ES3004870T3 - Tetrazole derivatives as trpa1 inhibitors - Google Patents

Abstract

La presente divulgación describe ciertos derivados de tetrazol que inhiben el potencial transitorio del receptor anquirina 1 (TRPA1) y, por lo tanto, son útiles para el tratamiento de enfermedades que pueden tratarse mediante la inhibición de TRPA1. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que los contienen y procedimientos para su preparación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de tetrazol como inhibidores de TRPA1

Campo de la invención

La presente exposición proporciona determinados derivados de tetrazol que son inhibidores de canal de potencial de receptor transitorio anquirina 1 (TRPA1, por sus siglas en inglés) y, por lo tanto, resultan útiles para el tratamiento de enfermedades tratables mediante la inhibición de TRPA1. Se proporcionan, además, composiciones farmacéuticas que los contienen, y procedimientos para la preparación de dichos compuestos.

Información de antecedentes

Los canales de potencial de receptor transitorio (canales TRP) son un grupo de canales iónicos activados por voltaje que se localizan principalmente en la membrana plasmática de numerosos tipos de células de mamífero. Existen aproximadamente 30 canales TRP relacionados estructuralmente, que se clasifican en grupos: TRPA, TRPC, TRPM, TRPML, TRPN, TRPP y TRPV. El canal catiónico de potencial de receptor transitorio, subfamilia A, miembro 1 (TRPA1), también conocido como canal de potencial de receptor transitorio anquirina 1, es el único miembro de la subfamilia génica TRPA. Estructuralmente, los canales TRPA se caracterizan por múltiples repeticiones N-terminales de anquirina (~14 en el extremo N-terminal de TRPA1 humano) que dan lugar a la “A” por designación a la anquirina (Montell, 2005).

TRPA1 se expresa a un nivel elevado en la membrana plasmática de las neuronas sensoriales en la raíz dorsal y ganglios nodosos que inervan tanto la piel como los pulmones, así como en el intestino delgado, colon, páncreas, músculo esquelético, corazón, cerebro, vejiga y linfocitos (https://www.proteinatlas.org/), así como en fibroblastos pulmonares humanos.

TRPA1 es mejor conocido como un sensor de irritantes ambientales que dan lugar a modalidades somatosensoriales tales como dolor, frío y picor. TRPA1 es activado por varios estímulos electrofílicos reactivos (p. ej., isotiocianato de alilo y especies de oxígeno reactivo), así como compuestos no reactivos (p. ej., icilina), está implicado en la tos asociada al asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis pulmonar idiopática (FPI) o la tos postvírica o la tos idiopática crónica, así como la tos en pacientes sensibles (Song y Chang, 2015; Grace y Belvisi, 2011). Los inhibidores de TRPA1 resultan útiles en el tratamiento de FPI en el que la tos es altamente prevalente debido a la asociación entre tos y lesión pulmonar, basada en estudios que muestran la elevación inducida por la tos de TGF-p (Xie et al., 2009; Froese et al., 2016; Tschumperlin et al., 2003; Yamamoto et al., 2002; Ahamed et al., 2008). Los antagonistas de TRPA1 inhiben la señalización de calcio inducida por inductores de la tos, tales como el estrés oxidativo por extracto de humo de cigarrillos (EHC), la liberación de mediadores inflamatorios y la expresión regulada negativamente de genes antioxidantes (Lin et al., 2015; Wang et al., 2019). Los antagonistas de TRPA1 han resultado eficaces en estudios de la dermatitis atópica (Oh et al., 2013; Wilson et al., 2013), dermatitis por contacto (Liu et al., 2013), el picor asociado a la psoriasis (Wilson et al., 2013) y el picor dependiente de IL-31 (Cevikbas et al., 2014). Se ha asociado la ganancia de función de TRPA1 humano al síndrome del dolor episódico familiar (Kremeyer et al., 2010). Un antagonista de TRPA1 ha resultado eficaz en un modelo conductual de alodinia relacionada con la migraña (Edelmayer et al., 2012). TRPA1 se encuentra selectivamente incrementado en los ganglios trigéminos que inervan dientes dañados (Haas et al., 2011). Es conocido que varios anestésicos son agonistas de TRPA1, incluyendo el isoflurano (Matta et al., 2008), proporcionando la base explicativa de que los inhibidores de TRPA1 proporcionen un alivio del dolor postquirúrgico. Los ratones con inactivación de TRPA1 y los ratones de tipo salvaje tratados con un antagonista de TRPA1 mostraron fenotipos de tipo ansiolítico y antidepresivo (de Moura et al., 2014). Se espera que los inhibidores de TRPA1 resulten beneficiosos en el tratamiento de la neuropatía diabética, según estudios que muestran una vinculación de mecanismo de regulación inversa de AMPK y TRPA1 (Hiyama et al., 2018; Koivisto y Pertovaara, 2013; Wang et al., 2018). Los ratones con inactivación de TRPA1 muestran tamaños menores de infarto de miocardio que los ratones de tipo salvaje (Conklin et al., 2019). La inactivación de TRPA1 y la intervención farmacológica inhiben la colitis inducida con TNBS en ratones (Engel et al., 2011). En un modelo de isquemia cerebral en ratones, la inactivación de TRPA1 y los antagonistas de TRPA1 reducen el daño en la mielina (Hamilton et al., 2016). Los cristales de urato y la inflamación articular son menores en ratones con inactivación de TRPA1 en un modelo de ratón de urato monosódico de gota (Moilanen et al., 2015). La deleción de TRPA1 en ratas mejora la inflamación articular y la hiperalgesia en un modelo de rata de brotes agudos de gota (Trevisan et al., 2014). La activación de TRPA1 induce una respuesta inflamatoria en condrocitos osteoartríticos (Nummenmaa et al., 2016). La inhibición de TRPA1 y la deleción genética reducen los mediadores inflamatorios en condrocitos de ratón y cartílago murino osteoartríticos (Nummenmaa et al., 2016). Finalmente, los ratones con inactivación de TRPA1 mostraron mejoras en la carga de peso en la extremidad osteoartrítica en un modelo de inflamación de la rodilla inducida por MIA (Horvath et al., 2016). TRPA1 se expresa diferencialmente en el epitelio de la vejiga en ratas (Du et al., 2007) y en pacientes con obstrucción de la salida de la vejiga (Du et al., 2008). La modulación de receptores de TRPA1 atenúa la hiperactividad de la vejiga en un modelo de rata de lesión de la médula espinal (Andrade et al., 2011) y la administración intratecal de antagonistas de TRPA1 atenúa la cistitis inducida por ciclofosfamida en ratas con micción por hiperreflexia (Chen et al., 2016).

Por lo tanto, resulta deseable proporcionar potentes inhibidores de TRPA1.

Los inhibidores de TRPA1 de diversas clases estructurales se revisan en S. Skerrat, Progress in Medicinal Chemistry, 2017, volumen 56, 81-115, en: D. Preti, G. Saponaro, A. Szallasi, Pharm. Pat. Anal. (2015) 4(2), 75-94, y en H. Chen, Transient receptor potential ankyrin 1 (TRPA1) antagonists: a patent review (2015-2019), Expert. Opin. Ther. Pat., 2020.

El documento n.° WO2017/060488 da a conocer compuestos que son antagonistas de TRPA1, que presentan la fórmula estructural generalizada:

No se da a conocer actividad de TRPA1 de los Ejemplos 28 y 29 portador de un anillo tetrazolilo en el mismo.

L. Schenkel et al., J. Med. Chem. 2016, 59, 2794-2809, dan a conocer antagonistas de TRPA1 basados en quinazolinona que incluyen compuestos de la fórmula estructural generalizada:

de la que se da a conocer el compuesto 31, en el que R es OH, como presentando actividad antagonista de TRPA1 de IC50 igual a 58 nM en un ensayo FLIPR y que presenta un aclaramiento intrínseco en microsomas hepáticos humanos <14 ^l/min/kg.

Descripción detallada de la invención

La presente invención da a conocer nuevos derivados de tetrazol que son inhibidores de potencial de receptor transitorio anquirina 1 (TRPA1), que poseen propiedades farmacológicas y farmacocinéticas apropiadas que permiten su utilización como medicamentos para el tratamiento de afecciones y/o enfermedades tratables mediante la inhibición de TRPA1.

Los compuestos de la presente invención pueden proporcionar varias ventajas, tales como una potencia mejorada, una mayor estabilidad metabólica y/o química, una selectividad elevada, seguridad y tolerabilidad, una solubilidad incrementada, una permeabilidad incrementada, unión deseable a proteínas plasmáticas, una biodisponibilidad incrementada, perfiles farmacocinéticos adecuados y la posibilidad de formar sales estables.

Los compuestos de la invención

La presente invención proporciona nuevos derivados de tetrazol que son inhibidores inesperadamente potentes de TRPA1 (ensayo A), caracterizados adicionalmente por:

- estabilidad mejorada en microsomas hepáticos humanos (ensayo B),

- estabilidad mejorada en hepatocitos humanos (ensayo C).

Los compuestos de la presente invención difieren estructuralmente de los Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488 en su núcleo tieno[2,3-d]pirimidinona, así como en los sustituyentes contiguos a un alcohol alifático secundario. Los compuestos de la presente invención además difieren estructuralmente del Ejemplo 31 en L. Schenkel et al., J. Med. Chem. 2016, 59, 2794-2809, en que portan un anillo tetrazolilo. Estas diferencias estructurales inesperadamente conducen a una combinación favorable de (i) inhibición de TRPA1, (ii) estabilidad en microsomas hepáticos humanos y (iii) estabilidad en hepatocitos humanos.

De esta manera, los compuestos de la invención son superiores a los dados a conocer en la técnica anterior en términos de la combinación de los parámetros siguientes:

- potencia como inhibidores de TRPA1,

- estabilidad en microsomas hepáticos humanos,

- estabilidad en hepatocitos humanos.

La estabilidad en microsomas hepáticos humanos se refiere a la susceptibilidad de los compuestos a la biotransformación en el contexto de la selección y/o diseño de fármacos con propiedades farmacocinéticas favorables como primera etapa de cribado. El sitio principal de metabolismo para muchos fármacos es el hígado. Los microsomas hepáticos humanos contienen el citocromo P450s (CYP) y, de esta manera, representan un sistema modelo para el estudio del metabolismo de fármacos de fase I in vitro. La estabilidad mejorada en microsomas hepáticos humanos está asociada a varias ventajas, incluyendo una biodisponibilidad incrementada y una semivida adecuada, que pueden permitir la administración de dosis menores y menos frecuentes a los pacientes. De esta manera, una estabilidad incrementada en microsomas hepáticos humanos es una característica favorable para los compuestos que van a utilizarse como fármacos. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención además de que pueden inhibir TRPA1, se espera que presenten un aclaramiento in vivo favorable y, de esta manera, la duración de acción deseada en el ser humano.

La estabilidad en hepatocitos humanos se refiere a la susceptibilidad de los compuestos a la biotransformación en el contexto de la selección y/o diseño de fármacos con propiedades farmacocinéticas favorables. El sitio principal del metabolismo de muchos fármacos es el hígado. Los hepatocitos humanos contienen el citocromo P450 (CYP) y otros enzimas metabolizadores de fármacos y, de esta manera, representan un sistema modelo para el estudio del metabolismo de fármacos in vivo (cabe destacar que, en contraste con el ensayo de microsomas hepáticos, el ensayo de hepatocitos también cubre las biotransformaciones de fase II, así como procesos mediados por transportadores específicos del hígado y, por lo tanto, representa un sistema más completo para estudios de metabolismo de fármacos). La estabilidad incrementada en hepatocitos humanos está asociada a varias ventajas, incluyendo una biodisponibilidad incrementada y una semivida adecuada, que pueden permitir la administración de dosis más bajas y menos frecuentes a los pacientes. De esta manera, una estabilidad incrementada en hepatocitos humanos es una característica favorable para los compuestos que van a utilizarse como fármacos.

La presente invención proporciona nuevos compuestos según la fórmula (I):

en la que:

A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tienofenilo, benzotiofenilo y benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R1 que consiste en -CN, halógeno, alquilo C1-4, O-alquilo C1-4, fluoroalquilo C1-4, O-fluoroalquilo C1-4, cicloalquilo C3-4, O-cicloalquilo C3-4, ciclofluoroalquilo C3-4 y O-ciclofluoroalquilo C3-4.

Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tieno fenilo, benzotiofenilo y benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R1 seleccionados de H3C-O, NC-, Br, Cl, F y H3C.

Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que:

A se selecciona del grupo que consiste en:

no sustituidos o sustituidos con uno o dos elementos del grupo R1, en el que R1 se define tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que:

A se selecciona del grupo que consiste en:

�

5 Resulta particularmente preferente el compuesto según la fórmula (I) seleccionado del grupo que consiste en:

y

Términos y definiciones utilizados

Los términos no definidos específicamente en la presente memoria deben presentar los significados proporcionados a ellos por el experto en la materia a la luz de la exposición y el contexto. Sin embargo, tal como se utiliza en la especificación, a menos que se especifique lo contrario, los términos siguientes presentan el significado indicado y se siguen las convenciones siguientes.

En los grupos, radicales o fracciones definidos posteriormente, el número de átomos de carbono con frecuencia se especifica precediendo el grupo, por ejemplo alquilo C1-6 se refiere a un grupo o radical alquilo que presenta entre 1 y 6 átomos de carbono. En general, en grupos como HO, H2N, (O)S, (O)2S, NC (ciano), HOOC, F3C o similar, el experto en la materia puede obtener el punto o puntos de unión de radicales a la molécula a partir de las valencias libres del grupo mismo. Para grupos combinados que comprenden dos o más subgrupos, el último subgrupo nombrado es el punto de unión de radicales, por ejemplo, el sustituyente “aril-alquilo C1-3” se refiere a un grupo arilo que se una a un grupo alquilo C1-3, en donde este último está unido al núcleo o al grupo al que está unido el sustituyente.

En el caso de que se ilustre un compuesto de la presente invención en forma de un nombre químico y de una fórmula, en caso de cualquier discrepancia, prevalecerá la fórmula. Puede utilizarse un asterisco en subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula central tal como se define.

La numeración de los átomos de un sustituyente se inicia con el átomo que está más próximo al núcleo o al grupo al que está unido el sustituyente.

Por ejemplo, el término “grupo 3-carboxipropilo” representa el sustituyente siguiente:

en el que el grupo carboxi está unido al tercer átomo de carbono del grupo propilo. Los términos “1-metilpropil-“, “2,2-dimetilpropil-“ o “ciclopropilmetil-“ representan los grupos siguientes:

El asterisco puede utilizarse en subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula central según se define.

El término “alquilo C-i-n”, en el que “n” es un número entero seleccionado de 2, 3, 4 o 5, solo o en combinación con otro radical denota un radical hidrocarburo acíclico, saturado, ramificado o lineal con 1 a n átomos de C. Por ejemplo, el término “alquilo C1-5” comprende los radicales H3C-, H3C-CH2-, H3C-CH2-CH2-, H3C-CH(CH3)-, H3C-CH2-CH2-CH2-, H3C-CH2-CH(CH3)-, H3C-CH(CH3)-CH2-, H3C-C(CH3)2-, H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-, H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-, H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-, H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-, H3C-CH2-C(CH3)2-, H3C-C(CH3)2-CH2-, H3C-CH(CH3)-CH(CH3)- and H3C-CH2-CH(CH2CH3)-.

El término “fluoro” añadido a un grupo “alquilo”, “alquileno” o “cicloalquilo” (saturado o insaturado) se refiere a un grupo alquilo o cicloalquilo en el que uno o más átomos de hidrógeno han sido sustituidos por un átomo de flúor. Entre los ejemplos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos: H2FC-, HF2C- y F3C-.

El término “fenilo” se refiere al radical del anillo siguiente:

El término “tiofenilo” se refiere al radical del anillo siguiente:

El término “benzotiofenilo” se refiere al radical del anillo siguiente:

El término “benzofuranilo” se refiere al radical del anillo siguiente:

El término tieno[2,3-d]pirimidinona se refiere al radical del anillo siguiente:

El término “tetrazol” se refiere al radical del anillo siguiente:

El término “sustituido” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a que uno o más hidrógenos cualesquiera en el átomo designado se han sustituido por una selección del grupo indicado, con la condición de que no se exceda la valencia normal del átomo designado, y que la sustitución resulte en un compuesto estable.

A menos que se indique específicamente, a lo largo de toda la especificación y las reivindicaciones adjuntas, una fórmula o nombre químico dado comprenderá tautómeros y todos los estereoisómeros, isómeros ópticos y geométricos (p. ej., enantiómeros, diastereómeros, isómeros E/Z, etc.) y racematos de los mismos, así como mezclas en diferentes proporciones de los enantiómeros separados, mezclas de diastereómeros, o mezclas de cualquiera de las formas anteriormente indicadas, en donde existen dichos isómeros y enantiómeros, así como sales, incluyendo sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, tales como, por ejemplo, hidratos, incluyendo solvatos de los compuestos o solvatos libres de una sal del compuesto.

En general, pueden obtenerse estereoisómeros sustancialmente puros de acuerdo con principios sintéticos conocidos por el experto en la materia, p. ej., mediante separación de mezclas correspondientes, mediante la utilización de materiales de partida estereoquímicamente puros y/o mediante síntesis estereoselectiva. Es conocido de la técnica cómo preparar formas ópticamente activas, tal como mediante resolución de formas racémicas o mediante síntesis, p. ej., partiendo de materiales de partida ópticamente activos y/o mediante la utilización de reactivos quirales.

Pueden prepararse compuestos enantioméricamente puros de la presente invención o compuestos intermedios mediante síntesis asimétrica, por ejemplo mediante preparación y posterior separación de compuestos diastereoméricos apropiados o compuestos intermedios que pueden separarse mediante métodos conocidos (p. ej., mediante separación cromatográfica o cristalización) y/o mediante la utilización de reactivos quirales, tales como materiales de partida quirales, catalizadores quirales o auxiliares quirales.

Además, es conocido por el experto en la materia cómo preparar compuestos enantioméricamente puros a partir de las mezclas racémicas correspondientes, tal como mediante separación cromatográfica de las mezclas racémicas correspondientes en fases estacionarias quirales, o mediante resolución de una mezcla racémica utilizando un agente de resolución apropiado, p. ej., mediante la formación de sal diastereomérica del compuesto racémico con ácidos o bases ópticamente activos, posterior resolución de las sales y liberación del compuesto deseado a partir de la sal, o mediante derivatización de los compuestos racémicos correspondientes con reactivos auxiliares quirales ópticamente activos, posterior separación de diastereómeros y eliminación del grupo auxiliar quiral, o mediante resolución cinética de un racemato (p. ej., mediante resolución enzimática); mediante cristalización enantioselectiva a partir de un conglomerado de cristales enantiomorfos bajo condiciones adecuadas, o mediante cristalización (fraccionada) a partir de un solvente adecuado en la presencia de un auxiliar quiral ópticamente activo.

La expresión “farmacéuticamente aceptable” se utiliza en la presente memoria para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de administración que resultan, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuadas para la utilización sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, y proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a derivados de los compuestos dados a conocer, en donde el compuesto parental forma una sal o un complejo con un ácido o una base. Entre los ejemplos de ácidos que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto parental que contiene una fracción básica se incluyen ácidos minerales u orgánicos, tales como ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido gentísico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido 4-metil-bencenosulfónico, ácido fosfórico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico y ácido tartárico.

Entre los ejemplos de cationes y bases que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto parental que contiene una fracción ácida se incluyen Na+, K+, Ca2+, Mg2+, NH4+, L-arginina, 2,2'-iminobisetanol, L-lisina, N-metil-D-glucamina o tris(hidroximetil)-aminometano. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto parental que contiene una fracción básica o ácida mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse mediante la reacción de las formas de ácido o base libre de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base o ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos.

Las sales de ácidos diferentes de los mencionados anteriormente que, por ejemplo, resultan útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (p. ej., sales trifluoroacetato) también comprenden una parte de la presente invención.

Ensayos biológicos

Evaluación de la actividad de TRPA1

Ensayo A: ensayo de TRPA1

La actividad de los compuestos de la invención pueden mostrarse utilizando el ensayo celular de TRPA1 in vitro siguiente:

Método:

Se utilizó una línea celular HEK293 humana sobreexpresante del canal iónico TRPA1 humano (Perkin Elmer, producto n.° AX-004-PCL) como sistema de ensayo para la eficacia y potencia de los compuestos. Se determinó la actividad de los compuestos mediante la medición del efecto de los mismos sobre la concentración de calcio intracelular inducida mediante agonismo de AITC (isotiocianato de alilo) en un sistema FLIPRtetra (Molecular Devices).

Cultivo celular:

Las células se obtuvieron en forma congelada en viales criogénicos y se almacenaron hasta la utilización, a -150 °C. Se cultivaron las células en medio de cultivo (medio MEM/EBSS con FCS al 10 % y 0,4 mg/ml de geneticina). Es importante que la densidad no exceda el 90 % de confluencia. Para el subcultivo, las células se desprendieron en matraces con Versene. El día antes del ensayo se desprendieron las células, se lavaron dos veces con medio (medio MEM/EBSS con FCS al 10 %) y se sembraron 20000 células en 20 pl/pocillo en placas de 384 pocillos biorrecubiertas con poli-D-lisina (negras, de fondo transparente, n.° de cat. 356697) de Corning. Las placas se incubaron durante 24 horas a 37 °C/5 % de CO2 antes de la utilización en el ensayo.

Preparación de compuestos:

Los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO al 100 % a una concentración de 10 mM y en una primera etapa se diluyeron en DMSO hasta una concentración de 5 mM, seguido de etapas de dilución en serie en DMSO al 100 %. El factor de dilución y el número de etapas de dilución pueden variar según las necesidades. Normalmente se preparan 8 concentraciones diferentes mediante diluciones 1:5; se llevan a cabo diluciones intermedias adicionales (1:20) de las sustancias con tampón HBSS/HEPES (IxHEPES, n.° de cat. 14065 de Gibco, HEPES 20 mM, n.° de cat. 83264 de Sigma, BSA al 0,1 %, n.° de cat. 11926 de Invitrogen, pH 7,4).

Ensayo FLIPR:

El día del ensayo se lavaron las células 3x con tampón de ensayo, quedando 20 |jl de tampón en los pocilios tras el lavado. Se añadieron 10 j l de tampón de carga del kit Ca6 (n.° de cat. R8191, Molecular Devices) en HBSS/HEPES a las células y las placas se incubaron con tapa durante 120 minutos a 37 °C/5 % de CO2. Se añadieron cuidadosamente a los pocillos 10 j l de compuesto o controles en tampón HBSS/HEPES/DMSO al 5 % procedente de la placa de dilución intermedia. Se leyó la luminiscencia (indicativa del flujo de entrada o liberación de calcio) en el dispositivo FLIPRtetra durante 10 minutos a fin de monitorizar los efectos inducidos por los compuestos (p. ej., agonismo). Finalmente, se añadieron 10 j l del agonista AITC 50 jM disueltos en tampón HBSS/HEPES/DMSO al 0,05 % (concentración final: 10 jM ) a los pocillos seguido de una lectura adicional en el dispositivo FLIPRtetra durante 10 minutos. Se utilizó la superficie bajo la curva de señal (AUC) tras la adición de IATC para los cálculos de IC50/% de inhibición.

Evaluación y cálculo de los datos:

Cada placa de microtitulación de ensayo contiene pocillos con vehículo (DMSO al 1 %) como controles en lugar de compuesto como controles para luminiscencia inducida por AITC (100 % CTL; controles altos) y pocillos con controles de vehículo sin AITC como controles para cambios no específicos de luminiscencia (0 % CTL, controles bajos).

El análisis de los datos se llevó a cabo mediante el cálculo de la superficie bajo la curva de señal de los pocillos individuales. Basándose en estos valores, se calculó el valor de % para la medición de la concentración de cada sustancia (AUC(muestra) - AUC(bajo))*100/(AUC(alto) - AUC(bajo)) utilizando el software MegaLab (desarrollo en el propio laboratorio). Se calcularon los valores de IC50 a partir de los valores de % del control utilizando el software MegaLab. Cálculo: [y=(a-d)/(1+(x/c)Ad], a=valor bajo, d=valor alto, x=conc. M; c=IC50 M; b=pendiente; y=% ctrl.

Tabla 1: datos biológicos para compuestos de la invención tal como se obtienen en el ensayo A.

Tabla 2 : datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se obtienen en el Ensayo A.

Tabla 3: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel et al., J. Med. Chem.

2016, 59, 2794-2809) tal como se obtienen en el Ensayo A.

Evaluación del aclaramiento microsómico

Ensayo B: aclaramiento microsómico:

La degradación metabólica del compuesto de ensayo se sometió a ensayo a 37 °C con microsomas hepáticos agrupados. El volumen de incubación final de 100 |jl por punto temporal contiene tampón TRIS, pH 7,5, a TA (0,1 M), cloruro de magnesio (5 mM), proteína microsómica (1 mg/ml) y el compuesto de ensayo a una concentración final de 1 jM .

Tras un corto periodo de preincubación a 37 °C, se iniciaron las reacciones mediante la adición de beta-nicotinamida adenina-dinucleótido fosfato, forma reducida (NADPH, 1 M) y se terminaron mediante transferencia de una alícuota a un solvente tras diferentes puntos temporales (0, 5, 15, 3o, 60 min). Además, se realizó un seguimiento de la degradación independiente de NADPH en incubación sin NADPH, terminadas en el último punto temporal. El [%] de compuesto de ensayo remanente tras la incubación independiente de NADPH se refleja mediante el parámetro c (control) (estabilidad metabólica). Las incubaciones desactivadas se peletizaron mediante centrifugación (10.000 g, 5 min).

Se sometió a ensayo una alícuota del sobrenadante mediante CL-EM/EM para la cantidad de compuesto parental. Se determinó la semivida (t-i/2 INVITRO) a partir de la pendiente del gráfico semilogarítmico del perfil de concentracióntiempo.

Se calculó el aclaramiento intrínseco (CL_INTRINSIC) mediante la consideración de la cantidad de proteína en la incubación:

CL_INTRINSIC [jl/min/mg de proteína] = (Ln 2 / (semivida [min] * contenido de proteína [mg/ml])) * 1000 CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [jl/min/mg de proteína] x MPPGL [mg de proteína/g de hígado] x factor hepático [g/kg de peso corporal]) / 1000

Qh [%] = CL [ml/min/kg] / flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg]

Hepatocelularidad, humana: 120x106 células/g de hígado

Factor hepático, humano: 25,7 g/kg de peso corporal

Flujo sanguíneo, humano: 21 ml/(min x kg)

Tabla 4: datos biológicos para los compuestos de la invención tal como se han obtenido en el Ensayo B.

Tabla 5: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se han obtenido en el Ensayo B.

Tabla 6: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel et al., J. Med. Chem.

2016, 59, 2794-2809) tal como se han obtenido en el Ensayo B.

Evaluación del aclaramiento por hepatocitos

Ensayo C: aclaramiento por hepatocitos

Se sometió a ensayo la degradación metabólica del compuesto de ensayo en una suspensión de hepatocitos.

Se incubaron hepatocitos (preservados criogénicamente) en medio de Eagle modificado por Dulbecco (suplementado con 3,5 |jg de glucagón/500 ml, 2,5 mg de insulina/500 ml y 3,75 mg/500 ml de hidrocortisona) que contenía suero de especie al 5 %.

Tras una preincubación de 30 min en un incubador (37 °C, 10 % de CO2, se añadieron 5 j l de solución de compuesto de ensayo (80 jM , a partir de 2 mM en solución madre en DMSO diluida 1:25 con medio) a 395 j l de suspensión de hepatocitos (densidad celular comprendida en el intervalo de entre 0,25 y 5 millones de células/ml dependiendo de la especie, normalmente 1 millón de células/ml; concentración final de compuesto de ensayo: 1 jM , concentración final en DMSO: 0,05 %).

Las células se incubaron durante seis horas (incubador, agitador orbital) y muestras (25 j l ) a 0, 0,5, 1,2, 4 y 6 horas. Se transfirieron las muestras a acetonitrilo y se peletizaron mediante centrifugación (5 min). El sobrenadante se transfirió a una nueva placa de 96 pocillos profundos, se evaporaron bajo nitrógeno y se resuspendieron.

La disminución del compuesto parental se analizó mediante HPLC-EM/EM.

Se calculó CLint del modo siguiente: CL_INTRINSIC=Dosis/AUC=(C0/CD)/(AUD+c_últ./k) x 1000/60. C0: concentración inicial en la incubación [jM ], CD: densidad celular de células vitales [106 células/ml], AUD: superficie bajo los datos [jM x h], c_últ.: concentración de último punto de datos [jM ], k: pendiente de la línea de regresión para la disminución del compuesto parental [Ir1].

El aclaramiento intrínseco hepáticoin vitrocalculado puede escalarse hasta el aclaramiento hepático in vivo intrínseco y utilizarse para predecir el aclaramiento (CL) sanguíneoin vivohepático mediante la utilización de un modelo hepático (modelo bien agitado).

CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [jl/m in/106 células] x hepatocelularidad [106 células/g de hígado] x factor hepático [g/kg de peso corporal]) / 1000

CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [jl/min/mg de proteína] x MPPGL [mg de proteína/g de hígado] x factor hepático [g/kg de peso corporal]) / 1000

Qh [%] = CL [ml/min/kg] / flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg])

Hepatocelularidad, humana: 120x106 células/g de hígado

Factor hepático, humano: 25,7 g/kg de peso corporal

Flujo sanguíneo, humano: 21 ml/(min x kg)

Tabla 7: datos biológicos para compuestos de la invención tal como se han obtenido en el Ensayo C.

(continuación)

Tabla 8: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se han obtenido en el Ensayo C.

Tabla 9: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel et al., J. Med. Chem.

2016, 59, 2794-2809) tal como se han obtenido en el Ensayo C.

Evaluación de la permeabilidad.

Se sembraron células Caco-2 (1 a 2x105 células/1 cm2 de superficie) en insertos de filtro (filtros transpocillo de policarbonato Costar o filtros de PET, tamaño de poro: 0,4 pm) y se cultivaron (DMEM) durante 10 a 25 días. Se disolvieron los compuestos en solvente apropiado (como DMSO, soluciones madre 1 a 20 mM). Las soluciones madre se diluyeron con tampón HTP-4 (NaCl 128,13 mM, KCl 5,36 mM, MgSO4 1 mM, CaCh 1,8 mM, NaHCO34,17 mM, Na2HPO4 x 7H2O 1,19 mM, NaH2PO4xH2O 0,41 mM, HEPES 15 mM, glucosa 20 mM, BSA al 0,25 %, pH 7,2), para preparar las soluciones de transporte (compuesto 0,1 a 300 pM, DMSO final <=0,5 %). La solución de transporte (TL) se aplicó al lado de donante apical o basolateral para medir la permeabilidad A-B o B-A (3 réplicas de filtro), respectivamente. Se recolectaron las muestras al principio y al final del experimento del donante y en diversos intervalos de tiempo durante un máximo de 2 horas también desde el lado receptor para la medición de la concentración mediante HPLC-EM/EM o recuento de centelleo. Los volúmenes de receptor muestreados se sustituyeron por solución de receptor fresca.

Evaluación de la unión de proteínas plasmáticas.

Se utiliza esta técnica de diálisis en el equilibrio (DE) para determinar la unión fraccional in vitro aproximada de los compuestos de ensayo a las proteínas plasmáticas. Se utilizaron células de diálisis de teflón Dianorm (micro 0,2). Cada celda consistía en una cámara donante y una cámara aceptora, separadas por una membrana semipermeable ultradelgada con un valor de corte de peso molecular de 5 kDa. Se prepararon soluciones madre para cada compuesto de ensayo en DMSO a 1 mM y se diluyeron hasta una concentración final de 1,0 pM. Las soluciones de diálisis posteriores se prepararon en plasma humano o de rata agrupado (con NaEDTA) procedente de donantes varones y mujeres. Se dispensaron alícuotas de 200 pl de tampón de diálisis (fosfato potásico 100 mM, pH 7,4) al interior de la cámara de tampón. Se dispensaron alícuotas de 200 pl de solución de diálisis de compuesto de ensayo al interior de las cámaras de plasma. La incubación se llevó a cabo durante 2 horas bajo rotación a 37 °C.

Al final del periodo de diálisis, se transfirió el dializado a tubos de reacción. Los tubos para la fracción de tampón contenían 0,2 ml de ACN/agua (80/20). Se transfirieron alícuotas de 25 pl del dializado plasmático a placas de pocillos profundos y se mezclaron con 25 pl de ACN/agua (80/20), 25 pl de tampón, 25 pl de solución de calibración y 25 pl de solución de patrón interno. La precipitación de las proteínas se llevó a cabo mediante la adición de 200 pl de ACN. Se transfirieron alícuotas de 50 pl del dializado de tampón a placas de pocillos profundos y se mezclaron con 25 pl de plasma de blanco, 25 pl de solución de patrón interno y 200 pl de<a>C<n>. Las muestras se midieron en sistemas de HPLC-EM/EM y se evaluaron con el software Analyst. Se calculó el porcentaje unido, utilizando la fórmula: % unido = (concentración en plasma - concentración en tampón/concentración en plasma 30) X 100.

Evaluación de la solubilidad

Se prepararon soluciones saturadas en placas de pocilios (formato dependiente del robot) mediante la adición de un volumen apropiado de medios acuosos seleccionados (normalmente en el intervalo de 0,25 a 1,5 ml) en cada pocillo que contiene una cantidad conocida de sustancia farmacéutica sólida (normalmente en el intervalo de 0,5 a 5,0 mg). Los pocillos se sometieron a agitación o mezclaron durante un periodo de tiempo predefinido (normalmente en un intervalo de 2 a 24 h) y después se filtraron utilizando membranas de filtración apropiadas (normalmente filtros de PTFE de tamaño de poro: 0,45 pm). Se evitó la absorción en el filtro mediante descarte de las primeras pocas gotas de filtrado. Se determinó la cantidad de sustancia farmacéutica disuelta mediante espectroscopia de UV. Además, se midió el pH de la solución saturada acuosa utilizando un medidor de pH de electrodo de vidrio.

Evaluación de características farmacocinéticas

Se administró el compuesto de ensayo por vía intravenosa u oral a la especie de ensayo respectiva. Se extrajeron muestras de sangre en varios puntos temporales después de la aplicación del compuesto de ensayo, se anticoagularon y se centrifugaron.

Se cuantificó la concentración de los analitos (el compuesto administrado y/o metabolitos) en las muestras de plasma. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos (FC) utilizando métodos no compartimentales. AUC y Cmax se normalizaron respeto a una dosis de 1 pmol/kg.

Evaluación del metabolismo en hepatocitos humanos in vitro

La ruta metabólica de un compuesto de ensayo se investigó utilizando hepatocitos humanos primarios en suspensión. Tras la recuperación a partir de la criopreservación, se incubaron hepatocitos humanos en medio de Eagle modificado por Dulbecco que contenía suero humano al 5 % y se suplementaron con 3,5 pg de glucagón/500 ml, 2,5 mg de insulina/500 ml y 3,75 mg/500 ml de hidrocortisona.

Tras una preincubación de 30 min en un incubador de cultivo celular (37 °C, 10 % de CO2), se añadió solución de compuesto de ensayo a la suspensión de hepatocitos a fin de obtener una densidad celular final de 1,0*106 a 4,0*106 células/ml (dependiendo de la tasa de renovación metabólica del compuesto observado con hepatocitos humanos primarios), una concentración de compuesto de ensayo final de 10 pM y una concentración de DMSo final de 0,05 %.

Las células se incubaron durante seis horas en un incubador de cultivo celular en un agitador horizontal, y se extrajeron las muestras de la incubación tras 0, 0,5, 1, 2, 4 o 6 horas, dependiendo de la tasa de renovación metabólica. Las muestras se desactivaron con acetonitrilo y se sedimentaron mediante centrifugación. Se transfirió el sobrenadante a una placa de 96 pocillos profundos, se evaporaron bajo nitrógeno y se resuspendieron previamente al bioanálisis mediante cromatografía liquida-espectrometría de masas de alta resolución para la identificación de metabolitos putativos.

Las estructuras se asignaron tentativamente basándose en datos de transformada de Fourier-MS n. Se informan metabolitos como porcentaje de la molécula parental en la incubación de hepatocitos humanos con un umbral de >4 %.

Método de tratamiento

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula general 1 que resultan útiles en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad y/o afección asociada o modulada por la actividad de TRPA1, incluyendo, aunque sin limitación, el tratamiento y/o la prevención de enfermedad fibrótica, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermedades o afecciones respiratorias o gastrointestinales, enfermedades oftálmicas, enfermedades inflamatorias de las articulaciones y enfermedades inflamatorias de nasofaringe, ojos y piel, y dolor y trastornos neurológicos. Entre dichos trastornos, enfermedades y afecciones se incluyen tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades intersticiales pulmonares y otras enfermedades fibróticas, asma o enfermedades alérgicas, enfermedades eosinofílicas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, así como trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis, así como dolor y trastornos neurológicos, tales como dolor agudo, dolor quirúrgico, dolor crónico y depresión, y trastornos de vejiga.

Los compuestos de fórmula general I resultan útiles para la utilización en la prevención y/o el tratamiento de:

(1) Tos, tal como tos idiopática crónica o tos refractaria crónica, tos asociada a asma, EPOC, cáncer pulmonar, infección postvírica y fibrosis pulmonar idiopática, y otras enfermedades intersticiales pulmonares.

(2) Enfermedades fibróticas pulmonares, tales como neumonitis o neumonitis intersticial asociada a colagenosis, p. ej., lupus eritematoso, escleroderma sistémica, artritis reumatoide, polimiositis y dermatomiositis, neumonías intersticiales idiopáticas, tales como fibrosis pulmonar idiopática (FPI), neumonía intersticial no específica, bronquiolitis respiratoria asociada a enfermedad pulmonar intersticial, neumonía intersticial descamativa, neumonía organizada criptogénica, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica, linfangioleiomiomatosis, proteinosis alveolar pulmonar, histiocitosis de células de Langerhans, fibroelastosis parenquimatosa pleural, enfermedades pulmonares intersticiales de causa conocida, tal como neumonitis intersticial como consecuencia de exposiciones ocupacionales, tales como asbestosis, silicosis, pulmón de minero (polvo de carbón), pulmón de granjero (heno y moho), pulmón del aficionado a las palomas (aves) u otros disparadores aéreos ocupacionales, tales como polvos metálicos o micobacterias, o como resultado del tratamiento, tal como radiación, metotrexato, amiodarona, nitrofurantoína o quimioterapéuticos, o para la enfermedad granulomatosa, tal como granulomatosis con poliangitis, síndrome de Churg-Strauss, sarcoidosis, neumonitis por hipersensibilidad, o neumonitis intersticial de diferentes orígenes, p. ej., aspiración, inhalación de gases tóxicos, vapores, bronquitis o neumonitis o neumonitis intersticial causada por insuficiencia cardíaca, rayos X, radiación, quimioterapia, enfermedad de M. Boeck o sarcoidosis, granulomatosis, fibrosis quística o mucoviscidosis, o deficiencia de alfa-1-antitripsina.

(3) Otras enfermedades fibróticas, tales como fibrosis hepática en puente, cirrosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), fibrosis auricular, fibrosis endomiocárdica, infarto de miocardio antiguo, cicatriz glial, rigidez arterial, artrofibrosis, contractura de Dupuytren, queloide, escleroderma/esclerosis sistémica, fibrosis mediastinal, mielofibrosis, enfermedad de Peyronie, fibrosis sistémica nefrogénica, fibrosis retroperitoneal y capsulitis adhesiva. (4) Enfermedades o afecciones inflamatorias, autoinmunitarias o alérgicas, tales como rinitis o sinusitis alérgica o no alérgica, sinusitis o rinitis crónica, poliposis nasal, rinosinusitis crónica, rinosinusitis aguda, asma, asma pediátrica, bronquitis alérgica, alveolitis, vías respiratorias hiperreactivas, conjuntivitis alérgica, bronquiectasia, síndrome del distrés respiratorio adulto, edema bronquial y pulmonar, bronquitis o neumonitis, celulitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Wells), neumonías eosinofílicas (p. ej., síndrome de Loeffler, neumonía eosinofílica crónica), fascitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Shulman), hipersensibilidad de tipo retardado, asma no alérgica, broncoconstricción inducida por ejercicio, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), bronquitis aguda, bronquitis crónica, tos, enfisema pulmonar, anafilaxis sistémica o respuestas de hipersensibilidad, alergias a fármacos (p. ej., a penicilina o cefalosporina), síndrome de eosinofilia-mialgia debido a la ingestión de fármacos contaminados portriptófano, alergias por picadura de insecto; enfermedades autoinmunitarias, tales como artritis reumatoide, enfermedad de Graves, síndrome de Sjogren y artritis soriásica, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, miastenia grave, trombocitopenia inmune (TPI adulta, trombocitopenia neonatal y TPI pediátrica), anemia hemolítica inmunitaria (autoinmune e inducida por fármacos), síndrome de Evans (citopenia inmunitaria de plaquetas y glóbulos rojos), enfermedad Rh del neonato, síndrome de Goodpasture (enfermedad anti-GBM), celiaquía, cardiomiopatía autoinmune y diabetes de inicio juvenil; glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Behcet; rechazo del injerto (p. ej., en trasplantes), incluyendo el rechazo de aloinjerto o la enfermedad del injerto contra el huésped; enfermedades intestinales inflamatorias, tales como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa; espondiloartropatías; escleroderma; soriasis (incluyendo la soriasis mediada por células T) y dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis, eccema, dermatitis atópica, dermatitis por contacto alérgica, urticaria, vasculitis (p. ej., necrotizante, cutánea y vasculitis de hipersensibilidad); eritema nodoso; miositis eosinofílica, fascitis eosinofílica, cánceres con infiltración de leucocitos de la piel u órganos; enfermedades oftálmicas, tales como degeneración macular asociada a la edad, retinopatía diabética y edema macular diabético, queratitis, queratitis eosinofílica, queratoconjuntivitis, queratoconjuntivitis vernal, cicatrización, cicatrización del segmento anterior, blefaritis, blefaroconjuntivitis, enfermedades bullosas, penfigoide cicatricial, melanoma conjuntival, conjuntivitis papilar, ojo seco, epiescleritis, glaucoma, gliosis, granuloma anular, oftalmopatía de Graves, melanoma intraocular, pinguécula, vitreorretinopatía proliferativa, pterigion, escleritis, uveítis, brotes agudos de gota, gota u osteoartritis.

(5) Dolor, tal como síndrome del dolor idiopático crónico, dolor neuropático, disestesia, alodinia, migraña, dolor dental y dolor postquirúrgico.

(6) Depresión, ansiedad, neuropatía diabética y trastornos de la vejiga, tales como obstrucción de la salida de la vejiga, vejiga hiperactiva, cistitis, lesión por reperfusión miocárdica o lesión por isquemia cerebral.

De acuerdo con lo anterior, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para la utilización a modo de medicamento.

Además, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para la utilización en el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad y/o afección asociada o modulada por la actividad de TRPA1.

Además, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para la utilización en el tratamiento y/o prevención de enfermedad fibrótica, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermedades o afecciones respiratorias o gastrointestinales, enfermedades oftálmicas, enfermedades inflamatorias de las articulaciones y enfermedades inflamatorias de la nasofaringe, ojos y piel, dolor y trastornos neurológicos. Entre dichos trastornos, enfermedades y afecciones se incluyen tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades intersticiales pulmonares y otras enfermedades fibróticas, asma o alérgicas, enfermedades eosinofílicas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, así como trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis, así como dolor y trastornos neurológicos, tales como dolor agudo, dolor quirúrgico, dolor crónico y depresión, y trastornos de la vejiga.

Además, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para la utilización en el tratamiento y/o la prevención de:

(1) Tos, tal como la tos idiopática crónica o la tos refractaria crónica, tos asociada a asma, EPOC, cáncer pulmonar, infección postvírica y fibrosis pulmonar idiopática y otras enfermedades intersticiales pulmonares.

(2) Enfermedades fibróticas pulmonares, tales como neumonitis o neumonitis intersticial asociada a colagenosis, p. ej., lupus eritematoso, escleroderma sistémica, artritis reumatoide, polimiositis y dermatomiositis, neumonías intersticiales idiopáticas, tales como fibrosis pulmonar idiopática (FPI), neumonía intersticial no específica, enfermedad pulmonar intersticial asociada a bronquiolitis respiratoria, neumonía intersticial descamativa, neumonía organizada criptogénica, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica, linfangioleiomiomatosis, proteinosis alveolar pulmonar, histiocitosis de células de Langerhans, fibroelastosis parenquimatosa pleural, enfermedades pulmonares intersticiales de causa conocida, tales como neumonitis intersticial como resultado de exposiciones ocupacionales, tales como asbestosis, silicosis, pulmón de minero (polvo de carbón), pulmón de granjero (heno y moho), pulmón de aficionados a las palomas (aves) u otros disparadores aéreos ocupacionales, tales como polvos metálicos o micobacterias, o como resultado del tratamiento, tal como radiación, metotrexato, amiodarona, nitrofurantoína o quimioterapéuticos, o para enfermedad granulomatosa, tal como granulomatosis con poliangitis, síndrome de Churg-Strauss, sarcoidosis, neumonitis por hipersensibilidad o neumonitis intersticial causada por diferentes orígenes, p. ej., aspiración, inhalación de gases tóxicos, vapores, bronquitis o neumonitis, o neumonitis intersticial causada por insuficiencia cardíaca, rayos X, radiación, quimioterapia, enfermedad de M. Boeck o sarcoidosis, granulomatosis, fibrosis quística o mucoviscidosis o deficiencia de alfa-1-antitripsina.

(3) Otras enfermedades fibróticas, tales como la fibrosis hepática en puente, cirrosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), fibrosis auricular, fibrosis endomiocárdica, infarto de miocardio antiguo, cicatriz glial, rigidez arterial, artrofibrosis, contractura de Dupuytren, queloide, escleroderma/esclerosis sistémica, fibrosis mediastinal, mielofibrosis, enfermedad de Peyronie, fibrosis sistémica nefrogénica, fibrosis retroperitoneal y capsulitis adhesiva. (4) Enfermedades y afecciones inflamatorias, autoinmunitarias o alérgicas, tales como rinitis o sinusitis alérgica o no alérgica sinusitis o rinitis crónica, poliposis nasal, rinosinusitis crónica, rinosinusitis aguda, asma, asma pediátrica, bronquitis alérgica, alveolitis, vías respiratorias hiperreactivas, conjuntivitis alérgica, bronquiectasia, síndrome del distrés respiratorio adulto, edema bronquial y pulmonar, bronquitis o neumonitis, celulitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Wells), neumonías eosinofílicas (p. ej., síndrome de Loeffler, neumonía eosinofílica crónica), fascitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Shulman), hipersensibilidad de tipo retardado, asma no alérgica, broncoconstricción inducida por el ejercicio, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), bronquitis aguda, bronquitis crónica, tos, enfisema pulmonar, anafilaxis sistémica o respuestas de hipersensibilidad, alergias a fármacos (p. ej., a penicilina o a cefalosporina), síndrome de eosinofilia-mialgia debido a la ingestión de fármacos contaminados por triptófano, alergias por picadura de insecto; enfermedades autoinmunitarias, tales como artritis reumatoide, enfermedad de Graves, síndrome de Sjogren, artritis soriásica, esclerosis múltiple, lupus sistémico eritematoso, miastenia grave, trombocitopenia inmune (TPI adulta, trombocitopenia neonatal y TPI pediátrica), anemia hemolítica inmune (autoinmune e inducida por fármacos), síndrome de Evans (citopenias inmunitarias de plaquetas y glóbulos rojos), enfermedad Rh del neonato, síndrome de Goodpasture (enfermedad anti-GBM), celiaquía, cardiomiopatía autoinmune, diabetes de inicio juvenil, glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Behcet, rechazo del injerto (p. ej., en el trasplante), incluyendo rechazo del aloinjerto o enfermedad del injerto contra el huésped; enfermedades intestinales inflamatorias, tales como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa; espondiloartropatías, escleroderma, soriasis (incluyendo la soriasis mediada por células T) y dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis, eccema, dermatitis atópica, dermatitis por contacto alérgica, urticaria, vasculitis (p. ej., vasculitis necrotizante, cutánea y por hipersensibilidad), eritema nodoso, miositis eosinofílica, fascitis eosinofílica, cánceres con infiltración leucocitaria de la piel u órganos; enfermedades oftálmicas, tales como degeneración macular relacionada con la edad, retinopatía diabética y edema macular diabético, queratitis, queratitis eosinofílica, queratoconjuntivitis, queratoconjuntivitis vernal, cicatrización, cicatrización del segmento anterior, blefaritis, blefaroconjuntivitis, trastornos bullosos, penfigoide cicatricial, melanoma conjuntival, conjuntivitis papilar, ojo seco, epiescleritis, glaucoma, gliosis, granuloma anular, oftalmopatía de Graves, melanoma intraocular, pinguécula, vitreorretinopatía proliferativa, pterigion, escleritis, uveítis, brotes agudos de gota, gota u osteoartritis.

(5) Dolor, tal como síndrome del dolor idiopático crónico, dolor neuropático, disestesia, alodinia, migraña, dolor dental y dolor postquirúrgico.

(6) Depresión, ansiedad, neuropatía diabética y trastornos de la vejiga, tales como obstrucción de la salida de la vejiga, vejiga hiperactiva, cistitis, lesión por reperfusión miocárdica o lesión por isquemia cerebral.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general I para la utilización en el tratamiento y/o la prevención de las enfermedades y afecciones anteriormente mencionadas.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula general 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de las enfermedades y afecciones anteriormente mencionadas.

Terapia de combinación

Los compuestos de la invención pueden combinarse adicionalmente con uno o más agentes terapéuticos adicionales, preferentemente uno. Según una realización, el agente terapéutico adicional se selecciona del grupo de agentes terapéuticos útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones indicadas anteriormente en la presente memoria, en particular asociadas a enfermedades fibróticas, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermedades o afecciones respiratorias o gastrointestinales, enfermedades inflamatorias de las articulaciones o de la nasofaringe, ojos, y piel, y afecciones, tales como, por ejemplo, tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades intersticiales pulmonares, asma o enfermedades alérgicas, enfermedades eosinofílicas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, dermatitis atópica, así como patologías autoinmunitarias, tales como artritis reumatoide y ateroesclerosis, o agentes terapéuticos útiles para el tratamiento de enfermedades oftálmicas, dolor y depresión.

Entre los agentes terapéuticos adicionales que resultan adecuados para dichas combinaciones se incluyen, en particular, aquellos que, por ejemplo, potencian el efecto terapéutico de una o más sustancias activas con respecto a una de las indicaciones mencionadas y/o permitan reducir las dosis de una o más de las sustancias activas.

Por lo tanto, un compuesto de la invención puede combinarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales seleccionados del grupo que consiste en agentes antifibróticos, agentes antitusivos, agentes antiinflamatorios, agentes antidermatitis atópica, analgésicos, anticonvulsivos, ansiolíticos, sedantes, relajantes del músculo esquelético o antidepresivos.

Los agentes antifibróticos son, por ejemplo, nintedanib, pirfenidona, inhibidores de la fosfodiesterasa-IV (PDE4), tales como roflumilast; inhibidores de autotaxina, tales como GLPG-1690 o BBT-877; anticuerpos bloqueantes del factor de crecimiento del tejido conectivo (CTGF, por sus siglas en inglés), tales como pamrevlumab; anticuerpos bloqueantes del receptor del factor activador de células B (BAFF-R, por sus siglas en inglés), tales como lanalumab; inhibidores bloqueantes de alfa-V/beta-6, tales como BG-00011/STX-100, pentraxina-2 recombinante (PTX-2), tales como PRM-151; inhibidores de la quinasa N-terminal c-Jun (JNK, por sus siglas en inglés), tales como CC-90001; inhibidores de galectina-2, tales como TD-139; inhibidores de receptor 84 acoplado a proteína G (GPR84, por sus siglas en inglés), tales como GLPG-1205; inhibidores duales de receptor 84 acoplado a proteína G/receptor 40 acoplado a proteína G, tales como PBI-4050; inhibidores de la quinasa 2 de proteína asociada a Rho que contiene dominios de superhélice (ROCK2, por sus siglas en inglés); ARN interfiriente pequeño de proteína 47 de choque térmico (HSP47, por sus siglas en inglés), tal como BMS-986263/ND-L02-s0201; inhibidor de la ruta de Wnt, tal como SM-04646; inhibidores de LD4/PD3/4, tales como tipelukast; dominios inmunomoduladores recombinantes de histidil-tARN sintetasa (HARS, por sus siglas en inglés), tales como ATYR-1923; inhibidores de prostaglandina sintasa, tal como ZL-2102/SAR-191801; ácido 15-hidroxi-eicosapentaenoico (15-HEPE, p. ej., DS-102); inhibidores de tipo lisil-oxidasa 2 (LOXL2, por sus siglas en inglés), tales como PAT-1251, PXS-5382/PXS-5338; fosfoinositida 3-quinasas (PI3K)/diana de mamífero de los inhibidores duales de la rapamicina (mTOR, por sus siglas en inglés), tales como HEC-68498; inhibidores de calpaína, tales como BLD-2660; inhibidores de la proteína quinasa quinasa quinasa activada por mitógeno (MAP3K19, por sus siglas en inglés), tales como MG-S-2525; inhibidores de quitinasa, tales como OATD-01; inhibidores de proteína quinasa 2 activada por proteína quinasa activada por mitógeno (MAPKAPK2, por sus siglas en inglés), tales como M<m>I-0100; ARN interfiriente pequeño del factor beta 1 de crecimiento transformante (TGF-beta1, por sus siglas en inglés), tal como TRK2507BNC-1021, o antagonistas de receptor de ácido lisofosfatídico, tales como BMS-986278.

Los agentes antitusivos son, por ejemplo, antagonistas de receptor de purinoceptor-3 (P2X3), tales como gefapixant, S-600918, BAY-1817080 o BLU-5937; antagonistas de receptor de neuroquinina-1 (N<k>-1), tales como orvepitant y aprepitant; estimuladores de la subunidad alfa-7 de receptor nicotínico de acetilcolina, tales como ATA-101/bradaniclina; codeína, gabapentina, pregabalina o azitromicina.

Los agentes antiinflamatorios son, por ejemplo, corticoesteroides, tales como prednisolona o dexametasona; inhibidores de ciclooxigenasa-2 (COX2), tales como celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib, deracoxib, etoricoxib o lumiracoxib; antagonistas de prostaglandina E2; antagonistas de leucotrieno B4; antagonistas de leucotrieno D4, tales como montelukast; inhibidores de 5-lipooxigenasa, u otros agentes antiinflamatorios no esteroideos (AINE), tales como aspirina, diclofenac, diflunisal, etodolac, ibuprofeno o indometacina.

Los agentes antidermatitis atópica son, por ejemplo, ciclosporina, metotrexato, micofenolato mofetilo, azatioprina, inhibidores de fosfodiesterasa (p. ej., apremilast y crisaborol), inhibidores de quinasa asociada a Janus (JAK, por sus siglas en inglés) (p. ej., tofacitinib), anticuerpos neutralizantes de IL-4/IL-13 (p. ej., dupilamab), IL-13 (p. ej., lebrikizumab y tralokinumab) e IL-31 (memolizumab).

Los analgésicos son, por ejemplo, del tipo opioide, tales como morfina, oximorfina, levopanol, oxicodona, propoxifeno, nalmefeno, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, meripidina, metadona, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina y pentazocina; o del tipo no opioide, tal como acetofenamina.

Los antidepresivos son, por ejemplo, antidepresivos tricíclicos, tales como amitriptilina, clopramina, despramina, doxepina, desipramina, imipramina, nortriptilina; antidepresivos inhibidores de la recaptación selectiva de la serotonina (SSRI, por sus siglas en inglés), tales como fluoxetina, paroxetina, sertralina, citalopram, escitalopram; antidepresivos inhibidores de la recaptación de la norepinefrina (SNRI, por sus siglas en inglés), tales como maprotilina, lofepramina, mirtazapina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxetina, mianserina, bupropión, hidroxibupropión, nomifensina y viloxazina; antidepresivos inhibidores de la recaptación de serotonina-norepinefrina (SNRI, por sus siglas en inglés), tales como duloxetina, venlafaxina, desvenlafaxina y levomilnaciprano; antidepresivos atípicos, tales como trazodona, mirtazapina, vortioxetina, vilazodona, bupropión o antidepresivos inhibidores de monoamina oxidasa (MAOI, por sus siglas en inglés), tales como tranilcipromina, fenelzina o isocarboxazida.

Los ansiolíticos son, por ejemplo, benzodiazepinas, tales como alprazolam, bromazepam, clordiazepóxido, clonazepam, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam, triazolam o tofisopam; o son hipnóticos no benzodiazepinas, tales como eszopiclona, zaleplón, zolpidem o zopiclona; o son carbamatos, p. ej., meprobamato, carisoprodol, tibamato o lorbamato; o son antihistamínicos, tales como hidroxizina, clofeniramina o difenhidramina.

Los sedantes son, por ejemplo, sedantes barbitúricos, tales como amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, secobarbital, talbutal, teamilal o tiopental; o son sedantes no barbitúricos, tales como glutetimida, meprobamato, metacualona o dicloalfenazona.

Los relajantes del músculo esquelético son, por ejemplo, baclofeno, meprobamato, carisoprodol ciclobenzaprina, metaxalona, metocarbamol, tizanidina, clorzoxazona u orfenadrina.

Otras parejas de combinación adecuadas son inhibidores de la acetilcolinesterasa, tales como donepezilo; antagonistas de 5-HT-3, tales como ondansetrón; antagonistas de receptor metabotrópico de glutamato; antiarrítmicos, tales como mexiletina o fenitoína; o antagonistas de receptor de NMDA. Son parejas de combinación adecuadas adicionales los medicamentos para la incontinencia, por ejemplo, anticolinérgicos, tales como oxibutinina, tolterodina, darifenacina, fesoterodina, solifenacina o trospio; o son relajantes musculares de la vejiga, tales como mirabegrón, o son alfa-bloqueantes, tales como tamsulosina, alfuzosina, silodosina, doxazosina o terazosina.

La dosis para las parejas de combinación mencionadas anteriormente es habitualmente 1/5 de la dosis más baja normalmente recomendada, hasta 1/1 de la dosis normalmente recomendada.

Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto según la invención en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente y posteriormente en la presente memoria para el tratamiento de enfermedades o afecciones que puede estar afectadas o estar mediadas por TRPA1, en particular enfermedades o afecciones tal como se ha indicado anteriormente o se indica posteriormente en la presente memoria.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad o afección que puede verse influida por la inhibición de TRPA1 en un paciente, que incluye la etapa de administrar al paciente en necesidad de dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales. En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales para el tratamiento de enfermedades o afecciones que pueden verse influidas por la inhibición de TRPA1 en un paciente que lo necesita.

En todavía otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la actividad de TRPA1 en un paciente, que incluye la etapa de administrar al paciente, preferentemente un ser humano, que requiere de dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente o que se indican posteriormente en la presente memoria.

La utilización del compuesto según la invención en combinación con el agente terapéutico adicional puede tener lugar simultáneamente o en momentos escalonados.

El compuesto según la invención y el agente o agentes terapéuticos adicionales pueden estar ambos presentes juntos en una formulación, por ejemplo una tableta o cápsula, o por separado en dos formulaciones idénticas o diferentes, por ejemplo un denominado “kit de partes”.

En consecuencia, en otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente y posteriormente en la presente memoria, opcionalmente junto con uno o más portadores y/o diluyentes inertes.

En todavía otro aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto según la invención en un dispositivo de medición de la tosa.

Otras características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes a partir de los ejemplos detallados, posteriormente, que ilustran, a título de ejemplo, los principios de la invención.

Preparación

Los compuestos según la presente invención y sus compuestos intermedios pueden obtenerse utilizando métodos de síntesis que son conocidos por el experto en la materia y que se describen en la literatura de la síntesis orgánica. Preferentemente, los compuestos se obtienen de manera análoga a los métodos de preparación explicados más completamente después en la presente memoria, en particular tal como se describen en la sección experimental. En algunos casos, el orden durante la ejecución de las etapas de reacción puede variarse. También pueden utilizarse variantes de los métodos de reacción conocidas por el experto en la materia, pero que no se describen en detalle en la presente memoria.

Los procedimientos generales para preparar los compuestos según la invención resultarán evidentes para el experto en la materia que estudie los esquemas siguientes. Cualesquiera grupos funcionales en los materiales de partida y compuestos intermedios pueden protegerse utilizando grupos protectores convencionales. Estos grupos protectores pueden escindirse nuevamente en una etapa adecuada dentro de la secuencia de reacción utilizando métodos que resultarán familiares al experto en la materia.

Los compuestos según la invención se preparan mediante los métodos de síntesis descritos posteriormente en la presente memoria en la que los sustituyentes de las fórmulas generales presentan los significados proporcionados anteriormente en la presente memoria. Estos métodos pretenden ser una ilustración de la invención sin restringir la materia objeto de la misma ni el alcance de los compuestos reivindicados a dichos ejemplos. En donde no se describe la preparación de compuestos de partida, pueden obtenerse comercialmente o pueden prepararse análogamente a compuestos conocidos o métodos descritos en la presente memoria. Las sustancias descritas en la literatura se preparan según los métodos de síntesis publicados. Se definen abreviaturas en la sección de Ejemplos.

Esquema 1:

En el Esquema 1, el clorometiltetrazol está N-alquilado con un derivado de etanona apropiado que es portador de un grupo saliente “GS” (p. ej., Cl o Br) alfa respecto al grupo carbonilo en la presencia de una base (p. ej., K2CO3), rindiendo una mezcla de dos regioisómeros. El regioisómero no deseado (no mostrado) puede eliminarse mediante cromatografía utilizando un gradiente apropiado. La cetona resultante (A) puede reducirse de una manera enantioselectiva mediante la utilización de sistemas catalíticos apropiados utilizando un complejo de metal de transición (de, p. ej., Ru o Ir) en combinación con un ligando quiral (p. ej., ([(1S,2S)-2-amino-1,2-difeniletil](4-toluenosulfonil)amido) y una fuente de hidrógeno, tal como complejo de ácido fórmico-trietilamina, rindiendo alcohol (B). Pueden sintetizarse compuestos finales (I) mediante alquilación de 4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidín-5-carboxamida (C) con compuesto intermedio (B) en presencia de una base, tal como K2CO3.

Esquema 2:

En el Esquema 2, el compuesto intermedio (C) puede sintetizarse a partir de 2-aminotiofén-3,4-dicarboxilato de 3,4-dietilo (CAS n.° 104680-25-3) mediante condensación con formamidina, p. ej., utilizando acetato de formamidinio, proporcionando (D), y la posterior formación de amida, p. ej., con amoníaco en presencia de CaCh.

Ejemplos

Preparación

Los compuestos según la invención y sus compuestos intermedios pueden obtenerse utilizando métodos de síntesis que son conocidos por el experto en la materia y se describen en la literatura de la síntesis orgánica, por ejemplo utilizando métodos descritos en “Comprehensive Organic Transformations”, 2a edición, Richard C. Larock, John Wiley & Sons, 2010, y “March's Advanced Organic Chemistry”, 7a edición, Michael B. Smith, John Wiley & Sons, 2013. Preferentemente, los compuestos se obtienen análogamente a los métodos de preparación explicados más completamente después en la presente memoria, en particular tal como se describen en la sección experimental. En algunos casos, la secuencia adoptada al llevar a cabo los esquemas de reacción puede variarse. También pueden utilizarse variantes de dichas reacciones que son conocidas por el experto en la materia pero que no se describen en detalle en la presente memoria. Los procedimientos generales para preparar los compuestos según la invención resultarán evidentes para el experto en la materia tras el estudio de los esquemas, posteriormente. Los compuestos de partida están disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante métodos que se describen en la literatura o en la presente memoria, o pueden prepararse de una manera análoga o similar. Antes de llevar a cabo la reacción, pueden protegerse cualesquiera grupos funcionales correspondientes en los compuestos de partida, utilizando grupos protectores convencionales. Estos grupos protectores pueden escindirse nuevamente en una etapa adecuada dentro de la secuencia de reacción utilizando métodos que resultarán familiares al experto en la materia y que se describen en la literatura, por ejemplo en “Protecting Groups”, 3a edición, Philip J. Kocienski, Thieme, 2005, y “Protective Groups in Organic Synthesis”, 4a edición, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, 2006. Las expresiones “temperatura ambiente” y “temperatura de laboratorio” se utilizan indistintamente y se refieren a una temperatura de aproximadamente 20 °C, p. ej. de entre 19 °C y 24 °C.

Abreviaturas:

Preparación de compuestos intermedios

Compuesto intermedio I

Compuesto intermedio I.1 (procedimiento general)

2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-1-ona

A 1,00 g (8,44 mmoles) de 5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol y 2,17 g (9,28 mmoles) de bromuro de 4-clorofenacilo en 15 ml de DMA se añadieron 1,63 g (11,8 mmoles) de K2CO3 bajo agitación a TA. La mezcla de reacción se sometió a agitación durante 30 min a TA y seguidamente se filtró. El filtrado se diluyó con agua y solución acuosa sat. de NaCl y se extrajo con EtOAc tres veces. Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron sobre carbón activado y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice; CH/EtOAc, gradiente de 80/20 a 50/50), proporcionando el producto.

C10HsCl2N4O (M = 271,1 g/mol)

ESI-MS: 271 [M+H]+

Rt (HPLC): 1,01 min (método B)

Se prepararon los compuestos siguientes utilizando procedimientos análogos a los descritos para el compuesto intermedio I.1, utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, dichos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones de reacción generales.

(continuación)

(continuación)

(continuación)

*se añadió lentamente bromuro de p-metoxifenacilo (1,05 eq.) a la solución bajo agitación de clorometiltetrazol y K2CO3 (1,4 eq.) en DMA a 18 °C; la mezcla se sometió a agitación a TA durante 1,5 h; purificación mediante HPLC de fase inversa (gradiente de ACN/H2O, TFA al 0,1 %).

Compuesto intermedio II

Compuesto intermedio II.1 (procedimiento general)

(1R)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-

Se disolvieron 1,30 g (4,80 mmoles) de 1-(4-clorofenil)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]etán-1-ona (compuesto intermedio I.1) en 20 ml de ACN bajo una atmósfera inerte. Se añadieron 12 mg (0,02 mmoles) de cloro([(1S,2S)-2-amino-1,2-difeniletil](4-toluenosulfonil)amido)(mestilén)rutenio (II) (CAS n.° 174813-81-1) seguido de la adición de gota a gota de 0,72 ml (1,73 mmoles) de complejo de ácido fórmico-trietilamina (5:2). Tras someter a agitación a TA durante 3 h, se eliminó el solvente bajo presión reducida. A la mezcla en bruto restante se añadió agua y esta mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se agruparon, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, se trataron con carbón activado, se filtraron y se eliminó el solvente bajo presión reducida, proporcionando el compuesto intermedio II.1.

C10H1üCl2N4O (M = 273,1 g/mol)

ESI-MS: 273 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,96 min (método B)

Se prepararon los compuestos siguientes utilizando procedimientos análogos a los descritos para el compuesto intermedio II.1 utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones de reacción generales.

(continuación)

(continuación)

Compuesto intermedio III

Compuesto intermedio III.1 (procedimiento general)

1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona

Se trataron 5,00 g (31,6 mmoles) de 4,5-difluoro-2-hidroxibenzaldehído en 50 ml de acetona con 6,99 g (50,6 mmoles) de carbonato potásico bajo argón a 0 °C. Tras agitación adicional durante 10 min a 0 °C, se añadieron gota a gota 3,78 ml (47,4 mmoles) de cloroacetona y la mezcla de reacción se sometió a agitación a 70 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a TA y se concentró. El producto en bruto se extrajo con EtOAc/agua y la fase orgánica se concentró bajo presión reducida, proporcionando el compuesto intermedio III.1.

C10H6F2O2 (M=196,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 2,56 (s, 3H), 7,89 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,01 (m, 1H).

Se prepararon los compuestos siguientes utilizando procedimientos análogos a los descritos para el compuesto intermedio 111.1 utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones de reacción generales.

(continuación)

Compuesto intermedio IV

Compuesto intermedio IV.1 (procedimiento general)

2-bromo-1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona

Se trataron gota a gota 500 mg (2,55 mmoles) de 1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona (III.1) en 6 ml de THF con 1,23 g (2,55 mmoles) de tribromuro de tetrabutilamonio en 300 |jl de MeOH y 3 ml de THF. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo se extrajo con EtOAc/agua. La fase orgánica se concentró bajo presión reducida y el material en bruto se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice; hexanos/EtOAc, gradiente de 9/1 a 7/3).

C-i0H5BrF2O2 (M = 275,0 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 4,83 (s, 2H), 7,98-8,12 (m, 3H).

Se prepararon los compuestos siguientes utilizando procedimientos análogos a los descritos para el compuesto intermedio IV.1 utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, dichos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones de reacción generales.

*: La reacción se llevó a cabo con bromo (13,6 eq.) a TA durante 2 h en dioxano/éter dietílico y se desactivó con solución de tiosulfato sódico.

Compuesto intermedio V

6-acetil-1-benzofurán-2-carboxilato de etilo

A 1,00 g (3,72 mimóles) de 6-bromo-1-benzofurán-2-carboxilato de etilo (III.6) en 12,5 ml de DMF se añadieron 616 mg (4,46 mmoles de carbonato potásico. La mezcla se purgó con argón y se añadieron 92 mg (0,22 mmoles) de 1,3-bis(difenilfosfino)propano, 250 mg (0,11 mmoles) de acetato de paladio (II) y 670 mg (9,29 mmoles) de éter de etilvinílico. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 80 °C durante 18 h, después se enfrió a TA y se ajustó el pH a pH=1 mediante la adición de solución acuosa 1 M de HCl. El producto en bruto se extrajo con EtOAc, se concentró bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice, hexano/EtOAc 7/3).

C13H12O4 (M = 232,2 g/mol)

ESI-MS: 233 [M+H]+

Rt(HPLC): 1,38 min (método Q)

Compuesto intermedio VI

ácido 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxílico

A 6,60 g (28,4 mmoles) de 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxilato de etilo (V) en 66 ml de THF y se añadieron 33 ml de agua, 3,3 ml de etanol y 1,4 g (34,1 mmoles) de monohidrato de LiOH. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 1 h y se concentró a sequedad bajo presión reducida, proporcionando el compuesto intermedio.

C11H8O4 (M = 204,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 2,67 (s, 3H), 7,73 (m, 1H), 7,99 -7 ,85 (m, 2H), 8,32 (m, 1H), 13,30- 14,50 (br s, 1H).

Compuesto intermedio VII

6-acetil-1-benzofurán-2-carboxamida

A 1,00 g (4,90 mmoles) de ácido 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxilico (VI) en 10 ml de DCM se añadieron 932 mg (7,34 mmoles) de cloruro de oxalilo y 1 gota de DMF a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación durante 2 h a TA y se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en 10 ml de THF, se enfrió a 0 °C y se añadieron 15 ml de amoníaco acuoso al 25 %. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h y se concentró a sequedad bajo presión reducida, proporcionando el compuesto intermedio.

C11H9NO3 (M = 203,2 g/mol)

ESI-MS: 204 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,96 min (método Q)

Compuesto intermedio VIII

6-acetil-1-benzofurán-2-carbonitrilo

A 0,90 g (4,43 mmoles) de 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxamida (VII) y 1,4 ml (9,88 mmoles) de TEA en 12 ml de THF se añadieron 1,1 ml (7,77 mmoles) de TFAA gota a gota bajo agitación a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 0 °C durante 1 h, se desactivó cona gua y se extrajo con EtOAc tres veces. Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el compuesto intermedio.

C11H7NO2 (M = 185,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 2,68 (s, 3H), 7,92-8,05 (m, 2H), 8,21 (m, 1H), 8,37 (m, 1H).

Compuesto intermedio IX

ácido 5-bromo-1-benzofurán-2-carboxílico

A 6,58 g (24,4 mmoles) de 5-bromo-1-benzofurán-2-carboxilato de etilo (III.7) en 3 ml de EtOH, 66 ml de THF y 33 ml de agua se añadieron 1,23 g (29,3 mmoles) de LiOH*H2O a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 2 h y seguidamente se concentró bajo presión reducida. El residuo se acidificó con HCl 1 M a pH 5 y el precipitado resultante se separó mediante filtración y se secó, proporcionando el compuesto intermedio V.

CgHsBrOa (M = 241,0 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 7,59-7,76 (m, 3 H), 8,02 (d, J= 2,0 Hz, 1 H), 13,5 -14 ,2 (br s, 1H).

Compuesto intermedio X

5- bromo-2-fluoro-1-benzofurano

Se sometieron a agitaicón 5,00 g (20,7 mmoles) de ácido 5-bromo-1-benzofurán-2-carboxílico (IX), 14,70 g (41,5 mmoles) de Selectflour y 4,82 g (83,0 mmoles) de fluoruro potásico en 185 ml de DCE y 95 ml de agua en un tubo sellado a 70 °C durante 20 h. Posteriormente, la mezcla de reacción se extrajo con DCM/agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice, DCM).

CsH4BrFO (M = 215,0 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 6,36 (dd, J= 6,4, 0,9 Hz, 1 H), 7,47 (dd, J=8,7, 2,1 Hz, 1 H), 7,58 (d, J= 8,7Hz, 1 H), 7,82 (d, J= 2,1 Hz, 1H).

Compuesto intermedio XI

1-(2-fluoro-1-benzofurán-5-il)etán-1-ona

A 218 mg (1,0 mmol) de 5-bromo-2-fluoro-1-benzofurano (X) en 3 ml de DMF y 0,3 ml de agua se añadieron 168 mg (1,2 mmoles) de carbonato potásico bajo agitación a TA. La mezcla se purgó con argón seguido de la adición de 25 mg (0,1 mmoles) de 1,3-bis(difenilfosfino)propano, dppp, 7 mg de acetato de paladio (II) y 183 mg (2,5 mmoles) de éter etilvinílico. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 80 °C durante la noche; después, se enfrió a TA y se trató con solución acuosa de HCl 1 M (20 ml). Tras someter a agitación a TA durante 30 min, la mezcla se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas agrupadas se concentraron bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice; EtOAc/hexano, gradiente).

C10H7FO2 (M = 178,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 2,63 (s, 3H), 6,49 (dd, J= 6,4, 0,8 Hz, 1H), 7,70 (dt, J= 8,7, 0,8 Hz, 1H), 7,93 (dd, J=8,7, 1,9 Hz, 1H), 8,25 (dd, J= 1,9, 0,6 Hz, 1H).

Compuesto intermedio XII

4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidín-5-carboxilato de etilo

Una mezcla de 13,9 g (57,14 mimóles) de 2-aminotiofén-3,4-dicarboxilato de dietilo y 24,4 g (234,26 mimóles) de acetato de formamidinio en 100 ml de etanol se sometió a reflujo bajo agitación durante 18 h. Tras enfriar hasta la TA, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, se trató con agua y se extrajo con EtOAc tres veces. Las capas orgánicas agrupadas se trataron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se trató con agua y el precipitado se separó mediante filtración y se secó, proporcionando el compuesto intermedio XII.

C9H8N2O3S (M = 224,24 g/mol)

ESI-MS: 225 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,70 min (método H)

Compuesto intermedio XIII

4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidín-5-carboxamida

A 490 mg (2,19 mmoles) de 4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidín-5-carboxilato de etilo (compuesto intermedio XII) en 3,0 ml de EtoH se añadieron 728 mg (6,56 mmoles) de CaCh y 2,81 ml (19,67 mmoles) de amoníaco en MeOH (7 M). La mezcla se sometió a agitación a 60 °C durante 3 h, se trató con amoníaco adicional en MeOH (3 ml, 21,0 mmoles) y se sometió a agitación a 60 °C durante 15 h. Posteriormente, la mezcla se concentró bajo presión reducida, se añadieron 25 ml de agua y se separó mediante filtración el precipitado resultante, se lavó con agua y se secó, proporcionando el compuesto intermedio XIII.

C7H5N3O2S (M = 195,2 g/mol)

ESI-MS: 196 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,24 min (método G)

Preparación de compuestos finales

Ejemplo 1 (procedimiento general)

3-({2-[(2R)-2-(4-clorofenil)-2-hidroxietil]-2H-1,2,3,4-tetrazol-5-il}metil)-4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidm-5-carboxamida

A 100 mg (0,51 mmoles) de 4-oxo-3H,4H-tieno[2,3-d]pirimidín-5-carboxamida (compuesto intermedio XIII) en 4 ml de DMF se añadieron 154 mg (0,56 mmoles) de (1R)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-1-ol (compuesto intermedio II.1) y 106 mg (0,77 mmoles) de K2CO3 y la mezcla se sometió a agitación a TA durante la noche. La mezcla se purificó mediante HPLC de fase inversa (gradiente de ACN/H2O, NH3 al 0,1 %), rindiendo el producto deseado.

C16H16ClNyO4 (M = 431.9 g/mol)

ESI-MS: 432 [M+H]+

Rt (HPLC): 0.82 min (Método C)

RMN 1H (400 MHz,D M S O d)5 ppm: 4,73 - 4,84 (m, 2 H), 5,11 (dd, J=7,4, 5,3 Hz, 1 H), 5,58 (s, 2 H), 5,91 (br s, 1 H), 7,31 - 7,39 (m, 4 H), 7,65 (br d,J=1,5 Hz, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,77 (s, 1 H), 9,79 (br d, J=1,7 Hz, 1 H).

Se prepararon los compuestos siguientes utilizando procedimientos análogos a los descritos para el Ejemplo 1 utilziando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones de reacción generales.

(continuación)

(continuación)

Datos analíticos para los compuestos indicados en la tabla anterior:

(continuación)

(continuación)

Métodos de HPLC analítica

Método A

Columna analítica: XBridge BEH (Waters) C18_2,1 x 30 mm_1,7 |jm; temperatura de columna: 60 °CMétodo B

Columna analítica: Stable Bond (Agilent) C18_3,0 x 30 mm_1,8 pm; temperatura de columna: 60 °CMétodo C

Columna analítica: Xbridge (Waters) C18_3,0 x 30 mm_2,5 pm; temperatura de columna: 60 °CMétodo D

Columna analítica: XBridge C18_3,0 x 30 mm_2,5 |jm (Waters); temperatura de columna: 60 °CMétodo E

Columna analítica: Sunfire (Waters); C18_3,0 x 30 mm_2,5 jm ; temperatura de columna: 60 °CMétodo F

Columna analítica: XBridge BEH (Waters) C18_2,1 x 30 mm_2,5 pm; temperatura de columna: 60 °CMétodo G

Columna analítica: Zorbax StableBond C18 (Agilent) 1,8 jm ; 2,1 x 30 mm; temperatura de columna: 60 °CMétodo H

Columna analítica: Sunfire (Waters) 2,5 jm ; 3,0 x 30 mm; temperatura de columna: 60 °C

Columna analítica: Sunfire C18 (Waters) 2,5 |jm; 3,0 x 30 mm; temperatura de columna: 60 °C

Método J

Columna analítica: Acquity UPLC BEH ; C8_2,1 x 150 mm_1,7 jm ; temperatura de columna: 55 °CMétodo K

Columna analítica: XBridge BEH Phenyl (Waters) 2,1 x 30 mm_1,7 pm; temperatura de columna: 60 °C

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Compuesto según la fórmula (I):

   en la que: A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tienofenilo, benzotiofenilo y benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R1 seleccionado de -CN, halógeno, alquilo C1-4, O-alquilo C1-4, fluoroalquilo C1-4, O-fluoroalquilo C1-4, cicloalquilo C3-4, O-cicloalquilo C3-4, ciclofluoroalquilo C3.4 y O-ciclofluoroalquilo C3-4. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que R1 se selecciona de H3C-O, NC-, Br, Cl, F y H3C. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en la que A se selecciona del grupo que consiste en:

   no sustituidos o sustituidos con uno o dos elementos del grupo R1. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que A se selecciona del grupo que consiste en:

   y 5. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en: