ES2995196T3 - Pd-0184264 for the treatment of coronavirus infections and/or covid-19 cytokine storm - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a inhibidores de MEK para su uso en un método para el tratamiento de una infección por coronavirus y/o el tratamiento o prevención de la tormenta de citocinas de la COVID-19. También se proporcionan composiciones que comprenden dichos inhibidores para su uso en el tratamiento de una infección por coronavirus, como la COVID-19. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

PD-0184264 para el tratamiento de las infecciones por coronavirus y/o de la tormenta de citocinas por la covid-19

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso del inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento de infecciones provocadas por coronavirus y/o el tratamiento o la prevención de la tormenta de citocinas por la covid-19.

Antecedentes

El grupo Coronavirus consiste de virus de ARN de hebra positiva envueltos que pertenecen a la familiaCoronaviridaey comprende subtipos referidos como coronavirus Alfa, Beta, Gamma y Delta. Alfa y Beta afectan mamíferos, mientras que Gamma afecta aves y Delta puede afectar ambos. La familia de coronavirus comprende varios miembros causantes de la enfermedad bien conocidos. La familia de Betacoronavirus ha planteado hasta ahora el mayor riesgo para los seres humanos y ahora incluye las dianas de virus más bien conocidas incluido el coronavirus de Síndrome Respiratorio Agudo Grave (SARS-CoV-1) responsable de la muerte de 774 personas en 2003, coronavirus de Síndrome Respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV), que se cree que mató a 858 personas en 2012, y la forma más reciente que ha surgido, el nuevo coronavirus, (SARS-CoV-2) que a principios de mayo de 2020 ha causado más de 250.000 muertes en todo el mundo. En total, los coronavirus representan una amenaza continua y en constante evolución para la vida humana.

Aunque los diferentes subtipos de coronavirus pueden infectar diferentes tipos de hospederos, la estructura bioquímica general del virus es similar. A pesar de los intentos actuales de desarrollar vacunas contra una infección por coronavirus patógenos en seres humanos, aún existe una necesidad de proporcionar composiciones alternativas o mejoradas y métodos para el tratamiento y/o prevención de enfermedades provocadas por coronavirus patógenos humanos.

La pandemia de covid-19 en 2019/20 provocada por SARS-CoV-2 muestra claramente que los coronavirus tienen un fuerte impacto en los sistemas de salud globales. No estuvo disponible vacunación preventiva, y solo un fármaco antiviral, Remdesivir, fue aprobado provisionalmente para la covid-19. Aunque se han hecho varios intentos para tratar la covid-19 con fármacos disponibles, hasta ahora ninguno ha sido muy exitoso. Esto destaca la necesidad urgente por antivirales eficaces adicionales para controlar mejor las infecciones de coronavirus en general y SARS-CoV-2 en particular. Particularmente, en la fase temprana de una pandemia, cuando no hay una vacuna disponible, los antivirales son el tratamiento independiente.

En el caso de la covid-19, el espectro clínico de la infección por SARS-CoV-2 parece que es amplio, abarcando infección asintomática, enfermedad leve de las vías respiratorias superiores, y neumonía viral grave con insuficiencia respiratoria e incluso la muerte, con muchos pacientes hospitalizados. El uso de un sistema de clasificación de 3 etapas es ampliamente aceptado, reconociendo que la enfermedad por covid-19 muestra tres grados de gravedad gradual que corresponden a hallazgos clínicos distintos, respuesta al tratamiento y resultado clínico. A pesar de los altos números de infecciones, el 80 % de todos los pacientes positivamente probados experimentaron síntomas leves solamente, el 20 % mostró signos de hipoxemia conduciendo a hospitalización y solo el 5 % requirió tratamiento en unidades de cuidado intensivo (UCI). Para tratar la covid-19, es importante comprender las etapas de la infección. Estas etapas se resumen en Hasanet al.,titulado "COVID-19 Illness in Native and Immunosuppressed States: A Clinical-Therapeutic Staging Proposal" y se resume a continuación.

La etapa inicial, llamada Etapa I, es una infección leve y se presenta en el momento de la inoculación y establecimiento temprano de la enfermedad. En la mayoría de las personas, esto implica un período de incubación asociado con síntomas leves y frecuentemente no específicos por algunos días tal como malestar, fiebre y tos seca. En pacientes quienes mantienen el virus limitado a esta etapa de la covid-19, es excelente el pronóstico y la recuperación. El tratamiento en esta etapa está principalmente dirigido hacia alivio sintomático. Se debe proporcionar una terapia antiviral benéfica, que se dirija a pacientes seleccionados durante esta etapa que pueda reducir la duración de los síntomas, minimizar el contagio y prevenir la progresión de la gravedad.

En la segunda etapa, llamada Etapa II, de una enfermedad pulmonar establecida, la norma es la multiplicación viral e inflamación localizada en el pulmón. La Etapa II incluye implicación pulmonar, llamada Etapa IIa, sin y Etapa IIb con hipoxia. Durante esta etapa, los pacientes desarrollan neumonía viral, con tos, fiebre y posiblemente hipoxia. Durante el curso de la enfermedad, se presenta disnea después de una mediana de 13 días después del primer inicio de los síntomas (intervalo 9-16,5 días). La disnea es un signo de enfermedad grave de las vías respiratorias, pulmones o corazón y se caracteriza por respiración difícil o laboriosa y disnea. En el caso de la covid-19, la imagenología con rayos X de tórax o tomografía computarizada revela infiltrados bilaterales u opacidades en vidrio deslustrado. Esta es una etapa que la mayoría de pacientes con covid-19 necesitan ser hospitalizados para observación cercana y manejo. El tratamiento consiste principalmente en medidas de apoyo y terapias antivirales, una vez disponibles. Es posible que los pacientes no obstante progresen a Etapa III para requerir ventilación mecánica en una unidad de cuidado intensivo (UCI).

En la covid-19 de Etapa II, los marcadores de inflamación sistémica se pueden elevar, pero no notablemente. En estudios tempranos llevados a cabo en el primer grupo de pacientes en Wuhan, China, se encontró que tras el ingreso en el hospital, las concentraciones en plasma de IL1beta, IL1Ralfa, IL7, IL8, IL9, IL10, FGF básico, GCSF, GMCSF, IFNgamma, IP10, MCP1, MIP1alfa, MIP1beta, PDGF, TNFalfa y VEGF fueron más altas que en los adultos sanos. Además, se encontró que los pacientes en la UCI tuvieron concentraciones en plasma de IL2, IL7, IL10, GCSF, IP10, MCP1, MIP1alfa y TNFalfa fueron más altas que en pacientes tras la admisión al hospital (Huanget al.; The Lancet;Vol 395; pág.: 497-506, 15 de febrero de 2020), indicando que un incremento en estas citocinas marca la transición de covid-19 de etapa II a etapa III.

Una minoría de pacientes con covid-19 cambiarán a la tercera y más grave etapa de enfermedad, llamada Etapa III, que se manifiesta como un síndrome de hiperinflamación sistémica extrapulmonar. En esta etapa, los marcadores de la inflamación sistémica son elevados. En general, el pronóstico y la recuperación de esta etapa crítica de la enfermedad son muy malos.

Por lo tanto, existe la necesidad por compuestos que puedan prevenir la progresión de la covid-19 de Etapa II a Etapa III y reduzcan la gravedad de la infección y mortalidad por covid-19. Varios estudios multinacionales están en curso enfocándose en las composiciones que ya han sido aprobadas o que se han sometido a estudios clínicos para una enfermedad diferente. La mayoría de los compuestos que se consideran para el tratamiento de la covid-19 pertenecen a uno de los dos grupos:

1. Medicamentos antivirales, que se desarrollaron originalmente contra el VIH, Ébola, Hepatitis C o Gripe. La idea es que estos bloqueen la reproducción del virus o prevengan la entrada en las células pulmonares. Entre otros, esto incluye medicamentos contra la malaria antiguos que se sabe son eficaces contra los virus. Estos antivirales pueden ser eficaces en etapa I y etapa II temprana de la covid-19 ya que actúan temprano en el ciclo de vida viral.

2. Inmunomoduladores supresores que se desarrollaron para tratar la artritis reumatoide o la enfermedad inflamatoria intestinal. La idea es que estos restringieran el sistema inmunitario de modo que no provocarían más daño que el virus mismo. Esto puede ser eficaz en infección por covid-19 de etapa II tardía y etapa III, ya que suprimen la producción de citocinas.

Se iniciaron varios estudios multinacionales para probar la eficacia de Remdesivir (inhibidor de ARN polimerasa), Ritonavir o Lopinavir (medicación para el VIH), beta interferones y/o Cloroquina o Hidroxicloroquina (medicamento para la Malaria).

A principios de mayo, se proporcionó una autorización de emergencia por la FDA estadounidense para uso del Remdesivir antiviral en el tratamiento de pacientes con covid-19 hospitalizados. El Remdesivir es un inhibidor de ARN polimerasa que se desarrolló originalmente para el tratamiento del Ébola, donde se encontró que es ineficaz. El Remdesivir solo fue aprobado para tratar pacientes en una instalación hospitalaria que muestran síntomas graves que los inventores clasificarían como COVID-19 en etapa III. Sin embargo, aunque se encontró que el Remdesivir disminuye la duración de hospitalización de los pacientes en los ensayos, no hubo un efecto significativo en la mortalidad.

Caiet al.(Journal of Virology; Vol. 395; n.° 2; pág.: 446-456 1, de noviembre de 2006) divulga que el U0126 disminuía significativamente la producción de progenie del virus de la hepatitis murina coronavirus (MHV). Se enseña que la vía de señalización Raf/MEK/ERK desempeña un papel en la síntesis del ARN del coronavirus. El U0126 tiene un efecto inhibidor general sobre la propagación del MHV, independientemente del tipo de célula y de la cepa del virus. También se divulga que parecería que los inhibidores de MEK1/2 tienen un amplio efecto sobre las propagaciones de virus de varias familias (virus de<a>R<n>de cadena positiva y de cadena negativa, retrovirus, virus ADN). Solo se muestran datosin vitro.

Kindrachucket al.(Antimicrobial Agents and Chemotherapy; Vol. 59; n.° 2; pág.: 1088-1099, 1 de febrero de 2015) divulga que la vía MAPK/ERK se modula específicamente en respuesta a la infección por MERS-CoVin vitroa lo largo de la infección y puede representar nuevas dianas farmacológicas para la intervención terapéutica. Selumetinib y Trametinib, entre otros inhibidores, demostraron la actividad inhibidora más potentein vitro.También se probó el U0126, que mostró actividad inhibidora cuando se administró antes de la infección. Solo se muestran datosin vitro.

En vista de la técnica anterior y la multitud de estudios en curso, es claro que existe la necesidad de nuevos compuestos y composiciones eficaces en el tratamiento y prevención de enfermedades provocadas por infecciones por coronavirus, en particular en enfermedades de las vías respiratorias como la covid-19. En particular, existe la necesidad por un medicamento para tratar pacientes con covid-19 en Etapa II y Etapa III, para prevenir la progresión de la enfermedad y para reducir la mortalidad.

Sumario de la invención

La solución al problema anterior proporcionada en el presente documento es la provisión de inhibidores de MEK para el tratamiento de infecciones por coronavirus. Específicamente, los inhibidores de MEK resultaron ser útiles en el tratamiento de la covid-19 en Etapa II, ya que ambos impiden la salida del virus de las células hospedadoras mediante el bloqueo de los receptores de MEK y disminuyen las respuestas inmunitarias que, en última instancia, conducen a la Etapa III de la covid-19. Debido a este doble mecanismo, los inhibidores de MEK, y específicamente ATR-002, también denominado PD-0184264, son especialmente prometedores para el tratamiento de la covid-19 en Etapa II. Además, los inhibidores de MEK podrían ser útiles para prevenir la progresión de la enfermedad de la Etapa II a la Etapa III y para tratar la covid-19 en Etapa III. Los inhibidores de MEK ya son conocidos originalmente como agentes quimioterapéuticos, y los inventores los están desarrollando para su uso en el tratamiento o la prevención de infecciones víricas, específicamente virus de la gripe y hantavirus. ATR-002, también denominado PD-0184264, es un metabolito de CI-1040 descrito por primera vez en el contexto de la quimioterapia en 2004 (Wabnitzet al.)que está siendo desarrollado por los inventores para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades víricas, tales como la infección por coronavirus. ATR-002 tiene la estructura química que se muestra a continuación:

PD-0184264 es uno de varios metabolitos de CI-1040 (Wabnitzet al.,2004, LoRussoet al.,2005). Sin embargo, los mecanismos estudiados acerca de PD-0184264 en relación con el papel de MEK en las infecciones por coronavirus se aplican igualmente a otros inhibidores de MEK.

Por este motivo, la presente invención se refiere al inhibidor de MEK PD-0184264 o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad causada por un coronavirus en un sujeto humano, en donde el sujeto humano está hospitalizado, en donde el coronavirus es el SARS-CoV-2 y el paciente padece covid-19. También se divulga una enfermedad respiratoria aguda, tal como las causadas por el SARS-CoV o el MERS. En el contexto de la invención, el coronavirus es SARS-CoV2 y el correspondiente paciente que se va a tratar padece covid-19. El uso del inhibidor de MEK PD-0184264 de la invención está previsto cuando la covid-19 es covid-19 en Etapa II.

Como se ha mencionado anteriormente, el inhibidor de MEK de la invención es PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. También se divulgan los siguientes inhibidores de MEK CI-1040, GSK-1120212, GDC-0973, binimetinib, selumetinib, PLX-4032, AZD6244, AZD8330, AS-703026, RDEA-119, RO-5126766, RO-4987655, PD-0325901, TAK-733, AS703026, PD98059 y PD184352, o sal o metabolito farmacéuticamente aceptable de los mismos. Preferentemente, el inhibidor de MEK es PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una forma farmacéutica preferida, el PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra al sujeto humano una vez al día en una dosis de 100 a 1000 mg, preferentemente de 300 a 900 mg, lo más preferentemente de 300, 600 o 900 mg.

De acuerdo con la invención, PD-0184264 se utiliza para tratar a un paciente humano hospitalizado que padece covid-19 causada por SARS-CoV-2. Preferentemente, la covid-19 es covid-19 en Etapa II. El PD-0184264 puede administrarse al sujeto humano en de 1 a 21 días consecutivos, preferentemente de 5 a 18 o de 7 a 14 días consecutivos tras la hospitalización. Preferentemente, el PD-0184264 se administra al sujeto humano en una forma farmacéutica oral.

En un aspecto adicional, el inhibidor de MEK de la invención PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se utiliza para tratar a un paciente humano hospitalizado, en donde el coronavirus es resistente al tratamiento antiviral previo, tal como Remdesivir. Además, el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede utilizarse para tratar al sujeto humano hospitalizado mayor de 60 años o perteneciente a un grupo de alto riesgo de infección por coronavirus.

La invención se dirige además al uso del inhibidor de MEK PD-0184264 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar o prevenir una tormenta de citocinas por la covid-19 en un sujeto infectado por un coronavirus humano. El inhibidor de MEK de acuerdo con la invención es PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. También se divulgan los siguientes inhibidores de MEK CI-1040, GSK-1120212, GDC-0973, binimetinib, selumetinib, PLX-4032, AZD6244, AZD8330, AS-703026, RDEA-119, RO-5126766, RO-4987655, PD-0325901, TAK-733, AS703026, PD98059 y PD184352, o sal o metabolito farmacéuticamente aceptable de los mismos.

El uso del inhibidor de MEK PD-0184264 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar o prevenir una tormenta de citocinas por la covid-19 en un sujeto puede comprender la reducción del nivel de IL-1p y/o TNF-a en el sujeto, preferentemente reduciendo el nivel de uno o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o los seis o TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-ip en un sujeto.

En línea con lo anterior, la invención también se dirige al uso de PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un método de tratamiento o prevención de una tormenta de citocinas por la covid-19 en un sujeto que sufre una infección por coronavirus humano, en donde el método comprende administrar al sujeto el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Este uso de PD-0184264 o sal farmacéuticamente aceptable del mismo en el método puede comprender la reducción del nivel de IL-1p y/o TNF-a en (la sangre o plasma) del sujeto, preferentemente reduciendo el nivel de uno o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o los seis o TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1p en (la sangre o el plasma) del sujeto.

Finalmente, las composiciones farmacéuticas que comprenden el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el uso y los tratamientos médicos descritos en el presente documento forman parte de la invención.

Breve descripción de las figuras

Figura 1:LaFig. 1(A)muestra una vista de carril del análisis de transferencia Western de células CaCo-2 infectadas con SARS-CoV-2 y tratadas con ATR-002. Se detectaron pERK1/2, ERK1/2 y proteína nucleocápside en células Caco2 infectadas con SARS-CoV2 tratadas con ATR-002. Como control se utilizaron células no infectadas (simulación).

LasFigs. 1 (B)-(D)muestran una comparación de la fosforilación de ERK y la correlación de la proteína nucleocápside de células Caco-2 infectadas con SARS-CoV-2, tratadas con ATR-002.

La Fig. 1(B) muestra la fosforilación de ERK. El área bajo el pico se utilizó para normalizar pERK1/2 a ERK1/2 y calcular los valores de % de fosforilación de ERK.

La Fig. 1(C) muestra la concentración de proteínas nucleósidos de las células Caco-2 tratadas con diferentes concentraciones de ATR-002 en comparación con el control de DMSO.

La Fig. 1(D) muestra el título viral (uFP/ml) de las células Caco-2 tratadas con diferentes concentraciones de ATR-002 en comparación con el control de DMSO.

Figura 2:LaFig.1 (A)muestra la infección de células Vero con SARS-CoV-2 tras la inhibición de MEK.

LaFig.1 (B)muestra la detección del gen viral RdRP durante la infección con SARS-CoV-2 tras la inhibición de MEK.

LaFigura 3muestra que ATR-002 reduce la expresión génica de citocinas y quimiocinas en un modelo de ratón de lesión pulmonar aguda (LPA).

LaFigura 4muestra que ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas tras la infección por SARS-CoV-2 de células CaCo2.

LaFigura 5muestra que ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas en células CMSP. LaFigura 6muestra una representación esquemática de la modulación de la abrumadora respuesta de citocinas tras el tratamiento con ATR-002.

LaFigura 7representa las etapas de la covid-19 de acuerdo con Hasanet al.

Descripción detallada

La siguiente descripción incluye información que puede ser útil para comprender la presente invención. No se admite que la información proporcionada en el presente documento sea técnica anterior o relevante para la invención reivindicada actualmente, o que cualquier publicación a la que se haga referencia de forma específica o implícita sea técnica anterior.

Dicho lo anterior, la presente invención se refiere al inhibidor de MEK PD-0184264 o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad viral en un paciente humano hospitalizado causada por un coronavirus. Como se muestra en los ejemplos, los inventores demostraron que, sorprendentemente, el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tiene un doble efecto en el tratamiento de enfermedades tales como la covid-19 causada por coronavirus. La presente invención también se refiere al uso de PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar o prevenir la tormenta de citocinas por la covid-19 en pacientes infectados por un coronavirus, en particular, que están infectado por el SARS-CoV2.

De acuerdo con la invención, como se demuestra en los ejemplos adjuntos, ATR-002 muestra un efecto directo sobre la propagación viral del SARS-CoV2, así como un efecto inmunomodulador que conduce a una disminución de la liberación de citocinas. Este doble efecto es sorprendente y hace que este inhibidor de MEK sea especialmente adecuado para el tratamiento de pacientes con covid-19 en Etapa II. Como se describe en la sección de antecedentes y se define más adelante, estos pacientes están hospitalizados, pero aún no se encuentran en cuidados intensivos. En estos pacientes, la inhibición de MEK tiene el doble efecto de prevenir la tormenta de citocinas que conduce a la covid-19 en Etapa III y, al mismo tiempo, inhibir la propagación viral para detener la progresión de la enfermedad y reducir la mortalidad.

En los primeros días tras la infección por SARS-CoV-2, se observa la extravasación de macrófagos, neutrófilos y linfocitos NK en el tejido pulmonar infectado. La covid-19 se produce entonces por la liberación de mediadores inflamatorios por parte del epitelio pulmonar infectado, monocitos, células dendríticas y macrófagos alveolares tras la infección con el virus SARS-CoV2. La producción y secreción de citocinas y quimiocinas (p. ej., TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1, MIP-1p) provoca una inflamación aguda local y sistémica y alteraciones de la respuesta inmunitaria adaptativa, lo que se denomina "tormenta de citocinas por la covid-19" (que también se denomina indistintamente "tormenta de citocinas" en el presente documento) y marca la transición de la fase II a la fase III de la covid-19. La expresión "tormenta de citocinas por la covid-19 se utiliza en el presente documento en su significado habitual en la técnica (véase, en este sentido, Jamillouxet al.,2020) para referirse a una tormenta de citocinas que puede producirse en un sujeto que ha sido infectado por un coronavirus patógeno humano, en particular el SARS-CoV-2. A partir de estudios preliminares presentados en los ejemplos, parece que los inhibidores de MEK en general y ATR-002 en particular serían capaces de disminuir simultáneamente la propagación del virus y prevenir la tormenta de citocinas mediante la inhibición de la liberación de citocinas (véase laFigura 6a este respecto). Este doble efecto fue inesperado y es diferente al de otros antivirales que se encuentran actualmente en estudio por su utilidad en el tratamiento de la covid-19, tales como Remdesivir.

A la luz de la pandemia de covid-19, los inventores estaban interesados en determinar si el SARS-CoV2 utiliza la vía MEK para la propagación viral. Para este fin, fue necesario obtener primero una cepa aislada de SARS-CoV-2 (cepa aislada "FI-10o") y luego determinar qué células disponibles podían ser infectadas por el virus. Los inhibidores de m Ek en general y ATR-002 en particular se dirigen al factor MEK de la célula hospedadora, la relación dosis-respuesta de ATR-002 no depende del virus, sino de la inhibición de la cinasa. En experimentosin vitrola eficacia antiviral de ATR-002 depende en gran medida del estado de activación de MEK en la estirpe celular utilizada para el experimento. Las estirpes celulares CaCo2 utilizadas para las investigaciones del SARS-CoV-2 muestran una elevada actividad de MEK constitutiva. Como comparación, también se realizaron experimentos en células Vero. Los métodos específicos utilizados pueden encontrarse en elEjemplo 1y los resultados se muestran en lasFiguras 1y2.Específicamente, la Figura 1 muestra que cuando las células CaCo-2 infectadas con SARS-CoV-2 (MdI = 0,1) se trataron con diferentes concentraciones de ATR-002, se observó la inhibición de la fosforilación de ERK, así como del SARS-CoV-2 y de la proteína nucleocápside, que es un marcador viral, a concentraciones de 50 y 100 pM de ATR-002. Esta elevada cantidad de ATR-002 necesaria para la inhibición no está relacionada con el título del virus, sino que se debe más bien a la elección de las células CaCo2, que tienen MEK constitutivamente activa, por lo que se necesitan cantidades elevadas para inhibir la MEK. Estos experimentos demuestran que el SARS-CoV-2 utiliza la vía MEK para la exportación del virus. Adicionalmente, laFigura 2muestra que las células Vero infectadas con SARS-CoV-2 y tratadas con 50 pM de ATR-002 presentan una carga viral inferior a la de las células de control durante todo el periodo de observación, y la medición del gen viral RdRP del SARS-CoV-2 confirmó este hallazgo. Esto indica que el inhibidor no solo provocó un retraso en la replicación, sino que inhibe de forma sostenible la propagación viral. A la luz delExperimento 1, los inventores concluyeron que el SARS-CoV-2 utiliza la vía MEK para la propagación viral.

En una segunda etapa, los inventores revisaron los datos que se habían obtenido anteriormente en un modelo de ratón de lesión pulmonar aguda (LPA), que se presenta comoEjemplo 2.Específicamente, en el modelo de LPA de ratón, La expresión de citocinas y quimiocinas inducida por LPS permite investigar la eficacia inmunomoduladora de ATR-002 en ausencia de infección viral. LaFigura 3muestra que el tratamiento con ATR-002 de ratones con LPA produce una disminución de las citocinas TNF-alfa, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1p. Como se ha analizado en la sección de antecedentes anterior, de acuerdo con Huanget al.,todas estas citocinas están aumentadas en los pacientes con covid-19, y TNF-alfa, IP-10 y MIP-1p aumentan en los pacientes con covid-19 en Etapa III en comparación con los niveles en el momento de la hospitalización con covid-19 en Etapa II. Esto indica que, independiente de la infección por SARS-CoV2, ATR-002 es capaz de reducir la expresión génica de citocinas y quimiocinas en mamíferos.

Para confirmar que ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas tras la infección por SARS-CoV-2, se realizaron más experimentosin vitroen células CaCo2 como se describe en elEjemplo 3.Se infectaron células CaCo2 con SARS-CoV2 y se trataron con ATR-002. Se midieron las cantidades de MCP-1 y los resultados se muestran en laFigura 4.Específicamente, se descubrió que ATR-002 es capaz de reducir la expresión de MCP-1 en las células infectadas por SARS-CoV2. Sin embargo, para ello es necesaria una cantidad elevada de ATR-002, como se analiza en elEjemplo 1, esto se debe a la activación constitutiva de la vía MEK en las células CaCo2. Debido a una mutación somática del conductor, se requieren cantidades elevadas de ATR-002 para inhibir la expresión de MCP-1 en células CaCo-2 infectadas con SARS-CoV-2.

Para ver si este efecto se observa también en otros tipos de células, se estudió el efecto de la inhibición de MEK en células mononucleares de sangre periférica (CMSP) inducidas por LPS, tal como se describe en elEjemplo 4.De nuevo, se descubrió que ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas en las CMSP. Específicamente, se estudiaron las cantidades de expresión de IP10, TNF-alfa y MCP-1 y como puede verse en laFigura 5, las tres se redujeron tras el tratamiento con ATR-002, lo que indica que 10 pg/ml de ATR-002 son suficientes para inhibir >90 % de la M<c>P-1 inducida por LPS en CMSP humanas.

Finalmente, debido a la urgencia de proporcionar un tratamiento para la pandemia de covid-19 y en vista de los prometedores datos de losEjemplos 1-4descritos en el presente documento, así como de los datos positivos de un estudio de seguridad de fase I de ATR-002, está previsto un estudio de fase II. Este estudio de fase II se describe en elEjemplo 5.El estudio se denominaRESPIRE- ARandomized, Double-Blind, Placebo-Controlled, Clinical Study toEvaluate theSafety and Efficacy of ATR-002 in Adult HospitalizedPatients with Moderate Coronavirus Disease (COVID-19) (Estudio clínico aleatorizado, con ocultación doble, controlado con placebo para evaluar la seguridad y eficacia del ATR-002 en pacientes adultos hospitalizados con enfermedad moderada por coronavirus [COVID-19]). El objetivo primario del estudio es demostrar la eficacia de ATR-002 en comparación con el placebo, cada uno en el tratamiento habitual, en el tratamiento de pacientes con covid-19 evaluados por el estado de gravedad clínica en el día 15. De acuerdo con lo determinado por losEjemplos 1a4, ATR-002 puede tratar la covid-19 debido a su modo de acción con un doble beneficio (efecto) siendo (1) un agente antiviral, y (2) inmunomodulador (para interferir con la tormenta de citocinas). En este estudio clínico se inscribirá a un total de 200 pacientes adultos hospitalizados que padecen enfermedad por coronavirus moderada en Etapa II. Se tomará un hisopo nasofaríngeo inmediatamente antes de la aleatorización para confirmar la presencia de SARS-CoV-2 a partir de entonces.

Todos los pacientes aleatorizados recibirán los cuidados habituales de acuerdo con las normas locales. 100 pacientes serán aleatorizados para recibir 900 mg de ATR-002 por vía oral una vez al día, 100 pacientes recibirán un placebo equivalente. Se suministrará ATR-002 o placebo de forma controlada con ocultación doble durante 5 días.

El objetivo primario del estudio es evaluar la eficacia de ATR-002 en relación con placebo medida por el estado de gravedad clínica en una escala ordinal de 7 puntos [1] No hospitalizado, sin limitaciones, [2] No hospitalizado, con limitaciones, [3] Hospitalizado, que no requieran oxígeno suplementario, [4] Hospitalizado, que requiere oxígeno suplementario, [5] Hospitalizado, con ventilación no invasiva o dispositivos de oxígeno de alto flujo, [6] Hospitalizado, con ventilación mecánica invasiva o ECMO, [7] Fallecimiento.

Los resultados secundarios se medirán mediante signos y síntomas clínicos, resultados notificados por el paciente, acontecimientos adversos surgidos durante el tratamiento, acontecimientos adversos graves, parámetros clínicos derivados, puntuaciones y acontecimientos del estudio, cambios en los valores de laboratorio y en los niveles plasmáticos de ATR-002, así como cambios en las muestras cuantitativas de SARS-CoV-2.

Se realizará un seguimiento de todos los pacientes tras finalizar el tratamiento farmacológico del estudio hasta el día 90 por motivos de seguridad y para determinar el estado de supervivencia.

Los pacientes seleccionados para el estudio son adultos de 18 años o más en el momento del cribado y que requieren hospitalización, que presentan signos clínicos de infección por covid-19, definida como fiebre, definida como temperatura >37,3 °C (axila), >38,0 °C (oral) o > 38,6 °C (rectal o timpánica) y SpO2 <=94 % en aire ambiente o que requieran oxígeno suplementario para mantener SpO2>94 %. Basándose en los estudios antivirales y de citocinas/quimiocinas mostrados en los ejemplos y en datos adicionales del estudio clínico de fase I, se requiere una inhibición de >50 %-90 % de la actividad de MEK para reducir la carga viral y la expresión de citocinas/quimiocinas en más del 50 %. En el estudio RESPIRE previsto descrito anteriormente y en elEjemplo 5, se tratará a pacientes que padecen covid-19 en Etapa II.

Como puede verse en laFigura 7, que procede de un trabajo de Hasanet al.,titulado "COVID-19 Illness in Native and Immunosuppressed States: A Clinical-Therapeutic Staging Proposal" y que se resume a continuación, en la covid-19 en Etapa II están en curso tanto la etapa de respuesta viral como la etapa de respuesta del hospedador, por lo que esta sería la etapa en la que el uso de un inhibidor de MEK sería más útil. Las etapas de covid-19 determinadas por Hasanet al.se resumen de nuevo a continuación.

La etapa inicial, llamada Etapa I, es una infección leve y se presenta en el momento de la inoculación y establecimiento temprano de la enfermedad. En la mayoría de las personas, esto implica un período de incubación asociado con síntomas leves y frecuentemente no específicos por algunos días tal como malestar, fiebre y tos seca. En pacientes quienes mantienen el virus limitado a esta etapa de la covid-19, es excelente el pronóstico y la recuperación. El tratamiento en esta etapa está principalmente dirigido hacia alivio sintomático. Se debe proporcionar una terapia antiviral benéfica, que se dirija a pacientes seleccionados durante esta etapa que pueda reducir la duración de los síntomas, minimizar el contagio y prevenir la progresión de la gravedad.

En la segunda etapa, llamada Etapa II, de una enfermedad pulmonar establecida, la norma es la multiplicación viral e inflamación localizada en el pulmón. La Etapa II incluye implicación pulmonar, llamada Etapa IIa, sin y Etapa IIb con hipoxia. Durante esta etapa, los pacientes desarrollan neumonía viral, con tos, fiebre y posiblemente hipoxia. Durante el curso de la enfermedad, se presenta disnea después de una mediana de 13 días después del primer inicio de los síntomas (intervalo 9-16,5 días). La disnea es un signo de enfermedad grave de las vías respiratorias, pulmones o corazón y se caracteriza por respiración difícil o laboriosa y disnea. En el caso de la covid-19, la imagenología con rayos X de tórax o tomografía computarizada revela infiltrados bilaterales u opacidades en vidrio deslustrado. Esta es una etapa que la mayoría de pacientes con covid-19 necesitan ser hospitalizados para observación cercana y manejo. El tratamiento consiste principalmente en medidas de apoyo y terapias antivirales, una vez disponibles. Es posible que los pacientes no obstante progresen a Etapa III para requerir ventilación mecánica en una unidad de cuidado intensivo (UCI).

En la covid-19 de Etapa II, los marcadores de inflamación sistémica se pueden elevar, pero no notablemente. En estudios tempranos llevados a cabo en el primer grupo de pacientes en Wuhan, China, se encontró que tras el ingreso en el hospital, las concentraciones en plasma de IL1p, IL1RA, IL7, IL8, IL9, IL10, FGF básico, GCSF, GMCSF, IFNy, IP10, MCP1, MIP1a, MIP1p, PDGF, TNFa y VEGF fueron más altas que en los adultos sanos. Además, se encontró que los pacientes en la UCI tuvieron concentraciones en plasma de IL2, IL7, IL10, GCSF, IP10, MCP1, MIP1a, y TNFa fueron mayores que en los pacientes tras la admisión al hospital (Huanget al.; The Lancet;Vol 395; pág.: 497-506, 15 de febrero de 2020), indicando que un incremento en estas citocinas marca la transición de covid-19 de etapa II a etapa III. Esta transición se caracteriza por un deterioro clínico repentino y de rápida progresión que se denomina "tormenta de citocinas por la covid-19" (también denominada "tormenta de citocinas" en el presente documento). Como se describe en detalle en Jamillouxet al.(Autoimmunity Reviews 2020), aquí los marcadores de inflamación sistémica están elevados, tales como IL-1p, IL-Ra, IL-6, TNF-a y sIL2Ra. Esto corresponde a lo demostrado por Huanget al.comentado anteriormente.

Una minoría de pacientes con covid-19 experimentará una tormenta de citocinas por la covid-19 y pasará a la tercera etapa y más grave de la enfermedad, llamada Etapa III, que se manifiesta como un síndrome de hiperinflamación sistémica extrapulmonar. En general, el pronóstico y la recuperación de esta etapa crítica de la enfermedad son muy malos.

Por este motivo, el mecanismo dual proporcionado por la inhibición de MEK sería fundamental para evitar la progresión a la Etapa III y, por tanto, disminuir la mortalidad.

El inhibidor de MEK de la presente invención PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es para su uso en un método de tratamiento y/o prevención. Como tal, el término "tratar" o "tratamiento" incluye la administración del inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, preferentemente en forma de composición farmacéutica, a un sujeto que padezca una infección por coronavirus con el fin de aliviar o mejorar los síntomas. Del mismo modo, se incluye la administración del inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, preferentemente en forma de fármaco, a un sujeto que sufra una tormenta de citocinas por la covid-19 con el fin de mejorar o atenuar los síntomas.

De manera adicional, el término "prevención" como se utiliza en el presente documento, se refiere a un procedimiento médico cuya finalidad es prevenir una enfermedad. Como se utilizan en el presente documento, los términos "impedir", "prevención" y "prevenir" se refieren a la reducción del riesgo de adquirir o desarrollar una afección determinada en un paciente diagnosticado de infección por coronavirus, como una tormenta de citocinas por la covid-19. También se entiende por "prevención" la reducción o inhibición de los marcadores de hiperinflamación sistémica, tales como TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y/o MIP-1p, en un sujeto diagnosticado con una infección por coronavirus, tal como el SARS-CoV-2 para reducir el riesgo de hiperinflamación sistémica, tal como una tormenta de citocinas por la covid-19, en un sujeto.

Los "inhibidores de MEK" inhiben la cascada de señalización mitogénica Raf/MEK/ERK en células o en un sujeto mediante la inhibición de la MEK (proteína cinasa cinasa activada por mitógenos). Esta cascada de señalización es secuestrada por muchos virus, en particular, los virus de la gripe y los coronavirus, para impulsar la replicación viral. Por tanto, el bloqueo específico de la vía Raf/MEK/ERK en el cuello de botella MEK impide el crecimiento de los virus, en particular los coronavirus. Adicionalmente, los inhibidores de la MEK presentan baja toxicidad y escasos efectos secundarios adversos en humanos. Tampoco hay tendencia a inducir resistencia viral (Ludwig, 2009). De acuerdo con la invención, el inhibidor de MEK es PD-0184264 o sal farmacéuticamente aceptable del mismo. También se divulgan los siguientes inhibidores de MEK CI-1040, GSK-1120212, GDC-0973, binimetinib, selumetinib, PLX-4032, AZD6244, AZD8330, AS-703026, RDEA-119, RO-5126766, RO-4987655, PD-0325901, TAK-733, AS703026, PD98059 y PD184352, o sal o metabolito farmacéuticamente aceptable de los mismos. El inhibidor de MEK de acuerdo con la invención es PD-0184264.

La "enfermedad" causada por un coronavirus puede ser una enfermedad respiratoria aguda causada por el SARS-CoV, SARS-CoV-2 o MERS. De acuerdo con la invención, el coronavirus es sARS-CoV2 y el paciente padece covid-19. En la versión más preferida, la enfermedad es covid-19 en Etapa II.

El "coronavirus" de acuerdo con la invención es el SARS-CoV2. También se divulgan los siguientes coronavirus SARS-CoV o MERS o un nuevo coronavirus zoonótico o mutante relacionado. En una realización específica, el coronavirus es resistente al tratamiento antiviral previo, tal como Remdesivir.

El "sujeto", que puede ser tratado por el inhibidor, el inhibidor de MEK de la presente invención PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es un sujeto humano a quien se ha diagnosticado una infección por coronavirus. En una realización, el sujeto está hospitalizado. El sujeto puede tener cualquier edad, y puede ser un niño de entre 0 y 10 años, un adolescente de entre 10 y 18 años o un adulto de 18 años en adelante. Opcionalmente, el sujeto puede tener entre 50 y 65 años, entre 18 y 50 años, o ser mayor de 65 años. En otras realizaciones, el sujeto se selecciona del grupo que consiste en sujetos de al menos 60 años de edad, sujetos que residen en centros de cuidados crónicos, sujetos con trastornos crónicos del sistema pulmonar o cardiovascular, sujetos que requirieron seguimiento médico regular u hospitalización durante el año anterior debido a enfermedades metabólicas crónicas, insuficiencia renal, hemoglobinopatías o inmunosupresión.

En un aspecto específico, el sujeto puede ser tratado con el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para prevenir o tratar una "tormenta de citocinas por la covid-19". Como se ha mencionado anteriormente, esta expresión se utiliza en su sentido habitual en la técnica (véase, en este respecto, Jamillouxet al.,2020) para referirse a una tormenta de citocinas que puede producirse en sujetos que han sido infectados por un coronavirus patógeno humano, en particular el SARS-CoV-2. Dicha tormenta de citocinas se caracteriza por un rápido deterioro clínico, y un aumento de las citocinas proinflamatorias marca la transición de la Etapa II a la Etapa III de la covid-19. Específicamente, tanto Huanget al.como Jamillouxet al.señalan que se observó un aumento repentino de IL-1p y/o TNF-α, posiblemente junto con un aumento de dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o los seis de TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1p. En un aspecto, el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se utiliza para reducir el nivel de IL-1p y/o TNF-a en el sujeto, preferentemente reduciendo el nivel de uno o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o los seis de TNF-α, IL-iβ, IP-10, IL-8, MCP-1 y M IP-ip en un sujeto.

Las citocinas y quimiocinas inflamatorias citadas anteriormente son bien conocidas en la técnica. Específicamente, los términos TNF-α, IL-1β, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1p se refieren a las secuencias de proteínas humanas conocidas en UNIPROT y GENEBANK con los siguientes números de registro:

La composición farmacéutica para el uso de la invención y que comprende el inhibidor de MEK PD-0184264 se administra a un paciente humano hospitalizado y que padece una enfermedad causada por un coronavirus. En un aspecto, el paciente humano tiene más de 60 años o pertenece a un grupo de alto o muy alto riesgo de infección por el coronavirus. En el caso de la covid-19, el grupo de muy alto riesgo incluye a pacientes que:

• tienen más de 70 años

• se han sometido a un trasplante de órganos

• están recibiendo quimioterapia activa

• se someten a radioterapia radical por cáncer de pulmón

• padecen cánceres de la sangre o de la médula ósea tales como leucemia, linfoma o mieloma en cualquier fase de tratamiento

• están recibiendo inmunoterapia u otros tratamientos continuados con anticuerpos para el cáncer

• están recibiendo otros tratamientos dirigidos contra el cáncer que pueden afectar al sistema inmunitario • que se hayan sometido a un trasplante de médula ósea o de células madre en los últimos 6 meses, o que sigan tomando medicamentos inmunosupresores

• que padecen afecciones respiratorias graves, incluida la fibrosis quística, asma grave, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar, enfermedad pulmonar intersticial y EPOC grave

• que padecen una afección que suponga un riesgo muy elevado de contraer infecciones (como SCID, drepanocitosis homocigótica)

• que están tomando medicamentos que le hacen mucho más propenso a contraer infecciones (como altas dosis de esteroides o terapias de inmunosupresión)

• que padecen una cardiopatía grave y que están embarazadas.

El grupo de alto riesgo incluye a las personas que:

• tienen más de 60 años

• tienen una discapacidad de aprendizaje

• tienen una afección pulmonar que no es grave (tal como asma, EPOC, enfisema o bronquitis)

• que padecen una cardiopatía (tal como insuficiencia cardíaca)

• que tienen la tensión arterial alta (hipertensión)

• que tienen diabetes

• que padecen una enfermedad renal crónica

• que padecen una enfermedad hepática (tal como hepatitis)

• que padecen una enfermedad que puede afectar a su respiración

• que tienen cáncer

• que tienen un sistema inmunitario débil (inmunodeprimidos)

• que padecen una enfermedad cerebrovascular

• que padecen una enfermedad que afecte al cerebro o a los nervios (tal como la enfermedad de Parkinson), enfermedad de la motoneurona, esclerosis múltiple o parálisis cerebral)

• que tienen un problema en el bazo o se les ha extirpado el bazo

• que padecen una enfermedad que implique un alto riesgo de contraer infecciones (tal como VIH, lupus o esclerodermia)

• que están tomando medicamentos que pueden afectar al sistema inmunitario (como dosis bajas de esteroides) • que tienen obesidad.

El PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el método de la invención, PD-0184264 puede administrarse por vía oral, intravenosa, intrapleural, intramuscular, tópica o por inhalación. Preferentemente, PD-0184264 se administra por inhalación o por vía oral. En una realización preferida, PD-0184264 se administra una vez al día en una dosis oral de entre 100 mg y 1000 mg, preferentemente de 300 mg, 600 mg o 900 mg, durante 1 a 21 días consecutivos, preferentemente de 5 a 18 o de 7 a 14 días consecutivos tras la hospitalización.

Específicamente, como se ha descrito anteriormente, en los estudios clínicos de fase I, el PD-0184264 se administró con una dosis inicial de 100 mg y hasta tres escalones de aumento en siete grupos, siguiendo una pauta de dosis única ascendente/múltiples dosis ascendentes (SAD/MAD[single ascending dose/multiple ascending dose]).El esquema de administración fue una dosis de PD-0184264, que aumenta de 100 mg a 900 mg (SAD), seguida de siete dosis de PD-0184264, que aumentan de 100 mg a 600 mg una vez al día durante siete días (MAD). Cada cohorte de dosis fue considerada segura por el Comité de Revisión de Seguridad (SRC, Safety Review Committee), con liberación permitida para la dosis inmediatamente superior (hasta SAD de 900 mg y MAD de 600 mg, respectivamente). El perfil farmacocinético observado respalda la pauta de una toma diaria previsto para el desarrollo clínico ulterior, y se prevé probar una dosis de 900 mg.

Solo se observaron unos pocos acontecimientos adversos en total y ningún acontecimiento adverso grave durante el ensayo. Así pues, el PD-0184264 se considera seguro y bien tolerado. La exposición farmacocinética y la determinación de la inhibición de la MEK se verificaron en el estudio de fase I y confirman el mantenimiento de niveles sanguíneos clínicamente relevantes.

La presente invención también contempla diferentes composiciones, preferentemente composiciones farmacéuticas. La presente invención se refiere a una composición que comprende PD-0184264 para su uso en un método para el tratamiento de una enfermedad causada por un coronavirus, en donde el coronavirus es el SARS-CoV-2 y el paciente padece covid-19.

Como se ha mencionado anteriormente, la composición que comprende el inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser una composición farmacéutica. De acuerdo con la invención, la composición farmacéutica comprende PD-0184264. Preferentemente, dichas composiciones comprenden además un portador, preferentemente un portador farmacéuticamente aceptable. La composición puede presentarse en forma de suspensiones o comprimidos administrables por vía oral, aerosoles nasales, preparados para dispositivos de inhalación, preparados inyectables estériles (por vía intravenosa, por vía intrapleural, intramuscular), por ejemplo, como suspensiones o supositorios acuosos u oleaginosos inyectables estériles.

El inhibidor de MEK PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra preferentemente en una cantidad terapéuticamente eficaz. La "cantidad terapéuticamente eficaz" para PD-0184264 o cada compuesto/inhibidor activo puede variar con factores que incluyen pero no se limitan a la actividad del compuesto utilizado, estabilidad del compuesto activo en el organismo del paciente, la gravedad de la afección que se debe aliviar, el peso total del paciente tratado, la vía de administración, la facilidad de absorción, distribución y excreción del compuesto por el organismo, la edad y la sensibilidad del paciente que se va a tratar, acontecimientos adversos y similares, como será evidente para el experto en la materia. La cantidad de administración puede ajustarse a medida que los diversos factores cambien con el tiempo.

Los inhibidores, los métodos y usos descritos en el presente documento son aplicables a la terapia humana. El compuesto descrito en el presente documento, PD-0184264, puede administrarse a un sujeto en un portador fisiológicamente aceptable, como se describe en el presente documento. De acuerdo con la forma de presentación, los compuestos pueden formularse de diversas maneras, como se expone a continuación. La concentración del compuesto terapéuticamente activo en la formulación puede variar entre el 0,1 y 100 % en peso. Los agentes pueden administrarse solos o junto con otros tratamientos. Por ejemplo, para el tratamiento de la covid-19 en Etapa II, el PD-0184264 puede administrarse a una dosis comprendida entre 10 y 100 mg/kg de PD-0184264, preferentemente en el intervalo de 25 a 75 mg/kg de PD-0184264. La administración preferida es una dosis diaria de entre 100 y 1000 mg, incluyendo cualquier dosis intermedia de 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800 y 900 mg. En una realización preferida, la administración es una vez al día y la dosis es de 600 mg o 900 mg por vía oral. PD-0184264 puede administrarse durante un periodo de tiempo de 1 a 21 días consecutivos o más, preferentemente de 5 a 18 y, lo más preferentemente, de 7 a 14 días después de la hospitalización.

Los compuestos farmacéuticos del método de la presente invención pueden administrarse en cualquier forma farmacéutica unitaria adecuada. Las formulaciones orales adecuadas pueden presentarse en forma de comprimidos, cápsulas, suspensión, jarabe, chicle, oblea, elixir y similares. En las composiciones farmacéuticas orales pueden incluirse portadores farmacéuticamente aceptables como aglutinantes, excipientes, lubricantes y agentes edulcorantes o aromatizantes. Si se desea, también pueden incluirse agentes convencionales para modificar los sabores, colores y formas de las formas especiales.

Para formulaciones inyectables, las composiciones farmacéuticas pueden estar en polvo liofilizado mezclados con excipientes adecuados en un vial o tubo adecuado. Antes de su uso en el entorno clínico, los fármacos pueden reconstituirse disolviendo el polvo liofilizado en un sistema disolvente adecuado para formar una composición apta para inyección intravenosa o intramuscular.

En una realización, la reducción de la infección viral es una reducción de las unidades formadoras de placa (UFP)/ml. Las "unidades formadoras de placas" son una medida del número de partículas capaces de formar placas por unidad de volumen, tales como las partículas de virus. Es una medida funcional más que una medida de la cantidad absoluta de partículas: las partículas víricas defectuosas o que no infecten a su célula diana no producirán una placa y, por tanto, no se contabilizarán. Por ejemplo, una solución de coronavirus con una concentración de 1000 UFP/jl indica que 1 |jl de la solución lleva suficientes partículas de virus para producir 1000 placas infecciosas en una monocapa celular. En el caso de la presente invención, un cultivo celular tratado con un inhibidor muestra un número reducido de unidades formadoras de placas en un cultivo después del tratamiento, en comparación con un cultivo previo al tratamiento con el inhibidor de MEK PD-0184264.

A efectos de la invención, el compuesto activo definido anteriormente también incluye la(s) sal(es) farmacéuticamente aceptable(s) del mismo. La expresión "sal(es) farmacéuticamente aceptable(s)", como se utiliza en el presente documento, se refiere a aquellas sales de compuestos de la invención que son seguras y eficaces para la forma de administración deseada. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas formadas con aniones tales como las derivadas de ácido clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc. y aquellas formadas con cationes tales como aquellas derivadas de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaína, etc.

Se debe indicar que, tal como se usa en el presente documento, las formas en singular "un", "uno/a" y "el/la", incluyen los referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por tanto, por ejemplo, la referencia a "un reactivo" incluye uno o más de dichos reactivos diferentes y la referencia a "el método" incluye referencias a etapas equivalentes y métodos conocidos por los expertos en la materia que podrían modificarse o sustituirse por los métodos descritos en el presente documento.

Salvo que se indique de otro modo, la expresión "al menos", que precede a una serie de elementos, debe entenderse que se refiere a cada elemento de la serie. Los expertos en la materia reconocerán, o serán capaces de determinar, usando nada más que la experimentación habitual, muchos equivalentes a las realizaciones específicas de la invención descritas en el presente documento. Se pretende que tales equivalentes estén incluidos en la presente invención.

A lo largo de esta memoria descriptiva y de las reivindicaciones que la siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, el término "comprenden" y sus variantes tales como "comprende" y "que comprende", se entenderá que implica la inclusión de un elemento integrante o de etapa, o grupo de elementos integrantes o de etapas, pero no la exclusión de ningún otro elemento integrante o etapa, o grupo de elementos integrantes o de etapas. Cuando se usa en el presente documento, la expresión "que comprende" puede sustituirse con la expresión "que contiene" o, a veces, cuando se usa en el presente documento, con la expresión "que tiene".

Cuando se usa en el presente documento, "que consiste en" excluye cualquier elemento, etapa o ingrediente no especificado en el elemento de la reivindicación. Cuando se utiliza en el presente documento, la expresión "que consiste/n esencialmente en" no excluye los materiales o las etapas que no afecten materialmente a las características básicas y novedosas de la reivindicación.

En cada caso, en el presente documento, cualquiera de las expresiones "que comprende", "que consiste esencialmente en" y "que consiste en" se puede sustituir por cualquiera de las otras dos expresiones.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran la invención. Estos ejemplos no deben interpretarse como limitativos del alcance de la invención. Los ejemplos se incluyen a título ilustrativo y la presente invención está limitada únicamente por las reivindicaciones.

MATERIALES:

1. ESTIRPES CELULARES

2. VIRUS

3. FARMACO

ATR-002 (PD0184264) [ácido 2-(2-doro-4-yodofenNamino)-N-3,4-difluorobenzoico], (M = 409,55 g/mol) se sintetizó en ChemCon GmbH (Friburgo, Alemania). Para todos los experimentos de cultivo celular, se preparó una solución madre 10 mM de ATR-002 en DMSO (Merck-Millipore, Darmstadt, Alemania) y se diluyó en los medios respectivos.

Ejemplo 1: el SARS-CoV-2 utiliza la vía MEK

En este experimento inicial, los inventores estaban interesados en averiguar si la inhibición de la vía MEK conduce a la inhibición de la propagación viral. ATR-002 se dirige al factor MEK de la célula hospedadora, sin embargo, la relación dosis-respuesta del ATR-002 no está relacionada con el virus, sino con la inhibición de la cinasa. En experimentosin vitrola eficacia antiviral de ATR-002 depende en gran medida del estado de activación de MEK en la estirpe celular utilizada para el experimento. Las estirpes celulares CaCo2 utilizadas para las investigaciones del SARS-CoV-2 muestran una elevada actividad de MEK constitutiva. Como comparación, también se realizaron experimentos en células Vero.

Métodos:

A. Ensayo de reducción del rendimiento del virus (RRV)

Para el ensayo de reducción del rendimiento del virus se utilizó una placa de 24 pocillos (Greiner Bio-One, Cat. 662 160) con células Caco-2 confluentes al 95 %. Los pocillos se lavaron una vez con medio de infección Caco-2 DMEM (Gibco, Cat. 41965-039) suplementado con un 5% de FCS (Capricorn, Cat. FBS-12A), Penicilina/estreptomicina al 1 %, (Sigma Aldrich, Cat. P4333) y 1 % de aminoácidos no esenciales (NEAA) (Merck, Cat. K 0293). Las células se infectaron con SARS-CoV-2 (Mdl = 0,1) durante 1 h en 200 pl de medio de infección Caco-2 por pocillo. Después se eliminó completamente el inóculo de virus y se trataron las células con 1 ml por pocillo con diferentes concentraciones de ATR-002 (100 pM, 50 pM, 25 pM, 12,5 pM, 6,25 pM, 3,125 pM, 1,56 pM, 0,78 pM, 0,39 pM, 0,195 pM, 0,098 pM, 0 pM) en medio de infección Caco-2 con DMSO al 1 % durante 24 h a 37 °C, CO2 al 5 %. Los sobrenadantes se recogieron 24 horas después de la infección y se centrifugaron a velocidad máxima, 5 min, 4 °C para eliminar los restos celulares. Se prepararon alícuotas de 200 pl y se almacenaron a -80 °C. La capa celular de cada pocillo se lisó añadiendo 50 pl de tampón RIPA modificado suplementado con cócteles de inhibidores de fosfatasas y proteasas, incubación durante 15 min, 4 °C. Los lisados se centrifugaron a velocidad máxima, 5 min, 4 °C, para eliminar los restos celulares. Los lisados se almacenaron a -80 °C.

B. Ensayo de placa Infección de células Vero con SARS-CoV-2 tras la inhibición de MEK

Para determinar el título del virus se realizó un ensayo de placa convencional. Se infectaron células Vero con la cepa FI-200 de SARS-CoV-2 (Mdl = 0,01). 1 hora después de la inyección, las células se trataron con 50 pM de ATR-002 o con la cantidad respectiva de DMSO como control. Los compuestos estuvieron presentes en el medio de cultivo durante todo el tiempo de infección. Después de 24, 36 y 48 hpi, se recogieron los sobrenadantes y se cuantificaron los títulos del virus mediante el ensayo en placa que se indica a continuación. Los datos de un único experimento con tres réplicas biológicas se muestran en laFigura 2A.

Las células Vero E6 se sembraron al 100 % de confluencia en placas de 6 pocillos (Greiner Bio-One, Cat. 657-160).

Se prepararon diluciones séxtuples de muestras de virus en medio de infección Vero E6 (IMDM, Gibco, Cat. 12440 053) suplementado con un 5 % de FCS (Capricorn, Cat. FBS-12A) y 1% de penicilina/estreptomicina (Sigma Aldrich Cat. P4333). Las células se lavaron una vez con medio de infección Vero E6 antes de la infección con 1 ml por pocillo de las diluciones del virus durante 1 h a 37 °C, CO2 al 5 %. Después se retiró completamente el inóculo vírico y se cubrieron las células con medio Avicel-(Avicel al 1,25 % (FMC BioPolymer, Cat. RC581), MEM al 10 % (Gibco, Cat.

21430-20), DEAE-Dextrano al 0,01% (Sigma Aldrich, Cat. n.° D9885), NaHCOa al 2,8% (Merck, Cat. n.°: 1.06329.1000), penicilina/estreptomicina al 1 % (Sigma Aldrich, Cat. P4333), BSA al 0,2 % (Carl Roth, Cat. 9163,4), L-Glutamina al 1 % (Sigma Aldrich, Cat. G7513). Incubación a 37 °C, CO2al 5 %. Transcurridas 72 h, se retiró el medio Avicel. Las células se lavaron dos veces con PBS (Gibco, Cat. 14190-094), se fijaron con Roti-Histofix al 4 % (Carl Roth, Cat. A146.1) en PBS (Lonza, Cat. 17515Q) durante 30 min a 4 °C y se tiñeron con solución de violeta de cristal (violeta de cristal al 1 % (Merck, Cat. 1408), etanol al 10 % (SAV-IP, Cat. ETO-5000-99-1) en H2Odd). El título del virus se calculó a partir del número de placas por pocillo y el factor de dilución respectivo.

C. Detección del gen viral RdRP durante la infección con SARS-CoV-2 tras la inhibición de MEK.

Las células Vero se infectaron con FI-200 (Mdl = 0,01). 1 hora después de la inyección, las células se trataron con 50 |jM de ATR-002 o con la cantidad respectiva de DMSO como control. Los compuestos estuvieron presentes en el medio de cultivo durante todo el tiempo de infección. Después de 24, 36 y 48 hpi, se recogieron los sobrenadantes y se utilizaron para la extracción de ARN. El número de copias del genoma se extrapoló por ml del gen RdRP basado en una curva patrón tras 24, 36 y 48 hpi. Los datos de un único experimento con tres réplicas biológicas se muestran en laFigura 2B.

D. Análisis Wes

Se utilizó electroforesis capilar Wes™ mediante ProteinSimple® para identificar y cuantificar pERK1/2, ERK1/2 y nucleoproteína del SARS-CoV-2. Los lisados celulares se diluyeron con 0,1 x tampón de muestra (ProteinSimple, Abingdon, Oxford, Reino Unido) hasta aproximadamente 50 ng de proteína total por carril y se analizaron utilizando anticuerpos específicos. Los anticuerpos primarios anticuerpo monoclonal de conejo pERK1/2 (fosfo-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP®, Cat. 43702) y anticperuo monoclonal de conejo ERK1/2 (p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5), Cat. 4695) se adquirieron a Cell Signaling Technology (Cell Signaling Technology, Danvers, Massachusetts, EE. UU.) y se utilizaron en diluciones 1:50 (para pERK1/2) y 1:100 (ERK1/2) en diluyente de anticuerpos (ProteinSimple, Abingdon, Oxford, RU). El anticuerpo contra la nucleoproteína del SARS-CoV-2, anticuerpo monoclonal de ratón se adquirió en ProSci (Cat. 35.580) y se utilizó a 1 jg/m l en diluyente de anticuerpos (ProteinSimple, Abingdon, Oxford, RU). El anticuerpo secundario anti-conejo (ProteinSimple, Cat. DM-001) y anticuerpo secundario anti-ratón (ProteinSimple, Cat. DM-002) y todos los demás reactivos para el análisis WES también se adquirieron en ProteinSimple y estaban listos para su uso.

Resultados:

Los resultados de los métodos anteriores pueden verse en lasFiguras 1y2.LaFigura 1muestra que cuando las células CaCo-2 infectadas con SARS-CoV-2 (Mdl = 0,1) se trataron con diferentes concentraciones de ATR-002, se observó la inhibición de ERK, así como del SARS-CoV-2 y de la proteína nucleocápside, que es un marcador viral, a concentraciones de 50 y 100 jM de ATR-002. Esta elevada cantidad de ATR-002 necesaria para la inhibición no está relacionada con el título del virus, sino que se debe más bien a la elección de las células CaCo2, que tienen MEK constitutivamente activa, por lo que se necesitan cantidades elevadas para inhibir la MEK. Estos experimentos demuestran que el SARS-CoV2 utiliza la vía MEK para la exportación del virus.

Además, laFigura 2muestra que las células Vero infectadas con SARS-CoV-2 y tratadas con 50 jM de ATR-002 presentan una carga viral inferior a la de las células de control durante todo el periodo de observación de 24 h, 36 h y 48 h, lo que indica que el inhibidor no solo provocó un retraso en la replicación del virus, sino que inhibió la propagación de forma sostenida. Esto se confirmó mediante la medición del gen viral RdRP del SARS-CoV2.

Ejemplo 2: ATR-002 reduce la expresión génica de citocinas y quimiocinas en un modelo de ratón de lesión pulmonar aguda (LPA)

El modelo de ratón de LPA de expresión de citocinas y quimiocinas inducida por LPS permite investigar la eficacia inmunomoduladora de ATR-002 en ausencia de infección viral.

Métodos:

Los ratones se anestesiaron con ketamina (10 mg/kg) inyectada por vía i.p. Ambos grupos de tratamiento fueron estimulados con 5 mg/kg de LPS preparado en PBS por vía i.p. Una hora después de la estimulación, el grupo de tratamiento fue tratado con 25 mg/kg de ATR-002 por vía i.p. Los ratones fueron sometidos a eutanasia 6 h después del tratamiento y los pulmones se conservaron directamente en RNAlater. El ARN se aisló de los pulmones utilizando el kit RNeasy plus universal Midi (Qiagen, Hilden, Alemania), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La elución del ARN se realizó en dos rondas con agua exenta de ribonucleasa y se almacenó a -20 °C para su posterior análisis. La calidad del ARN se determinó con un espectrofotómetro NanoDrop (ThermoFisher scientific) y se transcribió inversamente con un kit RT2 First Strand Kit (Qiagen, Hilden, Alemania). En lo sucesivo, el ADNc se utilizó en la matriz de PCR RT2 Profiler en tiempo real junto con RT2 SYBR® Green qPCR Mastermix. Para un rendimiento óptimo, las matrices fueron personalizadas para incluir: 84 genes y 5 genes de mantenimiento para utilizarse para la normalización de los datos. Para el control de la calidad, la prueba de contaminación por ADN genómico de ratón, se incluyeron 3 pruebas de eficacia de la transcripción inversa y 3 pruebas de reproducibilidad de conjuntos de PCR. Se presentan los resultados de la expresión de genes que codifican citocinas y quimiocinas implicadas en la covid-19 moderada y grave.

Se utilizaron las siguientes secuencias:

Gen Registro de GeneBank Registro de Uniprot especie

TNF NM_013693 P06804

IL-1b NM_008361 P10749

IP-10 NM_021274 P17515

CXCL1 Ratón

(KC) NM_008176 P12850

MCP-1 NM_011333 P10148

MIP-1P NM_013652 P14097

Resultados:

La Figura 3 muestra que el tratamiento con ATR-002 de ratones con LPA produce una disminución de las citocinas TNF-alfa, IL-1beta, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1beta. Como se ha analizado en la sección de antecedentes anterior, de acuerdo con Huanget al.,todas estas citocinas están aumentadas en los pacientes con covid-19, y TNF-alfa, IP-10 y MIP-1beta aumentan en los pacientes con covid-19 en Etapa III en comparación con los niveles en el momento de la hospitalización con covid-19 en Etapa II. Esto indica que, independiente de la infección por SARS-CoV-2, ATR-002 es capaz de reducir la expresión génica de citocinas y quimiocinas en mamíferos.

Ejemplo 3: ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas tras la infección por SARS-CoV-2 en células CaCo2

Se infectaron células CaCo2 con SARS-CoV-2 y se trataron con ATR-002 como se describe en el Ejemplo 1. Se midieron las cantidades de MCP-1 y los resultados se muestran en laFigura 4.Específicamente, ATR-002 es capaz de reducir la expresión de MCP-1 en células infectadas por SARS-CoV-2. Sin embargo, para ello es necesaria una cantidad elevada de ATR-002, como se analiza en elEjemplo 1, esto se debe a la activación constitutiva de la vía MEK en las células CaCo2. Debido a una mutación somática del conductor, se requieren cantidades elevadas de ATR-002 para inhibir la expresión de MCP-1 en células CaCo2 infectadas por SARS-CoV-2.

Ejemplo 4: ATR-002 reduce la respuesta proinflamatoria de citocinas/quimiocinas en células mononucleares de sangre periférica (CMSP)

Para comprobar qué concentración de ATR-002 sería necesaria para la reducción de citocinas, se estudiaron las cantidades de expresión de IP10, TNF-alfa y MCP-1 en células CMSp inducidas por LPS tras el tratamiento con ATR-002. Como puede observarse en la Figura 5, los tres se redujeron tras el tratamiento con 10 pg/ml de ATR-002, lo que indica que 10 pg/ml de ATR-002 son suficientes para inhibir >90 % de la MCP-1 inducida por LPS en CMSP humanas.

Ejemplo 5:EstudioRESPIRE: un estudio clínico aleatorizado, con ocultación doble, controlado con placebo para evaluar la seguridad y eficacia del ATR-002 en pacientes adultos hospitalizados con enfermedad moderada por coronavirus (COVID-19). El objetivo primario del estudio es demostrar la eficacia de ATR-002 en comparación con el placebo, cada uno en el tratamiento habitual, en el tratamiento de pacientes con covid-19 evaluados por el estado de gravedad clínica en el día 15. ATR-002 puede tratar la covid-19 debido a su modo de acción con un doble beneficio (efecto) siendo (1) un agente antiviral, y (2) inmunomodulador (para interferir con la tormenta de citocinas). En este estudio clínico se inscribirá a un total de 200 pacientes adultos hospitalizados que padecen enfermedad por coronavirus moderada en Etapa II. Se tomará un hisopo nasofaríngeo inmediatamente antes de la aleatorización para confirmar la presencia de SARS-CoV-2 a partir de entonces.

Todos los pacientes aleatorizados recibirán los cuidados habituales de acuerdo con las normas locales. 100 pacientes serán aleatorizados para recibir 900 mg de ATR-002 por vía oral una vez al día, 100 pacientes recibirán un placebo equivalente. Se suministrará ATR-002 o placebo de forma controlada con ocultación doble durante 5 días.

El objetivo primario del estudio es evaluar la eficacia de ATR-002 en relación con placebo medida por el estado de gravedad clínica en una escala ordinal de 7 puntos [1] No hospitalizado, sin limitaciones, [2] No hospitalizado, con limitaciones, [3] Hospitalizado, que no requieran oxígeno suplementario, [4] Hospitalizado, que requiere oxígeno suplementario, [5] Hospitalizado, con ventilación no invasiva o dispositivos de oxígeno de alto flujo, [6] Hospitalizado, con ventilación mecánica invasiva o ECMO, [7] Fallecimiento. Los resultados secundarios se medirán mediante signos y síntomas clínicos, resultados notificados por el paciente, acontecimientos adversos surgidos durante el tratamiento, acontecimientos adversos graves, parámetros clínicos derivados, puntuaciones y acontecimientos del estudio, cambios en los valores de laboratorio y en los niveles plasmáticos de ATR-002, así como cambios en las muestras cuantitativas de SARS-CoV-2.

Se realizará un seguimiento de todos los pacientes tras finalizar el tratamiento farmacológico del estudio hasta el día 90 por motivos de seguridad y para determinar el estado de supervivencia.

Los pacientes seleccionados para el estudio son adultos de 18 años o más en el momento del cribado y que requieren hospitalización, que presentan signos clínicos de infección por covid-19, definida como fiebre, definida como temperatura >37,3 °C (axila), >38,0 °C (oral) o > 38,6 °C (rectal o timpánica) y SpO2 <=94 % en aire ambiente o que requieran oxígeno suplementario para mantener SpO2>94 %.

REFERENCIAS

Haasbach, E.et al(2017). "The MEK-inhibitor CI-1040 displays a broad anti-influenza virus activityin vitroand provides a prolonged treatment window compared to standard of carein vivo". Antiviral research142, 178-184. Hasanet al.(2020). "COVID-19 Illness in Native and Immunosuppressed States: A Clinical-Therapeutic Staging Proposal".J Heart Lung Transplant.20 de marzo de 2020

Huanget al.; The Lancet;Vol 395; pág.: 497-506, 15 de febrero de 2020

Jamillouxet al.;"Should we stimulate or suppress immune response in COVID-19? Cytokine and anti-cytokine interventions", Autoimmunity Reviews, AUTREV 102567 aceptado el 28 de abril de 2020.

LoRusso, P., Adjei, A., Varterasian, M., Gadgeel, S., Reid, J., Mitchell, D.,et al.(2005). "Phase I and Pharmacodynamic Study of the Oral MEK Inhibitor CI-1040 in Patients With Advanced Malignancies".Journal of Clinical Oncology23(23), 5281-5293.

Ludwig, S. (2009). "Targeting cell signaling pathways to fight the flu: towards a paradigm change in anti-influenza therapy".Journal of Antimicrobial Chemotherapy,64, 1-4.

Mackey, T. K., Liang, B. A., 2012. "Lessons from SARS and H1N1/A: employing a WHO-WTO forum to promote optimal economic-public health pandemic response".J Public Health Policy33, 119-130.

Pleschka, S., Wolff, T., Ehrhardt, C., Hobom, G., Planz, O., Rapp, U. R., Ludwig, S., 2001. "Influenza virus propagation is impaired by inhibition of the Raf/MEK/ERK signalling cascade".Nat Cell Biol3, 301-305. Wabnitz, A., Mitchell, D. y Wabnitz, D. (2004)."In Vitroandin VivoMetabolism of the Anti-Cancer Agent CI-1040, a MEK Inhibitor, in Rat, Monkey, and Human".Pharmaceutical Research21(9), 1670-1679.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad causada por un coronavirus en un sujeto humano, en donde el sujeto humano está hospitalizado, en donde el coronavirus es el SARS-CoV-2 y el paciente padece covid-19.

2. PD-0184264 para el uso de la reivindicación 1, en donde la covid-19 es covid-19 en Etapa II.

3. PD-0184264 para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde PD-0184264 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a un sujeto humano una vez al día en una dosis de 100 a 1000 mg, preferentemente de 300 a 900 mg, lo más preferentemente de 300, 600 o 900 mg.

4. PD-0184264 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde PD-0184264 se administra a un sujeto humano en de 1 a 21 días consecutivos, preferentemente de 5 a 18 o de 7 a 14 días consecutivos tras la hospitalización.

5. PD-0184264 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde PD-0184264 se administra al sujeto humano en una forma farmacéutica oral.

6. PD-0184264 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el coronavirus es resistente al tratamiento antiviral previo, en donde el tratamiento antiviral previo es preferentemente la administración de Remdesivir.

7. PD-0184264 para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el sujeto humano hospitalizado es mayor de 60 años o pertenece a un grupo de muy alto riesgo o de alto riesgo para el coronavirus.

8. PD-0184264 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento o la prevención de una tormenta de citocinas por la covid-19 en un sujeto infectado por un coronavirus humano.

9. PD-0184264 para el uso de la reivindicación 8, en donde el uso comprende reducir el nivel de IL-1p y/o TNF-a en el sujeto, preferentemente reduciendo el nivel de uno o más, dos o más, tres o más, cuatro o más, cinco o más o los seis de TNF-a, IL-1p, IP-10, IL-8, MCP-1 y MIP-1p en un sujeto.

10. Una composición farmacéutica que comprende PD-0184264 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.