ES2989145T3 - Derivados de 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol para el tratamiento, alivio o prevención de trastornos asociados con agregados de Tau como la enfermedad de Alzheimer - Google Patents

Derivados de 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-b]indol para el tratamiento, alivio o prevención de trastornos asociados con agregados de Tau como la enfermedad de Alzheimer Download PDF

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Abstract

La presente invención se refiere a nuevos compuestos que pueden emplearse en el tratamiento, alivio o prevención de un grupo de trastornos y anomalías asociados con agregados de proteína Tau (unidad asociada a tubulina), incluyendo, pero no limitado a, ovillos neurofibrilares (NFT), como la enfermedad de Alzheimer (EA). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol para el tratamiento, alivio o prevención de trastornos asociados con agregados de Tau como la enfermedad de Alzheimer
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos que pueden emplearse en el tratamiento, alivio o prevención de un grupo de trastornos y anomalías asociados con agregados de proteínas Tau (unidad asociada a tubulina) que incluyen, pero no se limitan a, ovillos neurofibrilares (NFT), tales como enfermedad de Alzheimer (EA).
Antecedentes de la invención
Muchas enfermedades del envejecimiento se basan en o se asocian a depósitos extracelulares o intracelulares de proteínas amiloides o de tipo amiloide que contribuyen a la patogénesis, así como a la progresión de la enfermedad. La proteína amiloide mejor caracterizada que forma agregados extracelulares es beta amiloide (Ap). Otros ejemplos de proteínas amiloides que forman agregados extracelulares son priones, ATTR (transtiretina) o ADan (ADanPP). Las proteínas de tipo amiloide, que forman principalmente agregados intracelulares, incluyen, pero no se limitan a Tau, alfa-sinucleína, proteína de unión a ADN TAR 43 (TDP-43) y huntingtina (htt). Las enfermedades que implican agregados de Tau se enumeran generalmente como tauopatías tales como la EA.
Los depósitos amiloides o de tipo amiloide resultan del plegamiento incorrecto de proteínas seguido de agregación para dar ensamblajes de lámina p en donde múltiples péptidos o proteínas se mantienen juntos mediante enlaces de hidrógeno intermoleculares. Aunque las proteínas amiloides o de tipo amiloide tienen diferentes secuencias de aminoácidos primarias, sus depósitos a menudo contienen muchos constituyentes moleculares compartidos, en particular la presencia de estructuras cuaternarias de lámina p. La asociación entre depósitos amiloides y enfermedades sigue sin estar clara en gran medida. Se ha encontrado que una diversa gama de agregados proteicos, que incluye tanto los asociados como los no asociados con patologías de enfermedad, son tóxicos, lo que sugiere que las características moleculares comunes del amiloide están implicadas o son responsables del inicio de la enfermedad (Bucciantini et al., Nature, 2002, 416, 507-11). También se han asociado diversos multímeros de péptidos o proteínas agregados en lámina p con toxicidad para diferentes péptidos o proteínas que varían de dímeros, a oligómeros solubles de bajo peso molecular, protofibrillas o depósitos fibrilares insolubles.
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurológico que se cree que está causado principalmente por placas amiloides, una acumulación extracelular de depósito anormal de agregados de Ap (beta amiloide) en el cerebro. Las otras marcas distintivas neuropatológicas principales en la EA son los ovillos neurofibrilares intracelulares (NFT) que se originan por la agregación de la proteína Tau hiperfosforilada, Tau mal plegada o Tau patológica y sus confórmeros. La EA comparte su etiopatología con muchas tauopatías neurodegenerativas, en particular con tipos específicos de demencia frontotemporal (FTD). La proteína Tau es una proteína libremente soluble, "desplegada de forma natural" que se une ávidamente a los microtúbulos (MT) para promover su ensamblaje y estabilidad. Los MT son de gran importancia para la integridad citoesquelética de las neuronas, y por lo tanto para la formación y funcionamiento apropiados de los circuitos neuronales, por lo tanto, para el aprendizaje y la memoria. La unión de Tau a los MT está controlada por la fosforilación y desfosforilación dinámica, como se demuestra principalmentein vitroy en células no neuronales. En el cerebro con EA, la patología de Tau (tauopatía) se desarrolla más tarde que la patología amiloide, pero todavía se analiza controvertidamente si la proteína Ap es el agente causante de la EA que constituye la esencia de la denominada hipótesis de la cascada amiloide (Hardy et al., Science 1992, 256, 184-185; Musiek et al., Nature Neurosciences 2015, 18(6), 800-806). Los mecanismos exactos que enlazan el amiloide con la patología de Tau siguen siendo ampliamente desconocidos, pero se propone que implican la activación de vías de señalización neuronal que actúan sobre o mediante GSK3 y cdk5 como las principales "Tau-quinasas" (Muyllaert et al., Rev. Neurol. (París), 2006, 162, 903-7; Muyllaert et al., Genes Brain and Behav. 2008, Supl. 1,57-66). Incluso si la tauopatía se desarrolla más tarde que el amiloide, no es solo un efecto secundario inocente sino un ejecutor patológico principal en la EA. En modelos experimentales de ratón, los defectos cognitivos causados por la patología amiloide se alivian casi completamente por la ausencia de proteína Tau (Roberson et al., Science, 2007, 316(5825), 750-4) y la gravedad de la disfunción cognitiva y la demencia se correlaciona con la tauopatía, no con la patología amiloide.
Las enfermedades que implican agregados de Tau se enumeran generalmente como tauopatías e incluyen, pero no se limitan a, enfermedad de Alzheimer (EA), EA familiar, PART (tauopatía primaria relacionada con la edad), enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, demencia pugilística, síndrome de Down, enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS), miositis de cuerpos de inclusión, angiopatía amiloide cerebral de proteínas priónicas, lesión cerebral traumática (TBI), esclerosis lateral amiotrófica (ELA), complejo parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de las neuronas motoras no guamanianas con ovillos neurofibrilares, enfermedad de granos argirofílicos, degeneración corticobasal (CBD), ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, demencia frontotemporal con parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17), enfermedad de Halervorden-Spatz, atrofia sistémica múltiple (MSA), enfermedad de Niemann-Pick tipo C, degeneración palido-ponto-nigral, enfermedad de Pick (PiD), gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva (PSP), panencefalitis esclerosante subaguda, demencia predominante de ovillos, parkinsonismo posencefalítico, distrofia miotónica, panencefalopatía de esclerosis subaguda, mutaciones en LRRK2, encefalopatía traumática crónica (CET), demencia familiar británica, demencia familiar danesa, otras degeneraciones lobulares frontotemporales, parkinsonismo de Guadalupe, neurodegeneración con acumulación de hierro en el cerebro, retraso mental relacionado con SLC9A6, tauopatía de materia blanca con inclusiones gliales globulares, epilepsia, demencia con cuerpos de Lewy (LBD), deterioro cognitivo leve (DCL), esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, diabetes de aparición en adultos, amiloidosis cardiaca senil, glaucoma, accidente cerebrovascular isquémico, psicosis en EA y enfermedad de Huntington (Williams et al., Intern. Med. J., 2006, 36, 652-60; Kovacs et al., J Neuropathol Exp Neurol. 2008; 67(10): 963-975; Higuchi et al., Neuropsychopharmacology - 5th Generation of Progress, 2002, Sección 9, Capítulo 94: 1339-1354; Hilton et al., Acta Neuropathol. 1995; 90(1 ):101 -6; Iqbal et al., Biochimica et Biophysica Acta 1739 (2005) 198-210; McQuaid et al., Neuropathol Appl Neurobiol. Abril de 1994; 20(2):103-10; Vossel et al., Lancet Neurol 2017; 16:311-22; Stephan et al., Molecular Psychiatry (2012) 17, 1056-1076; Anderson et al., Brain (2008), 131,1736-1748; Savica et al., JAMA Neurol.
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De todos los agentes en ensayos clínicos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en 2017, los que se dirigen a Tau son muy escasos y representan solo el 8 % de los ensayos clínicos en fase II (Cummings et al., Alzheimer's & Dementia: Translational Research & Clinical Interventions 3 (2017) 367-384). Los enfoques terapéuticos actuales que se dirigen a la proteína Tau comprenden principalmente enfoques basados en anticuerpos con la principal limitación de dirigirse solo a la Tau extracelular. Entre los enfoques que usan moléculas pequeñas, se han desarrollado varios inhibidores de Tau quinasa, a pesar de ser muy desafiantes con respecto a la toxicidad y la especificidad. Sin embargo, actualmente solo se prueba un inhibidor de quinasa, Nilotinib, en ensayos clínicos. Por último, entre los inhibidores de la agregación de Tau solo uno, la LMTX, está actualmente en ensayos clínicos (Cummings et al., 2017). Aunque en los últimos años, los tratamientos basados en Tau se han convertido en un punto de foco creciente, todavía existe una gran necesidad de agentes terapéuticos adicionales que se dirijan a los confórmeros patológicos de Tau que se sabe o se supone que causan tauopatías.
La patente internacional WO2011/128455 se refiere a compuestos específicos que son adecuados para tratar trastornos asociados con proteínas amiloides o proteínas de tipo amiloide.
La patente internacional WO2010/080253 se refiere a compuestos derivados de dipiridil-pirrol que son útiles en el tratamiento de enfermedades susceptibles de inhibición, regulación y/o modulación de la transducción de señales de proteína quinasa.
Los siguientes compuestos se describen en el registro CAS:
(CAS: 1794307-60-0),
(CAS: 1497619-59-6),
(CAS: 1497557-11-5),
(CAS: 1371825-00-1),
(CAS: 1371004-32-8),
(CAS: 1356709-09-5),
(CAS: 1333974-37-0),
(CAS: 1333927-61-9),
(CAS: 1324386-72-2),
(CAS: 1320983-04-7),
(CAS: 1318103-95-5),
(CAS: 1316764-23-4),
(CAS: 1316264-49-9),
(CAS: 1269256-52-1),
(CAS: 1269193-44-3),
(CAS: 1223061-06-0),
(CAS: 1211728-75-4),
(CAS: 12211206-57-3),
(CAS: 1209092-09-0),
(CAS: 1147315-08-9),
(CAS: 1111571-99-3),
(CAS: 1090836-41-1),
(CAS: 1090836-38-6),
(CAS: 1090781-52-4),
(CAS: 1089996-99-5),
(CAS: 1089615-89-3),
(CAS: 949198-56-5),
(CAS: 929988-03-4).
Compendio de la invención
Un objeto de la presente invención fue proporcionar compuestos que se pueden emplear en el tratamiento, alivio o prevención de un grupo de trastornos y anomalías asociadas con agregados de proteína Tau que incluyen, pero no se limitan a, NFT, tales como enfermedad de Alzheimer (EA). Además, existe una necesidad en la técnica de compuestos que puedan usarse como agentes terapéuticos para (a) disminuir los agregados de Tau/NFT reconociendo a la Tau agregada y desagregando Tau, por ejemplo, cambiando la conformación molecular del agregado de tau, y/o (b) prevenir la formación de agregados de Tau, y/o (c) interferir intracelularmente con los agregados de Tau, y/o (d) reducir el plegamiento incorrecto e hiperfosforilación de Tauin vivoy/o (f) reducir los marcadores neuroinflamatorios. Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que estos objetos pueden lograrse mediante los compuestos de fórmula (I) como se describe a continuación en la presente memoria.
Los compuestos de fórmula (I) (a) muestran una alta capacidad para disminuir los agregados de Tau reconociendo la Tau agregada y desagregando la Tau, por ejemplo, cambiando la conformación molecular del agregado de Tau, y/o (b) evitan la formación de agregados de Tau, y/o (c) interfieren intracelularmente con los agregados de Tau, y/o (d) reducen el plegamiento incorrecto y la hiperfosforilación de Tauin vivoy/o (f) reducen los marcadores neuroinflamatorios. Aunque no se desea estar limitado por la teoría, se supone que los compuestos de fórmula (I) inhiben la agregación de Tau o desagregan agregados de Tau preformados, incluyendo cuando están presentes intracelularmente. Debido a sus características de diseño únicas, estos compuestos muestran propiedades tales como lipofilia y peso molecular apropiados, captación cerebral y farmacocinética, permeabilidad celular, solubilidad y estabilidad metabólica, con el fin de ser un medicamento exitoso para el tratamiento, alivio o prevención de tauopatías.
Se ha demostrado que la acumulación de lesiones de NFT de Tau se correlaciona bien con déficits cognitivos en la EA, tanto a través de análisis histopatológicos como a través de la obtención de imágenes por PETin vivode Tau. Los compuestos de esta invención pueden prevenir la formación de agregados de Tau, o desagregar agregados de Tau preexistentes y, por lo tanto, se puede esperar que eviten o reduzcan los déficits cognitivos asociados en la EA.
Los análisis ultraestructurales han demostrado que las inclusiones de Tau están compuestas por filamentos helicoidales emparejados (PHF) o filamentos rectos (SF). Los análisis estructurales de alta resolución han mostrado que estos filamentos están compuestos por una región central que comprende los aminoácidos 306-378 de Tau que adaptan una estructura cruzada beta/beta-hélice. Los compuestos de esta invención pueden reconocer Tau agregada y Tau desagregada, por ejemplo, cambiando la conformación molecular del agregado de Tau, y por lo tanto se puede esperar que facilite el aclaramiento de Tau.
Además, se ha demostrado que Tau es capaz tanto de propagarse de célula a célula como que ciertas formas de Tau (que actúan como semillas) son capaces de inducir el cambio estructural de la proteína Tau nativa dentro de la célula sana para experimentar un plegamiento incorrecto y una agregación. Se considera que la Tau agregada es responsable de la siembra y, por lo tanto, de la propagación de la patología de Tau. Los compuestos de esta invención pueden interferir intracelularmente con la Tau agregada y, por lo tanto, se puede esperar que reduzcan la propagación de la patología de Tau y finalmente que eviten o reduzcan los déficits cognitivos asociados en la EA.
La cascada de agregación de Tau se inicia con el plegamiento incorrecto e hiperfosforilación de Tau. Se cree que estos acontecimientos preceden a la formación de las inclusiones neuronales intracelulares de Tau y por tanto al establecimiento y la propagación de la patología de Tau. Los compuestos de esta invención pueden reducir el plegamiento incorrecto de Tau y la hiperfosforilaciónin vivoy por lo tanto se puede esperar que sea beneficioso en el tratamiento, alivio o prevención de enfermedades asociadas con la patología de Tau.
Por último, la conexión entre la patología de Tau y la neuroinflamación está bien establecida en la actualidad. La neuroinflamación es un evento clave ya en las etapas tempranas de la EA y se cree que es una de las causas que desencadenan la agregación de Tau en PHF. Además, varios modelos de ratón con tauopatía mostraron una neuroinflamación significativa una vez que la patología de Tau está bien establecida en el cerebro, lo que indica que la patología de Tau también puede inducir un proceso neuroinflamatorio. Estos dos hallazgos indican que la patología de Tau y la neuroinflamación están vinculadas en un bucle de retroalimentación positiva. Los compuestos de esta invención reducen los marcadores neuroinflamatorios en el contexto de la patología de Tau.
La presente invención describe nuevos compuestos de fórmula (I) que tienen capacidades para (a) disminuir los agregados de Tau, reconocer la Tau agregada y la Tau desagregada, por ejemplo, cambiando la conformación molecular del agregado de Tau, y/o (b) prevenir la formación de agregados de Tau, y/o (c) interferir intracelularmente con los agregados de Tau, y/o (d) reducir el plegamiento incorrecto e hiperfosforilación de Tauin vivoy/o (f) reducir los marcadores neuroinflamatorios. La presente invención proporciona métodos para el tratamiento de trastornos y anomalías asociados con agregados de proteína Tau que incluyen, pero no se limitan a, NFT, usando un compuesto de fórmula (I) o una composición farmacéutica del mismo. La presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención se resume en los siguientes puntos:
1. Un compuesto de fórmula (I):
y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y polimorfos del mismo;
en donde
A se selecciona del grupo que consiste en
en donde
puede unirse a Q en cualquier posición disponible, en donde
está sustituido por uno o varios sustituyentes Rj y en donde
puede estar sustituido opcionalmente con uno o varios sustituyentes R;
B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa;
E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S;
G se selecciona del grupo que consiste en un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina;
J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1;
Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1;
Y se selecciona del grupo que consiste en CZ y N, siempre que cuando Y es N y Y1, Y2 y Y3 son CZ, B es N-alquilo u O;
Y1 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y2 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y3 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, O-alquilo, alquilo y CN;
R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
y -NR3R4;
R<a>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>puede unirse para formar un anillo de 3 a 8 miembros;
R<j>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF<3>, -CN, -NR<3>R<4>,
en donde a un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d;
R1 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R2 son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a 6 miembros;
R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo;
R5 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
n es 0, 1,2, 3 o 4.
r y s son independientemente 0, 1,2 o 3; y
t y u son independientemente 1,2 o 3, siempre que el compuesto no sea:
2. El compuesto según el punto 1, que es un compuesto de fórmula (la):
en donde A, B, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg, Y y Z son como se definen en el punto 1. 3. El compuesto según el punto 1, que es un compuesto de fórmula (Ib):
en donde A, B, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg y Z son como se definen en el punto 1. 4. El compuesto según uno cualquiera de los puntos 1 a 3, en donde A es
en donde
puede estar unido a Q o a N en cualquier posición disponible, y en donde
puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes R.
5. El compuesto según uno cualquiera de los puntos 1 a 4, que es un compuesto de la fórmula (Ic):
en donde E, R, V y Z son
6. El compuesto según el punto 1, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en
��
��
7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I):
y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y polimorfos de la misma;
en donde
A se selecciona del grupo que consiste en
en donde
puede unirse a Q en cualquier posición disponible, en donde
está sustituido por uno o más sustituyentes Rj, y en donde
puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes R;
B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa;
E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S;
G se selecciona del grupo que consiste en un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina;
J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1;
Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1;
Y se selecciona del grupo que consiste en CZ y N, siempre que cuando Y es N y Y1, Y2 y Y3 son CZ, B es N-alquilo u O; Y1 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y2 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y3 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, O-alquilo, alquilo y CN;
R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
y -NR3R4;
R<a>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>puede unirse para formar un anillo de 3 a 8 miembros;
R<j>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF<3>, -CN, -NR<3>R<4>,
en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d;
R1 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R2 son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a 6 miembros;
R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo;
R5 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
n es 0, 1, 2, 3 o 4.
r y s son independientemente 0, 1,2 o 3; y
t y u son independientemente 1,2 o 3,
y opcionalmente un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto de fórmula (I):
y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y polimorfos del mismo;
en donde
A se selecciona del grupo que consiste en
en donde
puede unirse a Q en cualquier posición disponible, en donde
está sustituido por uno o más sustituyentes Rj, y en donde
puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes R;
B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa;
E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S;
G se selecciona del grupo que consiste en un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina;
J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1;
Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1;
y N, siempre que cuando Y es N y Y1, Y2 y Y3 son CZ, B es N-alquilo u O;
Y1 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y2 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y3 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, O-alquilo, alquilo y CN;
R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
y -NR3R4;
R<a>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>puede unirse para formar un anillo de 3 a 8 miembros;
R<j>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF<3>, -CN, -NR<3>R<4>,
en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d;
R1 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R2 son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a 6 miembros;
R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo;
R5 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
n es 0, 1, 2, 3 o 4.
r y s son independientemente 0, 1,2 o 3; y
t y u son independientemente 1,2 o 3,
para su uso como medicamento.
9. Un compuesto de fórmula (I):
y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y polimorfos del mismo;
para su uso en el tratamiento, alivio o prevención de un trastorno o anomalía seleccionado de enfermedad de Alzheimer (EA), EA familiar, tauopatía relacionada con la edad primaria (PART), enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, demencia pugilística, síndrome de Down, enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS), miositis de cuerpos de inclusión, angiopatía amiloide cerebral de proteína priónica, lesión cerebral traumática (TBI), esclerosis lateral amiotrófica (ELA), complejo parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de neuronas motoras no guamaniana con ovillos neurofibrilares, enfermedad de granos argirofílicos, degeneración corticobasal (CBD), ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, demencia frontotemporal con parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17), Enfermedad de Halervorden-Spatz, atrofia sistémica múltiple (MSA), enfermedad de Niemann-Pick tipo C, degeneración palido-ponto-nigral, enfermedad de Pick (PiD), gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva (PSP), panencefalitis esclerosante subaguda, demencia predominante de ovillos, parkinsonismo postencefalítico, distrofia miotónica, panencefalopatía de esclerosis subaguda, mutaciones en LRRK2, encefalopatía traumática crónica (CET), demencia familiar británica, demencia familiar danesa, otras degeneraciones lobulares frontotemporales, parkinsonismo de Guadalupe, neurodegeneración con acumulación de hierro en el cerebro, retraso mental relacionado con SLC9A6, tauopatía de la materia blanca con inclusiones gliales globulares, epilepsia, demencia con cuerpos de Lewy (LBD), deterioro cognitivo leve (DCL), esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, diabetes de aparición en adultos, amiloidosis cardiaca senil, glaucoma, accidente cerebrovascular isquémico, psicosis en EA y enfermedad de Huntington, preferiblemente enfermedad de Alzheimer (EA), degeneración corticobasal (CBD), enfermedad de Pick (PiD) y parálisis supranuclear progresiva (PSP);
en donde
A se selecciona del grupo que consiste en
en donde
puede unirse a Q en cualquier posición disponible, en donde
está sustituido por uno o más sustituyentes Rj, y en donde
puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes R;
B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa;
E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S;
G se selecciona del grupo que consiste en un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina; J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1;
Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1;
Y se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y1 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y2 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Y3 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N;
Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, O-alquilo, alquilo y CN;
R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
y -NR3R4;
R<a>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>y R<g>puede unirse para formar un anillo de 3 a 8 miembros; R<j>se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF3, -CN, -NR3R4,
en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d;
R1 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R2 son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a 6 miembros;
R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo;
R5 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo;
n es 0, 1, 2, 3 o 4;
r y s son independientemente 0, 1,2 o 3; y
t y u son independientemente 1,2 o 3.
10. El compuesto para su uso según el punto 9, en donde el compuesto de fórmula (I) es como se define en uno cualquiera de los puntos 1 a 6.
11. Una mezcla que comprende un compuesto como se define en uno cualquiera de los puntos 1 a 6 y al menos un compuesto biológicamente activo adicional seleccionado del grupo que consiste en compuestos contra el estrés oxidativo, compuestos antiapoptóticos, quelantes metálicos, inhibidores de la reparación del ADN tales como pirenzepina y metabolitos, ácido 3-amino-1-propanosulfónico (3APS), 1,3-propanodisulfonato (1,3PDS), activadores dea-secretasa, inhibidores dep- yY-secretasa, inhibidores de glucógeno sintasa quinasa 3, inhibidores de O-glcnacasa (OGA), neurotransmisores, rompedores de láminasp, atrayentes para componentes celulares de aclaramiento/agotamiento de beta amiloide, inhibidores de beta amiloide truncada en el extremo N que incluyen beta amiloide piroglutamatado 3-42, moléculas antiinflamatorias o inhibidores de colinesterasa (ChEls) tales como tacrina, rivastigmina, donepezilo y/o galantamina, agonistas de M1, otros fármacos que incluyen cualquier fármaco modificador amiloide o de Tau y suplementos nutritivos, un anticuerpo, que incluye cualquier anticuerpo funcionalmente equivalente o partes funcionales del mismo o una vacuna, en donde la mezcla comprende además al menos uno de un vehículo, un diluyente y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
12. La mezcla según el punto 11, en donde el compuesto biológicamente activo adicional es un inhibidor de colinesterasa (ChEI).
13. La mezcla según el punto 11, en donde el compuesto biológicamente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en tacrina, rivastigmina, donepezilo, galantamina, niacina y memantina.
14. La mezcla según el punto 11, en donde el compuesto biológicamente activo adicional es un anticuerpo, particularmente un anticuerpo monoclonal, incluyendo cualquier anticuerpo funcionalmente equivalente o partes funcionales del mismo.
15. La mezcla según uno cualquiera de los puntos 11 a 14, en donde el compuesto y/o el compuesto biológicamente activo adicional está/están presente(s) en una cantidad terapéuticamente eficaz.
16. El uso del compuesto como se define en cualquiera de los puntos 1 a 6 como referencia analítica o herramienta de cribadoin vitro.
Definiciones
En el sentido de la presente solicitud se aplican las siguientes definiciones:
"Alquilo" se refiere a un resto orgánico saturado lineal o ramificado que consiste en átomos de carbono e hidrógeno. Los ejemplos de grupos alquilo adecuados tienen de 1 a 6 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono, e incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo e isobutilo. El alquilo puede estar opcionalmente sustituido por un halógeno (preferiblemente F), -OH u -Oalquilo (preferiblemente -OMe).
"Hal" o "halógeno" se refiere a F, Cl, Br e I.
"Anillo de 3 a 8 miembros" se refiere a un anillo de tres, cuatro, cinco, seis, siete u ocho miembros en donde ninguno, uno o más de los átomos de carbono en el anillo se han reemplazado por 1 o 2 (para el anillo de tres miembros), 1, 2 o 3 (para el anillo de cuatro miembros), 1,2, 3 o 4 (para el anillo de cinco miembros) o 1,2, 3, 4 o 5 (para el anillo de seis miembros) 1,2, 3, 4, 5 o 6 (para el anillo de siete miembros) o 1,2, 3, 4, 5, 6 o 7 (para el anillo de ocho miembros) de los mismos o diferentes heteroátomos, por lo que los heteroátomos se seleccionan de O, N y S.
Los compuestos de la presente invención que tienen uno o más carbonos ópticamente activos pueden existir como racematos y mezclas racémicas (que incluyen mezclas en todas las proporciones), estereoisómeros (que incluyen mezclas diastereoméricas y diastereómeros individuales, mezclas enantioméricas y enantiómeros individuales, mezclas de confórmeros y confórmeros individuales), tautómeros, atropisómeros y rotámeros. Todas las formas isoméricas están incluidas en la presente invención. Los compuestos descritos en esta invención que contienen dobles enlaces olefínicos incluyen isómeros geométricos E y Z. También se incluyen en esta invención todas las sales, profármacos, polimorfos, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables.
El término “polimorfos” se refiere a las diversas estructuras cristalinas de los compuestos de la presente invención. Esto puede incluir, pero no se limita a, morfologías cristalinas (y materiales amorfos) y todas las formas de red cristalina. Las sales de la presente invención pueden ser cristalinas y pueden existir como más de un polimorfo.
Los solvatos, hidratos, así como las formas anhidras de la sal también están abarcados por la invención. El disolvente incluido en los solvatos no está particularmente limitado y puede ser cualquier disolvente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos incluyen agua y alcoholes C<1-4>(tales como metanol o etanol).
Las "sales farmacéuticamente aceptables" se definen como derivados de los compuestos descritos en donde el compuesto original se modifica fabricando sales de ácido o base del mismo. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto original formadas, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, dichas sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como, pero que no se limitan a, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como, pero que no se limitan a, ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluensulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isetiónico, y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o base libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Los disolventes orgánicos incluyen, pero no se limitan a, medios no acuosos como éteres, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se pueden encontrar listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18<a>ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, pág. 1445, cuya descripción se incorpora por la presente por referencia.
"Farmacéuticamente aceptable" se define como aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.
Los pacientes o sujetos en la presente invención son normalmente animales, particularmente mamíferos, más particularmente seres humanos.
"Tau", como se usa en la presente memoria, se refiere a una proteína de unión a microtúbulos altamente soluble que se encuentra principalmente en neuronas e incluye las 6 isoformas principales, formas escindidas o truncadas, y otras formas modificadas tales como las que surgen de la fosforilación, glucosilación, glicación, prolil isomerización, nitración, acetilación, poliaminación, ubiquitinación, sumoilación y oxidación.
"Tau agregada" se refiere a monómeros agregados de péptidos o proteínas de Tau que se pliegan en las estructuras oligoméricas o poliméricas.
"Ovillos neurofibrilares" (NFT) como se usa en la presente memoria se refiere a agregados insolubles de la proteína Tau hiperfosforilada que contiene filamentos helicoidales emparejados (PHF) y filamentos rectos. Su presencia es una marca distintiva de la EA y otras enfermedades conocidas como tauopatías.
Los términos "anticuerpo" o "anticuerpos" como se usan en la presente memoria son un término reconocido en la técnica y se entiende que se refieren a moléculas o fragmentos activos de moléculas que se unen a antígenos conocidos, o se refieren particularmente a moléculas de inmunoglobulina y a porciones de unión a antígeno de moléculas de inmunoglobulina. En particular, la mezcla de la presente invención incluye los compuestos de la presente invención y anticuerpos anti-Tau o anti-Abeta.
Se entiende que el término "anticuerpo funcional equivalente o parte funcional del mismo" como se usa en la presente memoria se refiere a una molécula equivalente o fragmentos activos de una molécula que se une a un antígeno conocido, o se refiere particularmente a una molécula de inmunoglobulina y a porciones de unión a antígeno de una molécula de inmunoglobulina y tiene esencialmente la misma actividad (biológica) que el anticuerpo del que se deriva.
La "vacuna" o "vacunas" descritas en las mezclas de la presente invención, son en particular vacunas de Tau o Abeta.
Las definiciones y definiciones preferidas dadas en la sección "Definición" se aplican a todas las realizaciones descritas a continuación a menos que se indique lo contrario.
Descripción de las figuras
Figura 1: Tau en CSF cuantificada en ratones rTg4510 tratados con el ejemplo 12 y el ejemplo 45.
Figura 2: Cuantificación del plegamiento incorrecto de Tau en ratones rTg4510 tratados con el ejemplo 12 y el ejemplo 45.
Figura 3: Cuantificación de Iba1 (A) y CD68 (B) en ratones rTg4510 tratados con el ejemplo 12 y el ejemplo 45. Figura 4: Reducción del plegamiento incorrecto de Tau en NFT en secciones de cerebro humano con EA y PSP con el ejemplo 45.
Figura 5: Autorradiografía de alta resolución en secciones de cerebro humano con EA usando 3H - ejemplo 45 (A) y 3H- ejemplo 45 y ejemplo 45 frío (B).
Descripción detallada de la invención
Los compuestos de la presente invención se describirán a continuación. Debe entenderse que también se contemplan todas las combinaciones posibles de las siguientes definiciones.
En una realización, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):
y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, profármacos, hidratos, solvatos y polimorfos de los mismos.
Una realización preferida del compuesto de fórmula (I) es
Una realización preferida adicional del compuesto de fórmula (I) es
Una realización preferida adicional del compuesto de fórmula (I) es
En una realización preferida adicional, el compuesto de fórmula (I) es
incluso más preferiblemente, el compuesto de fórmula (I) es
Incluso más preferiblemente
Las siguientes definiciones de A se aplican a los compuestos de fórmula (I) y sus realizaciones preferidas. A se selecciona del grupo que consiste en
en donde G se selecciona de un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina.
Por lo tanto,
cubre las siguientes realizaciones preferidas
Y por lo tanto,
cubre las siguientes realizaciones
En una realización preferida,
se selecciona de
Se pueden prever los anillos siguientes:
y
Las realizaciones preferidas incluyen
En estas fórmulas estructurales, el anillo G no se muestra completamente, sino que se indica únicamente mediante los enlaces parciales
En una realización preferida, A se selecciona de
En otra realización preferida, A es
En una realización preferida, A es
En una realización más preferida, A se selecciona de
y
En una realización más preferida, A se selecciona de
y
En una realización preferida adicional, A se selecciona de
En una realización aún más preferida, A es
En las definiciones anteriores de A y las realizaciones preferidas de la misma,
pueden unirse a Q en cualquier posición disponible.
En las definiciones anteriores de A y las realizaciones preferidas de la misma,
está sustituido con uno o varios sustituyentes Rj.
En las definiciones anteriores de A y las realizaciones preferidas de la misma,
puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes R.
Las siguientes definiciones se aplican a la fórmula (I) y sus realizaciones preferidas, según sea apropiado.
B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa. Más preferiblemente B es NRa, lo más preferiblemente NH. E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S. Puesto que el anillo contiene E y V es insaturado, al menos uno de E y V es N.
J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1, más preferiblemente O.
Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1. Preferiblemente, Q se selecciona del grupo que consiste en N y CH, más preferiblemente Q es N.
Y se selecciona del grupo que consiste en CZ y N. Más preferiblemente Y se selecciona del grupo que consiste en CH y N. Incluso más preferiblemente Y es CH. En una realización, si Y es N y Y1, Y2 y Y3 son CZ, B es N-alquilo u O, preferiblemente B es N-alquilo.
Y1 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N. Preferiblemente Y1 es CZ.
Y2 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N. Preferiblemente Y2 es CZ.
Y3 se selecciona del grupo que consiste en CZ y N. Preferiblemente Y3 es CZ.
Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno (preferiblemente F), O-alquilo, alquilo y CN, preferiblemente H, halógeno (preferiblemente F) y O-alquilo. En una realización preferida, una Z es independientemente halógeno (preferiblemente F), u O-alquilo y la otra Z es H. En una realización más preferida, una Z es halógeno (preferiblemente F) y la otra Z es H.
R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
y -NR3R4, preferiblemente R se selecciona del grupo que consiste en
y -NR3R4, más preferiblemente R es
, tal como
En estas realizaciones,
es preferiblemente
Ra se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo, más preferiblemente H y Me, incluso más preferiblemente H. Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg (por ejemplo, que están unidos a los mismos átomos del anillo o adyacentes) pueden unirse para formar un anillo de 3 a 8 miembros. Más preferiblemente Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg son independientemente H o alquilo, incluso más preferiblemente H.
Rj se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF<3>, -CN, -NR3R4,
en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d. Más preferiblemente Rj se selecciona del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -NR3R4 y
incluso más preferiblemente Rj es
R1 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo, preferiblemente alquilo, más preferiblemente CH<3>.
R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R2 son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a 6 miembros. En una realización R2 es alquilo opcionalmente sustituido, en otra realización R2 es F, en una realización adicional R2 es =O.
R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo. En una realización R3 o R4 es alquilo opcionalmente sustituido y el otro es H. En otra realización R3 es alquilo y R4 es alquilo opcionalmente sustituido. En otra forma de realización R3 y R4 son H.
R5 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo, en una realización R5 es H, en otra realización R5 es alquilo. n es 0, 1,2, 3 o 4, preferiblemente n es 0 o 1, más preferiblemente n es 0.
p es 1 o 2, más preferiblemente 1.
r y s son independientemente 0, 1,2 o 3.
t y u son independientemente 1,2 o 3.
Los compuestos preferidos de fórmula (I) son
��
Los compuestos preferidos también se ilustran en los ejemplos.
Cualquier combinación de las realizaciones, realizaciones preferidas y realizaciones más preferidas descritas en la presente memoria también se prevé en la presente invención.
Composiciones farmacéuticas
Aunque es posible que los compuestos de la presente invención se administren solos, es preferible formularlos en una composición farmacéutica de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar. Por tanto, la invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) opcionalmente mezclado con un vehículo, diluyente, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables son bien conocidos en la técnica farmacéutica, y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed., Mack Publishing Co., Nueva Jersey (1975). El excipiente farmacéutico puede seleccionarse con respecto a la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica estándar. El excipiente debe ser aceptable en el sentido de no ser perjudicial para el receptor del mismo.
Los excipientes farmacéuticamente útiles que pueden usarse en la formulación de la composición farmacéutica de la presente invención pueden comprender, por ejemplo, transportes, vehículos, diluyentes, disolventes tales como alcoholes monohídricos tales como etanol, isopropanol y alcoholes polihídricos tales como glicoles y aceites comestibles tales como aceite de soja, aceite de coco, aceite de oliva, aceite de cártamo, aceite de semilla de algodón, ésteres oleosos tales como oleato de etilo, miristato de isopropilo, ligantes, adyuvantes, solubilizantes, agentes espesantes, estabilizantes, desintegrantes, deslizantes, agentes lubricantes, agentes tamponantes, emulsionantes, agentes humectantes, agentes de suspensión, agentes edulcorantes, colorantes, aromatizantes, agentes de recubrimiento, conservantes, antioxidantes, agentes de procesamiento, modificadores y potenciadores de la liberación de fármacos tales como fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, monosacáridos, disacáridos, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, dextrosa, hidroxipropil-p-ciclodextrina, polivinilpirrolidona, ceras de bajo punto de fusión y resinas de intercambio iónico.
Las vías para la administración (liberación) de los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a, una o más de: oral (por ejemplo, como un comprimido, cápsula o como una disolución ingerible), tópica, mucosa (por ejemplo, como un pulverizador nasal o aerosol para inhalación), nasal, parenteral (por ejemplo, mediante una forma inyectable), gastrointestinal, intraespinal, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intrauterina, intraocular, intradérmica, intracraneal, intratraqueal, intravaginal, intracerebroventricular, intracerebral, subcutánea, oftálmica (que incluye intravítrea o intracameral), transdérmica, rectal, bucal, epidural y sublingual.
Por ejemplo, los compuestos pueden administrarse por vía oral en forma de comprimidos, cápsulas, óvulos, elixires, disoluciones o suspensiones, que pueden contener agentes aromatizantes o colorantes, para aplicaciones de liberación inmediata, retardada, modificada, sostenida, pulsada o controlada.
Los comprimidos pueden contener excipientes tales como celulosa microcristalina, lactosa, citrato sódico, carbonato cálcico, fosfato cálcico dibásico y glicina, desintegrantes tales como almidón (preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), glicolato sódico de almidón, croscarmelosa sódica y ciertos silicatos complejos, y ligantes de granulación tales como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), sacarosa, gelatina y goma arábiga. Adicionalmente, se pueden incluir agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato de glicerilo y talco. También se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina. Los excipientes preferidos a este respecto incluyen lactosa, almidón, una celulosa, azúcar de leche o polietilenglicoles de alto peso molecular. Para suspensiones acuosas y/o elixires, el agente puede combinarse con diversos agentes edulcorantes o aromatizantes, materias colorantes o tintes, con agentes emulsionantes y/o de suspensión y con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol y glicerina, y combinaciones de los mismos.
Si los compuestos de la presente invención se administran por vía parenteral, entonces los ejemplos de dicha administración incluyen uno o más de: administrar los compuestos por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular o subcutánea; y/o usando técnicas de infusión. Para la administración parenteral, los compuestos se usan mejor en forma de una disolución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo, sales suficientes o glucosa para hacer que la disolución sea isotónica con la sangre. Las disoluciones acuosas deben tamponarse adecuadamente (preferiblemente a un pH de 3 a 9), si es necesario. La preparación de formulaciones parenterales adecuadas en condiciones estériles se realiza fácilmente mediante técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica.
Como se indica, los compuestos de la presente invención pueden administrarse intranasalmente o por inhalación y se liberan convenientemente en forma de un inhalador de polvo seco o una presentación de pulverización en aerosol desde un recipiente presurizado, bomba, pulverizador o nebulizador con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, un hidrofluoroalcano tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA134AT) o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano (HFA 227EA), dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para liberar una cantidad medida. El recipiente presurizado, bomba, pulverizador o nebulizador puede contener una disolución o suspensión del compuesto activo, por ejemplo, usando una mezcla de etanol y el propulsor como disolvente, que puede contener adicionalmente un lubricante, por ejemplo trioleato de sorbitán. Las cápsulas y cartuchos (hechos, por ejemplo, de gelatina) para su uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para que contengan una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden administrarse en forma de supositorio o pesario, o pueden aplicarse tópicamente en forma de gel, hidrogel, loción, disolución, crema, pomada o polvo secante. Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse dérmica o transdérmicamente, por ejemplo, mediante el uso de un parche cutáneo.
También se pueden administrar por vía pulmonar o rectal. También se pueden administrar por vía ocular. Para uso oftálmico, los compuestos pueden formularse como suspensiones micronizadas en disolución salina estéril isotónica, con el pH ajustado, o, preferiblemente, como disoluciones en disolución salina estéril isotónica, con el pH ajustado, opcionalmente en combinación con un conservante tal como un cloruro de benzalconio. Alternativamente, pueden formularse en una pomada tal como vaselina.
Para la aplicación tópica a la piel, los compuestos de la presente invención pueden formularse como una pomada adecuada que contiene el compuesto activo suspendido o disuelto en, por ejemplo, una mezcla con uno o más de los siguientes: aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, cera emulsionante y agua. Alternativamente, se pueden formular como una loción o crema adecuada, suspendida o disuelta en, por ejemplo, una mezcla de uno o más de los siguientes: aceite mineral, monoestearato de sorbitán, un polietilenglicol, parafina líquida, polisorbato 60, cera de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
Normalmente, un médico determinará la dosis real que será la más adecuada para un sujeto individual. El nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier individuo particular pueden variarse y dependerán de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el modo y el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad de la afección particular y el individuo sometido a terapia.
Una dosis propuesta de los compuestos según la presente invención para la administración a un ser humano (de aproximadamente 70 kg de peso corporal) es de 0,1 mg a 3 g, de 0,1 mg a 2 g, de 0,1 mg a 1 g, preferiblemente de 1 mg a 500 mg del ingrediente activo por dosis unitaria. La dosis unitaria puede administrarse, por ejemplo, de 1 a 4 veces al día. La dosis dependerá de la vía de administración. Se apreciará que puede ser necesario realizar variaciones rutinarias en la dosificación dependiendo de la edad y el peso del paciente, así como de la gravedad de la afección que se va a tratar. La dosis y la vía de administración precisas serán finalmente a criterio del médico o veterinario encargado.
Los compuestos de la invención también pueden usarse en combinación con otros agentes terapéuticos. Cuando un compuesto de la invención se usa en combinación con un segundo agente terapéutico activo contra la misma enfermedad, la dosis de cada compuesto puede diferir de la que se usa con el compuesto solo.
Las combinaciones a las que se ha hecho referencia anteriormente pueden presentarse convenientemente para su uso en forma de una formulación farmacéutica. Los componentes individuales de dichas combinaciones pueden administrarse secuencial o simultáneamente en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas por cualquier vía conveniente. Cuando la administración es secuencial, se puede administrar primero el compuesto de la invención o el segundo agente terapéutico. Cuando la administración es simultánea, la combinación puede administrarse en la misma composición farmacéutica o en una composición farmacéutica diferente. Cuando se combinan en la misma formulación, se apreciará que los dos compuestos deben ser estables y compatibles entre sí y con los demás componentes de la formulación. Cuando se formulan por separado, pueden proporcionarse en cualquier formulación conveniente, convenientemente de tal manera que se conocen para dichos compuestos en la técnica.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden producirse de una manera conocida per se por el experto en la técnica como se describe, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed., Mack Publishing Co., Nueva Jersey (1975).
Las enfermedades o afecciones que pueden tratarse, aliviarse o prevenirse con los compuestos de la presente invención son trastornos o anomalías asociadas con agregados de proteína Tau tales como trastornos neurodegenerativos. Los ejemplos de enfermedades y afecciones que pueden tratarse, aliviarse o prevenirse están causados por o asociados con la formación de lesiones neurofibrilares. Esta es la patología cerebral predominante en la tauopatía. Las enfermedades y afecciones comprenden un grupo heterogéneo de enfermedades o afecciones neurodegenerativas, que incluyen enfermedades o afecciones que muestran coexistencia de patologías Tau y amiloides.
Los ejemplos de las enfermedades y afecciones que pueden tratarse, aliviarse o prevenirse incluyen, pero no se limitan a, enfermedad de Alzheimer (EA), EA familiar, PART (tauopatía primaria relacionada con la edad), enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, demencia pugilística, síndrome de Down, enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS), miositis de cuerpos de inclusión, angiopatía amiloide cerebral de proteínas priónicas, lesión cerebral traumática (TBI), esclerosis lateral amiotrófica (ELA), complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de neuronas motoras no guamaniana con ovillos neurofibrilares, enfermedad de granos argirofílicos, degeneración corticobasal (CBD), ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, demencia frontotemporal con parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17), enfermedad de Hallervorden-Spatz, atrofia sistémica múltiple (MSA), enfermedad de Niemann-Pick tipo C, degeneración palido-ponto-nigral, enfermedad de Pick (PiD), gliosis subcortical progresiva, parálisis supranuclear progresiva (PSP), panencefalitis esclerosante subaguda, demencia predominante en ovillos, parkinsonismo posencefalítico, distrofia miotónica, panencefalopatía de esclerosis subaguda, mutaciones en LRRK2, encefalopatía traumática crónica (CET), demencia familiar británica, demencia familiar danesa, otras degeneraciones lobulares frontotemporales, parkinsonismo de Guadalupe, neurodegeneración con acumulación de hierro en el cerebro, retraso mental relacionado con SLC9A6, Tauopatía de la materia blanca con inclusiones gliales globulares, epilepsia, demencia con cuerpos de Lewy (LBD), deterioro cognitivo leve (MCI), esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con VIH, diabetes de aparición en adultos, amiloidosis cardiaca senil, glaucoma, accidente cerebrovascular isquémico, psicosis en EA y enfermedad de Huntington. Preferiblemente, las enfermedades y afecciones que pueden tratarse, aliviarse o prevenirse incluyen enfermedad de Alzheimer (EA), así como otras tauopatías neurodegenerativas tales como enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, demencia pugilística, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), enfermedad de granos argirofílicos, degeneración corticobasal (CBD), demencia frontotemporal con parkinsonismo ligada al cromosoma 17 (FTDP-17), enfermedad de Pick (PiD), parálisis supranuclear progresiva (PSP), demencia predominante en ovillos, complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de Halervorden-Spatz, encefalopatía traumática crónica (CET), lesión cerebral traumática (TBl) y otra degeneración lobular frontotemporal. Más preferiblemente, la enfermedad de Alzheimer (EA), la degeneración corticobasal (CBD), la enfermedad de Pick (PiD) y la parálisis supranuclear progresiva (PSP).
Los compuestos de la presente invención también se pueden emplear para disminuir la agregación de proteínas, en particular la agregación de Tau. La capacidad de un compuesto para disminuir la agregación de Tau puede determinarse, por ejemplo, usando el ensayo de ThT (Hudson et al., FEBS J., 2009, 5960-72).
Los compuestos de la invención pueden usarse en el tratamiento de una amplia gama de trastornos en donde el proceso de neuroinflamación está asociado con plegamiento incorrecto y/o agregación patológica de la proteína Tau.
Los compuestos de la presente invención pueden usarse como referencia analítica o herramienta de cribadoin vitropara la caracterización de tejido con patología de Tau y para la prueba de compuestos dirigidos a la patología de Tau en dicho tejido.
Los compuestos de la presente invención pueden usarse como fotosondas para la reticulación del compuesto a la diana, para su uso en ensayos de cribadoin vitropara la identificación y caracterización del modo de acción del compuesto, incluyendo el mapeo del sitio de unión. A continuación, se presentan algunos ejemplos de fotosondas de compuestos de la presente invención:
Los compuestos según la presente invención también se pueden proporcionar en forma de una mezcla con al menos un compuesto biológicamente activo adicional y/o un vehículo y/o un diluyente y/o un excipiente farmacéuticamente aceptable. El compuesto y/o el compuesto biológicamente activo adicional están presentes preferiblemente en una cantidad terapéuticamente eficaz.
La naturaleza del compuesto biológicamente activo adicional dependerá del uso previsto de la mezcla. La sustancia o compuesto biológicamente activo adicional puede ejercer su efecto biológico mediante el mismo mecanismo o un mecanismo similar al compuesto según la invención o mediante un mecanismo de acción no relacionado o mediante una multiplicidad de mecanismos de acción relacionados y/o no relacionados.
Generalmente, el compuesto biológicamente activo adicional puede incluir potenciadores de la transmisión de neutrones, fármacos psicoterapéuticos, inhibidores de la acetilcolinesterasa, bloqueadores de los canales de calcio, aminas biogénicas, tranquilizantes de benzodiazepina, potenciadores de la síntesis, almacenamiento o liberación de acetilcolina, agonistas del receptor postsináptico de acetilcolina, inhibidores de la monoamina oxidasa A o B, antagonistas del receptor N-metil-D-aspartato de glutamato, fármacos antiinflamatorios no esteroideos, antioxidantes y antagonistas del receptor serotoninérgico. En particular, el compuesto biológicamente activo adicional puede seleccionarse del grupo que consiste en un compuesto usado en el tratamiento de amiloidosis, compuestos contra estrés oxidativo, compuestos antiapoptóticos, quelantes metálicos, inhibidores de la reparación de ADN tales como pirenzepina y metabolitos, ácido 3-amino-1-propanosulfónico (3APS), 1,3-propanodisulfonato (1,3PDS), activadores de a-secretasa, inhibidores de p y Y-secretasa, inhibidores de glucógeno sintasa quinasa 3, inhibidores de O-glcnacasa (OGA), neurotransmisor, rompedores de láminas p, atrayentes para componentes celulares de aclaramiento/agotamiento de beta amiloide, inhibidores de beta amiloide truncada en el extremo N que incluyen beta amiloide piroglutamatado 3-42, moléculas antiinflamatorias o inhibidores de colinesterasa (ChEl) tales como tacrina, rivastigmina, donepezilo y/o galantamina, agonistas de M1, otros fármacos que incluyen cualquier fármaco modificador de amiloide o Tau y suplementos nutricionales, un anticuerpo, que incluye cualquier anticuerpo funcionalmente equivalente o partes funcionales del mismo, o una vacuna.
En una realización adicional, las mezclas según la invención pueden comprender niacina o memantina junto con un compuesto según la presente invención y, opcionalmente, un vehículo y/o diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otra realización más de la invención se proporcionan mezclas que comprenden como compuesto biológicamente activo adicional “antipsicóticos atípicos” tales como, por ejemplo clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol u olanzapina para el tratamiento de síntomas psicóticos positivos y negativos que incluyen alucinaciones, delirios, trastornos del pensamiento (manifestados por incoherencia marcada, descarrilamiento, tangencialidad) y comportamiento extraño o desorganizado, así como anhedonia, afecto aplanado, apatía y retraimiento social, junto con un compuesto según la invención y, opcionalmente, un vehículo y/o un diluyente y/o un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otros compuestos que pueden usarse adecuadamente en mezclas en combinación con el compuesto según la presente invención se describen, por ejemplo, en la patente internacional WO 2004/058258 (véanse especialmente las páginas 16 y 17), que incluyen dianas farmacológicas terapéuticas (páginas 36 a 39), ácidos alcanosulfónicos y ácidos alcanolsulfúricos (páginas 39 a 51), inhibidores de colinesterasa (páginas 51 a 56), antagonistas de receptores NMDA (páginas 56 a 58), estrógenos (páginas 58 a 59), fármacos antiinflamatorios no esteroideos (páginas 60 y 61), antioxidantes (páginas 61 y 62), agonistas de receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR) (páginas 63 a 67), agentes hipocolesterolemiantes (páginas 68 a 75), inhibidores de amiloide (páginas 75 a 77), inhibidores de la formación de amiloide (páginas 77 a 78), quelantes metálicos (páginas 78 y 79), antipsicóticos y antidepresivos (páginas 80 a 82), suplementos nutricionales (páginas 83 a 89) y compuestos que aumentan la disponibilidad de sustancias biológicamente activas en el cerebro (véanse las páginas 89 a 93) y profármacos (páginas 93 y 94), cuyo documento se incorpora en la presente memoria por referencia.
La invención también incluye todas las variaciones isotópicas adecuadas de los compuestos de la invención. Una variación isotópica del compuesto de la invención se define como una en donde al menos un átomo está reemplazado por un átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica encontrada habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, azufre, flúor y cloro tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 35S, 18F y 36Cl respectivamente. Ciertas variaciones isotópicas de la invención, por ejemplo, aquellas en donde se incorpora un isótopo radiactivo tal como 3H o 14C, son útiles en estudios de distribución tisular de fármacos y/o sustratos. Los isótopos tritiado, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad. Los compuestos marcados con 18F son particularmente adecuados para aplicaciones de formación de imágenes tales como PET. Además, la sustitución con isótopos tales como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semividain vivoo requisitos de dosificación reducidos y se pueden preferir en algunas circunstancias. Las variaciones isotópicas de los compuestos de la invención pueden prepararse generalmente mediante procedimientos convencionales tales como mediante los procedimientos ilustrativos o mediante las preparaciones descritas en los ejemplos y preparaciones a continuación usando variaciones isotópicas apropiadas de reactivos adecuados.
Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse mediante uno de los métodos generales mostrados en los siguientes esquemas. Estos métodos se dan únicamente con fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes.
Esquemas sintéticos generales para la preparación de bloques de construcción de esta invención:
Esquema 1
Boc20
base
diso vente
Z = H, F, Cl, Me, OMe 2. base Z = H, F,C1, Me, OMe Z = H, F.CI, Me. OMe
R = H, Me 3. disolvente
3. disolvente
El calentamiento de derivados de fenilhidrazina disponibles comercialmente (Z = H, F, Cl, Me u OMe; Ra = H, CH<3>) con 4-oxopiperidina-1-carboxilato de íerc-butilo disponible comercialmente en un disolvente adecuado en condiciones ácidas (síntesis de indol de Fischer) proporcionó los bloques de construcción de 2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol tricíclicos después de purificación. En el caso de que se usaran derivados de fenilhidrazina sustituidos en 2 o 3, los regioisómeros se separaron por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). Los bloques de construcción tricíclicos que llevan un resto NH en el anillo indol se tratan adicionalmente con Boc<2>O para proteger selectivamente el resto amina secundaria alifática y se obtuvieron después de la purificación.
Pd al 10%/C, basedisolvente
Para evitar la formación de regioisómeros empleando derivados de fenilhidrazina sustituidos en 2 o 3, se usaron los correspondientes derivados de fenilhidrazina que tienen un átomo de halógeno adicional (Br, Cl) adyacente al resto hidrazina. Así, síntesis de indol de Fischer con 4-oxopiperidina-1-carboxilato de íerc-butilo disponible comercialmente en un disolvente adecuado en condiciones ácidas proporcionó sólo un único producto con un átomo de halógeno adicional después de purificación. La amina secundaria alifática se protegió con Boc y los productos se obtuvieron después de la purificación. El átomo de halógeno adicional se eliminó después por hidrogenación con un catalizador de paladio usando una base adecuada en un disolvente apropiado para proporcionar los bloques de construcción de 2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pir¡do[4,3-£>]¡ndol tricíclicos deseados después de purificación.
El resto NH del resto indol se trató después con yoduro de metilo o cloruro de tosilo en un disolvente apropiado usando una base adecuada para proporcionar los derivados de N-metilo o N-tosilo después de la purificación. El grupo protector Boc se eliminó mediante tratamiento ácido en un disolvente apropiado para proporcionar los bloques de construcción de 2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol tricíclicos deseados después de purificación. En caso de que no hubiera tratamiento con base, se obtuvieron las sales correspondientes.
Los derivados de fluoropiridina disponibles comercialmente con el átomo F en la posición 3, 4 o 5 y un átomo de halógeno adicional (Br, Cl) en la posición 2 se trataron con metilhidrazina en un disolvente apropiado para proporcionar los derivados de N-metilhidrazina correspondientes después de la purificación. La síntesis de indol de Fischer con 4oxopiperidina-1 -carboxilato de ferc-butilo disponible comercialmente en un disolvente adecuado en condiciones ácidas proporcionó los derivados de 9-metil-6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirrolo[2,3-b:4,5-c']dipiridina tricíclicos deseados después de purificación.
El calentamiento de derivados de fenilhidrazina disponibles comercialmente (Z = F) con 3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo disponible comercialmente en un disolvente adecuado en condiciones ácidas (síntesis de indol de Fischer) proporcionó los derivados tricíclicos de 5,6,7,8,9,10-hexahidro-7,10-epiminociclohepta[b]indol después de purificación. En el caso de derivados de fenilhidrazina sustituidos en 2 o 3, los regioisómeros deben separarse por cromatografía de fluidos supercríticos (SFC). El resto amina secundaria alifática se protegió entonces con Boc y los productos se obtuvieron después de la purificación. El resto NH del resto indol se trató después con cloruro de tosilo en un disolvente apropiado usando una base adecuada para proporcionar los derivados de N-tosilo después de la purificación. El grupo protector Boc se eliminó mediante tratamiento ácido en un disolvente apropiado para proporcionar los bloques de construcción de 5,6,7,8,9,10-hexahidro-7,10-epiminociclohepta[b]indol tricíclicos deseados después de purificación. En caso de que no hubiera tratamiento con base, se obtuvieron las sales correspondientes.
Los derivados de éster fenilborónico disponibles comercialmente (Z = F) se trataron con N-hidroxiftalimida y cloruro de cobre (I) y piridina en un disolvente apropiado para proporcionar los derivados de hidroxilamina correspondientes que contenían un grupo protector de ftalimida después de purificación. El grupo protector de ftalimida se escindió con hidrato de hidrazina y los derivados de hidroxilamina correspondientes se obtuvieron como sales. El calentamiento de los derivados de hidroxilamina con 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decano disponible comercialmente en un disolvente adecuado en condiciones ácidas (síntesis de indol de Fischer) proporcionó los derivados tricíclicos de 1,2,3,4-tetrahidrobenzofuro[3,2-c]piridina después de purificación.
Esquema 7
Derivados de benzo[d]tiazol (G = Ph) o benzo[d]oxazol (G = Ph) disponibles comercialmente que contenían dos átomos de halógeno (Br, Cl) se trataron con aminas primarias o secundarias en un disolvente apropiado y con una base adicional. El grupo saliente X se reemplazó por medio de sustitución nucleófila por las aminas primarias o secundarias para proporcionar los derivados de benzo[d]tiazol o benzo[a(]]oxazol sustituidos con amino correspondientes después de purificación. En el caso de aminas menos reactivas, se obtuvieron los derivados de benzo[d]tiazol o benzo[d]oxazol deseados realizando la reacción de sustitución nucleófila en condiciones de microondas. Se trataron los correspondientes derivados de tiazolo[5,4-¿>]piridina (G = Py) y tiazolo[4,5-¿>]piridina (G = Py) que contenían dos átomos de halógeno (Br, Cl) con morfolina en un disolvente apropiado y con una base adicional para proporcionar los correspondientes derivados de morfolino-tiazolo[5,4-¿>]piridina (G = Py) y morfolino-tiazolo[4,5-.¿>]piridina (G = Py) después de purificación. Se trataron los correspondientes derivados de tiazolo[5,4-d]pirimidina (G = pirimidina) que contenían dos átomos de halógeno (Br, Cl) con morfolina en un disolvente apropiado y con una base adicional para proporcionar los correspondientes derivados de morfolino-tiazolo[5,4-a(]pirimidina (G = pirimidina) después de purificación.
Los derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina disponibles comercialmente que contenían dos átomos de halógeno (Br, Cl) se trataron con morfolina en condiciones de microondas para proporcionar los productos de desplazamiento nucleófilo después de la purificación.
Los derivados de 3,6-dibromopiridazina y 2,5-dibromopirazina disponibles comercialmente que contenían dos átomos de bromo se trataron con morfolina, 3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano, u 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octano en condiciones de microondas para proporcionar los productos de desplazamiento nucleófilo después de purificación.
Se trataron derivados de 2,7-dicloroquinolina, 2-bromo-6-cloro-1,7-naftiridina, 2-bromo-6-cloro-1,8-naftiridina y 2,6-dicloroquinolina disponibles comercialmente que contenían dos átomos de halógeno (Br, Cl) con morfolina en condiciones de microondas para proporcionar los productos de desplazamiento nucleófilo después de la purificación.
Esquema sintético general para la preparación de compuestos de esta invención:
Esquema 9
Los bloques de construcción tricíclicos con B = NCH<3>o B = O se acoplaron con derivados de benzo[d]tiazol o benzo[d]oxazol sustituidos con amino, o derivados de piridina sustituidos mediante química de paladio con un catalizador de paladio adecuado (aducto de cloro-(2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil]paladio(II)-éter metil-t-butílico; Pd(RuPhos) G1), ligando (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo; RuPhos) y base (bis(trimetilsilil)amida de litio; LiHMDS) en un disolvente adecuado (tetrahidrofurano; THF) para proporcionar los compuestos deseados de fórmula (I) después de purificación.
Esquema 10
Los bloques de construcción tricíclicos que contienen un grupo W-tosilo en el resto indol/azaindol se acoplaron con benzo[d]tiazol sustituido con amino, benzo[d]oxazol, tiazolo[5,4-¿>]piridina (G = Py), derivados de tiazolo[4,5-¿>]piridina (G = Py), tiazolo[5,4-d]pirimidina (G = pirimidina), o derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina sustituidos con amino, o piridina sustituida con amino (L = Py), pirazina (L = pirazina), piridazina (L = piridazina), derivados de pirimidina (L = pirimidina), o derivados de isoquinolina, naftiridina, quinazolina sustituidos con amino mediante química de paladio con un catalizador de paladio adecuado (tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0); Pd2(dba)3), ligando (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo; RuPhos) y base (ferc-butóxido sódico; NaOtBu) en un disolvente adecuado (1,4-dioxano) para proporcionar los compuestos deseados de fórmula (I) después de purificación. Alternativamente, los bloques de construcción tricíclicos que contienen un grupo N-tosilo en el resto indol/azaindol se acoplaron con benzo[a(|tiazol sustituido con amino, benzo[a(|oxazol, tiazolo[5,4-¿>]piridina (G = Py), derivados de tiazolo[4,5-¿>]piridina (G = Py), tiazolo[5,4-d]pirimidina (G = pirimidina), o derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina sustituidos con amino, o piridina sustituida con amino (L = Py), pirazina (L = pirazina), piridazina (L = piridazina), derivados de pirimidina (L = pirimidina), o derivados de isoquinolina, naftiridina, quinazolina sustituidos con amino mediante química de paladio con un catalizador de paladio adecuado (tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0); ligando Pd2(dba)3) (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo; RuPhos) y una base más débil (carbonato de cesio; Cs2CO3) en un disolvente adecuado (1,4-dioxano) para proporcionar los compuestos protegidos con N-tosilo después de purificación. El grupo protector tosilo se elimina a continuación usando una base adecuada (carbonato de cesio; Cs2CO3) en un disolvente adecuado (2-metil THF, metanol) a temperatura elevada (reflujo) para proporcionar los compuestos deseados de fórmula (I) después de purificación.
Los bloques de construcción tricíclicos que contienen un grupo N-tosilo en el resto indol se acoplaron con benzo[d|tiazol di-halogenado y benzo[d|oxazol dihalogenado con una base adecuada (carbonato potásico; K<2>CO<3>) en un disolvente adecuado (DMF) para proporcionar los productos de desplazamiento nucleófilo. El producto se acopló entonces mediante química de paladio con un catalizador de paladio adecuado (tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0); Pd2(dba)3), ligando (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo; RuPhos) y base (terc-butóxido sódico; NaOtBu) en un disolvente adecuado (1,4-dioxano) para proporcionar los compuestos deseados de fórmula (I) después de la purificación.
Esquema sintético general para la preparación de compuestos marcados con tritio de esta invención:
El catalizador se añadió a un recipiente de reacción de tritio, seguido de una disolución de un compuesto de la presente invención en diclorometano. El recipiente se unió al conducto de tritio y se presurizó al gas tritio a -200 °C. La disolución se agitó durante 8 horas a temperatura ambiente, se enfrió a -200 °C y se eliminó el exceso de gas. El matraz de reacción se enjuagó con metanol y la fase orgánica combinada se evaporó al vacío. El material en bruto se purificó por HPLC, la fase móvil se evaporó al vacío y el producto se volvió a disolver en etanol absoluto. La actividad específica se determinó por espectrometría de masas.
La desagregación de Tau K18 y Tau de longitud completa (fl) puede medirse usando cualquier ensayo adecuado conocido en la técnica. Se describe un ensayo estándarin vitropara medir la capacidad de desagregación.
Ejemplos
Todos los reactivos y disolventes se obtuvieron de fuentes comerciales y se usaron sin purificación adicional. Los espectros de 1H RMN se registraron en espectrómetros Bruker AV 300 y 400 MHz en disolventes deuterados. Los desplazamientos químicos (5) se presentan en partes por millón y las constantes de acoplamiento (valores J) en hercios. Las multiplicidades de espín se indican mediante los siguientes símbolos: s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuartete), m (multiplete), bs (singlete ancho). Los espectros de masas se obtuvieron en un espectrómetro Agilent 1290 Infinity II con un 6130 Chemstation y un espectrómetro Agilent 1200 Infinity II con un 6130 Chemstation. Los datos de GC-MS se recogieron usando un cromatógrafo de gases Agilent 7890B y un espectrómetro de masas 5977B. Los espectros infrarrojos se obtuvieron en un espectrómetro PerkinElmer. La cromatografía se realizó usando gel de sílice (Fluka: gel de sílice 10l 60, 0,063-0,2 mm) y disolventes adecuados como se indica en ejemplos específicos. La purificación ultrarrápida se realizó con un Biotage Isolera con cartuchos HP-Sil o KP-NH SNAP (Biotage) y el gradiente de disolvente se indicó en los ejemplos específicos. La cromatografía en capa fina (TLC) se llevó a cabo en placas de gel de sílice con detección UV.
Ejemplo preparativo 1
Etapa A
A una disolución de 4-fluorofenilhidrazina (1 g, 7,9 mmol) y 4-oxopiperidina-1-carboxilato de íerc-butilo (1,2 g, 8,3 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió H<2>SO<4>concentrado (1 mL) a temperatura de baño de hielo. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, el precipitado se filtró. El sólido se disolvió en agua basificada con disolución de NaOH y se extrajo con DCM (diclorometano). La fase orgánica se separó y se secó sobre Na<2>SO<4>y el disolvente se eliminó para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (950 mg, 59 %).
MS: 191 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 10,91 (s, 1H), 7,23-7,24 (m, 1H), 7,09-7,09 (m, 1H), 6,80-6,81 (m, 1H), 3,91 (s, 2H), 3,11 (t,J= 5,56 Hz, 2H), 2,75 (d,J= 4,96 Hz, 2H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,95 g, 4,77 mmol) en THF (tetrahidrofurano) se añadió dicarbonato de di-íerc-butilo (Boc<2>O) (1,5 g) y la mezcla se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción como se evidencia por TLC, el disolvente se eliminó y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un líquido gomoso amarillo pálido (1,1 g, 78 %).
MS: 291 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,00 (s, 1H), 7,26 (q,J= 4,52 Hz, 1H), 7,18 (t,J= 8,12 Hz, 1H), 6,83-6,83 (m, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,69 (t,J= 5,64 Hz, 2H), 2,76 (s, 2H), 1,43 (s, 9H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,41 g, 1,41 mmol) en THF (5 ml) se añadió hidruro sódico (0,15 g, 6,25 mmol), seguido de cloruro de p-toluensulfonilo (TsCl) (0,29 g, 1,45 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (0,45 g, 72 %).
MS: 445 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,03-8,04 (m, 1H), 7,77 (d,J= 8,20 Hz, 2H), 7,36-7,38 (m, 3H), 7,15-7,16 (m, 1H), 4,43 (s, 2H), 3,69 (t,J= 5,64 Hz, 2H), 3,08 (s, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,43 (s, 9H).
Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (0,42 g, 0,915 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,2 g, 58 %).
MS: 345 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,61 (s, 1H), 8,01-8,02 (m, 1H), 7,82 (d,J =8,40 Hz, 2H), 7,45-7,45 (m, 1H), 7,39 (d,J= 8,40 Hz, 2H), 7,20-7,21 (m, 1H), 4,25 (s, 2H), 3,49 (s, 2H), 3,35 (d, J = 3,60 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H).
Etapa E
A una disolución del compuesto del título de la etapa D anterior (5,0 g, 13 mmol) en diclorometano (50 ml), se añadió trietilamina (5 ml) y se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (20 ml), se lavó con agua (2 X 30 ml) y una disolución saturada de NaCl (30 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título como base libre (rendimiento cuantitativo).
Ejemplo preparativo 2
Etapa A
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 1 etapa B (0,41 g, 1,41 mmol) en THF (5 ml) se le añadió hidruro sódico (0,067 g, 2,82 mmol), la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 0 °C y se añadió yoduro de metilo (0,24 g, 1,45 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na<2>SO<4>. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (0,3 g, 70 %).
MS: 304 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,38-7,39 (m, 1H), 7,22 (dd,J= 2,40, 10,00 Hz, 1H), 6,90-6,91 (m, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,71 (t,J= 6,00 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,79 (t,J= 5,20 Hz, 2H), 1,40 (s, 9H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,3 mg, 0,986 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,12 g, 60 %).
MS: 205,08 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,45 (br, 1H), 7,45-7,46 (m, 1H), 7,30-7,31 (m, 1H), 6,98-7,00 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,49 (d,J= 4,80 Hz, 2H), 3,06 (t,J= 6,00 Hz, 2H), 2,50 (s, 9H).
Ejemplo preparativo 3
Etapa A
A una disolución de 1 -(4-fluorofenil)-1 -metilhidrazina (2 g, 14,0 mmol) y 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (2,84 g, 14,0 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (1 mL) a temperatura de baño de hielo. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, el precipitado se filtró. El filtrado se desechó. El sólido se disolvió en agua (10 ml), el pH se ajustó a 14 con disolución de NaOH y la mezcla se extrajo con diclorometano (150 ml). La fase orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó para proporcionar el compuesto del título como base libre (1,3 g, 46 %).
MS: 205,08 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 4
Etapa A
A una disolución de (4-metoxifenil)hidrazina (1 g, 5,6 mmol) y 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,13 g, 5,6 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (1 mL) a temperatura de baño de hielo. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, el precipitado se filtró. El sólido se disolvió en agua basificada con disolución de NaOH y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se filtró y el disolvente se eliminó para dar el compuesto del título como un líquido gomoso de color amarillo pálido (0,60 g, 53 %). El producto bruto como tal se tomó para la siguiente etapa. MS: 203 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,60 mg, 2,9 mmol) en THF se añadió dicarbonato de di-ferc-butilo (0,65 g, 2,9 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche. El disolvente se eliminó y el producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido de color amarillo pálido (0,55 g, 62 %).
MS: 303 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-db) 5 = 10,71 (bs, 1H), 7,17 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,65-6,66 (m, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,69 (t,J= 5,60 Hz, 2H), 2,74 (t,J =5,60 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,55 g, 1,8 mmol) en THF (5 ml) se añadió hidruro sódico (0,087 g, 3,6 mmol), seguido de cloruro de p-toluensulfonilo (0,342 g, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na<2>SO<4>. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (20/80) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,45 g, 45 %).
MS: 457 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,92 (d,J= 9,20 Hz, 1H), 7,71 (d,J= 8,40 Hz, 2H), 7,35 (d,J= 8,00 Hz, 2H), 7,01 (s, 1H), 6,91-6,92 (m, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,68 (t,J= 5,60 Hz, 2H), 3,05 (bs, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,43 (s, 9H). Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (0,450 g, 0,986 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto como un sólido blanquecino (0,23 g, 65 %).
MS: 357 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-db) 5 = 9,67 (bs, 1H), 7,89 (d,J =9,20 Hz, 1H), 7,77 (d,J= 8,40 Hz, 2H), 7,36 (d,J= 8,00 Hz, 2H), 7,11 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 6,93-6,94 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,48-3,49 (m, 2H), 3,34-3,35 (m, 2H), 2,33 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 5
Etapa A
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 4 etapa B (0,55 g, 1,8 mmol) en THF (5 ml) se añadió hidruro sódico (0,087 g, 3,6 mmol) a 0 °C. La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 0 °C y se añadió yoduro de metilo (0,255 g, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. La mezcla en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (0,40 g, 45 %). MS: 317 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,29 (d,J= 8,80 Hz, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,72-6,73 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,70-3,72 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 2,78-2,79 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,4 g, 1,26 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido de color blanco (0,2 g, 73 %).
MS: 217 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 6
Etapa A
Una mezcla de 2-cloro-5-fluoropiridina (10 g, 76,34 mmol) y W-metilhidrazina (6 ml) se irradió a 180 °C durante 1 h en un horno microondas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se enfrió y la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo y se extrajo con diclorometano (2 x 50 ml). La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se eliminó para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (10 g, bruto). El producto bruto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 143 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (10 g, 70,84 mmol) en metanol (100 ml) se añadió 4-oxopiperidin-1-carboxilato de íerc-butilo (16,9 g, 85 mmol) y se agitó durante la noche. El disolvente se eliminó, la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de metanol/DCM (1/99) para proporcionar el compuesto del título como un aceite gomoso de color marrón (5 g, 22 %).
MS: 323 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,82-7,84 (m, 1H), 7,13-7,14 (m, 1H), 6,72-6,73 (m, 1H), 4,51 (bs, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,71-3,73 (m, 2H), 2,76-2,78 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).
Etapa C
Una mezcla del compuesto del título de la etapa B anterior (5 g, 15,50 mmol) y dietilenglicol (5 ml) se irradió a 180 °C durante 1 h en un horno microondas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se enfrió y la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo y se extrajo con diclorometano (2 x 50 ml). La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se eliminó, la mezcla en bruto se purificó por HPLC preparativa (Columna: Phenomenex Gemini C18 (150*4,6) mm 3,0 pm. Fase móvil A: acetato de amonio 10 mM en agua Milli-Q. Fase móvil B: Acetonitrilo. Caudal: 1,0 ml\min), para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón (0,9 g, 29 %).
MS: 206 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 7,87-7,89 (m, 1H), 7,46-7,47 (m, 1H), 4,53 (bs, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,71-3,73 (m, 2H), 2,76-2,78 (m, 2H).
Ejemplo preparativo 7
A una disolución de 3-(fluorofenil)hidrazina (1 g, 6,1 mmol) y 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,2 g, 6,1 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (1 ml) a 0 °C. Después, la mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se calentó a 110 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el precipitado se filtró. El sólido se disolvió en agua, se basificó con disolución de NaOH y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se eliminó para proporcionar la mezcla de regioisómeros como un sólido amarillo pálido (0,65 g, 56 %).
MS: 191,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 10,87 (bs, 1H), 7,26-7,30 (m, 1H), 7,02-7,05 (m, 1H), 6,74-6,79 (m, 1H), 3,83 (bs, 2H), 2,99-3,02 (m, 2H), 2,65-2,66 (m, 2H).
Etapa B
A una disolución de la mezcla de regioisómeros (0,65 g, 3,15 mmol) en THF se añadió dicarbonato de di-ferc-butilo (0,757 g, 3,47 mmol) y la mezcla se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), el disolvente se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto. Se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (malla de 60-120) usando hexano:EtOAc (70:30) para proporcionar la mezcla de los regioisómeros 7-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo y 9-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo como un sólido amarillo (0,750 g, 61 %) en una relación de ~70:30, respectivamente.
MS: 291,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,01 (bs, 1H), 7,36-7,39 (m, 1H), 7,06-7,09 (m, 1H), 6,79-6,84 (m, 1H), 4,51 (bs, 2H), 3,68-3,71 (m, 2H), 2,74-2,76 (m, 2H), 1,38 (s, 9H).
Etapa C
La mezcla de regioisómeros (0,750 mg, 70:30) se separó mediante una columna quiral de SFC (Chiracel OJ-H; Columna: X-bridge C8 (50 x 4,6) mm, 3,5 gm, Fase móvil A: TFA al 0,1 % en agua, fase móvil B: TFA al 0,1 % en acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título que eluye el segundo 7-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo como un sólido amarillo pálido con 100 % de pureza quiral (0,4 mg, 53 %). El compuesto del título que eluye primero 9-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo se aisló como un sólido amarillo pálido con una pureza quiral del 100 % (0,25 g, 33 %).
Compuesto del título que eluye el segundo:
MS: 291,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,01 (bs, 1H), 7,36-7,39 (m, 1H), 7,06-7,09 (m, 1H), 6,79-6,84 (m, 1H), 4,51 (bs, 2H), 3,68-3,71 (m, 2H), 2,74-2,77 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
TR = 2,08 min.
Compuesto del título que eluye primero:
MS: 291,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,22 (s, 1H), 7,13 (d,J =8,08 Hz, 1H), 6,96-6,97 (m, 1H), 6,69-6,71 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 3,69-3,70 (m, 2H), 2,68-2,76 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
TR = 1,74 min.
Etapa D
A una disolución del compuesto del título que eluye el segundo de la etapa C anterior (0,4 g, 1,37 mmol) en THF (5 ml) se añadió hidruro sódico (0,099 mg, 4,137 mmol), seguido de cloruro de p-toluensulfonilo (0,288 g, 1,51 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (0,3 g, 49 %).
MS: 445 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,92-7,94 (m, 1H), 7,68-7,70 (m, 1H), 7,25-7,29 (m, 4H), 7,00-7,04 (m, 1H), 4,50 (bs, 2H), 3,76 (bs, 2H), 3,12 (bs, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,51 (s, 9H).
Etapa E
A una disolución del compuesto del título de la etapa D anterior (0,3 g, 0,676 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,2 g, 78 %).
MS: 345 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,50 (bs, 2H), 7,80-7,87 (m, 2H), 7,78 (d,J= 2,00 Hz, 1H), 7,57-7,61 (m, 1H), 7,40 (d,J= 8,16 Hz, 2H), 7,18-7,23 (m, 1H), 4,27 (bs, 2H), 3,56 (bs, 2H), 3,47 (bs, 2H), 2,34 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 8
Etapa A
A una disolución de (2-cloro-3-fluorofenil)hidrazina (10 g, 62,5 mmol) y 4-oxopiperidina-1-carboxilato de íerc-butilo (12 g, 62,5 mmol) en 1,4-dioxano (100 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (10 ml) a 0 °C. Después, la mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se calentó a 110 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el precipitado se filtró. El sólido se disolvió en agua, se basificó con disolución de NaOH y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na<2>SO<4>y el disolvente se eliminó para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (10 g, 72 %).
MS: 225 (M+H)+.
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,23 (bs, 1H), 7,27-7,28 (m, 1H), 6,94-6,96 (m, 1H), 3,82 (s, 2H), 2,98-3,00 (m, 2H), 2,68 (d,J= 4,72 Hz, 2H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (10 g, 44,5 mmol) en THF (100 ml) se añadió dicarbonato de di-íerc-butilo (10,5 g, 46,5 mmol) y la mezcla se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), el disolvente se concentró a presión reducida para producir el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (malla 60-120) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (12 g, 85 %).
MS: 325,1 (M+H)+.
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 = 11,43 (s, 1H), 7,36-7,38 (m, 1H), 6,97-7,00 (m, 1H), 4,51 (s, 2H), 3,68-3,69 (m, 2H), 2,76-2,78 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (5 g, 15,3 mmol) en metanol seco (50 ml) se añadió trietilamina (6,74 ml, 46,18 mmol) y Pd al 10%/C (0,2 mg, 20 % en peso). La hidrogenación se realizó a 1000 kPa (10 bar) de presión durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título (4 g, 90 %).
MS: 291,2 (M+H)+.
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 = 11,01 (bs, 1H), 7,36-7,39 (m, 1H), 7,06-7,09 (m, 1H), 6,79-6,84 (m, 1H), 4,51 (bs, 2H), 3,68-3,71 (m, 2H), 2,74-2,77 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (4 g, 13,7 mmol) en THF (40 ml) se añadió hidruro sódico (9,9 g, 41,23 mmol), seguido de cloruro de p-toluensulfonilo (2,88 g, 15,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. La mezcla se disolvió en EtOAc (200 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na<2>SO<4>. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (5 g, 82 %).
MS: 445 (M+H)+.
<1>H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,92-7,94 (m, 1H), 7,68-7,70 (m, 1H), 7,25-7,29 (m, 4H), 7,00-7,04 (m, 1H), 4,50 (bs, 2H), 3,76 (bs, 2H), 3,12 (bs, 2H), 2,38 (s, 3H), 1,51 (s, 9H).
Etapa E
A una disolución del compuesto del título de la etapa D anterior (3 g, 6,76 mmol) en diclorometano (30 ml) se añadió HCl 2 N (15 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (2 g, 78 %).
MS: 345 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,50 (bs, 2H), 7,80-7,87 (m, 2H), 7,78 (d,J= 2,00 Hz, 1H), 7,57-7,61 (m, 1H), 7,40 (d,J= 8,16 Hz, 2H), 7,18-7,23 (m, 1H), 4,27 (bs, 2H), 3,56 (bs, 2H), 3,47 (bs, 2H), 2,34 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 9
Etapa A
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 8 etapa C (0,4 mg, 1,37 mmol) en THF (5 ml) se le añadió hidruro sódico (0,099 g, 4,137 mmol), seguido de yoduro de metilo (0,102 ml, 1,64 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na<2>SO<4>. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (0,3 mg, 73 %).
MS: 305,37 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,3 mg, 0,986 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,18 g 75 %).
MS: 205 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 10
A una disolución del compuesto del título que eluye primero del ejemplo preparativo 7 de la etapa C (0,2 mg, 0,67 mmol) en THF (5 ml) se añadió hidruro sódico (0,048 g, 2,137 mmol), seguido de cloruro de p-toluensulfonilo (0,144 g, 0,76 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. La mezcla se disolvió en EtOAc (20 ml) y se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (20/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (0,155 g, 50 %).
MS: 445 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,80-7,82 (m, 3H), 7,31-7,32 (m, 3H), 7,07-7,09 (m, 1H), 4,56 (s, 2H), 3,68-3,69 (m, 2H), 3,09 (bs, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,43 (s, 9H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (0,15 g, 0,337 mmol) en diclorometano se añadió HCl 2 N (5 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,1 g, 71 %).
MS: 345 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 = 9,49 (bs, 2H), 7,85-7,87 (m, 3H), 7,35-7,36 (m, 3H), 7,12-7,14 (m, 1H), 4,39 (s, 2H), 3,48 (bs, 2H), 3,17 (bs, 2H), 2,35 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 11
A una disolución de 2-(4-fluorofenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (5 g, 22,51 mmol) en dicloroetano (250 ml) se añadió N-hidroxiftalimida (7,34 g, 45,03 mmol), cloruro de cobre (I) (2,22 g, 22,51 mmol), piridina (2,75 ml, 33,75 mmol), tamices moleculares (5 g) y la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite y se lavó con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se concentró y el producto bruto se purificó en un gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One que emplea un gradiente de hexano/EtOAc (90/10 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (1,4 g, 24 %).
MS: 258,22 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 = 7,92-7,93 (m, 4H), 7,33-7,34 (m, 2H), 7,20-7,22 (m, 2H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (1,4 g, 5,44 mmol) en cloroformo:metanol (9:1, 100 ml) se añadió hidrato de hidrazina (0,81 g, 16,32 mmol) y la mezcla de reacción se dejó agitar a 25 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite y se lavó con diclorometano. La fase de diclorometano se concentró y el producto bruto se añadió a éter (5 ml) y HCl 2 N en éter (2 ml) a 0 °C, después la mezcla de reacción se dejó agitar a 25 °C durante 30 min. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se filtró, se secó al vacío para obtener un sólido blanquecino (0,44 g, 50 %).
MS: 128,12 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,03-8,04 (m, 2H), 7,76-7,76 (m, 2H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,44 g, 2,7 mmol) y 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decano (0,44 g, 3,07 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (0,5 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se calentó a 25 °C y después se calentó adicionalmente a 150 °C durante 1 h en condiciones de microondas. La mezcla de reacción se enfrió a 25 °C y el precipitado se filtró. El sólido se disolvió en agua, se basificó con disolución de NaOH y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se concentró, el producto bruto se recogió como tal para la siguiente etapa (0,270 g, 52 %).
MS: 192,21 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 12
A una disolución de hidrocloruro de 4-(fluorofenil)hidrazina (10 g, 0,061 mol) y 3-oxo-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de íerc-butilo (13,9 g, 0,61 mol) en 1,4-dioxano (100 ml) se añadió H<2>SO<4>conc. (10 mL) a 0 °C y luego la mezcla se calentó a 100 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a alto vacío para obtener el material bruto. El material bruto se basificó usando una disolución de hidróxido sódico al 30 % y el sólido precipitó. El sólido precipitado se filtró, se lavó con agua (100 ml) y éter dietílico (100 ml), después el sólido se secó en línea al vacío durante 16 h para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (11 g, 83 %).
MS: 216,10 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (11 g, 0,051 mol) en THF (50 ml) se añadió trietilamina (11 ml, 0,076 mol) y dicarbonato de di-íerc-butilo (11,13 g, 0,051 mol) a 0 °C y después se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Después de la finalización de la reacción como se evidencia por TLC, el disolvente se eliminó y la mezcla de reacción en bruto se purificó por una columna de gel de sílice usando del 40 % al 50 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (7,4 g, 46 %).
MS: 316,15 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 10,94 (bs, 1H), 7,23-7,24 (m, 2H), 6,80-6,81 (m, 1H), 5,09-5,11 (m, 1H), 4,46 (bs, 1H), 3,23-3,27 (m, 1H), 2,51-2,57 (m, 1H), 2,22-2,26 (m, 1H), 2,00-2,07 (m, 1H), 1,59-1,60 (m, 1H), 1,41-1,44 (m, 2H), 1,20-1,27 (m, 9H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (3 g, 0,009 mol) en THF (30 ml) se añadió hidruro sódico (60 % en aceite mineral; 0,57 g, 0,014 mol) en porciones a 0 °C. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, y después la mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 0 °C. A esta mezcla se añadió gota a gota cloruro de p-toluensulfonilo (2,16 g, 0,11 mol) disuelto en THF (20 ml) a 0 °C. Después de que se completara la adición, la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 2 h. Después de que se completara la reacción como se evidencia por TLC, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó con agua helada, seguido de extracción usando acetato de etilo (100 ml). La fase de acetato de etilo se lavó con agua (30 ml) y disolución de salmuera (30 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar el producto bruto que se purificó por una columna de gel de sílice usando del 15 % al 25 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (2,9 g, 65 %).
MS: 470,16 (M+H)+.
Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (2,9 g, 0,006 mol) en diclorometano (10 ml) a 0 °C se añadió HCl 4 N (20 ml) en 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 12 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico (10 ml) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color blanquecino (2,4 g, 98 %).
MS: 370,15 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,07-8,08 (m, 1H), 7,78-7,80 (m, 1H), 7,30-7,31 (m, 3H), 7,10-7,11 (m, 1H), 5,13 (d,J= 4,80 Hz, 1H), 4,52 (d,J= 4,80 Hz, 1H), 3,64-3,65 (m, 4H), 3,30-3,30 (m, 1H), 2,22-2,24 (m, 7H), 1,92 (bs, 1H). Ejemplo preparativo 13
Etapa A
A una disolución de 2,6-diclorobenzo[d]tiazol (5 g, 24,5 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió morfolina (3,19 g, 36,6 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (3,71 g, 36,7 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (5 g, 96 %).
MS: 213,4 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,80 (d,J= 8,00 Hz, 1H), 7,53 (d,J =2,00 Hz, 1H), 7,13-7,14 (m, 1H), 3,74-3,75 (m, 4H), 3,56-3,57 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 14
Etapa A
A una disolución de 2,5-diclorobenzo[d]tiazol (5 g, 24,5 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió morfolina (3,19 g, 36,6 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (3,71 g, 36,7 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (4,5 g, 86%).
MS: 255,4 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,82 (d,J= 8,00 Hz, 1H), 7,50 (d,J= 2,00 Hz, 1H), 7,11-7,11 (m, 1H), 3,72-3,73 (m, 4H), 3,55-3,56 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 15
Etapa A
A una disolución de 2,6-diclorobenzo[d]oxazol (5 g, 26,8 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió morfolina (3,50 g, 40,3 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (4,0 g, 39,6 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (5 g, 78 %).
MS: 239,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 7,59 (d,J =2,80 Hz, 1H), 7,30 (d,J =11,20 Hz, 1H), 7,21 (dd,J =2,80, 11,20 Hz, 1H), 3,71-3,74 (m, 4H), 3,57-3,60 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 16
Etapa A
A una disolución de 2,5-diclorobenzo[d]oxazol (5 g, 26,8 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió morfolina (3,50 g, 40,3 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (4,0 g, 39,6 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (5,2 g, 81 %).
MS: 239,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,44 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 7,36 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 7,06 (dd,J= 2,00, 8,40 Hz, 1H), 3,71 -3,73 (m, 4H), 3,59-3,61 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 17
Etapa A
A una disolución de 2,6-diclorobenzo[d]tiazol (5 g, 24,5 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió dimetilamina 2 M en THF (18,37 ml, 36,65 mol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (6,8 ml, 49 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (4,8 g, 94 %).
MS: 213,4 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 = 7,88 (d,J= 2,10 Hz, 1H), 7,41 (d,J= 8,70 Hz, 1H), 7,25-7,26 (m, 1H), 3,14 (s, 6H). Ejemplo preparativo 18
Etapa A
A una disolución de 2,5-diclorobenzo[d]tiazol (5 g, 24,5 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió dimetilamina 2 M en THF (18,37 ml, 36,65 mol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (6,8 ml, 49 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (4,5 g, 88 %).
MS: 213,4 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 7,77 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,46 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 7,05-7,05 (m, 1H), 3,14 (s, 6H).
Ejemplo preparativo 19
Etapa A
A una disolución de 6-bromo-2-clorobenzo[d]tiazol (0,45 g, 1,81 mmol) en etanol (12 ml), se añadió disolución de dimetilamina 2 M (3 ml) y la mezcla se calentó durante 60 minutos usando un horno microondas Biotage a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó, el producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo y heptano (40/60 => 60/40) para dar el compuesto del título como un sólido (0,441 g, 95 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,70 (d,J= 1,9 Hz, 1H), 7,43 - 7,35 (m, 2H), 3,20 (s, 6H).
Ejemplo preparativo 20
Etapa A
A una disolución de 2,6-diclorobenzo[d]oxazol (5 g, 26,6 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió dimetilamina 2 M en THF (26,6 ml, 53,2 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (5,6 ml, 39,9 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (5 g, 96 %).
MS: 197,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 = 7,56 (s, 1H), 7,23-7,24 (m, 1H), 7,16-7,16 (m, 1H), 3,13 (s, 6H).
Ejemplo preparativo 21
Etapa A
A una disolución de 2,5-diclorobenzo[d]oxazol (5 g, 26,6 mmol) en diclorometano seco (50 ml) se añadió dimetilamina 2 M en THF (26,6 ml, 53,2 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. A esta mezcla de reacción fría se añadió trietilamina (5,6 ml, 39,9 mmol) gota a gota y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 4 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se trató con H<2>O (2 x 20 ml) y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (4,9 g, 94 %).
MS: 197,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 = 7,40 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 7,30 (d,J= 2,00 Hz, 1H), 6,99-6,99 (m, 1H), 3,13 (s, 6H).
Ejemplo preparativo 22
Etapa A
A una disolución de 6-bromo-2-clorobenzo[d]tiazol (0,8 g, 3,2 mmol) en etanol (12 ml) se añadió disolución de isopropilamina (1 ml) y la mezcla se calentó durante 45 minutos usando un horno microondas Biotage a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó, el producto bruto se cristalizó en una mezcla de EtOAc y n-heptano para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,663 g, 75,8 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,69 (t,J= 1,3 Hz, 1H), 7,38 (d,J= 1,3 Hz, 2H), 7,27 (s, 1H), 5,51-5,26 (m, 1H), 3,92 (h,J= 6,5 Hz, 1H), 1,33 (d,J= 6,4 Hz, 6H).
Ejemplo preparativo 23
Etapa A
A una disolución de 6-bromo-2-clorobenzo[d]tiazol (1 g, 4,0 mmol) en etanol (6 ml) se añadió disolución de isopropilamina (1,5 ml) y la mezcla se calentó durante 90 minutos usando un horno microondas Biotage a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó, el producto bruto se disolvió en diclorometano (150 ml) y se lavó con disolución 1 M de NaOH, agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar un producto bruto, que se purificó en una columna de gel de sílice usando un gradiente de EtOAc y heptano (20/80 => 50/50) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,35 g, 36 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,72 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,29 (d,J= 3,3 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 3,13 (s, 3H). Ejemplo preparativo 24
Etapa A
A una disolución de 5-bromo-2-clorobenzo[d]tiazol (0,9 g, 3,62 mmol) en etanol (12 ml) se añadió disolución de metilamina 4 M (1 ml) y la mezcla se calentó durante 90 minutos usando un horno microondas Biotage a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó, el producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un gradiente de EtOAc y heptano (20/80 => 50/50) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,57 g, 65 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7, 68 (t,J= 2,0 Hz, 1H), 7,46 (d,J= 8,3 Hz, 1H), 7,22 (dd,J= 8,4, 1,9 Hz, 1H), 5,90 (s, 1H), 3,13 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 25
Etapa A
A una disolución de 5-bromo-2-clorobenzo[d]tiazol (0,87 g, 3,5 mmol) en etanol (12 ml) se añadió disolución de isopropilamina (1,5 ml) y la mezcla se calentó durante 60 minutos usando un horno microondas Biotage a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. El disolvente se eliminó, el producto bruto se disolvió en diclorometano (150 ml) y se lavó con disolución 1 M de NaOH, agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar un producto bruto, que se purificó en una columna de gel de sílice usando un gradiente de EtOAc y heptano (20/80 => 50/50) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,75 g, 79 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,67 (d,J= 1,9 Hz, 1H), 7,43 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 7,19 (dd,J= 8,3, 1,9 Hz, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,04-3,79 (m, 1H), 1,34 (d,J= 6,5 Hz, 6H).
Ejemplo preparativo 26
Etapa A
Una disolución de 5-bromo-3-yodopiridin-2-amina (5 g, 16,72 mmol) e isotiocianato de benzoilo (3,29, 20,07 mmol) en acetona (10 ml) se agitó a 60 °C durante 12 horas, la reacción se monitorizó por TLC. El disolvente se evaporó y el sólido se filtró, se lavó con n-hexano (200 ml) y se secó para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (4 g, 52 %).
MS: 461,5 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 12,35 (s, 1H), 11,86 (s, 1H), 8,64-8,65 (m, 2H), 7,99-7,99 (m, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,56 (d,J= 9,40 Hz, 2H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (4 g, 12,1 mmol) en 1,4-dioxano (60 ml) se añadió carbonato potásico (2,5 g, 18,15 mmol), L-prolina (0,28 g, 2,43 mmol) y yoduro de cobre (I) (0,462 g, 2,43 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 16 horas, la reacción se monitorizó por TLC. La mezcla de reacción se vertió en 1,0 l de agua y 1,0 l de disolución acuosa saturada de NH<4>CL La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El sólido se filtró, se lavó con solución acuosa saturada de NH<4>Cl (2 x 300 ml) y agua (2 x 300 ml) y se secó para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (2,5 g, bruto).
MS: 334,51 (M+H)+.
Etapa C
Una suspensión del compuesto del título de la etapa B anterior (2 g, 5,98 mmol) en H<2>SO<4>al 70 % (6, 3.0 vol) se calentó a 120 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se vertió lentamente en 100 ml de agua fría (0 °C). Después, la mezcla de reacción se ajustó a pH básico mediante la adición de NaOH acuoso al 50 %. Después, el compuesto se extrajo con EtOAc (6 x 150 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se filtró, después la disolución se concentró para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo claro (0,3 g, 23 %).
MS: 230,4 (M)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 = 8,27-8,31 (m, 2H), 8,11 (s, 2H).
Etapa D
A una suspensión del compuesto del título de la etapa C anterior (0,3 mg, 1,3 mmol) en acetonitrilo (5 ml) a 0 °C se añadió nitrito de íerc-butilo (0,2 ml, 1,95 mmol) durante un período de 10 min con una jeringa. Después, se añadió cloruro de cobre (II) (0,2 g, 1,56 mmol) en porciones. Después de 30 minutos a 0 °C, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 hora y se calentó a 65 °C, después se agitó durante 4 horas. El progreso de la reacción se monitorizó por TLC. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se evaporó y el producto se diluyó con agua (20 ml) y MeOH al 5%/DCM (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (60-120), eluyendo con metanol al 1 %/diclorometano para proporcionar el compuesto del título (0,15 g, 46 %) como un sólido blanquecino.
MS: 250,9 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 = 8,91 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 8,82 (d,J= 1,60 Hz, 1H).
Etapa E
A una solución del compuesto del título de la etapa D anterior (0,18 g, 0,72 mmol) en diclorometano seco (5 ml) se añadieron trietilamina (0,3 ml, 2,16 mmol) y morfolina (0,074 g, 0,86 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (60-120), eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título (0,18 g, 83 %) como un sólido de color blanquecino.
MS: 300,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,49 (d,J= 2,00 Hz, 1H), 8,38 (d,J= 1,60 Hz, 1H), 3,72-3,74 (m, 4H), 3,61-3,62 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 27
Etapa A
Una disolución de 2-bromo-6-cloropiridin-3-amina (5 g, 24,1 mmol) y tiocianato potásico (7 g, 72,3 mmol) en etanol (50 ml) y ácido clorhídrico concentrado (37 %, 100 ml) se agitó a 100 °C durante 40-45 h. La finalización de la reacción se confirmó por TLC (PE/EA = 7,5/2,5). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró para proporcionar un sólido marrón, que se repartió en diclorometano (150 ml) y NaOH 1 N acuoso (50 ml). El sólido se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título (3,5 g, 79 % de rendimiento) como un sólido amarillo claro. MS: 186,1 (M+H)+.
Etapa B
A una suspensión del compuesto del título de la etapa A anterior (1,5 g, 8,08 mmol) en acetonitrilo (25 ml) a 0 °C se añadió nitrito de íerc-butilo (1,4 ml, 12,12 mmol) durante un período de 10 min con una jeringa. Después, se añadió bromuro de cobre (II) (2,16 g, 9,69 mmol) en porciones. Después de 30 minutos a 0 °C, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas. El progreso de la reacción se monitorizó por TLC. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se evaporó y la mezcla se diluyó con agua (20 ml) y MeOH al 5 %/DCM (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (60-120) y se eluyó con metanol al 1 %/diclorometano para proporcionar el compuesto del título (0,65 g, 32 %) como un sólido amarillo pálido.
MS: 248,5 (M+H)+.
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,65 g, 2,61 mmol) en diclorometano seco (5 ml) se añadieron trietilamina (1,1 ml, 7,83 mmol) y morfolina (0,34 g, 3,91 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (60-120), eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título (0,6 g, 90 %) como un sólido blanquecino. MS: 256,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,83 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 7,41 (d,J= 8,44 Hz, 1H), 3,72-3,74 (m, 2H), 3,59-3,60 (m, 2H).
Ejemplo Preparativo 28
Etapa A
Una mezcla de 2,7-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (0,4 g, 1,44 mmol) y morfolina (4 ml) se calentó a reflujo durante 4 horas en atmósfera de N<2>. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (60-120), eluyendo con éter de petróleo/acetato de etilo al 10 100 por ciento como eluyente, proporcionando el compuesto del título (0,27 g, 66 %) como un sólido blanco.
MS: 285,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,64 (d,J= 7,08 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,13-7,14 (m, 1H), 3,69-3,71 (m, 2H), 3,45 3,46 (m, 2H).
Ejemplo preparativo 29
Etapa A P29
Se disolvió 3,6-dibromopiridazina (0,2 g, 0,841 mmol) en acetonitrilo (2,5 ml). A continuación, se añadieron morfolina (0,110 ml, 1,261 mmol) y trietilamina (0,176 ml, 1,261 mmol) y la suspensión se irradió en el microondas a 160 °C durante 1 h y 20 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con diclorometano dos veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/0 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,168 g, 82 %).
MS: 245,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,35 (d,J= 9,5 Hz, 1H), 6,79 (d,J= 9,5 Hz, 1H), 3,88 - 3,79 (m, 4H), 3,66 - 3,55 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 30
A una suspensión de hidruro sódico (0,0404 g, 1,682 mmol) en THF seco (3 ml), se añadió morfolina (0,146 ml, 1,682 mmol) en nitrógeno a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 15 minutos, después se añadió 2,5-dibromopirazina (0,400 g, 1,682 mmol) disuelta en THF seco (3 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en condiciones de reflujo durante la noche. Se inactivó con agua y el producto se extrajo con EtOAc tres veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/0 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,245 g, 60 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 8,15 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 7,86 (d,J= 1,5 Hz, 1H), 3,89 - 3,76 (m, 4H), 3,60 - 3,45 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 31
A una disolución caliente de 2-cloro-5-nitro-4-tiocianatopirimidina (10 g, 46,2 mmol) en ácido acético (264 ml, 4617 mmol) a 120 °C se añadió hierro (15,47 g, 277 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora a la misma temperatura. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y el material insoluble se eliminó por filtración y se lavó con ácido acético. El filtrado se concentró a presión reducida y se disolvió en THF (200 ml) y EtOAc (400 ml) y se lavó con una disolución acuosa saturada de NH4Cl (100 ml), una disolución saturada de NaHCO3 (100 ml), se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se eliminó a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (6,82 g, 79 %).
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,42 (s, 1H).
Etapa B
A una suspensión del compuesto del título de la etapa A anterior (8,2 g, 43 mmol) en acetonitrilo (20 ml) a 0 °C se añadió nitrito de ferc-butilo (6,8 g, 65,9 mmol) durante 30 minutos. Después, se añadió bromuro de cobre (II) (11,78 g, 52,8 mmol) en porciones. Después de 30 minutos a 0 °C, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 horas. Se añadieron agua (50 ml) y EtOAc (100 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó en cartuchos HP-Sil SNAP usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando EtOAc/n-heptano (20/80) para proporcionar el compuesto del título (4,94 g, 45 %).
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,54 (s, 1H), 8,30 (s, 2H).
Etapa C
El compuesto del título de la etapa B anterior (0,157 g, 0,627 mmol) se disolvió en morfolina (3 ml, 0,627 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con diclorometano dos veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/0 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido de color blanco (0,048 g, 30 %).
MS: 258,6 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,71 (s, 1H), 3,74 (dd,J= 6,0, 3,6 Hz, 4H), 3,70 - 3,58 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 32
A una suspensión de hidruro sódico (0,077 g, 3,21 mmol) en THF seco (5 ml), se añadió hidrocloruro de (1R,5S)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (0,457 g, 3,06 mmol) en nitrógeno a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos, después se añadió 2,5-dibromopirazina (0,800 g, 3,36 mmol) disuelta en THF seco (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar en condiciones de reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua y el producto se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/0 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,038 mg, 5 %).
MS: 271,8 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,24 (d,J= 1,4 Hz, 1H), 8,11 (d,J= 1,4 Hz, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,62 (d,J= 10,9 Hz, 2H), 3,52 (d,J= 11,0 Hz, 2H), 2,02 - 1,95 (m, 2H), 1,91 (m, 2H).
Ejemplo preparativo 33
Etapa A
Se colocaron acetato de paladio (II) (0,00651 g, 0,029 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (XPhos) (0,0415 g, 0,087 mmol) en un vial de reacción y se añadió 1,4-dioxano desgasificado (2 ml). La disolución resultante se desgasificó brevemente. La suspensión se calentó a 100 °C (en un bloque de calentamiento precalentado) durante menos de 1 minuto hasta que el color de la disolución viró de naranja a rosa oscuro. Después, el vial se retiró del bloque de calentamiento y se añadieron el compuesto del título del ejemplo preparativo 1 (0,110 g, 0,290 mmol) y el compuesto del título del ejemplo preparativo 29 (0,078 g, 0,319 mmol) y carbonato de cesio (0,331 g, 1,015 mmol). El vial de reacción se llenó con argón antes de cerrarlo. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (90/10 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,072 g, 49 %).
MS: 508,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 = 8,03 (dd,J= 9,1,4,5 Hz, 1H), 7,70 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,42 (d,J= 9,9 Hz, 1H), 7,38 (dd,J= 8,9, 2,6 Hz, 1H), 7,32 (dd,J= 9,0, 6,1 Hz, 2H), 7,17 (td,J= 9,2, 2,6 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,88 (t,J= 5,6 Hz, 2H), 3,78 - 3,65 (m, 4H), 3,41 - 3,34 (m, 4H), 3,21 - 3,14 (m, 2H), 2,30 (s, 3H).
Ejemplos preparativos 34 a 41f
Siguiendo el procedimiento de acoplamiento de paladio como se describe en el ejemplo preparativo 33, excepto que se usaron los derivados amino tricíclico y bromo/cloro indicados en la tabla siguiente, se prepararon los siguientes compuestos:
Tabla 1
Ejemplo preparativo 42
Se colocaron acetato de paladio (II) (0,0045 g, 0,020 mmol) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XANTPHOS) (0,035 g, 0,061 mmol) en un vial de reacción y se añadió 1,4-dioxano desgasificado (4 ml). La disolución resultante se desgasificó brevemente. La suspensión se calentó a 100 °C (en un bloque de calentamiento precalentado) durante menos de 1 minuto hasta que el color de la disolución viró de naranja a rosa oscuro. Después, el vial se retiró del bloque de calentamiento y se añadieron el compuesto del título del ejemplo preparativo 1 etapa E (70 mg, 0,203 mmol) y el compuesto del título del ejemplo preparativo 26 (0,067 g, 0,224 mmol) y carbonato de cesio (0,232 g, 0,771 mmol). El vial de reacción se llenó con argón antes de cerrarlo. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un diclorometano/etilmetanol (100/00 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,052 g, 45 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 8,24 (d,J= 2,7 Hz, 1H), 8,16 - 8,03 (m, 1H), 7,64 - 7,59 (m, 2H), 7,55 (d,J= 2,7 Hz, 1H), 7,18 (d,J= 8,2 Hz, 2H), 7,02 (dd,J= 8,6, 1,9 Hz, 2H), 4,23 (d,J= 2,0 Hz, 2H), 3,84 - 3,78 (m, 4H), 3,69 -3,63 (m, 4H), 3,59 (t,J= 5,6 Hz, 2H), 3,48 (s, 1H), 3,25 (dq,J= 5,7, 3,5, 2,8 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 43
Se colocaron acetato de paladio (II) (0,0045 g, 0,020 mmol) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XANTPHOS) (0,035 g, 0,061 mmol) en un vial de reacción y se añadió 1,4-dioxano desgasificado (4 ml). La disolución resultante se desgasificó brevemente. La suspensión se calentó a 100 °C (en un bloque de calentamiento precalentado) durante menos de 1 minuto hasta que el color de la disolución viró de naranja a rosa oscuro. Después, el vial se retiró del bloque de calentamiento y se añadieron el compuesto del título del ejemplo preparativo 1 etapa E (70 mg, 0,203 mmol) y el compuesto del título del ejemplo preparativo 27 (0,067 g, 0,224 mmol) y carbonato de cesio (0,232 g, 0,771 mmol). El vial de reacción se llenó con argón antes de cerrarlo. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un diclorometano/etilmetanol (100/00 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,048 g, 42 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 8,10 (dd,J= 9,0, 4,4 Hz, 1H), 7,65 (d,J= 8,9 Hz, 1H), 7,63-7,57 (m, 2H), 7,15 (d,J= 8,2 Hz, 2H), 7,09-6,97 (m, 2H), 6,75 (d,J= 8,9 Hz, 1H), 4,51 (d,J= 2,0 Hz, 2H), 3,94 (t,J= 5,6 Hz, 2H), 3,82 (q,J= 5,2 Hz, 4H), 3,57 (dd,J= 5,8, 4,0 Hz, 4H), 3,25 (td,J= 5,5, 2,7 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 44
Etapa A
Se disolvió 3,6-dibromopiridazina (0,2 g, 0,841 mmol) en acetonitrilo (2,5 ml). A continuación, se añadieron 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octano (0,105 g, 0,925 mmol) y trietilamina (0,176 ml, 1,261 mmol) y la suspensión se irradió en el microondas a 160 °C durante 1 h y 20 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con diclorometano dos veces. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/0 -> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido beige (0,152 g, 67 %).
MS: 271,5 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,32 (d,J= 9,5 Hz, 1H), 6,70 (d,J= 9,5 Hz, 1H), 4,60-4,43 (m, 2H), 3,83 (d,J= 12,8 Hz, 2H), 3,23 (dd,J= 12,4, 2,7 Hz, 2H), 2,08 - 1,94 (m, 2H), 1,90 - 1,76 (m, 2H).
Ejemplo preparativo 45
A una disolución de 2,6-diclorobenzo[a(]oxazol (1,2 g, 6,3 mmol) se añadió una disolución de metilamina al 33 % en peso en etanol absoluto (8 ml) y la mezcla se calentó durante 30 minutos a 100 °C usando un horno microondas Biotage. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se disolvió en diclorometano (150 ml). La fase orgánica se lavó con agua, disolución de NaOH 1 N y salmuera y después se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó y se obtuvo el compuesto del título (1,08 g, 94 %).
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 57,30-7,24 (m, 2H), 7,16 (dd,J= 8,4, 1,9 Hz, 1H), 5,35 (s, 1H), 3,14 (s, 3H).
Etapa B
A una suspensión agitada del compuesto del título de la etapa A anterior (39 mg, 1,643 mmol) en THF seco (1,5 ml) a 0 °C, se añadió lentamente una disolución de 6-cloro-N-metilbenzo[d]oxazol-2-amina (100 mg, 0,548 mmol) en THF seco (2 ml) y se agitó a la misma temperatura durante 30 min. Después, se añadió gota a gota una disolución de cloruro de 4-metilbenceno-1-sulfonilo (107 mg, 0,561 mmol) en THF seco (1,5 ml) a 0 °C y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se inactivó a 0 °C con agua enfriada con hielo (4 ml). Después, el producto se extrajo con acetato de etilo tres veces. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido beige (154 mg, 83 %).
MS: 337,14 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 7,93 - 7,89 (m, 2H), 7,88 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 7,58 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 2H), 7,36 (dd,J= 8,5, 2,0 Hz, 1H), 3,49 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 46
Etapa A
A una suspensión de NaH (0,47 g, 19,55 mmol) en THF (20 ml) se añadió 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-ó]indol-2-carboxilato de ferc-butilo disponible comercialmente (2,0 g, 7,35 mmol) (disuelto en THF) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó después a temperatura ambiente durante 1 h. Después de eso, se añadió cloruro de tosilo (1,5 g, 7,82 mmol) (disuelto en THF) a 0 °C y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de la finalización de la reacción como se comprobó por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada seguido de extracción usando acetato de etilo. La fase orgánica se concentró para proporcionar el compuesto del título (1,8 g, 65 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 427,1 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (1,8 g, 4,22 mmol) en DCM (20 ml) se añadió HCl 4 M (5 ml) en dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y el residuo se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (1,0 g, 66 %).
MS: 361,3 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 47
Etapa A
A una disolución de hidrocloruro de (2-fluorofenil)hidrazina disponible comercialmente (2 g, 12,34 mmol) y 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (2,45 g, 12,34 mmol) en dioxano (20 ml) se añadió H<2>SO<4>concentrado (2 mL), 0 °C. Luego, la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 4 h. Después de la finalización de la reacción como se evidencia por TLC, la mezcla de reacción se enfrió a 25 °C y luego se concentró. La mezcla bruta se basificó mediante una disolución de NaOH al 10 % y el precipitado se separó por filtración. El sólido se lavó con agua y se secó al vacío para obtener el compuesto del título (1,7 g, 75 %).
MS: 191,0 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución agitada del compuesto del título de la etapa A anterior (1,7 g, bruto) en THF (20 ml) se añadieron TEA (3,76 ml, 26,82 mmol) y dicarbonato de di-íerc-butilo (2,34 ml, 10,73 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción como se evidencia por TLC, el disolvente se eliminó y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/heptano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (700 mg, 27 %).
MS: 291,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,38 (bs, 1H), 7,22 (d,J= 7,60 Hz, 1H), 6,96-6,85 (m, 2H), 4,53 (s, 2H), 3,70-3,71 (m, 2H), 2,78 (bs, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa C
A una suspensión de NaH (144 mg, 3,61 mmol) en THF (15 ml) se añadió el compuesto del título de la etapa B anterior (700 mg, 2,41 mmol) (disuelto en THF) gota a gota a 0 °C. Después, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de eso, se añadió cloruro de tosilo (549 mg, 2,89 mmol) (disuelto en THF) a 0 °C y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de la finalización de la reacción como se evidencia por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua con hielo, seguido de extracción usando acetato de etilo. La fase orgánica se concentró y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One que emplea un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (900 mg, 84 %).
MS: 345,1 (M-Boc).
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,79 (d,J= 8,04 Hz, 2H), 7,41 (d,J= 8,24 Hz, 2H), 7,34 (d,J= 7,68 Hz, 2H), 7,22 7,23 (m, 1H), 7,07-7,09 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,70-3,72 (m, 2H), 3,17 (bs, 2H), 2,36 (s, 3H), 1,40 (s, 9H).
Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (900 mg, 2,02 mmol) en DCM (10 ml) se añadió HCl 2 N (5 ml) en dioxano. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y el residuo se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (450 mg, 65 %).
MS: 345,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 48
Etapa A
A una suspensión de NaH (300 mg, 12,39 mmol) en THF (15 ml) se añadió el compuesto del título del ejemplo preparativo 47, etapa B (1,2 g, 4,13 mmol) (disuelto en THF) gota a gota a 0 °C. Después, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de eso, se añadió yodometano (0,5 ml, 8,26 mmol) a 0 °C y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de la finalización, la mezcla de reacción se inactivó con agua con hielo, seguido de extracción usando acetato de etilo. La fase orgánica se concentró y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One que emplea un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título (900 mg, 72 %).
MS: 305,3 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,23 (d,J= 9,60 Hz, 1H), 6,88-6,91 (m, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,71-3,73 (m, 5H), 2,73 2,77 (m, 2H), 1,50 (s, 9H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la Etapa A anterior (900 mg, 2,96 mmol) en DCM (10 ml) se añadió HCl 4 M (5 ml) en dioxano. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y el residuo se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (500 mg, 83 %).
MS: 205,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 49
Etapa A
A una disolución de 2-bromo-6-cloro-1,8-naftiridina disponible comercialmente (0,2 g, 0,821 mmol) en acetonitrilo seco (5 ml) se añadieron carbonato potásico (0,335 mg, 2,46 mmol) y morfolina (0,11 g, 1,23 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (170 mg, 83 %).
MS: 250,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,71 (s, 1H), 8,07-8,08 (m, 1H), 7,82-7,95 (m, 1H), 7,55-7,56 (m, 1H), 3,72 (s, 8H). Ejemplo preparativo 50
Etapa A
A una disolución de 2-bromo-6-cloro-1,7-naftiridina disponible comercialmente (0,5 g, 2,05 mmol) en acetonitrilo seco (5 ml) se añadieron carbonato potásico (0,837 mg, 6,16 mmol) y morfolina (0,27 g, 3,08 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (270 mg, 53 %).
MS: 250,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 9,01 (s, 1H), 7,91-7,93 (m, 2H), 6,92-6,93 (m, 1H), 3,71 (s, 8H).
Ejemplo preparativo 51
Etapa A
A una disolución de 2,7-dicloroquinolina disponible comercialmente (0,5 g, 2,52 mmol) en DMF seca (5 ml) se añadieron carbonato potásico (1 g, 7,52 mmol) y morfolina (0,32 g, 3,78 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (500 mg, 80 %).
MS: 249,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 52
Etapa A
A una disolución de 2,6-dicloroquinolina disponible comercialmente (0,5 g, 2,52 mmol) en DMF seca (5 ml) se le añadieron carbonato potásico (1 g, 7,52 mmol) y morfolina (0,32 g, 3,78 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y la mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (500 mg, 80 %).
MS: 249,1 (M+H)+
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,06 (d,J= 12,40 Hz, 1H), 7,84 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 7,51-7,52 (m, 2H), 7,31 (d,J= 12,40 Hz, 1H), 3,66-3,67 (m, 8H).
Ejemplo preparativo 53
Etapa A
Una disolución de 4,6-dicloropiridin-3-amina disponible comercialmente (8,0 g, 49,07 mmol) e isotiocianato de benzoilo (7,3 ml, 53,98 mmol) en acetona (120 ml) se agitó a 60 °C durante 3 horas. La reacción se monitorizó mediante TLC. El disolvente se evaporó y el sólido se filtró, se lavó con n-hexano (100 ml) y se secó para dar el producto deseado como un sólido blanquecino (14,0 g, 87 %).
MS: 328,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 12,39 (s, 1H), 12,02 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,98-7,99 (m, 3H), 7,67-7,68 (m, 1H), 7,56 (t,J= 7,60 Hz, 2H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (14,0 g, 42,94 mmol) en N-metil-2-pirrolidona (NMP) (70 ml) se añadió metóxido sódico (NaOMe) (4,6 g, 85,88 mmol) a 0 °C. La mezcla se calentó después a 120 °C y la agitación continuó durante 4 horas. La reacción se monitorizó por TLC. La mezcla de reacción se vertió en agua fría (300 ml) y se obtuvo un precipitado blanco. El sólido se filtró, se lavó con agua (300 ml) y n-hexano (200 ml). El compuesto se secó al vacío durante 6 h para dar el producto deseado como un sólido blanco (14,0 g, bruto). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 290,0 (M+H)+
Etapa C
Una suspensión del compuesto del título de la etapa B anterior (14,0 g, 48,4 mmol) en H<2>SO<4>al 70 % (50,0 mL) se calentó a 110 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se vertió lentamente en 200 ml de agua fría (0 °C). Después, la mezcla de reacción se ajustó a pH básico mediante la adición de NaOH acuoso al 50 % sólido. Después, el compuesto se extrajo con EtOAc (6 x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se filtró, después el disolvente se concentró para dar el producto deseado como un sólido amarillo claro (6 g, 67 %).
MS: 186,1 (M+H)+
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,30 (s, 1H), 7,86 (s, 1H).
Etapa D
A una suspensión del compuesto del título de la etapa C anterior (5,0 g, 27,02 mmol) en acetonitrilo (120 ml) a 0 °C se añadió nitrito de íerc-butilo (4,8 ml, 40,54 mmol) durante un período de 10 min con una jeringa. Después, se añadió bromuro de cobre (II) (9,0 g, 40,54 mmol) en porciones. Después de 30 minutos a 0 °C, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2,5 horas, el progreso de la reacción se monitorizó por TLC. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se evaporó y se diluyó con agua (200 ml) y MeOH al 5 %/DCM (3 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (6,5 g). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 250,9 (M+H)+
Etapa E
A una disolución del compuesto del título de la etapa D anterior (6,5 g, 26,09 mmol) en DCM seco (100 ml) se añadieron trietilamina (11,2 ml, 81,5 mmol) y morfolina (2,8 ml, 28,13 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. La mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (10/80 => 80/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (4,7 g, 71 %).
MS: 256,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,48 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 3,73-3,74 (m, 4H), 3,60-3,61 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 54
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,25 g, 0,0013 mol) en acetonitrilo (15 ml) se añadieron K<2>CO<3>(0,538 g, 0,0039 mol) y 5-oxa-8-azaespiro[3.5]nonano (0,178 g, 0,0014 mol). Después de eso, la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadieron a la mezcla de reacción DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,30 g, 80,21 %) como un sólido blanco.
MS: 279,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,44 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 7,36-7,37 (m, 1H), 7,06 (dd,J= 2,00, 8,40 Hz, 1H), 3,64 3,65 (m, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,54-3,55 (m, 2H), 1,96-1,97 (m, 4H), 1,71-1,74 (m, 2H).
Ejemplo preparativo 55
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,60 g, 0,0032 mol) en acetonitrilo (15 ml) se añadieron K<2>CO<3>(1,32 g, 0,0096 mol) y 2-metoxietano-1-amina (0,266 g, 0,0035 mol). Después de eso, la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadieron a la mezcla de reacción DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,41 g, 56,24 %) como un sólido marrón.
MS: 226,9 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,26 (s, 1H), 7,35 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,28 (d,J= 2,80 Hz, 1H), 6,99 (dd,J= 2,80, 11,20 Hz, 1H), 3,48 (d,J= 7,20 Hz, 4H), 3,27 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 56
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,719 g, 0,0038 mol) en DCM (15 ml) se añadieron TEA (2,67 ml, 0,0191 mol) y (2R)-2-metilmorfolina (0,5 g, 0,00494 mol) y se agitó durante 12 h a 25 °C. Después de la finalización de la reacción por TLC, a la mezcla de reacción se añadió DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,6 g, 45,4 %) como un sólido blanco.
MS: 253,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,43 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,35 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 7,05 (dd,J= 2,80, 11,20 Hz, 1H), 3,89-3,90 (m, 3H), 3,56-3,59 (m, 2H), 3,17-3,18 (m, 1H), 2,86-2,89 (m, 1H), 1,15 (d,J= 8,40 Hz, 3H).
Ejemplo preparativo 57
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,360 g, 0,0019 mol) en DCM (15 ml) se añadieron TEA (1,33 ml, 0,0095 mol) y (2S)-2-metilmorfolina (0,25 g, 0,00247 mol) y se agitó durante 12 h a 25 °C. Después de la finalización de la reacción por TLC, a la mezcla de reacción se añadió DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró. La mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando 20-25 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,3 g, 45,5 %).
MS: 253,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,43 (d,J= 8,48 Hz, 1H), 7,34-7,35 (m, 1H), 7,05 (dd,J= 2,08, 8,46 Hz, 1H), 3,90 3,90 (m, 3H), 3,61-3,62 (m, 2H), 3,24-3,25 (m, 1H), 2,87-2,89 (m, 1H), 1,15 (d,J= 6,20 Hz, 3H).
Ejemplo preparativo 58
A una disolución de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (1,20 g, 6,38 mmol) en DCM seco (50 ml) a 0 °C, se añadieron (3R)-3-metilmorfolina (0,775 g, 7,65 mmol) y Et3N (1,94 g, 19,10 mmol) y se agitó a 25 °C durante 4 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con DCM (20 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida.
La mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando 10-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (1,0 g, 59,9 %).
MS: 252,9 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,43 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,35 (d,J= 2,80 Hz, 1H), 7,04 (dd,J= 2,80, 11,40 Hz, 1H), 4,17-4,19 (m, 1H), 3,69-3,76 (m, 3H), 3,42-3,43 (m, 5H), 1,30 (d,J= 9,20 Hz, 3H).
Ejemplo preparativo 59
A una disolución de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (1,20 g, 6,38 mmol) en DCM seco (50 ml) a 0 °C, se añadieron (3S)-3-metilmorfolina (0,775 g, 7,65 mmol) y Et3N (1,94 g, 19,10 mmol) y se agitó a 25 °C durante 4 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con H<2>O (20 ml) y se extrajo con DCM (20 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida.
La mezcla de reacción en bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando 10-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (0,8 g, 49,6 %).
MS: 252,9 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 = 7,43 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,35 (d,J= 2,80 Hz, 1H), 7,04 (dd,J= 2,80, 11,20 Hz, 1H), 4,17-4,19 (m, 1H), 3,73-3,75 (m, 4H), 3,46-3,47 (m, 2H), 1,30 (d,J= 9,20 Hz, 3H).
Ejemplo preparativo 60
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,5 g, 0,00265 mol) en acetonitrilo (10 ml) se añadieron K<2>CO<3>(1,1 g, 0,00797 mol) y 2-metoxi-N-metiletano-1-amina (0,284 g, 0,00319 mol). Después de eso, la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadieron a la mezcla de reacción DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,61 g, 95 %) como un líquido marrón.
MS: 241,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,40 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,30 (d,J= 2,80 Hz, 1H), 7,00 (dd,J= 2,80, 11,20 Hz, 1H), 3,68 (t,J= 6,40 Hz, 2H), 3,58 (t,J= 7,20 Hz, 2H), 3,27 (s, 3H), 3,16 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 61
A una disolución agitada de 2-amino-3-clorofenol (4 g, 0,0280 mol) en etanol (80 ml) se añadió O-etilcarbonoditioato potásico (4,49 g, 0,0280 mol), después se calentó a 85 °C durante 12 h en N<2>. Después de la finalización de la reacción por LCMS, la mezcla de reacción se concentró, el producto crudo se acidificó usando ácido acético (pH = 5) y el sólido se filtró, se lavó con agua, se secó al vacío durante 6 h para obtener 4-clorobenzo[d]oxazol-2-tiol (4,6 g, 89 %) como un sólido marrón pálido.
MS: 186,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 14,44 (bs, 1H), 7,46 (d,J= 10,80 Hz, 1H), 7,35 (d,J= 11,20 Hz, 1H), 7,23 (t,J= 10,80 Hz, 1H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (4,6 g, 0,0244 mol) en DCM (90 ml) se añadió cloruro de oxalilo (3,20 ml, 0,0374 mol) seguido de DMF (1 ml) a 0 °C, después se agitó a 25 °C durante 1 h. Después, se añadieron<t>E<a>(10 ml, 0,0734 mol) y morfolina (2,5 ml, 0,0293 mol) a 0 °C y se agitó a 25 °C durante 2 h en nitrógeno. Después de la finalización de la reacción seguida por TLC, se añadió agua (40 ml) y se extrajo con DCM (2x50 ml). La fase orgánica se concentró y el producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando 10-15 % de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (3,4 g, 58 %) como un sólido amarillo pálido.
MS: 239,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,40 (d,J= 10,80 Hz, 1H), 7,23 (d,J= 10,40 Hz, 1H), 7,03 (t,J= 10,80 Hz, 1H), 3,71-3,73 (m, 4H), 3,60-3,62 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 62
Etapa A
A una suspensión de NaH (0,47 g, 19,8 mmol) en THF (10 ml) se añadió gota a gota 1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de íerc-butilo (1,8 g, 6,61 mmol) (disuelto en THF) a 0 °C y después se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de eso, se añadió yodometano (0,7 ml, 11,76 mmol) a 0 °C y después se agitó a ta durante 2 h. Después de la finalización de la TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua con hielo seguido de extracción usando acetato de etilo. La fase orgánica se concentró y la mezcla de reacción en bruto para proporcionar 5-metil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de íerc-butilo (1,5 g, bruto). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa. MS: 287,2 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (1,5 g, 5,24 mmol) en DCM (20 ml) se añadió HCl 4,0 M (5 ml) en dioxano. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se lavó con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón (800 mg, bruto).
MS: 187,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 63
Etapa A
A una disolución de hidrocloruro de (3-metoxifenil)hidrazina (10 g, 57,4 mmol) y 4-oxopiperidin-1-carboxilato de íercbutilo (11,3 g, 57,4 mmol) en etanol (100 ml), se añadió ácido tartárico. Se añadió dimetilurea (30:70, 10 g) y se calentó a 70 °C durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a 25 °C y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en agua y se basificó a pH = 14 con disolución de NaOH (30 %) y se extrajo con DCM. La fase orgánica se separó y se secó sobre Na2SO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida para dar 7-metoxi-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol como una goma amarilla pálida (2,5 g, 21 %). El producto bruto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 203,0 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (600 mg, 2,9 mmol) en THF (6 ml) a 25 °C, se añadieron trietilamina (0,8 ml, 5,8 mmol) y anhídrido de Boc (650 mg, 3 mmol) y se agitó durante 12 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando hexano: EtOAc (80:20) para proporcionar 7-metoxi-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de íerc-butilo como un sólido amarillo pálido (610 mg, 68 %).
MS: 303,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 = 10,69 (bs, 1H), 7,25 (d,J= 11,60 Hz, 1H), 6,80 (d,J= 2,80 Hz, 1H), 6,61 (dd,J= 2,80, 11,60 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,67-3,68 (m, 2H), 2,73 (bs, 2H), 1,44 (s, 9H).
MS: 187,1 (M+H)+.
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (550 mg, 1,8 mmol) en THF (5 ml) a 0 °C, se añadió NaH (aceite mineral al 60 %, 0,14 g, 3,6 mmol) y se agitó durante 30 min. Después se añadió cloruro de ptoluensulfonilo (342 mg, 1,8 mmol) y se agitó durante 45 minutos. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre Na2SO4. Se filtró y los disolventes se evaporaron a presión reducida para producir 7-metoxi-5-tosil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo como un sólido blanquecino (550 mg, 66 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 357,0 (M+H)+-Boc.
Etapa D
A una disolución del compuesto del título de la etapa C anterior (550 mg, 1,204 mmol) en DCM seco (5 ml) a 0 °C, se añadió lentamente HCl (g) en dioxano (2 M, 5 ml) y se agitó a 25 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se evaporó a presión reducida para producir el producto bruto. Se lavó con éter dietílico para proporcionar 7-metoxi-5-tosil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol como un sólido blanquecino (350 mg, 81%).
EM: 357,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,73 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,37 (d,J= 8,00 Hz, 2H), 7,27 (d,J= 8,40 Hz, 1H), 6,85-6,86 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,72 (s, 2H), 2,90-2,97 (m, 4H), 2,32 (s, 3H).
Ejemplo preparativo 64
A una disolución agitada de 8-metil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol (1 g, 5,37 mmol) en DCM (20 ml) se añadieron TEA (2,25 ml, 16,1 mmol) y anhídrido de BOC (1,85 ml, 8,05 mol) a 0 °C, después se agitó a 25 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadió agua a la mezcla de reacción seguido de extracción usando DCM. La fase orgánica se separó y se lavó con disolución de salmuera, se concentró y se lavó con hexano para obtener los compuestos del título (1,1 g, 71 %) de cómo un sólido blanquecino.
MS: 287,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 10,74 (s, 1H), 7,16 (d,J= 8,44 Hz, 1H), 6,85 (d,J= 8,28 Hz, 1H), 4,49 (s, 2H), 3,69 (t,J= 5,64 Hz, 2H), 2,74 (t,J= 5,28 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
Etapa B
A una suspensión de hidruro sódico (0,125 g, 3,13 mmol) en THF (10 ml) se añadió gota a gota el compuesto del título de la Etapa A anterior (0,6 g, 2,08 mmol) (disuelto en THF 20 ml) a 0 °C, después se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de eso, se añadió cloruro de tosilo (1,19 g, 6,25 mmol) a 0 °C gota a gota (disuelto en THF 20 ml) y después se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada, el sólido formado se filtró y se lavó con agua y se secó para obtener el compuesto del título (0,550 g, 57 %) como un sólido blanco.
MS: 341,1 (M+H)+-Boc.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,91 (d,J= 8,52 Hz, 1H), 7,73 (d,J= 8,20 Hz, 2H), 7,34 (d,J= 8,40 Hz, 2H), 7,26 (s, 1H), 7,15 (d,J= 8,56 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,68 (t,J= 5,60 Hz, 2H), 3,06 (s, 2H), 2,29-2,30 (m, 6H), 1,43 (s, 9H), Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,55 g, 1,20 mmol) en DCM se añadió HCl 4 M (4 ml) en dioxano a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se filtró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,40 g, 85,9 %).
Ejemplo preparativo 65
A una disolución agitada de 8-cloro-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol (1 g, 4,84 mmol) en DCM (20 ml) se añadieron TEA (2,02 ml, 14,5 mmol) y anhídrido de BOC (1,67 ml, 7,26 mmol) a 0 °C, después se agitó a 25 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadió a la mezcla de reacción agua seguido de extracción usando DCM. La fase orgánica se separó y se lavó con disolución de salmuera, se concentró para obtener 8-cloro-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de íerc-butilo (1 g, 66,5 %) como un sólido blanco.
MS: 305,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 11,12 (bs, 1H), 7,46 (d,J= 1,68 Hz, 1H), 7,30 (d,J= 8,56 Hz, 1H), 7,03 (dd,J= 1,96, 8,52 Hz, 1H), 4,51 (s, 2H), 3,70 (t,J= 5,64 Hz, 2H), 2,77 (t,J= 5,32 Hz, 2H), 1,47 (s, 9H).
Etapa B
A una suspensión de hidruro sódico (0,096 g, 2,42 mmol) en THF (10 ml) enfriada a 0 °C, se añadió gota a gota el compuesto del título de la etapa A anterior (0,5 g, 1,61 mol) (disuelto en THF 20 ml) a 0 °C, después se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de eso, se añadió gota a gota cloruro de tosilo (0,921 g, 48,3 mol) a 0 °C (disuelto en THF 20 ml) y después se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada seguido de extracción usando acetato de etilo (100 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró. El producto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando éter de petróleo en acetato de etilo (75:25) para obtener 8-cloro-5-(ptolilsulfonil)-3,4-dihidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de íerc-butilo (0,450 g, 60 %) como un sólido blanco.
MS: 361,1 (M+H)+-Boc.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,05 (d,J= 8,88 Hz, 1H), 7,78 (d,J= 8,16 Hz, 2H), 7,64 (d,J= 1,96 Hz, 1H), 7,35 7,36 (m, 3H), 4,44 (s, 2H), 3,68 (t,J= 5,60 Hz, 2H), 3,08 (bs, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,43 (s, 9H).
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,45 g, 0,97 mol) en DCM se añadió HCl 4 M (3 ml) en dioxano a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se concentró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (0,32 g, 91 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 361,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 66
Etapa A
A una disolución de 5-bromo-2-clorobenzo[d|oxazol (1 g, 4,30 mmol) en DCM seco (10 ml) a 0 °C, se añadieron morfolina (0,56 g, 6,42 mmol) y Et<3>N (1,7 ml, 12,9 mmol) y se agitaron a 25 °C durante 4 h. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con H<2>O (10 ml) y se extrajo con DCM (10 ml x 2). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a presión reducida para producir el producto bruto. Se trituró con éter dietílico (100 ml), se filtró, se lavó con éter dietílico (5 ml) y se secó para proporcionar el compuesto del título (0,85 g, 71 %) como un sólido blanquecino.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 7,48 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 7,34-7,38 (m, 1H), 7,16-7,17 (m, 1H), 3,70-3,72 (m, 4H), 3,58-3,59 (m, 4H).
Ejemplo preparativo 67
A una disolución agitada de 4,6-dicloropiridin-3-amina (2,5 g, 15,3 mmol) en THF (50 ml) se añadió trifosgeno (4,55 g, 15,3 mol) en THF gota a gota seguido de la adición de TEA (4,28 ml, 30,7 mol) y se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetonitrilo (50 ml) y se añadieron tolueno (50 ml) y morfolina (1,34 g, 15,3 mmol) y se calentaron a 110 °C durante 12 h. Después de que se comprobara la TLC, el producto bruto se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando éter de petróleo:acetato de etilo (20:80) para obtener N-(4,6-dicloro-3-piridil)morfolin-4-carboxamida (3,0 g, 70,1 %) como un sólido blanco. MS: 276,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,55 (s, 1H), 8,38-8,40 (m, 1H), 7,78-7,79 (m, 1H), 3,57-3,58 (m, 4H), 3,40-3,42 (m, 4H).
Etapa B
A una disolución del compuesto del título de la etapa A anterior (3,0 g, 10,8 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se añadieron Cs<2>COa (10.5 g, 32,4 mol), 1,10-fenantrolina (0,972 g, 5,40 mol) y yoduro de cobre (1,03 g, 5,40 mol), después se calentaron a 120 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y se lavó con DCM/MeOH, se concentró y el producto bruto se purificó en columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de EtOAc/hexano (40/60) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (0,150 g, bruto). El producto bruto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 240,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 68
Etapa A
A una disolución agitada de 8-etoxi-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol (1 g, 4,62 mmol) en DCM (20 ml) se añadieron TEA (1,97 ml, 13,87 mmol) y anhídrido de BOC (1,5 ml, 6,93 mol) a 0 °C, después se agitó a 25 °C durante 12 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, a la mezcla de reacción se añadió agua seguido de extracción usando DCM. La fase orgánica se separó y se lavó con disolución de salmuera, se concentró y se lavó con hexano para obtener 8-etoxi-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo (0,8 g, 54 %) como un sólido marrón.
MS: 317,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 10,69 (bs, 1H), 7,16 (d,J= 8,68 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,66 (t,J= 6,76 Hz, 1H), 4,48 (s, 1H), 3,97-3,99 (m, 2H), 3,69 (t,J= 5,48 Hz, 2H), 2,74 (bs, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,23 (t,J= 6,84 Hz, 3H).
Etapa B
A una suspensión de hidruro sódico (0,136 g, 2,84 mmol) en THF (5 ml) se añadió gota a gota el compuesto del título de la etapa A anterior (0,3 g, 0,95 mmol) (disuelto en THF 10 ml) a 0 °C, después se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de eso, se añadió gota a gota cloruro de tosilo (0,27 g, 1,42 mmol) a 0 °C (disuelto en THF 10 ml) y después se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada, el sólido formado se filtró y se lavó con agua y se secó para obtener 8-etoxi-5-tosil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-carboxilato de ferc-butilo (0,32 g, 72 %) como un sólido blanco. El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 371,2 (M+H)+-Boc.
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (0,32 g, 0,68 mmol) en DCM se añadió HCl 4 M (4 ml) en dioxano a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó 2 h. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se evaporó para eliminar el disolvente y se filtró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón (0,13 g, 56 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 371,2 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 69
A una disolución agitada de 4-oxopiperidina-1-carboxilato de íerc-butilo (10,00 g, 0,0502 mol) en etanol (100 ml) se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (6,98 g, 0,100 mol) y CH3COONa (8,23 g, 0,100 mol), después se calentó a 90 °C durante 12 h en atmósfera de nitrógeno. Después de la finalización de la reacción por LCMS, la mezcla de reacción se concentró y al material bruto se añadió agua (100 ml) seguido de extracción usando diclorometano (250 ml). La fase orgánica se concentró y el producto bruto se purificó por columna de gel de sílice (Biotage) usando 18-30 % de acetato de etilo en éter de petróleo para obtener 4-(hidroxiimino)piperidin-1-carboxilato de íerc-butilo (5 g, 46,4 %) como un sólido blanco.
MS: 159,1 (M+H)+- í-butilo
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 10,45 (s, 1H), 3,33-3,36 (m, 4H), 2,42-2,44 (m, 2H), 2,20-2,22 (m, 2H), 1,41 (s, 9H).
Etapa B
A una suspensión de hidruro sódico (0,268 g, 7,00 mmol) en DMF (3 ml) se añadió gota a gota el compuesto del título de la etapa A anterior (0,500 g, 2,33 mmol) (disuelto en DMF 5 ml) a 0 °C, después se agitó a temperatura ambiente durante 60 min. Después de eso, se añadió gota a gota 2-fluoropiridina (0,340 g, 3,50 mmol) a 0 °C (disuelta en DMF 2 ml) y después se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada seguido de extracción usando acetato de etilo (30 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener 4-oxo-3-(2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)piperidin-1 -carboxilato de íerc-butilo (300 mg, bruto) como un sólido marrón pálido. El producto bruto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 293,2 (M+H)+.
Etapa C
Una suspensión del compuesto del título de la etapa B anterior (0,5 g, 1,71 mmol) en H<2>SO<4>concentrado (2,0 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h bajo atmósfera de nitrógeno. Después de eso, se comprobó la LCMS que indicó solo material de partida, luego la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 16 h en atmósfera de nitrógeno. Después de eso, se comprobó la LCMS que indicó el 80 % de la masa de producto. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, a esto se añadió 10% de acetonitrilo en agua (20,0 ml) y la mezcla de reacción se basificó usando K<2>CO<3>sólido, después se filtró el sólido. El filtrado se concentró para obtener el compuesto del título (250 mg, bruto) como un aceite gomoso marrón. El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 175,1 (M+H)+.
Etapa D
A un agitado del compuesto del título de la etapa C anterior (0,6 g, 3,15 mmol) en tetrahidrofurano (10,0 ml) se añadieron TEA (1,32 ml, 9,46 mmol) y anhídrido de BOC (0,869 ml, 3,78 mmol) a 0 °C, después se agitó a 25 °C durante 12 h en atmósfera de nitrógeno. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se concentró y el producto bruto se purificó por columna de gel de sílice (Biotage) usando 15-20 % de acetato de etilo en éter de petróleo para obtener 7,8-dihidrofuro[2,3-¿>:4,5-c]dipiridin-6(5H)-carboxilato de íerc-butilo (500 mg, 53 %) como un sólido blanquecino.
MS: 275,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,21-8,22 (m, 1H), 8,05-8,06 (m, 1H), 7,30-7,31 (m, 1H), 4,51 (s, 2H), 3,76 (t,J =5,60 Hz, 2H), 2,86 (t,J= 5,60 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa E
A una disolución agitada del compuesto del título de la etapa D anterior (0,5 g, 1,67 mmol) en diclorometano (5 ml) se añadió HCl 4,0 M en dioxano (2 ml) a 0 °C, después se agitó durante 2 h a 0 °C-20 °C. Después de la finalización de la reacción por TLC y LCMS, la mezcla de reacción se concentró para obtener el compuesto del título (350 mg, Cuantitativo) como un sólido blanquecino.
MS: 175,1 (M+H)+.
Ejemplo preparativo 70
Etapa A
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,25 g, 0,0013 mol) en acetonitrilo (15 ml) se añadieron K<2>CO<3>(0,55 g, 0,0040 mol) y (2S,6R)-2,6-dimetilmorfolina (0,17 g, 0,0014 mol). Después de eso, la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h.
Después de la finalización de la reacción por TLC, a la mezcla de reacción se añadió DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para dar el compuesto del título (0,2 g, 56 %) como un sólido blanco.
MS: 267,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,43 (d,J= 8,44 Hz, 1H), 7,34 (d,J= 1,96 Hz, 1H), 7,04-7,04 (m, 1H), 3,99 (d,J= 13,16 Hz, 2H), 3,66-3,67 (m, 2H), 2,82 (t,J= 10,84 Hz, 2H), 1,00 (d,J= 6,28 Hz, 6H).
Ejemplo preparativo 71
Etapa A
A una disolución agitada de 2,5-dicloro-1,3-benzoxazol (0,6 g, 0,0032 mol) en acetonitrilo (15 ml) se añadieron K<2>CO<3>(1,32 g, 0,0096 mol) y ferc-butilamina (0,255 g, 0,0035 mol). Después de eso la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h.
Después de la finalización de la reacción por TLC, se añadieron a la mezcla de reacción DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,4 g, 55 %) como un sólido marrón.
MS: 225,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 7,97 (s, 1H), 7,31-7,32 (m, 2H), 6,96-6,97 (m, 1H), 1,40 (s, 9H).
Ejemplo preparativo 72
Etapa A
A una disolución agitada de 6-bromo-2-cloroquinazolina (0,3 g, 1,234 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se añadieron K<2>CO<3>(0,34 g, 2,467 mmol) y morfolina (0,17 g, 1,85 mmol). Después de eso, la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 12 h.
Después de la finalización de la reacción por TLC, a la mezcla de reacción se añadieron DCM y agua (50 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener el compuesto del título (0,25 g, 69 %) como un sólido amarillo pálido. El producto se tomó como tal para la siguiente etapa.
MS: 294,0 (M+H)+.
Ejemplo Preparativo 73
Etapa A
A una disolución agitada de 2,6-dicloro-1,5-naftiridina (100 mg, 0,502 mmol) en dioxano (3 ml), se añadieron trietilamina (0,210 ml, 1,507 mmol) y morfolina (0,052 ml, 0,603 mmol). A continuación, la mezcla de reacción se agitó a 110 °C. Después de 4 h, la reacción no estaba completa, por lo tanto, se añadió trietilamina (0,210 ml, 1,507 mmol) y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a 110 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y después se disolvió en diclorometano y se lavó con disolución acuosa saturada de NH<4>CL La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el producto del título como un sólido beige (93 mg, 74 %).
MS: 250,02 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,05 (d,J= 9,4 Hz, 1H), 7,98 (d,J=<8 ,8>Hz, 1H), 7,59 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,53 (d,J= 9,5 Hz, 1H), 3,71 (hept,J= 3,3, 2,6 Hz,<8>H).
Ejemplo preparativo 74
Etapa A
Se disolvió 2-bromo-5-cloropiridina (200 mg, 1,039 mmol) en acetonitrilo (2,5 ml), a esto se añadieron hidrocloruro de (1S,4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptano (211 mg, 1,559 mmol) y trietilamina (0,362 ml, 2,60 mmol) y la suspensión se irradió en un microondas a 160 °C durante 1 h 20. La muestra se extrajo después entre agua (20 ml) y diclorometano (20 ml). La fase acuosa se lavó dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One con un gradiente de diclorometano/metanol (100/0 -> 90/10) para obtener el producto como un sólido beige (57 mg, 26 %).
MS: 211,03 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 8,06 (d,J= 2,6 Hz, 1H), 7,56 (dd,J= 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,57 (d,J= 9,0 Hz, 1H), 4,80 (d,J= 2,3 Hz, 1 H), 4,65 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 3,76 (dd,J= 7,3, 1,5 Hz, 1H), 3,61 (d,J= 7,3 Hz, 1H), 3,43 (dd,J= 10,1, 1,5 Hz, 1H), 3,20 (d,J= 10,3 Hz, 1H), 1,90 (dd,J= 9,7, 2,3 Hz, 1H), 1,87 - 1,81 (m, 1H).
Ejemplo preparativo 75
Etapa A
Se disolvió 2-bromo-5-cloropiridina (200 mg, 1,039 mmol) en acetonitrilo (2,5 ml), a esto se añadieron hidrocloruro de (1R,4R)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptano (211 mg, 1,559 mmol) y trietilamina (0,362 ml, 2,60 mmol) y la suspensión se irradió en el microondas a 160 °C durante 1 h 20. La muestra se extrajo después entre agua (20 ml) y diclorometano (20 ml). La fase acuosa se lavó dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One con un gradiente de diclorometano/metanol (100/0 -> 90/10) para obtener el producto como un sólido beige (51 mg, 23 %).
MS: 211,04 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 8,06 (dd,J= 2,7, 0,7 Hz, 1H), 7,56 (dd,J= 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,63-6,50 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,64 (s, 1H), 3,75 (dd,J= 7,3, 1,5 Hz, 1H), 3,61 (d,J= 7,3, 0,9 Hz, 1H), 3,43 (dd,J= 10,1, 1,6 Hz, 1H), 3,20 (d,J= 10,1, 1,1 Hz, 1H), 1,94-1,78 (m, 2H).
Ejemplo 1
A tetrahidrofurano desgasificado (5 ml) se añadió aducto de cloro-(2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxi-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil]paladio(II)- éter metil-í-butílico (PdRuPhos G1) (0,017 g, 0,024 mmol), 2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo (RuPho) (0,011 g, 0,024 mmol), el compuesto del título del ejemplo preparativo 2 (0,05 g, 0,024 mmol) y la 4-(6-bromobenzo[d]tiazol-2-il)morfolina disponible comercialmente (0,073 g, 0,029 mmol). Después, se añadió una disolución 1 M de bis(trimetilsilil)amida de litio (LiHMDS) en tetrahidrofurano (1 ml, 1 mmol). La mezcla de reacción resultante se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se disolvió en diclorometano (100 ml). La fase orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de acetato de etilo/n-heptano (80/20 => 100/0) para proporcionar el compuesto del título (0,070 g, 69 %).1
1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 5 = 7,51 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 7,31 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,20 (dd,J= 8,8, 4,2 Hz, 1H), 7,14 (td,J= 8,6, 2,4 Hz, 2H), 6,94 (td,J= 9,1, 2,5 Hz, 1H), 4,40 (s, 2H), 3,88 - 3,81 (m, 4H), 3,70 (t,J= 5,7 Hz, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,59 (t,J= 4,9 Hz, 4H), 2,92 (t,J= 5,7 Hz, 2H).
Ejemplo 2
Etapa A
A una disolución agitada del compuesto del título del ejemplo preparativo 1 (0,150 g, 1 eq.) en 1,4-dioxano seco (5 ml) se añadió la 4-(6-bromobenzo[a(]tiazol-2-il)morfolina disponible comercialmente (1 eq.), ferc-butóxido sódico (3 eq.) y la mezcla se desgasificó durante 10 minutos en una atmósfera de N<2>. A esta mezcla de reacción se añadió Pd2(dba)3 (0,05 eq.) y Ru-Phos (0,1 eq.) y la mezcla se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró y el producto bruto se purificó por cromatografía en columna o HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título 6 como se indica en la tabla 2.
Ejemplos 3 a 96e
Siguiendo los procedimientos de acoplamiento de paladio como se describe en los ejemplos 1 y 2, excepto que se usan los derivados amino tricíclico y bromo/cloro indicados en la tabla siguiente, se prepararon los siguientes compuestos. Los ejemplos 71 y 72 se prepararon siguiendo los procedimientos como se describen en los ejemplos preparativos 42 y 43, respectivamente, seguido del procedimiento de desprotección descrito en el Ejemplo 97.
Tabla 2
Ejemplo 97
El compuesto del título del ejemplo preparativo 33 (0,072 g, 0,142 mmol) y carbonato de cesio (0,107 g, 0,328 mmol) se colocaron en un tubo microondas seguido de MeOH (1,5 ml) y THF (3 ml). La mezcla de reacción se irradió en un microondas a 110 °C durante 30 minutos y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. Los disolventes se eliminaron a presión reducida y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One con un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (80/20-> 0/100) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,027 g, 53 %).
MS: 354,2 (M+H)+.
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 5 = 10,96 (s, 1H), 7,39 (d,J= 9,9 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,26 (t,J= 4,4 Hz, 1H), 7,20 (dd,J= 10,0, 2,6 Hz, 1H), 6,85 (td,J= 9,2, 2,6 Hz, 1H), 4,62 (s, 2H), 3,91 (t,J= 5,7 Hz, 2H), 3,79-3,67 (m, 4H), 3,37 3,32 (m, 4H), 2,88 (t,J= 5,6 Hz, 2H).
Ejemplos 98 a 105f
Siguiendo el procedimiento de escisión con tosilato como se describe en el ejemplo 97, excepto que se usaron los precursores protegidos con tosilo indicados en la tabla siguiente, se prepararon los siguientes compuestos: Tabla 3
Ejemplo 106
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 7 (500 mg, 1,31 mmol) en DMF (5 ml), se añadió 2,5-diclorobenzoxazol (327 mg, 1,74 mmol) y carbonato potásico (602 mg, 4,36 mmol) y se calentó a 100 °C durante<8>horas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo; el precipitado sólido se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título. El producto se tomó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional (0,500 g, 77 %).
MS: 496,1 (M+H)+.
Etapa B
En un matraz de fondo redondo de dos bocas de 50 ml, se añadió 1,4-dioxano seco (5 ml) y se desgasificó durante 20 minutos. A esto, se añadieron acetato de paladio (67 mg, 0,1008 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (144 mg, 0,302 mmol). La disolución resultante fue de color naranja y el desgasificado continuó durante otros 10 minutos. La suspensión se calentó a 100 °C en un baño de aceite precalentado durante pocos segundos (20-30 segundos). El color se cambió a verde oscuro. El baño de aceite se retiró y se desgasificó durante 5-10 minutos. A esto, se añadieron el compuesto del título de la etapa A anterior (500 mg, 1,008 mmol), morfolina<( 88>mg, 1,008 mmol) y carbonato de cesio (0,98 g, 3,024 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 3 horas. Después de 3 h, la LC-SM mostró el producto como pico principal. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título. El producto se tomó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional (0,450 g, 82 %).
MS: 547,3 (M+H)+.
Etapa C
A una disolución del compuesto del título de la etapa B anterior (450 mg, 0,82 mmol) en 1,4-dioxano:metanol (1:1; 5 ml), se añadió ferc-butóxido sódico (230 mg, 2,4 mmol) y se calentó a 70 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. La purificación se realizó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de éter de petróleo/EtOAc (0-100 %) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,270 g, 84 %).
MS: 393,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 11,10 (s, 1H), 7,47-7,48 (m, 1H), 7,28 (d,J= 8,72 Hz, 1H), 7,08-7,09 (m, 1H), 6,92 (d,J= 2,20 Hz, 1H), 6,83-6,84 (m, 1H), 6,62-6,63 (m, 1H), 4,81 (s, 2H), 3,98-4,00 (m, 2H), 3,73-3,74 (m, 4H), 3,04 3,05 (m, 4H), 2,94-2,95 (m, 2H).
Ejemplo 107
Etapa A
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 7 (500 mg, 1,318 mmol) en DMF (5 ml), se añadieron 2,5-diclorobenzotiazol (268 mg, 1,32 mmol) y carbonato potásico (545 mg, 3,95 mmol) y se calentó a 100 °C durante<8>horas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo, el precipitado sólido se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título (500 mg, 74 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional.
MS: 513,1 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución agitada del compuesto del título de la etapa A anterior (200 mg, 0,39 mmol) en dioxano seco (5 ml), se añadió morfolina (51 mg, 0,58 mmol), ferc-butóxido sódico (112 mg, 1,17 mmol) y se desgasificó durante 10 min en una atmósfera de N<2>. A esta mezcla de reacción se añadió Tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (17,9 mg, 0,019 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo (18,2 mg, 0,039 mmol) y se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por LCMS), la mezcla de reacción se filtró a través de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida para producir el producto bruto. La purificación se realizó en columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de éter de petróleo/EtOAc (0-100 %) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (50 mg, 33 %).
MS: 409,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 = 11,11 (s, 1H), 7,60 (d,J=<8 , 68>Hz, 1H), 7,48-7,49 (m, 1H), 7,07-7,08 (m, 2H),<6>,<86><6 , 88>(m, 2H), 4,77 (s, 2H), 3,97-3,98 (m, 2H), 3,74-3,76 (m, 4H), 3,11-3,12 (m, 4H), 2,95-2,96 (m, 2H).
Ejemplo 108
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 7 (1 g, 2,63 mmol) en DMF (10 ml), se añadieron 2,6-diclorobenzotiazol (0,537 g, 2,63 mmol) y carbonato potásico (1,09 g, 7,89 mmol) y se calentó a 100 °C durante<8>horas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo, el precipitado sólido se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título (1,0 g, 74 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional. MS: 513,2 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución agitada del compuesto del título de la etapa A anterior (150 mg, 0,293 mmol) en dioxano seco (5 ml), se añadió morfolina (39 mg, 0,44 mmol), íerc-butóxido sódico (85 mg, 0,87 mmol) y se desgasificó durante 10 min en una atmósfera de N2. A esta mezcla de reacción se añadió Tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (13,4 mg, 0, 0015 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo (13,65 mg, 0,029 mmol) y se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por LCMS), la mezcla de reacción se filtró a través de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida para producir el producto bruto. La purificación se realizó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de éter de petróleo/EtOAc (0-100 %) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (60 mg, 50 %).
MS: 409,1 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 = 11,10 (s, 1H), 7,48-7,50 (m, 1H), 7,36-7,38 (m, 2H), 7,08-7,09 (m, 1H), 6,96-6,97 (m, 1H), 6,85-6,86 (m, 1H), 4,74 (s, 2H), 3,94-3,95 (m, 2H), 3,74-3,75 (m, 4H), 3,06-3,07 (m, 4H), 2,94-2,95 (m, 2H).
Ejemplo 109
A una disolución del compuesto del título del ejemplo preparativo 7 (250 mg, 0,725 mmol) en DMF (5 ml), se añadió 2,6-diclorobenzoxazol (166 mg, 0,88 mmol) y carbonato potásico (326 mg, 2,36 mmol) y se calentó a 100 °C durante<8>horas. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua enfriada con hielo, el precipitado sólido se filtró y se secó para proporcionar el compuesto del título (250 mg, 70 %). El producto se tomó como tal para la siguiente etapa sin purificación adicional.
MS: 496,1 (M+H)+.
Etapa B
A una disolución agitada del compuesto del título de la etapa A anterior (250 mg, 0,505 mmol) en dioxano seco (5 ml), se añadió morfolina (53 mg, 0,60 mmol), íerc-butóxido sódico (145 mg, 1,52 mmol) y se desgasificó durante 10 min en una atmósfera de N2. A esta mezcla de reacción se añadió Tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (23,1 mg, 0,0252 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo (23,53 mg, 0,051 mmol) y se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por LCMS), la mezcla de reacción se filtró a través de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida para producir el producto bruto. La purificación se realizó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de éter de petróleo/EtOAc (0-100 %) para proporcionar el compuesto del título como un sólido (50 mg, 25 %).
MS: 393,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dk) 5 = 11,09 (s, 1H), 7,45-7,46 (m, 1H), 7,17 (d,J =8,56 Hz, 1H), 7,08-7,09 (m, 2H), 6,87 6,79 (m, 2H), 4,77 (s, 2H), 3,95-3,96 (m, 2H), 3,72-3,74 (m, 4H), 3,03-3,04 (m, 4H), 2,91-2,93 (m, 2H).
Ejemplo 110
Etapa A
A una disolución agitada del compuesto del título del ejemplo preparativo 1 (0,15 g, 0,43 mmol) en 1,4-dioxano seco (5 ml), se añadió el compuesto del título del ejemplo preparativo 50 (0,17 g, 0,43 mmol) y Cs<2>CO<3>sódico (0,420 g, 1,29 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó durante 10 min en atmósfera de N<2>. Después se añadieron Pd(OAc<)2>(0,009 g, 0,043 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (0,062 g; 0,129 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción (monitorizada por LCMS), la mezcla de reacción se filtró a través de celite y se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró a presión reducida para producir el producto bruto. El material bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida o HPLC preparativa para proporcionar el compuesto protegido con tosilo. A una disolución de compuesto de tosilo (1,0 eq.) en dioxano:MeOH (1:1, 10 vol), se añadió NaOtBu (3 eq.) y se calentó a 70 °C durante<6>horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el producto en bruto se purificó en columna para proporcionar el producto deseado. El material bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida o HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título (0,042 g, 24 %).
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe): 511,00 (bs, 1H), 8,70 (s, 1H), 7,96 (d,J= 9,60 Hz, 1H), 7,45-7,46 (m, 1H), 7,39 (d,J= 9,20 Hz, 1H), 7,07-7,08 (m, 2H), 6,82-6,83 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,02-4,04 (m, 2H), 3,73 (d,J= 4,80 Hz, 4H), 3,59 (d,J= 4,40 Hz, 4H), 2,90 (bs, 2H).
MS: 404,2 (M+H)+.
Ejemplos 111 y 112
Siguiendo el procedimiento de acoplamiento de paladio seguido de desprotección de tosilo como se describe en los Ejemplos 110, se prepararon los siguientes compuestos.
Tabla 4
Ejemplo 113
Etapa A
Se colocaron acetato de paladio (II) (0,013 g, 0,058 mmol) y 4,5-bis(d¡fen¡lfosfino)-9,9-d¡met¡lxanteno (XANTPHOS) (0,101 g, 0,174 mmol) en un vial de reacción y se desgasificaron. Se añadió 1,4-dioxano<(6>ml). La disolución resultante se desgasificó brevemente. La suspensión se calentó a 100 °C (en un bloque de calentamiento precalentado) durante menos de 1 minuto hasta que el color de la disolución viró de naranja a rosa oscuro. Después, el vial se retiró del bloque de calentamiento y se añadieron el compuesto del título del ejemplo preparativo 52 (148 mg, 0,581 mmol), el compuesto del título del ejemplo preparativo 1 (0,200 g, 0,581 mmol) y carbonato de cesio (0,662 g, 2,033 mmol). El vial de reacción se llenó con argón antes de cerrarlo. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/00-> 50/50). La mezcla de reacción en bruto obtenida (0,261 g, 0,469 mmol) y carbonato de cesio (0,214 g, 0,658 mmol) se colocaron en un tubo de microondas, seguido de MeOH (4 ml) y THF<(8>ml). La mezcla de reacción se irradió en un microondas a 110 °C durante 30 minutos y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. Los disolventes se eliminaron a presión reducida y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One con un gradiente de diclorometano/metanol (100/00 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,020 g, 9 %).
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,97 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,54 (d, 2H), 7,33 - 7,10 (m, 4H),<6 , 86>(td, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,72 (dt,<6>H), 3,55 (t, 4H),2, 95 (d, 2H).
MS: 403,19 (M+H)+.
Ejemplo 114
Etapa A
Se colocaron acetato de paladio (II) (0,013 g, 0,058 mmol) y 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XANTPHOS) (0,101 g, 0,174 mmol) en un vial de reacción y se desgasificaron. Se añadió 1,4-dioxano<(6>ml). La disolución resultante se desgasificó brevemente. La suspensión se calentó a 100 °C (en un bloque de calentamiento precalentado) durante menos de 1 minuto hasta que el color de la disolución viró de naranja a rosa oscuro. Después, el vial se retiró del bloque de calentamiento y se añadieron el compuesto del título del ejemplo preparativo 51 (144 mg, 0,581 mmol), el compuesto del título del ejemplo preparativo 1 (0,200 g, 0,581 mmol) y carbonato de cesio (0,662 g, 2,033 mmol). El vial de reacción se llenó con argón antes de cerrarlo. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One empleando un gradiente de n-heptano/acetato de etilo (100/00 -> 50/50). La mezcla de reacción en bruto obtenida (0,122 g, 0,219 mmol) y carbonato de cesio (0,214 g, 0,658 mmol) se colocaron en un tubo de microondas, seguido de MeOH (4 ml) y THF<(8>ml). La mezcla de reacción se irradió en un microondas a 110 °C durante 30 minutos y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. Los disolventes se eliminaron a presión reducida y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando un sistema de purificación Biotage Isolera One con un gradiente de diclorometano/metanol (100/00 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (0,081 g, 35 %).
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 5 10,97 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,40-7,13 (m, 3H), 7,02 (d, 1H), 6,97-6,79 (m, 2H), 4,49 (s, 2H), 3,80 (t, 2H), 3,72 (t, 4H), 3,60 (t, 4H), 2,93 (d, 2H). MS: 403,20 (M+H)+.
Ejemplo 115
Etapa A
Pd(OAc<)2>(16 mg, 0,072 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (XPhos; 103 mg, 0,2177 mmol) se añadieron a un vial de reacción y se añadió dioxano desgasificado (5 ml). El vial se llenó con gas argón y se selló. La suspensión se calentó a 100 °C durante 1 minuto, después se añadieron 8-fluoro-5-tosil-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirido[4,3-¿>]indol (ejemplo preparativo 1) (250 mg, 0,725 mmol), 4-(4-bromofenil)morfolina (210 mg, 0,87 mmol) y Cs<2>CO<3>(707 mg, 2,177 mmol) y la disolución se calentó a 100 °C durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (30 ml) y agua (30 ml). La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo dos veces más. La fase orgánica combinada se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y los disolventes se evaporaron a presión reducida. El producto bruto se purificó en columna HP-Sil (Biotage), empleando un gradiente de DCM/MeOH (100/0 -> 95/05) para proporcionar 4-(4-(8-fluoro-5-tosil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-il)fenil)morfolina (235 mg, 64 %) como un sólido amarillo.
A una disolución de 4-(4-(8-fluoro-5-tosil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-il)fenil)morfolina (0,235 mg, 0,465 mmol) en dioxano:MeOH (1:1,5 vol), se añadió NaOtBu (133 mg, 1,39 mmol) y se calentó a 70 °C durante<6>horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el producto bruto se purificó en columna en una columna HP-Sil (Biotage), empleando un gradiente de DCM/MeOH (100/0 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (57 mg, 35 %)
MS: 352,0 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 510,93 (bs, 1H), 7,21-7,24 (m, 2H), 6,99-7,01 (m, 2H), 6,85-6,86 (m, 3H), 4,24 (s, 2H), 3,73 (bs, 4H), 3,52-3,53 (m, 2H), 2,98 (bs, 4H), 2,86 (bs, 2H).
Ejemplo 116
A una disolución agitada de 7-fluoro-5-tosil-2,3,4,5-tetrahidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol (ejemplo preparativo 7) (250 mg, 0,7267 mmol) en dioxano seco (5 ml), se añadieron 5-cloro-W-(2-metoxietil)-W-metilbenzo[a(|oxazol-2-amina (ejemplo preparativo 60) (190 mg, 0,7994 mmol), terc-butóxido sódico (202 mg, 2,180 mmol) y se desgasificaron durante 10 min en atmósfera de N<2>. A esta mezcla de reacción se añadió Ruphos G4 Pd (60 mg, 0,0726 mmol) y se calentó a 100 °C hasta la finalización de la reacción. Después de la finalización de la reacción, la mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de Celite, se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna en columna HP-Sil (Biotage), empleando un gradiente de DCM/MeOH (100/0 -> 95/05) para proporcionar el compuesto del título (37 mg, 13 %).
MS: 395,0 (M+H)+.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 10,94 (bs, 1H), 7,43-7,44 (m, 1H), 7,23 (d,J =8,80 Hz, 1H), 7,06-7,06 (m, 1H), 6,99 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 6,80-6,81 (m, 1H), 6,71 -6,72 (m, 1 H), 4,32 (s, 2H), 3,64-3,65 (m, 2H), 3,56-3,58 (m, 4H), 3,27 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 2,86 (t,J= 5,20 Hz, 2H).
Ejemplos 117 a 145
Siguiendo los procedimientos presentados en el ejemplo 115 y ejemplo 116, se prepararon los siguientes compuestos.
Tabla 5
Ejemplo 146
Etapa A
A una suspensión de hidruro sódico (0,0293 g, 0,764 mmol) en DMF (3 ml) se añadió gota a gota 5-(7-fluoro-1,3,4,5-tetrahidropirido[4,3-ó]indol-2-il)-2-morfolino-1,3-benzoxazol (Ejemplo 45) (<0 , 100>g, 0,255 mmol) (disuelto en Dm F 3 ml) a 0 °C, después se agitó a temperatura ambiente durante 60 min. Después de eso, se añadió yodoetano (0,0596 g, 0,382 mmol) a 0 °C gota a gota (disuelto en DMF 2 ml) y después se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de la finalización de la reacción por TLC, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada seguido de extracción usando acetato de etilo (20 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y después se concentró para obtener un producto bruto y después se purificó por columna de gel de sílice (Biotage) usando un 40-50 % de acetato de etilo en éter de petróleo para dar 5-(5-etil-7-fluoro-3,4-dihidro-1 H-pirido[4,3-¿>]indol-2-il)-2-morfolino-1,3-benzoxazol como un sólido blanquecino. (15 mg, 14 %)
MS: 421,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 57,47-7,48 (m, 1H), 7,26-7,28 (m, 2H), 7,06 (d,J= 2,40 Hz, 1H), 6,84-6,85 (m, 1H), 6,78-6,79 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 4,10 (q,J= 7,20 Hz, 2H), 3,55-3,57 (m, 10H), 2,90 (t,J= 4,80 Hz, 2H), 1,22 (t,J= 7,20 Hz, 3H).
Ejemplos 147 a 153
Siguiendo los procedimientos de acoplamiento de paladio como se describe en los ejemplos 1,2 y 115, excepto que se usaron los derivados amino tricíclico y bromo/cloro indicados en la tabla siguiente, se prepararon los siguientes compuestos.
Tabla 5a
Sal de HCl de los compuestos de la presente invención
Ejemplo 89 HCl
Etapa A
A una disolución de 4-(6-(7-fluoro-1,3,4,5-tetrahidro-2H-pirido[4,3-¿>]indol-2-il)tiazolo[4,5-c]piridin-2-il)morfolina (ejemplo 89) (<0,1>g, 0,244 mmol) en DCM seco (5 ml), enfriado a<0>°C, se añadió HCl 4 M en dioxano (<0 , 2>ml) y se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se trituró con éter dietílico para dar el compuesto del título (0,09 g, 83 %) como un sólido marrón.
MS: 410,2 (M+H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 511,14 (bs, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,38-7,40 (m, 1H), 7,11-7,12 (m, 1H), 6,85<6 , 86>(m, 1H), 4,75 (s, 2H), 4,02 (t,J= 5,64 Hz, 2H), 3,73-3,75 (m,<8>H), 2,97 (s, 2H).
Ejemplos
Siguiendo el procedimiento de la sal de hidrocloruro como se describe en el Ejemplo 89 HCl se prepararon los siguientes compuestos.
Tabla<6>
Síntesis de radioligandos de compuestos de la presente invención
Ejemplo<3>H-12
El catalizador se añadió a un recipiente de reacción de tritio, seguido de una disolución del material de partida del ejemplo 12 (1,0 mg, 0,003 mmol) en diclorometano. El recipiente se unió al conducto de tritio y se presurizó al gas tritio a -200 °C. La disolución se agitó durante<8>horas, se enfrió a -200 °C y se eliminó el exceso de gas. El matraz de reacción se enjuagó con 4 x 1 ml de metanol transfiriendo cada uno a un matraz de recuperación de 100 ml. La fase orgánica combinada se evaporó al vacío (rendimiento bruto: 124 mCi). El material bruto se purificó por HPLC, la fase móvil se evaporó al vacío y el producto se volvió a disolver en etanol absoluto (rendimiento: 17 mCi, pureza, > 97 %). Se determinó que la actividad específica era 80,6 Ci/mmol mediante espectrometría de masas.
Ejemplo<3>H-45
El catalizador se añadió a un recipiente de reacción de tritio, seguido de una disolución del material de partida del ejemplo 45 (1,0 mg, 0,003 mmol) en diclorometano. El recipiente se unió al conducto de tritio y se presurizó al gas tritio a -200 °C. La disolución se agitó durante<8>horas, se enfrió a -200 °C y se eliminó el exceso de gas. El matraz de reacción se enjuagó con 4 x 1 ml de metanol transfiriendo cada uno a un matraz de recuperación de 100 ml. La fase orgánica combinada se evaporó al vacío (rendimiento bruto: 124 mCi). El material bruto se purificó por HPLC, la fase móvil se evaporó al vacío y el producto se volvió a disolver en etanol absoluto (rendimiento: 17 mCi, pureza, > 99 %). Se determinó que la actividad específica era 96,8 Ci/mmol mediante espectrometría de masas.
Descripción del ensayo biológico
Ensayo de desagregación de Tau de longitud completa (flTau) por tioflavina T (ThT)
La isoforma más larga de Tau humana (2N4R; 441 aminoácidos) se expresó en bacterias y se purificó. Para el ensayo de desagregación de Tau por ThT, se agregaron 35 pM de Tau recombinante de longitud completa (fl) en PBS durante 24 horas a 37 °C en presencia de 50 pM de heparina (Sigma-Aldrich) y 10 mM de DTT (Sigma-Aldrich) con agitación a 750 rpm. Los compuestos se disolvieron en sulfóxido de dimetilo anhidro (DMSO, Sigma-Aldrich) para alcanzar una concentración de 10 mM. Los agregados de flTau y diluciones en serie de compuestos se mezclaron entre sí en PBS (volumen 50 pl) hasta una concentración final de 2 pM de agregados de flTau y de 160 a 0,04 pM de compuestos. La mezcla se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente (TA), luego se transfirieron 40 pl de esta mezcla a un ensayo de placa negra de 384 pocillos (Perkin-Elmer) y se mezclaron con 10 pl de ThT 100 pM en glicina 250 mM (ambas de Sigma-Aldrich) en PBS. La fluorescencia (unidades de fluorescencia relativas; RFU) se midió por monoplicado o duplicado en un lector Tecan (excitación: 440 nm; emisión: 485 nm). A continuación, se calculó el porcentaje de desagregación de flTau y la concentración eficaz máxima media (EC<50>) se determinó usando GraphPad Prism versión 5 (GraphPad Software) asumiendo un modelo de ajuste de sitio de unión única.
Ensayo de desagregación de Tau K18 por ThT
El fragmento Tau K18, que abarca los aminoácidos 244 a 372 de la isoforma más larga (2N4R) de Tau441 humana, se expresó en bacterias y se purificó o compró a SignalChem. Para el ensayo de desagregación de K18 por ThT, se agregaron 35 pM de K18 recombinante en PBS durante 24 horas a 37 °C en presencia de 50 pM de heparina (Sigma-Aldrich) y 10 mM de DTT (Sigma-Aldrich) con agitación a 750 rpm. Los compuestos se disolvieron en sulfóxido de dimetilo anhidro (DMSO, Sigma-Aldrich) para alcanzar una concentración de 10 mM. Los agregados de K18 y las diluciones en serie de los compuestos se mezclaron entre sí en PBS (volumen 50 pl) hasta una concentración final de 2 pM de agregados de K18 y de 160 a 0,04 pM de compuestos. La mezcla se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente (TA), luego se transfirieron 40 pl de esta mezcla a un ensayo de placa negra de 384 pocillos (Perkin-Elmer) y se mezclaron con 10 pl de ThT 100 pM en glicina 250 mM (ambas de Sigma-Aldrich) en PBS. La fluorescencia (unidades de fluorescencia relativas; RFU) se midió por monoplicado o duplicado en un lector Tecan (excitación: 440 nm; emisión: 485 nm). Después se calculó el porcentaje de desagregación de K18 y la mitad de la concentración eficaz máxima (EC<50>) se determinó usando GraphPad Prism versión 5 (GraphPad Software) asumiendo un modelo de ajuste de sitio de unión única.
Se midieron los siguientes compuestos de ejemplo:
Tabla 7
Reducción de la agregación intracelular de Tau
Una línea celular de neuroblastoma humano que sobreexpresa la forma de longitud completa de Tau humana que porta la mutación P301L se cultivó en medio completo [DMEM-F12 4,5 g/l de Glutamax (Invitrogen), FBS al 15 % (Biochrom), Peni al 1%/Strep (Invitrogen) suplementado con 2,5 pg/ml de antibiótico de selección G418 (Sigma-Aldrich)]. El día antes del experimento 5x10<5>células/pocillo se colocaron en una placa de<6>pocillos en 3 ml de medio completo. Al día siguiente, las células se incubaron con DMSO o un compuesto de la presente invención a 5 pM durante 24 h adicionales a 37 °C. Después de la incubación, las células se tripsinizaron, se suspendieron de nuevo en 100 pl de tampón de homogeneización [Tris-HCl 25 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM que contenía inhibidores de fosfatasa (NaF 30 mM, Na<3>VO<4>0,2 mM, ácido okadaico 1 nM, PMSF 1 mM, Na<4>P<2>O<7>5 mM) y cóctel inhibidor de proteasa (Complete™, Roche)], y después se lisaron físicamente con tres ciclos rápidos de congelación y descongelación. Las muestras se ensayaron directamente después en el ensayo AlphaLISA. La Tau fosforilada, agregada y total se cuantificaron mediante AlphaLisa usando los siguientes pares de anticuerpos:
• Perlas aceptoras de HT7 perlas donantes de biotina (BT)-Tau13: Tau total
• Perlas aceptoras de HT7 perlas donantes de biotina (BT)-HT7: Tau humana agregada The Tau13 (Abcam) se biotiniló usando el Kit de biotinilación en fase sólida EZ-Link® NHS-PEO (Thermo Scientific), mientras que la HT7-biotina era de una fuente comercial (Thermo Scientific).
Para cada par de anticuerpos se optimizó la concentración de perlas aceptoras y anticuerpos biotinilados. Todas las muestras se probaron primero en una serie de diluciones en PBS con el fin de identificar el intervalo lineal y la dilución óptima para cada muestra y ensayo. Para el protocolo final, se añadieron los siguientes reactivos en una OptiPlate blanca de 384 pocillos (PerkinElmer):
• 5 pL de muestra diluida de prueba
• 20 pL de la mezcla biotina-perlas aceptoras de mAb a las siguientes concentraciones finales:
• HT7-BT a 1,25 nM en combinación con perlas de HT7-Acc a 10 pg/ml
• Tau13-BT a 5 nM en combinación con perlas de HT7-Acc a 2,5 pg/ml
Después de la incubación de esta mezcla a temperatura ambiente durante 1 h, se añadieron 25 pl de perlas donantes de estreptavidina (Perkin Elmer) a 25 pg/ml en la oscuridad. Las placas se analizaron después de 30 min de incubación usando el instrumento EnSpire Alpha y la versión 3.00 de la estación de trabajo EnSpire. Los datos para la Tau agregada se normalizaron a la Tau total y luego se expresaron como porcentaje de las células tratadas con DMSO. Se midieron los siguientes compuestos de ejemplo:
Tabla<8>
Eficaciain vivode los compuestos de la presente invención
Diseño del estudioin vivopara la prueba del ejemplo 12 y el ejemplo 45
Ratones rTg4510 transgénicos dobles expresan la Tau humana de longitud completa que porta la mutación P301L (Tau4R0N-P301L) bajo el control del promotor de CaMKII inducible por tet (Ramsden et al., J. Neurosci., 2005 • 25(46):10637-10647). Se usaron ratones transgénicos únicos que expresaban sólo el transactivador controlado por tetraciclina (tTA) como controles de genotipo. El estudio comprendía 4 grupos de tratamiento (n = 15 hembras para el grupo tTa y n = 11 ratones hembras/grupo para el tratamiento) con la siguiente distribución de grupos (véase la Tabla 9). Los compuestos o el vehículo control se administraron una vez al día o bi-diariamente mediante alimentación por sonda durante 1 mes comenzando a la edad de 5 meses. Todos los ratones recibieron 200 ppm de doxiciclina en pienso durante 3 semanas más una dosis de carga en agua potable durante los dos primeros días a 1,5 mg/ml en sacarosa al 4 %. La administración de doxiciclina en la dosificación comenzó en la semana 2 y duró durante todo el periodo de dosificación.
El análisis del líquido cefalorraquídeo (CSF) se realizó en todos los animales mientras que la histología para Tau mal plegada (MC1), microglía total (Iba1) y microglía fagocítica (CD<68>) se realizaron en 10 animales/grupo.
Tabla 9: Diseño del estudioin vivopara la prueba del ejemplo 12 y el ejemplo 45
Recogida y análisis de líquido cefalorraquídeo (CSF)
Los ratones se anestesiaron profundamente mediante anestesia inyectable estándar y se perfundieron de manera transcardiaca con PBS frío. Se eliminaron el pelo y la piel del cuello con tijeras quirúrgicas (el ratón no fue decapitado). El tejido que rodeaba la base del cráneo y el tronco encefálico se extrajo cuidadosamente mediante disección roma con sangrado mínimo. Una vez que las meninges estaban expuestas en la base del cráneo, en el área del foramen magnum, se mantuvo una aguja de mariposa de 27 ga perpendicular al cráneo y se insertó lateralmente en el espacio de líquido cefalorraquídeo (CSF). Las muestras se sumergieron rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 °C hasta que se realizó el análisis bioquímico mediante AlphaLISA. La Tau humana total en la Tau de CSF se cuantificó usando los siguientes pares de anticuerpos: perlas aceptoras de HT7 perlas donantes de biotina (BT)-Tau13. El anticuerpo Tau13 (Abcam) se biotiniló usando el Kit de biotinilación en fase sólida EZ-Link® NHS-PEO (Thermo Scientific). Para el protocolo final, se añadieron los siguientes reactivos en una OptiPlate blanca de 384 pocillos (PerkinElmer):
• 5 pL de muestra diluida de prueba
• 20 pL de la mezcla de biotina-perlas aceptoras de mAb a las concentraciones finales: Tau13-BT a 0,6 nM en combinación con perlas de HT7-Acc a 2,5 pg/ml
Después de la incubación de esta mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadieron 25 pl de perlas donantes de estreptavidina (Perkin Elmer) a 25 pg/ml en la oscuridad. Las placas se analizaron después de 30 minutos de incubación usando el instrumento EnSpire Alpha y la versión 3.00 de la estación de trabajo EnSpire. Los datos se analizaron mediante ANOVA de 1 vía seguido de comparaciones post-hoc y las estadísticas mostradas se refieren a diferencias comparadas con ratones rTg4510 tratados con vehículo.
Como se muestra en la Figura 1, tanto el ejemplo 12 como el ejemplo 45 disminuyeron los niveles de Tau en CSF.
Evaluación histológica de ratones rTg4510 tratados con el ejemplo 12 y el ejemplo 45
Después de la perfusión, se extrajeron los cerebros y se hemiseccionaron hemisagitalmente. Los hemisferios derechos se fijaron en paraformaldehído al 4 % en PBS durante tres horas a temperatura ambiente, se crioconservaron por inmersión en sacarosa al 15 % a 4 °C durante tres días y se prepararon para la criosección. Los hemisferios fijados se congelaron luego en hielo seco en medio OCT en criomoldes y se crioseccionaron sagitalmente (10 pm de espesor) con criotomo Leica CM3050. Se recogieron secciones de 10 ratones por grupo de aproximadamente 12 niveles mediolaterales. Se usó un conjunto aleatorio sistemático de secciones de siete niveles sagitales por animal para cuantificar la inmunorreactividad de Iba1 y CD<68>, mientras que se usó 1 sección/animal del nivel 4 mediolateral para evaluar el plegamiento incorrecto de Tau (anticuerpo monoclonal MC1). Las criosecciones se retiraron de -20 °C y se secaron al aire durante 25 minutos a temperatura ambiente. El tejido cerebral se rodeó con bloqueador líquido de rotulador pap y se lavó una vez durante 5 minutos y una vez durante 10 minutos en PBS a temperatura ambiente. El bloqueo y la permeabilización se realizaron durante 2 horas a temperatura ambiente con suero de cabra normal (NGS) al 10 % y Tritón X-100 al 0,25 % en PBS. Las secciones se transfirieron a papel absorbente y se incubaron con anticuerpo monoclonal de ratón MC1 diluido 1:1000 en PBS que contenía NGS al 5 % y T riton X-100 al 0,25 % durante la noche a 4°C en una cámara húmeda. Las secciones se lavaron tres veces 10 minutos en PBS a temperatura ambiente y se incubaron con un anticuerpo secundario de cabra anti-IgG de ratón marcado con Cy3 (H+L) (Jackson) diluido 1:1000 en PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente protegido de la luz. Después de tres lavados durante 10 minutos en PBS, las secciones se incubaron con una disolución de negro de Sudán al 0,1 % (Sigma) en etanol al 70 % durante 30 segundos a temperatura ambiente con el fin de reducir la autofluorescencia del tejido. Las secciones se lavaron tres veces durante 10 minutos en PBS, se montaron usando reactivo ProLong Gold Antifade con DAPI (Molecular Probes) y se cubrieron con cubreobjetos. Se obtuvieron imágenes de las secciones usando un escáner de portaobjetos digital (Panoramic 250 Flash, 3D Histech Ltd.) y se cuantificaron usando el software de visualización de imágenes Visiopharm.
La tinción de MC1 se analizó en la corteza frontal en las capas corticales superiores. Se dibujó una región de interés (ROI) correspondiente a un campo de visión a 20 aumentos alrededor de la corteza frontal. Esta ROI se analizó en Visiopharm usando un umbral predeterminado para la tinción de MC1 con un umbral de intensidad de píxel por encima de 30 (imágenes de<8>bits) y excluyendo todos los objetos detectados menores de 20 pm2. Los datos se analizaron mediante ANOVA de 1 vía seguido de prueba post-hoc. Como se muestra en la Figura 2, tanto el Ejemplo 12 como el Ejemplo 45 disminuyeron el área positiva de MC1. Estos datos indican que el tratamiento tanto con el ejemplo 12 como con el ejemplo 45 en rTg4510 disminuye los niveles de Tau mal plegada en este modelo transgénico agresivo de Tau.
Para evaluar si el efecto descrito anteriormente de los compuestos analizados sobre Tau también tenía un efecto sobre los marcadores de neuroinflamación, se marcaron las secciones para clon CD<68>anti-ratón de rata FA-11 (BD Biosciences), anticuerpo policlonal de cabra anti-Iba1 (Abcam) y se contratiñeron con DAPI. La unión de anticuerpos se visualizó usando anticuerpos secundarios marcados fluorescentemente con absorción cruzada elevada (Thermo Fisher). El anticuerpo se diluyó en diluyente de anticuerpo (Dako), la unión de IgG endógena no específica se bloqueó con suero M.O.M. (Vector) antes de la incubación primaria. Se obtuvieron imágenes de las secciones montadas como un todo en un escáner de portaobjetos Axio Scan Z1 controlado por el software ZEN a 20 aumentos (objetivo apocromático plano), usando iluminación LED (Colibri2) y una cámara monocromática sensible Orca Flash 4.0. Los datos se analizaron mediante ANOVA de 1 vía seguido de comparaciones post-hoc y las estadísticas mostradas se refieren a diferencias comparadas con ratones rTg4510 tratados con vehículo.
Como se muestra en la Figura 3A, tanto el ejemplo 12 como el Ejemplo 45 disminuyeron la microgliosis medida como área inmunorreactiva de Iba1. Además, tanto el ejemplo 12 como el 45 disminuyeron las células microgliales fagocíticas altamente activadas que son positivas para CD<68>(Figura 3B). Tomados en conjunto estos datos indican que el tratamiento tanto con el ejemplo 12 como con el ejemplo 45 en rTg4510 disminuye los niveles de neuroinflamación en este modelo transgénico agresivo de Tau.
Reducción del plegamiento incorrecto de Tau en ovillos neurofibrilares (NFT) de secciones de cerebro con EA y PSP humanas
Se obtuvieron secciones de tejido congelado fresco de un caso de EA y dos casos de PSP de un distribuidor comercial (Tissue Solutions, Reino Unido). Las secciones de tejido se incubaron con el ejemplo 45 a 100 pM o DMSO a temperatura ambiente durante aproximadamente 60 horas en una cámara húmeda. Después de la incubación, las secciones se lavaron tres veces en PBS, se fijaron durante 10 min a 4 °C con paraformaldehído (PFA; Sigma) y después se lavaron de nuevo tres veces en PBS. Las secciones se permeabilizaron después en tampón de bloqueo (PBS, suero de cabra puro (NGS) al 10 %, Triton X al 0,25 %) durante 1 hora a temperatura ambiente. Después del bloqueo, las secciones se incubaron durante la noche a 4 °C con un anticuerpo conformacional de Tau (anticuerpo monoclonal MC1) en tampón de bloqueo (NGS al 5 %, Triton X al 0,25 %). Al día siguiente, las secciones se lavaron tres veces durante cinco min en PBS y se incubaron con un anticuerpo anti-ratón de cabra AffiniPure conjugado con Cy3 (Jackson laboratories) durante 1 h a temperatura ambiente. El exceso de anticuerpo se lavó tres veces durante cinco min en PBS. Para disminuir la autofluorescencia, las secciones se incubaron con Sudán Negro al 0,1 % disuelto en etanol al 70 % (Sigma) durante ocho min a temperatura ambiente. Finalmente, las secciones se lavaron cinco veces durante cinco min en PBS y se montaron bajo cubreobjetos usando reactivo ProLong Gold Antifade con DAPI (Invitrogen). Las secciones se secaron a continuación a temperatura ambiente durante 24 horas antes de obtener imágenes usando un escáner de portaobjetos digital (Pannoramic P250 Flash III, 3D Histech Ltd.) y se cuantificó el plegamiento incorrecto de Tau en NFT usando el software Visiopharm. Como se muestra en la Figura 4, el ejemplo 45 reduce el plegamiento incorrecto de Tau en NFT de aproximadamente el 30 % con una potencia similar en muestras de cerebro humano con EA y PSP.
Autorradiografía de alta resolución ex vivo con<3>H-ejemplo 45 en secciones de cerebro con EA humana
Se obtuvieron secciones de tejido congelado fresco de un caso de EA de un distribuidor comercial (Tissue Solutions, Reino Unido). Para la autorradiografía, las secciones de cerebro se fijaron durante 15 minutos a 4 °C con PFA al 4 % (Sigma). Las secciones se incubaron con [<3>H]-ejemplo 45 a 20 nM, solo o junto con 5 pM de ejemplo 45 no radiactivo) durante 1 hora a temperatura ambiente. Las secciones se lavaron entonces como sigue: primero, en tampón enfriado con hielo durante 1 minuto, después, en etanol al 70 % enfriado con hielo dos veces durante 1 minuto, en tampón enfriado con hielo durante 1 minuto y finalmente, se enjuagaron brevemente en agua destilada enfriada con hielo. Las secciones se secaron posteriormente durante<1>hora bajo una corriente de aire y luego se expusieron a emulsión nuclear Ilford tipo K5 (Agar Scientific) durante 5 días a 4 °C en una caja de almacenamiento de portaobjetos a prueba de luz. La exposición a la emulsión siempre se realizó en una sala oscura iluminada con un rayo de seguridad y los fragmentos de emulsión se fundieron en un volumen igual de agua precalentada a 40 °C, según las instrucciones del fabricante. Después de 5 días, las secciones se revelaron según las instrucciones del fabricante. Las secciones se montaron usando reactivo ProLong Gold Antifade (Invitrogen) y se tomaron imágenes de un escáner de portaobjetos digital (Pannoramic P250 Flash III, 3D Histech Ltd.)
Como se muestra en la Figura 5, el ejemplo 45 muestra una unión con diana específica en las NFT de Tau en muestras de cerebro con EA humana.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (1):
    y todos los estereoisómeros, mezclas racémicas, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos y polimorfos del mismo; en donde A se selecciona del grupo que consiste en
    en donde
    pueden unirse a Q en cualquier posición disponible, en donde
    y
    está sustituido con uno o varios sustituyentes Rj, y en donde
    puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes R; B se selecciona del grupo que consiste en O y NRa; E y V se seleccionan independientemente del grupo que consiste en N, NR5, O y S; G se selecciona del grupo que consiste en un anillo de benceno, un anillo de pirimidina y un anillo de piridina; J se selecciona del grupo que consiste en O y N-R1; Q se selecciona del grupo que consiste en N y C-R1; Y se selecciona del grupo que consiste en CZ y N, siempre que cuando Y es N y Y1, Y<2>y Y<3>son CZ, B es N-alquilo u O; Y<1>se selecciona del grupo que consiste en CZ y N; Y<2>se selecciona del grupo que consiste en CZ y N; Y<3>se selecciona del grupo que consiste en CZ y N; Z se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, O-alquilo, alquilo y CN; R se selecciona independientemente del grupo que consiste en
    y -NR<3>R4; Ra se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo; Rb, Rc, Rd, Re, Rf, y Rg se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, o dos cualquiera de Rb, Rc, Rd, Re, Rf, y Rg pueden unirse para formar un anillo de 3 a<8>miembros; Rj se selecciona independientemente del grupo que consiste en -halógeno, -O-alquilo, -CF<3>, -CN, -NR3R4,
    en donde un puente que contiene átomos de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono a y el átomo de carbono c o d o en donde un puente que contiene un átomo de carbono C<1-2>puede estar presente entre el átomo de carbono b y el átomo de carbono c o d; R<1>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo; R<2>se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, F y =O, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo y en donde si dos R<2>son geminales pueden unirse para formar un anillo de 3 a<6>miembros; R<3>y R<4>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo, en donde el alquilo puede estar opcionalmente sustituido por halógeno, -OH u -O-alquilo; R<5>se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo; n es 0, 1,2, 3 o 4; r y s son independientemente 0, 1,2 o 3; y t y u son independientemente 1,2 o 3, siempre que el compuesto no sea:
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