ES2975077T3 - Uso de variantes del péptido natriurético tipo-C para tratar la displasia esquelética - Google Patents

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Abstract

La presente divulgación proporciona el uso de variantes del péptido natriurético de tipo C (CNP), y nuevas composiciones y formulaciones farmacéuticas que comprenden péptidos variantes de CNP para el tratamiento de displasias esqueléticas, uno o más síntomas de displasias esqueléticas, tales como crecimiento de huesos largos o crecimiento velocidad y otros trastornos que tienen una displasia esquelética y/o un síntoma o componente asociado al CNP. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Uso de variantes del péptido natriurético tipo-C para tratar la displasia esquelética
Campo de la Divulgación
La divulgación se refiere, en general, al uso de variantes del péptido natriurético tipo-C (CNP) para tratar displasias esqueléticas y formulaciones de péptidos variantes del CNP.
Antecedentes de la divulgación
La familia de péptidos natriuréticos consta de tres péptidos estructuralmente relacionados: péptido natriurético auricular (ANP) (No. de acceso a Genbank NP_006163, para la proteína precursora de ANP, NPPA), péptido natriurético cerebral (BNP) (No. de acceso a GenBank NP_002512, para la proteína precursora de BNP, NPPB) y el péptido natriurético tipo-C (CNP) (Biochem. Biophys. Res. Commun., 168: 863-870 (1990) (No. de acceso de GenBank NP_077720, para la proteína precursora del CNP, NPPC) (J. Hypertens., 10: 907-912 (1992)). Estos pequeños péptidos de cadena sencilla (ANP, BNP, CNP) tienen una estructura de bucle de 17-aminoácidos (Levin et al., N. Engl. J. Med., 339: 863-870 (1998)) y tienen funciones importantes en múltiples procesos biológicos. El ANP y el BNP se unen y activan el receptor A del péptido natriurético (NPR-A), también denominado guanalil ciclasa A (GC-A), lo que da como resultado niveles más altos de monofosfato de guanosina cíclico intracelular (GMPc). Asimismo, el CNP interactúa con NPR-B (GC-B) para estimular la generación de GMPc (J. Hypertens., 10: 1111-1114 (1992)). Un tercer tipo de receptor, NPR-C, se une a cada uno de los péptidos natriuréticos con alta afinidad y funciona principalmente para capturar los péptidos del compartimento extracelular y depositarlos en los lisosomas, donde estos se degradan (Science, 238: 675-678 (1987)). El ANP y el BNP se producen principalmente en las células musculares del corazón y se cree que tienen funciones importantes en la homeostasis cardiovascular (Science, 252: 120-123 (1991)). El CNP se expresa más ampliamente, incluyendo en el sistema nervioso central, el tracto reproductivo, los huesos y el endotelio de los vasos sanguíneos (Hypertension, 49: 419-426 (2007)).
En humanos, el CNP se produce inicialmente a partir del gen precursor del péptido natriurético C (NPPC) como un pre-pro polipéptido de 126-aminoácidos de cadena sencilla (Biochem. Biophys. Res. Commun., 168: 863-870 (1990)). La eliminación de la péptido señal produce pro-CNP, y una escisión adicional mediante la endoproteasa furina genera un péptido activo de 53-aminoácidos (CNP-53), el cual se secreta y se escinde nuevamente para producir el péptido maduro de 22-aminoácidos (CNP-22) (Wu, J. Biol. Chem. 278: 25847-852 (2003)). El CNP-53 y el CNP-22 difieren en su distribución, predominando CNP-53 en los tejidos, mientras que CNP-22 se encuentra principalmente en el plasma y el líquido cefalorraquídeo. (J. Alfonzo, Recept. Signal. Transduct. Res., 26: 269-297 (2006)). Se desconoce la forma predominante del<c>N<p>en el cartílago. Tanto CNP-53 como CNP-22 se unen de manera similar a NPR-B. Además, ambos inducen la producción de GMPc de forma similar y dependiente de la dosis (VT Yeung, Peptides, 17: 101-106 (1996)).
Los genes y polipéptidos naturales del CNP se han descrito previamente. La Patente de EE. UU. No. 5,352,770 divulga CNP-22 aislado y purificado de cerebro porcino idéntico en secuencia al CNP humano y su uso en el tratamiento de indicaciones cardiovasculares. La Patente de EE. UU. No. 6,034,231 divulga el gen y polipéptido humano de proCNP (126 aminoácidos) y el gen y polipéptido humano del CNP-53.
La eliminación del CNP del espacio extracelular se produce mediante la acción de la endopeptidasa neutral (NEP) unida a la membrana, la cual degrada rápidamente el CNP (Biochem. J., 291 (Pt 1): 83-88 (1993)), y a través de NPR-C, el cual se une y deposita CNP en los lisosomas, donde el CNP se degrada. Se ha demostrado que CNP tiene una vida-mediain vivode 2.6 min en el humano normal (J.Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35 (1994)). La baja concentración plasmática del CNP (J. Bone Moner. Res., 19 (Suppl. 1)S20 (2004)) y su co-expresión con NPR-B en varios tejidos sugiere que CNP funciona principalmente a través de un mecanismo autocrino/paracrino.
Como se indicó anteriormente, CNP se une y activa el receptor B del péptido natriurético (NPR-B), también denominado guanilil ciclasa B (GC-B), lo que da como resultado niveles más altos de monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) intracelular. La señalización río abajo mediada por la generación de GMPc influye en una amplia gama de procesos biológicos que incluyen la osificación endocondral. En consecuencia, niveles elevados o reducidos de cualquiera de los componentes de esta vía pueden provocar un crecimiento aberrante del hueso o cartílago. Por ejemplo, la eliminación de ya sea CNP o NPR-B en modelos de ratón da como resultado que los animales tengan un fenotipo enano con huesos largos y vértebras más cortos. Se han identificado mutaciones en NPR-B humano que bloquean la señalización adecuada del CNP y provocan enanismo (Olney, et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 91(4): 1229-1232 (2006); Bartels et al., Am. J. Hum. Genet. 75: 27-34 (2004)). Por el contrario, los ratones diseñados para producir niveles elevados del CNP muestran huesos largos y vértebras alargados.
La acondroplasia es el resultado de una mutación autosómica dominante en el gen del receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR-3), el cual ocasiona una anomalía en la formación del cartílago. FGFR-3 normalmente tiene un efecto regulador negativo sobre el crecimiento de los condrocitos y, por tanto, sobre el crecimiento óseo. En la acondroplasia, la forma mutada de FGFR-3 está constitutivamente activa, lo cual conduce a huesos gravemente acortados. Tanto la proliferación como la diferenciación de los condrocitos parecen estar alteradas, lo que lleva a una placa de crecimiento del cartílago notablemente corta (P. Krejci et al., J. Cell Sci. 118: 5089-5100 (2005)). La osificación endocondral es el proceso que gobierna el crecimiento longitudinal de los huesos-largos. Hay cuatro zonas de la placa de crecimiento - zona de reposo, proliferativa, hipertrófica y de calcificación. En la placa de crecimiento, NPR-B se expresa mediante células proliferativas, mientras que NPR-C se expresa mediante células hipertróficas (Yamashite et al., J. Biochem. 127: 177-179 (2000)). En el crecimiento óseo endocondral normal, los condrocitos se organizan en columnas y proliferan en la zona proliferativa de la placa de crecimiento. Estas columnas están desorganizadas en pacientes con acondroplasia. Además, la zona hipertrófica es donde las células se agrandan y eventualmente sufren apoptosis (lisis), lo que lleva a la invasión y mineralización de los osteocitos. Los condrocitos hipertróficos y el tamaño total de la zona son mucho más pequeños en pacientes con acondroplasia que en pacientes normales. El CNP es un agonista de NPR-B, un regulador positivo de condrocitos y del crecimiento óseo. La señalización río abajo del CNP/NPR-B inhibe la vía de FGFR-3 a nivel de la proteína cinasa activada por mitógenos (MAP K). La inhibición de MAP K promueve la proliferación y diferenciación de los condrocitos en las zonas proliferativas e hipertróficas de la placa de crecimiento, lo que resulta en crecimiento óseo.
En humanos, las mutaciones activadoras de FGFR-3 son la causa principal del enanismo genético. Los ratones que tienen FGFR-3 activado sirven como modelo de acondroplasia, la forma más común de displasia esquelética, y la sobreexpresión del CNP rescata a estos animales del enanismo. En consecuencia, el CNP y las variantes funcionales del CNP son terapias potenciales para el tratamiento de diversas displasias esqueléticas.
El uso terapéutico del CNP está actualmente limitado por su corta vida-media plasmática, la cual se ha demostrado que es de 2.6 minutosin vivoen humanos (J Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35 (1994)). Para aumentar la concentración de CNP por encima de los niveles intrínsecos (alrededor de 5 pM) que normalmente se encuentran en el plasma humano, ha sido necesaria la infusión continua en todos los estudios en humanos y animales que utilizaron CNP administrado sistémicamente. Dos mecanismos por los cuales se reduce la vida-media del CNP en el plasma humano son la degradación por la endopeptidasa neutral (NEP) y la eliminación por el receptor C del péptido natriurético (NPR-C) (Growth Horm. & IGF Res., 16: S6-S14 (2006)). Una variante del CNP que tiene una duración más largain vivode la vida-media sérica y exhibe una actividad similar o mejorada a la del CNP de tipo-silvestre es importante para una estrategia terapéutica sostenible.
Se han evaluado las actividades biológicas de varios análogos y derivados del CNP. Véase, por ejemplo, Patente de EE. UU. 7,276,481, Publicación PCT No. WO 94/20534 la cual divulga una quimera de CNP-22 y el C-terminal de 5-aminoácidos del ANP denominado péptido vasonatrina (VNP). Patentes de Ee . UU. 8,198,242, y 8,598,121 divulgan el uso de variantes del CNP para tratar displasias esqueléticas, tales como acondroplasia. Patentes de EE. UU.
7,642,243 y 8,658,373 divulgan el uso de variantes del CNP-22 o CNP-53 para tratar la artritis. EE. UU 2010/297021 divulga composiciones farmacéuticas que comprenden péptidos variantes del CNP y su uso en el tratamiento de enfermedades óseas.
Sumario de la divulgación
La presente invención proporciona una formulación de acuerdo con la reivindicación 1 y a composiciones que comprenden péptidos variantes del CNP para uso en el tratamiento de displasias esqueléticas y para uso en el aumento del crecimiento de los huesos largos y la velocidad de crecimiento. En la presente se divulga que la administración de péptidos variantes del CNP puede conducir a una velocidad de crecimiento mejorada en sujetos con acondroplasia. En diversas realizaciones, el péptido variante del CNP es Pro-Gly-CNP-37.
También se divulga un método para tratar la displasia esquelética, que comprende administrar una composición que comprende un péptido variante del CNP a un sujeto en necesidad del mismo en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en el que la administración trata una displasia esquelética o mejora al menos un síntoma o consecuencia fisiológica de la displasia esquelética.
El tratamiento puede ser una mejora en uno o más síntomas de la displasia esquelética seleccionados del grupo que consiste en aumento del crecimiento absoluto, velocidad de crecimiento mejorada o aumentada, aumento de la densidad mineral ósea (BMD) QCT, mejora en la morfología de la placa de crecimiento, aumento del crecimiento de los huesos-largos, mejora en la morfología de la columna, mejora o aumento del rango de movimiento de la articulación del codo y disminución de la apnea del sueño.
En una realización, la displasia esquelética se selecciona del grupo que consiste en acondroplasia, hipocondroplasia, baja estatura, enanismo, osteocondrodisplasias, displasia tanatofórica, osteogénesis imperfecta, acondrogénesis, condrodisplasia punctata, acondroplasia homocigótica, condrodisplasia punctata, displasia camptomélica, hipofosfatasia letal congénita, osteogénesis imperfecta del tipo perinatal letal, síndromes de polidactilia de costillascortas, hipocondroplasia, condrodisplasia punctata de tipo rizomélico, displasia metafisaria de tipo-Jansen, displasia espondiloepifisaria congénita, ateloteogénesis, displasia diastrófica, fémur corto congénito, displasia mesomelica tipo-Langer, displasia mesomelica tipo-Nievergelt, síndrome de Robinow, síndrome de Reinhardt, acrodisostosis, disostosis periférica, displasia de Kniest, fibrocondrogénesis, síndrome de Roberts, displasia acromesomélica, micromelia, síndrome de Morquio, síndrome de Kniest, displasia metatrófica y displasia espondiloepimetafisaria. En una realización preferible, la displasia esquelética es acondroplasia.
También se divulga un método para aumentar el crecimiento de los huesos largos en un sujeto, que comprende administrar una composición que comprende un péptido variante del CNP a un sujeto en necesidad del mismo en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en el que la administración aumenta el crecimiento de los huesos largos. En una realización preferible, el sujeto tiene acondroplasia.
También se describe un método para mejorar o aumentar la velocidad del crecimiento (es decir, la velocidad de crecimiento) en un sujeto, que comprende administrar una composición que comprende un péptido variante del CNP a un sujeto en necesidad del mismo en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en el que la administración mejora o aumenta la velocidad de crecimiento en el sujeto. El sujeto preferiblemente tiene acondroplasia. La mejora o aumento en la velocidad de crecimiento puede ser un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada en el intervalo de un cambio de 25%-50% desde la línea de base en el sujeto. La mejora o aumento en la velocidad de crecimiento puede ser un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada de al menos alrededor de 25%, más preferiblemente al menos alrededor de 40%, de cambio desde la línea de base en el sujeto.
Se contempla que la mejora en la velocidad de crecimiento puede evaluarse midiendo la altura de pie, la altura sentado, el peso, la circunferencia de la cabeza, la longitud de la parte superior del brazo, la longitud del brazo inferior, la longitud de la parte superior de la pierna, la longitud de la parte inferior de la pierna, la longitud de la mano y/o la longitud del pie.
En los diversos métodos y composiciones descritos en la presente, el péptido variante del CNP se puede seleccionar del grupo que consiste en:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO:2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3);
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP-37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7).
En diversas realizaciones preferibles, el péptido variante del CNP es Pro-Gly-CNP-37.
En los diversos métodos descritos en la presente, la cantidad de péptido variante del CNP administrada varía de alrededor de 7.5 pg/kg a alrededor de 100 pg/kg, preferiblemente de alrededor de 7.5 pg/kg a alrededor de 80 pg/kg, más preferiblemente de alrededor de 7.5 pg/kg a alrededor de 60 pg/kg. En diversas realizaciones, la cantidad de péptido variante del CNP administrada es al menos 7.5 pg/kg, al menos 15 pg/kg, al menos 30 pg/kg o al menos 60 pg/kg.
En los diversos métodos descritos en la presente, el péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se administra ya sea por vía subcutánea o parenteral, preferiblemente por vía subcutánea. También se contempla que el péptido variante del CNP se administre por otras vías. Las vías de administración ejemplares incluyen, pero no se limitan a, administración subcutánea, intraarticular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica, intratecal, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica, intratecal, tópica, transdérmica o transmucosa.
En los diversos métodos descritos en la presente, el péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se administra al sujeto en un tratamiento único o en dosis múltiples. Las dosis múltiples se pueden administrar una vez al día o en dosis múltiples durante el transcurso del tratamiento. El péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se puede administrar, en una dosis única o en dosis múltiples, diariamente, cada dos días, cada 3 días, 2 veces por semana, 3 veces por semana, semanalmente, quincenalmente, cada 3 semanas, mensualmente, cada 6 semanas, cada 2 meses, cada 3 meses u otro de acuerdo con lo considere apropiado el médico tratante. En realizaciones particularmente preferibles, el péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se administra al sujeto una vez al día durante un período de al menos un mes, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses, siete meses, ocho meses, nueve meses, diez meses, once meses, doce meses o más.
La administración del péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se puede ajustar para permitir períodos de tratamiento preventivo o terapéutico seguidos de un período de recuperación. Por ejemplo, el péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo se puede administrar por vía intraarticular, subcutánea, intravenosa o mediante otro modo diariamente o varias veces por semana durante un período de tiempo, seguido de un período sin tratamiento, luego el ciclo se repite. El período inicial de tratamiento (por ejemplo, administración del péptido variante del CNP diariamente o varias veces por semana) puede ser de 3 días, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas o 12 semanas. En un ejemplo relacionado, el período sin tratamiento dura 3 días, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas. En ciertos ejemplos, el régimen de dosificación del péptido variante del CNP es diario durante 3 días seguidos de 3 días de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 1 semana seguida de 3 días o 1 semana de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 2 semanas seguidas de 1 o 2 semanas de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 3 semanas seguidas de 1, 2 o 3 semanas de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 semanas seguidas de 1, 2, 3 o 4 semanas de descanso.
En los diversos métodos descritos en la presente, se prefiere que la administración del péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo no cause ni dé como resultado un evento adverso en el sujeto clasificado como de grado dos o superior. En otros casos, la administración del péptido variante del CNP o de la composición o formulación que comprende el mismo no produce cambios clínicamente significativos en la concentración de hemoglobina en sangre, el número de plaquetas en sangre, la concentración de electrolitos en sangre, la concentración de nitrógeno ureico en sangre, la concentración de creatinina en sangre, la concentración de fosfatasa alcalina en sangre, la concentración de alanina aminotransferasa en sangre y/o la concentración de aspartato aminotransferasa en sangre en dicho sujeto.
En los diversos métodos descritos en la presente, la administración del péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo da como resultado un cambio en (i) la proporción entre la longitud de la parte superior del cuerpo y la longitud de la parte inferior del cuerpo, (ii) la proporción entre la longitud de la parte superior del brazo y la longitud del brazo inferior, o (iii) la proporción entre la longitud de la parte superior de la pierna y la longitud de la parte inferior de la pierna, de alrededor de -0.25 y alrededor de 0.25, alrededor de -0.20 a alrededor de 0.20, alrededor de -0.15 y alrededor de 0.15, alrededor de -0.10 y alrededor de 0.10, o alrededor de -0.05 y alrededor de 0.05, en comparación con la línea de base (es decir, antes de la administración del péptido variante del CNP o de la composición o formulación que comprende el mismo).
La presente invención proporciona composiciones o formulaciones que comprenden un péptido variante del CNP. La composición o formulación puede comprender además un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición se puede preparar a partir de una formulación, ya sea líquida o liofilizada, que comprende un amortiguador de ácido cítrico/citrato o un amortiguador de ácido acético/acetato que tiene un pH de alrededor de 4 a alrededor de 6. En diversas realizaciones, el pH es 5.5.
También se divulga, pero no forma parte de la invención, un método de tratamiento como se describe en la presente que comprende además la administración de un segundo agente.
Los péptidos variantes del CNP utilizados en los métodos y composiciones o formulaciones descritos en la presente pueden unirse a un ácido hidrofóbico y pueden unirse a uno o más ácidos hidrofóbicos. Los ejemplos no-limitantes de ácidos hidrofóbicos incluyen ácidos carboxílicos C5-C12 de cadena-lineal o ramificada saturados o insaturados (por ejemplo, ácido pentanoico, ácido heptanoico, etc.) y ácidos grasos naturales. Los ácidos hidrofóbicos pueden estar unidos al N-terminal, al C-terminal y/o a la cadena lateral de uno o más residuos de aminoácidos. En una realización, los ácidos hidrofóbicos están conjugados con el N-terminal.
Los péptidos variantes del CNP utilizados en los métodos y composiciones divulgados en la presente son quimeras o proteínas de fusión, que comprenden un péptido variante del CNP y un péptido o proteína escindible, o etiqueta peptídica. Las proteínas o péptidos escindibles ejemplares incluyen, pero no se limitan a, etiquetas de histidina (por ejemplo, hexa-His); TAF12: factor de transcripción humano TAF12; KSI: cetoesteroide isomerasa; MBP: proteína de unión a maltosa; p-Gal: p-galactosidasa; GST: glutatión-S-transferasa; Trx: tiorredoxina; CBD: dominio de unión a quitina; BMPM: mutación BMP-2, SUMO, CAT, TrpE, proteína estafilocócica A, proteínas estreptocócicas, proteína de unión al almidón, dominio de unión a celulosa de la endoglucanasa A, dominio de unión a celulosa de la exoglucanasa Cex, dominio de unión a biotina, recA, Flag, c-Myc, poli(His), poli(Arg), poli(Asp), poli(Gln), poli(Phe), poli(Cys), proteína fluorescente verde, proteína fluorescente roja, proteína fluorescente amarilla, proteína fluorescente cian, biotina, avidina, estreptavidina, epítopes de anticuerpos y fragmentos de los mismos.
El péptido variante del CNP puede ser un monómero o un dímero. En una realización que está relacionada, los monómeros de péptidos variantes del CNP diméricos se pueden unir de N-terminal a N-terminal mediante un enlazador o sin enlazador, de N-terminal a C-terminal mediante un enlazador o sin enlazador, o de C-terminal a C-terminal mediante un enlazador o sin enlazador.
Los péptidos variantes del CNP pueden tener sustancialmente la misma o mejor actividad biológica que CNP-22 de tipo-silvestre. Por ejemplo, los péptidos variantes del CNP pueden retener al menos el 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o más de la actividad del<c>NP-22 de tipo-silvestre, o pueden tener mayor actividad que CNP-22, por ejemplo, con respecto a la interacción con NPR-B (GC-B) para estimular la generación de GMPc. Alternativamente, o además, los péptidos variantes del CNP pueden retener al menos el 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o más de la actividad del CNP-22 de tipo-silvestre, o pueden tener mayor actividad que CNP-22, con respecto a la regulación del crecimiento óseo endocondral y la actividad de los condrocitos, incluyendo, pero no limitado a, la proliferación de condrocitos, la diferenciación de condrocitos, la inhibición de la vía de señalización de la proteína cinasa activada por mitógenos (MAP)/MEK (Raf-1) y la promoción de la osificación endocondral. Los péptidos variantes del CNP pueden comprender una secuencia de aminoácidos que es al menos 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o más idéntica u homóloga a los aminoácidos 6-22 o 1-22 del CNP-22 de tipo-silvestre.
Los péptidos variantes del CNP pueden tener opcionalmente conjugación(es) o extensión(es), por ejemplo, en el N-y/o C-terminal para facilitar la localización del cartílago, reducir el aclaramiento renal y/o aumentar la resistencia a la degradación de NEP Dichas conjugación(es) o extensión(es), pueden comprender moléculas o secuencias formadas o derivadas de, por ejemplo, poliAsp, poliGlu, péptidos dirigidos al cartílago, sialoproteína, PEGs, carbohidratos, ácidos hidrofóbicos, NPPC o (poli)péptidos no-CNP, o combinaciones de los mismos.
Se contempla además que los péptidos variantes del CNP se puedan conjugar con una fracción polimérica o no polimérica hidrofóbica, tal como, por ejemplo, ácido heptanoico, ácido pentanoico o ácidos grasos. La fracción hidrofóbica puede conjugarse con la cadena lateral de un residuo de aminoácido, incluyendo, pero no limitada a, una lisina, una serina, una cisteína o una treonina, o puede unirse al N-terminal y/o al C-terminal de la variante del CNP
Los péptidos variantes del CNP útiles en los métodos pueden tener un pI en el intervalo de alrededor de 8 a alrededor de 10.5 o de alrededor de 8.5 a alrededor de 10.
También se divulga el uso de una composición farmacéutica que comprende un péptido variante del CNP, opcionalmente otro agente biológicamente activo y opcionalmente un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones pueden ser composiciones farmacéuticas estériles adecuadas para inyección parenteral. Las composiciones pueden comprender un péptido variante del CNP sustancialmente puro, por ejemplo, al menos alrededor de 90% o 95% puro. Las composiciones pueden contener menos de alrededor de 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0.5% de contaminantes, tales como otras proteínas humanas, proteínas porcinas o CNP-53 o fragmentos de los mismos (distintos del péptido variante del CNP deseado). La composición estéril se puede administrar a un sujeto para tratar o prevenir una displasia esquelética o uno o más síntomas o consecuencias fisiológicas de una displasia esquelética descrita en la presente.
Los péptidos variantes del CNP útiles en la presente retienen ventajosamente la actividad del CNP y muestran una vida-media en suero aumentada. La retención de la actividad del CNP se puede mostrar, por ejemplo, como retención del efecto biológico deseadoin vivo,o retención de al menos alrededor del 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o al menos alrededor del 100% de la actividad estimulante del GMPc sobre CNP-22, bajo la misma concentración (por ejemplo, 1 pM del péptido CNP o mayor que la ED80). Los péptidos variantes del CNP pueden mostrar al menos alrededor de 1.5-veces, 2-veces, 3-veces, 4-veces, 5-veces, 10-veces, 15-veces, 20-veces, 25-veces, 30-veces, 35-veces o 40-veces el aumento de la vida-media sérica en comparación con CNP-22.
Los péptidos variantes del CNP descritos en la presente pueden tener una mayor resistencia a NEP y exhibir una vidamedia mayor en comparación con CNP-22 de tipo-silvestre. La vida-media de los péptidos variantes del CNP se incrementa preferiblemente en alrededor del 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o alrededor de 100% en comparación con CNP-22 de tipo-silvestre.
También se divulga el uso de cualquiera de los péptidos variantes del CNP anteriores, o composición o formulación que comprende el mismo, descrito en la presente en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la displasia esquelética y los síntomas u otras manifestaciones fisiológicas descritas en la presente asociadas con la displasia esquelética. Jeringas, por ejemplo, jeringas de un solo uso o precargadas, recipientes sellados estériles, por ejemplo, viales, botellas, recipientes y/o kits o paquetes que comprenden cualquiera de los péptidos variantes del CNP anteriores, o composición o formulación que comprende al mismo, opcionalmente con instrucciones de uso adecuadas, también se contemplan.
También se divulgan en la presente formulaciones que comprenden (a) un péptido variante del CNP descrito en la presente y (b) uno o más componentes seleccionados del grupo que consiste en un agente amortiguador, un agente de isotonicidad, un estabilizador y un agente anti-adsorbente. Los agentes amortiguadores empleados en la formulación son monohidrato de ácido cítrico y dihidrato de citrato de sodio. Los agentes de isotonicidad empleados en las formulaciones de la presente invención son dihidrato de trehalosa y D-manitol. El estabilizador empleado en las formulaciones de la presente invención es L-metionina. El agente anti-adsorbente empleado en las formulaciones de la presente invención es polisorbato 80.
Las formulaciones de la presente invención pueden estar liofilizadas, en forma líquida o en forma líquida que haya sido reconstituida a partir de una forma previamente liofilizada. Las formulaciones de la presente invención pueden estar libres de conservantes y, opcionalmente, pueden estar contenidas dentro de un vial de vidrio de borosilicato sin tratar de tipo 1. Opcionalmente, las formulaciones de la presente invención tienen un pH en el intervalo de entre 5.0 y 6.0, preferiblemente 5.5.
En otras realizaciones, las formulaciones de la presente invención comprenden un péptido variante del CNP en una concentración de al menos 2.0 mg/ml, 5.0 mg/ml, 10.0 mg/ml o superior. En una realización particularmente preferible, la formulación de la presente invención comprende un péptido variante del CNP en una concentración de 10.0 mg/ml. En realizaciones particularmente preferibles, el péptido variante del CNP de la formulación es Pro-Gly-CNP-37.
Las formulaciones de la presente invención comprenden un péptido variante del CNP como se describe en la presente, monohidrato de ácido cítrico, dihidrato de citrato de sodio, dihidrato de trehalosa, D-manitol, L-metionina y polisorbato 80. En ciertas realizaciones preferibles, el péptido variante del CNP está presente en una concentración entre 2.0 mg/ml y 10.0 mg/ml, el monohidrato de ácido cítrico está presente en una concentración entre 0.15 mg/ml y 0.40 mg/ml, el dihidrato de citrato de sodio está presente en una concentración entre 0.5 mg/ml y 1.5 mg/ml, el dihidrato de trehalosa está presente en una concentración entre 30 mg/ml y 70 mg/ml, el D-manitol está presente en una concentración entre 10 mg/ml y 20.0 mg/ml, la L-metionina está presente en una concentración entre 0.5 mg/ml y 1.5 mg/ml y el polisorbato 80 está presente en una concentración entre 0.01 mg/ml y 0.1 mg/ml. En una realización particularmente preferible, la variante del CNP está presente en una concentración de 10.0 mg/ml, el monohidrato de ácido cítrico está presente en una concentración de 0.28 mg/ml, el dihidrato de citrato de sodio está presente en una concentración de 1.08 mg/ml, la dihidrato de trehalosa está presente en una concentración de 58.01 mg/ml, el D-manitol está presente en una concentración de 15.0 mg/ml, la L-metionina está presente en una concentración de 0.73 mg/ml y el polisorbato 80 está presente en una concentración de 0.05 mg/ml.
Las formulaciones que contienen péptidos variantes del CNP descritas en la presente son útiles y pueden emplearse en los diversos métodos descritos en la presente. Otros aspectos y realizaciones de la presente invención se describen en las reivindicaciones adjuntas.
Se entiende que cada característica o realización, o combinación, descrita en la presente es un ejemplo ilustrativo nolimitante de cualquiera de los aspectos de la divulgación y, como tal, debe ser combinable con cualquier otra característica o realización, o combinación, descrita en la presente. Por ejemplo, cuando las características se describen con lenguaje tal como "una realización", "algunas realizaciones", "realización adicional", "realizaciones ejemplares específicas" y/u "otra realización", cada uno de estos tipos de realizaciones es un ejemplo no-limitante de una característica que está destinada a combinarse con cualquier otra característica, o combinación de características, descritas en la presente sin tener que enumerar todas las combinaciones posibles. Tales características o combinaciones de características se aplican a cualquiera de los aspectos de la divulgación. Cuando se divulgan ejemplos de valores que caen dentro de intervalos, cualquiera de estos ejemplos se contempla como posibles puntos finales de un intervalo, se contemplan todos y cada uno de los valores numéricos entre dichos puntos finales y se prevén todas y cada una de las combinaciones de puntos finales superiores e inferiores.
Descripción detallada de la divulgación
La presente divulgación se refiere a péptidos variantes del CNP para uso en el tratamiento de displasias esqueléticas, uno o más síntomas o consecuencias fisiológicas de displasias esqueléticas y otros trastornos que tienen una displasia esquelética y/o un síntoma o componente asociado a<c>N<p>La presente divulgación también se refiere a composiciones y formulaciones que comprenden un péptido variante del CNP y al uso de tales composiciones o formulaciones para tratar la displasia esquelética o un síntoma o consecuencia fisiológica de una displasia esquelética, aumentar el crecimiento de los huesos largos en un sujeto en necesidad del mismo, o mejorar o aumentar la velocidad de crecimiento en un sujeto en necesidad de la misma, por ejemplo, en un sujeto que padece una displasia esquelética.
A. Definiciones
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos utilizados en esta solicitud, incluyendo la especificación y las reivindicaciones, tienen las definiciones que se proporcionan a continuación.
Tal como se utilizan en la especificación y las reivindicaciones adjuntas, los artículos indefinidos "un" y "una, uno" y el artículo definido "el, la" incluyen referentes tanto en plural como en singular a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.
El término "alrededor de" o "aproximadamente" significa un error aceptable para un valor particular determinado por una persona con habilidades ordinarias en la técnica, el cual depende en parte de cómo se mide o determina el valor. El término "alrededor de" o "aproximadamente" significa dentro de 1, 2, 3 o 4 desviaciones estándar. El término "alrededor de" o "aproximadamente" significa dentro del 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% o 0.05% de un valor o intervalo determinado. Siempre que el término "alrededor de" o "aproximadamente" preceda al primer valor numérico de una serie de dos o más valores numéricos, se entiende que el término "alrededor de" o "aproximadamente" se aplica a cada uno de los valores numéricos de esa serie.
La definición de términos químicos estándar se puede encontrar en trabajos de referencia, incluidas Carey and Sundberg, Advanced Organic Chemistry, 3rd Edition, Vols. A and B (Plenum Press, New York 1992). La práctica de la presente divulgación puede emplear, a menos que se indique lo contrario, ciertos métodos convencionales de química orgánica sintética, espectrometría de masas, cromatografía preparativa y analítica, química de proteínas, bioquímica, tecnología de ADN recombinante y farmacología, dentro de los conocimientos de la técnica. Véase, por ejemplo, TE. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., 4th Edition, 2004); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990).
A lo largo del texto se utilizan las siguientes abreviaturas de aminoácidos:
Alanina: Ala (A) Arginina: Arg (R)
Asparagina: Asn(N) Ácido aspártico: Asp (D)
Cisteína: Cys (C) Glutamina: Gln (Q)
Ácido glutámico: Glu (E) Glicina: Gly (G)
Histidina: His (H) Isoleucina: Ile(I)
Leucina: Leu (L) Lisina: Lys (K)
Metionina: Met(M) Fenilalanina: Phe (F)
Prolina: Pro (P) Serina: Ser (S)
Treonina: Thr (T) Triptófano: Trp (W)
Tirosina: Tyr(Y) Valina: Val (V)
En la presente se utiliza la notación convencional para representar secuencias de polipéptidos y péptidos: el extremo izquierdo de una secuencia de polipéptidos o péptidos es el amino-terminal; el extremo derecho de una secuencia polipeptídica es el carboxilo-terminal.
Los péptidos variantes del CNP descritos en la presente útiles en los métodos se pueden generar mediante medios recombinantes, utilizando un polinucleótido que codifica para un péptido variante del CNP Los péptidos variantes del CNP expresados por dichos polinucleótidos se pueden producir mediante métodos que incluyen el cultivo de células hospederas en medio de cultivo bajo condiciones adecuadas para la expresión del polinucleótido que codifica para una variante del CNP y el aislamiento del producto de expresión de las células huésped o del medio de cultivo. Los productos de expresión reales pueden variar ligeramente del producto proteico codificado dependiendo de cualquier procesamiento postraduccional. Los métodos para producir los péptidos variantes del CNP se divulgan al menos en Patente de EE. UU No. 8,198,242.
Los términos "idéntico" y porcentaje de "identidad", en el contexto de dos o más secuencias de polinucleótidos o polipéptidos, se refieren a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales o que tienen un porcentaje específico de nucleótidos o residuos de aminoácidos que son iguales, cuando se compara y alinea para obtener la máxima correspondencia, como se mide utilizando uno de los siguientes algoritmos de comparación de secuencias o mediante inspección visual.
La frase "sustancialmente homóloga" o "sustancialmente idéntica", en el contexto de dos ácidos nucleicos o polipéptidos, generalmente se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que tienen al menos 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o 98% de identidad de residuos de nucleótidos o aminoácidos, cuando se comparan y alinean para obtener la máxima correspondencia, como se mide utilizando uno de los siguientes algoritmos de comparación de secuencias o mediante inspección visual. La homología o identidad sustancial puede existir en regiones de las secuencias que tienen al menos alrededor de 25, 50, 100 o 150 residuos de longitud. Las secuencias pueden ser sustancialmente homólogas o idénticas en la longitud completa de uno o ambos biopolímeros de comparación.
Para la comparación de secuencias, normalmente una secuencia actúa como la secuencia de referencia, con la que se comparan las secuencias de prueba. Cuando se utiliza un algoritmo de comparación de secuencias, las secuencias de prueba y de referencia se ingresan en una computadora, se designan las coordenadas de la subsecuencia, si es necesario, y se designan los parámetros del programa del algoritmo de secuencia. Luego, el algoritmo de comparación de secuencias calcula el porcentaje de identidad de secuencia para las secuencias de prueba en relación con la secuencia de referencia, basándose en los parámetros del programa designados.
La alineación óptima de secuencias para comparación se puede realizar, por ejemplo, mediante el algoritmo de homología local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math., 2: 482 (1981), mediante el algoritmo de alineación de homología de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol., 48: 443 (1970), mediante el método de búsqueda de similitud de Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444 (1988), mediante las implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el Paquete de Software de Genética de Wisconsin, Grupo de Genética Computacional, 575 Science Dr., Madison, WI), o mediante inspección visual. Un ejemplo de un algoritmo útil es PILEUP, el cual utiliza una simplificación del método de alineación progresiva de Feng & Doolittle, J. Mol. Evol., 35: 351-360 (1987) y es similar al método descrito por Higgins & Sharp, CABIOS, 5: 151-153 (1989). Otro algoritmo útil para generar alineamientos múltiples de secuencias es Clustal W (Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22: 4673-4680 (1994)). Un ejemplo de un algoritmo que es adecuado para determinar el porcentaje de identidad de secuencia y similitud de secuencia es el algoritmo BlAST (Altschul et al., J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990); Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 10915 (1989); Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5787 (1993)). El software para realizar análisis BLAST está disponible públicamente a través del Centro Nacional de Información Biotecnológica.
"Tipo silvestre" (wt) es un término que se refiere a la forma natural, incluida la secuencia, de un polinucleótido, polipéptido o proteína en una especie. Una forma de tipo-silvestre se distingue de la forma mutante de un polinucleótido, polipéptido o proteína que surge de mutaciones genéticas.
Un primer péptido que es un "análogo" o "variante" o "derivado" de un segundo péptido puede ser un péptido que tiene al menos alrededor de 50%, 60% o 70% de homología de secuencia, pero menos del 100% de homología de secuencia, con el segundo péptido. Tales análogos, variantes o derivados pueden estar compuestos por residuos de aminoácidos no-naturales, incluyendo, sin limitación, homoarginina, ornitina, penicilamina y norvalina, así como residuos de aminoácidos naturales.
El polipéptido precursor del péptido natriurético C (NPPC) es un pre-pro polipéptido de 126-aminoácidos de cadena sencilla y que, tras la escisión, finalmente da como resultado CNP-22 de tipo silvestre (wtCNP-22). La eliminación de la péptido señal de NPPC produce pro-CNP, y una escisión adicional mediante la endoproteasa furina genera un péptido activo de 53-aminoácidos (CNP-53), el cual se secreta y se escinde nuevamente para producir el péptido maduro de 22-aminoácidos (CNP, o CNP-22). Un "péptido variante del CNP" puede ser al menos alrededor de 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% homólogo al NPPC de tipo silvestre sobre el mismo número de residuos de aminoácidos. Se contempla además que un péptido variante del CNP puede comprender alrededor de 1 a alrededor de 53, o de 1 a 38, o de 1 a 37, o de 1 a 35, o de 1 a 31, o de 1 a 27, o de 1 a 22, o de 10 a 35, o alrededor de 15 a alrededor de 37 residuos del polipéptido NPPC. Una variante del CNP puede comprender una secuencia de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35,36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 o 53 aminoácidos derivados del polipéptido NPPC.
El término "cantidad eficaz" significa la dosis suficiente para producir un resultado deseado en una condición de salud, patología o enfermedad de un sujeto o para un propósito de diagnóstico. El resultado deseado puede comprender una mejora subjetiva u objetiva en el receptor de la dosis. "Cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un agente eficaz para producir el efecto benéfico deseado sobre la salud. Una persona con habilidades ordinarias en la técnica puede determinar la cantidad "eficaz" apropiada en cualquier caso individual utilizando experimentación de rutina. Se entenderá que el nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier paciente particular pueden variarse y van a depender de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado; la biodisponibilidad, estabilidad metabólica, tasa de excreción y duración de la acción de ese compuesto; el modo y momento de administración del compuesto; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; y la gravedad de la condición particular.
"Tratamiento" se refiere a tratamiento profiláctico o tratamiento terapéutico o tratamiento de diagnóstico. Por ejemplo, "tratamiento" puede referirse a la administración de un compuesto o composición a un sujeto con fines terapéuticos, profilácticos o de diagnóstico.
Un tratamiento "profiláctico" es un tratamiento administrado a un sujeto que no presenta signos de una enfermedad o que sólo presenta signos tempranos de la enfermedad, con el propósito de disminuir el riesgo de desarrollar patología. Los compuestos o composiciones de la divulgación se pueden administrar como tratamiento profiláctico para reducir la probabilidad de desarrollar una patología o para minimizar la gravedad de la patología, si se desarrolla.
Un tratamiento "terapéutico" es un tratamiento administrado a un sujeto que presenta signos o síntomas de patología con el propósito de disminuir o eliminar esos signos o síntomas. Los signos o síntomas pueden ser bioquímicos, celulares, histológicos, funcionales o físicos, subjetivos u objetivos. Los compuestos de la divulgación también se pueden administrar como tratamiento terapéutico o para diagnóstico.
"Composición farmacéutica" o "formulación" se refiere a una composición adecuada para uso farmacéutico en el animal en cuestión, incluyendo humanos y mamíferos. Una composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido variante del CNP, opcionalmente otro agente biológicamente activo y opcionalmente un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una composición farmacéutica puede abarcar una composición que comprende el(los) ingrediente(s) activo(s) y el(los) ingrediente(s) inerte(s) que constituyen al portador, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación, complejación o agregación de cualquiera de dos o más de los ingredientes, o de la disociación de uno o más de los ingredientes, o de otros tipos de reacciones o interacciones de uno o más de los ingredientes. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación abarcan cualquier composición preparada mezclando un compuesto de la divulgación y un excipiente, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
"Portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquiera de los portadores, amortiguadores y similares farmacéuticos estándar, tales como una solución salina amortiguada con fosfato, solución acuosa de dextrosa al 5% y emulsiones (por ejemplo, una emulsión de aceite/agua o agua/aceite). Los ejemplos no-limitantes de excipientes incluyen adyuvantes, aglutinantes, rellenos, diluyentes, desintegrantes, agentes emulsionantes, agentes humectantes, lubricantes, deslizantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes y agentes colorantes. Los portadores, excipientes y diluyentes farmacéuticos adecuados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed.
(Mack Publishing Co., Easton, 1995). Los portadores farmacéuticos preferibles dependen del modo de administración previsto del agente activo. Los modos típicos de administración incluyen enteral, (por ejemplo, oral) o parenteral (por ejemplo, inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o intraperitoneal; o administración tópica, transdérmica o transmucosa).
Una "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal que puede formularse en un compuesto para uso farmacéutico, incluyendo, pero no limitado a, sales metálicas (por ejemplo, sodio, potasio, magnesio, calcio, etc.) y sales de amoniaco o aminas orgánicas.
Por "farmacéuticamente aceptable" o "farmacológicamente aceptable" se entiende un material que no es biológicamente o de otro modo indeseable, es decir, el material puede administrarse a un individuo sin causar ningún efecto biológico indeseable o sin interactuar de manera perjudicial con cualquiera de los componentes de la composición en la que está contenido o con cualquier componente presente en o en el cuerpo del individuo.
"Condiciones fisiológicas" se refiere a condiciones en el cuerpo de un animal (por ejemplo, un humano). Las condiciones fisiológicas incluyen, pero no se limitan a, la temperatura corporal y un entorno acuoso de fuerza iónica fisiológica, pH y enzimas. Las condiciones fisiológicas también abarcan condiciones en el cuerpo de un sujeto particular que difieren de las condiciones "normales" presentes en la mayoría de los sujetos, por ejemplo, que difieren de la temperatura normal del cuerpo humano de aproximadamente 37 °C o difieren del pH normal de la sangre humana de aproximadamente 7.4.
Tal como se utiliza en la presente, el término "sujeto" abarca mamíferos y no-mamíferos. Los ejemplos de mamíferos incluyen, pero no se limitan a, cualquier miembro de la clase de los mamíferos: humanos, primates no-humanos tales como chimpancés y otras especies de simios y monos; animales de granja tales como ganado, caballos, ovejas, cabras, cerdos; animales domésticos tales como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio, incluyendo roedores, tales como ratas, ratones y conejillos de indias, y similares. Ejemplos de no-mamíferos incluyen, pero no se limitan a, aves, peces y similares. El término no denota una edad o género en particular.
Los términos "polietilenglicol", "PEG", "óxido de polietileno" y "PEO" se utilizan indistintamente en la presente a menos que se indique lo contrario. Una variante del CNP conjugada mediante un grupo amino a un polímero "PEOn" asociado al número n, en general tiene la fórmula: CH3-[-O-CH2CH2-]n-C(=O)-NHR, donde n es el número de unidades de óxido de etileno y R denota el resto del péptido. El polímero "PEOn" puede tener opcionalmente un grupo alquileno, (CH2)m, donde m es un número entero de 1 a 5, entre el carbono carbonilo y las unidades repetidas de óxido de etileno. Dicho polímero "PEOn" (por ejemplo, PEO12 o PEO24) está monodisperso, es decir, es un polímero discreto único de un peso molecular particular. De manera similar, una variante del CNP conjugada mediante un grupo amino a un polímero "PEGnK" asociado con el número nK, en general tiene la fórmula: CH3-[-O-CH2CH2-]p-C(=O)-NHR, donde p es un número entero mayor que 1. El polímero "PEGnK" también puede tener opcionalmente un grupo alquileno, (CH2)m, donde m es un número entero de 1 a 5, entre el carbono carbonilo y las unidades repetidas de óxido de etileno. Sin embargo, dicho polímero "PEGnK" (por ejemplo, PEG1K, PEG2K, PEG5K o PEG20K) está polidisperso, es decir, contiene una mezcla de polímeros que tienen una distribución de pesos moleculares, donde el número nK indica el peso molecular promedio en número del polímero (Mn) en kilo Daltons. Por ejemplo, "PEG2K" conjugado con una variante del CNP denota un polímero de PEG polidisperso que tiene un peso molecular promedio en número del polímero de alrededor de 2 kDa.
Cuando se proporciona un intervalo de masa de un polímero (por ejemplo, PEG) (por ejemplo, en unidades de kDa), el intervalo se refiere a un intervalo de pesos moleculares promedio en número del polímero, no a un intervalo de pesos moleculares de múltiples polímeros en una mezcla polidispersa, salvo que expresamente se indique lo contrario.
B. Péptidos variantes del CNP
El uso del CNP-22 como un terapéutico está limitado por su corta vida-media en plasma (J. Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35 (1994)). En el plasma humano, la concentración del CNP-22 suele ser inferior a cinco picomolar. El CNP-22 es degradado y eliminado de la circulación por NEP y NPR-C en humanos (Growth Hormone & IGF Res., 16: S6-S14). En todos los estudios en humanos y animales en los que se utilizó CNP-22 administrado sistémicamente, se ha utilizado la infusión continua para aumentar la concentración del CNP-22 en los sujetos. Un péptido CNP que tiene una vida-media más larga y al menos un nivel similar de funcionalidad sería beneficioso para una estrategia terapéutica basada en CNP. Los péptidos variantes del CNP que tienen propiedades mejoradas se divulgan en las Solicitudes Internacionales Nos. WO 2009/067639 y WO 2010/135541 y Patentes de EE. UU. Nos. 8,198,242, 8,598,121, y 8,377,884.
Los péptidos variantes del CNP pueden ser derivados del CNP-37 o CNP-38. Los péptidos variantes del CNP-37 pueden contener adiciones, eliminaciones y/o sustituciones de aminoácidos con aminoácidos o peptidomiméticos naturales o no naturales (por ejemplo, isósteros de enlaces peptídicos) en una o más de las 37 posiciones del CNP-37. Los ejemplos no-limitantes de las sustituciones que se pueden realizar en CNP-37, de acuerdo con la numeración del CNP-22, incluyen K4R, G5S, G5R, G8S, K10R, G15S, S16Q, M17N, G19R y combinaciones de los mismos.
Los péptidos variantes del CNP pueden ser péptidos CNP-37 o CNP-38 modificados que tienen mutaciones/sustituciones en el sitio de escisión de furina, diseñados para mejorar la resistenciain vivoa la proteasa furina, y/o que contienen glicina o prolina-glicina en el N-terminal, diseñados para mejorar la estabilidad en plasma y prevenir la formación de piroglutamina. Las variantes del CNP-37 ejemplares incluyen, pero no se limitan a:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO:2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3);
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP-37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7).
C. Síntesis y purificación de péptidos variantes del CNP
Los péptidos variantes del CNP útiles en la presente se pueden producir mediante expresión recombinante, utilizando ciertas técnicas conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, N.Y (1989)); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II, D. N. Glover, Ed. (1985); y Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994).
Los péptidos variantes del CNP se pueden producir mediante un proceso recombinante que comprende cultivar en un medio una célula hospedera que comprende un primer polinucleótido que codifica para un péptido variante del CNP unido a un segundo polinucleótido que codifica para un péptido o proteína escindible bajo condiciones que dan como resultado la expresión de un polipéptido de fusión codificado por los polinucleótidos, en la que el polipéptido de fusión comprende el péptido variante del CNP directamente unido al péptido o proteína escindible o indirectamente unido al mismo a través de un enlazador. La célula hospedera puede transformarse con un vector de expresión que comprende el polinucleótido que codifica para el péptido variante del CNP unido al polinucleótido que codifica para el péptido o proteína escindible. El polipéptido de fusión puede expresarse como una proteína soluble o como un cuerpo de inclusión. El polipéptido de fusión expresado se puede aislar de la célula hospedera o del medio de cultivo, y el polipéptido de fusión aislado se puede poner en contacto con un agente de escisión para liberar el péptido variante del CNP.
Los métodos para producir péptidos variantes del CNP se describen en Patentes de EE. UU. 8,198,242, 8,377,884 y 8,598,121.
Las células hospederas utilizadas para producir péptidos variantes del CNP pueden ser células de bacterias, levaduras, insectos, vertebrados no-mamíferos o de mamíferos. Las células de bacterias incluyen sin limitación líneas y cepas celulares deE. coli.Ejemplos no-limitativos de líneas y cepas celulares deE. coliincluyen BL21, BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3)pGro7, ArcticExpress(DE3), C41 [también llamada C41(DE3)], C43 [también llamada C43(D<e>3)],<Origami>B(<d>E3),<Origami B(DE3)pLysS, KRX y Tuner(DE3). Los péptidos variantes del c>N<p y las proteínas>de fusión del CNP se pueden producir utilizando células BL21(DE3). Las células de mamífero incluyen, pero no se limitan a, células de hámster, mono, chimpancé, perro, gato, bovino, porcino, ratón, rata, conejo, oveja y humano. Las células huésped pueden ser células inmortalizadas (una línea celular) o células no-inmortalizadas (primarias o secundarias) y pueden ser cualquiera de una amplia variedad de tipos de células, tales como, pero no limitadas a, fibroblastos, queratinocitos, células epiteliales (por ejemplo, células epiteliales mamarias, células epiteliales intestinales), células de ovario (por ejemplo, ovario de hámster Chino o células CHO), células endoteliales, células gliales, células neurales, elementos formados de la sangre (por ejemplo, linfocitos, células de la médula ósea), condrocitos y otros células derivadas de hueso y precursoras de estos tipos de células somáticas. Las células hospederas que contienen el ADN o ARN de la variante del CNP se cultivan bajo condiciones apropiadas para el crecimiento de las células, la expresión del ADN o ARN y la identificación/selección de células que expresan el péptido variante del CNP.
Los péptidos variantes del CNP se pueden expresar de forma recombinante como proteínas de fusión que comprenden un péptido variante del CNP y una proteína portadora escindible o etiqueta escindible (por ejemplo, etiqueta peptídica),<en la que la proteína de fusión comprende el péptido variante del c>N<p unido directamente a la proteína portadora o>etiqueta escindible o unido indirectamente al mismo a través de un enlazador. El uso de una proteína portadora o etiqueta facilita, por ejemplo, la detección, el aislamiento y/o la purificación de la proteína de fusión. Las proteínas portadoras y etiquetas escindibles incluyen, pero no se limitan a, etiquetas de histidina (por ejemplo, hexa-His); factor de transcripción humano TAF12 (TAF12), fragmentos de TAF12, dominio plegado de histonas de TAF12, mutantes de TAF12 y fragmentos de los mismos, TAF12(C/A), TAF12(D/E), TAF12(4D/4E), TAF12(6D/6E), TAF12(10D/10E), TAF12(C/A y D/E), TAF12(C/A y 4D/4E), TAF12(C/A y 6D/6E), TAF12(C/A y 10D/10E); isomerasa cetoesteroide (KSI); proteína fijadora de maltosa (MBP); p-galactosidasa (p-Gal); glutatión-S-transferasa (GST); tiorredoxina (Trx); dominio<de unión a quitina (CBD); b>M<p>-2,<mutantes de BMP-2, BMP-2(C/A); SUMO; y mutantes y fragmentos de los mismos.>
Los péptidos variantes del CNP descritos en la presente se pueden sintetizar utilizando un sintetizador de péptidos y purificarse de acuerdo con métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, de acuerdo con los métodos de Atherton and Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach, IRL Press (Oxford, England (1989)).
D. Métodos de uso de péptidos variantes del CNP, composiciones farmacéuticas de péptidos variantes del CNP y vías de administración
Métodos de uso de variantes del CNP
Trastornos relacionados con los huesos/Displasias esqueléticas
Los factores de crecimiento de fibroblastos (FGFs) juegan papeles importantes en la formación ósea y las mutaciones en los genes del receptor de FGF (FGFR 1, 2 y 3) dan lugar a una variedad de malformaciones esqueléticas hereditarias (Curr. Biol., 5: 500-507 (1995)). En particular, las mutaciones activadoras en FGFR-3 son responsables de los trastornos de los huesos largos, incluida la acondroplasia, la forma más común de enanismo genético humano (Nature, 371: 252-254 (1994); Cell, 78: 335-342 (1994)), el trastorno más leve, hipocondroplasia (Ann. N. Y Acad. Sci., 785: 182-187 (1996)), y la displasia tanatofórica (DT) neonatal letal más grave tipos I y II (Hum. Mol. Genet., 5: 509 512 (1996); Nat. Genet., 9: 321-328 (1995)). Los modelos de ratón que sobreexpresan F<g>F-2 y, en consecuencia, activan FGFR-3, muestran huesos largos acortados y macrocefalia (Mol. Biol. Cell, 6: 1861-73 (1995)). De acuerdo con este modelo, los ratones deficientes en FGFR-3 muestran un crecimiento esquelético notable con placas de crecimiento más amplias (Nature Genet., 12: 390-397 (1996)).
Al estimular la producción de matriz, la proliferación y diferenciación de los condrocitos y aumentar el crecimiento de los huesos largos, los péptidos variantes del CNP de la divulgación son útiles para tratar mamíferos, incluyendo humanos, que padecen un trastorno relacionado con los huesos, tal como una displasia esquelética. Ejemplos nolimitantes de trastornos de huesos y displasias esqueléticas que responden al CNP incluyen acondroplasia, hipocondroplasia, baja estatura, enanismo, osteocondrodisplasias, displasia tanatofórica, osteogénesis congénita, acondrogénesis, condrodisplasia congénita, acondroplasia homocigótica, condrodisplasia congénita, displasia camptomélica, hipofosfatasia letal congénita, osteogénesis congénita del tipo perinatal letal, síndromes de polidactilia de costillas-cortas, hipocondroplasia, condrodisplasia congénita de tipo rizomélico, displasia metafisaria de tipo-Jansen, displasia espondiloepifisaria congénita, ateloteogénesis, displasia diastrófica, fémur corto congénito, displasia mesomélica de tipo Langer, displasia mesomélica tipo-Nievergelt, síndrome de Robinow, síndrome de Reinhardt, acrodisostosis, disostosis periférica, displasia de Kniest, fibrocondrogénesis, síndrome de Roberts, displasia acromesomélica, micromelia, síndrome de Morquio, síndrome de Kniest, displasia metatrófica y displasia espondiloepimetafisaria. Además, las variantes del CNP son útiles como complemento o alternativa a la hormona del crecimiento para el tratamiento de la baja estatura idiopática y otras displasias esqueléticas.
Además, los péptidos variantes del CNP son útiles para tratar otras afecciones y trastornos relacionados con los huesos, tales como el raquitismo, el raquitismo hipofosfatémico [incluyendo el raquitismo hipofosfatémico ligado a-X (también llamado raquitismo resistente a la vitamina D) y el raquitismo hipofosfatémico autosómico dominante] y la osteomalacia [incluyendo la osteomalacia inducida por tumores (también llamada osteomalacia oncogénica u osteomalacia hipofosfatémica oncogénica)].
Los péptidos variantes del CNP y las composiciones y formulaciones que los comprenden de la presente invención son útiles para mejorar uno o más de los síntomas o consecuencias fisiológicas de una displasia esquelética, en el que la mejora puede ser un aumento del crecimiento absoluto, un aumento de la velocidad de crecimiento, un aumento de la densidad mineral ósea mediante tomografía computarizada cualitativa (QCT), mejora en la morfología de la placa de crecimiento, aumento del crecimiento de los huesos largos, mejora en la morfología de la columna, mejora en el rango de movimiento de la articulación del codo y/o disminución de la apnea del sueño. En este respecto, cabe señalar que los términos "mejorado", "mejora", "aumento", "disminución" y los equivalentes gramaticales de los mismos son todos términos relativos que, cuando se utilizan en relación con un síntoma o consecuencia fisiológica de un estado de la enfermedad, se refieren al estado del síntoma o consecuencia fisiológica de la enfermedad después del tratamiento con un péptido variante del CNP (o composición o formulación que comprende el mismo) en comparación con el mismo síntoma o consecuencia fisiológica de la enfermedad antes del tratamiento con un péptido variante del CNP (o composición o formulación que comprende el mismo) (es decir, en comparación con la "línea de base"). Como se describió anteriormente, un estado "línea de base" puede determinarse ya sea mediante la medición del estado en el sujeto antes del tratamiento (lo cual posteriormente puede compararse con el estado en el mismo sujeto después del tratamiento), o mediante la medición de ese estado en una población de sujetos que padecen la misma aflicción y que comparten características iguales o similares (por ejemplo, edad, sexo y/o estado o progresión de la enfermedad).
Aumentor o mejora de la velocidad de crecimiento
Las composiciones y formulaciones de la presente invención también se pueden administrar con el propósito de mejorar o aumentar la velocidad de crecimiento en un sujeto que padece displasia esquelética. En una realización preferible, el sujeto padece acondroplasia.
Se pueden realizar mediciones de la velocidad de crecimiento de los sujetos a lo largo del tiempo utilizando técnicas estándar bien conocidas en la técnica. Las mediciones de parámetros tales como la altura de pie, la altura sentado, el peso, la circunferencia de la cabeza, la longitud de la parte superior del brazo, la longitud de la parte inferior del brazo (brazo inferior), la longitud de la parte superior de la pierna, la longitud de la parte inferior de la pierna (de la rodilla al pie), la longitud de la mano (de la muñeca a la punta del dedo) y/o la longitud del pie se pueden realizar durante un período de tiempo específico para determinar la tasa específica de crecimiento medida por cualquier parámetro particular (es decir, la velocidad de crecimiento). Las mediciones de la velocidad de crecimiento durante un período de tiempo específico pueden "anualizarse", en el que la tasa de crecimiento calculada durante un período de tiempo específico se convierte en la tasa de crecimiento esperada durante un período de un año. Las mediciones de la velocidad de crecimiento en un sujeto antes del tratamiento con un péptido variante del CNP (es decir, una velocidad de crecimiento de la "línea de base") pueden compararse con mediciones de la velocidad de crecimiento durante o después del tratamiento con un péptido variante del CNP para determinar el efecto del tratamiento sobre los cambios en la velocidad de crecimiento del sujeto. También se puede determinar una velocidad de crecimiento de la "línea de base" a partir de una población de sujetos de la misma edad general, sexo y estado de enfermedad que el individuo que está siendo tratado con un péptido variante del CNP.
Mejoras en la velocidad de crecimiento medida mediante la evaluación de uno o más de los parámetros descritos anteriormente (por ejemplo, altura de pie, etc.) inducidas o causadas por el tratamiento de un sujeto en necesidad del mismo con un péptido variante del CNP (o composición o formulación que comprende el mismo) puede medirse cuantitativamente. En este respecto, el aumento anualizado o la mejora de la velocidad de crecimiento de cualquier parámetro particular en un sujeto tratado con una variante del CNP (o una composición o formulación que comprende el mismo) puede ser al menos alrededor de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% o 50% o más por encima de la línea de base. Los métodos descritos en la presente pueden dar como resultado un aumento anualizado en la velocidad de crecimiento medida por la altura de pie de al menos alrededor de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% o 50% o más por encima de la línea de base. Los métodos descritos en la presente pueden dar como resultado un aumento anualizado en la velocidad de crecimiento medida por ya sea la altura sentado, el peso, la circunferencia de la cabeza, la longitud de la parte superior del brazo, la longitud de la parte inferior del brazo (brazo inferior), la longitud de la parte superior de la pierna, la longitud de la parte inferior de la pierna (rodilla a pie), la longitud de la mano (desde la muñeca hasta la punta del dedo), o longitud del pie de al menos alrededor de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% o 50%, o más por encima la línea de base. Como se describe en la presente, el comparador de la línea de base puede ser la velocidad de crecimiento anualizada medida por el parámetro específico antes del tratamiento del mismo sujeto con un péptido variante del CNP, o puede ser la velocidad de crecimiento determinada a partir de una población de sujetos de la misma edad general, sexo y estado de la enfermedad del individuo que está siendo tratado con un péptido variante del CNP
También se pueden obtener datos antropométricos relacionados con la proporcionalidad de ciertos segmentos corporales con respecto a otros de sujetos tanto antes como después del tratamiento con un péptido variante del CNP para determinar si la administración de un péptido variante del CNP produce cambios en dicha proporcionalidad. Por ejemplo, las proporciones de la longitud de la parte superior del cuerpo (de la cintura a la parte superior de la cabeza) a la longitud de la parte inferior del cuerpo (de la cintura a los pies) se pueden calcular tanto antes del tratamiento con un péptido variante del CNP (es decir, línea de base) como después del tratamiento con un péptido variante del CNP para determinar si el tratamiento con el péptido variante del<c>N<p>tiene un efecto adverso sobre la proporcionalidad corporal. También se pueden calcular y comparar las proporciones de la longitud de la parte superior del brazo a la del brazo inferior o de la parte superior de la pierna a la parte inferior de la pierna (rodilla a pie) para determinar el efecto del tratamiento con el péptido variante del CNP sobre la proporcionalidad corporal. La administración de un péptido variante del CNP a un sujeto puede no dar como resultado un cambio significativo en la proporcionalidad corporal medida por cualquier proporción específica en comparación con la línea de base. En este respecto, el tratamiento con un péptido variante del CNP, o una composición o formulación que comprende el mismo, de la presente invención puede dar como resultado un cambio en cualquiera de las proporciones descritas anteriormente de no más de 0.5, 0.25, 0.20, 0.15, 0.10 o 0.05, preferiblemente no más de 0.05.
En los diversos métodos descritos en la presente, se prefiere que la administración del péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo no dé como resultado un evento adverso relacionado con el fármaco del estudio de grado dos o superior, o de grado tres o superior, en el sujeto tratado. En este respecto, en http://evs.nci.nih.gov/ftpl/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5x11.pdf se pueden encontrar técnicas para medir y clasificar eventos fisiológicos asociados con el tratamiento de un sujeto con un compuesto, y una lista de eventos adversos clasificados.
Además, en los diversos métodos descritos en la presente, se prefiere que la administración del péptido variante del CNP o la composición o formulación que comprende el mismo no dé como resultado un cambio clínicamente significativo (ya sea un aumento o una disminución en comparación con la línea de base) en uno o más de los siguientes parámetros fisiológicos; concentración de hemoglobina en sangre, número de plaquetas en sangre, concentración de electrolitos en sangre, concentración de nitrógeno ureico en sangre, concentración de creatinina en sangre, concentración de fosfatasa alcalina en sangre, concentración de alanina aminotransferasa en sangre o concentración de aspartato aminotransferasa en sangre. Por "cambio clínicamente significativo" se entiende un cambio en uno cualquiera o más de los parámetros anteriores que se observa que da como resultado un cambio fisiológico adverso detectable/observable en la salud general del sujeto.
Composiciones farmacéuticas y formulaciones de péptidos variantes del CNP
También se divulga el uso de composiciones y formulaciones farmacéuticas que comprenden un péptido variante del CNP y uno o más excipientes, portadores y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Las composiciones pueden comprender además uno o más agentes biológicamente activos (por ejemplo, inhibidores de proteasas, receptores de tirosina cinasas y/o el receptor de eliminación de NPR-C).
Los ejemplos no-limitantes de excipientes, portadores y diluyentes incluyen vehículos, líquidos, amortiguadores, agentes de isotonicidad, aditivos, estabilizadores, conservantes, solubilizantes, tensioactivos, emulsionantes, agentes humectantes, adyuvantes, y así sucesivamente. Las composiciones pueden contener líquidos (por ejemplo, agua, etanol); diluyentes de diversos contenidos de amortiguador (por ejemplo, Tris-HCl, fosfato, amortiguadores de acetato, amortiguadores de citrato), pH y fuerza iónica; detergentes y agentes solubilizantes (por ejemplo, Polisorbato 20, Polisorbato 80); antioxidantes (por ejemplo, metionina, ácido ascórbico, metabisulfito de sodio); conservantes (por ejemplo, Timerosol, alcohol bencílico, m-cresol); y sustancias que aumentan el volumen (por ejemplo, lactosa, manitol, sacarosa). El uso de excipientes, diluyentes y portadores en la formulación de composiciones farmacéuticas es conocido en la técnica; véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, páginas 1435-1712, Mack Publishing Co. (Easton, Pennsylvania (1990)).
Por ejemplo, los portadores incluyen, sin limitación, diluyentes, vehículos y adyuvantes, así como portadores de implantes y rellenos sólidos o líquidos inertes y no-tóxicos y materiales encapsulantes que no reaccionan con los ingredientes activos. Los ejemplos no-limitantes de portadores incluyen salina amortiguada con fosfato, salina fisiológica, agua y emulsiones (por ejemplo, emulsiones de aceite/agua). Un portador puede ser un solvente o medio dispersante que contenga, por ejemplo, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido y similares), un aceite vegetal y mezclas de los mismos.
Las composiciones pueden ser formulaciones líquidas. Las formulaciones pueden comprender un péptido variante del CNP en un intervalo de concentración de alrededor de 0.1 mg/ml a alrededor de 20 mg/ml, o de alrededor de 0.5 mg/ml a alrededor de 20 mg/ml, o de alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 20 mg/ml, o de alrededor de 0.1 mg/ml a alrededor de 10 mg/ml, o de alrededor de 0.5 mg/ml a alrededor de 10 mg/ml, o de alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 10 mg/ml, o de alrededor de 2 mg/ml a alrededor de 10 mg/ml, o alrededor de 2 mg/ml o alrededor de 10 mg/ml. La formulación puede ser una formulación liofilizada o puede ser una formulación líquida que se reconstituyó previamente a partir de una formulación liofilizada.
Las composiciones pueden comprender una solución amortiguadora o un agente amortiguador para mantener el pH de una solución o suspensión que contiene CNP dentro de un intervalo deseado. Los ejemplos no-limitantes de soluciones amortiguadoras incluyen salina amortiguada con fosfato, salina amortiguada con Tris y salina amortiguada de Hank. Los agentes amortiguadores incluyen, sin limitación, acetato de sodio, fosfato de sodio, monohidrato de ácido cítrico y dihidrato de citrato de sodio. También se pueden utilizar mezclas de agentes amortiguadores. El agente amortiguador puede ser ácido acético/acetato o ácido cítrico/citrato. La cantidad del agente amortiguador adecuado en una composición depende en parte del amortiguador particular utilizado y del pH deseado de la solución o suspensión. Por ejemplo, el acetato es un amortiguador de pH más eficaz a pH 5 que a pH 6, por lo que se puede utilizar menos acetato en una solución a pH 5 que a pH 6. El agente amortiguador puede tener una concentración de alrededor de 10 mM ± 5 mM. El pH de una composición puede ser de alrededor de pH 3 a alrededor de pH 7.5, o de alrededor de pH 3.5 a alrededor de pH 7, o de alrededor de pH 3.5 a alrededor de pH 6.5, o de alrededor de pH 4 a alrededor de pH 6, o de alrededor de pH 4 a alrededor de pH 5, o está a alrededor de pH 5.0 ± 1.0, o está a alrededor de pH 5.5 ± 1.0.
Las composiciones pueden contener un agente de isotonicidad para hacer que la solución o suspensión sea isotónica y más compatible para la inyección. Los ejemplos no-limitantes de agentes de isotonicidad incluyen NaCl, trehalosa, manitol, dextrosa, glucosa, glicerina, sorbitol, xilitol y etanol. Por ejemplo, el agente de isotonicidad es trehalosa o manitol, que pueden emplearse individualmente o en combinación. En ejemplos específicos, la trehalosa o manitol está en una concentración de alrededor de 160 ± 20 mM, o alrededor de 140 mM ± 20 mM, o alrededor de 120 ± 20 mM, o alrededor de 100 mM ± 20 mM, o alrededor de 80 mM ± 20 mM, o alrededor de 60 mM ± 20 mM.
Las composiciones pueden comprender un conservante. Los conservantes incluyen, pero no se limitan a, m-cresol y alcohol bencílico. El conservante puede estar en una concentración de alrededor de 0.4% ± 0.2%, o alrededor de 1% ± 0.5%, o alrededor de 1.5% ± 0.5%, o alrededor de 2.0% ± 0.5%. Alternativamente, la composición o formulación puede no contener un conservante.
Las composiciones pueden contener un agente anti-adsorbente (por ejemplo, para mitigar la adsorción de una variante del CNP al vidrio o plástico). Los agentes anti-adsorbentes incluyen, sin limitación, alcohol bencílico, polisorbato 20 y polisorbato 80. El anti-adsorbente puede estar en una concentración de alrededor de 0.001% a alrededor de 0.5%, o de alrededor de 0.01% a alrededor de 0.5%, o de alrededor de 0.1% a alrededor de 1%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 1%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 1.5%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 2%, o de alrededor de 1% a alrededor de 2%.
Las composiciones pueden comprender un estabilizador. Los ejemplos no-limitantes de estabilizadores incluyen glicerina, glicerol, tioglicerol, metionina y ácido ascórbico y sales de los mismos. En los casos en los que el estabilizador sea tioglicerol o ácido ascórbico o una sal de los mismos, el estabilizador está preferiblemente en una concentración de alrededor de 0.1% a alrededor de 1%.
Las composiciones pueden contener un antioxidante. Un antioxidante ejemplar sin limitación es el ácido ascórbico. La proporción molar de antioxidante a péptido variante del CNP puede ser de alrededor de 0.1:1 a alrededor de 15:1, o de alrededor de 1:1 a alrededor de 15:1, o de alrededor de 0.5:1 a alrededor de 10:1, o de alrededor de 1:1 a alrededor de 10:1 o de alrededor de 3:1 a alrededor de 10:1.
Se pueden utilizar sales farmacéuticamente aceptables en las composiciones, incluyendo, sin limitación, sales de ácidos minerales (por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, fosfato, sulfato), sales de ácidos orgánicos (por ejemplo, acetato, propionato, malonato, benzoato, mesilato, tosilato) y sales de aminas (por ejemplo, isopropilamina, trimetilamina, diciclohexilamina, dietanolamina). Se encuentra una discusión detallada sobre las sales farmacéuticamente aceptables en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, (Easton, Pennsylvania (1990)).
Se pueden preparar formulaciones para administración parenteral, por ejemplo, como soluciones o suspensiones líquidas, como formas sólidas adecuadas para la solubilización o suspensión en un medio líquido antes de la inyección, o como emulsiones. Por ejemplo, se pueden formular soluciones y suspensiones inyectables estériles de acuerdo con técnicas que son conocidas en la técnica utilizando diluyentes, portadores y solventes adecuados (por ejemplo, solución acuosa amortiguada, solución de Ringer, solución isotónica de cloruro de sodio), agentes dispersantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes de suspensión y los similares. Además, se pueden utilizar aceites fijos estériles, ésteres grasos, polioles y/u otros ingredientes inactivos. Como ejemplos adicionales, las formulaciones para administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener agentes de suspensión y agentes espesantes.
Formulaciones ejemplares que contienen péptidos del CNP se describen en Patentes de EE. UU 8,198,242 y 8,598,121. Se contempla el uso de formulaciones del CNP que tienen un pH en el intervalo de alrededor de 4 a alrededor de 6.
Los péptidos variantes del CNP pueden formularse en portadores farmacéuticos para la administración a sujetos afectados por displasia esquelética. Las formulaciones líquidas de péptidos variantes del CNP se pueden formular de acuerdo con cualquier combinación de los ingredientes y sus cantidades o concentraciones que se describen a continuación:
Las composiciones que comprenden un péptido variante del CNP también pueden ser formulaciones liofilizadas. Las formulaciones liofilizadas pueden comprender un amortiguador y un agente que aumenta el volumen y, opcionalmente, un antioxidante. Los amortiguadores ejemplares incluyen, sin limitación, amortiguadores de acetato y amortiguadores de citrato. Los agentes que aumentan el volumen ejemplares incluyen, sin limitación, manitol, sacarosa, dexrano, lactosa, trehalosa y povidona (PVP K24). En ciertos casos, manitol y/o trehalosa pueden estar en una cantidad de alrededor de 3% a alrededor de 10%, o de alrededor de 4% a alrededor de 8%, o de alrededor de 4% a alrededor de 6%. En ciertos casos, la sacarosa puede estar en una cantidad de alrededor de 6% a alrededor de 20%, o de alrededor de 6% a alrededor de 15%, o de alrededor de 8% a alrededor de 12%.
Se pueden preparar formulaciones liofilizadas de péptidos variantes del CNP a partir de formulaciones formuladas de acuerdo con cualquier combinación de los ingredientes y sus cantidades o concentraciones que se describen a continuación:
En diversos casos, una formulación que comprende un péptido variante del CNP tiene un pH de alrededor de 3-7, o alrededor de 3-6, o alrededor de 3.5-6.5, o alrededor de 4-6, o alrededor de 4-5, o alrededor de 4.5-5.5. En algunos casos, para pH 4-5.5 un agente amortiguador adecuado es ácido acético/acetato (por ejemplo, acetato de sodio), y para pH 5.5-6 un agente amortiguador adecuado es ácido cítrico/citrato. El ácido cítrico/citrato (por ejemplo, citrato de sodio) también es un agente amortiguador adecuado en el intervalo de pH 3-6 o pH 4-6. En ciertos casos, el agente amortiguador tiene una concentración en la formulación de alrededor de 2-50 mM, o alrededor de 2-40 mM, o alrededor de 2-30 mM, o alrededor de 5-30 mM, o alrededor de 2-20 mM, o alrededor de 5-20 mM, o alrededor de 5-15 mM.
Además, para minimizar o evitar la desamidación de un péptido variante del CNP, se puede eliminar el agua de la formulación mediante liofilización. Las formulaciones liofilizadas pueden contener cualquier combinación de los siguientes componentes: amortiguador: acetato de sodio y ácido acético, o citrato de sodio y ácido cítrico; agente de isotonicidad/que aumenta el volumen: manitol (por ejemplo, 3-10%, 2-8% o 4-6%); sacarosa (por ejemplo, 6-20%, 5 15% u 8-12%); antioxidantes: metionina y/o ácido ascórbico con una proporción molar de cada antioxidante a péptido variante del CNP de alrededor de 0.1:1 a alrededor de 1:1, o de alrededor de 0.5:1 a alrededor de 5:1, o de alrededor de 1:1 a alrededor de 15:1, o de alrededor de 1:1 a alrededor de 10:1, o de alrededor de 3:1 a alrededor de 10:1.
La desamidación también se puede minimizar o evitar almacenando una composición del CNP (por ejemplo, una formulación líquida o una formulación liofilizada) a una temperatura más baja, tal como a alrededor de 5 °C, 0 °C, -10 °C, -20 °C, -30 °C, -40 °C, -50 °C, -60 °C, -70 °C, -80 °C, -90 °C o -100 °C.
Para minimizar o evitar la oxidación de residuos oxidables (por ejemplo, metionina) en un péptido variante del CNP, la variante se puede formular con uno o más antioxidantes. Los antioxidantes ejemplares incluyen, pero no se limitan a, metionina, ácido ascórbico y tioglicerol. La oxidación de, por ejemplo, residuos de metionina también se puede minimizar o prevenir purgando oxígeno de un medio líquido (si es una formulación líquida) con nitrógeno o argón, y/o purgando oxígeno de un recipiente o envase con nitrógeno o argón.
Para minimizar o prevenir la adsorción (por ejemplo, adsorción de un péptido variante del CNP al plástico o vidrio), se puede agregar polisorbato 20, polisorbato 80 o alcohol bencílico, o una combinación de los mismos, a una formulación del CNP. Cada uno de los antiadsorbentes puede estar en una concentración de alrededor de 0.001% a alrededor de 0.5%, o de alrededor de 0.01% a alrededor de 0.5%, o de alrededor de 0.1% a alrededor de 1%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 1%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 1.5%, o de alrededor de 0.5% a alrededor de 2%, o de alrededor de 1% a alrededor de 2%. Los intervalos ejemplares de antiadsorbentes en la formulación incluyen, sin limitación, de alrededor de 0.001% a alrededor de 0.5% de Polisorbato 20, de alrededor de 0.001% a alrededor de 0.5% de Polisorbato 80 y/o de alrededor de 0.5% a alrededor de 1.5% de alcohol bencílico
La divulgación también proporciona kits que contienen, por ejemplo, frascos, viales, ampollas, tubos, cartuchos y/o jeringas que comprenden una formulación líquida (por ejemplo, inyectable estéril) o una formulación sólida (por ejemplo, liofilizada). Los kits también pueden contener vehículos o portadores farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, solventes, soluciones y/o amortiguadores) para reconstituir una formulación sólida (por ejemplo, liofilizada) en una solución o suspensión para administración (por ejemplo, mediante inyección), incluyendo, sin limitación, la reconstitución de un formulación liofilizada en una jeringa para inyección o para diluir el concentrado a una concentración más baja. Además, se pueden preparar soluciones y suspensiones para inyección extemporánea a partir de, por ejemplo, polvo estéril, gránulos o tabletas que comprenden una composición que contiene-CNP Los kits también pueden incluir dispositivos dispensadores, tales como dispositivos dispensadores de aerosol o inyección, inyectores de pluma, autoinyectores, inyectores sin aguja, jeringas y/o agujas.
Dosis y frecuencia de dosificación
Como se utiliza en la presente, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" de un agente activo (por ejemplo, un péptido variante del c Np ) se refiere a una cantidad que proporciona un beneficio terapéutico a un paciente. La cantidad puede variar de un individuo a otro y puede depender de varios factores, incluyendo la condición física general del paciente. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido variante del CNP, utilizando materiales y procedimientos disponibles públicamente. Por ejemplo, la cantidad de un péptido variante del CNP utilizada para la terapia debería dar una tasa de crecimiento aceptable de acuerdo con las tablas de crecimiento para niños de 0-17 años con acondroplasia (214 mujeres y 189 hombres), que enlistan la altura para la edad, la circunferencia de la cabeza, y crecimiento segmentario (Horton WA et al., Standard growth curves for achondroplasia, J. Pediatr., 93: 435-8 (1978)). Las gráficas de CDC se pueden utilizar para evaluar el peso para la edad y el peso para la altura o el IMC para la edad. También se pueden medir los resultados secundarios que son de naturaleza más crónica con cursos.
La frecuencia de dosificación para un individuo en particular puede variar dependiendo de varios factores, incluyendo el trastorno que se está tratando y la condición y respuesta del individuo a la terapia. Una composición farmacéutica que contiene un péptido variante del CNP se puede administrar a un sujeto alrededor de una vez al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días o una vez por semana, dos veces por semana, tres veces por semana, una vez cada dos semanas o mensualmente. Para el tratamiento de trastornos relacionados con los huesos (por ejemplo, displasias esqueléticas, incluida la acondroplasia), se puede administrar una dosis diaria o semanal de un péptido variante del CNP a los pacientes hasta y/o durante la edad adulta.
Los péptidos variantes del CNP descritos en la presente se pueden administrar a una dosis en el intervalo de alrededor de 5 o 10 nmol/kg a alrededor de 300 nmol/kg, o de alrededor de 20 nmol/kg a alrededor de 200 nmol/kg. Por ejemplo, los péptidos variantes del CNP se pueden administrar a una dosis de alrededor de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1750 o 2000 nmol/kg u otra dosis que el médico tratante considere adecuada. En otros casos, los péptidos variantes del CNP se pueden administrar a una dosis de alrededor de 5, 7.5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 o 1000 pg/kg, o alrededor de 1, 1.25, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 o 10 mg/kg, u otra dosis que el médico tratante considere adecuada. El péptido variante del CNP se puede administrar a una dosis de alrededor de 7.5 a 100 pg/kg, o de alrededor de 15 a 75 pg/kg, o alrededor de 15 a 30 pg/kg, o alrededor de 2.5 pg/kg, 7.5 pg/kg, 15.0 pg/kg, 30.0 pg/kg o 60.0 pg/kg. Las dosis de péptidos variantes del c Np descritas en la presente se pueden administrar de acuerdo con la frecuencia de dosificación/frecuencia de administración descrita en la presente, incluyendo, sin limitación, diariamente, 2 o 3 veces por semana, semanalmente, cada 2 semanas, cada 3 semanas, mensualmente, etc. La administración de un péptido variante del CNP puede ocurrir durante un período de tiempo prolongado, en algunos casos, más de un mes, tres meses, seis meses o más.
La frecuencia de dosificación/administración de un péptido variante del CNP para un sujeto particular puede variar dependiendo de diversos factores, incluyendo el trastorno que se está tratando y la condición y respuesta del sujeto a la terapia. El péptido variante del CNP se puede administrar en una dosis única o en dosis múltiples por dosificación. En determinados casos, el péptido variante del CNP se puede administrar, en una dosis única o en dosis múltiples, diariamente, cada dos días, cada 3 días, 2 veces por semana, 3 veces por semana, semanalmente, quincenalmente, cada 3 semanas, mensualmente, cada 6 semanas, cada 2 meses, cada 3 meses, o según lo considere apropiado el médico tratante.
Se puede administrar un péptido variante del CNP para permitir períodos de crecimiento (por ejemplo, condrogénesis), seguidos de un período de recuperación (por ejemplo, osteogénesis). Por ejemplo, el péptido variante del CNP se puede administrar por vía intravenosa, subcutánea, intraarticular o mediante otro modo diariamente o varias veces por semana durante un período de tiempo, seguido de un período sin tratamiento, luego se repite el ciclo. El período inicial de tratamiento (por ejemplo, administración del péptido variante del CNP diariamente o varias veces por semana) puede ser de 3 días, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas o 12 semanas. El período sin tratamiento puede durar 3 días, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas o 4 semanas. El régimen de dosificación del péptido variante del CNP puede ser diario durante 3 días seguido de 3 días de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 1 semana seguida de 3 días o 1 semana de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 2 semanas seguidas de 1 o 2 semanas de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 3 semanas seguidas de 1, 2 o 3 semanas de descanso; o diariamente o varias veces por semana durante 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 semanas seguidas de 1,2, 3 o 4 semanas de descanso.
Modos de administración
Los péptidos variantes del CNP, o las composiciones o formulaciones farmacéuticas que los comprenden, se pueden administrar a sujetos de diversas maneras tales como, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intraarticular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica o intratecal. Los péptidos variantes del CNP se pueden administrar mediante una única inyección subcutánea, intraarticular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica o intratecal una vez al día, una cada dos días, una vez cada tres días o una vez a la semana.
Los péptidos variantes del CNP también se pueden administrar mediante inyección directa en el sitio de la enfermedad o cerca de este. Además, los péptidos variantes del CNP se pueden administrar mediante la implantación de un depósito en el sitio de acción diana (por ejemplo, una articulación o área de cartílago anormal o degenerada). Alternativamente, los péptidos variantes del Cn P se pueden administrar por vía sublingual debajo de la lengua (por ejemplo, tableta sublingual) o por inhalación en los pulmones (por ejemplo, inhalador o pulverización de aerosol), mediante administración en la cavidad nasal (por ejemplo, pulverización intranasal), mediante administración en el ojo (por ejemplo, gotas para los ojos) o mediante administración transdérmica (por ejemplo, por medio de un parche en la piel). Los péptidos variantes del CNP también se pueden administrar por vía oral en forma de microesferas, microcápsulas, liposomas (cargados o sin carga (por ejemplo, catiónicos)), micropartículas poliméricas (por ejemplo, poliamidas, polilactida, poliglicolida, poli(lactida-glicolida)), microemulsiones, y similares.
Un método adicional de administración es mediante bomba osmótica (por ejemplo, una bomba Alzet) o mini-bomba (por ejemplo, una mini-bomba osmótica Alzet), la cual permite la administración controlada, continua y/o de liberaciónlenta del péptido variante del CNP o composición farmacéutica durante un período predeterminado. La bomba osmótica o mini-bomba se puede implantar por vía subcutánea o cerca del sitio diana (por ejemplo, los huesos largos de las extremidades, la epífisis, etc.).
Será evidente para un experto en la técnica que los péptidos variantes del CNP o las composiciones de los mismos también se pueden administrar mediante otros modos. La determinación del modo de administración más eficaz de los péptidos variantes del CNP o composiciones de los mismos está dentro de la habilidad del experto en la técnica.
Los aspectos y detalles adicionales de la divulgación serán evidentes a partir de los siguientes ejemplos, que pretenden ser ilustrativos en lugar de limitantes.
E. Ejemplos
Ejemplo 1- Datos de ensayos clínicos en humanos durante seis meses para pacientes con acondroplasia
Para poder determinar el efecto de los péptidos variantes del CNP sobre los síntomas de displasia esquelética, tal como la acondroplasia, y sobre el crecimiento de los huesos largos y/o la velocidad de crecimiento (medido por la tasa de aumento en la altura de pie del paciente después del tratamiento en comparación con el pretratamiento) en pacientes con acondroplasia, se llevaron a cabo estudios de aumento de dosis en niños con acondroplasia (ACH) de 5-14 años (inclusive) que tenían ACH documentada, de acuerdo con lo documentado por fundamentos clínicos y confirmado mediante pruebas genéticas.
Antes de la administración de una formulación que comprende un péptido variante del CNP como se describe en la presente, se recolectaron mediciones de crecimiento en serie (en una variedad de parámetros diferentes) y mediciones de la velocidad de crecimiento (en al menos la altura del paciente de pie) a intervalos de tres meses de pacientes del estudio no tratados para establecer niveles de línea de base para la velocidad de crecimiento y la proporcionalidad de las proporciones corporales como se describe anteriormente. Una vez que se obtuvieron los niveles de la línea de base para la velocidad de crecimiento y la proporcionalidad de las proporciones corporales, se administró entonces una formulación que comprende un péptido variante del CNP (específicamente Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5) como una dosis diaria por vía subcutánea en uno de los siguientes regímenes de dosificación: Cohorte 1 (n=8): dosis diaria de 2.5 μg/kg de péptido Pro-Gly-CNP-37, Cohorte 2 (n=8), dosis diaria de 7.5 jg/kg de péptido Pro-Gly-CNP-37; Cohorte 3 (n=10), dosis diaria de 15.0 jg/kg de péptido Pro-Gly-CNP-37. La administración subcutánea diaria se realizó durante 6 meses.
Más específicamente, el péptido Pro-Gly-CNP-37 se formuló en una composición estéril y libre de conservantes que comprende 2.0 mg/ml o 10 mg/ml del péptido CNP en combinación con 0.28 mg/ml de monohidrato de ácido cítrico, 1.08 mg/ml de dihidrato de citrato de sodio, 58.01 mg/ml de dihidrato de trehalosa, 15 mg/ml de D-manitol, 0.73 mg/ml de L-metionina y 0.05 mg/ml de polisorbato 80, pH 5.5. Esta composición líquida se reconstituyó a partir de una formulación originalmente liofilizada que comprende los componentes descritos y se suministró en un vial de vidrio transparente de borosilicato sin tratar tipo I, estéril, de un solo uso. Esta formulación líquida reconstituida se empleó en todos los estudios del tratamiento clínico en humanos descritos en la presente.
Durante el curso de la administración del péptido variante del CNP, se realizaron varias evaluaciones, incluido el peso corporal, la medición de la longitud de los huesos y el crecimiento óseo, incluyendo el cálculo de la proporción entre la longitud de la parte superior del brazo y la longitud del brazo inferior, la proporción entre la longitud de la parte superior de la pierna y la longitud de la parte inferior de la pierna y la proporción entre la longitud de la parte superior del cuerpo y la longitud de la parte inferior del cuerpo. Las mediciones de la velocidad de crecimiento también se calcularon midiendo la altura de pie de los pacientes, y los datos se compararon con las tasas de velocidad de crecimiento de la línea de base obtenidas previamente. Las evaluaciones se realizaron aproximadamente a los días 15, 22, 29, 43, 85, 127 y 183 después de la primera administración del péptido variante del CNP.
Los datos de la evaluación de imágenes exploratorias incluyeron mediciones y morfología de la columna, huesos largos y extremidades, así como medidas de la placa de crecimiento, edad ósea y densidad mineral ósea. Los ensayos incluyen radiografía anteroposterior (AP) de la pelvis para la evaluación de la línea de base de la cadera; radiografías postero-anteriores (PA) de la mano y muñeca izquierdas para evaluar la edad ósea (Greulich, 1971, Stanford University Press.); (Tanner, 1975, Academic Press.), placas de crecimiento, longitud de la mano y grosor cortical; Radiografía AP de la extremidad inferior para evaluar las placas de crecimiento, longitud tibial, espesor cortical e inclinación, radiografías AP de la columna lumbar para evaluar la distancia interpedicular transversal. Se realizan radiografías laterales de la columna lumbar para evaluar el ángulo de la lordosis toracolumbar, la morfología vertebral, así como otros cambios potenciales relacionados con la estenosis espinal, un escaneo QCT del brazo inferior y la tibia para evaluar la densidad mineral ósea, la morfología de la placa de crecimiento y la longitud del hueso. Este escaneo se puede realizar con un escáner CT estándar, un espectro de calibración y un software designado, utilizando un protocolo predeterminado de dosis baja de radiación, que evita la radiación directa a la cabeza y el torso.
Estudio del sueño: La apnea del sueño sin tratar en la infancia se ha asociado repetidamente con malos resultados funcionales y de salud, incluyendo impactos negativos en ciertos aspectos del desarrollo infantil, tal como el comportamiento y aprendizaje. Los déficits cognitivos que se reporta están asociados con la apnea del sueño en niños incluyen el aprendizaje, la memoria y las habilidades visoespaciales; lenguaje, fluidez verbal, desempeño escolar y funciones ejecutivas. Además, los trastornos respiratorios del sueño en pediátricos se han asociado con anomalías del crecimiento; alteraciones en la salud cardíaca, incluida la presión arterial sistólica y diastólica, la regulación autonómica, la oxigenación cerebral y el flujo sanguíneo cerebral, lo cual sugiere que el síndrome de apnea obstructiva del sueño infantil puede poner en peligro la salud cardiovascular a largo-plazo; y marcadores sistémicos de inflamación (Marcus, 2012, Pediatrics). Se utiliza un dispositivo de prueba del sueño para evaluar la presencia y gravedad de los trastornos respiratorios del sueño mediante la medición de la saturación de oxígeno en sangre, la frecuencia del pulso y el flujo de aire durante la monitorización nocturna. La evaluación de la apnea del sueño incluye, pero no se limita a,<determinar el número de episodios de apnea e hipopnea por hora (Apnea/índice de hipopnea,>A<hi>).
Las medidas de flexión-extensión del rango de movimiento de la articulación del codo se miden con un goniómetro.
Los biomarcadores se evalúan de acuerdo con el cambio desde la línea de base e incluyen, pero no se limitan a, evaluación del recambio del cartílago (CTX-II), actividad de condrocitos y osteoblastos (fosfatasa alcalina específica del hueso), formación ósea (P1NP), recambio óseo (osteocalcina); y marcadores de bioactividad del CNP (GMPc, NT-proCNP, y ANP), así como biomarcadores adicionales. En los momentos designados se recolectan muestras de sangre y orina para marcadores bioquímicos de colágeno y recambio óseo, y para marcadores de la actividad del CNP.
Resultados: El cambio en la velocidad de crecimiento como resultado del tratamiento con el péptido variante del CNP Pro-Gly-CNP-37 se midió en la Cohorte 1 (2.5 jg/kg/día), la Cohorte 2 (7.5 jg/kg/día) y la Cohorte 3 (15 jg/kg/día) para un total de 26 pacientes midiendo los cambios en la altura de pie durante el tratamiento y comparándolos con las tasas de velocidad de crecimiento de la línea de base medidas antes del tratamiento. El cambio promedio en la velocidad de crecimiento en la altura durante el estudio de 6 meses se resume en la Tabla 1. Como se demuestra en la Tabla 1, no se observó un aumento significativo en la velocidad de crecimiento en los pacientes con acondroplasia tratados con 2.5 pg/kg/día de Pro-Gly-CNP-37 durante 6 meses (cohorte 1). Sin embargo, a diferencia de los pacientes de la cohorte 1, los pacientes con acondroplasia tratados con 7.5 pg/kg/día de Pro-Gly-CNP-37 durante 6 meses (cohorte 2) demostraron un aumento estadísticamente significativo (valor p = 0.04) en la velocidad de crecimiento de la altura de pie (en comparación con su tasa de velocidad de crecimiento de la línea de base de la altura de pie previamente calculada). Más específicamente, los pacientes de la cohorte 2 mostraron un aumento medio en la velocidad de crecimiento de la altura de 1.3 cm/año, lo cual representó un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada del 45% por encima de la línea de base. Finalmente, los pacientes con acondroplasia tratados con 15 pg/kg/día de Pro-Gly-CNP-37 durante 6 meses (cohorte 3) también demostraron un aumento estadísticamente significativo (valor p = 0.01) en la velocidad de crecimiento de la altura de pie (en comparación con su tasa de velocidad de crecimiento de la línea de base de la altura de pie previamente calculada). Más específicamente, los pacientes de la cohorte 3 mostraron un aumento medio en la velocidad de crecimiento de la altura de 2.0 cm/año, lo cual representó un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada del 50% por encima de la línea de base. Estos datos demuestran que el tratamiento subcutáneo diario de pacientes con acondroplasia con al menos 7.5 pg/kg de un péptido variante del CNP durante un período de 6 meses o más tiene un efecto benéfico sobre el crecimiento óseo, la velocidad de crecimiento y, en general, sobre el tratamiento de los síntomas de la acondroplasia.
Tabla 1
Proporcionalidad corporal. Se calcularon las proporcionalidades de la proporción corporal (longitud de la parte superior del cuerpo a la longitud de la parte inferior del cuerpo, longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna [rodilla a pie]) para todos los pacientes en todas las cohortes, tanto antes del tratamiento (línea de base) como durante el curso del tratamiento con el péptido variante del CNP.
Para la cohorte 1, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del cuerpo a la parte inferior del cuerpo, la media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y la media de la línea de base entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna fue de 2.09, 1.13 y 0.67, respectivamente. Después de 6 meses de tratamiento subcutáneo diario con 2.5 pg/kg del péptido variante del CNP, se determinó que las mismas proporcionalidades de la proporción corporal eran 2.07, 1.11 y 0.67, respectivamente, lo que representa cambios medios en esas mismas proporcionalidades de la proporción corporal de -0.02, -0.02. y 0.0, respectivamente.
Para la cohorte 2, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del cuerpo a longitud de la parte inferior del cuerpo, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna fue de 2.03, 1.14 y 0.66, respectivamente. Después de 6 meses de tratamiento subcutáneo diario con 7.5 pg/kg del péptido variante del CNP, se determinó que las mismas proporcionalidades de la proporción corporal eran 2.03, 1.14 y 0.66, respectivamente, lo que representa cambios medios en esas mismas proporcionalidades de la proporción corporal de 0.0, 0.0 y 0.0, respectivamente.
Para la cohorte 3, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del cuerpo a longitud de la parte inferior del cuerpo, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna fue de 1.91, 1.13 y 0.69, respectivamente. Después de 6 meses de tratamiento subcutáneo diario con 15 pg/kg del péptido variante del CNP, se determinó que las mismas proporcionalidades de la proporción corporal eran 1.89, 1.08 y 0.69, respectivamente, lo que representa cambios medios en esas mismas proporcionalidades de la proporción corporal de -0.02, -0.05 y 0.0, respectivamente.
Estos datos demuestran que el tratamiento de pacientes con acondroplasia con un péptido variante del CNP no tiene ningún efecto adverso significativo sobre la proporcionalidad corporal general, ya que todos los cambios medidos en la proporción de la proporcionalidad corporal cayeron entre -0.05 y 0.05, en relación con la línea de base, después de 6 meses de tratamiento con la variante del péptido CNP.
Eventos adversos. Todos los pacientes de cada una de las cohortes descritas anteriormente fueron evaluados periódicamente para la presencia de eventos adversos (de acuerdo con lo que se define en http://evs.nci.nih.gov/ftp1/CT-CAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5x11.pdf) específicamente causados por el tratamiento con el péptido variante del CNP. Ningún paciente en ninguna de las tres cohortes del estudio evidenció un evento adverso de grado dos o superior que se determinó que estuviera relacionado con el fármaco del estudio, lo que demuestra que el tratamiento de pacientes con acondroplasia con péptidos variantes del CNP no produce eventos fisiológicos adversos graves.
Además, todos los pacientes de cada cohorte del estudio fueron monitoreados periódicamente la concentración de hemoglobina en sangre, el número de plaquetas en sangre, la concentración de electrolitos en sangre, la concentración de nitrógeno ureico en sangre, la concentración de creatinina en sangre, la concentración de fosfatasa alcalina en sangre, la concentración de alanina aminotransferasa en sangre y la concentración de aspartato aminotransferasa en sangre. Los datos obtenidos de cada una de las tres cohortes del estudio demostraron que no se observaron cambios clínicamente significativos en ninguno de los indicadores de seguridad descritos anteriormente, lo que confirma nuevamente la seguridad subyacente de la terapia con péptidos variantes del CNP para la acondroplasia y los síntomas asociados.
Ejemplo 2- Datos de ensayos clínicos en humanos de doce meses para acondroplasia (Cohorte 3)
Después del primer período de tratamiento y evaluación del ensayo clínico de 6-meses, los 10 pacientes con acondroplasia de la cohorte 3 descrita en el Ejemplo 1 mencionado anteriormente continuaron con el régimen clínico de 15 μg/ml de Pro-Gly-CNP-37 administrados por vía subcutánea diariamente durante un período adicional de 6 meses (12 meses en total). Durante el transcurso del período de tratamiento adicional de seis meses, se realizaron varias evaluaciones, incluido el peso corporal, la medición de la longitud de los huesos y el crecimiento óseo, incluyendo el cálculo de la proporción entre la longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior, la proporción entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna y la proporción entre la longitud de la parte superior del cuerpo a la longitud de parte inferior del cuerpo. Las mediciones de la velocidad de crecimiento también se calcularon midiendo la altura de pie de los pacientes, y los datos se compararon con las tasas de velocidad de crecimiento de la línea de base obtenidas previamente.
Resultados; El cambio en la velocidad de crecimiento como resultado del tratamiento durante 12 meses con el péptido variante del CNP Pro-Gly-CNP-37 se midió en la Cohorte 3 (15 jg/kg/día) para un total de 10 pacientes midiendo los cambios en la altura de pie durante el tratamiento y comparando con las tasas de velocidad de crecimiento de la línea de base medidas antes del tratamiento. Los datos obtenidos de este estudio de 12-meses demostraron que los pacientes con acondroplasia tratados con 15 jg/kg/día de Pro-Gly-CNP-37 durante 12 meses (cohorte 3) demostraron un aumento estadísticamente significativo (valor p = 0.017) en la velocidad de crecimiento de la altura de pie (en comparación con su tasa de velocidad de crecimiento de la línea de base de la altura de pie previamente calculada). Más específicamente, los pacientes de la cohorte 3 mostraron un aumento medio en la velocidad de crecimiento de la altura de 1.9 cm/año, lo cual representó un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada de más del 47% por encima de la línea de base. Estos datos demuestran que el tratamiento subcutáneo diario de pacientes con acondroplasia con al menos 15 jg/kg de un péptido variante del CNP durante un período de 12 meses o más tiene un efecto benéfico sobre el crecimiento óseo, la velocidad de crecimiento y, en general, sobre el tratamiento de los síntomas de la acondroplasia.
Proporcionalidad corporal. Se calcularon las proporcionalidades de la proporción corporal (longitud de la parte superior del cuerpo a la longitud de la parte inferior del cuerpo, longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna [rodilla a pie]) para los 10 pacientes en la cohorte 3 antes del tratamiento (línea de base) y durante el curso del tratamiento con el péptido variante del CNP.
Para la cohorte 3, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del cuerpo a la longitud de la parte inferior del cuerpo, la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior del brazo a la longitud del brazo inferior y la proporción media de la línea de base entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de parte inferior de la pierna fue de 1.91, 1.13 y 0.69, respectivamente. Después de 6 meses de tratamiento subcutáneo diario con 15 jg/kg del péptido variante del CNP, se determinó que las mismas proporcionalidades de la proporción corporal eran 1.88, 1.16 y 0.69, respectivamente, lo que representa cambios medios en esas mismas proporcionalidades de la proporción corporal de -0.03, 0.03 y 0.0, respectivamente.
Estos datos demuestran que el tratamiento de pacientes con acondroplasia con un péptido variante del CNP no tiene ningún efecto adverso significativo sobre la proporcionalidad corporal general, ya que todos los cambios medidos en la proporción de la proporcionalidad corporal cayeron entre -0.05 y 0.05, en relación con la línea de base, después de 12 meses de tratamiento con el péptido variante del CNP.
Eventos adversos. Todos los pacientes de la cohorte 3 fueron evaluados periódicamente para la presencia de eventos adversos (de acuerdo con lo que se define en http://evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_8.5x11.pdf) específicamente causado por el tratamiento con el péptido variante del CNP durante el curso del tratamiento. Ningún paciente de la cohorte 3 evidenció un evento adverso de grado dos o superior que se haya determinado que esté relacionado con el fármaco del estudio, lo que demuestra que el tratamiento de pacientes con acondroplasia con péptidos variantes del CNP no produce eventos fisiológicos adversos graves.
Además, todos los pacientes de la cohorte 3 fueron monitoreados periódicamente para la concentración de hemoglobina en sangre, el número de plaquetas en sangre, la concentración de electrolitos en sangre, la concentración de nitrógeno ureico en sangre, la concentración de creatinina en sangre, la concentración de fosfatasa alcalina en sangre, la concentración de alanina aminotransferasa en sangre y la concentración de aspartato aminotransferasa en sangre. Los datos obtenidos de este estudio demostraron que no se observaron cambios clínicamente significativos en ninguno de los indicadores de seguridad descritos anteriormente, lo que confirma nuevamente la seguridad subyacente de la terapia con péptidos variantes del CNP para la acondroplasia y los síntomas asociados.
De acuerdo con los datos clínicos en humanos descritos anteriormente, también se probarán dosis diarias administradas por vía subcutánea de 30 pg/kg/día y 60 pg/kg/día de Pro-Gly-CNP-37 a pacientes con acondroplasia humana para determinar su eficacia y seguridad como se describe anteriormente. De acuerdo con los datos divulgados en la presente, se espera plenamente que tales regímenes de administración proporcionen tanto eficacia como seguridad para el tratamiento de la acondroplasia en pacientes humanos.

Claims (19)

REIVINDICACIONES
1. Una formulación que comprende:
(a) un péptido variante del CNP seleccionado del grupo que consiste en QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO:2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3);
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP 37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7); y
(b) monohidrato de ácido cítrico, dihidrato de citrato de sodio, dihidrato de trehalosa, D-manitol, L-metionina y polisorbato 80.
2. La formulación de la reivindicación 1 la cual está liofilizada.
3. La formulación de la reivindicación 1 la cual está en forma líquida o está reconstituida a partir de una formulación liofilizada.
4. La formulación de la reivindicación 1 que comprende
(a) al menos alrededor de 2.0 mg/ml de dicho péptido variante del CNP; o
(b) al menos alrededor de 10.0 mg/ml de dicho péptido variante del CNP; o
(c) 10.0 mg/ml de dicho péptido variante del CNP.
5. La formulación de la reivindicación 1, en la que dicho monohidrato de ácido cítrico está presente en una concentración de alrededor de 0.15 mg/ml a alrededor de 0.40 mg/ml, dicho dihidrato de citrato de sodio está presente en una concentración de alrededor de 0.5 mg/ml a alrededor de 1.5 mg/ml, dicho dihidrato de trehalosa está presente en una concentración de alrededor de 30 mg/ml a alrededor de 70 mg/ml, dicho D-manitol está presente en una concentración de alrededor de 10 mg/ml a alrededor de 20 mg/ml, dicha L-metionina está presente en una concentración de alrededor de 0.5 mg/ml a alrededor de 1.5 mg/ml y dicho polisorbato 80 está presente en una concentración de alrededor de 0.01 mg/ml a alrededor de 0.1 mg/ml.
6. La formulación de la reivindicación 1, en la que dicho monohidrato de ácido cítrico está presente en una concentración de alrededor de 0.28 mg/ml, dicho dihidrato de citrato de sodio está presente en una concentración de alrededor de 1.08 mg/ml, dicho dihidrato de trehalosa está presente en una concentración de alrededor de 58.01 mg/ml, dicho D-manitol está presente en una concentración de alrededor de 15 mg/ml, dicha L-metionina está presente en una concentración de alrededor de 0.73 mg/ml y dicho polisorbato 80 está presente en una concentración de alrededor de 0.05 mg/ml.
7. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 la cual
(a) está libre de conservantes; y/o
(b) está contenida en un vial de vidrio de borosilicato; y/o
(c) tiene un pH de entre alrededor de 5.0 y alrededor de 6.0, preferiblemente un pH de alrededor de 5.5.
8. Composición para usar en el tratamiento de la displasia esquelética en un sujeto que comprende el paso de administrar a dicho sujeto una composición que comprende un péptido variante del CNP, monohidrato de ácido cítrico, dihidrato de citrato de sodio, dihidrato de trehalosa, D-manitol, L-metionina y polisorbato 80, en la que el péptido variante del CNP se administra en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en la que el péptido variante del CNP se selecciona del grupo que consiste en:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO:2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP 37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7), y en la que el paso de administración trata dicha displasia esquelética.
9. Composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el tratamiento de la displasia esquelética da como resultado una mejora en uno o más síntomas de displasia esquelética seleccionados del grupo que consiste en aumento del crecimiento absoluto, aumento de la velocidad de crecimiento, aumento de la densidad mineral ósea (BMD) QCT, mejora en la morfología de la placa de crecimiento, aumento del crecimiento de los huesos-largos, mejora en la morfología de la columna, mejora del rango de movimiento de la articulación del codo y disminución de la apnea del sueño,
en el que preferiblemente la displasia esquelética se selecciona del grupo que consiste en acondroplasia, hipocondroplasia, baja estatura, enanismo, osteocondrodisplasias, displasia tanatofórica, osteogénesis imperfecta, acondrogénesis, condrodisplasia punctata, acondroplasia homocigótica, condrodisplasia punctata, displasia camptomélica, hipofosfatasia letal congénita, osteogénesis imperfecta del tipo perinatal letal, síndromes de polidactilia de costillas-cortas, hipocondroplasia, condrodisplasia punctata de tipo rizomélico, displasia metafisaria de tipo-Jansen, displasia espondiloepifisaria congénita, ateloteogénesis, displasia diastrófica, fémur corto congénito, displasia mesomelica tipo-Langer, displasia mesomelica tipo-Nievergelt, síndrome de Robinow, síndrome de Reinhardt, acrodisostosis, disostosis periférica, displasia de Kniest, fibrocondrogénesis, síndrome de Roberts, displasia acromesomélica, micromelia, síndrome de Morquio, síndrome de Kniest, displasia metatrófica y displasia espondiloepimetafisaria.
10. Composición para uso de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 9, en la que
(a) dicha composición se administra una vez al día, en la que preferiblemente dicha composición se administra una vez al día durante un período de al menos 6 meses; y/o
(b) dicha composición se administra por vía subcutánea.
11. Composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8-10 en la que
(a) dicha composición comprende la formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que preferiblemente dicha composición comprende la formulación de la reivindicación 5 o la reivindicación 6; o
(b) dicha composición comprende dicho péptido variante del CNP se administra a dicho sujeto, en la que se administra una cantidad de dicho péptido variante del CNP de al menos 15 pg/kg por día o una cantidad de al menos alrededor de 30 pg/kg por día, o una cantidad de al menos alrededor de 60 pg/kg por día.
12. Composición para uso en el aumento del crecimiento de los huesos largos en un sujeto que comprende el paso de administrar a dicho sujeto una composición que comprende un péptido variante del CNP, monohidrato de ácido cítrico, dihidrato de citrato de sodio, dihidrato de trehalosa, D-manitol, L-metionina y polisorbato 80, en la que el péptido variante del CNP se administra en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en la que el péptido variante del CNP se selecciona del grupo que consiste en:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO.2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3);
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP 37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7), y en la que el paso de dicha administración aumenta el crecimiento de los huesos largos en dicho sujeto.
13. Composición para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en la que
(a) dicho sujeto tiene acondroplasia; o
(b) dicha composición se administra una vez al día, en la que preferiblemente dicha composición se administra una vez al día durante un período de al menos 6 meses; preferiblemente en la que la composición se administra por vía subcutánea.
14. Composición para uso de acuerdo con la reivindicación 12 o la reivindicación 13 en la que
(a) dicha composición comprende la formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que preferiblemente dicha composición comprende la formulación de la reivindicación 5 o la reivindicación 6; o
(b) dicha composición que comprende dicho péptido variante del CNP se administra a dicho sujeto, en la que se administra una cantidad de dicho péptido variante del CNP de al menos alrededor de 15 pg/kg por día, o una cantidad de al menos alrededor de 30 pg/kg por día, o una cantidad de al menos alrededor de 60 pg/kg por día.
15. Composición para uso en el incremento de la velocidad de crecimiento en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende el paso de administrar una composición que comprende un péptido variante del CNP, monohidrato de ácido cítrico, dihidrato de citrato de sodio, dihidrato de trehalosa, D-manitol, L-metionina y polisorbato 80, en el que el péptido variante del CNP se administra en una cantidad de al menos 7.5 pg/kg, en el que dicho péptido variante del CNP se selecciona del grupo que consiste en:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N); SEQ ID NO:1];
MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP-37; SEQ ID NO:2);
PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP-37; SEQ ID NO:3);
GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP 37 (M32N); SEQ ID NO:4];
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:5);
MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP-37; SEQ ID NO:6); y GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Gly-CNP-37 o CNP-38: SEQ ID NO:7), y en el que el paso de administración aumenta la velocidad de crecimiento en dicho sujeto.
16. Composición para uso de acuerdo con la reivindicación 15, en la que
(a) dicho sujeto tiene acondroplasia; o
(b) el incremento en la velocidad de crecimiento es un aumento en la velocidad de crecimiento anualizada medida por la altura de pie de al menos un 25% o al menos un 40% por encima de la línea de base en dicho sujeto; y/o en el que el incremento en la velocidad de crecimiento se evalúa midiendo altura de pie, altura sentado, peso, circunferencia de la cabeza, longitud de la parte superior del brazo, longitud del brazo inferior, longitud de la parte superior de la pierna, longitud de la parte inferior de la pierna, longitud de la mano o longitud del pie.
17. Composición para uso de acuerdo con la reivindicación 15 o la reivindicación 16, en la que
(a) dicha composición se administra una vez al día, en la que preferiblemente
(i) dicha composición se administra una vez al día durante un período de al menos 6 meses; y/o
(ii) dicha composición se administra una vez al día durante un período de al menos 12 meses;
(b) la composición se administra por vía subcutánea; y/o
(c) el uso comprende el paso de administrar dicha composición que comprende dicho péptido variante del CNP a dicho sujeto, en el que se administra una cantidad de dicho péptido variante del CNP de al menos alrededor de 15 pg/kg por día; o de al menos alrededor de 30 pg/kg por día; o de al menos alrededor de 60 pg/kg por día de dicho péptido variante del CNP
18. Composición para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en la que
(a) dicha composición comprende la formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que preferiblemente dicha composición comprende la formulación de la reivindicación 2 o la reivindicación 6; o
(b) el uso no causa un evento adverso de grado dos o superior.
19. Composición para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15-18 en la que
(a) dicha composición se administra por vía parenteral; o
(b) dicha composición se administra diariamente, 3 veces por semana, dos veces por semana, una vez por semana o una vez cada dos semanas; o
(c) el uso no resulta en cambios clínicamente significativos en la concentración de hemoglobina en sangre, el número de plaquetas en sangre, la concentración de electrolitos en sangre, la concentración de nitrógeno ureico en sangre, la concentración de creatinina en sangre, la concentración de fosfatasa alcalina en sangre, la concentración de alanina aminotransferasa en sangre o la concentración de aspartato aminotransferasa en sangre en dicho sujeto; o (d) el uso da como resultado un cambio en la proporción entre la longitud de la parte superior del cuerpo y la longitud de la parte inferior del cuerpo de entre -0.05 y 0.05; o
(e) el uso da como resultado un cambio en la proporción entre la longitud de la parte superior del brazo y la longitud del brazo inferior de entre -0.05 y 0.05; o
(f) el uso da como resultado un cambio en la proporción entre la longitud de la parte superior de la pierna a la longitud de la parte inferior de la pierna de entre -0.05 y 0.05.
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