ES3005209T3

ES3005209T3 - Tetrazole derivatives as trpa1 inhibitors

Info

Publication number: ES3005209T3
Application number: ES21735302T
Authority: ES
Inventors: Martin Fleck; Florian Binder; Jens Willwacher
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2020-06-29
Filing date: 2021-06-25
Publication date: 2025-03-14
Anticipated expiration: 2041-06-25
Also published as: SA522441973B1; CL2022003325A1; MX2022016272A; WO2022002780A1; RS66140B1; JP7539500B2; IL299172A; CN121319001A; JP2023533189A; US20240352033A1; KR20230028546A; AR122778A1; BR112022021386A2; CN116157130A; HUE069955T2; EP4171571B1; CN116157130B9; LT4171571T; IL299172B2; HRP20241730T2

Abstract

La presente divulgación describe ciertos derivados de tetrazol que inhiben el potencial transitorio del receptor anquirina 1 (TRPA1) y, por lo tanto, son útiles para el tratamiento de enfermedades que pueden tratarse mediante la inhibición de TRPA1. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que los contienen y procedimientos para su preparación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de tetrazol como inhibidores de TRPA1

Campo de la invención

La presente exposición proporciona determinados derivados tetrazol que son inhibidores del receptor de potencial transitorio de anquirina-1 (TRPA1, por sus siglas en inglés) y, por lo tanto, resultan útiles para el tratamiento de enfer medades tratables mediante la inhibición de TRPA1. Se proporcionan, además, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos, y procedimientos para preparar dichos compuestos.

Información de antecedentes

Los canales receptores de potencial transitorio (canales TRP, por sus siglas en inglés) son un grupo de canales iónicos activados por voltaje situados principalmente sobre la membrana plasmática de numerosos tipos celulares de mamí fero. Existen aproximadamente 30 canales TRP estructuralmente relacionados clasificados en grupos: TRPA, TRPC, TRPM, TRPML, TRPN, TRPP y TRPV. El canal catiónico de receptor de potencial transitorio, subfamilia A, miembro 1 (TRPA1), también conocido como receptor de potencial transitorio de anquirina-1, es el único miembro de la subfa milia génica TRPA. Estructuralmente, los canales TRPA se caracterizan por múltiples repeticiones de anquirina N-terminales (~14 en el extremo N-terminal de TRPA1 humano), dando lugar a la "A" en la denominación de anquirina (Montell, 2005).

TRPA1 se expresa a nivel elevado en la membrana plasmática de las neuronas sensoriales en la raíz dorsal y ganglios nodosos que sirven tanto a la piel como a los pulmones, así como en el intestino delgado, colon, páncreas, músculo esquelético, corazón, cerebro, vejiga y linfocitos (https://www.proteinatlas.org/), así como en fibroblastos pulmonares humanos.

TRPA1 es mejor conocido como sensor de irritantes medioambientales, dando lugar a realizaciones somatosensoriales, tales como dolor, frío y prurito. TRPA1 resulta activado por varios estímulos electrofílicos reactivos (p. ej., isotiocianato de alilo, especies de oxígeno reactivo), así como compuestos no reactivos (p. ej., icilina), implicados en la tos asociada al asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis pulmonar idiopática (FPI) o tos poství rico, o para la tos idiopática crónica, así como la tos en pacientes sensibles (Song y Chang, 2015; Grace y Belvisi, 2011). Los inhibidores de TRPA resultan útiles en el tratamiento de la FPI, en la que la tos es altamente prevalente debido a la asociación entre la tos y el daño pulmonar, basado en estudios que muestran una elevación inducida por la tos de TGF-p (Xie et al., 2009; Froese et al., 2016; Tschumperlin et al., 2003; Yamamoto et al., 2002; Ahamed et al., 2008). Los antagonistas de TRPA1 inhiben la señalización del calcio inducida por inductores de la tos, tales como extracto de humo del cigarro (CSE, por sus siglas en inglés), estrés oxidativo,, liberación de mediadores inflamatorios y expresión génica de antioxidantes regulada negativamente (Lin et al., 2015; Wang et al., 2019). Los antagonistas de TRPA1 resultan eficaces en estudios de la dermatitis atópica (Oh et al., 2013; Wilson et al., 2013), la dermatitis por contacto (Liu et al., 2013), el prurito asociado a soriasis (Wilson et al., 2013) y el prurito dependiente de IL-31 (Cevikbas et al., 2014). Se ha asociado una ganancia de función de TRPA1 humano a síndrome de dolor episódico familiar (Kremeyer et al., 2010). Un antagonista de TRPA1 ha resultado eficaz en un modelo conductual de alodinia asociada a migraña (Edelmayer et al., 2012). TRPA1 está selectivamente incrementado en los ganglios trigéminos que inervan los dientes dañados, en comparación con la expresión de TRPA1 en ganglios trigéminos que inervan los dientes sanos (Haas et al., 2011). Es conocido que varios anestésicos son agonistas de TRPA1, incluyendo el isoflurano (Matta et al., 2008) justificando que los inhibidores de TRPA1 proporcionen alivio al dolor postquirúrgico. Los ratones con inac tivación de TRPA1 y los ratones de tipo salvaje tratados con un antagonista de TRPA1 mostraron fenotipos de tipo ansiolítico y antidepresivo (de Moura et al., 2014). Se espera que los inhibidores de TRPA1 resulten beneficiosos en el tratamiento de la neuropatía diabética, basándose en estudios que muestran una asociación de mecanismo en la regulación inversa entre<A m P K>y TRPA1 (Hiyama et al., 2018; Koivisto y Pertovaara, 2013; Wang et al., 2018). Los ratones con inactivación de TRPA1 muestran tamaños de infarto miocárdico más pequeños que los ratones de tipo salvaje (Conklin et al., 2019). La inactivación de TRPA1 y la intervención farmacológica inhibió la colitis inducida por TNBS en ratones (Engel et al., 2011). En un modelo de isquemia cerebral en el ratón, la inactivación de TRPA1 y los antagonistas de TRPA1 reducen el daño a la mielina (Hamilton et al., 2016). Los cristales de urato y la inflamación articular presentan niveles reducidos en ratones con inactivación de TRPA1 en un modelo de ratón de urato monosódico de gota (Moilanen et al., 2015). La deleción de TRPA1 en ratas mejoró la inflamación articular e hiperalgesia en un modelo de ratón de brotes agudos de gota (Trevisan et al., 2014). La activación de TRPA1 induce una respuesta inflamatoria en condrocitos osteoartríticos (Nummenmaa et al., 2016). La inhibición de TRPA1 y la deleción genética reducen los mediadores inflamatorios en condrocitos de ratón osteoartrítico y en el cartílago murino (Nummenmaa et al., 2016). Finalmente, los ratones con inactivación de TRPA1 mostraron una mejora en la carga de peso sobre la articulación osteoartrítica en un modelo de hinchazón de la rodilla evocado por MIA (Horvath et al., 2016). TRPA1 se expresa diferencialmente en el epitelio de la vejiga de ratas (Du et al., 2007) y de pacientes con obstrucción de la salida de la vejiga (Du et al., 2008). La modulación del receptor de TRPA1 atenúa la hiperactividad de la vejiga en un modelo de rata de lesión de la médula espinal (Andrade et al., 2011) y administración intratecal de antagonistas de TRPA1 atenúa la cistitis inducida por ciclofosfamida en ratas con micción hiperrefleja (Chen et al., 2016).

Por lo tanto, resulta deseable proporcionar inhibidores potentes de TRPA1.

Se proporciona una revisión de los inhibidores de TRPA1 de diversas clases estructurales en S. Skerratt, Progress in Medicinal Chemistry, 2017, volumen 56, 81-115 y en D. Preti, G. Saponaro, A. Szallasi, Pharm. Pat. Anal. (2015) 4 (2), 75-94.

El documento n.° WO2017/060488 da a conocer compuestos que son antagonistas de TRPA1, que presentan la fór-

La actividad de TRPA1 de los Ejemplos 28 y 29 portadores de un anillo tetrazolilo en el mismo no se da a conocer. L. Schenkel,et al.,J. Med. Chem. 2016, 59, 2794-2809 dan a conocer antagonistas de TRPA1 basados en quinazolinona, incluyendo compuestos que presentan la fórmula estructural generalizada siguiente:

de los que el compuesto 31, en el que R es OH, se da a conocer como presentando una actividad antagonista de TRPA1 de IC<50>58 nM en un ensayo FLIPR y que presenta un aclaramiento intrínseco en microsomas hepáticos hu manos <14 pl/min/kg.

Descripción detallada de la invención

La presente invención da a conocer nuevos derivados tetrazol que son inhibidores del receptor de potencial transitorio de anquirina-1 (TRPA1), que poseen propiedades farmacológicas y farmacocinéticas apropiadas que permiten su uso como medicamentos para el tratamiento de afecciones y/o enfermedades tratables mediante la inhibición de TRPA1. Los compuestos de la presente invención pueden proporcionar varias ventajas, tales como una potencia incrementada, una elevada estabilidad metabólica y/o química, elevadas selectividad y tolerabilidad, una solubilidad mejorada, una permeabilidad potenciada, unión a proteínas plasmáticas deseable, biodisponibilidad mejorada, perfiles farmacocinéticos adecuados y la posibilidad de formar sales estables.

Los compuestos de la invención

La presente invención proporciona nuevos derivados de tetrazol que son inhibidores inesperadamente potentes de TRPA1 (Ensayo A), que se caracterizan además por:

- estabilidad mejorada en microsomas hepáticos humanos (Ensayo B),

- estabilidad mejorada en hepatocitos humanos (Ensayo C).

Los compuestos de la presente invención difieren estructuralmente de los Ejemplos 28 y 29 del documento n.° WO2017/060488 en sus centros bicíclicos sustituidos (pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona, pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-4,6-diona o pirido[3,2-d][1,4]pirimidón-4,6-diona), así como en sustituyentes contiguos a un alcohol alifático secunda rio. Los compuestos de la presente invención, además, difieren estructuralmente del Ejemplo 31 en L. Schenkel,et al.,J. Med. Chem. 2016, 59, 2794-2809, en que portan un anillo tetrazolilo. Estas diferencias estructurales inesperada mente conducen a una combinación favorable de (i) inhibición de TRPA1, (ii) estabilidad en microsomas hepáticos humanos y (iii) estabilidad en hepatocitos humanos.

De esta manera, los compuestos de la invención son superiores a los dados a conocer en la técnica anterior en términos de la combinación de los parámetros siguientes:

- potencia como inhibidores de TRPA1,

- estabilidad en los microsomas hepáticos humanos,

- estabilidad en los hepatocitos humanos.

La estabilidad en los microsomas hepáticos humanos se refiere a la susceptibilidad de compuestos a la biotransformación en el contexto de la selección y/o diseño de fármacos con propiedades farmacocinéticas favorables como primera etapa en la selección. El sitio primario del metabolismo para muchos fármacos es el hígado. Los microsomas hepáticos humanos contienen el citocromo P450 (CYP) y, de esta manera, representan un sistema modelo para el estudio del metabolismo de fármacos de fase Iin vitro.La estabilidad incrementada en los microsomas hepáticos humanos se asocia a varias ventajas, entre ellas una mayor biodisponibilidad y una semivida adecuada, que pueden permitir una administración más baja y menos frecuente a los pacientes. De esta manera, la estabilidad incrementada en microsomas hepáticos humanos es una característica favorable para los compuestos que van a utilizarse para fármacos. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención, además de ser capaces de inhibir TRPA1, se espera que posean un aclaramientoin vivofavorable y, de esta manera, la duración de acción deseada en el ser humano.

La estabilidad en los hepatocitos humanos se refiere a la susceptibilidad de los compuestos a la biotransformación en el contexto de la selección y/o diseño de fármacos con propiedades farmacocinéticas favorables. El sitio primario del metabolismo para muchos fármacos es el hígado. Los hepatocitos humanos contienen el citocromo P450 (CYP) y otros enzimas metabolizadores de fármacos y, de esta manera, representan un sistema modelo para el estudio del metabolismo de fármacosin vitro.(Cabe destacar, en contraste con el ensayo en microsomas hepáticos, que el ensayo en hepatocitos cubre también las biotransformaciones de fase II, así como procesos mediados por transportadores específicos del hígado, y por lo tanto, representa un sistema más completo para los estudios de metabolismo de fármacos). La estabilidad incrementada en los hepatocitos humanos se asocia a varias ventajas, entre ellas una mayor biodisponibilidad y una semivida adecuada, que pueden permitir una administración a menor concentración y menos frecuente a los pacientes. De esta manera, la estabilidad incrementada en hepatocitos humanos es una característica favorable para los compuestos que van a utilizarse para fármacos.

La presente invención proporciona nuevos compuestos según la fórmula (I):

(I)

en la que:

A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno, dos o tres elementos del grupo R3 que consiste en halógeno, CN, alquilo C<1-4>, O-alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>, O-fluoroalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-4>, O-cicloalquilo C<3-4>, ciclofluoroalquilo C<3-4>y O-ciclofluoroalquilo C<3-4>,

o

A se selecciona del grupo que consiste en:

y

E se selecciona del grupo que consiste en O, S, SO, SO<2>y CH<2>;

y

R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>y halógeno, o R1 y R2 junto con el carbono al que están unidos forman un anillo ciclopropilo o ciclobutilo.

Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que:

A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3 que consiste en halógeno, alquilo C<1-4>, CN y O-alquilo C<1-4>,

o

A es:

E se selecciona del grupo que consiste en O, S y CH<2>,

y

R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C<1-4>y halógeno.

A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3 seleccionado del grupo que consiste en F, Cl, Br, alquilo C<1-4>, CN y O-CH<3>, o

A es:

y los sustituyentes E, R1 y R2 se definen tal como en la realización anterior.

A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3 seleccionado del grupo que consiste en F, Cl, Br, CH<3>, CN y OCH<3>, o

A es:

y los sustituyentes E, R<1>y R<2>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

A se selecciona del grupo que consiste en:

no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3,

o

A es:

y los sustituyentes E, R1, R2 y R3 se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

R3 se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br, CH<3>, CN y OCH<3>;

y los sustituyentes A, E, R1 y R2 se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

A se selecciona del grupo que consiste en:

y los sustituyentes E, R<1>y R<2>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores. Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que: E se selecciona del grupo que consiste en O y S;

y los sustituyentes A, R1, R<2>y R<3>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores. Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que:

E se selecciona del grupo que consiste en O y CH<2>;

y los sustituyentes A, R1, R<2>y R<3>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

E es O;

E es S;

E es CH<2>;

R<1>y R<2>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, CH<3>y halógeno;

y los sustituyentes A, E y R<3>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

R<1>y R<2>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, CH<3>y F;

Otra realización de la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), en la que R<1>y R<2>son H; y los sustituyentes A, E y R<3>se definen tal como en cualquiera de las realizaciones anteriores.

uno de R<1>y R<2>es H y el otro de R<1>y R<2>se selecciona del grupo que consiste en CH<3>y F;

Resulta preferente un compuesto de fórmula (I), seleccionado del grupo que consiste en:

y el sustituyente A, tal como se define en cualquiera de las realizaciones anteriores.

Resulta particularmente preferente el compuesto según la fórmula (I), seleccionado del grupo que consiste en:

Términos y definiciones utilizados

Los términos no definidos específicamente en la presente memoria deben presentar los significados atribuidos a ellos por el experto en la materia a la luz de la exposición y el contexto. Sin embargo, tal como se utilizan en la especifica ción, a menos que se especifique otra cosa, los términos siguientes presentan el significado indicado y se siguen las convenciones siguientes.

En los grupos, radicales o fracciones definidos posteriormente, el número de átomos de carbono con frecuencia se especifica después del grupo, por ejemplo, alquilo C<1-6>se refiere a un grupo o radical alquilo que presenta 1 a 6 átomos de carbono. En general, en grupos como HO, H<2>N, (O)S, (O)<2>S, NC (ciano), HOOC, F<3>C o similares, el experto en la materia puede identificar el punto o puntos de unión a la molécula a partir de las valencias libres del grupo mismo. Para grupos combinados que comprenden dos o más subgrupos, el último subgrupo nombrado es el punto de unión del radical, por ejemplo, el sustituyente "aril-alquilo C<1-3>" se refiere a un grupo arilo que está unido a un grupo alquilo C<1-3>, en donde este último está unido al núcleo o al grupo al que está unido el sustituyente.

En el caso de que un compuesto de la presente invención se represente en forma de un nombre químico y como fórmula, en caso de discrepancia, prevalecerá la fórmula. Puede utilizarse un asterisco en las subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula nuclear tal como se define.

La numeración de los átomos de un sustituyente se inicia con el átomo que es más próximo al núcleo o al grupo al que está unido el sustituyente.

Por ejemplo, el término "grupo 3-carboxipropilo" representa el sustituyente siguiente:

en el que el grupo carboxi está unido al tercer átomo de carbono del grupo propilo. Los términos "1-metilpropilo-", "2,2-dimetilpropilo-" o "ciclopropilmetilo-" representan los grupos siguientes:

El asterisco puede utilizarse en subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula nuclear tal como se define.

El término "alquilo C-i-n-", en el que "n" es un número entero seleccionado de 2, 3, 4 o 5, solo o en combinación con otro radical, denota un radical hidrocarburo acíclico, saturado, ramificado o lineal con 1 a n átomos de C. Por ejemplo, el término alquilo C<1-5>- comprende los radicales H<3>C-, H<3>C-CH<2>-, H<3>C-CH<2>-CH<2>-, H<3>C-CH(CH<3>)-, H<3>C-CH<2>-CH<2>-CH<2>-, H3C-CH2-CH(CH3)-, H3C-CH(CH3)-CH2-, H3C-C(CH3)2-, H<3>C-CH<2>-CH<2>-CH<2>-CH<2>-, H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-, H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-, H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-, H3C-CH2-C(CH3)2-, H3C-C(CH3)2-CH2-, H3C-CH(CH3)-CH(CH3)- y H3C-CH2-CH(CH2CH3)-.

El término "fluoro" añadido a un grupo "alquilo", "alquileno" o "cicloalquilo" (saturado o insaturado) se refiere a un grupo alquilo o cicloalquilo en el que se ha sustituido uno o más átomos de hidrógeno por un átomo de flúor. Entre los ejemplos se incluyen, aunque sin limitación: H<2>FC-, HF<2>C- y F<3>C-.

El término "fenilo" se refiere al radical del anillo siguiente:

El término "tiofenilo" se refiere al radical del anillo siguiente:

El término "benzotiofenilo" se refiere al radical del anillo siguiente:

El término "benzofuranilo" se refiere al radical del anillo siguiente:

El término "tetrazolilo" se refiere al radical del anillo siguiente:

El término "pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona" se refiere al radical del núcleo bicíclico siguiente:

El término "pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-4,6-diona" se refiere al radical del núcleo bicíclico siguiente:

El término "pirido[3,2-b][1,4]pirimidón-4,6-diona" se refiere al radical del núcleo bicíclico siguiente:

El término "sustituido" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a que uno o más hidrógenos cualesquiera en el átomo designado se han sustituido por una selección del grupo indicado, siempre que la valencia normal del átomo designado no se supere, y que la sustitución resulte en un compuesto estable.

A menos que se indique específicamente, a lo largo de toda la especificación y en las reivindicaciones adjuntas, una fórmula química o nombre dado comprenderá los tautómeros y todos los estereoisómeros, isómeros ópticos e isóme ros geométricos (p. ej., enantiómeros, diastereómeros, isómeros E/Z, etc.) y racematos de los mismos, así como mez clas en diferentes proporciones de los enantiómeros separados, mezclas de diastereómeros, o mezclas de cualquiera de las formas anteriormente indicadas, en la que existen tales isómeros y enantiómeros, así como sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y solvatos de los mismos, tales como, por ejemplo, hidratos, in cluyendo solvatos, de los compuestos libres, o solvatos de una sal del compuesto.

En general, pueden obtenerse estereoisómeros sustancialmente puros de acuerdo con principios sintéticos conocidos por el experto en la materia, p. ej., mediante separación de las mezclas correspondientes, mediante la utilización de materiales de partida estereoquímicamente puros y/o mediante síntesis estereoselectiva. Es conocido de la técnica cómo preparar formas ópticamente activas, tal como mediante resolución de formas racémicas o mediante síntesis, p. ej., partiendo de materiales de partida ópticamente activos y/o mediante la utilización de reactivos quirales.

Pueden prepararse compuestos enantioméricamente puros de la presente invención o compuestos intermedios, me diante síntesis asimétrica, por ejemplo mediante la preparación y posterior separación de compuestos diastereoméricos o intermedios apropiados, los cuales pueden separarse mediante métodos conocidos (p. ej., mediante separación cromatográfica o cristalización) y/o mediante la utilización de reactivos quirales, tales como materiales de partida qui rales, catalizadores quirales o auxiliares quirales.

Además, es conocido para el experto en la materia cómo preparar compuestos enantioméricamente puros a partir de las mezclas racémicas correspondientes, tal como mediante separación cromatográfica de las mezclas racémicas correspondientes en fases estacionarias quirales, o mediante resolución de una mezcla racémica utilizando un agente de resolución apropiado, p. ej., mediante formación de sal diastereomérica del compuesto racémico con ácidos o bases ópticamente activos, posterior resolución de las sales y liberación del compuesto deseado a partir de la sal, o mediante derivatización de los compuestos racémicos correspondientes con reactivos auxiliares quirales ópticamente activos, posterior separación de diastereómeros y eliminación del grupo auxiliar quiral, o mediante resolución cinética de un racemato (p. ej., mediante resolución enzimática), mediante cristalización enantioselectiva a partir de un con glomerado de cristales enantiomorfos bajo condiciones adecuadas, o mediante cristalización (fraccionada) a partir de un solvente adecuado en la presencia de un auxiliar quiral ópticamente activo.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se utiliza en la presente memoria para referirse a dichos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de administración que resultan, dentro del alcance del buen criterio médico, adecuados para la utilización sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, y en la medida de una relación de beneficio/riesgo razonable.

Tal como se utiliza en la presente memoria, "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a derivados de los compues tos dados a conocer, en donde el compuesto madre forma una sal o un complejo con un ácido o una base.

Entre los ejemplos de ácidos que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto madre que contiene una fracción básica se incluyen ácidos minerales u orgánicos, tales como ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido gentísico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido 4-metil-bencenosulfónico, ácido fosfórico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico y ácido tartárico.

Entre los ejemplos de cationes y bases que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto madre que contiene una fracción ácida se incluyen Na+, K+, Ca2+, Mg2+, NH<4>+, L-arginina, 2,2'-iminobisetanol, L-lisina, N-metil-D-glucamina o tris(hidroximetil)-aminometano. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pue den sintetizarse a partir del compuesto madre que contiene una fracción básica o ácida por métodos químicos con vencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse mediante la reacción de las formas de ácido o base libre de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base o ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico, tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos.

Las sales de ácidos diferentes de los anteriormente mencionados que, por ejemplo, resultan útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (p. ej., sales trifluoroacetato) también comprenden una parte de la presente invención.

Ensayos biológicos

Evaluación de la actividad de TRPA1

Ensayo A: ensayo de TRPA1

La actividad de los compuestos de la invención puede demostrarse utilizando el ensayo celular de TRPA1in vitrosiguiente:

Método:

Como un sistema de ensayo se utiliza la línea celular HEK293 humana sobreexpresante del canal iónico TRPA1 humano (Perkin Elmer, producto n.° AX-004-PCL) para analizar la eficacia y potencia de compuestos. La actividad de los compuestos se determina mediante la medición del efecto de os mismos sobre la concentración intracelular de calcio inducida mediante agonismo de AITC (alilisotiocianato) en un sistema FLIPRtetra (Molecular Devices).

Cultivo celular:

Las células se obtuvieron como células congeladas en viales criogénicos y se almacenaron hasta la utilización a -150 °C.

Las células se cultivaron en medio de cultivo (medio MEM/EBSS con FCS al 10 % y 0,4 mg/ml de geneticina). Es importante que la densidad no exceda el 90 % de confluencia. Para el subcultivo, se desprendieron las células de los matraces con Versene. El día antes del ensayo, se desprendieron las células, se lavaron dos veces con medio (medio MEM/EBSS con FCS al 10 %) y se sembraron 20.000 células en 20 pl/pocillo en placas de 384 pocillos biorrecubiertos con poli-D-lisina (placas negras, de fondo transparente, n.° de cat. 356697) de Corning. Se incubaron las placas du rante 24 horas a 37 °C/5 % de CO<2>antes de la utilización en el ensayo.

Preparación de compuestos

Los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO al 100% auna concentración de 10 mM y en una primera etapa se diluyeron en DMSO hasta una concentración de 5 mM, seguido de etapas de dilución en serie en DMSO al 100 %. El factor de dilución y el número de etapas de dilución pueden variar según las necesidades. Normalmente se preparan 8 concentraciones diferentes mediante diluciones 1:5; se llevan a cabo diluciones intermedias adicionales (1:20) de las sustancias con tampón HBSS/HEPES (1xHEPES, n.° de cat. 14065 de Gibco, HEPES 20 mM, n.° de cat. 83264 de Sigma, BSA al 0,1 %, n.° de cat. 11926 de Invitrogen, pH 7,4.

Ensayo FLIPR:

El día del ensayo, las células se lavaron 3x con tampón de ensayo, quedando 20 pll de tampón en los pocillos después del lavado. Se añadieron 10 pl de tampón de carga del kit Ca6 (n.° de cat. R8191, Molecular Devices) en HBSS/HEPES a las células y las placas se incubaron con tapa durante 120 minutos a 37 °C/5 % de CO<2>. Se añadieron cuidadosa mente a los pocillos 10 pl de compuesto o controles en tampón HBS/HEPES/DMSO al 5 % de la placa de dilución intermedia. Se leyó la luminiscencia (indicando flujo de entrada o liberación de calcio) en el dispositivo FLIPRtetra durante 10 minutos para realizar un seguimiento de los efectos inducidos por el compuesto (p. ej., el agonismo). Finalmente, se añadieron 10 pl del agonista AITC 50 pM disuelto en tampón HBSS/HE<p>E<s>/DM<s>O al 0,05 % (concen tración final: 10 pM) a los pocillos, seguido de una lectura adicional en el dispositivo FLIPRtetra durante 10 minutos. Se utilizó la superficie bajo la curva de señal (AUC, por sus siglas en inglés) después de la adición de AITC para los cálculos de IC<50>/% de inhibición.

Evaluación de los datos y cálculos:

Cada placa de microtitulación de ensayo contenía pocillos con controles de vehículo (DMSO al 1 %) en lugar de compuesto, como controles para la luminiscencia inducida por AITC (CTL 100 %; controles altos) y pocillos con con troles de vehículo sin AITC como controles para cambios no específicos de luminiscencia (CTL 0 %; controles bajos).

El análisis de los datos se llevó a cabo mediante el cálculo de la superficie bajo la curva de señal de los pocillos individuales. Basándose en dichos valores, se calculó el valor del % para la medición de la concentración de cada sustancia: (AUC(muestra) - AUC(inferior))*100/(AUC(superior) - AUC(inferior)) utilizando el software MegaLab (desa rrollo en el propio laboratorio). Se calcularon los valores de IC<50>a partir de los valores de % del control utilizando el software MegaLab. Cálculo: [y=(a-d)/(1+(x/c)Ab)+d], a=valor inferior, d=valor superior; x=conc. M; c=IC<50>M; b=coeficiente de Hill; y=% del control

Tabla 1: datos biológicos para compuestos de la invención tal como se han obtenido en el Ensayo A

Tabla 2: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se han obtenido en el Ensayo A.

Tabla 3: datos biológicos para los compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel, et al., J. Med.

Chem. 2016, 59, 2794-2809) tal como se ha obtenido en el Ensayo A.

Evaluación del aclaramiento microsómico

Ensayo B: aclaramiento microsómico:

La degradación metabólica del compuesto de ensayo se sometió a ensayo a 37 °C on microsomas hepáticos agrupa dos. El volumen de incubación final de 100 pl por punto temporal contenía tampón TRIS, pH 7,6, a TA (0,1 M), cloruro de magnesio (5 mM), proteína microsómica (1 mg/ml) y el compuesto de ensayo a una concentración final de 1 pM.

Tras un corto periodo de preincubación a 37 °C, se iniciaron las reacciones mediante adición de beta-nicotinamida adenín-dinucleótido fosfato, forma reducida (NADPH, 1 mM) y se terminaron mediante transferencia de un alícuota a solvente tras diferentes puntos temporales (0, 5, 15, 30 y 60 min). Además, se realizó un seguimiento de la degradación independiente de NADpH en incubaciones sin NADPH, terminadas en el último punto temporal. El compuesto de ensayo remanente [%] tras la incubación independiente de NADPH se refleja mediante el parámetro c (control) (esta bilidad metabólica). Las incubaciones desactivadas se peletizaron mediante centrifugación (10.000 g, 5 min).

Se sometió a ensayo una alícuota del sobrenadante mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas/espectrometría de masas (LC-MS/MS, por sus siglas en inglés) para la cantidad de compuesto madre. Se determinó la semivida (t-i</2>in vitro)a partir de la pendiente del gráfico semilogarítmico del perfil de concentración-tiempo.

El aclaramiento intrínseco (CL_INTRINSIC) se calcula a partir de la consideración de la cantidad de proteína en la incubación:

CL_INTRINSIC [pl/min/mg de proteína] = (Ln 2 / (semivida [min] * contenido de proteína [mg/ml])) * 1000

CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [pl/min/mg proteína] x MPPGL [mg de proteína/g de hígado] x factor hepático [g/kg de peso corporal]) / 1000

Qh [%] = CL [ml/min/kg] / flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg])

Hepatocelularidad, humana: 120x106 células/g de hígado

Factor hepático, humano: 25,7 g/kg de peso corporal

Flujo sanguíneo, humano: 21 ml/(min x kg)

Tabla 4: datos biológicos para compuestos de la invención tal como se han obtenido en el Ensayo B

(continuación)

Tabla 5: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se han obtenido en el Ensayo B.

Tabla 6: datos biológicos para los compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel, et al., J. Med.

Chem. 2016, 59, 2794-2809) tal como se ha obtenido en el Ensayo B.

Evaluación del aclaramiento hepatocitario

Ensayo C: aclaramiento hepatocitario

La degradación metabólica del compuesto de ensayo se sometió a ensayo en una suspensión de hepatocitos. Se incubaron hepatocitos (conservados criogénicamente) en medio de Eagle modificado por Dulbecco (suplementado con 3,5 |jg de glucagón/500 ml, 2,5 mg de insulina/500 ml y 3,75 mg/500 ml de hidrocortisona) que contenía 5 % o 50 % de suero específico.

Tras una preincubación de 30 min en un incubador (37 °C, 10 % de CO<2>), se añadieron 5 j l de solución de compuesto de ensayo (80 jM , a partir de solución madre 2 mM en DMSO, diluida 1:25 con medio) a 395 j l de suspensión de hepatocitos (densidad celular comprendida en el intervalo de entre 0,25 y 5 millones de células/ml, según la especie, normalmente 1 millón de células/ml; concentración final del compuesto de ensayo: 1 jM , concentración final de DMSO: 0,05 %).

Las células se incubaron durante seis horas (incubador, agitador orbital) y se extrajeron muestras (25 j l ) a las 0, 0,5, 1, 2, 4 y 6 horas. Las muestras se transfirieron a acetonitrilo y se peletizaron mediante centrifugación (5 min). Se transfirió el sobrenadante a una nueva placa de 96 pocillos profundos, se evaporó bajo nitrógeno y se resuspendió. La caída del nivel de compuesto madre se analizó mediante HPLC-MS/MS.

Se calculó CLint de la manera siguiente: CL_INTRINSIC=Dosis/AUC=(C0/CD)/(AUD clast/k)x1000/60. C0: concen tración inicial en la incubación [jM ], CD: densidad celular de células vivas [106 células/ml], AUD: superficie bajo los datos [jM x h], clast: concentración de último punto de datos [jM ], k: pendiente de la recta de regresión para la caída del compuesto madre [Ir1].

El aclaramiento intrínseco hepáticoin vitrocalculado puede escalarse al aclaramiento intrínseco hepáticoin vivoy utilizarse para predecir el aclaramiento (CL) sanguíneoin vivodel hígado mediante la utilización de un modelo hepático (modelo bien mezclado).

CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [jl/m in/106 células] x hepatocelularidad [106 células/g de hí gado] x factor hepático [g/kg de peso corporal]) / 1000

CL [ml/min/kg] = CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] x flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg] / (CLJNTRINSICJNVIVO [ml/min/kg] flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg])

Qh [%] = CL [ml/min/kg] / flujo sanguíneo hepático [ml/min/kg])

Hepatocelularidad, humana: 120x106 células/g de hígado

Factor hepático, humano: 25,7 g/kg de peso corporal

Flujo sanguíneo, humano: 21 ml/(min x kg)

Tabla 7: datos biológicos para compuestos de la invención tal como se han obtenido en el Ensayo C

Tabla 8: datos biológicos para compuestos de la técnica anterior (Ejemplos 28 y 29 en el documento n.° WO2017/060488) tal como se han obtenido en el Ensayo C.

Tabla 9: datos biológicos para los compuestos de la técnica anterior (Ejemplo 31 en L. Schenkel, et al., J. Med.

Chem. 2016, 59, 2794-2809) tal como se ha obtenido en el Ensayo C.

Evaluación de la permeabilidad

Se sembraron células Caco-2 (1 a 2x10<5>células/superficie de 1 cm2) en insertos de filtro (filtros de policarbonato o PET transpocillo de Costar, tamaño de poro: 0,5 pm) y se cultivaron (DMEM) durante 10 a 25 días.

Se disolvieron los compuestos en solvente adecuado (tal como DMSO, soluciones madre 1 a 20 mM). La soluciones madre se diluyeron con tampón HTP-4 (NaCl 128,13 mM, KCl 5,36 mM, MgSO<4>1 mM, CaCh 1,8 mM, NaHCO<3>4.17 mM, Na<2>HPO<4>X<7>H<2>O 1.19 mM, NaH<2>PO<4>xH<2>O 0.41 mM , HEPES 15 mM, glucosa 20 mM, BSA al 0,25 %, pH 7,2) para preparar las soluciones de transporte (compuesto 0,1 a 300 pM, DMSO final<=0,5 %). Se aplicó la solución de transporte (TL) al lado apical o basolateral del donante para medir la permeabilidad A-B o B-A (3 réplicas de filtro), respectivamente. Se recogieron las muestras al principio y final del experimento del donante y en diversos intervalos de tiempo durante hasta 2 horas también del lado de receptor para la medición de la concentración mediante HPLC-MS/MS o el recuento de centelleo. Los volúmenes de receptor muestreados se sustituyeron por solución de receptor nueva.

Evaluación de la unión a proteínas plasmáticas

Se utilizó la técnica de diálisis de equilibrio (DE) para determinar la unión fraccionalin vitroaproximada de los com puestos de ensayo a proteínas plasmáticas. Se utilizaron celdas de diálisis de teflón Dianorm (micro 0,2). Cada celda consiste en una cámara donante y una cámara aceptora, separadas por una membrana semipermeable ultradelgada con un valor de corte de peso molecular de 5 kDa. Se prepararon soluciones madre para cada compuesto de ensayo en DMSO a 1 mM y se diluyeron hasta una concentración final de 1,0 pM. Las soluciones de diálisis se prepararon a continuación en plasma humano o de rata agrupado (con NaEDTA) procedente de donantes varones y mujeres. Se dispensaron alícuotas de 200 pl de tampón de diálisis (fosfato potásico 100 mM, pH 7,4) en la cámara de tampón. Se dispensaron alícuotas de 200 pl de solución de diálisis de compuesto de ensayo en las cámaras de plasma. Se llevó a cabo la incubación durante 2 horas bajo rotación a 37 °C.

Al final del periodo de diálisis, se transfirió el dializado a tubos de reacción. Los tubos para la fracción de tampón contenían 0,2 ml de ACN/agua (80/20). Se transfirieron alícuotas de 25 pl del dializado plasmático a placas de pocillos profundos y se mezclaron con 25 pl de ACN/agua (80/20), 25 pl de tampón, 25 pl de solución de calibración y 25 pl de solución de patrón interno. La precipitación de las proteínas se llevó a cabo mediante la adición de 200 pl de ACN. Se transfirieron alícuotas de 50 pl del dializado de tampón a placas de pocillos profundos y se mezclaron con 25 pl de plasma de blanco, 25 pl de solución de patrón interno y 200 pl de a Cn . Se midieron las muestras en un sistema de HPLC-MS/EM y se evaluaron con el software Analyst. Se calculó el porcentaje de unido con la fórmula siguiente: % unido = (concentración en plasma - concentración en tampón/concentración en plasma 30) X 100.

Evaluación de la solubilidad

Se prepararon soluciones saturadas en placas de pocillos (el formato depende del robot) mediante la adición de un volumen apropiado de medio acuoso seleccionado (normalmente comprendido en el intervalo de entre 0,25 y 1,5 ml) en cada pocillo que contenía una cantidad conocida de sustancia farmacéutica sólida (normalmente comprendida en el intervalo de entre 0,5 y 5,0 mg). Los pocillos se sometieron a agitación o se mezclaron durante un periodo de tiempo predefinido (normalmente comprendido en un intervalo de entre 2 y 24 h) y después se filtraron utilizando membranas de filtración adecuadas (habitualmente filtros de PTFE con 0,45 pm de tamaño de poro). Se evitó la absorción del filtro mediante el descarte de las primeras gotas de filtrado. Se determinó la cantidad de sustancia farmacéutica disuelta mediante espectroscopía de UV. Además, se midió el pH de la solución acuosa saturada utilizando un medidor de pH de electrodo de vidrio.

Evaluación de las características farmacocinéticas en roedores

El compuesto de ensayo se administró por vía intravenosa en ratas alimentadas, o por vía oral a ratas sometidas a ayuno. Se extrajeron muestras de sangre en varios puntos temporales después de la aplicación del compuesto de ensayo, se añadió anticoagulante y se centrifugaron.

La concentración de analitos (el compuesto administrado y/o metabolitos) se cuantificó en las muestras de plasma. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos (Fc) utilizando métodos no compartimentales. La AUC y la Cmax se norma lizaron respecto a una dosis de 1 pmol/kg.

Evaluación del metabolismo en hepatocitos humanosin vitro

Se investigó la ruta metabólica de un compuesto de ensayo utilizando hepatocitos primarios humanos en suspensión. Tras la recuperarlos de la conservación criogénica, se incubaron los hepatocitos humanos en medio de Eagle modifi cado por Dulbecco que contenía suero humano al 5 % y suplementado con 3,5 pg de glucagón/500 ml, 2,5 mg de insulina/500 ml y 3,75 mg/500 ml de hidrocortisona.

Tras una preincubación de 30 min en un incubador de cultivo celular (37 °C, 10 % de CO<2>), se añadió la solución de compuesto de ensayo a la suspensión de hepatocitos a fin de obtener una densidad celular final de 1,0*106 a 4,0*106 células/ml (dependiendo de la tasa de renovación metabólica del compuesto observada con hepatocitos primarios humanos), una concentración final de compuesto de ensayo de 10 pM, y una concentración final de DMSO de 0,05 %.

Las células se incubaron durante seis horas en un incubador de cultivo celular en un agitador horizontal y se extrajeron las muestras de la incubación tras 0, 0,5, 1, 2, 4 o 6 horas, dependiendo de la tasa de renovación metabólica. Las muestras se desactivaron con acetonitrilo y se peletizaron mediante centrifugación. Se transfirió el sobrenadante a una placa de 96 pocilios profundos, se evaporó bajo nitrógeno y se resuspendió previamente al bioanálisis mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas de alta resolución para la identificación de los metabolitos putativos.

Las estructuras se asignaron tentativamente basándose en datos de transformada de Fourier-MSn. Los metabolitos se informan como porcentaje del compuesto madre en la incubación de hepatocitos humanos con un umbral >4 %.

Método de tratamiento

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula general 1 que resultan útiles en la prevención y/o tratamiento de una enfermedad y/o afección asociada o modulada por la actividad de TRPA1, incluyendo, aunque sin limitación, el tratamiento y/o prevención de enfermedades fibróticas, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermeda des o afecciones respiratorias o gastrointestinales, enfermedades oftálmicas, enfermedades inflamatorias de las arti culaciones y enfermedades inflamatorias de la nasofaringe, ojos y piel, y dolor y trastornos neurológicos. Entre dichos trastornos, enfermedades y afecciones se incluyen tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades intersticiales pulmonares y otras enfermedades fibróticas, asma o enfermedades alérgicas, enfermedades eosinofílicas, enferme dad pulmonar obstructiva crónica, así como trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, tales como artritis reumatoide y aterosclerosis, así como dolor y trastornos neurológicos, tales como dolor agudo, dolor quirúrgico, dolor crónico, depresión y trastornos de la vejiga.

Los compuestos de fórmula general 1 resultan útiles para la prevención y/o tratamiento de:

(1) Tos, tal como tos idiopática crónica o tos crónica refractaria, tos asociada a asma, EPOC, cáncer de pulmón, infección postvírica y fibrosis pulmonar idiopática y otras enfermedades pulmonares intersticiales.

(2) Enfermedades pulmonares fibróticas, tales como neumonitis o neumonitis intersticial asociada a colagenosis, p. ej., lupus eritematoso, esclerodermia sistémica, artritis reumatoide, polimiositis y dermatomiosisitis, neumonías intersticiales idiopáticas, tales como fibrosis pulmonar (FPI), neumonía intersticial no específica, enfermedad pul monar intersticial asociada a bronquiolitis respiratoria, neumonía intersticial descamativa, neumonía organizativa criptogénica, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica, linfangioleiomiomatosis, proteinosis al veolar pulmonar, histiocitosis de células de Langerhans, fibroelastosis pleural parenquimatosa, enfermedades in tersticiales pulmonares de causa conocida, tales como neumonitis intersticial como resultado de exposiciones ocupacionales, tales como asbestosis, silicosis, pulmón del minero (polvo de carbón), pulmón del agricultor (heno y moho), pulmón del cuidador de palomas (aves) u otros desencadenantes aéreos ocupacionales, tales como polvo de metal o micobacterias, o como resultado de un tratamiento, tal como radiación, metotrexato, amiodarona, nitrofurantoína o quimioterapéuticos, o para enfermedad granulomatosa, tal como granulomatosis con poliangitis, sín drome de Churg-Strauss, sarcoidosis, neumonitis por hipersensibilidad, o neumonitis intersticial causada por dife rentes orígenes, p. ej., aspiración, inhalación de gases tóxicos, vapores, bronquitis o neumonitis o neumonitis in tersticial causada por insuficiencia cardíaca, radiografías, radiación, quimioterapia, M. boeck o sarcoidosis, granu lomatosis, fibrosis quística o mucoviscidosis, o deficiencia de antitripsina alfa-1.

(3) Otras enfermedades fibróticas, tales como fibrosis hepática en puente, cirrosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica (EHGNA), fibrosis auricular, fibrosis endomiocárdica, infarto de miocardio antiguo, cicatriz glial, rigidez arterial, artrofibrosis, contractura de Dupuytren, queloides, esclerodermia/esclerosis sistémica, fibrosis mediastínica, mielofibrosis, enfermedad de Peyronie, fibrosis sistémica nefrogénica, fibrosis retroperitoneal y capsulitis ad hesiva.

(4) Enfermedades y afecciones inflamatorias, autoinmunes o alérgicas, tales como rinitis o sinusitis alérgica o no alérgica, sinusitis o rinitis crónica, poliposis nasal, rinosinusitis crónica, rinosinusitis aguda, asma, asma pediátrica, bronquitis alérgica, alveolitis, vías aéreas hiperreactivas, conjuntivitis alérgica, bronquiectasias, síndrome de difi cultad respiratoria del adulto, edema bronquial y pulmonar, bronquitis o neumonitis, celulitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Wells), neumonías eosinofílicas (p. ej., síndrome de Loeffler, neumonía eosinofílica crónica), fascitis eosinofílica (p. ej., síndrome de Shulman), hipersensibilidad de tipo retardado, asma no alérgica; broncoconstricción inducida por ejercicio; enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), bronquitis aguda, bronquitis crónica, tos, enfisema pulmonar; anafilaxis sistémica o respuestas de hipersensibilidad, alergias a medicamentos (p. ej., a la penicilina o a la cefalosporina), síndrome eosinofilia-mialgia debido a la ingestión de triptófano contaminado, alergias a picaduras de insectos; enfermedades autoinmunes, tales como artritis reumatoide, enfermedad de Gra ves, síndrome de Sjogren, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, miastenia grave, trombocitopenia inmune (TCI en el adulto, trombocitopenia neonatal, TCI pediátrico), anemia hemolítica inmune (autoinmune e inducida por medicamentos), síndrome de Evans (citopenias inmunes de plaquetas y glóbulos ro jos), enfermedad de Rh del recién nacido, síndrome de Goodpasture (enfermedad anti-GBM), celíaca, cardiomiopatía autoinmune, diabetes juvenil; glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Behcet; rechazo de in jerto (p. ej., en el trasplante), incluyendo rechazo de aloinjerto o enfermedad injerto contra huésped; enfermedades inflamatorias intestinales, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa; espondiloartropatías; esclerodermia; psoriasis (incluida psoriasis mediada por células T) y dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis, eczema, dermatitis atópica, dermatitis por contacto alérgico, urticaria; vasculitis (p. ej., necrosante, cutánea y vasculitis por hipersensibilidad); eritema nudoso; miositis eosinofílica, fascitis eosinofílica, cánceres con infiltración leucocitaria de la piel u órganos; enfermedades oftálmicas, tales como degeneración macular asociada a la edad, retinopatía diabética y edema macular diabético, queratitis, queratitis eosinofílica, queratoconjuntivitis, queratoconjuntivitis ver nal, cicatrización, cicatrización del segmento anterior, blefaritis, blefaroconjuntivitis, trastornos ampollosos, penfigoide cicatricial, melanoma conjuntival, conjuntivitis papilar, ojo seco, epiescleritis, glaucoma, gliosis, granuloma anular, oftalmopatía de Graves, melanoma intraocular, pinguécula, retinopatía proliferativa vitreorretiniana, pterigion, escleritis, uveítis, episodios agudos de gota, gota u osteoartritis.

(5) Dolor, tal como síndrome de dolor idiopático crónico, dolor neuropático, disestesia, alodinia, migraña, dolor dental y dolor postquirúrgico.

(6) Depresión, ansiedad, neuropatía diabética y trastornos vesicales, tales como obstrucción del tracto de salida de la vejiga, vejiga hiperactiva, cistitis; lesión por reperfusión miocárdica o lesión por isquemia cerebral.

De acuerdo con lo anterior, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para la utilización como medicamento.

Además, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula general 1 para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad y/o afección asociada o modulada por la actividad de TRPA1.

Además, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general 1 para el tratamiento y/o preven ción de enfermedades fibróticas, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermedades o afecciones respira torias o gastrointestinales, enfermedades oftálmicas, enfermedades inflamatorias de las articulaciones y enfermeda des inflamatorias de la nasofaringe, ojos y piel, dolor y trastornos neurológicos. Entre dichos trastornos, enfermedades y afecciones se incluyen tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades intersticiales pulmonares y otras enfer medades fibróticas, asma o enfermedades alérgicas, enfermedades eosinofílicas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, así como trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, tales como artritis reumatoide y aterosclerosis, así como dolor y trastornos neurológicos, tales como dolor agudo, dolor quirúrgico, dolor crónico, depresión y trastornos de la vejiga.

Además, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula general 1 para el tratamiento y/o prevención de:

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general 1 para su uso en el tratamiento y/o prevención de las enfermedades y afecciones mencionadas anteriormente.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula general 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de las enfermedades y afecciones mencionadas anteriormente.

En un aspecto adicional de la presente invención, la presente invención se refiere a métodos para el tratamiento o prevención de las enfermedades y afecciones mencionadas anteriormente, que comprenden la administración de una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula general 1 a un ser humano.

Terapia de combinación

Los compuestos de la invención pueden además combinarse con uno o más, preferentemente un agente terapéutico adicional. Según una realización, el agente terapéutico adicional se selecciona del grupo de agentes terapéuticos útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones descritas anteriormente, en particular asociadas a enfermeda des fibróticas, trastornos inflamatorios e inmunorreguladores, enfermedades o trastornos respiratorios o gastrointesti nales, enfermedades inflamatorias de las articulaciones o de la nasofaringe, ojos y piel o afecciones como, por ejemplo, tos, fibrosis pulmonar idiopática, otras enfermedades pulmonares intersticiales, asma o enfermedades alérgicas, en fermedades eosinofílicas, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, dermatitis atópica, así como patologías autoin munes, tales como artritis reumatoide y aterosclerosis, o agentes terapéuticos útiles para el tratamiento de enferme dades oftálmicas, dolor y depresión.

Entre los agentes terapéuticos adicionales que resultan adecuados para tales combinaciones se incluyen, en particu lar, aquellos que, por ejemplo, potencian el efecto terapéutico de una o más sustancias activas con respecto a una de las indicaciones mencionadas y/o permiten reducir la dosis de una o más sustancias activas.

Por lo tanto, un compuesto de la invención puede combinarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales selec cionados del grupo que consiste en agentes antifibróticos, agentes antitusivos, agentes antiinflamatorios, agentes anti dermatitis atópica, analgésicos, anticonvulsivos, ansiolíticos, sedantes, relajantes del músculo esquelético o antide presivos.

Los agentes antifibróticos son, por ejemplo, nintedanib, pirfenidona, inhibidores de la fosfodiesterasa IV (PDE4), tales como roflumilast, inhibidores de la autotaxina, tales como GLPG-1690 o BBT-877; anticuerpos bloqueadores del factor de crecimiento del tejido conectivo (CTGF), tales como pamrevlumab; anticuerpos bloqueadores del receptor del factor activador de células B (BAFF-R), tales como lanalumab; inhibidores bloqueadores de alfa-V/beta-6, tales como BG00011/STX-100, pentraxina-2 (PTX-2) recombinante, tal como PRM-151; inhibidores de la quinasa N-terminal c-Jun (JNK), tales como CC-90001; inhibidores de galectina-3, tales como TD-139; inhibidores del receptor acoplado a pro teína G 84 (GPR84), tales como GLPG-1205; inhibidores duales del receptor acoplado a proteína G 84/receptor aco plado a proteína G 40, tales como PBI-4050; inhibidores de la proteína quinasa 2 asociada a Rho (ROCK2), tales como KD-025; ARN de interferencia pequeño de la proteína de choque térmico 47 (HSP47), tal como<b>M<s>-986263/ND-L02-s0201; inhibidor de la vía de Wnt, tal como<s>M-04646; inhibidores LD4/PDE3/4, tales como tipelukast; dominios inmunomoduladores recombinantes de la sintetasa de histidil-ARNt (HARS), tales como ATYR-1923; inhibidores de la sintetasa de prostaglandinas, tales como ZL-2102/SAR-191801; ácido 15-hidroxi-eicosapentaenoico (15-HEPE, p. ej., DS-102); inhibidores de la lisil-oxidasa similar 2 (LOXL2), tales como PAT-1251, PXS-5382/PXS-5338; inhibidores duales de las fosfoinositida 3-quinasas (PI3K)/objetivo de rapamicina en mamíferos (mTOR), tal como HEC-68498; inhibidores de la calpaína, tal como BLD-2660; inhibidores de la quinasa quinasa quinasa activada por mitógenos (MAP3K19), tales como MG-S-2525; inhibidores de la quitinasa como OATD-01; inhibidores de la quinasa activada por la proteína quinasa activada por mitógenos 2 (MAPKAPK2), tales como MMI-0100; ARN de interferencia pequeño del factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-beta1), tal como TRK250/BNC-1021; o antagonistas del receptor de ácido lisofosfatídico, tal como BMS-986278.

Los agentes antitusivos son, por ejemplo, antagonistas del receptor purinoceptor 3 (P2X3), tales como gefapixant, S-600918, BAY-1817080 o BLU-5937; antagonistas del receptor de neuroquinina 1 (NK-1), tales como orvepitant, aprepitant; estimuladores de la subunidad alfa 7 del receptor nicotínico de la acetilcolina, tales como ATA-101/bradanicline; codeína, gabapentina, pregabalina o azitromicina.

Los agentes antiinflamatorios son, por ejemplo, corticosteroides, tales como prednisolona o dexametasona; inhibidores de la ciclo-oxigenasa-2 (COX2), tales como celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib, deracoxib, etoricoxib o lumiracoxib; antagonistas de la prostaglandina E2; antagonistas del leucotrieno B4; antagonistas del leucotrieno D4, tales como montelukast; inhibidores de la 5-lipooxigenasa; u otros agentes antiinflamatorios no esteroides (AINE), tales como aspirina, diclofenaco, diflunisal, etodolaco, ibuprofeno o indometacina.

Los agentes para la dermatitis atópica son, por ejemplo, ciclosporina, metotrexato, micofenolato mofetilo, azatioprina, inhibidores de fosfodiesterasa (p. ej., apremilast, crisaborol), inhibidores de la quinasa asociada a Janus (JAK) (p. ej., tofacitinib), anticuerpos neutralizantes contra IL-4/IL-13 (p. ej., dupilumab), IL-13 (p. ej., lebrikizumab, tralokinumab) e IL-31 (nemolizumab).

Los analgésicos son, por ejemplo, del tipo opioide, tales como la morfina, oximorfina, levopanol, oxicodona, propoxifeno, nalmefeno, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, meripedina, metadona, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina, pentazocina; o del tipo no opioide, tal como la acetofenamina.

Los antidepresivos son, por ejemplo, antidepresivos tricíclicos, tales como amitriptilina, clomipramina, desipramina, doxepina, desipramina, imipramina, nortriptilina; antidepresivos inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS), tales como fluoxetina, paroxetina, sertralina, citalopram, escitalopram; antidepresivos inhibidores de la recap tación de norepinefrina (IRN), tales como maprotilina, lofepramina, mirtazapina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxetina, mianserina, bupropión, hidroxibupropión, nomifensina, viloxazina; antidepresivos inhibidores duales de la recaptación de serotonina-norepinefrina (IRSN), tales como duloxetina, venlafaxina, desvenlafaxina, levomilnacipran; antidepresi vos atípicos, tales como trazodona, mirtazapina, vortioxetina, vilazodona, bupropión; o antidepresivos inhibidores de la monoamino oxidasa (IMAO), tales como tranilcipromina, fenelzina o isocarboxazida.

Los ansiolíticos son, por ejemplo, benzodiazepinas, tales como alprazolam, bromazepam, clordiazepóxido, clonazepam, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam, triazolam o tofisopam; o son hip nóticos no benzodiazepínicos, tales como eszopiclona, zaleplón, zolpidem o zopiclona; o son carbamatos, tales como meprobamato, carisoprodol, tibamato o lorbamato; o son antihistamínicos, tales como hidroxizina, clorfeniramina o difenhidramina.

Los sedantes son, por ejemplo, sedantes barbitúricos, tales como amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, secobarbital, talbutal, teamilal o tiopental; o son sedantes no bar bitúricos, tales como glutetimida, meprobamato, metacualona o diclororfenazona.

Los relajantes musculares esqueléticos son, por ejemplo, baclofeno, meprobamato, carisoprodol, ciclobenzaprina, metaxalona, metocarbamol, tizanidina, clorzoxazona u orfenadrina.

Otros parejas de combinación adecuados son los inhibidores de la acetilcolinesterasa, tales como donepezilo; anta gonistas 5-HT-3, tales como ondansetrón; antagonistas del receptor de glutamato metabotrópico; antiarrítmicos, tales como mexiletina o fenitoína; o antagonistas del receptor NMDA.

Otras parejas de combinación adecuados son medicamentos para la incontinencia, por ejemplo, anticolinérgicos tales como oxibutinina, tolterodina, darifenacina, fesoterodina, solifenacina o trospio; o son relajantes del músculo vesical, tales como mirabegrón; o bloqueadores alfa, tales como tamsulosina, alfuzosina, silodosina, doxazosina o terazosina. La dosis para las parejas de combinación mencionados es generalmente 1/5 de la dosis más baja normalmente reco mendada hasta 1/1 de la dosis normalmente recomendada.

Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de acuerdo con la invención en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente y posteriormente en la presente memoria para el tratamiento de enfermedades o afecciones que pueden verse afectadas o que están mediadas por TRPA1, en particular enfermedades o afecciones tales como las anteriormente y posteriormente indicadas en la pre sente memoria.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un método para tratar una enfermedad o afección que puede ser influenciada por la inhibición de TRPA1 en un paciente, que incluye la etapa de administrar al paciente que necesita dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéu ticamente aceptable del mismo en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales para el tratamiento de enfermedades o afecciones que pueden ser influenciadas por la inhibición de TRPA1 en un paciente que lo necesite.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad o afección mediada por la actividad de TRPA1 en un paciente que incluye la etapa de administrar al paciente, preferentemente un ser humano, que necesita dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente y posteriormente en la presente memoria.

La utilización del compuesto según la invención en combinación con el agente terapéutico adicional puede llevarse a cabo simultáneamente o en tiempos escalonados.

El compuesto según la invención y el agente o agentes terapéuticos adicionales pueden estar presentes juntos en una formulación, por ejemplo una tableta o cápsula, o separadamente en dos formulaciones idénticas o diferentes, por ejemplo, en forma de un denominado "kit de partes".

En consecuencia, en otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales indicados anteriormente y posterior mente, opcionalmente junto con uno o más portadores inertes y/o diluyentes.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a la utilización de un compuesto según la invención en un dispositivo de medición de tos.

Otras características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes a partir de los siguientes ejemplos más detallados que ilustran, a modo de ejemplo, los principios de la invención.

Preparación

Los compuestos de acuerdo con la presente invención y sus intermediarios pueden obtenerse utilizando métodos de síntesis que son conocidos por el experto en la materia y que están descritos en la literatura de síntesis orgánica. Preferentemente, los compuestos se obtienen de manera análoga a los métodos de preparación explicados más de talladamente a continuación, en particular tal como se describe en la sección experimental. En algunos casos, puede modificarse el orden para llevar a cabo las etapas de reacción. También se pueden utilizar variantes de los métodos de reacción que son conocidas por el experto en la materia pero no descritas en detalle en la presente memoria.

Los procedimientos generales para preparar los compuestos según la invención resultarán evidentes para el experto en la materia tras estudiar los siguientes esquemas. Cualquier grupo funcional en los materiales de partida o interme diarios puede ser protegido utilizando grupos protectores convencionales. Dichos grupos protectores pueden ser eli minados de nuevo en una etapa adecuada dentro de la secuencia de reacción utilizando métodos que resultarán familiares para el experto en la materia.

Los compuestos según la invención se preparan mediante los métodos de síntesis descritos a continuación en los que los sustituyentes de las fórmulas generales presentan los significados proporcionados anteriormente en la presente memoria. Dichos métodos pretenden ser ilustrativos de la invención, sin restringir la materia objeto y el alcance de los compuestos reivindicados en estos ejemplos. En donde no se describe la preparación de compuestos de partida, pueden adquirirse comercialmente o pueden prepararse de manera análoga a compuestos conocidos o métodos des critos en la presente memoria. Las sustancias descritas en la literatura se preparan según los métodos de síntesis publicados. Las abreviaturas se definen en la sección de Ejemplos.

Los compuestos de la fórmula (I) con E=O, denotados por (Ia), pueden prepararse tal como se muestra en el Esquema<1>, a continuación.

En el Esquema 1, el clorometiltetrazol se N-alquila con un derivado de etanona apropiado que lleva un grupo saliente "GS" (p. ej., Cl o Br) alfa respecto al grupo carbonilo en presencia de una base (p. ej., K<2>CO<3>), rindiendo una mezcla de dos regioisómeros. El regioisómero no deseado (no mostrado) puede eliminarse mediante cromatografía utilizando un gradiente apropiado. La cetona resultante (A) puede reducirse de manera enantioselectiva mediante la utilización de sistemas catalíticos apropiados con un complejo de metal de transición (de, p. ej., Ru o Ir) en combinación con un ligando quiral (p. ej., ([(1S,2S)-2-amino-1,2-difeniletil](4-toluenosulfonil)amido) y una fuente de hidrógeno, tal como el complejo de ácido fórmico y trietilamina. En presencia de una base, el alcohol resultante (B) puede usarse para la alquilación de (C), proporcionando directamente compuestos de fórmula general (Ia), o para alquilar (D) a fin de obte ner el intermedio (E), que tras la metilación con un reactivo metilante (p. ej., yoduro de metilo) en presencia de una base también produce compuestos de fórmula general (Ia).

Los compuestos de la fórmula (I) con E=O, denotados por (Ia), pueden prepararse tal como se muestra en el Esquema<2>, a continuación.

Esquema 2:

En el Esquema 2, el compuesto (G) puede prepararse mediante alquilación de (D) con un derivado de acetonitrilo que lleva un grupo saliente "GS" (p. ej., Cl o Br) en presencia de una base débil, tal como DIPEA, seguido de metilación del intermedio (F) con un reactivo de metilación (p. ej., MeI) en presencia de una base (p. ej., K<2>CO<3>). La formación del tetrazol (H) puede lograrse mediante condiciones de reacción habituales para la formación de tetrazol (p. ej., utili zando NaN<3>en presencia de TEA/hidrocloruro de TEA en DMF). La alquilación del tetrazol (H) con un derivado de etanona apropiado que lleva un grupo saliente "GS" (p. ej., Cl o Br) alfa respecto al grupo carbonilo se realiza en presencia de una base, tal como K<2>CO<3>, rindiendo una mezcla de dos regioisómeros. El regioisómero no deseado (no mostrado) puede eliminarse mediante cromatografía utilizando un gradiente apropiado. La cetona resultante (A) puede reducirse de manera enantioselectiva mediante la utilización de sistemas catalíticos apropiados con un complejo de metal de transición (de, p. ej., Ru o Ir) en combinación con un ligando quiral (p. ej., ([(1S,2S)-2-amino-1,2-difeniletil](4-toluenosulfonil)amido) y una fuente de hidrógeno, tal como el complejo de ácido fórmico y trietilamina, proporcionando los compuestos finales (Ia). Alternativamente, los compuestos finales (Ia) se pueden preparar mediante alquilación del intermedio (H) con un derivado de etanol apropiado (K) que lleva un grupo saliente "GS" (p. ej., Cl o Br) alfa respecto al grupo hidroxilo, en presencia de una base, tal como DIPEA y posterior aislamiento del regioisómero deseado.

Los intermedios (C) y (D) de los Esquemas 1 y 2 pueden prepararse tal como se muestra en el Esquema 3.

Esquema 3

En el Esquema 3, los intermedios (C) y (D) se pueden sintetizar partiendo de 5-aminopirimidina-4,6-diol. La amidación de 5-aminopirimidina-4,6-diol con un ácido carboxílico activado con un grupo saliente (GS) en la posición alfa (p. ej., cloro-acetilcloruro) produce (L), que puede reaccionarse a intermedio (D) en presencia de una base (p. ej., DIPEA). Alternativamente, el intermedio (D) puede sintetizarse a partir de 5-aminopirimidina-4,6-diol mediante reacción con un ácido carboxílico o con un derivado de ácido carboxílico que lleve un grupo saliente (GS) en posición alfa bajo condi ciones sin solvente. La N-alquilación de la pirimidona (D) con un grupo protector, tal como el parametoxibencilo, se puede llevar a cabo mediante tratamiento de (D) con un reactivo apropiado que lleve un grupo saliente (p. ej., cloruro de parametoxibencilo, PMB-Cl) en presencia de una base (p. ej., K<2>CO<3>). Lo anterior permite la metilación posterior (p. ej., con MeI) de (M) en presencia de una base (p. ej., K<2>CO<3>), proporcionando (N). Finalmente, la escisión del grupo protector de (N) bajo condiciones adecuadas (p. ej., para PMB: ácido trifluoroacético, 100 °C), proporciona el intermedio (C).

Los compuestos de la fórmula (I) con E=CH<2>, denotados por (Ib), pueden prepararse tal como se muestra en el Es quema 4, a continuación.

Esque

En el Esquema 4, el acoplamiento de amida del hidrocloruro de éster etílico de sarcosina y el cloruro de succinilo etílico en presencia de una base proporciona el intermedio (XVI), que puede hacerse reaccionar adicionalmente a intermedio (XVII) en una condensación de Claisen en presencia de una base (p. ej., NaOEt). La posterior condensación con una sal de formamidinio (p. ej., acetato de formamidinio) rinde el intermedio (XVIII), que puede ser alquilado con alcohol (B) en presencia de una base (p. ej., K<2>CO<3>), proporcionando (Ib).

Los compuestos de fórmula (I) con E=S, SO y SO<2>, ejemplificados por (Ic), pueden prepararse tal como se muestra en el Esquema 5, a continuación.

Esquema 5:

En el Esquema 5, el intermedio (XIX) se puede sintetizar mediante la metilación de 4-cloro-5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-6-ona con un agente de metilación (p. ej., MeI) en presencia de una base (p. ej., NaH). La posterior hidró lisis de (XIX) en presencia de un ácido (por ejemplo, ácido fórmico) produce el intermedio (XX) que puede ser N-alquilado con alcohol (B) en presencia de una base (por ejemplo, K<2>CO<3>) para obtener (Ic).

EJEMPLOS

Preparación

Los compuestos según la invención y sus intermedios pueden obtenerse utilizando métodos de síntesis que son co nocidos por el experto en la materia y descritos en la literatura de síntesis orgánica, por ejemplo, utilizando métodos descritos en "Comprehensive Organic Transformations", 2a edición, Richard C. Larock, John Wiley & Sons, 2010, y "March's Advanced Organic Chemistry",<7>a edición, Michael B. Smith, John Wiley & Sons, 2013. Preferentemente, los compuestos se obtienen de manera análoga a los métodos de preparación explicados más detalladamente a conti nuación, en particular tal como se describe en la sección experimental. En algunos casos, puede modificarse la se cuencia adoptada para llevar a cabo los esquemas de reacción. También se pueden utilizar variantes de estas reac ciones que son conocidas por el experto en la materia, pero que no se describen detalladamente en la presente me moria. Los procedimientos generales para preparar los compuestos según la invención resultarán evidentes para el experto en la materia tras estudiar los esquemas que siguen. Los compuestos de partida están comercialmente dis ponibles o pueden prepararse mediante métodos que se describen en la literatura o en la presente memoria, o pueden prepararse de manera análoga o similar. Antes de llevar a cabo la reacción, cualquier grupo funcional correspondiente en los compuestos de partida puede protegerse utilizando grupos protectores convencionales. Estos grupos protec tores pueden cortarse de nuevo en una etapa adecuada dentro de la secuencia de reacciones utilizando métodos que resultarán familiares al experto y que están descritos en la literatura, por ejemplo, en "Protecting Groups",<3>a edición, Philip J. Kocienski, Thieme, 2005, y en "Protective Groups in Organic Synthesis",<4>a edición, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, 2006. Las expresiones "temperatura ambiente" y "temperatura de laboratorio" se utilizan indistintamente y designan una temperatura de aproximadamente 20 °C, p. ej., de entre 19 °C y 24 °C.

Abreviaturas:

ACN acetonitrilo

Aq. acuoso

°C grado centígrado

CyH/CH ciclohexano

conc. concentrado

DCM diclorometano

DIPEA W,W-diisopropiletilamina

DMA W,W-dimetilacetamida

DMF W,W-dimetilformamida

DMSO dimetilsulfóxido

ESI-MS espectrometría de masas por ionización por electropulverización

EtOAc acetato de etilo

EtOH etanol

ej. ejemplo

eq. equivalente

AF ácido fórmico

h hora

HCl ácido clorhídrico

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

K2CO3 carbonato potásico

L litro

LiOH*H<2>O monohidrato de hidróxido de litio

M molar

MeOH metanol

MgSO4 sulfato de magnesio

min minuto

ml mililitro

MTBE éter terc-butilmetílico

NH3amoníaco

PMB para-metoxibencilo

Prep. preparativo

RP fase inversa

TA temperatura ambiente (aproximadamente 20 °C)

sat. saturado

TBTU tetrafluoroborato de benzotriazolil-tetrametiluronio

TEA trietilamina

TFA ácido trifluoroacético

TFAA: anhídrido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

Preparación de compuestos intermedios

Intermedio I

Intermedio I.1 (procedimiento general)

2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-1-ona

A 1,00 g (8,44 mmoles) de 5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol y 2,17 g (9,28 mimóles) de bromuro de 4-clorofenacilo en 15 ml de DMA se añadieron 1,63 g (11,8 mmoles) de K<2>CO<3>bajo agitación a TA. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 30 min y posteriormente se filtró. El filtrado se diluye con agua y solución acuosa saturada de NaCl y se extrae con EtOAc tres veces. Las fases orgánicas agrupadas se lavaron con agua, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron sobre carbón activado y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; cH/EtOAc, gradiente de 80/20 a 50/50), proporcionando el producto.

C<10>HsCl<2>N<4>O (M=271,1 g/mol)

ESI-MS: 271 [M+H]+

Rt (HPLC): 1,01 min (método B)

Los siguientes compuestos se prepararon utilizando procedimientos análogos a los descritos para el intermedio I.1, utilizando materiales de partida adecuados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

(continuación)

*el p-bromuro de metoxifenacilo (1,04 eq.) se añadió lentamente a una solución bajo agitación de clorometiltetrazol y K<2>CO<3>(1,4 eq) en DMA a 18 °C; la mezcla se sometió a agitación a TA durante 1,5 h; la purificación se llevó a cabo mediante HPLC de fase inversa (gradiente de ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %).

Compuestos intermedios II

Intermedio II.1 (procedimiento general)

(1R)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-

Se disolvieron 1,30 g (4,80 mimóles) de 1-(4-clorofenil)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]etán-1-ona (I.1) en 20 ml de ACN bajo atmósfera inerte. Se añadieron 12 mg (0,02 mmol) de cloro([(1S,2S)-2-amino-1,2-difeniletil](4-toluensulfonil)amido)(mesitileno)rutenio (II) (CAS n.° 174813-81-1), seguido de la adición gota a gota de 0,72 ml (1,73 mmoles) de complejo de ácido fórmico y trietilamina (5:2). Después de agitar a TA durante 3 h, se eliminó el solvente bajo presión reducida. A la mezcla en bruto restante se le añadió agua y esta mezcla se extrajo con EtOAc. Se agruparon las capas orgánicas, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron, se trataron con carbón activado, se filtraron y se eliminó el solvente bajo presión reducida, proporcionando el intermedio II.1.

C<10>H<1>üCl<2>N<4>O (M=273,1 g/mol)

ESI-MS: 273 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,96 min (método B)

Se prepararon los siguientes compuestos utilizando procedimientos análogos a los descritos para el intermedio I.1, utilizando materiales de partida adecuados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

(continuación)

Compuesto intermedio III

Intermedio III.1 (procedimiento general)

1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona

Se trataron 5,00 g (31,6 mmoles) de 4,5-difluoro-2-hidroxibenzaldehído en 50 ml de acetona con 6,99 g (50,6 mmoles) de carbonato de potasio bajo argón a 0 °C. Después de una agitación adicional durante 10 min a 0 °C, se añadieron gota a gota 3,78 ml (47,4 mimóles) de cloroacetona y la mezcla de reacción se sometió a agitación a 70 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a TA y se concentró. El producto en bruto se extrajo con EtOAc/agua y la fase orgánica se concentró bajo presión reducida, proporcionando el intermedio III.1.

C<10>H<6>F<2>O<2>(M=196,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm: 2,56 (s, 3H), 7,89 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,01 (m, 1H)

Se prepararon los siguientes compuestos utilizando procedimientos análogos a los descritos para el intermedio III.1, utilizando materiales de partida adecuados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

(continuación)

Compuesto intermedio IV

Intermedio IV.1 (procedimiento general)

2-bromo-1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona

Se trataron 500 mg (2,55 mmoles) de 1-(5,6-difluoro-1-benzofurán-2-il)etán-1-ona (III.1) en 6 ml de THF gota a gota con 1,23 g (2,55 mmoles) de tribromuro de tetrabutilamonio en 300 pl de MeOH y 3 ml de THF. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se extrajo con EtOAc/agua. La fase orgánica se concentró bajo presión reducida y el material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; hexanos/EtOAc, con un gradiente de 9/1 a 7/3).

CiüH<5>BrF<2>O<2>(M=275,0 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-da) 8 ppm: 4,83 (s, 2H), 7,98-8,12 (m, 3H)

Se prepararon los siguientes compuestos utilizando procedimientos análogos a los descritos para el intermedio IV.1, utilizando materiales de partida adecuados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

(continuación)

**: La reacción se lleva a cabo con bromo (13,6 eq.) a TA durante 2 h en dioxano/éter dietílico y se desactiva con solución de tiosulfato de sodio.

Compuesto intermedio V

3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

A 10,0 g (127,10 mmoles) de 5-aminopirimidín-4,6-diol en 300 ml de DMF se añadieron lentamente 7,5 ml (94,41 mmoles) de cloruro de cloroacetilo bajo agitación a 65 °C. Después de la agitación a 65 °C durante 1,5 h, se añadieron lentamente 36,1 ml (129,94 mmoles) de DIPEA a la mezcla de reacción y se continuó con la agitación a 65 °C durante 45 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se trató con agua, y el producto precipitado se filtró, se lavó con pequeñas cantidades de EtOH y se secó.

C<6>H<5>N<3>O<3>(M=167,1 g/mol)

ESI-MS: 168 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,20 min (método M)

Compuesto intermedio VI

3-[(4-metoxifenil)metil]-5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

Se trataron 680 mg (4,07 mimóles) de 3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona (intermedio V) en 15 ml de DMF con 843 mg (6,10 mmoles) de carbonato de potasio y se sometieron a agitación a temperatura ambiente durante 15 min. Se añadieron 0,58 ml (4,27 mmoles) de 1-(clorometil)-4-metoxibenceno y la mezcla de reacción se sometió a agitación durante 20 h. Se añadieron 843 mg (6,10 mmoles) de carbonato de potasio y 0,30 ml (4,88 mmoles) de yoduro de metilo y la mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 20 h. Se añadieron 0,26 ml (4,07 mmoles) de yoduro de metilo y la mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 20 h, se filtró, se concentró bajo presión reducida y se purificó mediante HPLC de fase inversa (gradiente ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %).

C<15>H<15>N<3>O<4>(M=301,3 g/mol)

ESI-MS: 302 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,95 min (método B)

Compuesto intermedio VII

5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

Se trataron 5,30 g (14,07 mmoles) de 3-[(4-metoxifenil)metil]-5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazm-4,6-diona (intermedio VI) con 16 ml de TFA y se sometieron a agitación a 100 °C durante 1,5 h. Posteriormente, la mezcla de reacción se sometió a agitación en el microondas a 120 °C durante 15 min, se vertió sobre agua con hielo y se filtró. El filtrado se liofiliza y se utilizó directamente sin purificación adicional.

C<7>H<7>N<3>O<3>(M=181,2 g/mol)

ESI-MS: 182 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,37 min (método B)

Compuesto intermedio VIII

7-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

Una mezcla de 200 mg (1,57 mmoles) de 5-aminopirimidín-4,6-diol y 1,44 g (9,44 mmoles) de ácido 2-bromopropiónico se sometió a agitación bajo condiciones de reacción sin solventes, a 100 °C durante 22,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM, se filtró y el filtrado concentrado se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; DCM/MeOH, gradiente de 1/0 a 7/3).

C7H7N3O3 (M=181,2 g/mol)

ESI-MS: 182 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,23 min (método E)

Compuesto intermedio IX

Intermedio IX.1 (procedimiento general)

3-({2-[(2R)-2-(4-clorofenil)-2-hidroxietil]-2H-1,2,3,4-tetrazol-5-il}metil)-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazm-4,6-diona

A 61 mg (0,37 mmol) de 3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona (V) en 3 ml de DMF se le añadieron 76 mg (0,55 mmoles) de carbonato de potasio y 100 mg (0,37 mmoles) de (1R)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-1-ol (II.1) y la mezcla se sometió a agitación a TA durante la noche. La mezcla de reacción se desactivó con agua/ACN/TFA, se filtró y se purificó mediante HPLC de fase inversa (gradiente de ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %), rindiendo el producto deseado.

C<1>aH<14>ClNyO<4>(M=403,8 g/mol)

ESI-MS: 404 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,77 min (método H)

Se prepararon los siguientes compuestos utilizando procedimientos análogos a los descritos para el intermedio IX.1, utilizando materiales de partida adecuados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

Compuesto intermedio X

2-bromo-2,2-difluoro-N-(4-hidroxi-6-oxo-1,6-dihidropirimidín-5-il)acetamida

Se trataron 200 mg (1,57 mmoles) de 5-aminopirimidín-4,6-diol con 456 mg (2,36 mmoles) de bromodifluoroacetilcloruro y se sometieron a agitación bajo condiciones de ausencia de solventes, a 90 °C durante 3,5 h. La mezcla de reacción se trituró con éter dietílico y se filtró, rindiendo el intermedio X.

C6H4BrF2N3O3 (M=284,0 g/mol)

ESI-MS: 284/286 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,10 min (método E)

Compuesto intermedio XI

7,7-difluoro-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

Se trataron 30 mg (0,11 mimóles) de 2-bromo-2,2-difluoro-N-(4-hidroxi-6-oxo-1,6-dihidropirimidín-5-il)acetamida (X) en 2,5 ml de DMF con 16 mg (0,37 mmoles) de hidruro de sodio y se sometieron a agitación durante 18 h a 50 °C. La mezcla de reacción se purificó mediante HPLC de fase inversa (gradiente ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %), rindiendo el pro ducto deseado.

C<6>H<3>F<2>N<3>O<3>(M=203,1 g/mol)

ESI-MS: 204 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,23 min (método A)

Compuesto intermedio XII

<6>-acetil-<1>-benzofurán-<2>-carboxilato de etilo

A 1,00 g (3,72 mmoles) de 6-bromo-1-benzofurano-2-carboxilato de etilo (III.4) en 12,5 ml de DMF se le añadieron 616 mg (4,46 mmoles) de carbonato de potasio. La mezcla se purgó con argón y se añadieron 92 mg (0,22 mmoles) de 1,3-bis(difenilfosfino)propano, 250 mg (0,11 mmoles) de acetato de paladio (II) y 670 mg (9,29 mmoles) de éter etilvinílico. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 80 °C durante 18 h, y después se enfrió a la TA y se ajustó el pH a pH=1 mediante la adición de HCl aq. 1 M. El producto en bruto se extrajo con EtOAc, se concentró bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía de columna (gel de sílice; hexano/EtOAc 7/3).

C<13>H<12>O<4>(M=232,2 g/mol)

ESI-MS: 233 [M+H]+

Rt (HPLC): 1,38 min (método Q)

Compuesto intermedio XIII

ácido<6>-acetil<-1>-benzofurán-<2>-carboxílico

A 6,60 g (28,4 mmoles) de 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxilato de etilo (XII) en<6 6>ml de THF y 33 ml de agua se le añadieron 3,3 ml de etanol y 1,43 g (34,1 mmoles) de monohidrato de LiOH. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 1 h y se concentró a sequedad bajo presión reducida, proporcionando el intermedio.

C<11>H<8>O<4>(M=204,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d<6>)<8>ppm: 2,67 (s, 3H), 7,73 (m, 1H), 7,99 -7 ,85 (m, 2H), 8,32 (m, 1H), 13,30- 14,50 (br s, 1H)

Compuesto intermedio XIV

<6>-acetil<-1>-benzofurán-<2>-carboxamida

(7,34 mimóles) de cloruro de oxalilo y 1 gota de DMF a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación durante 2 h a temperatura ambiente y se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en 10 ml de THF, se enfrió a 0 °C y se añadieron 15 ml de amoníaco acuoso al 25 %. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h y se concentró a sequedad bajo presión reducida, proporcionando el intermedio.

C<11>H<9>NO<3>(M=203,2 g/mol)

ESI-MS: 204 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,96 min (método Q)

Compuesto intermedio XV

<6>-acetil-<1>-benzofurán-<2>-carbonitrilo

A 0,90 g (4,43 mmoles) de 6-acetil-1-benzofurán-2-carboxamida (XIV) y 1,4 ml (9,88 mmoles) de TEA en 12 ml de THF se les añadieron 1,1 ml (7,77 mmoles) de TFA gota a gota bajo agitación a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 0 °C durante 1 h, se enfrió con agua y se extrajo con EtOAc tres veces. Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con sol. sat. de NaHCO<3>y salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida, proporcionando el intermedio.

C<11>H<7>NO<2>(M=185,2 g/mol)

RMN 1H (300 MHz, DMSO-da)<8>ppm: 2,68 (s, 3H), 7,92-8,05 (m, 2H), 8,21 (m, 1H), 8,37 (m, 1H).

Compuesto intermedio XVI

3-[(2-etoxi-2-oxoetil)(metil)carbamoíl]propanoato de etilo

A 1,50 g de hidrocloruro de éster etílico de sarcosina (9,77 mmoles, CAS n.° 52605-49-9) en 30 ml de DCM se le añadieron TEA (3,40 ml, 24,4 mmoles), seguido de cloruro succinilo etílico (1,53 ml, 10,74 mmoles, CAS n.° 14794 31-3) a 0 °C bajo agitación. La mezcla se calentó lentamente a TA, se sometió a agitación a TA durante 3 h y poste riormente se lavó con agua tres veces. La capa orgánica se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; CyH/EtOAc, en gradiente).

C<11>H<19>NO<5>(M=245,27 g/mol)

ESI-MS: 246 [M+H]+

Rt (HPLC): 1,05 min (método M)

Compuesto intermedio XVII

1-metil-3,6-dioxopiperidín-2-carboxilato de etilo

A 0,40 g (1,63 mimóles) de 3-[(2-etoxi-2-oxoetil)(metil)carbamoil]propanoato de etilo (XVI) en 4,0 ml de dioxano abso luto se añadieron lentamente 56 mg (2,45 mmoles) de sodio bajo agitación a TA, seguido de la adición lenta de 0,2 ml de EtOH abs. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 80 °C durante 12 h, y después se enfrió a la TA y se ajustó el pH a pH=7 mediante la adición de HCl aq. (4 N). La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc tres veces. Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron bajo pre sión reducida, proporcionando el intermedio.

C<9>H<13>NO<4>(M=199,20 g/mol)

ESI-MS: 200 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,75 min (método H)

Compuesto intermedio XVIII

1-metil-1,2,3,4,7,8-hexahidro-1,7-naftiridín-2,8-diona

A una mezcla bajo agitación de 0,13 g (0,52 mmoles) de 1-metil-3,6-dioxopiperidín-2-carboxilato de etilo (XVII) y 0,27 g de acetato de formamidina (2,61 mmoles) en 5,0 ml de MeOH abs. se le añadieron lentamente 0,60 ml de una solución de metilato de sodio en MeOH (al 25 % p/p) a 0 °C. Posteriormente, la mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 4 h, se enfrió a 0 °C, se neutralizó con ácido acético y se concentró bajo presión reducida. La purificación mediante HPLC de fase inversa (gradiente de ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %), rindió el producto deseado.

C<8>H<9>N<3>O<2>(M=179,18 g/mol)

ESI-MS: 180 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,08 min (método J)

Compuesto intermedio XIX

4-cloro-5-metil-5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-6-ona

A 0,50 g (2,48 mmoles) de 4-cloro-5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-6-ona (CAS n.° 20015-70-7) en 3,0 ml de DMF bajo argón se le añadieron 0,12 g (2,73 mmoles) de hidruro de sodio y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 20 min. Se añadió yoduro de metilo (0,17 ml, 2,73 mmoles) y la mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcio nando el intermedio.

Cy^ClNaOS (M=215,66 g/mol)

ESI-MS: 215 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,80 min (método B)

Compuesto intermedio XX

5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]tiazín-4,6-diona

Se sometieron a agitación 0,34 g (1,58 mimóles) de 4-cloro-5-metil-5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]tiazm-6-ona (XIX) en 4,0 ml de ácido fórmico a 90 °C durante 3 h y a TA toda la noche. La mezcla de reacción se concentró posteriormente a presión reducida y se llevó a reflujo en EtOH durante 30 min bajo agitación. Después de enfriarse lentamente hasta la TA, se filtró el producto, se lavó con EtOH y se secó a presión reducida.

C<7>H<7>N<3>O<2>S (M=197,22 g/mol)

ESI-MS: 198 [M+H]+

Rt(HPLC): 0,53 min (método B)

Preparación de compuestos finales

Ejemplo 1 (procedimiento general A)

3-({2-[(2R)-2-(4-clorofenil)-2-hidroxietil]-2H-1,2,3,4-tetrazol-5-il}metil)-5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

A 210 mg (0,77 mmoles) de (1R)-2-[5-(clorometil)-2H-1,2,3,4-tetrazol-2-il]-1-(4-clorofenil)etán-1-ol (II.1) en 7 ml de DMF se le añadieron 159 mg (1,15 mmoles) de K<2>CO<3>y 185 mg (0,77 mmoles) de 5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona (VII) y la mezcla se sometió a agitación a TA durante la noche. La mezcla se purificó mediante Hp l C de fase inversa (gradiente de ACN/H<2>O, TFA al 0,1 %), obteniendo el producto deseado.

C17H16ClN7O4 (M=417,8 g/mol)

ESI-MS: 418 [M+H]+

Rt (HPLC): 0,81 min (método H)

RMN 1H (400 MHz,DMSO-de)8 ppm: 3,33 (s, 3 H), 4,74 -4,84 (m, 4 H), 5,10 ■ 5,16 (m, 1 H), 5,45 (s, 2 H), 5,92 (d, J= 4,8 Hz, 1 H), 7,36 - 7,43 (m, 4 H), 8,46 (s, 1 H)

Los siguientes compuestos se prepararon utilizando procedimientos análogos a los descritos en el Ejemplo 1, proce dimiento general A, utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

(continuación)

D n líi r l m in i n l l n ri rm n :

(continuación)

Ejemplo 1 (procedimiento general B)

3-({2-[(2R)-2-(4-dorofenil)-2-hidroxietil]-2H-1,2,3,4-tetrazol-5-il}metil)-5-metil-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona

A 0,74 g (1,83 mmoles) de 3-({2-[(2R)-2-(4-clorofenil)-2-hidroxietil]-2H-1,2,3,4-tetrazol-5-il}metil)-3H,4H,5H,6H,7H-pirimido[4,5-b][1,4]oxazín-4,6-diona (IX.1) en 15 ml de DMF se le añadieron 0,43 g (3,12 mmoles) de carbonato de potasio y 0,17 ml (2,75 mmoles) de yoduro de metilo. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante la noche, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc dos veces. Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron a presión reducida, proporcionando el Ejemplo 1.

Los siguientes compuestos se prepararon utilizando procedimientos análogos a los descritos para el Ejemplo 1, pro cedimiento general B, utilizando materiales de partida apropiados. Tal como apreciará el experto en la materia, estos ejemplos análogos pueden implicar variaciones en las condiciones generales de reacción.

*La configuración absoluta de los estereocentros del Ejemplo 23 se asignó mediante rayos X. Datos analíticos para los compuestos indicados en la tabla, anteriormente:

Métodos analíticos de HPLC

Método A

Columna analítica: XBridge BEH C18_2,1 x 30 mm, 1,7 |jm; temperatura de columna: 60 °C Método B

Columna analítica: Stable Bond (Agilent) 1,8 pm; 3,0x30 mm; temperatura de la columna: 60 °C Método C

Columna analítica: Sunfire C18 (Waters) 2,5 pm; 3,0x30 mm; temperatura de la columna: 60 °C Método D

Columna analítica: XBridge C18_3,0 x 30 mm_2,5 pm (Waters); temperatura de la columna: 60 °C Método E

Columna analítica: XSelect HSS PFP (Waters) _2,1x30 mm_1,8 pm; temperatura de la columna: 60 °C Método F

Columna analítica: Sunfire (Waters) C18_3,0x30 mm_2,5 |jm; temperatura de la columna: 60 °C Método G

Columna analítica: Zorbax StableBond C18 (Agilent) 1,8 jm ; 2,1x30 mm; temperatura de la columna: 60 °C Método H

Columna analítica: Sunfire (Waters) 2,5 jm ; 3,0x30 mm; temperatura de la columna: 60 °C

Método

Columna analítica: Sunfire (Waters); C18_3,0x30 mm_2,5 jm ; temperatura de la columna: 60 °C Método J

Columna analítica: Xbridge (Waters); C18_3,0x30 mm_2,5 jm ; temperatura de la columna: 60 °C Método K

Columna analítica: Sunfire (Waters); C18_3,0x30 mm_2,5 |jm; temperatura de la columna: 60 °C

Método L

Columna analítica: Chiral Art Cellulose (YMC); SJ_4,6x250 mm_5 jm ; temperatura de la columna: 40 °C; retropresión: 2175,0 psi

Método M

Columna analítica: Zorbax StableBond (Agilent) C18_3,0x30 mm_1,8 jm ; temperatura de la columna: 60 °C Método N

Columna analítica: KinetexXB ; C18_4,6x50 mm_2,6 jm ; temperatura de la columna: 25 °C

Método O

(continuación)

Columna analítica: Acquity UPLC BEH ; C8_2,1x150 mm_1,7 |jm; temperatura de la columna: 55 °C

Método P

Columna analítica: Xbridge (Waters); C18_3,0x30 mm_2,5 jm ; temperatura de la columna: 60 °C

Método Q

Columna analítica: Acquity UPLC BEH ; C18_2,1x100 mm_1,7 jm ; temperatura de la columna: 40 °C

Claims

REIVINDICACIONES Compuesto según la fórmula (I):
en la que: A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno, dos o tres elementos del grupo R3 que consiste en halógeno, CN, alquilo C<1-4>, O-alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>, O-fluoroalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-4>, O-cicloalquilo C<3-4>, ciclofluoroalquilo C<3-4>y O-ciclofluoroalquilo C<3-4>, o A se selecciona del grupo que consiste en: y E se selecciona del grupo que consiste en O, S, SO, SO<2>y CH<2>; y R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>y halógeno, o R1 y R2 junto con el carbono al que están unidos forman un anillo ciclopropilo o ciclobutilo. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en el que A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tiofenilo, benzotiofenilo o benzofuranilo, no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3 que consiste en F, Cl, Br, CH<3>, CN y OCH<3>, o A es:
3. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que A se selecciona del grupo que consiste en:

no sustituido o sustituido con uno o dos elementos del grupo R3, o A es:
4. Compuesto de fórmula (I) según las reivindicaciones 1 a 3, en la que R3 se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br, CH<3>, CN y OCH<3>.
5. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que A se selecciona del grupo que consiste en: