ES2986894T3 - Un método para recoger muestras de aliento - Google Patents
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Abstract
El objeto de la invención es un aparato para la recogida de muestras de aliento que comprende una boquilla, un colector de saliva y una unidad receptora de muestra, caracterizado porque consta de una unidad suministradora del aire inhalado, que comprende una boquilla (1) conectada al colector de saliva (2) por la parte inferior y que presenta en su extremo un conducto (3), estando conectado el conducto de forma desmontable a la unidad receptora de muestra a través del conducto de entrada (4), y estando constituida la unidad receptora de muestra por un tubo de ensayo (6) para el condensado del aliento exhalado conectado de forma desmontable por la parte inferior al bloque de refrigeración (5) dotado de la cámara de refrigeración (5a) dotada de un sensor de temperatura (5c) y de un elemento activo del bloque de refrigeración (5b) conectado a la unidad de dispersión de calor (5d) a través de un sistema de tubos de calor, estando el bloque de refrigeración (5) alimentado por la unidad eléctrica (5f) y controlado a través de una unidad de control programable (5e) dotada de una pantalla LCD y de un teclado; Además, el bloque de refrigeración (5) está conectado de forma desmontable al conducto de salida (7) al que está conectada la unidad que fuerza el flujo unidireccional (8). El objeto de la invención es también un método de recogida de una muestra de aliento mediante el aparato para diagnosticar el estado de salud del paciente basándose en el análisis cuantitativo o cualitativo de la muestra recogida. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Un método para recoger muestras de aliento
Campo de la invención
El objeto de la invención es un método para recoger muestras de aliento.
Técnica anterior
En la técnica anterior se divulgan soluciones relativas a la recogida de excreción en forma de condensado de vapor de agua contenido en el aire exhalado por el paciente.
En la solicitud de patente internacional n.° WO 2019/018121 se divulga un dispositivo para la recogida y conservación de muestras en forma de condensados de aliento exhalado. El dispositivo, sin embargo, no presenta elementos que enfriaran las muestras de aliento recogidas.
En la descripción de la invención IT 102011901967915 A se divulga un dispositivo para la recogida de muestras de aire que incorpora un condensador donde se enfría la muestra. El dispositivo, sin embargo, es de uso costoso y presenta un método diferente para controlar la temperatura del bloque de enfriamiento.
En la descripción de la invención GB2548122 A se divulga un kit de piezas para un dispositivo de recogida de condensado de aliento exhalado, que comprende un módulo de boquilla que comprende un conducto de respiración definido en el módulo de boquilla que proporciona conducción de fluido desde un puerto de entrada de aliento de la boquilla para recibir el aliento exhalado hasta un puerto de salida de aliento de la boquilla en uso. El kit comprende además un recipiente de recogida para su inserción en el dispositivo para su enfriamiento en uso. El recipiente de recogida define una cámara sellada y resellable para recoger el condensado de aliento exhalado en uso. El recipiente de recogida tiene una entrada de aliento del recipiente para admitir el aire exhalado en la cámara. El kit de piezas está configurado de manera que el recipiente de recogida lección sea: insertable en el dispositivo en una configuración de recogida de muestras en la que la entrada de aliento del recipiente está abierta y en comunicación fluida con el puerto de salida de aliento de la boquilla del módulo de boquilla; y extraíble del dispositivo en una configuración de contención de muestra en la que la cámara del recipiente de recogida se vuelve a sellar. El dispositivo y método no divulgan un bloque de enfriamiento con un elemento activo y un sistema para regular y controlar el proceso de enfriamiento del contenedor de condensado.
En la descripción de la invención US2020/033323 A1 se divulga un analizador para recoger y analizar un condensado de aliento que comprende un alojamiento que tiene un medio de enfriamiento y, además, que retiene un dispositivo de cartucho que comprende una zona de condensación para condensar el aliento exhalado de un sujeto, y una o más regiones diferenciadas adicionales para la detección del analito y la medición del analito, comprendiendo además el dispositivo de cartucho una vía de fluido que conecta la zona de condensación con la región diferenciada o con cada una de las regiones diferenciadas. El dispositivo, sin embargo, no presenta ningún elemento para la recogida de muestras de aliento que comprenda una boquilla, un recolector de saliva y una unidad receptora de muestras con sistema de enfriamiento integrado, activo que garantiza los parámetros de calidad adecuados de la muestra de condensado de aire recogida.
En la descripción de la invención WO2021/089992 A1 se divulga un dispositivo de recogida de aliento exhalado adecuado para recoger y medir un biomarcador en el aliento exhalado. Más particularmente, el dispositivo que comprende una unidad de sensor configurada para medir un biomarcador en el aliento exhalado, un dispositivo de enfriamiento configurado para reducir una temperatura del aliento exhalado, y una unidad de control de temperatura, en donde la unidad de control de temperatura puede controlar el dispositivo de enfriamiento para alcanzar una temperatura objetivo superior a 0 °C e inferior o igual a 30 °C, en donde el biomarcador es peróxido de hidrógeno (H2O2).
Descripción detallada de la invención
Todas las soluciones conocidas relativas a la recogida de excreción utilizan el fenómeno de condensación del vapor de agua contenido en el aire exhalado. Para tal fin, se debe enfriar el aire por debajo del punto de rocío. El elemento principal que diferencia las soluciones individuales existentes es el método de enfriamiento y la forma de regular la temperatura en la cámara donde se acumula el condensado. Los dispositivos que condensan el vapor de agua contenido en el aire se pueden dividir en construcciones que presentan un sistema integrado o externo para descargar calor de la cámara de enfriamiento (sistemas activos) y aquellas en las que el bloque de enfriamiento está congelado de manera preliminar, tras lo cual el calor ya no se descarga de la cámara durante el proceso de condensación (enfriamiento pasivo).
La eficacia del proceso de recogida de condensado depende directamente de la capacidad del dispositivo para mantener estable la temperatura baja. Cuando el paciente exhala aire durante la prueba, la cámara de enfriamiento se calienta; por lo tanto, es necesario buscar soluciones que garanticen la posibilidad de mantener la baja temperatura de la muestra de condensado de aliento exhalado en un nivel estable.
En el transcurso de la investigación realizada, los inventores resolvieron el problema de obtener una muestra de condensado de aliento exhalado de calidad adecuada proporcionando un aparato que cumpliera este propósito. Así mismo, se ha demostrado que una muestra del condensado de aliento exhalado recogida con el aparato de acuerdo con la invención permite un análisis cualitativo y cuantitativo de las sustancias biológicas contenidas en la muestra, lo cual es útil para diagnosticar la etiología de las infecciones.
Un objeto de la divulgación es proporcionar un aparato para la recogida de muestras de aliento que comprende una boquilla, un recolector de saliva y una unidad receptora de muestras que consiste en una unidad que suministra el aire inhalado, que comprende la boquilla 1 conectada al recolector 2 de saliva en la parte inferior y que presenta un tubería 3 en su extremo, donde el tubería 3 está conectado de manera desmontable a la unidad receptora de muestras a través de un conducto 4 de entrada, en donde la unidad receptora de muestras consiste en un tubo 6 de prueba para el condensado de aliento exhalado conectado de manera desmontable en la parte inferior a un bloque 5 de enfriamiento, caracterizado por que el bloque 5 de enfriamiento está equipado con una cámara 5a de enfriamiento, un elemento activo del bloque 5b de enfriamiento, un sensor 5c de temperatura conectado a una unidad 5d de dispersión de calor a través de un sistema de tuberías de calor, y donde el elemento activo del bloque 5b de enfriamiento se controla a través de una unidad 5e de control programable que presenta una pantalla LCD y un teclado que permite configurar y monitorizar los parámetros de funcionamiento del aparato, y alimentado por una unidad 5f eléctrica, y en donde el bloque 5 de enfriamiento está conectado de manera desmontable a un conducto 7 de salida al que está conectada la unidad que fuerza el flujo 8 unidireccional, en donde el conducto 7 de salida y la unidad 8 están en una posición paralela con respecto al conducto 4 de entrada.
El aparato presenta un sistema de enfriamiento integrado, activo que garantiza los parámetros de calidad adecuados de la muestra de condensado de aire recogida.
Un elemento importante que diferencia la solución de los dispositivos conocidos es el método para controlar la temperatura del bloque5de enfriamiento. Habitualmente, se logra mediante el método de doble estado que consiste en definir el umbral fijo inferior (T1) y superior (T2) de temperatura en la cámara5ade enfriamiento. Cuando la cámara de enfriamiento alcanza la temperatura T1 preestablecida, la célula se apaga y permanece inactiva hasta que se alcanza la temperatura T2 umbral. Cuando ocurre, la célula se enciende y continúa funcionando hasta que se alcanza nuevamente la temperatura T1. En la práctica, sin embargo, la temperatura en la cámara continúa aumentando por encima de la temperatura T2 umbral a pesar del trabajo del sistema de enfriamiento debido a la inercia térmica del sistema. Esto puede provocar cambios sustanciales de temperatura que perjudican la eficacia del proceso de condensación de la excreción y la calidad del condensado.
El objeto de la invención se define por un método para recoger muestras de aliento, que implica exhalar aire de los pulmones y recoger las muestras, en donde el aire exhalado de los pulmones a través de la boquilla1se dirige a través de la tubería3a la unidad receptora de muestras, donde el aire suministrado a través del conducto4de entrada se enfría en el bloque5de enfriamiento hasta una temperatura inferior al punto de rocío, en cuyo efecto el vapor de agua contenido en el aire exhalado se condensa y se acumula en el tubo6.
El elemento activo del bloque5de enfriamiento usado en el método de acuerdo con la invención es la célula Peltier5b. En el método de acuerdo con la invención, la cámara5ade enfriamiento primero se enfría hasta la temperatura T1 preestablecida a -10 °C, con lo cual la energía suministrada a la celda Peltier5bse reduce para mantener la temperatura de la cámara5ade enfriamiento en el nivel preestablecido, después de lo cual el bloque5de enfriamiento está conectado a la unidad que suministra el aire inhalado y a la unidad receptora de muestras, después de lo cual el paciente exhala aire de los pulmones (durante aproximadamente 20 minutos) y una vez que el aire se suministra al bloque5de enfriamiento se enfría por debajo del punto de rocío, por lo que el vapor de agua contenido en el aire exhalado se condensa y la excreción destinada a pruebas posteriores en forma de condensado de aliento exhalado se acumula en las paredes del tubo6de prueba y donde la unidad que fuerza el flujo8unidireccional permite descargar los gases y mantener la presión normal dentro del tubo6de prueba. Cuando se recoge la muestra de condensado, la cámara5ade enfriamiento se calienta en contacto con el aire caliente exhalado de los pulmones del paciente; por eso la unidad5ede control programable controla la energía suministrada a la celda5fpara mantener la temperatura preestablecida en un nivel estable dentro de un intervalo de margen de fluctuación de temperatura estrecho, que permite mantener el equilibrio térmico en la cámara5ade enfriamiento.
Una vez que se haya recogido un volumen apropiado del condensado de aliento exhalado, el tubo6de prueba se desconecta y el condensado acumulado se utiliza en análisis o se somete a procesamiento posterior destinado a fijar la muestra, como la congelación o la liofilización.
Otro objeto que no forma parte de la invención es un método para diagnosticar una afección médica del paciente caracterizado por que la muestra de aliento recogida como se describe anteriormente se somete a un análisis cuantitativo o cualitativo.
Los inventores de la invención llevaron a cabo un análisis de los condensados de aliento exhalado recogidos utilizando el aparato de acuerdo con la invención entre pacientes pediátricos que padecían leucemia linfoblástica aguda (LLA), niños con diabetes tipo 1 y pacientes bariátricos. Se observaron diferencias estadísticamente significativas en los perfiles de aminoácidos medidos en el aire exhalado (antes y después del tratamiento).
Los resultados arrojaron que resultaron particularmente interesantes los análisis de los perfiles de aminoácidos de las muestras de condensados de aliento exhalado recogidas de pacientes tratados por el síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) diagnosticado. Se demostró que la etiología de la enfermedad se puede diferenciar basándose en un análisis de diferencias en los niveles de aminoácidos, especialmente en el caso de infecciones virales, incluidos los causados por el SARS-COV 2. Por tanto, la solución de acuerdo con la invención puede usarse potencialmente en el diagnóstico de enfermedades de origen viral, como el síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) o el COVID-19.
La preparación tecnológica de las soluciones de acuerdo con la invención en la escala TRL se ha evaluado en el nivel VII.
Descripción de las figuras
El objeto de la invención se muestra en las figuras de los dibujos, donde
[Fig. 1] presenta el diagrama esquemático de la estructura del aparato para recoger muestras del aire exhalado. Las flechas indican la dirección del flujo de aire;
[Fig. 2] presenta el bloque5de enfriamiento
[Fig. 3] presenta el diagrama del procedimiento de derivatización de aminoácidos
[Fig. 4] presenta una fotografía de un prototipo de bloque de enfriamiento de acuerdo con la invención
[Fig. 5] presenta una fotografía de la unidad que suministra el aire inhalado y la unidad receptora
[Fig. 6] presenta una fotografía de un prototipo de aparato para recoger muestras de condensados de aliento exhalado Lista de referencias numéricas:
1 - boquilla
2 - recolector de saliva
3 - tubería
4 - conducto de entrada
5 - bloque de enfriamiento
5a - cámara de enfriamiento
5b - Celda Peltier
5c - sensor de temperatura
5d - unidad de dispersión de calor
5e - unidad de control programable con una pantalla y teclado
5f - unidad de fuente de alimentación
6- tubo de prueba
7- conducto de descarga
8 - unidad que fuerza el flujo unidireccional
Parte experimental
La invención se resalta en las siguientes realizaciones, que no limitan su alcance.
Ejemplo 1
El aparato de acuerdo con la invención que se utilizó incorporaba la célula Peltier5bcomo elemento activo del bloque5de enfriamiento.
La cámara5ade enfriamiento se enfrió hasta la temperatura T1 preestablecida en -10 °C, con lo cual el suministro de energía a la celda Peltier5bse redujo para mantener la temperatura del bloque5de enfriamiento en el nivel preestablecido, después de lo cual el bloque5de enfriamiento estaba conectado a la unidad que suministra el aire inhalado y a la unidad receptora de muestras. El paciente estuvo exhalando aire de los pulmones a la boquilla durante 20 minutos, el aire, cuando se suministraba al bloque5de enfriamiento, se enfrió a -7 °C, en cuyo efecto condensó el vapor de agua contenido en el aire exhalado y la excreción en forma de condensado de aliento exhalado destinado a pruebas posteriores comenzó a acumularse en las paredes del tubo6de prueba, mientras los gases exhalados se retiraron del tubo6de prueba por la unidad que fuerza el flujo8unidireccional. La unidad5ede control había sido configurada para mantener la temperatura preestablecida en un nivel estable, con pequeñas fluctuaciones de temperatura que se mantienen dentro del intervalo de ±3 °C, lo que permitió mantener el equilibrio térmico en el bloque5de enfriamiento.
Ejemplo 2
Condensados de aliento exhalado (CAE)
Las muestras de CAE son un valioso material de diagnóstico recogido de pacientes de una manera totalmente no invasiva y segura. Las muestras de aire exhalado se recogen cuando el paciente respira de forma regular y tranquila y su recogida no le resulta incómoda ni tediosa [1].
Las muestras de CAE analizadas se recogieron de voluntarios sanos que participaron en el proyecto de investigación realizado en cooperación con la Clínica de Inmunología del MUG, en la aprobación n.° 274/2018 de la Comisión de Bioética. Todos los participantes que tomaron parte en la investigación dieron su consentimiento por escrito y se les pidió que completaran un breve cuestionario.
Las muestras de CAE se recogieron el mismo día, de forma ambulatoria, en la Clínica de Cirugía General, Endocrina y de Trasplantes del Centro de Medicina Invasiva (CMI) del MUG. La recogida de las muestras se realizó bajo la supervisión de médicos. Las muestras de aliento se recogieron por personal médico calificado durante una cita con un médico. El mismo día, el material recogido se transportó a la Cátedra y al Departamento de Química Farmacéutica del MUG y se conservó sumamente congelado a una temperatura de -80 °C hasta el momento en que se realizó un análisis de CL-EM/EM.
Las muestras de CAE se recogieron con el aparato de acuerdo con la invención (como en el Ejemplo 1) y el dispositivo disponible comercialmente llamado Medivac Turbo DECCS, siguiendo el manual de usuario del fabricante.
Las muestras de CAE se sometieron al análisis cuantitativo de los aminoácidos presentes en el condensado.
El procedimiento de derivatización de aminoácidos
Los aminoácidos son compuestos de moléculas pequeñas difíciles de analizar en un sistema de fase inversa (RP). Debido a su naturaleza hidrófila, las moléculas no se disocian en tales condiciones. Para mejorar la detección, los aminoácidos se sometieron al procedimiento de derivatización que aumentó la masa de los iones monitorizados. En efecto, su identificación por el detector de masas mejoró, lo que se tradujo en una mayor sensibilidad del método y una señal de analito mejorada a expensas de las señales reducidas generadas por el ruido. Esto resultó en el logro de un valor LOD bajo en el nivel de fmol) [2]. Asimismo, las propiedades de los aminoácidos cambiaron de hidrófilas a lipófilas, lo que permitió utilizar la columna C18 y permitió una perfecta separación de los analitos ensayados en el sistema de fase inversa. La derivatización se llevó a cabo en el modo precolumna, utilizando cloroformiato de propilo como agente derivatizante. Debido al corto tiempo de derivatización y las condiciones suaves (1 min, temperatura ambiente), el agente destaca entre otros reactivos usados anteriormente mencionados en la bibliografía.
Para tal fin, las muestras se transfirieron a tubos de prueba de vidrio de 1,2 ml utilizando una pipeta automática para someterlas al proceso de derivatización.
Se preparó una solución de NaOH y 3-picolina en n-propanol en la proporción volumétrica de 3:2 (v/v), 200 gl por tubo de prueba. Los extremos de la pipeta rellenos con un lecho se conectaron a una jeringa que se usó para colocar la solución dentro del tubo de prueba sobre el sorbente donde se adsorbieron los analitos. Una vez finalizada esta fase, el lecho se lavó con 200 gl de n-propanol. La solución preparada anteriormente se utilizó para lavar el lecho desde el extremo de la pipeta hasta el tubo de prueba de vidrio. Se añadieron 50 gl del agente derivatizante (cloroformiato de propilo en cloroformo), después de lo cual se llevó a cabo la mezcla con un agitador durante aproximadamente 8 segundos hasta que se obtuvo una emulsión blanca. La mezcla se repitió después de un minuto. Luego se agregaron 100 gl de isooctano y el mezclado se realizó nuevamente. La capa orgánica superior (aproximadamente 150 gl) se recogió con una pipeta y se sometió a evaporación al vacío a una temperatura de 30 °C durante 15 min. Los restos secos se disolvieron en 100 gl de una mezcla de fases móviles (fase A: 10 mM de formiato de amonio: fase B: 10 mM de formiato de amonio en metanol (33:67, v/v) y se sometieron al análisis de CL-EM/EM. En la Fig. 3 se muestra un diagrama del procedimiento de derivatización de aminoácidos.
La ventaja del agente derivatizante de aminoácidos en forma de cloroformiato de propilo utilizado en la invención se debe a su fácil disponibilidad en el mercado y su bajo precio. Así mismo, el procedimiento de derivatización de aminoácidos es rápido y es posible derivatizar aminoácidos directamente en una solución acuosa. Entonces, los compuestos derivatizados se extraen usando un disolvente orgánico.
Las condiciones para analizar aminoácidos en el condensado de aliento exhalado (CAE) utilizando la técnica de CL-EM/EM.
Los aminoácidos derivatizados se sometieron a ensayo utilizando la técnica de cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masas en tándem (CL-EM/EM). El espectrómetro de masas estaba equipado con una fuente de iones del tipo electropulverización (ESI,electrospray ionization)y un analizador del tipo triple cuadrupolo (EM/EM). Los aminoácidos se separaron en la columna C18 (Phenomenex EZ: faast AAA-MS) de tamaño 25 x 2,0 mm; 4 gm en el sistema de fase inversa (RP). Se utilizó elución en gradiente (Tabla 2). La fase móvil A estaba constituida por agua a la que se le añadió formiato de amonio 10 mM y ácido fórmico al 0,1 %. La fase B consistía en metanol al que se le añadió formiato de amonio 10 mM y ácido fórmico al 0,1 %.
Condiciones de elución en gradiente
Las condiciones optimizadas de separación analítica de aminoácidos mediante la técnica CL-EM/EM fueron las siguientes:
- volumen de inyección: 1 gl
- tiempo total de un solo análisis: 18 min
- flujo de la fase móvil: 0,3 ml/min
- temperatura de la columna: 35 °C
- temperatura del muestreador automático: 4 °C
- modo EM: positivo
- temperatura de la fuente de iones ESI: 300 °C
- temperatura del bloque de calentamiento: 400 °C
- caudal del gas de calentamiento (nitrógeno): 10 l/min
- flujo del gas de secado (nitrógeno): 10 l/min
- flujo del gas nebulizador: 3 l/min
- temperatura de la línea de desolvatación (DL): 250 °C
- tensión capilar: 5 kV
Los resultados de la concentración de aminoácidos medida se dan en la Tabla 1.
La Tabla 1 presenta los resultados de las mediciones del nivel de aminoácidos [ng/ml] analizados mediante un método patentado que emplea la técnica de CL-EM/EM. Los significados de las siglas: Turbo DECCS significa un aparato para la recogida del condensado de aliento exhalado, fabricado por una empresa italiana y disponible en el mercado en condiciones comerciales; aparato PG significa el aparato de acuerdo con la invención; NO indica una concentración no detectable (valor por debajo del umbral de detección del método analítico desarrollado).
Tabla 1
Ejemplo 3
Condensados de aliento exhalado (CAE) - investigación comparativa
Se recogieron y prepararon muestras de CAE como se describe en el Ejemplo 2. Las muestras recogidas con el dispositivo de acuerdo con la invención (aparato PG) y un aparato Turbo DESC disponible comercialmente se analizaron para determinar la concentración del aminoácido seleccionado.
Los resultados de la concentración de aminoácidos medida se presentan en la Tabla 2.
Tabla 2
Conclusiones: las muestras recogidas con el aparato de acuerdo con la invención (aparato PG) dieron resultados más precisos de las concentraciones de aminoácidos, lo que demuestra que la recogida de muestras con un aparato PG en condiciones de temperatura estables es importante para la calidad del análisis y el diagnóstico posterior de la afección del paciente.
Lista de citas
Bibliografía de no patente
[1] I. Horváth, J. Hunt, P.J. Barnes, Exhaled breath condensate: methodological recommendations and unresolved questions, Eur. Resp. J., 26 (2005) 523-548.
[2] Y. Sakaguchi, T. Kinumi, T. Yamazaki, A. Takatsu, A novel amino acid analysis method using derivatization of multiple functional groups followed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry, Analyst 140 (2015) 1965 1973.
Claims (2)
1. Un método para recoger muestras de aliento, que implica exhalar aire de los pulmones y recoger las muestras usando un aparato que comprende una boquilla, un recolector de saliva y una unidad receptora de muestras que consiste en una unidad que suministra el aire inhalado, que comprende la boquilla (1) conectada al recolector (2) de saliva en la parte inferior y que presenta un tubería (3) en su extremo, donde el tubería (3) está conectado de manera desmontable a la unidad receptora de muestras a través de un conducto (4) de entrada, en donde la unidad receptora de muestras consiste en un tubo (6) de prueba para el condensado de aliento exhalado conectado de manera desmontable en la parte inferior a un bloque (5) de enfriamiento equipado con una cámara (5a) de enfriamiento que presenta un sensor (5c) de temperatura y un elemento activo del bloque (5b) de enfriamiento conectado a una unidad (5d) de dispersión de calor a través de un sistema de tuberías de calor, en donde el bloque (5) de enfriamiento está alimentado por una unidad (5f) eléctrica y controlado mediante una unidad (5e) de control programable que presenta una pantalla LCD y un teclado, en donde el bloque (5) de enfriamiento está conectado de manera desmontable a un conducto (7) de salida al que está conectada la unidad que fuerza el flujo (8) unidireccional,caracterizado por queantes de recoger la muestra, el bloque (5) de enfriamiento se enfría hasta la temperatura T1 preestablecida a -10 °C, después de lo cual el bloque (5) de enfriamiento se conecta a través de la tubería (3) a la unidad que suministra el aire inhalado y a través del conducto (7) de salida a la unidad que fuerza el flujo (8) unidireccional, después de lo cual el aire exhalado de los pulmones a través de la boquilla (1) se dirige a través de la tubería (3) a la unidad receptora de muestras en la que el aire suministrado a través del conducto de entrada (4) se enfría en el bloque (5) de enfriamiento hasta una temperatura por debajo del punto de rocío, en cuyo efecto el vapor de agua contenido en el aire exhalado se condensa y se acumula en el tubo (6) de prueba, mientras que la unidad que fuerza el flujo (8) unidireccional se utiliza para descargar los gases, y una vez que se recoge una cantidad adecuada de condensado de aliento exhalado, el tubo (6) de prueba se desconecta, en donde la muestra de aliento procedente del tubo (6) de prueba en forma de condensado de vapor de agua se utiliza en análisis o se somete a un procesamiento posterior destinado a fijar la muestra, como congelación o liofilización y se somete a análisis cuantitativo y/o cualitativo que incluye análisis del perfil de aminoácidos.
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la celda Peltier se usa como elemento activo del bloque (5b) de enfriamiento, ajustándose la energía suministrada de la celda Peltier (5b) de modo que se eleva para enfriar el bloque (5) de enfriamiento y se reduce para mantener la temperatura del bloque (5) de enfriamiento en el nivel preestablecido, en donde la energía suministrada de la celda Peltier (5b) se controla con la unidad (5e) de control.
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