ES2984190T3 - Derivados de bis-octahidrofenantreno carboxamida y conjugados de proteínas de los mismos para su uso como agonistas de LXR - Google Patents

Derivados de bis-octahidrofenantreno carboxamida y conjugados de proteínas de los mismos para su uso como agonistas de LXR Download PDF

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Abstract

En el presente documento se proporcionan compuestos o cargas útiles, cargas útiles de enlazadores, conjugados anticuerpo-fármaco y composiciones, y métodos para el tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con el receptor X del hígado, incluidas las carboxamidas de bis-octahidrofenantreno y sus conjugados de proteína (por ejemplo, anticuerpo)-fármaco. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de bis-octahidrofenantreno carboxamida y conjugados de proteínas de los mismos para su uso como agonistas de LXR
Campo
En el presente documento se proporcionan novedosas bis-octahidrofenantreno carboxamidas y conjugados de proteínas de las mismas, y dichos compuestos y conjugados para su uso en el tratamiento de diversas enfermedades, trastornos y afecciones, que incluyen la administración de bis-octahidrofenantreno carboxamidas y conjugados de proteínas de las mismas.
Antecedentes
Los conjugados anticuerpo-fármaco (CAF) son anticuerpos que se unen a fármacos de molécula pequeña biológicamente activos, combinando así la especificidad de dirección de los anticuerpos con el modo de acción y la potencia de los fármacos de molécula pequeña. La utilidad terapéutica de los CAF ha sido validada en el tratamiento del cáncer y es un importante foco de estudio en curso. ADCETRIS® (brentuximab vedotin) y KADCYLA® (adotrastuzumab emtansina son dos CAF aprobados para el tratamiento de ciertos tipos de cáncer y al menos cuarenta CAF se encuentran actualmente en desarrollo clínico.
El receptor X hepático (LXR) incluye LXRa y LXRp, que son factores de transcripción dependientes de ligando que controlan la expresión de genes implicados en la homeostasis del colesterol, los lípidos y la glucosa, la inflamación y la inmunidad innata. LXRa se expresa altamente en el hígado, el intestino, el tejido adiposo y los macrófagos diferenciados; y LXRp se expresa de forma ubicua. Los LXR tienen varias funciones biológicas que incluyen (i) estimular la expresión de transportadores de colesterol, por ejemplo, ABCA1 y ABCG1, los cuales participan en la salida de colesterol celular; y (ii) regular negativamente la expresión del gen inflamatorio de los macrófagos mediante la represión de la activación de NF-kB. Los LXR también han sido implicados en aterosclerosis, trastornos proliferativos, trastornos neurodegenerativos e inflamación. Los trastornos proliferativos incluyen melanomas, cáncer de pulmón, carcinoma escamoso oral y cáncer de próstata. (Penchevaet al.2004; Wuet al.2015; Kanekoet al.2015; Chuuet al.2006). Los trastornos neurodegenerativos incluyen la enfermedad de Alzheimer y la expresión del gen de la mielina. (Terwelet al.2011; Sandoval-Hernandezet al.2016; Meffreet al.2014) La inflamación incluye enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y artritis. (Andersonet al.2011; Huanget al.2015; Cuiet al.2012). Se sabe que los LXR de macrófagos incluyen actividad antiaterogénica. Se cree que los agonistas de LXR son capaces de (i) inhibir el inicio y retrasar la progresión de la aterosclerosis; (ii) mitigar la aterosclerosis y estabilizar las lesiones ateroscleróticas establecidas; y (iii) reducir el contenido de macrófagos de la lesión mediante apoptosis.
El potencial terapéutico de los moduladores de LXR de molécula pequeña está limitado por, por ejemplo, modulación no deseada de LXR en células no objetivo y/o baja biodisponibilidad. La modulación de LXR en células no objetivo puede provocar efectos secundarios indeseables y una baja biodisponibilidad puede manifestarse por innumerables razones, entre ellas, sin limitación, baja solubilidad que exacerba aún más las ventanas terapéuticas deficientes para el tratamiento. El desarrollo de CAF que comprendan moduladores de LXR permitiría la modulación de LXR específica del objetivo, evitando así los efectos secundarios causados por la modulación fuera del objetivo de LXR. De manera adicional, tales CAF proporcionarían una mejor modulación de objetivos biológicos, biodisponibilidad mejorada y ventana terapéutica mejorada. Por tanto, existe una necesidad continua de tratamientos eficaces para, por ejemplo, enfermedades metabólicas utilizando CAF de molécula pequeña de moduladores de LXR.
Sumario
En el presente documento se proporcionan compuestos útiles, por ejemplo, para el tratamiento de enfermedades metabólicas, incluyendo, sin limitación, dislipidemia. También se proporcionan en el presente documento compuestos útiles, por ejemplo, para el tratamiento de la inflamación o de una enfermedad neurodegenerativa.
En una realización, se proporcionan en el presente documento compuestos de Fórmula I:
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o forma estereoisomérica de los mismos, en donde
cada uno deQ1 yQ2 es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)<2>-, -SO<2>-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=;
W es -CH<2>-, -N(H)-o -O-;
R1 es -N(H)R4 o -N(R5)<2>;
R2 es -N(H)R4;
cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido;
R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un - OH y
-CH<2>OH o al menos un nitrógeno primario o secundario;
cadaR6 es independientemente halógeno, alquilo C<1-6>, alcoxi C<1-6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGni, en donde cadanes un número entero de 0-14, y cadanies un número entero de 1-12; y cadaR3 es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo.
En una realización, en el presente documento se proporcionan compuestos de acuerdo con la Fórmula I:
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o forma estereoisomérica de los mismos, en donde
cada uno deQ1 yQ2 es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)<2>-, -SO<2>-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3-o -N=;
Wes -CH<2>-, -N(H)- o -O-;
R1 es -N(H)R4 o -N(R5)<2>;
R2 es -N(H)R4;
cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo;
R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un - OH y
-CH<2>OH o al menos un nitrógeno primario o secundario;
cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1-6>, alcoxi C<1-6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGn i, en donde cadanes un número entero de 0-14, y cadanies un número entero de 1-12; y cadaR3es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo.
En otra realización, en el presente documento se expone es un enlazador-carga activa que tiene un compuesto de acuerdo con la Fórmula I, anterior, unido a un enlazador.
En otra realización, en el presente documento se expone un conjugado anticuerpo-fármaco que tiene un compuesto de Fórmula I o un enlazador-carga activa, anterior, unido a un anticuerpo o a un fragmento de unión a antígeno del mismo.
En una realización, en el presente documento se exponen compuestos de acuerdo con las FórmulasA, B, C o D:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde
Les un enlazador;
BAes un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo;
kes un número entero de 1 a 30;
cada uno deQ1 yQ2 es independientemente -CH2-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)2-, -SO2-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=;
Wes -CH<2>-, -N(H)- o -O-;
R1 es -N(H)R4, -N(H)R4-, -N(H)-, -N(R5)<2>o -N(R5)<2>-;
R2 es -N(H)R4, -N(H)R4- o -N(H)-;
cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo, acilo sustituido o -alquileno-;R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH2OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cadaR6 es independientemente halógeno, alquilo C1-6, alquileno C1-6, alcoxi C1-6, -CN, O-glucosa, resto de O aminoácido u O-PEGni, en donde cada n es un número entero de 0-14 y cadanies un número entero de 1-12; y cadaR3 es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo.
En otra realización, en el presente documento se exponen compuestos de acuerdo con las FórmulasA, B, C o D:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde
Les un enlazador;
BAes un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo;
kes un número entero de 1 a 30;
cada uno deQ1 yQ2 es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)<2>-, -SO<2>-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=;
Wes -CH<2>-, -N(H)-o -O-;
R1 es -N(H)R4, -N(H)R4-, -N(H)-, -N(R5)<2>o -N(R5)<2>-;
R2 es -N(H)R4, -N(H)R4- o -N(H)-;
cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo o -alquileno-;
R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos uno -OH y -CH2OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cadaR6 es independientemente halógeno, alquilo C1-6, alquileno C1-6, alcoxi C1-6, -Cn , O-glucosa, resto de O aminoácido u O-PEGni, en donde cadanes un número entero de 0-14, y cadanies un número entero de 1-12; y cadaR3 es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo.
En otra realización, en el presente documento se proporciona una composición farmacéutica, incluyendo un compuesto, enlazador-carga activa o conjugado anticuerpo-fármaco descrito en el presente documento y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
También se divulga un método para el tratamiento de la dislipidemia, una enfermedad metabólica, inflamación o una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto, incluyendo la administración al sujeto de una cantidad de tratamiento eficaz de un compuesto, enlazador-carga activa o conjugado anticuerpo-fármaco, o composición farmacéutica descrita en el presente documento.
En otra realización, en el presente documento se exponen métodos para preparar los compuestos, enlazador-cargas activas o conjugados de anticuerpo-fármaco, y composiciones descritas en el presente documento.
Breves descripciones de los dibujos
Las figuras 1 y 2 muestran esquemas de química sintética para cargas activas, compuestos y bisoctahidrofenantreno carboxamidas.
Las figuras 3-9 muestran esquemas de química sintética para enlazador-cargas activas, enlazador-cargas activas basados en ciclodextrina, enlazador-cargas activas a base de PEG4-taurina y enlazador-cargas activas a base de maltosa.
Las figuras 10-12 muestran esquemas de química sintética para ciclodextrina-azidas, ácido-PEG4-taurinas y maltosa-azidas.
La figura 13 muestra gráficos de la CE<50>para la activación del eflujo de colesterol mediante un CAF anti-MSR1 que tiene una carga activa P2.
Descripción de ejemplos de realización
En el presente documento se proporcionan compuestos o cargas activas, enlazador-cargas activas, conjugados de anticuerpo y fármaco, composiciones y métodos útiles para tratar, por ejemplo, la dislipidemia, una enfermedad metabólica, inflamación o una enfermedad neurodegenerativa, en un sujeto.
A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende habitualmente un experto en la materia a la que pertenece la presente invención. Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente", cuando se utiliza en referencia a un valor numérico indicado particular, significa que el valor puede variar con respecto al valor indicado en no más de un<1>%. Por ejemplo, como se usa en el presente documento, la expresión "aproximadamente 100" incluye 99 y 101, y todos los valores intermedios (por ejemplo, 99,1,99,2, 99,3, 99,4, etc.).
Aunque se pueden utilizar en la práctica o en el ensayo de la presente invención cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a los que se describen en el presente documento, a continuación se describen los métodos y materiales preferidos.
Definiciones
Al referirse a los compuestos o cargas activas, enlazador-cargas activas (LP) o conjugados de anticuerpo-fármaco proporcionados en el presente documento, los términos siguientes tienen los significados siguientes a menos que se indique de otro modo. A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende habitualmente un experto en la materia. En el caso en el que exista una pluralidad de definiciones para un término o expresión en el presente documento, estas definiciones prevalecen a menos que se indique lo contrario.
Como se usa en el presente documento, "alquilo" se refiere a un resto de radical hidrocarburo monovalente y saturado. El alquilo está opcionalmente sustituido y puede ser lineal, ramificado o cíclico, es decir, cicloalquilo. Alquilo incluye, pero sin limitación, los radicales que tienen<1 - 20>átomos de carbono, es decir, alquilo C i-20;<1 - 1 2>átomos de carbono, es decir, alquilo C1-12; 1-8 átomos de carbono, es decir, alquilo C1-8; 1-6 átomos de carbono, es decir, alquilo C1-6; y 1 3 átomos de carbono, es decir, alquilo C1-3. Los ejemplos de restos alquilo incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, s-butilo, /-butilo, /-butilo, un resto pentilo, un resto hexilo y sus isómeros constitucionales, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
Como se usa en el presente documento, "isómeros constitucionales" se refiere a compuestos que tienen la misma fórmula molecular, pero diferentes estructuras químicas resultantes de la forma en que están dispuestos los átomos. Los isómeros constitucionales ilustrativos incluyen n-propilo e isopropilo; n-butilo, sec-butilo y tere-butilo; y n-pentilo, isopentilo y neopentilo, y similares.
Como se usa en el presente documento, "alquileno" se refiere a un grupo alquilo divalente. A menos que se especifique de otro modo, alquileno incluye, pero sin limitación, 1-20 átomos de carbono. El grupo alquileno está opcionalmente sustituido como se describe en el presente documento para alquilo. En algunas realizaciones, el alquileno no está sustituido.
Como se usa en el presente documento, el término "O-aminoácido" o "HO-aminoácido" designa un aminoácido en donde el grupo amino nativo en el extremo N de un aminoácido o una secuencia de aminoácidos ha sido reemplazado por un oxígeno o un grupo hidroxilo, respectivamente. Por ejemplo, "O-AAAA" u "HO-AAAA" pretende designar una secuencia de aminoácidos (AAAA) en donde el grupo amino nativo en el extremo N ha sido reemplazado por un oxígeno o un grupo hidroxilo, respectivamente (por ejemplo,
donde cada R es una cadena lateral de aminoácido). De manera similar, las expresiones "resto de O-aminoácido" o "resto de HO-aminoácido" se refieren a la fracción química dentro de un compuesto que queda después de una reacción química. Por ejemplo, "resto de O-aminoácido" o "resto de HO-aminoácido" se refiere al producto de un acoplamiento de amida o de un acoplamiento peptídico de un O-aminoácido o un HO-aminoácido a un compañero de acoplamiento adecuado; en donde, por ejemplo, se expulsa una molécula de agua después del acoplamiento de amida o peptídico del O-aminoácido o de un HO-aminoácido, dando como resultado que el producto tenga incorporado en el mismo el resto de O-aminoácido o un resto de HO-aminoácido.
La designación de un aminoácido o resto de aminoácido sin especificar su estereoquímica pretende abarcar la forma L del aminoácido, la forma D del aminoácido o una mezcla racémica de los mismos.
Como se usa en el presente documento, "haloalquilo" se refiere a alquilo, como se ha definido anteriormente, en donde el alquilo incluye al menos un sustituyente seleccionado entre un halógeno, por ejemplo, flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br) o yodo (I). Los ejemplos de haloalquilo incluyen, aunque sin limitación, -CF3, -C<h>2CF3, -CCl2F y -CCl3.
Como se usa en el presente documento, "alquenilo" se refiere a una fracción de radical hidrocarbonado monovalente que contiene al menos dos átomos de carbono y uno o más dobles enlaces carbono-carbono no aromáticos. El alquenilo está opcionalmente sustituido y puede ser lineal, ramificado o cíclico. Alquenilo incluye, pero sin limitación, los radicales que tienen 2-20 átomos de carbono, es decir, alquenilo C2-2<o>; 2-12 átomos de carbono, es decir, alquenilo C<2-12>; 2-8 átomos de carbono, es decir, alquenilo C<2-8>; 2-6 átomos de carbono, es decir, alquenilo C<2-6>; y 2-4 átomos de carbono, es decir, alquenilo C2-4. Los ejemplos de fracciones de alquenilo incluyen, pero sin limitación, vinilo, propenilo, butenilo y ciclohexenilo.
Como se usa en el presente documento, "alquinilo" se refiere a una fracción de radical hidrocarbonado monovalente que contiene al menos dos átomos de carbono y uno o más triples enlaces carbono-carbono. El alquinilo está opcionalmente sustituido y puede ser lineal, ramificado o cíclico. Alquinilo incluye, pero sin limitación, los radicales que tienen 2-20 átomos de carbono, es decir, alquinilo C2-20; 2-12 átomos de carbono, es decir, alquinilo C2-12; 2-8 átomos de carbono, es decir, alquinilo C2-8; 2-6 átomos de carbono, es decir, alquinilo C2-6; y 2-4 átomos de carbono, es decir, alquinilo C2-4. Ejemplos de restos alquinilo incluyen, pero sin limitación, etinilo, propinilo y butinilo.
Como se usa en el presente documento, "alcoxi" se refiere a una fracción de radical hidrocarbonado monovalente y saturado en donde el hidrocarbono incluye un enlace simple con un átomo de oxígeno y en donde el radical está localizado en el átomo de oxígeno, por ejemplo, CH<3>CH<2>-O- para etoxi. Los sustituyentes alcoxi se unen al compuesto que sustituyen a través de este átomo de oxígeno del sustituyente alcoxi. El alcoxi está opcionalmente sustituido y puede ser lineal, ramificado o cíclico, es decir, cicloalcoxi. Alcoxi incluye, pero sin limitación, que tiene 1-20 átomos de carbono, es decir, alcoxi C1-20; 1-12 átomos de carbono, es decir, alcoxi C1-12; 1-8 átomos de carbono, es decir, alcoxi C<1-8>; 1-6 átomos de carbono, es decir, alcoxi C<1-6>; y 1-3 átomos de carbono, es decir, alcoxi C<1-3>. Los ejemplos de restos alcoxi incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, s-butoxi, f-butoxi, i-butoxi, una fracción pentoxi y una fracción hexoxi, ciclopropoxi, ciclobutoxi, ciclopentoxi y ciclohexoxi (es decir,
respectivamente).
Como se usa en el presente documento, "haloalcoxi" se refiere a alcoxi, como se ha definido anteriormente, en donde el alcoxi incluye al menos un sustituyente seleccionado entre un halógeno, por ejemplo, F, Cl, Br o I.
Como se usa en el presente documento, "arilo" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto aromático en donde los átomos del anillo son átomos de carbono. Arilo está opcionalmente sustituido y puede ser monocíclico o policíclico, por ejemplo, bicíclico o tricíclico. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, aunque sin limitación, los que tienen de 6 a 20 átomos de carbono del anillo, es decir, arilo C6-20; de 6 a 15 átomos de carbono en el anillo, es decir, arilo C<6-15>y de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo, es decir, arilo C<6>-<10>. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero sin limitación, fenilo, naftilo, fluorenilo, azulenilo, antrilo, fenantrilo y pirenilo.
Como se usa en el presente documento, "arilalquilo" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto alquilo, en donde el compuesto alquilo está sustituido con un sustituyente aromático, es decir, el compuesto aromático incluye un enlace simple con un grupo alquilo y en donde el radical está localizado en el grupo alquilo. Un grupo arilalquilo se une a la estructura química ilustrada a través del grupo alquilo. Un arilalquilo puede estar representado por la estructura, por ejemplo,
en donde B es una fracción aromática, por ejemplo, fenilo. ArMalquilo está opcionalmente sustituido, es decir, el grupo arilo y/o el grupo alquilo, puede sustituirse como se desvela en el presente documento. Los ejemplos de arilalquilo incluyen, aunque sin limitación, bencilo.
Como se usa en el presente documento, "alquilarilo" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto arilo, en donde el compuesto arilo está sustituido con un sustituyente alquilo, es decir, el compuesto de arilo incluye un enlace simple con un grupo alquilo y en donde el radical está localizado en el grupo arilo. Un grupo alquilarilo se une a la estructura química ilustrada a través del grupo arilo. Un alquilarilo puede estar representado por la estructura, por ejemplo,
en donde B es una fracción aromática, por ejemplo, fenilo. Alquilarilo está opcionalmente sustituido, es decir, el grupo arilo y/o el grupo alquilo, puede sustituirse como se desvela en el presente documento. Ejemplos de alquilarilo incluyen, aunque sin limitación, toluílo.
Como se usa en el presente documento, "ariloxi" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto aromático en donde los átomos del anillo son átomos de carbono y en donde el anillo está sustituido con un radical oxígeno, es decir, el compuesto aromático incluye un enlace simple con un átomo de oxígeno y en donde el radical está localizado en el átomo de oxígeno, por ejemplo,
para fenoxi. Los sustituyentes ariloxi se unen al compuesto que sustituyen a través de este átomo de oxígeno. El ariloxi está opcionalmente sustituido. El ariloxi incluye, pero sin limitación, los radicales que tienen de 6 a 20 átomos de carbono en el anillo, es decir, ariloxi C<6>-<20>; de 6 a 15 átomos de carbono en el anillo, es decir, ariloxi C<6-15>y de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo, es decir, ariloxi C<6>-<10>. Ejemplos de fracciones ariloxi incluyen, pero sin limitación, fenoxi, naftoxi y antroxi.
Como se usa en el presente documento, "RaRbN-ariloxi" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto aromático en donde los átomos del anillo son átomos de carbono y en donde el anillo está sustituido con al menos un RaRbN- sustituyente y al menos un radical oxígeno, es decir, el compuesto aromático incluye un enlace simple a un RaRbN- sustituyente y un enlace simple a un átomo de oxígeno y en donde el radical está localizado en el átomo de oxígeno, por ejemplo,
sustituyentes RaRbN-ariloxi se unen al compuesto que sustituyen a través de este átomo de oxígeno. RaRbN-ariloxi está opcionalmente sustituido. RaRbN-ariloxi incluye, pero sin limitación, los que tienen de 6 a 20 átomos de carbono del anillo, por ejemplo, ariloxi C<6-20>(RaRbN)nn-, de 6 a 15 átomos de carbono en el anillo, por ejemplo, ariloxi C<6-15>(RaRbN)<1>a 10 átomos de carbono en el anillo, por ejemplo, ariloxi C<6-10>(RaRbN)nn-, en donde nn representa el número de RaRbN- sustituyentes. Un ejemplo de una fracción RaRbN-ariloxi incluye, pero sin limitaciones, 4-(dimetilamino)-fenoxi,
Como se usa en el presente documento, "arileno" se refiere a una fracción divalente de un compuesto aromático en donde los átomos del anillo son sólo átomos de carbono. El arileno está opcionalmente sustituido y puede ser monocíclico o policíclico, por ejemplo, bicíclico o tricíclico. Los ejemplos de fracciones de arileno incluyen, pero sin limitaciones, los que tienen de 6 a 20 átomos de carbono en el anillo, es decir, arileno C<6>-<20>; de 6 a 15 átomos de carbono en el anillo, es decir, arileno C<6-15>y de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo, es decir, arileno C<6>-<10>.
Como se usa en el presente documento, "heteroalquilo" se refiere a un alquilo en el que uno o más átomos de carbono están reemplazados por heteroátomos. Como se usa en el presente documento, "heteroalquenilo" se refiere a un alquenilo en el que uno o más átomos de carbono están reemplazados por heteroátomos. Como se usa en el presente documento, "heteroalquinilo" se refiere a un alquinilo en el que uno o más átomos de carbono están reemplazados por heteroátomos. Los heteroátomos adecuados incluyen, aunque sin limitación, átomos de nitrógeno, oxígeno y azufre. El heteroalquilo está opcionalmente sustituido. Los ejemplos de fracciones de heteroarilo incluyen, aunque sin limitación, aminoalquilo, sulfonilalquilo y sulfinilalquilo. Los ejemplos de fracciones de heteroalquilo también incluyen, aunque sin limitación, metilamino, metilsulfonilo y metilsulfinilo. Como se usa en el presente documento, "heteroalquileno", "heteroalquenileno", y "heteroalquinileno" son formas divalentes de heteroalquilo, heteroalquenilo y heteroalquinilo, respectivamente.
Como se usa en el presente documento, "heteroarilo" se refiere a una fracción monovalente que es un radical de un compuesto aromático en donde los átomos del anillo contienen átomos de carbono y al menos un átomo de oxígeno, azufre, nitrógeno o fósforo. Los ejemplos de restos heteroarilo incluyen, pero sin limitaciones, los que tienen de 5 a 20 átomos en el anillo; de 5 a 15 átomos en el anillo; y de 5 a 10 átomos en el anillo. Heteroarilo está opcionalmente sustituido.
Como se usa en el presente documento, "heteroarileno" se refiere a un arileno en el que uno o más átomos del anillo aromático están reemplazados por un átomo de oxígeno, azufre, nitrógeno o fósforo. Heteroarileno está opcionalmente sustituido.
Como se usa en el presente documento, "heterocicloalquilo" se refiere a un cicloalquilo en el que uno o más átomos de carbono están reemplazados por heteroátomos. Los heteroátomos adecuados incluyen, aunque sin limitación, átomos de nitrógeno, oxígeno y azufre. El heterocicloalquilo está opcionalmente sustituido. Los ejemplos de fracciones de heterocicloalquilo incluyen, aunque sin limitación, morfolinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo, tiazolidinilo, dioxolanilo, ditiolanilo, oxanilo o tianilo.
Como se usa en el presente documento, "ácido de Lewis" se refiere a una molécula o ion que acepta un par de electrones solitarios. Los ácidos de Lewis utilizados en los métodos descritos en el presente documento son aquellos distintos de los protones. Los ácidos de Lewis incluyen, aunque sin limitación, ácidos no metálicos, ácidos metálicos, ácidos de Lewis duros y ácidos de Lewis blandos. Los ácidos de Lewis incluyen, aunque sin limitación, ácidos de Lewis de aluminio, boro, hierro, estaño, titanio, magnesio, cobre, antimonio, fósforo, plata, iterbio, escandio, níquel y cinc. Los ácidos de Lewis ilustrativos incluyen, aunque sin limitación, AlBr3, AlC13, BCl3, sulfuro de metilo de tricloruro de boro, BF3, éter metílico de trifluoruro de boro, sulfuro de metilo de trifluoruro de boro, trifluoruro de boro tetrahidrofurano, trifluorometanosulfonato de diciclohexilboro, bromuro de hierro(III), cloruro de hierro(III), cloruro de estaño(II), cloruro de titanio (IV), isopropóxido de titanio (IV), Cu(OTf)2, CuCl2, CuBr2, cloruro de cinc, haluros de alquilaluminio (RnAlX3-n, en donde R es hidrocarbilo), Zn(OTf)2, ZnCl2, Yb(OTf)3, Sc(OTf)3, MgBr2, NiCl2, Sn(OTf)2, Ni(OTf<)2>y Mg(OTf)<2>.
Como se usa en el presente documento, "heterocicloalquilo que contieneN",se refiere a un cicloalquilo en el que uno o más átomos de carbono están reemplazados por heteroátomos y en donde al menos un heteroátomo es un átomo de nitrógeno. Los heteroátomos adecuados además de nitrógeno, incluyen, pero sin limitaciones, átomos de oxígeno y azufre. el heterocicloalquilo que contieneNestá opcionalmente sustituido. Los ejemplos de fracciones de heterocicloalquilo que contiene N incluyen, aunque sin limitación, morfolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo o tiazolidinilo.
Como se usa en el presente documento, "O-glucosa" se refiere a una fracción monovalente unida mediante un átomo de oxígeno de glucosa exocíclico. Las fracciones de O-glucosa adecuadas incluyen, sin limitación,
y similares.
Como se usa en el presente documento, "O-PEGn i"se refiere a una fracción monovalente unida a través del átomo de oxígeno terminal, en donde n i es de 1 a 100. Por ejemplo, cuando n i es 1, O-PEGnies -O-CH2CH2OH; cuando n i es dos, O-PEGnies -O-CH2CH2O-CH2CH2OH; y cuando n i es tres, O-PEGnies -O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2OH.
Como se usa en el presente documento, "opcionalmente sustituido", cuando se usa para describir una fracción de radical, por ejemplo, alquilo opcionalmente sustituido, significa que dicha fracción está opcionalmente unida a uno o más sustituyentes. Los ejemplos de dichos sustituyentes incluyen, aunque sin limitación, halo, ciano, nitro, haloalquilo opcionalmente sustituido, azido, epoxi, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido,
oxo o
9 s
, O ’
en donde RA, RB y RC son, independientemente en cada caso, un átomo de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo o heterocicloalquilo, o RA y RB junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico saturado o insaturado, en donde el anillo está opcionalmente sustituido y en donde uno o más átomos del anillo están opcionalmente sustituidos por un heteroátomo. En determinadas realizaciones, cuando una fracción de radical está opcionalmente sustituida con un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o anillo carbocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, los sustituyentes en el heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o anillo carbocíclico saturado o insaturado opcionalmente sustituido, si están sustituidos, no están sustituidos con sustituyentes que además están opcionalmente sustituidos con sustituyentes adicionales. En algunas realizaciones, cuando un grupo descrito en el presente documento está sustituido opcionalmente, el sustituyente unido al grupo no está sustituido a menos que se especifique lo contrario.
Como se usa en el presente documento, "acilo" se refiere a
donde RA es alquilo o alquilo opcionalmente sustituido. Como también se usa en el presente documento, "acilo opcionalmente sustituido" se refiere a cuando RA está opcionalmente sustituido.
Como se usa en el presente documento, "agente de unión" se refiere a un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo.
Como se usa en el presente documento, "enlazador" se refiere a una fracción divalente, trivalente o multivalente que une covalentemente el agente de unión a uno o más compuestos descritos en el presente documento, por ejemplo compuestos de carga activa y agentes de mejora.
Como se usa en el presente documento, "condiciones de síntesis de amida" se refiere a condiciones de reacción adecuadas para efectuar la formación de una amida, por ejemplo, mediante la reacción de un ácido carboxílico, ácido carboxílico activado o haluro de acilo con una amina. En algunos ejemplos, las condiciones de síntesis de amida se refieren a condiciones de reacción adecuadas para efectuar la formación de un enlace amida entre un ácido carboxílico y una amina. En algunos de estos ejemplos, el ácido carboxílico se convierte primero en un ácido carboxílico activado antes de que el ácido carboxílico activado reaccione con una amina para formar una amida. Las condiciones adecuadas para efectuar la formación de una amida incluyen, aunque sin limitación, aquellas que usan reactivos para efectuar la reacción entre un ácido carboxílico y una amina, incluidos, aunque no de forma limitativa, diciclohexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio (BOP), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (PyAOP), hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfonio (PyBrOP), hexafluorofosfato de O-(benzotr¡azoM-¡l)-N,N,N',W-tetrametiluron¡o (HBTU), tetrafluoroborato de O-(benzotriazoM-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (TBTU), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU), N-etoxicarbonil-2-etoxi-1,2-dihidroquinolina (EEDQ), N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de 2-cloro-1,3-dimetilimidazolidinio (CIP), 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (CDMT) y carbonildiimidazol (CDI). En algunos ejemplos, primero se convierte un ácido carboxílico en un éster carboxílico activado antes de tratar el éster carboxílico activado con una amina para formar un enlace amida. En determinadas realizaciones, el ácido carboxílico se trata con un reactivo. El reactivo activa el ácido carboxílico desprotonando el ácido carboxílico y luego formando un complejo de producto con el ácido carboxílico desprotonado como resultado del ataque nucleofílico del ácido carboxílico desprotonado sobre el reactivo protonado. Los ésteres carboxílicos activados de determinados ácidos carboxílicos son posteriormente más susceptibles al ataque nucleofílico por una amina que el ácido carboxílico antes de su activación. Esto da como resultado la formación de enlaces amida. Así pues, el ácido carboxílico se describe como activado. Los reactivos ilustrados incluyen DCC y DIC.
Como se usa en el presente documento, "regioisómero" "regioisómeros", o "mezcla de regioisómeros" se refiere al(los) producto(s) de 1,3-cicloadiciones o cicloadiciones de alquino-azida promovidas por deformación (SPAAC), también conocidas como reacciones de clic, que derivan de azidas adecuadas (por ejemplo, anticuerpos derivatizados de -N<3>o PEG-N<3>) tratados con alquinos adecuados. En determinadas realizaciones, por ejemplo, los regioisómeros y las mezclas de regioisómeros se caracterizan por los productos de reacción de clic que se muestran a continuación:
En determinadas realizaciones, se pueden utilizar más de una azida adecuada y más de un alquino adecuado dentro de un esquema sintético en el camino hacia un producto, donde cada par de azida-alquino puede participar en una o más reacciones de clic independientes para generar una mezcla de productos de reacción de clic regioisoméricos. Por ejemplo, un experto reconocerá que una primera azida adecuada puede reaccionar independientemente con un primer alquino adecuado y una segunda azida adecuada puede reaccionar independientemente con un segundo alquino adecuado, en camino hacia un producto, dando como resultado la generación de cuatro posibles regioisómeros de reacción de clic o una mezcla de los cuatro posibles regioisómeros de reacción de clic en una muestra de un CAF descrito en el presente documento. A modo de ejemplo adicional, un experto reconocerá que una primera azida adecuada puede reaccionar independientemente con un primer alquino adecuado y una segunda azida adecuada puede reaccionar independientemente con un segundo alquino adecuado, en camino hacia un producto, dando como resultado la generación de cuatro posibles regioisómeros de reacción de clic o una mezcla de los cuatro posibles regioisómeros de reacción de clic en una muestra de un LP descrito en el presente documento.
Como se usa en el presente documento, el término "resto" se refiere a la fracción química dentro de un compuesto que queda después de una reacción química. Por ejemplo, la expresión "resto de aminoácido" o "resto de N-alquilaminoácido" se refiere al producto de un acoplamiento de amida o de un acoplamiento de péptido de un aminoácido o un N-alquilaminoácido a un compañero de acoplamiento adecuado; en donde, por ejemplo, una molécula de agua es expulsada después del acoplamiento DE amida o peptídico del aminoácido o del N-alquilaminoácido, dando como resultado que el producto tenga el resto de aminoácido o resto de N-alquilaminoácido incorporado en el mismo.
Como se usa en el presente documento, "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad (por ejemplo, de un compuesto o carga activa) que es suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico a un paciente en el tratamiento o manejo de una enfermedad o trastorno, o para retrasar o minimizar uno o más síntomas asociados con la enfermedad o trastorno.
Ciertos grupos, fracciones, sustituyentes y átomos se representan con una línea ondulada que intersecta un enlace o enlaces para indicar el átomo a través del cual se unen los grupos, fracciones, sustituyentes, átomos. Por ejemplo, un grupo fenilo que está sustituido con un grupo propilo representado como:
tiene la siguiente estructura:
Como se usa en el presente documento, las ilustraciones que muestran sustituyentes unidos a un grupo cíclico (por ejemplo, aromático, heteroaromático, anillo condensado y cicloalquilo o heterocicloalquilo saturado o insaturado) a través de un enlace entre átomos del anillo pretenden indicar, a menos que se especifique de otro modo, que el grupo cíclico puede estar sustituido con ese sustituyente en cualquier posición del anillo en el grupo cíclico o en cualquier anillo en el grupo del anillo fusionado, según técnicas establecidas en el presente documento o que son conocidas en el campo al que pertenece la presente divulgación. Por ejemplo, el grupo,
en donde el subíndice q es un número entero de 0 a 4 y en el que las posiciones del sustituyente R<1>se describen genéricamente, es decir, no unidos directamente a ningún vértice de la estructura de la línea de enlace, es decir, átomo de carbono del anillo específico, incluyen lo siguiente, ejemplos no limitantes de grupos en los que el sustituyente R<1>está unido a un átomo de carbono del anillo específico:
Como se usa en el presente documento, la expresión "enlazador reactivo", o la abreviatura "RL"se refiere a un grupo
monovalente que incluye un grupo reactivo y un grupo espaciador, representado, por ejemplo, como RG-SP-^, en dondeRGes el grupo reactivo y SP es el grupo espaciador. Como se describe en el presente documento, un enlazador reactivo puede incluir más de un grupo reactivo y más de un grupo espaciador. El grupo espaciador es cualquier fracción divalente que une el grupo reactivo con otro grupo, tal como una carga activa. Los enlazadores reactivos (RL), junto con las cargas activas a las que están unidos, proporcionan intermedios ("enlazador-cargas activas") útiles como precursores sintéticos para la preparación de los conjugados de anticuerpos descritos en el presente documento. El enlazador reactivo incluye un grupo reactivo ("RG"), que es un grupo o fracción funcional que es capaz de reaccionar con una porción reactiva de otro grupo, por ejemplo, un anticuerpo, anticuerpo modificado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, o un grupo potenciador. La fracción resultante de la reacción del grupo reactivo con el anticuerpo, anticuerpo modificado o fragmento de unión a antígeno del mismo, junto con el grupo de enlace, incluye la porción de "enlazador de agente de unión" ("BL") del conjugado, descrito en el presente documento. En determinadas realizaciones, el "grupo reactivo" es un grupo o fracción funcional (por ejemplo, maleimida o éster de N-hidroxisuccinimida (NHS)) que reacciona con un resto de cisteína o lisina de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo. En determinadas realizaciones, el "grupo reactivo" es un grupo funcional o fracción que es capaz de sufrir una reacción química de clic (véase, por ejemplo, química clic, Huisgen Proc. Chem. Soc. 1961,Wanget al.J. Am. Chem. Soc. 2003 y Agardet al.J. Am. Chem. Soc. 2004). En algunas realizaciones de dicha reacción química de clic, el grupo reactivo es un alquino que es capaz de experimental una reacción de 1,3-cicloadición con una azida. Tales grupos reactivos adecuados incluyen, aunque sin limitación, alquinos tensionados, por ejemplo, los adecuados para cicloadiciones de alquino-azidas promovidas por deformación (SPAAC), cicloalquinos, por ejemplo, ciclooctinas, alquinos benzanillados y alquinos capaces de experimentar reacciones de 1,3-cicloadición con alquinos en ausencia de catalizadores de cobre. Los alquinos adecuados también incluyen, aunque sin limitación, dibenzoazaciclooctina o
(DIBAC), dibenzociclooctina o
(DIBO), biarilazaciclooctinona o
(BARAC), ciclooctina difluorada o
(DIFO), sustituido, por ejemplo, alquinos fluorados, aza-cicloalquinos, biciclo[6.1.0]nonino o
(BCN, donde R es alquilo, alcoxi o acilo) y derivados de los mismos. Los alquinos particularmente útiles incluyen
y
Los enlazador-cargas activas que incluyen dichos grupos reactivos son útiles para conjugar anticuerpos que han sido funcionalizados con grupos azido. Dichos anticuerpos funcionalizados incluyen anticuerpos funcionalizados con grupos azido-polietilenglicol. En determinadas realizaciones, dicho anticuerpo funcionalizado se obtiene tratando un anticuerpo que tiene al menos un resto de glutamina, por ejemplo, Gln295 de la cadena pesada, con un compuesto que lleva un grupo amino y un grupo azida, en presencia de la enzima transglutaminasa.
En algunos ejemplos, el grupo reactivo es un alquino, por ejemplo,
que puede reaccionar mediante química de clic con una azida, por ejemplo,
para formar un producto químico de clic, por ejemplo,
En algunos ejemplos, el grupo reacciona con una azida en un anticuerpo modificado o fragmento de unión a antígeno del mismo. En algunos ejemplos, el grupo reactivo es un alquino, por ejemplo,
que puede reaccionar mediante química de clic con una azida, por ejemplo,
para formar un producto químico de clic, por ejemplo,
En algunos ejemplos, el grupo reactivo es un alquino, por ejemplo,
que puede reaccionar mediante química de clic con una azida, por ejemplo,
para formar un producto químico de clic, por ejemplo,
o
En algunos ejemplos, el grupo reactivo es un grupo funcional, por ejemplo,
que reacciona con un resto de cisteína en un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, para formar un enlace con el mismo, por ejemplo,
en donde Ab se refiere a un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo y S se refiere al átomo de S en un resto de cisteína a través del cual el grupo funcional se une al Ab. En algunos ejemplos, el grupo reactivo es un grupo funcional, por ejemplo,
que reacciona con un resto de lisina en un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, para formar un enlace con el mismo, por ejemplo,
en donde Ab se refiere a un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo y NH se refiere al átomo de NH en un resto de cadena lateral de lisina a través del cual el grupo funcional se une al Ab.
Como se usa en el presente documento, la expresión "fracción biodegradable" se refiere a una fracción que se degradain vivoen componentes biocompatibles no tóxicos que pueden eliminarse del organismo mediante procesos biológicos ordinarios. En algunas realizaciones, una fracción biodegradable se degrada total o sustancialmentein vivoen el transcurso de aproximadamente 90 días o menos, aproximadamente 60 días o menos o aproximadamente 30 días o menos, donde el grado de degradación se basa en el porcentaje de pérdida de masa de la fracción biodegradable y en donde la degradación completa corresponde al 100 % de pérdida de masa. En las realizaciones de la invención definidas en el presente documento, una fracción biodegradable es un poliéster alifático, tal como poli(£-caprolactona) (PCL), poli(3-hidroxibutirato) (PHB), poli(ácido glicólico) (PGA), poli(ácido láctico) (PLA) y sus copolímeros con ácido glicólico (es decir, poli(D,L-lactida-coglicólido) (PLGA) (Vert M, Schwach G, Engel R y Coudane J (1998) J Control Release 53(1-3):85-92; Jain R A (2000) Biomaterials 2l(23):2475-2490; Uhrich K E, Cannizzaro S M, Langer R S y Shakesheff K M (1999) Chemical Reviews 99(11):3181-3198; y Park T G (1995) Biomaterials 16(15):1123-1130).
Como se usa en el presente documento, las expresiones "cantidad eficaz" "cantidad fisiológicamente eficaz", o "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a la cantidad de compuesto que es suficiente para efectuar el tratamiento, cuando se administra a un sujeto que necesita dicho tratamiento. Una "cantidad fisiológicamente eficaz" de una sustancia activa indica que una cantidad eficaz de las sustancias activas tiene un efecto significativo, observable externamente en el paciente. Por lo tanto, una cantidad fisiológicamente eficaz afecta a una o más de las características (por ejemplo, fenotipo) en el paciente sin necesidad de equipamiento especial para determinar el efecto. Por ejemplo, una cantidad fisiológicamente eficaz de un compuesto divulgado en el presente documento tiene un efecto significativo, observable externamente sobre el comportamiento del paciente al reducir uno o más de los síntomas de la afección a tratar. En consecuencia, se puede determinar si se ha administrado una cantidad eficaz de la sustancia activa observando al paciente y observando si se han producido cambios en el paciente debido a la sustancia activa.
Como se usa en el presente documento, la expresión "enlazador de agente de unión", o "BL"se refiere a cualquier grupo o fracción divalente, trivalente o multivalente que se une, conecta o enlaza con un agente de unión (por ejemplo, un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo) con un compuesto de carga activa expuesto en el presente documento (por ejemplo, bis-octahidrofenantreno carboxamidas) y, opcionalmente, con uno o más compuestos de cadena lateral. En general, los enlazadores de agentes de unión adecuados para los conjugados de anticuerpos descritos en el presente documento son aquellos que son lo suficientemente estables para aprovechar la semivida circulante del anticuerpo y, al mismo tiempo, capaces de liberar la carga activa tras la interiorización del conjugado mediada por antígeno. Los enlazadores pueden ser escindibles o no escindibles. Los enlazadores escindibles son enlazadores que se escinden mediante metabolismo intracelular tras la interiorización, por ejemplo, escisión por hidrólisis, reducción o reacción enzimática. Los enlazadores no escindibles son enlazadores que liberan una carga activa adjunta a través de la degradación lisosomal del anticuerpo tras la interiorización. Los enlazadores adecuados incluyen, aunque sin limitación, enlazadores lábiles al ácido, enlazadores lábiles a la hidrólisis, enlazadores escindibles enzimáticamente, enlazadores lábiles a la reducción, enlazadores autoinmolables y enlazadores no escindibles. Los enlazadores adecuados también incluyen, aunque sin limitación, los que son o comprenden péptidos, glucurónidos, succinimida-tioéteres, unidades de polietilenglicol (PEG), hidrazonas, unidades de mal-caproílo, unidades de dipéptidos, unidades de valina-citrulina y unidades de para-aminobencilo (PAB). En algunas realizaciones, el enlazador del agente de unión (BL) incluye una fracción que se forma por la reacción del grupo reactivo (RG) de un enlazador reactivo (RL) y porción reactiva del agente de unión, por ejemplo, el anticuerpo, anticuerpo modificado o fragmento de unión a antígeno del mismo.
En algunos ejemplos, elBLincluye la siguiente fracción:
o el regioisómero triazolilo, en donde
es el enlace con el agente de unión. En algunos ejemplos, elBLincluye la siguiente fracción:
en donde
es el enlace con el agente de unión. En algunos ejemplos, el BL incluye la siguiente fracción:
o el regioisómero triazolilo, en donde
es el enlace con el agente de unión. En algunos ejemplos, el BL incluye la siguiente fracción:
en donde
es el enlace a la cisteína del anticuerpo o
en donde
es el enlace a la lisina del anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo.
Compuestos o cargas activas
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto que tiene la estructura de Fórmula (I):
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o forma estereoisomérica de los mismos, en donde
cada uno deQ1yQ2es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)- o -C(OH)<2>-;
Wes -CH<2>-, -N(H)- o -O-;
R1es -N(H)R4o -N(R5)<2>;
R2es -N(H)R4;
cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido;
R5es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos uno -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; y cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1-6>, alcoxi C<1-6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGn i, en donde cadanes un número entero de 0-14 y cadanies un número entero de 1-12.
En una realización de Fórmula I,Q1es -CH<2>-,Q<2>es -C(O)- yWes -CH<2>-. En una realización de Fórmula I,Q1es -CH<2>-,Q2es -C(O)- yWes -O-. En una realización de Fórmula I,Q1es -CH<2>-,Q2es -C(O)- yWes -NH-. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R1is -N(H)R4o -N(R5)<2>yR2es -N(H)R4En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R1es -N(H)R4yR2es -N(H)R4En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R1es -N(R5)<2>yR2es -N(H)R4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es hidrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, un resto de aminoácido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, un resto de N-alquilaminoácido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, un resto peptídico. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, una fracción biodegradable. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, alquilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, alquilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, acilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4es, independientemente en cada caso, acilo sustituido. En cualquier realización en este párrafo, unR4es hidrógeno y el otroR4es un resto de aminoácido. En cualquier realización en este párrafo, unR4es hidrógeno y el otroR4es un resto peptídico. En cualquier realización en este párrafo, unR4es hidrógeno y el otroR4es alquilo sustituido. En cualquier realización en este párrafo, unR4es hidrógeno y el otroR4es acilo. En cualquier realización en este párrafo, unR4es hidrógeno y el otroR4es acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es alquilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es arilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es arilalquilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye un nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye un oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye dos heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye dos átomos de nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye dos átomos de oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye un nitrógeno y un oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye tres átomos de nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es heterocicloalquilo y heterocicloalquilo incluye dos átomos de nitrógeno y un átomo de oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos átomos de nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos átomos de oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un nitrógeno y un oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye tres átomos de nitrógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos átomos de nitrógeno y un átomo de oxígeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente e incluye al menos un -OH y -CH<2>OH. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente e incluye al menos un -OH y -CH<2>OH. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente e incluye al menos un -OH y -CH<2>OH. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno primario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno primario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno primario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno secundario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye dos heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno secundario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,R5es un heterocicloalquilo sustituido e incluye tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, como anteriormente, e incluye al menos un nitrógeno secundario. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1>-<6>, alcoxi C<1>-<6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGn i, en donde cada n es un número entero de 0-14 y cadanies un número entero de 1-12. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente halógeno. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente alquilo C<1>-<6>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente alcoxi C<1>-<6>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es -CN. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente una O-glucosa. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente un resto de O-aminoácido. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies un número entero de 1-12. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies 1. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies 2. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies 3. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies 4. En cualquier realización en este párrafo, cadaR6es
independientemente un O-PEGn i, en donde cadanies 12. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1>-<6>, alcoxi C<1>-<6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGn i, en donde cada n es un número entero de 0-14 y cadanies un número entero de 1-12 y cualquier combinación de los mismos. Por ejemplo, en una realización, unR6es halógeno y el otroR6es alquilo C<1>-<6>. Se han contemplado otras realizaciones de combinación deR6ilustrativos, como apreciaría un experto en la materia. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, los aminoácidos adecuados como restos de aminoácidos o para combinarse como restos peptídicos incluyen alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico, y cualquier combinación de los mismos como restos peptídicos, como apreciaría un experto en la materia. Los expertos en la técnica reconocerán que el resto de aminoácido puede ser aquiral o quiral, por ejemplo, restos de L-aminoácidos o restos de D-aminoácidos. Los expertos en la técnica reconocerán que los restos peptídicos pueden ser aquirales o quirales, por ejemplo, incluyendo DL-aminoácidos racémicos o D- o L-aminoácidos no racémicos y mezclas diastereoméricas de los mismos. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, los restos arilalquilo adecuados incluyen, bencilo, fenetilo, fenilpropilo, a-metilbencilo y cada estereoisómero del mismo, y 2-fenilpropilo y cada estereoisómero del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es bencilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es fenetilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es fenilpropilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es a-metilbencilo y cada estereoisómero del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es (R)-a-metilbencilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es (S)-a-metilbencilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es 2-fenilpropilo (es decir, CH<3>CH(F)CH<2>-) y cada estereoisómero del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es (R)-2-fenilpropilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, arilalquilo es (S)-2-fenilpropilo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, halógeno se selecciona entre el grupo que consiste en flúor, cloro, bromo y yodo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, halógeno es flúor. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, halógeno es cloro. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, halógeno es bromo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, halógeno es yodo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, el alquilo C<1-6>se selecciona entre el grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo e isómeros constitucionales de los mismos. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es metilo o -CH<3>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es etilo o -CH<2>CH<3>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es propilo o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es butilo o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es pentilo o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es hexilo o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alcoxi C<1-6>se selecciona entre el grupo que consiste en metoxi, etoxi, propiloxi, butiloxi, pentiloxi y hexiloxi e isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es metoxi o -OCH<3>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es etoxi o -OCH<2>CH<3>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es propiloxi o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es butiloxi o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es pentiloxi o isómeros constitucionales del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, alquilo C<1-6>es hexiloxi o isómeros constitucionales del mismo.
En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(H)(OH)-, Q2 es -C(O)- y W es - CH<2>-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(H)(OH)-, Q2 es -C(O)- y W es -O-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(H)(OH)-, Q2 es -C(O)- y W es -NH-. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(O)- y W es -CH<2>-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(O)- y W es -O-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(O)- y W es -NH-. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -CH<2>- y W es -CH<2>-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -CH<2>- y W es -O-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -CH<2>- y W es -NH-. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(H)(OH)- y W es - CH<2>-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(H)(OH)- y W es -O-. En una realización de Fórmula I, Q1 es -C(O)-, Q2 es -C(H)(OH)- y W es -NH-. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa que tiene la estructura de Fórmula (II):
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa que tiene la estructura de Fórmula (III):
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -N(H)R4. En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -N(R5)<2>. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R2, R4, R5 y R6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, donde R1 es
-NH2; y R4 es un resto de aminoácido. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es un resto de N-alquilaminoácido. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es un resto peptídico. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es una fracción biodegradable. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es alquilo. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es alquilo sustituido. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es acilo. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa de Fórmulas I, II o III, en donde R1 es -NH2; y R4 es acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, los restos de aminoácidos adecuados son los descritos anteriormente en el contexto de la Fórmula I. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, los restos peptídicos adecuados son los descritos anteriormente en el contexto de la Fórmula I. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa en donde R1 es -NH2; y R4 es un resto de aminoácido y el resto de aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa en donde R1 es -NH<2>; y R4 es un resto peptídico, en donde el resto peptídico comprende restos de aminoácidos seleccionados entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, R6 es como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I.
En algunas realizaciones, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa en donde R1 y R2 son -N(H)R4. En una realización, en el presente documento se expone un compuesto o carga activa en donde R1 y R2 son -N(H)R4 y R4 es, independientemente en cada caso, un resto de aminoácido; y el resto de aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico.
En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan compuestos o cargas activas seleccionadas entre el grupo que consiste en:
o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, en el presente documento se proporciona un compuesto que tiene la siguiente estructura,
o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Además en el presente documento se proporcionan compuestos o cargas activas seleccionadas entre el grupo que consiste en:
Agentes de unión
La divulgación proporciona ejemplos de agentes de unión para cualquiera de los conjugados proporcionados en la presente divulgación. Estos incluyen, aunque sin limitación, anticuerpos, linfocinas, hormonas, factores de crecimiento, receptores virales, interleucinas o cualquier otra molécula o sustancia de unión celular o de unión a péptidos. Sin embargo, se apreciará que cuando el agente de unión es distinto de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, el conjugado queda fuera del alcance de las reivindicaciones.
En los conjugados definidos por las reivindicaciones, el agente de unión es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo. El anticuerpo puede tener cualquier forma conocida por los expertos en la técnica. El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier molécula o complejo molecular de unión a antígeno que comprende al menos una región determinante de la complementariedad (CDR) que se une específicamente a o interacciona con un antígeno concreto. El término "anticuerpo" incluye moléculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, así como multímeros de las mismas (por ejemplo, IgM). Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (abreviada en el presente documento como HCVR o V<h>) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios, CH1, CH2 y C<h>3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada en el presente documento como LCVR o VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio (CL1). Las regiones VH y VL pueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDR, del ingléscomplementarity determining regions),intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada VH y VL comprende tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino hasta el extremo carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. En realizaciones diferentes de la presente divulgación, las FR de los anticuerpos (o porción de unión a antígeno de los mismos) adecuadas para los compuestos o cargas activas del presente documento pueden ser idénticas a las secuencias de la línea germinal humana o pueden estar modificadas de forma natural o artificial. Una secuencia de aminoácidos consenso puede definirse basándose en un análisis en paralelo de dos o más CDR. El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, también incluye fragmentos de unión a antígeno de moléculas de anticuerpo completas. Las expresiones "parte de unión a antígeno" de un anticuerpo, "fragmento de unión al antígeno" de un anticuerpo y similares, como se usa en el presente documento, incluyen cualquier polipéptido o glucoproteína de origen natural, obtenible enzimáticamente, sintético o modificado por ingeniería genética que se une específicamente a un antígeno para formar un complejo. Pueden obtenerse fragmentos de unión a antígeno de un anticuerpo, por ejemplo, a partir de moléculas de anticuerpos completos utilizando cualquier técnica estándar adecuada, tales como digestión proteolítica o técnica(s) de ingeniería genética recombinante que implican la manipulación y expresión de ADN que codifica dominios variables y, opcionalmente, constantes del anticuerpo. Dicho ADN se conoce y/o se puede adquirir fácilmente de, por ejemplo, fuentes comerciales, bibliotecas de ADN (incluyendo, por ejemplo, fagotecas de anticuerpos) o puede sintetizarse. El ADN puede secuenciarse y manipularse químicamente o mediante técnicas de biología molecular, por ejemplo, para disponer uno o más dominios variables y/o constantes en una configuración adecuada, o para introducir codones, crear restos de cisteína, modificar, añadir o eliminar aminoácidos, etc. Algunos ejemplos no limitativos de fragmentos de unión a antígeno incluyen: (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas de Fv monocatenario (scFv); (vi) fragmentos dAb; y (vii) unidades mínimas de reconocimiento que consisten en los restos de aminoácido que imitan la región hipervariable de un anticuerpo (por ejemplo, una CDR aislada tal como un péptido CDR3) o un péptido restringido
FR3-CDR3-FR4. Otras moléculas genomanipuladas, tales como anticuerpos específicos de dominio, anticuerpos de un solo dominio, anticuerpos con dominio eliminado, anticuerpos quiméricos, anticuerpos con CDR injertados, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, minicuerpos, nanocuerpos (por ejemplo, nanocuerpos monovalentes, nanocuerpos bivalentes, etc.), agentes inmunofarmacéuticos modulares pequeños (SMIP) y dominios IgNAR variables de tiburón, también se incluyen dentro de la expresión "fragmento de unión al antígeno", como se utiliza en el presente documento. Un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo normalmente comprenderá al menos un dominio variable. El dominio variable puede ser de cualquier tamaño o composición de aminoácidos y generalmente comprenderá al menos una CDR que está adyacente a o en fase con una o más secuencias marco. En fragmentos de unión a antígeno que tienen un dominio Vh asociado con un dominio Vl, los dominios Vh y Vl pueden situarse uno con respecto al otro en cualquier disposición adecuada. Por ejemplo, la región variable puede ser dimérica y contener los dímeros Vh-Vh, Vh-Vl o Vl-Vl. Como alternativa, el fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo puede contener un dominio V<h>o V<l>monomérico. En determinadas realizaciones, un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo puede contener al menos un dominio variable unido de manera covalente a al menos un dominio constante.
Configuraciones no limitantes, ilustrativas, de dominios variables y constantes que pueden encontrarse dentro de un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de la presente invención incluyen: (i) Vh-Ch1; (ii) Vh-Ch2; (iii) Vh-Ch3;
(iv) Vh-Ch1-Ch2; (v) Vh-Ch1-Ch2-Ch3; (vi) Vh-Ch2-Ch3; (vii) Vh-Cl; (viii) Vl-Ch1, (ix) Vl-Ch2; (x) Vl-C Ch2; (xii) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii) Vl-Ch2-Ch3; y (xiv) Vl-Cl. En cualquier configuración de dominios variables y constantes, incluidas cualquiera de las configuraciones ilustrativas enumeradas anteriormente, los dominios variables y constantes pueden estar unidos directamente entre sí o pueden estar unidos mediante una región bisagra o enlazadora completa o parcial. Una región bisagra puede consistir en al menos 2 (por ejemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 o más) aminoácidos que dan lugar a una unión flexible o semiflexible entre dominios variables y/o constantes adyacentes en una única molécula polipeptídica. Como ocurre con las moléculas de anticuerpo completas, los fragmentos de unión a antígeno pueden ser monoespecíficos o multiespecíficos (por ejemplo, biespecíficos). Un fragmento de unión a antígeno multiespecífico de un anticuerpo normalmente comprenderá al menos dos dominios variables diferentes, en donde cada dominio variable es capaz de unirse específicamente a un antígeno diferente o a un epítopo distinto en el mismo antígeno. Cualquier formato de anticuerpo multiespecífico, incluyendo los formatos de anticuerpo biespecífico ilustrativos que se divulgan en el presente documento, puede adaptarse para su uso en el contexto de un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo de la presente divulgación mediante técnicas habituales disponibles en la técnica.
En determinadas realizaciones descritas en el presente documento, los anticuerpos descritos en el presente documento son anticuerpos humanos. La expresión "anticuerpo humano", como se usa en el presente documento, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos humanos de la presente divulgación pueden incluir restos de aminoácido no codificados por las secuencias de inmunoglobulina de estirpe germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica de sitioin vitroo por mutación somáticain vivo),por ejemplo, en las CDR y, en particular, en la CDR3. Sin embargo, la expresión "anticuerpo humano", como se usa en el presente documento, no pretende incluir anticuerpos en los que secuencias de CDR procedentes de la estirpe germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se han injertado en secuencias marco humanas. La expresión "anticuerpo humano" no incluye moléculas naturales que normalmente existen sin modificación o intervención/manipulación humana, en un organismo vivo de origen natural, no modificado. Los anticuerpos de la presente divulgación pueden, en algunas realizaciones, ser anticuerpos humanos recombinantes. La expresión "anticuerpo humano recombinante", como se usa en el presente documento, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresados, se crean o se aíslan por medios recombinantes, tales como los anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula hospedadora (que se describe con más detalle más adelante), anticuerpos aislados de un recombinante, biblioteca de anticuerpo humano combinatorio (que se describe en más detalle posteriormente), anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para genes de inmunoglobulina humana (véase, por ejemplo, Tayloret al.(1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados mediante cualquier otro medio que implique el corte y empalme de secuencias génicas de inmunoglobulina humana con otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes procedentes de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. En determinadas realizaciones, sin embargo, tales anticuerpos humanos recombinantes se someten a mutagénesisin vitro(o, cuando se utiliza un animal transgénico para secuencias de Ig humana, mutagénesis somáticain vivo)y, por tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones Vh y Vl de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque proceden de secuencias V<h>y V<l>de la línea germinal humana, y están relacionadas con ella, no pueden existir de forma natural dentro del repertorio de la estirpe germinal de anticuerpos humanosin vivo.Los anticuerpos humanos pueden existir en dos formas que se asocian a la heterogeneidad de bisagra. En una forma, una molécula de inmunoglobulina comprende una construcción de cuatro cadenas estable de aproximadamente 150-160 kDa en donde los dímeros se mantienen juntos mediante un enlace disulfuro intercatenario de la cadena pesada. En una segunda forma, los dímeros no están unidos a través de enlaces disulfuro intercatenarios y se forma una molécula de aproximadamente 75-80 kDa compuesta por una cadena ligera y pesada acopladas covalentemente (semianticuerpo). Estas formas han sido extremadamente difíciles de separar, incluso después de la purificación por afinidad. La frecuencia de aparición de la segunda forma en diferentes isotipos de IgG inalterada se debe, aunque no de forma limitativa, a diferencias estructurales asociadas al isotipo de la región bisagra del anticuerpo.
Una sustitución de un único aminoácido en la región bisagra de la bisagra de IgG4 humana puede reducir significativamente la aparición de la segunda forma (Angalet al.(1993)Molecular Immunology30:105) hasta los niveles normalmente observados usando una bisagra de IgG1 humana. La presente divulgación abarca anticuerpos que tienen una o más mutaciones en la región bisagra, la región Ch2 o la región Ch3, que puede ser deseable, por ejemplo, en la producción, para mejorar el rendimiento de la forma de anticuerpo deseada. Los anticuerpos descritos en el presente documento pueden ser anticuerpos aislados. Un "anticuerpo aislado", como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo que se ha identificado y separado y/o recuperado de al menos un componente de su entorno natural. Por ejemplo, un anticuerpo que se ha separado o eliminado de al menos un componente de un organismo, o de un tejido o célula en donde el anticuerpo existe de forma natural o se produce de forma natural, es un "anticuerpo aislado" para los fines de la presente divulgación. Un anticuerpo aislado también incluye un anticuerpoin situdentro de una célula recombinante. Los anticuerpos aislados son anticuerpos que se han sometido a al menos una etapa de purificación o aislamiento. De acuerdo con determinadas realizaciones, un anticuerpo aislado puede carecer sustancialmente de otro material celular y/o agentes químicos. Los anticuerpos usados en el presente documento pueden comprender una o más sustituciones, inserciones y/o deleciones de aminoácidos en las regiones marco y/o CDR de los dominios variables de cadena pesada y ligera en comparación con las secuencias de la estirpe germinal correspondientes de las que derivan los anticuerpos. Dichas mutaciones pueden determinarse fácilmente comparando las secuencias de aminoácidos desveladas en el presente documento con secuencias de la línea germinal disponibles, por ejemplo, en bases de datos públicas de secuencias de anticuerpos. La presente divulgación incluye anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que proceden de cualquiera de las secuencias de aminoácidos desveladas en el presente documento, en donde uno o más aminoácidos dentro de una o más regiones marco y/o CDR están mutados en el resto o restos correspondientes de la secuencia de la línea germinal de la que procede el anticuerpo, o en el resto o restos correspondientes de otra secuencia de la línea germinal humana, o en una sustitución de aminoácidos conservadora del resto o restos de la línea germinal correspondientes (dichos cambios de secuencia se denominan en conjunto en el presente documento "mutaciones de la línea germinal"). Un experto en la materia, partiendo de las secuencias de la región variable de cadena pesada y ligera desveladas en el presente documento, puede producir numerosos anticuerpos y fragmentos de unión a antígenos que comprendan una o más mutaciones individuales de la línea germinal o combinaciones de las mismas. En determinadas realizaciones, todos los restos de la región marco y/o CDR dentro de los dominios Vh y/o Vl se retromutan a los restos encontrados en la secuencia de la estirpe germinal original de la que se obtuvo el anticuerpo. En otras realizaciones, únicamente determinados restos retromutan a la secuencia de línea germinal original, por ejemplo, únicamente los restos mutados encontrados dentro de los 8 primeros aminoácidos de FR1 o dentro de los 8 últimos aminoácidos de FR4, o únicamente los restos mutados encontrados dentro de CDR1, CDR2 o CDR3. En otras realizaciones, uno o más del resto o restos marco y/o CDR están mutados en el resto o restos correspondientes de una secuencia de línea germinal diferente (es decir, una secuencia de línea germinal que es diferente de la secuencia de línea germinal de la cual se obtuvo originalmente el anticuerpo). De manera adicional, los anticuerpos de la presente divulgación pueden contener cualquier combinación de dos o más mutaciones de la estirpe germinal dentro de las regiones marco conservadas y/o las CDR, por ejemplo, en donde determinados restos individuales mutan al resto correspondiente de una secuencia de la línea germinal particular, mientras que otros restos determinados, que difieren de los de la secuencia de la línea germinal original, se mantienen o mutan al resto correspondiente de una secuencia de línea germinal distinta. Una vez obtenidos, los anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno que contienen una o más mutaciones de la estirpe germinal pueden probarse con respecto a una o más propiedades deseadas tales como, especificidad de unión mejorada, mayor afinidad de unión, propiedades biológicas antagonistas o agonistas mejoradas o potenciadas (según sea el caso) e inmunogenicidad reducida, etc. Los anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno obtenidos de esta manera general están abarcados en la presente divulgación. Los anticuerpos útiles para los compuestos o cargas activas del presente documento también incluyen anticuerpos que comprenden variantes de cualquiera de HCVR, LCVR y/o CDR divulgadas en el presente documento que tienen una o más sustituciones conservativas. El término "epítopo" se refiere a un determinante antigénico que interacciona con un sitio de unión a antígeno específico en la región variable de una molécula de anticuerpo conocida como parátopo. Un único antígeno puede tener más de un epítopo. Por lo tanto, distintos anticuerpos pueden unirse a distintas áreas de un antígeno y pueden tener distintos efectos biológicos. Los epítopos pueden ser conformacionales o lineales. Un epítopo conformacional se produce mediante aminoácidos yuxtapuestos espacialmente de diferentes segmentos de la cadena polipeptídica lineal. Un epítopo lineal es uno producido por restos de aminoácidos adyacentes en una cadena polipeptídica. En determinadas realizaciones, un epítopo puede incluir fracciones de sacáridos, grupos fosforilo o grupos sulfonilo en el antígeno.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo comprende una cadena ligera. En determinadas realizaciones, la cadena ligera variable es una cadena ligera kappa. En determinadas realizaciones, la cadena ligera es una cadena ligera lambda. En determinadas realizaciones, el anticuerpo comprende una cadena pesada. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgA. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgD. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgE. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgG. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgM. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgG1. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgG2. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgG3. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgG4. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgA1. En algunas realizaciones, la cadena pesada es una IgA2.
En algunas realizaciones, el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fv. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento F(ab')<2>. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab'. En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento scFv (sFv). En algunas realizaciones, el fragmento de anticuerpo es un fragmento scFv-Fc.
En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo policlonal.
En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo humano.
El anticuerpo puede tener especificidad de unión por cualquier antígeno que los expertos en la técnica consideren adecuado. En determinadas realizaciones, el antígeno es una molécula transmembrana (por ejemplo, un receptor) o un factor de crecimiento. Los antígenos ilustrativos incluyen, aunque sin limitación, moléculas tales como receptores secuestrantes de clase A, incluido el receptor secuestrante A (SR-A o MSR1), receptor de macrófagos con estructura colagenosa (MARCO), receptor secuestrante con lectina de tipo C (SRCL) y receptor secuestrante A-5 (SCARA5), COLEC12, receptores secuestrantes de macrófagos de clase B, incluidos CD36, LIMPII, SRBI, SRBII, receptor secuestrante de clase D CD68 y glicoproteína de membrana lisosomal (LAMP), receptor secuestrante de clase E que incluye el receptor 1 de lipoproteína de baja densidad oxidado similar a la lectina LOX-1 y Dectina-1, receptores secuestrantes de clase F, incluido el receptor secuestrante expresado por células endoteliales I (SREC-I) y SREC-II, así como múltiples dominios similares al factor de crecimiento epidérmico (EGF) (MEGF)10, ligando de quimiocina CXC del receptor secuestrante de clase G 16 (CXCL16), receptores secuestrantes de clase H que incluyen fasciclina, tipo EGF, receptor secuestrante que contiene dominio de unión y similar a EGF de tipo lámina 1 (FEEL-1) y 2 (FEEL-2), receptor secuestrante de clase I CD163 y receptor secuestrante de clase J para productos finales de glicación avanzada (RAGE), otros miembros de la superfamilia de lectinas de tipo C, incluidos DEC205, CD206, Dectina-2, Mincle, DC-SIGN y DNGR-1, y otras proteínas de membrana tales como el miembro relacionado con la familia B7, incluido V-set, y el dominio Ig que contiene 4 (VSIG4), receptor del factor estimulante de colonias 1 (CSF1R), receptor de asialoglicoproteína (ASGPR) y proteína similar al precursor de beta amiloide 2 (APLP-2). En algunas realizaciones, el antígeno es PRLR o HER2. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo anti-PRLR o anti-HER2. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo anti-MSR1. En el presente documento se describen anticuerpos anti-MSR1 ilustrativos.
Los enlazadores de agente de unión pueden unirse al agente de unión, por ejemplo, anticuerpo o molécula de unión a antígeno, a través de una unión en un aminoácido particular dentro del anticuerpo o molécula de unión al antígeno. Las uniones de aminoácidos ilustrativas que se pueden utilizar en el contexto de este aspecto de la divulgación incluyen, por ejemplo, lisina (véanse, por ejemplo, US 5,208,020; US 2010/0129314; Hollanderet al.,Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; el documento WO 2005/089808; US 5,714,586; US 2013/0101546; y US 2012/0585592), cisteína (véanse, por ejemplo, US 2007/0258987; el documento WO 2013/055993; el documento WO 2013/055990; el documento WO 2013/053873; el documento WO 2013/053872; el documento WO 2011/130598; US 2013/0101546; y US 7.750.116), selenocisteína (véanse, por ejemplo, el documento WO 2008/122039; y Hoferet al.,Proc. Natl. Acad. Sci., EE.UU., 2008, 105:12451-12456), formil-glicina (véanse, por ejemplo, Carricoet al.,Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwalet al.,Proc. Natl. Acad. Sci., EE.UU., 2013, 110:46-51 y Rabukaet al.,Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067), aminoácidos no naturales (véase, por ejemplo, los documentos WO 2013/068874 y WO 2012/166559) y aminoácidos ácidos (véase, por ejemplo, WO 2012/05982). Los enlazadores también se pueden conjugar con una proteína de unión a antígeno mediante la unión a carbohidratos (véase, por ejemplo, los documentos US 2008/0305497, WO 2014/065661 y Ryanet al.,Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130).
En algunos ejemplos, el agente de unión es un anticuerpo o molécula de unión a antígeno, y el anticuerpo está unido al enlazador a través de un resto de lisina. En algunas realizaciones, el anticuerpo o molécula de unión a antígeno se une al enlazador a través de un resto de cisteína.
Los enlazadores también se pueden conjugar con uno o más restos de glutamina mediante conjugación quimioenzimática basada en transglutaminasa (véase, por ejemplo, Dennleret al.,Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569 578) y el documento WO 2017/147542). Por ejemplo, en presencia de transglutaminasa, uno o más restos de glutamina de un anticuerpo pueden acoplarse a un compuesto de amina primaria. Brevemente, en algunas realizaciones, se trata un anticuerpo que tiene un resto de glutamina (por ejemplo, un resto Gln295) con un compuesto de amina primaria, descrito con más detalle a continuación, en presencia de la enzima transglutaminasa. Los compuestos de amina primaria incluyen, por ejemplo, cargas activas o enlazador-cargas activas, que proporcionan directamente conjugados de anticuerpos y fármacos mediante acoplamiento mediado por transglutaminasa. Los compuestos de amina primaria también incluyen enlazadores y espaciadores que están funcionalizados con grupos reactivos que pueden tratarse posteriormente con compuestos adicionales para la síntesis de conjugados de anticuerpos y fármacos. Los anticuerpos que comprenden restos de glutamina se pueden aislar de fuentes naturales o diseñarse para que comprendan uno o más restos de glutamina. Las técnicas para diseñar restos de glutamina en una cadena polipeptídica de anticuerpo (anticuerpos modificados con glutaminilo o moléculas de unión a antígeno) están dentro del conocimiento de los profesionales en la técnica. En determinadas realizaciones, el anticuerpo está aglicosilado.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo comprende un resto de glutamina en una o más posiciones de la cadena pesada numeradas 295 en el sistema de numeración EU. En la presente divulgación, esta posición se denomina glutamina 295, Gln295 o Q295. Los expertos reconocerán que este es un resto de glutamina conservado en la secuencia natural de muchos anticuerpos. En otras realizaciones útiles, el anticuerpo se puede diseñar para que comprenda un resto de glutamina. Las técnicas para modificar una secuencia de anticuerpo para incluir un resto de glutamina están dentro del conocimiento de los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Ausubelet al.Current Protoc. Mol. Biol.).
En determinadas realizaciones, el anticuerpo o un anticuerpo modificado con glutaminilo o molécula de unión a antígeno comprende al menos un resto de glutamina en al menos una secuencia de cadena polipeptídica. En determinadas realizaciones, el anticuerpo o un anticuerpo modificado con glutaminilo o una molécula de unión a antígeno comprende dos polipéptidos de cadena pesada, cada uno con un resto Gln295. En realizaciones adicionales, el anticuerpo o un anticuerpo modificado con glutaminilo o molécula de unión a antígeno comprende uno o más restos de glutamina en un sitio distinto de una cadena pesada 295. En el presente documento se incluyen anticuerpos de esta sección que portan mutaciones de Asn297Gln (N297Q) descritas en el presente documento. En el presente documento Se incluyen anticuerpos de esta sección que portan restos Gln55 (Q55). Como se describe en el presente documento, la numeración de restos se realiza según el sistema de numeración EU.
Compuestos de amina primaria
En determinadas realizaciones, los compuestos de amina primaria útiles para el acoplamiento mediado por transglutaminasa de un anticuerpo (o compuesto de unión a antígeno) que comprende una glutamina pueden ser cualquier compuesto de amina primaria considerado útil por el profesional experto. En general, el compuesto de amina primaria tiene la fórmula H<2>N-R, donde R puede ser cualquier grupo compatible con el anticuerpo y las condiciones de reacción. En determinadas realizaciones, R es alquilo, alquilo sustituido, heteroalquilo o heteroalquilo sustituido.
En algunas realizaciones, el compuesto de amina primaria comprende un grupo reactivo o un grupo reactivo protegido. Los grupos reactivos útiles incluyen azidas, alquinos, cicloalquinos, tioles, alcoholes, cetonas, aldehídos, ácidos, ésteres, hidrazidas, anilinas y aminas. En determinadas realizaciones, el grupo reactivo se selecciona entre el grupo que consiste en azida, alquino, sulfhidrilo, cicloalquino, aldehído y carboxilo.
En determinadas realizaciones, el compuesto de amina primaria es conforme a la fórmula H<2>N-LL-X, dóndeLLes un espaciador divalente yXes un grupo reactivo o grupo reactivo protegido. En realizaciones particulares,LLes un grupo polietilenglicol (PEG) divalente. En determinadas realizaciones,Xse selecciona entre el grupo que consiste en -SH, -N<3>, alquino, aldehído y tetrazol. En realizaciones particulares, X es -N<3>.
En determinadas realizaciones, el compuesto de amina primaria es conforme a una de las siguientes fórmulas:
H2N-(CH2)n-X;
H2N-(CH2CH2O)n-(CH2)p-X;
H<2>N-(CH<2>)n-N(H)C(O)-(CH<2>)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H<2>N-(CH<2>)n-C(O)N(H)-(CH<2>)m-X;
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X;
H<2>N-(CH<2>CH<2>O)n-N(H)C(O)-(CH<2>)m-X;
H<2>N-(CH<2>)n-C(O)N(H)-(CH<2>CH<2>O)m-(CH<2>)p-X;
y
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X;
dondenes un número entero seleccionado de 1 a 12;
mes un número entero seleccionado de 0 a 12;
pes un número entero seleccionado de 0 a 2;
yXse selecciona entre el grupo que consiste en -SH, -N<3>, -C=CH, -C(O)H, tetrazol y cualquiera de
En lo anterior, cualquiera de los grupos alquilo (es decir, -CH2-) pueden estar sustituidos opcionalmente, por ejemplo, con alquilo C i-8, metilformilo o -SO3H. En determinadas realizaciones, los grupos alquilo no están sustituidos.
En determinadas realizaciones, el compuesto de amina primaria se selecciona entre el grupo que consiste en:
En realizaciones particulares, el compuesto de amina primaria es
En los ejemplos siguientes se proporcionan condiciones ilustrativas para las reacciones anteriores.
Enlazadores
En determinadas realizaciones, la porción de enlazadorLde los conjugados descritos en el presente documento es una fracción, por ejemplo, una fracción divalente, que une covalentemente un agente de unión a un compuesto de carga activa descrito en el presente documento. En otros casos, el enlazadorLes una fracción trivalente o multivalente que une covalentemente un agente de unión a un compuesto de carga activa descrito en el presente documento. Se pueden encontrar enlazadores adecuados, por ejemplo, en Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins; Phillips, G. L., Ed.; Springer Verlag: Nueva York, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Ducry, L., Ed.; Humana Press, 2013; Antibody-Drug Conjugates; Wang, J., Shen, W.-C. y Zaro, J. L., Eds.; Springer International Publishing, 2015. Los compuestos de carga activa son compuestos de las Fórmulas I, II y III anteriores y sus restos después de la unión o incorporación con el enlazadorL,en donde la combinación de compuestos o cargas activas con el enlazadorLson enlazador-cargas activas (LP). Los expertos en la técnica reconocerán que ciertos grupos funcionales del compuesto o fracciones de carga activa son convenientes para unirse a enlazadores y/o agentes de unión. Dichos grupos incluyen aminas, hidroxilos, fosfatos y azúcares.
En determinadas realizaciones, los enlazadores son estables en condiciones fisiológicas. En determinadas realizaciones, los enlazadores son escindibles, por ejemplo, capaces de liberar al menos el compuesto o parte de carga activa en presencia de una enzima o en un intervalo o valor de pH concreto. En algunas realizaciones, un enlazador comprende una fracción escindible mediante enzima. Las fracciones escindibles por enzimas ilustrativas incluyen, aunque sin limitación, enlaces peptídicos, enlaces éster, hidrazonas y enlaces disulfuro. En algunas realizaciones, el enlazador comprende un enlazador escindible con catepsina.
En algunas realizaciones, el enlazador comprende una fracción no escindible. En algunas realizaciones, el enlazador no escindible se obtiene de
o un resto del mismo. En algunas realizaciones, el enlazador no escindible-carga activa es
o un regioisómero del mismo. En algunas realizaciones, el enlazador no escindible se obtiene de
o un resto del mismo. En algunas realizaciones, el enlazador no escindible-carga activa es
o un regioisómero del mismo. En una realización, el enlazador es ciclohexanocarboxilato de maleimida o ácido 4-(N-maleimidometil)ciclohexanocarboxílico (MCC). En las estructuras,
indica un enlace a un agente de unión. En las estructuras, en algunos ejemplos,
indica un resto químico de clic que resulta de la reacción de, por ejemplo, un agente de unión y una carga activa del enlazador.
En algunas realizaciones, los enlazadores adecuados incluyen, aunque sin limitación, aquellos que están unidos químicamente a dos restos de cisteína de un único agente de unión, por ejemplo, anticuerpo. Dichos enlazadores pueden servir para imitar los enlaces disulfuro del anticuerpo que se rompen como resultado del proceso de conjugación.
En algunas realizaciones, el enlazador comprende uno o más aminoácidos. Los aminoácidos adecuados incluyen L o D-a-aminoácidos naturales, no naturales, estándar, no estándar, proteinogénicos, no proteinogénicos. En algunas realizaciones, el enlazador comprende alanina, valina, glicina, leucina, isoleucina, metionina, triptófano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina, histidina o citrulina, un derivado de los mismos o combinación de los mismos. En determinadas realizaciones, una o más cadenas laterales de los aminoácidos están unidas a un grupo de cadena lateral, descrito a continuación. En algunas realizaciones, el enlazador comprende valina y citrulina. En algunas realizaciones, el enlazador comprende lisina, valina y citrulina. En algunas realizaciones, el enlazador comprende lisina, valina y alanina. En algunas realizaciones, el enlazador comprende valina y alanina.
En algunas realizaciones, el enlazador comprende un grupo autoinmolable. El grupo autoinmolable puede ser cualquier grupo conocido por los expertos. En realizaciones particulares, el grupo autoinmolable es p-aminobencilo (PAB) o un derivado del mismo. Los derivados útiles incluyen p-aminobenciloxicarbonilo (PABC). Los expertos reconocerán que un grupo autoinmolable es capaz de llevar a cabo una reacción química que libera los átomos restantes de un enlazador de una carga activa.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
en donde:
SP1 es un espaciador;
SP2 es un espaciador;
es uno o más enlaces al agente de unión;
es uno o más enlaces a la carga activa;
cadaAAes un aminoácido; y
p1es un número entero de 0 a 10.
El espaciadorSP1 es una fracción que conecta la fracción (AA)pi resto al agente de unión (BA) o a un resto de grupo reactivo que está unido aBA.Los espaciadoresSP1 adecuados incluyen, aunque sin limitación, aquellos que comprenden alquileno o poliéter, o ambos. Los extremos de los espaciadores, por ejemplo, la porción del espaciador unida al agente de unión o a unAA,pueden ser fracciones derivadas de fracciones reactivas que se utilizan con fines de acoplamiento del anticuerpo o unAAal espaciador durante la síntesis química del conjugado. En determinadas realizaciones,p1es 0, 1, 2, 3 o 4. En realizaciones particulares,p1es 0. En realizaciones particulares,p1es 2. En realizaciones particulares,p1es 3. En realizaciones particulares,p1es 4.
En algunas realizaciones, el espaciadorSP1 comprende un alquileno. En algunas realizaciones, el espaciadorSP1 comprende un alquileno C<5-7>. En algunas realizaciones, el espaciadorSP1 comprende un poliéter. En algunas realizaciones, el espaciadorSP1 comprende un polímero de óxido de etileno tal como polietilenglicol.
En algunas realizaciones, el espaciadorSP1 es:
en donde:
RG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente de unión;
es un enlace con el agente de unión;
es un enlace con (AA)p<1>;
bes un número entero de 2 a 8; y
p1es un número entero de 0 a 4.
El grupo reactivoRGpuede ser cualquier grupo reactivo conocido por los expertos en la técnica como capaz de formar uno o más enlaces con el agente de unión. El grupo reactivoRGes una fracción que comprende una porción en su estructura que es capaz de reaccionar con el agente de unión (por ejemplo, reaccionar con un anticuerpo en sus restos de cisteína o lisina, o en una fracción azida, por ejemplo, un anticuerpo funcionalizado con PEG-N3 en uno o más restos de glutamina) para formar un compuesto de FórmulaA, B, C, D, A', B', C', D'oA”.Después de la conjugación con el agente de unión, el grupo reactivo se convierte en el resto de grupo reactivo (RG'). Los grupos reactivos ilustrativos incluyen, aunque sin limitación, los que comprenden haloacetilo, isotiocianato, succinimida, Nhidroxisuccinimida o porciones de maleimida que son capaces de reaccionar con el agente de unión.
En determinadas realizaciones, los grupos reactivos incluyen, aunque sin limitación, alquinos. En determinadas realizaciones, los alquinos son alquinos capaces de sufrir reacciones de 1,3-cicloadición con azidas en ausencia de catalizadores de cobre, tales como alquinos tensionados. Los alquinos tensionados son adecuados para cicloadiciones de alquino-azida promovidas por tensión (SPAAC), cicloalquinos, por ejemplo, ciclooctinas, y alquinos benzanillados. Los alquinos adecuados incluyen, aunque sin limitación, dibenzoazaciclooctina o
(DIBAC), dibenzociclooctina o
(DIBO), biarilazaciclooctinona o
(BARAC), ciclooctina difluorada o
(DIFO), sustituido, por ejemplo, alquinos fluorados, aza-cicloalquinos, biciclo[6.1.0]nonino o
(BCN) y derivados de los mismos. Los alquinos particularmente útiles incluyen
En determinadas realizaciones, el agente de unión se une directamente aRG'.En determinadas realizaciones, el agente de unión está unido aRG'a través de un espaciador, por ejemploSP4, a continuación. En realizaciones particulares, el agente de unión está unido aRG'mediante un espaciador PEG. Como se analiza a continuación en detalle, en determinadas realizaciones, el agente de unión se prepara funcionalizándolo con uno o más grupos azido. Cada grupo azido es capaz de reaccionar conRGpara formarRG'.En realizaciones particulares, el agente de unión se derivatiza con -PEG-N<3>unido a un resto de glutamina. Los agentes de unión derivatizados de -N<3>ilustrativos, métodos para su preparación y métodos para su uso al reaccionar conRGse proporcionan en el presente documento. En determinadas realizaciones,RGes un alquino adecuado para participar en 1,3-cicloadiciones, yRG'es una fracción 1,2,3-triazolilo formada a partir de la reacción deRGcon un agente de unión funcionalizado con azido. A modo de ejemplo adicional, en determinadas realizaciones,RG'está unido al agente de unión como se muestra en
o
o una mezcla de cada regioisómero. CadaR y R'es como se describe en el presente documento.
El espaciadorSP2 es una fracción que conecta la fracción (AA)pi a la carga activa. Los espaciadores adecuados incluyen, aunque sin limitación, los descritos anteriormente como espaciadoresSP1. Los espaciadoresSP2 más adecuados incluyen, aunque sin limitación, aquellos que comprenden alquileno o poliéter, o ambos. Los extremos de los espaciadoresSP2, por ejemplo, la porción del espaciador unida directamente a la carga activa o a unAA,pueden ser fracciones derivadas de fracciones reactivas que se utilizan con fines de acoplamiento de la carga activa oAAal espaciadorSP2 durante la síntesis química del conjugado. En algunos ejemplos, los extremos de los espaciadoresSP2, por ejemplo, la porción del espaciadorSP2 unido directamente a la carga activa o a unAA,pueden ser restos de fracciones reactivas que se utilizan con fines de acoplamiento de la carga activa o unAAal espaciador durante la síntesis química del conjugado.
En algunas realizaciones, el espaciadorSP2 se selecciona entre el grupo que consiste en -O-, -N(R6')-, -R4'-,-R5'-, -OR5'- y -OP(O)(OR6')O-, en donde:
R4'es-Z'-Y-X-;
Xse selecciona entre el grupo que consiste en -O- y -N(H)-;
Yse selecciona entre el grupo que consiste en alquileno, alquileno sustituido (incluido, sin limitación, sustitución oxo, es decir, =O), heteroalquileno y heteroalquileno sustituido;
Z"se selecciona entre el grupo que consiste en -O- y -N(H)-;
R5'es heterocicloalquileno o heterocicloalquileno sustituido, en donde cada heterocicloalquileno o heterocicloalquileno sustituido incluye uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, incluyendo al menos dos fracciones seleccionadas entre el grupo que consiste en -O-, -N(H)- y
útiles para unirse al resto de la molécula; y
cadaR6'es -H, un resto de aminoácido, un péptido o alquilo.
En determinadas realizaciones, el espaciadorSP2se selecciona entre el grupo que consiste en -O-, -N(H)-,
En determinadas realizaciones, cada uno
es un enlace a la carga activa, y cada
es un enlace con (AA)pi.
En las fórmulas anteriores, cadaAAes un aminoácido u, opcionalmente, un resto p-aminobenciloxicarbonilo (PABC) o
en dondeces 1,2, 3, 4, 5 o 6. Si hay PABC presente, preferentemente sólo está presente un PABC. Preferentemente, el resto de PABC, si está presente, está unido a una Aterminal en el grupo (AA)pi, proximal a la carga activa. Si
está presente, preferentementeces 2. Preferentemente, el
resto, si está presente yces 2, está unido a unAAterminal en el grupo (AA)pi, distal a la carga activa. Los aminoácidos adecuados para cadaAAincluyen L- o D-a-aminoácidos naturales, no naturales, estándar, no estándar, proteinogénicos, no proteinogénicos. En algunas realizaciones, el enlazadorAAcomprende alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptófano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina, histidina o citrulina, un derivado de estos o una combinación de estos. En determinadas realizaciones, una o más cadenas laterales de los aminoácidos están unidas a un grupo de cadena lateral, descrito a continuación. En algunas realizaciones,p1es cero. En algunas realizaciones,p1es dos. En algunas realizaciones, el (AA)pi es valina-citrulina. En algunas realizaciones, (AA)pi es citrulina-valina. En algunas realizaciones, (AA)pi es valina-alanina. En algunas realizaciones, (AA)pi es alanina-valina. En algunas realizaciones, (AA)pi es valina-glicina. En algunas realizaciones, (AA)pi es glicina-valina. En algunas realizaciones,p1es tres. En algunas realizaciones, el (AA)pi es valina-citrulina-PABC. En algunas realizaciones, (AA)pi es citrulina-valina-PABC. En algunas realizaciones, el (AA)pi es lisina-valina-citrulina-PABC. En algunas realizaciones, (AA)pi es glutamatovalina-citrulina. En algunas realizaciones, (AA)pi es glutamina-valina-citrulina. En algunas realizaciones, (AA)pi es lisina-valina-alanina. En algunas realizaciones, (AA)pi es lisina-valina-citrulina. En algunas realizaciones,pies cuatro. En algunas realizaciones, (AA)pi es glutamato-valina-citrulina-PAB. En algunas realizaciones, (AA)pi es glutaminavalina-citrulina-PABC. Los expertos reconocerán PABC como un resto de p-aminobenciloxicarbonilo con las siguientes estructuras ilustrativas:
o
Se ha demostrado que el resto de PABC facilita la escisión de ciertos enlazadoresin vitroein vivo.En algunas realizaciones, el enlazador es: o
en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C1-6. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o
en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cadaR9 es -CH<3>, -CH(CHa)<2>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>;
qes un número entero de uno a tres; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento;qles un número entero de uno a cinco; yHes -O- o -NH-. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. En una realización,Hes -O-. En una realización,Hes -NH-. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cadaR9 es -CH<3>, -CH(CHs)<2>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>;
qes un número entero de uno a tres; y
cada A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento;qles un número entero de uno a cinco; yHes -O- o -NH-. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C i-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C i-6. En una realización,H es-O-. En una realización,Hes -NH-. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En cualquiera de las realizaciones anteriores, el grupo (AA)pi se puede modificar con uno o más grupos de mejora. Ventajosamente, el grupo potenciador puede unirse a la cadena lateral de cualquier aminoácido en (AA)pi. Los aminoácidos útiles para unir grupos de mejora incluyen lisina, asparagina, aspartato, glutamina, glutamato y citrulina. El enlace al grupo potenciador puede ser un enlace directo a la cadena lateral de aminoácidos o el enlace puede ser indirecto a través de un grupo espaciador y/o reactivo. Los espaciadores y grupos reactivos útiles incluyen cualquiera de los descritos anteriormente. El grupo potenciador puede ser cualquier grupo que los expertos en la técnica consideren útil. Por ejemplo, el grupo potenciador puede ser cualquier grupo que imparta un efecto beneficioso al compuesto, carga activa, carga activa del enlazador o conjugado de anticuerpo que incluye, aunque no de forma limitativa, efectos biológicos, bioquímicos, sintéticos, solubilizantes, de formación de imágenes, detección y de reactividad, y similares. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es una ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. El grupo potenciador es capaz de mejorar la solubilidad del resto del conjugado. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico está sustituido o no sustituido. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)1-<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SOsH, -(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SOsH, -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SOsH, -(CH<2>V -N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SOsH)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SO3H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(-(CH2)n<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es --(CH2)n<2>-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en dondem2es 1,2, 3, 4 o 5. En algunas realizaciones, el enlazador es:
en donde:
SP1 es un espaciador;
SP2 es un espaciador;
SP3 es un espaciador, unido a unAAde(AA)pi;
es uno o más enlaces al agente de unión;
es uno o más enlaces a la carga activa;
es uno o más enlaces al grupo potenciadorEG;
cadaAAes un aminoácido; y
p1es un número entero de 1 a 10.
Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
El grupo espaciadorSP1 es como se ha descrito anteriormente. El grupo espaciadorSP2 es como se ha descrito anteriormente. Cada grupo(AA)pi es como se ha descrito anteriormente.
El espaciadorSP3 es una fracción que conecta la fracción (AA)pi al grupo potenciador(EG). Los espaciadoresSP3 adecuados incluyen, aunque sin limitación, aquellos que comprenden alquileno o poliéter, o ambos. Los extremos de<los espaciadores SP3, es decir, la porción del espaciador>sP<3 unido directamente Al grupo potenciador o a un AA,>pueden ser fracciones derivadas de fracciones reactivas que se utilizan con fines de acoplamiento del grupo potenciador o unAAal espaciadorSP3 durante la síntesis química del conjugado. En algunos ejemplos, los extremos de los espaciadoresSP3, es decir, la porción del espaciador unida directamente al grupo potenciador o a unAA,pueden ser restos de fracciones reactivas que se utilizan con fines de acoplamiento del grupo potenciador o unAAal espaciador durante la síntesis química del conjugado. En determinadas realizaciones,SP3 es un espaciador, unido a uno y sólo unoAAde(AA)pi.En determinadas realizaciones, el espaciadorSP3 está unido a la cadena lateral de un resto de lisina de(AA)pi.
En algunas realizaciones, el espaciadorSP3 es:
en donde:
RG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente potenciadorEG;es un enlace con el agente potenciador;
es un enlace con(AA)pi;
aes un número entero de 2 a 8; y
p1es un número entero de 1 a 4.
El grupo reactivoRGpuede ser cualquier grupo reactivo conocido por los expertos en la técnica como capaz de formar uno o más enlaces con el agente potenciador. El grupo reactivoRGes una fracción que comprende una porción en su estructura que es capaz de reaccionar con el grupo potenciador para formar un compuesto de fórmulaLPa, LPb, LPc, LPd, LPa', LPb', LPc', LPd', A, B, C, D, A', B', C', D'oA". Después de la conjugación con el grupo potenciador, el grupo reactivo se convierte en el resto de grupo reactivo(RG').El grupo reactivoRGpuede ser cualquier grupo reactivo descrito anteriormente. Los grupos reactivos ilustrativos incluyen, aunque sin limitación, los que comprenden haloacetilo, isotiocianato, succinimida, N-hidroxisuccinimida o porciones de maleimida que son capaces de reaccionar con el agente de unión.
En determinadas realizaciones, los grupos reactivos incluyen, aunque sin limitación, alquinos. En determinadas realizaciones, los alquinos son alquinos capaces de sufrir reacciones de 1,3-cicloadición con azidas en ausencia de catalizadores de cobre, tales como alquinos tensionados. Los alquinos tensionados son adecuados para cicloadiciones de alquino-azida promovidas por tensión (SPAAC), cicloalquinos, por ejemplo, ciclooctinas, y alquinos benzanillados. Los alquinos adecuados incluyen, aunque sin limitación, dibenzoazaciclooctina o
dibenzociclooctina o
(DIBO), biarilazaciclooctinona o
(BARAC), ciclooctina difluorada o
(DIFO), sustituido, por ejemplo, alquinos fluorados, aza-cicloalquinos, biciclo[6.1.0]nonino o
(BCN) y derivados de los mismos. Los alquinos particularmente útiles incluyen
En algunas realizaciones, el enlazador es:
en donde:
RG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente de unión;PEGes -NH-PEG4-C(O)-;
SP2 es un espaciador;
SP3 es un espaciador, unido a un resto deAAde(AA)pi;
es uno o más enlaces al agente de unión;
es uno o más enlaces a la carga activa;
es uno o más enlaces al grupo potenciadorEG;
cada AA es un resto de aminoácido; y
p1es un número entero de 1 a 10.
Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En determinadas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cada uno
es un enlace con el agente potenciador;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
o
donde ZZ es hidrogeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1-6>. En determinadas realizaciones, 1,3-cicloadición o regioisómeros SPAAC, o mezcla de regioisómeros, se obtienen de anticuerpos derivados de PEG-N<3>tratados con alquinos adecuados. Por ejemplo, en una realización, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo.
A modo de ejemplo adicional, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>K<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1>-SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>K<5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(-(CH<2>V<2>C(O)NH-(CH<2>)i-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es --(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con el agente potenciador;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SOaH, -(CH2)n2-NH-(CH2)1-5SOaH, -(CH2)n2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-aSO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(-(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es --(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO3H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO3H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO3H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión; -rcada uno
es un enlace con la carga activa;
R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
A es -O-, -N(H)-,
o
donde ZZ es hidrogeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
Aes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomerica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cada uno
es un enlace con el grupo potenciador;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1-6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1-6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>K<5>SO<3>H, -(CH2)n2-NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1-5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(-(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en donden2es<1>,<2>, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es --(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SOaH)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
cadaR9 es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)-<i>-<5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(-(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)NH-(CH<2>)-<i>-<5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es --(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SOsH)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o
5 o
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa; yHes -O- o -NH-.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa; yHes -O- o -NH-En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomerica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisomero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
A es -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
En algunas realizaciones, el enlazador es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, o un regioisómero del mismo, o una mezcla de regioisómeros del mismo, en donde:
cada uno
es un enlace con el agente de unión;
cada uno
es un enlace con la carga activa;
R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrogeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión.
Enlazador-cargas activas o enlazador reactivo-cargas activas
Se proporcionan enlazador-cargas activas o enlazador reactivo-cargas activas de cualquiera de los compuestos o cargas activas (por ejemplo, compuestos o cargas activas de las Fórmulas I, II o III) y enlazadores descritos en el presente documento. En determinadas realizaciones, descritos a continuación, los conjugados proporcionados en el presente documento se pueden preparar a partir de enlazador-cargas activas o enlazador reactivo-cargas activas que tienen grupos reactivosRGcomo se ha descrito anteriormente. El enlazador-cargas activas o enlazador reactivocargas activas se puede enlazar a grupos potenciadores y/o agentes de unión de acuerdo con los métodos descritos a continuación.
En determinadas realizaciones, el enlazador-cargas activas incluye cualquier carga activa específica adoptada por uno o más de las Fórmulas I, II o III anteriores, unida a uno o más enlazadores, en donde el(los) enlazador(es) descrito(s) en el presente documento incluyen una fracción que es reactiva con un agente de unión, anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, y/o grupo potenciador descrito en el presente documento. En realizaciones particulares, el enlazador está unido aR1,R2 oR6, o formas divalentes deR1,R2 oR6, como en una cualquiera o más de las Fórmulas de carga activa I, II o III anteriores. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPa:
en dondeLes un enlazador como se ha descrito anteriormente, yQ1,Q2,W, -R1-,R2,R4,R5 yR6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I anterior. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPb:
en dondeLes un enlazador como se ha descrito anteriormente, yQ1,Q2,W,R1, -R2-,R4,R5 yR6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I anterior. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPc:
en dondeLes un enlazador como se ha descrito anteriormente, yQ1,Q2,W,R1,R2,R4,R5 y-R6- son como se describe en el contexto de la Fórmula I anterior. En una realización, el enlazador-carga tiene una estructura de fórmulaLPd:
en dondeLes un enlazador como se ha descrito anteriormente, yQ1,Q2,W,R1,R2,R4,R5 y-R6- son como se describe en el contexto de la Fórmula I anterior. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPa':
en dondeSP1 ySP2 son espaciadores como se ha descrito anteriormente, cadaAAes un resto de aminoácido como se ha descrito anteriormente,Q1,Q2,W,-R1-,R2,R4,R5 yR6 son como se describen en el contexto de la Fórmula I, yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPb':
en dondeSP1 ySP2 son espaciadores como se ha descrito anteriormente, cadaAAes un resto de aminoácido como se ha descrito anteriormente,Q1,Q2,W,R1, -R2-,R4,R5 yR6 son como se describen en el contexto de la Fórmula I, yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPc':
en dondeSP1 ySP2 son espaciadores como se ha descrito anteriormente, cadaAAes un resto de aminoácido como se ha descrito anteriormente,Q1,Q2,W,R1,R2,R4,R5 y-R6- son como se describen en el contexto de la Fórmula I yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el enlazador-carga activa tiene una estructura de FórmulaLPd':
en dondeSP1 ySP2 son espaciadores como se ha descrito anteriormente, cadaAAes un resto de aminoácido como se ha descrito anteriormente,Q1,Q2,W,R1,R2,R4,R5 y -R6- son como se describe en el contexto de la Fórmula I yp1es un número entero de 1 a 10. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,p1es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, el enlazadorLo espaciadorSP2 está unido a un nitrógeno del arilo o a un resto de aminoácido solo o dentro de un péptido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de A/-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
a sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
cada RG es un grupo reactivo, tal como se describe en el presente documento;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
cada RG es un grupo reactivo, tal como se describe en el presente documento;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
a sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
Q<1>,Q<2>,W,R<1>,R<2>,R<4>,R<5>yR<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>bN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador reactivo-carga activa es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>como se describen en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador reactivo-carga activa es:
na sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
Q<1>,Q<2>,W,R<1>,R<2>,R<4>,R<5>yR<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C1-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o forma estereoisomerica de los mismos, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
a sal, solvato, o forma estereoisomerica del mismo, o un regioisomero del mismo, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C1-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R<5>y R<6>son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa se selecciona entre:
5
5
y
5
o
una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Además en el presente documento se proporciona enlazador-cargas activas seleccionados entre el grupo que consiste en:
y
una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los enlazadores, enlazador-cargas activas o enlazador reactivo-cargas activas anteriores son útiles para proporcionar los siguientes conjugados.
Conjugados/Conjugados de anticuerpos y fármacos (CAF)
En el presente documento se proporcionan anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, en donde dichos anticuerpos están conjugados con uno o más compuestos de Fórmula I, II o III como se describe en el presente documento.
En el presente documento se proporcionan compuestos o conjugados de FórmulaA:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en dondeBAes un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo,Les un enlazador,Q1,Q2,W,-R1-,R2,R4,R5 yR6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I, ykes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En determinadas realizaciones, los compuestos o cargas activas conjugados con -L-BAen la Fórmula A incluyen uno o más compuestos de las Fórmulas I, II y/o III como se ha descrito anteriormente, en dondeBAes un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo;Les un enlazador; ykes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo.
En el presente documento se proporcionan compuestos o conjugados de FórmulaB:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en dondeBAes un agente de unión,Les un enlazador,Q1,Q2,W,R1, -R2-,R4,R5 yR6 son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I, ykes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En determinadas realizaciones, los compuestos o cargas activas conjugados con -L-BAen la Fórmula B incluyen uno o más compuestos de las Fórmulas I, II y/o III como se ha descrito anteriormente, en dondeBAes un agente de unión;Les un enlazador; ykes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo, Ba es anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo.
En el presente documento se proporcionan compuestos o conjugados de FórmulaC:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en dondeBAes un agente de unión,Les un enlazador,Q1,Q2,W,R1,R2,R4,R5 y -R6- son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I, ykes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En determinadas realizaciones, los compuestos o cargas activas conjugados con -L-BAen la Fórmula C incluyen uno o más compuestos de las Fórmulas I, II y/o III como se ha descrito anteriormente, en dondeBAes un agente de unión;Les un enlazador; ykes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo.
En el presente documento se proporcionan compuestos o conjugados de FórmulaD:
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde BA es un agente de unión, L es un enlazador,Q1, Q2,W,R1, R2, R4, R5 y-R6-son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I, ykes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En determinadas realizaciones, los compuestos o cargas activas conjugados con -L-BAen la Fórmula D incluyen uno o más compuestos de las Fórmulas I, II y/o III como se ha descrito anteriormente, en dondeBAes un agente de unión;Les un enlazador; ykes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,Baes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de A-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo, cadaR4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo.
En cualquiera de las realizaciones de los cuatro párrafos anteriores,Les un enlazador oX-Y-Z,en dondeXes -NH-u -O-;Yes una fracción enzimáticamente escindible, un grupo autoinmolable, una fracción lábil a los ácidos, PEGni, una fracción de azúcar o un grupo potenciador; yZes un enlazador de agente de unión(BL)en dondeZestá unido covalentemente aBA.Las fracciones escindibles enzimáticamente ilustrativas incluyen, aunque sin limitación, cualquier di o tripéptido (por ejemplo, VC-PAB y VA, como se describe en cualquier otro sitio del presente documento). En otra parte del presente documento se describen grupos autoinmolables ilustrativos. Las fracciones lábiles a los ácidos ilustrativas incluyen, aunque sin limitación, alcoxaminas, cetoxaminas, carbonatos o fosfonatos. Los grupos potenciadores ilustrativos se describen en otra parte del presente documento. En otra parte del presente documento se describen fracciones reactivas ilustrativas. En determinadas realizaciones,Yno incluye PEGn<1>, en donden1es 1, 2, 3, 4 o 5. En determinadas realizaciones, se puede usar un aminoácido para conectar la carga activa, grupo potenciador y anticuerpo (cada uno como se describe en otra parte del presente documento) entre sí, como se describe y es evidente en otra parte del presente documento. La conexión de la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo a través del aminoácido pueden llevarse a cabo mediante reacciones de acoplamiento de amida, adiciones de tio-Michael o alquilaciones de anilina-NH como apreciarán los expertos en la técnica. Por ejemplo, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es lisina. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es D-lisina. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es ácido aspártico. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es ácido glutámico. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es serina. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es cisteína. A modo de ejemplo adicional, en una realización, el aminoácido que conecta la carga activa, el grupo potenciador y el anticuerpo es tirosina.
En el presente documento se proporcionan compuestos o conjugados que tienen la FórmulaA', B',CoD':
o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en dondeBAes un agente de unión,Q1, Q2, W, R1, -R1-, R2, R2-, R4, R5yR6o-R6-son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I,SP1ySP2,cuando está presente, son grupos espaciadores, cadaAAes un resto de aminoácido yP1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el compuesto o conjugado es de FórmulaA'o una sal o una forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en dondeBAes un agente de unión,Q1, Q2, W, -R1-, R2, R4, R5yR6son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I,SP1ySP2,cuando está presente, son grupos espaciadores, cadaAAes un resto de aminoácido yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el compuesto o conjugado es de FórmulaB'o una sal o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en dondeBAes un agente de unión,Q1, Q2, W, R1, -R2-, R4, R5yR6son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I,SP1ySP2,cuando está presente, son grupos espaciadores, cadaAAes un resto de aminoácido yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el compuesto o conjugado es de FórmulaC'o una sal o una forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en dondeBAes un agente de unión,Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5y -R6-son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I,SP1ySP2,cuando está presente, son grupos espaciadores, cadaAAes un resto de aminoácido yp1es un número entero de 1 a 10. En una realización, el compuesto o conjugado es de FórmulaD'o una sal o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en dondeBAes un agente de unión,Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5y -R6-son como se ha descrito anteriormente en el contexto de la Fórmula I,SP1ySP2,cuando está presente, son grupos espaciadores, cadaAAes un resto de aminoácido yp1es un número entero de 1 a 10. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de<Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,>Ba<es anticuerpo o fragmento>de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,p1es 1,2, 3, 4 o 5. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es de FórmulaA”:
o una sal farmacéuticamente aceptable, o una forma estereoisomérica de la misma, o un regioisómero de la misma, en donde:
BAes un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo;
cadaSP1, SP2 ySP3 es un grupo espaciador como se ha descrito anteriormente, dóndeSP3 está unido a un resto de aminoácidoAAde (AA)p<1>;
p1es un número entero de 1 a 10;
EGes un agente potenciador de la solubilidad;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, -R1-, R2, R4, R5 yR6 son como se ha descrito en el contexto de la Fórmula I.
Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(C^KaSOsH, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SOsH, -(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SOsH, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SOsH, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SOsH)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO<s>H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SOsH)2, donden2es 1,2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SO3H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO3H)<2>, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1,2, 3, 4 o 5. En una realización, el espaciador SP1 es:
en dondeRG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente de unión;
es un enlace, directo o indirecto, al agente de unión; y b es un número entero de 1 a 4; el (AA)pi-SP2- es -NH-lisinavalina-alanina-, -NH-lisina-valina-citrulina- o -NH-lisina-valina-citrulina-PABC-; el espaciadorSP3 es:
en dondeRG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente potenciadorEG;
es un enlace con el agente potenciador; y
es un enlace con (AA)pi. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula I, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula II, como se ha descrito anteriormente. En cualquier realización en este párrafo,BAes anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo está conjugado con un compuesto de Fórmula III, como se ha descrito anteriormente. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,p1es 1, 2, 3, 4 o 5. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
cadaRG'es el resto de un grupo reactivo, tal como se describe en el presente documento;
EGes un agente potenciador de la solubilidad;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR9es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>H<5>SO<3>H, -(CH2)n2-NH-(CH2)1-5SOsH, -(CH2)n2-C(O)NH-(CH2)1-5SOsH, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SOsH, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SOsH)2,
-(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1,2, 3, 4 o 5, ym2es 1,2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SO3H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1,2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
o una sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
cadaRG'es el resto de un grupo reactivo, tal como se describe en el presente documento;
EGes un agente potenciador de la solubilidad;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrogeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. Como se ha discutido anteriormente, la unión al agente de unión puede ser directa o mediante un espaciador. En determinadas realizaciones, la unión al agente de unión se realiza mediante un espaciador de PEG a un resto de glutamina del agente de unión. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>K<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2,
-(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H<)2>o -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es<1>, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>V<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BA es un agente de unión;
k es un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada uno
es un enlace con el grupo potenciador;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, -(CH<2>V<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>V<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1>-<5>C(O)NH(CH<2>)<1>-<5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el conjugado es:
; o
o una sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BA es un agente de unión;
k es un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5 y R6 son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada uno
es un enlace con el grupo potenciador;
cada R<9>es -CH<3>o -(CH<2>)aN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(H)-,
donde ZZ es hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo C<1>-<6>. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -<(CH2>K<5SO3H, -(CH2)n2-NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, ->(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2,
-(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1, 2, 3, 4 o 5, ym2es 1, 2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1-5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)NH-(CH<2>K<5>SO<3>H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)n<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR9es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
o
donde ZZ es hidrogeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización, ZZ es alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización, ZZ es heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
o una sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR9es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C i-6.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
a sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada uno
es un enlace con el grupo potenciador;
cadaR<9>es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cada A es -O-, -N(h )-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C i-6. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1-5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, -(CH<2>V -C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1,2, 3, 4 o 5, ym2es 1,2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH<2>)<1-5>SO<3>H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1,2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
o una sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cada uno
es un enlace con el grupo potenciador;
cadaR9 es -CH<3>o -(CH<2>)<3>N(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C1-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C1-6. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es un grupo hidrófilo. En determinadas realizaciones, el agente potenciador es ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el grupo potenciador es un alquilo, heteroalquilo, alquilenil o ácido heteroalquilenilsulfónico. La ciclodextrina puede ser cualquier ciclodextrina conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina o gamma ciclodextrina, o mezclas de las mismas. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es alfa ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es beta ciclodextrina. En determinadas realizaciones, la ciclodextrina es gamma ciclodextrina. En determinadas realizaciones, el ácido alquil, heteroalquil, alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>K<5>SO<3>H, -(CH<2>)n<2>-NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, -(CH<2>V -C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2CH2O)m2-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, -(CH2)n2-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, -(CH2)n2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2 o -(CH2CH2O)m2-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, donden2es 1,2, 3, 4 o 5, ym2es 1,2, 3, 4 o 5. En una realización, el ácido alquil o alquilenilsulfónico es -(CH2)1-5SO3H. En otra realización, el ácido heteroalquilo o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-NH-(CH2)1-5SO3H, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)NH-(CH<2>)<1-5>SO<3>H, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2CH2O)m<2>-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H, en dondem2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1, 2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH2)n<2>-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2, en donden2es 1,2, 3, 4 o 5. En otra realización, el alquilo, heteroalquilo, el ácido alquilenil o heteroalquilenilsulfónico es -(CH<2>CH<2>O V<2>-C(O)N((CH<2>)<1-5>C(O)NH(CH<2>)<1-5>SO<3>H)<2>, en dondem2es 1,2, 3, 4 o 5.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
o una sal, solvato, o forma estereoisomérica del mismo, o un regioisómero del mismo, en donde:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5yR6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR9es -CH<3>o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo Ci-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C<1>-<6>.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado es:
BAes un agente de unión;
kes un número entero de 1 a 30;
Q1, Q2, W, R1, R2, R4, R5, R6son como se describe en el contexto de la Fórmula I;
cadaR9es -CHa o -(CH<2>)sN(H)C(O)NH<2>; y
cadaAes -O-, -N(H)-,
dondeZZes hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido como se analiza en otra parte del presente documento. Por ejemplo, en una realización,ZZes alquilo C i-6. A modo de ejemplo adicional, en una realización,ZZes heteroalquilo C i-6.
En cada una de las realizaciones anteriores, los conjugados se pueden preparar a partir de agentes de unión funcionalizados con grupos azida y restos de los mismos, como se describe en las secciones siguientes. Por comodidad, el resto de triazol en varias estructuras anteriores se representa entre paréntesis. Los expertos reconocerán que el triazol puede formarse a partir de un grupo azida de un agente de unión derivatizado con azida y un alquino del enlazador-carga activa LP.
En algunas realizaciones, el compuesto o conjugado se selecciona entre:
5
5
o un regioisómero, o una forma estereoisomérica del mismo. En cualquier realización en este párrafo,BAes un agente de unión. En cualquier realización en este párrafo,BAes un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes un número entero de 1 a 30. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kestá en un intervalo de 1-2, 1-3, 2-3, 2-4, 3-4 o 1-4. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 1. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 2. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 3. En cualquiera de las realizaciones de este párrafo,kes 4.
Además en el presente documento se proporcionan CAF seleccionados entre el grupo que consiste en:
5
En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a HER2. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a PRLR. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, y la conjugación se realiza a través de al menos un resto Q295. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, y la conjugación se realiza a través de dos restos Q295. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo anti-N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y la conjugación se realiza a través de al menos un resto Q295 y al menos un resto Q297. En cualquiera de las realizaciones del compuesto o conjugado proporcionadas, BA es un anticuerpo N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y la conjugación se realiza a través de dos restos Q295 y dos restos Q297.
En realizaciones particulares, la numeración se realiza según el sistema de numeración EU.
En cualquiera de las realizaciones anteriores,BAes un anticuerpo anti-MSR1. En determinadas realizaciones,BAes el anticuerpo anti-MSR1 H1H21234N descrito en los Ejemplos siguientes. En determinadas realizaciones,BAes el anticuerpo anti-MSR1 H1H21234N N297Q descrito en los ejemplos siguientes. En determinadas realizaciones,BAes un anticuerpo anti-MSR1 que comprende una HCVR según la S<e>Q ID NO:2 y una LCVR según la SEQ ID NO:10. En determinadas realizaciones,BAes un anticuerpo anti-MSR1 que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco o seis de HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 según las SEQ ID NOS: 4, 6, 8, 12, 14 y 16, respectivamente. En determinadas realizaciones, la HCVR está codificada por la SEQ ID NO:1. En determinadas realizaciones, la LCVR está codificada por la SEQ ID NO:9. En determinadas realizaciones, uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis de HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 están codificados por las secuencias de polinucleótidos SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 11, 13 y 15, respectivamente. N297Q indica que uno o más restos 297 están mutados de asparagina (N) a glutamina (Q). Preferentemente, cada resto 297 está mutado a Q. En realizaciones preferidas, la numeración se realiza según el sistema de numeración EU. En determinadas realizaciones de este párrafo, k es de 1 a 4. En determinadas realizaciones, k es 1, 2, 3 o 4. En determinadas realizaciones, k es 4. En determinadas realizaciones,BAes un anticuerpo anti-MSR1 descrito en el documento WO 2019/217591, presentada el 8 de mayo de 2019.
Métodos de preparación de compuestos
Los compuestos proporcionados en el presente documento se pueden preparar, aislar u obtener por cualquier método evidente para los expertos en la técnica. Los métodos de preparación ilustrativos se describen con detalle en los ejemplos siguientes. En determinadas realizaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento se pueden preparar según los esquemas A y B.
Esquema A. Esquema de preparación ilustrativo
En el esquema de preparación ilustrativo A,Q1, Q2, W, R1, R2, R6 ynse definen como se describe en el contexto de la Fórmula (I). La esterificación inicial es seguida por la protección deR1 y/o aminación deR1 para darR2P.Después de la protección deR1,una saponificación y activación de, por ejemplo, una fracción de ácido carboxílico proporciona un primer compañero de acoplamiento que tieneQ1.Después de la aminación, saponificación y amidación de, por ejemplo, una fracción de ácido carboxílico, proporciona un segundo compañero de acoplamiento que tieneQ2.
Unificación de compañeros de acoplamiento que tienenQ1 yQ2,respectivamente, seguido de desprotecciones deR1 yR2,respectivamente, proporciona compuestos de Fórmula I. Los métodos de preparación ilustrativos se describen con detalle en los Ejemplos siguientes.
En determinadas realizaciones, se pueden incluir una o más etapas de protección o desprotección en los métodos de preparación descritos en el Esquema A, anteriormente.
El enlazador-cargas activas descritos en el presente documento se pueden sintetizar mediante una serie de etapas de acoplamiento. Por ejemplo, la carga activa en el lado derecho se puede unir a SP2 mediante una o más reacciones de acoplamiento estándar. En realizaciones ventajosas, los compuestos de carga activa descritos en el presente documento incluyen grupos amino libres disponibles para acoplarse mediante condiciones de síntesis de amida, descritas en el presente documento. Los aminoácidos de (AA)p<1>se puede añadir mediante condiciones de síntesis de amida, por ejemplo, condiciones de síntesis de péptidos. El espaciador SP2 se puede unir a (AA)p<1>mediante una o más reacciones de acoplamiento estándar. En realizaciones ventajosas, los grupos SP2 y (AA)pi descritos en el presente documento incluyen grupos amino o carboxilo libres disponibles para acoplarse mediante condiciones de síntesis de amida, descritas en el presente documento. Cuando está presente, el espaciador SP3 se puede unir a (AA)pi mediante una o más reacciones de acoplamiento estándar. En realizaciones ventajosas, los grupos SP3y (AA)pi descritos en el presente documento incluyen grupos amino o carboxilo libres disponibles para acoplarse mediante condiciones de síntesis de amida, descrito en el presente documento.
Esquema B1. Esquema de preparación ilustrativo
En el esquema de preparación B1 ilustrativo,B1se descarboxila oxidativamente para proporcionarB2y luegoB2se sustituye con cargas activas (HO-carga activa o H<2>N-carga activa) para darB3oB4.Como alternativa, B5 está esterificado o es un péptido acoplado con cargas activas (HO-carga activa o H<2>N-carga activa, respectivamente) para darB6oB7.
Esquema B2. Esquema de preparación ilustrativo
En un esquema de preparación ilustrativoB2,B3, B4, B6oB7es un péptido acoplado conBBy luego se desprotege para darB8, B9, B10o Bll.B8-B11son péptidos acoplados independientemente con cualquiera de las antípodas del ácido glutámico protegido para darB12-B19.Los carboxilatos de B20 oB21se activan para proporcionar B22 o B23, que luego se acoplan independientemente a uno deB12-B19para proporcionarB24-B27.
El espaciadorSP3,cuando está presente, termina con un grupo reactivoRG.Este grupo reactivo se puede unir al agente potenciadorEGmediante condiciones de acoplamiento consideradas adecuadas para los expertos en la técnica. En determinadas realizaciones, el espaciadorSP3está unido al agente potenciadorEGa través de condiciones de síntesis de amida. En determinadas realizaciones, el espaciadorSP3está unido al agente potenciadorEGmediante química de clic. En estas realizaciones, el espaciadorSP3termina con un grupo reactivo adecuado para una reacción de clic, por ejemplo, una azida o un alquino, y un agente potenciadorEGcomprende un grupo reactivo complementario adecuado para una reacción de clic, por ejemplo un alquino o una azida. En las realizaciones preferidas, elSP3termina con un alquino tensionado yEGcomprende una azida; oSP3termina en un ácido carboxílico yEGcomprende una amina. CuandoEGes una fracción de ciclodextrina, la ciclodextrina puede comprender una azida. Las azidociclodextrinas pueden prepararse sintéticamente u obtenerse de fuentes comerciales. CuandoEGes una fracción de ácido sulfónico, uno de los extremos delEGterminan con uno o más grupos de ácido sulfónico y el otro extremo termina con una amina primaria o secundaria.
Los conjugados descritos en el presente documento se pueden sintetizar acoplando el enlazador-cargas activas descritos en el presente documento con un agente de unión, por ejemplo, un anticuerpo en condiciones de conjugación estándar (véase, por ejemplo, Doroninaet al.Nature Biotechnology 2003, 21, 7, 778). Cuando el agente de unión es un anticuerpo, el anticuerpo puede acoplarse a un enlazador-carga activa mediante uno o más restos de cisteína o lisina del anticuerpo. El enlazador-cargas activas se pueden acoplar a restos de cisteína, por ejemplo, sometiendo el anticuerpo a un agente reductor, por ejemplo, ditioteritol, para escindir los enlaces disulfuro del anticuerpo, purificar el anticuerpo reducido, por ejemplo, mediante filtración en gel, y posteriormente tratar el anticuerpo con un enlazadorcarga activa que contiene una fracción reactiva adecuada, por ejemplo, un grupo maleimido. Los disolventes adecuados incluyen, pero sin limitación, agua, DMA, DMF y DMSO. El enlazador-cargas activas que contienen un grupo reactivo, por ejemplo, un grupo éster activado o haluro de ácido, se puede acoplar a restos de lisina del anticuerpo. Los disolventes adecuados incluyen, pero sin limitación, agua, DMA, DMF y DMSO. Los conjugados se pueden purificar usando técnicas de proteínas conocidas, incluidos, por ejemplo, cromatografía de exclusión por tamaño, diálisis y ultrafiltración/diafiltración.
Los agentes de unión, por ejemplo, anticuerpos, también se puede conjugar mediante reacciones químicas de clic. En algunas realizaciones de dichas reacciones de química de clic, el enlazador-carga activa incluye un grupo reactivo, por ejemplo un alquino, que es capaz de sufrir una reacción de 1,3-cicloadición con una azida. Estos grupos reactivos adecuados se han descrito anteriormente. El anticuerpo incluye uno o más grupos azida. Dichos anticuerpos incluyen anticuerpos funcionalizados con, por ejemplo, grupos azido-polietilenglicol. En determinadas realizaciones, dicho anticuerpo funcionalizado se obtiene tratando un anticuerpo que tiene al menos un resto de glutamina, por ejemplo, Gln295 o Gln55 de cadena pesada, con un compuesto de amina primaria en presencia de la enzima transglutaminasa. En determinadas realizaciones, dicho anticuerpo funcionalizado se obtiene tratando un anticuerpo que tiene al menos un resto de glutamina, por ejemplo, Gln297 de la cadena pesada, con un compuesto de amina primaria en presencia de la enzima transglutaminasa. Dichos anticuerpos incluyen mutantes Asn297Gln (N297Q). En determinadas realizaciones, dicho anticuerpo funcionalizado se obtiene tratando un anticuerpo que tiene al menos dos restos de glutamina, por ejemplo, Gln295 de cadena pesada y Gln297 de cadena pesada, con un compuesto de amina primaria en presencia de la enzima transglutaminasa. Dichos anticuerpos incluyen mutantes Asn297Gln (N297Q). En determinadas realizaciones, el anticuerpo tiene dos cadenas pesadas como se describe en este párrafo para un total de dos o un total de cuatro restos de glutamina.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo comprende dos restos de glutamina, uno en cada cadena pesada. En realizaciones particulares, el anticuerpo comprende un resto Q295 en cada cadena pesada. En realizaciones adicionales, el anticuerpo comprende uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho o más restos de glutamina. Estos restos de glutamina pueden estar en cadenas pesadas, cadenas ligeras o tanto en cadenas pesadas como en cadenas ligeras. Los restos de glutamina ilustrativos incluyen Q55. Estos restos de glutamina pueden ser restos de tipo salvaje o restos modificados. Los anticuerpos se pueden preparar según técnicas estándar.
Los expertos reconocerán que los anticuerpos a menudo están glicosilados en el resto N297, cerca del resto Q295 en una secuencia de cadena pesada. La glicosilación en el resto N297 puede interferir con una transglutaminasa en el resto Q295 (Dennleret al.,anteriormente,). En consecuencia, en realizaciones ventajosas, el anticuerpo no está glicosilado. En determinadas realizaciones, el anticuerpo está desglicoslado o aglicosilado. En realizaciones particulares, una cadena pesada de anticuerpo tiene una mutación N297. Como alternativa a lo indicado, el anticuerpo está mutado para que ya no tenga un resto de asparagina en la posición 297. En realizaciones particulares, una cadena pesada de anticuerpo tiene una mutación N297Q. Un anticuerpo de este tipo puede prepararse mediante mutagénesis dirigida al sitio para eliminar o desactivar una secuencia de glicosilación o mediante mutagénesis dirigida al sitio para insertar un resto de glutamina en un sitio sin dar como resultado una función o unión del anticuerpo desactivada. En algunas realizaciones, un anticuerpo que tiene un resto Q295 y/o una mutación N297Q contiene uno o más restos de glutamina naturales adicionales en sus regiones variables, que puede ser accesible a la transglutaminasa y, por lo tanto, capaz de conjugarse con un enlazador o un enlazador-carga activa. Se puede encontrar un resto de glutamina natural ilustrativo, por ejemplo, en Q55 de la cadena ligera. En tales casos, el anticuerpo conjugado mediante transglutaminasa puede tener un valor de relación fármaco:anticuerpo (DAR) superior al esperado (por ejemplo, un DAR superior a 4). Cualquiera de estos anticuerpos puede aislarse de fuentes naturales o artificiales.
A continuación, el anticuerpo sin interferir en la glicosilación se hace reaccionar con un compuesto de amina primaria. En determinadas realizaciones, un anticuerpo aglicosilado se hace reaccionar con un compuesto de amina primaria para producir un anticuerpo modificado con glutaminilo. En determinadas realizaciones, un anticuerpo desglicosilado se hace reaccionar con un compuesto de amina primaria para producir un anticuerpo modificado con glutaminilo.
La secuencia de aminoácidos de un anticuerpo se puede numerar usando cualquier esquema de numeración conocido, incluyendo los descritos por Kabatet al.,(esquema de numeración "Kabat"); Al-Lazikaniet al.,1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 (esquema de numeración de "Chothia"); MacCallumet al.,1996, J. Mol. Biol. 262:732-745 (esquema de numeración de "Contact"); Lefrancet al.,Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 (esquema de numeración de "IMGT"); y Honegge y Pluckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 (esquema de numeración de "AHo"). Salvo que se especifique lo contrario, el esquema de numeración utilizado en el presente documento es el esquema de numeración de Kabat. Sin embargo, la selección de un esquema de numeración no pretende implicar diferencias en secuencias cuando no existen, y un experto en la técnica puede confirmar fácilmente una posición de secuencia examinando la secuencia de aminoácidos de uno o más anticuerpos. A menos que se indique lo contrario, el "esquema de numeración de EU" se utiliza generalmente cuando se hace referencia a un resto en una región constante de la cadena pesada de un anticuerpo (por ejemplo, como se indica en Kabatet al.,anteriormente).
La expresión "anticuerpo aglicosilado" se refiere a un anticuerpo que no comprende una secuencia de glicosilación que pueda interferir con una reacción de transglutaminación, por ejemplo, un anticuerpo que no tiene un grupo sacárido en N297 en una o más cadenas pesadas. En realizaciones particulares, una cadena pesada de anticuerpo tiene una mutación N297. Dicho de otro modo, el anticuerpo está mutado para que ya no tenga un resto de asparagina en la posición 297 según el sistema de numeración de EU según lo divulgado por Kabatet al.En realizaciones particulares, la cadena pesada de un anticuerpo tiene una mutación N297Q o N297D. Un anticuerpo de este tipo puede prepararse mediante mutagénesis dirigida al sitio para eliminar o desactivar una secuencia de glicosilación o mediante mutagénesis dirigida al sitio para insertar un resto de glutamina en un sitio aparte de cualquier sitio de glicosilación que interfiera o cualquier otra estructura que interfiera. Un anticuerpo de este tipo también puede aislarse a partir de fuentes naturales o artificiales.
La expresión "anticuerpo desgliosilado" se refiere a un anticuerpo en el que se eliminó un grupo sacárido en N297, abriendo así Q295 a la transglutaminación. En realizaciones particulares, en el presente documento se proporcionan procesos que abarcan una etapa adicional de desglicosilación de un anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo N297.
La amina primaria puede ser cualquier amina primaria que sea capaz de formar un enlace covalente con un resto de glutamina en presencia de una transglutaminasa. Las aminas primarias útiles se han descrito anteriormente. La transglutaminasa puede ser cualquier transglutaminasa que los expertos en la técnica consideren adecuada. En determinadas realizaciones, la transglutaminasa es una enzima que cataliza la formación de un enlace isopéptido entre un grupo amina libre en el compuesto de amina primaria y el grupo acilo en la cadena lateral de un resto de glutamina. La transglutaminasa también se conoce como proteína-glutamina-Y-glutamiltransferasa. En realizaciones particulares, la transglutaminasa está clasificada como EC 2.3.2.13. La transglutaminasa puede proceder de cualquier fuente que se considere adecuada. En determinadas realizaciones, la transglutaminasa es microbiana. Se han aislado transglutaminasas útiles deStreptomyces mobaraense, Streptomyces cinnamoneum, Streptomyces griseo-carneum, Streptomyces lavendulaeyBacillus subtilis.También se pueden usar transglutaminasas no microbianas, incluidas las transglutaminasas de mamífero. En determinadas realizaciones, la transglutaminasa puede producirse mediante cualquier técnica u obtenerse de cualquier fuente que el experto considere adecuada. En realizaciones particulares, la transglutaminasa se obtiene de una fuente comercial.
En realizaciones particulares, el compuesto de amina primaria comprende un grupo reactivo capaz de reaccionar adicionalmente después de la transglutaminación. En estas realizaciones, el anticuerpo modificado con glutaminilo se puede hacer reaccionar o tratar con un compuesto de carga activa reactiva, enlazador-carga activa o un compuesto enlazador-reactivo-carga activa para formar un conjugado de anticuerpo-carga activa. En determinadas realizaciones, el compuesto de amina primaria comprende una azida.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo modificado con glutaminilo se hace reaccionar o se trata con un enlazador-carga activa o enlazador reactivo-carga activa para formar un conjugado de anticuerpo-carga activa. La reacción puede desarrollarse en condiciones consideradas adecuadas por los expertos en la técnica. En determinadas realizaciones, el anticuerpo modificado con glutaminilo se pone en contacto con el enlazador-carga activa o el compuesto enlazador reactivo-carga activa en condiciones adecuadas para formar un enlace entre el anticuerpo modificado con glutaminilo y el compuesto enlazador-carga activa. Otras condiciones de reacción son bien conocidas por los expertos en la materia.
En los ejemplos siguientes se proporcionan reacciones ilustrativas.
Composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento
En el presente documento se proporcionan métodos para tratar y prevenir enfermedades, afecciones o trastornos que comprenden administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz o uno o más de los compuestos o cargas activas divulgados en el presente documento, por ejemplo, uno o más de los compuestos de una fórmula proporcionada en el presente documento. Las enfermedades, trastornos y/o afecciones incluyen, aunque sin limitación, aquellas asociadas con los antígenos enumerados en el presente documento.
Los compuestos descritos en el presente documento se pueden administrar solos o junto con uno o más agentes terapéuticos adicionales. El uno o más agentes terapéuticos adicionales se pueden administrar justo antes de, simultáneamente con o poco después de la administración de los compuestos descritos en el presente documento. La presente divulgación también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden cualquiera de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales, y métodos de tratamiento que comprenden administrar dichas combinaciones a sujetos que lo necesitan.
Los agentes terapéuticos adicionales adecuados incluyen, pero sin limitación: un segundo glucocorticoide, un agente terapéutico autoinmunitario, una hormona, una sustancia biológica o un anticuerpo monoclonal. Los agentes terapéuticos adecuados también incluyen, pero sin limitación, cualquier sal, ácido o derivado farmacéuticamente aceptable de un compuesto expuesto en el presente documento.
En algunas realizaciones de los métodos descritos en el presente documento, pueden administrarse múltiples dosis de un compuesto descrito en el presente documento (o una composición farmacéutica que comprende una combinación de un compuesto descrito en el presente documento y cualquiera de los agentes terapéuticos adicionales mencionados en el presente documento) a un sujeto durante un transcurso de tiempo definido. Los métodos de acuerdo con este aspecto de la divulgación comprenden administrar secuencialmente a un sujeto múltiples dosis de un compuesto descrito en el presente documento. Como se usa en el presente documento, "administrar de manera secuencial" significa que cada dosis del compuesto se administra al sujeto en un punto temporal diferente, por ejemplo, en días diferentes separados por un intervalo predeterminado (por ejemplo, horas, días, semanas o meses). La presente divulgación incluye métodos que comprenden administrar secuencialmente al paciente una dosis inicial única de un compuesto descrito en el presente documento, seguida de una o más dosis secundarias del compuesto y seguida opcionalmente de una o más dosis terciarias del compuesto.
Las expresiones "dosis inicial", "dosis secundarias" y "dosis terciarias" se refieren a la secuencia temporal de administración de los compuestos descritos en el presente documento. Por lo tanto, la "dosis inicial" es la dosis que se administra al inicio de la pauta terapéutica (también denominada "dosis basal"); las "dosis secundarias" son las dosis que se administran después de la dosis inicial; y las "dosis terciarias" son las dosis que se administran después de las dosis secundarias. Las dosis inicial, secundaria y terciaria pueden incluir todas la misma cantidad del compuesto descrito en el presente documento, pero generalmente pueden diferir entre sí en términos de frecuencia de administración. En determinadas realizaciones, la cantidad del compuesto incluido en las dosis inicial, secundaria y/o terciaria varía entre sí (por ejemplo, ajustadas hacia arriba o hacia abajo según corresponda) durante el transcurso del tratamiento. En determinadas realizaciones, se administran dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4 o 5) dosis al comienzo del régimen de tratamiento como "dosis de carga" seguidas de dosis posteriores que se administran con menos frecuencia (por ejemplo, "dosis de mantenimiento").
En determinadas realizaciones ilustrativas de la presente divulgación, cada dosis secundaria y/o terciaria se administra de 1 a 26 (por ejemplo, 1, 1 / , 2, 2 / , 3, 3 / , 4, 41/ 2, 5, 51/ 2, 6, 61/ 2, 7, 71/ 2, 8, 81/ 2, 9, 91/ 2, 10, 101/ 2, 11, 11 /, 12, 121/ 2, 13, 131/ 2, 14, 14 /, 15, 15 /, 16, 16 /, 17, 17 /, 18, 18 /, 19, 19 /, 20, 20 /, 21, 21 /, 22, 22 /, 23, 23 /, 24, 24 /, 25, 25 /, 26, 26 / o más) semanas después de la dosis inmediatamente anterior. La expresión "la dosis inmediatamente anterior", como se usa en el presente documento, significa, en una secuencia de administraciones múltiples, la dosis del compuesto que se administra a un paciente antes de la administración de la siguiente dosis de la secuencia sin dosis intermedias.
Los métodos de acuerdo con este aspecto de la divulgación pueden comprender administrar a un paciente cualquier cantidad de dosis secundarias y/o terciarias del compuesto. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, al paciente se le administra únicamente una sola dosis secundaria. En otras realizaciones, se administran dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más) dosis secundarias al paciente. Asimismo, en determinadas realizaciones, al paciente se le administra únicamente una sola dosis terciaria. En otras realizaciones, se administran dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más) dosis terciarias al paciente. El régimen de administración puede llevarse a cabo indefinidamente durante la vida de un sujeto particular, o hasta que dicho tratamiento ya no sea terapéuticamente necesario o ventajoso.
En realizaciones que implican múltiples dosis secundarias, cada dosis secundaria puede administrarse a la misma frecuencia que las otras dosis secundarias. Por ejemplo, cada dosis secundaria puede administrarse al paciente de 1 a 2 semanas o de 1 a 2 meses después de la dosis inmediatamente anterior. De manera similar, en realizaciones que implican múltiples dosis terciarias, cada dosis terciaria puede administrarse con la misma frecuencia que las otras dosis terciarias. Por ejemplo, cada dosis terciaria puede administrarse al paciente de 2 a 12 semanas después de la dosis inmediatamente anterior. En ciertas realizaciones de la divulgación, la frecuencia con la que se administran las dosis secundarias y/o terciarias a un paciente puede variar durante el transcurso del régimen de tratamiento. La frecuencia de administración también puede ajustarla un médico en el transcurso del tratamiento, dependiendo de las necesidades del paciente individual después del examen clínico.
La presente divulgación incluye la administración de regímenes en los que se administran de 2 a 6 dosis de carga a un paciente en una primera frecuencia (por ejemplo, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses, etc.), seguido de la administración de dos o más dosis de mantenimiento al paciente de forma menos frecuente. Por ejemplo, de acuerdo con este aspecto de la divulgación, si las dosis de carga se administran con una frecuencia de una vez al mes, entonces las dosis de mantenimiento pueden administrarse al paciente una vez cada seis semanas, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, etc.
La presente divulgación incluye composiciones farmacéuticas de los compuestos, cargas activas, enlazador-cargas activas y/o conjugados descritos en el presente documento, por ejemplo, los compuestos de Fórmula I, II y/o III, por ejemplo, composiciones que comprenden un compuesto descrito en el presente documento, una sal, estereoisómero, polimorfo del mismo, y un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de vehículos, diluyentes y excipientes adecuados incluyen, aunque sin limitación, tampones para el mantenimiento del pH adecuado de la composición (por ejemplo, tampones citrato, tampones succinato, tampones acetato, tampones fosfato, tampones lactato, tampones oxalato y similares), proteínas transportadoras (por ejemplo, seroalbúmina humana), solución salina, polioles (por ejemplo, trehalosa, sacarosa, xilitol, sorbitol y similares), tensioactivos (por ejemplo, polisorbato 20, polisorbato 80, polioxolato y similares), antimicrobianos y antioxidantes.
En algunos ejemplos, en el presente documento se expone un método de tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección que comprende administrar a un paciente que tiene dicho trastorno una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I, II y/o III o una composición farmacéutica del mismo.
En algunos ejemplos, en el presente documento se expone un método para prevenir una enfermedad, trastorno o afección que comprende administrar a un paciente que tiene dicho trastorno una cantidad profilácticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I, II y/o III o una composición farmacéutica del mismo.
En algunos ejemplos, en el presente documento se exponen métodos para tratar o prevenir cualquier enfermedad, trastorno o afección que responde a la modulación de la señalización LXR. En algunos ejemplos, la enfermedad o trastorno se asocia con la función LXR, polimorfismos de LXR, actividad agonista de LXR o actividad antagonista de LXR. En algunos ejemplos, en el presente documento se expone un método para tratar o prevenir una enfermedad, trastorno o afección seleccionado entre el grupo que consiste en un trastorno proliferativo, un trastorno neurodegenerativo, un trastorno inmunológico, una enfermedad autoinmunitaria, un trastorno inflamatorio, una enfermedad dermatológica, una enfermedad metabólica, enfermedad cardiovascular y una enfermedad gastrointestinal.
El trastorno proliferativo puede ser cualquier trastorno proliferativo conocido por los expertos. En determinadas realizaciones, los trastornos proliferativos incluyen, sin limitación, trastornos oncológicos, donde el trastorno oncológico puede ser cualquier trastorno canceroso conocido por los expertos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir un melanoma. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir el melanoma metastásico. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer de pulmón. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer de pulmón resistente al inhibidor de tirosina quinasa EGFR. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer oral. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir carcinoma de células escamosas oral. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer de próstata. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o controlar linfoma de Burkitt. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer mama.
El trastorno neurodegenerativo puede ser cualquier trastorno neurodegenerativo conocido por los expertos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir enfermedad de Alzheimer. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad de Parkinson. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad de Huntington,. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la esclerosis lateral amiotrófica. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la expresión del gen de mielina. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir afecciones, enfermedades o trastornos relacionados con la mielinización y remielinización.
El trastorno inmunológico puede ser cualquier trastorno inmunológico conocido por los expertos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad intestinal inflamatoria. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la colitis ulcerosa. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad de Crohn.
El trastorno inflamatorio puede ser cualquier trastorno inflamatorio conocido por los expertos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la artritis. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la artritis reumatoide.
La enfermedad metabólica puede ser cualquier enfermedad metabólica conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la enfermedad metabólica es la dislipidemia. La dislipidemia puede ser cualquier dislipidemia conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, la dislipidemia se selecciona entre el grupo que consiste en hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperlipoproteinemia, deficiencia de HDL, deficiencia de ApoA-I y enfermedades cardiovasculares, tal como enfermedad de las arterias coronarias (incluyendo, por ejemplo, tratamiento y prevención de la angina, infarto de miocardio y la muerte súbita cardíaca); aterosclerosis (incluyendo, por ejemplo, tratamiento y prevención de la aterosclerosis); y reestenosis (incluyendo, por ejemplo, prevención o tratamiento de las placas ateroscleróticas que se desarrollan como consecuencia de procedimientos médicos como la angioplastia con balón). En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la diabetes.
La enfermedad cardiovascular puede ser cualquier enfermedad cardiovascular conocida por los expertos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la aterosclerosis. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la aterosclerosis derivada del procesamiento anormal de los macrófagos. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la aterosclerosis derivada de la formación de lipoproteínas de baja densidad oxidadas (oxLDL), donde los macrófagos no logran procesar las oxLDL. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad cardíaca isquémica. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir el ictus. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad cardíaca por hipertensión. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir los aneurismas. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la endocarditis. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir la enfermedad de las arterias periféricas. En determinadas realizaciones, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar o prevenir combinaciones de cualquiera de las enfermedades proporcionadas en este párrafo.
En algunos ejemplos, en el presente documento se expone un método para modular la función de un receptor nuclear. A modo de ejemplo no limitante, la función puede seleccionarse entre la expresión/secreción de mediadores inflamatorios (por ejemplo, citocinas, quimiocinas), regulación del colesterol, ingesta de colesterol, eflujo de colesterol, oxidación del colesterol, migración, quimiotaxis, apoptosis y necrosis, una actividad inflamatoria, regulación de lípidos, apoptosis, migración, quimiotaxis, transcripción de genes y expresión de proteínas.
Ejemplos
En el presente documento se proporcionan nuevas bis-octahidrofenantreno carboxamidas, conjugados de proteínas de las mismas y métodos para tratar enfermedades, trastornos y afecciones, que incluyen la administración de bisoctahidrofenantreno carboxamidas y conjugados.
En algunos ejemplos, el compuesto de Fórmula (I) es un compuesto identificado en la Tabla 1.
Tabla 1. Lista de car as activas
(continuación)
(continuación)
(continuación)
Ejemplos de enlazador-cargas activas de la presente divulgación incluyen, aunque sin limitación, los descritos en la Tabla 2 a continuación.
Tabla^ 2. Lista de enlazador-car as activas
continuación
continuación
continuación
En los siguientes ejemplos no limitantes se ilustran determinadas realizaciones de la invención.
Los reactivos y disolventes se obtuvieron de fuentes comerciales, tales como Sinopharm Chemical Reagent Co. (SCRC), Sigma-Aldrich, Alfa u otros proveedores, a menos que se indique explícitamente lo contrario.
RMN 1H y otros espectros de RMN se registraron en un Bruker AVIII 400 o Bruker A VIII 500. Los datos se procesaron con el software Nuts o el software MestReNova, midiendo los cambios de protones en partes por millón (ppm) en el campo desde un patrón interno de tetrametilsilano.
La medición de HPLC-MS se realizó en el sistema Agilent 1200 HPLC/6100 SQ utilizando las siguientes condiciones:
Se incluye el método A para la medición por HPLC-MS, como la Fase Móvil: A: Agua (0,01 % de TFA) y B: acetonitrilo (0,01 % de TFA). La fase de gradiente fue del 5 % de B aumentada al 95 % de B durante 15 minutos (min) a 1,0 ml/min. La columna de HPLC utilizada era una Sunfire C18, 4,6 * 50 mm, 3,5 pm. La temperatura de la columna fue de 50 °C. Los detectores incluían un detector de dispersión de luz evaporativa con convertidor analógico a digital (en adelante "ADC ELSD"), Detector de matriz de diodos (DAD, 214 nm y 254 nm) e ionización por electropulverización-ionización por presión atmosférica (ES-API).
Método B para medición HPLC-MS incluido, como la Fase Móvil: A: Agua (NH<4>HCO<3>10 mM) y B: acetonitrilo. La fase de gradiente fue del 5 % de B aumentada al 95 % de B durante 15 min a 1,0 ml/min. La columna usada era una XBridge C18, 4,6 x 50 mm, 3,5 pm. La temperatura de la columna fue de 50 °C. Los detectores incluían un ADC ELSD, DAD (214 nm y 254 nm) y un detector selectivo de masas (MSD ES-API).
La medición LC-MS se realizó en el sistema Agilent 1200 HPLC/6100 SQ utilizando las siguientes condiciones:
El método A para la medición LC-MS se realizó en un instrumento WATERS 2767. La columna era un Shimadzu Shim-Pack, PRC-ODS, 20 x 250 mm, 15 pm, dos conectados en serie. La Fase Móvil fue A: Agua (0,01 % de TFA) y B: acetonitrilo (0,01 % de TFA). La fase de gradiente fue del 5 % de B aumentada al 95 % de B durante 3 min a 1,8 -2,3 ml/min. La columna utilizada fue SunFire C18, 4,6 x 50 mm, 3,5 pm. La temperatura de la columna fue de 50 °C. Los detectores incluían un ADC ELSD, DAD (214 nm y 254 nm) y un MSD ES-API.
El método B para la medición LC-MS se realizó en un instrumento Gilson GX-281. La columna era una Xbridge Prep C18 10 pm OBD, 19 x 250 mm. La Fase Móvil fue A: agua (NH<4>HCO<3>10 mM) B: Acetonitrilo. La fase de gradiente fue del 5 % de B aumentada al 95 % de B durante 3 min a 1,8 -2,3 ml/min. La columna usada era una XBridge C18, 4,6 x 50 mm, 3,5 pm. La temperatura de la columna fue de 50 °C. Los detectores incluían ADC ELSD, DAD (214 nm y 254 nm) y un MSD ES-API.
La cromatografía líquida preparativa de alta presión (Prep-HPLC) se realizó en un instrumento Gilson GX-281. Se utilizaron dos sistemas de disolventes, uno ácido y otro básico. El sistema de disolvente ácido (Método A) incluía una columna Waters Sunfire C18 de 10 pm (100 A, 250 x 19 mm). El disolvente A para HPLC preparatoria fue TFA al 0,05 % en agua y el disolvente B fue acetonitrilo. La condición de elución fue un gradiente lineal que aumentó el disolvente B del 5 % al 100 % durante 20 minutos a 30 ml/min. El sistema de disolvente básico (Método B) incluía una columna Waters Xbridge C18 de 10 pm (100 Á, 250 x 19 mm). El disolvente A para la HPLC preparatoria fue bicarbonato de amonio 10 mM (NH<4>HCO<3>) en agua y el disolvente B era acetonitrilo. La condición de elución fue un gradiente lineal que aumentó el disolvente B del 5 % al 100 % durante 20 minutos a 30 ml/min.
La cromatografía flash se realizó en un instrumento Biotage, con Agela Flash Column sílice-CS. La cromatografía flash de fase inversa se realizó en un instrumento Biotage, con Boston ODS o Agela C18, a menos que se indique explícitamente lo contrario.
Como se usa en el presente documento, los símbolos y convenciones usados en estos procesos, esquemas y ejemplos, independientemente de si se define específicamente una abreviatura particular, son consistentes con los usados en la bibliografía científica contemporánea, por ejemplo, el Journal of the American Chemical Society o el Journal of Biological Chemistry. Específicamente, pero sin limitación, se pueden usar las abreviaturas siguientes en los ejemplos y a lo largo de la memoria descriptiva:
continuación
Métodos de preparación
EJEMPLO 1
Este ejemplo demuestra métodos generales para la síntesis de los derivados del ácido podocárpicoP1, P15yP2en la Tabla 1, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados desde1a12a-byP1, P15yP2en la Figura 1.
(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxMato de metilo (2)
A una solución de acido podocarpico (1, 90 g, 0,33 mol) en metanol (200 ml) y tolueno (600 ml) se anadio (trimetilsilil)diazometano (2 M en hexano, 200 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 horas. El ácido podocárpico se consumió totalmente según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se trituró en éter de petróleo (2 l) para dar el compuesto2(91 g, rendimiento del 96 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 289 (M H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde ) 88,95 (s, 1H), 6,79 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 6,48 (dd,J= 8,2, 2,4 Hz, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,80-2,55 (m, 2H), 2,20-2,02 (m, 3H), 1,96-1,71 (m, 2H), 1,56-1,45 (m, 2H), 1,27 (t,J= 13,5 Hz, 1H), 1,21 (s, 3H), 1,09 (td,J= 13,5, 4,1 Hz, 1H), 0,91 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-1,4a-dimetil-6-(trifluorometanosulfoniloxi)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-carboxilato de metilo (3)
A una solución de compuesto2(10 g, 35 mmol) en cloruro de metileno (200 ml) se añadieron piridina (3,3 g, 42 mmol) y DMAP (0,84 g, 6,9 mmol) en nitrógeno. La mezcla se enfrió a -78 °C y se añadió anhídrido tríflico (12 g, 42 mmol). La mezcla resultante se dejó calentar a 25 °C y se agitó a 25 °C durante otras 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (500 ml), se lavó con agua (100 ml), clorhidrato acuoso (1 N, 150 ml) y salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío para dar el compuesto bruto.3(14 g, 97 % de rendimiento bruto) como aceite viscoso, que era lo suficientemente puro para la siguiente etapa. El compuesto bruto3podría purificarse mediante cromatografía ultrarrápida (0-10 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar3puro como un aceite viscoso. ESI m/z: 421,2 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 57,12 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 7,10 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,97 (dd,J= 8,5, 2,5 Hz, 1H), 3,67 (s,J= 3,4 Hz, 3H), 2,93 (dd,J= 17,2, 4,4 Hz, 1H), 2,85-2,71 (m, 1H), 2,29 (d,J= 13,5 Hz, 1H), 2,25-2,14 (m, 2H), 2,03-1,89 (m, 2H), 1,71-1,61 (m, 1H), 1,56-1,48 (m, 1H), 1,40 (td,J= 13,4, 4,2 Hz, 1H), 1,30-1,22 (m, 3H), 1,09 (td,J= 13,6, 4,2 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-((ferc-butoxicarboml)ammo)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-carboxNato de metilo (4)
A una solución del compuesto 3 (14 g, 34 mmol) y carbamato de ferc-butilo (BocNH<2>, 7,9 g, 68 mmol) en ferc-butanol (100 ml) se añadieron, sucesiva, carbonato de cesio (22 g, 68 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (Pd<2>(dba)<3>, 1,8 g, 2,0 mmol) y X-Phos (1,8 g, 4,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se desgasificó y se purgó con argón 3 veces y luego se agitó a 80 °C bajo un globo de argón durante la noche hasta que el compuesto3estaba totalmente consumido, según lo monitorizado por TLC. Después de enfriar a TA, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se filtró a través de celite. Los sólidos se lavaron con acetato de etilo 3 veces. El filtrado combinado se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-6,25 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto 4 (11 g, 80 % de rendimiento) como un sólido blanco. ESI m/z: 410 (M 23)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde ) 89,07 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,13 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,87 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,76 (dd,J= 16,4, 4,5 Hz, 1H), 2,70-2,61 (m, 1H), 2,16-2,05 (m, 3H), 2,00-1,75 (m, 2H), 1,65-1,50 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,31-1,25 (m, 1H), 1,21 (s, 3H), 1,10 (td,J= 13,5, 4,1 Hz, 1H), 0,92 (s, 3H) ppm.
Ácido (1S,4aS,10aR)-6-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo}-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxílico (5)
A una solución de compuesto.4(4,9 g, 13 mmol) en DMSO se añadió ferc-butóxido de potasio (15 g, 0,13 mol) en una porción a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 3 horas en atmósfera de argón hasta que se completó la reacción según LCMS. Después de enfriar a TA, la mezcla de reacción se vertió en hielo y se acidificó lentamente con clorhidrato acuoso (0,5 M) a pH 5, durante el cual no se permitió que la temperatura alcanzara más de 25 °C. Los precipitados se recogieron por filtración y se lavaron con agua varias veces. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto5(4,5 g, rendimiento del 93 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 318 (M - 55)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 812,08 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 6,87 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 2,79-2,68 (m, 1H), 2,65 (d,J= 12,6 Hz, 1H), 2,17-2,03 (m, 4H), 1,94-1,76 (m, 2H), 1,53 (d,J= 13,7 Hz, 1H), 1,46 (d,J= 7,4 Hz, 9H), 1,29-1,14 (m, 5H), 1,04 (s, 3H) ppm.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-carbamo¡l-4b,8-d¡met¡l-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octah¡drofenantren-3-¡l]carbamato de tere-butilo (6)
A una solución de 5 (4,5 g, 12 mmol) y HATU (4,9 g, 13 mmol) en DMF (50 ml) se le añadió diisopropiletilamina (20 ml, 0,12 mol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante una hora. Después se añadió a la mezcla cloruro de amonio (16 g, 0,30 moles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (0-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto 6 (4,2 g, 94 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. ESI m/z: 373,3 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, metanol-dd) 87,20 (s, 1H), 6,97 (d,J= 7,7 Hz, 1H), 6,80 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 2,77-2,68 (m, 2H), 2,66-2,55 (m, 1H), 2,20 (d,J= 12,9 Hz, 1H), 2,13 (dd,J= 13,2, 5,3 Hz, 1H), 2,08 (d,J= 14,0 Hz, 1H), 2,03-1,86 (m, 2H), 1,54 (d,J= 11,1 Hz, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,26 (t,J= 26,7Hz, 1H), 1,18 (s, 3H), 1,14-1,03 (m, 4H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-am¡no-1,4a-d¡met¡l-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octah¡drofenantren-1-carbox¡lato de met¡lo, sal de ác¡do trifluoroacético (7)
A una solución del compuesto4(6,0 g, 15 mmol) en DCM (60 ml) se le añadió TFA (12 ml) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que Boc se eliminó por completo, según lo monitorizado por TLC. La mezcla de reacción se concentró al vacío para dar el compuesto bruto7como una sal de TFA, que se usó en la etapa siguiente sin más purificación. ESI m/z: 288 (M+1)+.
(1S,4aS,10aR)-6-(benc¡lox¡)-1,4a-d¡met¡l-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octah¡drofenantren-1-carbox¡lato de met¡lo (8a)
Una mezcla del compuesto2(12 g, 40 mmol) y carbonato de cesio (14 g, 44 mmol) en DMF (100 ml) se agitó a 20 25 °C durante 15 minutos. A la mezcla se le añadió bromuro de bencilo (7,1 ml, 60 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar a TA durante 4 h, la mezcla resultante se vertió en agua fría y se extrajo con acetato de etilo. La solución orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-10 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto del título8a (13g, rendimiento del 89 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 379 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, m e tanoM 87,60 - 7,20 (m, 5H), 7,00-6,82 (m, 2H), 6,73 (d,J= 7,1 Hz, 1H), 5,03 (s, 2H), 3,66 (s, 3H), 2,95-2,58 (m, 2H), 2,36-2,10 (m, 3H), 2,10-1,85 (m, 2H), 1,70-1,48 (m, 2H), 1,44-1,21 (m, 4H), 1,15 (t,J= 17,2 Hz, 1H), 1,01 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-(dibencilamino)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-carboxilato de metilo (8b)
A una solución del compuesto bruto7obtenido anteriormente(calc.15 mmol) en DMF (60 ml) se añadieron carbonato potásico (6,4 g, 46 mmol) y bromuro de bencilo (5,8 g, 34 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante la noche hasta que se completó la reacción según se controló por TLC. Después de enfriar a TA, la mezcla de reacción se vertió en agua fría (300 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces). La solución orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío para dar el producto bruto 8b, que se usó en la etapa siguiente sin más purificación. ESI m/z: 468 (M 1)+.
Ácido (1S,4aS,10aR)-6-(bencNoxi)-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxflico (9a)
Una mezcla del compuesto 8a (11 g, 29 mmol) y ferc-butóxido de potasio (33 g, 0,29 mol) en DMSO (0,19 l) se agitó a 100 °C durante una hora hasta que el éster se consumió por completo, según lo monitorizado por LCMS y TLC. Después del enfriamiento a 25 °C, la mezcla se inactivó con clorhidrato acuoso (1N) y se extrajo con acetato de etilo. La solución orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-24 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto9a(7,5 g, rendimiento del 71 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 365 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, m e tanoM 57,42 (d,J= 7,4 Hz, 2H), 7,36 (t,J= 7,5 Hz, 2H), 7,30 (t,J= 7,3 Hz, 1H), 6,92 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,87 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 6,72 (dd,J= 8,4, 2,5 Hz, 1H), 5,02 (s, 2H), 2,82 (dd,J= 16,3, 4,4 Hz, 1H), 2,77-2,65 (m, 1H), 2,24 (d,J= 13,2 Hz, 2H), 2,19 (dd,J= 13,8, 6,0 Hz, 1H), 2,11-1,96 (m, 2H), 1,64-1,56 (m, 1H), 1,53 (d,J= 11,0 Hz, 1H), 1,35 (td,J= 13,3, 3,7 Hz, 1H), 1,30 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,11-1,05 (m, 1H) ppm.
Ácido (1S,4aS,10aR)-6-(dibencilammo)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxíNco (9b)
A una solución del compuesto bruto8bobtenido anteriormente(calc.15 mmol) en DMSO (100 ml) se añadió fercbutóxido de potasio (17 g, 0,15 mol) en una porción a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 2 horas en atmósfera de argón hasta que se completó la reacción según LCMS. Después de enfriar a TA, la mezcla de reacción se vertió en hielo y se acidificó lentamente con clorhidrato acuoso (4 M) a pH 5, durante el cual no se permitió que la temperatura alcanzara más de 25 °C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo y la solución orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto9b(6,8 g, 99 % de rendimiento en 3 etapas a partir del compuesto4) como un sólido blanco. ESI m/z: 454 (M 1)+.
(1S,4aS,10aR)-6-(benciloxi)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxilato de pentafluorofenilo (10a)
A una solución de9a(9,6 g, 26 mmol) en DMF (100 ml) se añadió DIPEA (14 ml, 79 mmol) y 2,2,2-trifluoroacetato de perfluorofenilo (15 g, 53 mmol). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se controló por LCMS. Después, la mezcla de reacción se diluyó con éter (200 ml) y se lavó con agua (300 ml) y salmuera (200 ml). La solución orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-10 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto10a(12 g, rendimiento del 88 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 531 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, DMSO-da)57,43 (d,J= 7,1 Hz, 2H), 7,38 (t,J= 7,4 Hz, 2H), 7,31 (t,J= 7,2 Hz, 1H), 6,93 (dd,J= 10,2, 5,5 Hz, 2H), 6,76 (dd,J= 8,4, 2,5 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 2,81 (dd,J= 16,3, 4,5 Hz, 1H), 2,77-2,68 (m, 1H), 2,28-2,19 (m, 2H), 2,18 (dd,J= 13,4, 5,6 Hz, 1H), 2,00-1,83 (m, 2H), 1,74 (d,J= 11,8 Hz, 1H), 1,65 (d,J= 14,1 Hz, 1H), 1,47 (s, 3H), 1,38-1,27 (m, 2H), 1,08 (s, 3H) ppm.
(1 S,4aS,10aR)-6-(dibencilamino)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -carboxilato de pentafluorofenilo (10b)
A una solución de9b(6,8 g, 15 mmol) en DMF (100 ml) se añadió DIPEA (10 ml, 0,61 mol) y 2,2,2-trifluoroacetato de perfluorofenilo (10 ml, 58 mmol). Esta mezcla se agitó a 25 °C durante la noche en atmósfera de nitrógeno y luego se diluyó con éter. Las fases orgánicas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío. El residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-10 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto10b(7,5 g, rendimiento del 81 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 620 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, CDCls)57,36-7,25 (m, 10H), 6,92 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,67 (d,J= 2,8 Hz, 1H), 6,63 (dd,J= 8,4, 2,6 Hz, 1H), 4,63 (m, 4H), 2,85-2,73 (m, 2H), 2,41-2,37 (m, 1H), 2,22-2,20 (m, 1H), 2,15 1,91 (m, 3H), 1,71-1,65 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,37-1,19 (m, 2H), 1,10 (s, 3H) ppm.
W-[(4bS,8S,8aft)-8-({[(1 S,4aS,10aR)-6-(benciloxi)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de ferc-butilo (11a)
A una solución de compuesto6(2,3 g, 6,2 mmol) en THF (20 ml) se añadió gota a gota n-BuLi (2,5 M en hexano, 5,5 ml, 14 mmol) a -78 °C. La reacción se agitó a -78 °C durante 1 hora. A la mezcla se le añadió una solución de10a(3,0 g, 5,6 mmol) en THF (20 ml) y luego la mezcla resultante se agitó a 10-20 °C durante la noche hasta que el compuesto10ase hubo consumido, según lo controlado mediante LCMS. La reacción se inactivó con cloruro de amonio acuoso saturad y se extrajo con acetato de etilo. La solución orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-30 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto11a(1,59 g, rendimiento del 51 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 719 (M 1)+.
(En comparación con el procedimiento de 11bmás adelante,aquí se utilizó n-BuLi en lugar de LiHMDS. Aunque 6 no se consumió por completo, este procedimiento condujo a menos productos secundarios y al rendimiento de 11a aumentó de aproximadamente 40%a 51 %. Se recuperó el compuesto 6 sin reaccionar (rendimiento recuperado:10 20 %).
W-[(4bS,8S,8aft)-8-({[(1 S,4aS,10aR)-6-(dibencilamino)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de ferc-butilo (11b)
A una solución del compuesto6(1 g, 2,7 mmol) en THF (15 ml) se añadió gota a gota bis(trimetilsMil)amida de litio (1 M en hexano, 8,0 ml) a 0 °C. La reacción se agitó a 0 °C durante una hora. A la mezcla se añadió una solución del compuesto10b(2,5 g, 4,0 mmol) en THF (10 ml) y luego la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después, la reacción se inactivó con cloruro de amonio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. La solución orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-35 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el compuesto11b(0,95 g, rendimiento del 44 %) como un sólido blanco; y compuesto recuperado6(rendimiento recuperado 37 %). ESI m/z: 808 (M 1)+. RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 58,16 (s, 1H), 7,35-7,24 (m, 10H), 7,12 (d,J= 8 Hz, 1H), 7,00 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,91 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,62-6,59 (m, 2H), 6,42 (s, 1H), 4,62 (s, 3H), 2,98-2,75 (m, 4H), 2,31-2,22 (m, 5H), 2,10-1,97 (m, 5H), 1,69-1,63 (m, 4H), 1,56 (s, 9H), 1,32-1,27 (m, 9H), 1,43-1,27 (m, 5H), 1,05 (s, 3H) ppm.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de íerc-butilo (12a) (P15)
A una solución de11a(2,0 g, 2,78 mmol) en acetato de etilo (40 ml) se añadió paladio húmedo sobre carbón (10% Pd, 0,9 g) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se desgasificó, se purgó con hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente bajo un balón de hidrógeno durante la noche hasta que11aestaba totalmente consumido, según lo controlado mediante LCMS. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-55 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar12a(P15;1,06 g, rendimiento del 61 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 629 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 8 9,10 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,15 (d,J= 7,5 Hz, 1H), 6,90 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,81 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,3 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,2, 2,4 Hz, 1H), 2,84 (td,J= 16,3, 3,8 Hz, 2H), 2,77-2,64 (m, 2H), 2,30 2,22 (m, 2H), 2,14 (t,J= 10,9 Hz, 4H), 2,00-1,80 (m, 4H), 1,65-1,54 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,34-1,28 (m, 2H), 1,27 (d,J= 2,5 Hz, 6H), 1,15-1,08 (m, 2H), 0,99 (s, 6H) ppm.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de íerc-butilo (12b)
A una solución de11b(0,45 g, 0,56 mmol) en acetato de etilo (5 ml) se añadió paladio húmedo sobre carbón (10 % de Pd, 50 mg) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se desgasificó, se purgó con hidrógeno 3 veces y se agitó a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno durante la noche. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el compuesto 12b (0,33 g, rendimiento del 94 %) en forma de un sólido blanco. ESI m/z: 628 (M 1)+.
(1S,4aS,10aR)-W-[(1S,4aS,10aR)-6-Ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboml]-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P1)
A una solución del compuesto12a(0,17 g, 0,27 mmol) en DCM (10 ml) se añadió gota a gota TFA (3 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó Boc según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (método B) para darP1(0,10 g, rendimiento del 70%) como un sólido blanco. ESI m/z: 529,3 (M 1)+. Rotación óptica(a):+ 2,53° (1,7 g/100 ml de THF, 25 °C).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla)58,14 (s, 1H), 6,92 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,86 (d,J= 8,1 Hz, 1H), 6,73 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 6,65-6,57 (m, 2H), 6,50 (dd,J= 8,1,2,3 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 3,49 (s, 1H), 2,99-2,85 (m, 2H), 2,79 (tt,J= 11,6, 5,8 Hz, 2H), 2,34-2,14 (m, 6H), 2,15-1,95 (m, 4H), 1,74-1,51 (m, 5H), 1,46-1,34 (m, 2H), 1,30 (s, 6H), 1,21-1,06 (m, 8H) ppm.
RMN 1H (400 MHz, DMSOde ) 88,99 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 6,81 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,0, 2,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 8,0, 2,5 Hz, 1H), 4,69 (s, 2H), 2,86 2,60 (m, 4H), 2,28-2,10 (m, 6H), 1,94-1,75 (m, 4H), 1,65-1,53 (m, 4H), 1,35-1,20 (m, 8H), 1,20-1,06 (m, 2H), 0,98 (s, 6H) ppm.
RMN 13C (100 MHz, DMSO-de) 8 174,03, 173,92, 155,34, 148,39, 147,63, 146,43, 129,56, 129,09, 124,60, 121,65, 113,23, 112,58, 111,81, 110,77, 52,32, 52,09, 45,56, 45,52, 39,20, 39,36, 38,23, 38,17, 37,18, 37,12, 31,08, 31,00, 27,65, 27,64, 23,08, 23,03, 21,43, 21,27, 19,64, 19,61 ppm.
HPLC (método B): Tiempo de retención: 8,92 min, pureza: 99,4 %. HPLC quiral: >99,9 % (en la columna AD, AS, OD y OJ).
(1S,4aS,10aR)-6-ammo-W-((1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P2)
A la solución del compuesto.12b(0,63 g, 1,0 mmol) en DCM (10 ml) se añadió gota a gota TFA (3 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas hasta que se eliminó Boc según LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para darP2(0,42 g, rendimiento del 79 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 528,2 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde ) 88,28 (s, 1H), 6,67 (d,J= 8,0 Hz, 2H), 6,47 (d,J= 2,0 Hz, 2H), 6,33 (dd,J= 8,0, 2,0 Hz, 2H), 4,69 (s, 4H), 2,80-2,75 (m, 2H), 2,70-2,60 (m, 2H), 2,26-2,20 (m, 2H), 2,19-2,05 (m, 4H), 1,95-1,75 (m, 4H), 1,62-1,50 (m, 4H), 1,33-1,20 (m, 8H), 1,12 (t,J= 8,8 Hz, 2H), 0,98 (s, 6H) ppm.
EJEMPLO 2
Este ejemplo demuestra métodos generales para la síntesis del derivado del ácido podocárpico.P3en la Tabla 1, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados desde11byP3en la Figura 2A.
(3S,8R,9S,10R,13S,14S)-17-immo-10,13-dimetN-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-3-ol, sal del ácido trifluoroacético (P3)
A una solución de compuesto.11b(10 mg, 12 |jmol) en DCM (2 ml) se añadió TFA (1 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que se eliminó Boc según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se disolvió en acetonitrilo al 5 % en agua. La solución se liofilizó para proporcionar el compuestoP3(7 mg, rendimiento del 80 %) como un sólido amarillo claro. ESI m/z: 354,8 (M/2 H)+. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de)89,38 (s a, 2H), 8,08 (s, 1H), 7,35-7,06 (m, 12H), 6,97 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 6,73 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 6,46 (d,J= 6,4 Hz, 1H), 4,68-4,55 (m, 4H), 3,00-2,50 (m, 4H), 2,40-2,00 (m, 6H), 1,94-1,73 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 3H), 1,50-1,00 (m, 11H), 0,98 (s, 3H), 0,83 (s, 3H) ppm. RMN 19F (376 MHz, DMSOde) 5-74,08 ppm.
EJEMPLO 3
Este ejemplo demuestra métodos generales para la síntesis de los derivados del ácido podocárpico.P4-P8en la Tabla 1, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados desde12byP4-P9, P13, P14 y P17en la Figura 2A.
Ejemplo 3a
Intermedios 13a-e
A una solución de compuesto12b(1,0 equiv.) en DMF o DCM se añadió Fmoc-aminoácido (1,1-1,2 equiv.), HATU (1,2-1,5 equiv.) y DIPEA (2,0-3,0 equiv.) sucesivamente. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 4 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se concentró al vacío (cuando DCM era disolvente) y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-90 % de acetato de etilo en éter de petróleo); o la mezcla de reacción (cuando DMF era disolvente) se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (50-90 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto13como sólidos blancos.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-£[(íerc-butoxi)carboml]ammoH,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctah¡drofenantren-1-¡l]formam¡do}carboml)-4b,8-d¡met¡l-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octah¡drofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo (13a)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios13a-e,el compuesto13a(0,14 g, 78%de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 907 (M H)+.
W-[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(ferc-butox¡)carboml]ammo}-1,4a-d¡met¡l-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctah¡drofenantren-1-¡l]formam¡do}carboml)-4b,8-d¡met¡l-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octah¡drofenantren-3-il]carbamoil}-2-hidroxietil]carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo (13b)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios13a-e,el compuesto13b(0,39 g, 83 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 938 (M H)+.
W-[(5S)-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(ferc-butox¡)carboml]ammo}-1,4a-d¡met¡l-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctah¡drofenantren-1-¡l]formam¡do}carboml)-4b,8-d¡met¡l-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octah¡drofenantren-3-¡l]carbamo¡l}-5-1[(9H-fluoren-9-¡lmetox¡)carboml]ammo)pentM]carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo (13c)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios13a-e,el compuesto13c(0,30 g, 78 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 1201 (M H)+.
3-(((9H-fluoren-9-¡l)metox¡)carbomlammo)-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(íerc-butox¡carbomlammo)-1,4a-d¡met¡l-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octah¡drofenantreno-1-carbon¡lcarbamo¡l)-4b,8-d¡met¡l-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-4-oxobutanoato de (S)-ferc-But¡lo (13d)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios13a-e,el compuesto13d(0,43 g, 85%de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 1021 (M H)+.
4-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbomlammo)-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(ferc-butoxicarbomlammo)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-5-oxopentanoato de (S)-íerc-Butilo (13e)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios13a-e,el compuesto13e(0,42 g, 82 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 1036 (M H)+.
Ejemplo 3b
Intermedios 14a-e
A una solución del compuesto13(1,0 equiv.) en DCM se añadió TFA a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora y se concentró al vacío para dar el producto bruto14como aceite incoloro, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo, sal del ácido trifluoroacético (14a)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios14a-e,el compuesto bruto14a(0,14 g, rendimiento del 99 %, sal TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 807 (M 1)+.
(S)-1-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-3-hidroxi-1-oxopropan-2-ilcarbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo, sal del ácido trifluoroacético (14b)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios14a-e,el compuesto bruto14b(0,14 g, rendimiento del 99 %, sal TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 837 (M 1)+.
W-[(5S)-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-ammo}-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carboml)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}-5[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino)pentil]carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo, sal del ácido trifluoroacético (14c)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios14a-e,el compuesto bruto14c(0,22 g, rendimiento del 92 %, sal TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 1101 (M 1)+.
Ácido (S)-3-(((9H-Fluoren-9-il)metoxi)carbomlammo)-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-4-oxobutanoico, sal del ácido trifluoroacético (14d)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios14a-e,el compuesto bruto14d(0,10 g, rendimiento del 87 %, sal TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 866 (M 1)+.
Ácido (S)-4-(((9H-Fluoren-9-N)metoxi)carbomlammo)-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbomlcarbamoM)-4b,8-dimetN-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-5-oxopentanoico, sal del ácido trifluoroacético (14e)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios14a-e,el compuesto bruto14e(84 mg, rendimiento del 86 %, sal TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 880 (M 1)+.
Ejemplo 3c
Cargas activas P4-9, 13, 14 y 17
A una solución de14 bruto,obtenido anteriormente, en DMF se añadió piperidina. La mezcla se agitó a ta durante media hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar cargas activas.P4-8como sólidos blancos.
(1S,4aS,10aR)-W-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-aminoacetamido)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]-6- amino -1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P4)
Siguiendo el procedimiento general para cargas activasP4-8,el compuestoP4(12 mg, 28% de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 585 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 89,79 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,41 (dd,J= 8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4. 70 (m, 2H), 3,20 (s, 3H), 2,95-2,83 (m, 1H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,70 2,60 (m, 1H), 2,30-2,20 (m, 2H), 2,20-2,10 (m, 4H), 2,05-1,70 (m, 4H), 1,70-1,50 (m, 4H), 1,31-1,25 (m, 8H), 1,20-1,10 (m, 2H), 1,05 (d,J= 7,5 Hz, 6H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-Amino-W-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2-ammo-3-hidroxipropanamido)-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octadrohenantreno-1-carboxamida (P5)
Siguiendo el procedimiento general para cargas activasP4-8,el compuestoP5(41 mg, 67 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 615 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 58,09 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,41 (dd,J=8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4,84-4,76 (m, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,60-3,45 (m, 2H), 2,95-2,83 (m, 1H), 2,80-2,60 (m, 4H), 2,30-2,20 (m, 3H), 2,20-2,10 (m, 4H), 1,95-1,75 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 4H), 1,40-1,30 (m, 2H), 1,28 (s, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,20-1,10 (m, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-Amino-W-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2,6-diammohexanamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octadrohenantreno-1-carboxamida (P6)
Siguiendo el procedimiento general para cargas activasP4-8,el compuestoP6(5 mg, 17 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 656 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 88,09 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,41 (dd,J= 8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4. 70 (m, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,95-2,83 (m, 2H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,70-2,60 (m, 2H), 2,37 2,35 (m, 1H), 2,30-2,20 (m, 3H), 2,20-2,10 (m, 5H), 2,05-1,95 (m, 2H), 1,95-1,75 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 6H), 1,31-1,25 (m, 8H), 1,20-1,10 (m, 3H), 1,05 (d,J= 7,5 Hz, 6H), 0,85 (t,J= 6,0 Hz, 1H) ppm.
Ácido (S)-3-Amino-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-4-oxobutanoico (P7)
Siguiendo el procedimiento general para cargas activasP4-8,el compuestoP7(39 mg, 51 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 643 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOda) 810,5-10,0 (s a, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,41 (dd,J= 8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4,84-4,50 (m, 2H), 3,75-3,68 (m, 2H), 2,95-2,83 (m, 1H), 2,80-2,60 (m, 4H), 2,40-2,20 (m, 4H), 2,20-2,10 (m, 5H), 1,95-1,70 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 5H), 1,27 (d,J= 7,5 Hz, 6H), 1,20-1,10 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
Ácido (S)-4-amrno-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-5-oxopentanoico (P8)
Siguiendo el procedimiento general para cargas activasP4-8,el compuestoP8(44 mg, 58 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 657 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 88,09 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,41 (dd,J= 8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4,70 (m, 2H), 2,95-2,83 (m, 1H), 2,80-2,60 (m, 5H), 2,30-2,20 (m, 4H), 2,20-2,10 (m, 5H), 1,95-1,75 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 5H), 1,50-1,40 (m, 4H), 1,27 (d,J= 7,5 Hz, 6H), 1,20-1,10 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-6-amino-N-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanamido)-1, 4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno -1-carboxamida (P9)
A una solución de Fmoc-His-OH (0,38 g, 1,0 mmol) en DCM (5 ml) se le añadieron Fmoc-OSu (0,37 g, 1,1 mmol) y DIPEA (0,26 g, 2,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (metanol al 5-10 % en DCM) para dar Fmoc-His(Fmoc)-OH (0,50 g, rendimiento del 84 %, ESI m/z: 600 (M 1)+) en forma de un sólido de color blanco.
A una solución de compuesto.12b(0,31 g, 0,50 mmol) en DCM (20 ml) se añadió el Fmoc-His(Fmoc)-OH (0,33 g, 0,55 mmol), obtenido anteriormente, HATU (0,23 g, 0,60 mmol) y DIPEA (0,19 g, 1,5 mmol) sucesivamente. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, que se monitorizó mediante LCMS. A la mezcla de reacción se le añadió piperidina (0,5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó totalmente el Fmo, según lo controlado mediante LCMS. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (50-80 % de acetonitrilo en agua) para darBoc-P9(0,15 g) como un sólido blanco, la mitad del cual se disolvió en DCM (20 ml). A la solución se le añadió TFA (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó Boc según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (método B) para dar elcompuesto P9(17 mg, rendimiento del 12 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 665 (M 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde ) 811,82 (s, 1H), 9,75 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,52-7,50 (m, 2H), 7,41 (dd,J= 8,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,90-6,80 (m, 1H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 6,34 (dd,J= 7,5 Hz, 1,5 Hz, 1H), 4,84-4,50 (m, 2H), 3,60-3,45 (m, 2H), 2,95 2,83 (m, 2H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,70-2,60 (m, 2H), 2,40-2,10 (m, 8H), 1,95-1,70 (m, 5H), 1,70-1,50 (m, 4H), 1,27 (d,J= 7,5 Hz, 6H), 1,20-1,10 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]-6-[(2S)-2-aminopropanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P13)
Siguiendo el mismo procedimiento queP9,excepto sustituir Fmoc-Ala-OH por Fmoc-His(Fmoc)-OH, el compuestoP13(12 mg, 59 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 8 9,85 (s a, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,54-7,51 (m, 1H), 7,41-7,39 (m, 1H), 6,95 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,6 Hz, 1H), 6,35-6,32 (m, 1H), 4,69 (s, 2H), 3,58-3,41 (m, 3H), 2,91-2,61 (m, 4H), 2,26-2,14 (m, 6H), 1,91 1,78 (m, 4H), 1,66-1,55 (m, 4H), 1,33-1,08 (m, 13H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-hidroxiacetamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P14)
A una mezcla de ácido glicólico (2,2 mg, 29 |jmol) y HATU (18,2 mg, 48 |jmol) en DMF (2,0 ml) se le añadió DIPEA (12 jl, 72 jm ol) y el compuesto12b(15 mg, 24 jmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para darBoc-P14,que se disolvió en DCM (2 ml). A la solución se añadió TFA (0,5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que Boc se eliminó por completo, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa (método B) para dar la carga activaP14(4,3 mg, rendimiento del 31 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 686,5 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde ) 89,46 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,59 (d,J= 1,8 Hz, 1H), 7,49 (dd,J= 8,3, 1,9 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,47 (d,J= 2,1 Hz, 1H), 6,33 (dd,J= 8,1, 2,1 Hz, 1H), 5,65 (t,J= 6,0 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 3,94 (d,J= 6,0 Hz, 2H), 2,93-2,85 (m, 1H), 2,80 2,72 (m, 2H), 2,71-2,63 (m, 1H), 2,34-2,08 (m, 6H), 1,94-1,76 (m, 4H), 1,68-1,52 (m, 4H), 1,35-1,23 (m, 8H), 1,19-1,10 (m, 2H), 0,99 (d,J= 8,1 Hz, 6H) ppm.
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-hidroxiacetamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P17)
A una solución de carga activa P1 (10 mg, 0,019 mmol) en DMF (2 ml) se le añadieron HATU (14 mg, 0,038 mmol) y DIPEA (9,8 mg, 0,076 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de la adición de ácido glicólico (1,73 mg, 0,0228 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar laP17(5,7 mg, rendimiento del 51 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 587,4 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde) 8 9,46 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,53-7,45 (m, 1H), 6,96 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,82 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,3 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,2, 2,4 Hz, 1H), 5,64 (t,J= 6,0 Hz, 1H), 3,94 (d,J= 5,9 Hz, 2H), 2,93-2,66 (m, 4H), 2,29-2,10 (m, 6H), 2,00-1,80 (m, 4H), 1,72-1,50 (m, 4H), 1,30-0,90 (m, 16H) ppm.
EJEMPLO 4
Este ejemplo demuestra métodos generales para la síntesis de los derivados del ácido podocárpico.P10yP11en la Tabla 1, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados desde14a, 15a-b,yP10yP11en la Figura 2B.
4-amino-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(2-ammoacetamido)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-5-oxopentanoato de (S)-terc-butilo, sal del ácido ditrifluoroacético (15a)
A una solución de Fmoc-Glu(OtBu)-OH (74 mg, 0,17 mmol) y DIPEA (55 |jl, 0,32 mmol) en DMF (5,0 ml) se le añadió HATU (91 mg, 0,24 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de la adición del compuesto14a(0,14 g, 0,16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. Después se añadió gota a gota piperidina (1 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó totalmente Fmoc según LCMS. La mezcla resultante se separó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto15a(0,13 g, rendimiento del 80 %) como un sólido amarillo. ESI m/z: 770,5 (M 1)+.
5,5'-(4bS,4b'S,8S,8aR,8'S,8a'R)-8,8'-(azanodiilbis(oxometileno))bis(4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantreno-8,3-diil)bis(azanodiil)bis(4-amino-5-oxopentanoato) de (4S ,4 'S)-terc-butilo sal de ácido di trifluoroacético (15b)
A una solución de Fmoc-Glu(OtBu)-OH (0,15 g, 0,35 mmol) y DIPEA (83 jl, 0,48 mmol) en DMF (5,0 ml) se le añadió HATU (0,15 g, 0,40 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min antes de la adición del compuestoP2(0,10 g, 0,16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. Después se añadió gota a gota piperidina (1 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que se eliminó totalmente Fmoc según LCMS. La mezcla resultante se separó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto15b(0,14 g, rendimiento del 78 %) como un sólido amarillo. ESI m/z: 899 (M 1)+.
Ácido (S)-4-Amino-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(2-ammoacetamido)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-5-oxopentanoico (P10)
Una mezcla del compuestos15a(0,13 g, 0,13 mmol) en TFA puro (2,0 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en bicarbonato de sodio acuoso (10 mM)) para darP10(20 mg, rendimiento del 22 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 358 (M/2 1)+; 714,5 (M 1)+. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 89,85 (s a, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,51 (s, 2H), 7,42-7,36 (m, 2H), 6,96 (dd,J= 8,0 Hz y 3,0 Hz, 2H), 3,67 (s a, 8H), 3,36-3,33 (m, 1H), 3,22 (s, 2H), 2,91-2,87 (m, 2H), 2,80 2,71 (m, 2H), 2,31-2,28 (m, 4H), 2,17-2,14 (m, 4H), 1,91-1,82 (m, 5H), 1,69-1,58 (m, 5H), 1,34-1,23 (m, 6H), 1,19-1,12 (m, 2H), 1,01 (s, 6H) ppm.
Ácido (4S,4'S)-5,5'-(4bS,4b'S,8S,8aR,8'S,8a'R)-8,8'-(azanodiMbis(oxometNeno))bis(4b,8-dimetN-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantreno-8,3-diM)bis(azanodiM)bis(4-ammo-5-oxopentanoico) (P11)
Una mezcla del compuesto 15b (0,14 g, 0,14 mmol) en TFA puro (3,0 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (30 ml) y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en bicarbonato de sodio acuoso (10 mM)) para darP11(20 mg, rendimiento del 18 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 394 (M/2 1)+. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 89,85 (s a, 2H), 8,12 (s, 1H), 7,51 (s, 2H), 7,9 (dd,J= 8,4 Hz y 1,6 Hz, 2H), 6,97 (d,J= 8,0 Hz, 2H), 3,5 (s a, 6H), 3,40-3,37 (m, 2H), 3,16 (s, 1H), 2,91-2,88 (m, 2H), 2,79-2,66 (m, 2H), 2,33-2,29 (m, 7H), 2,18-2,15 (m, 4H), 1,91-1,84 (m, 6H), 1,71-1,59 (m, 6H), 1,35-1,23 (m, 6H), 1,18-1,12 (m, 2H), 1,01 (s, 6H) ppm.
Ejemplo 4a
Este ejemplo demuestra métodos generales para la síntesis del derivado del ácido podocárpico.P19en la Tabla 1, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos de la Figura 2C.
(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-{[(íerc-butoxi)carbonil]amino}-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil[carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilcarbonato de ferc-butilo (16)
A una mezcla de carga activaP1(0,10 g, 0,19 mmol) en ferc-butanol (2 ml), carbonato de potasio (78 mg, 0,57 mmol) y anhídrido de Boc (0,12 g, 0,57 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 3 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante luego se enfrió y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en DCM (100 ml) y la solución se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío para dar el producto bruto16(0,14 g, bruto) como un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI m/z: 729,4 (M 1)+.
(4bS,8S,8aR)-8-1[(1S,4aS,10aR)-7-bromo-6-{[(íerc-butoxi)carbonN]ammo)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilcarbonato de ferc-butilo (17)
A una solución de compuesto bruto16(0,14 g, obtenido anteriormente) en DMF (4 ml) se le añadió NBS (50 mg, 0,28 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto17(40 mg, rendimiento del 26 % en 2 etapas) como un sólido amarillo. ESI m/z: 807,3 (M 1)+.
(4bS,8S,8aR)-8-1[(1S,4aS,10aR)-6-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo)-7-hidroxi-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilcarbonato de ferc-butilo (19)
Una mezcla de compuestos17(40 mg, 50 |jmol), acetato de potasio (12 mg, 0,12 mmol) y bis(pinacolato)diboro18(50 mg, 0,20 mmol) en dioxano seco (5 ml) se desgasificó y se purgó con nitrógeno 3 veces. A la mezcla se le añadió Pd(dppf)Cl.2(1,8 mg, 2,5 jm ol) en atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a 90 °C en una atmósfera de nitrógeno durante media hora, que se monitorizó mediante LCMS. Luego se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite. Al filtrado se le añadió peróxido de hidrógeno (30 %ac.,2,0 ml) gota a gota durante 10 minutos a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante otra media hora, que se monitorizó mediante LCMS. Luego, la mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en TFA ac. (0,01 %)) para dar el compuesto bruto19(35 mg, 50% de pureza, 95% de rendimiento bruto) como un sólido amarillo, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI m/z: 745,5 (M 1)+.
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-amino-7-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno -1-carbonil]-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P19)
A una solución de compuesto bruto19(35 mg, obtenido anteriormente) en DCM (5 ml) se añadió gota a gota TFA (2 ml) a 0 °C durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante media hora hasta que Boc se eliminó por completo, que se monitorizó mediante LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el resto se purificó mediante HPLC preparativa (método A) para obtener la carga activaP19(6,5 mg, 24 % de rendimiento del compuesto17) como un sólido blanquecino. ESI m/z: 545,3 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6 ) 89,03 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 6,81 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,62 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 6,49 (dd,J= 8,4, 2,8 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 4,21 (s, 2H), 2,84-2,80 (m, 1H), 2,73-2,57 (m, 3H), 2,25-2,19 (m, 2H), 2,15-2,08 (m, 4H), 1,89-1,77 (m, 4H), 1,62-1,54 (m, 4H), 1,30 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 1,31-1,20 (m, 2H), 1,14-1,10 (m, 2H), 0,98 (s, 3H), 0,94 (s, 3H) ppm.
EJEMPLO 5
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis del enlazador-cargas activasLP1-LP5,yLP20en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados12by de102a-ba106a-ey enlazador-cargas activasLP1-LP5en la Figura 3.
Ejemplo 5a
Intermedios 102a-b
A una solución de ácido (Fmoc-Val-Ala-OH (101a,1,2 equivalenteso Fmoc-Val-Cit-OH(101b,1,2 equiv.) en DMF se añadieron HATU (1,2 equiv.) y DIPEA (2,0-3,0 equiv.) a temperatura ambiente. Después de que la mezcla se agitase a temperatura ambiente durante 5 minutos, se añadió compuesto12b(1,0 equiv.). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4-20 h hasta que la amina se consumió según LCMS. Luego se añadió a la mezcla piperidina (exceso) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1-6 h hasta que se eliminó totalmente el Fmoc, según lo controlado mediante LCMS. La mezcla de reacción se filtró a través de una membrana y el filtrado se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) o cromatografía ultrarrápida de fase inversa para dar el compuesto102(38-72 % de rendimiento) como un sólido blanco.
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-ammo-3-metilbutanamido]propanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil- 4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de tere-butilo (102a)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 102a,b, el compuesto102a(0,29 g, 72%de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 799 (M 1)+.
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-ammo-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -il]carbonil}carbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de tere-butilo (102b)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 102a,b, el compuesto102b(0,27 g, 38 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 885 (M 1)+.
Ejemplo 5b
Intermedios 104a-b
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-ammo-6-[2-(ciclooct-2-m-1-iloxi)acetamido]hexanamido}-3-metilbutanamido]propanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantren-1-il]carbonil}carbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de tere-Butilo (104a)
A una solución de compuesto103(70 mg, 0,13 mmol) en DMF (2 ml) se añadieron HATU (68 mg, 0,18 mmol) y DIPEA (44 pl, 0,24 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos antes de la adición del compuesto102a(95 mg, 0,12 mmol). Luego la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que el compuesto102aestaba totalmente consumido, según lo controlado mediante LCMS. Después se añadió piperidina (0,5 ml, exceso) a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. A continuación, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto104a(0,13 g, rendimiento del 96 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 518,0 ((M-55)/2)+.
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-ammo-6-[2-(ciclooct-2-m-1-iloxi)acetamido]hexanamido}-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3- il]carbamato de tere-butilo (104b)
A una solución de compuesto103(0,27 g, 0,31 mmol) y DIPEA (0,11 ml, 0,61 mmol) en DMF (6 ml) se añadió el compuesto102b(0,18 g, 0,34 mmol) seguido de la adición de HATU (0,14 g, 0,37 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La solución resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa para dar el compuestoFmoc-104b(0,30 g, ESI m/z: 711 ((M Na)/2 1)+) como un sólido amarillo pálido, que se disolvió en DCM (6,0 ml). A la solución se le añadió piperidina (0,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que Fmoc se eliminó totalmente según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se trituró con éter de petróleo para dar el compuesto104b(0,26 g, rendimiento del 65 %) como un sólido amarillo claro. ESI m/z: 1177,6 (M H)+.
Ejemplo 5c
Intermedios 105a-c
El intermedio azido a-CD-N<3>(105a)se sintetizó según J. Am. Chem. Soc., 2012, 134(46), 19108-19117 (FIG. 10).
Ácido azido-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxa-16-azaoctadecano-18-sulfónico (105b) (Figura 11)
A una solución de 1-azido-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo (N<3>-PEG<4>-OSu, 0,10 g, 0,26 mmol) y taurina105b-A(39 mg, 0,31 mmol) en DMF anhidra (4 ml) se añadió DIPEA (15 mg, 0,52 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se filtró y la solución se purificó mediante HPLC preparativa (método A) para dar el intermedio105b(0,80 g, rendimiento 78 %) como un aceite incoloro. ESI m/z: 399,1 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, D<2>-O) 53,69 (t,J= 6,0 Hz, 2H), 3,64-3,59 (m, 14H), 3,49 (t,J= 6,5 Hz, 2H), 3,41 (t,J= 4,5 Hz, 2H), 3,00 (t,J= 7,0 Hz, 2H), 2,45 (t,J= 6,0 Hz, 2H) ppm.
Cloruro de [2-(1-azido-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido)etil]trimetilazanio (105d)
Siguiendo un procedimiento similar para105banterior, excepto sustituir105d-Apara105b-A,se obtuvo cloruro de trimetilamonio105d(0,13 g, rendimiento del 64 %) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 376 (M H)+. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 53,65-3,58 (m, 4H), 3,58-3,45 (m, 16H), 3,45-3,30 (m, 12H), 2,35 (t,J= 6,5 Hz, 2H) ppm.
El intermedio azido maltosa-N<3>(105c) se sintetizó según Tetrahedron Letters, 2001, 42 (7), 1325-1328 (FIG. 12).
Ejemplo 5d
Intermedios 106a-f
A una solución del compuesto 104 en DMF se le añadió el intermedio azido 105 a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3-48 h hasta que el análisis por LCMS mostró que la reacción se ha completado. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparativa para dar el compuesto Boc-106 en forma de un sólido blanco, que se disolvió en solución de TFA (o TFA puro). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 0,5-20 horas hasta que se eliminó Boc según LCMS. La solución se concentró para dar 106 (como la sal de TFA).
(1S,4aS,10aR)-W-[(1S,4aS,10aR)-6-Ammo-1,4a-dimetN-2,3,4,9,10,10a-hexahidrofenantreno-1-carboml]-6-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-amino-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25,30-pentaquis(hidroximetil)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptacido[26.2.2.23,6.2811.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-il]metil}-4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-il)oxi]acetamido}hexanamido]-3-metilbutanamido]propanamido]-1,4a-dimetil-2,3,4,9,10,10a-hexahidrofenantreno-1-carboxamida sal de ácido trifluoroacético (106a)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 106a-e, el compuestoBoc-106a(72 mg, 76% de rendimiento, como una mezcla de regioisómeros de triazol) se obtuvo como un sólido blanco (ESI m/z: 1045 (M/2 1)+). Se pudo obtener una pequeña cantidad del isómero principal puro (7 mg) después de una purificación adicional mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-60 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)), que fue determinado por RMN 1H (500 MHz, DMSOde) ((con regioisómeros) 59,92 (s, 0,5H), 9,82 (s, 0,5H), 9,10 (s, 1H), 8,58 8,53 (m, 1H), 8,50-8,35 (m, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,04 (s, 3H), 7,88-7,82 (m, 1H), 7,55 (s, 0,5H), 7,46 (s, 0,5H), 7,41 (s, 1H), 7,40-7,26 (m, 1H), 7,14 (d,J= 7,0 Hz, 1H), 6,97 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,90 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 5,51 (a, 12H), 4,83 4,70 (m, 8H), 4,57-4,51 (m, 3H), 4,44-4,36 (m, 4H), 4,00-3,98 (m, 1H), 3,88-3,55 (m, 27H), 3,26-3,09 (m, 6H), 2,91 2,85 (m, 4H), 2,76-2,63 (m, 3H), 2,29-2,25 (m, 2H), 2,17-1,99 (m, 4H), 1,96-1,93 (m, 6H), 1,88-1,63 (m, 9H), 1,56-1,54 (m, 15H), 1,33-1,28 (m, 15H), 1,18-1,13 (m, 3H), 1,01-0,99 (m, 6H), 0,89-0,83 (m, 7H) ppm). A una mezcla deBoc-106a(como una mezcla de regioisómeros) (20 mg, 9,6 |jmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (1 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó Boc, según lo controlado mediante LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío para dar el compuesto106a(19 mg, 69 % de rendimiento de104a) como un sólido de color amarillo pálido, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. ESI m/z: 995 (M/2 1)+.
(1S,4aS,10R)-W-{[(1S,4aS,10R)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-Amino-6-{2-[(1-£[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25,30-pentaquis(hidroximetil)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptaciclo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-il]metil}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-M)oxi]acetamido}hexanamido]-3-metMbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3, 4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]carbonil}-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-carboxamida sal del ácido trifluoroacético (106b)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 106a-e, el compuesto 106b (76 mg, 87%de rendimiento a partir de104b) se obtuvo como un sólido amarillo. ESI m/z: 692 (M/3 1)+.
Ácido 1-(4-(2-(((R)-5-Amino-6-(((S)-1-(((S)-1-(((4bS,8S,8aR)-8-(((1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboml)carbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il)ammo)-1-oxppropan-2-il)ammo)-3-metil-1-oxobutan-2-il)ammo)-6-oxohexil)ammo) -2-oxoetoxi)-4,5,6,7,8,9-hexahidro-1H-Ácido cicloocta[d][1,2,3]triazol-1-il)-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxa-16-azaoctadecano-18-sulfónico (106c)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 106a-e, el compuesto 106c (90 mg, 39 % de rendimiento a partir de104c) se obtuvo como un sólido amarillo. ESI m/z: 463,8 (M/3 1)+.
Ácido 1-(4-(((6S,9S,12R)-1,12-Diamino-6-(((4bS,8S,8aR)-8-(((1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboml)carbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il)carbamoil)-9-isopropil-1,8,11,18-tetraoxo-2,7,10,17-tetraazanonadecan-19-il)oxi)-4 ,5,6,7,8,9-hexahidro-1H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-1 -il)-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxa-16-azaoctadecano-18-sulfónico (106d)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 106a-e, el compuesto 106d como su sal de TFA (22 mg, 36 % de rendimiento) se obtuvo como un sólido blanco después de la purificación mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-80 % de acetonitrilo en agua durante 25 minutos). ESI m/z: 788 (M/2 H)+.
(1S,4aS,10aR)-6-Amino-N-((1S,4aS,1aR)-6-((2S)-2-((2S)-2-((2R)-2-amino-6-(2-((1-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-dihidroxi-6-(hidroximetil)-5-(((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)tetrahidro-2ft-piran-2-il)-3a,4,5,6,7,8,9,9a-octahidro-1ft-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-il)oxi)acetamido)hexanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (106e)
Siguiendo el procedimiento general para los Intermedios 106a-e, el compuesto106ecomo su sal de TFA (34 mg, 77 % de rendimiento) se obtuvo como un aceite incoloro. ESI m/z: 1358 (M H)+.
Trifluoroacetato de (2-{1-[4-({[(5R)-5-Amino-5-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8- ({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4adimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carboml)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}pentil]carbamoil}metoxi)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d] [1,2,3]triazol-1-il]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido}etil)trimetilazanio (1061)
Siguiendo el procedimiento general, el compuesto 106f (20 mg, 42%de rendimiento a partir de104a) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 455,8 (M/3)+.
Ejemplo 5e
Enlazador-cargas activas LP1-LP5 y LP20
A una solución de compuesto.106en DMF se añadió el compuesto DIBAC-PEG<4>-NHS107y DIPEA a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) o cromatografía ultrarrápida de fase inversa (método B) para dar el compuestoLP1-5yLP20.
continuación
1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-W-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetN-2,3,4,9,10,10a-hexahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-5,6,7,8a,9,10 -hexahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metNpropM]carbamoM}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25,30-pentakis(hidroximetM)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptaddo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-N]metM}-4H,5H,6H,7H,8H,9H-cidoocta[d][1,2,3]triazol-4-il)oxi]acetamido}pentil]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (LP1)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, enlazador-carga activa LP1 (8 mg, rendimiento del 36 %) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 842 (M/3 1)+; 1262 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde ) 89,69 (s, 0.5H), 9,28 (s, 0,5H), 8,20-8,00 (m, 5H), 7,81-7,75 (m, 2H), 7,66 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,60 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,53-7,27 (m, 9H), 6,96-6,92 (m, 1H), 6,67 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,32 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 5,57 5,47 (m, 14H), 5,13-4,99 (m, 2H), 4,81-4,68 (m, 11H), 4,59-4,52 (m, 5H), 4,36-4,29 (m, 3H), 4,16-4,08 (m, 1H), 3,99 3,98 (m, 1H), 3,84-3,53 (m, 30H), 3,45-3,38 (m, 12H), 3,13-3,03 (m, 4H), 2,90-2,66 (m, 5H), 2,36-2,32 (m, 1H), 2,26 2,20 (m, 3H), 2,15-2,12 (m, 4H), 2,00-1,99 (m, 2H), 1,88-1,72 (m, 6H), 1,64-1,40 (m, 14H), 1,33-1,24 (m, 17H), 1,14 1,09 (m, 3H), 1,00-0,97 (m, 7H), 0,89-0,81 (m, 8H) ppm.
Anal. HPLC:95 %, Tiempo de retención: 7,93 min (método B).
1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-W-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantren-1-N]formamido}carboml)-4b,8-dimetN-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}-4-(carbamoilamino)butil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25,30-pentakis(hidroximetil)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptaddo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-N]metM}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-ddooda[d][1,2,3]triazol-4-N)oxi]acetamido}pentM]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (LP2)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, enlazador-carga activa LP2 (20 mg, rendimiento del 21 %) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 870 (M/3 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 89,76 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,26-8,16 (m, 1H), 8,11-8,07 (m, 1H), 8,03-7,98 (m, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,68-7,66 (m, 1H), 7,62-7,60 (d,J =7,2 Hz, 1H), 7,55-7,52 (m, 1H), 7,48-7,44 (m, 4H), 7,39-7,30 (m, 4H), 6,96-6,93 (m, 1H), 6,68-6,77 (d,J =8,4 Hz, 1H), 6,47 (m, 1H), 6,34-6,32 (dd,J= 8,0 Hz, 1,6 Hz, 1H), 5,96 (s a, 1H), 5,59-5,56 (m, 5H), 5,52-5,45 (m, 7H), 5,38 (s, 2H), 5,13 (s a, 1H), 5,04-5,00 (d,J= 14,0 Hz, 1H), 4,81-4,69 (m, 10H), 4,60-4,51 (m, 5H), 4,36-4,11 (m, 5H), 3,98 (s a, 2H), 3,85-3,77 (m, 11H), 3,70-3,58 (m, 10H), 3,45-3,40 (m, 20H), 3,30-3,27 (m, 4H), 3,12-3,04 (m, 5H), 2,98-2,86 (m, 4H), 2,77-2,67 (m, 4H), 2,27-2,19 (m, 4H), 2,16-2,10 (m, 4H), 2,02-1,96 (m, 2H), 1,89-1,73 (m, 8H), 1,64 1,57 (m, 11H), 1,50-1,43 (m, 7H), 1,26-1,20 (m, 12H), 1,15-1,10 (m, 4H), 1,01-0,97 (m, 6H), 0,89-0,82 (m, 6H) ppm.Anal. HPLC:100 %, Tiempo de retención: 7,35 min (método B). Solubilidad: < 0,1 mg/ml de agua.
Ácido 2-[1-[4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.049]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-5-£[(1S)-1-[[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metNpropN]carbamoN}pentM]carbamoN}metoxi)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]tnazol-1-M]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido}etano-1-sulfónico (LP3)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, enlazador-carga activaLP3(60 mg, rendimiento del 52 %) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 642 (M/3 H)+. RMN de 1H (500 MHz, CDCh)59,68 (s, 0.6H), 9,25 (s, 0,4H), 8,22-8,07 (m, 3H), 8,02-7,86 (m, 2H), 7,77-7,72 (m, 2H), 7,68-7,60 (m, 2H), 7,54-7,52 (m, 1H), 7,50-7,42 (m, 4H), 7,39-7,27 (m, 4H), 7,22 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,97-6,94 (m, 2H), 6,74 (d,J= 10,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,43 (dd,J= 10,0 Hz, 2,0 Hz, 1H), 5,62 (s a, 1H), 5,04-5,00 (m, 1H), 4,93-4,90 (m, 0.4H), 4,76-4,72 (m, 0.6H), 4,52-4,26 (m, 4H), 4,16-4,08 (m, 1H), 3,81-3,75 (m, 4H), 3,61-3,55 (m, 4H), 3,46-3,44 (m, 24H), 3,30-3,27 (m, 5H), 3,08-3,06 (m, 5H), 2,97-2,89 (m, 2H), 2,80-2,74 (m, 4H), 2,54-2,52 (m, 2H), 2,40-2,31 (m, 2H), 2,27-2,22 (m, 4H), 2,16 2,13 (m, 4H), 2,02-1,71 (m, 8H), 1,69-1,45 (m, 10H), 1,40-1,21 (m, 14H), 1,17-1,08 (m, 4H), 1,01-0,98 (m, 6H), 0,89 0,82 (m, 6h ) ppm.
Ácido 2-[1-[4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-Azatricido[10.4.0.049]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-5-{[(1S)-1-{[(1S}-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}-4-(carbamoilamino)butil]carbamoil}-2-metNpropN]carbamoN}pentM]carbamoil}metoxi)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-ddooda[d][1,2,3]triazol-1-M]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amidoletano-1-sulfónico (LP4)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, el compuesto LP4 (6,0 mg, 20% de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 671 (M/3 H)+. RMN de 1H (500 MHz, CDCh) 5 9,37 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 8,24-8,22 (m, 1H), 8,18-8,17 (m, 2H), 8,09 (s, 2H), 8,01-7,99 (m, 1H), 7,97-7,94 (m, 2H), 7,89-7,84 (m, 1H), 7,76 (m, 5H), 7,68 (d,J= 7,5 Hz, 2H), 7,62 (d,J= 7,5 Hz, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,51-7,43 (m, 7H), 7,39-7,28 (m, 7H), 7,08 (m, 4H), 6,96-6,93 (t,J= 7,0 Hz, 2H), 6,68 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 6,48 (s, 2H), 6,35-6,33 (m, 2H), 5.97- 5,95 (m, 2H), 5,37 (s, 4H), 5,04-5,01 (m, 2H), 4,74-4,69 (m, 5H), 4,52 (m, 1H), 4,42 (t,J= 5,5 Hz, 2H), 4,34-4,27 (m, 4H), 4,18 (m, 1H), 4,13-4,11 (m, 1H), 3,82-3,77 (m, 5H), 3,58-3,55 (m, 6H), 3,49-3,44 (m, 14H), 3,10-3,05 (m, 4H), 2.98- 2,93 (m, 4H), 2,77-2,75 (m, 4H), 2,28-2,25 (m, 4H), 2,03-1,99 (m, 2H), 1,64-1,51 (m, 6H), 1,27-1,24 (m, 11H), 1,01-0,98 (m, 11H), 0,89-0,82 (m, 8H) ppm.
1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.049]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-W-[(1R)-1-1[(1S)-1-1[(1S)-1-1[(4bS,8S,8aR)-8-1[(1S,4a,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-N]carbamoN}etM]carbamoM}-2-metNpropN]carbamoM}-5-[2-({1-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-dihidroxi-6-(hidroximetM)-5-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetM)oxan-2-N]oxi}oxan-2-M]-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-il}oxi)acetamido]pentil]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (LP5)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, el compuestoLP5(15 mg, 27 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 947 (M/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 8 9,69 (s, 0.55H), 9,27 (s, 0.45H), 8,25-8,15 (m, 2H), 8,15-8,05 (m, 2H), 8,05-7,90 (m, 1H), 7,90-7,80 (m, 1H), 7,76 (t,J= 6,4 Hz, 1H), 7,66 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,60 (d,J= 6,8 Hz, 1H), 7,55-7,40 (m, 4H), 7,40-7,25 (m, 3H), 7,00-6,90 (m, 1H), 6,67 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,32 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 5,75-5,70 (m, 1H), 5,56 (d,J= 6,0 Hz, 1H), 5,50 5,40 (m, 2H), 5,20-4,92 (m, 4H), 4,80-4,70 (m, 1H), 4,70-4,65 (m, 2H), 4,65-4,55 (m, 2H), 4,40-4,25 (m, 2H), 4,20-3,95 (m, 2H), 3,80-3,75 (m, 2H), 3,75-3,45 (m, 23H), 3,30-3,20 (m, 3H), 3,20-2,90 (m, 5H), 2,90-2,65 (m, 3H), 2,60-2,55 (m, 1H), 2,40-1,95 (m, 12H), 1,90-1,70 (m, 5H), 1,70-1,35 (m, 14H), 1,35-1,20 (m, 15H), 1,15-1,05 (m, 3H), 1,00-0,90 (m, 7H), 0,90-0,80 (m, 7H) ppm.
Trifluoroacetato de (2-£H4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-5-{[(1S)-1-{[(1s) )-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metNpropN]carbamoN}pentM]carbamoN}metoxi)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-ddooda[d][1,2,3]triazoM-M]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido}etil)trimetilazanio (LP20)
Siguiendo el procedimiento general para enlazador-cargas activas LP1-5, el compuesto LP20 (7 mg, 24%de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 950,8 (M/2)+.
EJEMPLO 6
Enlazador-carga activa LP6
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP6en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados desde109a113y enlazador-carga activaLP6en la Figura 4.
1-(4-{2-Azatriddo[10.4.0.049]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-W-[(1S)-1-{[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-{[4-(hidroximetil)fenil]carbamoil}butil]carbamoil}-2-metilpropil]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (110)
A una solución de compuesto108(0,30 g, 0,54 mmol) en DMF (10 ml) se añadieron HATU (0,31 g, 0,81 mmol) y DIPEA (0,14 g, 1,1 mmol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. A la solución de reacción se le añadió luego VC-PAB-OH 109 (CAS: 159857-79-1, 0,21 g, 0,54 mmol) a temperatura ambiente, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que108o109se consumieron, según lo controlado mediante LCMS. Después, la mezcla de reacción se filtró a través de una membrana filtrante y el filtrado se concentró y se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua (con 10 mmol/l de bicarbonato de amonio)) para dar el compuesto110(0,30 g, rendimiento del 60 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 617 (M H)+.
4-nitrofenilcarbonato de {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-£2-Azatriddo[10.4.0.049]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-M}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metMbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (112)
A una solución de compuesto110(0,15 g, 0,16 mmol) en DMF (10 ml) se añadió carbonato de bis(4-nitrofenilo)111(0,15 g, 0,49 mmol) y DIPEA (63 mg, 0,49 mmol) sucesivamente a 0 °C. Luego la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que110se consumió, según lo controlado mediante LCMS. Después, la mezcla de reacción se filtró a través de una membrana filtrante y el filtrado se concentró y se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua (con 10 mmol/l de bicarbonato de amonio)) para dar el compuesto112(50 mg, rendimiento del 28 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1079 (M H)+.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10R)-6-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-azatriddo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metoxi)carbonil]amino}-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-ilo ]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (113)
A una mezcla de compuesto14a(0,10 g, 0,12 mmol) y compuesto112(0,15 g, 0,14 mmol) en DMF (5 ml) se añadieron HOBt (20 mg, 0,15 mmol) y DIPEA (48 mg, 0,37 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparativa (método B) para dar el compuesto 113 (0,16 g, rendimiento del 72 %) en forma de un sólido amarillo claro. ESI m/z: 874 (M/2 1)+.
N-[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-(2-ammoacetamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de {4-[(25)-2-[(25)-2-[1-(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (LP6)
A una solución de compuesto113(0,10 g, 0,057 mmol) en DMF (5 ml) se añadió piperidina (1 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante media hora hasta que Fmoc se eliminó totalmente según LCMS. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparatoria (método B) para dar el compuestoLP6(35 mg, rendimiento del 23 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 763 (M/2 1)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOde) 810,0 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 8,15-8,08 (m, 2H), 7,87 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 7,76 (t,J= 5,0 Hz, 1H), 7,70-7,65 (m, 1H), 7,61 (t,J= 8,5 Hz, 3H), 7,51-7,42 (m, 4H), 7,41-7,30 (m, 8H), 7,20-7,10 (m, 1H), 7,00-6,90 (m, 2H), 6,00-5,95 (m, 1H), 5,40 (s, 2H), 5,35 5,30 (m, 1H), 5,10-5,00 (m, 3H), 4,40-4,35 (m, 1H), 4,25-4,20 (m, 1H), 3,65-3,55 (m, 3H), 3,50-3,40 (m, 14H), 3,25 (s, 3H), 3,10-3,00 (m, 4H), 3,00-2,85 (m, 4H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,63-2,61 (m, 1H), 2,60-2,55 (m, 1H), 2,45-2,35 (m, 3H), 2,31-2,20 (m, 3H), 2,20-2,10 (m,4H), 2,10-1,92 (m, 5H), 1,90-1,82 (m, 4H), 1,68-1,53 (m, 6H), 1,50-1,40 (m, 2H), 1,20 1,10 (m, 2H), 1,02-0,96 (m, 6H), 0,90-0,80 (m, 8H) ppm.
EJEMPLO 7
Enlazador-carga activa LP7
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP7en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados14a, 107, 114y115y enlazador-carga activaLP7en la Figura 5.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{[(íerc-butoxi)carboml]ammo}-3-metilbutanamido]propanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo (114)
A una solución de compuesto.14a(66 mg, 0,082 mmol) en DMF (10 ml) se añadió Boc-Val-Ala-OH 101c (28 mg, 0,098 mmol), DIPEA (32 mg, 0,25 mmol) y HATU (47 mg, 0,12 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (50-90 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto114(74 mg, rendimiento del 84 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 978 (M - Boc 1)+.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-ammo-3-metilbutanamido]propanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carboml)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo, sal de ácido trifluoroacético (115)
A una solución del compuesto114(74 mg, 0,069 mmol) en DCM (3 ml) se le añadió TFA (1 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que Boc se eliminó totalmente según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío para dar el producto bruto 115 (66 mg, 97 % de rendimiento como sal de TFA) en forma de un aceite incoloro. ESI m/z: 978 (M 1)+.
1-(4-{2-Azatricido[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-il}-4-oxobutanamido)-W-[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-(2-ammoacetamido)-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metilpropil]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (LP7)
A una solución de compuesto115(60 mg, 61 jm ol) en DMF (5 ml) se añadió DIBAC-suc-PEG4-OSu 107 (48 mg, 74 |jmol) y DIPEA (24 mg, 0,18 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se monitorizó mediante LCMS. Después se añadió a la reacción piperidina (0,2 ml, exceso). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos hasta que se eliminó totalmente Fmoc según LCMS. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparatoria (método B) para darLP7(22 mg, rendimiento del 28 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1292 (M H)+. RMN 1H (500MHz, Dm So ¿6) (con regioisómeros) 89,66 (s, 0,5H), 9,51 (s, 0.5H), 8,43 (d,J= 7,5 Hz, 0.5H), 8,15-8,10 (m, 1.5H), 8,05 (d,J= 7,5 Hz, 0.5H), 7,90 (d,J= 7,5 Hz, 0.5H), 7,77 (t,J= 5,5 Hz, 1H), 7,70-7,65 (m, 1H), 7,65-7,60 (m, 1H), 7,55-7,25 (m, 11H), 6,97 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 5,02 (d,J= 14,5 Hz, 1H), 4,40-4,35 (m, 1H), 4,18 (t,J= 7,5 Hz, 0.5H), 4,04 (t,J= 7,5 Hz, 0.5H), 3,65-3,50 (m, 3H), 3,50-3,40 (m, 14H), 3,23 (s, 3H), 3,15-3,05 (m, 3H), 2,95-2,85 (m, 3H), 2,80-2,70 (m, 3H), 2,60-2,55 (m, 1H), 2,40-2,10 (m, 12H), 2,00-1,80 (m, 5H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,70-1,55 (m, 5H), 1,24 (s, 1H), 1,20-1,10 (m, 3H), 1,10-0,90 (m, 8H), 0,90-0,80 (m, 8H) ppm.
EJEMPLO 8
Enlazador-carga activa LP8
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP8en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numeradosP4, 117-120y enlazador-carga activaLP8en la Figura 6.
N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1 S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de 14-[(2S)-2-[(2S)-2-Amino-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (117)
A una solución de Fmoc-vc-PAB-PNP116(0,14 g, 0,18 mmol) y carga activaP4(0,11 g, 0,18 mmol) en DMF (2 ml) se añadieron HOBt (24 mg, 0,18 mmol) y DIPEA (70 mg, 0,54 mmol) a temperatura ambiente con una jeringa. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y el compuestoP4se consumió según LCMS. A la mezcla resultante se le añadió piperidina (42 mg, 0,50 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que se eliminó totalmente el Fmoc, según lo controlado mediante LCMS. Después de filtrar a través de una membrana, el filtrado se concentró y se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar un compuesto117(45 mg, rendimiento del 27%) como un sólido blanco. ESI m/z: 991 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde) 510,11 (s, 1H), 9,80 (s, 1H), 8,20-8,04 (m, 2H), 7,60 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,52-7,44 (m, 2H), 7,36-7,20 (m, 3H), 6,96 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 1,7 Hz, 1H), 6,36-6,29 (m, 1H), 5,98 (t,J= 5,6 Hz, 1H), 5,41 (s, 2H), 4,97 (s, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,52-4,42 (m, 1H), 3,75 (d,J= 6,0 Hz, 2H), 3,07-2,85 (m, 4H), 2,82-2,61 (m, 3H), 2,31-2,06 (m, 6H), 2,00-1,78 (m, 6H), 1,72-1,52 (m, 6H), 1,44-1,09 (m, 13H), 0,99 (d,J= 8,5 Hz, 6H), 0,87 (d,J= 8,1 Hz, 3H), 0,78 (d,J= 6,8 Hz, 3H) ppm.
(2R)-6-[2-(ciclooct-2-m-1-iloxi)acetamido]-2-{[(9R-fluoren-9-ilmetoxi)carboml]ammo}hexanoato de 2,5-Dioxopirrolidin-1-ilo (118)
Una mezcla del compuesto103(0,10 g, 0,19 mmol), EDCI (72 mg, 0,38 mmol) y HOSu (43 mg, 0,38 mmol) en DCM (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (70 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para dar el producto intermedio118(55 mg, rendimiento del 47 %) como un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación. ESI m/z: 630 (M 1)+.
N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1 S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-Amino-6-[2-(ciclooct-2-in-1 -iloxi)acetamido]hexanamido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (119)
A una solución de compuesto117(55 mg, 56 ^mol) y DIPEA (24 mg, 0,19 mmol) en DMF (1,5 ml) se añadió el intermedio bruto118(40 mg, 63 ^mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que118se consumió según Lc m S. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua) para darFmoc-119(60 mg, ESI m/z: 753 (M/2 1)+) como un sólido blanco, que se disolvió en DMF (1,5 ml). A la solución se le añadió dietilamina (24 mg, 0,33 mmol) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas hasta que el Fmoc se eliminó totalmente según LCMS. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso) para dar el compuesto119(35 mg, 50%de rendimiento del compuesto117) como un sólido blanco. ESI m/z: 1282 (M H)+.
W-({|(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metil)carbamato de {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-Ammo-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25 ,30-pentaquis(hidroximetM)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptaciclo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-N]metM}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-M)oxi]acetamido}hexanamido]-3-metMbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (120)
A una solución del compuesto119(70 mg, 54 |jmol) en DMF (3 ml) se añadió a-CD-N<3>105a(0,16 g, 0,16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 3 días, que se monitorizó mediante LCMS. A continuación, la mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto120(20 mg, rendimiento del 16 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1141 (M/2 1)+.
W-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboml]carbamoM}-4b,8-dimetil-4b,5,6,78,8a,9,10-octahidrofenantren-3-M]carbamoM}metM)carbamato de {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-[1-(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-dodecahidroxi-10,15,20,25,30-pentakis(hidroximetil)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxaheptaciclo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5-N]metM}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-il)oxi]acetamido}hexanamido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (LP8)
A una solución de compuesto120(10 mg, 4,4 jm ol) y el intermedio107(5 mg, 7,7 jm ol) en DMF (2 ml) se añadió DIPEA (16 mg, 0,12 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) dos veces para darLP8(1,5 mg, rendimiento del 12 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 939 (M/3 H)+. RMN 1H (500 MHz, DMSO-de) 59,87-9,66 (m, 1H), 8,22-8,08 (m, 4H), 7,91-7,76 (m, 2H), 7,71-7,61 (m, 4H), 7,56-7,45 (m, 4H), 7,40-7,28 (m, 5H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,1 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,34 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,03-5,96 (m, 1H), 5,67-5,31 (m, 12H), 5,06-4,95 (m, 3H), 4,87-4,66 (m, 7H), 4,63-4,50 (m, 3H), 4,38-4,29 (m, 3H), 4,22-4,13 (m, 1H), 4,06-3,93 (m, 1H), 3,86-3,40 (m, 54H), 3,30-3,19 (m, 4H), 3,17-2,85 (m, 4H), 2,81-2,62 (m, 2H), 2,60-2,54 (m, 3H), 2,41-1,95 (m, 11H), 1,92-1,71 (m, 5H), 1,68-1,40 (m, 13H), 1,33-1,09 (m, 22H), 1,02-0,93 (m, 10H), 0,89-0,78 (m, 9H) ppm.Anal. HPLC(como una mezcla de regioisómeros de triazol): 63 %, Tiempo de retención: 6,03 min; 36 %, Tiempo de retención: 6,13 min (método B).
EJEMPLO 9
Enlazador-carga activa LP9
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP9en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados12b, 15, 112, 121y122y enlazador-carga activaLP9en la Figura 7.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamidolcarbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo, sal del ácido trifluoroacético (15)
A una solución de compuesto.12b(0,63 g, 1,0 mmol) en DCM (50 ml) se añadieron Fmoc-OSu (0,40 g, 1,2 mmol) y DIPEA (0,26 g, 2,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (50-80 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para darBoc-15(0,71 g) como un sólido blanco, que se disolvió en DCM (10 ml). A la solución se le añadió TFA (3 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas hasta que Boc se eliminó por completo según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío para dar el compuesto15como sal de TFA (0,62 g, rendimiento del 74 %) y aceite incoloro. ESI m/z: 751 (M H)+.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-6-amino-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carboml]ammo}hexanamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carboml)-4b,8- dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de 9H-Fluoren-9-ilmetilo, sal del ácido trifluoroacético (122)
A la solución del compuesto.15(0,30 g, 0,40 mmol) en DMF (20 ml) se añadió Fmoc-Lys(Boc)-OH.121(0,23 g, 0,48 mmol), HATU (228 mg, 0,60 mmol) y DIPEA (0,16 g, 1,2 mmol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (50-90 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para darBoc-122(0,41 g) como un sólido blanco, de los cuales 0,24 g se disolvieron en DCM (20 ml). A la solución se le añadió TFA (3 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que Boc se eliminó totalmente según LCMS. Los volátiles se eliminaron al vacío para dar el compuesto122como sal de TFA (0,22 g, rendimiento del 79 %) y aceite incoloro. ESI m/z: 1101 (M H)+.
W-[(5S)-5-amrno-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}pentil]carbamato de {4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-£2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (LP9)
A una mezcla de compuesto122(14 mg, 12 ^mol) y compuesto112(15 mg, 14 ^mol) en DMF (5 ml) se añadieron HOBt (2 mg, 15 ^mol) y DIPEA (5 mg, 37 ^mol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, que se monitorizó mediante LCMS. A la mezcla de reacción se le añadió piperidina (0,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas hasta que Fmoc se eliminó totalmente según LCMS. Después la mezcla de reacción se filtró a través de una membrana y el filtrado se concentró y se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para darLP9(6 mg, rendimiento del 31 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 798 (M/2 H)+. RMN 1H (500 MHz, DMSOd6) 5 10,0 (s, 1H), 8,15-8,08 (m, 2H), 7,87 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 7,76 (t,J= 5,0 Hz, 1H), 7,67 (d,J= 7,0 Hz, 1H), 7,61 (d,J= 7,0 Hz, 1H), 7,60-7,56 (m, 2H), 7,51-7,42 (m, 4H), 7,41-7,24 (m, 6H), 7,20-7,16 (m, 1H), 6,95 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,50-6,46 (m, 1H), 6,36-6,32 (m, 1H), 6,00-5,96 (m, 1H), 5,40 (s, 2H), 5,02 (d,J= 9,0 Hz, 1H), 4,91 (s, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,40-4,35 (m, 1H), 4,25-4,20 (m, 1H), 3,65-3,55 (m, 3H), 3,50-3,40 (m, 14H), 3,24-3,20 (m, 2H), 3,10-3,05 (m, 2H), 3,00-2,92 (m, 3H), 2,92-2,85 (m, 1H), 2,80-2,70 (m, 2H), 2,65-2,55 (m, 2H), 2,45-2,35 (m, 2H), 2,31-2,20 (m, 4H), 2,20-2,10 (m,4H), 2,10-1,92 (m, 3H), 1,90-1,70 (m, 6H), 1,68 1,53 (m, 6H), 1,50-1,30 (m, 8H), 1,25-1,20 (m, 7H), 1,20-1,10 (m, 3H), 1,02-0,96 (m, 6H), 0,90-0,80 (m, 6H) ppm.
EJEMPLO 10
Enlazador-cargas activas LP10 y LP11
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-cargas activasLP10-LP11en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numeradosP7, P8, 116, 123a-b,enlazador-cargas activasLP10yLP11en la Figura 8.
Ácido (S)-4-((4bS,8S,8aft)-8-((1 S,4aS,10aft)-6-Amino-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-3-((4-((S)-2-((SÁcido )-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benciloxi)carbonilamino)-4-oxobutanoico (123a)
A una solución de carga activa P7 (64 mg, 0,10 mmol) en DMF (5 ml) se le añadieron el intermedio 116 (92 mg, 0,12 mmol) y DIPEA (26 mg, 0,20 mmol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se monitorizó mediante LCMS. Luego se añadió a la mezcla piperidina (0,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos hasta que se eliminó totalmente Fmoc según LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (40-70 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto123a(41 mg, rendimiento del 39 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1049 (M H)+.
Ácido (S)-5-((4bS,8S,8aft)-8-((1 S,4aS,10aft)-6-amino-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-4-((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benciloxi)carbonilamino)-5-oxopentanoico (123b)
Siguiendo un procedimiento similar para123aexcepto sustituirP8(0,53 g, 0,81 mmol) paraP7,proporciona el compuesto123b(0,61 g, rendimiento del 71 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1063 (M H)+.
Ácido (3S)-3-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1 -(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilammo)pentanamido]feml}metoxi)carboml]ammo}-3-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-ammo-1,4adimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}propanoico (LP10)
A una solución de compuesto 123 (21 mg, 20 ^mol) en DMF (2 ml) se añadió el intermedio 107 (16 mg, 24 ^mol) y DIPEA (5 mg, 40 ^mol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparatoria (método B) para dar el compuesto LP10 (12 mg, rendimiento del 38 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 792 (M/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 510,0 (s, 1H), 8,14 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,90 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 7,85-7,75 (m, 1H), 7,68 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,65-7,55 (m, 3H), 7,55-7,40 (m, 4H), 7,40-7,25 (m, 5H), 6,95 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 6,67 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,32 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,05-5,95 (m, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,05-4,90 (m, 3H), 4,80-4,60 (m, 1H), 4,40-4,35 (m, 2H), 4,25-4,20 (m, 1H), 3,65-3,55 (m, 3H), 3,50-3,40 (m, 25H), 3,20-2,85 (m, 4H), 2,80-2,55 (m, 3H), 2,40-2,30 (m, 3H), 2,30-2,20 (m, 3H), 2,20-2,05 (m, 4H), 2,0-1,50 (m, 12H), 1,50-1,30 (m, 3H), 1,30-1,20 (m, 6H), 1,20-1,05 (m, 2H), 1,05-0,90 (m, 5H), 0,90-0,80 (m, 6H) ppm.
Ácido (4S)-4-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1 -(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04’9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metoxi)carbonil]amino}-4-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4adimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}butanoico (LP11)
Siguiendo un procedimiento similar para LP10 excepto sustituir 123b (0,10 g, 94 ^mol) para 123a, proporciona el compuesto LP11 (50 mg, rendimiento del 33 %) como un sólido blanco.<e>S<i>m/z: 799 (<m>/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde) 5 10,0 (s, 1H), 9,91 (s, 1H), 8,14 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,90 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 7,85-7,75 (m, 1H), 7,68 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 7,65-7,55 (m, 3H), 7,55-7,40 (m, 4H), 7,40-7,25 (m, 6H), 6,95 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 6,67 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,32 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,05-5,95 (m, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,05-4,90 (m, 3H), 4,40-4,35 (m, 2H), 4,25-4,20 (m, 1H), 3,65-3,55 (m, 4H), 3,50-3,40 (m, 25H), 3,20-2,85 (m, 4H), 2,80-2,55 (m, 3H), 2,40-2,30 (m, 3H), 2,30-2,20 (m, 3H), 2,20-2,05 (m, 4H), 2,00-1,50 (m, 12H), 1,50-1,30 (m, 3H), 1,30-1,20 (m, 6H), 1,20-1,05 (m, 2H), 1,05-0,90 (m, 5H), 0,90-0,80 (m, 6H) ppm.
EJEMPLO 11
Carga activa P12 y P16; y enlazador-carga activa LP12 y LP16
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de la carga activa. P12 y P16 en la Tabla 1, anteriormente, y el enlazador-carga activa LP12 y LP16 en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados 12b, 107, 124, 125 y 126; y carga activa P12 y p 16; y enlazador-carga activa LP12 y LP16 en la Figura 9
((S)-2-((((9H-Fluoren-9-il)metoxi)carboml)ammo)-5-(ferc-butoxi)-5-oxopentanoil)-L-alamna (125)
A una solución de Fmoc-Glu(OtBu)-OH (6,0 g, 14 mmol) en DCM (300 ml) se le añadieron HOSu (3,2 g, 28 mmol) y EDCI (5,4 g, 28 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente y se controló por LCMS. La mezcla resultante se diluyó con DCM (200 ml) y se lavó con agua (100 ml x 2) y salmuera (100 ml). La solución orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar el compuesto bruto.124(8,5 g, ESI m/z: 545 (M 23)+), que se disolvió en DMF (10 ml). A la solución se le añadieron alanina (4,2 g, 48 mmol) y DIPEA (6,2 g, 48 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente y se controló por LCMS. La mezcla resultante se vertió en agua (100 ml) y se acidificó con ácido acético hasta pH 5-6. La mezcla se extrajo con acetato de etilo y la solución orgánica combinada se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-60 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto125(1 g, rendimiento del 15 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 497 (M H)+.
4-amino-5-((S)-1 -((4bS,8S,8aft)-8-((1 S,4aS,10aR)-6-(ferc-butoxicarbomlammo)-1,4a-dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanoato de (S)-ferc-butilo (126a)
A una solución de compuesto125(42 mg, 84 ^mol) y DIPEA (28 ^l, 0,16 mmol) en DMF (3,0 ml) se añadió HATU (36 mg, 95 ^mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de la adición del compuesto12b(50 mg, 80 ^mol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. A la mezcla de reacción se le añadió piperidina (1,0 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que Fmoc se eliminó totalmente según LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto126a(20 mg, rendimiento del 28 %) como un sólido amarillo. ESI m/z: 885 (M H)+.
(4S)-4-amino-4-{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a -dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}butanoato de ferc-Butilo (126b)
Siguiendo un procedimiento similar para126a,excepto sustituirP1para12b,el compuesto126b(37 mg, 47 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 393,4 (M/2 1)+.
Ácido (S)-4-Amino-5-((S)-1 -((4bS,8S,8aR)-8-((1 S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilamino)-1-oxopropan-2-ilamino)-5-oxopentanoico (P12)
Una mezcla de compuesto126a(57 mg, 64 ^mol) en TFA puro (2,0 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una hora y se controló mediante Lc Ms . La mezcla de reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en bicarbonato de sodio acuoso (10 mM)) para darP12(20 mg, rendimiento del 43 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 365 (M/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde) 59,90 (s, 1H), 8,30 (s a, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,33 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,96 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,67 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,33 (dd,J= 7,6 Hz y 2,0 Hz, 1H), 4,70 (s a, 1H), 4,41-4,36 (m, 1H), 3,42-3,30 (m, 6H), 2,91-2,85 (m, 1H), 2,78-2,75 (m, 2H), 2,67-2,61 (m, 1H), 2,32-2,27 (m, 4H), 2,16-2,13 (m, 4H), 1,88-1,77 (m, 4H), 1,65-1,58 (m, 4H), 1,29-1,23 (m, 12H), 1,14-1,11 (m, 2H), 1,01 (d,J =7,6 Hz, 6H) ppm.
Ácido (4S)-4-Ammo-4-{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxM,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}butanoico (P16)
Siguiendo un procedimiento similar paraP12,excepto sustituir126bpara126a,la carga activaP16(18 mg, 53 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 729,5 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 9,95-9,90 (d,J= 18,8 Hz, 1H), 8,30 (s a, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,37-7,33 (m, 1H), 6,96 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,81 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,8 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,0, 2,0 Hz, 1H), 4,39 (s a, 1H), 3,32-3,16 (m, 4H), 2,90 2,66 (m, 5H), 2,27-2,13 (m, 8H), 1,88-1,80 (m, 4H), 1,66-1,59 (m, 4H), 1,47 (s a, 1H), 1,31-1,23 (m, 11H), 1,17-1,10 (m, 2H), 1,00-0,98 (m, 6H) ppm.
Ácido (4S)-4-[1-(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04’9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,l2-tetraoxapentadecan-15-amido ]-4-{[(1S)-1-{[(4bS,8s,8aft)-8-({[(1S,4aS,10aft)-6-ammo-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}butanoico (LP12)
A una solución de compuestoP12(10 mg, 14 pmol) en DMF (2,0 ml) se añadió DIPEA (6 pl, 21 pmol) y el compuesto107(11 mg, 16 pmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparatoria (método B) para dar el compuestoLP12(3,5 mg, rendimiento del 20 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 632 (M/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 5 9,64 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 8,41-8,39 (m, 1H), 8,12-8,09 (m, 1H), 7,79 (s a, 1H), 7,67 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,61 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 7,60 (s a, 1H), 7,52-7,27 (m, 8H), 6,95 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,67 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,33 (dd,J= 8,4 Hz y 1,6 Hz, 1H), 5,02 (d,J= 14,0 Hz, 1H), 4,70-4,67 (s a, 1H), 4,36-4,30 (m, 1H), 4,21-4,14 (m, 1H), 3,61-3,58 (m, 3H), 3,46-3,45 (m, 15H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,90-2,55 (m, 5H), 2,42-2,09 (m, 12H), 1,98-1,73 (m, 7H), 1,65-1,54 (m, 3H), 1,29-1,25 (m, 12H), 1,17-1,11 (m, 2H), 0,99-0,97 (m, 6H) ppm.
Ácido (4S)-4-[1 -(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido ]-4-{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}butanoico (LP16)
Siguiendo un procedimiento similar paraLP12,excepto sustituirP16paraP12,enlazador-carga activaLP16(12 mg, rendimiento del 69 %) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 632,5 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 5 9,63 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,38 (d,J= 5,6 Hz, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,78 (s a, 1H), 7,67 (d,J= 7,6 Hz, 1H), 7,61 (d,J= 6,4 Hz, 1H), 7,56-7,27 (m, 8H), 6,95 (d,J= 8,0 Hz, 1H), 6,81 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,51-6,48 (m, 1H), 5,02 (d,J= 13,6 Hz, 1H), 4,36-4,30 (m, 1H), 4,20-4,15 (m, 1H), 3,61-3,54 (m, 3H), 3,46-3,43 (m, 14H), 3,10-3,06 (m, 2H), 2,89-2,66 (m, 5H), 2,44-2,11 (m, 12H), 2,02-1,73 (m, 7H), 1,65-1,56 (m, 3H), 1,31-1,22 (m, 12H), 1,17-1,09 (m, 2H), 1,00-0,98 (m, 6H) ppm.
EJEMPLO 12
Enlazador-carga activa LP13 y LP14
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis del enlazador-cargas activasLP13yLP14en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados102a, 127a/b, 128a/b, 107y enlazador-cargas activasLP13yLP14en la Figura 9A.
Ácido (4S)-4-Amino-4-{[(1S)-1 -{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-M]formamido}carboml)-4b,8-dimetM-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}butanoico (128a)
Una solución de compuesto127a(6,4 mg, 21 ^mol) y HATU (8,0 mg, 21 ^mol) en DMF (2,0 ml) se agitaron a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de la adición del compuesto102a(14 mg, 17,5 ^mol) y DIPEA (6,8 mg, 52,5 ^mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua) para dar protección.128a(12 mg) como un sólido blanco, que se disolvió en DCM (4 ml). A la solución agitada se le añadió TFA (0,5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto128a(7,1 mg, rendimiento del 49 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 827,5 (M 1)+.
Ácido (4R)-4-amino-4-{[(1S)-1 -{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}butanoico (128b)
Siguiendo un procedimiento similar para128a,excepto sustituir el compuesto127bpara127a,el compuesto128b(16 mg, 56 % de rendimiento) se obtuvo en forma de un sólido de color blanco. ESI m/z: 827,5 (M 1)+.
Ácido (4S)-4-[1 -(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2 -il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-4-{[(1S)-1 -{[(1S)-1 -{[(4bS,8S,8aR )-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil-2-metilpropil]carbamoil}butanoico (LP13)
A una mezcla del compuesto.128a(7,1 mg, 8,6 ^mol) en DMF (2,0 ml) se añadió el compuesto107(5,6 mg, 8,6 ^mol) y DIPEA (3,3 mg, 26 ^mol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar enlazador-carga activaLP13(5,5 mg, rendimiento del 47 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 681,6 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-^) 59,75 (dd,J= 12, 0,6 Hz, 1H), 8,31 (dd,J= 12, 3,5 Hz, 1H), 8,19 (dd,J= 7,5, 2,1 Hz, 1H), 8,16-8,08 (m, 2H), 7,82-7,70 (m, 2H), 7,68 (dd,J= 7,5, 1,1 Hz, 1H), 7,64-7,59 (m, 1H), 7,56-7,44 (m, 4H), 7,41-7,27 (m, 4H), 6,96 (dd,J= 8,8, 3,2 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,47 (d,J= 1,8 Hz, 1H), 6,33 (dd,J= 8,1,2,1 Hz, 1H), 5,02 (d,J= 14,0 Hz, 1H), 4,43 4,26 (m, 3H), 4,22-4,08 (m, 2H), 3,62-3,55 (m, 3H), 3,51-3,42 (m, 12H), 3,30-3,20 (m, 2H), 3,12-2,84 (m, 3H), 2,802,55 (m, 4H), 2,47-2,10 (m, 12H), 2,04-1,52 (m, 13H), 1,37-1,23 (m, 10H), 1,17-1,08 (m, 2H), 0,99 (d,J =7,7 Hz, 6H), 0,88-0,78 (m, 6H) ppm.
Ácido (4R)-4-[1 -(4-{2-Azatricido [10.4.0.04,9] hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2 -il}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-4-{[(1S)-1 -{[(lS)-1 -{[(4bS,8S,8aR )-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1 -il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}etil]carbamoil}-2-metilpropil]carbamoil}butanoico (LP14)
Siguiendo un procedimiento similar paraLP13,excepto sustituir128bpara128a,enlazador-carga activaLP14(10 mg, rendimiento del 76 %) se obtuvo como un sólido blanco. ESI m/z: 681,5 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 9,79 (a, 1H), 9,35 (s, 1H), 8,28-8,23 (m, 1H), 8,21 (d,J= 6,6 Hz, 1H), 8,17-8,13 (m, 1H), 8,12-8,03 (m, 2H), 8,02-7,95 (m, 1H), 7,76 (t,J= 5,8 Hz, 1H), 7,67 (dd,J= 7,3, 1,1 Hz, 1H), 7,64-7,60 (m, 1H), 7,51 (dd,J= 5,0, 1,9 Hz, 1H), 7,49 7,42 (m, 3H), 7,40-7,31 (m, 3H), 7,29 (dd,J =7,4, 1,5 Hz, 1H), 6,95 (dd,J= 8,2, 4,7 Hz, 1H), 6,68 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,48 (d,J= 2,1 Hz, 1H), 6,33 (dd,J= 7,9, 2,1 Hz, 1H), 5,02 (d,J =14,0 Hz, 1H), 4,40-4,30 (m, 2H), 4,20-4,12 (m, 1H), 3,62-3,49 (m, 4H), 3,45-3,33 (m, 12H), 3,33-3,28 (m, 2H), 3,12-3,05 (m, 2H), 2,92-2,85 (m, 1H), 2,81-2,73 (m, 2H), 2,69-2,63 (m, 1H), 2,61-2,54 (m, 1H), 2,43-2,20 (m, 7H), 2,20-1,95 (m, 6H), 1,91-1,70 (m, 6H), 1,68-1,50 (m, 5H), 1,34 1,22 (m, 10H), 1,18-1,08 (m, 2H), 1,03-0,96 (m, 6H), 0,90 (d,J= 6,8 Hz, 2H), 0,86-0,80 (m, 4H) ppm.
EJEMPLO 12A
Enlazador-carga activa LP15
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP15en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados129, 130, 131, 132, 133, Ser-P1,y enlazador-carga activaLP15en la Figura 9B. El Compuesto129se sintetizó según el documento<w>O 2015/095124 A1.
1 -N-(2-{2-[2-(2-Azidoetoxi)etoxi]etoxi}etil)-1 -N'-[(1S)-4-(carbamoilamino)-1 -{[4-(hidroximetilo) fenil]carbamoil]butil]ciclobutano-1,1 -dicarboxamida (130)
A una solución de compuesto.129(0,18 g, 0,44 mmol) en DMF seca (6 ml) se añadieron amino-PEG3-azida (0,10 g, 0,46 mmol) y EDCI (0,13 g, 0,65 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100% de acetonitrilo en agua) para dar el compuesto130(0,19 g, rendimiento del 70 %) como un sólido blanquecino. ESI m/z: 607,3 (M 1)+.
1-N-(2-{2-[2-(2-aminoetoxi)etoxi]etoxi}etil)-1-N'-[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-{[4-(hidroximetil)feml]carbamoil}butil]ciclobutano-1,1 -dicarboxamida (131)
A una solución de compuesto.130(0,18 g, 0,30 mmol) en metanol (10 ml) se añadió paladio al 10 % sobre carbono (20 mg) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se desgasificó y se purgó con hidrógeno 3 veces y luego se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de hidrógeno durante 20 horas. La mezcla resultante se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el compuesto bruto131(0,16 g, rendimiento del 92 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 581,4 (M 1)+.
(2S)-2-[(1-{[2-(2-{2-[2-(4-{2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)etoxi]etoxi}etoxi)etil]carbamoil}ciclobutil)formamido] -5-(carbamoilamino)-N-[4-(hidroximetil)fenil]pentanamida (133)
A una solución de compuesto bruto.131(0,16 g, 0,28 mmol) en DMF (4 ml) se añadió DIBAC-suc-OSu132(0,12 g, 0,30 mmol) y DIPEA (0,2 ml, 0,83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto133(50 mg, rendimiento del 21 %) como un sólido amarillo. ESI m/z: 434,8 (M/2 1)+.
N-[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a -dimetiM,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren-1-il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}-2-hidroxietil]carbamato de {4-[(2S)-2-[(1-{[2-(2-£2-[2-(4-{2-Azatricido[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-M}-4-oxobutanamido)etoxi]etoxi}etoxi)etM]carbamoN}ddobutN)formamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metilo (LP15)
A una solución de compuesto.133(50 mg, 58 jm ol) en DMF seca (3 ml) se añadieron carbonato de bis(4-nitrofenilo) (PNPC) (35 mg, 0,12 mmol) y DIPEA (45 |jl, 0,17 mmol) sucesivamente, y la mezcla de reacción se agitó. a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua). La solución se liofilizó para dar un sólido amarillo, 16 mg de los cuales (16 jm ol) se disolvieron en DMF (5 ml). A la solución se le añadióPx2(Ser-P1,que se informó en el documento WO 2018/213082 A1) (10 mg, 16 jm ol) y DIPEA (10 jl, 64 jmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar el enlazador-carga activaLP15(4,0 mg, 16 % de rendimiento dePx2) como un sólido naranja. ESI m/z: 755,5 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 55 10,0 (s, 1H), 9,84 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,89-7,84 (m, 2H), 7,78-7,75 (tm, 1H), 7,68-7,65 (m, 1H), 7,62-7,60 (m, 3H), 7,54 (s, 1H), 7,50-7,44 (m, 3H), 7,39-7,22 (m, 10H), 6,96 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,81 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,67 (s a, 1H), 6,63 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 2,0 Hz, 8,0 Hz, 1H), 6,04-6,02 (m, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,32 (t,J= 4,8 Hz, 2H), 5,04-4,95 (m, 3H), 4,44-4,37 (m, 1H), 4,20-4,15 (m, 1H), 3,71-3,62 (m, 2H), 3,53 3,48 (m, 12H), 3,34-3,25 (m, 2H), 2,47-2,37 (m, 3H), 2,16-2,13 (m, 4H), 2,03-1,95 (m, 8H), 1,79-1,71 (m, 4H), 1,66 1,54 (m, 6H), 1,49-1,42 (m, 4H), 1,27-1,26 (m, 8H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,87-0,83 (m, 6H) ppm.
EJEMPLO 12B
Carga activa P18; y Enlazador-Cargas activas LP17 y LP18
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de carga activa.P18en la Tabla 1, anterior y enlazador-cargas activasLP17yLP18en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados134, P1, P18, 112, 135,y el enlazador-cargas activasLP17yLP18en la Figura 9C. El Compuesto134se sintetizó según el documento WO 2015/155998 A1.
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-{2-[(2-aminoacetamido)metoxi]acetamido}-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil]-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxamida (P18)
A una solución de compuesto.134(42 mg, 0,11 mmol) en DMF (5 ml) se añadieron HATU (79 mg, 0,21 mmol) y DIPEA (54 mg, 0,44 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de añadir la carga activa.
P1(63 mg, 0,12 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para darFmoc-P18(47 mg, ESI m/z: 895,4 (M 1)+), que se disolvió en DMF (5 ml). A la solución se le añadió piperidina (13 mg, 0,15 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora hasta que se eliminó totalmente el Fmoc, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar el compuestoP18(34 mg, rendimiento del 47 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 673,5 (M 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOde) 59,54 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,85 (s a, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,59 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 7,45 (dd,J= 8,4, 1,5 Hz, 1H), 6,97 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,82 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,2 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,4, 2,2 Hz, 1H), 4,66 (d,J= 1,6 Hz, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,14 (s, 2H), 2,94-2,64 (m, 4H), 2,35-2,32 (m, 1H), 2,32-2,22 (m, 2H), 2,22-2,09 (m, 4H), 1,95-1,78 (m, 4H), 1,68-1,52 (m, 4H), 1,36-1,28 (m, 2H), 1,28 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,20-1,09 (m, 2H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H) ppm.
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1 -(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-N}-4-oxobutanamido)-3,6,9,l2-tetraoxapentadecan-l5-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metil7V-({[({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamoil}metoxi)metil]carbamoil}metil)carbamato (LP17)
A una solución del compuesto.P18(16 mg, 24 ^mol) en DMF (5 ml) se añadió el compuesto112(26 mg, 24 ^mol) y DIPEA (6,2 mg, 0,048 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante la noche, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar enlazador-carga activaLP17(20 mg, rendimiento del 53 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 807 (M/2 1)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 5 10,00 (s, 1H), 9,53 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,92-8,83 (m, 1H), 8,19-8,07 (m, 2H), 7,88 (d,J= 8,1 Hz, 1H), 7,77 (t,J= 5,6 Hz, 1H), 7,68 (d,J= 6,0 Hz, 1H), 7,64-7,56 (m, 4H), 7,53-7,25 (m, 9H), 6,96 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 6,81 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,50 (d,J= 7,9 Hz, 1H), 6,02-5,94 (m, 1H), 5,42 (s, 2H), 5,02 (d,J= 14 Hz, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,65 (d,J= 6,5 Hz, 2H), 4,43-4,32 (m, 1H), 4,26-4,19 (m, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,70-3,54 (m, 5H), 3,50-3,41 (m, 12H), 3,31 3,26 (m, 1H), 3,13-2,54 (m, 8H), 2,41-2,08 (m, 11H), 2,06-1,52 (m, 14H), 1,47-1,08 (m, 12H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,86 (d,J= 6,8 Hz, 3H), 0,82 (d,J= 6,8 Hz, 3H) ppm.
Ácido (2S)-2-{2-[2-(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-m-2-N}-4-oxobutanamido)acetamido]acetamido}-3-fenilpropanoico (135)
A una solución de péptido Gly-Gly-Phe (65 mg, 0,16 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió el compuesto132(56 mg, 0,16 mmol) y DIPEA (63 mg, 0,49 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar el compuesto135(58 mg, rendimiento del 64 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 567 (M 1)+.
(1 S,4aS,10aK)-A/-[(1 S,4aS,10aR)-6-[2-({2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il}-4-oxobutanamido)acetamido]acetamido}-3-fenilpropanamido]acetamido}metoxi)acetamido]-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonil]-6-hidroxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,l0a-octahidrofenantreno-1 -carboxamida (LP18)
A una solución de compuesto.135(8,5 mg, 15 ^mol) en DMF (5 ml) se añadieron HATU (11 mg, 30 ^mol) y DIPEA (7,7 mg, 60 ^mol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de añadir el compuestoP18(10 mg, 15 ^mol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla resultante se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar enlazador-carga activaLP18(8,4 mg, rendimiento del 46 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 635 (M - Mp<17>)+. RMN 1H (400 MHz, DMSOd6) 59,53 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,70 (d,J= 5,2 Hz, 1H), 8,36 (d,J= 5,0 Hz, 1H), 8,20-7,96 (m, 4H), 7,69-7,62 (m, 1H), 7,61-7,56 (m, 2H), 7,51-7,39 (m, 4H), 7,38-7,32 (m, 2H), 7,31-7,20 (m, 5H), 7,19-7,13 (m, 1H), 6,95 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 6,82 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 6,63 (d,J= 2,2 Hz, 1H), 6,50 (dd,J= 8,2 y 2,2 Hz, 1H), 4,99 (dd,J= 13,9 y 1,9 Hz, 1H), 4,64 (d,J= 6,6 Hz, 2H), 4,51-4,43 (m, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,80-3,66 (m, 3H), 3,62-3,56 (m, 3H), 3,08-2,99 (m, 1H), 2,91-2,59 (m, 7H), 2,34-2,23 (m, 3H), 2,20-2,10 (m, 4H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,95-1,72 (m, 5H), 1,67-1,51 (m, 4H), 1,27 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,25-1,22 (m, 2H), 1,17-1,08 (m, 2H), 0,99 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.
EJEMPLO 12C
Enlazador-carga activa LP19
Este ejemplo demuestra métodos para la síntesis de enlazador-carga activaLP19en la Tabla 2, anteriormente. Este ejemplo se refiere a los compuestos numerados136-138, 140, P15, 141-143, 106, 116y el enlazador-cargas activasLP19en la Figura 9D.
2-hidroxietil(metil)carbamato de tere-butilo (137)
A una mezcla del compuesto136(3,8 g, 50 mmol) en DCM (90 ml) se añadió gota a gota una solución de Boc2O (11 g, 52 mmol) en DCM (10 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se lavó con salmuera dos veces y la solución orgánica se concentró al vacío para dar el compuesto137(8,5 g, rendimiento del 97 %) como aceite incoloro. ESI m/z: 198 (M Na)+.
(2-oxoetil)carbamato de tere-butilmetilo (138)
A una solución del compuesto137(4,4 g, 25 mmol) en DCM seco (50 ml) se añadió en porciones peróxido de Dess-Martin (12 g, 25 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se inactivó con bicarbonato de sodio acuoso saturado y tiosulfato de sodio acuoso saturado. La mezcla inactivada se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. La solución orgánica se recogió y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró al vacío para dar138bruto, que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (12-18% de acetato en éter de petróleo, detectado por TLC usando PMA) para dar el compuesto138(2,6 g, rendimiento del 60 %) como un aceite de color amarillo claro. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5 9,48 (d,J= 8,4 Hz, 1H), 4,03 (a, 2H), 2,85 (s, 3H), 1,41 (s, 9H) ppm.
2-(2-(2-hidroxietoxi)etilamino)etil(metil)carbamato de tere-butilo (140)
Una mezcla del compuesto138(2,6 g, 15 mmol) y el compuesto139(1,7 g, 16 mmol) en metanol seco (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas antes de añadir en porciones borohidruro de sodio (1,1 g, 30 mmol) a la mezcla a 0 °C. La mezcla se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se inactivó con agua fría y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (0-100 % de metanol en DCM) para dar el compuesto140(2,4 g, rendimiento del 61 %) como aceite amarillo. ESI m/z: 263,1 (M H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)53,50-3,43 (m, 4H), 3,41-3,38 (m, 2H), 3,21 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,69-2,63 (m, 4H), 2,08 (s, 1H), 1,39 (s, 9H) ppm.
W-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(2-{[(ferc-butoxi)carboml](metil)ammo}etil)[2-(2-hidroxietoxi)etil]carbamoil]oxi}-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantren- 1 -il]formamido}carbonil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-il]carbamato de ferc-butilo (141)
A una solución de carga activaP15(0,44 g, 0,70 mmol) en DCM seco (15 ml) se añadieron trietilamina (0,21 g, 2,1 mmol) y una solución de cloroformiato de 4-nitrofenilo (0,15 g, 0,74 mmol) en DCM seco (5 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1,5 horas, que se monitorizó mediante LCMS. La mezcla se concentró al vacío para dar éster de PNP bruto (0,58 g), que se disolvió en DCM (15 ml). A la solución se añadieron HOBt (19 mg, 0,14 mmol) y una solución del compuesto140(0,32 g, 1,2 mmol) en DCM (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas hasta que se completó la reacción según LCMS. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en TFA acuoso (0,01 %)) para dar el compuesto141(0,50 g, rendimiento del 78 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 940,5 (M Na)+.
2-(2-hidroxietoxi)etil(2-(metilamino)etil)carbamato de (4bS,8S,8aR)-8-((1 S,4aS,10aR)-6-amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1 -carbonilcarbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilo (142)
A un compuesto en solución141(0,30 g, 0,33 mmol) en acetonitrilo (5 ml) se añadió una solución de HCl en dioxano (4 N, 3 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que Boc se eliminó totalmente según LCMS. Se eliminaron los volátiles y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (0-100 % de acetonitrilo en agua) para dar el compuesto142como sal HCl (0,19 g, rendimiento del 73 %), en forma de un sólido de color blanco, que no era estable, incluso en tampón básico (pH > 7). ESI m/z: 717,2 (M H)+.
(2-((((4-((5)-2-((5)-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencil)oxi)carbonil)(metil)amino)etil)(2-(2-hidroxietoxi)etil)carbamato de (4bS,8S,8aR)-8-(((1 S,4aS,10aR)-6-Amino-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahidrofenantreno-1-carbonil)carbamoil)-4b,8-dimetil-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilo (143)
A una mezcla de compuesto recién sintetizado142(35 mg, 49 |jmol) en DMF seca se añadió trietilamina (15 mg, 0,15 mmol), HOBt (7,0 mg, 49 jm ol) y una solución de Fmoc-vcPAB-PNP (116,35 mg, 45 jm ol) en DMF seca (5 ml) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A la mezcla de reacción se añadió piperidina (13 mg, 0,15 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas hasta que se eliminó totalmente el Fmoc según LCMS. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (5-95 % de acetonitrilo en bicarbonato de amonio acuoso (10 mM)) para dar el compuesto143(62 mg, rendimiento del 58 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 1145,6 (M Na)+.
W-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-azatricido[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-In-2-M}-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metMbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil}metoxi)carbonil](metil)amino}etil)-7V-[2-(2-hidroxietoxi)etil]carbamato de (4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-Ammo-1,4a-dimetN-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carbonil]carbamoil}-4b,8-dimetil-4b,5,6,7 ,8,8a,9,10-octahidrofenantren-3-ilo (LP19)
A una solución del compuesto143(30 mg, 27 jm ol) en DMF seca (5 ml) se añadió DIBAC-suc-PEG<4>-OSu (107, 21 mg, 30 jm ol) y DIPEA (10 mg, 78 jm ol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se purificó directamente mediante HPLC preparativa (método B) para dar el compuestoLP19(15 mg, rendimiento del 34 %) como un sólido blanco. ESI m/z: 829,0 (M/2 H)+. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de) 810,00 (s, 1H), 8,13-8,10 (m, 2H), 7,88-7,86 (m, 1H), 7,78-7,74 (m, 1H), 7,69-7,66 (m, 1H), 7,62-7,44 (m, 6H), 7,39-7,28 (m, 4H), 7,22-7,20 (m, 1H), 6,99-6,97 (m, 2H), 6,75-6,74 (m, 1H), 6,69-6,66 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 6,35-6,32 (m, 1H), 5,97-5,96 (m, 1H), 5,41 (s, 2H), 5,04-4,92 (m, 3H), 4,69 (s, 2H), 4,60-4,58 (m, 1H), 4,39-4,35 (m, 1H), 4,30-4,20 (m, 1H), 3,62-2,53 (m, 39H), 2,40-1,36 (m, 25H), 1,27-1,25 (m, 8H), 1,14-1,11 (m, 2H), 0,99-0,97 (m, 6H), 0,87-0,81 (m, 7H) ppm.
Ejemplos ANALÍTICOS
EJEMPLO 13
Las estructuras, valores de LogP calculados, resultados de MS y HPLC para los compuestos de carga activa anteriores se resumen en la Tabla 3.
Tabla 3 Pro iedades físico- uímicas de las car as activas
EJEMPLO 14
Las fórmulas moleculares, pesos moleculares, valores de LogP calculados, resultados de MS y HPLC para los compuestos de enlazador-carga activa anteriores se resumen en la Tabla 4.
Tabla 4 Pro iedades físico- uímicas de las car as activas
EJEMPLO 15
La actividad de ciertas cargas activas de agonistas de LXR descritas en el presente documento se evaluó en un ensayo de indicador de luciferasa sensible a LXR basado en células. Para generar la línea celular de ensayo, se transdujo un gen indicador de luciferasa regulado por LXR (kit Cignal Lenti LXR Reporter (luc) (Qiagen, n.° de catálogo CLS-001L)) en células THP1 y las células se seleccionaron durante dos semanas en puromicina. El lentivirus expresa el gen de la luciferasa de luciérnaga bajo el control de un promotor de CMV mínimo y repeticiones en tándem del elemento de respuesta transcripcional LXR. La línea celular resultante se denomina células THP1/LXR-Luc. Para el ensayo, se sembraron células THP1/LXR-Luc en placas de 96 pocillos a razón de 40.000 células/pocillo en medios que contenían RPMI suplementado con 10 % de FBS y penicilina/estreptomicina y luego se diferenciaron con acetato de miristato de forbol (PMA) 200 nM durante 3 días. Posteriormente, el medio se retiró y se reemplazó con 80 ul de medio nuevo sin PMA. Se prepararon diluciones en serie triples de cargas activas libres en DMSO al 100 %, se transfirieron a medio nuevo y se añadieron 20 |jl a las células a una concentración final constante de DMSO del 0,2 % y cargas activas libres a concentraciones finales que oscilaban entre 100 nM y 0,015 nM. El último pocillo de la placa sirvió como control en blanco que contenía solo el medio y DMSO al 0,2 % (pocillo sin tratar) y se representó como una continuación de la dilución en serie de 3 veces. Cuarenta y ocho horas después, la actividad luciferasa se determinó después de la adición de reactivo One-Glo™ (Promega, n.° de cat. E6130) a cada pocillo. Las unidades relativas de luz (URL) se midieron en un luminómetro Victor (PerkinElmer) y los valores de CE<50>se determinaron utilizando una ecuación logística de cuatro parámetros sobre una curva dosis-respuesta de 10 puntos (GraphPad Prism). El valor de CE<50>de cada molécula analizada se muestra en la Tabla 1. La señal a ruido (S/N) se determinó tomando la relación entre las ULR más altas en la curva de respuesta a la dosis y las ULR en los pocillos no tratados. Como se muestra en la tabla 5, todos los compuestos de carga activa probados aumentaron la actividad de la luciferasa dependiente de LXR en células THP1/LXR-Luc con valores de CE<50>que varían de 112 pM a 3,51 nM y valores de S/N que varían de 10,4 a 13,8.
Tabla 5: Actividad de LXR-Indicador por compuestos de carga activa en células THP-1/LXR-Luc
diferenciadas
EJEMPLO 16
La conjugación a través de las cisteínas de anticuerpos se realiza en dos etapas usando métodos similares a los descritos en Mol. Pharm. 2015, 12(6), 1863-71. En un procedimiento de ejemplo, un anticuerpo monoclonal (mAb) se reduce con ditiotreitol o TCEP. Después de la filtración en gel, se añade el enlazador-carga activa adecuado en solución de DMSO al anticuerpo reducido y la mezcla se ajusta al pH apropiado. Se deja agitar la reacción. El conjugado resultante se purifica mediante<s>E<c>. Los valores de DAR (UV) se determinan utilizando las absorbancias medidas del CAF y los coeficientes de extinción del enlazador-carga activa del anticuerpo.
Se puede realizar la conjugación de anticuerpos específica del sitio, por ejemplo, en dos etapas: (1)La unión enzimática basada en transglutaminasa microbiana, por ejemplo, (MTG EC 2.3.2.13, Zedira, Darmstadt, Alemania) de una azido-PEG-amina a un anticuerpo mutado específico de sitio y (2) la unión de un enlazador-carga activa adecuado al anticuerpo funcionalizado con azido-PEG-amina mediante una cicloadición [2 3], por ejemplo, cicloadición 1,3-dipolar entre la fracción azido del anticuerpo funcionalizado y la fracción de ciclooctina apropiada del enlazador-carga activa, por ejemplo, química de clic sin cobre. Véase, Baskin, J. M.; Prescher, J. A.; Laughlin, S. T.; Agard, N. J.; Chang, P. V.; Miller, I. A.; Lo, A.; Codelli, J. A.; Bertozzi, C. R. PNAS 2007, 104 (43), 16793-7. Por ejemplo, el anticuerpo humano aglicosilado IgG (IgG1, IgG4, etc.) o un isotipo de IgG1 humano en BupH™ (pH 6,5-8,0) se mezcla con >200 equivalentes molares de azido-dPEG<3>-amina (PM = 218,26 g/mol). La solución resultante se mezcla con transglutaminasa (25 U/ml; 5U de MTG por mg de anticuerpo, de Zedira, Darmstadt, Alemania, o Ajinomoto, Japón) dando como resultado una concentración final del anticuerpo de 0,5-5 mg/ml, y la solución se mantiene a un pH de 6,5-8,0 y luego se incuba a 37 °C durante 4-24 h mientras se agita suavemente. La reacción se monitorizó mediante ESI-MS. Al finalizar la reacción, el exceso de amina y MTG se elimina mediante SEC o columna de proteína A, eluyendo con tampón ácido y luego neutralizándose con tampón Tris (pH 8) para generar el anticuerpo funcionalizado con azido. Este producto se analiza mediante SDS-PAGE y ESI. La azido-dPEG<3>-amina se añade a dos sitios, Q295 y Q297, del anticuerpo, lo que da como resultado un aumento de 804 Da para el conjugado anticuerpo aglicosilado 4DAR-PEG.3-azida. Los sitios de conjugación se identifica y confirman en EEQEnlazadorYQEnlazadorSTYR para el anticuerpo funcionalizado con azido 4DAR mediante mapeo de secuencia peptídica de cadenas pesadas digeridas con tripsina.
En otro ejemplo, los conjugados de fármaco de anticuerpo aglicosilado específico de sitio con una IgG humana (IgG1, IgG4, etc.) que contienen una mutación N297Q (numeración de EU) se preparan mediante una reacción de clic [2 3] entre anticuerpos funcionalizados con azido con un enlazador-carga activa que contiene un alquino. Específicamente, un anticuerpo IgG1 humano aglicosilado funcionalizado con azido (mAb-PEG<3>-N<3>) se conjuga con un enlazador-carga activa apropiado mediante la incubación de mAb-PEG<3>-N<3>(1-3 mg/ml) en un medio acuoso (por ejemplo, PBS, PBS que contiene 5 % de glicerol, HBS) con >6 equivalentes molares de un enlazador-carga activa disuelto en un disolvente orgánico adecuado, tales como DMSO, DMF o DMA (es decir, la mezcla de reacción contiene 5-20 % de disolvente orgánico, v/v) a de 24 °C a 37 °C durante más de 6 horas. El progreso de la reacción se controla mediante ESI-MS y la ausencia de mAb-PEG<3>-N<3>indicó la finalización de la conjugación. La cantidad excesiva del enlazador-carga activa y el disolvente orgánico se eliminan mediante SEC mediante elución con PBS o mediante una columna de proteína A que eluye con tampón ácido seguido de neutralización con Tris (pH 8). Los conjugados purificados se analizan mediante SEC, SDS-PAGE y ESI-MS.
Los anticuerpos y los conjugados anticuerpo-fármaco se pueden caracterizar mediante SDS-PAGE, SEC y MS (ESI). En un método, condiciones de SDS-PAGE que incluyen muestras reducidas y no reducidas (2-4 |jg) junto con BenchMark Pre-Stained Protein Ladder (Invitrogen, n.° de cat.10748-010; L n.° 1671922.) se cargan por calle en (1,0 mm x<10>pocillos) Novex 4-20 % de Tris-Glycine Gel y se ejecuta a 180 V, 300 mA, durante 80 minutos. Se prepara una muestra analítica usando tampón Novex Tris-Glycine<s>D<s>(2X) (Invitrogen, N.° de cat. LC2676) y la muestra reductora se prepara con tampón de muestra SDS (2X) que contiene 2-mercaptoetanol al 10 %.
Ejemplo 16a
Ensayo de indicador de luciferasa LXR basado en células
Los agonistas de LXR descritos en el presente documento se evaluaron en un ensayo indicador de luciferasa sensible a LXR basado en células. Para generar la línea celular de ensayo, se transdujo un gen indicador de luciferasa regulado por LXR [kit Cignal Lenti LXR Reporter (luc) (Qiagen, n.° de catálogo CLS-001L)] en células THP1 y las células se seleccionaron durante dos semanas en puromicina. El lentivirus expresa el gen de la luciferasa de luciérnaga bajo el control de un promotor basal y repeticiones en tándem del elemento de respuesta transcripcional LXR. La línea celular resultante se denomina células THP1/LXR-Luc. Para el ensayo, se sembraron células THP1/LXR-Luc en placas de 96 pocillos a razón de 40.000 células/pocillo en medios que contenían RPMI suplementado con 10% de FBS y penicilina/estreptomicina y luego se diferenciaron con acetato de miristato de forbol (PMA) 200 nM durante 3 días. Posteriormente, el medio se retiró y se reemplazó con 80 j l de medio nuevo sin PMA. Se prepararon diluciones en serie triples de cargas activas libres en DMSO al 100 %, se transfirieron a medio de crecimiento nuevo y se añadieron 20 j l a las células a una concentración final constante de DMSO del 0,2 % y cargas activas libres a concentraciones finales que oscilaban entre 100 nM y 0,015 nM. El último pocillo de la placa sirvió como control en blanco que contenía solo el medio y DMSO al 0,2 % (pocillo sin tratar) y se representó como una continuación de la dilución en serie de 3 veces. Cuarenta y ocho horas después, la actividad luciferasa se determinó después de la adición de reactivo One-Glo™ (Promega, n.° de cat. E6130) a cada pocillo. Las unidades relativas de luz (URL) se midieron en un luminómetro Envision (PerkinElmer) y los valores de CE<50>se determinaron utilizando una ecuación logística de cuatro parámetros sobre una curva de dosis-respuesta de 10 puntos (GraphPad Prism). El valor de CE<50>de cada molécula analizada se muestra en la Tabla 5a. La señal a ruido (S/N) se determinó tomando la relación entre las ULR más altas en la curva de respuesta a la dosis y las ULR en los pocillos no tratados. Como se muestra en la Tabla 5a, los agonistas de LXR aumentaron la actividad de la luciferasa dependiente de LXR en células THP1/LXR-Luc, con valores de CE<50>que varían de 78,8 pM a 72,9 nM y valores de S/N que varían de 8,8 a 13,1.
Tabla 5a: Activi in i r LXR r ni LXR n l l THP-1 LXR-L c diferenciadas
EJEMPLO 17
Se derivaron varias enlazador-cargas activas (LP) a partir de los compuestos de carga activa de la Tabla 1 y se conjugaron con un anticuerpo anti-MSR1 (H1H21234N-N297Q) o un control de no unión utilizando las técnicas descritas en el ejemplo anterior. Los conjugados de fármaco-anticuerpo agonista de LXR anti-MSR1 resultantes (CAF) se analizaron para determinar su actividad en el ensayo indicador de THP1/LXRLuc como se ha descrito anteriormente para los compuestos de carga activa. Como se muestra en la tabla 6, todos los CAF de agonistas de LXR anti-MSR1 probados demostraron estimulación de las células THP1/LXR-Luc con valores de CE<50>que oscilan entre 414 pM y 2,11 nM y valores de S/N que oscilan entre 9,4 y 13,7. El anti-MSR1 no conjugado no tuvo impacto sobre la actividad de LXR-Luc y un anticuerpo de control de no unión conjugado con LP1 (Control CAF-LP1) tuvo valores de CE<50>de > 100 nM y valores máximos de S/N < 5,0.
El anticuerpo anti-MSR1 H1H21234N tiene la HCVR según la SEQ ID NO:2 y la LCVR según la SEQ ID NO:10. Comprende HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3 según las SEQ ID NOS: 4, 6, 8, 12, 14 y 16, respectivamente. Las secuencias polipeptídicas pueden estar codificadas por las secuencias polinucleotídicas SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 y 15. N297q indica que el resto 297 está mutado de asparagina (N) a glutamina (Q). Toda la numeración se realiza según el sistema de numeración EU.
T l : A ivi l n ni n i-M R1-LXR n l l THP-1 LXR-L if r n i
EJEMPLO 18
Caracterización de CAF mediante LC-ESI-MS
Se realizó la medición de la masa intacta de las muestras de CAF mediante LC-ESI-MS para determinar el perfil de distribución del fármaco-carga activa y calcular el DAR promedio. Cada muestra de prueba (20-50 ng, 5 |jl) se cargó en una columna Acquity UPLC Protein BEH C4 (10Kpsi, 300 A, 1,7 jm , 75 jm * 100 mm; n.° de cat. 186003810). Después de 3 minutos de desalinización, la proteína se eluyó y los espectros de masas se adquirieron mediante un espectrómetro de masas Waters Synapt G2-Si. Como se resume en la Tabla 7, la mayoría de los CAF específicos de sitio tienen 3,9 DAR para los conjugados específicos de sitio.
Tabla 7. Pro iedades del CAF
continuación
EJEMPLO 19
Activación de eflujo de colesterol en macrófagos THP1 diferenciados mediante conjugados fármacoanticuerpo agonista LXR
La capacidad de los CAF agonistas anti-MSRI-LXR para activar el eflujo de colesterol en una línea celular de macrófagos humanos (THP-1; número de catálogo ATTC TIB-202) se evaluaron utilizando un análogo de colesterol fluorescente. Para el ensayo, se sembraron células THP-1 en placas recubiertas de polilisina de 96 pocillos (Corning, n.° de catálogo 354640) a 100.000 células/pocillo en medio RPMI 1640 (Irvine Scientific, n.° de catálogo 9160) que contenía FBS al 10 % (Gibco, n.° de catálogo 1043010), 10 |jg/ml de penicilina-estreptomicina (Gibco, n.° de catálogo 15140122) en 5 % de CO<2>a 37 °C. Las células se diferenciaron en macrófagos mediante tratamiento con miristato 13-acetato de forbol-12 100 nM (Sigma, n.° de catálogo P8139), que se añadió al medio (descrito anteriormente), durante 96 horas. Luego se incubaron los macrófagos diferenciados en medio RPMI 1640 libre de rojo fenol (Gibco, n.° de catálogo 32404-014) que contenía colesterol-BODIPY 25 jM (Avanti Polar Lipids, n.° de catálogo 810255P), seroalbúmina bovina (BSA) al 0,2 %; Sigma n.° de catálogo A7211) y 10 jg/m l de penicilina-estreptomicina durante 24 horas, seguido de un tratamiento de 24 horas con diluciones en serie que van desde 1*10'7 M a 5*10'17 M de cargas activas libres(P1oP2),agonistas anti-MSR1 Ab-LXR ncCAF (H1H21234N-N297Q-29d1y H1H21234N-N297Q-LP1) o CAFnc de agonista de control de isotipo-LXR (control de isotipo-N297Q-LP1) en medio RPMI 1640 sin rojo fenol que contiene 0,2 % de BSA. Las células se lavaron con medio RPMI 1640 libre de rojo fenol y se incubaron con 100 j l de medio aceptor que contenía 50 jg/m l de lipoproteína de alta densidad (n.° de catálogo Millipore 437641), 10 jg/m l de apolipoproteína A1 (Millipore, n.° de catálogo ALP10) en medio RPMI 1640 sin rojo fenol durante 5 horas, tras lo cual, se recogió el medio aceptor y las células se lisaron en 100 j l de tampón RIPA (Millipore, n.° de catálogo 20-188) durante 2 horas con agitación suave a temperatura ambiente. La fluorescencia se midió en estas fracciones a una excitación de 482 nm, emisión de 515 nm en lector de placas SpectraMax i3 (Molecular Devices). El porcentaje de eflujo de colesterol BODIPY se calculó utilizando la siguiente fórmula: [fluorescencia en medios aceptores / (fluorescencia en medios aceptores fluorescencia en lisado celular)] * 100.
Como se muestra en la Tabla 8 y en la Figura 13, después de 24 horas, las cargas activas libres P1 y P2 demostraron una cantidad similar de valores de CE<50>de eflujo de colesterol de 20 pM y 14 pM, respectivamente. H1H21234N-N297Q-29d1CAFnc demostró un valor de CE<50>de 12 pM y CAFnc H1H21234N-N297Q-LP1mostró un valor de CE<50>de 98 pM. El CAFnc N297Q-LP1-control de isotipo demostró un eflujo mínimo de colesterol con un valor de CE<50>de 13 nM.
Tabla 8: Activación del eflujo de colesterol por agonistas de LXR y conjugados anticuerpo-fármaco a onistas de LXR

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula I
    o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o forma estereoisomérica de los mismos, en donde cada uno deQ1yQ2es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)<2>-, -SO<2>-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=; Wes -CH<2>-, -N(H)- o -O-; R1es -N(H)R4o -N(R5)<2>; R2es -N(H)R4; cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo o acilo sustituido; R5es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1>-<6>, alcoxi C<1>-<6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGni, en donde cadanes un número entero de cero a catorce y cadanies un número entero de uno a doce; cadaR3es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo; y cada fracción biodegradable es un poliéster alifático. 2. El compuesto de la reivindicación 1 de acuerdo con la Fórmula I
    o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno deQ1yQ2es independientemente -CH<2>-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)<2>-, -SO<2>-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=; Wes -CH<2>-, -N(H)- o -O-; R1es -N(H)R4o -N(R5)<2>; R2es -N(H)R4; cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo; R5es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1>-<6>, alcoxi C<1>-<6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGn<1>, en donde cadanes un número entero de cero a catorce y cadan1es un número entero de uno a doce; y cadaR3es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo. 3. El compuesto de la reivindicación 1 de acuerdo con la Fórmula I
    o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada uno deQ1yQ2es independientemente -CH2-, -C(O)-, -C(H)(OH)- o -C(OH)2-; W es -CH<2>-, -N(H)-o -O-; R1es -N(H)R4o -N(R5)<2>; R2es -N(H)R4; cadaR4es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo; R5es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH2OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; y cadaR6es independientemente halógeno, alquilo C<1>-<6>, alcoxi C<1>-<6>, -CN, O-glucosa, resto de O-aminoácido u O-PEGni, en donde cadanes un número entero de cero a catorce y cadanies un número entero de uno a doce, preferentemente el compuesto es un compuesto de acuerdo con la Fórmula II
    o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo. 4. El compuesto de cualquier reivindicación anterior en donde (i)Q1 es -CH<2>- yQ2 es -C(O)-; (ii)Q1 es -C(H)(OH)- yQ2 es -C(O)-; (iii)Q1 es -C(O)- yQ2 es -C(O)-; (iv)Q1 es -C(O)- yQ2 es -CH<2>-; (v)Q1 es -C(O)- yQ2 es -C(H)(OH)-; (vi)Wes -CH<2>-; (vii)Wes -O-; (viii)Wes -<n>H-; y/o (ix) el compuesto es conforme a la Fórmula III
    o una sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo. 5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde R1 es -N(H)R4 o -N(R5)2, preferentemente R1 es -NH2; y cada R4 es, independientemente en cada caso, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable o alquilo, más preferentemente R1 es -NH2 y cada R4 es, independientemente en cada caso, un resto de aminoácido; y el resto de aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. 6. El compuesto de la reivindicación 5, seleccionado entre el grupo que consiste en
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 7. El compuesto de la reivindicación 5, en donde cada R4 es, independientemente en cada caso, un resto peptídico, en donde el resto peptídico comprende un aminoácido seleccionado entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico y los restos de los mismos. 8. El compuesto de la reivindicación 7, en donde el compuesto es
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 9. El compuesto de la reivindicación 5, en donde el compuesto es
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde R1 y R2 son -N(H)R4, preferentemente en donde cada R4 es, independientemente en cada caso, un resto de aminoácido; en donde el aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, triptófano, tirosina, valina, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteina, glicina, prolina, arginina, histidina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico y los restos de los mismos. 11. El compuesto de la reivindicación 10, en donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en
    y
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 12. El compuesto de la reivindicación 5, en donde el compuesto es
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 13. El compuesto de la reivindicación 10, en donde el compuesto es
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 14. Un enlazador-carga activa que comprende el compuesto de cualquier reivindicación anterior unido a un enlazador. 15. El enlazador-carga activa de la reivindicación 14, que tiene una fórmula LPa, LPb, LPc o LPd
    a sal, solvato o forma estereoisomérica farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde L es un enlazador; cada uno de Q1 y Q2 es independientemente -CH2-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)2-, -SO2-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=; W es -CH<2>-, -N(H)-o -O-; R1 es -N(H)R4, -N(H)R4-, -N(H)-, -N(R5)<2>o -N(R5)<2>-; R2 es -N(H)R4, -N(H)R4- o -N(H)-; cada R4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo, acilo sustituido o -alquileno-; R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cada R6 es independientemente halógeno, alquilo C<1-6>, alquileno C<1-6>, alcoxi C<1-6>, -CN, O-glucosa, resto de O aminoácido u O-PEGni, en donde cada n es un número entero de cero a catorce y cada n i es un número entero de uno a doce; cada R3 es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo; y cada fracción biodegradable es un poliéster alifático. 16. El enlazador-carga activa de la reivindicación 15, en donde cada R4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo o -alquileno-. 17. El enlazador-carga activa de la reivindicación 15, que tiene la fórmula LPa', LPb', LPc' o LPd'
    en donde SP1 y SP2, cuando están presentes, son grupos espaciadores; cada AA es un resto de aminoácido; y p1 es un número entero de uno a diez. 18. El enlazador-carga activa de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde el enlazador L o espaciador SP2 está unido a un nitrógeno del arilo o a un resto de aminoácido solo o dentro de un péptido. 19. El enlazador-carga activa de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, seleccionado entre el grupo que consiste en
    5
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 20. Un conjugado de anticuerpo-fármaco que comprende el compuesto o enlazador-carga activa de cualquier reivindicación anterior unido a un anticuerpo o a un fragmento de unión a antígeno del mismo. 21. Un compuesto de Fórmula A, B, C o D
    o una sal o forma farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde L es un enlazador; BA es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo; k es un número entero de uno a treinta; cada uno de Q1 y Q2 es independientemente -CH2-, -C(O)-, -C(H)(OH)-, -C(OH)2-, -SO2-, -SO-, -PO(OR3)-, -PO(NR3NR4)-, -NR3- o -N=; W es -CH<2>-, -N(H)-o -O-; R1 es -N(H)R4, -N(H)R4-, -N(H)-, -N(R5)<2>o -N(R5)<2>-; R2 es -N(H)R4, -N(H)R4- o -N(H)-; cada R4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo, alquilo sustituido, acilo, acilo sustituido o -alquileno-; R5 es alquilo, arilo, arilalquilo, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, en donde cada heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido comprende uno, dos o tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno y oxígeno, y cuando está sustituido incluye al menos un -OH y -CH<2>OH, o al menos un nitrógeno primario o secundario; cada R6 es independientemente halógeno, alquilo C<1-6>, alquileno C<1-6>, alcoxi C<1-6>, -CN, O-glucosa, resto de O aminoácido u O-PEGni, en donde cada n es un número entero de cero a catorce y cada n i es un número entero de uno a doce; cada R3 es independientemente hidrógeno, alquilo o arilo; y cada fracción biodegradable es un poliéster alifático. 22. El compuesto de la reivindicación 21, en donde cada R4 es, independientemente en cada caso, hidrógeno, un resto de aminoácido, un resto de N-alquilaminoácido, un resto peptídico, una fracción biodegradable, alquilo o -alquileno-. 23. El compuesto de la reivindicación 21, que tiene la fórmula A', B', C' o D'
    o
    en dondeSP1 ySP2, cuando están presentes, son grupos espaciadores; cadaAAes un resto de aminoácido; yp1es un número entero de uno a diez. 24. El compuesto de la reivindicación 23, seleccionado entre el grupo que consiste en
    y
    o una sal farmacéuticamente aceptable, o una forma estereoisomérica de la misma, o un regioisómero de la misma, en donde cadaSP1,SP2 ySP3 es un grupo espaciador, dondeSP3 está unido a un AA de (AA)pi; cadaAAes un resto de aminoácido; p1es un número entero de uno a diez; EGes un agente potenciador de la solubilidad, preferentemente en donde el espaciadorSP1 es
    en donde RG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGcon un agente de unión;
    es un enlace, directo o indirecto, al agente de unión; y bes un número entero de uno a cuatro; (AA)pi es
    SP2 es un enlace o PABC; el espaciadorSP3 es
    en donde RG'es un resto de grupo reactivo después de la reacción de un grupo reactivoRGconEG;
    es un enlace conEG;y
    es un enlace con (AA)pi y/o el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en
    5
    5
    5 y
    26. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 21-25, en donde (i) BA es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo; (ii) k es un número entero de uno a cuatro; (iii) BA es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo que se une a (a) HER2, (b) PRLR o (c) MSR1; (iv) BA es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, y la conjugación se realiza a través de al menos un resto Q295, preferentemente la conjugación es a través de dos restos Q295; (v) BA es un anticuerpo N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo; (vi) BA es un anticuerpo N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo y la conjugación se realiza a través de al menos un resto Q295 y al menos un resto Q297; y/o (vii) BA es un anticuerpo N297Q o un fragmento de unión a antígeno del mismo y la conjugación se realiza a través de dos restos Q295 y dos restos Q297. 27. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto, enlazador-carga activa o conjugado anticuerpofármaco de cualquier reivindicación anterior y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 28. Un compuesto o composición farmacéutica según se define en cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso como medicamento; por ejemplo (i) para su uso en el tratamiento de la dislipidemia, una enfermedad metabólica, inflamación o una enfermedad neurodegenerativa; (ii) para su uso en el tratamiento de la dislipidemia; (iii) para su uso en el tratamiento de una enfermedad metabólica; (iv) para su uso en el tratamiento de la inflamación; o (v) para su uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa
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