ES2983421T3 - Oligonucleótidos moduladores de ARN con características mejoradas para el tratamiento de trastornos neuromusculares - Google Patents

Oligonucleótidos moduladores de ARN con características mejoradas para el tratamiento de trastornos neuromusculares Download PDF

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Abstract

La presente invención proporciona un oligonucleótido mejorado y su uso para tratar, mejorar, prevenir, retrasar y/o tratar un trastorno neuromuscular o neurodegenerativo genético asociado a la inestabilidad de la repetición del elemento cis humano. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Oligonucleótidos moduladores de ARN con características mejoradas para el tratamiento de trastornos neuromusculares
Campo
[0001] La invención se refiere al campo de la genética humana, más específicamente a los trastornos neuromusculares. La invención se refiere, en particular, al uso de oligonucleótidos antisentido (OAS) con características mejoradas que mejoran la aplicabilidad clínica, como se define adicionalmente en el presente documento.
Antecedentes de la invención
[0002] Las enfermedades neuromusculares se caracterizan por un funcionamiento deficiente de los músculos debido a una patología muscular o nerviosa (miopatías y neuropatías). Las neuropatías se caracterizan por neurodegeneración y alteración del control nervioso que provoca problemas de movimiento, espasticidad o parálisis. Los ejemplos incluyen la enfermedad de Huntington (EH), varios tipos de ataxia espinocerebelosa (AEC), ataxia de Friedreich (AF), esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y demencia frontotemporal (DFT). Un subconjunto de neuropatías es causado por una inestabilidad repetida del elemento cis. Por ejemplo, la EH es causada por una expansión repetida del triplete (CAG)n en el exón 1 del gen HTT. La expansión de estas repeticiones da como resultado la expansión de un tramo de glutamina en el extremo N-terminal de la proteína huntingtina citoplásmica de 348 kDa. La huntingtina tiene una secuencia característica de 6 a 29 residuos de aminoácidos de glutamina en su forma normal; donde la huntingtina mutada que provoca la enfermedad tiene más de 38 residuos. La expresión continua de moléculas mutantes de huntingtina en células neuronales da como resultado la formación de grandes depósitos de proteínas que finalmente dan lugar a la muerte celular, especialmente en los lóbulos frontales y los ganglios basales (principalmente en el núcleo caudado). La gravedad de la enfermedad es generalmente proporcional al número de residuos adicionales. Los OAS que se dirigen específicamente a las repeticiones CAG expandidas (tales como PS57 (CUG)<z>como un ARN 2'-0-metil fosforotioato; SEQ ID N.°: 1 Everset al.)se pueden aplicar para reducir eficazmente el transcrito de huntingtina mutante y los niveles de proteína (tóxica) en células derivadas de paciente con EH. Para el tratamiento de las neuropatías, los OAS administrados por vía sistémica deben atravesar la barrera hematoencefálica. Por lo tanto, existe una necesidad de optimización de la oligoquímica que permita y/o muestre una administración cerebral mejorada.
[0003] Las miopatías incluyen distrofias musculares genéticas que se caracterizan por debilidad progresiva y degeneración del músculo esquelético, cardíaco y/o liso. Los ejemplos de miopatías son la distrofia muscular de Duchenne (DMD), la distrofia miotónica tipo 1 (DM1) y la distrofia miotónica tipo 2 (DM2). DM1 Y DM2 también son causadas por inestabilidad de repetición del elemento cis; DM1 por una expansión repetida del trinucleótido (CTG)<n>en la región 3' no traducida del exón 15 en el gen DMPK y DM2 por una expansión repetida del tetranucleótido (CCTG)<n>en el gen DM2/ZNF9. También aquí, se ha demostrado que los OAS que se dirigen específicamente a las repeticiones expandidas, como PS58, (CAG)<z>, un ARN 2'-O-metil fosforotioato para DM1 (Mulderset al.),inducen eficazmente la degradación específica de los transcritos repetidos expandidos (tóxicos). A diferencia de la DMD, en la que el defecto genético se asocia con una mayor permeabilidad de las membranas de las fibras musculares para compuestos pequeños, como los OAS, para la mayoría de las otras miopatías es esencial una mayor distribución y absorción de los OAS en el tejido muscular para obtener un efecto terapéutico. Por lo tanto, también aquí existe la necesidad de optimizar la oligoquímica que permita y/o muestre una administración muscular mejorada.
[0004] Las características particulares de una química elegida afectan al menos a la administración de un OAS al transcrito diana: vía de administración, bioestabilidad, biodistribución, distribución de intratejido y captación y tráfico celular. Además, se concibe una optimización adicional de la química de los oligonucleótidos para mejorar la afinidad de unión y la estabilidad, mejorar la actividad, mejorar la seguridad y/o reducir el costo de los productos al reducir la longitud o mejorar los procedimientos de síntesis y/o purificación. Múltiples modificaciones químicas están disponibles de forma general y/o comercial para la comunidad investigadora (como ARN 2'-O-metilo y pirimidinas 5-sustituidas y 2,6-diaminopurinas), mientras que la mayoría de los demás todavía presentan un importante esfuerzo sintético para obtenerlos. Se han obtenido resultados especialmente alentadores preliminares utilizando ARN 2'-0-metil fosforotioato que contiene modificaciones en las bases de pirimidina y purina como se identifican en el presente documento. El documento WO 2009/099326 A1 describe oligonucleótidos de ARN 2'-O-metilo/fosforotioato uniformemente modificados con la secuencia (XYG)n, que son adecuados para el tratamiento de la enfermedad de Huntington.
[0005] En conclusión, para mejorar la aplicabilidad terapéutica de los OAS para el tratamiento de trastornos genéticos asociados a la inestabilidad de repetición del elemento cis humano, como se ejemplifica en el presente documento, existe la necesidad de OAS con características mejoradas adicionales.
Descripción
Oligonucleótido
[0006] En un primer aspecto, la divulgación proporciona un oligonucleótido que comprende residuos de nucleótidos de ARN 2'-O-metilo, que tiene un esqueleto, donde al menos un resto fosfato es reemplazado por un resto fosforotioato, y que comprende una o más bases de 5-metilpirimidina y/o una o más bases de 2,6-diaminopurina; o un oligonucleótido que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-O-metilo y que tiene un esqueleto donde todos los restos fosfato son reemplazados por restos fosforotioato, y que comprende una o más bases de 5-metilpirimidina y/o una o más bases de 2,6-diaminopurina, para su uso como medicamento para tratar trastornos genéticos asociados a la inestabilidad de repetición del elemento cis humano. La invención proporciona un oligonucleótido que consta de residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo, tal y como se define en la reivindicación 1, es decir, un oligonucleótido que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo, que tiene un esqueleto, donde todos los restos fosfato son reemplazados por restos fosforotioato, y que comprende una o más 5-metilpirimidina, donde dicho oligonucleótido es capaz de hibridarse con una unidad de nucleótidos repetitiva (CAG)n, donde dicho oligonucleótido comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)m, donde m es un número entero de 4 a 12, donde cada X es 5-metilcitosina y/o cada Y es 5-metiluracilo, para su uso en el tratamiento, el retraso, y/o la prevención de la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelar (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) o la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA).
[0007] En este contexto, "esqueleto" se utiliza para identificar la cadena de anillos de ribosa alternos y enlaces internucleósidos, a los que están unidas las nucleobases. El término "enlace" se usa para la conexión entre dos unidades de ribosa (es decir, "enlace internucleósido"), que generalmente es un resto fosfato. Por lo tanto, un oligonucleótido que tiene 10 nucleótidos puede contener 9 enlaces, que unen las 10 unidades de ribosa entre sí. Adicionalmente, puede haber uno o más últimos enlace(s) presentes en uno o ambos lados del oligonucleótido, que solo está conectado a un nucleótido. Los términos "enlace" y "enlace internucleósido " también pretenden indicar dicho enlace colgante. Los enlaces en el esqueleto del oligonucleótido según la invención consisten en un resto fosforotioato, que une dos unidades de ribosa. Por lo tanto, al menos uno de los restos fosfodiéster 3' a 5' presentes en el ARN es reemplazado por un resto fosforotioato.
[0008] Dentro del contexto de la divulgación y la invención, "un/a" en cada una de las siguientes expresiones significa "al menos un/a": un residuo de nucleótido de ARN 2'-0-metilo, un residuo de ARN 2'-0-metilo, un resto fosforotioato, un residuo de ARN 2'-0-metil fosforotioato, una base de 5-metilpirimidina, una base de 5-metilcitosina, una base de 5-metiluracilo, una base de timina, una base de 2,6-diaminopurina.
[0009] Preferiblemente, el oligonucleótido según la invención es un oligonucleótido con menos de 37 nucleótidos. Dicho oligonucleótido puede tener 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Dicho oligonucleótido también puede identificarse como un oligonucleótido que tiene de 12 a 36 nucleótidos.
[0010] En consecuencia, un oligonucleótido de la divulgación, que comprende un residuo de nucleótido de ARN 2'-0-metilo que tiene un esqueleto, donde al menos un resto fosfato es reemplazado por un resto fosforotioato, comprende menos de 37 nucleótidos (es decir, comprende 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos) y una base de 5-metilpirimidina y/o una base de 2,6-diaminopurina.
[0011] En consecuencia, un oligonucleótido de la divulgación, que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo y que tiene un esqueleto, donde todos los restos fosfato son reemplazados por fosforotioato, y comprende menos de 37 nucleótidos (es decir, comprende 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos) y una de base 5-metilpirimidina y/o una base de 2,6-diaminopurina.
[0012] En un aspecto preferido, el oligonucleótido de la divulgación comprende un residuo de nucleótido de ARN 2'-0-metil fosforotioato, o consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metil fosforotioato. Dicho oligonucleótido comprende un residuo de ARN 2'-0-metilo, que está conectado mediante un enlace fosforotioato al siguiente nucleótido en la secuencia. Este siguiente nucleótido puede ser, pero no necesariamente, otro residuo de nucleótido de ARN 2'-0-metil fosforotioato. Alternativamente, un oligonucleótido según la invención (como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto) consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2-0-metil fosforotioato, donde todos los nucleótidos comprenden un resto 2'-0-metilo y un resto fosforotioato. Preferiblemente, dicho oligonucleótido consta de residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metil fosforotioato. Dicha química es conocida por el experto en la materia. A lo largo de la solicitud, un oligonucleótido que comprende un residuo de ARN 2'-0-metilo y un enlace fosforotioato se puede reemplazar por un oligonucleótido que comprende un residuo de nucleótido de ARN 2'-0-metil fosforotioato o un oligonucleótido que comprende un residuo de ARN 2'-0-metil fosforotioato. A lo largo de la solicitud, un oligonucleótido que consta de residuos de ARN 2'-0-metilo enlazados o conectados a través de enlaces fosforotioato o un oligonucleótido que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metil fosforotioato se puede reemplazar por un oligonucleótido que consta de ARN 2'-0-metil fosforotioato.
[0013] Además, un oligonucleótido de la invención comprende al menos una modificación de base que aumenta la afinidad de unión a las hebras diana, aumenta la temperatura de fusión del dúplex resultante de dicho oligonucleótido con su diana, y/o disminuye los efectos inmunoestimulantes, y/o aumenta la bioestabilidad, y/o mejora la biodistribución y/o la distribución intratisular, y/o la captación y el tráfico celular. En un aspecto, un oligonucleótido de la divulgación comprende una base de 5-metilpirimidina y/o una base de 2,6-diaminopurina. Una base de 5-metilpirimidina se selecciona de entre una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo y/o una timina, donde la timina es idéntica al 5-metiluracilo. Cuando un oligonucleótido de la divulgación tiene dos o más de dichas modificaciones de bases, dichas modificaciones de bases pueden ser idénticas, por ejemplo, todas estas bases modificadas en el oligonucleótido son 5-metilcitosina, o dichas modificaciones de bases pueden ser combinaciones de diferentes modificaciones de bases, por ejemplo, el oligonucleótido puede tener una o más 5-metilcitosinas y uno o más 5-metiluracilos.
[0014] En una forma de realización preferida, un oligonucleótido de la invención (es decir, como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto) o la divulgación (es decir, un oligonucleótido que comprende residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo, que tiene un esqueleto, donde al menos un resto fosfato es reemplazado por un resto fosforotioato, y que comprende una o más bases de 5-metilpirimidina y/o una o más bases de 2,6-diaminopurina; o un oligonucleótido que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo y que tiene un esqueleto, donde todos los restos fosfato son reemplazados por restos fosforotioato, y que comprende una o más bases de 5-metilpirimidina y/o una o más bases de 2,6-diaminopurina) es tal que no comprende un nucleótido de 2'-desoxi 2'-fluoro (es decir, 2'-desoxi 2'-fluoro-adenosina, - guanosina, - uridina y/o -citidina). Se ha demostrado que dicho oligonucleótido que comprende un nucleótido de 2'-fluoro (2'-F) es capaz de reclutar el factor de unión potenciador de interleucina 2 y 3 (ILF2/3) y, por lo tanto, es capaz de inducir la emisión de exones en el pre-ARNm diana (Rigo F,et al.,WO2011/097614). En la presente invención, el oligonucleótido usado preferiblemente no recluta dichos factores y/o el oligonucleótido de la invención no forma heterodúplex con ARN que sean reconocidos específicamente por el ILF2/3. Se supone que el mecanismo de acción del oligonucleótido de la presente invención es diferente del uno de un oligonucleótido con un nucleótido de 2'-F: se espera que el oligonucleótido de la invención induce principalmente la degradación específica de los transcritos repetidos expandidos (tóxicos).
[0015] "Timina" y "5-metiluracilo" pueden intercambiarse en todo el documento. Por analogía, la 2,6-diaminopurina es idéntica a la 2-aminoadenina y estos términos pueden intercambiarse en todo el documento.
[0016] El término "modificación de base" o "base modificada", como se identifica en el presente documento, se refiere a la modificación de una base natural en el ARN (es decir, base de pirimidina o purina) o a la síntesis de novo de una base. Esta base sintetizada de novo podría calificarse de "modificada" en comparación con una base existente.
[0017] Un oligonucleótido que comprende una base de 5-metilcitosina y/o una base de 5-metiluracilo y/o una base de 2,6-diaminopurina significa que al menos una de las nucleobases de citosina de dicho oligonucleótido ha sido modificada mediante sustitución del protón en la posición 5 del anillo de pirimidina con un grupo metilo (es decir, una 5-metilcitosina), y/o que al menos una de las nucleobases de uracilo de dicho oligonucleótido ha sido modificada mediante sustitución del protón en la posición 5 del anillo de pirimidina con un grupo metilo (es decir, un 5-metiluracilo), y/o que al menos una de las nucleobases de adenina de dicho oligonucleótido ha sido modificada mediante sustitución del protón en la posición 2 con un grupo amino (es decir, una 2,6-diaminopurina), respectivamente. Dentro de este contexto, la expresión "la sustitución de un protón por un grupo metilo en la posición 5 del anillo de pirimidina" puede sustituirse por la expresión "la sustitución de una pirimidina por una 5-metilpirimidina", donde la pirimidina se refiere únicamente al uracilo, únicamente a la citosina o a ambos. Asimismo, la expresión "la sustitución de un protón por un grupo amino en la posición 2 de la adenina" se puede reemplazar por la expresión "la sustitución de una adenina por una 2,6-diaminopurina". Si dicho oligonucleótido comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más citosinas, uracilos y/o adeninas, de esta manera se han modificado al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más citosinas, uracilos y/o adeninas respectivamente. Preferiblemente, todas las citosinas, todos los uracilos y/o todas las adeninas se han modificado de esta manera o se han reemplazado por 5-metilcitosina, 5-metiluracilo y/o 2,6-diaminopurina, respectivamente. No hace falta decir que la divulgación y la invención solo podrían aplicarse a oligonucleótidos que comprenden al menos una citosina, un uracilo o una adenina, respectivamente, en su secuencia.
[0018] Descubrimos que la presencia de una 5-metilcitosina, un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina en un oligonucleótido de la divulgación tiene un efecto positivo sobre al menos uno de los parámetros o una mejora de al menos unos parámetros de dichos oligonucleótidos. En este contexto, los parámetros pueden incluir: afinidad y/o cinética de unión, actividad silenciadora, bioestabilidad, distribución (intratisular), captación y/o tráfico celular, y/o inmunogenicidad de dicho oligonucleótido, como se explica a continuación.
[0019] La afinidad y la cinética de unión dependen de las propiedades termodinámicas del OAS. Estos están determinados al menos en parte por la temperatura de fusión de dicho oligonucleótido (Tm; calculada con, por ejemplo, las calculadora de propiedades de oligonucleótidos (http://www.unc.edu/~cail/biotool/oligo/index.html o http://eu.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/) para ARN monocatenario utilizando la Tm básica y el modelo vecino más cercano), y/o la energía libre del complejo oligonucleótido-exón diana (usando la estructura de ARN versión 4.5 o ARN mfold versión 3.5). Si aumenta una Tm, la actividad de omisión de exones normalmente aumenta, pero cuando una Tm es demasiado alta, se espera que el OAS se vuelva menos específico de secuencia. Una Tm aceptable y una energía libre dependen de la secuencia del oligonucleótido. Por lo tanto, es difícil dar rangos preferidos para cada uno de estos parámetros.
[0020] Una actividad de un oligonucleótido de la divulgación y la invención es inhibir la formación de una proteína mutante y/o silenciar o reducir o disminuir la cantidad de un transcrito asociado a la enfermedad o causante de la enfermedad o mutante que contiene un número extendido o inestable de repeticiones en una célula de un paciente, en un tejido de un paciente y/o en un paciente, como se explica en adelante en el presente documento. Se espera que un oligonucleótido de la divulgación que comprende o consiste en un ARN 2'-0-metil fosforotioato y una base de 5-metilcitosina y/o un base de 5-metiluracilo y/o una base de 2,6-diaminopurina sea capaz de silenciar o reducir o disminuir la cantidad de dicho transcrito de manera más eficiente que lo haría un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, pero sin ninguna base de 5-metilcitosina, sin ninguna base de 5-metiluracilo y sin ninguna base de 2,6-diaminopurina. Esta diferencia en términos de eficiencia puede ser de al menos 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %. La reducción o disminución se puede evaluar mediante transferencia Northern(Northern Blotting)o RT-PCR (semi)cuantitativa para determinar los niveles de transcripción (preferiblemente como se lleva a cabo en la parte experimental) o mediante transferencia Western(Western blotting)para niveles de proteína. Un oligonucleótido de la invención puede probarse primero en el sistema celular como fibroblastos derivados de pacientes, como se describe en el ejemplo 1.
[0021] La biodistribución y la bioestabilidad se determinan preferiblemente, al menos en parte, mediante un ensayo de ligadura de hibridación validado adaptado de Yuet al.,2002. En una forma de realización, se incuban muestras de plasma o tejido homogeneizado con una sonda de oligonucleótidos de captura específica. Después de la separación, se liga un oligonucleótido marcado con DIG al complejo y se sigue la detección usando una peroxidasa unida a anticuerpo anti-DIG. El análisis farmacocinético no compartimental se realiza usando el paquete desoftwareWINNONLIN (modelo 200, versión 5.2, Pharsight, Mountainview, CA). Los niveles de OAS (ug) por ml de plasma o mg de tejido se monitorean a lo largo del tiempo para evaluar el área bajo la curva (AUC), la concentración máxima (Cmax), el tiempo hasta la concentración máxima (Tmax), la vida media terminal y el tiempo de retardo de absorción (tlag). Dicho ensayo preferido se ha descrito en la parte experimental.
[0022] Los OAS pueden estimular una respuesta inmune innata activando los receptores tipo Toll (TLR), incluidos TLR9 y TLR7 (Krieget al.,1995). La activación de TLR9 se produce generalmente debido a la presencia de secuencias CG no metiladas presentes en oligodesoxinucleótidos (ODN) al imitar el ADN bacteriano que activa el sistema inmunitario innato mediante la liberación de citoquinas mediada por TLR9. Sin embargo, se sugiere que la modificación 2'-0-metilo reduce notablemente dicho posible efecto. Se ha descrito que TLR7 reconoce repeticiones de uracilo en el ARN (Dieboldet al.,2006).
[0023] La activación de TLR9 y TLR7 da como resultado un conjunto de respuestas inmunológicas coordinadas que incluyen inmunidad innata (macrófagos, células dendríticas (CD) y células NK) (Krieget al.,1995; Krieg, 2000). Varias quimioquinas y citoquinas, como IP-10, TNFa, IL-6, MCP-1 e IFNa (Wagner, 1999; Popovicet al.,2006) han estado implicadas en este proceso. Las citoquinas inflamatorias atraen células defensivas adicionales de la sangre, tales como las células T y B. Los niveles de estas citoquinas se pueden investigar mediante pruebasin vitro.En resumen, se incuba sangre entera humana con concentraciones crecientes de OAS, después de lo cual se determinan los niveles de citoquinas mediante kits ELISA estándar disponibles comercialmente. Una disminución de la inmunogenicidad corresponde preferiblemente a una reducción detectable de la concentración de al menos una de las citoquinas mencionadas anteriormente en comparación con la concentración de la citoquina correspondiente en un ensayo en una célula tratada con un oligonucleótido que comprende al menos una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo, y/o una 2,6-diaminopurina en comparación con una célula tratada con un oligonucleótido correspondiente que no tiene 5-metilcitosinas, 5-metiluracilos ni 2,6-diaminopurinas.
[0024] En consecuencia, un oligonucleótido preferido de la divulgación tiene un parámetro mejorado, como una inmunogenicidad aceptable o disminuida y/o una mejor biodistribución y/o una cinética de unión a ARN y/o propiedades termodinámicas aceptables o mejoradas en comparación con un oligonucleótido correspondiente que consta de un ARN 2'-0-metil fosforotioato sin 5-metilcitosina, sin 5-metiluracilo y sin 2,6-diaminopurina. Cada uno de estos parámetros podría evaluarse usando ensayos conocidos por el experto o preferiblemente como se describe en el presente documento.
[0025] A continuación se definen otras químicas y modificaciones del oligonucleótido de la divulgación y la invención (como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto). Estas químicas y modificaciones adicionales pueden estar presentes en combinación con la química ya definida para dicho oligonucleótido, es decir, la presencia de una 5-metilcitosina, un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina, y el oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato.
[0026] Un oligonucleótido preferido de la divulgación comprende o consiste en una molécula de ARN o una molécula de ARN modificada. En una forma de realización preferida, un oligonucleótido es monocatenario. Sin embargo, el experto entenderá que es posible que un oligonucleótido monocatenario pueda formar una estructura bicatenaria interna. Sin embargo, este oligonucleótido todavía se denomina oligonucleótido monocatenario en el contexto de esta invención. Un oligonucleótido monocatenario tiene varias ventajas en comparación con un oligonucleótido de ARNip bicatenario: (i) se espera que su síntesis sea más fácil que la de dos cadenas de ARNip complementario; (ii) existe una gama más amplia de modificaciones químicas posibles para mejorar la absorción en las células, una mejor estabilidad (fisiológica) y disminuir los posibles efectos adversos genéricos; (iii) los ARNpi tienen un mayor potencial de efectos no específicos (incluidos genes no diana) y farmacología exagerada (por ejemplo, menor control posible de la eficacia y selectividad mediante esquema de tratamiento o dosis) y (iv) es menos probable que los ARNpi actúen en el núcleo y no pueden dirigirse contra intrones.
[0027] Además de las modificaciones descritas anteriormente, el oligonucleótido de la divulgación y la invención (como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto) puede comprender modificaciones adicionales, tales como diferentes tipos de residuos de nucleótidos de ácido nucleico o nucleótidos, como se describe a continuación. Se pueden usar diferentes tipos de residuos de nucleótido de ácido nucleico para generar un oligonucleótido de la invención. Dicho oligonucleótido puede tener al menos una modificación del esqueleto (enlace internucleósido y/o modificación de azúcar) y/o al menos una modificación de base en comparación con un oligonucleótido basado en ARN.
[0028] Una modificación de base incluye una versión modificada de las bases naturales de purina y pirimidina (por ejemplo, adenina, uracilo, guanina, citosina, y timina), como hipoxantina (por ejemplo, inosina), ácido orótico, agmatidina, lisidina, pseudouracilo, 2-tiopirimidina (por ejemplo, 2-tiouracilo, 2-tiotimina), G-clamp y sus derivados, 5-pirimidina sustituida (por ejemplo, 5-halouracilo, 5-propiniluracilo, 5-propinilcitosina, 5-aminometiluracilo, 5-hidroximetiluracilo, 5-aminometilcitosina, 5-hidroximetilcitosina, Super T), 7-deazaguanina, 7-deazaadenina, 7-aza-2,6-diaminopurina, 8-aza-7-deazaguanina, 8-aza-7-deazaadenina, 8-aza-7-deaza-2,6-diaminopurina, Super G, Super A, y N4-etilcitosina, o derivados de las mismas; W2-ciclopentilguanina (cPent-G), W2-ciclopentil-2-aminopurina (cPent-AP), y W2-propil-2-aminopurina (Pr-AP), o derivados de las mismas; y bases degeneradas o universales, como 2,6-difluorotolueno o bases ausentes como sitios abásicos (por ejemplo, 1-desoxirribosa, 1,2-didesoxirribosa, 1-desoxi-2-O-metil ribosa; o derivados de pirrolidina en los que el oxígeno del anillo ha sido reemplazado por nitrógeno (azaribosa)). Se pueden encontrar ejemplos de derivados de Super A, Super G y Super T en la patente de EE. UU. 6,683,173 (Epoch Biosciences). Se demostró que cPent-G, cPent-AP y Pr-AP reducen los efectos inmunoestimulantes cuando se incorporan en ARNip (Peacock H.et al.).
[0029] En una forma de realización, un oligonucleótido de la divulgación y la invención comprende un sitio abásico o un monómero abásico. Dentro de este contexto, dicho monómero puede denominarse sitio abásico o un monómero abásico. Un monómero abásico o sitio abásico es un residuo de nucleótido o bloque de construcción que carece de una nucleobase en comparación con un residuo de nucleótido correspondiente que comprende una nucleobase. Por lo tanto, un monómero abásico es una parte de bloque de construcción de un oligonucleótido pero que carece de una nucleobase. Dicho monómero abásico puede estar presente o enlazado o unido o conjugado a un extremo libre de un oligonucleótido. En una forma de realización más preferida, un oligonucleótido comprende 1-10 o más monómeros abásicos. Por lo tanto, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más monómeros abásicos pueden estar presentes en un oligonucleótido de la invención.
[0030] Un monómero abásico puede ser de cualquier tipo conocido y concebible por el experto, cuyos ejemplos no limitativos se representan a continuación:
[0031] En el presente documento, Ri y R2 son independientemente H, un oligonucleótido u otro(s) sitio(s) abásico(s), siempre que ni Ri ni R2 sean H y Ri y R2 no sean ambos un oligonucleótido. Un monómero(s) abásico se puede unir a uno o ambos terminales del oligonucleótido, como se especificó anteriormente. Cabe señalar que un oligonucleótido unido a uno o dos sitio(s) abásico(s) o monómero(s) abásico(s) puede comprender menos de 12 nucleótidos. A este respecto, el oligonucleótido puede comprender al menos 12 nucleótidos, que incluyen opcionalmente uno o más sitios abásicos o monómeros abásicos en uno o ambos terminales.
[0032] En el listado de secuencias, un oligonucleótido que comprende un monómero abásico puede estar representado por su secuencia de nucleótidos o bases; donde el monómero abásico no está representado, ya que puede considerarse como enlazado o unido o conjugado a un extremo libre de un oligonucleótido. Este es el caso para las secuencias de bases SEQ ID N.°: 107 y 108. En la tabla 2, se proporciona la secuencia completa de oligonucleótidos preferidos que comprenden SEQ ID N.°: 107 o 108: dicho oligonucleótido comprende SEQ ID N.°: 107 o 108 y 4 monómeros abásicos en el extremo 3' de la correspondiente SEQ ID N.°: 107 o 108. SEQ ID N. °: 220 y 221 corresponden a SEQ ID N.°: 107 y 108 que comprenden, además, 4 monómeros abásicos adicionales en el extremo 3' del oligonucleótido. Cuando un monómero abásico está presente dentro de una secuencia de bases de un oligonucleótido, dicho monómero abásico se identifica en el listado de secuencias como parte de la secuencia de dicho oligonucleótido como en SEQ ID N.°: 210 y 213.
[0033] En las tablas 1 y 2, un monómero abásico se identifica usando la letra Q.
[0034] Dependiendo de su longitud, un oligonucleótido descrito en el presente documento puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 modificaciones de bases. También se incluye introducir más de una modificación de base diferente en dicho oligonucleótido.
[0035] Una "modificación de azúcar" indica la presencia de una versión modificada del resto ribosilo que se encuentra naturalmente en el ARN (es decir, el resto furanosilo), como azúcares bicíclicos, tetrahidropiranos, morfolinos, azúcares modificados en 2', azúcares modificados en 4', azúcares modificados en 5' y azúcares sustituidos en 4'. Los ejemplos de modificaciones de azúcar adecuadas según la divulgación (un oligonucleótido según la invención consisten en residuos de nucleótidos de ARN 2'-O-metilo, como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto) incluyen, pero de forma no limitativa, residuos de nucleótidos de ARN modificados con 2'-0, como 2'-O-alquilo o 2'-0-alquilo (sustituido), por ejemplo, 2'-0-metilo, 2'-0-(2-cianoetilo), 2'-0-(2-metoxi)etilo (2'-MOE), 2'-0-(2-tiometil)etilo, 2'-0-butirilo, 2'-0-propargilo, 2'-0-alilo, 2'-0-(2-amino)propilo, 2'-0-(2-(dimetilamino)propilo), 2'-0-(2-amino)etilo, 2'-0-(2-(dimetilamino)etilo); 2'-desoxi (ADN); 2'-0-(haloalcoxi)metilo (Arai K.et al.)por ejemplo, 2'-0-(2-cloroetoxi)metilo (MCe M), 2'-O-(2,2-dicloroetoxi)metilo (DCEM); 2'-0-alcoxicarbonilo, por ejemplo, 2'-0-[2-(metoxicarbonil)etil] (MOCE), 2'-0-[2-(W-metilcarbamoil)etil] (MCE), 2'-0-[2-(W,W-dimetilcarbamoil)etil] (DCME); 2'-halo, por ejemplo, 2'-F, FANA (ácido arabinosilnucleico 2'-F); modificaciones de carbaazúcar y azaazúcar; 3'-0-alquilo, por ejemplo, 3'-0-metilo, 3'-0-butirilo, 3'-0-propargilo, 5'-alquilo, por ejemplo, 5'-metilo; y sus derivados.
[0036] Otra modificación de azúcar según la divulgación incluye ácido nucleico "con puente" o "bicílico" (BNA), por ejemplo, ácido nucleico bloqueado (LNA), xilo-LNA, a-L-LNA, p-D-LNA, LNA de cEt (etilo restringido en 2'-O, 4'-C), LNA de cMOEt (metoxietilo restringido en 2'-0,4'-C), ácido nucleico con puente de etileno (ENA), BNANC[N-Me] (como se describe en Chem. Commun. 2007, 3765); ADN triciclo (ADNtc); ácido nucleico desbloqueado (UNA); BNA sustituidos con 5'-metilo (como se describe en la solicitud de patente de EE. UU.
13/530.218); ácido ciclohexenilnucleico (CeNA), ácido nucleico de altriol (ANA), ácido nucleico de hexitol (HNA), HNA fluorado (F-HNA), piranosil-ARN (p-ARN), 3'-desoxipiranosil-ADN (p-ADN); morfolino (como, por ejemplo, en PMO, PMOPlus, PMO-X) y sus derivados, ácido nucleico preferiblemente bloqueado (LNA), xilo-LNA, a-L-LNA, p-D-LNA, LNA de cEt (etilo restringido en 2'-0,4'-C ), L<n>A de cMOEt (metoxietilo restringido en 2'-0,4'-C), ácido nucleico con puente de etileno (ENA), ADN triciclo (ADNtc); ciclohexenilnucleico (CeNA), ácido nucleico de altriol (ANA), ácido nucleico de hexitol (HNA), HNA fluorado (F-HnA), piranosil-ARN (p-ARN), 3'-desoxipiranosil-ADN (p-ADN); morfolino (como, por ejemplo, en PMO, PMOPlus, p MO-X) y sus derivados. Un ADNtc preferido es ADN-tc-PS (ADN triciclo que comprende un enlace internucleósido fosforotioato). Dependiendo de su longitud, un oligonucleótido puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 modificaciones de azúcar. La divulgación también incluye introducir más de una modificación de azúcar diferente en dicho oligonucleótido. En un aspecto, un oligonucleótido de la divulgación, tal y como se define el presente documento, comprende o consiste en un LNA o un derivado del mismo. Los derivados de BNA se describen, por ejemplo, en el documento WO 2011/097641. En una realización más preferida, un oligonucleótido está completamente modificado con 2'-0-metilo. Se describen ejemplos de P<m>O-X en el documento WO2011150408.
[0037] En un aspecto preferido, el oligonucleótido según la divulgación comprende, además de la modificación de azúcar 2'-O-metilo, al menos otra modificación de azúcar seleccionada de entre 2'-0-metilo, 2'-0-(2-metoxi)etilo, morfolino, un nucleótido con puente o BNA, o el oligonucleótido comprende tanto nucleótidos con puente como nucleótidos modificados con 2'-desoxi (mezcladores de BNA/ADN). Más preferiblemente, el oligonucleótido según la divulgación se modifica en toda su longitud con una modificación de azúcar seleccionada de entre 2'-0-metilo, 2'-0-(2-metoxi)etilo, morfolino, ácido nucleico con puente (BNA) o mezclador de BNA/ADN.
[0038] El oligonucleótido según la invención está completamente modificado con 2'-0-metil fosforotioato.
[0039] Una "modificación de esqueleto" indica la presencia de una versión modificada del resto ribosilo ("modificación de azúcar"), como se indicó anteriormente, y/o la presencia de una versión modificada del fosfodiéster, como ocurre naturalmente en el ARN (modificación del enlace internucleósido"). Los ejemplos de modificaciones de enlace internucleósido según la divulgación (un oligonucleótido según la invención tiene un esqueleto donde todos los restos fosfato son reemplazados por restos fosforotioato, como se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto), son fosforotioato (PS), fosforotioato quiralmente puro, fosforoditioato (PS2), fosfonoacetato (PACE), fosfonoacetamida (PACA), tiofosfonoacetato, tiofosfonoacetamida, profármaco de fosforotioato, H-fosfonato, metilfosfonato, metilfosfonotioato, metilfosfato, metilfosforotioato, etilfosfato, etilfosforotioato, boranofosfato, boranofosforotioato, boranofosfato de metilo, boranofosforotioato de metilo, boranofosfonato de metilo, boranofosfonotioato de metilo y sus derivados. Otra modificación incluye fosforamidita, fosforamidato, fosforamidato N3'^-P5', fosfordiamidato, fosforotiodiamidato, sulfamato, dimetilenosulfóxido, sulfonato, triazol, oxalilo, carbamato, metileneimino (MMI), y ácido nucleico de tioacetamido (TANA); y sus derivados. Dependiendo de su longitud, un oligonucleótido puede comprender 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o 35 modificaciones de esqueleto. La divulgación también incluye introducir más de una modificación del esqueleto diferente en dicho oligonucleótido.
[0040] Un oligonucleótido de la divulgación comprende al menos una modificación de fosforotioato. El oligonucleótido de la invención está completamente modificado con fosforotioato.
[0041] Otras modificaciones químicas de un oligonucleótido de la divulgación incluyen ácido nucleico peptídico (PNA), PNA modificado con grupo del boro, ácido nucleico oxipéptido basado en pirrolidina (POPNA), ácido nucleico basado en glicol o glicerol (GNA), ácido nucleico basado en treosa (TNA), ácido nucleico basado en treoninol acíclico (aTNA), oligonucleótidos basados en morfolino (PMO, PPMO, PMO-X), oligómeros catiónicos basados en morfolino (PMOPlus), oligonucleótidos con bases integradas y esqueletos (ONIB), oligonucleótidos de pirrolidina-amida (POM); y sus derivados.
[0042] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido comprende un ácido nucleico peptídico y/o un morfolino fosforodiamidato o un derivado del mismo.
[0043] Por lo tanto, el oligonucleótido preferido según un aspecto de la divulgación comprende:
(a) al menos una modificación de base seleccionada de entre 5-metilpirimidina y 2,6-diaminopurina; y/o (b) al menos una modificación de azúcar, que es 2'-0-metilo, y/o
(c) al menos una modificación del esqueleto, que es fosforotioato.
[0044] Por lo tanto, un oligonucleótido preferido según este aspecto de la divulgación comprende una modificación de base (a) y no comprende ninguna modificación de azúcar (b) ni ninguna modificación del esqueleto (c). Otro oligonucleótido preferido según este aspecto de la divulgación comprende una modificación de azúcar (b) y no comprende ninguna modificación de base (a) ni ninguna modificación del esqueleto (c). Otro oligonucleótido preferido según este aspecto de la divulgación comprende una modificación del esqueleto (c) y no comprende ninguna modificación de base (a) ni ninguna modificación de azúcar (b). También se entiende que están cubiertos por la presente divulgación los oligonucleótidos que no tienen ninguna de las modificaciones mencionadas anteriormente, así como los oligonucleótidos que comprenden dos, es decir (a) y (b), (a) y (c) y/o (b) y (c), o las tres modificaciones (a), (b) y (c), tal y como se definen anteriormente. En otro aspecto preferido de la divulgación, cualquiera de los oligonucleótidos, como se describe en el párrafo anterior, pueden comprender: (a) al menos una modificación de base (adicional) seleccionada de entre 2-tiouracilo, 2-tiotimina, 5-metilcitosina, 5-metiluracilo, timina, 2,6-diaminopurina; y/o
(b) al menos una modificación de azúcar (adicional) seleccionada de entre 2'-0-metilo, 2'-0-(2-metoxi)etilo, 2'-desoxi (ADN), morfolino, un nucleótido con puente o BNA, o el oligonucleótido comprende tanto nucleótidos con puente como nucleótidos modificados con 2'-desoxi (oligómeros alternos (mixmers) de BNA/ADN); y/o
(c) al menos una modificación del esqueleto (adicional) seleccionada de (otro) fosforotioato o fosfordiamidato.
[0045] En otro aspecto preferido, el oligonucleótido según la divulgación se modifica en toda su longitud con una o más de la misma modificación, seleccionadas de entre (a) una de las modificaciones de base; y/o (b) una de las modificaciones de azúcar; y/o (c) una de las modificaciones del esqueleto. El oligonucleótido según la invención se establece en el conjunto de reivindicaciones adjunto.
[0046] Con la aparición de la tecnología de imitación de ácidos nucleicos, se ha hecho posible generar moléculas que tienen características de hibridación similares, preferiblemente las mismas en tipo, no necesariamente en cantidad, que el propio ácido nucleico. Evidentemente, dichos equivalentes funcionales también son adecuados para su uso en la invención.
[0047] El experto entenderá que no todos los azúcares, bases y/o esqueletos se pueden modificar de la misma manera. Se pueden combinar varios azúcares, bases y/o esqueletos modificados diferentes en un único oligonucleótido de la invención.
[0048] Un experto en la técnica también reconocerá que existen muchos derivados sintéticos de oligonucleótidos.
[0049] Preferiblemente, dicho oligonucleótido comprende ARN, ya que los dúplex de ARN/ARN son muy estables. Se prefiere que un oligonucleótido de ARN comprenda una modificación que proporcione al ARN una propiedad adicional, por ejemplo, resistencia a endonucleasas, exonucleasas y RNasa H, fuerza de hibridación adicional, estabilidad aumentada (por ejemplo, en un fluido corporal), flexibilidad aumentada o disminuida, actividad aumentada, toxicidad reducida, transporte intracelular aumentado, especificidad tisular, etc. Además, el ARNm complejado con el oligonucleótido de la invención no es preferiblemente susceptible a la escisión por RNasa H. Se han identificado anteriormente modificaciones preferidas.
[0050] Los oligonucleótidos que contienen al menos en parte nucleótidos de ADN de origen natural son útiles para inducir la degradación de moléculas híbridas de ADN-ARN en la célula por la actividad de la RNasa H (EC.3.1.26.4).
[0051] Los ribonucleótidos de ARN de origen natural o los ribonucleótidos sintéticos de tipo ARN que comprenden oligonucleótidos se incluyen en el presente documento para formar híbridos ARN-ARN bicatenarios que actúan como antisentido dependiente de enzimas a través de las vías de interferencia o silenciamiento de ARN (ARNi/ARNip), lo que implica reconocimiento de ARN diana mediante el emparejamiento de cadenas sentidoantisentido, seguido de la degradación del ARN diana mediante el complejo silenciador inducido por ARN (RISC).
[0052] Como alternativa, o además, un oligonucleótido puede interferir en el procesamiento o la expresión del ARN precursor o ARN mensajero (bloqueo estérico, procesos independientes de la ARNasa H) en particular, pero sin limitarse a, el empalme de ARN y la omisión de exones, al unirse a una secuencia diana de transcrito de ARN e interferir en procesos como la traducción o el bloqueo de los sitios donantes de empalme o aceptores de empalme. Además, el oligonucleótido puede inhibir la unión de proteínas, factores nucleares y otros por impedimento estérico y/o interferir en el plegamiento espacial auténtico del ARN diana y/o unirse a proteínas que originalmente se unan al ARN diana y/o tener otros efectos sobre el ARN diana, lo que contribuye a la desestabilización del ARN diana, preferiblemente pre-ARNm, y/o a la disminución de la cantidad de transcrito y/o proteína enferma o tóxica en enfermedades, como la EH, como se identifica más adelante en este documento.
[0053] Como se define en el presente documento, un oligonucleótido puede comprender nucleótidos con sustituciones químicas (resistentes a la RNasa H) en al menos uno de sus extremos 5' o 3', para proporcionar estabilidad intracelular, y comprende menos de 9, más preferiblemente menos de 6 nucleótidos desoxirribosa consecutivos (sensibles a la RNasa H) en el resto de su secuencia. El resto de la secuencia es preferiblemente el centro de la secuencia. Dicho oligonucleótido se denomina gapmer. Los gapmers se han descrito extensamente en el documento WO 2007/089611. Los gapmers están diseñados para permitir el reclutamiento y/o la activación de la RNasa H. Sin querer limitarnos a ninguna teoría, se cree que la RNasa H se recluta y/o activa mediante la unión a la región central del gapmer formado por desoxirribosas. Un oligonucleótido que es, de manera preferiblemente sustancial, independiente o independiente de la RNasa H está diseñado para tener una región central que sustancialmente no es capaz o no es capaz de reclutar y/o activar la RNasa H. En una forma de realización preferida, el resto de la secuencia de dicho oligonucleótido, más preferiblemente su parte central, comprende menos de 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o no comprende ninguna desoxirribosa. En consecuencia, este oligonucleótido se reemplaza preferiblemente de forma parcial o total, como se ha definido anteriormente en el presente documento. "Parcialmente reemplazado" significa que el oligonucleótido comprende al menos algunos de los nucleótidos que han sido reemplazados, preferiblemente al menos el 50 % de sus nucleótidos han sido reemplazados, o al menos el 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85%,90% o95%han sido reemplazados. El 100 % de reemplazo de nucleótidos corresponde a "totalmente reemplazado".
[0054] En consecuencia, la divulgación proporciona un oligonucleótido que comprende un residuo de ARN 2'-0-metil fosforotioato o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una base de 5-metilpirimidina y/o una base de 2,6-diaminopurina. De la manera más preferible, este oligonucleótido consiste en residuos de<a>R<n>2'-0-metilo conectados a través de un esqueleto de fosforotioato y todas sus citosinas y/o todos sus uracilos y/o todas sus adeninas, independientemente, han sido reemplazada/os por 5-metilcitosina, 5-metiluracilo y/o 2,6-diaminopurina, respectivamente. Por lo tanto, un oligonucleótido de la divulgación puede tener:
Al menos una y preferiblemente todas las citosinas reemplazadas por 5-metilcitosinas,
Al menos una y preferiblemente todas las citosinas reemplazadas por 5-metilcitosinas y al menos uno y preferiblemente todos los uracilos reemplazados por 5-metiluracilos,
Al menos una y preferiblemente todas las citosinas reemplazadas por 5-metilcitosinas y al menos una y preferiblemente todas las adeninas reemplazadas por 2,6-diaminopurinas,
Al menos una y preferiblemente todas las citosinas reemplazadas por 5-metilcitosinas y al menos uno y preferiblemente todos los uracilos reemplazados por 5-metiluracilos y al menos una y preferiblemente todas las adeninas reemplazadas por 2,6-diaminopurinas,
Al menos uno y preferiblemente todos los uracilos reemplazados por 5-metiluracilos,
Al menos uno y preferiblemente todos los uracilos reemplazados por 5-metiluracilos y al menos una y preferiblemente todas las adeninas reemplazadas por 2,6-diaminopurinas, o
Al menos una y preferiblemente todas las adeninas reemplazadas por 2,6-diaminopurinas.
[0055] Un oligonucleótido de la divulgación se utiliza como medicamento para prevenir, retrasar y/o tratar trastornos genéticos asociados a inestabilidad de repetición de elementos cis humanos, preferiblemente como se ejemplifica aquí. Un trastorno genético asociado a la inestabilidad de repetición de elementos cis humanos, como se identifica en el presente documento, es preferiblemente un trastorno neuromuscular. Un oligonucleótido de la invención se utiliza para tratar, retrasar y/o prevenir la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) o la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA). Preferiblemente, dicho oligonucleótido se utiliza en la modulación terapéutica del ARN. Por lo tanto, el oligonucleótido según la divulgación y la invención se puede describir como un oligonucleótido antisentido (OAS). Un oligonucleótido antisentido es un oligonucleótido que se une (o es capaz de unirse), se dirige, se hibrida con (o es capaz de hibridarse con) y/o es inversamente complementario a una secuencia específica de un transcrito de un gen que se sabe que está asociado con o involucrado en un trastorno neuromuscular genético asociado a la inestabilidad de la repetición del elemento cis humano.
[0056] Según la divulgación, un oligonucleótido antisentido que comprende o consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-0-metilo, que tiene un esqueleto, donde al menos un resto fosfato es reemplazado por un resto fosforotioato, y que comprende, además, al menos uno de una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a un elemento repetitivo en un transcrito de ARN que tiene como unidad de nucleótidos repetitiva una unidad de nucleótidos repetitiva, que se selecciona de entre (CAG)<n>, (GCG)<n>, (CGG)<n>, (GAA)<n>, (GCC)<n>, (CCG)<n>, (AUUCU)<n>, (GGGGCC)<n>o (CCUG)<n>. Dicho oligonucleótido es preferiblemente un oligonucleótido monocatenario.
[0057] Aunque se debe entender que un oligonucleótido de la divulgación se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementario a un elemento repetitivo presente en un transcrito de ARN, como se identificó anteriormente, no se puede descartar que dicho oligonucleótido también pueda interferir en o unirse (o ser capaz de unirse) o hibridarse con (o ser capaz de hibridarse) con un ADN correspondiente, del que se deriva este transcrito de ARN.
[0058] Una repetición o un elemento repetitivo o una secuencia repetitiva o un tramo repetitivo se define en el presente documento como una repetición de al menos 3, 4, 5, 10, 100, 1000 o más, de una unidad repetitiva o unidad de nucleótidos repetitiva o una unidad de nucleótidos repetitiva (como (CAG)<n>, (GCG)<n>, (CGG)<n>, (GAA)<n>, (GCC)<n>, (CCG)<n>, (AUUCU)<n>, (GGGGCC)<n>o (CCUG)<n>), que comprende una unidad repetitiva de trinucleótidos, o alternativamente una unidad repetitiva de 4, 5 o 6 nucleótidos, en una secuencia génica transcrita en el genoma de un sujeto, incluido un sujeto humano. En consecuencia, n es un número entero y puede ser al menos 3, 4, 5, 10, 100, 1000 o más. La divulgación no se limita a unidades de nucleótidos repetitivas ejemplificadas. Se pueden encontrar otras unidades de nucleótidos repetitivas en la siguiente página web http://neuromuscular.wustl.edu/mother/dnarep.htm. En la mayoría de los pacientes, una repetición, un elemento repetitivo o una secuencia repetitiva o un tramo repetitivo "puros", como la/el identificada(o) anteriormente, (como (CAG)<n>, (GCG)<n>, (CGG)<n>, (GAA)<n>, (GCC)<n>, (CCG)<n>, (AUUCU)<n>, (GGGGCC)<n>o (CCUG)<n>) está presente en una secuencia génica transcrita en el genoma de dicho paciente. Sin embargo, la divulgación también incluye que, en algunos pacientes, dicha repetición o dicho elemento repetitivo o dicha secuencia repetitiva o dicho tramo repetitivo, como se identificó anteriormente, no se califica como "puro" o se cualifica como una "variante", cuando, por ejemplo, dicha repetición o dicho elemento repetitivo o dicha secuencia repetitiva o dicho tramo repetitivo, como se identificó anteriormente, se intercala con al menos 1,2, o 3 nucleótido(s) que no encaja(n) en el/los nucleótido(s) de dicha repetición o dicho elemento repetitivo o dicha secuencia repetitiva o dicho tramo repetitivo (Braida C.,et al.).
[0059] Por lo tanto, un oligonucleótido según la divulgación puede no necesitar ser 100 % inversamente complementario a una repetición dirigida. Por lo general, un oligonucleótido de la invención puede ser al menos 90 %, 95 %, 97 %, 99 % o 100 % inversamente complementario a una repetición dirigida.
[0060] En un aspecto de la divulgación, un oligonucleótido antisentido comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, comprende una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina, o un oligonucleótido antisentido, tal y como se define en el conjunto de reivindicaciones adjunto, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a un tracto (CAG)<n>en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o prevención de las enfermedades genéticas humanas, como la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) según la divulgación, la demencia frontotemporal (DFT) según la divulgación, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) ligada al cromosoma X y la atrofia dentato-rubro-pálidoluisiana (DRPLA) causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos de los genes HTT (SEQ ID N.°: 80), ATXN1 (SEQ ID N.°: 81), ATXN2 (SEQ ID N.°: 82) ATXN3 (SEQ ID N.°: 83), CACNA1A (SEQ ID N.°: 84), ATXN7 (SEQ ID N.°: 85), PPP2R2B (SEQ ID N.°: 86), TBP (SEQ ID N.°: 87), AR (SEQ ID N.°: 88) o ATN1 (SEQ ID N.°: 89). Preferiblemente, estos genes son de origen humano. En este aspecto, un oligonucleótido de la divulgación comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, comprende una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (CAG)<n>, como se identificó anteriormente, y tiene una unidad de nucleótidos repetitiva (CUG)<m>. La m en (CUG)<m>es preferiblemente un número entero que es 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. En una realización preferida de la divulgación, m es 5 o 6 o 7 o 8 o 9 o 10 o 11 o 12. En esta forma de realización, un oligonucleótido de la invención está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (CAG)<n>, como se identificó anteriormente, y tiene como unidad de nucleótidos repetitiva (CUG)<m>, donde la m en (CUG)<m>es un número entero que es 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12.
[0061] Cabe señalar que, en el caso de la ELA y la DFT según la divulgación, se sabe que al menos dos repeticiones diferentes en al menos dos transcritos diferentes pueden estar implicadas o pueden ser responsables o estar vinculadas con la enfermedad. En el párrafo anterior se identificó uno (es decir, (CAG)<n>en un transcrito de ATXN2). Otro se identificó más adelante como una repetición (GGGGCC)<n>o un tracto en un transcrito de C9ORF72. Esto significa que, para cada una de estas dos enfermedades, se puede considerar el uso de cualquiera de estos dos oligonucleótidos diferentes para inducir específicamente la degradación específica de los transcritos repetidos expandidos (tóxicos) correspondientes.
[0062] A lo largo de la solicitud, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (es capaz de unirse), se hibrida (es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición, como se identificó anteriormente, y tiene o comprende una unidad de nucleótidos repetitiva puede tener cualquier longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos. Si tomamos el ejemplo de CUG como unidad de nucleótidos repetitiva comprendida dentro de dicho oligonucleótido, cualquier oligonucleótido que comprenda UGC o GCU como unidad de nucleótidos repetitiva también está incluido en la presente invención. Dependiendo de la longitud de dicho oligonucleótido (por ejemplo, de 12 a 36 nucleótidos), la unidad de nucleótidos repetitiva dada puede no estar completa en el lado 5' y/o en el lado 3' de dicho oligonucleótido.
[0063] Alternativamente, si todavía tomamos como ejemplo el oligonucleótido de la divulgación que tiene CUG como unidad de nucleótidos repetitiva, se puede representar mediante H-(P)<p>-(CUG)<m>-(Q)<q>-H, donde m es un número entero, tal y como se definió anteriormente. Cada aparición de P y Q es, individualmente, un monómero abásico, tal y como se definió anteriormente, o un nucleótido, como A, C, G, U, o un análogo o equivalente del mismo y p y q son cada uno individualmente un número entero, preferiblemente 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o mayor hasta 100. Por lo tanto, p y q son cada uno individualmente un número entero de 0 a 100, preferiblemente un número entero de 0 a 20, más preferiblemente un número entero de 0 a 10, más preferiblemente de 0 a 6, aún más preferiblemente de 0 a 3. Por lo tanto, cuando p es 0, P está ausente y cuando q es 0, Q está ausente. El experto en la materia apreciará que un oligonucleótido siempre comenzará y terminará con un átomo de hidrógeno (H), independientemente de la cantidad y la naturaleza de los nucleótidos presentes en el oligonucleótido.
[0064] Se apreciará que en el presente documento (CUG)<m>se puede reemplazar por cualquier unidad de nucleótidos repetitiva dentro del contexto de la divulgación. Por lo tanto, un oligonucleótido preferido según la divulgación puede estar representado por H-(P)<p>-(R)<r>-(Q)<q>-H, donde (R)<r>es una unidad de nucleótidos repetitiva dentro del contexto de la divulgación y P, Q, p y q son como se definieron anteriormente.
[0065] En el contexto de la presente descripción e invención, un "análogo" o un "equivalente" de un nucleótido debe entenderse como un nucleótido que comprende al menos una modificación con respecto a los nucleótidos que se encuentran de forma natural en el<a>R<n>, tales como A, C, G y U. Dicha modificación puede ser una modificación de enlace internucleósido y/o una modificación de azúcar y/o una modificación de base, como se explicó y ejemplificó anteriormente. Considerando nuevamente el oligonucleótido que tiene CUG como unidad de nucleótidos repetitiva, debe entenderse que la secuencia repetitiva puede empezar con una C, una U o una G. Por lo tanto, en un aspecto preferido, p no es 0, y (P)<p>está representado por (P')<p>UG o (P')<p->G, donde cada aparición de P' es, individualmente, un sitio abásico o un nucleótido, como A, C, G, U o un análogo o equivalente del mismo, y p' es p - 2 y p" es p - 1. Dichos oligonucleótidos pueden estar representados como:
H-(P'VUG-(CUG)<m>-(Q)<q>-H
o
H-(P')<p">G-(CUG)<m>-(Q)<q>-H.
[0066] En un aspecto igualmente preferido, q no es 0, y (Q)<q>está representado por CU(Q')<q'>o C(Q')<q->y cada aparición de Q' es, individualmente, un sitio abásico o un nucleótido, como A, C, G, U o un análogo o equivalente del mismo, y q' es q - 2 q - 2 y q" es q - 1. Dichos oligonucleótidos pueden estar representados como:
H-(P)<p>-(CUG)<m>-CU(Q')<q'>-H
o
H-(P)<p>-(CUG)<m>-C(Q')<q>“ H.
[0067] En otro aspecto preferido, tanto p como q no son 0, y tanto (P)<p>como (Q)<q>están representados por (P')<p>UG o (P')<p->G y CU(Q')<q'>o C(Q')<q-,>respectivamente, donde P', Q', p', p", q' y q" son como se definieron anteriormente. Dichos oligonucleótidos pueden estar representados como:
H-(P'VUG-(CUG)<m>-CU(Q')<q>-H,
H-(P')<p->G-(CUG)<m>-CU(Q')<q>-H,
H-(P'VUG-(CUG)<m>-C(Q')<q>-H,
o
H-(P')<p->G-(CUG)<m>-C(Q')<q-.>H.
[0068] Se debe entender que p', p", q' y q" no pueden ser números enteros negativos. Por lo tanto, cuando (P)<p>está representado por (P')<p>UG o (P')<p->G, p es al menos 1 o al menos 2 respectivamente, y cuando (Q)<q>está representado por CU(Q')<q'>o C(Q')<q->, q es al menos 1 o al menos 2 respectivamente. Se debe entender que todo lo dicho aquí con respecto a la unidad de repetición CUG se puede extender a cualquier unidad de repetición dentro del contexto de la divulgación.
[0069] En una forma de realización preferida, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o que se dirige a una repetición (CAG)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es (divulgación) de 5-metiluracilo o de manera que cada X es 5-metilcitosina y/o cada Y es 5-metiluracilo (invención). m es un número entero. En el contexto de esta forma de realización, m puede ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Un valor preferido para m es 7.
[0070] Un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)<m>, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 2 a 12).
[0071] Un oligonucleótido de la invención comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)<m>, donde cada X es 5-metilcitosina, y/o cada Y es 5-metiluracilo, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 2 a 12).
[0072] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)s, (XYG)6 o (XYG)z, (XYG)s, o (XYG)g, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo. Se prefiere más un oligonucleótido de la divulgación que comprende o consiste en (XYG)z, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo (SEQ ID N.°: 7).
[0073] Un oligonucleótido aún más preferido de la invención comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)z, donde cada X es 5-metilcitosina y cada Y es un uracilo (SEQ ID N.°: 2), o cada X es una citosina y cada Y es 5-metiluracilo (SEQ ID N.°: 3). Un oligonucleótido aún más preferido comprende SEQ ID N.°: 2 o 3 y tiene una longitud de 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 nucleótidos.
[0074] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)m se han identificado en la tabla 2 como S<e>Q ID N.°: 90-118.
[0075] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de secuencias de bases SEQ ID N.°: 90-106 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación o de la invención consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 90-106 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 90-106 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0076] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 107 o 108 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 107 o 108 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 107 o 108 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0077] El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 107 o 108, tiene una longitud de 21 nucleótidos y comprende adicionalmente 4 monómeros abásicos en uno de sus extremos, preferiblemente en el extremo 3'. Dicho oligonucleótido más preferido está representado por una secuencia de bases que consiste en SEQ ID N.°: 220 o 221.
[0078] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 109 o 110 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la invención consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 109 o 110 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 109 o 110 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0079] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 111 o 112 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la invención consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 111 o 112 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 111 o 112 y tiene una longitud de 27 nucleótidos.
[0080] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 113 o 114 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la invención consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 113 o 114 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 113 o 114 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0081] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 115 o 116 y tiene una longitud de 33-36 nucleótidos, más preferiblemente 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la invención consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 115 o 116 y tiene una longitud de 33-36 nucleótidos, más preferiblemente 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 115 o 116 y tiene una longitud de 33 nucleótidos.
[0082] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 117 o 118 y tiene una longitud de 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la invención consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 117 o 118 y tiene una longitud de 36 nucleótidos.
[0083] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido antisentido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, y que comprende una 5-metilcitosina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une a (o es capaz de unirse a), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (GCG)<n>en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o la prevención de las enfermedades genéticas humanas: síndrome de espasmo infantil, displasia deidocraneal, blefarofimosis, enfermedad genital mano-pie, sinpolidactilia, distrofia muscular oculofaríngea y/o holoprosencefalia, que son causadas por expansiones repetidas en los genes ARX, CBFA1, FOXL2, HOXA13, HOXD13, OPDM/PABP2, TCFBR1 o ZIC2. Preferiblemente, estos genes son de origen humano.
[0084] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o que se dirige a una repetición (GCG)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina. m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Un valor preferido para m es 7.
[0085] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<m>, donde al menos una X es 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 13 a 21). Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<m>, donde cada X es 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 13 a 21).
[0086] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<z>(SEQ ID N.°: 16), donde al menos una X es 5-metilcitosina. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<z>(SEQ ID N.°: 16), donde cada X es 5-metilcitosina.
[0087] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGX)<m>se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 119-132.
[0088] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 119 o 120 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 119 o 120 y tiene una longitud de 16-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 119 o 120 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0089] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 121 o 122 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 90-106 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 121 o 122 y tiene una longitud de 15 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 123 o 124 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 123 o 124 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 123 o 124 y tiene una longitud de 18 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 125 o 126 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 125 o 126 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 125 o 126 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0090] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 127 o 128 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 127 o 128 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 127 o 128 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0091] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 129 o 130 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 129 o 130 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 129 o 130 y tiene una longitud de 27 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 131 o 132 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 131 o 132 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 131 o 132 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0092] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una 5-metilcitosina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se dirige, se hibrida (o es capaz de hibridarse) y/o es inversamente complementaria a un repetición (CGG)n en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o la prevención de síndromes humanos del cromosoma X frágil, causados por la expansión de repeticiones en el gen FMR1. Preferiblemente, estos genes son de origen humano.
[0093] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o que se dirige a una repetición (CGG)n comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)m y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina.
[0094] m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Un valor preferido para m es 7.
[0095] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)m, donde cada X es C o 5-metilcitosina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 22 a 30).
[0096] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)m, donde cada X es 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 22 a 30).
[0097] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)z (SEQ ID N.°: 25), donde cada X es C o 5-metilcitosina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina.
[0098] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)z (SEQ ID N.°: 25), donde cada X es 5-metilcitosina.
[0099] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XXG)m se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 133-146.
[0100] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 133 o 134 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 133 o 134 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 133 o 134 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0101] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 135 o 136 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 135 o 136 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 135 o 136 y tiene una longitud de 15 nucleótidos.
[0102] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 137 o 138 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 137 o 138 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 137 o 138 y tiene una longitud de 18 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 139 o 140 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 139 o 140 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 139 o 140 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0103] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 141 o 142 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 141 o 142 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 141 o 142 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0104] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 143 o 144 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 143 o 144 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 143 o 144 y tiene una longitud de 27 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 145 o 146 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 145 o 146 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 145 o 146 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0105] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una 5-metilcitosina y/o un 5-metiluracilo, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se dirige, se hibrida (o es capaz de hibridarse) y/o es inversamente complementaria a una repetición (GAA)<n>en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso y/o la prevención del trastorno genético humano de la ataxia de Friedreich.
[0106] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición (GAA)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YYX)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo.
[0107] m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Un valor preferido para m es 7.
[0108] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YYX)<m>, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 31 a 39).
[0109] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YYX)<m>, donde cada X es 5-metilcitosina, y/o cada Y es 5-metiluracilo, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 31 a 39).
[0110] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YYX)<z>(SEQ ID N.°: 34), donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Y es U o 5-metiluracilo, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Y es 5-metiluracilo.
[0111] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YYX)<z>(SEQ ID N.°: 34), donde cada X es 5-metilcitosina, y/o cada Y es 5-metiluracilo.
[0112] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)<m>se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 147-167.
[0113] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 147 o 148 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 147 o 148 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 147 o 148 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0114] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 149 o 150 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 149 o 150 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 149 o 150 y tiene una longitud de 15 nucleótidos.
[0115] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 151 o 152 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 151 o 152 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 151 o 152 y tiene una longitud de 18 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 153-157 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 153-157 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 153-157 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0116] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 158 o 159 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 158 o 159 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 158 o 159 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0117] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 160 o 161 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 160 o 161 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 160 o 161 y tiene una longitud de 27 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 162 o 163 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 162 o 163 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 162 o 163 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0118] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 164 o 165 y tiene una longitud de 33-36 nucleótidos, más preferiblemente 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 164 o 165 y tiene una longitud de 33-36 nucleótidos, más preferiblemente 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 164 o 165 y tiene una longitud de 33 nucleótidos.
[0119] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 166 o 167 y tiene una longitud de 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y tiene una secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 166 o 167 y tiene una longitud de 36 nucleótidos.
[0120] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido antisentido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una 5-metilcitosina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une a (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (CCG)<n>o (GCC)<n>en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o la prevención del trastorno genético humano llamado retraso mental XE frágil, causado por la expansión repetida del gen FMR2. Preferiblemente, estos genes son de origen humano.
[0121] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición (CCG)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)<m>o (GGX)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina. m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Un valor preferido para m es 7.
[0122] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)m o (GGX)m, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 49 a 57) o (SEQ ID N.°: 40 a 48). Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)m o (GGX)m, donde cada X es 5-metilcitosina, y m es un número entero de 4 a 12 (SEQ ID N.°: 49 a 57) o (SEQ ID N.°: 4o a 48).
[0123] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)z (SEQ ID N.°: 52) o (GGX)z (SEQ ID N.°: 43), donde cada X es C o 5-metilcitosina.
[0124] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)z (SEQ ID N.°: 52) o (GGX)z (SEQ ID N.°: 43), donde cada X es 5-metilcitosina.
[0125] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (GGX)m se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 168-177.
[0126] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una secuencia de bases SEQ ID N.°: 168 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende secuencias de bases SEQ ID N.°: 168 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en secuencias de bases SEQ ID N.°: 168 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0127] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 169 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 169 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 169 y tiene una longitud de 15 nucleótidos.
[0128] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 170 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 170 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 170 y tiene una longitud de 18 nucleótidos.
[0129] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 171-174 tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 171-174 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 171-174 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0130] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 175 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 175 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 175 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0131] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 176 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 176 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 176 y tiene una longitud de 27 nucleótidos.
[0132] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 177 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 177 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 177 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0133] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XGG)m se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 178-184.
[0134] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 178 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 178 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 178 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0135] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 179 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 179 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 179 y tiene una longitud de 15 nucleótidos.
[0136] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende secuencias de bases SEQ ID N.°: 180 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 180 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 180 y tiene una longitud de 18 nucleótidos.
[0137] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 181 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 181 y tiene una longitud de 21-36 nucleótidos, más preferiblemente 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 181 y tiene una longitud de 21 nucleótidos.
[0138] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 182 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 182 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 182 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0139] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 183 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 183 y tiene una longitud de 27-36 nucleótidos, más preferiblemente 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 183 y tiene una longitud de 27 nucleótidos.
[0140] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 184 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 184 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 184 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0141] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una 5-metilcitosina y/o una 2,6-diaminopurina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (CCUG)<n>en un transcrito y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso y/o la prevención de la enfermedad genética humana distrofia miotónica tipo 2 (DM2), causada por expansiones repetidas en el gen DM2/ZNF9. Preferiblemente, estos genes son de origen humano.
[0142] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición (CCUG)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XZGG)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Z es 2,6-diaminopurina.
[0143] m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9. Un valor preferido para m es 5.
[0144] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XZGG)<m>, donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una A es 2,6-diaminopurina, y m es un número entero de 3 a 9 (SEQ ID N.°: 63 a 69). Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XZGG)<m>, donde cada X es 5-metilcitosina, y/o cada Z es 2,6-diaminopurina, y m es un número entero de 3 a 9 (SEQ ID N.°: 63 a 69).
[0145] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (YZGG)<5>(SEQ ID N.°: 65), donde cada X es C o 5-metilcitosina, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina y/o al menos una Z es 2,6-diaminopurina.
[0146] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XZGG)s (SEQ ID N.°: 65), donde cada X es 5-metilcitosina, y/o cada Z es 2,6-diaminopurina.
[0147] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (XZGG)<m>se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 193-208.
[0148] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 193 o 194 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 193 o 194 y tiene una longitud de 12-36 nucleótidos, más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 193 o 194 y tiene una longitud de 12 nucleótidos.
[0149] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 195 o 196 y tiene una longitud de 16-36 nucleótidos, más preferiblemente 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 195 o 196 y tiene una longitud de 16-36 nucleótidos, más preferiblemente 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 195 o 196 y tiene una longitud de 16 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 197-200 y tiene una longitud de 20-36 nucleótidos, más preferiblemente 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 197-200 y tiene una longitud de 20-36 nucleótidos, más preferiblemente 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 197-200 y tiene una longitud de 20 nucleótidos.
[0150] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 201 o 202 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 201 o 202 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 201 o 202 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0151] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 203 o 204 y tiene una longitud de 28-36 nucleótidos, más preferiblemente 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 203 o 204 y tiene una longitud de 28-36 nucleótidos, más preferiblemente 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 203 o 204 y tiene una longitud de 28 nucleótidos. Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 205 o 206 y tiene una longitud de 32-36 nucleótidos, más preferiblemente 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 205 o 206 y tiene una longitud de 32-36 nucleótidos, más preferiblemente 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 205 o 206 y tiene una longitud de 32 nucleótidos.
[0152] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 207 o 208 y tiene una longitud de 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 207 o 208 y tiene una longitud de 36 nucleótidos.
[0153] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende un 5-metiluracilo y/o una 2,6-diaminopurina está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (AUUCU)<n>en un intrón y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o la prevención del trastorno genético humano ataxia espinocerebelosa tipo 10 (AEC10). Preferiblemente, este gen es de origen humano.
[0154] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición (AUUCU)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<m>y tiene una longitud comprendida entre 12 y 36 nucleótidos y donde cada Y es U o 5-metiluracilo, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una Y es 5-metiluracilo y/o al menos una Z es 2,6-diaminopurina.
[0155] m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 3, 4, 5, 6, 7. Un valor preferido para m es 4.
[0156] Por lo tanto, un oligonucleótido más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<m>, donde cada Y es U o 5-metiluracilo, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una Y es 5-metiluracilo y/o al menos una Z es 2,6-diaminopurina, y m es un número entero de 3 a 7 (SEQ ID N.°: 58 a 62).
[0157] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<m>, donde cada Y es 5-metiluracilo, y/o cada Z es 2,6-diaminopurina, y m es un número entero de 3 a 7 (SEQ ID N.°: 58 a 62).
[0158] Por lo tanto, un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<4>(SEQ ID N.°: 59), donde cada Y es C o 5-metiluracilo, y cada Z es A o 2,6-diaminopurina, de manera que al menos una Y es 5-metiluracilo y/o al menos una Z es 2,6-diaminopurina.
[0159] Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<4>(SEQ ID N.°: 59), donde cada Y es 5-metiluracilo, y/o cada Z es 2,6-diaminopurina.
[0160] Las secuencias de oligonucleótidos más preferidas de la divulgación que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (ZGZZY)<m>se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 185-192.
[0161] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 185 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 185 y tiene una longitud de 15-36 nucleótidos, más preferiblemente 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 185 y tiene una longitud de 15 nucleótidos.
[0162] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 186-189 y tiene una longitud de 20-36 nucleótidos, más preferiblemente 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 186-189 y tiene una longitud de 20-36 nucleótidos, más preferiblemente 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 186-189 y tiene una longitud de 20 nucleótidos.
[0163] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 190 y tiene una longitud de 25-36 nucleótidos, más preferiblemente 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 190 y tiene una longitud de 25-36 nucleótidos, más preferiblemente 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 190 y tiene una longitud de 25 nucleótidos.
[0164] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 191 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 191 y tiene una longitud de 30-36 nucleótidos, más preferiblemente 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 191 y tiene una longitud de 30 nucleótidos.
[0165] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 192 y tiene una longitud de 35-36 nucleótidos, más preferiblemente 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 192 y tiene una longitud de 35-36 nucleótidos, más preferiblemente 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 192 y tiene una longitud de 35 nucleótidos.
[0166] En otro aspecto de la divulgación, un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y que comprende una 5-metilcitosina y/o un monómero abásico, y/o una inosina está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a una repetición (GGGGCC)<n>presente en un transcrito humano de C9ORF72 y es particularmente útil para el tratamiento, el retraso, la mejora y/o la prevención del trastorno genético humano esclerosis lateral amilotrófica (ELA) o demencia frontotemporal (DFT). Preferiblemente, este gen es de origen humano.
[0167] En un aspecto preferido de la divulgación, un oligonucleótido definido como inversamente complementario a, que se une (o es capaz de unirse), que se hibrida (o es capaz de hibridarse) o se dirige a una repetición (GGGGCC)<n>comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (GGXUXX)<m>, (GGXQXX)<m>, (GGXIXX)<m>, o (GGCCUC)<m>, y tiene una longitud comprendida entre 17 y 36 nucleótidos y donde cada X es C o 5-metilcitosina, de manera que al menos una X es 5-metilcitosina, donde cada Q es un monómero abásico, donde cada I es una inosina, y donde m es un número entero. En el contexto de este aspecto, m puede ser 3, 4, 5, 6, 7. Un valor preferido para m es 3 o 4.
[0168] Más preferiblemente, dicho oligonucleótido de la divulgación comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva SEQ ID N.°: 216-219 tal y como se define en la tabla 1. Las secuencias de oligonucleótidos aún más preferidas que comprenden o consisten en una unidad de nucleótidos repetitiva (GGXUXX)<m>, (GGXQXX)<m>, (GGXIXx)<m>, o (GGCCUC)<m>, se han identificado en la tabla 2 como SEQ ID N.°: 209-215.
[0169] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 209 o 211 y tiene una longitud de 17-36 nucleótidos, más preferiblemente 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 209 o 211 y tiene una longitud de 17-36 nucleótidos, más preferiblemente 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 209 o 211 y tiene una longitud de 17 o 18 nucleótidos.
[0170] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 210 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 210 y tiene una longitud de 18-36 nucleótidos, más preferiblemente 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en la secuencia de bases SEQ ID N.°: 210 y tiene una longitud de 18 nucleótidos.
[0171] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 212 o 215 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 212 o 215 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en una de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 212 o 215 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0172] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 213 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 213 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en las secuencias de bases SEQ ID N.°: 213 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0173] Un oligonucleótido preferido de la divulgación que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 214 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. Un oligonucleótido aún más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato y comprende la secuencia de bases SEQ ID N.°: 214 y tiene una longitud de 24-36 nucleótidos, más preferiblemente 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 o 36 nucleótidos. El oligonucleótido más preferido de la divulgación consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, tiene su secuencia de bases que consiste en las secuencias de bases SEQ ID N.°: 214 y tiene una longitud de 24 nucleótidos.
[0174] En un aspecto, un oligonucleótido de la divulgación comprende preferiblemente o consiste en ARN 2'-O-metil fosforotioato, comprende una base de 5-metilcitosina y/o una base de 5-metiluracilo y/o una base de 2,6-diaminopurina, está representado por una secuencia de nucleótidos que comprende o consiste en al menos 12 a 36 nucleótidos consecutivos, donde dicho oligonucleótido se dirige, se hibrida (o es capaz de hibridarse), se une (o es capaz de unirse) y/o es inversamente complementaria a una repetición, como se ha definido en el presente documento anteriormente. Más preferiblemente, dicha secuencia de nucleótidos comprende o consiste en al menos 12 a 36 nucleótidos, aún más preferiblemente 15 a 24, y más preferiblemente 20 o 21 nucleótidos. La longitud de dicho oligonucleótido puede ser 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, o 36 nucleótidos. Dicho oligonucleótido de la divulgación puede ser inversamente complementario a y/o ser capaz de hibridarse con y/o ser capaz de dirigirse a y/o ser capaz de unirse a una repetición en una región codificante de un transcrito, preferiblemente un tracto codificante de poliglutamina (CAG)<n>. Dicho oligonucleótido, como se describe en el conjunto de reivindicaciones adjunto, puede ser inversamente complementario a y/o ser capaz de hibridarse con y/o ser capaz de dirigirse y/o ser capaz de unirse a un tracto codificante de poliglutamina (CAG)<n>. Dicho oligonucleótido de la divulgación y la invención también puede ser inversamente complementario a y/o ser capaz de hibridarse con y/o ser capaz de dirigirse a y/o capaz de unirse a una región no codificante, por ejemplo regiones 5' o 3' no traducidas, o secuencias intrónicas presentes en moléculas de ARN precursor.
[0175] Dentro del contexto de la divulgación y la invención, la expresión "capaz de" puede ser reemplazada por "es capaz de".
[0176] En un segundo aspecto, la presente descripción se refiere a un oligonucleótido, que comprende uno o más sitios abásicos, tal y como se define más adelante, en uno o ambos extremos. Preferiblemente, están presentes de 1 a 10, más preferiblemente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 y, de la manera más preferible, 4 sitios abásicos en un solo extremo o en ambos extremos del oligonucleótido. Pueden estar presentes uno o más sitios abásicos y ambos extremos libres del oligonucleótido (5' y 3'), o solo en uno. El oligonucleótido según este aspecto de la divulgación está representado preferiblemente por un nucleótido o una secuencia de bases que comprende o consiste en una secuencia que se une (o es capaz de unirse), se hibrida (o es capaz de hibridarse), se dirige y/o es inversamente complementaria a un elemento repetitivo en un transcrito de ARN seleccionado de entre (CAG)<n>, (GCG)<n>, (CGG)<n>, (GAA)<n>, (GCC)<n>, (CCG)<n>, (AUUCU)<n>, (GGGGCC)<n>o (CCUG)<n>, como se indicó anteriormente. Dicho oligonucleótido es preferiblemente un oligonucleótido monocatenario, y puede comprender, además, opcionalmente cualquiera de las modificaciones que se analizan en el presente documento, como una o más modificaciones de bases, modificaciones de azúcares y/o modificaciones del esqueleto, como 5-metil-C, 5-metil-U, 2,6-diaminopurina, 2'-0-metilo, fosforotioato y combinaciones de los mismos. Se debe entender que, en este aspecto de la divulgación, esta modificación no es obligatoria.
[0177] El oligonucleótido según este aspecto de la divulgación, que comprende uno o más sitios abásicos en uno o ambos extremos, tiene un parámetro mejorado con respecto a los oligonucleótidos sin dichos sitios abásicos. En este contexto, los parámetros pueden incluir: afinidad y/o cinética de unión, actividad de silenciamiento, selectividad alélica, bioestabilidad, distribución (intratisular), captación y/o tráfico celular y/o inmunogenicidad de dicho oligonucleótido, como se explicó anteriormente en este documento en relación con el parámetro mejorado de un oligonucleótido del primer aspecto. Cada uno de los ensayos y las definiciones proporcionados aquí en relación con la mejora de un parámetro de un oligonucleótido del primer aspecto también son válidos para un oligonucleótido del segundo aspecto.
[0178] A continuación, se toma como ejemplo un oligonucleótido que comprende o consiste en ARN 2'-0-metil fosforotioato, que comprende una base de 5-metilcitosina y/o una base de 5-metiluracilo y que está representado por un nucleótido o una secuencia de bases que comprende (CUG)m y, por lo tanto, se une a (o es capaz de unirse a), que se hibrida (o es capaz de hibridarse), que se dirige y/o es inversamente complementaria a (CAG)<n>para ilustrar aun más la invención. El experto en la materia podría definir parámetros similares definidos en el contexto de dicho oligonucleótido para otros oligonucleótidos que se encuentren dentro del alcance de la invención y que se unen a (o pueden unirse a), se hibridan (o pueden hibridarse), se dirigen a y/o son inversamente complementarios a otras repeticiones, como se identifica en el presente documento. El experto en la materia puede identificar otros síntomas o síntomas similares en relación con otras enfermedades como las identificadas en el presente documento.
[0179] En una forma de realización preferida, en el contexto de la invención, un oligonucleótido, como está diseñado aquí, es capaz de retrasar y/o curar y/o tratar y/o prevenir y/o mejorar un trastorno genético humano, como la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (a EC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) según la divulgación, la demencia frontotemporal (DFT) según la divulgación, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) ligada al cromosoma X y la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA) causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos de los genes HTT (SEQ ID N.°: 80), ATXN1 (SEQ ID N.°: 81), ATXN2 (SEQ ID N.°: 82) ATXN3 (SEQ ID N.°: 83), CACNA1A (SEQ ID N.°: 84), ATXN7 (SEQ ID N.°: 85), PPP2R2B (SEQ ID N.°: 86), TBP (SEQ ID N.°: 87), AR (SEQ ID N.°: 88), ATN1 (SEQ ID N.°: 89) cuando este oligonucleótido es capaz de reducir o disminuir la cantidad de transcrito (tóxico) de un alelo enfermo de un gen HTT, ATXN1, ATXN2 ATXN3, CACNA1A, ATXN7, PPP2R2B, TBP, AR o ATN1 en una célula de un paciente, en un tejido de un paciente y/o en un paciente. En una realización, dichos genes HTT, ATXN1, ATXN2, ATXN3, CACNA1A, ATXN7, PPP2R2B, TBP, AR o ATN1 son genes humanos.
[0180] En el caso de EH, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 1 del gen HTT en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 38 a 180 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG, en una secuencia transcrita del gen HTT.
[0181] En el caso de AEC1, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 8 del gen ATXN1 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse aquí como aquella que comprende una repetición consecutiva de 41 a 83 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG, en una secuencia transcrita del gen ATXN1.
[0182] En el caso de AEC2, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 1 del gen ATXN2 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 32 a 200 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAg en una secuencia transcrita del gen ATXN2.
[0183] En el caso de AEC3, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 8 del gen ATXN3 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como que comprende una repetición consecutiva de 52 a 86 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen ATXN3.
[0184] En el caso de AEC6, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 47 del gen CACNA1A en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como que comprende una repetición consecutiva de 20 a 33 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen CACNA1A.
[0185] En el caso de AEC7, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 3 del gen ATXN7 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como que comprende una repetición consecutiva de 36 a al menos 460 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen ATXN7.
[0186] En el caso de AEC12, una región de repetición CAG expandida puede estar presente en la región 5' no traducida (UTR), en un intrón o dentro de un marco de lectura abierto del gen PPP2R2B en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 66 a 78 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen PPP2R2B.
[0187] En el caso de AEC17, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 3 del gen TBP en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 45 a 66 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen TBP.
[0188] En el caso de ELA o DFT según la divulgación, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 1 del gen ATXN2 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 27 a 33 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen ATXN2.
[0189] En el caso de ELA o DFT (según la divulgación), una región de repetición GGGGCC expandida está presente en el primer intrón del gen C9ORF72 en el genoma de un paciente. Una región de repetición GGGGCC expandida puede definirse en el presente documento como que comprende una repetición consecutiva de >30 unidades repetitivas que comprenden un hexanucleótido GGGGCC en una secuencia transcrita del gen C9ORF72.
[0190] En el caso de SBMA, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 1 del gen AR en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como que comprende una repetición consecutiva de 40 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido CAG en una secuencia transcrita del gen AR.
[0191] En el caso de DRPLA, una región de repetición CAG expandida está presente en el exón 5 del gen ATN1 en el genoma de un paciente. Una región de repetición CAG expandida puede definirse en el presente documento como una región que comprende una repetición consecutiva de 49 a 88 unidades repetitivas que comprenden un trinucleótido<c>A<g>en una secuencia transcrita del gen ATN1.
[0192] A lo largo de toda la divulgación y la invención, el término repetición CAG se puede reemplazar por (CAG)<n>, y viceversa, donde n es un número entero que puede ser de 6 a 29 cuando la repetición está presente en exón 1 del transcrito de HTT de un individuo sano, de 6 a 39 cuando la repetición está presente en exón 8 del gen ATXN1 de un individuo sano, menos de 31 cuando la repetición está presente en el exón 1 del gen ATXN2 de un individuo sano, de 12 a 40 cuando la repetición está presente en el exón 8 del gen ATXN3 de un individuo sano, menos de 18 cuando la repetición está presente en el exón 47 del gen CACNA1A de un individuo sano, de 4 a 17 cuando la repetición está presente en el exón 3 del gen ATXN7 de un individuo sano, de 7 a 28 cuando la repetición está presente en la 5'UTR del gen PPP2R2B de un individuo sano, de 25 a 42 cuando las repetición está presente en exón 3 del gen TBP de un individuo sano, de 13 a 31 cuando la repetición está presente en el exón 1 del gen AR de un individuo sano, de 12 a 40 cuando la repetición está presente en el exón 8 del gen ATXN3 de un individuo sano, o de 6 a 35 cuando la repetición está presente en el exón 5 del gen ATN1 de un individuo sano.
[0193] Preferiblemente significa que un oligonucleótido de la invención reduce una cantidad detectable de transcrito asociado a la enfermedad o causante de la enfermedad o mutante que contiene un número extenso o inestable de repeticiones CAG en una célula de dicho paciente, en un tejido de dicho paciente y/o en un paciente. Como alternativa o en combinación con la oración anterior, dicho oligonucleótido puede reducir la traslación de dicho transcrito mutante y, por lo tanto, la cantidad de proteína mutante (tóxica). La reducción o disminución de la cantidad de transcritos de repeticiones CAG expandidas puede ser de al menos 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65%, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 % en comparación con la cantidad de transcritos de repeticiones CAG expandidas antes del tratamiento. Otro parámetro puede ser la reducción del transcrito (CAG)n o de la cantidad de dicho transcrito mutante. Esta puede ser de al menos 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 % en comparación con la cantidad de dicho transcrito detectado al inicio del tratamiento
[0194] La reducción o disminución se puede evaluar mediante transferencia Northern o Q-RT-PCR, preferiblemente como se lleva a cabo en la parte experimental. Un oligonucleótido de la invención puede probarse primero en el sistema celular, como se describe en el ejemplo 1 en la parte experimental.
[0195] Como alternativa o en combinación con la forma de realización preferida anterior, en el contexto de la invención, un oligonucleótido, como está diseñado en el presente documento, es capaz de retrasar y/o curar y/o tratar y/o prevenir y/o mejorar un trastorno genético humano, como la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) según la divulgación, la demencia frontotemporal (DFT) según la divulgación, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) ligada al cromosoma X y la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA) causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos de los genes HTT, ATXN1, ATXN2 ATXN3, CACNA1A, ATXN7, PPP2R2B, TBP, AR o ATN1 cuando este oligonucleótido es capaz de aliviar uno o más síntoma(s) y/o una o más característica(s) y/o de mejorar un parámetro vinculado o asociado con la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (ACE) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) según la divulgación, la demencia frontotemporal (DFT) según la divulgación, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) ligada al cromosoma X y la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA) en un individuo. Un oligonucleótido, tal y como se define en este documento, es capaz de mejorar un parámetro o reducir un síntoma o una característica si después de al menos una semana, un mes, seis meses, un año o más de tratamiento usando una dosis de dicho oligonucleótido de la invención, como se identifica en este documento, se dice que dicho parámetro ha mejorado o se dice que dicho síntoma o dicha característica se ha reducido.
[0196] La mejora en este contexto puede significar que dicho parámetro ha cambiado significativamente hacia un valor de dicho parámetro para una persona sana y/o hacia un valor de dicho parámetro que corresponde al valor de dicho parámetro en el mismo individuo al inicio del tratamiento.
[0197] La reducción o el alivio en este contexto puede significar que dicho síntoma o dicha característica ha cambiado significativamente hacia la ausencia de dicho síntoma o dicha característica que es característica de una persona sana y/o hacia un cambio de dicho síntoma o dicha característica que corresponde al estado del mismo individuo al inicio del tratamiento.
[0198] En este contexto, los síntomas de la enfermedad de Huntington son movimientos coreiformes, la demencia progresiva y las manifestaciones psiquiátricas (depresión, psicosis, etc.). Los movimientos coreiformes consisten en acciones motoras involuntarias, rápidas, irregulares y espasmódicas, que incluyen espasmos o contorsiones faciales y espasmos de las extremidades distales, y formas posteriores más generalizadas que pueden afectar la marcha (Ropper y Brown, 2005). El médico puede evaluar cada uno de estos síntomas utilizando métodos conocidos y descritos. Un método preferido es el seguimiento de la capacidad funcional total (CFT), una escala validada o la progresión de los síntomas en relación con las tres áreas sintomáticas principales de la EH, medidas mediante escalas de valoración validadas. Estas áreas son específicamente la progresión de los signos motores, la progresión de los síntomas neurosiquiátricos y la progresión del deterioro cognitivo. Por lo tanto, otra escala preferida es la escala Unificada de Calificación de la E<h>(UHDRS; Huntington Study Group (Kieburtz K.et al.1996;11:136-142).
[0199] La enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) ligada al cromosoma X y la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA) son todas causadas por expansiones de repeticiones de tripletes CAG en la región codificante del gen. Aunque las proteínas que causan la enfermedad en estas enfermedades son diferentes, en cada caso la extensión expandida resultante de las glutaminas da como resultado una ganancia tóxica de función de la proteína y esto conduce a la neurodegeneración. Los agregados proteicos se encuentran en el núcleo y el citoplasma de células, lo que indica que el plegamiento incorrecto de las proteínas es una característica común de estos trastornos. Por lo tanto, un parámetro preferido común son los niveles de proteína (mutante), que se pueden determinar mediante análisis de transferencia Western (Everset al.),o la presencia de agregados proteicos en el núcleo y/o citoplasma, que se pueden controlar mediante hibridaciónin situ.Una mejora de un parámetro de EH puede ser la disminución en la detección de la cantidad de agregado proteico. Dicha disminución puede ser de al menos 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30%, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 % en comparación con la cantidad de agregado proteico antes del inicio del tratamiento.
[0200] En el contexto de la EH, se han descubierto que varias otras proteínas se colocalizan con agregados de htt, es decir, la proteína de unión a la caja TATA (TBP), la proteína de unión a CREB (CBP) y varias chaperonas moleculares (Huanget al.;Muchowskiet al.;Roon-Momet al.;Steffanet al.).También se han identificado muchos procesos celulares afectados en la EH, como la desregulación transcripcional, la disfunción mitocondrial y el transporte vesicular deficiente, que pueden proporcionar parámetros alternativos para la EH (Baueret al.,2009; Rosset al.).Una mejora de cada uno de estos posibles parámetros de EH alternativos (es decir, la proteína de unión a la caja TATA (TBP), la proteína de unión a CREB (CBP) y varias chaperonas moleculares) puede definirse como la mejora del agregado proteico, como se definió anteriormente.
Composición
[0201] En un segundo aspecto, se proporciona una composición que comprende un oligonucleótido, como se describe en la sección anterior titulada "Oligonucleótido". Esta composición comprende preferiblemente o consiste en o consiste esencialmente en un oligonucleótido, como se ha descrito anteriormente.
[0202] Como se explica en el primer aspecto de la invención para ELA y DFT según la divulgación, se sabe que al menos dos repeticiones diferentes en al menos dos transcritos diferentes pueden estar implicadas en, ser responsables de, o estar vinculadas con la enfermedad. Todas las características preferidas relacionadas con cada uno de estos oligonucleótidos se han descrito en la sección titulada "Oligonucleótido".
[0203] Dicha composición está destinada a usarse como se define en las reivindicaciones adjuntas. Por lo tanto, dicha composición es una composición farmacéutica. Una composición farmacéutica comprende habitualmente un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable. En una realización preferida, una composición de la presente invención comprende un compuesto, tal y como se define en el presente documento, y comprende, además, opcionalmente una formulación farmacéuticamente aceptable, un relleno, un conservante, un solubilizante, un vehículo, un diluyente, un excipiente, una sal, un adyuvante y/o un solvente. Dicho vehículo, relleno, conservante, solubilizante, diluyente, sal, adyuvante, solvente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable se puede encontrar, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición. Baltimore, m D: Lippincott Williams y Wilkins, 2000. El compuesto descrito en la invención posee al menos un grupo ionizable. Un grupo ionizable puede ser una base o un ácido, y puede estar cargado o ser neutro. Un grupo ionizable puede estar presente como un par iónico con un contraión apropiado que lleva carga(s) opuesta(s). Los ejemplos de contraiones catiónicos son sodio, potasio, cesio, Tris, litio, calcio, magnesio, trialquilamonio, trietilamonio y tetraalquilamonio. Los ejemplos de contraiones aniónicos son cloruro, bromuro, yoduro, lactato, mesilato, acetato, trifluoroacetato, dicloroacetato y citrato. Se han descrito ejemplos de contraiones [por ejemplo, Kumar L.et al.,2008].
[0204] Una composición farmacéutica puede formularse adicionalmente para ayudar a mejorar la estabilidad, solubilidad, absorción, biodisponibilidad, farmacocinética y captación celular de dicho compuesto, en particular formulaciones que comprenden excipientes capaces de formar complejos, nanopartículas, micropartículas, nanotubos, nanogeles, hidrogeles, poloxámeros o plurónicos, polimersomas, coloides, microburbujas, vesículas, micelas, lipoplexos y/o liposomas. Los ejemplos de nanopartículas incluyen nanopartículas poliméricas, nanopartículas de oro, nanopartículas magnéticas, nanopartículas de sílice, nanopartículas lipídicas, partículas de azúcar, nanopartículas proteicas y nanopartículas peptídicas.
[0205] Una composición preferida comprende al menos un excipiente que puede ayudar, además, a mejorar el direccionamiento y/o la administración de dicha composición y/o dicho oligonucleótido a y/o dentro del tejido muscular y/o cerebral y/o a un tejido neuronal y/o una célula. Una célula puede ser una célula muscular o neuronal.
[0206] Muchos de estos excipientes se conocen en la técnica (por ejemplo, consulte Bruno, 2011) y pueden categorizarse como un primer tipo de excipiente. Los ejemplos del primer tipo de excipientes incluyen polímeros (por ejemplo, polietilenoimina (PEI), polipropilenimina (PPI), derivados de dextrano, butilcianoacrilato (PBCA), hexilcianoacrilato (PHCA), poli(ácido láctico-co-glicólico), poliaminas (por ejemplo, espermina, espermidina, putrescina, cadaverina), quitosano, poli(amido aminas) (PAMAM), poli(éster amina), polivinil éter, polivinilpirrolidona (PVP), polietilenglicol (PEG), ciclodextrinas, ácido hialurónico, ácido colomínico, y derivados de los mismos), dendrímeros (por ejemplo, poli(amidoamina)), lípidos {por ejemplo, propano de 1,2-dioleoil-3-dimetilamonio (DODAP), cloruro de dioleoildimetilamonio (DODAC), derivados de fosfatidilcolina [por ejemplo, 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC)], derivados de lisofosfatidilcolina [por ejemplo, 1-estearoil-2-lisosn-glicero-3-fosfocolina (S-LisoPC)], esfingomielina, carbamoilo de 2-{3-[bis-(3-amino-propil)-amino]-propilamino}-W-ditetracedil carbamoil metilacetamida (RPR209120), derivados de fosfoglicerol [por ejemplo, sal sódica de 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (DPPG-Na), derivados del ácido fosfatídico [sal sódica del ácido 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfaticida (DSPA), derivados de fosfatidiletanolamina [por ejemplo, dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE), 2-difitanoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DPhyPE)], N-[1-(2,3-dioleoiloxi)propil]-W,W,W-trimetilamonio (DOTAP), N-[1-(2,3-dioleiloxi)propil]-W,W,W-trimetilamonio (DOTMA), 1,3-di-oleoiloxi-2-(6-carboxi-espermil)-propilamida (DOSPER), (1,2-dimiristiloxipropil-3-dimetilhidroxietilamonio (DMRIE), (N1-colesteriloxicarbonil-3,7-diazanonano-1,9-diamina (CDAN), bromuro de dimetildioctadecilamonio (DDAB), 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicerol-3-fosfocolina (POPC), (trihidrocloruro de ácido b-L-arginil-2,3-L-diaminopropiónico-W-palmitil-W-oleil-amida (AtuFECT01), derivados de W,W-dimetil-3-aminopropano [por ejemplo, 1,2-diestearoiloxi-W,W-dimetil-3-aminopropano (DSDMA), 1,2-dioleiloxi-W,W-dimetil-3-aminopropano (DoDMA), 1,2-dilinoleiloxi-W,W-3-dimetilaminopropano (DLinDMA), 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil [1,3]-dioxolano (DLin-K-DMA), derivados de fosfatidilserina [1,2-dioleil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina, sal sódica (DOPS)], colesterol}proteínas (por ejemplo,, albúmina, gelatinas, atelocolágeno) y péptidos (por ejemplo, protamina, PepFects, NickFects, poliarginina, polilisina, CADY, MPG).
[0207] Otra composición preferida puede comprender al menos un excipiente categorizado como un segundo tipo de excipiente. Un segundo tipo de excipiente puede comprender o contener un grupo conjugado, como se describe en este documento, para mejorar el direccionamiento y/o la administración de la composición y/o del oligonucleótido de la invención a un tejido y/o una célula y/o en un tejido y/o una célula, como, por ejemplo, tejido o célula muscular o neuronal. Ambos tipos de excipientes se puede combinar juntos en una composición única, como se identifica en el presente documento. El experto en la materia puede seleccionar, combinar y/o adaptar uno o más de los excipientes y sistemas de administración alternativos anteriores u otros para formular y administrar un compuesto para su uso en la presente invención.
[0208] Dicha composición farmacéutica de la invención puede administrarse en una concentración eficaz en momentos determinados a un animal, preferiblemente un mamífero. El mamífero más preferido es un ser humano. Un oligonucleótido o una composición, tal y como se define en el presente documento, para su uso según la invención puede ser adecuado para la administración directa a una célula, un tejido y/o un órganoin vivode individuos afectados por o con riesgo de desarrollar una enfermedad o afección, como se identifica en el presente documento, y se puede administrar directamentein vivo, ex vivooin vitro.La administración puede realizarse por vías sistémica y/o parenteral, por ejemplo, vía intravenosa, subcutánea, intraventricular, intratecal, intramuscular, intranasal, enteral, intravítrea, intracerebral, epidural u oral.
[0209] Preferiblemente, dicha composición farmacéutica de la invención se puede encapsular en forma de emulsión, suspensión, píldora, comprimido, cápsula o gel blando para administración oral, o en forma de aerosol o polvo seco para administración al tracto respiratorio y los pulmones. En una realización, un oligonucleótido de la invención se puede usar junto con otro compuesto que ya se conoce que se utiliza para el tratamiento de dicha enfermedad. Estos otros compuestos se pueden usar para retardar la progresión de la enfermedad, reducir los comportamientos o movimientos anormales, reducir la inflamación del tejido muscular, mejorar la función, integridad y/o supervivencia de las fibras musculares y/o neuronas y/o mejorar, aumentar o restaurar la función cardíaca. Los ejemplos son, pero no se limitan a, un esteroide, preferiblemente un (gluco)corticosteroide, un inhibidor de la ECA (preferiblemente perindopril), un bloqueador del receptor de angiotensina II tipo 1 (preferiblemente losartán), un inhibidor del factor de necrosis tumoral alfa (TNFa), un inhibidor del TGFp (preferiblemente decorina), biglicano recombinante humano, una fuente de mIGF-1, un inhibidor de miostatina, manosa-6-fosfato, dantroleno, halofuginona, un antioxidante, un inhibidor de los canales iónicos, un inhibidor de la proteasa, un inhibidor de la fosfodiesterasa (preferiblemente un inhibidor de la PDE5, como el sildenafil o el tadalafil, y/o inhibidores de la PDE10A y/o MP-10), L-arginina, bloqueantes de la dopamina, amantadina, tetrabenazina, coenzima Q10, antidepresivos, antipsicóticos, antiepilépticos, estabilizadores del estado de ánimo en general, ácidos grasos omega-3, monohidrato de creatina, inhibidores de la KMO (quinurenina monooxigenasa), tales como CHDI246, o inhibidores de la HDAC4, como PBT2. Dicho uso combinado puede ser un uso secuencial: cada componente se administra en una composición diferente. Alternativamente, cada compuesto se puede usar en conjunto en una única composición.
Uso
[0210] En un aspecto adicional, un oligonucleótido o una composición de la invención está destinada a usarse como medicamento o parte de una terapia para prevenir, retrasar, curar, mejorar y/o tratar la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA), o la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA), tal y como se define en el conjunto de reivindicaciones adjunto. Dicho oligonucleótido o dicha composición está destinada a usarse en un método para prevenir, retrasar, curar, mejorar y/o tratar la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) o la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA). El método comprende administrar un oligonucleótido o una composición de la invención a dicho individuo o un sujeto que lo necesite. El oligonucleótido o la composición, tal y como se define en el presente documento, puede ser adecuada para la administración a una célula, un tejido y/o un órganoin vivode individuos afectados por cualquiera de las enfermedades definidas en el presente documento o con riesgo de desarrollar dicha enfermedad, y puede administrarsein vivo, ex vivooin vitro.Un individuo o un sujeto que lo necesite es preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un ser humano.
[0211] En un aspecto adicional de la divulgación, se proporciona un método para el diagnóstico, donde el oligonucleótido está provisto de un marcador radiactivo o un marcador fluorescente. En este método, un oligonucleótido se puede usar como sondain situpara detectar focos (agregados de ARN/proteicos resultantes de la expansión de repetición) en una muestra de un sujeto. Dicha muestra comprende células de dicho sujeto.
[0212] En una forma de realización, una concentración de un oligonucleótido o una composición para su uso según la invención oscila entre 0,01 nM y 1 pM. Más preferiblemente, la concentración usada es de 0,05 a 500 nM, o de 0,1 a 500 nM, o de 0,02 a 500 nM, o de 0,05 a 500 nM, aún más preferiblemente de 1 a 200 nM.
[0213] Los rangos de dosis de un oligonucleótido o una composición según la invención están diseñados preferiblemente basándose en estudios de dosis crecientes en ensayos clínicos (usoin vivo)para los cuales existen requisitos de protocolo rigurosos. Un oligonucleótido, como se define en el presente documento, se puede usar en una dosis que se oscila entre 0,01 y 200 mg/kg o entre 0,05 y 100 mg/kg o entre 0,1 y 50 mg/kg o entre 0,1 y 20 mg/kg, preferiblemente entre 0,5 y 10 mg/kg.
Los rangos de dosis de un oligonucleótido o una composición según la invención también se pueden usar en una dosis que
Oscila entre 100 y 300 pg/semana, entre 8 y 12 inyecciones en total u
Oscila entre 150 y 250 pg/semana, entre 9 y 11 inyecciones en total o
200 pg/semana, 11 inyecciones en total u
Oscila entre 10 y 350 pg/día durante dos semanas u
Oscila entre 50 y 250 pg/día durante dos semanas u
Oscila entre 100 y 200 pg/día durante dos semanas u
Oscila entre 20 y 80 pg/día durante dos semanas u
Oscila entre 200 y 320 pg/día durante dos semanas o
320 pg/día, durante dos semanas o
30 pg/día, durante dos semanas.
[0214] Los rangos de concentración o la dosis de oligonucleótido o la composición que se dieron anteriormente son concentraciones o dosis preferidas para usosin vitrooex vivo.El experto en la materia entenderá que, dependiendo de la identidad del oligonucleótido usado, la célula diana que se va a tratar, la diana del gen y sus niveles de expresión, el medio usado y las condiciones de transfección e incubación, la concentración o dosis de oligonucleótido usado puede variar aun más y puede ser necesario optimizarla aun más.
[0215] En este documento y en sus reivindicaciones, el verbo "comprender" y sus conjugaciones se usa en su sentido no limitativo para significar que se incluyen los elementos después de la palabra, pero no se excluyen los elementos que no se mencionan específicamente. El verbo "comprender" es sinónimo del verbo "tener", a menos que se indique lo contrario. Además, el verbo "consistir" se puede reemplazar por "consistir esencialmente en", lo que significa que un oligonucleótido o una composición, tal y como se define en este caso, puede comprender componente(s) adicional(es) a los identificados específicamente, sin que dicho(s) componente(s) adicional(es) altere(n) la característica exclusiva de la invención. Además, la referencia a un elemento mediante el artículo indefinido "un" o "una" no excluye la posibilidad de que estén presentes más de uno de los elementos, a menos que el contexto requiera claramente que haya solo uno de los elementos. Por lo tanto, el artículo indefinido "un" o "una" significa normalmente "al menos un/a".
Definiciones
[0216] A lo largo de la solicitud, la palabra "se une", "se dirige", "se hibrida" se puede usar indistintamente cuando se usa en el contexto de un oligonucleótido antisentido que es inversamente complementario a una parte de un pre-ARNm, como se identifica en el presente documento. En el contexto de la invención, "se hibrida" o "se une" se usa en condiciones fisiológicas en una célula, preferiblemente una célula humana, a menos que se indique lo contrario.
[0217] Como se utiliza en el presente documento, "hibridación" se refiere al emparejamiento de compuestos oligoméricos complementarios (por ejemplo, un compuesto antisentido y su ácido nucleico diana). Aunque no se limita a un mecanismo particular, el mecanismo de emparejamiento más común implica la unión de hidrógeno, que puede ser unión de hidrógeno Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen invertido, entre bases complementarias de nucleósidos o nucleótidos (nucleobases). Por ejemplo, la base natural adenina es una nucleobase complementaria a las nucleobases naturales timina, 5-metiluracilo y uracilo que se emparejan mediante la formación de enlaces hidrógeno. La base natural guanina es una nucleobase complementaria a las bases naturales citosina y 5-metil-citosina. La hibridación puede ocurrir en diversas circunstancias. En particular, la hibridación de un oligonucleótido de la invención con un pre-ARNm dirigido puede ocurrir en diversas circunstancias. De forma similar, la unión de un oligonucleótido de la invención a un pre-ARNm dirigido puede ocurrir en diversas circunstancias. Preferiblemente, dicha hibridación o dicha unión se evalúa en condiciones fisiológicas en una célula, más preferiblemente en una célula humana. Se dice preferiblemente que un oligonucleótido de la invención puede unirse a, o es capaz de unirse a, o puede hibridarse con, o es capaz de hibridarse con, cuando dicha unión o dicha hibridación ocurre en condiciones fisiológicas en una célula, preferiblemente una célula humana.
[0218] Como se utiliza en el presente documento, "nucleótido" se refiere a un nucleósido que comprende, además, un grupo de enlace fosfato modificado o no modificado o un enlace intemucleósido que no es de fosfato.
[0219] Como se utiliza en el presente documento, "análogo del nucleótido" o "equivalente de nucleótido" se refiere a un nucleótido, que comprende al menos una modificación con respecto a los nucleótidos que se encuentran de forma natural en el ARN, tales como A, C, G y U. Dicha modificación puede ser una modificación de enlace intemucleósido y/o una modificación de azúcar y/o una modificación de base.
[0220] Como se utiliza en el presente documento, "monómero" se refiere a un precursor en la síntesis de un compuesto oligomérico o polimérico. Además, la unidad monomérica o el residuo dentro de dicho compuesto oligomérico o polimérico se incluye en el término "monómero". Por lo tanto, "monómero" y "residuo de nucleótido" se pueden usar indistintamente a lo largo de la descripción. Dentro del contexto de la presente invención, un monómero es preferiblemente un nucleótido. Los monómeros preferidos que se van a incorporar en los oligonucleótidos según la divulgación o de la invención son nucleótidos que comprenden un sustituyente 2'-0-metilo, un enlace internucleósido de fosforotioato y una nucleobase de 5-metilpirimidina y/o una nucleobase de 2,6-diaminopurina.
[0221] Como se utiliza en el presente documento, "nucleobase" se refiere a la porción de base heterocíclica de un nucleósido. Las nucleobases pueden ser de origen natural o pueden estar modificadas y, por lo tanto, incluyen, pero de forma no limitativa, adenina, citosina, guanina, uracilo, timina y sus análogos, como la 5-metilcitosina. En determinadas formas de realización, una nucleobase puede comprender cualquier átomo o grupo de átomos capaz/ces de unirse por enlaces hidrógeno a una base de otro ácido nucleico. Tal y como se utiliza en el presente documento, "T<m>" significa temperatura de fusión, que es la temperatura a la que se separan las dos cadenas de un ácido nucleico dúplex. T<m>se utiliza a menudo como una medida de estabilidad del dúplex o la afinidad de unión de un compuesto antisentido hacia una molécula de ARN complementaria.
[0222] Como se utiliza en el presente documento, "modificado/a en 2'" o "sustituido/a en 2'" se refiere a un nucleósido que comprende un azúcar pentosa que comprende un sustituyente en la posición 2' distinto de H u OH. Los nucleósidos modificados en 2' incluyen, entre otros, nucleósidos bicíclicos en los que el puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de azúcar conecta el carbono en 2' y otro carbono del anillo de azúcar; y nucleósidos con sustituyentes en 2' sin puente, tales como alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C<1>-C<10>, -OCF<3>, O-(CH<2>)<2>-O-CH<s>, 2'-O(CH<2>)<2>SCH<s>, O-(CH<2>)<2>-O-N(R<m>)(R<n>), o O-CH<2>-C(=O)-N(R<m>)(R<n>), donde cada R<m>y R<n>es, independientemente, H o alquilo C<1>-C<10>sustituido o no sustituido. Los nucleósidos modificados en 2' pueden comprender, además, otras modificaciones, por ejemplo, en otras posiciones del azúcar y/o en la nucleobase.
[0223] Como se utiliza en el presente documento, "2'-0-Me", "2'-OMe" o "2-OCH<3>" o "2'-0-metilo" se refiere cada uno a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo -OCH<3>en la posición 2' del anillo de azúcar.
[0224] Como se utiliza en el presente documento, "MOE" o "2'-MOE" o "2'-OCH<2>CH<2>OCH<3>" o "2'-0-metoxietilo" se refieren cada uno a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo -OCH<2>CH<2>OCH<3>en la posición 2' del anillo de azúcar.
[0225] Como se utiliza en el presente documento, el término "análogo de la adenina" significa una nucleobase de purina modificada químicamente que, cuando se incorpora a un oligómero, es capaz de formar un par de bases con una timina o un uracilo de una cadena complementaria de ARN o ADN. Preferiblemente, dicho par de bases es un par de bases Watson-Crick, pero análogos y ligeras desviaciones del mismo también se consideran permitidos dentro del contexto de la presente invención.
[0226] Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "análogo del uracilo" significa una nucleobase de pirimidina modificada químicamente que, cuando se incorpora a un oligómero, es capaz de formar un par de bases con una adenina de una cadena complementaria de ARN o ADN. Preferiblemente, dicho par de bases es un par de bases Watson-Crick, pero análogos y ligeras desviaciones del mismo os también se consideran permitidos dentro del contexto de la presente invención.
[0227] Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "análogo de la timina" significa una nucleobase de pirimidina modificada químicamente que, cuando se incorpora a un oligómero, es capaz de formar un par de bases con una adenina de una cadena complementaria de ARN o ADN. Preferiblemente, dicho par de bases es un par de bases Watson-Crick, pero análogos y ligeras desviaciones del mismo también se consideran permitidos dentro del contexto de la presente invención.
[0228] Como se utiliza en el presente documento, el término "análogo de la citosina" significa una nucleobase de pirimidina modificada químicamente que, cuando se incorpora a un oligómero, es capaz de formar un par de bases con una guanina de una cadena complementaria de ARN o ADN. Por ejemplo, un análogo de la citosina puede ser una 5-metilcitosina. Preferiblemente, dicho par de bases es un par de bases Watson-Crick, pero análogos y ligeras desviaciones del mismo también se consideran permitidos dentro del contexto de la presente invención.
[0229] Como se utiliza en el presente documento, el término "análogo de la guanina" significa una nucleobase de purina modificada químicamente que, cuando se incorpora a un oligómero, es capaz de formar un par de bases con una citosina de una cadena complementaria de ARN o ADN. Preferiblemente, dicho par de bases es un par de bases Watson-Crick, pero análogos y ligeras desviaciones del mismo también se consideran permitidos dentro del contexto de la presente invención.
[0230] Como se utiliza en el presente documento, el término "guanosina" se refiere a un nucleósido o nucleósido modificado de azúcar que comprende una nucleobase de guanina o análoga de la guanina.
[0231] Como se utiliza en el presente documento, el término "uridina" se refiere a un nucleósido o un nucleósido modificado de azúcar que comprende una nucleobase de uracilo o análoga del uracilo.
[0232] Como se utiliza en el presente documento, el término "timidina" se refiere a un nucleósido o nucleósido modificado de azúcar que comprende una nucleobase de timina o análoga de la timina.
[0233] Como se utiliza en el presente documento, el término "citidina" se refiere a un nucleósido o nucleósido modificado de azúcar que comprende una nucleobase de citosina o análoga de la citosina.
[0234] Como se utiliza en el presente documento, el término "adenosina" se refiere a un nucleósido o nucleósido modificado de azúcar que comprende una nucleobase de adenina o análoga de la adenina.
[0235] Como se utiliza en el presente documento, "oligonucleótido" se refiere a un compuesto que comprende una pluralidad de nucleósidos enlazados. En determinadas formas de realización, se modifica uno o más de la pluralidad de nucleósidos. En determinadas formas de realización, un oligonucleótido comprende uno o más ribonucleósidos (ARN) y/o desoxirribonucleósidos (ADN).
[0236] Como se utiliza en el presente documento, "enlace internucleósido" se refiere a un enlace covalente entre nucleósidos adyacentes. Un enlace internucleósido puede ser un enlace internucleósido de origen natural, es decir, un enlace fosfodiéster de 3' a 5', o un enlace internucleósido modificado. Como se utiliza en el presente documento, "enlace internucleósido modificado" se refiere a cualquier enlace internucleósido distinto de un enlace internucleósido de origen natural.
[0237] Como se utiliza en el presente documento, "esqueleto" se refiere a la cadena de restos de azúcar alternantes y enlaces internucleósidos, como ocurre en un oligonucleótido. El oligonucleótido de la divulgación comprende al menos un enlace internucleósido de fosforoditioato, pero debe entenderse que pueden estar presentes más modificaciones del esqueleto, como modificaciones de azúcar y/o modificaciones de enlaces internucleósidos en el esqueleto.
[0238] Como se utiliza en el presente documento, "compuesto oligomérico" se refiere a una estructura polimérica que comprende dos o más subestructuras. En determinadas formas de realización, un compuesto oligomérico es un oligonucleótido. En determinadas formas de realización, un compuesto oligomérico es un oligonucleótido monocatenario. En determinadas formas de realización, un compuesto oligomérico es un dúplex bicatenario que comprende dos oligonucleótidos. En determinadas formas de realización, un compuesto oligomérico es un oligonucleótido monocatenario o bicatenario que comprende uno o más grupos conjugados y/o grupos terminales.
[0239] Como se utiliza en el presente documento, "conjugado" se refiere a un átomo o grupo de átomos unidos a un compuesto oligonucleótido u oligomérico. En general, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del compuesto al que están unidos, incluidos, pero de forma no limitada a, farmacodinámica, farmacocinética, unión, absorción, distribución celular, captación celular, carga y depuración. Los grupos conjugados se utilizan rutinariamente en las técnicas químicas y están unidos directamente o a través de un resto de enlace o un grupo de enlace opcional al compuesto parental, como un compuesto oligomérico. En determinadas formas de realización, grupos conjugados incluyen, sin limitación, intercaladores, moléculas indicadoras, poliaminas, poliamidas, polietilenglicoles, tioéteres, poliéteres, colesteroles, tiocolesteroles, restos de ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodamina, cumarinas y colorantes. En determinadas formas de realización, los conjugados son grupos terminales. En determinadas formas de realización, los conjugados se unen a un nucleósido terminal 3' o 5' o a un nucleósido interno de un oligonucleótido.
[0240] Como se utiliza en el presente documento, "grupo de enlace conjugado" se refiere a cualquier átomo o grupo de átomos utilizados para unir un conjugado a un oligonucleótido o compuesto oligomérico. Los grupos de unión o los restos de enlace bifuncionales, como los conocidos en la técnica, son susceptibles de aplicación en la presente invención.
[0241] Como se utiliza en el presente documento, "compuesto antisentido" se refiere a un compuesto oligomérico, al menos cuya una porción es al menos parcialmente complementaria a, o está al menos parcialmente dirigida a, un ácido nucleico diana con el que se hibrida y modula la actividad, el procesamiento o la expresión de dicho ácido nucleico diana.
[0242] Como se utiliza en el presente documento, "expresión" se refiere al proceso por el cual un gen finalmente da como resultado una proteína. La expresión incluye, pero de forma no limitada, transcripción, empalme, modificación postranscripcional y traducción.
[0243] Como se utiliza en el presente documento, "oligonucleótido antisentido" se refiere a un compuesto antisentido que es un oligonucleótido.
[0244] Como se utiliza en el presente documento, "actividad antisentido" se refiere a cualquier actividad detectable y/o medible atribuible a la hibridación de un compuesto antisentido con su ácido nucleico diana. En determinadas formas de realización, dicha actividad puede ser un aumento o una disminución en una cantidad de un ácido nucleico o una proteína. En determinadas formas de realización, dicha actividad puede ser un cambio en la proporción de variantes de empalme de un ácido nucleico o una proteína. La detección y/o medición de la actividad antisentido puede ser directa o indirecta. En determinadas formas de realización, la actividad antisentido se evalúa observando un cambio fenotípico en una célula o un animal.
[0245] Como se utiliza en el presente documento, "ácido nucleico diana" se refiere a cualquier molécula de ácido nucleico cuya expresión, cantidad o actividad es capaz de ser modulada por un compuesto antisentido. En determinadas formas de realización, el ácido nucleico diana es ADN o ARN. En determinadas formas de realización, el ARN diana es miARN, ARNm, pre-ARNm, ARN no codificante, o transcritos antisentido naturales. Por ejemplo, el ácido nucleico diana puede ser un gen celular (o ARNm transcrito a partir del gen), cuya expresión está asociada a un trastorno o un estado patológico particular.
[0246] Como se utiliza en el presente documento, "ARNm diana" se refiere a una molécula de ARN preseleccionada que codifica una proteína.
[0247] Como se utiliza en el presente documento, "que se dirige" o "dirigido/a a" se refiere a la asociación de un compuesto antisentido a una molécula de ácido nucleico diana particular o una región particular de nucleótidos dentro de una molécula de ácido nucleico diana. Un compuesto antisentido se dirige a un ácido nucleico diana si es suficientemente complementario en sentido inverso al ácido nucleico diana para permitir la hibridación en condiciones fisiológicas. En este contexto, "suficientemente complementario/a en sentido inverso" puede ser al menos un 90 %, 95 %, 97 %, 99 % o 100 % inversamente complementario de dicha molécula de ácido nucleico diana.
[0248] Como se utiliza en el presente documento, "sitio diana" se refiere a una región de un ácido nucleico diana que está unida por un compuesto antisentido. En determinadas formas de realización, un sitio diana está al menos parcialmente en la región 3' no traducida de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana está al menos parcialmente en la región 5' no traducida de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana se encuentra al menos parcialmente dentro de la región traducida de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana se encuentra al menos parcialmente dentro de un exón de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana se encuentra al menos parcialmente dentro de un intrón de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana se encuentra al menos parcialmente dentro de un sitio diana de miARN de una molécula de ARN. En determinadas formas de realización, un sitio diana se encuentra al menos parcialmente dentro de una región de repetición de una molécula de ARN.
[0249] Como se utiliza en el presente documento, "proteína diana" se refiere a una proteína, cuya expresión está modulada por un compuesto antisentido. En determinadas formas de realización, una proteína diana está codificada por un ácido nucleico diana. En determinadas formas de realización, la expresión de una proteína diana está influenciada de otra manera por un ácido nucleico diana.
[0250] Como se utiliza en el presente documento, "complementariedad" en referencia a nucleobases se refiere a una nucleobase que es capaz de emparejarse con otra nucleobase. Por ejemplo, en el ADN, la adenina (A) es complementaria a la timina (T). Por ejemplo, en el ARN, la adenina (A) es complementaria al uracilo (U). En determinadas formas de realización, la nucleobase complementaria se refiere a una nucleobase de un compuesto antisentido que es capaz de emparejarse con una nucleobase de su ácido nucleico diana. Por ejemplo, si una nucleobase en una determinada posición de un compuesto antisentido es capaz de formar enlaces hidrógeno con una nucleobase en una determinada posición de un ácido nucleico diana, entonces la posición del enlace hidrógeno entre el oligonucleótido y el ácido nucleico diana se considera complementaria a ese par de nucleobases. Las nucleobases que comprenden determinadas modificaciones pueden mantener la capacidad de emparejarse con una nucleobase homóloga y, por lo tanto, aun son capaces de la complementariedad de nucleobases.
[0251] Como se utiliza en el presente documento, "no complementario/a" en referencia a nucleobases se refiere a un par de nucleobases que no forman enlaces hidrógeno entre sí ni admiten de otro modo la hibridación.
[0252] Como se utiliza en el presente documento, "complementario/a" en referencia a nucleósidos, oligonucleótidos o ácidos nucleicos unidos, se refiere a la capacidad de un compuesto oligomérico de hibridarse con otro compuesto oligomérico o ácido nucleico a través de la complementariedad de nucleobases. En determinadas formas de realización, un compuesto antisentido y su diana son complementarios entre sí cuando una cantidad suficiente de posiciones correspondientes en cada molécula están ocupadas por nucleobases que pueden unirse entre sí para permitir una asociación estable entre el compuesto antisentido y la diana. Un experto en la materia reconoce que la inclusión de incompatibilidades es posible sin eliminar la capacidad de los compuestos oligoméricos de permanecer en asociación. Por lo tanto, en el presente documento se describen compuestos antisentido que pueden comprender hasta aproximadamente un 20 % de nucleótidos que no coinciden (es decir, no son complementarios en cuanto a nucleobases de los nucleótidos correspondientes de la diana). Preferiblemente, los compuestos antisentido no contienen más de aproximadamente el 15 %, más preferiblemente no más de aproximadamente el 10 %, más preferiblemente no más del 5 % o ninguna incompatibilidad. Los nucleótidos restantes son complementarios a la nucleobase o, de otro modo, no alteran la hibridación (por ejemplo, bases universales). Un experto en la materia reconocería que los compuestos proporcionados en este documento son al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 %, al menos 99 % o 100 % complementarios a un ácido nucleico diana o tienen complementariedad inversa a un ácido nucleico diana.
[0253] Como se utiliza en el presente documento, "modulación" se refiere a una perturbación de la cantidad o calidad de una función o actividad en comparación con la función o actividad antes de la modulación. Por ejemplo, la modulación incluye el cambio, ya sea un aumento (estimulación o inducción) o una disminución (inhibición o reducción) en la expresión génica. Como ejemplo adicional, la modulación de expresión puede incluir la alteración de la selección del sitio de empalme del procesamiento del pre-ARNm, lo que da como resultado un cambio en la cantidad de una variante de empalme particular presente en comparación con las condiciones que no se alteraron. Como ejemplo adicional, la modulación incluye alterar la traducción de una proteína.
[0254] Como se utiliza en el presente documento, "motivo" se refiere a un patrón de modificaciones en un compuesto oligomérico o una región del mismo. Los motivos se pueden definir mediante modificaciones en determinados nucleósidos y/o en determinados grupos de enlace de un compuesto oligomérico.
[0255] Como se utiliza en el presente documento, "las mismas modificaciones" se refieren a modificaciones con respecto a moléculas de origen natural que son iguales entre sí, incluida la ausencia de modificaciones. Por lo tanto, por ejemplo, dos nucleósidos de ADN no modificados tienen "la misma modificación", aunque el nucleósido de ADN no esté modificado.
[0256] Como se utiliza en el presente documento, "tipo de modificación", en referencia a un nucleósido o un nucleósido de un "tipo", se refiere a la modificación de un nucleósido e incluye nucleósidos modificados y no modificados. En consecuencia, a menos que se indique lo contrario, un "nucleósido que tiene una modificación de un primer tipo" puede ser un nucleósido no modificado.
[0257] Como se utiliza en el presente documento, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales de compuestos activos que conservan la actividad biológica deseada del compuesto activo y no le imparten efectos toxicológicos no deseados.
[0258] Como se utiliza en el presente documento, el término "independientemente" significa que cada aparición de una variable repetitiva dentro de un oligonucleótido reivindicado se selecciona independientemente de las demás. Por ejemplo, cada variable repetitiva se puede seleccionar de modo que (i) cada una de las variables repetitivas sea la misma, (ii) dos o más sean iguales, o (iii) cada una de las variables repetitivas pueda ser diferente.
Definiciones de química general
[0259] Como se utiliza en el presente documento, "alquilo" se refiere a un sustituyente o radical hidrocarbonado saturado, lineal o ramificado, que contiene normalmente hasta veinticuatro átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero de forma no limitativa, metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, n-hexilo, octilo, decilo, dodecilo y similares. Los grupos alquilo incluyen normalmente de 1 a 24 átomos de carbono, más normalmente de 1 a 12 átomos de carbono (alquilo C1-C12), donde se prefieren más de 1 a 6 átomos de carbono (alquilo C1-C6). El término "alquilo inferior", como se utiliza en el presente documento, incluye de 1 a 6 átomos de carbono (alquilo Cr Ca). Los grupos alquilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente uno o más sustituyentes adicionales.
[0260] Como se utiliza en el presente documento, "alquenilo" se refiere a un radical o sustituyente de cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, que contiene normalmente hasta veinticuatro átomos de carbono y que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, pero de forma no limitativa, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-2-buten-1-ilo, dienos, como 1,3-butadienilo y similares. Los grupos alquenilo incluyen normalmente de 2 a 24 átomos de carbono, más normalmente de 2 a 12 átomos de carbono, donde se prefieren más de 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquenilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente uno o más sustituyentes adicionales.
[0261] Como se utiliza en el presente documento, "alquinilo" se refiere a un radical o sustituyente hidrocarbonado lineal o ramificado, que contiene normalmente hasta veinticuatro átomos de carbono, y que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono. Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen, pero de forma no limitativa, etinilo, I-propinilo, l-butinilo y similares. Los grupos alquinilo incluyen normalmente de 2 a 24 átomos de carbono, más normalmente de 2 a 12 átomos de carbono, donde se prefiere más de 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquinilo, como se utiliza en el presente documento, pueden contener opcionalmente uno o más sustituyentes adicionales.
[0262] Como se utiliza en el presente documento, "aminoalquilo" se refiere a un radical o sustituyente alquilo sustituido con amino. Este término pretende incluir grupos alquilo C1-C12 que tienen un sustituyente amino en cualquiera posición y donde el grupo aminoalquilo está unido a la molécula parental a través de su resto alquilo. Las porciones alquilo y/o amino del grupo aminoalquilo puede estar sustituidas opcionalmente, además, por sustituyentes adicionales.
[0263] Como se utiliza en el presente documento, "alifático" se refiere a un radical o sustituyente hidrocarbonado lineal o ramificado, que contiene normalmente hasta veinticuatro átomos de carbono, donde la saturación entre dos átomos de carbono es un enlace simple, doble o triple. Un grupo alifático contiene preferiblemente de 1 a 24 átomos de carbono, más normalmente de 1 a 12 átomos de carbono, donde es más preferido de 1 a 6 átomos de carbono. La cadena lineal o ramificada de un grupo alifático puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos que incluyen nitrógeno, oxígeno, azufre y fósforo. Dichos grupos alifáticos interrumpidos por heteroátomos incluyen, sin limitación, polialcoxis, tales como polialquilenglicoles, poliaminas y poliiminas. Los grupos alifáticos, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0264] Como se utiliza en el presente documento, "alicíclico" o "aliciclilo" se refiere a un radical o sustituyente cíclico, donde el sistema de anillo es alifático. El sistema anular puede comprender uno o más anillos, donde al menos un anillo es alifático. Los restos alicíclicos preferidos incluyen anillos que tienen de 5 a 9 átomos de carbono en el anillo. Los grupos alicíclicos, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0265] Como se utiliza en el presente documento, "alcoxi" se refiere a un radical o sustituyente que comprende un grupo alquilo y un átomo de oxígeno, donde el grupo alcoxi está unido a una molécula parental a través de su átomo de oxígeno. Los ejemplos de grupos alcoxi incluyen, pero de forma no limitativa, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, n-pentoxi, neopentoxi, n-hexoxi y similares. Los grupos alcoxi, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0266] Como se utiliza en el presente documento, "halo", "haluro" y "halógeno" se refieren a un átomo, radical o sustituyente seleccionado de entre flúor, cloro, bromo y yodo.
[0267] Como se utiliza en el presente documento, "arilo" y "aromático" se refieren a un radical o sustituyente que comprende un sistema de anillo carbocíclico monocíclico o policíclico que tiene uno o más anillos aromáticos. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero de forma no limitativa, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, idenilo y similares. Los sistemas de anillo de arilo preferidos tienen de 5 a 20 átomos de carbono en uno o más anillos. Los grupos arilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0268] Como se utiliza en el presente documento, "aralquilo" y "arilalquilo" se refieren a un radical o sustituyente que comprende un grupo alquilo y un grupo arilo, donde el aralquilo o grupo arilalquilo está unido a una molécula parental a través de su resto alquilo. Los ejemplos incluyen, pero de forma no limitativa, bencilo, fenetilo y similares. Los grupos aralquilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales unidos al alquilo, al arilo o a ambos restos que forman el radical o sustituyente.
[0269] Como se utiliza en el presente documento, "heterociclilo" se refiere a un radical o sustituyente que comprende un sistema de anillos monocíclico o policíclico que incluye al menos un heteroátomo y está insaturado, parcialmente saturado o completamente saturado, por lo que incluye grupos heteroarilo. El heterociclilo también incluye restos de sistemas de anillo fusionados, donde uno o más de los anillos fusionados contienen al menos un heteroátomo y los otros anillos puede contener uno o más heteroátomos u opcionalmente no contener ningún heteroátomo. Un grupo heterocíclico incluye normalmente al menos un átomo seleccionado de entre azufre, nitrógeno u oxígeno. Los ejemplos de grupos heterocíclicos incluyen [1,3]dioxolano, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, quinoxalinilo, piridazinonilo, tetrahidrofurilo y similares. Los grupos heterocíclicos, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales. Como se utilizan en el presente documento, "heteroarilo" y "heteroaromático" se refieren a un radical o sustituyente que comprende un anillo aromático monocíclico o policíclico, o un sistema de anillos fusionados, donde al menos uno de los anillos es aromático e incluye uno o más heteroátomos. El término heteroarilo también incluye sistemas de anillos fusionados que incluyen sistemas en los que uno o más de los anillos fusionados no contienen heteroátomos. Los grupos heteroarilo incluyen normalmente un átomo de anillo seleccionado de entre azufre, nitrógeno u oxígeno. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero de forma no limitativa, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolil, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzooxazolilo, quinoxalinilo y similares. Los radicales o sustituyentes heteroarilo se pueden unir a una molécula parental directamente o a través de un resto de enlace, como un grupo alifático o un heteroátomo. Los grupos heteroarilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0270] Como se utiliza en el presente documento, "heteroarilalquilo" se refiere a un radical o sustituyente que comprende un grupo heteroarilo, como se definió previamente, y un resto alquilo, donde el grupo heteroarilalquilo está unido a una molécula parental través de su resto alquilo. Los ejemplos incluyen, pero de forma no limitativa, piridinilmetilo, pirimidiniletilo, naptiridinilpropilo y similares. Los grupos heteroarilalquilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales en una o ambas porciones heteroarilo o alquilo.
[0271] Como se utiliza en el presente documento, "monocíclico o policíclico" se refiere a cualquiera de los sistemas de anillos, como un anillo único o un sistema policíclico que tiene anillos que están fusionados o enlazados, y se pretende que incluya sistemas de anillos únicos y mezclados seleccionados individualmente de entre alifáticos, alicíclicos, arilo, heteroarilo, aralquilo, arilalquilo, heterocíclicos, heteroarilo, heteroaromáticos y heteroarilalquilo. Dichas estructuras monocíclicas y policíclicas pueden contener anillos que tienen un grado de saturación uniforme o variable, que incluye completamente anillos saturados, parcialmente saturados o completamente insaturados. Cada anillo puede comprender átomos de anillo seleccionados de entre C, N, O y S para dar lugar a anillos heterocíclicos, así como a anillos que comprenden solamente átomos de anillo C. Los anillos de carbono heterocíclicos y de todos los carbonos pueden estar presentes en un motivo mixto, como, por ejemplo, bencimidazol, donde un anillo del sistema de anillos fusionados tiene solo átomos de carbono en el anillo y el otro anillo tiene dos átomos de nitrógeno. Las estructuras monocíclicas o policíclicas se pueden sustituir, además, por sustituyentes, tales como, por ejemplo, ftalimida, que tiene dos grupos oxo (=O) unidos a uno de los anillos. En otro aspecto, las estructuras monocíclicas o policíclicas se pueden unir a una molécula parental directamente a través de un átomo de anillo, a través de un sustituyente o un resto de enlace bifuncional.
[0272] Como se utiliza en el presente documento, "acilo" se refiere a un radical o sustituyente que comprende un resto carbonilo (C=O o -C(O)-) y un sustituyente adicional X, donde el grupo acilo está unido a una molécula parental a través de su resto carbonilo. Como tal, un grupo acilo se obtiene formalmente mediante la eliminación de un grupo hidroxilo de un ácido orgánico y tiene la fórmula general -C(O)-X, donde X es normalmente alifático, alicíclico o aromático. El término "acilo" también pretende incluir radicales heteroacilo o sustituyentes con la fórmula general -Y(O)n-X, donde X es como se definió anteriormente e Y(O)n es normalmente sulfonilo, sulfinilo o fosfato. Los ejemplos de grupos acilo incluyen carbonilos alifáticos, carbonilos aromáticos, sulfonilos alifáticos, sulfinilos aromáticos, sulfinilos alifáticos, fosfatos aromáticos, fosfatos alifáticos y similares. Los grupos acilo, como se utilizan en el presente documento, pueden contener opcionalmente sustituyentes adicionales.
[0273] Como se utiliza en el presente documento, "sustituyente" y "grupo sustituyente" incluyen grupos que se añaden normalmente a otros sustituyentes o compuestos parentales para mejorar las propiedades deseadas o proporcionar los efectos deseados. Los grupos sustituyentes pueden estar protegidos o no protegidos y pueden estar unidos a un sitio disponible o a muchos sitios disponibles en un compuesto parental. Los grupos sustituyentes también pueden sustituirse por otros grupos sustituyentes y pueden unirse directamente o a través de un grupo de enlace, como un grupo alquilo o hidrocarbilo, a un compuesto parental. En el presente documento, "hidrocarbilo" se refiere a cualquier grupo que comprenda C, O y H. Se incluyen grupos lineales, ramificados y cíclicos que tienen cualquier grado de saturación. Dichos grupos hidrocarbilo pueden incluir uno o más heteroátomos seleccionados de entre N, O y S y pueden estar sustituidos, además, por uno o más sustituyentes.
[0274] A menos que se indique lo contrario, el término "sustituido" u "opcionalmente sustituido" se refiere a la presencia (opcional) de cualquiera de los siguientes sustituyentes: halógeno, hidroxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo (-C(O)Raa), carboxilo (-C(O)O-Raa), grupos alifáticos, grupos alicíclicos, alcoxi, oxo sustituido (-O<R>aa<) , a r i l o , a r a lq u i l o , h e t e r o c í c l i c o , h e t e r o a r i l o , h e t e r o a r i l a l q u i l o , a m in o ( - N R>bb<R>cc<) , im i n o ( = N R>bb<) , a m id o ( -C ( O ) N R>bb<R>cc<o - N ( R>bb<) C ( O ) R>aa<) , a z i d o ( - N>3<) , n i t r o ( - N O>2<) , c i a n o ( - C N ) , c a r b a m id o ( - O C ( O ) N R>bb<R>cc<o -N ( R>bb<) C ( O ) O R>aa<) , u r e id o ( - N ( R>bb<) C ( O ) N R>bb<R>cc<) , t i o u r e i d o ( - N ( R>bb<) C ( S ) N R>bb<R>cc<) , g u a n id i n i l o ( -N ( R>bb<) C ( = N R>bb<) N R>bb<R>cc<) , a m id i n i l o ( - C ( = N R>bb<) N R>bb<R>cc<o - N ( R>bb<) C ( N R>bb<) R>aa<) , t i o l ( - S R>bb<) , s u l f i n i l o ( - S ( O ) R>bb<), s u l f o n i l o ( - S ( O )>2<R>bb<) , s u l f o n a m i d i l o ( - S ( O )>2<N R>bb<R>cc<o - N ( R>bb<) S ( O )>2<R>bb<) y g r u p o s c o n j u g a d o s . E n e s t e d o c u m e n t o , c a d a R>aa<, R>bb<y R>cc<e s , i n d e p e n d ie n t e m e n t e , H , u n g r u p o f u n c io n a l q u í m ic o o p c i o n a l m e n t e e n l a z a d o o u n>s u s t i t u y e n t e a d i c io n a l , p r e f e r i b l e m e n t e , p e r o s in l i m i t a c ió n , s e l e c c io n a d o d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n H , a lq u i l o , a l q u e n i lo , a l q u in i lo , a l i f á t i c o , a l c o x i , a c i lo , a r i l o , a r a lq u i l o , h e t e r o a r i l o , h e t e r o c í c l i c o a l i c í c l i c o y h e t e r o a r i l a lq u i lo . L o s s u s t i t u y e n t e s s e l e c c io n a d o s e n lo s c o m p u e s t o s d e s c r i t o s e n e s t e d o c u m e n t o e s t á n p r e s e n t e s e n u n g r a d o r e c u r r e n t e .
[ 0275 ] E n e s t e c o n t e x t o , " s u s t i t u y e n t e r e c u r r e n t e " s i g n i f i c a q u e u n s u s t i t u y e n t e p u e d e i n c lu i r o t r o e j e m p lo d e l m is m o . D e b id o a la n a t u r a le z a r e c u r r e n t e d e d i c h o s s u s t i t u y e n t e s , t e ó r i c a m e n t e , p u e d e e s t a r p r e s e n t e u n g r a n n ú m e r o e n c u a l q u i e r r e i v i n d i c a c ió n d a d a . U n e x p e r t o e n la m a t e r i a d e la q u í m ic a m e d ic i n a l y la q u í m ic a o r g á n i c a e n t i e n d e q u e e l n ú m e r o t o t a l d e d i c h o s s u s t i t u y e n t e s e s t á r a z o n a b le l i m i t a d o p o r la s p r o p i e d a d e s d e s e a d a s d e l c o m p u e s t o e n c u e s t ió n . D i c h a s p r o p i e d a d e s in c lu y e n , a m o d o d e e j e m p lo y n o d e l i m i t a c ió n , p r o p i e d a d e s f í s i c a s , c o m o p e s o m o le c u la r , s o l u b i l i d a d o lo g a r i t m o P , p r o p i e d a d e s d e a p l i c a c i ó n , c o m o a c t i v i d a d c o n t r a la d i a n a e n c u e s t i ó n y p r o p i e d a d e s p r á c t i c a s , c o m o f a c i l i d a d d e s í n t e s i s .
[ 0276 ] L o s s u s t i t u y e n t e s r e c u r r e n t e s s o n u n a s p e c t o p r e v i s t o d e la in v e n c ió n . U n a p e r s o n a c o n c o n o c im ie n t o s b á s i c o s e n e l c a m p o d e la q u í m ic a m e d ic i n a l y o r g á n i c a c o m p r e n d e la v e r s a t i l i d a d d e d i c h o s s u s t i t u y e n t e s . E n la m e d id a e n q u e e s t é n p r e s e n t e s s u s t i t u y e n t e s r e c u r r e n t e s e n u n a r e i v i n d i c a c ió n d e la in v e n c ió n , e l n ú m e r o t o t a l s e d e t e r m i n a r á c o m o s e e s t a b l e c ió a n t e r io r m e n t e .
[ 0277 ] C o m o s e u t i l i z a e n e l p r e s e n t e d o c u m e n t o , u n c e r o ( 0 ) e n u n r a n g o q u e in d ic a n ú m e r o d e u n a u n id a d p a r t i c u l a r s i g n i f i c a q u e la u n i d a d p u e d e e s t a r a u s e n t e . P o r e j e m p lo , u n c o m p u e s t o o l i g o m é r i c o q u e c o m p r e n d e 0 2 r e g io n e s d e u n m o t i v o p a r t i c u l a r s i g n i f i c a q u e e l c o m p u e s t o o l i g o m é r i c o p u e d e c o m p r e n d e r u n a o d o s d e d i c h a s r e g io n e s q u e t i e n e n e l m o t i v o p a r t i c u l a r , o e l c o m p u e s t o o l i g o m é r i c o p u e d e n o t e n e r n i n g u n a r e g ió n c o n e l m o t i v o p a r t i c u l a r . E n c a s o s e n lo s q u e u n a p o r c ió n in t e r n a d e u n a m o lé c u la e s t á a u s e n t e , l a s p o r c io n e s q u e f l a n q u e a n la p o r c ió n a u s e n t e e s t á n u n i d a s d i r e c t a m e n t e e n t r e s í . A s i m i s m o , e l t é r m in o " n i n g u n o / a " , c o m o s e u t i l i z a e n e l p r e s e n t e d o c u m e n t o , in d ic a q u e u n a d e t e r m i n a d a c a r a c t e r í s t i c a n o e s t á p r e s e n t e . C o m o s e u t i l i z a e n e l p r e s e n t e d o c u m e n t o , " a n á lo g o / a " o " d e r i v a d o / a " s i g n i f i c a u n c o m p u e s t o o u n r e s t o s im i l a r e n e s t r u c t u r a , p e r o d i f e r e n t e , c o n r e s p e c t o a la c o m p o s i c ió n e l e m e n t a l d e l c o m p u e s t o p a r e n t a l , i n d e p e n d ie n t e m e n t e d e c ó m o s e h a y a e l a b o r a d o e l c o m p u e s t o . P o r e j e m p lo , n o e s n e c e s a r i o e l a b o r a r u n c o m p u e s t o a n á lo g o o d e r i v a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o p a r e n t a l c o m o u n m a t e r i a l d e p a r t id a q u í m ic o .
[ 0278 ] L o s s ig u ie n t e s e j e m p lo s s e o f r e c e n s o l o c o n f i n e s i l u s t r a t i v o s , y n o t ie n e n p o r o b j e t o l i m i t a r e l a l c a n c e d e la p r e s e n t e in v e n c ió n d e n i n g u n a m a n e r a .
Leyendas de la figura
<[ 0 2 7 9 ] F ig u ra 1.>Ensayo de actividad in v itro para (XYG)<7>en el que X = 5-metilcitosina e Y=U (PS659 SEQ ID N.°: 90; derivado de SEQ ID N.°: 2) y (XYG^ en el que X=C e Y es 5-metiluracilo (PS661 SEQ ID N.°: 97; derivado de SEQ ID N.°: 3)<. P S 6 5 9>(1a)<y>pS661(1b)<s e t r a n s f e c t a r o n e n f i b r o b l a s t o s d e E H ( G M 0 4 0 2 2 ) a>c o n c e n t r a c i o n e s c r e c ie n t e s ( 0 , 5 - 200 n M ) . L a e f i c a c i a y s e l e c t i v i d a d s e d e t e r m i n a r o n c o n R T - P C R y a n á l i s i s d e l<d i s p o s i t i v o " la b o n a c h ip " . S e c o m p a r ó e l s i l e n c i a m i e n t o d e lo s t r a n s c r i t o s d e H T T e x p a n d id o s>((Ca G)<44>)<y s a n o s ( ( C A G )>1s<) c o n lo s n i v e le s r e la t i v o s d e l t r a n s c r i t o d e H T T e n m u e s t r a s s im u l a d a s . P a r a t o d o s lo s O A S , n = 2 ,>e x c e p t o p a r a e l s im u l a d o ( n = 3 ) .
<[ 0 2 8 0 ]>Figura 2. Eficacia in v iv o de PS659 ((XYG)<7>en la que X = 5-metilcitosina e Y=U; SEQ ID N.°: 2) en un modelo de rata transgénica con EH.<L a s r a t a s t r a n s g é n i c a s c o n E H ( r e p e t i c i ó n ( C A G ) s i ) r e c ib i e r o n 15 v e c e s>u n a i n y e c c ió n in t r a v e n t r i c u l a r c o n P S 659 ( S E Q ID N . ° : 90 d e r i v a d a d e S E Q ID N . ° : 2 ) , d u r a n t e 18 s e m a n a s e n u n a d o s i s f in a l d e 200 p g p o r in y e c c ió n , la s r a t a s c o n E H d e c o n t r o l r e c ib i e r o n s o l o v e h í c u l o . L a s r a t a s f u e r o n s a c r i f i c a d a s u n a s e m a n a d e s p u é s d e la in y e c c ió n f in a l . D e t o d a s la s r a t a s s e a i s l ó t e j i d o y s e d e t e r m i n a r o n lo s<n i v e le s d e H T T c o n a n á l i s i s d e Q - R T - P C R . S e e n c o n t r a r o n n i v e le s r e d u c i d o s d e l t r a n s c r i t o d e H T T e n>(A)<la c o r t e z a ,>(B)<e l h i p o c a m p o ,>(C)<e l b u l b o o l f a t i v o y>(D)<e l t á l a m o d e s p u é s d e l t r a t a m ie n t o c o n P S 6 5 9 e n>c o m p a r a c ió n c o n e l c o n t r o l .
Tabla 2. Estructuras generales de OAS. Todos los OAS son OAS de tipo 2'-O-metil fosfotioato, en los que C es 5-metilcitosina, U es 5-metiluracilo, A es 2,6-diamino urina, I es inosina Q es un monómero abásico.
Ejemplos
EJEMPLO 1.
Introducción
[0281] Las características particulares de una química de oligonucleótido antisentido (OAS) seleccionada pueden mejorar al menos en parte la afinidad y estabilidad de la unión, mejorar la actividad, mejorar la seguridad y/o reducir el costo de los productos al reducir la longitud o mejorar los procedimientos de síntesis y/o purificación. Este ejemplo describe el análisis comparativo de la actividad de los OAS diseñados para dirigirse a la repetición (CAG)n expandida en los transcritos de HTT en fibroblastos de EHin vitro,e incluye OAS con 5-metilcitosinas (XYG)/, donde X es 5-metilcitosina e Y = U, que también se identifica como SEQ ID N.°: 90 (y se deriva de SEQ ID N.°: 2), o 5-metiluracilo (XYG)7, donde X = C e Y= 5-metiluracilo que también se identifica como SEQ ID N.°: 97 (y se deriva de SEQ ID N.°: 3).
Materiales y métodos
[0282]Cultivo celular. Los fibroblastos de EH derivados de pacientes (GM04022) (adquiridos de Coriell Cell Repositories, Camden, EE. UU.) se cultivaron a 37 °C y 5 % de CO2 en el medio esencial mínimo (MEM) (Gibco Invitrogen, Carlsbad, EE. UU.) con 15 % de suero bovino fetal (FBS) inactivado por calor (Clontech, Palo Alto, EE. UU.), 1 % de Glutamax (Gibco) y 100 U/ml de penicilina/estreptomicina (P/S) (Gibco).
[0283]Oligonucleótidos. Los OAS fueron completamente modificados con 2'-O-metil fosforotioato: PS659; (XYG)7, donde X es 5-metilcitosina e Y = U, que también se identifica como SEQ ID N.°: 90 (y se deriva de SEQ ID N.°: 2), y PS661; (XYG)7, donde X = C e Y= 5-metiluracilo, que también se identifican como SEQ ID N.°: 97 (y se derivan de SEQ ID N.°: 3).
[0284]Transfección. Las células se transfectaron con OAS complejados con PEI (2 pL por pg de OAS, en 0,15 MNaCl). Se añadió el complejo OAS-PEI en el medio MEM con 5 % de FBS a las células hasta una concentración final de OAS que variaba de 0,5 a 200 nM. Se añadió medio fresco después de cuatro horas y después de 24 horas se aisló el ARN.
[0285]Aislamiento de ARN. El ARN de las células cultivadas se aisló usando el kit Aurum Total RNA Mini (Bio-Rad, Hercules, CA) según el protocolo del fabricante.
[0286]Análisis de RT-PCR y Lab-on-a-chip. Se sometieron aproximadamente 200 ng de ARN a la síntesis de ADNc con hexámeros aleatorios utilizando el sistema de síntesis de primera cadena SuperScript (Invitrogen) en un volumen total de 20 pL. La PCR se realizó con cebadores para HTT (a través de la repetición CAG) y pactina. El programa de PCR comenzó con una desnaturalización inicial de 4 min a 95 °C, seguida de 35 ciclos de desnaturalización de 30 s a 94 °C, hibridación de 30 s a 60 °C, elongación de 45 s a 72 °C, después de lo cual se realizó un paso de elongación final a 72 °C durante 7 min. Lab-on-a-Chip se realizó en el Bioanalizador Agilent 2100 (Agilent Technologies, Waldbronn, Alemania), utilizando el kit Agilent DNA 1000. Los niveles de expresión se normalizaron para los niveles de p-actina y con respecto a los niveles de transcrito sin transfección. Se usaron los siguientes cebadores:
HTT directo: 5'-ATGGCGACCCTGGAAAAGCTGAT-3' (SEQ ID N.°: 70)
HTT inverso: 5'-TGAGGCAGCAGCGGCTG-3' (SEQ ID N.°: 71)
p-actina directa: 5'-GGACTTCGAGCAAGAGATGG-3' (SEQ ID N.°: 72)
P-actina inversa: 5'- AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3' (SEQ ID N.°: 73)
Resultados
[0287] Tanto PS659 (SEQ ID N.°: 90 derivado de SEQ ID N.°: 2) como PS661 (SEQ ID N.°: 97 derivado de SEQ ID N.°: 3) fueron altamente eficaces y redujeron los transcritos de HTT en fibroblastos de EH de una manera dependiente de la dosis(figura 1a, b). Ambos OAS también mostraron una preferencia por el alelo con las repeticiones CAG expandidas. PS659 (SEQ ID N.°: 90 derivado de SEQ ID N.°: 2) fue más eficaz y más específico de alelos en concentraciones inferiores (efecto más fuerte a 5 nM)(1a)que PS661 (SEQ ID N.°: 97 derivada de SEQ ID N.°: 3) (efecto más fuerte a 20 nM)(1b).
EJEMPLO 2.
Introducción
[0288] PS659 (XYG)z, donde X es 5-metilcitosina e Y = U también identificado como SEQ ID N.°: 90 (derivado de SEQ ID N.°: 2), se seleccionó a partir de estudiosin vitrocomo el candidato más eficiente y seguro. Este ejemplo describe su actividad en un modelo de rata transgénica con EH después de una serie de inyecciones intraventriculares directas.
Materiales y métodos
[0289]Animales. Las ratas transgénicas con EH portan un fragmento de ADNc de Huntington truncado con 51 repeticiones CAG bajo el control del promotor de Huntington de rata nativo. El producto génico expresado es de aproximadamente 75 kDa, correspondiente al 22%del Huntington de longitud completa (posición de ADNc 324 2321, posición de aminoácido 1-709/825, correspondiente al exón 1-16), bajo el control de 886 pb del promotor de Huntington de rata (von Horsten S.et al.).Todos los experimentos con animales fueron aprobados por los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Maastricht, Maastricht.
[0290]Oligonucleótidos. PS659 (XYG)7, donde X es 5-metilcitosina e Y = U también identificado como SEQ ID N.°: 90 (derivado de SEQ ID N.°: 2), es un OAS completamente modificado con 2'-0-metil fosforotioato.
[0291]Tratamientoin vivo.Las ratas transgénicas con EH recibieron 15 veces una inyección intraventricular en una dosis final de 200 pg de PS659 también identificado como SEQ ID N.°: 90 (derivado de SEQ ID N.°: 2) durante 18 semanas. Las ratas con EH de control solo recibieron el vehículo. Las ratas fueron sacrificadas una semana después de la inyección final.
[0292]Aislamiento de ARN. El ARN de tejido cerebral se aisló utilizando el reactivo “RNA-Bee” (Tel Test, Inc). En resumen, las muestras de tejido se homogeneizaron en tubos de perlas verdes MagNA Lyser (Roche) añadiendo RNA-Bee (50 mg de tejido/ml de RNA-Bee) y homogeneizando con un instrumento MagNA Lyser (Roche). El lisado se transfirió a un nuevo tubo, se añadió cloroformo (SIGMA) (0,2 mL por mL de RNA-Bee), se mezcló, se incubó en hielo durante 5 minutos y se centrifugó a 13.000 r.p.m. durante 15 minutos a 4 °C. Se recolectó la fase acuosa superior y se añadió un volumen igual de isopropanol (SIGMA), seguido de un período de incubación de 1 hora a 4 °C y centrifugación (13000 r.p.m., 15 min, 4 °C). El precipitado de ARN se lavó con etanol al 70 % (v/v) (BioSolve), se secó al aire y se disolvió en MilliQ.
[0293]Análisis de RT-PCR cuantitativa. Aproximadamente 200 ng se sometieron a síntesis de ADNc con hexámeros aleatorios usando el sistema de síntesis de primera cadena SuperScript (Invitrogen) en un volumen total de 20 pL. Posteriormente se utilizaron 3 pL de preparación de dilución de ADNc 1/40 en un análisis de PCR cuantitativa según los procedimientos estándar en presencia de iQ™ SYBR® Green Supermix (Bio-Rad). Los cebadores de la PCR cuantitativa se diseñaron en función de la información de secuencia de bases de datos del NCBI(National Center for Biotechnology Information)(Centro Nacional para la Información Biotecnológica). La identidad del producto se confirmó mediante secuenciación de ADN. La señal de Rab2 e YWHAZ se usó para la normalización. Se utilizaron los siguientes cebadores:
Htt-F de rata: 5'- CGCCGCCTCCTCAGCTTC -3' (SEQ ID N.°: 74)
Htt-R de rata: 5'- GAGAGTTCCTTCTTTGGTCGGTGC -3' (SEQ ID N.°: 75)
Rab2-F: 5'- TGGGAAACAGATAAAACTCCAGA-3' (SEQ ID N.°: 76)
Rab2-R: 5'- AATATGACCTTGTGATAGAACGAAAG-3' (SEQ ID N.°: 77)
FYWHAZ: 5'- AAATGAGCTGGTGCAGAAGG-3' (SEQ ID N.°: 78)
YWHAZ -R: 5'- GGCTGCCATGTCATCGTAT -3' (SEQ ID N.°: 79)
Resultados
[0294] PS659 (también identificado como SEQ ID N.°: 90 o derivado de SEQ ID N.°: 2) redujo los niveles de transcrito de Htt transgénico en la corteza(figura 2a), el hipocampo(figura 2b), el bulbo olfativo(figura 2c), así como en el tálamo (figura 3d) en comparación con las ratas tratadas con solución salina. Estos resultados demuestran que PS659 (también identificado como SEQ ID N.°: 90 o derivado de SEQ ID N.°: 2) es eficazin vivodespués de la inyección intraventricular directa.
Lista de referencias
[0295]
Aartsma-Ruset al.,Hum Mol Gen 2003; 12(8):907-14.
Arai Ket al.Bioorg. Med. Chem. 2011,21,6285
Baueret al.,2009; J Neurochem. 110:1737-65
Braida C.,et al.,Human Molecular Genetics, 2010, vol 9: 1399-1412
Brunoet al.,Adv Drug Deliv Rev. 2011;63(13):1210-26
Dieboldet al.,2006, Eur J Immunol; 36(12): 3256-67
Everset al.PLoS ONE 2011,6 (9) e24308
Huanget al.,1998 Somat Cell Molec Gen 24:217-33;
Krieg AM.et al.,Nature 1995; 374: 546-549.
Krieg, A. M., Curr. Opin. Immunol. 2000; 12: 35-43.
Kumar L, Pharm. Technol. 2008, 3, 128.
Muchowskiet al.,2002 PNAS 99: 727-32
Mulderset al.PNAS 2009106(33); p13915-20
Peacock Het al.J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 9200
Popovic PJ.et al.J of Immunol 2006; 177: 8701-8707.
Roon-Momet al.,2002 Mol Brain Res 109: 1-10
Ropper AH. y Brown RH., 2005 Principies of neurology. 8a Ed. Nueva York: McGraw-Hill, 2005. Rosset al.,2011; Lancet Neurol. 10:83-98
Rigo, F,et al.,2012, Nature Chemical biology, 8: 555-561.
Steffanet al.,2000 PNAS 97: 6763-68
von Horsten S.et al.Hum Mol Genet. 2003;12(6):617-24
Wagner, H., Adv. Immunol. 1999; 73: 329-368.
Yu RZ., Anal Biochem 2002; 304: 19-25.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Oligonucleótido que consiste en residuos de nucleótidos de ARN 2'-O-metilo, que tiene un esqueleto, donde todos los restos fosfato son reemplazados por restos fosforotioato, y que comprende una o más bases de 5-metilpirimidina, donde dicho oligonucleótido es capaz de hibridarse con una unidad de nucleótidos repetitiva (CAG)n, donde dicho oligonucleótido comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)m, donde m es un número entero de 4 a 12 y cada X es C o 5-metilcitosina y cada Y es U o 5-metiluracilo, donde cada X es 5-metilcitosina y/o cada Y es 5-metiluracilo, para su uso en el tratamiento, el retraso y/o la prevención de la enfermedad de Huntington (EH), ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) o atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA).
2. Oligonucleótido para su uso según la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido es tal que m es 5 o 6 o 7 o 8 o 9 o 10 o 11 o 12.
3. Oligonucleótido para su uso según la reivindicación 2, donde m es 7, preferiblemente donde dicho oligonucleótido comprende o consiste en una unidad de nucleótidos repetitiva (XYG)7, donde cada X es 5-metilcitosina y cada Y es un uracilo (SEQ ID N.°: 2), o cada X es una citosina y cada Y es 5-metiluracilo (SEQ ID N.°: 3).
4. Oligonucleótido para su uso según la reivindicación 3, donde la secuencia de bases de dicho oligonucleótido comprende o consiste en cualquiera de las secuencias de bases SEQ ID N.°: 90, 97, 104, 107 y 109-118, preferiblemente donde la secuencia de bases de dicho oligonucleótido consiste en SEQ ID N.°: 90.
5. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la longitud de dicho oligonucleótido está comprendida entre 12 y 36 nucleótidos.
6. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicho oligonucleótido es un oligonucleótido monocatenario.
7. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde dicho oligonucleótido es al menos un 90 % inversamente complementario de dicha unidad de nucleótidos repetitiva y/o permanece asociado a su diana cuando hay hasta un 20 % de nucleótidos no coincidentes.
8. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde dicho oligonucleótido reduce una cantidad detectable de transcrito mutante y/o reduce la traducción de dichos transcritos mutantes y, por lo tanto, la cantidad de proteína mutante, preferiblemente donde dicho oligonucleótido reduce la cantidad de proteína mutante.
9. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde dicho oligonucleótido interfiere en el procesamiento o la expresión del ARN precursor o ARN mensajero, como el empalme de ARN y la omisión de exones.
10. Composición que comprende un oligonucleótido, tal y como se define en cualquier reivindicación 1-9, donde preferiblemente dicha composición comprende al menos un excipiente que puede ayudar, además, a mejorar el direccionamiento y/o la administración de dicha composición y/o dicho oligonucleótido a un tejido y/o una célula y/o a un tejido y/o una célula, para su uso en el tratamiento, el retraso y/o la prevención de la enfermedad de Huntington (EH), la ataxia espinocerebelosa (AEC) tipo 1, 2, 3, 6, 7, 12 o 17, la atrofia muscular espinal y bulbar (SBMA) o la atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana (DRPLA).
11. Oligonucleótido para su uso según cualquier según la reivindicación 1-9, o una composición para su uso según la reivindicación 10, donde la administración de dicho oligonucleótido o dicha composición es por vía intravenosa, subcutánea, intraventricular, intratecal, intramuscular, intranasal, enteral, intravítrea, intracerebral, epidural u oral.
12. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 o 11, o una composición para su uso según la reivindicación 10 o 11, donde dicha AEC tipo 1 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen ATXN1 (SEQ ID N.°: 81), dicha AEC tipo 2 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen ATXN2 (SEQ ID N.°: 82), dicha AEC tipo 3 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen ATXN3 (SEQ ID N.°: 83), dicha AEC tipo 6 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen CACNA1A (SEQ ID N.°: 84), dicha AEC tipo 7 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen ATXN7 (SEQ ID N.°: 85), dicha AEC tipo 12 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen PPP2R2B (SEQ ID N.°: 86) y dicha AEC tipo 17 es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen TBP (SEQ ID N.°: 87) .
13. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 o 11, o una composición para su uso según la reivindicación 10 o 11, donde dicha SBMA es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen AR (SEQ ID N.°: 88), y dicha DRPLA es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen ATN1 (SEQ ID N.°: 89).
14. Oligonucleótido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9 o 11, o una composición para su uso según la reivindicación 10 o 11, donde dicha EH es causada por expansiones de repeticiones CAG en los transcritos del gen HTT (SEQ ID N.°: 80).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6047270B2 (ja) 2006-08-11 2016-12-21 バイオマリン テクノロジーズ ベー．フェー． Ｄｎａリピートの不安定性に関連した遺伝的障害を治療するための方法及び手段
EP2203173B1 (en) 2007-10-26 2015-12-23 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and methods for counteracting muscle disorders
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
SG171914A1 (en) 2008-12-02 2011-07-28 Chiralgen Ltd Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids
EP2451461A4 (en) 2009-07-06 2013-05-29 Ontorii Inc NOVEL NUCLEIC ACID PRODRUGS AND METHOD OF USE THEREOF
DK2620428T3 (da) 2010-09-24 2019-07-01 Wave Life Sciences Ltd Asymmetrisk hjælpegruppe
WO2012138289A1 (en) * 2011-04-08 2012-10-11 Zain-Luqman Rula Diagnosis and treatment of friedreich's ataxia
US9605019B2 (en) 2011-07-19 2017-03-28 Wave Life Sciences Ltd. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
CN118581086A (zh) 2012-01-27 2024-09-03 比奥马林技术公司 用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的rna调节性寡核苷酸
EP3604536B1 (en) * 2012-04-23 2024-05-29 Vico Therapeutics B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of neuromuscular disorders
DK2872485T3 (da) 2012-07-13 2021-03-08 Wave Life Sciences Ltd Asymmetrisk hjælpegruppe
US9963699B2 (en) 2012-10-15 2018-05-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating C9ORF72 expression
WO2014062736A1 (en) * 2012-10-15 2014-04-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for monitoring c9orf72 expression
RU2730677C2 (ru) * 2012-10-15 2020-08-24 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Соединение для модуляции экспрессии гена c9orf72 и его применение
SG10201808903UA (en) 2013-10-11 2018-11-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Compositions for modulating c9orf72 expression
KR102423317B1 (ko) 2014-01-16 2022-07-22 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 디자인
WO2015143245A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating ataxin 2 expression
CN116970607A (zh) 2014-03-19 2023-10-31 Ionis制药公司 用于调节共济失调蛋白2表达的组合物
US10538762B2 (en) 2014-10-14 2020-01-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Allele selective inhibition of mutant C9orf72 foci expression by duplex RNAS targeting the expanded hexanucleotide repeat
SI3283080T1 (sl) 2015-04-16 2020-06-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Sestavki za moduliranje izražanja C9ORF72
US11260073B2 (en) 2015-11-02 2022-03-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating C90RF72
CA3006015A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing ataxin-2 expression
US20180028554A1 (en) * 2016-07-05 2018-02-01 Biomarin Technologies B.V. Oligomers Having Bicyclic Scaffold Moeities
CN118416088A (zh) 2017-03-03 2024-08-02 加利福尼亚大学董事会 经由抑制性tRNAs和脱氨酶对突变进行RNA靶向
CN111819281B (zh) * 2017-10-23 2024-12-31 普利维尔治疗公司 用于神经变性疾病的基因疗法
CA3106986A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing atxn2 expression
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US12370264B1 (en) 2018-08-02 2025-07-29 Dyne Therapeutics, Inc. Complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of delivering oligonucleotide to a subject
JP7611825B2 (ja) 2018-08-02 2025-01-10 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド ジストロフィン異常症を処置するための筋標的化複合体およびそれらの使用
US12018087B2 (en) 2018-08-02 2024-06-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US20220193250A1 (en) 2018-08-02 2022-06-23 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US12097263B2 (en) 2018-08-02 2024-09-24 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CN114728018B (zh) * 2019-11-01 2024-07-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 亨廷顿(HTT)iRNA药剂组合物及其使用方法
AU2020395113A1 (en) 2019-12-02 2022-06-09 Shape Therapeutics Inc. Therapeutic editing
KR20230005933A (ko) * 2020-05-01 2023-01-10 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Atxn1을 조정하는 화합물 및 방법
CA3195722A1 (en) 2020-09-17 2022-03-24 Q-State Biosciences, Inc. Therapeutic compositions for treating pain via multiple targets
EP4329774A4 (en) * 2021-04-28 2025-11-05 Quiver Holdings Inc THERAPEUTIC COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MULTI-TARGET PAIN
CN117980006A (zh) 2021-07-09 2024-05-03 达因疗法公司 用于治疗肌养蛋白病的肌肉靶向复合物和制剂
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
EP4408999A1 (en) * 2021-09-29 2024-08-07 F. Hoffmann-La Roche AG Rna editing
WO2023164656A2 (en) * 2022-02-25 2023-08-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating atn1 expression
KR20250004770A (ko) 2022-04-15 2025-01-08 다인 세라퓨틱스, 인크. 근긴장성 이영양증을 치료하기 위한 근육 표적화 복합체 및 제제
WO2025068368A1 (en) * 2023-09-26 2025-04-03 Katholieke Universiteit Leuven Inhibitors for treating cancer
WO2025255388A1 (en) * 2024-06-05 2025-12-11 Camp4 Therapeutics Corporation Modulation of syngap1 gene transcription using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas
WO2026057769A1 (en) 2024-09-12 2026-03-19 Vico Therapeutics B.V. New dosing regimen for huntington treatment

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5695933A (en) 1993-05-28 1997-12-09 Massachusetts Institute Of Technology Direct detection of expanded nucleotide repeats in the human genome
WO1995030774A1 (en) 1994-05-05 1995-11-16 Beckman Instruments, Inc. Oligonucleotide repeat arrays
US6683173B2 (en) 1998-04-03 2004-01-27 Epoch Biosciences, Inc. Tm leveling methods
US5945290A (en) * 1998-09-18 1999-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of RhoA expression
US6900187B2 (en) * 1999-02-26 2005-05-31 The University Of British Columbia TRPM-2 antisense therapy using an oligonucleotide having 2′-O-(2-methoxy)ethyl modifications
US20050277133A1 (en) 2001-05-18 2005-12-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US7745420B2 (en) * 2001-07-06 2010-06-29 Topigen Pharmaceutique, Inc. Methods for increasing in vivo efficacy of oligonucleotides and inhibiting inflammation in mammals
CA2455424A1 (en) 2001-08-07 2003-02-20 University Of Delaware Compositions and methods for the prevention and treatment of huntington's disease
US20060074034A1 (en) 2001-09-17 2006-04-06 Collins Douglas A Cobalamin mediated delivery of nucleic acids, analogs and derivatives thereof
US20050255086A1 (en) 2002-08-05 2005-11-17 Davidson Beverly L Nucleic acid silencing of Huntington's Disease gene
US7892793B2 (en) 2002-11-04 2011-02-22 University Of Massachusetts Allele-specific RNA interference
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
US7514551B2 (en) 2003-04-03 2009-04-07 Enzo Life Sciences, Inc. Multisignal labeling reagents, and processes and uses therefor
WO2004101787A1 (ja) 2003-05-14 2004-11-25 Japan Science And Technology Agency ハンチンチン遺伝子の発現抑制
WO2006083800A2 (en) 2005-01-31 2006-08-10 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid silencing of huntington's disease gene
SI2161038T1 (sl) 2006-01-26 2014-05-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sestavki in njihove uporabe, usmerjeni proti huntingtinu
CN101501193B (zh) * 2006-08-11 2013-07-03 普罗森那技术公司 用于治疗与dna重复不稳定性相关的遗传病的方法和手段
JP6047270B2 (ja) * 2006-08-11 2016-12-21 バイオマリン テクノロジーズ ベー．フェー． Ｄｎａリピートの不安定性に関連した遺伝的障害を治療するための方法及び手段
CN103212085A (zh) 2007-07-12 2013-07-24 普罗森那技术公司 用于使化合物靶向多种选定器官或组织的分子
WO2009099326A1 (en) * 2008-02-08 2009-08-13 Prosensa Holding Bv Methods and means for treating dna repeat instability associated genetic disorders
DK2320925T3 (en) 2008-07-10 2016-03-21 Regenesance B V Komplementantagonister and uses thereof
WO2010006237A2 (en) 2008-07-11 2010-01-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides non-nucleosidic phosphorothiotes as delivery agents for irna agents
CA2732343C (en) 2008-07-29 2017-05-09 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Selective inhibition of polyglutamine protein expression
KR101866152B1 (ko) * 2008-12-04 2018-06-08 큐알엔에이, 인크. 종양 억제 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 종양 억제 유전자 관련된 질환의 치료
AU2010258875A1 (en) 2009-06-08 2012-01-19 Miragen Therapeutics Chemical modification motifs for miRNA inhibitors and mimetics
EP2536738A4 (en) 2010-02-08 2014-09-17 Isis Pharmaceuticals Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES OR SUFFERING IN CONNECTION WITH REPEAT EXTENSIONS
WO2011097614A1 (en) * 2010-02-08 2011-08-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Mehods and compositions useful in diseases or conditions related to repeat expansion
US20130059903A1 (en) * 2010-03-12 2013-03-07 The Johns Hopkins University Compositions and Methods for Characterizing Breast Cancer
KR102182663B1 (ko) 2010-05-28 2020-11-25 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 변형된 서브유니트간 결합 및/또는 말단 그룹을 갖는 올리고뉴클레오타이드 유사체
EP3489360A3 (en) 2010-07-19 2019-08-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of nuclear-retained rna
KR20150039873A (ko) 2010-08-20 2015-04-13 레플리코르 인코포레이티드 올리고뉴클레오타이드 킬레이트 복합체
EP3067421B1 (en) 2011-02-08 2018-10-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
CA2833223A1 (en) * 2011-04-22 2012-10-26 Prosensa Technologies B.V. New compounds for treating, delaying and/or preventing a human genetic disorder such as myotonic dystrophy type 1 (dm1)
IL273838B (en) 2011-05-05 2022-09-01 Sarepta Therapeutics Inc Peptide and oligonucleotide conjugates, preparations containing them and their uses
WO2013082548A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotides for treating expanded repeat diseases
CN118581086A (zh) * 2012-01-27 2024-09-03 比奥马林技术公司 用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的rna调节性寡核苷酸
EP3330278A1 (en) 2012-02-08 2018-06-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of rna by repeat targeting
EP3604536B1 (en) * 2012-04-23 2024-05-29 Vico Therapeutics B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of neuromuscular disorders

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