ES2991123T3 - Composición tópica que comprende cannabidiol - Google Patents

Abstract

Composición tópica que comprende una composición de base acuosa que comprende cannabinoides, en particular cannabidiol, en niosomas que tienen un tamaño inferior a 500 nm, y al menos un excipiente tópicamente aceptable, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado, esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido, y opcionalmente (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composición tópica que comprende cannabidiol

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una composición tópica que comprende cannabinoides. En particular, la presente invención se refiere a una composición tópica que comprende cannabidiol incorporado en niosomas, preferentemente con un tamaño inferior a 500 nm y al menos un excipiente tópicamente aceptable.

Estado de la técnica

Cannabis sativa L. es una planta herbácea anual perteneciente a la familia Cannabaceae, conocida desde la antigüedad por sus usos industriales y terapéuticos.

Las inflorescencias de cannabis ofloscontienen la mayor concentración de cannabinoides, los principios activos característicos y exclusivos de la planta de cannabis, siendo los dos principales el delta-9-tetrahidrocannabinol (THC) y el cannabidiol (CBD).

Actualmente, se han separado más de 500 sustancias de las plantas de cáñamo, entre las cuales se encuentran más de 120 cannabinoides, por ejemplo, tetrahidrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD), cannabicromeno (CBC), cannabigerol (CBG), cannabidivarina (CBDV), cannabinol (CBN) y otros, que están presentes en cantidades variables en las partes aéreas de la planta de cáñamo.

El cannabis y sus derivados están actualmente acreditados para el tratamiento de una serie de afecciones patológicas, incluidos los vómitos inducidos por la quimioterapia, náuseas y dolor, espasticidad asociada con la esclerosis múltiple y algunas epilepsias (Abrams, D.I., European Journal of Internal Medicine, marzo de 2018, volumen 49, páginas 7-11). A9-THC es uno de los principales cannabinoides del cannabis responsable de sus efectos y usos terapéuticos, pero su potencial psicoactivo y su naturaleza adictiva han limitado su desarrollo terapéutico. El cannabidiol (CBD) es el otro cannabinoide principal presente en la planta de cannabis que, a diferencia de A9-THC, está desprovisto de actividad psicotrópica, desprovisto de efecto cannabimimético y desprovisto de potencial adictivo (Babalonis et al., Drug Alcohol Depend. 1 de marzo de 2017; 172: 9-13). La química y farmacología del CBD, así como sus dianas moleculares, se han revisado recientemente. De hecho, ignorado por mucho tiempo, actualmente el CBD está ganando atención por sus propiedades terapéuticas (Pisanti et al., Cannabidiol: State of the art and new challenges for therapeutic applications, Pharmacology and Therapeutics, volumen 175, julio de 2017, páginas 133-150) incluidos trastornos de la piel.

El cannabidiol se extrae predominantemente de las partes aéreas del cannabis (Cannabis sativa L.), pero también se produce sintéticamente. El cannabidiol puede tener efectos beneficiosos sobre la piel e interactuar con el sistema endocannabinoide de la piel, por ejemplo, regulando la secreción de sebo. Numerosos estudios científicos han confirmado las capacidades regenerativas del cannabidiol, que también es útil como antiinflamatorio, antioxidante, agente cicatrizante y antibacteriano para la piel y anejos cutáneos. El cannabidiol también puede favorecer la renovación celular natural y actúa como escudo protector contra influencias ambientales nocivas (efecto anticontaminación).

Sin embargo, también se sabe que el cannabidiol no es adecuado para la preparación de formulaciones tópicas, en particular productos cosméticos y/o dispositivos médicos y/o preparaciones farmacéuticas para aplicación sobre la piel y las membranas mucosas, debido a su escasa solubilidad en agua y su consiguiente inestabilidad o incompatibilidad con el alto porcentaje de agua habitualmente presente en una crema, loción, gel u otra formulación tópica. Por lo tanto, el cannabidiol se utiliza actualmente en soluciones/suspensiones oleosas, como, por ejemplo, la composición descrita en WO2019/023668 A1, que comprende cannabidiol en una mezcla de ácidos grasos, con poca capacidad para penetrar la piel y los epitelios, que impide o reduce la eficacia de la administración tópica de cannabidiol.

El uso de niosomas para mejorar la solubilidad y la estabilidad en formulaciones tópicas y la penetración a través de la piel del cannabidiol ha sido sugerido por E. Ripamonti et al, "Evaluation of the efficacy of proprietary niosomes as enhancers of skin permeability of plant extracts: an in vitro study", H&PC Today, vol. 13(2) marzo/abril 2018, pero los resultados obtenidos con un modelo de niosoma descrito en el documento WO 2017/168354 A1 no dieron resultados estadísticamente significativos.

Hasta la fecha, la industria cosmética todavía está buscando una composición capaz de permitir la formulación de cannabidiol para aplicaciones tópicas y capaz de administrar eficazmente cannabidiol a través de la piel.

Sumario de la invención

La solicitante se ha enfrentado al problema de la administración tópica de cannabidiol y sorprendentemente ha encontrado una formulación de cannabidiol incorporado en niosomas capaz de superar los inconvenientes conocidos en el estado de la técnica.

En particular, la solicitante se ha enfrentado al problema de preparar una composición tópica que comprenda cannabidiol en forma de una emulsión de base acuosa que sea estable en el tiempo y que no dé lugar a separación y/o precipitación y/o alteración de sus componentes.

Al mismo tiempo, la solicitante se ha enfrentado al problema de preparar una composición tópica que comprenda cannabidiol capaz de solubilizar una mayor cantidad de cannabidiol.

Por último, la solicitante se ha enfrentado al problema de preparar una composición tópica que comprenda cannabidiol que mejore la penetración de cannabidiol a través de la piel.

Después de una extensa experimentación, la solicitante descubrió que una composición tópica que comprende una formulación de cannabidiol incorporada en niosomas que comprenden al menos un poliglicerol lineal o ramificado, esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina, preferentemente un betaglucano y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono, preferentemente caprililglicol, permite solubilizar hasta un 5 % o más en peso de cannabidiol y mejora la penetración del cannabidiol a través de la piel, haciendo así que haya más cannabidiol disponible y efectivo para la misma cantidad de producto administrada.

En particular, la solicitante descubrió que la composición de la invención exhibía una mayor elasticidad, estimada a través de mediciones de extrusión, ayudada por la presencia de betaglucano que confiere a los niosomas una mejor plasticidad y deformabilidad al atravesar los espacios intercelulares de la piel.

La solicitante constató además que la composición tópica resultante era estable a lo largo del tiempo, no causaba ninguna irritación y tenía una resistencia antimicrobiana adecuada.

Por último, la solicitante descubrió que la composición tópica así obtenida, además de proporcionar una protección eficaz contra los contaminantes atmosféricos, como material particulado, también era capaz de mejorar la viabilidad de las células de la piel y el trofismo celular y de ejercer una importante capacidad antiinflamatoria, en parte, relacionada con la mejor penetración del componente cannabidiol y, en parte, relacionada con la presencia de betaglucano.

Asimismo, la solicitante también descubrió que la composición de la invención tiene una considerable actividad calmante y contra picazón en la piel, junto con la estimulación de la mitogénesis en las células del bulbo piloso. Por otro lado, evaluaciones preliminares, todavía en progreso, sugieren que la composición de la invención tiene una considerable actividad analgésica en la piel.

La solicitante también considera que los resultados obtenidos con el cannabidiol, en términos de estabilidad y capacidad de penetración, pueden extenderse a otros cannabinoides, tales como, por ejemplo, el cannabigerol (CBG) y el cannabinol (CBN) anteriormente mencionados.

Por lo tanto, un primer objeto de la presente invención se refiere a una composición tópica que comprende una composición de base acuosa que comprende cannabinoides, en particular cannabidiol, en niosomas que tienen un tamaño inferior a 500 nm y, al menos, un excipiente tópicamente aceptable, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado, esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición de base acuosa, en particular a una dispersión o solución acuosa, que comprende cannabinoides, en particular cannabidiol, incorporado en niosomas, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono.

Un tercer aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento para preparar una composición de base acuosa que comprende niosomas que contienen cannabinoides, en particular cannabidiol, que comprende el uso de técnicas de agitación manual o ultrasónica, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado, esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono.

Breve descripción de las figuras

La presente invención se ilustrará mejor en la siguiente descripción detallada, expuesta a continuación con referencia a los dibujos que acompañan, que se proporcionan únicamente con fines ilustrativos y, por lo tanto, no son limitantes, en los que:

la figura 1 muestra una fotomicrografía de las vesículas de dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 observadas mediante microscopía electrónica de transmisión TEM (JEM-1200EX, JEOL Co., Tokio, Japón) utilizando un procedimiento de tinción negativa,

la figura 2 muestra el gráfico de la dispersión dinámica de luz (DLS) obtenido al analizar la misma muestra de vesículas de dispersión de niosomas (CBD-S5) que en el ejemplo 1 con un instrumento Brookhaven 90Plus-Particle Size Analyzer,

la figura 3 muestra el gráfico de la viabilidad celular relativa de un modelo de epidermis humana reconstruida tratada con dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 frente a un control positivo (PC) y un control negativo (NC) como se describe en el ejemplo 5A,

la figura 4 muestra el gráfico de la viabilidad celular relativa de un modelo de epidermis humana reconstruida tratada con la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1, en presencia o ausencia de PM2,5, frente a un control positivo (PC) y un control negativo (NC) como se describe en el ejemplo 8, y

la figura 5 muestra el gráfico del porcentaje relativo de liberación de IL-1a de un modelo de epidermis humana reconstruida tratada con dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1, en presencia o ausencia de PM2,5, frente a un control positivo (PC) y un control negativo (NC) como se describe en el ejemplo 8.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere en un primer aspecto a una composición tópica que comprende una composición de base acuosa que comprende cannabinoides, en particular cannabidiol, en niosomas que tienen un tamaño inferior a 500 nm y, al menos, un excipiente tópicamente aceptable, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono. La expresión "tópicamente aceptable" como se utiliza en este documento pretende definir sustancias reconocidas por no tener efectos secundarios adversos (irritación, toxicidad, etc.) cuando se aplica sobre la piel, epitelios y/o membranas mucosas.

La expresión "niosoma" o "niosomas" tal como se utiliza en este documento pretende definir vesículas hidrófilas formadas a partir de un tensioactivo no iónico orientado en una bicapa.

Ventajosamente, los niosomas utilizados en la presente invención tienen diámetros inferiores a 400 nm, más preferentemente inferiores a 300 nm y, aún más preferentemente, inferiores a 200 nm. Preferentemente, los niosomas utilizados en la presente invención tienen diámetros superiores a 10 nm, más preferentemente superiores a 20 nm y, aún más preferentemente, superiores a 40 nm. Ventajosamente, los niosomas utilizados en la presente invención tienen diámetros entre 50 nm y 180 nm, preferentemente entre 70 nm y 150 nm.

El poliglicerol lineal o ramificado esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados útil en la presente invención se obtiene mediante esterificación de un poliglicerol lineal o ramificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados.

El cannabidiol útil en la presente invención puede ser de origen natural y/o sintético, preferentemente con una pureza igual o superior al 95 %, igual o superior al 96 %, igual o superior al 97 %, igual o superior al 98 % o igual o superior al 99. Ventajosamente, el cannabidiol útil en la presente invención tiene una pureza de aproximadamente el 100 %.

El cannabidiol de origen natural puede contener porcentajes minoritarios de otros cannabinoides, tales como, por ejemplo, cannabicromeno, cannabigerol y cannabinol, generalmente en total igual o inferior al 5 %, igual o inferior al 4 %, igual o inferior al 3 %, igual o inferior al 2 % o igual o inferior al 1 %.

Los ejemplos preferentes de poligliceroles son el triglicerol, tetraglicerol, hexaglicerol, octaglicerol, decaglicerol. Los poligliceroles lineales o ramificados útiles en la presente invención están disponibles comercialmente.

Ejemplos de productos comerciales son los poligliceroles distribuidos por American International Chemical LLC bajo el nombre comercial Polyglycerol-3, por Spiga Nord S.p.A. bajo los nombres comerciales Vegetable Polyglycerine-3, Vegetable Polyglycerine-4, Vegetable Polyglycerine-6 y Vegetable Polyglycerine-10 y de Solvay Chemicals, Inc. bajo los nombres comerciales Polyglycerol-3 y Polyglycerol-4.

Ejemplos útiles de ácidos grasos lineales saturados incluyen ácidos monocarboxílicos que tienen de 4 a 32 átomos de carbono, como el ácido butírico, ácido valérico, ácido caproico, ácido enántico, ácido caprílico, ácido pelargónico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico, ácido lignocérico, ácido cerótico, ácido montánico, ácido melísico y ácido laceroico.

Los ácidos grasos lineales saturados preferentes incluyen ácidos monocarboxílicos que tienen de 12 a 22 átomos de carbono, tal como ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico y ácido behénico.

Ejemplos útiles de ácidos grasos monoinsaturados lineales incluyen ácidos monocarboxílicos que tienen de 14 a 24 átomos de carbono, como el ácido miristoleico, ácido palmitoleico, ácido oleico, ácido gadoleico y ácido erúcico.

Ejemplos útiles de mezclas de ácidos grasos son los aceites vegetales obtenidos mediante prensado o extracción de semillas o frutos, tales como, por ejemplo, aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de coco, aceite de palma y aceite de colza. Debido al bajo contenido de ácidos poliinsaturados, son preferentes el aceite de oliva y el aceite de coco, en particular el aceite de oliva.

Ésteres de poligliceroles lineales o ramificados con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados, o mezclas de los mismos, útiles en la presente invención están disponibles comercialmente. Ejemplos de productos comerciales son los ésteres de poliglicerol preparados y distribuidos por la empresa Lonza bajo el nombre comercial Polyaldo, tales como, por ejemplo, Polyaldo® 6-2-S [diestearato de poligliceril-6], Polyaldo®10-1-S [estearato de poligliceril-10], Polyaldo® 10-1-O [oleato de poligliceril-10], Polyaldo® 10-2-P [dipalmitato de poligliceril-10], por la empresa Hydrior AG, Alemania bajo el nombre comercial Hydriol, tales como, por ejemplo, HYDRIOL® PGO (oleato de poliglicerol-4), HYDRIOL® PGD (diisoestearato de poliglicerol-3), por la empresa Naturalis s.r.l. bajo el nombre comercial Soavirol, tales como, por ejemplo, Soavirol OV6 (éster de poligliceril-6 de aceite de oliva), Soavirol OV4 (éster de poligliceril-4 de aceite de oliva) y por la empresa Nikko Chemicals Co, Ltd. bajo el nombre comercial Nikkol Hexaglyn, tales como, por ejemplo, Nikkol Hexaglyn 1-L (laurato de poligliceril-6) y Nikkol Hexaglyn PR-15 (polirricinoleato de poligliceril-6). Se pueden encontrar proveedores adicionales de ésteres de poliglicerol para aplicaciones cosméticas en https://cosmet¡cs.spec¡alchem.com/selectors?q=polvglicer¡lo.

El polisacárido útil en la presente invención se selecciona del grupo que consiste en polisacáridos de origen natural, como pululanos, glucanos alginatos, amilosa, glucógeno e inulina.

Ventajosamente, el polisacárido útil en la presente invención se selecciona del grupo que consiste en alfa- y betaglucanos, más preferentemente betaglucanos.

Los betaglucanos son polisacáridos lineales que comprenden moléculas de glucosa unidas entre sí por enlaces glucosídicos 3(1-3). Los betaglucanos son productos naturales que se encuentran en cereales, bacterias y hongos. La avena y la cebada son particularmente ricas en betaglucanos y su producción proviene principalmente de la extracción de estos cereales. Los betaglucanos obtenidos a partir de hongos también están ampliamente disponibles comercialmente. Los betaglucanos de hongos y levaduras contienen enlaces ramificados con enlaces glucosídicos y (3(1-6), mientras que los betaglucanos de los cereales tienen enlaces glucosídicos y (3(1-3) y (3(1-4). Los betaglucanos derivados de cereales son más solubles en agua y, por lo tanto, son preferentes para los fines de la presente invención.

Los betaglucanos particularmente útiles para los fines de la presente invención son los betaglucanos distribuidos por la empresa Ohly GmbH, Alemania, bajo el nombre comercial Ohly-GOO Glucan, por la empresa Maypro Industries LLC bajo el nombre comercial Chitoglucan®, por la empresa Lesaffre Human Care bajo el nombre comercial Lynside® Wall Glucan y por la empresa HerbaKraft Inc. bajo el nombre comercial Beta Glucan. Se pueden encontrar proveedores adicionales de betaglucanos para aplicaciones cosméticas en https://cosmetics.specialchem.com/inci/beta-glucan.

El glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono útil en la presente invención se selecciona preferentemente del grupo que consiste en 1,2-butanodiol, 1,2-pentanodiol, 1,2-hexanodiol, 1,2-heptanodiol, 1,2-octanodiol (caprililglicol), 1,2-decanodiol (caprilglicol), 1,2-dodecanodiol (laurilglicol) y 1,2-hexadecanodiol.

1,2-hexanodiol, 1,2-heptanodiol, 1,2-octanodiol (caprililglicol), 1,2-decanodiol (caprilglicol) son particularmente preferentes. Para los fines de la presente invención, se utiliza ventajosamente 1,2-octanodiol (caprililglicol).

Los productos comerciales que comprenden glicoles útiles para los fines de la presente invención son distribuidos por la empresa CBW Chemie GmbH, Alemania, por la empresa Inolex Inc., EE.UU., bajo el nombre comercial Lexgard®, por la empresa Wintersun Chemical, EE.UU., y por la empresa Chemos GmbH & Co. KG.

Proveedores de poligliceroles y sus ésteres, betaglucanos y glicoles útiles en la presente invención también se pueden encontrar en Internet, por ejemplo, en https://www.food-ingredients.com/english/, en http://www.buyersguidechem.com/ y en https://cosmetics.specialchem.com/.

En la fabricación de los niosomas empleados para los fines de la presente invención, se utilizan preferentemente otros componentes adecuados para estabilizar y conservar la solución/dispersión acuosa de niosomas, como, por ejemplo, antioxidantes naturales solubles en agua, como ácido ascórbico y sus derivados y polifenoles.

La composición de base acuosa que comprende niosomas de la presente invención se puede preparar según técnicas conocidas en la técnica, por ejemplo, mediante la técnica de agitación manual o mediante la técnica ultrasónica.

La técnica de agitación manual comprende una primera etapa de solubilización de los componentes en un disolvente orgánico volátil, tales como, por ejemplo, éter etílico, cloroformo o metanol, realizada en un matraz de vidrio, una segunda etapa de evaporación, realizada en un evaporador rotatorio a temperatura ambiente (20°-25 °C) dejando una fina capa de los componentes depositada en las paredes del matraz y finalmente una tercera etapa de rehidratación con una fase acuosa que comprende los extractos vegetales a una temperatura entre 0° y 60 °C bajo ligera agitación. La técnica ultrasónica comprende la sonicación a una temperatura entre 0° y 60 °C de una dispersión obtenida mezclando una fase orgánica que comprende surfactantes y una fase acuosa que comprende extractos de plantas. Estos y otros procedimientos de preparación de composiciones que comprenden niosomas se describen en la literatura, por ejemplo, en el artículo de Madhav et al., "Niosomes: a novel drug delivery system"; International journal of research in pharmacy and chemistry, IJRPC 2011, 1(3), 498-5,11.

La dispersión/solución de niosomas de la presente invención comprende preferentemente las cantidades de componentes descritas a continuación y expresadas como porcentaje en peso con respecto al peso total de la dispersión/solución de niosomas (% p/p).

El cannabidiol se incluye en la dispersión/solución de niosomas hasta una cantidad de 10 % p/p. Preferentemente, el cannabidiol está presente en una cantidad que oscila entre el 1 % y el 8 % p/p, más preferentemente que oscila entre el 2 % y el 7 % p/p y aún más preferentemente que oscila entre el 3 % y el 6 % p/p. Ventajosamente, la cantidad de cannabidiol oscila entre el 4 % y el 5 % p/p.

La dispersión/solución de niosomas comprende una cantidad de ésteres de poliglicerol que oscila entre el 40 % y el 90 % p/p, preferentemente que oscila entre el 50 % y el 80 % p/p.

La cantidad de betaglucano incluida en la dispersión/solución de niosomas oscila entre el 1 % y el 5 % p/p, preferentemente entre el 1 % y el 3 % p/p.

La cantidad de glicol incluida en la dispersión/solución de niosomas oscila entre el 0,1 % y el 5 % p/p, preferentemente entre el 0,5 % y el 3 % p/p.

La dispersión/solución de niosomas resultante comprende agua en una cantidad de entre el 10 % y el 40 % p/p, preferentemente entre el 20 % y el 30 % p/p.

La dispersión/solución de niosomas puede comprender otros componentes, como, por ejemplo, estabilizadores y conservantes, hasta la cantidad de 1 % p/p.

La composición tópica de la presente invención puede ser líquida o semisólida.

En particular, la composición tópica de la presente invención es una composición cosmética y/o un dispositivo médico y/o una preparación farmacéutica, para aplicación sobre la piel, epitelios y membranas mucosas.

La composición tópica de la presente invención comprende ventajosamente composiciones líquidas o semisólidas dentro de las cuales la composición de niosoma de base acuosa se dispersa en una cantidad de entre 0,5 % y 10 % en peso, preferentemente de entre 1 % a 5 % en peso, con respecto al peso total de la composición tópica.

Las composiciones líquidas de la presente invención incluyen soluciones, emulsiones, microemulsiones, lociones, geles, espumas, leches, aguas micelares, aceites, tensiolitas o suspensiones con una amplia variación de viscosidad. Las composiciones líquidas incluyen, por ejemplo, soluciones acuosas, soluciones hidroalcohólicas, soluciones oleosas, emulsiones obtenidas por dispersión de una fase oleosa en una fase acuosa (aceite en agua) o, viceversa, de una fase acuosa en una fase oleosa (agua en aceite) y suspensiones, obtenidas por dispersión de una fase dispersa, que consiste en partículas sólidas, en un medio dispersante generalmente representado por un líquido acuoso u oleoso de cierta viscosidad.

Las composiciones semisólidas de la presente invención incluyen cremas, geles, bálsamos, pomadas, pastas, cremagel, barras y ceras.

De forma adicional, las composiciones tópicas de la presente invención pueden comprender diversos aditivos o vehículos tópicamente aceptables útiles en la preparación de productos cosméticos y/o dispositivos médicos y/o preparaciones farmacéuticas conocidos por el experto en la materia, tales como, por ejemplo, emulsionantes, hidratantes, disolventes, emolientes, estabilizantes, viscosizantes, conservantes, lubricantes, agentes de secuestro o quelantes, cargas, polvos, fragancias, perfumes, absorbentes, colorantes y opacificantes, antioxidantes, vitaminas, extractos naturales, polisacáridos, sustancias protectoras, filtros UV, aceites esenciales, sustancias queratinactivas y aminoácidos.

Los aditivos disolventes adecuados incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, cetonas (como acetona y metil isobutil cetona), glicoles (como etilenglicol, propilenglicol y butilenglicol), polietilenglicoles (como PEG-40, PEG-50, PEG-60), acetatos de alquilo (como acetato de amilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo), parafinas e isoparafinas, cicloalquilos (como ciclohexano), glicerina, aceites naturales y sintéticos, triglicéridos naturales y sintéticos, aceites esenciales.

Ventajosamente, las composiciones tópicas de la presente invención son composiciones acuosas.

En las composiciones acuosas, el agua representa el componente principal de la composición alcanzando incluso una cantidad de hasta el 99 % en peso con respecto al peso de la composición total. Las composiciones acuosas contienen preferentemente una cantidad de agua que oscila entre el 25 % y el 99 %, preferentemente que oscila entre el 35% y el 95 % y más preferentemente que oscila entre el 50 % y el 90 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Las composiciones acuosas de la presente invención pueden comprender preferentemente una cantidad total de disolventes no acuosos que oscila entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 60 %, más preferentemente que oscila entre el 1 % y el 40 % y aún más preferentemente que oscila entre el 5 % y el 35 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de aditivos emulsionantes adecuados son los no iónicos, catiónicos, tensioactivos aniónicos y anfóteros o una combinación de los mismos. Ejemplos de emulsionantes útiles en la presente invención son sorbitanos, alcoholes etoxilados de cadena larga, poliglucósidos de alquilo, jabones, alquilsulfatos, tales como, por ejemplo, sulfato de cetilestearilo de sodio, monoalquilfosfatos y dialquilfosfatos, sulfonatos de alquilo, aceite de ricino hidrogenado, isotionatos de acilo, ésteres de sacarosa, betaínas, lecitinas, sales de amonio cuaternario, alquiloleatos, glicéridos, tales como, por ejemplo, polioxiglicéridos de caprilocaproilo y emulsionantes del aceite de oliva.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de emulsionantes que varía entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 60 %, más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 25 % y aún más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 10 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Los aditivos de viscosidad típicos útiles en la presente invención son, por ejemplo, goma xantana, hidroxipropilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carbopol, carrageninas, polioxámeros y goma de acacia.

Ventajosamente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de viscosificadores que oscila entre aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 25 %, más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 10 % y aún más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 5 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de aditivos con acción hidratante útiles en la presente invención son, por ejemplo, urea, alantoína, ácido hialurónico y derivados de los mismos, glicerina, aminoácidos, acetilmonoetanolamida, butoxipropanol, butilglicol, polietilenglicoles de bajo peso molecular (como PEG-40, PEG-50, PEG-60), aloe, malva, trehalosa y sorbitol.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de humectantes que oscila entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 25 %, más preferentemente entre 0,5 % y 10 % y aún más preferentemente entre 0,1 % y 5 % en peso de la composición total.

Los ejemplos de aditivos emolientes adecuados útiles en la presente invención incluyen, por ejemplo, lanolina, aceite de almendra, aceite de oliva, aceites vegetales, aceite de jojoba, aceite de argán, aceite de ricino hidrogenado, extractos lipofílicos naturales, cera microcristalina, polidimetilsiloxano (dimeticona), polimetilfenilsiloxano, polímeros de glicol y silicona, aceites minerales, parafina, ozokerita, ceresina, ésteres de triglicéridos, monoglicéridos acetilados, glicéridos etoxilados, ésteres de alquilo de ácidos grasos, ácidos grasos, alcoholes de cadena larga, esteroles, cera de abejas, alcoholes polihídricos, poliésteres y amidas de ácidos grasos.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de emolientes que oscila entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 25 %, más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 10 % y aún más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 5 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de fragancias útiles en la presente invención son, por ejemplo, aceites esenciales naturales o fracciones o concentrados de aceites esenciales, tales como, por ejemplo, aceite de limón, aceite de bergamota, esencia de lavanda, limoneno, linalol. Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de fragancias que oscila entre aproximadamente el 0,001 % y aproximadamente el 0,1 %.

Los ejemplos de aditivos conservantes adecuados útiles en la presente invención incluyen, por ejemplo, alcoholes, tales como etanol, fenoxietanol y alcohol bencílico, parahidroxibenzoato de metilo y propilo, hidroxianisol butilado (BHA), sorbatos, derivados de urea e isotiazolinonas, conservantes naturales, tales como, por ejemplo, ácido ascórbico y derivados, tocoferol y derivados, polifenoles. Otros ejemplos de colorantes que pueden emplearse en la composición tópica de la presente invención se pueden encontrar en el Anexo V del Reglamento (CE) n.° 1223/2009 de 30 de noviembre de 2009.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de conservantes que oscila entre aproximadamente el 0,01 % y aproximadamente el 2,00 %, más preferentemente que oscila entre el 0,05 % y el 1,00 % y aún más preferentemente que oscila entre el 0,1 % y el 0,5 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de aditivos de secuestro o quelantes útiles en la presente invención son EDTA, HEDTA, oxalatos de alquilo, oxalato de litio o de potasio, pirofosfato de sodio o potasio. Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de aditivos de secuestro o quelantes que oscila entre aproximadamente el 0,01 % y aproximadamente el 20 %, más preferentemente que oscila entre el 0,05 % y el 10 % y aún más preferentemente que oscila entre el 0,1 % y el 5 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de aditivos estabilizantes adecuados útiles en la presente invención son alcoholes de cadena larga (tales como alcohol cetílico, alcohol estearílico) y mezclas de los mismos, polietilenglicoles de alto peso molecular (como PEG-9000 y PEG 14000) y polivinilpirrolidonas (como povidona).

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de estabilizadores que oscila entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 25 %, más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 15 % y aún más preferentemente que oscila entre el 1 % y el 10 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de aditivos en polvo adecuados útiles en la presente invención son siliconas elastoméricas, tales como polímeros cruzados de dimeticona/(DC 9506, Dow-Corning), mezclas de polímeros cruzados de ciclometicona y dimeticona (DC 9040, Dow Corning), polímeros cruzados de dimeticona y vinildimeticona o tratados con sílice (DC 9701, Dow Corning), mezclas de polímeros cruzados de ciclometicona y dimeticona/vinildimeticona (SFE 839, GE Bayer Silicones).

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de aditivos en polvo que oscila entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 5 %, más preferentemente que oscila entre el 0,2 % y el 1 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Ejemplos de agentes opacificantes útiles en la presente invención son óxido de zinc o aluminio, dióxido de titanio o de zinc, alúmina, mica, sales de ácidos grasos con aluminio y yeso.

Ejemplos de colorantes utilizados preferentemente en la presente invención son colorantes solubles en agua fácilmente lavables que no manchan la piel y no dejan residuos, tales como, por ejemplo, azul ácido 3 C.1.42051, azul ácido 9 C.I.42090, azul ácido 74 C.1.73015, pigmento azul 15 C.1.74160, amarillo ácido 3 C.I.47005, amarillo alimentario 3 C.1.15985, amarillo ácido 23 C.I.19140, amarillo ácido 73 C.I.45350, rojo ácido 14 C.1.14720, rojo ácido 18 C.1.16255, rojo ácido 27 C.1.16185, rojo ácido 51 C.I.45430, verde ácido 1 C.1.10020, verde ácido 25 C. 1.61570 y mezclas de los mismos. Otros ejemplos de colorantes que pueden emplearse en la composición tópica de la presente invención se pueden encontrar en el Anexo IV del Reglamento (CE) n.° 1223/2009 de 30 de noviembre de 2009.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de agentes opacificantes y colorantes que oscila entre aproximadamente el 0,01 % y aproximadamente el 15 %, más preferentemente que oscila entre el 0,05 % y el 5 % en peso con respecto al peso de la composición total.

Preferentemente, la composición de la presente invención puede comprender filtros UV capaces de proteger la piel de la acción de la radiación ultravioleta. Ejemplos de filtros U<v>son, por ejemplo, acrilatos como 2-etilhexil 2-ciano-3,3-difenilacrilato (PARSOL 340) y 2-ciano-3,3-difenilacrilato de etilo, derivados del alcanfor como el alcanfor 4-metilbencilideno (PARSOL 5000) y el alcanfor 3-bencilideno, cinamatos como el metoxicinamato de octilo (PARSOL MCX), metoxicinamato de etoxietilo, metoxicinamato de dietanolamina (PARSOL Hydro), derivados de triazona como etilhexil triazona (UVINUL T-150), dietilhexil butamido triazona (UVASORB HEB), derivados del dibenzoilmetano como el 4-terc-butil-4'-metoxidibenzoilmetano (PARSOL 1789), el dimetoxidibenzoilmetano, derivados de benzotriazol como 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,-tetrametilbutil)-fenol (TINOSORB M), derivados de triazina como bis-etilhexiloxifenol metoxifenil triazina (TINOSORB S). Otros ejemplos de filtros UV que pueden utilizarse en la composición tópica de la presente invención se pueden encontrar en el Anexo VI del Reglamento (CE) n.° 1223/2009 de 30 de noviembre de 2009.

Preferentemente, la composición de la presente invención comprende una cantidad total de filtros UV que oscila entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 20 %, más preferentemente que oscila entre el 0,5 % y el 15 % en peso con respecto al peso de la composición total.

La siguiente parte experimental ilustra al menos una realización de la invención, sin restringir en modo alguno el alcance de la protección tal como se define en las reivindicaciones adjuntas a la presente descripción.

Parte experimental

EJEMPLO 1 - preparación de niosomas

Se preparó una dispersión de niosomas (CBD-S5) comprendiendo cannabidiol (CBD) con la composición que se muestra en la siguiente tabla 1. La composición resultante tenía la apariencia de un gel viscoso uniforme de color amarillo pálido. Para cada componente se expresa el porcentaje en peso con respecto al peso de la composición total.

TABLA 1

EJEMPLO 2

La morfología de la vesícula de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 se examinó mediante microscopía electrónica de transmisión TEM (JEM-1200EX, JEOL Co., Tokio, Japón) utilizando un procedimiento de tinción negativa.

Una pequeña alícuota (5,0 ml) de la dispersión de CBD-S5 se centrifugó a 4 °C durante 30 minutos a una velocidad capaz de desarrollar aproximadamente 80000 xg. El pellet se secó y luego se diluyó con una solución de acetato de uranilo al 1 %. Una gota de la suspensión se utilizó directamente para cargar una pantalla de microscopio electrónico recubierta de carbono. El exceso de muestra se eliminó mediante absorción utilizando papel de filtro normal. La pantalla así preparada se incubó a 30 °C durante 10 minutos para secarla completamente y se observó mediante TEM a 80 kV. En la figura 1 se muestra una fotomicrografía de las vesículas observadas. Las vesículas numeradas tenían el diámetro que se muestra en la siguiente tabla 2.

TABLA 2

El análisis ultraestructural por microscopía electrónica de transmisión mostró la presencia de estructuras vesiculares esferoidales con un tamaño promedio de unos 200 nm.

La figura 2 muestra el gráfico de dispersión de luz dinámica (DLS) obtenido al analizar la misma muestra de CBD-S5 con un analizador de tamaño de partículas Brookhaven 90Plus. La medición confirmó un diámetro promedio de 190,4 nm con un índice de polidispersibilidad de 0,137.

EJEMPLO 3

La elasticidad es una de las características más importantes de los niosomas. La elasticidad se estima mediante mediciones de extrusión. Las vesículas de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 fueron extrudidas a través de un filtro de policarbonato con un diámetro de poro de 100 nm bajo presión constante. La elasticidad se expresa en términos del índice de deformabilidad (D) calculado mediante la siguiente fórmula:

D = J x (rv / rp)2

donde J es la relación de suspensión extrudida en 5 minutos, rv es el tamaño de las vesículas después de cruzar el filtro medido por DLS y rp es el diámetro de poro del filtro.

Se demuestra una buena deformabilidad cuando el índice de deformabilidad es mayor que 80. La prueba se realizó con el instrumento Avestin LiposoFast midiendo las partículas con el analizador de tamaño de partículas Brookhaven 90Plus.

Los resultados mostraron una relación de suspensión extrudida de 5 minutos (J) del 87 % con un tamaño de vesícula rv de 141 nm. Por tanto, el índice de deformabilidad (D) fue 172,96, confirmando la excelente deformabilidad de los niosomas, una característica predictiva de una excelente capacidad para penetrar a través de la piel, epitelios y apéndices cutáneos. Las características de elasticidad y deformabilidad son esenciales para la interacción con las capas superficiales de la piel y los anejos cutáneos, promoviendo la absorción y penetración no solo a través de interacciones químicas.

EJEMPLO 4

Se evaluaron las vesículas de dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 y una solución al 5 % de cannabidiol en MCT (CBD-5 %) para determinar su capacidad de difusión a través de una membrana artificial, utilizando solución salina tamponada con fosfato (PBS) como control negativo. Los aceites de triglicéridos de cadena media (MCT) utilizados para la comparación se encuentran entre los sistemas de solubilización de cannabidiol más populares, incluso para uso tópico.

El ensayo incluyó la evaluación de la difusión de cannabidiol con células de Franz a través de una membrana artificial Strat-M<®>(Sigma-Aldrich) utilizada para pruebas de difusión transmembrana, que simulan la difusión en la epidermis humana de diferentes tipos de compuestos y formulaciones.

La membrana artificial Strat-M<®>consiste en dos capas de poliéter sulfona (PES, más resistente a la difusión) colocadas en la superficie y una capa de poliolefina (más difusiva). Estas capas de polímero crean una estructura porosa con un gradiente de difusión. De forma adicional, esta estructura porosa está impregnada de una mezcla de lípidos sintéticos, dándole propiedades similares a las de la piel.

La celda de difusión consta de una cámara donante y una cámara receptora entre las cuales se coloca la membrana. En la cámara receptora hay un tampón de fosfato con 5 % de albúmina sérica bovina (BSA) y un imán para mezclar adecuadamente la solución. El área disponible para la aplicación de la muestra es de 0,2 cm<2>

Las muestras de CBD-S5 y CBD-5 % se aplicaron a la membrana (1 g/cm<2>) utilizando una pipeta de desplazamiento positivo Gilson P100 especial para líquidos densos. El control negativo fueron membranas tratadas únicamente con solución salina tamponada con fosfato (PBS).

Las muestras y los controles se incubaron a 32 °C, 5 % de CO<2>y la exposición se realizó durante 16, 24 y 48 horas. La muestra se analizó por triplicado. En los diferentes tiempos de exposición, se extrajo parte del líquido receptor con una jeringa. Las muestras así recuperadas fueron congeladas inmediatamente a -20 °C y descongeladas posteriormente para su análisis cromatográfico cuantitativo.

Una alícuota de la cantidad difundida bajo las membranas en cada tiempo de evaluación se diluyó con una solución de metanol acidificada con ácido fosfórico al 0,3 % (v/v). El subnadante se analizó mediante HPLC-DAD con el instrumento WATERS 2695, con las siguientes condiciones analíticas.

Longitud de onda: 212 nm

Inyección: 10 pl

Columna: Eclipse XDB-C183,5 pm 3,0 x 150 mm

Temperatura de la columna: 35 °C

Caudal: 0,6 ml/min

Fase móvil A: 0,3 % H<3>PO<4>en H<2>O milliQ

Fase móvil B: 0,3 % H<3>PO<4>en ACN

Gradiente: Según la tabla 3

TABLA 3

continuación

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 4.

TABLA 4

Los resultados de la tabla 4 demostraron un aumento significativo en la difusión de cannabidiol de la muestra CBD-S5 de la presente invención en comparación con la muestra CBD-5 %.

Los resultados de la prueba permiten predecir una mayor capacidad de penetración y liberación del ingrediente activo en la piel.

EJEMPLO 5

El poder irritante de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 se evaluó mediante una prueba in vitro sobre epidermis reconstituida y una prueba in vivo sobre un grupo de veinte sujetos. Determinar si los productos tópicos y cosméticos son irritantes es una evaluación importante para establecer procedimientos para un uso correcto y seguro.

A. Prueba in vitro

La prueba in vitro consiste en una exposición tópica de la sustancia de prueba en la epidermis humana reconstituida (RHE) seguida de una prueba de viabilidad celular.

La viabilidad celular se determina mediante la conversión de MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) en una sal azul de formazán, que se mide cuantitativamente después de la extracción del tejido. La conversión se produce a través de la enzima mitocondrial succinato deshidrogenasa, que solo está activa en células vivas, provocando que el anillo de tetrazol MTT se abra y se forme formazán. La evaluación de la viabilidad de los tejidos expuestos a la sustancia de prueba en comparación con el control negativo (tratado con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco - DPBS) y el control positivo (tratado con dodecil sulfato de sodio - SDS) se utiliza para predecir el potencial de irritación de la piel.

El modelo de epidermis humana reconstruida consta de queratinocitos epidérmicos normales derivados de humanos cultivados para recrear una epidermis humana multicapa altamente diferenciada. Está formada por una capa basal, una capa espinosa y granular y un estrato córneo multicapa que contiene capas lipídicas lamelares intercelulares dispuestas de manera similar a las presentes in vivo.

La muestra de piel reconstruida cubre un área de 0,63 cm2 La prueba se realiza por triplicado. Cada muestra se trata con 25 |jg de CBD-S5. En paralelo, la prueba de control positivo (PC) se realiza aplicando 30 jL de solución de SDS al 5 % a la muestra de piel y la prueba de control negativo (NC) aplicando 30 jL de DPBS a la muestra de piel. El tratamiento dura 60 minutos, entonces se lavan las muestras para eliminar las sustancias de prueba y se incuban durante 24 horas antes de realizar el ensayo MTT.

El ensayo MTT se realiza transfiriendo las muestras a placas de 24 pocillos que contienen una solución de MTT (1 mg/ml). La sal de formazán azul producida por las mitocondrias celulares se extrae con 2,0 ml de isopropanol por muestra.

La densidad óptica del formazán extraído se determina espectrofotométricamente a una longitud de onda de 570 nm utilizando el espectrofotómetro de microplacas jQUANT BIO TEK. La viabilidad celular relativa se calcula para cada tejido como % de la densidad óptica media de los tejidos de control negativo. Los resultados se resumen en la siguiente tabla 5 y en la figura 3.

TABLA 5

Por lo tanto, se comprobó que la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 no era irritante.

B. Prueba in vivo

La prueba in vivo consistió en aplicar la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 utilizando Finn Chambers (celdas de 20 microlitros de volumen) en la espalda y/o el antebrazo de sujetos seleccionados. El potencial irritante del producto se evaluó mediante pruebas realizadas en tres momentos distintos. El potencial de irritación cutánea inmediata se evaluó aplicando el producto durante 60 minutos (T1). El potencial de irritación cutánea se evaluó aplicando el producto durante 48 horas (T2) y 24 horas después de retirar el producto (T3). La evaluación se dividió en cuatro niveles de irritación como se describe en la siguiente tabla 6.

TABLA 6

En la siguiente tabla 7 se resumen los resultados obtenidos en los sujetos investigados al final de la prueba.

TABLA 7

La prueba in vivo confirmó la no irritabilidad de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1.

EJEMPLO 6 - Prueba de resistencia antimicrobiana (prueba de estimulación)

La prueba consiste en "estimular" la preparación con un inóculo específico de microorganismos adecuados, dejando la preparación inoculada a una temperatura prescrita y retirando muestras del recipiente a intervalos de tiempo específicos y contando el número de organismos presentes en las muestras tomadas.

La prueba se realizó siguiendo las recomendaciones de Italian Pharmacopoeia - edición IX y European Pharmacopeia equivalente 5.1.3. y utilizando cultivos bacterianos de las siguientes cepas de microorganismos.

• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

• Escherichia coli ATCC 8739

• Staphylococcus aureus ATCC 6538

• Candida albicans ATCC 10231

• Aspergillus brasiliensis ATCC 16404

La dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 se inoculó con los diferentes microorganismos con un inóculo que comprendía un número de bacterias entre 105 y 106 y un número de hongos o levaduras entre 104 y 105. El producto inoculado se almacenó a temperatura ambiente (20°-25 °C) protegido de la luz. Se tomó una muestra del producto en el momento t0 (valor basal) y los intervalos de días 2 (t2), 7 (t7), 14 (t14) y 28 (t28), para determinar el número de microorganismos presentes.

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 8, donde los valores comprobados, expresado en base logarítmica, se muestran para cada microorganismo en los distintos momentos de observación. Los datos expresan las unidades formadoras de colonias (ufc) relativas a 1 g de producto.

TABLA 8

continuación

Basándose en los resultados obtenidos, la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 pasó la prueba de estimulación, mostrando actividad inhibitoria frente a todos los microorganismos según los criterios de aceptabilidad que prevén una reducción del 99,9 % de bacterias y del 90 % de mohos u hongos inoculados dentro de los 7 días siguientes a la inoculación y una reducción adicional en el periodo posterior (CTFA M-3 y M4, ISO 11930:2012 y Ph Eu 5.3.1).

EJEMPLO 7 - Prueba de estabilidad por envejecimiento acelerado

La dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 se sometió a una serie de pruebas de estabilidad y envejecimiento acelerado en diferentes condiciones:

(A) Temperatura ambiente (25 °C) con exposición a la luz durante 90 días

(B) Temperatura de 40 °C durante 90 días

(C) Temperatura de 4 °C durante 90 días

(<d>) Choque térmico: 15 días a 4 °C y 15 días a 40 °C (3 ciclos)

Los parámetros de interés (apariencia, color, pH, densidad) se monitorizaron quincenalmente durante un período total de 90 días.

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 9.

Después de 90 días de envejecimiento acelerado bajo diversas condiciones estresantes, los parámetros del producto no cambiaron significativamente, en particular la densidad como índice de estabilidad de la vesícula niosomal, con excepción del color que cambió de amarillo a rojo. Este cambio se debe a la conocida inestabilidad del cannabidiol al calor y a la luz. Las condiciones de almacenamiento de la preparación niosomal incluyen un envase impermeable a la luz y al aire y mantenido a temperatura ambiente.

EJEMPLO 8 - Prueba de resistencia a partículas y viabilidad celular

La prueba implica el tratamiento de tejido de epidermis humana reconstituida (RHE), ya sea protegido o no con la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1, con una muestra de partículas con un diámetro aerodinámico de menos de 2,5 pm (PM2,5) elegida para ser representativa de la contaminación ambiental por partículas. En paralelo, el tejido epidérmico humano reconstituido se trató con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS -control negativo NC), dodecil sulfato de sodio (SDS - control positivo PC) y dispersión de niosomas sola (CBD-S5) del ejemplo 1.

Específicamente, pocillos que contienen RHE (EpiDerm™ EPI-200, MakTek Corporation) en su propio medio de cultivo (EpiDerm™ EPI-100-NMM, MakTek Corporation) tratado con (1) 30 pl de DPBS (NC), (2) 30 pl de SDS al 5 % (PC), (3 ) 20 pg de PM2,5 disueltos en 30 pl de PBS, (4) 30 pl de Cb D-s 5 y (5) 30 pl de CBD-S5 con 20 pg de PM2,5 se prepararon por triplicado.

Después de la incubación a 37 °C durante 24 h en una atmósfera controlada de 5 % de CO2, la viabilidad celular de la muestra de RHE se evaluó mediante el ensayo MTT, como se describe en el ejemplo 5A, mientras que el medio de cultivo fue recolectado y analizado para la liberación de IL-1a mediante ensayo ELISA, utilizando un kit EMIL1ALPHA (Invitrogen-Thermo Scientific) con el siguiente procedimiento.

Se transfirieron 100 pl de medio de cada tratamiento a pocillos recubiertos con anti-IL-1a humana y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Al final de la incubación, se retiró el medio y se lavaron los pocillos 4 veces con tampón de lavado 1X. Se añadieron 100 pl de anticuerpo biotinilado a cada pocillo y se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente. Al final, los pocillos se lavaron 4 veces con tampón de lavado 1X, se trataron con 100 pl de solución de estreptavidina-HRP durante 45 minutos a temperatura ambiente y finalmente se lavaron 4 veces con tampón de lavado 1X. Se añadieron 100 pl de sustrato<t>M<b>a cada pocillo y se incubó durante 10 minutos en la oscuridad. Por último, se agregaron 100 pl de solución de parada a cada pocillo y se llevaron a cabo lecturas espectrofotométricas en longitudes de onda de 450 nm y 550 nm utilizando el instrumento espectrofotómetro de microplacas pQUANT BIO TEK.

Los cambios en los niveles de IL-1a liberados del tejido RHE después de cada tratamiento se expresaron como valores en % en comparación con el RHE no tratado (NC) utilizado como control (100 %).

La siguiente tabla 10 resume los resultados de las pruebas, también mostrado en las figuras 4 y 5.

TABLA 5

La prueba MTT in vitro mostró que PM2,5 redujo la viabilidad celular al 28,51 %, mientras que el co-tratamiento con CBD-S5 protegió la epidermis humana reconstituida (RHE) contra el efecto tóxico de PM2,5. Los datos mostraron que el CBD-S5 pudo aumentar la viabilidad celular del 28,5 % al 71,25 %. Al mismo tiempo, los resultados de la prueba de solo CBD-S5 mostraron sorprendentemente un aumento en la viabilidad celular con respecto al control al 110,86 %, lo que indica una sorprendente actividad regenerativa. Se cree que este aumento puede deberse a una acción revitalizante provocada por la presencia del polisacárido betaglucano.

El ensayo ELISA mostró que (i) PM2,5 a una concentración de 20 pg/pocillo indujo un aumento en la liberación de IL-1a, y (ii) el tratamiento con CBD-S5 fue capaz de reducir tanto la liberación de IL-1a en tejidos no tratados como en tejidos tratados con 20 pg/pocillo de PM2,5. De nuevo, se observó una reducción sorprendente en la liberación de IL-1a en la muestra tratada solo con CBD-S5, lo que indica una actividad antiinflamatoria significativa.

EJEMPLO 9 - Evaluación in vitro de la eficacia calmante

El ensayo evaluó cuantitativamente los efectos de la muestra en la protección de las células de la piel y en la inhibición de la reacción calmante causada por agentes irritantes moderados como el lauril sulfato de sodio (SLS) mediante un modelo de células cutáneas in vitro multicapa.

Se investigó la inhibición de la liberación de la citocina IL-1a inducida por SLS (mediante un ensayo ELISA específico) después de la exposición a la sustancia probada y con respecto a muestras de piel no tratadas. La viabilidad celular se determinó mediante el ensayo MTT.

Ambos ensayos utilizaron un modelo de piel humana artificial reconstruida que comprendía queratinocitos epidérmicos humanos normales, creciendo como un modelo de cultivo celular tridimensional integrado, imitando perfectamente la piel humana in vitro. El modelo presenta funciones de barrera normales (presencia de un estrato córneo bien diferenciado). El modelo fue suministrado por Episkin (Lion, lote 20-RHE-041).

La epidermis se trató durante 70 minutos con SLS al 0,30 % para inducir la síntesis y liberación de IL-1a. Después, se trataron 40 pl de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 (diluida al 2 % en agua estéril) sobre dos epidermis y se realizó la exposición durante 24 horas a 37 °C, 5 % de CO2. Como control negativo, se trataron dos unidades de epidermis con tampón de fosfato, mientras que las unidades de epidermis tratadas durante 70 minutos con SLS 0,30 % se utilizaron como control positivo. La prueba se realizó en dos réplicas.

Al final del período de exposición, la muestra se retiró mediante lavados con tampón de fosfato (PBS) y se realizó el ensayo MTT para evaluar la supervivencia celular.

Las unidades de epidermis se trataron con una solución de MTT de 1 mg/ml (bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio) durante 3 h a 37 °C. A continuación, se retiró la solución y se reemplazó con isopropanol, con 2 h más de incubación a temperatura ambiente. Se transfirieron dos alícuotas de cada muestra a una placa de 96 pocillos para la lectura. La absorbancia (DO) se leyó a la longitud de onda de 570 nm con un colorímetro (Tecan modelo Infinite F200) equipado con un lector de microplacas.

Los resultados se expresaron en términos de porcentaje de viabilidad celular y % de protección relativa obtenidos con las siguientes fórmulas:

%<de viabilidad celular (cv) =>[OD570 TS / OD<570>NC] x 100

<% de protección relativa = (% CV>TS<- % CV>PC)</ (% CV>NC<- % CV>PC)

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 6.

TABLA 6

Para el ensayo de IL-1a, el medio de cultivo se ha recogido a las 6 y 24 horas. Como control negativo, se ha utilizado medio de cultivo de unidades tratadas con PBS; mientras que como control positivo se ha utilizado medio de cultivo de 2 unidades tratado con SLS 0,30 %. Se determinó IL-1a en el medio de cultivo de epidermis tratada y no tratada, utilizando una prueba ELISA directa (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas). La señal colorimétrica fue directamente proporcional a la cantidad de citoquina en el medio de cultivo. Las muestras se leyeron a 450 nm. El límite de sensibilidad fue inferior a 10 pg/ml.

La concentración de citocinas se determinó utilizando una curva estándar. Los resultados se expresaron en términos de porcentaje de inhibición de la liberación de IL-1a obtenido con la siguiente fórmula:

% de inhibición IL-1 a = 100 - {pg/ml liberación de IL-1a muestra de prueba / pg/ml IL-1 a control positivo)*100

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 7.

TABLA 7

Los datos resumidos en las tablas 6 y 7 demostraron que el CBD-S5 fue capaz de proteger las células de la piel e inhibir la liberación de IL-1a, mostrando así una actividad calmante in vitro.

EJEMPLO 10 - Mitogénesis en células del bulbo piloso

El propósito de este ensayo fue evaluar cuantitativamente los efectos del CBD-S5 sobre la estimulación del ciclo celular y sobre la síntesis de proteínas totales en fibroblastos de papila dérmica de cabello humano a través del ensayo de viabilidad celular (MTT) después de la inanición y la extracción de proteínas total y cuantificación en diferentes tiempos de exposición con dosis subtóxicas y seriadas. Cuando una composición es capaz de aumentar la proliferación celular y la síntesis de proteínas, esto sugerirá su papel en la estimulación del crecimiento del folículo y la fase de anagénesis temprana.

La prueba se lleva a cabo en células de la papila dérmica del cabello humano (HHDPC) con morfología similar a la de los fibroblastos. Las células se cultivan en m Em que contiene 10 % de FBS y antibióticos.

Las células se sembraron en placas de 24 pocillos y se dejaron crecer durante 24 h a 37 °C y 5 % de CO<2>. Las células se sometieron a inanición en un medio sin suero durante 6 horas antes del tratamiento. Entonces se añadió a las células medio fresco sin suero y suplementado con diluciones seriadas de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 (0,006 y 0,003 mg/ml). La dispersión de niosomas se disolvió directamente en el medio de cultivo. La prueba se realizó en tres réplicas.

Después de 24 y 48 horas de exposición, se evaluaron la viabilidad celular y el contenido total de proteína celular en placas separadas. Las células no tratadas se utilizaron como controles negativos (NC); las células tratadas con insulina humana se utilizaron como control positivo (CP).

La viabilidad celular se evaluó incubando los tejidos durante 2 horas con solución de MTT (bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio). Luego, el formazán precipitado se extrajo utilizando DMSO y se cuantificó espectrofotométricamente. La absorbancia a 570 nm (OD<570>) se midió con un lector de microplacas (Tecan, Infinite 200 PRO), deduciendo antecedentes a 650 nm (OD<650>).

La viabilidad celular se expresó en términos porcentuales según la siguiente fórmula:

% de viabilidad celular = [(OD570 - OD6so) producto prueba / (OD570 - OD650) NC] x 100

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 8.

TABLA 8

El contenido total de proteína celular se analizó según el método de Bradford. Al final del tratamiento, las células se lavaron dos veces con PBS y se lisaron mediante tratamiento con agua purificada a 4 °C. Se añadió reactivo colorante a cada muestra. Se estableció una curva estándar con titulación con un rango de concentración de 2 a 12 jg/ml. 200 |jl de cada muestra, controles y estándares se transfirieron a una placa de 96 pocillos. La lectura se realizó a 595 nm con un colorímetro equipado con un lector de placas.

Para cuantificar proteínas, se diseñó una gráfica estándar con albúmina y se determinaron las concentraciones de la muestra en base a sus valores de absorbancia utilizando la fórmula de gráfica de interpolación. Se calcularon los valores medios de cada conjunto de datos y para cada muestra se determinó el porcentaje de aumento en la síntesis de proteínas por comparación con el control negativo (CN) de acuerdo con la siguiente fórmula:

% aumento en la síntesis de proteínas = (pg/ml muestra proteínas / pig/ml NC)*100

Los resultados se resumen en la siguiente tabla 9.

TABLA 9

Los datos resumidos en las tablas 8 y 9 demostraron que el CBD-S5 fue capaz de estimular la proliferación celular y la síntesis de proteínas en fibroblastos de papila dérmica del cabello humano en comparación con cultivos de células de control no tratados (control negativo) a una concentración de 0,003 mg/ml después de un período de exposición de 48 horas.

EJEMPLO 11 - Actividad contra picazón

In vivo,una desgranulación de células basófilas mediada por IgE desencadena una reacción alérgica inmediata caracterizada por la liberación rápida de mediadores inflamatorios almacenados previamente (histamina, leucotrienos, tromboxano, enzimas basófilas, hexosaminidasas), que provoca enrojecimiento, erupciones, picazón y reacciones inflamatorias locales. La capacidad de una composición para inhibir la desgranulación de las células basófilas es un indicador de su capacidad para inhibir los síntomas descritos anteriormente y sobre todo el prurito.

La prueba se lleva a cabo en una línea celular de células basófilas de rata transfectadas (RBL-2H3 ATCC<®>CRL-2256<™>) que expresan el receptor humano de IgE (FcRI). Las células se mantienen en RPMI que contiene 10 % de FCS y 2 mM de glutamina.

Las células no tratadas se utilizaron como control negativo para la desgranulación espontánea.

Se utilizó un control positivo consistente en células expuestas a anticuerpos anti-receptor de IgE humana para evaluar el nivel máximo de desgranulación.

También se analizaron lisados celulares en Triton al 1 % para evaluar la mayor liberación posible de las moléculas analizadas.

Para evaluar el efecto de la dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 sobre la desgranulación de basófilos, la muestra se incubó previamente con una línea celular de células basófilas de rata transfectadas (RBL) que expresaban el receptor humano de IgE (FcRI).

La liberación de p-hexosaminidasa durante la desgranulación se controló en el sobrenadante de células RBL-SX38 añadido con p-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosamina (Sigma-Aldrich) en tampón de citrato 0,1 M (pH 6,2) e incubado a 37 °C durante 120 min. La reacción se terminó utilizando tampón de carbonato 0,1 M (pH 10) y se leyó la absorbancia a 405 nm (OD<405>).

El sobrenadante de células no tratadas se utilizó como control negativo. La estimulación máxima de RBL-SX38 se evaluó en un lisado de Triton X-100 al 1% de la monocapa celular.

La densidad óptica del control negativo y positivo y del lisado Triton X-100 se informa en la siguiente tabla 10.

TABLA 10

La dispersión de niosomas (CBD-S5) del ejemplo 1 se solubilizó en medio de cultivo celular a diferentes concentraciones, como se indica en la siguiente tabla 11.

También se utilizó hialuronato de sodio en diluciones seriadas, como se indica en la siguiente tabla 11, como control de la inhibición de la desgranulación de los basófilos.

La densidad óptica medida a 405 nm (OD<405>) se presenta en la siguiente tabla 11.

TABLA 11

El porcentaje de inhibición de desgranulación de basófilos activados con receptor de IgE se ha calculado con la siguiente fórmula:

% de inhibición de desgranulación = 100-[(O D 40s C B D - S 5+ P C - O D 405N C ) / (OD405 P C - OD405 N C )]*100

Los resultados se ilustran en la siguiente tabla 12.

TABLA 12

La dispersión de niosomas (CBD-S5) fue capaz de inhibir la desgranulación de los basófilos de manera dependiente de la dosis. El efecto más alto se observó en las concentraciones más altas probadas. No fue detectable la interferencia en la desgranulación espontánea.

Los resultados anteriores demostraron que la dispersión de niosomas (CBD-S5) tiene actividad contra picazón.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Composición tópica que comprende una composición de base acuosa que comprende cannabinoides en niosomas que tienen un tamaño inferior a 500 nm y al menos un excipiente tópicamente aceptable, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados y (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina.

2. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos cannabinoides son de origen natural o sintético.

3. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos cannabinoides se seleccionan del grupo que consiste en cannabidiol, cannabigerol y cannabinol.

4. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dicho polisacárido se selecciona del grupo que consiste en alfaglucano y betaglucano, preferentemente betaglucano.

5. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dicho poliglicerol lineal o ramificado se selecciona del grupo que consiste en triglicerol, tetraglicerol, hexaglicerol, octaglicerol, decaglicerol.

6. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados se seleccionan del grupo que consiste en ácidos monocarboxílicos que tienen de 4 a 32 átomos de carbono.

7. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos ácidos grasos saturados lineales se seleccionan del grupo que consiste en ácido butírico, ácido valérico, ácido caproico, ácido enántico, ácido caprílico, ácido pelargónico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico, ácido lignocérico, ácido cerótico, ácido montánico, ácido melísico y ácido laceroico.

8. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos ácidos grasos monoinsaturados lineales se seleccionan del grupo que consiste en ácido miristoleico, ácido palmitoleico, ácido oleico, ácido gadoleico y ácido erúcico.

9. Composición tópica según la reivindicación 1, en donde dichos niosomas comprenden (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono.

10. Composición tópica según la reivindicación 9, en donde dicho glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono se selecciona del grupo que consiste en 1,2-butanodiol, 1,2-pentanodiol, 1,2-hexanodiol, 1,2-heptanodiol, 1,2-octanodiol (caprililglicol), 1,2-decanodiol (caprilglicol), 1,2-dodecanodiol (laurilglicol) y 1,2-hexadecanodiol.

11. Composición de base acuosa que comprende cannabidiol incorporado en niosomas, caracterizada porque dichos niosomas comprenden (i) al menos un poliglicerol lineal o ramificado esterificado con ácidos grasos lineales saturados o monoinsaturados y (ii) al menos un polisacárido seleccionado del grupo que consiste en pululano, glucano, alginato, amilosa, glucógeno e inulina y, opcionalmente, (iii) al menos un glicol que tiene de 4 a 16 átomos de carbono.

12. Composición según la reivindicación 11, en donde dicha composición es una solución o dispersión acuosa.

13. Procedimiento para preparar una composición de base acuosa como se define en la reivindicación 11 o 12, que comprende el uso de técnicas de agitación manual o técnicas de agitación ultrasónica.