ES2989233T3 - Procedimiento de obtención de pared celular de levadura enriquecida con proteína de manano- oligosacárido - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones de pared celular de levadura 5 enriquecidas con manosa, extractos de manosa y procesos para elaborarlas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Procedimiento de obtención de pared celular de levadura enriquecida con proteína de manano- oligosacáridoAntecedentes

La presente invención se refiere a la producción de composiciones enriquecidas de pared celular de levadura. Las manoproteínas de la pared de la levadura son polipéptidos altamente glicosilados, a menudo entre un 50 y un 95% en peso de carbohidratos, por lo que pueden considerarse proteoglicanos de levadura. Las manoproteínas se utilizan actualmente en una serie de dietas de alimentación animal por sus efectos protectores en el tracto gastrointestinal. El documento JPH0984529A describe el uso de manano y/o pared celular originada a partir de microorganismos para eliminar selectivamente del organismo bacterias intestinales nocivas causantes de intoxicaciones alimentarias sin disminuir el apetito del ganado o de las aves de corral.

El documento JP2006169514A describe un procedimiento de preparación para polisacáridos solubles en agua originados de levadura que mantiene la tasa de rendimiento por encima del 10% mediante hidrólisis alcalina sin causar enturbiamiento o precipitación en condiciones ácidas o alcalinas.

El documento JP2008271820A describe la preparación de levadura que contiene las fracciones solubles o la fracción soluble de la pared celular de la levadura.

El documento US2005186188A1 describe microorganismos probióticos, como una bacteria productora de ácido láctico o una levadura y un manano-oligosacárido para mejorar la salud del tracto gastrointestinal reduciendo el nivel de bacterias patógenas presentes.

El documento BG1325U1 describe un aditivo para piensos que contiene manano-oligosacáridos solubles obtenidos por cultivo de levadura que sintetiza manano-oligosacáridos extracelulares.

El documento US2011250235A1 describe un procedimiento de producción de una composición inmunoestimulante que tiene una fracción de sacáridos, incluyendo el procedimiento las etapas de hidrólisis de células de levadura y recuperación de la fracción soluble.

El documento US2003091589 describe la alimentación de animales expuestos o infectados con coccidios, especialmente aves de corral expuestas a especies patógenas de Eimeria, con composiciones que contienen pared celular de levadura, incluidas aquellas composiciones que comprenden manano-oligosacárido(s).

Los suplementos nutricionales a base de manano-oligosacáridos, MOS, se utilizan ampliamente en nutrición como aditivo natural. Se ha demostrado que la MOS mejora la salud gastrointestinal y la salud en general, mejorando así el bienestar, los niveles de energía y el rendimiento. En la industria de producción animal, por ejemplo, el MOS se utiliza ampliamente en dietas para aves de corral, terneros, cerdos y acuicultura. Los estudios de investigación han respaldado la eficacia en cada una de estas categorías de producción.

Los productos MOS existentes en el mercado son simples productos de pared celular con poca diferenciación. Un producto de pared celular con niveles más altos de MOS puede proporcionar una ventaja de rendimiento sobre los competidores al aumentar el componente activo en el material de la pared celular de la levadura.

Sumario de la invención

La presente invención es un extracto de manano-oligosacárido, pared celular de levadura enriquecida con manano, un procedimiento para hacer las composiciones y su uso en aditivos para piensos animales.

Según un primer aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento para fabricar manano-oligosacárido soluble derivado de levadura que comprende lavar la pared celular de levadura con agua y separar el material soluble e insoluble, extraer manano-oligosacárido del material insoluble con base, separar la solución de manano-oligosacárido soluble del material insoluble, enfriar la solución de manano-oligosacárido soluble con ácido, concentrar la solución de manano-oligosacárido soluble, añadir la solución de pared celular de levadura a la solución de manano-oligosacárido soluble y secar por pulverización la pared celular de levadura y la solución de manano-oligosacárido soluble.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra trazas de GPC de material de pared celular de levadura enriquecido con manosa.

Descripción detallada de las realizaciones ilustrativas

Durante la producción de p-glucano de levadura, la etapa inicial es una etapa de lavado con agua que implica álcali (NaOH) que libera grandes cantidades de manoproteína. En la actualidad, ese material proteínico se considera un residuo y se trata como un residuo medioambiental que debe someterse a un tratamiento de aguas residuales (un gasto importante). La invención consiste en recoger el agua de lavado alcalina actual con alto contenido en MOS, neutralizar el agua proteínica, pulverizarla sobre el material de la pared celular de la levadura y secar la mezcla resultante. El producto resultante tendrá un contenido de MOS entre un 25 y un 50% superior. La invención también implica el secado por pulverización del extracto de MOS para crear un producto concentrado de MOS.

Los productos de MOS existentes en el mercado consisten básicamente en pared celular de levadura con poca o ninguna diferenciación o purificación, y la MOS que reside en la pared celular está en una forma insoluble. Unos niveles más altos de MOS en un producto de pared celular o un extracto concentrado de MOS proporcionarían una ventaja de rendimiento sobre otros productos de MOS al aumentar el componente activo. Además, el componente MOS añadido de la presente invención está solubilizado, lo que proporciona ventajas significativas sobre el MOS insoluble.

La MOS puede reducir el número de bacterias patógenas en el tracto gastrointestinal de un animal. Los patógenos poseen pequeñas proyecciones en forma de pelo conocidas como pili o fimbrias en sus superficies, que son ricas en lectinas. Las lectinas son necesarias para que el patógeno pueda unirse a las células epiteliales del intestino. Los patógenos con pili específicos para la manosa se adhieren a las células del tracto gastrointestinal que contienen manosa. Una vez que los patógenos se adhieren, son capaces de colonizar el tracto gastrointestinal y causar enfermedades. Sin embargo, si a un animal se le administra MOS por vía oral, por ejemplo en su pienso, los patógenos se unirán a la MOS en el tracto digestivo, lo que impide que los patógenos se unan a los epitelios intestinales (o mucosa) y se establezcan en el tracto gastrointestinal. La MOS "balsa" o transporta los patógenos fuera del tracto gastrointestinal y se excreta en los residuos fecales. La MOS soluble es superior al producto MOS insoluble, porque la MOS soluble cubre un mayor volumen y área del tracto gastrointestinal, lo que le permite entrar en contacto, interactuar y unirse a más bacterias patógenas indeseables.

El uso de MOS solubles en lugar de MOS insolubles también supone una ventaja económica. La tasa actual de inclusión de pared celular de levadura es de aproximadamente 1-4 kg/tonelada métrica en el pienso acabado, pero esto se reduce en un 20-50% con MOS soluble, lo que también permite incluir más nutrientes en el pienso acabado (proteínas, carbohidratos, grasas, nutrientes esenciales).

Brevemente, el procedimiento implicaba lavar la pared celular de la levadura para eliminar el material soluble no deseado del sobrenadante, extraer la pared celular con base, separar el manano extraído de la pared celular insoluble restante, enfriar la base utilizada en la extracción y secar por pulverización. Alternativamente, la solución de manano extraída y enfriada puede combinarse con pared celular adicional no extraída y, a continuación, secarse por pulverización. Este último producto contiene MOS soluble e insoluble.

El producto MOS soluble aquí enseñado utiliza etapas de hidrólisis alcalina y ácida para liberar proteínas, mananos y otros carbohidratos. En procedimientos anteriores se han utilizado enzimas para liberar materiales similares. Sin embargo, el proceso enzimático liberará proteínas y carbohidratos con propiedades muy diferentes a las de la hidrólisis alcalina. La hidrólisis alcalina daña menos la estructura de las proteínas y los hidratos de carbono que las enzimas, que digieren rápidamente las proteínas y los hidratos de carbono complejos. La hidrólisis alcalina y ácida deja las proteínas y los hidratos de carbono más cerca de su estructura nativa con una hidrólisis mínima catalizada por álcalis o ácidos. Además, el proceso enzimático digerirá otros valiosos productos derivados de la levadura, como el p-glucano. Sin embargo, la hidrólisis alcalina y ácida deja el p-glucano y otros componentes de la pared celular intactos y en forma nativa, de modo que estos componentes pueden comercializarse.

Ejemplo 1

Procedimiento de lavado de la pared celular

Se lavó una pequeña muestra de pared celular de levadura repitiendo tres veces un proceso de centrifugación, descarte del sobrenadante, dilución con agua desionizada y agitación en vórtex. Se observó que la pared celular lavada contenía un 23% de manosa, mientras que el sólido soluble correspondiente del sobrenadante sólo contenía un 3% de manosa. Teniendo en cuenta el bajo nivel de manosa en los sólidos solubles del sobrenadante, decidimos lavar la pared celular antes de extraer el manano.

Los 76 L completos de pared celular se lavaron por lotes añadiendo 500 mL de cremas a frascos de centrífuga de 750 mL y centrifugando durante 30 minutos a 3.250 RPM en una centrífuga equipada con un rotor de cubo oscilante de 13 cm. Tras la centrifugación, se desechó el sobrenadante y se añadieron aproximadamente 300 ml de agua desionizada a cada frasco. El pellet se agitó con una espátula para obtener una suspensión homogénea que luego se centrifugó como se ha descrito anteriormente. Esto se repitió una segunda vez, momento en el que el pellet se subió en una cantidad mínima de agua y se transfirió a cubos de 5 galones. Después de lavar los 76 L de pared celular, el material se repartió uniformemente en cuatro cubos de 5 galones, lo que dio como resultado un volumen de 4,5 galones (17 L) por cubo. Para evitar la contaminación, el pH de la solución se elevó a un pH entre 9 y 10 con NaOH (solución acuosa al 50%, 19,4 M). Se registró el volumen de NaOH al 50% que se añadió.

Extracción de manano

La extracción del manano se realizó colocando el cubo en un baño de agua a 50°C que consistía en una gran bañera de plástico llena de agua que se hacía circular a través de un baño de agua circulante de temperatura controlada. Una vez que la temperatura interna de la solución en el cubo alcanzó los 50°C, se llevó la concentración de base a 0,5 M añadiendo un total de 438 mL de NaOH al 50% (el volumen añadido para llevar el pH inicial a 9-10 formaba parte del volumen de 438 mL que se añadió a cada uno). Tras añadir la base, las lecturas de pH de las soluciones en los cuatro cubos se situaron entre 12,75 y 12,84. Los cubos se agitaron con una cuchara grande de plástico cada 10 minutos durante un tiempo total de reacción de 1 h. Tras la reacción, los cubos se almacenaron a 4 °C antes de las etapas que se describen a continuación.

La solución extraída se centrifugó como se ha descrito anteriormente con la excepción de que el sobrenadante era la fracción deseada y se guardó. El sobrenadante de cada frasco se mezcló vertiéndolo en un cubo limpio. A continuación, cada pellet se lavó una vez con unos 300 mL de agua agitando con una espátula y centrifugando una segunda vez. El sobrenadante se mezcló en el mismo cubo que el material de la primera centrifugación. Los pellets se desecharon después de esta etapa de lavado. Los sobrenadantes agrupados también se almacenaron a 4°C.

Procedimiento de enfriamiento de la base

La base en la solución extraída se apagó utilizando una resina de intercambio aniónico fuertemente ácida (ABA Water Sources, Plainview, MN). El enfriamiento se realizó de esta manera en lugar de utilizar HCl para evitar la producción de NaCl, que habría acabado en el producto final tras el secado por pulverización. El procedimiento de enfriamiento se realizó añadiendo 2,4 kg de resina ácida a lotes de 13,2 L del material extraído en cubos de 5 galones. La solución se agitó aproximadamente cada 20 min. El pH de la solución descendió gradualmente y después de aproximadamente 1 h el pH estaba entre 4 y 4,5. En este punto se detuvo la agitación y se dejó reposar la suspensión durante al menos 1 h. La solución se sedimentó en tres capas. La capa superior era una solución transparente de color amarillo claro, la capa intermedia era una suspensión de color canela y la capa inferior era una suspensión que contenía principalmente resina. El sobrenadante amarillo superior se extrajo con un vaso de precipitados y se pasó a través de dos filtros de café muy gruesos previamente humedecidos y colocados uno encima del otro en un embudo Buchner de porcelana de 9 cm de ancho. Los filtros se sustituían con mucha frecuencia debido a la obstrucción. Después de retirar y filtrar la mayor parte del sobrenadante claro, la capa intermedia que contenía la suspensión se centrifugó como se ha descrito anteriormente y el sobrenadante se vertió a través del mismo embudo Buchner descrito anteriormente. La tercera capa que contenía la resina se enjuagó varias veces con agua desionizada en el cubo y se decantó en frascos de centrífuga. Esta solución se centrifugó y filtró como se ha descrito anteriormente. Toda la solución filtrada se combinó en cubos limpios de 5 galones. Se obtuvieron aproximadamente 83 L (22 galones) de la solución filtrada. La solución contenía aproximadamente un 2,5% (25 g/L) de sólidos y el ensayo de manosa basado en Dionex proporcionó valores de aproximadamente 9 mg/mL de concentración de manosa en cada cubo, lo que corresponde aproximadamente a un 35% de extracto puro que contiene manosa.

Mezclado y secado por pulverización

Se obtuvo un nuevo lote de pared celular de levadura para el secado por pulverización con el manano extraído anteriormente. Se comprobó que la nueva pared celular contenía un 15% (150 g/L) de sólidos totales y que la concentración de sólidos solubles en el sobrenadante era del 3,3% (3,3 g/L). Finalmente se determinó, tras el secado por atomización, que los sólidos solubles en el sobrenadante contenían 9 mg/mL de manosa, lo que se traduce en un 27% de material que contiene manosa. Finalmente se comprobó que la pared celular lavada contenía un 17% de manosa.

El nuevo lote de pared celular se centrifugó como se indicó anteriormente, centrifugando 700 mL en frascos de centrífuga de 750 mL. A continuación, se desechó el sobrenadante y el precipitado se introdujo en aproximadamente 300 mL de la solución de manano extraída y se vertió en un cubo limpio. A continuación, el frasco se enjuagó dos veces con solución adicional de manano extraído. De esta manera se procesaron aproximadamente 16,8 L de pared celular. Se centrifugaron otros 5,6 L de pared celular y se introdujeron en un volumen mínimo de agua desionizada. A continuación, toda la pared celular lavada y el manano extraído se almacenaron a 4 °C durante la noche. Al día siguiente, en el laboratorio de alimentación de la Universidad de Minnesota, los 83 litros de manano extraído y los 3,8 kg de pared celular lavada se combinaron en un tanque de acero inoxidable con camisa de vapor y un mezclador eléctrico de paletas. El pH de la solución final mezclada fue de 4,8 y el % final de sólidos fue del 8% (8 g/L) con un volumen aproximado de 28 galones (106 L). La solución se pasteurizó elevando la temperatura a 160°C con la camisa de vapor. Cuando la temperatura alcanzó los 160°C, se apagó el vapor y se dejó enfriar lentamente la solución mientras se secaba por pulverización. El material se secó por atomización utilizando una temperatura de entrada de aproximadamente 110°C, una temperatura de salida de 90°C y una velocidad de alimentación de 200 mL/min. El secador de pulverización funcionó durante aproximadamente 8 horas para proporcionar 5,2 kg de polvo final.

Análisis del polvo final

Se analizó el contenido de manosa y glucosa de una muestra del producto de pared celular enriquecido con manano y se observó que contenía un 23% de manosa y un 16% de glucosa. Se comprobó que el polvo contenía un 39% de proteínas, determinado mediante un análisis de combustión en el que el % de N se multiplica por 6,25. La cantidad total de MOS (manoproteína, manano) se determina sumando el contenido en manosa y el contenido en proteínas. La pared celular enriquecida con manano y los productos de manano extraídos contienen un 62% y un 72% de manano, respectivamente. La tabla 1 muestra estos resultados, así como los de la pared celular sobre la que se secó por atomización el manano extraído y los de la pared celular de la que se extrajo el manano. En la Tabla 1 también se muestran tres productos comerciales de AllTech, Sensient y Citadel. Los 2 kg de manano extraído también se analizaron para determinar su contenido en manosa, glucosa y proteínas. El material de partida eran aproximadamente 76 litros (20 galones) de cremas a granel. Se encontró que el lodo tan contenía 16% (160 g/L) de sólidos disueltos totales y cuando se centrifugó el sobrenadante contenía 1.9% (19 g/L) de sólidos disueltos. La sustracción de la concentración del sobrenadante de la concentración global dio 14,1% (14,1 g/L) de sólidos disueltos. La cantidad de manosa, expresada como porcentaje de la masa total, se calculó para las muestras mediante el uso de un ensayo de monosacáridos basado en la hidrólisis con ácido trifluoroacético seguida de la separación y cuantificación en un Dionex mediante cromatografía de intercambio aniónico de alto rendimiento con detección amperométrica pulsada (HPAEC/PAD) utilizando un patrón interno de inositol y comparando las áreas obtenidas de las muestras con la de las curvas patrón de glucosa y manosa.

Tabla 1. Resultados analíticos de material final, productos intermedios y muestras de competidores.

Ejemplo 2

Se utilizó el siguiente procedimiento para fabricar pared celular enriquecida con manano y manano puro a partir deSaccharomyces cerevisiae.Brevemente, el procedimiento implicaba realizar la autolisis de la levadura Mindak, lavar la pared celular obtenida, extraer la pared celular con base, separar el manano extraído del resto de la pared celular insoluble, acidificar el extracto, centrifugar y diafiltrar el sobrenadante para obtener el extracto final de manano deseado. Una parte del extracto se secó por pulverización con la pared celular sin extraer y otra parte se secó por pulverización en estado puro.

Procedimiento de autolisis

La autolisis de la levadura se realizó en 7 lotes separados, cada uno conteniendo aproximadamente 40 galones de la suspensión de levadura inicial a -20% de sólidos y ~6 kg de cloruro de sodio. Cada lote se calentó durante la noche a 50°C en una caldera de acero inoxidable de 45 galones con agitación mecánica por encima. La temperatura se mantuvo con 3 elementos calefactores Briskheat (modelo DHCS15-G) envueltos alrededor del exterior del hervidor. Cada cocción completa se lavó por lotes llenando frascos de centrífuga de 750 ml con el lodo y haciéndolos girar durante 30 minutos a 3.250 rpm en una centrífuga equipada con un rotor de cubo oscilante de 13 cm. La centrifugación se realizó mientras la mezcla de reacción aún estaba caliente. Tras la centrifugación, se desechó el sobrenadante y se añadieron aproximadamente 500 ml de agua desionizada a cada frasco. El pellet se mezcló con una batidora eléctrica manual y se rasparon las paredes y el fondo del frasco con una espátula para obtener una suspensión homogénea que luego se centrifugó como se ha descrito anteriormente. El pellet se subió en una cantidad mínima de agua y se transfirió a cubos de 7 galones. Para evitar la contaminación, el pH de la solución se elevó a un pH de 12 con NaOH (solución acuosa al 50%, 19,4 M). Cada uno de los 7 lotes de pared celular procedentes de la autolisis se conservó por separado. El 6° lote se calentó inadvertidamente a 95°C durante la noche, pero la pared celular de este lote se siguió utilizando en la etapa de extracción del manano. El 7° lote de pared celular se elaboró a partir de levadura que se había almacenado intencionadamente a 4°C durante 20 días y este lote también recibió una etapa de lavado adicional tras la autolisis. Los lotes 1 a 6 se sometieron a autolisis en los 5 días siguientes a la recepción de la levadura Mindak.

Extracción de manano

La mayor parte de la pared celular, con la excepción del 7° lote, se llevó a cabo la extracción de manano realizando 6 cocciones de base separadas. Cada uno se devolvió al volumen original de ~40 galones añadiendo agua desionizada y se colocó en la caldera de reacción descrita anteriormente. La concentración de base se llevó a 0,5 M (incluyendo el volumen de NaOH añadido para obtener un pH inicial de 12). Cada cocción se calentó entre 50°C y 70°C durante 3 horas. La reacción se centrifugó como se ha descrito anteriormente, con la salvedad de que el sobrenadante era la fracción deseada y se guardó. La centrifugación se realizó mientras la mezcla de reacción aún estaba caliente. El sobrenadante de cada frasco se mezcló vertiéndolo en un cubo limpio. Los pellets se desecharon después de esta etapa de lavado.

Procedimiento de acidificación

El procedimiento de enfriamiento se llevó a cabo añadiendo, con agitación, ácido sulfúrico concentrado a la solución de extracto en cubos de 7 galones para bajar el pH a un valor entre 2 y 3. Esta suspensión se centrifugó como se ha descrito anteriormente. El sobrenadante de cada botella se mezcló vertiéndolo en cubos limpios y, finalmente, en barriles de 55 galones y se almacenó a temperatura ambiente hasta la diafiltración. Se obtuvo un total de ~110 galones de extracto de manano a partir de los 6 lotes separados de pared celular.

Diafiltración

El extracto de manano diluido se bombeó al tanque de alimentación de nanofiltración (NF) utilizando una bomba de desplazamiento positivo. El procedimiento de NF se completó utilizando un filtro de nanofiltración de 8" de diámetro y 10K de peso molecular de corte fabricado por Parker. El volumen inicial de extracto de manano se dividió en dos partes aproximadamente iguales para obtener manosa concentrada. El primer lote de ~55galones se concentró hasta aproximadamente la mitad del volumen original antes de añadir agua de diafiltración desionizada para eliminar las sales y otras impurezas de pequeño peso molecular. El permeado se desechó y el concentrado se retuvo y recuperó. Se utilizó un total de unos 125 galones de agua de diafiltración para lavar los sólidos disueltos (4x del volumen concentrado). Tras la adición del agua de diafiltración, la solución se concentró de nuevo hasta -14,5% de sólidos disueltos, medidos en brix con un refractómetro. La solución concentrada se bombeó fuera del sistema NF y se recogió para el secado por pulverización. Se utilizó una cantidad mínima de agua adicional para lavar el producto concentrado fuera del sistema de membranas. De este modo, la concentración final de sólidos disueltos del producto recogido se situó en torno al 13% de sólidos disueltos. Se estimó que había unos 7,6 kg de sólidos disueltos de extracto de manano en una solución de 59 kg. (7,6/59 = 12,9% de sólidos disueltos) El procedimiento de nanofiltración / diafiltración se repitió en la segunda asignación, obteniéndose 50 kg de extracto concentrado de manano con un 15% de sólidos disueltos.

La Figura 1 muestra una curva GPC de los retentados después de cada etapa de diafiltración. Como se muestra, con cada etapa de diafiltración posterior, la manosa se concentra más.

Este es un ejemplo de concentración de la MOS soluble. También pueden utilizarse otros métodos, como la centrifugación.

Secado por pulverización

El primer lote de extracto concentrado de manano se secó por pulverización en un secador por pulverización APV Anhydo. Las condiciones primarias de funcionamiento del secador de pulverización incluían una temperatura del aire de entrada de 180°C, una temperatura del aire de salida de 95°C, una velocidad del atomizador de disco giratorio de 2.750 rpm, una velocidad del ventilador de escape del88,5%y velocidades de alimentación de líquido de 160-200 ml/min. El primer lote se secó hasta recoger unos 4,6 kg de polvo seco total. Se secaron unos 42 kg de solución. Los 17 kg restantes de extracto concentrado de manano se retuvieron y se añadieron a la segunda asignación junto con la solución de 6 kg de pared celular sin extraer. La solución combinada se calentó en un Univat a 75°C para pasteurizar la solución y, a continuación, se secó por atomización en las mismas condiciones de funcionamiento, con la salvedad de que la velocidad de alimentación de líquido fue ligeramente superior debido al mayor contenido global de sólidos disueltos. En total se produjeron unos 13,5 kg de pared celular de levadura seca mejorada con manano. Análisis del polvo final

Se analizaron muestras de los productos finales secados por atomización para determinar el contenido de manosa y glucosa (Tabla 2). El producto de pared celular enriquecido con manano contenía un 39% de manosa, un 13% de glucosa y un 64,7% de MOS totales, mientras que el producto de manano puro contenía un 49% de manosa, un 1,6% de glucosa y un 86,2% de MOS totales. La pared celular de partida que finalmente se secó por pulverización con manano contenía un 24% de manosa y un 26% de glucosa.

En resumen, aproximadamente 180 kg de levadura se sometieron a autolisis y extracción para obtener aproximadamente 12 kg de manano extraído. Una porción de ~5 kg del extracto final de manano se secó por atomización sola y contenía un 49% de manosa. Aproximadamente 30 kg de levadura se transportaron sólo a través de autolisis para proporcionar ~6 kg de pared celular sin extraer. La pared celular sin extraer contenía un 24% de manosa insoluble. Una porción de ~9 kg de la manosa extraída se secó por pulverización con ~6 kg de la pared celular sin extraer y el material final contenía un 39% de manosa.

Tabla 2. Resultados analíticos de los materiales finales secados por atomización y de la pared celular de partida.

Referencias

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2. Orlean, P 1997. Biogénesis de los componentes de la pared y la superficie de las levaduras, p. 229-362. En J. Pringle, J. Broach y E. Jones (ed.), Molecular and cellular biology of the yeast Saccharomyces, Vol. 3. Ciclo celular y biología celular. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y

3. Van der Vaart, J. M., L. H. P Caro, J. W. Chapman, F. M. Klis y C. T Verrips. 1995. Identificación de tres manoproteínas en la pared celular de Saccharomyces cerevisiae. J. Bacteriol. 177:3104-3110.

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5. Hooge, Danny M. (2004). "Meta-analysis of Broiler Chicken Pen Trials Evaluating Dietary Mannan Oligosaccharide, 1993-2003". Revista Internacional de Avicultura 3: 163-74.

6. Newman, K.; Jacques, K. A.; Buede, R. (1993). "Efecto del mananooligosacárido en el rendimiento de terneros alimentados con sustitutos lácteos acidificados y no acidificados". J. Anim. Sci. 71 (Supl. 1): 271.

7. Rosen, G. D. (2007). "Holoanálisis de la eficacia de Bio-Mos® en nutrición porcina". Ciencia Animal 82: 683-9.

8. Torrecillas, S; Makol, A; Caballero, M; Montero, D; Robaina, L; Real, F; Sweetman, J; Tort, L et al. (2007). "Estimulación inmunitaria y mejora de la resistencia a las infecciones en la lubina europea (Dicentrarchus labrax) alimentada con oligosacáridos de manano". Inmunología de pescados y mariscos 23: 969-81.

Claims (4)

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para fabricar manano-oligosacárido soluble derivado de levadura que comprende:

lavar la pared celular de la levadura con agua y separar el material soluble del insoluble;

extraer el manano-oligosacárido del material insoluble con una base;

separar la solución de manano-oligosacárido soluble del material insoluble;

desactivar la solución de manano-oligosacárido soluble con ácido;

concentrar la solución de manano-oligosacárido soluble;

añadir solución de pared celular de levadura a la solución de manano-oligosacárido soluble; y

secar por pulverización la pared celular de la levadura y la solución de manano-oligosacárido soluble.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que la solución de manano-oligosacárido soluble se concentra mediante diafiltración.

3. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que la etapa de desactivación comprende llevar la solución de manano-oligosacárido soluble a un pH comprendido entre 2 y 3 aproximadamente.

4. El procedimiento según la reivindicación 1, que comprende además:

pasteurizar la solución de pared celular de levadura y la solución de manano-oligosacárido soluble.