ES2987347T3 - Estabilización de composiciones farmacéuticas que comprenden polisorbato - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas estabilizadas que comprenden un sistema tampón basado en histidina mejorado que reduce la degradación de polisorbatos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Estabilización de composiciones farmacéuticas que comprenden polisorbato

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas estabilizadas que comprenden un sistema tampón mejorado a base de histidina que reduce la degradación de los polisorbatos.

Antecedentes de la invención

Las composiciones farmacéuticas, en particular, las composiciones farmacéuticas, normalmente comprenden un principio activo, un tensioactivo y un sistema tampón, a menudo complementado con agentes quelantes, estabilizantes, modificadores de la tonicidad y antioxidantes. Se utilizan preferentemente excipientes con perfiles de seguridad bien establecidos debido a los menores riesgos y costes asociados con su aprobación por parte de las autoridades sanitarias.

Los tensioactivos más comunes utilizados en la industria farmacéutica son los polisorbatos y están presentes en aproximadamente el 80 % de las composiciones farmacéuticas comerciales, en particular, las composiciones de anticuerpos monoclonales (mAb). Se conocen numerosos polisorbatos diferentes y se añaden de forma rutinaria a las formulaciones de estos fármacos para mantener una estabilidad física y química adecuada durante el almacenamiento, incluso a temperatura ambiente. Los polisorbatos son tensioactivos anfifílicos, tensioactivos no iónicos. Entre los polisorbatos conocidos, el polisorbato 20 (PS20) y el polisorbato 80 (PS80) son los más usados.

Los polisorbatos poseen un "grupo principal" de sorbitán hidrófilo donde cada uno de los cuatro grupos hidroxilo está unido a una cadena de polímero de polioxietileno (POE). Uno o más grupos hidroxilo al final de la cadena del polímero POE están esterificados con ácidos grasos, estos últimos representan la fracción hidrófoba de la molécula. Puede haber muchas variaciones en esta estructura subyacente derivadas del tipo (sorbitán e isosorbida) y la estereoquímica del grupo principal, longitud de las cadenas de POE, número de ésteres de ácidos grasos (1 a 4) y composición de ácidos grasos (grado de insaturación del ácido graso, longitud del ácido graso).

Sin embargo, la degradación del tensioactivo polisorbato ha sido un tema de preocupación en la industria farmacéutica durante la última década. La degradación del polisorbato puede conducir a una menor protección tensioactiva del principio activo contra el estrés interfacial. Las reacciones de degradación no deseadas también pueden dar lugar a una amplia gama de productos de degradación, incluidos los ácidos grasos libres, que forman partículas (sub)visibles y pueden precipitar. Estos productos de degradación del polisorbato también tienen un impacto no deseado en la estabilidad del fármaco, en particular, fármacos proteicos tales como anticuerpos, reduciendo de este modo la vida útil de la formulación del fármaco. La agregación de proteínas y la posterior formación de partículas es una de las manifestaciones más comunes de la inestabilidad de las proteínas. Por lo tanto, es fundamental mantener los polisorbatos intactos en los medicamentos.

En términos de sus vías de degradación, los polisorbatos son propensos a la hidrólisis y/u oxidación. De acuerdo con estudios anteriores, la hidrólisis de polisorbatos inducida químicamente se exacerba cuando las composiciones farmacéuticas se almacenan a temperaturas más altas, por ejemplo, durante condiciones de almacenamiento subóptimas o aceleradas, mientras que la autooxidación puede ser problemática incluso a temperaturas relativamente bajas (por ejemplo, 5-25 0C) y en condiciones ligeramente ácidas (por ejemplo, pH 5,5). Se ha demostrado que las velocidades de estas reacciones de hidrólisis y autooxidación aumentan con el aumento de temperatura.

Para la industria farmacéutica, la caracterización de los polisorbatos en productos farmacéuticos es de gran relevancia debido a su tendencia a formar productos de degradación y, por lo tanto, el contenido de polisorbato se controla habitualmente en diferentes fases del desarrollo del medicamento.

Aparte de los polisorbatos, los excipientes más comúnmente usados en composiciones farmacéuticas, en particular, composiciones farmacéuticas para la administración parenteral, son tampones, lo cuales contribuyen significativamente a la estabilidad general de un medicamento a través de diversos mecanismos. También, las composiciones parenterales deben estar preferentemente a pH fisiológico, especialmente para aplicación subcutánea, para minimizar el dolor del paciente y la inflamación local.

Los tampones preferidos en las composiciones farmacéuticas de este tipo (es decir, que comprenden fármacos proteicos) comprenden tampones de histidina (His), citrato, succinato, acetato y fosfato.

El fosfato de sodio es uno de los tampones más usados en formulaciones parenterales, ya que imita determinados componentes de los fluidos extracelulares, su pH es prácticamente independiente de la temperatura y no es tóxico para las células. Sin embargo, el fosfato de sodio tiene el potencial de precipitar durante la fase de congelación de la liofilización, lo que puede provocar cambios locales en el pH. Por tanto, se debe evitar el fosfato de sodio, especialmente durante el procesamiento de sustancias farmacéuticas a granel o durante la liofilización, ya que los cambios en el pH del medio ambiente tienen el potencial de desestabilizar los fármacos proteicos.

El tampón citrato se utiliza en más de 100 medicamentos inyectables aprobados. Tiene efectos antioxidantes, una larga historia de uso y un perfil de seguridad comprobado. Sin embargo, por el lado negativo, las soluciones tampón de citrato pueden inducir dolor tras la administración parenteral (subcutánea). El uso de tampón de ácido acético es aconsejable para formulaciones de proteínas que son estables en solución en condiciones ácidas, pero debe evitarse durante la liofilización debido a la rápida sublimación y los consecuentes cambios de pH que pueden afectar negativamente a la estabilidad del principio activo.

Los tampones de histidina se han vuelto cada vez más populares, especialmente para formulaciones biofarmacéuticas en los últimos años, y son ideales para su uso en condiciones de pH neutro en ambos estados, líquido y liofilizado. Su uso común es una consecuencia de su actividad amortiguadora única, aplicación parenteral indolora, características antioxidantes y compatibilidad con los fármacos proteicos y otros excipientes de la formulación. Los tampones de histidina también mejoran las propiedades físicas de los medicamentos, tales como reducir la viscosidad de la solución, lo cual es deseable durante el proceso de fabricación de las formas farmacéuticas y para las proteínas terapéuticas, tales como anticuerpos monoclonales (mAb) en concentraciones ultraaltas en solución.

Sin embargo, se ha informado que un sistema tampón de histidina y acetato de histidina promovió la degradación oxidativa. De acuerdo con estos hallazgos, los presentes inventores descubrieron que un sistema tampón de histidina y cloruro de histidina también conducía a una degradación considerable de los polisorbatos en composiciones farmacéuticas.

A pesar del uso común de polisorbatos y tampones en composiciones farmacéuticas, particularmente en medicamentos biofarmacéuticos, sólo se dispone de datos limitados sobre la influencia de los tampones en la estabilidad química de los polisorbatos.

Por ejemplo, el documento WO 2019/106206 A1 informa de composiciones farmacéuticas liquidas estables, de baja viscosidad, y de alta concentración de un anticuerpo anti-IL-12/23p40 que comprenden intervalos de concentración definidos del anticuerpo, un azúcar, un tensioactivo no iónico y un tampón de histidina con o sin una sal inorgánica particularmente adecuado para administración subcutánea y para uso en el tratamiento de enfermedades inmunomediadas en las que IL-12 y/o IL-23 desempeñan un papel. El documento EP 3156071 A1 divulga formulaciones acuosas de adalimumab estables y convenientes mediante la incorporación de una solución tampón de histidina y una solución tampón de fosfato en combinación. Por otra parte, el documento EP 3607969 A1 enseña una composición farmacéutica, que comprende infliximab, un sistema tampón de histidina, un protector de estructura y un tensioactivo, en donde la concentración de histidina en el sistema tampón de histidina es de aproximadamente 1 -200 mM. Por último, el documento WO 2018/060210 A1 divulga una composición farmacéutica líquida en el intervalo de pH de 5,5 a 7,5 y que comprende un receptor de interleucina-6, un tampón de histidina, un poliol (tal como un alcohol de azúcar), un aminoácido libre, un tensioactivo y opcionalmente una sal.

Por consiguiente, existe la necesidad de sistemas tampón que combinen las ventajas de la histidina como agente tampón para productos farmacéuticos y que eviten la degradación del polisorbato durante la formulación del principio activo, así como en el medicamento final, por ejemplo, durante el almacenamiento.

Figuras

Figura 1:La degradación de los polisorbatos en composiciones farmacéuticas que comprenden sal tampón de cloruro de histidina tiene lugar a través de tres vías mecanísticas, en donde la hidrólisis es la vía predominante. La oxidación, la hidrólisis y la aminolisis dan como resultado diferentes productos de degradación, que en algunos casos son poco solubles en agua y por lo tanto propensos a la agregación, pudiendo así dar lugar a la formación de precipitados. Como resultado de la degradación del polisorbato, se reduce la concentración y, por consiguiente, la actividad estabilizadora del polisorbato.

Figura 2:Degradación de PS20 (Figura 2A) y PS80 (Figura 2B) en solución tampón de cloruro de histidina. PS20 y PS80 se obtuvieron de diferentes fabricantes (véase la tabla 1) y se sometieron a pruebas de estabilidad acelerada a pH 5,5 y pH 6,5 ("exp" = vencido). Las muestras se tomaron al inicio del experimento (t0), después de un mes (1 m) y después de dos meses (2m).

Figura 3:Estabilidad de PS80 HX2 en soluciones que contienen sal tampón de cloruro de alanina (AlaCI) a pH 5,0 o pH 6,0 o sal tampón de cloruro de imidazol (ImiCI) a pH 5,0, pH 6,5 o pH 7,0. El ensayo se realizó en condiciones de almacenamiento aceleradas. Las muestras tomadas después de 1 mes (1m) no mostraron degradación para las muestras que contenían sal tampón de cloruro de alanina, mientras que PS80 HX2 se degradó casi por completo en las muestras que contenían sal tampón de cloruro de imidazol en todo el intervalo de pH probado.

Figura 4:Estabilidad de PS80 en soluciones que comprenden sales tampón de histidina con diversos contraiones.

Se usaron las siguientes sales tampón de histidina: malato de histidina (MAL), maleato de histidina (MALE), fumarato de histidina (FUM), tartrato de histidina (TAR), citrato de histidina (CIT), fosfato de histidina (FOS), lactato de histidina (LAK), acetato de histidina (ACE), glutarato de histidina (GLT), succinato de histidina (SUK), adipato de histidina (ADI), histidina a-cetoglutarato (aKG), glutamato de histidina (GLM), aspartato de histidina (ASP), formiato de histidina (FOR) y mesilato de histidina (MET). La concentración de PS80 HX2 se muestra en cada momento para todas las sales tampón probadas.

Figura 5:Estabilidad de PS20 (Figura 5A) y PS80 (Figura 5B) en soluciones que comprenden cloruro de histidina o sales tampón de malato de histidina. Estabilidad de PS20 (Merck) o PS80 (Merck) en condiciones de prueba de estabilidad acelerada en presencia de cloruro de histidina (HisCI) o malato de histidina (HisMAL) a pH 5,5 o pH 6.5.

Figura 6:Estabilidad de PS80 en soluciones que comprenden una sal tampón de histidina y un principio activo. Estabilidad de PS80 HX2 (véase la tabla 1) en presencia de sales tampón de cloruro de histidina (Cl) o malato de histidina (MAL). Las soluciones comprendían además uno de los dos anticuerpos monoclonales ilustrativos como sustancias modelo para principios activos biofarmacéuticos. En presencia de mAb1 (Figura 6A) o mAb2 (Figura 6B), se observó una degradación significativa de PS80 para las soluciones que comprendían sal tampón de cloruro de histidina, mientras que no se observó una degradación significativa para las soluciones que comprendían sal tampón de malato de histidina.

Figura 7:Pruebas de estabilidad de PS20 (Figura 7A) y PS80 (Figura 7B) en presencia de excipientes adicionales manitol (Mann) y trehalosa (Treh) en tampón HisCI: PS20 y PS80 de diversos fabricantes se sometieron a pruebas de estabilidad acelerada en presencia de sal tampón de cloruro de histidina. Algunas de las muestras contenían además trehalosa y manitol como excipientes ilustrativos de composiciones farmacéuticas.

Sumario de la invención

En el primer aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica estabilizada que comprende un principio activo, polisorbato y un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

En una realización, el polisorbato se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120 y mezclas de los mismos.

En una realización adicional, la composición farmacéutica estabilizada comprende el polisorbato en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v), preferentemente, en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v).

En otra realización más, la composición farmacéutica estabilizada comprende la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM, preferentemente en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM, más preferentemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mM, lo más preferentemente en una concentración de aproximadamente 20 mM.

En una realización adicional, el pH de la composición está entre aproximadamente pH 4,0 y aproximadamente pH 8.5, preferentemente entre aproximadamente pH 5,5 y aproximadamente pH 7,0.

En una realización adicional, la composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del principio activo.

En una realización adicional más, el principio activo es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

En un segundo aspecto, la invención se refiere a un método para preparar una composición farmacéutica estabilizada, que comprende incluir un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina en una composición farmacéutica que comprende un principio activo y polisorbato, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

Por último, en el aspecto final de la invención, la invención se refiere al uso de una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina, preferentemente en una composición farmacéutica líquida; en donde la sal tampón no es cloruro de histidina ni acetato de histidina.

Descripción detallada de la invención

Como se usan en el presente documento, las realizaciones generales "que comprende" o "comprendido/a" abarcan la realización más específica "que consiste en". Asimismo, las formas singular y plural no se usan de forma limitativa. De acuerdo con la presente divulgación, las formas en singular "un", "una" y "el/la" designan tanto el singular como el plural, a menos que se indique expresamente que designan solamente el singular.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica estabilizada que comprende un principio activo, polisorbato y un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina y lactato de histidina, y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

Los términos "tampón", "solución tampón" o "sistema tampón" como se usa en el presente documento se refieren a una solución de un pH predefinido, que se mantiene esencialmente cuando se añaden cantidades (menores) de ácido o bases. Por tanto, se usa un tampón para mantener el pH de una composición en o cerca de un valor predeterminado. Normalmente, un sistema tampón consiste en una base débil y una sal disociada conjugada del mismo, o un ácido débil y una sal disociada conjugada del mismo. Por ejemplo, un tampón de acetato es una mezcla de ácido acético (es decir, el ácido débil) y acetato de sodio (es decir, su sal conjugada disociada). La función de un sistema tampón es evitar un cambio rápido en el pH cuando se somete una composición tamponada a, por ejemplo, cambios rápidos de temperatura, liofilización, almacenamiento a largo plazo o la adición de compuestos ácidos o básicos. Un tampón actúa donando o aceptando protones en el intervalo de pH alrededor de su pK<a>(constante de disociación ácida). En general, un tampón ejerce una capacidad amortiguadora máxima a pH = pK<a>, y su capacidad para mantener el pH disminuye a medida que el pH se aleja del pK<a>del tampón. La elección del sistema tampón apropiado generalmente depende del pH requerido.

Un tampón de histidina consiste en histidina (es decir, una base débil) y una sal de adición de ácido de la misma. Por ejemplo, un "tampón de histidina/acetato de histidina" (también denominado "tampón de acetato de histidina" (HisACE)) consiste en histidina y acetato de histidina (es decir, la sal disociada conjugada de histidina). Para los fines de la presente invención, esta última especie se conoce como "sal tampón de histidina".

El término "sal tampón de histidina" (o "sal tampón de His"), como se usa en el presente documento se refiere por tanto a una sal que comprende ácido 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico (histidina) en forma de una especie catiónica y un contraión aniónico.

En el tampón de histidina de la invención, la histidina, así como la sal tampón de histidina pueden comprender histidina en forma de L-histidina o D-histidina, o una mezcla de las mismas. Preferentemente, la histidina y la sal tampón de histidina de acuerdo con la invención comprenden histidina en forma de L-histidina. Los hidratos de histidina, así como las sales tampón de histidina están incluidos en el término "histidina" o la expresión "sal tampón de histidina", respectivamente.

La sal tampón de histidina comprendida en la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos. La sal tampón comprendida en la composición farmacéutica estabilizada no es cloruro de histidina ni acetato de histidina. Por consiguiente, el contraión aniónico de la histidina es el malato, maleato, fumarato, tartrato, citrato, lactato y mezclas de los mismos.

En una realización, la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos. En otra realización, la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos. En otra realización más, la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos.

Se ha descubierto sorprendentemente que las composiciones farmacéuticas de la invención que usan dicho tampón de histidina que comprende una sal tampón con los contraiones específicos anteriores evitan la degradación del polisorbato, por ejemplo, durante la producción del principio activo, el proceso de formulación posterior y, en particular, en la composición final, por ejemplo, durante el almacenamiento o su uso.

La composición farmacéutica estabilizada de la invención puede comprender cualquier polisorbato adecuado conocido por el experto para ese fin. "Polisorbato", también denominado en ocasiones "Tween®", se refiere a una clase de tensioactivos anfifílicos, no iónicos que se derivan del sorbitán etoxilado (un derivado del sorbitol), esterificado con ácidos grasos. Los polisorbatos se fabrican habitualmente mediante etoxilación de sorbitán, antes de la esterificación con un ácido graso. El proceso de etoxilación deja el núcleo de sorbitán con un número definido de unidades repetidas de polietilenglicol que se distribuyen en cuatro sitios de unión diferentes (grupos hidroxilo) de la molécula de sorbitán. En consecuencia, el término "polisorbato" se refiere a una mezcla compuesta de especies químicas que varían, entre otras cosas, de acuerdo con la distribución específica de unidades de polietilenglicol entre los grupos hidroxilo de sorbitán.

Los polisorbatos se denominan comúnmente de acuerdo con la siguiente nomenclatura. El primer dígito indica el ácido graso principalmente esterificado (2 = ácido láurico, 4 = ácido palmítico, 6 = ácido esteárico, 8 = ácido oleico, 12 = ácido isoesteárico). El segundo dígito indica el tipo de esterificación (0 = un monoéster que comprende 20 unidades de polioxietileno, 1 = un monoéster que comprende 4 o 5 unidades de polioxietileno, 5 = un triéster que comprende 20 unidades de polioxietileno). El término "PS20" o "polisorbato 20" se refiere a monolaurato de polioxietileno (20) sorbitán. "PS80" o "polisorbato 80" se refiere a monooleato de polioxietileno (20) sorbitán.

Por tanto, en la composición farmacéutica estabilizada de la invención, el polisorbato se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120 y mezclas de los mismos. En una realización preferida, el polisorbato se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80 y mezclas de los mismos. Más preferentemente, el polisorbato se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80 y mezclas de los mismos. En una realización específica, el polisorbato es polisorbato 80. En otra realización específica, el polisorbato es polisorbato 20.

La cantidad de polisorbato en la composición farmacéutica estabilizada de la invención puede variar, y un experto en la materia puede determinar fácilmente una cantidad óptima. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede comprender polisorbato en una concentración de aproximadamente 0,0001 % (p/v) a aproximadamente 1,0 % (p/v), o de aproximadamente 0,001 % (p/v) a aproximadamente 0,5 % (p/v), o de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v), por ejemplo, en una concentración de aproximadamente el 0,02 % (p/v).

Por tanto, la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención comprende preferentemente un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v).

Más preferentemente, la composición farmacéutica comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,001 % (p/v) a aproximadamente el 0,5 % (p/v).

Aún más preferentemente, un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80 y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v), y más preferentemente polisorbato 80 en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v).

La composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención comprende la sal tampón de histidina en una concentración adecuada para uso farmacéutico. El experto en la materia puede determinar fácilmente las cantidades adecuadas. En realizaciones específicas, la composición farmacéutica comprende la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM, o en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM, o en una concentración de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM, por ejemplo, en una concentración de aproximadamente 20 mM.

En una realización, la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención comprende un polisorbato seleccionado del grupo formado por polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v), y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM.

Preferentemente, la composición farmacéutica comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80 y mezclas del mismo en una concentración de aproximadamente el 0,001 % (p/v) a aproximadamente el 0,5 % (p/v), y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM; aún más preferentemente, la composición farmacéutica comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80 y mezclas del mismo en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v) y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM; o polisorbato 80 en una concentración de aproximadamente el 0,02 % (p/v) y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 20 mM.

El pH de la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención puede ser cualquier pH que sea adecuado para composiciones farmacéuticas dentro del intervalo de pH obtenible con un tampón de histidina. Generalmente, el pH se ajusta para asegurar la estabilidad del principio activo en la composición, siendo lo más cercano posible al pH fisiológico en el lugar previsto de administración o liberación (sangre, músculo, pulmón, tubo digestivo, etc.). El pH de un sistema dado generalmente varía en función de la temperatura. Como se define en el presente documento, los valores de pH están indicados para composiciones farmacéuticas a temperatura ambiente, es decir, a una temperatura de aproximadamente 20 0C a aproximadamente 25 0C. Generalmente, los valores de pH de las composiciones farmacéuticas varían de aproximadamente pH 4,0 a aproximadamente pH 8,5.

En una realización, el pH de la composición farmacéutica de acuerdo con la invención es de aproximadamente pH 4,5 a aproximadamente pH 8,0, más preferentemente de aproximadamente pH 5,0 a aproximadamente pH 7,5, aún más preferentemente de aproximadamente pH 5,5 a aproximadamente 7,0 y los más preferentemente de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 6,5.

En una realización, la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención comprende, por lo tanto, un polisorbato seleccionado del grupo formado por polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v), y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 4,0 a aproximadamente pH 8,5.

Preferentemente, la composición farmacéutica comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,001 % (p/v) a aproximadamente el 0,5 % (p/v), y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 4,5 a aproximadamente pH 8,0.

Más preferentemente la composición farmacéutica comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80, y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v), y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 5,0 a aproximadamente pH 7,5; o la composición farmacéutica comprende polisorbato 80 en una concentración de aproximadamente el 0,02 % (p/v) y la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 20 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 5,5 a aproximadamente pH 7,0.

El principio activo comprendido en la composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede ser cualquier tipo de principio activo. Sin embargo, se prefiere que el principio activo sea un fármaco proteico.

El término "proteína" se usa indistintamente con "secuencias de residuos de aminoácidos", "polipéptido" o "péptido" y se refiere a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. Estos términos también incluyen proteínas y péptidos que se modifican de forma postraduccional a través de reacciones que incluyen, pero sin limitación, glucosilación, acetilación, fosforilación o procesamiento de proteínas. Se puede producir modificaciones y cambios, por ejemplo, fusiones con otras proteínas, sustituciones de secuencia de aminoácidos, deleciones o inserciones, en la estructura de un polipéptido mientras la molécula mantiene su actividad funcional biológica. Por ejemplo, se pueden realizar determinadas sustituciones de secuencias de aminoácidos en un polipéptido o su secuencia codificante de ácido nucleico subyacente y se puede obtener una proteína con las mismas propiedades.

El término "polipéptido" significa una secuencia con más de 50 aminoácidos y el término "péptido" significa secuencias con hasta 50 aminoácidos de longitud. Sin embargo, los términos se utilizan en el presente documento indistintamente.

La proteína puede ser cualquier proteína para uso preventivo o terapéutico. Las proteínas para uso preventivo incluyen, por ejemplo, antígenos proteicos para uso en vacunas. Las proteínas para su uso terapéutico incluyen de manera ilustrativa proteínas producidas de forma recombinante, tales como interferones, factores de coagulación sanguínea, factores inmunosupresores, citocinas, factores de crecimiento, proteína C, eritropoyetina, estreptocinasa, asparaginasa, urato oxidasa o papaína, proteínas de fusión, tales como proteínas de fusión del receptor de TNF y anticuerpos, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos.

El término "anticuerpo" se refiere a una proteína que consiste en uno o más polipéptidos codificados sustancialmente por uno o más genes de inmunoglobulina. Los genes de inmunoglobulinas reconocidos incluyen genes de regiones constantes kappa, lambda, alfa, gamma, delta, épsilon y mu, así como los innumerables genes de regiones variables de inmunoglobulinas. Como se usan en el presente documento, el término "anticuerpo" incluye un anticuerpo policlonal, monoclonal, biespecífico, multiespecífico, humano, humanizado o quimérico.

El término "anticuerpo" se usa en el presente documento en el sentido más amplio e incluye anticuerpos monoclonales (incluyendo anticuerpos monoclonales de longitud completa), anticuerpos policlonales, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos), anticuerpos de dominio único y fragmentos de anticuerpo de unión a antígeno (tal como Fv, Fab, Fab', F(ab)2 u otras subsecuencias de anticuerpos de unión a antígeno). El término "anticuerpo" también abarca conjugados de anticuerpos y anticuerpos de fusión. Los anticuerpos biespecíficos incluyen anticuerpos BITE® (Bispecific T-cell Engager) y DART® (Dual-Affinity Re-Targeting). Los anticuerpos de dominio único incluyen anticuerpos de camélidos. Los "anticuerpos" o "inmunoglobulinas" de longitud completa son generalmente glucoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150 kDa, compuestas por dos cadenas ligeras idénticas y dos pesadas idénticas. Cada cadena ligera está unida a una cadena pesada mediante un enlace disulfuro covalente, mientras que el número de enlaces disulfuro varía entre las cadenas pesadas de diferentes isotipos de inmunoglobulina. Cada cadena pesada y ligera tiene también puentes disulfuro intracatenarios a espacios regulares. Cada cadena pesada tiene un dominio variable amino terminal (VH) seguido de tres dominios constantes carboxi terminales (CH). Cada cadena ligera tiene un dominio N-terminal variable (VL) y un único dominio constante C-terminal (CL). Los anticuerpos se pueden asignar a diferentes clases, en función de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas. Anticuerpos expresados a partir de los genes de regiones constantes kappa, lambda, alfa, gamma, delta, épsilon y mu dan lugar a las cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, 5, £, y, y m, respectivamente. Las clases de anticuerpos se pueden dividir a su vez en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e lgA2. El término "anticuerpo" se refiere además a un tipo de anticuerpo que comprende una pluralidad de anticuerpos individuales que tienen la misma especificidad (dominio variable) y que tienen los mismos dominios constantes.

El término "anticuerpo policlonal", como se usa en el presente documento, se refiere a una mezcla de moléculas de inmunoglobulina, cada una de las cuales reacciona contra diferentes determinantes específicos (epítopos), que normalmente son secretados por diferentes linajes de linfocitos B dentro del cuerpo.

La expresión "anticuerpo monoclonal" (mAb) como se usa en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos en función de su secuencia de aminoácidos. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antigénico. Asimismo, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos convencionales (policlonales), que normalmente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada mAb se dirige contra un único determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los mAb son ventajosos porque pueden sintetizarse y suelen sintetizarse mediante cultivos celulares (hibridomas, células recombinantes o similares) no contaminados por otras inmunoglobulinas. Los mAb que se enseñan en el presente documento incluyen quiméricos, humanizados y humanos.

En una realización preferida, el principio activo es un anticuerpo monoclonal o policlonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo. Lo más preferentemente, el principio activo es un anticuerpo monoclonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En una realización, dicho anticuerpo monoclonal se selecciona del grupo que consiste en adalimumab, aducanumab, alacizumab, alemtuzumab, alirocumab, ascrinvacumab, atezolizumab, atinumab, bapineuzumab, belimumab, benralizumab, bevacizumab, bimekizumab, blinatumomab, blosozumab, bococizumab, brentuximab, burosumab, caplacizumab, capromab, cemiplimab, certolizumab, cetuximab, crenezumab, daclizumab, daratumumab, demcizumab, denosumab, dinutuximab, dupilumab, eculizumab, efalizumab, elotuzumab, emicizumab, enoticumab, eptinezumab, etaracizumab, etokimab, etrolizumab, evinacumab, evolocumab, fasinumab, fulranumab, gantenerumab, golimumab, ibritumomab, icrucumab, idarucizumab, inclacumab, infliximab, inotuzumab, ipilimumab, isatuximab, ixekizumab, margetuximab, mepolizumab, mirikizumab, natalizumab, necitumumab, nesvacumab, nivolumab, obinutuzumab, olaratumab, opicinumab, orticumab, ozanezumab, palivizumab, pamrevlumab, panitumumab, pembrolizumab, pertuzumab, ponezumab, ralpancizumab, ramucirumab, raxibacumab, refanezumab, relatlimab, rinucumab, risankizumab, rituximab, romosozumab, sarilumab, siltuximab, solanezumab, stamulumab, tadocizumab, tanezumab, tocilizumab, trastuzumab, tremelimumab, ustekinumab, vedolizumab, vesencumab, abciximab y zolbetuximab.

Se ha descubierto que la estabilidad química de los anticuerpos depende del pH, en donde en muchos casos las condiciones ligeramente ácidas son favorables.

El principio activo comprendido en la composición farmacéutica de acuerdo con la invención normalmente está comprendido en la misma en una cantidad terapéuticamente eficaz. Como se usan en el presente documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un principio activo que, cuando se administra a un paciente, previene, reduce o mejora la aparición, la progresión, gravedad y/o duración de una afección o enfermedad. Por ejemplo, la composición farmacéutica de acuerdo con la invención comprende el principio activo en una concentración de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 250 mg/ml, o de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 150 mg/ml, o de aproximadamente 0,8 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml, o de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 50 mg/ml.

En consecuencia, en una realización, la composición farmacéutica estabilizada de la invención comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120 y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v), la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un principio activo que es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, más preferentemente un anticuerpo monoclonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

Preferentemente, la composición farmacéutica estabilizada de la invención comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80 y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,001 % (p/v) a aproximadamente el 0,5 % (p/v), la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 4,5 a aproximadamente pH 8,0, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un principio activo que es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, más preferentemente un anticuerpo monoclonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

Más preferentemente, la composición farmacéutica estabilizada de la invención comprende un polisorbato seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 80 y mezclas de los mismos en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v), la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 5,0 a aproximadamente pH 7,5, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un principio activo que es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, más preferentemente un anticuerpo monoclonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

En una realización específica, la composición farmacéutica estabilizada de la invención comprende polisorbato 80 en una concentración de aproximadamente el 0,02 % (p/v), la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 20 mM, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 5,5 a aproximadamente pH 7,0, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un principio activo que es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal o un fragmento de unión a antígeno del mismo, más preferentemente un anticuerpo monoclonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

La composición farmacéutica estabilizada de la invención puede comprender aditivos o excipientes adicionales. Los excipientes comunes para las composiciones farmacéuticas son espesantes, estabilizantes, modificadores de la tonicidad tal como NaCI y manitol, antioxidantes tal como L-metionina, agentes quelantes tal como EDTA u otros tensioactivos. Los excipientes típicos para composiciones farmacéuticas se describen enRemington's Pharmaceutical Sciences16a edición, Osol, A. Ed. (1980).

En una realización particularmente preferida, la sal tampón comprendida en la composición farmacéutica estabilizada de acuerdo con la invención no es glutarato de histidina, succinato de histidina, adipato de histidina, histidina a-cetoglutarato, glutamato de histidina, aspartato de histidina, formiato de histidina y/o mesilato de histidina.

Preferentemente, la composición farmacéutica de la invención es una composición líquida o una composición liofilizada. En una realización más preferida, la composición farmacéutica de acuerdo con la invención es una composición líquida, lo más preferentemente una composición acuosa líquida.

La composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede ser adecuada para cualquier tipo o vía de administración. En realizaciones preferidas, la composición es para administración parenteral, tal como para administración intravenosa, subcutánea o intramuscular, más preferentemente para administración intravenosa o subcutánea y lo más preferentemente para administración intravenosa.

La composición farmacéutica de acuerdo con la invención generalmente se encuentra en una forma microbiológicamente estéril y puede estar contenida o almacenada convenientemente en un recipiente estéril, sellado tal como un vial, una jeringa o cápsula y se almacena a la temperatura deseada.

La degradación química del polisorbato mediada por sales tampón de histidina de la técnica anterior, tal como el cloruro de histidina, tiene lugar a lo largo de tres vías mecanísticas principales, que incluyen hidrólisis de ésteres, oxidación y aminolisis de ésteres (Figura 1), en donde la hidrólisis de ésteres es la vía predominante. La hidrólisis de ésteres da como resultado la formación de ácidos grasos libres que pueden precipitar como resultado de una mala solubilidad en la composición farmacéutica estabilizada. La oxidación se produce en particular en la fracción de óxido de etileno del polisorbato y en el doble enlace de la fracción de ácido graso y conduce a la formación de aldehídos, cetonas, peróxidos y epóxidos. La aminolisis del éster mediada por histidina conduce a la formación de aductos de ácido graso-amida de histidina. Aminolisis de, por ejemplo, polisorbato 20 o polisorbato 80, da como resultado la formación de lauroil-histidina u oleoil-histidina, respectivamente.

En la composición farmacéutica estabilizada de la invención que comprende un tampón de histidina con la(s) sal(es) de tampón de histidina específicas como se ha definido anteriormente, la degradación del polisorbato se reduce con respecto a la misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina. En particular, en las composiciones farmacéuticas estabilizadas de la invención, la hidrólisis del éster de polisorbato se reduce con respecto a la misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina. En la siguiente sección experimental (véase, bajo el título"Polysorbate contení analysis"),se proporciona una prueba estándar adecuada ilustrativa para determinar y comparar la degradación del polisorbato.

La invención se refiere además a un método para preparar una composición farmacéutica estabilizada, que comprende incluir un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina en una composición farmacéutica que comprende un principio activo y polisorbato, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón de histidina no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

El método de acuerdo con la invención proporciona una composición farmacéutica estabilizada en donde la degradación del polisorbato, por ejemplo, por hidrólisis de éster, se reduce en comparación con la misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina.

En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, en donde la sal tampón de histidina no es cloruro de histidina ni acetato de histidina, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende polisorbato. Ventajosamente, dicha estabilización conduce a una hidrólisis reducida del éster de polisorbato mediada por histidina en comparación con una misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina. Dicha composición farmacéutica comprende además un principio activo como se ha definido anteriormente en el presente documento.

En una realización, la presente invención proporciona el uso de una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, en donde la sal tampón de histidina no es cloruro de histidina ni acetato de histidina, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende polisorbato. En otra realización, la presente invención proporciona el uso de una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, en donde la sal tampón de histidina no es cloruro de histidina ni acetato de histidina, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende polisorbato. En otra realización más, la presente invención proporciona el uso de una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, en donde la sal tampón de histidina no es cloruro de histidina ni acetato de histidina, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende polisorbato.

En un uso preferido de acuerdo con la invención, la composición farmacéutica es una composición farmacéutica líquida y, más preferentemente una composición acuosa líquida.

Ejemplos

Preparación de muestras y pruebas de estabilidad aceleradas

Se disolvió PS20 o PS80 obtenidos de diferentes fabricantes (véase la Tabla 1) en tampón acuoso 20 mM a pH 5,5 o 6,5 en un vial de vidrio hasta una concentración final de polisorbato al 0,02 % (p/v). Las sales tampón usadas en los tampones de histidina investigados fueron cloruro de histidina (HisCI) y diversas sales tampón de histidina adicionales (véase más abajo, todas obtenidas de Sigma-Aldrich (ahora Merck KgaA)). Como el grado de degradación del polisorbato fue mayor en presencia de la sal tampón HisCI, esta sal tampón se usó como sal tampón de referencia.

Los mecanismos de degradación de los polisorbatos se exploraron usando sales tampón de cloruro de imidazol 20 mM y cloruro de alanina 20 mM. También, se prepararon soluciones que comprenden sal tampón HisCI con excipientes adicionales de manitol o trehalosa (ambos Sigma-Aldrich) para determinar la influencia de los azúcares y sus derivados en la degradación del polisorbato. Finalmente, se usaron dos mAb diferentes como principios activos y cada uno contenía 10 mg/ml de mAb, PS80 HX2 al 0,02 % y sal tampón HisCI 20 mM a pH 6,5. Las soluciones de proteínas terapéuticas fueron proporcionadas por Lek d.d. (Menges, Slovenia). En todos los casos, las muestras del punto de partida se recogieron inmediatamente y se almacenaron a -80 0C. A continuación, los viales se colocaron en una incubadora a 50 0C durante un máximo de 2 meses, con muestras recolectadas al mes y muestras adicionales en algunos casos a los 2 meses. Todas estas muestras se almacenaron a -80 0C para su posterior análisis.

En esta prueba de estabilidad acelerada se compararon varios fabricantes de polisorbato y grados de calidad de polisorbato (véase la tabla 1). Los grados de calidad del polisorbato disponible en el mercado se diferencian, entre otras cosas, por el grado de homogeneidad del componente de ácido graso. El componente de ácido graso predominante generalmente dicta el tipo de polisorbato. El polisorbato de tipo "todo oleato" ofrece un mayor grado de homogeneidad con respecto al componente de ácido graso (>98,0 % de ácido oleico) en comparación con el grado ''multicompendial" comúnmente usado.

Tabla 1:Detalles de las muestras seleccionadas de PS20 y PS80 de los diferentes fabricantes.

Análisis del contenido de polisorbato

Los contenidos de polisorbato se analizaron y cuantificaron mediante un método basado en cromatografía en modo mixto, como intercambio aniónico mixto y fase inversa, combinado con un detector de aerosol cargado (CAD). Se usó el método de estándar externo para la cuantificación de los tensioactivos. El análisis cromatográfico se realizó mediante el método de Hewitt.et al.(Hewitt, D.et al. J. Cromatogr. A1218,2138-2145 (2011).

Los analitos se separaron usando una columna Waters Oasis MAX (tamaño de partícula de 30 pm, 2,1 mm x 20 mm), temperatura de la columna de 30 0C, caudal de 1 ml/min y un tiempo total de ejecución de 10 min. El volumen de inyección fue de 10 pl. Las condiciones iniciales se establecieron en disolvente A al 90 % (ácido fórmico al 2 % en agua purificada) y disolvente B al 10 % (ácido fórmico al 2 % en isopropanol). El disolvente B se aumentó al 20 % en el primer minuto y se mantuvo durante 2,4 minutos. Los ésteres de sorbitán POE se eluyeron utilizando un gradiente escalonado del 20 % al 100 % B durante 0,1 min, seguido de una etapa de equilibrio de B al 10 % durante 0,9 min.

El ácido fórmico de grado cromatografía líquida-MS, el agua y el isopropanol se adquirieron de Merck KgaA (Darmstadt, Alemania).

Ejemplo 1:Análisis de la estabilidad del polisorbato en presencia de sal tampón de cloruro de histidina.

La estabilidad de PS 20 (Figura 2A) y PS80 (Figura 2B) se probó en presencia de sal tampón de cloruro de histidina en condiciones aceleradas (véaseMethods)a pH 5,5 y pH 6,5. En el estudio se utilizó polisorbato de diferentes fabricantes (véase tabla 1). Se usaron polisorbatos a una concentración del 0,02 % p/v, cloruro de histidina a 20 mM. Se tomaron muestras al inicio del estudio (t0), después de un mes (1m) y después de 2 meses (2m) y se analizaron como se ha descrito anteriormente.

El grado de calidad y la vida útil de los polisorbatos no tuvieron efectos relevantes sobre su degradación. Un material de polisorbato en bruto menos heterogéneo ("todo oleato") no contribuyó a minimizar los problemas de inestabilidad del polisorbato. Para PS80, además del grado multicompendial (de Merck y Baker), hay una nueva generación de PS80 de grado "superior o totalmente oleato", con dos probados en este caso (HX2 de NOF Corporation y Well de Well Chemicals). El nuevo grado todo oleato de PS80 se degradó incluso más rápido que el grado PS80 multicompendial (Figura 2B). Estos datos muestran que la elección correcta del sistema tampón de histidina, en el que los polisorbatos no se degradan, es más importante para la estabilidad del polisorbato que el grado del polisorbato empleado.

También hubo diferencias en las tasas de degradación entre las muestras de PS20 (Figura 2A) y PS80 (Figura 2B) del mismo fabricante, con las muestras PS80 generalmente degradándose más rápido. Este efecto es más pronunciado después de 2 meses de pruebas de estabilidad aceleradas. Sin embargo, tanto PS20 como PS80 mostraron una fuerte degradación en las condiciones probadas en presencia de sal tampón de cloruro de histidina.

Ejemplo 2:Comparación de la degradación del polisorbato en presencia de sales tampón de cloruro de alanina y cloruro de imidazol a diferentes valores de pH.

Para evaluar si el mecanismo de degradación está catalizado por la fracción de imidazol de la histidina, se prepararon soluciones tamponadas con cloruro de imidazol y, por separado, soluciones tamponadas con cloruro de alanina. Para el estudio se utilizó polisorbato 80 HX2 (NOF Corporation, véase la tabla 1) en una concentración del 0,02 % p/v, que se realizó en condiciones aceleradas, como se ha descrito anteriormente. Se usaron sales tampón de cloruro de alanina y cloruro de imidazol a una concentración de 20 mM. Las muestras se tomaron al inicio del estudio (t0) y después de un mes en condiciones aceleradas (1 m). Las muestras se analizaron tal como se describe anteriormente. La concentración determinada analíticamente de PS80 HX2 para cada uno de los experimentos se representa en la Figura 3.

La degradación del polisorbato se detectó sólo en presencia de sal tampón de cloruro de imidazol, lo que indica que la fracción imidazol de la histidina provoca la degradación del polisorbato. Los experimentos muestran además que la degradación del polisorbato observada se produce en un intervalo de pH de al menos de aproximadamente pH 5,0 a aproximadamente pH 7,0.

Ejemplo 3:Estabilidad del polisorbato 80 en soluciones que comprenden sales tampón de histidina con varios contraiones diferentes.

Para determinar la influencia de los contraiones aniónicos de la sal tampón de histidina, PS80 HX2 se sometió a pruebas de estabilidad acelerada en las condiciones descritas anteriormente. Se usó PS80 HX2 (véase tabla 1) en una concentración del 0,02 % p/v junto con una sal tampón de histidina en una concentración de 20 mM. La mezcla se ajustó a pH = 6,5. El estudio se realizó en condiciones aceleradas. Las muestras se tomaron al inicio del estudio (t0) y después de un mes de almacenamiento (1 m).

Se usaron malato de histidina (MAL), maleato de histidina (MALE), fumarato de histidina (FUM), tartrato de histidina (TAR), citrato de histidina (CIT), fosfato de histidina (FOS), lactato de histidina (LAK), acetato de histidina (ACE), glutarato de histidina (GLT), succinato de histidina (SUK), adipato de histidina (ADI), histidina a-cetoglutarato (aKG), glutamato de histidina (GLM), aspartato de histidina (ASP), formiato de histidina (FOR) y mesilato de histidina (MET).

Las soluciones que comprenden malato de histidina (MAL), maleato de histidina (MALE), fumarato de histidina (FUM), tartrato de histidina (TAR), citrato de histidina (CIT), fosfato de histidina (FOS) o lactato de histidina (LAK) no mostraron una degradación significativa del polisorbato 80 HX2, mientras que en las soluciones que contienen acetato de histidina (ACE) se observó una degradación de mayor a casi completa, glutarato de histidina (GLT), succinato de histidina (SUK), adipato de histidina (ADI), histidina a-cetoglutarato (aKG), glutamato de histidina (GLM), aspartato de histidina (ASP), formiato de histidina (FOR) o mesilato de histidina (MET) (Figura 4).

Sorprendentemente, el contraión usado en la sal tampón de histidina tuvo un impacto significativo en la estabilidad del PS en las condiciones probadas. Los contraiones probados se dividen en dos grupos: contraiones estabilizadores y desestabilizadores o "sales tampón de histidina".

Ejemplo 4:Estabilidad de PS20 y PS80 en soluciones que comprenden cloruro de histidina o malato de histidina.

La estabilidad de PS20 (Merck) y PS80 (Merck) se probó a diferentes valores de pH (pH 5,5 y 6,5) en presencia de una sal tampón desestabilizadora ilustrativa (cloruro de histidina, HisCI) o una sal tampón estabilizadora ilustrativa (malato de histidina, HisMAL). Se usaron polisorbatos en una concentración del 0,02 % p/v, sales tampón de histidina a una concentración de 20 mM. Las pruebas se realizaron en condiciones aceleradas como se ha descrito anteriormente. Las muestras se tomaron al inicio del estudio (t0), al mes (1m) y a los dos meses (2m).

En ambos valores de pH probados, PS20 (Figura 5A) y PS80 (Figura 5B) mostraron degradación en presencia de HisCI, pero significativamente menos degradación en presencia de HisMAL.

Ejemplo 5:Estabilidad de PS80 en soluciones que comprenden una sal tampón de histidina y un principio activo.

Para evaluar si los efectos estabilizadores o desestabilizadores observados de las sales tampón de histidina también se pueden observar en presencia de un principio activo, PS80 HX2 (0,02 % p/v) se sometió a pruebas de estabilidad acelerada como se ha descrito anteriormente en presencia de cloruro de histidina (Cl) o malato de histidina (MAL) y uno de los dos anticuerpos monoclonales ilustrativos (mAb1 (Figura 6A) o mAb2 (Figura 6B). Se usaron sales tampón de histidina a una concentración de 20 mM, anticuerpos a una concentración de 10 mg/ml. La mezcla se ajustó a pH = 6,5. Se tomaron muestras al inicio del estudio (t0) y después de un mes (1m) y se analizaron como se ha descrito anteriormente (Figura 6).

Al igual que en los experimentos anteriores, el polisorbato 80 mostró una degradación significativamente más rápida en presencia de sal tampón de cloruro de histidina en comparación con la sal tampón de malato de histidina.

Ejemplo 6:Pruebas de estabilidad en presencia de excipientes adicionales manitol (Mann), trehalosa (Treh) y NaCI en tampón a base de cloruro de histidina.

Se analizó la influencia de tres excipientes comunes de composiciones farmacéuticas, manitol (Mann), trehalosa (Treh) y NaCI sobre la estabilidad del polisorbato. PS20 o PS80 (0,02 % p/v) de diversos fabricantes se sometieron a pruebas de estabilidad acelerada en presencia de sal tampón de cloruro de histidina en una concentración de 20 mM y a pH = 6,5. Las muestras contenían además trehalosa, manitol o NaCI como excipientes ilustrativos para composiciones farmacéuticas. Se tomaron muestras al comienzo del experimento (t0) y después de 1 mes (1 m) y se analizaron como se ha descrito anteriormente (Figura 7).

La adición de trehalosa, manitol, NaCI y EDTA no desaceleró la degradación de PS20 (Figura 7A) o PS80 (Figura 7B). No se muestran los resultados obtenidos con NaCI.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica estabilizada que comprende un principio activo, polisorbato y un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

2. La composición farmacéutica estabilizada líquida de la reivindicación 1, en donde el polisorbato se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 21, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 61, polisorbato 65, polisorbato 80, polisorbato 81, polisorbato 85, polisorbato 120 y mezclas de los mismos.

3. La composición farmacéutica estabilizada de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende el polisorbato en una concentración de aproximadamente el 0,0001 % (p/v) a aproximadamente el 1,0 % (p/v), preferentemente, en una concentración de aproximadamente el 0,01 % (p/v) a aproximadamente el 0,25 % (p/v).

4. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la sal tampón de histidina en una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 200 mM, preferentemente en una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 100 mM, más preferentemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mM, lo más preferentemente en una concentración de aproximadamente 20 mM.

5. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el pH de la composición es de aproximadamente pH 4,0 a aproximadamente pH 8,5, preferentemente entre aproximadamente pH 5,5 y aproximadamente pH 7,0.

6. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del principio activo.

7. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el principio activo es una proteína, preferentemente un anticuerpo monoclonal o policlonal, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.

8. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una composición líquida o una composición liofilizada, preferentemente una composición líquida.

9. La composición farmacéutica estabilizada de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para administración intravenosa, subcutánea o intramuscular, preferentemente para administración intravenosa o subcutánea.

10. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la degradación del polisorbato se reduce con respecto a la misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 10, en donde la hidrólisis del éster de polisorbato se reduce con respecto a la misma composición que comprende cloruro de histidina como sal tampón de histidina.

12. Un método para preparar una composición farmacéutica estabilizada, que comprende incluir un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina en una composición farmacéutica que comprende un principio activo y polisorbato, en donde la sal tampón de histidina se selecciona del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos; y en donde la sal tampón no es cloruro de histidina o acetato de histidina.

13. Uso de una sal tampón de histidina seleccionada del grupo que consiste en malato de histidina, maleato de histidina, fumarato de histidina, tartrato de histidina, citrato de histidina, lactato de histidina y mezclas de los mismos, para estabilizar polisorbato en una composición farmacéutica que comprende un tampón de histidina que consiste en histidina y una sal tampón de histidina, preferentemente en una composición farmacéutica líquida; en donde la sal tampón no es cloruro de histidina ni acetato de histidina.