ES2992468T3 - Ligandos peptídicos bicíclicos específicos para linfocitos NK - Google Patents

Ligandos peptídicos bicíclicos específicos para linfocitos NK Download PDF

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Katie Gaynor
Liuhong Chen
Phil Brandish
Chris Leitheiser
Sandra Uhlenbroich
Liz Repash
Kevin Mcdonnell
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Abstract

La presente invención se refiere a polipéptidos que están unidos covalentemente a estructuras moleculares de tal manera que dos o más bucles peptídicos están subtendidos entre los puntos de unión a la estructura. En particular, la invención describe péptidos que se unen a células asesinas naturales (NK). La invención también incluye complejos de unión multiméricos que comprenden al menos dos de dichos ligandos peptídicos bicíclicos. La invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden dichos ligandos peptídicos o dichos complejos de unión multiméricos y el uso de dichos ligandos peptídicos, complejos de unión multiméricos y composiciones farmacéuticas para prevenir, suprimir o tratar una enfermedad o trastorno mediado por células asesinas naturales (NK), tales como trastornos inflamatorios, enfermedades autoinmunes y cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Ligandos peptídicos bicíclicos específicos para linfocitos NK
Campo de la invención
La presente invención se refiere a polipéptidos que están unidos covalentemente a armazones moleculares de tal manera que se delimitan dos o más bucles peptídicos entre los puntos de unión al armazón. En particular, la invención describe péptidos que se unen a linfocitos citolíticos naturales (NK). La invención también incluye complejos de unión multiméricos que comprenden al menos dos de dichos ligandos peptídicos bicíclicos. La invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden dichos ligandos peptídicos o dichos complejos de unión multiméricos y el uso de dichos ligandos peptídicos, complejos de unión multiméricos y composiciones farmacéuticas para prevenir, suprimir o tratar una enfermedad o trastorno mediado por linfocitos citolíticos naturales (NK), tales como trastornos inflamatorios, enfermedades autoinmunitarias y cáncer.
Antecedentes de la invención
Los péptidos cíclicos pueden unirse con alta afinidad y especificidad a dianas proteicas y, por lo tanto, son una clase de moléculas atractiva para el desarrollo de terapias. De hecho, varios péptidos cíclicos ya se usan con éxito en la clínica, como, por ejemplo, el péptido antibacteriano vancomicina, el fármaco inmunosupresor ciclosporina o el fármaco antineoplásico octreotida (Driggerset al.(2008), Nat. Rev. Drug. Discov. 7(7), 608-24). Las buenas propiedades de unión son resultado de una superficie de interacción relativamente grande formada entre el péptido y la diana, así como de la flexibilidad conformacional reducida de las estructuras cíclicas. Típicamente, los macrociclos se unen a superficies de varios cientos de angstroms cuadrados, como, por ejemplo, el antagonista CXCR4 del péptido cíclico CVX15 (400 A<2>; Wuet al.(2007), Science 330, 1066-71), un péptido cíclico con el motivo Arg-Gly-Asp que se une a la integrina aVb3 (355 A<2>) (Xionget al.(2002), Science 296(5565), 151-5) o el inhibidor del péptido cíclico upain-1 que se une al activador del plasminógeno de tipo urocinasa (603 A<2>; Zhaoet al.(2007), J. Struct. Biol. 160(1), 1-10).
Debido a su configuración cíclica, los macrociclos peptídicos son menos flexibles que los péptidos lineales, lo que conduce a una menor pérdida de entropía al unirse a las dianas y da como resultado una mayor afinidad de unión. La flexibilidad reducida también conduce al bloqueo de conformaciones específicas de la diana, lo que aumenta la especificidad de unión en comparación con los péptidos lineales. Este efecto se ha ilustrado por un inhibidor potente y selectivo de la metaloproteinasa de matriz 8 (MMP-8) que perdió su selectividad sobre otras MMP cuando se abrió su anillo (Cherneyet al.(1998), J. Med. Chem. 41(11), 1749-51). Las propiedades de unión favorables logradas a través de la macrociclación son incluso más pronunciadas en péptidos multicíclicos que tienen más de un anillo peptídico como, por ejemplo, en vancomicina, nisina y actinomicina.
Diferentes equipos de investigación han unido previamente polipéptidos con residuos de cisteína a una estructura molecular sintética (Kemp y McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmermanet al.(2005), ChemBioChem). Meloen y sus colaboradores habían usado tris(bromometil)benceno y moléculas relacionadas para la ciclación rápida y cuantitativa de múltiples bucles peptídicos sobre armazones sintéticas para la imitación estructural de superficies de proteínas (Timmermanet al.(2005), ChemBioChem). Métodos para la generación de compuestos farmacológicos candidatos en donde dichos compuestos se generan mediante la unión de polipéptidos que contienen cisteína a un armazón molecular como, por ejemplo, 1,1',1"-(1,3,5-triazinano-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-ona (TATA) (Heiniset al.(2014) Angewandte Chemie, Edición Internacional 53(6) 1602-1606).
Se han desarrollado enfoques combinatorios basados en la presentación en fagos para generar y cribar grandes bibliotecas de péptidos bicíclicos para dianas de interés (Heiniset al.(2009), Nat. Chem. Biol. 5(7), 502-7 y el documento WO 2009/098450). Brevemente, se presentaron en fago bibliotecas combinatorias de péptidos lineales que contenían tres residuos de cisteína y dos regiones de seis aminoácidos aleatorios (Cys-(Xaa)<6>-Cys-(Xaa)<6>-Cys) y se ciclaron uniendo covalentemente las cadenas laterales de cisteína con un armazón de molécula pequeña. El documento WO 2019/226617 divulga construcciones de unión a antígeno multiespecíficas que son específicas para un receptor de citotoxicidad natural presente en la superficie de los linfocitos Nk.
Sumario de la invención
El alcance de la invención se define por el conjunto de reivindicaciones modificado.
De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un ligando peptídico específico para linfocitos citolíticos naturales (NK) que comprende un polipéptido que comprende al menos tres grupos reactivos, separados por al menos dos secuencias de bucle, y un armazón molecular que forma enlaces covalentes con los grupos reactivos del polipéptido de tal manera que se formen al menos dos bucles de polipéptido en el armazón molecular.
De acuerdo con otro aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un ligando peptídico como se define en el presente documento junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un ligando peptídico o una composición farmacéutica como se define en el presente documento para su uso en la prevención, supresión o tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por linfocitos citolíticos naturales (NK).
Breve descripción de las figuras
Figura 1:Unión de dímeros peptídicos bicíclicos NKp46 marcados con Alexa Fluor® 488 a líneas celulares originales CHO-K1/NKp46 o CHO-K1 nulas para NKp46. (A) Ilustra que los dímeros peptídicos bicíclicos NKp46 marcados con Alexa Fluor® 488 se unen de una manera dependiente de la dosis a células que expresan NKp46. No se observa unión en la línea celular original CHO-K1 (B), que es nula para NKp46. Se evaluaron múltiples dímeros AF488-NKp46, que se muestran en la Tabla 4. BCY15665 es un dímero peptídico bicíclico sin unión, compuesto por todos los aminoácidos D.
Figura 2:Unión de dímeros peptídicos bicíclicos NKp46 marcados con Alexa Fluor® 488 a células CD56+ (linfocitos NK) o CD56- de PBMC humanas. (A) Unión de dímeros peptídicos bicíclicos NKp46 marcados con Alexa Fluor® 488 a poblaciones de PBMC que expresan CD56 (población de linfocitos NK). (B) Las células en la población de PBMC que no expresan CD56 y que son CD3+ (población de linfocitos T) no provocan unión. Datos de un único donante de PBMC representativo (n = 4). BCY15665 es un dímero peptídico bicíclico sin unión, compuesto por todos los aminoácidos D.
Figura 3:Ensayo de competencia de IgG con la variante CD16a F176 humana biotinilada en el extremo C (variante F) usando BCY15914 (A), BCY15915 (B) y BCY15916 (C).
Figura 4:Ensayo de competencia de IgG con la variante CD16a V176 humana biotinilada en el extremo N (variante V) usando BCY15914 (A), BCY15915 (B) y BCY15916 (C).
Descripción detallada de la invención
De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un ligando peptídico específico para linfocitos citolíticos naturales (NK) que comprende un polipéptido que comprende al menos tres grupos reactivos, separados por al menos dos secuencias de bucle, y un armazón molecular que forma enlaces covalentes con los grupos reactivos del polipéptido de tal manera que se formen al menos dos bucles de polipéptido en el armazón molecular.
Los linfocitos citolíticos naturales (NK) son miembros del sistema inmunitario innato que representan una pequeña fracción de las células mononucleares de sangre periférica. Como respondedores de primera línea, estas células inmunitarias detectan y eliminan células no sanas y unen la respuesta inmunitaria innata con la respuesta inmunitaria adaptativa. Debido a sus propiedades inherentes, los linfocitos NK son un candidato excelente para mejorar las herramientas terapéuticas en oncología inmunitaria y autoinmunidad.
Los linfocitos NK son responsables de la vigilancia inmunitaria realizada a través de una diversidad de receptores inhibidores y activadores. Estos receptores activadores e inhibidores en la superficie celular de los linfocitos NK son un medio complejo a través del cual la actividad de los linfocitos NK se mantiene en equilibrio en individuos sanos. Los linfocitos Nk reconocen las moléculas de MHC de clase I en la superficie de las células sanas y se les impide a través de receptores inhibidores eliminar estas células sanas. En tiempos de estrés, infección o transformación, los linfocitos NK reconocen las células no sanas a través de la pérdida de MHC de clase I en la superficie celular y la inducción de ligandos de receptores de linfocitos NK que se unen a receptores activadores. El reconocimiento de lo ajeno por parte de los linfocitos NK provoca una respuesta citotóxica, una liberación de citocinas y moléculas citotóxicas para la eliminación de las células no sanas.
La actividad de los linfocitos NK se produce mediante un mecanismo complejo que implica señales tanto activadoras como inhibidoras. Múltiples informes han proporcionado evidencia de un papel central de los receptores de linfocitos NK en la citotoxicidad natural y su utilidad en el tratamiento del cáncer. Existe una necesidad insatisfecha de una mayor comprensión y mejora del reconocimiento mediado por linfocitos NK y la destrucción de células tumorales. Los informes sugieren que las células tumorales utilizan muchos mecanismos para reducir la actividad de los linfocitos NK, y que la presencia y eficacia de los linfocitos NK se asocia con un pronóstico favorable en los pacientes (Paseroet al.(2015) Oncotarget 6(16), 14360-14373, Stringariset al.(2014) Haematologica 99(5), 836-847). Es a través de la intervención terapéutica que se puede aprovechar el potencial que pueden desempeñar los linfocitos NK en la mediación de una respuesta inmunitaria para combatir el cáncer y las enfermedades autoinmunitarias.
Péptidos bicíclicos de unión a NKp46
En una realización, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) un receptor de citotoxicidad natural presente en la superficie de los linfocitos NK. En una realización adicional, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) un receptor de citotoxicidad natural seleccionado de NKp30, NKp44 y NKp46. En una realización adicional más, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) NKp46.
Los receptores de citotoxicidad natural (NCR, por sus siglas en inglés) son una familia de receptores estimuladores expresados en la superficie de los linfocitos Nk que provocan la activación de NK y la citotoxicidad mediada por células. La familia de NCR consiste en tres miembros, NKp30, NKp44 y NKp46. Aunque se desconoce el ligando celular para NKp46, se ha demostrado un papel para NKp46 en la inmunidad antitumoral. La activación de los linfocitos NK mediada por antígenos víricos por NKp46 da como resultado el rechazo del tumor (Chinneryet al.2012). Tras la interacción con su ligando, el receptor NKp46 desencadena la citotoxicidad dirigida de los linfocitos NK, ilustrada por el uso de anticuerpos bloqueadores anti NKp46 que inhiben la capacidad de los linfocitos NK para lisar dianas (Arnonet al.2004). La cantidad de expresión de NCR en la superficie de los linfocitos NK también aumenta la citotoxicidad de los NK. Se ha identificado una fuerte correlación entre la densidad de la expresión de NCR y la capacidad de los linfocitos NK para destruir células diana, incluyendo una amplia diversidad de células tumorales (Morettaet al.2006). En la AML y en el cáncer de cuello del útero y las lesiones precursoras, la cantidad insuficiente de NCR o ligandos de NCR hizo que las células tumorales fueran resistentes a la citotoxicidad de los NK (Costelloet al.2002, Garcia-Iglesiaset al.2009). En muchos tumores sólidos, los linfocitos NK se regulan negativamente por el microambiente tumoral, entre lo que se incluyen el desprendimiento tumoral de ligandos de NCR y la edición inmunitaria, que impiden la capacidad de los linfocitos NK para reconocer, infiltrar y destruir las células tumorales (Nayyar 2019, Stojanovicet al.
2011, Sordo-Bahamondeet al.2020, Watanabeet al.2010, Izawaet al.2011, Kooet al.2013, Sunet al.2015, Hasmimet al.2015, Hanet al.2018). Stringariset al.(2014) informaron de la regulación negativa de NKp46, la regulación positiva del receptor inhibidor de linfocitos NK NKG2A y la baja capacidad citotóxica de los linfocitos NK de pacientes con AML. Además, en cánceres sólidos tales como el cáncer de próstata, se informó una disminución de la expresión de varios receptores activadores (CD16, NKp30, NKp46, NK<g>2<d>y DNAM-1) y un aumento del receptor inhibidor CD85j (Pesaroet al.2016). Por el contrario, Gautheiret al.(2019) han identificado a NKp46 como un buen candidato para el direccionamiento de un receptor activador sobre los linfocitos NK en el cáncer, sin demostrar una regulación negativa estadísticamente significativa de NKp46 en la periferia en pacientes de cáncer con SCCHN, cáncer de mama, hígado, pulmón, riñón y melanoma metastásico. Adicionalmente, en múltiples tumores sólidos, se ha informado de una expresión sostenida de NKp46, asociada a la regulación negativa de otros receptores activadores, tales como NKG2D, NKp30 y NKp44, y una baja expresión de CD16 en linfocitos infiltrantes de tumores para cánceres, tales como leucemia mieloide aguda, cáncer de mama y carcinoma de pulmón (Fauriatet al.2007, Mamessieret al.2011, Platonovaet al.
2011, Leviet al.2015, Kimet al.2010, MacFarlaneet al.2017). Por lo tanto, se ha demostrado que NKp46 es un marcador de superficie de NK específico adecuado para la aplicación terapéutica para identificar y dirigir los linfocitos NK a los tumores.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden 4, 5, 6 o 7 aminoácidos.
En una realización, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>NLQKPC<ii>MKYPC<iii>(SEQ ID NO: 1); y
C<i>NLQNPC<ii>MKFPC<iii>(SEQ ID NO: 2);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 1)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY14654);
A-(SEQ ID NO: 1)-A (denominada en el presente documento BCY14456);
A-(s EQ ID NO: 2)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15125);
A-(SEQ ID NO: 2)-A (denominada en el presente documento BCY15102); y
A-(SEQ ID NO: 2)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY18004),
en donde PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 1)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY14654); y
A-(SEQ ID NO: 2)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15125),
en donde Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 6 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 6 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>NLQAPC<ii>MQTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 3);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 4; denominada en el presente documento BCY18295 cuando forma complejo con TATA);
C<i>NLQQAC<ii>LHTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 63);
C<i>NLQAAC<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 64);
C<i>NLQAPC<ii>MATGKVC<iii>(SEQ ID NO: 65);
C<i>NLQAPC<ii>MLAGKVC<iii>(SEQ ID NO: 66);
C<i>NLQAPC<ii>MLTAKVC<iii>(SEQ ID NO: 67);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGAVC<iii>(SEQ ID NO: 68);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGKAC<iii>(SEQ ID NO: 69);
C<i>N[tBuAla]QAPC<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 70);
C<i>NLQA[Sar]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 71);
C<i>NLQA[Cis-HyP]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 72);
C<i>NLQA[HyP]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 73);
C<i>NLQA[NMeAla]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 74);
C<i>NLQAPC<ii>LLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 75);
C<i>NLQAPC<ii>[Nle]LTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 76);
C<i>NLQAPC<ii>[Cba]LTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 77);
C<i>NLQAPC<ii>METGKVC<iii>(SEQ ID NO: 78);
C<i>NLQAPC<ii>MFTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 79);
C<i>NLQAPC<ii>MYTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 80);
C<i>NLQAPC<ii>M[Cba]TGKVC<iii>(SEQ ID NO: 81);
C<i>NLQAPC<ii>M[tBuAla]TGKVC<iii>(SEQ ID NO: 82);
C<i>NLQAPC<ii>M[Cha]TGKVC<iii>(SEQ ID NO: 83);
C<i>NLQAPC<ii>MLT[dA]KVC<iii>(SEQ ID NO: 84);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGRVC<iii>(SEQ ID NO: 85);
C<i>NLQAPC<ii>MLTG[Agb]VC<iii>(SEQ ID NO: 86);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGK[tBuGly]C<iii>(SEQ ID NO: 87);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGK[Chg]C<iii>(SEQ ID NO: 88);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGK[Cbg]C<iii>(SEQ ID NO: 89);
C<i>NLQAPC<ii>MLTG[HArg]VC<iii>(SEQ ID NO: 90);
C<i>NLQA[Aze]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 91);
C<i>NLQA[Pip]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 92);
C<i>NLQAPC<ii>MVTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 93);
C<i>NLQAPC<ii>M[Nle]TGKVC<iii>(SEQ ID NO: 94);
C<i>NLQAPC<ii>M[Nva]TGKVC<iii>(SEQ ID NO: 95);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGK[Allolle]C<iii>(SEQ ID NO: 96);
C<i>NLQAPC<ii>MLTGK[EPA]C<iii>(SEQ ID NO: 97);
C<i>NLQQPC<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 98);
C<i>NLQA[Nva]C<ii>MLTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 99);
C<i>NLQAPC<ii>MHTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 100);
C<i>NLQAPC<ii>LHTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 101); y
C<i>NLQQAC<ii>MQTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 102);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, y en donde Cba representa ciclobutolalanina, tBuAla representa p-t-butil-L-alanina, Sar representa sarcosina, Cis-HyP representa L-4-cis-hidroxiprolina, HyP representa hidroxiprolina, NMeAla representa N-metilalanina, Nle representa norleucina, dA representa D-alanina, Agb representa norarginina, tBuGly representa terc-butilglicina, Cha representa 3-ciclohexil-L-alanina, Chg representa ciclohexilglicina, Cbg representa ciclobutilglicina, HArg representa homoarginia, Aze representa ácido azetidin-2-carboxílico, Pip representa ácido pipecólico, Nva representa norvalina, Allolle representa L-alo-isoleucina y EPA representa dietil-L-alanina, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 6 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>NLQAPC<ii>MQTGKVC<iii>(SEQ ID NO: 3); y
C<í>NLQAPC<n>MLTGKVC<ín>(SEQ ID NO: 4);
en donde C<i>, C<ii>y C<ii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 6 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 3)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15687);
A-(SEQ ID NO: 3)-A (denominada en el presente documento BCY15098);
A-(SEQ ID NO: 4)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15115);
A-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY15099);
Ac-(SEQ ID NO: 4) (denominada en el presente documento BCY18293);
Ac-A-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY18294);
(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19694);
K-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19695);
dK-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19696);
Dap-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19697);
Dab-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19698);
GABA-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19699);
A-(SEQ ID NO: 63)-A (denominada en e presente documento BCY14454)
A-(SEQ ID NO: 64)-A (denominada en e presente documento BCY18299)
A-(SEQ ID NO: 65)-A (denominada en e presente documento BCY18301)
A-(s EQ ID NO: 66)-A (denominada en e presente documento BCY18302)
A-(SEQ ID NO: 67)-A (denominada en e presente documento BCY18303)
A-(SEQ ID NO: 68)-A (denominada en e presente documento BCY18304)
A-(SEQ ID NO: 69)-A (denominada en e presente documento BCY18305)
A-(SEQ ID NO: 70)-A (denominada en e presente documento BCY18307)
A-(SEQ ID NO: 71)-A (denominada en e presente documento BCY18309)
A-(SEQ ID NO: 72)-A (denominada en e presente documento BCY18310)
A-(SEQ ID NO: 73)-A (denominada en e presente documento BCY18311)
A-(<s>EQ ID NO: 74)-A (denominada en e presente documento BCY18312)
A-(SEQ ID NO: 75)-A (denominada en e presente documento BCY18313)
A-(SEQ ID NO: 76)-A (denominada en e presente documento BCY18314)
A-(SEQ ID NO: 77)-A (denominada en e presente documento BCY18315)
A-(SEQ ID NO: 78)-A (denominada en e presente documento BCY18316)
A-(SEQ ID NO: 79)-A (denominada en e presente documento BCY18317)
A-(SEQ ID NO: 80)-A (denominada en e presente documento BCY18318)
A-(SEQ ID NO: 81)-A (denominada en e presente documento BCY18319)
A-(SEQ ID NO: 82)-A (denominada en e presente documento BCY18320)
A-(<s>EQ ID NO: 83)-A (denominada en e presente documento BCY18321)
A-(SEQ ID NO: 84)-A (denominada en e presente documento BCY18322)
A-(SEQ ID NO: 85)-A (denominada en e presente documento BCY18323)
A-(SEQ ID NO: 86)-A (denominada en e presente documento BCY18324)
A-(SEQ ID NO: 87)-A (denominada en e presente documento BCY18325)
A-(SEQ ID NO: 88)-A (denominada en e presente documento BCY18326)
A-(SEQ ID NO: 89)-A (denominada en e presente documento BCY18327)
A-(SEQ ID NO: 90)-A (denominada en e presente documento BCY18328)
A-(<s>EQ ID NO: 91)-A (denominada en e presente documento BCY19700)
A-(SEQ ID NO: 92)-A (denominada en e presente documento BCY19701)
A-(SEQ ID NO: 93)-A (denominada en e presente documento BCY19702)
A-(SEQ ID NO: 94)-A (denominada en e presente documento BCY19703)
A-(SEQ ID NO: 95)-A (denominada en e presente documento BCY19704)
A-(SEQ ID NO: 96)-A (denominada en e presente documento BCY19706)
A-(SEQ ID NO: 97)-A (denominada en e presente documento BCY19707)
A-(SEQ ID NO: 98)-A (denominada en e presente documento BCY19708)
A-(<s>EQ ID NO: 99)-A (denominada en e presente documento BCY19710)
A-(SEQ ID NO: 100)-A (denominada en el presente documento BCY19711);
A-(SEQ ID NO: 101)-A (denominada en el presente documento BCY19712); y
A-(SEQ ID NO: 102)-A (denominada en el presente documento BCY19713),
en donde PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina, FI representa fluoresceína, dK representa D-lisina, Dap representa ácido L-2,3-diaminopropiónico, Dab representa ácido L-2,4-diaminobutírico, y GABA representa ácido Y-aminobutírico.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 6 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 3)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15687); y
A-(SEQ ID NO: 4)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15115),
en donde PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 7 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 7 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>LLHDHC<ii>PNTHPKLC<iii>(SEQ ID NO: 5);
C<i>LLHEHC<ii>PNTHPKMC<iii>(SEQ ID NO: 6);
C<i>LLHDHC<ii>PNSHPEIC<iii>(SEQ ID NO: 7);
C<i>LLHDHC<ii>PNTHPIIC<iii>(SEQ ID NO: 8); y
C<i>LLHDHC<ii>PNTHPKMC<iii>(SEQ ID NO: 103);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 7 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>LLHDHC<ii>PNTHPKLC<iii>(SEQ ID NO: 5);
C<i>LLHEHC<ii>PNTHPKMC<iii>(SEQ ID NO: 6);
C<i>LLHDHC<ii>PNSHPEIC<iii>(SEQ ID NO: 7); y
C<i>LLHDHC<ii>PNTHPIIC<iii>(SEQ ID NO: 8);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 7 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 5)-A (denominada en el presente documento BCY15103);
A-(SEQ ID NO: 5)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY18005);
A-(SEQ ID NO: 5)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15118);
A-(SEQ ID NO: 6)-A (denominada en el presente documento BCY15104);
A-(SEQ ID NO: 6)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15119);
A-(SEQ ID NO: 7)-A (denominada en el presente documento BCY15105);
A-(s EQ ID NO: 7)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15120);
A-(SEQ ID NO: 8)-A (denominada en el presente documento BCY15106);
A-(SEQ ID NO: 8)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15121); y
A-(SEQ ID NO: 103)-A (denominada en el presente documento BCY14457),
en donde PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 7 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 5)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15118);
A-(SEQ ID NO: 6)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15119);
A-(SEQ ID NO: 7)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15120); y
A-(SEQ ID NO: 8)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15121),
en donde Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína o penicilamina separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>YLPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 9);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 10);
C<i>DLTTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 11; denominada en el presente documento BCY18262 cuando forma complejo con TATA);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 12; denominada en el presente documento BCY15633 cuando forma complejo con TATA);
C<i>YLPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 13);
C<i>[2,6DiMeTyr]LPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 14);
C<i>Y[tBuAla]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 15);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 16);
C<i>YL[HyP]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 17);
C<i>YL[Aze]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 18);
C<i>YL[Aib]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 19);
C<i>YLPD[1NaI]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 20);
C<i>YLPD[2Nal]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 21);
C<i>YLPD[3Pal]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 22);
C<i>YLPD[2,6DiMeTyr]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 23);
C<i>YLPDW[tBuAla]C<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 24);
C<i>YLPDW[Cba]C<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 25);
C<i>YLPDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 26);
C<i>YLPDYLC<ii>GDE[2,6DiMeTyr]C<iii>(SEQ ID NO: 27);
C<i>ALPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 28);
C<i>YAPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 29);
C<i>YLADYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 30);
C<i>YLPAYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 31);
C<i>YLPDALC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 32);
C<i>YLPDYAC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 33);
C<i>YLPDYLC<ii>ADEYC<iii>(SEQ ID NO: 34);
C<i>YLPDYLC<ii>GAEYC<iii>(SEQ ID NO: 35);
C<i>YLPDYLC<ii>GDAYC<iii>(SEQ ID NO: 36);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEAC<iii>(SEQ ID NO: 37);
C<i>Y[C5A]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 38);
C<i>Y[Cha]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 39);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 40);
C<i>YLPD[4FPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 41);
C<i>YLPD[4MeOPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 42);
C<i>YLPD[NO2Phe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 43);
C<i>YLPD[4MePhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 44);
C<i>YLPD[pCoPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 45);
C<i>YLPD[pCaPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 46);
C<i>YLPD[4tBuPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 47);
C<i>YLPD[CF3Phe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 48);
C<i>YLPD[4CNPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 49);
C<i>YLPD[4ClPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 50);
C<i>YLPD[HPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 51);
C<i>[2,6DiMeTyr]LPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 52);
C<i>Y[Cba]PDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 53);
C<i>YL[Aze]DWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 54);
C<i>YLPDWLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 55);
C<i>SLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 56);
C<i>DLTTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 57);
C<i>DLTTHNC<ii>LWGVC<iii>(SEQ ID NO: 58);
C<i>NLQLHNC<ii>lWGVC<iii>(SEQ ID NO: 59);
C<i>DLTTHNC<ii>lWGVC<iii>(SEQ ID NO: 104);
C<i>NLQLHNC<ii>lWGVC<iii>(SEQ ID NO: 105);
C<i>NLQLHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 106);
C<i>[3tBuTyr]LPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 107);
C<i>YLPD[3tBuTyr]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 108);
C<i>YLPDYLC<ii>GDE[3tBuTyr]C<iii>(SEQ ID NO: 109);
Cí[K(PYA)]LPDYLCnGDEYCní (SEQ ID NO: 110);
C<í>YLP[K(PYA)]YLC<n>GDEYC<ní>(SEQ ID NO: 111);
CíYLPDYLCn[K(PYA)]DEYCín (SEQ ID NO: 112);
C<í>YLPDYLC<n>GD[K(PYA)]YC<ín>(SEQ ID NO: 113);
CíYLPDYLCnGDE[K(PYA)]Cín (SEQ ID NO: 114);
C<i>YLPDYLC<ii>[dK(PYA)]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 115);
CALTTHNCnQWGICní (SEQ ID NO: 116);
C<i>DLATHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 117);
C<i>DLTAHNC<i>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 118);
C<i>DLTTHNC<i>AWGIC<iii>(SEQ ID NO: 119);
CíDLTTHNCnQWGACín (SEQ ID NO: 120);
C<i>NLTTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 121);
C<i>DLQTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 122);
C<i>DLTLHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 123);
C<i>DLTT[His3Me]NC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 124);
C<i>DLTT[2Pal]NC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 125);
C<i>DLTT[His1Me]NC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 126);
C<i>DLTT[4ThiAz]NC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 127);
C<i>DLTTHNC<ii>VWGIC<iii>(SEQ ID NO: 128);
C<i>DLTTHNC<ii>[Cba]WGIC<iii>(SEQ ID NO: 129);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[1Nal]GIC<iii>(SEQ ID NO: 130);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[Trp(Me)]GIC<iii>(SEQ ID NO: 131);
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[tBuGly]C<iii>(SEQ ID NO: 132);
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[tBuAla]C<iii>(SEQ ID NO: 133);
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[Chg]C<iii>(SEQ ID NO: 134);
C<i>DLTTHNC<ii>QW[dA]IC<iii>(SEQ ID NO: 135);
C<i>S[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 136) C<i>[Hser][Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 137);
C<i>N[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 138);
C<i>[4Pal][Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 139);
C<i>Y[Cba][Cis-HyP]DYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 140);
C<i>Y[Cba][NmeAla]DYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 141);
C<i>Y[Cba]PNYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 142);
C<i>Y[Cba]PQYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 143);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dV]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 144);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dNva]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 145);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dF]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 146);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dCha]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 147);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dK(PYA)]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 148);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dNle]EYC<iii>(SEQ ID NO: 149);
C<i>Y[Cba]PD[DOPA]LC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 150);
C<i>Y[Cba]PD[2FTyr]LC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 151);
C<i>Y[Cba]PDY[Nle]C<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 152);
[Pen]<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 153);
C<i>Y[Cba]PDYL[Pen]<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 154);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEY[Pen]<iii>(SEQ ID NO: 155);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEY[dC<iii>] (SEQ ID NO: 156);
[dC<i>]Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 157);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[AzaTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 158);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[2MeTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 159);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[6MeTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 160);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[7MeTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 161);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[6FTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 162);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[5FTrp]GIC<iii>(SEQ ID NO: 163);
C<i>DLTTHNC<ii>Q[Dht]GIC<iii>(SEQ ID NO: 164);
C<i>DLTT[2FuAla]NC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 165);
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[EPA]C<iii>(SEQ ID NO: 166);
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[Nle]C<iii>(SEQ ID NO: 167); y
C<i>DLTTHNC<ii>QWG[A<N>o<N>e]C<iii>(SEQ ID NO: 168); en donde C<i>, Pen<i>, C<ii>, Pen<n>, C<iii>y Pen<ni>representan un primer, segundo y tercer grupos reactivos, respectivamente, en donde 2,6DiMeTyr representa 2,6-dimetil-tirosina, tBuAla representa t-butil-alanina, Cba representa p-ciclobutilalanina, HyP representa hidroxiprolina, Aze representa azetidina, Aib representa ácido aminoisobutírico, 1 Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, 3Pal representa 3-piridilalanina, C5A representa beta-ciclopentil-L-alanina, Cha representa 3-ciclohexil-L-alanina, 4Fphe representa 4-fluoro-L-fenilalanina, 4MeOPhe representa 4-metoxi-fenilalanina, NO2Phe representa 4-nitro-fenilalanina, 4MePhe representa 4-metil-fenilalanina, pCoPhe representa para-carboxi-fenilalanina, pCaPhe representa p-carboxamido-fenilalanina, 4tBuPhe representa 4-terc-butilfenilalanina, CF3Phe representa 4-trifluorometil-fenilalanina, 4CNPhe representa 4-ciano-fenilalanina, 4CIPhe representa 4-cloro-fenilalanina, HPhe representa homofenilalanina, 3tBuTyr representa 3-terc-butiltirosina, His3Me representa 3-metilhistidina, 2Pal representa 2-piridilalanina, HisIMe representa 1-metilhistidina, 4ThiAz representa beta-4-tiazol-L-ilalanina, Trp(Me) representa 1-metiltriptófano, tBuGly representa L-t-butilglicina, Chg representa ciclohexilglicina, Hser representa homoserina, NmeAla representa N-metilalanina, 4Pal representa 4-piridilalanina, Cis-HyP representa 4-cis-hidroxiprolina, dA representa D-Alanina, dV representa D-valina, dNva representa D-norvalina, dNle representa D-norleucina, dF representa D-fenilalanina, dCha representa 3-ciclohexil-D-alanina, DOPA representa 3,4-dihidroxifenilalanina, 2FTyr representa 2-fluorotirosina, Nle representa norleucina, dC representa D-cisteína, AzaTrp representa azatriptófano, 2MeTrp representa 2-metiltriptófano, 6MeTrp representa 6-metiltriptófano, 6FTrp representa 6-fluorotriptófano, 5FTrp representa 5-fluorotriptófano, Dht representa 2,3-dihidrotriptófano, 2FuAla representa 2-furilalanina, Allolle representa L-alo-isoleucina, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>YLPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 9);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 10);
C<i>DLTTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 11);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 12; denominada en el presente documento BCY15633 cuando forma complejo con TATA);
C<i>YLPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 13);
C<i>[2,6DiMeTyr]LPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 14);
C<i>Y[tBuAla]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 15);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 16);
C<i>YL[HyP]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 17);
C<i>YL[Aze]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 18);
C<i>YL[Aib]DYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 19);
C<i>YLPD[1Nal]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 20);
C<i>YLPD[2Nal]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 21);
C<i>YLPD[3Pal]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 22);
C<i>YLPD[2,6DiMeTyr]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 23);
C<i>YLPDW[tBuAla]C<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 24);
C<i>YLPDW[Cba]C<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 25);
C<i>YLPDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 26);
C<i>YLPDYLC<ii>GDE[2,6DiMeTyr]C<iii>(SEQ ID NO: 27);
C<i>ALPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 28);
C<i>YAPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 29);
C<i>YLADYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 30);
C<i>YLPAYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 31);
C<i>YLPDALC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 32);
C<i>YLPDYAC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 33);
C<i>YLPDYLC<ii>ADEYC<iii>(SEQ ID NO: 34);
C<i>YLPDYLC<ii>GAEYC<iii>(SEQ ID NO: 35);
C<i>YLPDYLC<ii>GDAYC<iii>(SEQ ID NO: 36);
C<i>YLPDYLC<ii>GDEAC<iii>(SEQ ID NO: 37);
C<i>Y[C5A]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 38);
C<i>Y[Cha]PDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 39);
C<i>Y[Cba]PDYLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 40);
C<i>YLPD[4Fphe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 41);
C<i>YLPD[4MeOPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 42);
C<i>YLPD[NO2Phe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 43);
C<i>YLPD[4MePhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 44);
C<i>YLPD[pCoPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 45);
C<i>YLPD[pCaPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 46);
C<i>YLPD[4tBuPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 47);
C<i>YLPD[CF3Phe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 48);
C<i>YLPD[4CNPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 49);
C<i>YLPD[4ClPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 50);
C<i>YLPD[HPhe]LC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 51);
C<i>[2,6DiMeTyr]LPDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 52);
C<i>Y[Cba]PDWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 53);
CYL[Aze]DWLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 54);
CYLPDWLC<ii>[dA]DEYC<iii>(SEQ ID NO: 55);
C<i>SLPDYLC<ii>GDEYC<iii>(SEQ ID NO: 56);
C<i>DLTTHNC<ii>QWGIC<iii>(SEQ ID NO: 57);
CíDLTTHNCnLWGVCní (SEQ ID NO: 58); y
C<i>NLQLHNC<ii>lWGVC<iii>(SEQ ID NO: 59);
en donde C<i>, C<u>y Cí<m>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, en donde 2,6DiMeTyr representa 2,6-dimetil-tirosina, tBuAla representa t-butil-alanina, Cba representa p-ciclobutilalanina, HyP representa hidroxiprolina, Aze representa azetidina, Aib representa ácido aminoisobutírico, 1 Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, 3Pal representa 3-piridilalanina, C5A representa beta-ciclopentil-L-alanina, Cha representa 3-ciclohexil-L-alanina, 4Fphe representa 4-fluoro-L-fenilalanina, 4MeOPhe representa 4-metoxi-fenilalanina, NO2Phe representa 4-nitro-fenilalanina, 4MePhe representa 4-metil-fenilalanina, pCoPhe representa para-carboxi-fenilalanina, pCaPhe representa p-carboxamido-fenilalanina, 4tBuPhe representa 4-terc-butilfenilalanina, CF3Phe representa 4-trifluorometil-fenilalanina, 4CNPhe representa 4-ciano-fenilalanina, 4CIPhe representa 4-cloro-fenilalanina, HPhe representa homofenilalanina, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 9)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15013);
A-(SEQ ID NO: 10)-A (denominada en el presente documento BCY18470);
A-(SEQ ID NO: 10)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15452);
A-(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY15107); Ac-(SEQ ID NO: 11) (denominada en el presente documento BCY18260);
Ac-A-(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY18261);
A-(SEQ ID NO: 11)-[Aib] (denominada en el presente documento BCY19717);
(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY19718);
A-(SEQ ID NO: 11)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY19719);
A-(SEQ ID NO: 11)-A-[K(pYA)] (denominada en el presente documento BCY15686);
A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15100);
Ac-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY15634);
Ac-A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15635);
dA-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY16134;
A-(SEQ ID NO: 12)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15116);
A-(SEQ ID NO: 13)-A (denominada en el presente documento BCY14455);
(SEQ ID NO: 13)-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15023);
Ac-(SEQ ID NO: 13)-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15024);
A-(SEQ ID NO: 13)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY14652);
A-(SEQ ID NO: 14)-A (denominada en el presente documento BCY15636);
A-(SEQ ID NO: 15)-A (denominada en el presente documento BCY15638);
A-(SEQ ID NO: 16)-A (denominada en el presente documento BCY15639);
A-(SEQ ID NO: 17)-A (denominada en el presente documento BCY15640);
A-(<s>EQ ID NO: 18)-A (denominada en el presente documento BCY15641);
A-(SEQ ID NO: 19)-A (denominada en el presente documento BCY15642);
A-(SEQ ID NO: 20)-A (denominada en el presente documento BCY15643);
A-(SEQ ID NO: 21)-A (denominada en el presente documento BCY15644);
A-(SEQ ID NO: 22)-A (denominada en el presente documento BCY15645);
A-(SEQ ID NO: 23)-A (denominada en el presente documento BCY15646);
A-(SEQ ID NO: 24)-A (denominada en el presente documento BCY15648);
A-(SEQ ID NO: 25)-A (denominada en el presente documento BCY15649);
A-(SEQ ID NO: 26)-A (denominada en el presente documento BCY15650);
A-(SEQ ID NO: 27)-A (denominada en el presente documento BCY15651);
A-(SEQ ID NO: 28)-A (denominada en el presente documento BCY15653);
A-(SEQ ID NO: 29)-A (denominada en el presente documento BCY15654);
A-(SEQ ID NO: 30)-A (denominada en el presente documento BCY15655);
A-(SEQ ID NO: 31)-A (denominada en el presente documento BCY15656);
A-(SEQ ID NO: 32)-A (denominada en el presente documento BCY15657);
A-(SEQ ID NO: 33)-A (denominada en el presente documento BCY15658);
A-(SEQ ID NO: 34)-A (denominada en el presente documento BCY15659);
A-(SEQ ID NO 35) -A (denominada en el presente documento BCY15660);
A-(SEQ ID NO 36) -A (denominada en el presente documento BCY15661);
A-(SEQ ID NO 37) -A (denominada en el presente documento BCY15662);
A-(SEQ ID NO 38) -A (denominada en el presente documento BCY16130);
A-(SEQ ID NO 39) -A (denominada en el presente documento BCY16131);
A-(SEQ ID NO 40) -A (denominada en el presente documento BCY16132);
Ac-(SEQ ID NO 40) (denominada en el presente documento BCY16133);
Ac-(SEQ ID NO 40)-[k (PYA)] (denominada en el presente documento BCY17224); A-(SEQ ID NO: 41) -A (denominada en el presente documento BCY16135);
A-(SEQ ID NO: 42) -A (denominada en el presente documento BCY16136);
A-(SEQ ID NO: 43) -A (denominada en el presente documento BCY16137);
A-(SEQ ID NO: 44) -A (denominada en el presente documento BCY16138);
A-(SEQ ID NO: 45) -A (denominada en el presente documento BCY16139);
A-(SEQ ID NO: 46) -A (denominada en el presente documento BCY16140);
A-(SEQ ID NO: 47) -A (denominada en el presente documento BCY16141);
A-(SEQ ID NO: 48) -A (denominada en el presente documento BCY16142);
A-(SEQ ID NO: 49) -A (denominada en el presente documento BCY16143);
A-(SEQ ID NO: 50) -A (denominada en el presente documento BCY16144);
A-(SEQ ID NO: 51) -A (denominada en el presente documento BCY16145);
A-(SEQ ID NO: 52) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15025); A-(SEQ ID NO: 53) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15028); A-(SEQ ID NO: 54) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15030); A-(SEQ ID NO: 55) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15035); A-(SEQ ID NO: 56) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15117); A-(SEQ ID NO: 57) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15122); A-(SEQ ID NO: 58) -A (denominada en el presente documento BCY15108);
A-(SEQ ID NO: 58) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15123); A-(SEQ ID NO: 59) -A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15124), A-(SEQ ID NO: 104) -A (denominada e pnr e sente documento BCY14458) A-(SEQ ID NO: 105) -A (denominada e pnr e sente documento BCY15109) A-(SEQ ID NO: 106) -A (denominada e pnr e sente documento BCY15568) A-(SEQ ID NO: 107) -A (denominada e pnr e sente documento BCY15637) A-(SEQ ID NO: 108) -A (denominada e pnr e sente documento BCY15647) A-(SEQ ID NO: 109) -A (denominada e pnr e sente documento BCY15652) A-(SEQ ID NO: 110) -A (denominada e pnr e sente documento BCY16834) A-(SEQ ID NO: 111) -A (denominada e pnr e sente documento BCY16837) A-(SEQ ID NO: 112) -A (denominada e pnr e sente documento BCY16840) A-(SEQ ID NO: 113) -A (denominada e pnr e sente documento BCY16842) A-(SEQ ID NO: 114) -A (denominada e pnr e sente documento BCY16843) A-(SEQ ID NO: 115) -A (denominada e pnr e sente documento BCY17662) A-(SEQ ID NO: 116) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18263) A-(SEQ ID NO: 117) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18265) A-(SEQ ID NO: 118) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18266) A-(SEQ ID NO: 119) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18269) A-(SEQ ID NO: 120) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18272) A-(SEQ ID NO: 121) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18273) A-(SEQ ID NO: 122) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18277) A-(SEQ ID NO: 123) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18278) A-(SEQ ID NO: 124) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18279) A-(SEQ ID NO: 125) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18280) A-(SEQ ID NO: 126) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18281) A-(SEQ ID NO: 127) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18282) A-(SEQ ID NO: 128) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18285) A-(SEQ ID NO: 129) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18286) A-(SEQ ID NO: 130) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18287) A-(SEQ ID NO: 131) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18288) A-(SEQ ID NO: 132) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18289) A-(SEQ ID NO: 133) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18290) A-(SEQ ID NO: 134) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18291) A-(SEQ ID NO: 135) -A (denominada e pnr e sente documento BCY18292) Ac-(SEQ ID NO 136) (denominada en el presente documento BCY18433)
Ac-(SEQ ID NO 137) (denominada en el presente documento BCY18434)
Ac-(SEQ ID NO 138) (denominada en el presente documento BCY18435)
Ac-(SEQ ID NO 139) (denominada en el presente documento BCY18437)
Ac-(SEQ ID NO 140) (denominada en el presente documento BCY18439)
Ac-(SEQ ID NO 141) (denominada en el presente documento BCY18440) Ac-(SEQ ID NO : 142) (denominada en el presente documento BCY18441);
Ac-(SEQ ID NO : 143) (denominada en el presente documento BCY18442);
Ac-(SEQ ID NO : 144) (denominada en el presente documento BCY18443);
Ac-(SEQ ID NO : 145) (denominada en el presente documento BCY18444);
Ac-(SEQ ID NO : 146) (denominada en el presente documento BCY19682);
Ac-(SEQ ID NO : 147) (denominada en el presente documento BCY19683);
Ac-(SEQ ID NO : 148) (denominada en el presente documento BCY19684);
Ac-(SEQ ID NO : 149) (denominada en el presente documento BCY19685);
Ac-(SEQ ID NO : 150) (denominada en el presente documento BCY19686);
Ac-(SEQ ID NO : 151) (denominada en el presente documento BCY19687);
Ac-(SEQ ID NO : 152) (denominada en el presente documento BCY19688);
Ac-(SEQ ID NO : 153) (denominada en el presente documento BCY19689);
Ac-(SEQ ID NO : 154) (denominada en el presente documento BCY19690);
Ac-(SEQ ID NO : 155) (denominada en el presente documento BCY19691);
Ac-(SEQ ID NO : 156) (denominada en el presente documento BCY19692);
Ac-(SEQ ID NO : 157) (denominada en el presente documento BCY19693);
A-(SEQ ID NO: 158) -A (denominada en el presente documento BCY19720);
A-(SEQ ID NO: 159) -A (denominada en el presente documento BCY19721);
A-(SEQ ID NO: 160) -A (denominada en el presente documento BCY19722);
A-(SEQ ID NO: 161) -A (denominada en el presente documento BCY19723);
A-(SEQ ID NO: 162) -A (denominada en el presente documento BCY19724);
A-(SEQ ID NO: 163) -A (denominada en el presente documento BCY19725);
A-(SEQ ID NO: 164) -A (denominada en el presente documento BCY19730);
A-(SEQ ID NO: 165) -A (denominada en el presente documento BCY19732);
A-(SEQ ID NO: 166) -A (denominada en el presente documento BCY19733);
A-(SEQ ID NO: 167) -A (denominada en el presente documento BCY19734); y
A-(SEQ ID NO: 168) -A (denominada en el presente documento BCY19735);
en donde Aib representa ácido aminoisobutírico, PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 9)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15013);
A-(SEQ ID NO: 10)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15452);
A-(SEQ ID NO: 11)-A-[K(pYA)] (denominada en el presente documento BCY15686);
A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15100);
(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY15633);
Ac-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY15634);
Ac-A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15635);
dA-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY16134;
A-(SEQ ID NO: 12)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15116);
A-(SEQ ID NO: 13)-A (denominada en el presente documento BCY14455);
(SEQ ID NO: 13)-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15023);
Ac-(SEQ ID NO: 13)-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15024);
A-(SEQ ID NO: 13)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY14652);
A-(SEQ ID NO: 14)-A (denominada en el presente documento BCY15636);
A-(SEQ ID NO: 15)-A (denominada en el presente documento BCY15638);
A-(SEQ ID NO: 16)-A (denominada en el presente documento BCY15639);
A-(SEQ ID NO: 17)-A (denominada en el presente documento BCY15640);
A-(SEQ ID NO: 18)-A (denominada en el presente documento BCY15641);
A-(SEQ ID NO: 19)-A (denominada en el presente documento BCY15642);
A-(SEQ ID NO: 20)-A (denominada en el presente documento BCY15643);
A-(SEQ ID NO: 21)-A (denominada en el presente documento BCY15644);
A-(SEQ ID NO: 22)-A (denominada en el presente documento BCY15645);
A-(SEQ ID NO: 23)-A (denominada en el presente documento BCY15646);
A-(SEQ ID NO: 24)-A (denominada en el presente documento BCY15648);
A-(SEQ ID NO: 25)-A (denominada en el presente documento BCY15649);
A-(SEQ ID NO: 26)-A (denominada en el presente documento BCY15650);
A-(SEQ ID NO: 27)-A (denominada en el presente documento BCY15651);
A-(SEQ ID NO: 28)-A (denominada en el presente documento BCY15653);
A-(SEQ ID NO: 29)-A (denominada en el presente documento BCY15654);
A-(SEQ ID NO: 30)-A (denominada en el presente documento BCY15655);
A-(SEQ ID NO: 31)-A (denominada en el presente documento BCY15656);
A-(SEQ ID NO: 32)-A (denominada en el presente documento BCY15657);
A-(SEQ ID NO: 33)-A (denominada en el presente documento BCY15658);
A-(SEQ ID NO: 34)-A (denominada en el presente documento BCY15659);
A-(SEQ ID NO: 35)-A (denominada en el presente documento BCY15660);
A-(SEQ ID NO: 36)-A (denominada en el presente documento BCY15661);
A-(SEQ ID NO: 37)-A (denominada en el presente documento BCY15662);
A-(SEQ ID NO: 38)-A (denominada en el presente documento BCY16130);
A-(SEQ ID NO: 39)-A (denominada en el presente documento BCY16131);
A-(s EQ ID NO: 40)-A (denominada en el presente documento BCY16132);
Ac-(SEQ ID NO: 40) (denominada en el presente documento BCY16133);
Ac-(SEQ ID NO: 40)-[k (PYA)] (denominada en el presente documento BCY17224);
A-(SEQ ID NO: 41)-A (denominada en el presente documento BCY16135);
A-(SEQ ID NO: 42)-A (denominada en el presente documento BCY16136);
A-(SEQ ID NO: 43)-A (denominada en el presente documento BCY16137);
A-(SEQ ID NO: 44)-A (denominada en el presente documento BCY16138);
A-(SEQ ID NO: 45)-A (denominada en el presente documento BCY16139);
A-(s EQ ID NO: 46)-A (denominada en el presente documento BCY16140);
A-(SEQ ID NO: 47)-A (denominada en el presente documento BCY16141);
A-(SEQ ID NO: 48)-A (denominada en el presente documento BCY16142);
A-(SEQ ID NO: 49)-A (denominada en el presente documento BCY16143);
A-(SEQ ID NO: 50)-A (denominada en el presente documento BCY16144);
A-(SEQ ID NO: 51)-A (denominada en el presente documento BCY16145);
A-(SEQ ID NO: 52)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15025);
A-(SEQ ID NO: 53)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15028);
A-(s EQ ID NO: 54)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15030);
A-(<s>EQ ID NO: 55)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15035);
A-(SEQ ID NO: 56)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15117);
A-(SEQ ID NO: 57)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15122);
A-(SEQ ID NO: 58)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15123); y
A-(SEQ ID NO: 59)-A-Sar<6>-KFI (denominada en el presente documento BCY15124),
en donde PYA representa ácido pentinoico, Sar representa sarcosina y FI representa fluoresceína.
Péptidos bicíclicos de unión a CD16a
En una realización, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) un receptor Fc presente en la superficie de los linfocitos NK. En una realización adicional, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) un receptor Fc gamma de baja afinidad (F<cy>R) seleccionado de F<cy>RIIA, F<cy>RIIB, F<cy>RIIC, F<cy>RIIIA y F<cy>RIIIB. En una realización adicional más, el péptido bicíclico es específico para (es decir, se une a) FcyRIIIA (también conocido como CD16a).
Los receptores Fc se expresan en la superficie de muchos leucocitos. En los seres humanos, cinco receptores Fc gamma clásicos de baja afinidad (F<cy>R) (F<cy>RIIA, FcyRIIB, FcyRIIC, F<cy>RIIIA y F<cy>RIIIB) se unen a la porción Fc de la inmunoglobulina G (IgG) y son mediadores de la inflamación a través de la activación, así como de la inhibición, de las células inmunitarias (Mutaet al.1994, Ravetchet al.2001). El FcyRIIIA (CD16a) se activa mediante la interacción con la porción Fc de la molécula de IgG y es fundamental para el proceso de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). La ADCC es un mecanismo en el que los anticuerpos específicos de antígeno dirigen a los linfocitos NK para que destruyan las células cancerosas que expresan antígenos (Arnouldet al.2006). Desempeñando un papel vital en los efectos antitumorales de los mAb IgG1, varios estudios han demostrado que parte del efecto antitumoral de trastuzumab, un anticuerpo IgG1 humano anti receptor del factor de crecimiento epidérmico humano 2 (HER-2), así como el anticuerpo EGFR cetuximab en pacientes con cáncer colorrectal metastásico, se produce a través de la ADCC (Zhanget al.2007, 2020, Wuet al.2003). Se pueden describir resultados similares para rituximab, un mAb IgG1 quimérico para el antígeno de diferenciación de linfocitos B CD20 (Mancheset al.2003, Clyneset al.
2000). La utilidad de la expresión de CD16 para dirigir a las células inmunitarias para promover la destrucción de células tumorales se ha ilustrado en estudios de sobreexpresión. A través de la transducción retrovírica de Ig-Fc, la expresión de IgFc en la superficie de las células de melanoma B16 conduce a la destrucción del tumorin vivo(Riddleet al.2005). El papel de la interacción de FcyR para dirigir los linfocitos NK a los tumores también se ha ilustrado en estudios mediante los cuales los linfocitos T del receptor de antígeno quimérico expresan CD16 scFv y se dirigen a células tumorales recubiertas de anticuerpos. La introducción de CD16-CarT en modelosin vivoen ratones portadores de tumores EGFR o CD20 tratados con cetuximab o rituximab mejoró el direccionamiento de las células inmunitarias y la destrucción de ADCC, erradicando así los tumores evasivos (Ratajet al.2019, Caratelliet al.2017).
Las contribuciones de los genes FcyR a las enfermedades autoinmunitarias han atraído una atención sustancial, y se ha informado que los polimorfismos funcionales de FcyR desempeñan funcionales importantes en la patogénesis de las enfermedades autoinmunitarias (Salmonet al.2001, Morganet al.2003, Wuet al.1997). Los modelos de ratón con FcyR inactivado indican que los FcyR tanto activadores como inhibidores influyen en el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias (Nabbeet al. 2003,Kleinauet al. 2000,Bollandet al.2000). Las variaciones en la expresión de FcyR afectan significativamente a los umbrales de señal mediados por complejos inmunitarios de IgG. Cabe destacar que las citocinas proinflamatorias y antiinflamatorias podrían modular los niveles de expresión de FcyR activadores e inhibidores que afectan al umbral de respuesta de las células inmunitarias a los complejos inmunitarios de IgG (Pricopet al.2001, Boruchovet al.2005). Las variaciones en el número de copias de FcyRiIIA y FcyRIIIB se han asociado con el lupus eritematoso sistémico (SLE, por sus siglas en inglés) y la artritis reumatoide (RA, por sus siglas en inglés) en pacientes taiwaneses (Chenet al.20l4). Se demostró que un alto número de copias de FcyRIIIA es un factor de riesgo para el SLE. Se observaron frecuencias más altas de células dendríticas (CD) positivas para FcyRIIIA productoras de citocinas en pacientes con SLE, particularmente en aquellos con enfermedad activa, lo que sugiere que la producción de citocinas inflamatorias mediada por F<cy>RIIIA en las CD podría contribuir a la patogénesis de la enfermedad (Henriqueset al.2012). Se cree que la mayor densidad de FcyRIllA activador en la superficie de las células inmunitarias (linfocitos NK, monocitos, CD, macrófagos y subconjuntos de linfocitos T) podría inclinar el delicado equilibrio de las respuestas inmunitarias hacia una inflamación intensa, lo que puede dar como resultado el desarrollo de SLE (Chenet al.2014). Se ha demostrado una correlación entre un bajo número de copias de FcyRIIIA y una baja expresión de CD16A en los linfocitos NK, lo que sugiere que el número de copias de F<cy>RIIIA tiene implicaciones fisiológicas en las funciones de los linfocitos NK. Más importante aún, la deficiencia de F<cy>RIIIA está asociada con dos enfermedades autoinmunitarias distintas (SLE y RA), lo que sugiere que las funciones defectuosas de F<cy>RIIIA pueden representar un factor de riesgo común para diversas enfermedades autoinmunitarias. Las asociaciones de enfermedades sugieren que la modulación de la función de FcyRIIIA puede ser una diana terapéutica importante para la nefritis lúpica (Chenet al.2014).
Las innovaciones terapéuticas han proporcionado cierta esperanza en cuanto a un medio para bloquear la inflamación en la enfermedad autoinmunitaria a través de interacciones de FcyR. Estudios anteriores respaldan el potencial de la inhibición de FcyR como una estrategia terapéutica para inhibir acontecimientos mediados por complejos inmunitarios en enfermedades autoinmunitarias (Clarksonet al.1986, Flahertyet al.2012). El fragmento Fc de IgG por sí solo ha demostrado una buena eficacia en modelos animales de RA y en humanos con trombocitopenia (ITP, por sus siglas en inglés) o enfermedad de Kawasaki (Anthonyet al.2008, Debré Met al.1993, Hsuet al.1993). Se ha demostrado que las construcciones Fc multivalentes inhiben los procesos de complejos inmunitarios en modelos murinos de trombocitopenia y artritis (Ortizet al.2016). Además, la infusión de FcyR3a y 2a solubles puede inhibir la inflamación desencadenada por complejos inmunitarios en el modelo de lupus murino (Liet al.2014). El bloqueo de la formación de complejos inmunitarios en los linfocitos NK es una vía a explorar para la activación reducida de la inflamación y, por lo tanto, de las enfermedades autoinmunitarias.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden 3, 4, 5, 6, 7 u 8 aminoácidos. En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden 3, 4, 5, 7 u 8 aminoácidos.
En una realización, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 4 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 8 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 4 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 8 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que es:
C<i>TWPYC<ii>KSWGDVQDC<iii>(SEQ ID NO: 265);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 4 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 8 aminoácidos, el armazón molecular es TATB y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 265)-A (denominada en el presente documento BCY15044); y
A-(SEQ ID NO: 265)-a Ga AAE (denominada en el presente documento BCY19416).
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
C<i>PPTVYC<ii>HPLDC<iii>(SEQ ID NO: 60);
C<i>PPAVYC<ii>HPLDC<iii>(SEQ ID NO: 169);
C<i>PPEVFC<ii>HPLDC<iii>(SEQ ID NO: 170);
C<i>PPEVYC<ii>HPLDC<iii>(SEQ ID NO: 171);
C<í>PPEVWC<n>HPLDC<ín>(SEQ ID NO: 172);
CíPPQVYCnHPLDCní (SEQ ID NO: 173); y
CíPPEVWCnHPLDCín (SEQ ID NO: 174);
en donde C<í>, C<íí>y C<mí>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que es:
CiPPTVYCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 60);
en donde Ci, Cíí y Cmí representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 60)-A (denominada en el presente documento BCY11808);
A-(SEQ ID NO: 60)-A-[k (PYA)] (denominada en el presente documento BCY15685);
A-(SEQ ID NO: 60)-A-[Sar6]-[KBiot] (denominada en el presente documento BCY12621);
A-(SEQ ID NO: 169)-A (denominada presente documento BCY11673);
A-(SEQ ID NO: 170)-A (denominada presente documento BCY11809);
A-(s EQ ID NO: 171)-A (denominada presente documento BCY11810);
A-(SEQ ID NO: 172)-A (denominada presente documento BCY11811)
A-(SEQ ID NO: 173)-A (denominada presente documento BCY11812); y
A-(SEQ ID NO: 174)-A-[Sar6]-[KBiot] (denominada en el presente documento BCY12622);
en donde Sar representa sarcosina y Biot representa biotina.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 5 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 4 aminoácidos, el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que es:
A-(SEQ ID n O: 60)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15685).
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que es:
CiDWWDPGCiiTYFCiii (SEQ ID NO: 266);
en donde Ci, C<íí>y C<mí>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 6 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, el armazón molecular es TATB y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 266)-A (denominada en el presente documento BCY15045); y
A-(SEQ ID NO: 266)-a Ga AAE (denominada en el presente documento BCY19417).
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 7 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 7 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
CiRWSVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 61);
CiRWS[tBuGly]EDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 175);
C<i>RWSVED[HyP]C<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 176);
C<i>RWSVED[Aze]C<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 177);
C<i>RWSVEDPC<ii>[dA]AWC<iii>(SEQ ID NO: 178);
C<i>RWSVE[Gla]PC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 179);
C<i>RWSVED[Aze]C<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 180);
CíMWIRSDPCnGAWCín (SEQ ID NO: 181);
CíRWYPDDPCnGAWCní (SEQ ID NO: 182);
C<í>EWHISEPC<n>GAWC<ín>(SEQ ID NO: 183);
CíNWHVYEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 184);
CíRWHFSEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 185);
CíRWNLDDPCnGAWCín (SEQ ID NO: 186);
C<í>MWIRSDPC<n>GAWC<ín>(SEQ ID NO: 187);
C<í>RWYPDDPC<n>GAWC<ní>(SEQ ID NO: 188);
CíEWHISEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 189);
CíNWHVYEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 190);
CíRWHFSEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 191);
C<í>RWNLDDPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 192);
C<í>R[2MeTrp]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 193);
C<í>R[6MeTrp]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 194);
C<í>R[6FTrp]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 195);
C<í>R[5FTrp]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 196);
C<í>R[6CITrp]SVEDPC<ii>GAWC<iM>(SEQ ID NO: 197);
C<í>R[Trp(S)]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 198);
C<í>R[AzaTrp]SVEDPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 199);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[2MeTrp]C<íii>(SEQ ID NO: 200);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[6FTrp]C<íii>(SEQ ID NO: 201);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[5FTrp]C<íii>(SEQ ID NO: 202);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[4MeoTrp]C<íii>(SEQ ID NO: 203);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[5MeoTrp]C<íii>(SEQ ID NO: 204);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[Trp(S)]C<íii>(SEQ ID NO: 205);
C<í>RWSVEDPC<íí>GA[DOPA]C<ííí>(SEQ ID NO: 206);
CíRWYPDDPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 207);
CíRWHFSEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 208);
C<í>R[2MeTrp]HFSEPC<íí>GAWC<íii>(SEQ ID NO: 209);
C<í>RWYFSEPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 210);
CíRWSFSEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 211);
CíRWHPSEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 212);
C<í>RWYPSEPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 213);
CíRWHPDEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 214);
CíRWHPEEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 215);
CíRWHFDEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 216);
C<í>RWHFDDPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 217);
CíRWYFDEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 218);
C<i>RW[His1Me]FSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 219);
C<í>RW[Hís3Me]FSEPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 220);
C<i>RW[4MeoPhe]FSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 221);
CíRW[DOPA]FSEPCííGAWCííí (SEQ ID NO: 222);
C<i>RW[26DiMeTyr]FSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 223);
C<i>RW[3tBuTyr]FSEPC<íí>GAWC<iíí>(SEQ ID NO: 224);
C<i>RW[4FPhe]FSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 225);
C<i>RWH[4MePhe]SEPC<íí>GAWC<iíí>(SEQ ID NO: 226);
C<i>RWH[Aze]SEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 227);
C<i>RWH[HyP]SEPC<íí>GAWC<iíí>(SEQ ID NO: 228);
C<i>RWH[4tBuPhe]SEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 229);
C<i>RWH[HPhe]SEPC<íí>GAWC<iíí>(SEQ ID NO: 230, denominada en el presente documento BCY21693 cuando forma complejo con TBMT);
C<i>RWH[4PhePro]SEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 231);
C<i>RWHF[HSer]EPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 232);
C<i>RWHFS[Gla]PC<íí>GAWC<iíí>(SEQ ID NO: 233);
C<i>RWHFS[HGlu]PC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 234);
C<i>RWHFSEPC<ii>[dA]AWC<iii>(SEQ ID NO: 235);
C<i>RWYFSE[Aze]C<íí>[dA]AWC<iíí>(SEQ ID NO: 236);
C<i>RWHFDE[Aze]C<ii>[dA]AWC<iii>(SEQ ID NO: 237);
C<i>RWYPSE[Aze]C<íí>[dA]AWC<iíí>(SEQ ID NO: 238);
C<i>[HArg]WHFSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 239);
C<í>RWH[Cis-HyP]SEPC<íí>GAWC<ííí>(SEQ ID NO: 240);
C<í>RWHFSEPC<n>GAWC<ín>(SEQ ID NO: 241);
CíRWHFSEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 242);
C<i>RWHFSEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 243);
C<i>RWH[4BnPro]SEPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 267); y
C<i>RWH[HPhe]SE[Aze]C<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 268);
en donde C<i>, C<ii>y Cím representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, en donde Gla representa ácido Y-carboxiglutámico, Aze representa ácido azetidin-2-carboxílico, 2MeTrp representa 2-metiltriptófano, 6MeTrp representa 6-metiltriptófano, 6FTrp representa 6-fluorotriptófano, 5FTrp representa 5-fluorotriptófano, 6CITrp representa 6-cloro-L-triptófano, 5MeoTrp representa 5-metoxi-L-triptófano, Trp(S) representa 3-(3-benzotienil)-L-alanina, AzaTrp representa azatriptófano, 4MeoTrp representa 4-metoxi-L-triptófano, DOPA representa 3,4-dihidroxifenilalanina, His1Me representa 1-metilhistidina, His3Me representa 3-metilhistidina, 4MeoPhe representa 4-metoxifenilalanina, 26DiMeTyr representa 2,6-dimetil-L-tirosina, 3tBuTyr representa 3-ferc-butiltirosina, 4FPhe representa 4-fluoro-L-fenilalanina, 4MePhe representa 4-metil-fenilalanina, HyP representa hidroxiprolina, 4tBuPhe representa 4-t-butil-fenilalanina, HPhe representa homofenilalanina, 4PhePro representa (2S,4S)-4-fenilprolina, HSer representa homoserina, HGIu representa ácido L-2-aminoadípico, dA representa D-Alanina, HArg representa homoarginina, tBuGly representa ferc-butilglicina, Cis-HyP representa 4-cis-hidroxiprolina, y 4BnPro representa ácido (2S,4R)-4-bencil-pirrolidin-2-carboxílico, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 7 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que es:
C<i>RWSVEDPC<ii>GAWC<iii>(SEQ ID NO: 61);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 7 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, el armazón molecular es TBMT y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 61)-A (denominada en el presente documento BCY14950);
Ac-A-(SEQ ID NO: 61)-A (denominada en el presente documento BCY16599);
A-(SEQ ID NO: 61)-a GaAa E (denominada en el presente documento BCY19040);
A-(s EQ ID NO: 61)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY13883);
Ac-A-(SEQ ID NO: 61)-A-[K(pYA)] (denominada en el presente documento BCY19596);
A-(SEQ ID NO: 175)-A (denominada en el presente documento BCY14953);
A-(SEQ ID NO: 176)-A (denominada en el presente documento BCY14954);
[pYa ]-A-(SEQ ID nO: 177) (denominada en el presente documento BCY14955);
A-(s Eq ID NO: 178)-A (denominada en el presente documento BCY14956);
A-(SEQ ID NO: 179)-A (denominada en el presente documento BCY16608);
A-(SEQ ID NO: 180)-A (denominada en el presente documento BCY16610);
A-(s EQ ID NO: 181)-A (denominada en el presente documento BCY19032);
A-(SEQ ID NO: 182)-A (denominada en el presente documento BCY19033);
A-(SEQ ID NO: 183)-A (denominada en el presente documento BCY19034);
A-(SEQ ID NO: 184)-A (denominada en el presente documento BCY19035);
A-(SEQ ID NO: 185)-A (denominada en el presente documento BCY19036);
A-(SEQ ID NO: 186)-A (denominada en el presente documento BCY19037);
A-(SEQ ID NO: 187)-a GaAAE (denominada en el presente documento BCY19038);
A-(SEQ ID NO: 188)-AGAAAE (denominada en el presente documento BCY19039);
A-(s EQ ID NO: 189)-AGAAAE (denominada en el presente documento BCY19041);
A-(SEQ ID NO: 190)-AGAAAE (denominada en el presente documento BCY19042);
A-(SEQ ID NO: 191)-AGAAAE (denominada en el presente documento BCY19043);
A-(SEQ ID NO: 192)-AGAAAE (denominada en el presente documento BCY19044);
A-(SEQ ID NO: 193)-A (denominada en el presente documento BCY19045);
A-(SEQ ID NO: 194)-A (denominada en el presente documento BCY19046);
A-(SEQ ID NO: 195)-A (denominada en el presente documento BCY19048);
A-(SEQ ID NO: 196)-A (denominada en el presente documento BCY19049);
A-(SEQ ID NO: 197)-A (denominada en el presente documento BCY19050);
A-(s EQ ID NO: 198)-A (denominada en el presente documento BCY19053);
A-(SEQ ID NO: 199)-A (denominada en el presente documento BCY19055);
A-(SEQ ID NO: 200)-A (denominada en el presente documento BCY19057);
A-(SEQ ID NO: 201)-A (denominada en el presente documento BCY19060);
A-(SEQ ID NO: 202)-A (denominada en el presente documento BCY19061);
A-(SEQ ID NO: 203)-A (denominada en el presente documento BCY19063);
A-(SEQ ID NO: 204)-A (denominada en el presente documento BCY19064);
A-(SEQ ID NO: 205)-A (denominada en el presente documento BCY19065);
A-(SEQ ID NO: 206)-A (denominada en el presente documento BCY19068);
A-(SEQ ID NO: 207)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY20360);
A-(SEQ ID NO: 208)-A-[k (pYa )] (denominada en el presente documento BCY20361);
A-(SEQ ID NO: 209)-A (denominada en el presente documento BCY20363);
A-(SEQ ID NO: 210)-A (denominada en el presente documento BCY20364);
A-(SEQ ID NO: 211)-A (denominada en el presente documento BCY20365);
A-(SEQ ID NO: 212)-A (denominada en el presente documento BCY20366);
A-(SEQ ID NO: 213)-A (denominada en el presente documento BCY20367);
A-(s EQ ID NO: 214)-A (denominada en el presente documento BCY20368);
A-(SEQ ID NO: 215)-A (denominada en el presente documento BCY20369);
A-(SEQ ID NO: 216)-A (denominada en el presente documento BCY20370);
A-(SEQ ID NO: 217)-A (denominada en el presente documento BCY20371);
A-(SEQ ID NO: 218)-A (denominada en el presente documento BCY20372);
A-(SEQ ID NO: 219)-A (denominada en el presente documento BCY20373);
A-(SEQ ID NO: 220)-A (denominada en el presente documento BCY20374);
A-(SEQ ID NO: 221)-A (denominada en el presente documento BCY20375);
A-(s EQ ID NO: 222)-A (denominada en el presente documento BCY20376);
A-(SEQ ID NO: 223)-A (denominada en el presente documento BCY20377);
A-(SEQ ID NO: 224)-A (denominada en el presente documento BCY20378);
A-(SEQ ID NO: 225)-A (denominada en el presente documento BCY20379);
A-(SEQ ID NO: 226)-A (denominada en el presente documento BCY20380);
A-(SEQ ID NO: 227)-A (denominada en el presente documento BCY20382);
A-(SEQ ID NO: 228)-A (denominada en el presente documento BCY20383);
A-(SEQ ID NO: 229)-A (denominada en el presente documento BCY20384);
A-(s EQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY20385);
(SEQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY21690);
Ac-(SEQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY21691);
A-(SEQ ID NO: 230) (denominada en el presente documento BCY21692);
Ac-(SEQ ID NO: 230) (denominada en el presente documento BCY21694);
[Nle]-(SEQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY21695);
Ac-[Nle]-(SEQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY21696);
Ac-A-(SEQ ID NO: 230)-A (denominada en el presente documento BCY21697);
A-(SEQ ID NO: 231)-A (denominada en el presente documento BCY20386);
A-(SEQ ID NO: 232)-A (denominada en el presente documento BCY20388);
A-(SEQ ID NO: 233)-A (denominada en el presente documento BCY20389);
A-(SEQ ID NO: 234)-A (denominada en el presente documento BCY20390);
A-(SEQ ID NO: 235)-A (denominada en el presente documento BCY20392);
A-(SEQ ID NO: 236)-A (denominada en el presente documento BCY20394);
A-(SEQ ID NO: 237)-A (denominada en el presente documento BCY20395);
A-(SEQ ID NO: 238)-A (denominada en el presente documento BCY20396);
A-(s EQ ID NO: 239)-A (denominada en el presente documento BCY20397);
A-(SEQ ID NO: 240)-A (denominada en el presente documento BCY20526);
Ac-A-(SEQ ID NO: 241)-A (denominada en el presente documento BCY20527);
[Aib]-(SEQ ID NO: 242)-A (denominada en el presente documento BCY20528);
A-(SEQ ID NO: 243)-[Aib] (denominada en el presente documento BCY20529),
A-(SEQ ID NO: 267)-A (denominada en el presente documento BCY20387); y
A-(SEQ ID NO: 268)-A (denominada en el presente documento BCY21689);
en donde PYA representa ácido pentinoico y Aib representa ácido aminoisobutírico.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 7 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, el armazón molecular es TBMT y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que es:
A-(SEQ ID<n>O: 61)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY13883),
en donde PYA representa ácido pentinoico.
En una realización alternativa, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 8 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos.
En una realización adicional, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 8 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de: C<i>VGLEELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 62; denominada en el presente documento BCY16494 cuando forma complejo con TBMT);
C<i>VGLLELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 244);
C<i>PGLEELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 245);
C<i>V[dA]LEELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 246);
C<i>VG[tBuAla]EELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 247);
C<i>VG[Cba]EELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 248);
C<i>VGFEELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 249);
C<i>VG[1Nal]EELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 250);
C<i>VG[2Nal]EELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 251);
C<i>VGLPELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 252);
C<i>VGL[tBuAla]ELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 253);
C<i>VGL[Cba]ELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 254);
C<i>VGL[Cha]ELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 255);
C<i>VGL[Nle]ELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 256);
C<i>VGLE[Gla]LGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 257);
C<i>VGLEELG[Aze]C<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 258);
C<i>VGLEELGPC<ii>SD[tBuAla]C<iii>(SEQ ID NO: 259);
C<i>VGLEELGPC<ii>SD[Cba]C<iii>(SEQ ID NO: 260);
C<i>VGLEELGPC<ii>SD[Cha]C<iii>(SEQ ID NO: 261);
C<i>VG[HLeu]EELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 262);
C<i>VGL[HLeu]ELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 263); y
C<i>VGLE[HGlu]LGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 264);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, y en donde dA representa D-alanina, tBuAla representa p-t-butil-L-alanina, Cba representa ciclobutilalanina, 1 Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, Cha representa 3-ciclohexil-D-alanina, Nle representa norleucina, Gla representa ácido Y-carboxiglutámico, Aze representa ácido azetidin-2-carboxílico, HLeu representa homoleucina, HGIu representa ácido L-2-aminoadípico, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres residuos de cisteína separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 8 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, y el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que es:
C<i>VGLEELGPC<ii>SDLC<iii>(SEQ ID NO: 62);
en donde C<i>, C<ii>y C<iii>representan un primer, segundo y tercer residuos de cisteína, respectivamente, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización adicional más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 8 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, el armazón molecular es TBMT y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 62)-A (denominada en el presente documento BCY16493);
Ac-(SEQ ID NO: 62) (denominada en el presente documento BCY16495);
A-(SEQ ID NO: 62)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY13886);
A-(s EQ ID NO: 244)-A-[K(Py A)] (denominada en el presente documento BCY16165);
A-(SEQ ID NO: 245)-A (denominada en el presente documento BCY16498);
A-(SEQ ID NO: 246)-A (denominada en el presente documento BCY16499);
A-(SEQ ID NO: 247)-A (denominada en el presente documento BCY16501);
A-(SEQ ID NO: 248)-A (denominada en el presente documento BCY16502);
A-(SEQ ID NO: 249)-A (denominada en el presente documento BCY16504);
A-(SEQ ID NO: 250)-A (denominada en el presente documento BCY16505);
A-(SEQ ID NO: 251)-A (denominada en el presente documento BCY16506);
A-(SEQ ID NO: 252)-A (denominada en el presente documento BCY16507);
A-(SEQ ID NO: 253)-A (denominada en el presente documento BCY16508);
A-(SEQ ID NO: 254)-A (denominada en el presente documento BCY16509);
A-(SEQ ID NO: 255)-A (denominada en el presente documento BCY16510);
A-(SEQ ID NO: 256)-A (denominada en el presente documento BCY16511);
A-(SEQ ID NO: 257)-A (denominada en el presente documento BCY16512);
A-(SEQ ID NO: 258)-A (denominada en el presente documento BCY16520);
A-(SEQ ID NO: 259)-A (denominada en el presente documento BCY16522);
A-(SEQ ID NO: 260)-A (denominada en el presente documento BCY16523);
A-(SEQ ID NO: 261)-A (denominada en el presente documento BCY16524);
A-(SEQ ID NO: 262)-A (denominada en el presente documento BCY16527);
A-(SEQ ID NO: 263)-A (denominada en el presente documento BCY16528); y
A-(SEQ ID NO: 264)-A (denominada en el presente documento BCY16529),
en donde PYA representa ácido pentinoico.
En aún otra realización más, dichas secuencias de bucle comprenden tres grupos reactivos separados por dos secuencias de bucle, la primera de las cuales consiste en 8 aminoácidos y la segunda de las cuales consiste en 3 aminoácidos, el armazón molecular es TBMT y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que es:
A-(SEQ ID NO: 62)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY13886);
en donde PYA representa ácido pentinoico.
En una realización adicional, la sal farmacéuticamente aceptable se selecciona del ácido libre o la sal de sodio, potasio, calcio o amonio.
A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por el experto en la técnica, como en las técnicas de la química de péptidos, cultivo celular y presentación en fagos, química de ácidos nucleicos y bioquímica. Se usan técnicas estándar para métodos de biología molecular, genéticos y bioquímicos (véase Sambrooket al.,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3.a ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubelet al.,Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4.a ed., John Wiley & Sons, Inc.), que se incorporan en el presente documento por referencia.
Numeración
Cuando se hace referencia a las posiciones de los residuos de aminoácidos dentro de los péptidos de la invención, los grupos reactivos, es decir, los residuos de cisteína o penicilamina (C<i>, Pen<i>, C<ii>, Pen<n>y C<iii>y Pen<iii>) se omiten de la numeración ya que son invariantes, por lo tanto, la numeración de los residuos de aminoácidos dentro de los péptidos de la invención se menciona a continuación:
-C<i>-N<i>-L<2>-Q<3>-A<4>-P<5>-C<i r>M<6>-Q<7>-T<8>-G<9>-K<io>-V<i i>-C<i i r>(SEQ ID NO: 1).
Para los fines de esta descripción, se supone que todos los péptidos bicíclicos están ciclados con TATA, TATB o TBMT y producen una estructura trisustituida. La ciclación con TATA, TATB o TBMT se produce en el primer, segundo y tercer grupos reactivos (es decir, C<i>, C<ii>, C<iii>).
Formato molecular
Las extensiones en el extremo N o C de la secuencia central bicíclica se añaden al lado izquierdo o derecho de la secuencia, separadas por un guión. Por ejemplo, una cola de biotina-G-Sar<5>en el extremo N se representa como:
[Biot]-G-[Sars]-A-(SEQ ID NO: X).
Secuencias peptídicas invertidas
A la luz de la divulgación en Nairet al.(2003) J. Immunol. 170(3), 1362-1373, se prevé que las secuencias peptídicas divulgadas en el presente documento también encuentren utilidad en su forma retroinversa. Por ejemplo, la secuencia se invierte (es decir, el extremo N se convierte en el extremo C, y viceversa) y su estereoquímica también se invierte (es decir, los aminoácidos D se convierten en aminoácidos L, y viceversa).
Definición de ligando peptídico
Un ligando peptídico, como se denomina en el presente documento, se refiere a un péptido, peptídico o peptidomimético unido covalentemente a un armazón molecular. Típicamente, dichos péptidos, peptídicos o peptidomiméticos comprenden un péptido que tiene aminoácidos naturales o no naturales, dos o más grupos reactivos (es decir, residuos de cisteína o penicilamina) que son capaces de formar enlaces covalentes con el armazón, y una secuencia delimitada entre dichos grupos reactivos que se denomina secuencia de bucle, ya que forma un bucle cuando el péptido, peptídico o peptidomimético está unido al armazón. En el presente caso, los péptidos, peptídicos o peptidomiméticos comprenden al menos tres residuos de cisteína o penicilamina (denominados en el presente documento C<i>, Pen<i>, C<ii>, Pen<ii>y C<iii>y Pen<iii>), y forman al menos dos bucles en el armazón.
Ventajas de los ligandos peptídicos
Determinados péptidos bicíclicos de la presente invención tienen una serie de propiedades ventajosas que les permiten ser considerados como moléculas similares a fármacos adecuadas para inyección, inhalación, administración nasal, ocular, oral o tópica. Dichas propiedades ventajosas incluyen:
- Reactividad cruzada entre especies. Este es un requisito típico para la farmacodinámica preclínica y la evaluación farmacocinética;
- Estabilidad a las proteasas. Los ligandos de péptidos bicíclicos deben demostrar, en la mayoría de las circunstancias, estabilidad a las proteasas plasmáticas, proteasas epiteliales ("ancladas a la membrana"), proteasas gástricas e intestinales, proteasas de la superficie pulmonar, proteasas intracelulares y similares. La estabilidad a las proteasas debe mantenerse entre diferentes especies de modo que se pueda desarrollar un candidato líder de péptido bicíclico en modelos animales, así como administrarlo con confianza a seres humanos; - Perfil de solubilidad deseable. Esto va en función de la proporción de residuos cargados e hidrófilos frente a hidrófobos y de enlaces de H intra/intermoleculares, que es importante para fines de formulación y absorción; y - Una semivida plasmática óptima en la circulación. Dependiendo de la indicación clínica y del régimen de tratamiento, puede ser necesario desarrollar un péptido bicíclico con tiempos de exposiciónin vivocortos o prolongados para el tratamiento de patologías crónicas o agudas. El tiempo de exposición óptimo estará determinado por el requisito de exposición sostenida (para una eficacia terapéutica máxima) frente al requisito de tiempos de exposición cortos para minimizar los efectos toxicológicos que surgen de la exposición sostenida al agente.
Sales farmacéuticamente aceptables
Se apreciará que las formas salinas están dentro del alcance de esta invención, y las referencias a ligandos peptídicos incluyen las formas salinas de dichos ligandos.
Las sales de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto precursor que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales tales como los métodos descritos en Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editora), ISBN: 3-90639-026-8, tapa dura, 388 páginas, agosto de 2002. Generalmente, dichas sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas ácidas o básicas libres de estos compuestos con la base o el ácido adecuados en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de ambos.
Las sales de adición de ácido (monosales o disales) pueden formarse con una amplia diversidad de ácidos, tanto inorgánicos como orgánicos. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen monosales o disales formadas con un ácido seleccionado del grupo que consiste en ácido acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (por ejemplo, L-ascórbico), L-aspártico, bencenosulfónico, benzoico, 4-acetamidobenzoico, butanoico, (+) alcanfórico, canfor-sulfónico, (+)-(1S)-canfor-10-sulfónico, cáprico, caproico, caprílico, cinámico, cítrico, ciclámico, dodecilsulfúrico, etano-1,2-disulfónico, etanosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, glucoheptónico, D-glucónico, glucurónico (por ejemplo, D-glucurónico), glutámico (por ejemplo, L-glutámico), aoxoglutárico, glicólico, hipúrico, ácidos hidrohídricos (por ejemplo, bromhídrico, clorhídrico, yodhídrico), isetiónico, láctico (por ejemplo, (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico), lactobiónico, maleico, málico, (-)-L-málico, malónico, (±)-DL-mandélico, metanosulfónico, naftaleno-2-sulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, 1-hidroxi-2-naftoico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamoico, fosfórico, propiónico, pirúvico, L-piroglutámico, salicílico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, succínico, sulfúrico, tánico, (+)-L-tartárico, tiociánico, p-toluenosulfónico, undecilénico y valérico, así como aminoácidos acilados y resinas de intercambio catiónico.
Un grupo particular de sales consiste en sales formadas a partir de ácido acético, clorhídrico, yodhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, succínico, maleico, málico, isetiónico, fumárico, bencenosulfónico, toluenosulfónico, sulfúrico, metanosulfónico (mesilato), etanosulfónico, naftalenosulfónico, valérico, propanoico, butanoico, malónico, glucurónico y lactobiónico. Una sal particular es la sal de clorhidrato. Otra sal particular es la sal de acetato.
Si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (por ejemplo, -COOH puede ser -COO<'>), entonces se puede formar una sal con una base orgánica o inorgánica, generando un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, iones de metales alcalinos tales como Li<+>, Na<+>y K<+>, cationes de metales alcalinotérreos, tales como Ca<2+>y Mg<2+>, y otros cationes tales como Al<3+>o Zn<+>. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, ion amonio (es decir NH<4+>) e iones amonio sustituidos (por ejemplo, NH<3>R<+>, NH<2>R<2+>, NHR<3+>, NR<4+>). Algunos ejemplos de algunos iones amonio sustituidos adecuados son aquellos procedentes de: metilamina, etilamina, dietilamina, propilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion amonio cuaternario común es N(CH<3>)<4+>.
Cuando los péptidos de la invención contienen una función amina, estos pueden formar sales de amonio cuaternario, por ejemplo mediante reacción con un agente alquilante de acuerdo con métodos bien conocidos por el experto en la técnica. Dichos compuestos de amonio cuaternario están dentro del alcance de los péptidos de la invención.
Complejos de unión multiméricos
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un complejo de unión multimérico que comprende al menos dos ligandos peptídicos bicíclicos como se define en el presente documento, en donde dichos ligandos peptídicos pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, los complejos de unión multiméricos comprenden más de un péptido bicíclico que son iguales (es decir, homomultímeros). En una realización alternativa, los complejos de unión multiméricos comprenden péptidos bicíclicos que son diferentes (es decir, heteromultímeros).
En una realización, el complejo de unión multimérico comprende adicionalmente un fluoróforo.
En una realización, el complejo de unión multimérico comprende dos péptidos bicíclicos que son iguales (es decir, homodímeros). En la Tabla A a continuación se muestran ejemplos de homodímeros NKp46 diméricos adecuados:
Tabla A: Com le os de unión multiméricos NK 46 diméricos de la invención
En la Tabla B a continuación se muestran ejemplos de homodímeros CD16a diméricos adecuados:
Tabla B: Com le os de unión multiméricos CD16a diméricos de la invención
Derivados modificados
Se apreciará que los derivados modificados de los ligandos peptídicos como se definen en el presente documento están dentro del alcance de la presente invención. Los ejemplos de dichos derivados modificados adecuados incluyen una o más modificaciones seleccionadas de: modificaciones en el extremo N y/o C; reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos por uno o más residuos de aminoácidos no naturales (tal como el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos polares por uno o más aminoácidos isostéricos o isoelectrónicos; reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos no polares con otros aminoácidos isostéricos o isoelectrónicos no naturales); adición de un grupo espaciador; reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos sensibles a la oxidación por uno o más residuos de aminoácidos resistentes a la oxidación; reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos por uno o más aminoácidos de reemplazo, tal como una alanina, reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos L por uno o más residuos de aminoácidos D; N-alquilación de uno o más enlaces amida dentro del ligando peptídico bicíclico; reemplazo de uno o más enlaces peptídicos con un enlace sustituto; modificación de la longitud de la cadena principal del péptido; sustitución del hidrógeno en el carbono alfa de uno o más residuos de aminoácidos con otro grupo químico; modificación de aminoácidos tales como cisteína, lisina, glutamato/aspartato y tirosina con reactivos adecuados que reaccionan con amina, tiol, ácido carboxílico y fenol para funcionalizar dichos aminoácidos; e introducción o reemplazo de aminoácidos que introducen reactividades ortogonales que son adecuadas para la funcionalización, por ejemplo, aminoácidos que portan grupos azida o alquino que permiten la funcionalización con restos fracciones que portan alquino o azida, respectivamente.
En una realización, el derivado modificado comprende una modificación en el extremo N y/o C. En una realización adicional, en donde el derivado modificado comprende una modificación en el extremo N usando una química aminoreactiva adecuada, y/o una modificación en el extremo C usando una química carboxi-reactiva adecuada. En una realización adicional, dicha modificación en el extremo N o C comprende la adición de un grupo efector, incluyendo, pero sin limitación, un agente citotóxico, un radioquelante o un cromóforo.
En una realización adicional, el derivado modificado comprende una modificación en el extremo N. En una realización adicional, la modificación en el extremo N comprende un grupo acetilo en el extremo N. En esta realización, el residuo en el extremo N se protege con anhídrido acético u otros reactivos apropiados durante la síntesis peptídica, lo que conduce a una molécula que está acetilada en el extremo N. Esta realización proporciona la ventaja de eliminar un punto de reconocimiento potencial para aminopeptidasas y evita el potencial de degradación del péptido bicíclico.
En una realización alternativa, la modificación en el extremo N comprende la adición de un grupo espaciador molecular que facilita la conjugación de grupos efectores y la retención de la potencia del péptido bicíclico con su diana.
En una realización adicional, el derivado modificado comprende una modificación en el extremo C. En una realización adicional, la modificación en el extremo C comprende un grupo amida. En esta realización, el residuo en el extremo C se sintetiza como una amida durante la síntesis peptídica, lo que conduce a una molécula que está amidada en el extremo C. Esta realización proporciona la ventaja de eliminar un punto de reconocimiento potencial para la carboxipeptidasa y reduce el potencial de degradación proteolítica del péptido bicíclico.
En una realización, el derivado modificado comprende el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos por uno o más residuos de aminoácidos no naturales. En esta realización, pueden seleccionarse aminoácidos no naturales que tengan cadenas laterales isostéricas/isoelectrónicas que no sean reconocidas por proteasas degradativas ni tengan ningún efecto adverso sobre la potencia de la diana.
Como alternativa, pueden usarse aminoácidos no naturales que tengan cadenas laterales de aminoácidos restringidas, de modo que la hidrólisis proteolítica del enlace peptídico cercano se impida conformacional y estéricamente. En particular, estos se refieren a análogos de prolina, cadenas laterales voluminosas, derivados disustituidos en Ca (por ejemplo, ácido aminoisobutírico, Aib) y aminoácidos cíclicos, siendo un derivado simple el ácido aminociclopropilcarboxílico.
En una realización, el derivado modificado comprende la adición de un grupo espaciador. En una realización adicional, el derivado modificado comprende la adición de un grupo espaciador a la cisteína o penicilamina del extremo N (C<i>o Pen<i>) y/o la cisteína o penicilamina del extremo C (C<m>o Pen<m>).
En una realización, el derivado modificado comprende el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos sensibles a la oxidación por uno o más residuos de aminoácidos resistentes a la oxidación. En una realización adicional, el derivado modificado comprende el reemplazo de un residuo de triptófano por un residuo de naftilalanina o alanina. Esta realización proporciona la ventaja de mejorar el perfil de estabilidad farmacéutica del ligando peptídico bicíclico resultante.
En una realización, el derivado modificado comprende el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos cargados por uno o más residuos de aminoácidos hidrófobos. En una realización alternativa, el derivado modificado comprende el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos hidrófobos por uno o más residuos de aminoácidos cargados. El equilibrio correcto de residuos de aminoácidos cargados frente a hidrófobos es una característica importante de los ligandos peptídicos bicíclicos. Por ejemplo, los residuos de aminoácidos hidrófobos influyen en el grado de unión a proteínas plasmáticas y, por lo tanto, en la concentración de la fracción libre disponible en el plasma, mientras que los residuos de aminoácidos cargados (en particular, arginina) pueden influir en la interacción del péptido con las membranas de fosfolípidos en las superficies celulares. La combinación de ambos puede influir en la semivida, el volumen de distribución y la exposición del fármaco peptídico, y se puede adaptar de acuerdo con el criterio de valoración clínico. Además, la combinación y el número correctos de residuos de aminoácidos cargados frente a hidrófobos pueden reducir la irritación en el lugar de inyección (si el fármaco peptídico se ha administrado por vía subcutánea).
En una realización, el derivado modificado comprende el reemplazo de uno o más residuos de aminoácidos L por uno o más residuos de aminoácidos D. Se cree que esta realización aumenta la estabilidad proteolítica por impedimento estérico y por una propensión de los aminoácidos D a estabilizar las conformaciones de giro p (Tugyiet al.(2005) PNAS, 102(2), 413-418).
En una realización, el derivado modificado comprende la eliminación de cualquier residuo de aminoácido y la sustitución por alaninas, tales como D-alaninas. Esta realización proporciona la ventaja de identificar residuos de unión clave y eliminar uno o más sitios de ataque proteolítico potenciales.
Cabe señalar que cada una de las modificaciones mencionadas anteriormente sirve para mejorar deliberadamente la potencia o la estabilidad del péptido. Se pueden lograr mejoras de potencia adicionales basadas en modificaciones a través de los siguientes mecanismos:
- Incorporar restos hidrófobos que aprovechen el efecto hidrófobo y conduzcan a tasas de desactivación más bajas, de modo que se logren afinidades más altas;
- Incorporar grupos cargados que aprovechen interacciones iónicas de largo alcance, lo que conduce a tasas de activación más rápidas y a afinidades más altas (véase, por ejemplo, Schreiberet al.,Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol. 3, 427-31); y
- Incorporar restricciones adicionales en el péptido, por ejemplo, restringiendo las cadenas laterales de aminoácidos correctamente de modo que la pérdida de entropía sea mínima tras la unión a la diana, restringiendo los ángulos de torsión de la cadena principal de modo que la pérdida de entropía sea mínima tras la unión a la diana e introduciendo ciclaciones adicionales en la molécula por razones idénticas.
(Para revisiones, véanse Gentilucciet al.,Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203 y Néstoret al.,Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418).
Variaciones isotópicas
La presente invención incluye todos los ligandos peptídicos marcados con (radio)isótopos farmacéuticamente aceptables de la invención, en donde uno o más átomos se reemplazan por átomos que tienen el mismo número atómico, pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra habitualmente en la naturaleza, y ligandos peptídicos de la invención, en donde se unen grupos quelantes metálicos (denominados "efectores") que son capaces de contener (radio)isótopos relevantes, y ligandos peptídicos de la invención, en donde determinados grupos funcionales se reemplazan covalentemente por (radio)isótopos relevantes o grupos funcionales marcados isotópicamente.
Los ejemplos de isótopos adecuados para su inclusión en los ligandos peptídicos de la invención comprenden isótopos de hidrógeno, tales como 2H (D) y 3H (T), carbono, tales como 11C, 13C y 14C, cloro, tal como 36Cl, flúor, tal como 18F, yodo, tales como 123I, 125I y 131I, nitrógeno, tales como 13N y 15N, oxígeno, tales como 15O,17O y 18O, fósforo, tal como 32P, azufre, tal como 35S, cobre, tal como 64Cu, galio, tal como 67Ga o 68Ga, itrio, tal como 90Y y lutecio, tal como 177Lu, y bismuto, tal como 213Bi.
Determinados ligandos peptídicos marcados isotópicamente de la invención, por ejemplo, los que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en estudios de distribución de fármacos y/o sustratos tisulares, y para evaluar clínicamente la presencia y/o ausencia de la diana en tejidos enfermos. Los ligandos peptídicos de la invención pueden tener además valiosas propiedades diagnósticas ya que pueden usarse para detectar o identificar la formación de un complejo entre un compuesto marcado y otras moléculas, péptidos, proteínas, enzimas o receptores. Los métodos de detección o identificación pueden usar compuestos que están marcados con agentes de marcado tales como radioisótopos, enzimas, sustancias fluorescentes, sustancias luminosas (por ejemplo, luminol, derivados de luminol, luciferina, aequorina y luciferasa), etc. Los isótopos radiactivos tritio, es decir, 3H (T), y carbono-14, es decir 14C, son particularmente útiles para este propósito en vista de su facilidad de incorporación y medios de detección fáciles.
La sustitución con isótopos más pesados, tales como deuterio, es decir, 2H (D), puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor semividain vivoo menores requisitos de dosificación y, por lo tanto, pueden preferirse en algunas circunstancias.
La sustitución con isótopos emisores de positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N, puede ser útil en estudios de topografía por emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación de la diana.
Los compuestos marcados isotópicamente de ligandos peptídicos de la invención se pueden preparar generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos adjuntos usando un reactivo marcado isotópicamente apropiado en lugar del reactivo no marcado empleado previamente.
Armazón molecular
En una realización, el armazón molecular comprende un armazón molecular no aromático. Las referencias en el presente documento a "armazón molecular no aromático" se refieren a cualquier armazón molecular como se define en el presente documento que no contenga un sistema anular carbocíclico o heterocíclico aromático (es decir, insaturado).
Se describen ejemplos adecuados de armazones moleculares no aromáticos en Heiniset al.(2014) Angewandte Chemie, Edición Internacional 53(6) 1602-1606.
Como se ha indicado en los documentos anteriores, el armazón molecular puede ser una molécula pequeña, tal como una molécula orgánica pequeña.
En una realización, el armazón molecular puede ser una macromolécula. En una realización, el armazón molecular es una macromolécula compuesta por aminoácidos, nucleótidos o carbohidratos.
En una realización, el armazón molecular comprende grupos reactivos que son capaces de reaccionar con uno o más grupos funcionales del polipéptido para formar enlaces covalentes.
El armazón molecular puede comprender grupos químicos que forman el enlace con un péptido, tales como aminas, tioles, alcoholes, cetonas, aldehídos, nitrilos, ácidos carboxílicos, ésteres, alquenos, alquinos, azidas, anhídridos, succinimidas, maleimidas, haluros de alquilo y haluros de acilo.
En una realización, el armazón molecular es 1,1',1"-(1,3,5-triazinano-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-ona (también conocida como triacriloxilhexahidro-s-triazina (TATA):
Por lo tanto, después de la ciclación con los péptidos bicíclicos de la invención en los residuos de cisteína o penicilamina C<i>, Pen<i>, C<u>, Pen<ii>, C<iii>y Pen<¡¡i>, el armazón molecular forma un derivado de 1,1',1"-(1,3,5-triazinano-1,3,5-triil)tripropan-1-ona trisustituido de TATA que tiene la siguiente estructura:
en donde * representa el punto de unión de los tres residuos de cisteína.
En una realización alternativa, el armazón molecular es 2,4,6-tris(bromometil)-s-triazina (TBMT):
Por lo tanto, después de la ciclación con los péptidos bicíclicos de la invención en los residuos de cisteína o penicilamina C<i>, Pen<i>, C<n>, Pen<ii>, C<iii>y Pen<m>, el armazón molecular forma un derivado trisustituido de TBMT que tiene la siguiente estructura:
en donde * representa el punto de unión de los tres residuos de cisteína.
En una realización alternativa, el armazón molecular es 1,3,5-tris(bromoacetil)hexahidro-1,3,5-triazina (TATB):
Por lo tanto, después de la ciclación con los péptidos bicíclicos de la invención en los residuos de cisteína o penicilamina C<i>, Pen<i>, C<¡>¡, Pen<¡¡>, C<¡¡i>y Pen<¡ii>, el armazón molecular forma un derivado de 1,3,5-tris(bromoacetil)hexahidro-1,3,5-triazina trisustituido de TATB que tiene la siguiente estructura:
en donde * representa el punto de unión de los tres residuos de cisteína.
Síntesis
Los péptidos de la presente invención pueden fabricarse sintéticamente mediante técnicas estándar seguidas de una reacción con un armazón molecularin vitro.Cuando esto se realiza, puede usarse la química estándar. Esto permite la preparación rápida a gran escala de material soluble para experimentos aguas abajo o validación. Dichos métodos se podrían llevar a cabo usando química convencional como la descrita en Timmermanet al.(anteriormente).
Por lo tanto, la invención también se refiere a la fabricación de polipéptidos o conjugados seleccionados como se expone en el presente documento, en donde la fabricación comprende etapas adicionales opcionales como se explica a continuación. En una realización, estas etapas se realizan en el polipéptido/conjugado del producto final elaborado mediante síntesis química.
Opcionalmente, los residuos de aminoácidos en el polipéptido de interés pueden sustituirse cuando se elabora un conjugado o complejo.
Los péptidos también pueden extenderse, para incorporar, por ejemplo, otro bucle y, por lo tanto, introducir múltiples especificidades.
Para extender el péptido, simplemente puede extenderse químicamente en su extremo N o C o dentro de los bucles usando lisinas protegidas ortogonalmente (y análogos) usando química estándar en fase sólida o fase de solución. Pueden usarse técnicas de (bio)conjugación estándar para introducir un extremo N o C activado o activable. Como alternativa, pueden realizarse adiciones mediante condensación de fragmentos o ligadura química natural, por ejemplo, como se describe en (Dawsonet al.1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779), o por enzimas, por ejemplo, usando subtiligasa como se describe en (Changet al.Proc Natl Acad Sci USA. 20 de diciembre de 1994; 91(26): 12544-8 o en Hikariet al.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Volumen 18, número 22, 15 de noviembre de 2 O08, páginas 6000-6003).
Como alternativa, los péptidos pueden extenderse o modificarse mediante una conjugación adicional a través de enlaces disulfuro. Esto tiene la ventaja adicional de permitir que el primer y el segundo péptido se disocien entre sí una vez dentro del entorno reductor de la célula. En este caso, el armazón molecular (por ejemplo, TATA, TATB o TBMT) podría añadirse durante la síntesis química del primer péptido para que reaccione con los tres grupos de cisteína; a continuación, podría añadirse una cisteína o tiol adicional al extremo N o C del primer péptido, de modo que esta cisteína o tiol solo reaccionara con una cisteína o tiol libre del segundo péptido, formando un conjugado péptido-péptido bicíclico unido por disulfuro.
Además, la adición de otros grupos funcionales o grupos efectores puede lograrse de la misma manera, usando la química apropiada, acoplándose en los extremos N o C o a través de cadenas laterales. En una realización, el acoplamiento se realiza de tal manera que no bloquee la actividad de ninguna de las entidades.
Composiciones farmacéuticas
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un ligando peptídico como se define en el presente documento junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Generalmente, los presentes ligandos peptídicos se utilizarán en forma purificada junto con excipientes o portadores farmacológicamente apropiados. Típicamente, estos excipientes o portadores incluyen soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas o alcohólicas/acuosas, incluyendo medios salinos y/o tamponados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio y Ringer lactato. Los adyuvantes fisiológicamente aceptables adecuados, si son necesarios para mantener un complejo polipeptídico en suspensión, pueden elegirse de espesantes tales como carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, gelatina y alginatos.
Los vehículos intravenosos incluyen reponedores de líquidos y nutrientes y reponedores de electrolitos, tales como los basados en dextrosa de Ringer. También pueden estar presentes conservantes y otros aditivos, tales como agentes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y gases inertes (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16.a Edición).
Los ligandos peptídicos de la presente invención pueden usarse como composiciones administradas por separado o junto con otros agentes. Estos pueden incluir anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y diversos fármacos inmunoterápicos, tales como ciclosporina, metotrexato, adriamicina o cisplatino e inmunotoxinas. Ejemplos adicionales de otros agentes que pueden administrarse por separado o junto con los ligandos peptídicos de la invención incluyen citocinas, linfocinas, otros factores hematopoyéticos, factores trombolíticos y antitrombóticos. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir "cócteles" de diversos agentes citotóxicos u otros agentes junto con los ligandos proteicos de la presente invención, o incluso combinaciones de polipéptidos seleccionados de acuerdo con la presente invención que tienen diferentes especificidades, tales como polipéptidos seleccionados usando diferentes ligandos diana, ya sea que se agrupen o no antes de la administración.
La vía de administración de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención puede ser cualquiera de las conocidas comúnmente por los expertos en la técnica. Para la terapia, los ligandos peptídicos de la invención se pueden administrar a cualquier paciente de acuerdo con técnicas estándar. La administración puede ser por cualquier modo apropiado, incluyendo por vía parenteral, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, pulmonar, o también, adecuadamente, por infusión directa con un catéter. Preferentemente, las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se administrarán por vía intravenosa. La dosis y frecuencia de administración dependerán de la edad, el sexo y la afección del paciente, la administración simultánea de otros fármacos, contraindicaciones y otros parámetros que el médico debe tener en cuenta.
Los ligandos peptídicos de esta invención se pueden liofilizar para su almacenamiento y reconstituir en un portador adecuado antes de su uso. Se ha demostrado que esta técnica es eficaz y se pueden emplear técnicas de liofilización y reconstitución conocidas en la técnica. Los expertos en la técnica apreciarán que la liofilización y reconstitución pueden conducir a diversos grados de pérdida de actividad y que los niveles pueden tener que ajustarse hacia arriba para compensar.
Las composiciones que contienen los presentes ligandos peptídicos o un cóctel de los mismos se pueden administrar para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. En determinadas aplicaciones terapéuticas, una cantidad adecuada para lograr al menos una inhibición parcial, supresión, modulación, destrucción, o algún otro parámetro medible, de una población de células seleccionadas se define como una "dosis terapéuticamente eficaz". Las cantidades necesarias para lograr esta dosificación dependerán de la gravedad de la enfermedad, pero generalmente varían de 0,005 a 5,0 mg de ligando peptídico seleccionado por kilogramo de peso corporal, usándose más comúnmente dosis de 0,05 a 2,0 mg/kg/dosis. Para aplicaciones profilácticas, las composiciones que contienen los presentes ligandos peptídicos o cócteles de los mismos también pueden administrarse en dosis similares o ligeramente inferiores.
Una composición que contiene un ligando peptídico de acuerdo con la presente invención puede utilizarse en entornos profilácticos y terapéuticos para facilitar la alteración, inactivación, destrucción o eliminación de una población de células diana seleccionada en un mamífero. Además, los ligandos peptídicos descritos en el presente documento pueden usarse de manera extracorpórea o selectivain vitropara destruir, agotar o eliminar de otro modo de manera eficaz una población de células diana de una colección heterogénea de células. La sangre de un mamífero puede combinarse de manera extracorpórea con los ligandos peptídicos seleccionados, por lo que las células no deseadas se destruyen o se eliminan de otro modo de la sangre para devolverlas al mamífero de acuerdo con técnicas estándar.
Usos terapéuticos
Las referencias a métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnósticoin vivo).
Los ligandos polipeptídicos seleccionados de acuerdo con el método de la presente invención pueden emplearse en aplicaciones terapéuticas y profilácticasin vivo,aplicaciones de diagnósticoin vitroein vivo,aplicaciones de ensayo y reactivoin vitro,y similares. Los ligandos que tienen niveles seleccionados de especificidad son útiles en aplicaciones que implican pruebas en animales no humanos, donde la reactividad cruzada es deseable, o en aplicaciones de diagnóstico, donde la reactividad cruzada con homólogos o parálogos ha de ser controlada cuidadosamente. En algunas aplicaciones, tales como aplicaciones de vacuna, la capacidad de provocar una respuesta inmunitaria a intervalos predeterminados de antígenos puede ser aprovechada para adaptar una vacuna a enfermedades y patógenos específicos.
Los ligandos peptídicos sustancialmente puros de al menos el 90 al 95 % de homogeneidad son los preferidos para la administración a un mamífero, y del 98 al 99 % o más de homogeneidad es lo más preferido para usos farmacéuticos, especialmente cuando el mamífero es un ser humano. Una vez purificados, parcialmente o hasta homogeneidad según se desee, los polipéptidos seleccionados pueden usarse de manera diagnóstica o terapéutica (incluso de forma extracorpórea) o en el desarrollo y realización de procedimientos de ensayo, tinciones inmunofluorescentes y similares (Lefkovite y Pernis, (1979 y 1981) Immunological Methods, Volúmenes I y II, Academic Press, NY).
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un ligando peptídico o un conjugado de fármaco como se define en el presente documento, para su uso en la prevención, supresión o tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por linfocitos NK.
De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método para prevenir, suprimir o tratar una enfermedad o trastorno mediado por linfocitos NK, que comprende administrar a un paciente que lo necesite el ligando peptídico que se define en el presente documento.
En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por linfocitos NK se selecciona de trastornos inflamatorios, enfermedades autoinmunitarias y cáncer. En una realización adicional, la enfermedad o trastorno mediado por linfocitos NK se selecciona de: artritis reumatoide (RA), erosión ósea, abscesos intraperitoneales, enfermedad inflamatoria intestinal, rechazo de aloinjertos, psoriasis, angiogénesis, ateroesclerosis, asma, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico (SLE), trastornos de la superficie ocular (tales como ojo seco), espondilitis anquilosante, artritis psoriásica, cáncer (tales como mieloma múltiple y cáncer de mama).
En una realización adicional, la enfermedad o trastorno mediado por linfocitos NK se selecciona de cáncer.
Los ejemplos de cánceres (y sus equivalentes benignos) que pueden tratarse (o inhibirse) incluyen, pero sin limitación, tumores de origen epitelial (adenomas y carcinomas de diversos tipos, incluidos adenocarcinomas, carcinomas escamosos, carcinomas de células transicionales y otros carcinomas), tales como carcinomas de vejiga y tracto urinario, mama, tracto gastrointestinal (incluido el esófago, estómago (gástrico), intestino delgado, colon, recto y ano), hígado (carcinoma hepatocelular), vesícula biliar y sistema biliar, páncreas exocrino, riñón, pulmón (por ejemplo, adenocarcinomas, carcinomas pulmonares microcíticos, carcinomas pulmonares no microcíticos, carcinomas bronquioalveolares y mesoteliomas), cabeza y cuello (por ejemplo, cánceres de lengua, cavidad bucal, laringe, faringe, nasofaringe, amígdala, glándulas salivales, cavidad nasal y senos paranasales), ovario, trompas de Falopio, peritoneo, vagina, vulva, pene, cuello del útero, miometrio, endometrio, tiroides (por ejemplo, carcinoma folicular de tiroides), suprarrenal, próstata, piel y anexos (por ejemplo, melanoma, carcinoma basocelular, carcinoma escamocelular, queratoacantoma, nevo displásico); neoplasias hematológicas (es decir, linfomas) y trastornos hematológicos preneoplásicos y trastornos de bajo potencial neoplásico, incluyendo neoplasias hematológicas y afecciones relacionadas del linaje linfoide (por ejemplo, leucemia linfocítica aguda [ALL], leucemia linfocítica crónica [CLL], linfomas de linfocitos B, tales como linfoma difuso de linfocitos B grandes [DLBCL], linfoma folicular, linfoma de Burkitt, linfoma de células del manto, linfomas y leucemias de linfocitos T, linfomas de linfocitos citolíticos naturales [NK], linfomas de Hodgkin, leucemia de células pilosas, gamopatía monoclonal de significado incierto, plasmacitoma, mieloma múltiple y trastornos linfoproliferativos postrasplante), y neoplasias hematológicas y afecciones relacionadas de linaje mieloide (por ejemplo, leucemia mieloide aguda [AML], leucemia mieloide crónica [CML], leucemia mielomonocítica crónica [Cm Ml ], síndrome hipereosinofílico, trastornos mieloproliferativos tales como policitemia vera, trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria, síndrome mieloproliferativo, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica); tumores de origen mesenquimal, por ejemplo, sarcomas de tejido blando, hueso o cartílago, tales como osteosarcomas, fibrosarcomas, condrosarcomas, rabdomiosarcomas, leiomiosarcomas, liposarcomas, angiosarcomas, sarcoma de Kaposi, sarcoma de Ewing, sarcomas sinoviales, sarcomas epitelioides, tumores del estroma gastrointestinal, histiocitomas benignos y malignos y dermatofibrosarcoma protuberans; tumores del sistema nervioso central o periférico (por ejemplo, astrocitomas, gliomas y glioblastomas, meningiomas, ependimomas, tumores pineales y schwannomas); tumores endocrinos (por ejemplo, tumores pituitarios, tumores suprarrenales, tumores de células de los islotes, tumores paratiroideos, tumores carcinoides y carcinoma medular de la tiroides); tumores oculares y anexiales (por ejemplo, retinoblastoma); tumores de células germinales y trofoblásticos (por ejemplo, teratomas, seminomas, disgerminomas, molas hidatiformes y coriocarcinomas); y tumores pediátricos y embrionarios (por ejemplo, meduloblastoma, neuroblastoma, tumor de Wilms y tumores neuroectodérmicos primitivos); o síndromes, congénitos o de otro tipo, que dejan al paciente susceptible a la malignidad (por ejemplo, xeroderma pigmentoso).
Las referencias en el presente documento al término "prevención" implican la administración de la composición protectora antes de la inducción de la enfermedad. "Supresión" se refiere a la administración de la composición después de un acontecimiento inductivo, pero antes de la aparición clínica de la enfermedad. "Tratamiento" implica la administración de la composición protectora después de que se manifiesten los síntomas de la enfermedad.
Están disponibles sistemas de modelos animales que se pueden usar para evaluar la eficacia de los ligandos peptídicos en la protección contra la enfermedad o en el tratamiento de la misma. La presente invención facilita el uso de sistemas de modelos animales, que permite el desarrollo de ligandos polipeptídicos que pueden reaccionar de forma cruzada con dianas humanas y animales, para permitir el uso de modelos animales.
La invención se describe con más detalle a continuación con referencia a los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Materiales y métodos
Preparación de ligandos peptídicos bicíclicos (método general)
Los péptidos bicíclicos se sintetizaron en resina de amida Rink usando síntesis de péptidos en fase sólida Fmoc (9-fluorenilmetiloxicarbonilo) estándar, ya sea mediante acoplamiento manual (para gran escala) o usando un sintetizador de péptidos automatizado Biotage Syroll (para pequeña escala). Después de la escisión a base de TFA de la resina, los péptidos se precipitaron con éter dietílico y se disolvieron en 50:50 de acetonitrilo/agua. A continuación, péptidos en bruto (a una concentración de ~1 mM) se ciclaron con 1,3 equiv. del armazón, usando bicarbonato de amonio (100 mM) como base. La finalización de la ciclación se determinó mediante desorción-ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF) o LC-MS. Una vez completada, la reacción de ciclación se interrumpió usando N-acetil cisteína (10 equiv. con respecto al péptido), y las soluciones se liofilizaron. El residuo se disolvió en un disolvente apropiado y se purificó por RP-HPL<c>. Las fracciones de péptidos de suficiente pureza y el peso molecular correcto (verificado por MALDI-TOF y HPLC o LC-MS) se agruparon y se liofilizaron. Las concentraciones se determinaron por absorción UV usando el coeficiente de extinción a 280 nm, que se basó en el contenido de Trp/Tyr. Todos los aminoácidos, a menos que se indique de otro modo, se usaron en las configuraciones L.
Ejemplos
En general, algunos de los complejos de péptidos bicíclicos diméricos fluorescentes de la invención pueden prepararse de acuerdo con el siguiente método general:
Se disuelve una mezcla de BP24369 (1,0 equiv.) y AF488-NHS (1, 1,5 equiv.) en DMF. El pH de esta solución se ajusta a 8 mediante la adición gota a gota de DIEA (3,0 equiv.). La mezcla de reacción se agita a 25 °C durante 1 hora, a continuación se toma una muestra para análisis. Si la reacción está incompleta, se añade más cantidad de AF488-NHS y la mezcla se deja en agitación durante 1 hora más. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtra para eliminar el residuo no disuelto y el producto en bruto se purifica por HPLC preparativa para dar el intermedio2. Una mezcla de intermedio2(1,0 equiv.),biciclo(2,1 equiv.) y THPTA (2,2 equiv.) se disuelve en t-BuOH/H2O desgasificado (1:1), a continuación se añaden CuSO<4>acuoso (0,4 M, 2,2 equiv.) y VcNa (4,0 equiv.). Finalmente, se añade NH<4>HCO<3>0,2 M para ajustar el pH a 8. La mezcla de reacción se agita durante hasta 16 horas en una atmósfera de N<2>. La mezcla de reacción se purifica directamente por HPLC preparativa.
Los complejos peptídicos bicíclicos diméricos marcados con fluorescencia que se prepararon usando este método se enumeran a continuación:
A continuación se proporcionan experimentos más detallados para complejos multiméricos de péptidos bicíclicos seleccionados de la invención:
Síntesis del intermedio AF488-BP24369
Se disolvió una mezcla del compuesto 1 (10,0 mg, 18,2 pmol, 1,0 equiv.), el compuesto 2 (17,0 mg, 27,3 pmol, 1,5 equiv.) en DMF (0,4 ml). El pH de esta solución se ajustó a 8 mediante la adición gota a gota de DIEA (15,8 pl, 181,60 pmol, 3,0 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 1 hora. El análisis por LC-MS mostró queBP24369no se había consumido por completo, por lo que se añadió más cantidad del compuesto 2 (17,0 mg, 27,24 pmol, 1,5 equiv.) a la mezcla de reacción, que se agitó a 25 °C durante 1 h. El análisis por LC-MS mostró un pico principal con la m/z deseada. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el residuo no disuelto. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa y se obtuvoa F488-BP24369(10,0 mg, 8,90 pmol, 49,02 % de rendimiento, 95,0 % de pureza) en forma de un sólido de color rojo. PM calculado: 1067,1,m/zobservada; 1068,3 ([M+H]+), 534,7 ([M+2H]2+).
Síntesis de BCY15663
Se disolvió una mezcla del compuesto 1 (3,0 mg, 2,81 |jmol, 1,0 equiv.), el compuesto 2 (14,0 mg, 6,47 jmol, 2,3 equiv.) y THPTA (1,2 mg, 2,81 jmol, 1,0 equiv.) en t-BuOH/H2O (1:1, 0,5 ml), se desgasificó y se purgó con N<2>y, a continuación se añadieron una solución acuosa de CuSO<4>(0,4 M, 7,0 j l, 1,0 equiv.) y Vc (2,0 mg, 11,25 jmol, 4,0 equiv.) en una atmósfera de N<2>. El pH de esta solución se ajustó a 8, y la solución se volvió de color amarillo claro. La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 1 hora en una atmósfera de N<2>. El análisis por LC-MS mostró queAF488-BP24369se había consumido por completo, que quedaba parte deBCY15452y que se detectó un pico principal con la relación m/z deseada. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el residuo no disuelto. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa y se obtuvoBCY15663(9,4 mg, 1,66 jmol, 59,06 % de rendimiento, 96,4 % de pureza) en forma de un sólido de color blanco. PM calculado: 5377,9, m/z observada: 1345,5 ([M+4H]<4+>).
BCY15921
BCY15922
BCY15455
Síntesis de BCY15916
Se disolvió una mezcla del compuesto 1 (2,0 mg, 1,87 |jmol, 1,0 equiv.), el compuesto 2 (7,5 mg, 3,94 |jmol, 2,1 equiv.) y THPTA (1,8 mg, 4,12 jmol, 2,2 equiv.) en t-BuoH/H2O (1:1, 0,5 ml, se desgasificó y se purgó con N2) y, a continuación se añadieron una solución acuosa de CuSO4 (0,4 M, 10,3 jl, 2,2 equiv.) y VcNa (1,5 mg, 7,5 jmol, 4,0 equiv.) en una atmósfera de N2. El pH de esta solución se ajustó a 8 mediante la adición gota a gota de NH4HCO3 0,2 M (en 1:1 de t-BuOH/H2O), y la solución se volvió de color amarillo claro. La mezcla de reacción se agitó a 25 30 °C durante 1 h en una atmósfera de N2. El análisis por LC-MS mostró que el compuesto 1 se había consumido por completo, y se detectó un pico principal con la m/z deseada. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el residuo no disuelto. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa y se obtuvoBCY15916(1,6 mg, 0,30 jmol, 16,3 % de rendimiento, 93,3 % de pureza) en forma de un sólido de color blanco. PM calculado: 4875,5, m/z observada: 1219,6 ([M+4H]4+).
BCY15914
BCY15915
DATOS BIOLOGICOS
1. Ensayo de unión directa por polarización de fluorescencia (FP) de NKp46
La afinidad de los péptidos de la invención por NKp46 humano (Acro Biosystems, NC1-H5257 o NC1-H52H4) se determinó usando un ensayo de polarización de fluorescencia. Los péptidos de la invención se marcaron con una etiqueta fluorescente (fluoresceína) y se diluyeron a 2,5 nM en HEPES 25 mM con NaCI 100 mM y P20 al 0,005 %, pH 7,4. La proteína NKp46 se valoró comenzando a 0,2-5 pM en el mismo tampón de ensayo que el péptido para ensayar 1 nM de péptido en un volumen total de 25 pl en placas de 384 pocillos de pared y fondo de color negro de bajo volumen y baja unión. El ensayo se configuró típicamente añadiendo 5 pl de tampón de ensayo, 10 pl de proteína NKp46 y a continuación 10 pl de péptido fluorescente. Las concentraciones de proteína NKp46 fueron diluciones de 2 o 3 veces para dar 12 concentraciones diferentes comenzando en 0,2-5 pM. Las mediciones se realizaron en un BMG PHERAstar FS equipado con un módulo óptico FP 485520520 a 25 °C con 200 destellos por pocillo y un retraso de posicionamiento de 0,1 segundo. Cada pocillo se midió cada 5 minutos durante 60 minutos. La ganancia usada para el análisis se determinó para cada trazador al final de los 60 minutos donde no había proteína en el pocillo. Los mP se ajustaron a un modelo de unión estándar 1: 1 con una ecuación cuadrática para generar un valor de Kd. Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 1.
Materiales del ensayo de unión directa por FP:
Etiqueta Fc de NKp46 humana (Aero Biosystems, NC1-H5257)
Etiqueta His de NKp46 humana (Aero Biosystems, NC1-H52H4)
Tabla 1: Datos del ensayo de unión directa por polarización de fluorescencia para péptidos bicíclicos seleccionados de la invención
2. Ensayo de unión competitiva por polarización de fluorescencia (FP) de NKp46
Las afinidades de los péptidos de la invención se determinaron en un ensayo de competencia de polarización de fluorescencia (FP) usando el péptido marcado con fluorescencia BCY15035 como el trazador que compite con los péptidos no marcados.
Los péptidos competidores no marcados se diluyeron en un tampón de ensayo HEPES 25 mM, NaCl 100 mM, P20 al 0,01 %, pH 7,4, hasta una concentración máxima de 5000 nM y se diluyeron 2 veces en 11 etapas. La proteína marcada con his NKp46 humana (AcroBiosystems) se diluyó hasta una concentración final de 40 nM en el ensayo. Finalmente, se añadió el péptido trazador fluorescente BCY15035 a 1 nM. El ensayo se preparó típicamente añadiendo 5 pl de competidor, 10 pl de proteína NKp46 y a continuación 10 pl de péptido fluorescente. El volumen total de 25 pl se preparó en placas de 384 pocillos de bajo volumen y baja unión con fondo plano y paredes de color negro. Las mediciones se realizaron usando Envision (PerkinElmer) equipado con el filtro de excitación FITC FP 480, el filtro de emisión FITC FP P-pol 535 y el 2.° filtro de emisión FITC FP S-pol 535 y configurado a 30 destellos. La ganancia se estableció en un pocillo que contenía solo el trazador sin proteína diana. Los valores de mP en la lectura final a los 60 minutos se transformaron en porcentaje de inhibición y se usaron para calcular los valores de Ki (Kcomp) en el programa informático Sigmaplot (Systat Software Inc) usando la ecuación a continuación:
f= ymáx+(ymín-ymáx)/L¡g*((Ug*((2*((Klig+Kcomp+L¡g+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+KI¡g*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))A0,5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Ug+Comp-Prot*c)A3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Cornp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*KI¡g*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Cornp-Prot*c)+Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+L¡g+Comp-Prot*c)))/((3*Klig)+((2*((Klig+Kcomp+Ug+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+KI¡g*Kcomp))A0,5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A3+9*(Klig+Kcomp+L¡g+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c))))
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2: Datos del ensayo de polarización de fluorescencia de competencia para péptidos bicíclicos seleccionados de la invención
continuación
3a. Ensayo SPR de NKp46 (Método 1)
Se realizaron experimentos SPR para determinar los valores de ka (M-1s-1), kd (s-1), K<d>(nM) (cuando fueron medibles) de diversos péptidos bicíclicos con respecto a NKp46 inmovilizado.
Para el análisis de la unión del péptido a NKp46, se usó un instrumento Biacore 3000 con un chip de estreptavidina Cytiva. La captura de la proteína (fusión NKp46-Fc humana recombinante biotinilada mediante Avi-tag) se realizó a 25 °C con HBS-N (HEPES 10 mM, NaCl 0,15 M, pH 7,4) como tampón de ejecución y se capturó NKp46 biotinilado a un nivel de 400-800 UR usando una dilución de proteína a 0,2 pM en tampón. A continuación, se cambió el tampón a PBS/Tween 20 al 0,05 % y se preparó una serie de diluciones de los péptidos en este tampón con una concentración final de DMSO del 0,5 % con una concentración máxima de péptidos de 100 nM-5000 nM y 6 diluciones más de 2 o 3 veces. El análisis SPR se realizó a 25 °C y a un caudal de 50 pl/min con 60 segundos de tiempo asociación y 200 400 segundos de tiempo de disociación. Los datos se corrigieron para determinar los efectos de volumen excluidos del DMSO. Se hizo referencia a todos los datos dos veces para las inyecciones en blanco y la superficie de referencia usando procedimientos de procesamiento estándar, y el procesamiento de datos y el ajuste cinético se realizaron usando el programa informático Scrubber, versión 2.0c (BioLogic Software). Los datos se ajustaron usando un modelo de unión simple 1:1 que permite efectos de transporte de masa cuando corresponde.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 3A.
Tabla 3A: Datos del ensayo eleccionados de la invención
3b. Ensayo SPR de NKp46 (Método 2)
Los péptidos se ensayaron frente a NKp46 humano marcado con Fc (ACROBiosystems, n.° de cat. NC1-H5257).
Para el análisis de la unión de péptidos, se usó un instrumento Biacore 8k+ con un chip CM5 (Cytiva). Todos los experimentos se realizaron a 25 °C. El anticuerpo anti IgG humana (Fc) (Cytiva) se inmovilizó en todas las celdas de flujo mediante química de acoplamiento de amina estándar. El tampón de ejecución fue HBS-N (Cytiva, HEPES 10 mM, NaCl 0,15 M, pH 7,4) y el caudal fue de 10 pl/min. La superficie de carboximetil dextrano se activó con una relación 1:1 de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) 0,4 M/N-hidroxi succinimida (NHS) 0,1 M (Cytiva) durante 420 s. El anticuerpo anti IgG humana (Fc) se diluyó a 12,5 pg/ml en acetato de sodio 10 mM, pH 5,0, y se inyectó en la superficie del chip durante 360 s. Los grupos activados residuales se bloquearon con una inyección de 420 s de etanolamina 1 M (pH 8,5). La densidad superficial final fue de 3000-5000 UR. El NKp46 humano marcado con Fc se diluyó a 0,1 pM en HBS-N y se capturó solo en la celda de flujo 2 del chip sensor a un caudal de 10 pl/min a 500-1000 UR. A continuación, el tampón se cambió a PBS-P+ (Cytiva) complementado con DMSO al 2 %. Se prepararon diluciones de péptidos en este tampón para dar una concentración final de DMSO al 2 %. El caudal fue de 50 pl/min con una asociación de 60 s y una disociación de 400 s. Los datos se corrigieron para determinar los efectos de exclusión de volumen del DMSO. Se hizo referencia a todos los datos dos veces frente a inyecciones en blanco y la respuesta de la superficie de referencia usando procedimientos de procesamiento estándar. El procesamiento de datos y el ajuste cinético se realizaron usando el programa informático de evaluación Biacore Insight con la extensión de caracterización y detección extendida (Cytiva). Los datos se ajustaron usando un modelo de unión de 1:1 de afinidad de estado estable para determinar K<d>. Los datos se ajustaron usando un modelo de unión cinética de 1:1 para determinar las constantes cinéticas cuando correspondía.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el Método 1 y/o el Método 2 y los resultados se muestran en la Tabla 3B.
Tabla 3B: Datos del ens PR r i i í li l ionados de la invención
(continuación)
(continuación)
(continuación)
(continuación)
4. Unión a la línea celular CHO-K1/NKp46
La afinidad de los péptidos bicíclicos diméricos NKp46 conjugados con Alexa Fluor® 488 con las células CHO-K1 que sobreexpresan NKp46 disponibles comercialmente se determinó mediante un ensayo de citometría de flujo.
Las células CHO-K1 disponibles comercialmente transfectadas de forma estable con el receptor celular natural activador humano 46 (NKp46, también conocido como receptor desencadenante de citotoxicidad natural 1 (NCR1) o CD355), denominadas en el presente documento células CHO-K1/NKp46, se obtuvieron en Abeomics. Las células CHO-K1/NKp46 se cultivaron en medio DMEM (Corning® 15-017 CV) complementado con suero fetal bovino al 10 % inactivado por calor (FBS; Corning® 35-01 1-<c>V), HEPES 10 mM (Gibco™ 15-630-080), penicilina estreptomicina al 1 % (Corning™ 30-002-CI) y 10 pg/ml de blasticidina (Gibco™ A1113902). Las condiciones de mantenimiento del cultivo y de pase se siguieron de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
El día del experimento, las células CHO-K1/NKp46 se separaron del recipiente de cultivo con tripsina/EDTA, se lavaron una vez a 500 rpm durante 5 minutos en 15 ml de medio de trabajo precalentado definido como: Medio DMEM (Corning® 15-017 CV) complementado con suero fetal bovino 10 % inactivado por calor (FBS; Corning® 35-011-CV), HEPES 10 mM (Gibco™ 15-630-080) y penicilina estreptomicina al 1 % (Corning™ 30-002-CI). A continuación, el sedimento celular se suspendió de nuevo en medio de trabajo a una concentración de 3 x 105 células/ml. Posteriormente, se sembraron 100 pl de suspensión celular en una placa de polipropileno de fondo en V de 96 pocillos (Greiner Bio-One 651201).
Los péptidos bicíclicos diméricos NKp46 conjugados con Alexa Fluor® 488 se diluyeron en un medio de trabajo y se añadieron a la placa a una concentración inicial de 1 pM y se valoraron en una serie de diluciones de 1:4 para realizar una dilución en serie de 11 puntos. A continuación, las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad. Después de la incubación, las placas se centrifugaron a 500 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se descartó. A continuación, las muestras se lavaron dos veces en 200 pl de solución salina tamponada con fosfato 1x (PBS; Gibco™ 10-010-023) a 500 rpm durante 5 minutos. Las células se suspendieron de nuevo en 100 |jl de PBS y se transfirieron a una nueva placa de polipropileno de fondo en V de 96 pocilios (Greiner Bio-One 651201). Las placas se centrifugaron a 500 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se descartó.
Preparación de muestras para citometría de flujo: Se preparó el colorante de viabilidad fijable Zombie Violet™ (BioLegend® 423113) como una dilución de 1:1000 en<p>B<s>y se añadieron 100 j l de colorante de viabilidad a cada pocillo y se incubaron en la oscuridad a 4 °C durante 30 minutos. Para asegurar la expresión de NKp46, las células CHO-K1/NKp46 no tratadas se tiñeron con anti NKp46 humano o con un control de isotipo. Los cócteles de anticuerpos se prepararon diluyendo 1,5 j l de PE anti NKp46 humano (BioLegend® 331908; clon 9E2) o control de isotipo PE para IgG1,k(BioLegend® 400112), por 100 j l de tampón de tinción (PBS 1x complementado con FBS al 2 %). Las células se suspendieron de nuevo en un cóctel de mezcla maestra (100 j l) y se incubaron a 4 °C durante 30 minutos en la oscuridad. Posteriormente, las células se lavaron 3 veces en 100 j l de tampón de tinción durante 5 minutos a 500 rpm y el sobrenadante se descartó. Las células resuspendidas en 200 j l de tampón de tinción se mantuvieron a 4 °C y en la oscuridad hasta que se leyeron con el citómetro de flujo BD FACsCelesta™.
Los resultados de la citometría de flujo se analizaron en el programa informático FlowJo™ con una estrategia de selección para excluir los desechos, selección de células individuales y vivas únicamente, y determinación de la media geométrica de las poblaciones de Alexa Fluor® 488 /-. La afinidad de unión de los péptidos bicíclicos se calculó usando una regresión logística de cuatro parámetros usando el programa informático Prism GraphPad.
Los datos que se muestran en la Figura 1 y la Tabla 4 ilustran que los dímeros peptídicos bicíclicos NKp46 marcados con Alexa Fluor® 488 se unen de manera dependiente de la dosis a las células que expresan NKp46.
Tabla 4: Afinidades de unión (K<d,ap>) para la unión de péptidos bicíclicos del dímero NKp46 Alexa Fluor® 488 a células CHO-K1/NK 46
5. Unión a PBMC
La afinidad de los péptidos bicíclicos diméricos NKp46 conjugados con Alexa Fluor® 488 con las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) primarias sanas se evaluó mediante un ensayo de citometría de flujo.
El día del experimento, el medio se preparó complementando RPMI-1640 (Gibco™ 11875-093; con L-glutamina) con suero fetal bovino al 10 % inactivado por calor (FBS; Corning® 35-011-CV), HEPES 10 mM (Gibco™ 15-630-080) y penicilina estreptomicina al 1 % (Corning™ 30-002-CI), denominado en el presente documento medio de trabajo. Las células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) aisladas previamente de sangre completa se descongelaron rápidamente en un baño de agua y se lavaron una vez a 500 rpm durante 5 minutos en 10 ml de medio de trabajo precalentado. A continuación, el sedimento de PBMC se suspendió de nuevo a una concentración de 5 x 106 células/ml en medio de trabajo y se dejó reposar durante una noche (12-18 horas) en posición horizontal en un matraz recubierto para cultivo tisular (T-183; CELLTREAT Scientific 229351).
Después de la incubación durante una noche, las PBMC se retiraron del matraz y se lavaron una vez a 500 rpm durante 5 minutos en 10 ml de medio de trabajo precalentado. A continuación, el sedimento de PBMC se suspendió de nuevo en medio de trabajo a una concentración de 5 x 105 células/ml. Posteriormente, se sembraron 100 j l de suspensión celular en una placa de polipropileno de fondo en V de 96 pocillos (Greiner Bio-One 651201). Los péptidos bicíclicos se diluyeron en medio de trabajo y se añadieron a la placa de células correspondiente a una concentración inicial de 300 nM valorada en una serie de diluciones de 1:4 para realizar una dilución en serie de 12 puntos. A continuación, las placas se incubaron durante 1 hora a 37 °C, CO2 al 5 %. Después de la incubación, la placa se centrifugó a 500 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se descartó. A continuación, las muestras se lavaron una vez en 200 j l de solución salina tamponada con fosfato 1x (PBS; Gibco™ 10-010-023) a 500 rpm durante 5 minutos y el sobrenadante se descartó.
Preparación de muestras para citometría de flujo: Se preparó el colorante de viabilidad fijable Zombie Aqua™ (BioLegend® 423102) como una dilución de 1:1000 en p Bs y se añadieron 100 j l de colorante de viabilidad a cada pocillo y se incubaron en la oscuridad a 4 °C durante 30 minutos. Posteriormente, los pocillos se lavaron con 100 j l de PBS durante 5 minutos a 500 rpm y el sobrenadante se descartó. A continuación, se preparó el bloque humano TruStain FcX™ (BioLegend® 422302) diluyendo 1,5 j l de FcX en 25 j l de tampón de tinción (pBS 1x complementado con FBS al 2 %). La solución de bloque Fc (25 jl/pocillo) se incubó a temperatura ambiente (TA) durante 10 minutos en la oscuridad. El cóctel de mezcla maestra de anticuerpos se preparó diluyendo 1,5 |jl de los siguientes anticuerpos por 100 j l de tampón de tinción: anti CD3 humano Brilliant Violet 605™ (BioLegend® 344836; clon SK7), y anti<c>D56 humano PE/Cyanine7 (BioLegend® 362510; clon 5.1H11). Las células se suspendieron de nuevo en el cóctel de mezcla maestra (100 j l) y se incubaron a 4 °C durante 30 minutos en la oscuridad. Posteriormente, las células se lavaron 3 veces en 100 j l de tampón de tinción durante 5 minutos a 500 rpm y el sobrenadante se descartó. Las células se resuspendieron en 200 j l de tampón de tinción y se mantuvieron a 4 °C en la oscuridad hasta que se leyeron con el citómetro de flujo BD FACSCelesta™.
Los resultados de la citometría de flujo se analizaron en el programa informático FlowJo™ con una estrategia de selección para evaluar la población de linfocitos y a continuación excluir los restos, seleccionar únicamente células individuales y vivas y determinar la media geométrica de Alexa Fluor® 488 en las poblaciones CD3+ y CD3-/CD56+. Las afinidades de unión se calcularon usando una regresión logística de cuatro parámetros con el programa informático Prism GraphPad™ 8.0.2.
Tabla 5: Afinidades de unión (K<d,ap>) para los dímeros NKp46 Alexa Fluor<®>488 a subpoblaciones en células
PBMC
Los datos que se muestran en la Tabla 5 y la figura 2 demuestran que el NKp46 marcado con Alexa Fluor® 488 BCY15663 produce una unión dependiente de la dosis solo a los linfocitos NK (poblaciones CD56+). Comparativamente, el NKp46 marcado con Alexa Fluor® 488 BCY15665 sin unión no produce unión en ninguna población de PBMC.
6a. Descripción experimental de SPR de FcvRIII (CD16a) (Método A)
Se realizaron experimentos SPR para determinar los valores de ka (M 'V ) , kd (s-1), K<d>(nM) (cuando fueron medibles) de diversos péptidos bicíclicos con respecto a proteínas FcyRIII humanas inmovilizadas.
Para el análisis de la unión de péptidos, se usó un instrumento Biacore 3000 o T200 con un chip CM5 (GE Healthcare). La estreptavidina se inmovilizó en el chip usando química de acoplamiento de amina estándar a 25 °C con HBS-N (HEPES 10 mM, NaCl 0,15 M, pH 7,4) como tampón de ejecución. Brevemente, la superficie de carboximetildextrano se activó con una inyección de 7 min de una relación 1:1 de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) 0,4 M/N-hidroxisuccinimida (NHS) 0,1 M a un caudal de 10 jl/min. Para la captura de estreptavidina, la proteína se diluyó a 0,2 mg/ml en acetato de sodio 10 mM (pH 4,5) y se capturó inyectando 120 j l de sobre la superficie del chip activado. Los grupos activados residuales se bloquearon con una inyección de 7 min de etanolamina 1 M (pH 8,5) y el FcyRIII biotinilado se capturó a un nivel de 400-1.400 UR. El tampón se cambió a PBS/Tween 20 al 0,05 % y se preparó una serie de diluciones de los péptidos en este tampón con una concentración final de DMSO del 0,5 %. La concentración máxima de péptidos varió entre 200 nM-20 jM (dependiendo de la afinidad esperada) con 6 diluciones adicionales de 2 o 3 veces. El análisis SPR se realizó a 25 °C a un caudal de 50 jl/m in con 60 segundos de asociación y disociación entre 60 y 200 segundos. Los datos se corrigieron para determinar los efectos de volumen excluidos del DMSO. Se hizo referencia a todos los datos dos veces para las inyecciones en blanco y la superficie de referencia usando procedimientos de procesamiento estándar, y el procesamiento de datos y el ajuste cinético se realizaron usando el programa informático Scrubber, versión 2.0c (BioLogic Software). Los datos se ajustaron usando un modelo de unión simple 1:1 que permite efectos de transporte de masa cuando corresponde.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 6A:
Tabla 6A: Datos del ensayo PR r i i í li eleccionados de la invención
6b. Descripción experimental de SPR de FcvRIII (CD16a) (Método B)
Para el análisis de la unión de péptidos, se usó un instrumento Biacore 8k+ con un chip CM5 (Cytiva). Todos los experimentos se realizaron a 25 °C. La estreptavidina se inmovilizó en todas las celdas de flujo mediante química de acoplamiento de amina estándar. El tampón de ejecución fue HBS-N (Cytiva, HEPES 10 mM, NaCl 0,15 M, pH 7,4) y el caudal fue de 10 jl/min. La superficie de carboximetil dextrano se activó con una relación 1:1 de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) 0,4 M/N-hidroxi succinimida (NHS) 0,1 M (Cytiva) durante 420 s. La estreptavidina (ProSpec, n.° de cat. PRO-791) se diluyó a 0,2 mg/ml en acetato de sodio 10 mM, pH 4,5, y se inyectó sobre la superficie del chip durante 600 s. Los grupos activados residuales se bloquearon con una inyección de 420 s de etanolamina 1 M (pH 8,5). La densidad superficial final fue de 2000-3000<u>R. El CD16a biotinilado se diluyó a 5 |jg/ml en HBS-N y se capturó solo en la celda de flujo 2 del chip de estreptavidina a un caudal de 10 jl/m in a 1500 2500 UR. A continuación, el tampón se cambió a PBS-P+ (Cytiva) complementado con DMSO al 0,5-2 %. Se prepararon diluciones de péptidos en este tampón para dar una concentración final de DMSO al 0,5-2 %. El caudal fue de 30 jl/m in con una asociación de 100 s y una disociación de 400 s. Los datos se corrigieron para determinar los efectos de exclusión de volumen del DMSO. Se hizo referencia a todos los datos dos veces frente a inyecciones en blanco y la respuesta de la superficie de referencia usando procedimientos de procesamiento estándar. El procesamiento de datos y el ajuste cinético se realizaron usando el programa informático de evaluación Biacore Insight con la extensión de caracterización y detección extendida (Cytiva). Los datos se ajustaron usando un modelo de unión de 1:1 de afinidad de estado estable para determinar Kd. Los datos se ajustaron usando un modelo de unión cinética de 1:1 para determinar las constantes cinéticas cuando correspondía.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el Método A y/o el Método B y los resultados se muestran en la Tabla 6B:
Tabla 6B: D l n PR r i i í li l i n la invención
(continuación)
(continuación)
(continuación)
7. Ensayo de competencia de IgG
Los péptidos bicíclicos se evaluaron con un ensayo de competencia de CD16a-IgG usando la tecnología AlphaScreen™ de Perkin Elmer. Las perlas aceptoras (Perkin Elmer 6762003) se conjugaron químicamente a través de una reacción de aminación reductora con un mAb IgG2a de ratón para unirse a través de las aminas libres, según el protocolo del fabricante. Brevemente, las perlas se centrifugaron y se suspendieron de nuevo en una solución tamponada con fosfato de sodio 130 mM a pH 8,0 que contenía 0,2 mg de mAb, NaBHaCN 20 mM (Sigma 296945) y tensioactivo P20 al 0,06 % (Cytiva Life Sciences, b R-1000-54) y se incubaron en un agitador rotatorio a 44 °C durante 22 horas. A continuación, los sitios no unidos se bloquearon añadiendo una concentración final de 3 mg/ml de carboximetoxilamina (CMO) (Sigma C13408), antes de continuar la incubación con agitación durante 1 hora más. Las perlas se lavaron por centrifugación y resuspensión en TRIS-HCl 100 mM a pH 8,0 (Sigma T2694), antes de una resuspensión final en PBS (GIBCO 14190) Proclin-300 al 0,05 % (Sigma 48912-U), a 5 mg/ml y almacenamiento a 4 °C hasta su uso.
El ensayo se realizó en placas de color blanco de 384 pocillos (PerkinElmer, 6007290) usando tampón de ensayo HEPES 25 mM (Sigma-Aldrich, H0887), NaCl 100 mM (Sigma-Aldrich, S5150), BSA al 0,5 % (Sigma-Aldrich, A3294), P20 al 0,05 % (Cytiva Life Sciences, BR-1000-54), pH 7,4 para todas las diluciones. Los péptidos bicíclicos se titularon y se incubaron con una concentración final de 10 nM de CD16a F176 humano biotinilado en el extremo C (ACRO Biosystems CDA-H82E8) o la variante V176 biotinilada en el extremo N (R&D Systems 4325-Fc, biotinilada internamente) y se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las perlas aceptoras conjugadas con IgG2a de ratón descritas anteriormente se añadieron a una concentración final de 20 ug/ml y se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos con luz tenue. Se añadieron perlas donantes recubiertas con estreptavidina (PerkinElmer, 6760002) a una concentración final de 20 ug/ml y se incubaron a temperatura ambiente durante 60 minutos con luz tenue. La luminiscencia tras la excitación a 570 nM se leyó utilizando un lector de placas Pherastar FS de BMG Labtech. Los datos se normalizaron con respecto a un control alto que contenía todos los componentes del ensayo excepto el péptido bicíclico y se ajustaron a una regresión no lineal de cuatro parámetros en GraphPad Prism 8.0.2 para generar un valor de CI50.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 7 y las figuras 3 y 4. Los datos de la Tabla 7 y las figuras 3 y 4 muestran que los péptidos de la invención se unen a un epítopo biológicamente relevante en FcyRIIIA (variantes F y V) y pueden competir con IgG por la unión a este epítopo.
Tabla 7: Datos^ l n m n i I r i i í li l i n e la invención
continuación
8. Ensayo HTRF de CD16a/FCgRIIIa
La unión a CD16a/FCgRllla celular (variante F158) se determinó a través de la competencia con IgG por la unión a los receptores CD16a expresados en células HEK293. Este ensayo se basó en la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FREt ) mediante la cual un destello de luz inducirá FRET entre el colorante donante de terbio CD16a del aceptor IgG-d2 cuando el par donante-aceptor está en estrecha proximidad, lo que da como resultado una señal fluorescente. El anticuerpo no marcado o los péptidos bicíclicos que compiten con el aceptor IgG-d2 reducen la señal general de una manera dependiente de la dosis, lo que permite determinar los valores de CI50.
El procedimiento experimental siguió las instrucciones del fabricante detalladas en la información del producto para el kit CD16 (FCyRllla) (Cisbio-6FR3APAG). Se incluyeron dos anticuerpos IgG humanos como controles (Cisbio-6FR3APAG, concentración máxima de 267 nM y R&D systems-1-001-A, concentración máxima de 3000 nM). Se preparó el tampón Tag-lite para generar la solución aceptora de IgG-d2. Se dispensaron péptidos bicíclicos usando el manipulador de compuestos Echo a una concentración máxima de 20 pM. Los anticuerpos competidores no marcados y los péptidos bicíclicos se añadieron en una serie de diluciones triples en tampón Tag-lite en PerkinElmer-ProxiPlate-384 Plus.
Las células HEK293 que expresaban CD16a marcado con terbio se descongelaron, se lavaron en PBS y se añadieron a los pocillos de PerkinElmer-ProxiPlate-384 Plus que contenían los compuestos competidores. Finalmente, se añadió el reactivo aceptor de IgG-d2 y la placa se incubó durante 2 h a TA. La señal FRET se leyó en el lector de placas Envision usando las configuraciones Ex 340 nM y Em 655/620 nM. Los datos se representaron gráficamente en Graph pad prism y se determinaron los valores de CI50 para indicar la competencia de anticuerpos no marcados o péptidos bicíclicos por la unión celular al receptor CD16a.
Los péptidos seleccionados de la invención se ensayaron en el ensayo mencionado anteriormente y los resultados se muestran en la Tabla 8:
Tabla 8: Datos del ensayo de competencia de IgG para péptidos bicíclicos seleccionados de la invención
HTRF
continuación
LISTA DE REFERENCIAS
Muta Tet al,Nature. 1994 Mar 3;368(6466):70-3. doi: 10.1038/368070a0. Erratum in: Nature. 1994 May 26;369(6478):340. PMID: 8107887.
Ravetch JV, Bolland S. IgG Fc receptors. Annu Rev Immunol. 2001;19:275-90. doi: 10.1146/annurev.immunol.19.1.275. PMID: 11244038.
Arnould Let al.,Br J Cancer. 2006 Jan 30;94(2):259-67. doi: 10.1038/sj.bjc.6602930. PMID: 16404427; PMCID: PMC2361112.
Zhang Wet al.,J Clin Oncol. 2007 Aug 20;25(24):3712-8. doi: 10.1200/JCO.2006.08.8021. PMID: 17704420., Zhang Xet al,Mol Immunol. 2020 Mar;119:48-58. doi: 10.1016/j.molimm.2020.01.009. Epub 2020 Jan 21. PMID: 31978707.,
Wu SYet al,Mol Cancer. 2020 Aug 6;19(1):120. doi: 10.1186/s12943-020-01238-x. PMID: 32762681; PMCID: PMC7409673.
Manches Oet al,Blood. 2003 Feb 1;101(3):949-54. doi: 10.1182/blood-2002-02-0469. Epub 2002 Oct 3. PMID: 12393572.
Clynes RAet al,Nat Med. 2000 Apr;6(4):443-6. doi: 10.1038/74704. PMID: 10742152. Riddle DSet al,Hum Gene Ther. 2005 Jul;16(7):830-44. doi: 10.1089/hum.2005.16.830. PMID: 16000065.
Rataj Fet al,Br J Cancer. 2019 Jan;120(1):79-87. doi: 10.1038/s41416-018-0341-1. Epub 2018 Nov 15. PMID: 30429531; PMCID: PMC6325122.
Caratelli Set al,Front Immunol. 2017 Apr 27;8:457. doi: 10.3389/fimmu.2017.00457. PMID: 28496440; PMCID: PMC5406408.
Salmón JEet al,Arthritis Rheum. 2001 Apr;44(4):739-50. doi: 10.1002/1529-0131(200104)44:4<739::AID-ANR129>3.0.CO;2-O. PMID: 11315912.
Morgan AWet al,Rheumatology (Oxford). 2003 Apr;42(4):528-33. doi: 10.1093/rheumatology/keg169. PMID: 12649399.
Wu Jet al,J Clin Invest. 1997 Sep 1;100(5):1059-70. doi: 10.1172/JCI119616. PMID: 9276722; PMCID: PMC508280.
Nabbe KCet al,Arthritis Rheum. 2003 Jan;48(1):255-65. doi: 10.1002/art. 10721. PMID: 12528127.
Kleinau Set al,J Exp Med. 2000 May 1;191(9):1611-6. doi: 10.1084/jem.191.9.1611. PMID: 10790435; PMCID: PMC2213438.
Bolland Set al,Immunity. 2000 Aug;13(2):277-85. doi: 10.1016/s1074-7613(00)00027-3. PMID: 10981970. Salmon JEet al,Arthritis Rheum. 2001 Apr;44(4):739-50. doi: 10.1002/1529-0131(200104)44:4<739::AID-ANR129>3.0.CO;2-O. PMID: 11315912.
Boruchov AMet al,J Clin Invest. 2005 Oct;115(10):2914-23. doi: 10.1172/JCI24772. Epub 2005 Sep 15. PMID: 16167082; PMCID: PMC1201664.
Chen JYet al,Arthritis Rheumatol. 2014 Nov;66(11):3113-21. doi: 10.1002/art.38813. PMID: 25154742; PMCID: PMC4232894.
Henriques Aet al,Rheumatol Int. 2012 Apr;32(4):863-9. doi: 10.1007/s00296-010-1709-6. Epub 2011 Jan 8. PMID: 21221593.
Chen JYet al,Arthritis Rheumatol. 2014 Nov;66(11):3113-21. doi: 10.1002/art.38813. PMID: 25154742; PMCID: PMC4232894.
Clarkson SBet al,N Engl J Med. 1986 May 8;314(19):1236-9. doi: 10.1056/NEJM198605083141907. PMID: 2939345.
Flaherty MMet al,Toxicol Sci. 2012 Jan;125(1):299-309. doi: 10.1093/toxsci/kfr278. Epub 2011 Oct 24. PMID: 22025730.
Anthony RMet al,Science. 2008 Apr 18;320(5874):373-6. doi: 10.1126/science.1154315. PMID: 18420934; PMCID: PMC2409116.
Debré Met al,Lancet. 1993 Oct 16;342(8877):945-9. doi: 10.1016/0140-6736(93)92000-j. PMID: 8105212., Hsu CHet al,Pediatr Infect Dis J. 1993 Jun;12(6):509-12. doi: 10.1097/00006454-199306000-00010. PMID: 8345983.
Ortiz DFet al,Sci Transl Med.2016 Nov 16;8(365):365ra158. doi: 10.1126/scitranslmed.aaf9418. PMID: 27856797. Li Xet al,Expert Opin Ther Targets. 2014 Mar;18(3):335-50. doi: 10.1517/14728222.2014.877891. PMID: 24521454; PMCID: PMC4019044.
Pasero Cet al,Oncotarget. 2015 Jun 10;6(16):14360-73. doi: 10.18632/oncotarget.3965. PMID: 25961317; PMCID: PMC4546472.
Stringaris Ket al,Haematologica. 2014 May;99(5):836-47. doi: 10.3324/haematol.2013.087536. Epub 2014 Jan 31. PMID: 24488563; PMCID: PMC4008119.
Chinnery Fet al,Oncoimmunology. 2012 Sep 1;1(6):874-883. doi: 10.4161/onci.20636. PMID: 23162755; PMCID: PMC3489743.
Arnon TIet al,Blood. 2004 Jan 15;103(2):664-72. doi: 10.1182/blood-2003-05-1716. Epub 2003 Sep 22. PMID: 14504081.
Moretta Letal,Semin Immunol. 2006 Jun;18(3):151-8. doi: 10.1016/j.smim.2006.03.002. Epub 2006 May 26. PMID: 16730454.
Costello RTet al,Blood. 2002 May 15;99(10):3661-7. doi: 10.1182/blood.v99.10.3661. PMID: 11986221.
Garcia-Iglesias Tet al,BMC Cancer. 2009 Jun 16;9:186. doi: 10.1186/1471-2407-9-186. PMID: 19531227; PMCID: PMC2704222.
Nayyar Get al,Front Oncol. 2019 Feb 11;9:51. doi: 10.3389/fonc.2019.00051. PMID: 30805309; PMCID: PMC6378304.
Stojanovic Aet al,J Innate Immun. 2011;3(4):355-64. doi: 10.1159/000325465. Epub 2011 Apr 18. PMID: 21502747.
Sordo-Bahamonde Cet al,Cancers (Basel). 2020 Apr 7;12(4):893. doi: 10.3390/cancers12040893. PMID: 32272610; PMCID: PMC7226138.
Watanabe Met al,Dis Esophagus. 2010 Nov;23(8):675-81. doi: 10.1111/j. 1442-2050.2010.01073.x. PMID: 20545975.
Izawa Set al,Cancer Immunol Immunother. 2011 Dec;60(12):1801-10. doi: 10.1007/s00262-011-1082-7. Epub 2011 Aug 3. PMID: 21811786.
Koo KCet al,PLoS One. 2013 Nov 4;8(11):e78049. doi: 10.1371/journal.pone.0078049. PMID: 24223759; PMCID: PMC3817174.
Sun Cet al,Cell Mol Immunol. 2015 May;12(3):292-302. doi: 10.1038/cmi.2014.91. Epub 2014 Oct 13. PMID: 25308752; PMCID: PMC4654321.
Hasmim Met al,Front Immunol. 2015 Sep 23;6:482. doi: 10.3389/fimmu.2015.00482. PMID: 26441986; PMCID: PMC4585210.
Han Bet al,J Immunol Res. 2018 Sep 3;2018:6248590. doi: 10.1155/2018/6248590. PMID: 30255106; PMCID: PMC6140275.
Stringaris Ket al,Haematologica. 2014 May;99(5):836-47. doi: 10.3324/haematol.2013.087536. Epub 2014 Jan 31. PMID: 24488563; PMCID: PMC4008119.
Rocca YSet al,Front Immunol. 2016 Oct 10;7:413. doi: 10.3389/fimmu.2016.00413. PMID: 27777574; PMCID: PMC5056190.
Gauthier Let al,Cell. 2019 Jun 13;177(7):1701-1713.e16. doi: 10.1016/j.ceN.2019.04.041. Epub 2019 May 30. PMID: 31155232.
Fauriat Cet al,Blood. 2007 Jan 1;109(1):323-30. doi: 10.1182/blood-2005-08-027979. Epub 2006 Aug 29. PMID: 16940427.
Mamessier Eet al,Cancer Res. 2011 Nov 1;71(21):6621-32. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-11-0792. Epub 2011 Sep 21. PMID: 21937679.
Platonova Set al,Cancer Res. 2011 Aug 15;71(16):5412-22. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-4179. Epub 2011 Jun 27. PMID: 21708957.
Levi Iet al,Oncotarget. 2015 May 30;6(15):13835-43. doi: 10.18632/oncotarget.3453. PMID: 26079948; PMCID: PMC4537053.
Kim HSet al,Immunity. 2010 Feb 26;32(2):175-86. doi: 10.1016/j.immuni.2010.02.004. PMID: 20189481; PMCID: PMC2843589.
MacFarlane AW4thet al,Oncoimmunology. 2017 May 19;6(7):e1330235. doi: 10.1080/2162402X.2017.1330235. PMID: 28811973; PMCID: PMC5543845.
Pasero Cet al,Oncotarget. 2015 Jun 10;6(16):14360-73. doi: 10.18632/oncotarget.3965. PMID: 25961317; PMCID: PMC4546472.
Stringaris Ket al,Haematologica. 2014 May;99(5):836-47. doi: 10.3324/haematol.2013.087536. Epub 2014 Jan 31. PMID: 24488563; PMCID: PMC4008119.

Claims (3)

REIVINDICACIONES
1. Un ligando peptídico específico para linfocitos citolíticos naturales (NK), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende un polipéptido que comprende al menos tres grupos reactivos, separados por al menos dos secuencias de bucle, y un armazón molecular que forma enlaces covalentes con los grupos reactivos del polipéptido de tal manera que se formen al menos dos bucles de polipéptido en el armazón molecular, en donde el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
CiNLQKPCiiMKYPCiii (SEQ ID NO: 1);
CiNLQNPCiiMKFPCiii (SEQ ID NO: 2);
CiNLQAPCiiMQTGKVCiii (SEQ ID NO: 3);
CiNLQAPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 4; denominada en el presente documento BCY18295 cuando forma complejo con TATA);
CiLLHDHCiiPNTHPKLCiii (SEQ ID NO: 5);
CiLLHEHCiiPNTHPKMCiii (SEQ ID NO: 6);
CiLLHDHCiiPNSHPEICiii (SEQ ID NO: 7);
CiLLHDHCiiPNTHPIICiii (SEQ ID NO: 8);
CiYLPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 9);
CiYLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 10);
CiDLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 11; denominada en el presente documento BCY18262 cuando forma complejo con TATA);
CiYLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 12; denominada en el presente documento BCY15633 cuando forma complejo con TATA);
CiYLPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 13);
Ci[2,6DiMeTyr]LPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 14);
CiY[tBuAla]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 15);
CiY[Cba]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 16);
CiYL[HyP]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 17);
CiYL[Aze]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 18);
CiYL[Aib]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 19);
CiYLPD[1Nal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 20);
CiYLPD[2Nal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 21);
CiYLPD[3Pal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 22);
CiYLPD[2,6DiMeTyr]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 23);
CiYLPDW[tBuAla]CiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 24);
CiYLPDW[Cba]CiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 25);
CiYLPDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 26);
CiYLPDYLCiiGDE[2,6DiMeTyr]Ciii (SEQ ID NO: 27);
CiALPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 28);
CiYAPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 29);
CiYLADYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 30);
CiYLPAYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 31);
CiYLPDALCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 32);
CiYLPDYACiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 33);
CiYLPDYLCiiADEYCiii (SEQ ID NO: 34);
CiYLPDYLCiiGAEYCiii (SEQ ID NO: 35);
CiYLPDYLCiiGDAYCiii (SEQ ID NO: 36);
CiYLPDYLCiiGDEACiii (SEQ ID NO: 37);
CiY[CSA]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 38);
CiY[Cha]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 39);
CiY[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 40);
CiYLPD[4FPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 41);
CiYLPD[4MeOPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 42);
CiYLPD[NO2Phe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 43);
CiYLPD[4MePhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 44);
CiYLPD[pCoPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 45);
CiYLPD[pCaPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 46);
CiYLPD[4tBuPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 47);
CiYLPD[CF3Phe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 48);
CiYLPD[4CNPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 49);
CiYLPD[4ClPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 50);
CiYLPD[HPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 51);
Ci[2,6DiMeTyr]LPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 52);
CiY[Cba]PDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 53);
CiYL[Aze]DWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 54);
CiYLPDWLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 55);
CiSLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 56);
CiDLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 57);
CiDLTTHNCiiLWGVCiii (SEQ ID NO: 58);
CiNLQLHNCiilWGVCiii (SEQ ID NO: 59);
CiPPTVYCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 60);
CíRWSVEDPCnGAWCín (SEQ ID NO: 61);
CiVGLEELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 62 ; denominada en el presente documento BCY16494 cuando forma complejo con TBMT);
CiNLQQACiiLHTGKVCiii (SEQ ID NO: 63);
CiNLQAACiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 64);
CiNLQAPCiiMATGKVCiii (SEQ ID NO: 65);
CiNLQAPCiiMLAGKVCiii (SEQ ID NO: 66);
CiNLQAPCiiMLTAKVCiii (SEQ ID NO: 67);
CiNLQAPCiiMLTGAVCiii (SEQ ID NO: 68);
CiNLQAPCiiMLTGKACiii (SEQ ID NO: 69);
CiN[tBuAla]QAPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 70);
CiNLQA[Sar]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 71);
CiNLQA[Cis-HyP]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 72);
CiNLQA[HyP]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 73);
CiNLQA[NMeAla]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 74);
CiNLQAPCiiLLTGKVCiii (SEQ ID NO: 75);
CiNLQAPCii[Nle]LTGKVCiii (SEQ ID NO: 76);
CiNLQAPCii[Cba]LTGKVCiii (SEQ ID NO: 77);
CiNLQAPCiiMETGKVCiii (SEQ ID NO: 78);
CiNLQAPCiiMFTGKVCiii (SEQ ID NO: 79);
CiNLQAPCiiMYTGKVCiii (SEQ ID NO: 80);
CiNLQAPCiiM[Cba]TGKVCiii (SEQ ID NO: 81);
CiNLQAPCiiM[tBuAla]TGKVCiii (SEQ ID NO: 82);
CiNLQAPCiiM[Cha]TGKVCiii (SEQ ID NO: 83);
CiNLQAPCiiMLT[dA]KVCiii (SEQ ID NO: 84);
CiNLQAPCiiMLTGRVCiii (SEQ ID NO: 85);
CiNLQAPCiiMLTG[Agb]VCiii (SEQ ID NO: 86);
CiNLQAPCiiMLTGK[tBuGly]Ciii (SEQ ID NO: 87);
CiNLQAPCiiMLTGK[Chg]Ciii (SEQ ID NO: 88);
CiNLQAPCiiMLTGK[Cbg]Ciii (SEQ ID NO: 89);
CiNLQAPCiiMLTG[HArg]VCiii (SEQ ID NO: 90);
CiNLQA[Aze]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 91);
CiNLQA[Pip]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 92);
CiNLQAPCiiMVTGKVCiii (SEQ ID NO: 93);
CiNLQAPCiiM[Nle]TGKVCiii (SEQ ID NO: 94);
CiNLQAPCiiM[Nva]TGKVCiii (SEQ ID NO: 95);
CiNLQAPCiiMLTGK[ANoIle]Ciii (SEQ ID NO: 96);
CiNLQAPCiiMLTGK[EPA]Ciii (SEQ ID NO: 97);
CiNLQQPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 98);
CiNLQA[Nva]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 99);
CiNLQAPCiiMHTGKVCiii (SEQ ID NO: 100);
CiNLQAPCiiLHTGKVCiii (SEQ ID NO: 101);
CiNLQQACiiMQTGKVCiii (SEQ ID NO: 102);
CiLLHDHCiiPNTHPKMCiii (SEQ ID NO: 103);
CiDLTTHNiiIWGVCiii (SEQ ID NO: 104);
CiNLQLHNCiiIWGVCiii (SEQ ID NO: 105);
CiNLQLHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 106);
Ci[3tBuTyr]LPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 107);
CiYLPD[3tBuTyr]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 108);
CiYLPDYLCiiGDE[3tBuTyr]Ciii (SEQ ID NO: 109);
Ci[K(PYA)]LPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 110);
CiYLP[K(PYA)]YLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 111);
CiYLPDYLCii[K(PYA)]DEYCiii (SEQ ID NO: 112);
CiYLPDYLCiiGD[K(PYA)]YCiii (SEQ ID NO: 113);
CiYLPDYLCiiGDE[K(PYA)]Ciii (SEQ ID NO: 114);
CiYLPDYLCii[dK(PYA)]DEYCiii (SEQ ID NO: 115);
CiALTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 116);
CiDLATHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 117);
CiDLTAHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 118);
CiDLTTHNCiiAWGICiii (SEQ ID NO: 119);
CiDLTTHNCiiQWGACiii (SEQ ID NO: 120);
CiLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 121);
CiDLQTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 122);
CiDLTLHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 123);
CiDLTT[His3Me]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 124);
CiDLTT[2Pal]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 125);
CiDLTT[His1Me]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 126);
CiDLTT[4ThiAz]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 127);
CiDLTTHNCiiVWGICiii (SEQ ID NO: 128);
CiDLTTHNCii[Cba]WGICiii (SEQ ID NO: 129);
CiDLTTHNCiiQ[1Nal]GICiii (SEQ ID NO: 130);
CiDLTTHNCiiQ[Trp(Me)]GICiii (SEQ ID NO: 131);
CiDLTTHNCiiQWG[tBuGly]Ciii (SEQ ID NO: 132);
CiDLTTHNCiiQWG[tBuAla]Ciii (SEQ ID NO: 133);
CiDLTTHNCiiQWG[Chg]Ciii (SEQ ID NO: 134);
CiDLTTHNCiiQW[dA]ICiii (SEQ ID NO: 135);
CiS[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 136) Ci[HSer][Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 137);
CiN[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 138);
Ci[4Pal][Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 139);
CiY[Cba][Cis-HyP]DYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 140);
CiY[Cba][NMeAla]DYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 141);
CiY[Cba]PNYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 142);
CiY[Cba]PQYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 143);
CiY[Cba]PDYLCii[dV]DEYCiii (SEQ ID NO: 144);
CiY[Cba]PDYLCii[dNva]DEYCiii (SEQ ID NO: 145);
CiY[Cba]PDYLCii[dF]DEYCiii (SEQ ID NO: 146);
CiY[Cba]PDYLCii[dCha]DEYCiii (SEQ ID NO: 147);
CiY[Cba]PDYLCii[dK(PYA)]DEYCiii (SEQ ID NO: 148);
CiY[Cba]PDYLCii[dNIe]DEYCiii (SEQ ID NO: 149);
CiY[Cba]PD[DOPA]LCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 150);
CiY[Cba]PD[2FTyr]LCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 151);
CiY[Cba]PDY[Nle]Cii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 152);
[Pen]iY[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 153);
CiY[Cba]PDYL[Pen]ii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 154);
CiY[Cba]PDYLCii[dA]DEY[Pen]iii (SEQ ID NO: 155);
CiY[Cba]PDYLCii[dA]DEY[dCiii] (SEQ ID NO: 156);
[dCi]Y[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 157);
CiDLTTHNCiiQ[AzaTrp]GICiii (SEQ ID NO: 158);
CiDLTTHNCiiQ[2MeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 159);
CiDLTTHNCiiQ[eMeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 160);
CiDLTTHNCiiQ[7MeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 161);
CiDLTTHNCiiQ[eFTrp]GICiii (SEQ ID NO: 162);
CiDLTTHNCiiQ[5FTrp]GICiii (SEQ ID NO: 163);
CiDLTTHNCiiQ[Dht]GICiii (SEQ ID NO: 164);
CiDLTT[2FuAla]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 165);
CiDLTTHNCiiQWG[EPA]Ciii (SEQ ID NO: 166);
CiDLTTHNCiiQWG[Nle]Ciii (SEQ ID NO: 167);
CiDLTTHNCiiQWG[ANoNe]Ciii (SEQ ID NO: 168);
CiPPAVYCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 169);
CíPPEVFCnHPLDCín (SEQ ID NO: 170);
C<í>PPEVYC<n>HPLDC<ín>(SEQ ID NO: 171);
CiPPEVWCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 172);
CiPPQVYCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 173);
CiPPEVWCiiHPLDCiii (SEQ ID NO: 174);
CiRWS[tBuGly]EDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 175);
CiRWSVED[HyP]CiiGAWCiii (SEQ ID NO: 176);
CiRWSVED[Aze]CiiGAWCiii (SEQ ID NO: 177);
CiRWSVEDPCii[dA]AWCiii (SEQ ID NO: 178);
CiRWSVE[Gla]PCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 179);
CiRWSVED[Aze]CiiGAWCiii (SEQ ID NO: 180);
CiMWIRSDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 181);
CiRWYPDDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 182);
CiEWHISEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 183);
CiNWHVYEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 184);
CiRWHFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 185);
CiRWNLDDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 186); C<í>MWIRSDPC<n>GAWC<ín>(SEQ ID NO: 187);
CíRWYPDDPCnGAWCní (SEQ ID NO: 188);
CíEWHISEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 189);
CíNWHVYEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 190);
CíRWHFSEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 191);
CíRWNLDDPCnGAWCín (SEQ ID NO: 192);
CiR[2MeTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 193);
CiR[6MeTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 194);
CiR[6FTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 195);
CiR[5FTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 196);
CiR[6ClTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 197);
CiR[Trp(S)]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 198);
CiR[AzaTrp]SVEDPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 199);
CiRWSVEDPCiiGA[2MeTrp]Ciii (SEQ ID NO: 200);
CiRWSVEDPCiiGA[6FTrp]Ciii (SEQ ID NO: 201);
CiRWSVEDPCiiGA[5FTrp]Ciii (SEQ ID NO: 202);
CiRWSVEDPCiiGA[4MeoTrp]Ciii (SEQ ID NO: 203);
CiRWSVEDPCiiGA[5MeoTrp]Ciii (SEQ ID NO: 204);
CiRWSVEDPCiiGA[Trp(S)]Ciii (SEQ ID NO: 205);
CiRWSVEDPCiiGA[DOPA]Ciii (SEQ ID NO: 206);
CíRWYPDDPCnGAWCní (SEQ ID NO: 207);
CíRWHFSEPCnGAWCín (SEQ ID NO: 208);
CiR[2MeTrp]HFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 209);
C<í>RWYFSEPC<íí>GAWC<ím>(SEQ ID NO: 210);
CíRWSFSEPCííGAWCím (SEQ ID NO: 211);
CíRWHPSEPCííGAWCím (SEQ ID NO: 212);
CíRWYPSEPCííGAWCím (SEQ ID NO: 213);
C<í>RWHPDEPC<n>GAWC<ím>(SEQ ID NO: 214);
CíRWHPEEPCííGAWCím (SEQ ID NO: 215);
CíRWHPDEPCnGAWCí<m>(SEQ ID NO: 216);
CiRWHFDDPCiiGAWCiN (SEQ ID NO: 217);
CiRWYFDEPCiiGAWCiN (SEQ ID NO: 218);
CiRW[His1Me]FSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 219);
CiRW[His3Me]FSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 220);
CiRW[4MeoPhe]FSEPCiiGAWCiN (SEQ ID NO: 221);
CíRW[DOPA]FSEPCííGAWCní (SEQ ID NO: 222);
CiRW[26DiMeTyr]FSEPCiiGAWCiN (SEQ ID NO: 223);
CiRW[3tBuTyr]FSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 224);
CiRW[4FPhe]FSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 225);
CiRWH[4MePhe]SEPCiiGAWCNi (SEQ ID NO: 226);
CiRWH[Aze]SEPCiiGAWCNi (SEQ ID NO: 227);
CiRWH[HyP]SEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 228);
CiRWH[4tBuPhe]SEPCiiGAWCNi (SEQ ID NO: 229);
CiRWH[HPhe]SEPCiiGAWCNi (SEQ ID NO: 230; denominada en el presente documento BCY21693 cuando forma complejo con TBMT);
CiRWH[4PhePro]SEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 231);
CiRWHF[HSer]EPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 232);
CiRWHFS[Gla]PCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 233);
CiRWHFS[HGlu]PCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 234);
CiRWHFSEPCii[dA]AWCiii (SEQ ID NO: 235);
CiRWYFSE[Aze]Cii[dA]AWCNi (SEQ ID NO: 236);
CiRWHFDE[Aze]Cii[dA]AWCNi (SEQ ID NO: 237);
CiRWYPSE[Aze]Cii[dA]AWCNi (SEQ ID NO: 238);
Ci[HArg]WHFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 239);
CiRWH[Cis-HyP]SEPCiiGAWCiN (SEQ ID NO: 240);
CiRWHFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 241);
CiRWHFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 242);
CiRWHFSEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 243);
CVGLLELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 244);
C<í>PGLEELGPC<m>SDLC<ím>(SEQ ID NO: 245);
CiV[dA]LEELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 246);
CiVG[tBuAla]EELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 247);
CiVG[Cba]EELGPCiiSDLCNi (SEQ ID NO: 248);
CiVGFEELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 249);
CiVG[1Nal]EELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 250);
CiVG[2Nal]EELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 251);
CiVGLPELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 252);
CiVGL[tBuAla]ELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 253);
CVGL[Cba]ELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 254);
CVGL[Cha]ELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 255);
CVGL[Nle]ELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 256);
CVGLE[Gla]LGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 257);
CiVGLEELG[Aze]CiiSDLCiii (SEQ ID NO: 258);
CVGLEELGPCiiSD[tBuAla]Ciii (SEQ ID NO: 259);
CiVGLEELGPCiiSD[Cba]Ciii (SEQ ID NO: 260);
CVGLEELGPCiiSD[Cha]Ciii (SEQ ID NO: 261);
CVG[HLeu]EELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 262);
CVGL[HLeu]ELGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 263);
CiVGLE[HGlu]LGPCiiSDLCiii (SEQ ID NO: 264);
CíTWPYCnKSWGDVQDCín (SEQ ID NO: 265);
C<í>DWWDPGC<n>TYFC<ní>(SEQ ID NO: 266);
CiRWH[4BnPro]SEPCiiGAWCiii (SEQ ID NO: 267); y
CiRWH[HPhe]SE[Aze]CiiGAWCiii (SEQ ID NO: 268);
en donde Ci, Peni, Cii, Penn, Cím y Penni representan un primer, segundo y tercer grupos reactivos, respectivamente, y en donde 2,6DiMeTyr representa 2,6-dimetil-tirosina, tBuAla representa p-t-butil-L-alanina, Cba representa pcidobutilalanina, HyP representa hidroxiprolina, Aze representa ácido azetidin-2-carboxílico, Aib representa ácido aminoisobutírico, 1 Nal representa 1-naftilalanina, 2Nal representa 2-naftilalanina, 3Pal representa 3-piridilalanina, C5A representa beta-ciclopentil-L-alanina, Cha representa 3-ciclohexil-L-alanina, 4FPhe representa 4-fluoro-L-fenilalanina, 4MeOPhe representa 4-metoxi-fenilalanina, NO2Phe representa 4-nitro-fenilalanina, 4MePhe representa 4-metilfenilalanina, pCoPhe representa para-carboxi-fenilalanina, pCaPhe representa p-carboxamido-fenilalanina, 4tBuPhe representa 4-terc-butil-fenilalanina, CF3Phe representa 4-trifluorometil-fenilalanina, 4CNPhe representa 4-cianofenilalanina, 4CIPhe representa 4-cloro-fenilalanina, HPhe representa homofenilalanina, 3tBuTyr representa3-terc-butiltirosina, His3Me representa 3-metilhistidina, 2Pal representa 2-piridilalanina, HisIMe representa 1-metilhistidina, 4ThiAz representa beta-4-tiazol-L-ilalanina, Trp(Me) representa 1-metiltriptófano, tBuGly representa terc-butilglicina, Chg representa ciclohexilglicina, HSer representa homoserina, NMeAla representa N-metilalanina, 4Pal representa 4-piridilalanina, Cis-HyP representa L-4-cis-hidroxiprolina, dA representa D-Alanina, dV representa D-valina, Nva representa norvalina, dNva representa D-norvalina, Nle representa norleucina, dNle representa D-norleucina, dF representa D-fenilalanina, dCha representa 3-ciclohexil-D-alanina, DOPA representa 3,4-dihidroxifenilalanina, 2FTyr representa 2-fluorotirosina, dC representa D-cisteína, AzaTrp representa azatriptófano, 2MeTrp representa 2-metiltriptófano, 6MeTrp representa 6-metiltriptófano, 6FTrp representa 6-fluorotriptófano, 5FTrp representa 5-fluorotriptófano, Dht representa 2,3-dihidrotriptófano, 2FuAla representa 2-furilalanina, Allolle representa L-aloisoleucina, Sar representa sarcosina, Agb representa norarginina, Cbg representa ciclobutilglicina, HArg representa homoarginina, Pep representa ácido pipecólico, EPA representa dietil-L-alanina, Gla representa ácido<y>-carboxiglutámico, 6CITrp representa 6-cloro-L-triptófano, 4MeoTrp representa 4-metoxi-L-triptófano, 5MeoTrp representa 5-metoxi-L-triptófano, Trp(S) representa 3-(3-benzotienil)-L-alanina, 26DiMeTyr representa 2,6-dimetil-L-tirosina, 4PhePro representa (2S,4S)-4-fenilprolina, HGIu representa ácido L-2-aminoadípico, 4BnPro representa ácido (2S,4R)-4-bencil-pirrolidin-2-carboxílico y HLeu representa homoleucina.
2. El ligando peptídico como se define en la reivindicación 1, en donde dicho péptido bicíclico es específico para NKp46 y en donde el ligando peptídico bicíclico comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
CiNLQKPCiiMKYPCiii (SEQ ID NO: 1); y
CiNLQNPCiiMKFPCiii (SEQ ID NO: 2);
CiNLQAPCiiMQTGKVCiii (SEQ ID NO: 3);
CiNLQAPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 4; denominada en el presente documento BCY18295 cuando forma complejo con TATA);
CiLLHDHCiiPNTHPKLCiii (SEQ ID NO: 5);
CiLLHEHCiiPNTHPKMCiii (SEQ ID NO: 6);
CiLLHDHCiiPNSHPEICiii (SEQ ID NO: 7);
CiLLHDHCiiPNTHPIICiii (SEQ ID NO: 8);
CiYLPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 9);
CiYLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 10);
CiDLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 11; denominada en el presente documento BCY18262 cuando forma complejo con TATA);
CiYLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 12; denominada en el presente documento BCY15633 cuando forma complejo con TATA);
CiYLPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 13);
Ci[2,6DiMeTyr]LPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 14);
CiY[tBuAla]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 15);
CiY[Cba]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 16);
CiYL[HyP]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 17);
CiYL[Aze]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 18);
CYL[Aib]DYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 19);
CYLPD[1Nal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 20);
CYLPD[2Nal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 21);
CiYLPD[3Pal]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 22);
CYLPD[2,6DiMeTyr]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 23);
CYLPDW[tBuAla]CiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 24);
CiYLPDW[Cba]CiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 25);
CYLPDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 26);
CYLPDYLCiiGDE[2,6DiMeTyr]Ciii (SEQ ID NO: 27);
CiALPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 28);
CiYAPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 29);
CiYLADYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 30);
CYLPAYLCnGDEYCín (SEQ ID NO: 31);
CiYLPDALCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 32);
CiYLPDYACiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 33);
CiYLPDYLCiiADEYCiii (SEQ ID NO: 34);
CiYLPDYLCiiGAEYCiii (SEQ ID NO: 35);
CiYLPDYLCiiGDAYCiii (SEQ ID NO: 36);
CiYLPDYLCiiGDEACiii (SEQ ID NO: 37);
CiY[C5A]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 38);
CY[Cha]PDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 39);
CY[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 40);
CYLPD[4FPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 41);
CYLPD[4MeOPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 42);
CiYLPD[NO2Phe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 43);
CiYLPD[4MePhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 44);
CYLPD[pCoPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 45);
CYLPD[pCaPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 46);
CiYLPD[4tBuPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 47);
CYLPD[CF3Phe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 48);
CiYLPD[4CNPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 49);
CiYLPD[4ClPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 50);
CYLPD[HPhe]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 51);
Ci[2,6DiMeTyr]LPDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 52);
CiY[Cba]PDWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 53);
CiYL[Aze]DWLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 54);
CiYLPDWLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 55);
CiSLPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 56);
CiDLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 57);
CíDLTTHNCnLWGVCní (SEQ ID NO: 58);
CíNLQLHNCnIWGVCín (SEQ ID NO: 59);
CiNLQQACiiLHTGKVCiii (SEQ ID NO: 63);
CiNLQAACiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 64);
CiNLQAPCiiMATGKVCiii (SEQ ID NO: 65);
CiNLQAPCiiMLAGKVCiii (SEQ ID NO: 66);
CiNLQAPCiiMLTAKVCiii (SEQ ID NO: 67);
CiNLQAPCiiMLTGAVCiii (SEQ ID NO: 68);
CiNLQAPCiiMLTGKACiii (SEQ ID NO: 69);
CiN[tBuAla]QAPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 70);
CiNLQA[Sar]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 71);
CiNLQA[Cis-HyP]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 72);
CiNLQA[HyP]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 73);
CiNLQA[NMeAla]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 74);
CiNLQAPCiiLLTGKVCiii (SEQ ID NO: 75);
CiNLQAPCii[Nle]LTGKVCiii (SEQ ID NO: 76);
CiNLQAPCii[Cba]LTGKVCiii (SEQ ID NO: 77);
CiNLQAPCiiMETGKVCiii (SEQ ID NO: 78);
CiNLQAPCiiMFTGKVCiii (SEQ ID NO: 79);
CiNLQAPCiiMYTGKVCiii (SEQ ID NO: 80);
CiNLQAPCiiM[Cba]TGKVCiii (SEQ ID NO: 81);
CiNLQAPCiiM[tBuAla]TGKVCiii (SEQ ID NO: 82);
CiNLQAPCiiM[Cha]TGKVCiii (SEQ ID NO: 83);
CiNLQAPCiiMLT[dA]KVCiii (SEQ ID NO: 84);
CiNLQAPCiiMLTGRVCiii (SEQ ID NO: 85);
CiNLQAPCiiMLTG[Agb]VCiii (SEQ ID NO: 86); CiNLQAPCiiMLTGK[tBuGly]Ciii (SEQ ID NO: 87);
CiNLQAPCiiMLTGK[Chg]Ciii (SEQ ID NO: 88);
CiNLQAPCiiMLTGK[Cbg]Ciii (SEQ ID NO: 89);
CiNLQAPCiiMLTG[HArg]VCiii (SEQ ID NO: 90);
CiNLQA[Aze]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 91);
CiNLQA[Pip]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 92);
CíNLQAPCnMVTGKVCní (SEQ ID NO: 93);
CiNLQAPCiiM[Nle]TGKVCiii (SEQ ID NO: 94);
CiNLQAPCiiM[Nva]TGKVCiii (SEQ ID NO: 95);
CiNLQAPCiiMLTGK[ANoNe]Ciii (SEQ ID NO: 96);
CiNLQAPCiiMLTGK[EPA]Ciii (SEQ ID NO: 97);
CiNLQQPCiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 98);
CiNLQA[Nva]CiiMLTGKVCiii (SEQ ID NO: 99);
CiNLQAPCiiMHTGKVCiii (SEQ ID NO: 100);
CiNLQAPCiiLHTGKVCiii (SEQ ID NO: 101);
CiNLQQACiiMQTGKVCiii (SEQ ID NO: 102);
C<í>LLHDHC<n>PNTHPKMC<ní>(SEQ ID NO: 103);
CiDLTTHNCiiIWGVCiii (SEQ ID NO: 104);
CíNLQLHNCnIWGVCín (SEQ ID NO: 105);
CiNLQLHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 106);
Ci[3tBuTyr]LPDYLCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 107);
CiYLPD[3tBuTyr]LCiiGDEYCiii (SEQ ID NO: 108);
CiYLPDYLCiiGDE[3tBuTyr]Ciii (SEQ ID NO: 109);
Cí[K(PYA)]LPDYLCnGDEYCní (SEQ ID NO: 110);
C<í>YLP[K(PYA)]YLC<n>GDEYC<ní>(SEQ ID NO: 111);
C<í>YLPDYLC<n>[K(PYA)]DEYC<ín>(SEQ ID NO: 112);
CíYLPDYLCnGD[K(PYA)]YCín (SEQ ID NO: 113);
CíYLPDYLCnGDE[K(PYA)]Cín (SEQ ID NO: 114);
CiYLPDYLCii[dK(PYA)]DEYCiii (SEQ ID NO: 115);
CiALTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 116);
CiDLATHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 117);
CiDLTAHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 118);
CiDLTTHNCiiAWGICiii (SEQ ID NO: 119);
CiDLTTHNCiiQWGACiii (SEQ ID NO: 120);
CiNLTTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 121);
CiDLQTHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 122);
CiDLTLHNCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 123);
CiDLTT[His3Me]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 124);
CiDLTT[2Pal]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 125);
CiDLTT[His1Me]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 126);
CiDLTT[4ThiAz]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 127);
CiDLTTHNCiVWGICiii (SEQ ID NO: 128);
CiDLTTHNCii[Cba]WGICiii (SEQ ID NO: 129);
CiDLTTHNCiiQ[1Nal]GICiii (SEQ ID NO: 130);
CiDLTTHNCiiQ[Trp(Me)]GICiii (SEQ ID NO: 131);
CiDLTTHNCiiQWG[tBuGly]Ciii (SEQ ID NO: 132);
CiDLTTHNCiiQWG[tBuAla]Ciii (SEQ ID NO: 133);
CiDLTTHNCiiQWG[Chg]Ciii (SEQ ID NO: 134);
CiDLTTHNCiiQW[dA]ICiii (SEQ ID NO: 135);
CiS[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 136) Ci[Hser][Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 137);
CiN[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 138);
Ci[4Pal][Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 139);
CiY[Cba][Cis-HyP]DYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 140);
CiY[Cba][NmeAla]DYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 141);
CiY[Cba]PNYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 142);
CiY[Cba]PQYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 143);
CiY[Cba]PDYLCii[dV]DEYCiii (SEQ ID NO: 144);
CiY[Cba]PDYLCii[dNva]DEYCiii (SEQ ID NO: 145);
CiY[Cba]PDYLCii[dF]DEYCiii (SEQ ID NO: 146);
CiY[Cba]PDYLCii[dCha]DEYCiii (SEQ ID NO: 147);
CiY[Cba]PDYLCii[dK(PYA)]DEYCiii (SEQ ID NO: 148);
CiY[Cba]PDYLCii[dNle]DEYCiii (SEQ ID NO: 149);
CiY[Cba]PD[DOPA]LCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 150);
CiY[Cba]PD[2FTyr]LCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 151);
CiY[Cba]PDY[Nle]Cii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 152); [Pen]iY[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 153);
CiY[Cba]PDYL[Pen]ii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 154);
CiY[Cba]PDYLCii[dA]DEY[Pen]iii (SEQ ID NO: 155);
CiY[Cba]PDYLCii[dA]DEY[dCiii] (SEQ ID NO: 156);
[dCi]Y[Cba]PDYLCii[dA]DEYCiii (SEQ ID NO: 157);
CiDLTTHNCiiQ[AzaTrp]GICiii (SEQ ID NO: 158);
CiDLTTHNCiiQ[2MeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 159);
CiDLTTHNCiiQ[eMeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 160);
CiDLTTHNCiiQ[7MeTrp]GICiii (SEQ ID NO: 161);
CiDLTTHNCiiQ[eFTrp]GICiii (SEQ ID NO: 162);
CiDLTTHNCiiQ[SFTrp]GICiii (SEQ ID NO: 163);
CiDLTTHNCiiQ[Dht]GICiii (SEQ ID NO: 164);
CiDLTT[2FuAla]NCiiQWGICiii (SEQ ID NO: 165);
CiDLTTHNCiiQWG[EPA]Ciii (SEQ ID NO: 166);
CiDLTTHNCiiQWG[Nle]Ciii (SEQ ID NO: 167); y
CiDLTTHNCiiQWG[ANoNe]Ciii (SEQ ID NO: 168).
3. El ligando peptídico como se define en la reivindicación 2, en donde el armazón molecular es TATA y el ligando peptídico bicíclico comprende adicionalmente adiciones en el extremo N y/o C y comprende una secuencia de aminoácidos que se selecciona de:
A-(SEQ ID NO: 1)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY14654);
A-(SEQ ID NO: 1)-A (denominada en el presente documento BCY14456);
A-(SEQ ID NO: 2)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15125);
A-(SEQ ID NO: 2)-A (denominada en el presente documento BCY15102);
A-(SEQ ID NO: 2)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY18004);
A-(<s>EQ ID NO: 3)-A-[<k>(<p>Y<a>)] (denominada en el presente documento BCY15687);
A-(SEQ ID NO: 3)-A (denominada en el presente documento BCY15098);
A-(SEQ ID NO: 4)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15115);
A-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY15099);
Ac-(SEQ ID NO: 4) (denominada en el presente documento BCY18293);
Ac-A-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY18294);
(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19694);
K-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19695);
dK-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19696);
Dap-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19697);
Dab-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19698);
GABA-(SEQ ID NO: 4)-A (denominada en el presente documento BCY19699);
A-(SEQ ID NO: 5)-A (denominada en el presente documento BCY15103);
A-(SEQ ID NO: 5)-A-[K(PYA)] (denominada en el presente documento BCY18005);
A-(SEQ ID NO: 5)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15118);
A-(SEQ ID NO: 6)-A (denominada en el presente documento BCY15104);
A-(SEQ ID NO: 6)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15119);
A-(SEQ ID NO: 7)-A (denominada en el presente documento BCY15105);
A-(SEQ ID NO: 7)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15120);
A-(SEQ ID NO: 8)-A (denominada en el presente documento BCY15106);
A-(SEQ ID NO: 8)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15121);
A-(SEQ ID NO: 9)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15013);
A-(SEQ ID NO: 10)-A (denominada en el presente documento BCY18470);
A-(SEQ ID NO: 10)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY15452);
A-(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY15107);
Ac-(SEQ ID NO: 11) (denominada en el presente documento BCY18260);
Ac-A-(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY18261);
A-(SEQ ID NO: 11)-[Aib] (denominada en el presente documento BCY19717);
(SEQ ID NO: 11)-A (denominada en el presente documento BCY19718);
A-(SEQ ID NO: 11)-A-[dK(PYA)] (denominada en el presente documento BCY19719);
A-(SEQ ID NO: 11)-A-[K(P<y>A)] (denominada en el presente documento BCY15686);
A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15100);
Ac-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY15634);
Ac-A-(SEQ ID NO: 12)-A (denominada en el presente documento BCY15635);
dA-(SEQ ID NO: 12) (denominada en el presente documento BCY16134;
A-(SEQ ID NO: 12)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15116);
A-(SEQ ID NO: 13)-A (denominada en el presente documento BCY14455);
(SEQ ID NO: 13)-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15023);
Ac-(SEQ ID NO: 13)-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15024);
A-(SEQ ID NO: 13)-A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY14652);
(denominada p ernes eente documento BCY15636) (denominada p ernes eente documento BCY15638) (denominada p ernes eente documento BCY15639) (denominada p ernes eente documento BCY15640) (denominada p ernes eente documento BCY15641) (denominada p ernes eente documento BCY15642) (denominada p ernes eente documento BCY15643) (denominada p ernes eente documento BCY15644) (denominada p ernes eente documento BCY15645) (denominada p ernes eente documento BCY15646) (denominada p ernes eente documento BCY15648) (denominada p ernes eente documento BCY15649) (denominada p ernes eente documento BCY15650) (denominada p ernes eente documento BCY15651) (denominada p ernes eente documento BCY15653) (denominada p ernes eente documento BCY15654) (denominada p ernes eente documento BCY15655) (denominada p ernes eente documento BCY15656) (denominada p ernes eente documento BCY15657) (denominada p ernes eente documento BCY15658) (denominada p ernes eente documento BCY15659) (denominada p ernes eente documento BCY15660) (denominada p ernes eente documento BCY15661) (denominada p ernes eente documento BCY15662) (denominada p ernes eente documento BCY16130) (denominada p ernes eente documento BCY16131) (denominada p ernes eente documento BCY16132) minada en el presente documento BCY16133);
A)] (denominada en el presente documento BCY17224): (denominada p ernes eente documento BCY16135) (denominada p ernes eente documento BCY16136) (denominada p ernes eente documento BCY16137) (denominada p ernes eente documento BCY16138) (denominada p ernes eente documento BCY16139) (denominada p ernes eente documento BCY16140) (denominada p ernes eente documento BCY16141) (denominada p ernes eente documento BCY16142) (denominada p ernes eente documento BCY16143) (denominada p ernes eente documento BCY16144) (denominada p ernes eente documento BCY16145) r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15025) r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15028) r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15030) r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15035) r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15117)
r6-KFI (denominada en el presente documento BCY15122) A-(SEQ ID NO 58) -A (denominada en el presente documento BCY15108);
A-(SEQ ID NO 58) -A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15123) A-(SEQ ID NO 59) -A-Sar6-KFI (denominada en el presente documento BCY15124) A-(SEQ ID NO 63) -A (denominada en el presente documento BCY14454) A-(SEQ ID NO 64) -A (denominada en el presente documento BCY18299) A-(SEQ ID NO 65) -A (denominada en el presente documento BCY18301) A-(SEQ ID NO 66) -A (denominada en el presente documento BCY18302) A-(SEQ ID NO 67) -A (denominada en el presente documento BCY18303) A-(SEQ ID NO 68) -A (denominada en el presente documento BCY18304) A-(SEQ ID NO 69) -A (denominada en el presente documento BCY18305) A-(SEQ ID NO 70) -A (denominada en el presente documento BCY18307) A-(SEQ ID NO 71) -A (denominada en el presente documento BCY18309) A-(SEQ ID NO 72) -A (denominada en el presente documento BCY18310) A-(SEQ ID NO 73) -A (denominada en el presente documento BCY18311) A-(SEQ ID NO 74) -A (denominada en el presente documento BCY18312) A-(SEQ ID NO 75) -A (denominada en el presente documento BCY18313) A-(SEQ ID NO 76) -A (denominada en el presente documento BCY18314) A-(SEQ ID NO 77) -A (denominada en el presente documento BCY18315) A-(SEQ ID NO 78) -A (denominada en el presente documento BCY18316) A-(SEQ ID NO 79) -A (denominada en el presente documento BCY18317) (denominada p ernes eente documento BCY18318)
(denominada p ernes eente documento BCY18319) (denominada p ernes eente documento BCY18320) (denominada p ernes eente documento BCY18321) (denominada p ernes eente documento BCY18322) (denominada p ernes eente documento BCY18323) (denominada p ernes eente documento BCY18324) (denominada p ernes eente documento BCY18325) (denominada p ernes eente documento BCY18326) (denominada p ernes eente documento BCY18327) (denominada p ernes eente documento BCY18328) (denominada p ernes eente documento BCY19700) (denominada p ernes eente documento BCY19701) (denominada p ernes eente documento BCY19702) (denominada p ernes eente documento BCY19703) (denominada p ernes eente documento BCY19704) (denominada p ernes eente documento BCY19706) (denominada p ernes eente documento BCY19707) (denominada p ernes eente documento BCY19708) (denominada p ernes eente documento BCY19710) (denominada ¡l e pnr e sente documento BCY19711) (denominada ¡l e pnr e sente documento BCY19712) (denominada il e pnr e sente documento BCY19713) (denominada il e pnr e sente documento BCY14457) (denominada il e pnr e sente documento BCY14458) (denominada il e pnr e sente documento BCY15109) (denominada il e pnr e sente documento BCY15568) (denominada il e pnr e sente documento BCY15637) (denominada il e pnr e sente documento BCY15647) (denominada il e pnr e sente documento BCY15652) (denominada il e pnr e sente documento BCY16834) (denominada il e pnr e sente documento BCY16837) (denominada il e pnr e sente documento BCY16840) (denominada il e pnr e sente documento BCY16842) (denominada il e pnr e sente documento BCY16843) (denominada il e pnr e sente documento BCY17662) (denominada il e pnr e sente documento BCY18263) (denominada il e pnr e sente documento BCY18265) (denominada il e pnr e sente documento BCY18266) (denominada il e pnr e sente documento BCY18269) (denominada il e pnr e sente documento BCY18272) (denominada il e pnr e sente documento BCY18273) (denominada il e pnr e sente documento BCY18277) (denominada il e pnr e sente documento BCY18278) (denominada il e pnr e sente documento BCY18279) (denominada il e pnr e sente documento BCY18280) (denominada il e pnr e sente documento BCY18281) (denominada il e pnr e sente documento BCY18282) (denominada il e pnr e sente documento BCY18285) (denominada il e pnr e sente documento BCY18286) (denominada il e pnr e sente documento BCY18287) (denominada il e pnr e sente documento BCY18288) (denominada il e pnr e sente documento BCY18289) (denominada il e pnr e sente documento BCY18290) (denominada il e pnr e sente documento BCY18291)
(denominada il e pnr e sente documento BCY18292) Ac-(SEQ ID NO 136) (denominada en el presente documento BCY18433) Ac-(SEQ ID NO 137) (denominada en el presente documento BCY18434) Ac-(SEQ ID NO 138) (denominada en el presente documento BCY18435) Ac-(SEQ ID NO 139) (denominada en el presente documento BCY18437) Ac-(SEQ ID NO 140) (denominada en el presente documento BCY18439) Ac-(SEQ ID NO 141) (denominada en el presente documento BCY18440) Ac-(SEQ ID NO 142) (denominada en el presente documento BCY18441) Ac-(SEQ ID NO 143) (denominada en el presente documento BCY18442) Ac-(SEQ ID NO 144) (denominada en el presente documento BCY18443) Ac-(SEQ ID NO 145) (denominada en el presente documento BCY18444)
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107148425B (zh) 2014-10-29 2021-08-03 拜斯科阿迪有限公司 对mt1-mmp特异性的双环肽配体
EP3645549A1 (en) 2017-06-26 2020-05-06 BicycleRD Limited Bicyclic peptide ligands with detectable moieties and uses thereof
JP7670481B2 (ja) 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
CN111902429A (zh) 2018-02-23 2020-11-06 拜斯科技术开发有限公司 多聚体双环肽配体
IL279489B2 (en) 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201820325D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for psma
GB201820288D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicycle Tx Ltd Bicycle peptide ligaands specific for MT1-MMP
GB201820295D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for MT1-MMP
WO2020128527A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands specific for pd-l1
US12492224B2 (en) 2018-12-21 2025-12-09 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for PD-L1
GB201900529D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for CD38
TWI860386B (zh) 2019-07-30 2024-11-01 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
AU2021322934A1 (en) 2020-08-03 2023-03-30 Bicycletx Limited Peptide-based linkers
EP4731638A1 (en) * 2023-06-23 2026-04-29 BicycleTx Limited Bicyclic peptide ligands specific for nk cells

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2653545A1 (en) 2008-02-05 2013-10-23 Bicycle Therapeutics Limited Methods and compositions
JP6822849B2 (ja) * 2014-06-27 2021-01-27 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 多重特異的ＮＫｐ４６結合タンパク質
CN115093463A (zh) * 2014-09-30 2022-09-23 波利弗尔股份公司 β-发夹肽模拟物
WO2018222987A1 (en) * 2017-06-01 2018-12-06 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted constructs
JP7670481B2 (ja) * 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
WO2019084060A1 (en) * 2017-10-24 2019-05-02 Silverback Therapeutics, Inc. CONJUGATES AND METHODS OF USE FOR THE SELECTIVE DELIVERY OF IMMUNOMODULATORY AGENTS
CN111902429A (zh) * 2018-02-23 2020-11-06 拜斯科技术开发有限公司 多聚体双环肽配体
CA3099308A1 (en) * 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
US12492224B2 (en) * 2018-12-21 2025-12-09 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for PD-L1

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