ES2981476T3 - Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas - Google Patents

Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas Download PDF

Info

Publication number
ES2981476T3
ES2981476T3 ES15874179T ES15874179T ES2981476T3 ES 2981476 T3 ES2981476 T3 ES 2981476T3 ES 15874179 T ES15874179 T ES 15874179T ES 15874179 T ES15874179 T ES 15874179T ES 2981476 T3 ES2981476 T3 ES 2981476T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
dengue
vaccine
virus
composition
dengue virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15874179T
Other languages
English (en)
Inventor
Danilo Casimiro
Andrew Bett
Beth-Ann Griswold Coller
Govindarajan Dhanasekaran
Ramesh Chintala
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck Sharp and Dohme LLC
Original Assignee
Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Sharp and Dohme LLC filed Critical Merck Sharp and Dohme LLC
Application granted granted Critical
Publication of ES2981476T3 publication Critical patent/ES2981476T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24171—Demonstrated in vivo effect
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones de vacuna contra el virus del dengue que comprenden una primera y una segunda vacuna contra el dengue, en donde la primera vacuna contra el dengue comprende al menos un virus del dengue vivo atenuado o un virus del dengue quimérico vivo atenuado y la segunda vacuna contra el dengue es una vacuna de subunidades recombinante contra el dengue, una vacuna de ADN, una vacuna conjugada o una vacuna inactivada contra el dengue; en donde el genoma del virus del dengue vivo atenuado o del virus del dengue quimérico vivo atenuado comprende una deleción de 30 nucleótidos de la estructura de tallo-bucle TL2 de la región no traducida 3'. Las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención pueden comprender además uno o más adyuvantes. En realizaciones preferidas de la invención, la primera y la segunda vacuna contra el dengue son tetravalentes. La invención también se refiere a métodos de uso de las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención para tratar o prevenir la infección por dengue, o para prevenir, mejorar o retrasar la aparición o progresión de las manifestaciones clínicas de la misma. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

d e s c r ip c ió n
Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas
Campo de la invención
La invención se refiere a composiciones que inducen una respuesta inmunitaria contra las infecciones por el virus del dengue, útil para la prevención y/o el tratamiento de infecciones por el virus del dengue en un sujeto, y/o las manifestaciones clínicas de las mismas.
Antecedentes de la invención
La familiaFlaviviridaeincluye su prototipo, que es el virus de la fiebre amarilla (FA), Ios cuatro serotipos del virus del dengue (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y De Nv -4), el virus de la encefalitis Japonesa (EJ), el virus de la encefalitis transmitida por garrapatas (ETG), el virus del Nilo Occidental (VNO), el virus de la encefalitis de San L<uís>(ESL) y aproximadamente 70 virus más causantes de enfermedades. Los flavívirus son pequeños, virus con envoltura que contienen un genoma de ARN monocatenario de cadena positiva. Diez productos génicos están codificados por un único marco abierto de lectura y se traducen como una políproteína organizada en el orden: cápside (C), "premembrana" (prM, que se procesa a "membrana" (M) Justo antes de la liberación del virión de la célula), "envoltura" (E), seguido de las proteínas no estructurales (NS) N<s>1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b y NS5 (revisados en Chambers, TJet al., Annual Rev Micrnbiol(1990) 44:649-688; Henchal, E.<a>. y Putnak, J. R.,Clin Micrnbiol Rev.(1990) 3:376-396). A continuación, se producen proteínas flavivírícas individuales mediante acontecimientos de procesamiento precisos mediados por el hospedador y por proteasas de codificación vírica.
La envoltura de Ios flavívirus procede de la membrana de la célula hospedadora y contiene las glucoproteínas de codificación vírica de envoltura (E) y de membrana (M) ancladas a la membrana. La glucoproteína E es la proteína estructural vírica más grande y contiene dominios funcionales responsables de la unión a la superficie celular y las actividades de fusión intraendosómica. También es una diana importante del sistema inmunitario del hospedador, que induce la producción de anticuerpos neutralizantes del virus, que están asociados con la inmunidad protectora.
L<os>virus del dengue son transmitidos al hombre por mosquitos del géneroAedes,principalmenteaegyptiyA. albopictus.La infección por I<os>virus del dengue produce un cuadro clínico diverso que varía desde una enfermedad febril asintomática o leve, pasando por el dengue clásico (D), hasta el dengue grave/síndrome de choque por dengue (DG/SCD). El dengue se caracteriza por fiebre alta, cefalea, artralgia y mialgia, erupción cutánea, linfadenopatía y leucopenía (Gíbbons, R. V. y D. W. Vaughn,British Medical Journal(2002) 324:1563-1566). El DG/SCD es una forma más grave de infección más habitual en niños, caracterizada por permeabilidad vascular y/o manifestaciones hemorrágicas graves que van desde la presencia de petequias y equimosis hasta hemorragia grave espontánea y choque profundo. Sin diagnóstico y una rápida intervención médica, la aparición repentina y progresión rápida del DG/SCD pueden ser mortales si no se tratan.
Los virus del dengue son el grupo más importante de virus transmitidos por artrópodos en lo que respecta a la morbilidad y mortalidad global, con una cantidad estimada de cien millones de infecciones por dengue al año, incluidos al menos 36 millones de casos de dengue y entre 250000 y 500000 casos de DG/SCD (Gubler, D. J.,Clin. Microbiol. Rev.(1998) 11:480-496; Gibbons, citado anteriormente). Con el aumento global de la población, la urbanización de la población, especialmente en I<os>trópicos, y la falta de medidas constantes de control de mosquitos, I<os>mosquitos vectores del dengue han ampliado su distribución por Ios trópicos, subtrópicos y algunas zonas templadas, elevando el riesgo de infección por dengue a más de la mitad de la población mundial. Los actuales viajes en avión y la emigración humana han facilitado la distribución mundial de Ios serotipos del dengue, de modo que hoy en día múltiples serotipos del dengue son endémicos en muchas regiones. Ha habido un aumento de la frecuencia de las epidemias por dengue y de la incidencia del DG/SCD en Ios últimos 20 años o más. Por ejemplo, en el sudeste asiático, El DG/SCD es una de las principales causas de hospitalización y muerte entre Ios niños (Gubler, citado anteriormente; Gibbons y Vaughn, citado anteriormente).
Hasta ahora, el desarrollo de vacunas contra flavívirus ha tenido un éxito desigual. Hay cuatro enfoques básicos que se han implementado en un intento de producir vacunas candidatas para proteger contra las enfermedades causadas por flavívirus: atenuadas, con virus completo inactivado, con proteína subunitaria recombinante y vacunas basadas en el ADN. Desde hace décadas se dispone de una vacuna con virus vivos atenuada contra el virus de la fiebre amarilla y, más recientemente, se ha registrado en diversos países del mundo una vacuna con virus vivos atenuada contra la encefalitis Japonesa. Se ha demostrado el<uso>de vacunas con virus completos inactivados para I<os>virus de la ETG y la EJ con varios productos registrados disponibles. Heinzet al.Flavívirus and flavívirus vaccines.Vaccine30: 4301-06 (2012).
A pesar de Ios éxitos de las vacunas para la FA, la EJ y ETG destacadas anteriormente, el uso de virus atenuados y métodos con virus inactivados para desarrollar vacunas contra el virus del dengue se ha enfrentado a importantes desafíos. Existen cuatro serotipos del virus del dengue (DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4) y se encuentran cepas de todos I<os>serotipos en circulación en todas las regiones con dengue endémico del mundo. La infección natural confiere inmunidad duradera frente al serotipo infectante, pero no frente a otros serotipos del dengue. Las formas más graves de la enfermedad (DG/SCD) se producen con mayor frecuencia después de una infección secundaria por dengue, cuando a la infección por un serotipo del virus del dengue le sigue una segunda infección por otro serotipo. Se ha planteado la hipótesis de que la asociación más frecuente de DG y SCD con infección secundaria por dengue se debe a que los anticuerpos no neutralizantes inducidos por la infección con un tipo de virus aumentan la ineficacia de un segundo tipo de virus del dengue (potenciación dependiente de anticuerpos, ADE).
Hasta ahora, la mayoría de las vacunas probadas clínicamente son vacunas atenuadas. También se está explorando el<uso>de vacunas candidatas no replicativas. Por ejemplo, Ivyet al.(patente de EE.UU. n.06432411) desvelan una vacuna de subunidad tetravalente que comprende proteínas DEN1-4 80 % E (la región peptídica de DEN1-4 correspondiente a los aminoácidos 1-395 del polipéptido de la envoltura DENV-2). Ivyet al.,citado anteriormente, también informan de composiciones que comprenden DENV 1-4 80 % E y adyuvante ISCOMATRIX®. Colleret al.(documento WO 2012/154202) desvelan formulaciones tetravalentes que comprenden DEN1-4 80 % E de DEN 1-4. L<os>virus inactivados también pueden utilizarse como posibles candidatos a vacunas<o>como componentes de una vacuna eficaz (Putnaket al. Vacóme23: 4442-4452 (2005), documento US 6190859, documento US 6254873 y Sternet al.WO 2007/002470). En la solicitud de patente internacional n.o PCT/US14/042625 (WO/2014/204892) se desvelan composiciones que comprenden una vacuna contra el virus del dengue atenuada y una vacuna no replicante contra el dengue.
Sin embargo, a pesar de los intentos anteriores de desarrollar una vacuna contra el dengue, hasta la fecha no hay ninguna vacuna registrada contra el dengue. Por lo tanto, sigue siendo necesaria una vacuna estable, segura y eficaz que pueda inducir una respuesta inmunitaria protectora contra la infección por dengue y/o enfermedades relacionadas con el dengue.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a una composición de vacuna contra el virus del dengue que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de (a) una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue que comprende al menos un virus vivo atenuado del dengue (LAV), en donde el LAV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos correspondientes a la estructura de tallo-bucle de TL-2 de la región 3' no traducida (Ut R), en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene además una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'; que reduce la capacidad replicativa del virus, y (b) una vacuna no replicativa contra el dengue. Se descubrió que la presencia de la vacuna no replicativa contra el dengue en la misma composición que la vacuna con virus vivos atenuada no afecta significativamente a la viabilidad del virus vivo, permitiendo de este modo que la vacuna con virus vivo y la no replicante se administren en la misma formulación ("coformulación").
En algunas realizaciones, la vacuna no replicante contra el dengue se selecciona de una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue, una vacuna de ADN, una vacuna conjugada o una vacuna inactivada contra el dengue. En realizaciones adicionales, la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue<o>una vacuna inactivada contra el dengue. En algunas realizaciones de la invención, la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue que comprende al menos una proteína de la envoltura (E) del dengue<o>un fragmento de la misma. En realizaciones preferidas de la invención, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue es tetravalente y comprende proteínas E truncadas del dengue, cada una de las cuales consiste en aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural del virus del dengue ("DENV", como alternativa "DEN") de serotipo 1, también conocido como DENV 1, DENV 2, DENV 3 y DENV 4, comenzando desde el resto de aminoácido 1 en<su>extremo N.
En realizaciones adicionales de la invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es una LAV tetravalente o "LATV" (es decir, comprende virus del dengue vivos atenuados de DENV 1-4 o flavivirus quiméricos vivos atenuados (LACV) de DENV 1-4, como se define en el presente documento, o una combinación de los mismos, en donde al menos uno de los LAV<o>LACV es un A30LAV<o>un A30LACV), siempre que la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprenda al menos un LAV que sea inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'. En realizaciones adicionales de la invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es tetravalente y comprende al menos un flavivirus quimérico; en donde el flavivirus quimérico comprende un genoma vírico que contiene secuencias de nucleótidos que codifican las proteínas prM y E de un único serotipo de virus del dengue y secuencias de nucleótidos que codifican la cápside y las proteínas no estructurales de un flavivirus diferente, en donde el flavivirus quimérico está atenuado, siempre que la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprenda al menos un LAV que sea inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'. En algunas realizaciones de la invención, la cápside y las proteínas no estructurales del flavivirus quimérico provienen de un serotipo de dengue diferente al de las proteínas prM y E.
En realizaciones preferidas de la invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es una vacuna atenuada tetravalente que comprende un virus DEN1A30, un virus DEN2/4A30 (un DEN2 A30LACV sobre una cadena principal de DEN4), un virus<d>E<n>3A30 y un virus DEN4A30. Véase la figura 1.
La invención también se refiere a composiciones de vacuna contra el virus del dengue que comprenden una vacuna con virus vivo atenuada contra el dengue, una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue y un adyuvante, en donde la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprende al menos un A30LAV<o>A30LA<c>V. En algunas realizaciones descritas en el presente documento, el adyuvante es un adyuvante de sal de aluminio. En realizaciones alternativas, el adyuvante es un adyuvante basado en saponina o un adyuvante agonista del receptor de tipotoll.
Las referencias a los métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción han de interpretarse como referencias a los compuestos, a las composiciones farmacéuticas y a los medicamentos de la presente invención para<su uso>en un método para el tratamiento del cuerpo humano (<o>animal) mediante terapia (<o>para diagnóstico).
Otros aspectos de la presente invención incluyen métodos para prevenir la infección por dengue<o>prevenir<o>aliviar los síntomas de la misma, que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención a un paciente que lo necesite. En realizaciones adicionales de este aspecto de la invención, las composiciones se administran en una pauta de sensibilización/refuerzo, en donde se administra una primera dosis de la composición a un paciente que lo necesite, se deja pasar un tiempo predeterminado y se administra al paciente una segunda dosis de la composición. Opcionalmente, se pueden administrar dosis adicionales al paciente después de que haya transcurrido un periodo de tiempo predeterminado entre cada dosis.
En realizaciones adicionales, la invención se refiere a un método para inducir una respuesta inmunitaria contra la infección por dengue, reduciendo de este modo la probabilidad de infección por dengue, que comprende las etapas de:
(a) mezclar una primera vacuna contra el dengue y una segunda vacuna contra el dengue, para formar una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención,
en donde la primera vacuna contra el dengue es una vacuna con virus vivos atenuada tetravalente contra el dengue que comprende virus vivos atenuados (LAV), en donde el LAV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos correspondientes a la estructura de tallo-bucle de TL-2 de la región 3' no traducida (UTR), en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene además una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'; en donde al menos un LAV es un A30LAV; en donde la segunda vacuna contra el dengue es una vacuna tetravalente recombinante de subunidades contra el dengue o una vacuna tetravalente inactivada contra el dengue; y en donde la vacuna tetravalente recombinante de subunidades contra el dengue comprende proteínas de la envoltura (E) del dengue de los serotipos 1-4 del dengue o fragmentos de las mismas;
(b) administrar la composición de vacuna contra el virus del dengue de la etapa (a) después de mezclarla a un paciente en el que se va a inducir una respuesta inmunitaria contra el dengue, reduciendo de este modo la probabilidad de infección por dengue. En algunas realizaciones del método de la invención, la respuesta inmunitaria previene la infección por dengue o previene o alivia los síntomas del mismo. En realizaciones adicionales de la invención, se administra una segunda dosis de la composición al paciente después de dejar pasar un periodo de tiempo predeterminado. La primera vacuna contra el dengue y la segunda vacuna contra el dengue de la segunda dosis de la composición pueden formularse en un único vial o en dos viales separados y mezclarse entre sí antes de su administración al paciente.
La invención también se refiere al<uso>de las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención para el tratamiento o profilaxis de enfermedades asociadas con la infección por dengue, tales como el dengue, SCD o DG.
Como se usa a lo largo de la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno/a" y "el/la" incluyen la referencia en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.
La referencia a "<o>" indica una<o>ambas posibilidades a menos que el contexto dicte claramente una de las posibilidades indicadas. En algunos casos, se ha empleado "y/o" para resaltar una<o>ambas posibilidades.
Como se usan a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, se aplican las siguientes definiciones y abreviaturas:
La expresión "virus vivo atenuado", también denominado en el presente documento "LAV", significa un virus del dengue vivo atenuado, en donde la capacidad del virus para causar enfermedad está reducida en comparación con el virus del dengue natural.
La expresión "virus quimérico vivo atenuado" (como alternativa, "flavivirus quimérico vivo atenuado")<o>"LACV" se refiere a un virus quimérico vivo atenuado en donde el genoma vírico comprende una cadena principal de un primer flavivirus (incluidos Ios genes de C, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B y NS5) y Ios genes de premembrana (prM) y envoltura (E) de un segundo flavivirus, en donde el segundo flavivirus se selecciona entre DENV<i>, DENV2, DENV3 o DENV4. El primer flavivirus puede ser un serotipo diferente del dengue u otro flavivirus, tal como el virus de la fiebre amarilla.
La expresión "A30 LAV" se refiere a un virus DEN1, DEN2, DEN3<o>DEN4 vivo atenuado, en donde el LAV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos (nt) correspondientes a la estructura de tallo-bucle de TL2 de la región 3' no traducida (UTR) de aproximadamente nt 143 a aproximadamente nt 172, que reduce la capacidad replicativa del virus (véase el documento WO 03/092592).
La expresión "A30 LACV" se refiere a un flavivirus quimérico vivo atenuado (LACV) de DENV 1-4 en donde el LACV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 de la región UTR 3' de aproximadamente nt 143 a aproximadamente nt 172, que reduce la capacidad replicativa del virus (véase el documento WO 03/092592).
La expresión "A30/A31 LAV" se refiere a un virus DEN1, DEN2, DEN3<o>DEN4 vivo atenuado, en donde el genoma vírico comprende una supresión de aproximadamente 30 nt de la estructura tallo-bucle de TL2 de la UTR 3' y comprende además una supresión en dirección 5' no contigua, separada, de aproximadamente 31 nt de la UTR 3' que elimina la secuencia hasta e incluyendo la estructura homóloga de TL-3 de modo que la supresión se extiende hasta el límite 5' de la estructura homóloga de TL-3 de la UTR 3' del dengue. Véase Whiteheadet al.,patente de EE. UU. n.08 337860. En realizaciones preferidas de la invención, el LAV DEN3 comprende las mutaciones A30/A31.
La expresión "A30/A31 LACV" se refiere a un virus DEN1, DEN2, DEN3 o DEN4 quimérico vivo atenuado como se ha descrito anteriormente, en donde el genoma vírico del virus quimérico comprende una supresión de 30 nt de la estructura de tallo-bucle de TL2 de la UTR 3' y comprende además una supresión separada, no contigua, de 31 nt en dirección 5' de la UTR 3', que suprime la estructura de TL-3, como se ha descrito anteriormente.
La expresión "LATV" o "virus tetravalente vivo atenuado" o "vacuna LATV" se refiere a una vacuna que comprende una cantidad eficaz de un LAV<o>LACV DEN1, un LAV<o>LACV DEN2, un LAV<o>LACV DEN3 y un LAV<o>LACV DEN4, en donde al menos uno de I<os>LAV<o>LACV del dengue comprende la mutación A30 de la estructura TL-2 en la UTR 3', como se ha descrito anteriormente y en el documento WO 03/092592. En algunas realizaciones preferidas, el LATV comprende Ios siguientes elementos: (1) rDEN1A30, que es un LAV DENV1 en donde el genoma vírico de DENV1 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; (2) rDEN2/4A30, que es un LACV DENV2 que comprende Ios genes prM y E de DENV2 en una cadena principal de DENV4, en donde la cadena principal de DEN4 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; (3) rDEN3A30/A31, que es un LAV DENV3 en donde el genoma vírico de DENV3 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; y una supresión separada, no contigua, de 31 nt en dirección 5' correspondiente a la estructura de TL-3 de la UTR 3'; y (4) rDEN4A30, que es un LAV DENV4 en donde el genoma vírico de DENV4 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3' (véase la figura 1).
"Vacuna no replicante" se refiere a una vacuna contra el virus del dengue para la prevención<o>el tratamiento de la infección por el virus del dengue<o>I<os>síntomas clínicos de la misma, seleccionada de una vacuna recombinante de subunidades, una vacuna inactivada, una vacuna conjugada o una vacuna de ADN.
"Vacuna inactivada" se refiere a una vacuna que comprende una cantidad eficaz de un virus del dengue completo muerto<o>inactivado y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde el virus se ha inactivado por cualquier medio, incluido por productos químicos, calor<o>radiación. Una vacuna inactivada tiene una ineficacia residual baja después de la inactivación, p. ej. <5 unidades formadoras de placas (UFP)/ml después de la inactivación. En realizaciones preferidas, hay una cantidad muy baja de ineficacia residual después de la inactivación, p. ej. <4 UFP/ml, <3 UFP/ml<o><2 UFP/ml, <1 UFP/ml, <0,5 uFp/ml<o><0,1 UFP/ml. Se pueden determinar las UFP de una vacuna particular, por ejemplo, mediante el<uso>de un análisis de placas, un ensayo de inmunotinción<u>otro método conocido en la técnica para detectar la infectividad vírica.
"Vacuna conjugada" se refiere a una vacuna que comprende un antígeno del dengue unido covalentemente a una proteína transportadora.
Una "vacuna de ADN" es una vacuna que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un antígeno proteico del dengue, incluidas las proteínas del dengue, fragmentos de proteínas del dengue y proteínas de fusión del dengue, y variantes de las mismas. Las vacunas de ADN comprenden un plásmido (p. ej., un plásmido de ADN<o>vírico) que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un antígeno de interés, unido operativamente a un promotor.
"Vacuna de subunidades" se refiere a una vacuna que incluye uno o más componentes antigénicos del dengue, pero no virus completos del dengue, tales como epítopos inmunógenos del dengue, proteínas del dengue, proteínas de fusión de antígenos del dengue, incluidas fusiones antígenos de diferentes serotipos del dengue o fragmentos de proteínas del dengue. Las vacunas de subunidades, como se utilizan en el presente documento, pueden ser monovalentes (comprenden un único antígeno del dengue) o multivalentes (comprenden más de un componente antigénico). En realizaciones preferidas, la vacuna de subunidades es tetravalente.
La expresión "sensibilización-refuerzo con coformulación" se refiere a una pauta terapéutica que comprende (1) la administración a un paciente que lo necesite de una composición de vacuna contra el virus del dengue, en donde la composición comprende (a) al menos un virus vivo atenuado del dengue (LAV)<o>flavivirus quimérico vivo atenuado (LACv ), en donde el LAV o LACV comprende una mutación A30 en la región 3' no traducida del genoma vírico y en donde el genoma vírico del LACV comprende los genes prM y E de un único serotipo de virus del dengue y los genes C y no estructurales de un flavivirus diferente, (b) una vacuna no replicante contra el dengue y (<c>) un vehículo farmacéuticamente aceptable; (2) esperar a que pase un periodo de tiempo predeterminado; y (3) la administración al paciente de una segunda composición de vacuna contra el virus del dengue, como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna de subunidades o una vacuna inactivada. La segunda composición de vacuna contra el virus del dengue puede ser igual<o>diferente a la primera composición de vacuna contra el virus del dengue, siempre que comprenda una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y una vacuna no replicante contra el dengue de acuerdo con la invención. Las vacunas contra el virus del dengue utilizadas en las composiciones de la invención son útiles para inducir una respuesta de anticuerpos neutralizantes del virus frente a los virus del dengue homólogos en pacientes humanos.
El término "tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a las medidas profilácticas o preventivas. Las personas o Ios pacientes que "necesitan" tratamiento incluyen los que ya padecen una infección por dengue, se manifiesten o no síntomas clínicos, así como Ios que están en riesgo de ser infectados por dengue. El tratamiento de un paciente con las composiciones<o>coformulaciones de vacuna contra el dengue de la invención incluye uno<o>más de I<os>siguientes: inducir/aumentar una respuesta inmunitaria contra el dengue en el paciente, inducir una respuesta de anticuerpos neutralizantes del virus contra uno<o>más virus del dengue, prevenir, aliviar, anular<o>reducir la probabilidad de las manifestaciones clínicas del dengue en pacientes que han sido infectados por dengue, prevenir<o>reducir la probabilidad de contraer dengue, DG o SCD y/u otra enfermedad o complicación asociada con la infección por dengue, reducir la gravedad<o>duración de I<os>síntomas clínicos de la infección por dengue y/u otra enfermedad<o>complicación asociada con el dengue y prevenir<o>reducir la probabilidad de infección por dengue.
La expresión "cantidad farmacéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" significa que se introduce en un paciente una composición de vacuna suficiente para producir el efecto deseado, incluidos, pero sin limitación: inducir/aumentar una respuesta inmunitaria contra el dengue en el paciente, inducir/aumentar una respuesta de anticuerpos neutralizantes del virus contra el dengue en un paciente, prevenir o reducir la probabilidad de infección por dengue, prevenir o reducir la probabilidad de infección recurrente por dengue, prevenir, aliviar<o>anular las manifestaciones clínicas de la infección por dengue en pacientes que han sido infectados por dengue, prevenir el dengue, DG y/o SCD o reducir la gravedad o duración de la enfermedad asociada con el dengue. Un experto en la materia reconoce que este nivel puede variar.
La expresión "respuesta inmunitaria" se refiere a una respuesta inmunitaria mediada por células (linfocitos T) y/o una respuesta de anticuerpos (linfocitos B).
El término "paciente" se refiere a un mamífero que puede infectarse con un virus del dengue, tal como DEN1, DEN2, DEN3<o d>EN4, es decir, recibir las composiciones/coformulaciones de vacuna contra el dengue descritas en el presente documento, incluidos individuos tanto inmunocompetentes como inmunodeprimidos. En realizaciones preferidas, el paciente es un ser humano. Como se define en el presente documento, un "paciente" incluye a Ios que ya están infectados por dengue, ya sea por infección natural<o>vacunación,<o>I<os>que puedan quedar expuestos posteriormente.
"MAA" significa adyuvante de aluminio de Merck. El MAA es un adyuvante de sulfato de hidroxifosfato de aluminio amorfo.
Un "adyuvante de tipo ISCOM" es un adyuvante que comprende un complejo inmunoestimulante (ISCOM), que comprende una saponina, colesterol y un fosfolípido, que juntos forman una partícula característica de tipo jaula, que tiene una estructura esférica de tipo jaula particular, que contribuye a su función (para una revisión, véase Barr y Mitchell,Immunology and Cell Biology74: 8-25 (1996)). Esta expresión incluye tanto adyuvantes ISCOM™, que se producen con un antígeno y comprenden antígeno dentro de la partícula ISCOM™, y adyuvantes de matriz ISCOM™, que son adyuvantes huecos de tipo ISCOM que se producen sin antígeno. En realizaciones preferidas de las composiciones y métodos proporcionados en el presente documento, el adyuvante de tipo ISCOM es un adyuvante de partículas de matriz ISCOM™, tal como ISCOMATRIX™, que se fabrica sin antígeno (ISCOM™ y ISCOMATRIX™ son marcas registradas de CSL Limited, Parkville, Australia).
La designación "rDEN1A30-1545" se refiere a un virus del dengue 1 recombinante en donde el genoma vírico comprende (1) una supresión de 30 nt de la estructura de tallo-bucle de TL2 de la UTR 3' y (2) una sustitución en la posición de nucleótido 1545, que se produjo después de la adaptación del virus al crecimiento en células Vero.
La designación "rDEN2/4 A 30(ME)-1495,7163" se refiere a un virus quimérico recombinante del dengue 2/4, en donde el genoma vírico comprende: (1) una cadena principal del dengue 4 (genes C, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5) que comprenden (í) una supresión de 30 nt de la estructura de tallo-bucle de TL2 de la UTR 3' y (II) sustituciones en las posiciones de nucleótldos 1495 y 7163, que se produjo después de la adaptación del virus al crecimiento en células Vero, y (2) genes prM y E del dengue 2.
La designación "rDEN3A30/31-7164" se refiere a un virus recombinante del dengue 3 en donde el genoma vírico comprende: (1) una supresión de 30 nt de la estructura de tallo-bucle de TL2 de la UTR 3', (2) una supresión separada de 31 nt en la UTR 3', en dirección 5' de la mutación A30, que suprime la estructura de TL-3 y (3) una sustitución en la posición del nucleótído 7164, que se produjo después de la adaptación del virus al crecimiento en células Vero.
La designación "rDEN4A 30-7132,7163,8308" se refiere a un virus recombinante del dengue 4 en donde el genoma vírico comprende: (1) una supresión de 30 nt de la estructura de tallo-bucle de TL2 de la UTR 3' y (2) sustituciones en las posiciones de nucleótldos 7132, 7163 y 8308, que se produjo después de la adaptación del virus al crecimiento en células Vero.
"V180" se refiere a una vacuna tetravalente de subunidades compuesta por glucoproteínas de envoltura truncadas (DEN-80E) de cada uno de los 4 serotipos del virus del dengue (DENV1, De NV2, DENV3 y DENV4), en donde cada una de las proteínas E constituye aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural a partir del resto de aminoácido 1 en<su>extremo N, de modo que dicha proteína E sea secretable en medio de cultivo cuando se expresa de forma recombinante en una célula hospedadora. Véase Colleret al.WO 2012/154202.
En el presente documento se utilizan las siguientes abreviaturas que tienen los siguientes significados: C es el gen de la cápside del dengue, DEN (como alternativa DENV) es el virus del dengue, D es el dengue, DG es dengue grave, SCD es el síndrome de choque por dengue, h es horas, GMT es el título medio geométrico, i.m. es Intramuscular, IMX es Iscomatrix™, EJ es la encefalitis Japonesa, LAV es el virus vivo atenuado, MAA es el adyuvante de aluminio de Merck, MAPA es el adyuvante de fosfato de aluminio de Merck, NS (usado en NS1-NS5) es no estructural, nt es nucleótído, UFP es unidades formadoras de placas, prM es el gen de la premembrana del dengue,<s>.<c>. es subcutáneo, ETG es la encefalitis transmitida por garrapatas, UTR es la reglón no traducida, NO (como alternativa VNO) es el virus del Nllo Occidental, FA (como alternativa VFA) es el virus de la fiebre amarilla y wt es tipo natural.
Breve descripción de Ios dibujos
La FIGURA 1 proporciona una Ilustración esquemática de la composición del A30 LATV (vacuna con virus<vívos>tetravalente atenuada A30 contra el virus del dengue) utilizada en los ejemplos 1-3.
La FIGURA 2 muestra el efecto de mezclar los adyuvantes Indicados y los antígenos subunitarios del dengue sobre la viabilidad del virus del dengue de tipo 1 (barras "rDEN1A30" en el gráfico), virus del dengue de tipo 2 (barras "rDEN2/4A30"), virus del dengue de tipo 3 (barras "rDEN3A30") y virus del dengue de tipo 4 (barras "rDEN4A30") en el A30 LATV descrito anteriormente y en el ejemplo 1. La viabilidad del virus (presentada como título vírico en UFP/ml) se determinó utilizando un análisis de placasin vitroen células Vero como se describe en el ejemplo 2. Se muestran los valores para el punto temporal Inicial (0 horas) para cada muestra en comparación con las mismas mezclas después de 24 horas de almacenamiento a 4 °C.
La FIGURA 3 proporciona los títulos de anticuerpos neutralizantes de serotipos del dengue (GMT LICorso) Inducido en macacos de la India en la semana 4 (4 semanas después de la dosis 1, véase el ejemplo 3). El calendarlo de vacunación y las formulaciones utilizadas en el estudio se muestran en la tabla 2. L<os>títulos de Inmunización se determinaron usando un ensayo de microneutralización basado en LiCor como se describe en el ejemplo 3. La FIGURA 4 proporciona los títulos de anticuerpos neutralizantes de serotipos del dengue (GMT LiCorso) Inducidos en los mismos macacos de la India para los que se proporcionan datos en la figura 3 en la semana 20 (4 semanas después de la dosis 2, véase el ejemplo 3).
La FiGURA 5 proporciona los títulos de neutralización medios geométricos longitudinales para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos descritos en el ejemplo 3.
La FIGURA 6 proporciona los títulos de anticuerpos neutralizantes de serotipos del dengue (GMT LICorso) Inducido en macacos de la India en la semana 4 (4 semanas después de la dosis 1, véase el ejemplo 4). El calendarlo de vacunación y las formulaciones utilizadas en el estudio se muestran en la tabla 3. Los títulos de Inmunización se determinaron usando un ensayo de microneutralización basado en LiCor como se describe en el ejemplo 3. La FIGURA 7 proporciona los títulos de anticuerpos neutralizantes de serotipos del dengue (GMT LlCorso) Inducidos en los mismos macacos de la India para los que se proporcionan datos en la figura 6 en la semana 28 (4 semanas después de la dosis 2, véase el ejemplo 4).
La F<i>GURA 8 proporciona los títulos de neutralización medios geométricos longitudinales para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos descritos en el ejemplo 4.
Descripción detallada de la invención
La presente Invención se refiere a una composición de vacuna contra el virus del dengue que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de (a) una vacuna con virus vívos atenuada contra el dengue que comprende al menos un virus vívo atenuado del dengue (LAV), en donde el LAV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nucleótldos correspondientes a la estructura de tallo-bucle de TL-2 de la reglón 3' no traducida (Ut R), en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene además una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3', que reduce la capacidad replicativa del virus; y (b) una vacuna no replicante contra el dengue, que comprende además opcionalmente un adyuvante. El LAV y la segunda vacuna se formulan en el mismo vial o en viales separados y se mezclan antes de la administración al sujeto. En realizaciones de la invención, se administra una composición de acuerdo con la invención a un paciente dos<o>más veces en un régimen de tratamiento de sensibilización-refuerzo.
Un régimen de sensibilización-refuerzo heterólogo convencional que comprende la administración de la vacuna con virus vivos atenuada en un momento determinado, seguido de la administración de una vacuna no replicante contra el dengue entre 2 semanas y 2 años después es un enfoque alternativo que se puede utilizar, pero este enfoque puede causar confusión con respecto a qué vacuna (vacuna con virus vivos atenuada o vacuna no replicante) debe administrarse primero en la serie. La administración de la vacuna con virus vivos atenuada y la vacuna no replicante en el orden correcto es importante porque la inversión del orden (primero la vacuna de subunidades o inactivada, seguida de la vacuna con virus vivos atenuada) podría provocar una respuesta inmunitaria inferior que puede aumentar el riesgo de la persona de padecer un dengue más grave si se infectaran de forma natural. Por lo tanto, la coadministración de la vacuna con virus vivos atenuada y la vacuna no replicante a un paciente simplifica la administración del régimen de tratamiento completo. Se cree que, cuando se administra en un régimen de sensibilización-refuerzo, la coformulación de (1) la vacuna con virus vivos atenuada y (2) la vacuna no replicante inducirá fuertes respuestas inmunitarias que son impulsadas principalmente por la vacuna con virus vivos en la sensibilización y por la vacuna no replicante en el refuerzo.
Antes de la presente invención, se creía que la presencia de un antígeno subunitario<o>vacuna inactivada y/o adyuvante en una composición de vacuna contra el dengue que comprende un virus vivo atenuado tenía el potencial de inactivar el virus vivo atenuado dando lugar a una disminución del título vírico. Minkeet al. (Vacdne29 (2011) 4608- 4612 yVeterinary Immunol. and Immunopathol.111 (2006) 47-57) y Guthrieet al.(Vacdne27 (2009) 4434-4438) informaron sobre un virus de la viruela de los canarios recombinante vivo modificado que expresa los genes prM/E derivados del VNO formulado en adyuvante carbómero. Sin embargo, esta composición de vacuna no contenía antígenos subunitarios víricos separados.
Se ha probado el uso de diferentes vacunas contra el virus del dengue en estrategias de sensibilización-refuerzo. Simmonset al. (Virology396280-288 (2010); patente de EE. UU. n.08440202 y patente de EE. UU. n.08241 638) probaron un método de sensibilización y refuerzo para el dengue en macacos de la India mediante sensibilización de los animales con una vacuna no replicante en forma de vacuna inactivada<o>vacuna basada en ADN, seguida de refuerzo con una vacuna tetravalente con virus vivos atenuada. Kanakatteet al.(documento WO 2008127307) también describen un régimen de sensibilización y refuerzo heterólogo contra el dengue con el inmunógeno de sensibilización que comprende un sistema de expresión de ADN, un vector de expresión de adenovirus o un sistema de replicón del virus de la encefalitis equina venezolana y el inmunógeno de refuerzo que comprende una vacuna tetravalente con virus vivos atenuada. En este método, el inmunógeno de refuerzo se administra entre dos semanas y 2 meses después de la administración del inmunógeno de sensibilización.
Guyet al.(documento WO 2008/047023) informan de un método para inducir protección contra DEN1-4 en un paciente, que comprende: administrar (a) una primera serie de administraciones (i) de una dosis de un virus vacunal del dengue de un primer serotipo y de una dosis de un virus vacunal del dengue de un segundo serotipo, y (ii) de una dosis de un virus vacunal del dengue de un tercer serotipo y de una dosis de un virus vacunal del dengue de un cuarto serotipo, y (b) una segunda serie de administraciones de las dosis (i) y (ii), en la que las dosis (i) y (ii) se administran simultáneamente en sitios anatómicos separados y en la que la segunda serie se implementa de al menos 30 días a como máximo 12 meses después de la primera serie. Por lo tanto, informes anteriores sobre enfoques de sensibilización/refuerzo contra el dengue se centran en el uso del LAV como inmunógeno de refuerzo y requieren que transcurra un periodo de tiempo, de semanas a meses, entre la administración de la composición de sensibilización y la administración del LAV.
En el presente documento los inventores han mostrado que, sorprendentemente, los títulos de neutralización medios geométricos medidos en macacos de la India que fueron inmunizados con las composiciones (coformulaciones) de la invención (A30 LATV V180) cuatro semanas después de la dosis 1 fueron comparables a los inducidos cuando la vacuna A30 LATV se administró sola (véase el ejemplo 3). Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 LATV con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta a la primera dosis de la vacuna de virus vivos atenuada.
Se ha mostrado además en el presente documento que los enfoques tanto de sensibilización y refuerzo convencional (sensibilización con A30 LATV seguida de refuerzo con V180) como los enfoques de sensibilización y refuerzo con coformulación (sensibilización con coformulación de A30 LATV V180 seguida de refuerzo con coformulación de A30 LATV V180) indujeron títulos de neutralización superiores frente a los cuatro tipos de DENV en comparación con la vacuna A30 LATV sola. Las respuestas de neutralización en el grupo de coformulación cuatro semanas después de la dosis de refuerzo fueron equivalentes a, si no mejores que las inducidas en los grupos que recibieron la pauta convencional de sensibilización-refuerzo. Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 L<a>TV con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta al refuerzo de subunidades.
Por lo tanto, I<os>beneficios de un enfoque de sensibilizadón/refuerzo heterólogo se pueden lograr mediante (a) la administración de una primera composición de vacuna contra el dengue a un paciente que la necesite, comprendiendo la composición: (1) una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue, en donde la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprende al menos un LAV<o>LACV que comprende un genoma vírico, en donde el genoma vírico comprende una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos correspondientes a la estructura del tallo-bucle de TL-2 en la UTR 3', y (2) una vacuna no replicante contra el dengue; (b) dejar pasar un tiempo predeterminado; y (3) la administración de una segunda composición de vacuna contra el virus del dengue al paciente. En algunas realizaciones de la invención, la vacuna no replicante se selecciona entre una vacuna de subunidades contra el dengue y una vacuna inactivada contra el dengue. En esta realización, la composición de vacuna contra el dengue de la invención se administra al paciente como composición tanto de sensibilización como de refuerzo. En realizaciones de la invención, la composición de la primera vacuna contra el dengue y la composición de la segunda vacuna contra el dengue son iguales. En realizaciones alternativas, la composición de la primera vacuna contra el dengue y la composición de la segunda vacuna contra el dengue son diferentes.
Por consiguiente, la invención se refiere a un método para prevenir<o>reducir la probabilidad de infección por dengue o prevenir, tratar o aliviar sus manifestaciones clínicas, comprendiendo el método:
(a) administrar una primera composición de vacuna contra el virus del dengue a un paciente que la necesite, (b) esperar a que pase una cantidad de tiempo predeterminada después de la etapa (a); y
(c) administrar al paciente una segunda composición de vacuna contra el virus del dengue, en donde la primera y segunda composición de vacuna contra el virus del dengue comprenden:
(i) una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue que comprende al menos un virus vivo atenuado del dengue (LAV) en donde el LAV comprende un genoma vírico que comprende una supresión de 30 nucleótidos de la estructura de bucle-tallo de TL-2 en la UTR 3', en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene además una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'; y
(ii) una vacuna no replicante contra el dengue.
En algunas realizaciones del método anterior, la vacuna no replicante es una vacuna e subunidades del dengue<o>una vacuna inactivada contra el dengue.
En realizaciones preferidas de la invención, las vacunas con virus vivos atenuadas y no replicantes contra el dengue son tetravalentes (es decir, comprenden componentes DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4 o inducen una respuesta inmunitaria contra DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4), siempre que la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprenda al menos un LAV que sea inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'.
En algunas realizaciones de los métodos de coformulación de sensibilización-refuerzo, la composición de la segunda vacuna contra el virus del dengue de la etapa (<c>) es igual que la composición de la primera vacuna contra el virus del dengue de la etapa (a). En realizaciones alternativas, la composición de la etapa (<c>) no es la misma que la composición de la etapa (a). En realizaciones adicionales, el método comprende repetir las etapas (b) y (c) una o más veces. En algunas realizaciones, la primera vacuna y la segunda vacuna contra el dengue de la etapa (a) y/o de la etapa (<c>) se formulan en viales separados y se mezclan entre sí antes de la administración. Se cree que el uso de las composiciones de la invención en un régimen de sensibilización/refuerzo inducirá fuertes respuestas inmunitarias que son impulsadas principalmente por la vacuna con virus vivos atenuada en la sensibilización (primera dosis) y por la vacuna no replicante (p. ej., de subunidades o inactivada) en el refuerzo (segunda dosis).
Por consiguiente, la presente invención se refiere a una composición de vacuna contra el virus del dengue que comprende cantidades eficaces de una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y una vacuna no replicante contra el dengue y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprende al menos un virus vivo atenuado del dengue (LAV), en donde el LAV comprende un genoma vírico que comprende una supresión de 30 nucleótidos de la estructura tallo-bucle de TL-2 en la U<t>R 3', en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la U<t>R 3'. En algunas realizaciones de la invención, la vacuna no replicante contra el dengue de las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención se seleccionan entre una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue o una vacuna contra el dengue inactivada.
Para preparar composiciones de vacuna contra el virus del dengue farmacéuticas o estériles de la invención, una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y una vacuna no replicante contra el dengue, como se describen en el presente documento, se mezclan con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Como alternativa, una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y una vacuna no replicante contra el dengue comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable antes de mezclarlas y no se requiere ningún vehículo adicional cuando se mezclan las vacunas. Véase, p. ej., Remlngton's Pharmaceutlcal Sciences y U.S. Pharmacopela: National Formulary, Mack Publlshlng Company, Easton, PA (1984). L<os>"transportadores farmacéuticamente aceptables" incluyen todos y cada uno de los dlsolventes, medlos de dlsperslón, agentes lsotónlcos y retardantes de la absorclón y slmllares que sean flslológlcamente compatlbies. El vehículo puede ser adecuado para admlnlstraclón lntravenosa, lntramuscular, subcutánea, parenteral, rectal, esplnal o epldérmlca (p. ej., medlante lnyecclón o lnfuslón).
Como se utlllza en el presente documento, la expreslón "vehículo farmacéutlcamente aceptable" se reflere a una sustancla, como se ha descrlto anterlormente, que se mezcla con un prlnclplo actlvo (p. ej., vlrus lnactlvado completo, vlrus<vívo>atenuado, vlrus qulmérlco<vívo>atenuado, proteína vírlca, plásmldo que comprende una secuencla de nucleótldos que codlflca una proteína antlgénlca del dengue<o>conjugado antlgénlco del dengue) de la lnvenclón que es adecuado para su admlnlstraclón a seres humanos. En reallzaclones de la lnvenclón, el vehículo farmacéutlcamente aceptable no se encuentra en la naturaleza en la mlsma forma, p. ej., la sustancla es artlflclal, ya sea porque no exlste en la naturaleza o porque la pureza y/o esterllldad de la sustancla no es la mlsma que la sustancla natural correspondlente. Por ejemplo, agua estérll para lnyectables, que es una preparaclón estérll, sln bacterlas, sln solutos de agua destllada para lnyectables, no exlste en la naturaleza en la mlsma forma y se consldera un vehículo farmacéutlcamente aceptable. En algunas reallzaclones, las composlclones farmacéutlcas de la lnvenclón comprenden uno o más prlnclplos actlvos desvelados en el presente documento (p. ej., un LAV tetravalente) y agua estérll para lnyectables. En reallzaclones adlclonales, el vehículo farmacéutlcamente aceptable puede ser otra forma de agua que sea adecuada para preparaclones farmacéutlcas o blológlcas y no sea la mlsma que el agua que se encuentra en la naturaleza, lnclulda agua purlflcada, agua para lnyectables, agua purlflcada estérll y agua bacterlostátlca para lnyecclón.
Las composlclones farmacéutlcas normalmente deben ser estérlles y estables en las condlclones de fabrlcaclón y almacenamlento. Las formulaclones de agentes terapéutlcos y de dlagnóstlco pueden prepararse mezclando con vehículos, exclplentes<o>establllzantes aceptables en forma de, p. ej., polvos iloflllzados, suspenslones espesas, soluclones acuosas, suspenslones, mlcroemulslones, dlsperslones, ilposomas<u>otra estructura ordenada adecuada para la formulaclón y admlnlstraclón de vacunas (véase, p. ej., Hardman,et al.(2001) Goodman and Gllman's The Pharmacologlcal Basls of Therapeutlcs, McGraw-Hlll, Nueva York, NY; Gennaro (2000) Remlngton: The Sclence and Practlce of Pharmacy, Llpplncott, Wllllams y Wllklns, Nueva York, NY; A<v>I<s>,et al.(eds.) (1993) Pharmaceutlcal Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman,et al.(eds.) (1990) Pharmaceutlcal Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman,et al.(eds.) (1990) Pharmaceutlcal Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner y Kotkoskle (2000) Exclplent Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, NY).
Las coformulaciones de la vacuna contra el virus del dengue de la presente invención pueden comprender además componentes adicionales, incluidos, pero sin limitación, adyuvantes, como se analiza posteriormente, tampones, estabilizantes, solubilizantes, sal, conservantes antimicrobianos, tensioactivos, modificadores de la tonicidad, agentes quelantes, dextrano, sulfato de dextrano, dextrano T40, dietanolamina, guanldlna, cloruro cálclco, citrato de sodio, albúmina, gelatina, polietilenglicol (PEG), lípldos y heparlna. Un experto en la técnica es capaz de determinar fácilmente qué excipientes adicionales deberían incluirse en una composición<o>coformulación deseada de vacuna contra el virus del dengue, dependiendo de<su>función en la formulación, así como del modo previsto de administración, la dosis y otros factores tales como el tiempo de almacenamiento esperado y la temperatura de la composición. Un experto en la materia reconoce que la cantidad de excipientes adicionales puede variar y puede determinar fácilmente una cantidad adecuada que sea segura para la administración a seres humanos y eficaz para la función deseada.
Vacuna con virus vivos atenuada contra el virus del dengue
Como se ha indicado anteriormente, las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención comprenden una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue que comprende al menos un LAV, seleccionado del grupo que consiste en virus del dengue de tipo 1 (DEN1), virus del dengue de tipo 2 (DEN2), virus del dengue de tipo 3 (d EN3) y virus del dengue de tipo 4 (d EN4), o LACV, en donde el LAV comprende un genoma vírico que comprende una modificación TL-2 A30 en la UTR 3' y en donde el LAV induce una respuesta inmunitaria contra el serotipo 3 del dengue, induce una respuesta de anticuerpos neutralizantes del virus contra el serotipo 3 del dengue, protege contra<o>reduce la probabilidad de infección<o>reduce la gravedad<o>duración de las manifestaciones clínicas de la misma. En realizaciones de la Invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es monovalente, bivalente, trivalente<o>tetravalente, es decir, induce una respuesta inmunitaria<o>protege contra uno, dos, tres<o>cuatro de los serotipos de DEN 1-4, respectivamente, siempre que la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprenda al menos un LAV que sea inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótldos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'. En realizaciones preferidas de la Invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es tetravalente, es decir, induce una respuesta inmunitaria contra<o>protege contra los serotipos de DEN 1-4 y comprende un componente DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4, en donde cada componente es un LAV o un LACV, siempre que la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprenda al menos un LAV que sea inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene una supresión de nucleótldos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'.
En algunas realizaciones de la Invención, cada componente de LAV o LACV de un LATV de la invención comprende un virus vivo atenuado que es un virus del dengue atenuado que comprende la modificación TL-2 A30 en la UTR 3' del genoma vírico. La atenuación del virus del dengue se logra mediante la modificación TL-2 A30. Sin embargo, también se pueden incluir mutaciones atenuantes adicionales en uno o más componentes de la vacuna, incluidos, pero sin limitación: mutaciones en las posiciones 1495, 1545, 7132, 7163, 7164 y 8308. Las mutaciones atenuantes se pueden lograr mediante diferentes técnicas, incluidos métodos conocidos en la técnica tales como mediante pases en serie en cultivo de tejidos<o>mediante manipulaciones genéticas más definidas. En la técnica se conocen mutaciones útiles para atenuar los virus del dengue y los virus del dengue quiméricos. Véanse, p. ej., los documentos WO 02/095075, WO 2006/44857, la patente de EE. UU. n.o 7189403, la patente de EE. UU. n.08337860, WO 2003/103571, WO 2000/014245 y W<o>2008/022196. También se pueden usar cepas atenuadas de dengue conocidas en las composiciones del presente documento, tales como las cepas descritas en los documentos WO 06/134433, WO 2006/134443, WO 2007/141259, WO 96/40933, WO 2000/057907, WO 2000/057908, WO 2000/057909, WO 2000/057910 y WO 2007/015783.
Las realizaciones preferidas de las composiciones de la invención comprenden una vacuna tetravalente con virus vivos atenuada contra el dengue (LATV). Dicha vacuna tetravalente con virus vivos atenuada puede comprender cuatro virus atenuados del dengue (LAV), tres LAV y una cepa de flavivirus quimérico atenuado (LACV), dos L<a>V de dengue y dos LACV<o>un LAV de dengue y tres LA<c>V.
En realizaciones preferidas, el LATV comprende los siguientes elementos: (1) rDEN1A30, que es un LAV DENV1 en donde el genoma vírico de DENV1 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; (2) rDEN2/4A30, que es un LACV DENV2 que comprende los genes prM y E de DENV2 en una cadena principal de DENV4, en donde la cadena principal de DEN4 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; (3) rDEN3 A30/A31, que es un LAV DENV3 en donde el genoma vírico de DENV3 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'; y una supresión separada, no contigua, de 31 nt en dirección 5' correspondiente a la estructura de TL-3 de la UTR 3'; y (4) rDEN4A30, que es un LAV DENV4 en donde el genoma vírico de DENV4 comprende una supresión de 30 nt correspondiente a la estructura de tallo-bucle de TL2 en la UTR 3'.
En realizaciones de la invención que comprenden flavivirus quiméricos, cada flavivirus quimérico comprende un genoma vírico que comprende secuencias de nucleótidos que codifican las proteínas prM y E de un único serotipo de virus del dengue y secuencias de nucleótidos que codifican la cápside y las proteínas no estructurales (es decir, "la cadena principal") de un flavivirus diferente, en donde cada uno de los flavivirus quiméricos está atenuado. L<os>métodos para la construcción de una cepa de flavivirus vivo atenuado recombinante pueden comprender el<uso>de una cepa atenuada conocida como base, en el que el método comprende sustituir con los genes adecuados (prM y E) de un virus relacionado de interés los genes equivalentes del virus base. Por ejemplo, este enfoque se ha utilizado para el VNO en donde el virus quimérico es un quimérico intertípico basado en una cepa DEN-4 atenuada que comprende los genes prM y E del VNO (Bray, M.et al., J. Virol.(1996) 70:4162-4166; Chen, W.,et al., J. Vlrol.(1995) 69:5186-5190; Bray, M. y Lai, C.-J.,Proc. Nati. Acad. Scí. USA(1991) 88:10342-10346; Lai, C. J.et al., Clin. Diagn. Virol.(1998) 10:173-179).
Otro enfoque ha sido el uso de la cepa atenuada de fiebre amarilla YF 17D como base para desarrollar vacunas quiméricas recombinantes, que se utilizó anteriormente para el virus de la EJ, virus del DEN y virus del NO. Se puede construir una vacuna quimérica contra la fiebre amarilla que comprenda una cadena principal de la fiebre amarilla reemplazando los genes que codifican las proteínas prM y E de cualquier cepa de fiebre amarilla, por ejemplo, YFV 17D, con los de un serotipo de dengue. Después de la clonación del<a>D<n>, el ARN se transcribe y transfecta en células Vero para obtener virus quiméricos que poseen la maquinaria de replicación de YFV 17D y la cubierta externa del virus del dengue correspondiente. Véase Guirakhooet al., Journal of Virology,74(12): 5477-5485 (2000); Guyet al., Vaccine28: 632-649 (2010); Monath T.P.Adv Virus Res(2003) 61:469-509; Monathet al. Proc. Nati. Acad. Sci. USA(2006) 103:6694; y documento WO 98/37911. Por lo tanto, en algunas realizaciones de la invención, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprende (1) al menos un flavivirus quimérico que comprende las proteínas prM y E de un solo serotipo del dengue y una cadena principal de la fiebre amarilla y (2) al menos un LAV<o>LACV que comprende un genoma vírico que comprende una supresión de 30 nucleótidos de la estructura de tallo-bucle de TL-2 de la UTR 3'.
Los flavivirus quiméricos vivos atenuados útiles en las composiciones de la invención también pueden comprender un virus quimérico del dengue, en donde el genoma vírico comprende genes prM y E de un único serotipo de virus del dengue y los genes de la cápside y no estructurales de un serotipo de virus del dengue diferente. En realizaciones en donde el virus quimérico comprende un esqueleto de un segundo serotipo de dengue, la cadena principal del dengue comprende una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos de la UTR 3' que corresponde a la estructura de tallobucle de TL-2 y, opcionalmente, puede comprender mutaciones atenuantes adicionales. Se puede utilizar cualquier virus del dengue atenuado o virus del dengue natural como cadena principal del virus quimérico, mediante la introducción de una supresión de 30 nucleótidos de la estructura de tallo-bucle de TL-2 en una cadena principal atenuada del dengue o en una cadena principal del virus del dengue natural. La atenuación de la cadena principal del virus del dengue se puede lograr mediante pases en serie, mediante la introducción de mutaciones genéticas definidas o mediante el uso de cepas atenuadas del dengue conocidas. Se describen vacunas quiméricas contra el dengue, por ejemplo, en Whiteheadet al.WO 03/092592. En algunas realizaciones de la invención, la vacuna con virus vivos atenuada comprende un flavivirus quimérico en donde la cápside y las proteínas no estructurales son de un serotipo de dengue diferente al de las proteínas prM y E.
Las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención comprenden una cantidad eficaz de vacuna de virus vivo atenuado. En algunas realizaciones de la invención, la potencia de la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es de 10 a aproximadamente 1<x>107 unidades formadoras de placas (UFP). En realizaciones alternativas, la potencia de la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es de aproximadamente 1x102 a aproximadamente 1x106 UFP. En otras realizaciones, la potencia de la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es de aproximadamente 1x103 a aproximadamente 1*10s UFP.
Vacuna de subunidades contra el dengue
En algunas realizaciones de la invención, la composición comprende una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue que comprende una o más proteínas antigénicas del dengue. En realizaciones preferidas de este aspecto de la invención, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue comprende una<o>más proteínas del dengue, proteínas de fusión o un fragmento o fragmentos de las mismas. En otras realizaciones preferidas, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue comprende proteína de envoltura<o>E del dengue,<o>un fragmento de la misma.
En otras realizaciones preferidas, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue es tetravalente, es decir, se dirige a una respuesta inmunitaria contra los cuatro serotipos del dengue. Una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue puede comprender cuatro proteínas recombinantes del dengue<o>menos de cuatro, p. ej., una proteína DEN1 recombinante, una proteína DEN2 recombinante y una proteína de fusión DEN3/4 recombinante. En algunas realizaciones, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue comprende glucoproteína de la envoltura del virus del dengue, o fragmentos de la misma, de DEN1-4 (p. ej., DEN1-80E, DEN2-80E, DEN3-80E, DEN4-80E o DEN4-80EZÍp) que se produce y secreta mediante un sistema de expresión recombinante. Dicha vacuna de subunidades puede comprender opcionalmente un adyuvante, como se describe con más detalle a continuación.
En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue comprende una<o>más proteínas de la envoltura ("E") del virus del dengue purificadas, un excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde cada una de las proteínas E constituye aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural a partir del resto de aminoácido 1 en su extremo N, de modo que dicha proteína E sea secretable en medio de cultivo cuando se expresa de forma recombinante en una célula hospedadora y en donde la composición induce la producción de anticuerpos neutralizantes en sujetos humanos. En algunas realizaciones de la invención, la vacuna recombinante de subunidades contra el dengue comprende además una cantidad eficaz de un adyuvante. En algunas realizaciones de la invención, la proteína DEN-4 E es dimérica ("DEN4-80EZÍ<p>"), como se describe en los documentos US 6749857 y WO 2012/154202.
En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, las proteínas E en la composición descrita anteriormente se producen y expresan de manera recombinante en células hospedadoras de insecto. En otras realizaciones preferidas, la proteína E se produce y expresa de forma recombinante en células hospedadoras Schneider 2 (S2) deDrosophila melanogaster.
Las proteínas E recombinantes del virus del dengue de la presente invención pueden producirse mediante un sistema de expresión en cultivo celular que utiliza células Schneider 2 (S2) deDrosophila.Se ha demostrado que este sistema produce proteínas recombinantes de la envoltura del dengue que mantienen una estructura similar a la nativa (Cuzzubboet al., Clin. Diagn. Lab. Immunol.(2001) 8:1150-55; Modiset al., Proc. Nati. Acad. Scí.(2003) 100:6986-9 l; Modiset al., Nature(2004) 427:313-9; Zhanget al., Structure(2004) 12(9):1607-18). También se ha mostrado que este sistema de expresión expresa otras proteínas de la envoltura recombinantes de otros flavivirus tales como el virus del Nilo Occidental, el de la encefalitis Japonesa, el de la hepatitis C y el de la encefalitis transmitida por garrapatas. Las proteínas recombinantes de la envoltura del dengue pueden estar truncadas en el extremo C, dejando el 80 % de la proteína de la envoltura nativa ("80E"). Por lo tanto, 80E se define como aproximadamente el primer 80 % de aminoácidos consecutivos de la proteína E comenzando en el aminoácido 1 de su extremo N.
Como se ha indicado anteriormente, algunas realizaciones de este aspecto de la invención comprenden proteínas 80E truncadas que consisten en aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural comenzando desde el resto de aminoácido 1 en su extremo N. Las proteínas E utilizadas en algunas realizaciones de la invención suprimen la parte de anclaje a la membrana (aproximadamente el último 10 % de E en el extremo carboxilo) de la proteína. Dicho de otro modo, las proteínas 80E truncadas de<uso>en realizaciones específicas de la invención consisten en hasta el primer 90 % de aminoácidos consecutivos de E comenzando en el aminoácido 1 de su extremo N, permitiendo de este modo que se secrete al medio extracelular, lo que facilita la recuperación. El truncamiento puede eliminar además la parte de "tallo" de la proteína E que une la parte 80E con la parte de anclaje a la membrana; la parte de tallo no contiene epítopos antigénicos notables y, por lo tanto, no está incluida en los antígenos preferidos, DEN1-80E, DEN2-80E, DE<n>3-80E, DEN4-80E<o>DEN4-80<e>Z<íp>. Más del 90 %, pero menos del 100 %, de la proteína E se puede clonar y secretar, es decir, la proteína puede tener un 90 %+ de longitud, truncada en el extremo carboxilo, y puede incluir una parte del dominio transmembrana siempre que la proteína E truncada sea secretable. "Secretable" significa que puede ser secretada y, normalmente, es secretada, de las células transformadas en el sistema de expresión. Por lo tanto, un experto en la materia se dará cuenta de que las proteínas E del dengue que son útiles en las composiciones y métodos de la presente invención pueden variar del 80 % ejemplificado en el presente documento, siempre que la proteína sea secretable. En realizaciones preferidas de cada aspecto de la presente invención, las proteínas E de DEN tienen aproximadamente un 80 % de longitud comenzando desde el aminoácido N-terminal de la proteína de la envoltura y terminando en un aminoácido en el intervalo del aminoácido 393 al 401, por ejemplo, del aminoácido 1 al aminoácido 395 del virus del dengue de tipo 2. En realizaciones alternativas de cada aspecto de la invención, la proteína E del dengue puede ser aproximadamente el 75 %, aproximadamente el 85 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 95 %<o>aproximadamente el 98 % de los aminoácidos consecutivos de E comenzando en el aminoácido 1 de<su>extremo N. En realizaciones ilustrativas de aspectos de la invención del presente documento, la proteína E de DEN es aproximadamente el 80 % de aminoácidos consecutivos de la proteína E comenzando en el aminoácido 1 de<su>extremo N; tal como DEN1- 80E, como se expone en la SEQ ID NO:1, DEN2- 80E, como se expone en la SEQ ID NO:2, DEN3- 80E, como se expone en SEQ<i>D NO:3 y DEN4-80E, como se expone en la SEQ ID NO:4.
La proteína E secretada puede contener además dominios que facilitan la dimerización, tal como en la proteína DEN4-80Ez íp , de modo que se potencia aún más la inmunogenicidad de la proteína recombinante. Una proteína DEN4-80EZip ilustrativa comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ ID NO: 5. En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, los antígenos DEN1, DEN2 y DEN3 80E incluidos en la composición son monoméricos y el antígeno DEN480E es dimérico.
En realizaciones alternativas de este aspecto de la invención, las proteínas DEN1-80E, DEN2-80E, DEN3-80E y DEN4-80E de la composición son monoméricas. En dichas realizaciones, el componente DEN4 está presente en una cantidad que es de aproximadamente 1,5 a aproximadamente 3 veces las cantidades individuales de las proteínas DEN1, DEN2 y DEN3, preferiblemente aproximadamente 2 veces la cantidad de los componentes DEN1, DEN2 y DEN3 (proteínas). En realizaciones preferidas de este aspecto de la invención, la relación de antígenos DEN1:DEN2:DEN3:DEN4 en las composiciones es aproximadamente 1:1:1:2.
En realizaciones de la invención que comprenden proteínas E del dengue, la cantidad de cada proteína E en la composición es de aproximadamente 0,5 |jg a aproximadamente 500 |jg. En realizaciones alternativas, la cantidad de cada proteína E es de aproximadamente 0,5 jg a aproximadamente 450 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 400 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 350 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 300 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 250 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 200 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 150 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 100 jg , de 0,5 jg a aproximadamente 50 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 500 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 450 jg , de 5.0 jg a aproximadamente 400 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 350 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 300 jg , de 5.0 jg a aproximadamente 250 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 200 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 150 jg , de 5.0 jg a aproximadamente 100 jg , de 5,0 jg a aproximadamente 50 jg , de 10 jg a aproximadamente 500 jg , de 10 jg a aproximadamente 450 jg , de 10 jg a aproximadamente 400 jg , de 10 jg a aproximadamente 350 jg , de 10 jg a aproximadamente 300 jg , de 10 jg a aproximadamente 250 jg , de 10 jg a aproximadamente 200 jg , de 10 jg a aproximadamente 150 jg , de 10 jg a aproximadamente 100 jg , de 10 jg a aproximadamente 50 jg , de 25 jg a aproximadamente 500 jg , de 25 jg a aproximadamente 450 jg , de 25 jg a aproximadamente 400 jg , de 25 jg a aproximadamente 350 jg , de 25 jg a aproximadamente 300 jg , de 25 jg a aproximadamente 250 jg , de 25 jg a aproximadamente 200 jg , de 25 jg a aproximadamente 150 jg , de 25 jg a aproximadamente 100 jg o de 25 jg a aproximadamente 50 jg . En otras realizaciones preferidas, la cantidad de cada proteína E en la composición es de aproximadamente 1,0 jg a aproximadamente 1O0 jg . En más realizaciones adicionales, la cantidad de cada proteína E en la composición se selecciona entre aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 1OO, 15O, 2OO, 25O, 3OO, 35O, 4OO, 45O o 5OO jg.
Vacuna inactivada contra el dengue
Como alternativa a una vacuna de subunidades contra el dengue en las coformulaciones de vacuna contra el dengue de la invención, también se puede usar una vacuna completa inactivada contra el dengue o una vacuna quimérica inactivada contra el dengue. Las vacunas inactivadas contra el dengue de las coformulaciones del presente documento comprenden uno o más virus del dengue inactivados completos y/o uno o más virus quiméricos del dengue inactivados.
En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, la vacuna inactivada contra el dengue es tetravalente y comprende DEN1, DEN2, DEN3 y De N4 inactivado completo. En realizaciones alternativas, la vacuna inactivada comprende cuatro virus quiméricos del dengue inactivados. En otras realizaciones más, la vacuna inactivada es tetravalente y comprende uno<o>más virus del dengue inactivados completos y uno<o>más virus quiméricos del dengue inactivados, p. ej., un virus DEN1 completo inactivado, un virus DEN2 completo inactivado, un virus quimérico DEN3 inactivado y un virus quimérico DEN4 inactivado. Un experto en la técnica se da cuenta de que se puede utilizar cualquier combinación de virus DEN completos o quiméricos inactivados en las composiciones tetravalentes y métodos de la invención, siempre que la composición de la vacuna se dirija a los cuatro serotipos del dengue.
Se describen vacunas inactivadas contra el dengue útiles en las composiciones y métodos de la invención en Putnak.et al. Vaccine23: 4442-4452 (2OO5), documento US 619O859, documento US 6254873 y Sternet al.WO 2OO7/OO247O.
Como alternativa, las cepas del virus del dengue y las cepas quiméricas del dengue/cepas quiméricas de flavivirns pueden inactivarse para<su uso>en las composiciones y métodos de la invención mediante métodos conocidos en la técnica, p. ej., con productos químicos, calor o radiación.
Adyuvantes
La coadministración de vacunas con compuestos que puedan potenciar la respuesta inmunitaria contra el antígeno de interés, conocidos como adyuvantes, se ha estudiado ampliamente. Además de aumentar la respuesta inmunitaria contra el antígeno de interés, se pueden usar algunos adyuvantes para disminuir la cantidad de antígeno necesaria para provocar la respuesta inmunitaria deseada<o>disminuir la cantidad de inyecciones necesarias en un régimen clínico para inducir una respuesta inmunitaria duradera y brindar protección contra enfermedades.
Con este fin, las coformulaciones de vacunas contra el virus del dengue de la invención pueden emplear un adyuvante. El adyuvante de las coformulaciones descritas en el presente documento puede ser cualquier adyuvante que realice la función deseada, como se ha descrito anteriormente, y no inactiva ni afecta significativamente al título del LAV<o>LACV de la composición.
Hace más de 60 años se determinó que los compuestos a base de aluminio poseían actividad adyuvante (para una revisión, véase Lindblad, E.B.Immunol. and Cell BíoI.82: 497-505 (2004); Bayloret al. Vaccine20: S18-S23 (2002)). L<os>adyuvantes de aluminio generalmente se consideran seguros cuando se usan en dosis adecuadas. Muchos han sido aprobados para su administración a seres humanos por agencias reguladoras de todo el mundo.
Por consiguiente, los compuestos a base de aluminio, tales como el hidróxido de aluminio (AI(OH)s), el hidroxifosfato de aluminio (AIPO4), el sulfato de hidroxifosfato de aluminio amorfo (AAHS)<o>el llamado "alumbre" (KAl(S04) 12 H20) (véase Kleinet al.,Analysis of aluminum hydroxyphosphate vaccine adjuvants by Al MAS NMR.,J. Pharm. Scí.89(3): 311-21 (200<o>)), se pueden combinar con las composiciones proporcionadas en el presente documento. En realizaciones ilustrativas de la invención proporcionada en el presente documento, el adyuvante de aluminio es hidroxifosfato de aluminio o AAHS, denominado como alternativa "MAA". En realizaciones alternativas, el adyuvante de aluminio es un adyuvante de fosfato de aluminio, denominado en el presente documento "MAPA". En otras realizaciones, el adyuvante es hidróxido de aluminio.
Un experto en la materia podrá determinar una dosificación óptima de adyuvante de aluminio que sea tanto segura como eficaz para aumentar la respuesta inmunitaria contra Ios virus del dengue diana. Para un análisis del perfil de seguridad del aluminio, así como las cantidades de aluminio incluidas en las vacunas autorizadas por la FDA, véase Bayloret al., Vaccine20: S18-S23 (2002). En general, una dosis eficaz y segura de adyuvante de aluminio varía de 50 |jg a 1,25 mg de aluminio elemental por dosis (concentración de 100 jg/m l a 2,5 mg/ml).
Por lo tanto, realizaciones específicas de la presente invención incluyen composiciones que comprenden una vacuna con virus vivos atenuada contra el virus del dengue y una vacuna no replicante, como se describe en cualquier realización del presente documento, y que comprende además un adyuvante de aluminio. En algunas realizaciones, la vacuna no replicante se selecciona entre una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue<o>una vacuna inactivada contra el dengue. En realizaciones de la invención, las composiciones contra el dengue comprenden un adyuvante que comprende de aproximadamente 50 jg a aproximadamente 1,25 mg de aluminio elemental por dosis de vacuna. En otras realizaciones, el adyuvante de aluminio por dosis de composición de vacuna comprende una cantidad de aluminio elemental que varía de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 1,0mg, de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 800 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 700 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 600 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 500 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 400 jg , de aproximadamente 100 jg a aproximadamente 300 jg , de aproximadamente 100 a aproximadamente 250 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 1,25 mg, de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 1,0 mg, de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 800 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 700 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 600 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 500 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 400 jg , de aproximadamente 200 jg a aproximadamente 300 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 1,25 mg, de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 1,0 mg, de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 800 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 700 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 600 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 500 jg , de aproximadamente 300 jg a aproximadamente 400 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 1,25 mg, de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 1,0 mg, de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 800 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 700 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 600 jg , de aproximadamente 400 jg a aproximadamente 500 jg , de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 1,25 mg, de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 1,0 mg, de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 800 jg , de aproximadamente 500 jg a aproximadamente 700 jg , de aproximadamente 500 |jg a aproximadamente 600 jg , de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 1,25 mg, de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 1,0 mg, de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 900 jg , de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 850 jg , de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 800 jg o de aproximadamente 600 jg a aproximadamente 700 jg .
Otros adyuvantes que pueden usarse Junto con las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención, incluyen, pero sin limitación, adyuvantes que contienen oligonucleótidos CpG u otras moléculas que actúan sobre receptores de tipotolltales como t LR4 y TLR9 (para revisiones, véanse, Daubenberger, C.A.,Curr. Opin. MoI. Ther.9(1):45-52 (2007); Duthieet al., Immunological Reviews239(1): 178-196 (2011); Hedayatet al., Medicinal Research Reviews32(2): 294-325 (2012)), incluidos lipopolisacárido, monofosforil lípido A y aminoalquilglucosaminida 4-fosfatos. L<os>adyuvantes adicionales útiles en las composiciones de la invención incluyen oligonucleótidos inmunoestimulantes (IMO; véanse, p. eJ., los documentos U.S. 7713535 y U.S. 7470674); epítopos T-auxiliares, lípido A y derivados o variantes del mismo, liposomas, fosfato de calcio, citocinas, (p. eJ., factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) IL-2, IFN-ci, Flt-3L), CD40, CD28, CD70, IL-12, proteína de choque térmico (HSP) 90, CDl34 (0X40), CD137, CoVaccine HT, copolímeros en bloques no iónicos, adyuvante incompleto de Freund, quimiocinas, toxina colérica; enterotoxina termolábil deE. coli;toxina pertúsica; dipéptido de muramilo, análogos de péptidos de muramilo, MF59, SAF, complejos inmunoestimulantes, microesferas biodegradables, polifosfaceno; polinucleótidos sintéticos.
L<os>adyuvantes adicionales para usar con las composiciones descritas en el presente documento son adyuvantes que contienen saponinas (p. ej., QS21), ya sea solas o combinadas con colesterol y fosfolípidos en la forma característica de un ISCOM ("complejo inmunoestimulante", para una revisión, véase Barr y Mitchell,Immunology and Cell Biology74: 8-25 (1996); y Skene y Sutton,Methods40: 53-59 (2006)). Dichos adyuvantes se denominan en el presente documento "adyuvantes basados en saponina". En realizaciones específicas de las composiciones y métodos proporcionados en el presente documento, las toxinas mutantes y/o las proteínas de las toxinas se combinan con un adyuvante de tipo ISCOM<o>"ISCOM", que es un adyuvante de partículas de matriz ISCOM, tal como ISC0MATRIX™, que se fabrica sin antígeno (ISCOM™ y ISCOMAt RIX™ son las marcas registradas de CSL Limited, Parkville, Australia).
Métodos de uso
Las realizaciones de la invención también incluyen una<o>más de las coformulaciones de vacuna contra el dengue descritas en el presente documento (i) para su uso en, (ii) para su uso como un medicamento o una composición para,<o>(iii) para<su uso>en la preparación de un medicamento para: (a) terapia (p. ej., del cuerpo humano); (b) medicina; (<c>) inhibición de la replicación del virus del dengue, incluido DEN1, DEN2, DEN3 y/o DEN4; (d) inducción de una respuesta inmunitaria o una respuesta inmunitaria protectora contra uno o más de DEN1, DEN2, DEN3 y/o DEN4; (e) inducción de una respuesta de anticuerpos neutralizantes del virus contra uno o más tipos de dengue; (f) tratamiento o profilaxis de la infección por el virus del dengue; (g) prevención de la reaparición de la infección por el virus del dengue; (h) reducción de la progresión, el inicio<o>la gravedad de los síntomas patológicos asociados con la infección por el virus del dengue y/o reducción de la probabilidad de una infección por el virus del dengue o, (i) tratamiento, profilaxis o retraso del inicio, gravedad<o>progresión de la enfermedad<o>enfermedades asociadas al dengue, incluidas, pero sin limitación: dengue, dengue grave y síndrome de choque por dengue. En estos usos, las composiciones de vacuna contra el dengue se pueden emplear opcionalmente en combinación con uno o más adyuvantes (p. ej., MAA, fosfato de aluminio, hidróxido de aluminio tal como Alhydrogel®<u>otro adyuvante de sal de aluminio, un adyuvante basado en saponina tal como ISCOMAt RIX™ (CSL, Ltd.), un agonista de TLR o nanopartículas lipídicas, descritas en el presente documento).
Por consiguiente, la invención proporciona métodos para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus del dengue<o>de la enfermedad asociada al dengue, que comprenden administrar una<o>más de las coformulaciones de la invención a un paciente que necesite tratamiento.
Un "paciente" (denominado de otro modo en el presente documento "sujeto") se refiere a un mamífero que puede infectarse con un virus del dengue, tal como DEN1, DEN2, DEN3 o DEN4. En realizaciones preferidas, el paciente es un ser humano. Un paciente puede tratarse de forma profiláctica o terapéutica. El tratamiento profiláctico proporciona suficiente inmunidad protectora para reducir la probabilidad o gravedad de una infección por dengue o Ios efectos de la misma, p. ej., dengue. Se puede realizar un tratamiento terapéutico para reducir la gravedad<o>prevenir la reaparición de una infección por dengue<o>I<os>efectos clínicos de la misma.
El tratamiento profiláctico se puede realizar usando una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención, como se describe en el presente documento. Las composiciones de la invención se pueden administrar a la población general o a las personas con mayor riesgo de infección por dengue, por ejemplo, las personas que viven<o>van a viajar a áreas del mundo en las que son frecuentes I<os>mosquitos del géneroAedes.
L<os>que "necesitan tratamiento" incluyen I<os>que ya tienen una infección por dengue (p. ej., infectados con uno<o>más de DEN1, DEN2, DEN3<o>DEN4), así como I<os>propensos a tener una infección<o>cualquier persona en la que se desee una reducción de la probabilidad de infección.
Las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención se pueden formular y administrar a un paciente usando técnicas bien conocidas en este campo. Las pautas para la administración farmacéutica en general se proporcionan en, por ejemplo,Vacáneseds. Plotkin y Orenstein, W.B. Sanders Company, 1999;Remington's Pharmaceutical Sciences20a edición, ed. Gennaro, Mack Publishing, 2000; yModern Pharmaceutics2a edición, Eds. Banker y Rhodes, Marcel Dekker, Inc., 1990.
Por consiguiente, la invención proporciona un método para inducir una respuesta inmunitaria protectora en un paciente contra una infección por dengue que comprende la etapa de administrar al paciente una cantidad inmunológicamente eficaz de cualquiera de las composiciones de vacuna contra el virus del dengue descritas en el presente documento.
La invención también proporciona un método para tratar la infección por dengue o para tratar cualquier afección patológica asociada con la infección por dengue, incluyendo dicho tratamiento profilaxis de la infección y reducción de la gravedad de los síntomas clínicos, retardo<o>prevención de la progresión de la enfermedad y/o reducción de la probabilidad de infección o de los síntomas clínicos de la misma; comprendiendo el método la etapa de administrar al paciente una cantidad inmunológicamente eficaz de cualquiera de las composiciones de vacuna como se describe en el presente documento.
Las realizaciones adicionales de la invención comprenden la administración de dos o más composiciones de la invención a un paciente en un régimen de sensibilización/refuerzo. Por consiguiente, la invención se refiere a un método para prevenir o reducir la probabilidad de infección por dengue en un paciente que lo necesite, que comprende las etapas de:
(a) administrar una primera composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención al paciente;
(b) esperar a que pase una cantidad de tiempo predeterminada después de la etapa (a);
(c) administrar al paciente una segunda composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención; y, (d) opcionalmente repetir las etapas (b) y (<c>);
de modo que se prevenga la infección por dengue<o>se reduzca la probabilidad de infección por dengue en el paciente.
En realizaciones del método anterior, las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención están en forma de líquido (es decir, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y la vacuna no replicante contra el dengue se formulan juntas como un líquido en el mismo vial<o>recipiente). En realizaciones alternativas, las composiciones de vacuna contra el virus del dengue se liofilizan (es decir, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y la vacuna no replicante contra el dengue se formulan juntas y se liofilizan en el mismo vial<u>otro recipiente) y se reconstituyen con un diluyente estéril antes de la administración al paciente. En realizaciones adicionales, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y la vacuna no replicante contra el dengue se proporcionan en viales<o>recipientes separados y se mezclan antes de que el médico la administre al paciente. En dichas realizaciones, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y la vacuna no replicante contra el dengue pueden estar (1) ambas en forma de líquido, (2) ambas liofilizadas<o>(3) una vacuna en forma de líquido y una vacuna liofilizada. Cuando una vacuna está en forma de líquido y la otra está liofilizada, la vacuna liofilizada se puede reconstituir con la vacuna líquida para formar una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención o la vacuna liofilizada se puede reconstituir con un diluyente estéril y después mezclar con la vacuna líquida para formar una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención.
La cantidad de tiempo entre la primera dosis de una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención y la segunda dosis de una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención,<o>cualquier dosis posterior, es de aproximadamente 2 semanas a aproximadamente 2 años. En realizaciones preferidas de la invención, se deja pasar un tiempo de 2 meses a 12 meses entre múltiples administraciones. En realizaciones alternativas de este aspecto de la invención, la cantidad de tiempo entre cada administración de cada dosis de la composición de vacuna se selecciona independientemente del grupo que consiste en 2 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses y 24 meses.
En algunas realizaciones de la invención, la primera y segunda composiciones de la vacuna contra el virus del dengue son las mismas. En realizaciones alternativas, la primera y segunda composiciones de la vacuna contra el virus del dengue no son las mismas.
Las composiciones de vacuna contra el virus del dengue de la invención se pueden administrar por diferentes vías. En realizaciones preferidas de la invención, las composiciones de la invención se administran por vía parenteral, es decir, por inyección intradérmica, subcutánea o intramuscular. La administración subcutánea e intramuscular se puede realizar utilizando, por ejemplo, agujas<o>inyectores de chorro.
Las composiciones descritas en el presente documento se pueden administrar de una manera compatible con la formulación posológica y en una cantidad tal que sea inmunológicamente eficaz para tratar y/o reducir la probabilidad de infección por dengue. La dosis administrada a un paciente, en el contexto de la presente invención, debería ser suficiente para lograr una respuesta beneficiosa en un paciente a lo largo del tiempo, tal como una reducción del nivel del virus del dengue,<o>para reducir la probabilidad de infección por dengue. La cantidad de las vacunas contra el virus del dengue que se va a administrar puede depender del sujeto que se vaya a tratar, incluida la edad, el sexo, el peso y el estado general de salud del mismo. A este respecto, las cantidades exactas de la vacuna que es necesario administrar dependerán del criterio del facultativo. Para determinar la cantidad eficaz de vacuna que se va a administrar en el tratamiento<o>profilaxis contra la infección por dengue, el médico puede evaluar los niveles circulantes en plasma, la evolución de la enfermedad y la producción de anticuerpos contra el dengue. En cualquier caso, los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente dosis adecuadas de las composiciones inmunógenas de la invención.
Los regímenes de dosificación adecuados se determinan preferiblemente teniendo en cuenta factores bien conocidos en la técnica, incluidos la edad, el peso, el sexo y el estado clínico del paciente; la vía de administración; el efecto deseado; y la composición particular empleada. El momento de administración de las dosis depende de factores bien conocidos en la técnica y puede oscilar entre 2 semanas y 24 meses. Después de la administración inicial, se pueden administrar una o más dosis adicionales para mantener y/o aumentar los títulos de anticuerpos.
La invención también se refiere a métodos para prevenir la infección por dengue<o>prevenir<o>aliviar los síntomas de la misma, que comprende las etapas de: (a) mezclar una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue y una vacuna no replicante contra el dengue para formar una composición de vacuna contra el virus del dengue de la invención. En este método, la composición de vacuna contra el virus del dengue se administra al paciente dentro de un periodo de tiempo después de la mezcla en el que permanece estable, p. ej., en 24 horas. En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue<o>una vacuna inactivada contra el dengue.
Las realizaciones adicionales de este aspecto de la invención comprenden (c) dejar pasar una cantidad de tiempo predeterminada después de la administración de la composición de vacuna contra el virus del dengue y (d) administrar una segunda dosis de una composición de la invención. En dichas realizaciones, las etapas (c) y (d) pueden repetirse opcionalmente una<o>más veces.
En el método descrito anteriormente, la primera vacuna contra el dengue es preferiblemente tetravalente y comprende un componente DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4, en donde cada componente comprende un virus del dengue vivo atenuado o un flavivirus quimérico vivo atenuado, como se describe en el presente documento. En realizaciones ilustrativas, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue comprende cuatro flavivirus quiméricos; en donde cada uno de los flavivirus quiméricos comprende las proteínas prM y E de un único serotipo de virus del dengue y las proteínas de la cápside y no estructurales de un flavivirus diferente, en donde cada uno de los flavivirus quiméricos está atenuado. En determinadas realizaciones, la cápside y las proteínas no estructurales de los cuatro flavivirus quiméricos provienen del virus de la fiebre amarilla. En realizaciones alternativas, la cápside y las proteínas no estructurales de cada uno de los cuatro flavivirus quiméricos provienen de un serotipo de dengue diferente al de las proteínas prM y E.
En algunas realizaciones de este aspecto de la invención, la segunda vacuna contra el dengue es una vacuna de subunidades recombinante tetravalente contra el dengue que comprende proteínas E del dengue,<o>fragmentos de las mismas, de DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4. En el presente documento se describen vacunas de subunidades útiles en este método de la invención. En realizaciones preferidas, cada una de las proteínas E constituye aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural de DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4, comenzando desde el resto de aminoácido 1 en su extremo N.
En determinadas realizaciones del método descrito anteriormente, la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue se liofiliza y la vacuna de subunidad recombinante es líquida antes de mezclarla. En algunas realizaciones, la mezcla de la etapa (a) comprende reconstituir la vacuna liofilizada con la vacuna líquida. En realizaciones alternativas, la vacuna liofilizada se reconstituye con un diluyente estéril antes de mezclarla con la vacuna líquida de la etapa (a).
Todas las publicaciones mencionadas en el presente documento describen o divulgan metodologías y materiales que podrían usarse en relación con la presente invención.
Habiendo descrito distintas realizaciones de la invención en el presente documento con referencia a los dibujos adjuntos, debe entenderse que la invención no se limita a esas realizaciones precisas y que un experto en la materia puede efectuar diversos cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención como se define en las reivindicaciones adjuntas.
e j e m p l o 1
Elaboración de formulaciones para pruebas de compatibilidad/estabilidad de virus del dengue vivos atenuados en presencia de adyuvantes y/o antígenos del dengue (De N-80E tetravalente).
Se realizó un estudio para evaluar la compatibilidad/estabilidad de virus vivos atenuados A30 recombinantes (rDENI-4) cuando se coformulan en combinación con una vacuna de subunidades tetravalente DEN-80E (1-4) (V180), sola o combinada con MAA<o>ISCOMATRIX® (IMX).
Todas las formulaciones se prepararon en una cabina de bioseguridad utilizando técnica aséptica. Las muestras para la prueba se formularon con el adyuvante deseado, antígeno(s) del dengue o combinación de adyuvante/antígeno(s) en PBS de Dulbecco y se colocaron en viales ISO estériles de 2 ml sellados con tapones F<l>UROTEC® (West Pharmaceutical Services, Inc., Exton, PA). Las muestras de adyuvantes/antígenos analizadas en este estudio fueron las siguientes: (1) PBS solo; (2) DEN-80E tetravalente (DEN1-80E DEN2-80E DEN3-80E DEN4-80E); (3) DEN-80E tetravalente MAA; (4) DEN-80E tetravalente 3xMAA y (5) DEN-80E tetravalente adyuvante ISCOMATRIX™ (IMX). Las muestras de adyuvantes/antígeno se mezclaronin situcon los virus del dengue vivos atenuados en una relación de 1:1 como se describe a continuación. La dosis y las concentraciones de las muestras, antes y después de la mezclain situcon los virus del dengue vivos atenuados A30 (como se describe en el ejemplo 2) fueron como se muestran en la tabla 1.
Todas las formulaciones se almacenaron a 2-8 °C antes de mezclarlasin situcon LAV.
EJEMPLO 2
Pruebas de compatibilidad/estabilidad de coformulaciones con virus vivos atenuados del dengue A30 en presencia de adyuvantes y/o antígenos del dengue (DEN-80E tetravalente)
Se mezclaronin situmuestras de antígeno/adyuvante preparadas en el ejemplo 1 con virus atenuados vivos del dengue A30 y se analizó la viabilidad del virus usando un ensayo de placasin vitroen células Vero como se describe a continuación. Los virus del dengue vivos atenuados utilizados en estos estudios fueron (rDEN1 - rDEN1A30-1545; rDEN2 - rDEN2/4 A 30(ME)-1495,7163; rDEN3 - rDEN3A30/31-7164; y rDEN4 - rDEN4 A 30-7132,7163,8308). En la tabla 1 se proporcionan las concentraciones de los antígenos del dengue y los adyuvantes después de la mezclain situcon el A30 LAV.
Se sembraron placas de veinticuatro pocilios con 4 * 105 células Vero/pocillo. El nivel de pases de las células Vero fue P144. Para diluir muestras víricas para el ensayo de placas (T = punto temporal de 0 horas), se descongeló una alícuota de 1 mi de cada uno de los A30 LAV (rDEN1-4) en un baño de agua a 22 °C. Se realizaron diluciones de virus en medio 199 al 2 % para producir una reserva diluida con un título vírico de 2 * 105 UFP/ml. A partir de esta reserva diluida, se tomaron alícuotas de 0,5 mi de virus en un tubo nuevo y se mezclaron con 0,5 mi de una de las formulaciones de adyuvante/antígeno descritas en el ejemplo 1 para dar una dilución 1:1. El volumen total obtenido fue de 1 mi, de los cuales 0,5 mi se usaron para el ensayo de placas de T = 0 horas y 0,5 mi se almacenaron a 4 °C para<su uso>en el ensayo de placas de T = 24 horas.
Se prepararon diluciones adicionales de las muestras 1:1 de A30LAV:adyuvante/antígeno en una placa de 96 pocilios utilizando medio 199 al 2% para dar diluciones 1:10, 1:10o, 1:100o, 1:1000o, 1:10000o y 1:1 000000 de cada muestra de prueba. Para realizar el ensayo, se lavaron monocapas de células Vero con PBS y se añadieron 75 |jl de cada muestra diluida (por duplicado) a cada pocilio de las placas. El inóculo del virus se extendió sobre las células del pocilio y las placas se colocaron en una incubadora. Las placas se agitaron cada 10-15 minutos durante 1 hora para distribuir uniformemente el inóculo. Después de 1 hora de adsorción, las células se cubrieron añadiendo 1 mi de metilcelulosa al 1 % en medio de cultivo a cada pocilio y se incubaron a 37 °C con CO2 al 5 %.
Después de 6 días de incubación, se aspiró la capa superior de metilcelulosa de cada pocilio y la monocapa celular se sometió a inmunotinción utilizando un anticuerpo monoclonal universal contra flavivirus 4G2 (Henchalet al.Dengue virus-specific and flavivirus group determinants identified with monoclonal antibodies by indirect immunofluorescence.The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene31 (4):830-836 (1982)). Siguiendo el procedimiento de inmunotinción, se determinó el título vírico contando el número de placas con una dilución de virus adecuada.
Después de 24 horas, se repitió el procedimiento anterior para determinar el título vírico de cada muestra después del almacenamiento. Las muestras se prepararon como se ha descrito anteriormente. L<os>resultados indican que ninguno de los adyuvantes probados, el antígeno subunitario solo<o>las formulaciones de adyuvante/antígeno tuvieron ningún efecto sobre el título vírico de A30 LAV en T=0 (véase la FIGURA 2). Los resultados indican además que los LAV A30 eran estables con antígenos subunitarios solos y con adyuvantes incluso después de 24 horas de incubación a 4 °C.
EJEMPLO 3
Evaluación de estrategias de vacunación de sensibilización-refuerzo contra el dengue enMacaca mulatta
El objetivo de este estudio no acorde con BPL realizado en macacos de la India fue evaluar la estrategia de vacunación de sensibilización-refuerzo con coformulación y compararla con una estrategia de vacunación de sensibilización y refuerzo convencional. Para el estudio, se administraron dos vacunas candidatas, una vacuna candidata de subunidades tetravalente recombinante contra el dengue (V180) y una vacuna tetravalente A30 con virus vivos atenuada contra el dengue (A30 LAV) utilizando pautas diferentes. La candidata V180 tetravalente comprendía glucoproteínas de la envoltura truncadas (DEN-80E) de cada uno de los 4 serotipos del virus del dengue (virus del dengue (DENV) 1, DENV2, DENV3 y DENV4). El L<a>V tetravalente A30 comprendía virus del dengue vivos atenuados de los tipos de dengue 1-4 (rDENI - rDEN1A30-1545; rDEN2 - rDEN2/4 A30(ME)-1495,7163; rDEN3 - rDEN3A30/31-7164; y rDEN4 - rDEN4 A 30-7132,7163,8308).
En este estudio, se utilizaron macacos de la India adultos sanos, de cualquier sexo (n=4/grupo), con un peso superior a 3 kg y que fueran negativos para anticuerpos contra flavivirus (DENV 1,2, 3 y 4, y virus del Nilo Occidental) mediante ELISA. Las vacunas se administraron como se describe en la tabla 2. Para el estudio, el grupo 1 recibió la vacuna de A30 LAV por vía subcutánea (s.c.) a las 0 y 16 semanas. El grupo 2 recibió sensibilización y refuerzo convencionales en los que se administró la vacuna A30 LAV a las 0 semanas seguida de V180 formulada con Alhydrogel® (Biosector Brenntag, Frederikssund, DK) a las 16 semanas. El grupo 3 recibió coformulaciones de la vacuna A30 LAV y V180/Alhydrogel® a las 0 y 16 semanas (sensibilización y refuerzo con coformulación). Todas las vacunas se administraron a 0,5 mi por dosis. Después de la vacunación, se observó diariamente a los animales para detectar cualquier cambio en el lugar de inoculación u otros cambios en la actividad o Ios hábitos alimentarios que pudieran indicar una reacción adversa a la vacuna.
Tabla 2 Pauta formulaciones utilizadas en el estudio de inmuno enicidad de macacos de la India
continuación
La actividad neutralizante del virus se determinó cada 4 semanas hasta la semana 20 del estudio utilizando el ensayo de microneutralización basado en LiCor. Para el ensayo de LiCor, se sembraron células Vero durante una noche en 100 |jl de medio 199 al 10 % en placas de cultivo tisular de 96 pocilios de fondo plano a 1,5* 104 células/pocillo. En placas separadas de 96 pocilios, las muestras de suero se diluyeron en serie 2 veces por duplicado para 8 diluciones comenzando en 1:10. Para las muestras que no lograron alcanzar el punto final de titulación, la muestra se volvió a analizar comenzando con una dilución más alta. El suero se incubó con un volumen igual de virus diluido a 50 ufp/pocillo. Todas las diluciones del ensayo se realizaron en medio 199 al 2 %. La mezcla se incubó a 37 °C CO2 al 5 % durante 1 hora. Después de la neutralización, toda la mezcla se añadió a las células Vero sembradas y se incubó durante 4 días a 37 °C CO2 al 5 %. Después de la eliminación de los medios de cultivo, las células se fijaron con formaldehído al 3,7 % en PBS durante 30 minutos. Las placas se lavaron 2 veces durante 5 minutos cada una con 200 j l de Titon X-100/PBS al 0,1 %. Las placas se tiñeron con 50 ul de anticuerpo 4G2 a 2,8 jg/ml. A continuación, se añadió una IgG biotinilada de caballo anti-ratón a 7,5 jg/m l seguido de un cóctel de estreptavidina IRDye® 800CW (1:1000) y sonda fluorescente DRAQ5 (1:1000o). Las placas se mantuvieron en la oscuridad para este desarrollo final. Los anticuerpos y los reactivos se diluyeron en tampón Odyssey Block complementado con Tween-20 al 0,2 %. Las placas se lavaron 3 veces entre los intercambios de anticuerpos usando Tween-20/PBS al 0,1 %. Las etapas de incubación se realizaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las etapas de lavado y distribución se automatizaron utilizando el sistema lavaplacas BioTek® EL406 (Winooski, VT). Las placas se secaron al aire y se exploraron con un sistema de captura de imágenes en el infrarrojo Odyssey® Sa (Li-Cor Biosciences). Los datos brutos se importaron a una hoja de cálculo de procesamiento de Excel. Se promediaron los pocilios duplicados y los puntos finales de títulos de neutralización en suero se definieron como el recíproco de la dilución de suero más alta que reduzca la relación de intensidad integrada de fluorescencia de 800 nm/700 nm > 50 % en comparación con el control de virus incluido en cada placa de ensayo. Se utilizó Prisma® (GraphPad Software, Inc.) para trazar los resultados. Todas las muestras se prepararon comenzando con una dilución 1:1o. Si una muestra no lograba neutralizarse con esta dilución, se asignaba un título de 1:5.
La media geométrica de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos para la semana 4 (4 semanas después de la dosis 1) se resumen en la figura 3. En este punto temporal, se detectaron respuestas de anticuerpos neutralizantes del virus en todos los animales inmunizados excepto en un animal que no respondió al DENV 4 en el grupo 2. Las conclusiones clave de los resultados de la semana 4 son:
• Las respuestas de neutralización medidas en el grupo de coformulación (grupos 3) cuatro semanas después de la dosis 1 fueron comparables a las inducidas cuando se administró la vacuna A30 LATV sola (grupos 1 y 2). Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 LATV con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta a la primera dosis de la vacuna de virus vivos atenuada.
La media geométrica de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos para la semana 20 (4 semanas después de la dosis 2) se resumen en la figura 4. En este punto temporal, se detectaron respuestas de anticuerpos neutralizantes del virus en todos los animales inmunizados. Las conclusiones clave de los resultados de la semana 20 son:
• Tanto el enfoque de sensibilización y refuerzo convencional (Grupo 2) como el de sensibilización y refuerzo con coformulación (grupo 3) indujeron títulos de neutralización superiores para los cuatro tipos de DENV en comparación con la vacuna A30 LATV (grupo 1). Los títulos oscilaron entre 1,7 y 6,7 veces mayores según el tipo de DENV.
• Las respuestas de neutralización medidas en el grupo de coformulación (grupos 3) cuatro semanas después de la dosis 2 fueron equivalentes, si no mejores que las inducidas en los grupos que recibieron la pauta de sensibilización-refuerzo convencional (grupo 2). Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 LAT<v>con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta al refuerzo de subunidades.
La media geométrica longitudinal de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos se muestra en la figura 5. En general, los datos demuestran que el régimen de sensibilización y refuerzo de coformulación induce respuestas que son comparables al enfoque de sensibilización y refuerzo convencional y que las respuestas son superiores al A30 LATV administrado como vacuna homóloga.
EJEMPLO 4
Evaluación de estrategias de vacunación dependientes de la dosis de sensibilización-refuerzo contra el dengue enMacaca mulatta
El objetivo de este estudio no acorde con BPL realizado en macacos de la India fue evaluar la estrategia de vacunación de sensibilización-refuerzo con coformulación utilizando diferentes dosis de coformulación de vacuna de subunidades y vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue. Para el estudio, se utilizaron las dos vacunas candidatas descritas en el ejemplo 3.
En este estudio, se utilizaron macacos de la India adultos sanos, de cualquier sexo (n=5/grupo), con un peso superior a 4 kg y que fueran negativos para anticuerpos contra flavivirus (DENV 1, 2, 3 y 4, y virus del Nilo Occidental) mediante ELISA. Las vacunas se administraron como se describe en la tabla 3. Para el estudio, e grupo 1 recibió la vacuna de A30 LAV (10e5 ufp cada LAV) por vía subcutánea (SC) a las 0 y 24 semanas. El grupo 2 recibió coformulaciones de la vacuna A30<l>A<v>(10e5ufp cada LAV) y V180 (10, 10, 10, 20 |jg cada 80E)/Alhydrogel® (Brenntag Biosector, Frederikssund, DK) a las 0 y 24 semanas (sensibilización y refuerzo con coformulación). El grupo 3 recibió coformulaciones de la vacuna de A30 LAV (10e5 ufp cada LAV) y V180 (3, 3, 3, 6 jg cada 80E)/Alhydrogel® a las 0 y 24 semanas (sensibilización y refuerzo con coformulación). El grupo 4 recibió coformulaciones de la vacuna de A30 LAV (10e3 ufp cada LAV) y V l80 (10, 10, 10, 20 jg cada 80E)/Alhydrogel® a las 0 y 24 semanas (sensibilización y refuerzo con coformulación). Todas las vacunas se administraron a 0,5 ml por dosis. Después de la vacunación, se observó diariamente a los animales para detectar cualquier cambio en el lugar de inoculación u otros cambios en la actividad o Ios hábitos alimentarios que pudieran indicar una reacción adversa a la vacuna.
Tabla 3. Pauta formulaciones utilizadas en el estudio de inmuno enicidad de macacos de la India
continuación
La actividad neutralizante del virus se determinó cada 4 semanas hasta la semana 28 del estudio utilizando el ensayo de microneutralización basado en LiCor como se ha descrito anteriormente en el ejemplo 3.
La media geométrica de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos para la semana 4 (4 semanas después de la dosis 1) se resumen en la figura 6. En este punto temporal, se detectaron respuestas de anticuerpos neutralizantes del virus en todos los animales inmunizados excepto en un animal del grupo 1 y un animal del grupo 4 que no respondieron al DENV 1. Las conclusiones clave de los resultados de la semana 4 son:
• Las respuestas de neutralización medidas en el grupo de coformulación (grupos 2, 3 y 4) cuatro semanas después de la dosis 1 fueron comparables a las inducidas cuando se administró la vacuna A30 LATV sola (grupo 1). Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 LATV con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta a la primera dosis de la vacuna de virus vivos atenuada.
• Las respuestas de neutralización en los grupos de coformulación que recibieron una dosis alta (10e5 ufp de cada virus) de A30 LATV (grupo 2) o una dosis baja (10e3 ufp de cada virus) de A30 LATV (grupo 4) fueron comparables. Esto indica que una dosis más baja de la vacuna A30 LATV no se ve afectada negativamente por la coformulación con la vacuna de subunidades V180 y Alhydrogel®.
La media geométrica de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos para la semana 28 (4 semanas después de la dosis 2) se resumen en la figura 7. En este punto temporal, se detectaron respuestas de anticuerpos neutralizantes del virus en todos los animales inmunizados. Las conclusiones clave de los resultados de la semana 28 son:
• Todos los grupos de coformulación (grupos 2, 3 y 4) demostraron un fuerte refuerzo de los títulos de neutralización de LiCor cuatro semanas después de la dosis 2 que fueron superiores a los observados en el grupo de A30 LATV solo (grupo 2). Esto indica que la coformulación de la vacuna A30 LATV con la vacuna de subunidades V180 y el adyuvante Alhydrogel® no afecta negativamente a la respuesta al refuerzo de subunidades.
• La coformulación que contenía la dosis baja de V180 (grupo 3) reforzó tan bien como la coformulación que contenía la dosis alta de V180 (grupo 2).
• La coformulación que contenía la dosis baja (10e3 ufp de cada virus) de A30 LATV (grupo 4) reforzó tan bien como la coformulación que contenía la dosis alta (10e5 ufp de cada virus) de A30 LATV (grupo 2).
La media geométrica longitudinal de los títulos de neutralización para DENV1, DENV2, DENV3 y DENV4 para todos los grupos se muestra en la figura 8. En general, los datos demuestran que el régimen de sensibilización y refuerzo de coformulación induce respuestas que son comparables al enfoque de sensibilización y refuerzo convencional y que las respuestas son superiores al A30 LATV administrado como vacuna homóloga.

Claims (14)

r e iv in d ic a c io n e s
1. Una composición de vacuna contra el virus del dengue que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de: (a) una vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue que comprende al menos un virus vivo atenuado del dengue (LAV), en donde el LAV comprende un genoma vírico que contiene una supresión de aproximadamente 30 nucleótidos correspondientes a la estructura de tallo-bucle de TL-2 de la región 3' no traducida (UTR), en donde el LAV es inmunógeno contra el serotipo 3 del dengue, en donde el genoma vírico del LAV contiene además una supresión de nucleótidos en posición 5' con respecto a la supresión A30 correspondiente a la estructura TL-3 de la UTR 3'; y
(b) una vacuna no replicante contra el dengue.
2. La composición de la reivindicación 1, en donde la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna recombinante de subunidades contra el dengue o una vacuna inactivada contra el dengue.
3. La composición de la reivindicación 1<o>de la reivindicación 2, en donde la vacuna no replicante contra el dengue es una vacuna tetravalente de subunidades contra el dengue que comprende proteínas E del dengue, o fragmentos de las mismas, del virus del dengue de tipo 1 (DEN1), virus del dengue de tipo 2 (DEN2), virus del dengue de tipo 3 (DEN3) y virus del dengue de tipo 4 (DEN4).
4. La composición de la reivindicación 3, en donde cada una de las proteínas E constituye aproximadamente el 80 % de la longitud de la E natural de DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4, comenzando desde el resto de aminoácido 1 en su extremo N.
5. La composición de la reivindicación 3 o de la reivindicación 4, que comprende además un adyuvante.
6. La composición de la reivindicación 5, en donde el adyuvante es un adyuvante de sal de aluminio.
7. La composición de la reivindicación 6, en donde la cantidad de aluminio elemental en la composición es de 50 |jg a 1,25 mg; o es de 200 jg a 850 jg .
8. La composición de la reivindicación 5, en donde el adyuvante es un adyuvante basado en saponina.
9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 3-7, en donde la cantidad de cada proteína E en la composición es de 0,5 jg a 500 jg ;<o>es de 1,0 jg a 100 jg .
10. La composición de la reivindicación 9, en donde la cantidad de proteína E de DEN4 es de aproximadamente 1,5 a aproximadamente 2,5 veces la cantidad de proteínas E de DEN1, D<e>N2 y DEN3.
11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 9-10, en donde cada proteína E se produce de forma recombinante y se expresa en células hospedadoras de insecto.
12. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es tetravalente.
13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde la potencia de la vacuna con virus vivos atenuada contra el dengue es de 10 a 1<x>107 unidades formadoras de placas (U<f>P)<o>es de 1<x>103 a 1*10<s>UFP.
14. La composición de vacuna contra el virus del dengue de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 para<su uso>en el tratamiento o la profilaxis de enfermedades asociadas con la infección por dengue; o la inducción de una respuesta inmunitaria contra el virus del dengue en un paciente.
ES15874179T 2014-12-22 2015-12-18 Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas Active ES2981476T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462095331P 2014-12-22 2014-12-22
PCT/US2015/066549 WO2016106107A2 (en) 2014-12-22 2015-12-18 Dengue virus vaccine compositions and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2981476T3 true ES2981476T3 (es) 2024-10-09

Family

ID=56151628

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15874179T Active ES2981476T3 (es) 2014-12-22 2015-12-18 Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas

Country Status (16)

Country Link
US (1) US10449243B2 (es)
EP (1) EP3236997B1 (es)
JP (1) JP2018502080A (es)
CN (1) CN106999568A (es)
AU (1) AU2015369875A1 (es)
BR (1) BR112017013270A2 (es)
CL (1) CL2017001595A1 (es)
CO (1) CO2017005830A2 (es)
CR (1) CR20170280A (es)
ES (1) ES2981476T3 (es)
MX (1) MX383329B (es)
MY (1) MY192543A (es)
NI (1) NI201700080A (es)
PH (1) PH12017501165B1 (es)
SG (1) SG11201704942QA (es)
WO (1) WO2016106107A2 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170143817A1 (en) * 2015-11-20 2017-05-25 Oregon Health & Science University Dengue virus vaccine
TWI625393B (zh) * 2016-11-15 2018-06-01 國立清華大學 對抗複數種登革熱病毒血清型之疫苗套組及其製備方法與用途
WO2019112921A1 (en) 2017-12-07 2019-06-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of dengue virus vaccine compositions
WO2020236973A1 (en) * 2019-05-20 2020-11-26 Soligenix, Inc. Compositions and methods of manufacturing trivalent filovirus vaccines
WO2025027616A1 (en) * 2023-08-01 2025-02-06 Serum Institute Of India Private Limited Freeze-dried viral vaccine compositions and method of manufacturing thereof

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6184024B1 (en) * 1988-07-14 2001-02-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Chimeric and/or growth-restricted flaviviruses
US6190859B1 (en) 1995-04-17 2001-02-20 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Method and kit for detection of dengue virus
US6254873B1 (en) 1995-04-17 2001-07-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Inactivated dengue virus vaccine
WO1996040933A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Infectious dengue 2 virus pdk-53 as quadravalent vaccine
EP0836090A1 (en) 1996-10-12 1998-04-15 Evotec BioSystems GmbH Method of analysis of samples by determination of the distribution of specific brightnesses of particles
EP0977587B1 (en) 1997-02-28 2005-06-15 Acambis Inc. Chimeric flavivirus vaccines
WO1999006068A2 (en) 1997-07-31 1999-02-11 Hawaii Biotechnology Group, Inc. Recombinant dimeric envelope vaccine against flaviviral infection
AU774045B2 (en) 1998-09-02 2004-06-17 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Dengue viruses that are replication defective in mosquitos for use as vaccines
EP1165127B1 (en) 1999-03-26 2008-12-31 Walter Reed Army Institute of Research Multivalent dengue virus vaccine
US6537557B1 (en) 1999-03-26 2003-03-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Attenuated dengue-4 virus vaccine
WO2000057909A2 (en) 1999-03-26 2000-10-05 Walter Reed Army Institute Of Research Attenuated dengue-2 virus vaccine
JP2002540169A (ja) 1999-03-26 2002-11-26 ウォルター リード アーミー インスティテュート オブ リサーチ 弱毒化デング熱１型ウイルスワクチン
US6432411B1 (en) 1999-07-13 2002-08-13 Hawaii Biotechnology Group Recombinant envelope vaccine against flavivirus infection
CA2966716C (en) 2001-05-22 2019-11-26 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Cretary, Department Of Health And Human Services Development of mutations useful for attenuating dengue viruses and chimeric dengue viruses
KR101074175B1 (ko) 2002-01-15 2011-10-14 사노피 파스테르 바이오로직스 씨오 플라비바이러스 백신
ATE481982T1 (de) 2002-05-03 2010-10-15 Us Gov Health & Human Serv Dengue-vakzine mit einer gemeinsamen 30 nukleotid-deletion im 3'-utr der dengue-typen 1 und 2.
US20040259224A1 (en) 2002-05-31 2004-12-23 Farshad Guirakhoo Tetravalent Dengue vaccines
US7189403B2 (en) 2003-06-30 2007-03-13 Institut Pasteur Attenuated flavivirus strains containing a mutated M-ectodomain and their applications
CA2549173A1 (en) 2003-12-08 2005-07-07 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties by small oligonucleotide-based compounds
SG156666A1 (en) 2004-10-20 2009-11-26 Acambis Inc Vaccines against japanese encephalitis virus and west nile virus
CA2611954C (en) 2005-06-17 2014-01-28 Sanofi Pasteur Dengue serotype 2 attenuated strain
CN101238144B (zh) 2005-06-17 2012-09-05 赛诺菲巴斯德有限公司 登革血清型1减毒株
CA2612047C (en) 2005-06-24 2015-05-12 Intervet International B.V. Inactivated chimeric vaccines and related methods of use
CA2616026A1 (en) 2005-07-22 2007-02-08 Research Development Foundation Attenuated strains of flaviviruses , and uses thereof
US7470674B2 (en) 2005-11-07 2008-12-30 Idera Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds comprising modified immunostimulatory dinucleotides
AR061197A1 (es) 2006-06-07 2008-08-13 Sanofi Pasteur Cepas del virus 3 del dengue vivas atenuadas
PL2589602T3 (pl) * 2006-08-15 2016-11-30 Rozwinięcie komponentów szczepionki przeciwko wirusowi dengi
FR2906724B1 (fr) 2006-10-04 2009-03-20 Sanofi Pasteur Sa Methode d'immunisation contre les 4 serotypes de la dengue.
ES2517615T3 (es) 2006-11-09 2014-11-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Inducción de una respuesta inmunitaria frente al virus del dengue usando un enfoque de sensibilización-refuerzo
US8440202B2 (en) 2006-11-09 2013-05-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Induction of an immune response against dengue virus using the prime-boost approach
BRPI0904020B8 (pt) * 2009-10-01 2021-05-25 Fundacao Oswaldo Cruz composição vacinal contra o vírus da dengue, e, kit
AU2011367817B2 (en) * 2010-10-29 2015-05-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Recombinant subunit dengue virus vaccine
WO2012065105A2 (en) * 2010-11-12 2012-05-18 Thomas Monath Chimeric flavivirus vaccines
AU2013295016A1 (en) * 2012-07-24 2015-01-29 Sanofi Pasteur Vaccine compositions for prevention against dengue virus infection
JP2016523251A (ja) * 2013-06-21 2016-08-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． デングウイルスワクチン組成物およびその使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3236997A4 (en) 2018-05-30
MX2017008342A (es) 2017-10-24
US10449243B2 (en) 2019-10-22
BR112017013270A2 (pt) 2018-03-06
MY192543A (en) 2022-08-26
EP3236997A2 (en) 2017-11-01
CR20170280A (es) 2017-08-21
WO2016106107A3 (en) 2016-08-18
NI201700080A (es) 2017-07-18
US20170360917A1 (en) 2017-12-21
PH12017501165B1 (en) 2023-02-22
CL2017001595A1 (es) 2018-01-26
MX383329B (es) 2025-03-13
WO2016106107A2 (en) 2016-06-30
JP2018502080A (ja) 2018-01-25
AU2015369875A1 (en) 2017-06-15
EP3236997B1 (en) 2024-05-29
SG11201704942QA (en) 2017-07-28
PH12017501165A1 (en) 2017-12-11
CO2017005830A2 (es) 2017-08-31
CN106999568A (zh) 2017-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12208135B2 (en) Formulations of dengue virus vaccine compositions
US10137187B2 (en) Recombinant subunit dengue virus vaccine
JP5227172B2 (ja) デングウイルス感染に対するワクチン接種
US9861692B2 (en) Dengue virus vaccine compositions and methods of use thereof
ES2981476T3 (es) Composiciones de vacunas contra el virus del dengue y métodos de uso de las mismas
US20120141520A1 (en) Recombinant subunit west nile virus vaccine for protection of human subjects
JP2019520090A (ja) 弱毒変異型ジカウイルスを含むワクチン組成物
EA041699B1 (ru) Составы вакцинных композиций от вируса денге
HK1173657A1 (zh) 免疫组合物和方法