ES3015124T3 - Modulators of liver receptor homologue 1 (lrh-1) - Google Patents

Modulators of liver receptor homologue 1 (lrh-1) Download PDF

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Suzanne Mays
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Autumn Flynn
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Abstract

Esta divulgación se refiere a moduladores del receptor hepático homólogo 1 (LRH-1) y a métodos para el manejo de enfermedades y afecciones relacionadas. En ciertas realizaciones, los moduladores son derivados del hexahidropentaleno. En ciertas realizaciones, esta divulgación se refiere a métodos para el tratamiento o la prevención del cáncer, la diabetes o las enfermedades cardiovasculares mediante la administración de una cantidad eficaz de un derivado del hexahidropentaleno descrito en este documento. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Moduladores del receptor hepático homólogo 1 (LRH-1)
Antecedentes
El receptor hepático homólogo 1 (LRH-1) es un receptor nuclear de hormonas (RN) y actúa como un factor de transcripción para controlar la expresión genética. Tradicionalmente, se ha determinado que LRH-1 está implicado en la homeostasis del colesterol y en el desarrollo fetal temprano. El uso de un agonista LRH-1 para tratar la diabetes se reporta en Lee et al. Nature, 2011, 474, 506-510, El fosfolípido dietético de cadena media, dilauroil-fosfatidilcolina (DLPC) fue identificado como un agonista de la LRH-1, Los ratones diabéticos alimentados con DLPC tienen una tolerancia a la glucosa mejorada y acumulación de grasa hepática reducida, así como cantidades reducidas de insulina, triglicéridos y ácidos grasos libres circulantes. Los efectos antidiabéticos se asociaron a cambios en la expresión de un subconjunto selecto de genes diana de LRH-1 implicados en el metabolismo lipídico. Es importante destacar que las diferencias en la salud y en la expresión génica por DLPC estuvieron ausentes en los ratones knockout condicional específicos de hígado LRH-1, implicando directamente a LRH-1 en estos efectos. Además del DLPC, el LRH-1 se une al fosfatidil-inositol 3,4,5-trisfosfato (PIP3), que es un importante lípido de señalización en la diabetes.
LRH-1 también se sobreexpresa de forma aberrante en ciertos cánceres. Se cree que promueve el crecimiento tumoral a través del receptor de estrógenos y la señalización de p-catenina. Véase Christina et al. Receptor hepático homólogo-1 (LRH-1): una posible diana terapéutica para el cáncer. Cancer Biol Ther, 2015, 16(7): 997-1004, Whitby et al. informan sobre pequeñas moléculas agonistas de LRH-1, J Med Chem 2006, 49(23):6652-5, Véase también Whitby et al., J Med Chem, 2011, 54, 2266-2281, que se relaciona con los agonistas de LRH-1 y SF-1; Busby et al.. Informes de sondas del programa de bibliotecas moleculares de los NIH, 2010, 1:1-55; Benod et al.. Antagonistas del receptor nuclear LRH-1, J Biol Chem, 2013, 288:19830-44, US2013/0210143, US2008/0227864, y US 2004/0038862,
Mays et al. informan de las estructuras cristalinas de LRH-1 unida a agonistas sintéticos. J Biol Chem, 2016, 291(49):25281-25291,
Lalit et al., J Mol Structure, 2013, 1049:. 315-325, relates to modelling studies in the discovery of LRH-1 agonists.
Las referencias citadas en el presente documento no constituyen una admisión de la técnica anterior.
Sumario
La presente invención se define en las reivindicaciones y se relaciona con los compuestos I de la siguiente fórmula estructural
o una sal de los mismos, y subgrupos de los mismos, en los que los sustituyentes son como se establece en las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se relaciona además con composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, así como estas composiciones para tratar o prevenir ciertas afecciones como se enumeran en las reivindicaciones.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1A muestra un esquema para la producción de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva.
La Figura 1B ilustra realizaciones adicionales de esta divulgación. GSK8470 arriba a la izquierda y arriba a la derecha, análogo de RJW100 que carece del grupo hidroxilo (denominado 18a).
La Figura 1C muestra un esquema para la producción de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva.
La Figura 1D muestra un esquema para la producción de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva.
La Figura 2A ilustra realizaciones adicionales de esta divulgación.
La Figura 2B ilustra realizaciones adicionales de esta divulgación.
La Figura 3A ilustra la estructura general, con las a-hélices mostradas en claro y las p-hojas en pizarra. El péptido Tif2 se une al SAF. El ligando se une en un único sitio del bolsillo de unión. Línea discontinua, región de desorden en la espina dorsal de la proteína que no pudo modelarse.
La Figura 3B muestra un mapa de omisión (FO - FC, contorneado a 2,5 o) que muestra que un único enantiómero de RJW 100 está ligado en la estructura.
La Figura 3C muestra la superposición de RR-RJW100 con las coordenadas del ligando de DLPC (púrpura, PDB 4DOS), lo que indica un modo de unión diferente de RR-RJW100 en comparación con los ligandos PL.
La Figura 3D, superposición de RR-RJW100 con las coordenadas del ligando de PIP3 (PDB 4RWV) que indica un modo de unión diferente de RR-RJW100 en comparación con los ligandos PL.
La Figura 3E muestra que DLPC amplía la anchura en la boca de la cavidad en ~3 A en comparación con RR-RJW100, La anchura fue medida desde Thr-341 a Asn-419 (a-carbonos).
La Figura 4A muestra la superposición de coordenadas para GSK8470 (de PBD 3PLZ) y RR-RJW100,
La Figura 4B muestra que se predijo que el grupo hidroxilo RR-RJW100 interactuaría con los residuos His-390 y Arg-393, pero está a más de 6 A de estos residuos en la estructura.
La Figura 5A muestra un primer plano de las vistas de los bolsillos de unión de las estructuras de LRH-1 unido a RR-RJW100 que representan cadenas laterales de residuos de aminoácidos que interactúan con cada ligando. Se muestran los residuos que también interactúan con GSK8470, mientras que las interacciones únicas realizadas por RR-RJW100 se muestran en gris. Se muestran porciones de los mapas de densidad electrónica para resaltar las interacciones con Thr-352 a través del agua (FO - FC, contorneadas a 1o).
La Figura 5B muestra un primer plano de las cavidades de unión de las estructuras de LRH-1 unida a SR-RJW100, La Figura 6A muestra datos que indican que la introducción de la mutación T352V en LRH-1 anula los efectos estabilizadores de RR-RJW00 y endo-RjW100, La LBD de LRH-1 purificada, unida inicialmente a DLPC para homogeneidad, se incubó con DMSO (control) o agonista sintético disuelto en DMSO.
La Figura 6B muestra los datos de los ensayos reporteros de luciferasa que miden la actividad de LRH-1, mediante el uso del reportero SHP-luc. Los valores se han normalizado con respecto a la señal de luciferasa Renilla constitutiva y se presentan como cambio de pliegues frente a LRH-1 de tipo salvaje DMSO. La mutación A349F introduce una cadena lateral aromática voluminosa, que bloquea el bolsillo de unión e impide la unión de ligandos sintéticos.
La Figura 6C muestra datos de ensayos de reportero de luciferasa que miden la actividad de LRH-1, mediante el uso del reportero SHP-luc.
La Figura 6D muestra datos de ensayos de reportero de luciferasa que miden la actividad de LRH-1, mediante el uso del reportero SHP-luc.
La Figura 7 muestra un esquema para la producción de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva.
La Figura 8 muestra esquemas para la producción de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva.
Discusión detallada
A menos que se definan de otro modo, todos los términos y expresiones técnicos y científicos usados en la presente memoria descriptiva tienen el mismo significado que entiende habitualmente un experto en la técnica a la que pertenece la divulgación. Aunque en la práctica o prueba de la presente divulgación, también se puede usar cualquier procedimiento y material similar o equivalente a los descritos en la presente memoria, ahora se describen los procedimientos y materiales preferentes.
La cita de cualquier publicación es para su divulgación antes de la fecha de presentación y no debe interpretarse como una admisión de que la presente divulgación no tiene derecho a ser anterior a dicha publicación en virtud de una divulgación previa. Además, las fechas de publicación proporcionadas podrían ser diferentes de las fechas reales de publicación, que deben ser confirmadas de forma independiente.
Cualquier procedimiento recitado puede llevarse a cabo en el orden de los eventos recitados o en cualquier otro orden que sea lógicamente posible.
Las realizaciones de la presente divulgación emplearán, a menos que se indique lo contrario, técnicas de medicina, química orgánica, bioquímica, biología molecular, farmacología y similares, que están dentro de la habilidad de la técnica. Estas técnicas se explican ampliamente en la literatura.
Cabe señalar que, tal como se usa en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "uno, una" y "el/la" incluyen referencias plurales salvo que el contexto indique claramente lo contrario. En esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones que siguen, se hará referencia a una serie de términos que se definirán con el siguiente significado, a menos que sea evidente una intención contraria.
Algunos de los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva pueden contener uno o más centros asimétricos y pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta en cada átomo asimétrico, como (R)- o (S)-. Las presentes entidades químicas, composiciones farmacéuticas y procedimientos deben incluir todos tales isómeros posibles, incluyendo mezclas racémicas, formas tautómeras, formas hidratadas, formas ópticamente sustanciablemente puras y mezclas intermedias.
Un "grupo de enlace" se relaciona con cualquier variedad de arreglos moleculares que puede ser usada para puentear residuos moleculares juntos. Una fórmula ejemplar puede ser -Rm- en la que R es seleccionada individual e independientemente en cada ocurrencia como: -CRmRm-, -CHRm-, -CH-, -C-, -CH<2>-, -C(OH)Rm, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)Rm-, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -C(Na)Rm-, -C(CN)Rm-, -C(CN)(CN)-, -C(CN)H-, -C(Na)(Na)-, -C(N3)H-, -O-, -S-, -N-, -NH-, -RNm-, -(C=O)-, -(C=NH)-, -(C=S)-, -(C=CH<2>)-, que puede contener enlaces simples, dobles o triples individual e independientemente entre los grupos R. Si un R está ramificado con un Rm puede estar terminado con un grupo tal como -CH<3>, -H, -CH=CH<2>, -CCH, -OH, -SH, -NH<2>, -N<3>, -CN, o -Hal, o dos R ramificados pueden formar una estructura cíclica. Se contempla que en ciertos casos, el total de Rs o "m" puede ser inferior a 100, 50, 25, 10, 5, 4 o 3, Ejemplos de grupos enlazantes en incluyen grupos alquilo puente, grupos alcoxialquilo y polietilenglicol. El término "Hal" se relaciona con un halógeno.
Como se utiliza en la presente memoria, "alquilo" significa un hidrocarburo no cíclico de cadena lineal o ramificada, insaturado o saturado, tales como los que contienen de 1 a 22 átomos de carbono, mientras que el término "alquilo inferior" o "alquilo C1-4" tiene el mismo significado que alquilo pero contiene de 1 a 4 átomos de carbono. El término "alquilo superior" tiene el mismo significado que alquilo pero contiene de 7 a 22 átomos de carbono. Los alquilos saturados de cadena lineal representativos incluyen el metilo, el etilo, el n-propilo, el n-butilo, el n-pentilo, el n-hexilo, el n-septilo, el n-octilo, el n-nonilo y similares; mientras que los alquilos ramificados saturados incluyen el isopropilo, el sec-butilo, el isobutilo, el terc-butilo, el isopentilo y similares. Los alquilos insaturados contienen al menos un enlace doble o triple entre átomos de carbono adyacentes (denominados "alquenilo" o "alquinilo", respectivamente). Los alquenilos representativos de cadena lineal y ramificados incluyen el etilenilo, el propilenilo, el 1 -butenilo, el 2-butenilo, el isobutilenilo, el 1-pentenilo, el 2-pentenilo, el 3-metil-1-butenilo, el 2-metil-2-butenilo, y similares; mientras que los alquilinos representativos de cadena lineal y ramificada incluyen acetilenilo, propinilo, 1-butil, 2-butil, 1 -pentilo, 2-pentilo, 3-metil-1-butil, y similares.
Los alquilos mono o policíclicos no aromáticos se denominan en la presente memoria "carbociclos" o grupos "carbociclilos". Los carbociclos saturados representativos incluyen el ciclopropilo, el ciclobutilo, el ciclopentilo, el ciclohexilo y similares; mientras que los carbociclos insaturados incluyen el ciclopentenilo y el ciclohexenilo y similares.
Los grupos "heterocarbociclos" o heterocarbociclilo" son carbociclos que contienen de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, que pueden ser saturados o insaturados (pero no aromáticos), monocíclicos o policíclicos, y en la que los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados, y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. Los heterocarbociclos incluyen el morfolinilo, el pirrolidinonilo, el pirrolidinilo, el piperidinilo, el hidantoinilo, el valerolactamilo, el oxiranilo, el oxetanilo, el tetrahidrofurano, el tetrahidropiranilo tetrahidropiridinilo, tetrahidroprimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y similares.
Por "arilo" se entiende un anillo aromático carbocíclico monocíclico o policíclico tal como el fenilo o el naftilo. Los sistemas de anillos policíclicos pueden contener uno o más anillos no aromáticos, aunque no es obligatorio, siempre que uno de los anillos sea aromático. "Arilalquilo" significa un alquilo sustituido con un arilo, por ejemplo, bencilo, metilo sustituido con fenilo.
Como se utiliza en la presente memoria, "heteroarilo" se relaciona con un heterociclo aromático que tiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y que contiene al menos 1 átomo de carbono, incluyendo sistemas de anillos mono y policíclicos. Los sistemas de anillos policíclicos pueden contener uno o más anillos no aromáticos, aunque no es obligatorio, siempre que uno de los anillos sea aromático. Los heteroarilos representativos son furilo, benzofuranoilo, tiofenilo, benzotiofenilo, pirrolilo, indolilo, isoindolilo, azaindolilo, piridilo, quinolinilo, isoquinolinilo, oxazolilo, isooxazolilo benzoxazolilo, pirazolilo, imidazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, cinolinilo, ftalazinilo y quinazolinilo. Se contempla que el uso del término "heteroarilo" incluye derivados N-alquilados como un sustituyente 1-metilimidazol-5-ilo.
Como se utiliza en la presente memoria, "heterociclo" o "heterociclilo" se relaciona con sistemas de anillos monocíclicos y policíclicos que tienen de 1 a 4 heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y que contienen al menos 1 átomo de carbono. Los sistemas de anillos monocíclicos y policíclicos pueden ser aromáticos, no aromáticos o mezclas de anillos aromáticos y no aromáticos. Los heterociclos incluyen heterocarbociclos, heteroarilos y similares.
"Alquiltio" se relaciona con un grupo alquilo como el definido anteriormente unido a través de un puente de azufre. Un ejemplo de alquiltio es el metiltio, (es decir, -S-CH<3>).
"Alcoxi" se relaciona con un grupo alquilo como el definido anteriormente unido a través de un puente de oxígeno. Los ejemplos de alcoxi incluyen, entre otros, metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, s-butoxi, t-butoxi, n-pentoxi y spentoxi. Los grupos alcoxi preferentes son metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, s-butoxi, y t-butoxi.
"Alquilamino" se relaciona con un grupo alquilo como el definido anteriormente unido a través de un puente amino. Un ejemplo de alquilamino es el metilamino, (es decir, -NH-CH3).
"Alcanoilol" se relaciona con un alquilo como se define anteriormente unido a través de una novia de carbonilo (es decir, -(C=O)alquil).
"Alquilsulfonilo" se relaciona con un alquilo como el definido anteriormente unido a través de un puente de sulfonilo (es decir, - S(=O)<2>alquilo) tal como el mesilo y similares, "arilsulfonilo" se relaciona con un arilo unido a través de un puente de sulfonilo (es decir, - S(=O)<2>arilo), y "aminosulfonilo" se relaciona con un amino unido a través de un puente de sulfonilo (es decir, - S(=O)<2>NH<2>).
"Alquilsulfinilo" se relaciona con un alquilo como se define anteriormente unido a través de un puente de sulfinilo (es decir, - S(=O)alquilo).
"Aminoalquilo" se relaciona con un grupo amino unido a través de un puente de alquilo. Un ejemplo de un aminoalquilo es el aminoetilo, (es decir, NH<2>-CH<2>-).
"Hidroxialquilo" se relaciona con un grupo hidroxi unido a través de un puente alquilo. Un ejemplo de hidroxialquilo es el hidroxietilo, (es decir, HO-CH<2>CH<2>-).
El término "sustituido" se relaciona con una molécula en la que al menos un átomo de hidrógeno se sustituye por un sustituyente. Cuando están sustituidos, uno o más de los grupos son "sustituyentes". La molécula puede estar sustituida de forma múltiple. En el caso de un sustituto oxo ("=O"), se sustituyen dos átomos de hidrógeno. Ejemplos de sustituyentes dentro de este contexto pueden incluir halógeno, hidroxilo, alquilo, alcoxi, nitro, ciano, oxo, carbociclilo, carbocicloalquilo, heterocarbociclilo, heterocarbocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, -NRaRb, -NRaC(=O)Rb,-NRaC(=O)NRaNRb, -NRaC(=O)ORb, - NRaSO<2>Rb, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -C(=O)NRaRb, -OC(=O)NRaRb, -ORa, -SRa, -SORa, -S(=O)<2>Ra, -OS(=O)<2>Ra y -S(=O)<2>ORa. Ra y Rb en este contexto pueden ser iguales o diferentes e independientemente hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo, alcoxi, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, carbociclilo, carbocicloalquilo, heterocarbociclilo, heterocarbocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo.
El término "opcionalmente sustituido", como se utiliza en la presente memoria, significa que la sustitución es opcional y, por tanto, es posible que el átomo designado no esté sustituido.
Como se utiliza en la presente memoria, las "sales" se refieren a los derivados de los compuestos desvelados en la que el compuesto madre se modifica haciendo sales ácidas o básicas del mismo. Los ejemplos de sales incluyen, pero no se limitan a, sales minerales tales como sodio, potasio, o sales ácidas carboxílicas de zinc, u sales ácidas orgánicas de residuos básicos tales como aminas, alquilaminas o dialquilaminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. En realizaciones típicas, las sales son sales convencionales no tóxicas farmacéuticamente aceptables, incluyendo las sales de amonio cuaternario del compuesto madre formado, y ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales preferentes incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como el clorhídrico, el bromhídrico, el sulfúrico, el sulfámico, el fosfórico, el nítrico y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como el acético, el propiónico, el succínico, el glicólico, el esteárico, el láctico, el málico, el tartárico, el cítrico, el ascórbico, el pamóico, el maleico, el hidroximaleico fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etano disulfónico, oxálico, isetónico y similares.
"Individuo" se relaciona con cualquier animal, preferentemente un paciente humano, ganado, roedor, mono o mascota doméstica.
"Cáncer" se relaciona con cualquiera de las varias enfermedades celulares con neoplasias malignas caracterizadas por la proliferación de células. No se pretende que las células enfermas invadan realmente el tejido circundante y hagan metástasis en nuevas localizaciones corporales. El cáncer puede afectar a cualquier tejido del cuerpo y tener muchas formas diferentes en cada zona corporal. En el contexto de ciertas realizaciones, la "reducción del cáncer" puede identificarse por medio de una variedad de procedimientos de diagnóstico conocidos por los expertos en la materia, incluyendo, pero sin limitarse a, la observación de la reducción del tamaño o el número de masas tumorales o si se observa un aumento de la apoptosis de las células cancerosas, por ejemplo, si se observa un aumento de la apoptosis de las células cancerosas superior al 5 % para un compuesto de muestra en comparación con un control sin el compuesto. También puede identificarse por un cambio en un biomarcador o perfil de expresión génica relevante, como el PSA para el cáncer de próstata, el HER2 para el cáncer de mama u otros.
Un "agente quimioterapéutico", "quimioterapéutico", "agente anticanceroso" o similares, se refieren a moléculas que se reconocen para ayudar en el tratamiento de un cáncer. Ejemplos contemplados incluyen las siguientes moléculas o derivados tales como temozolomida, carmustina, bevacizumab, procarbazina, lomustina, vincristina, gefitinib, erlotinib, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, 5-fluorouracilo, gemcitabina, tegafur, raltitrexed, metotrexato, arabinósido de citosina, hidroxiurea, adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina, vinblastina, vindesina, vinorelbina, paclitaxel, taxol, docetaxel, etopósido, tenipósido, amsacrina, topotecán, camptotecina, bortezomib, anagrelida, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, fulvestrant, bicalutamida, flutamida, nilutamida, ciproterona, goserelina, leuprorelina, buserelina, megestrol, anastrozol, letrozol, vorozol, exemestano, finasterida, marimastat, trastuzumab, cetuximab, dasatinib, imatinib, combretastatina, talidomida, azacitidina, azatioprina, capecitabina, clorambucilo, ciclofosfamida, citarabina, daunorrubicina, doxifluridina, epotelona, irinotecán, mecloretamina, mercaptopurina, mitoxantrona, pemetrexed, tioguanina, valrubicina y/o lenalidomida o combinaciones de los mismos como ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo (CMF); doxorrubicina, ciclofosfamida (AC); mustina, vincristina, procarbazina, prednisolona (MOPP); sdriamicina, bleomicina, vinblastina, dacarbazina (ABVD); ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, prednisolona (CHOP); bleomicina, etopósido, cisplatino (BEP); epirrubicina, cisplatino, 5-fluorouracilo (ECF); epirrubicina, cisplatino, capecitabina (ECX); metotrexato, vincristina, doxorrubicina, cisplatino (MVAC).
Como se usa en la presente memoria, los términos "prevenir" y "que previene" incluyen la prevención de la recurrencia, diseminación o aparición. No se pretende que la presente divulgación se limite a la prevención completa. En algunas realizaciones, la aparición se retrasa o se reduce la gravedad de la enfermedad.
Como se usan en la presente memoria, los términos "tratar" y "tratamiento" no se limitan al caso en el que el individuo (por ejemplo, el paciente) se cure y la enfermedad se erradique. Además, las realizaciones de la presente divulgación también contemplan el tratamiento que simplemente reduce los síntomas, y/o retrasa la progresión de la enfermedad.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "combinación con" cuando se utiliza para describir la administración con un tratamiento adicional significa que el agente puede administrarse antes, junto con o después del tratamiento adicional, o una combinación de los mismos.
Estructuras de cristal del receptor nuclear, receptor hepático homólogo 1, unidas a agonistas sintéticos revelan un mecanismo de activación
Los moduladores sintéticos de LRH-1 son muy buscados como herramientas farmacológicas y como agentes terapéuticos potenciales. Una exploración detallada de mecanismos estructurales que gobiernan la regulación de LRH-1 por medio de ligandos sintéticos fue realizada. Véase Mays et al., J Biol Chem, 2016, 291(49):25281-25291, Relacionado con los fosfolípidos bacterianos (FL) LRH-1 agonista, dilauroilfosfatidil clolina (DLPC), el agonista (RR-RJW100) contrae el bolsillo de unión y desestabiliza porciones de la superficie de activación de función (SAF) (Fig. 1B). La estabilización del SAF puede facilitar la unión del coactivador, lo que conduce a una mayor potencia o eficacia. Alternativamente, los análogos diseñados para potenciar la desestabilización del SAF pueden ser antagonistas o agonistas inversos eficaces. RJW100 fue un derivado eficaz, pero aumentó modestamente la activación de LRH-1,
Los experimentos de estructura cristalina revelan un modo de unión diferente para RR-RJW100 en comparación con GSK8470 (Fig. 1B). Aunque esto fue sorprendente, no es irracional, considerando que el LRH-1 tiene un bolsillo de unión muy hidrófobo y que estos agonistas son también bastante hidrófobos, rellenando solamente el 37% del espacio disponible (excluyendo aguas). Es posible que muchos de los análogos del GSK8470 investigados en el anterior estudio de relación estructura-actividad adopten una variedad de conformaciones diferentes. Es posible que muchos de los GSK8470 análogos investigados en el estudio de la relación de estructura-actividad previa adopten una variedad de conformaciones diferentes. Importantemente, sin embargo, el reposicionamiento de RR-RJW100 en nuestra estructura parece ser llevado a cabo por interacciones particulares, porque SR-RJW100 asume una posición muy similar (Fig. 1B). Esto ocurre a pesar de que el derivado SR muestra signos de movimiento en nuestra estructura cristalina, con un desorden significativo en la cola del ligando y factores B relativos más altos que RR-RJW100,
Un factor importante que impulsó el reposicionamiento de los isómeros RJW100 fue la interacción de enlace de hidrógeno realizada por el grupo hidroxilo. Aunque el contacto con el residuo Thr-352 es indirecto, está mediado por una molécula de agua. Se ha descrito la existencia de moléculas de agua conservadas, así como su participación en la unión de ligandos. Así, esta interacción podría servir como punto de anclaje para asegurar el compuesto en una orientación predecible, permitiendo la orientación de las partes deseadas del bolsillo de unión por medio de la adición estratégica de sustituyentes al andamiaje del ligando. Además, la sustitución del grupo hidroxilo de RJW100 por una fracción polar más grande podría permitir el contacto directo con Thr-352, lo que daría lugar a una interacción más fuerte.
El papel de la interacción Thr-352 en la activación de LRH-1 por RR-RJW100 se demostró a través de la marcada pérdida de activación por este compuesto cuando se mutó este residuo. Además, un análogo de RJW100 que carecía de un grupo hidroxilo era un activador deficiente. Inesperadamente, la mutación T352V también dio lugar a una pérdida de actividad para GSK8470, aunque este compuesto no interactúa con la molécula de agua coordinada con Thr-352, Sin embargo, demostramos que la mutación T352V debilita la interacción de GSK8470 con His-390, quizás a través de la desestabilización de la red de agua conservada. Esto podría ser responsable de la pérdida de actividad de GSK8470 cuando se muta Thr-352,
Los estudios indican que la interacción de los agonistas de molécula pequeña con LRH-1 es compleja. Estos agonistas no sólo afectan a la conformación del receptor de forma diferente a los ligandos PL, sino que también muestran una variabilidad inesperada en los modos de unión.
Derivados del hexahidropentaleno
En ciertas realizaciones, la presente divulgación se relaciona con compuestos que son derivados de hexahidropentaleno. Los compuestos tienen la siguiente fórmula:
o una sal del mismo, en la que:
R1 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R1 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R2 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R2 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R3 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R4 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R4 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R5 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R5 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R6 es un alquilo sustituido terminalmente con un hidroxi, un carboxi o un fosfato, en el que el hidroxi, el carboxi o el fosfato están opcionalmente sustituidos además con R10;
R7 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquilam ino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R7 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R1 y R7 juntos son un oxo o oxima, en el que la oxima es opcionalmente sustituida con uno o más, el mismo o diferente, R10;
R10 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil,, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R10está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R11; y
R11 es halógeno, nitro, ciano, hidroxi, trifluorometoxi, trifluorometilo, amino, formilo, carboxi, carbamoil, mercapto, sulfamoil, metilo, etilo, metoxi, etoxi, isopropoxi, tert-butoxi, hidoximetil, hidroxietil, tiometil, tioetil, aminometil, aminoetil, acetil, acetoxi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilcarbamoil, N-etilcarbamoil, N,N-dimetilcarbamoil, N,N-dietilcarbamoil, N-metil-N-etilcarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinilo, etilsulfinilo, mesilo, etilsulfonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, isopropoxicarbonil, tert-butoxicarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N,N-dimetilsulfamoil, N,N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, benozil, benzil, carbociclilo, arilo o heterociclilo.
En ciertas realizaciones, R2 y R3 son hidrógeno, R4 es 1 -fenilvinilo o 1-feniletilo, y R5 es fenilo.
En ciertas realizaciones, los compuestos tienen una de las siguientes fórmulas
en las que R6 es hidrógeno, alquilo o alcanoilo opcionalmente sustituido con R10,
En ciertas realizaciones, R1 es hidroxilo, alquilo, amino, aminoalquilo, carbamoilo, sulfato, sulfonato, aminosulfonilo, fosfato, fosfonato o heterociclilo, en el que R1 está opcionalmente sustituido con R10,
En determinadas realizaciones, R<1>es tiazolidinadiona o triazolo.
En ciertas realizaciones, los compuestos tienen una de la siguiente fórmula:
, y
en la que,
X es un grupo enlazador, -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, -SO<2>-, -NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-;
Y es -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, -SO<2>-, -NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-;
Z es -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, -SO<2>-, - NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-; y
R1 es hidrógeno, hidroxi, alquil, alcanoil, amino, aminoalquil, carbamoil, sulfato, sulfonato, aminosulfonil, fosfato, fosfonato, o heterociclilo.
En ciertas realizaciones, X, Y, Z, y R1 pueden ser:
a) X es O, y R1 es alcanoil;
b) X es -NH-, y R1 es alcanoilo;
c) X es O, y R1 es aminosulfonilo;
d) X es -NH-, y R1 es aminosulfonilo;
e) X es -(C=O)-, R1 es amino;
f) X es O, Y es -(C=O)-, R1 es amino;
g) X es O, Y es -(C=O)-, Z es -NH-, y R1 es sulfonato; y
h) X es O, Y es -(C=O)-, Z es -NH-, y R1 es aminosulfonilo.
En ciertas realizaciones, R7 es hidroxilo o alcoxi, en el que R7 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
En ciertas realizaciones, los compuestos tienen la siguiente fórmula:
o una sal del mismo, en la que,
R1 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R2 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R3 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R4 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquilam ino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R4 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R5 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquilam ino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R5 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10;
R6 es un alquilo sustituido terminalmente con un hidroxi, un carboxi o un fosfato, en el que el hidroxi, el carboxi o el fosfato están opcionalmente sustituidos además con R10;
R10 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil,, alquilamino, aminoalquil, (alquilam ino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R10está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R11; y
R11 es halógeno, nitro, ciano, hidroxi, trifluorometoxi, trifluorometilo, amino, formilo, carboxi, carbamoil, mercapto, sulfamoil, metilo, etilo, metoxi, etoxi, isopropoxi, tert-butoxi, hidoximetil, hidroxietil, tiometil, tioetil, aminometil, aminoetil, acetil, acetoxi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilcarbamoil, N-etilcarbamoil, N,N-dimetilcarbamoil, N,N-dietilcarbamoil, N-metil-N-etilcarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinilo, etilsulfinilo, mesilo, etilsulfonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, isopropoxicarbonil, tert-butoxicarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N,N-dimetilsulfamoil, N,N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, benozil, benzil, carbociclilo, arilo o heterociclilo.
R4 es 1-fenilvinilo o 1-feniletilo, y R5 es fenilo opcionalmente sustituido.
R6 es un alquilo sustituido terminalmente con un hidroxi, un carboxi o un fosfato, en el que el hidroxi, el carboxi o el fosfato están opcionalmente sustituidos además con R10,
Uso en procedimientos de tratamiento
En ciertas realizaciones, la presente divulgación se relaciona con un derivado de hexahidropentaleno como se establece en las reivindicaciones para su uso en un procedimiento de tratamiento o prevención de enfermedades o afecciones asociadas con LRH-1 tales como diabetes, cáncer o enfermedad cardiovascular en un individuo que lo necesite.
En ciertas realizaciones, la divulgación se relaciona con una composición farmacéutica que comprende compuestos desvelados en la presente memoria para su uso en un procedimiento de tratamiento o prevención de la diabetes en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer diabetes, diabetes mellitus insulinodependiente, diabetes mellitus no insulinodependiente o diabetes gestacional, o presenta síntomas o ha sido diagnosticado de diabetes.
En ciertas realizaciones, la presente divulgación se relaciona con compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva que son agonistas de LRH-1 para su uso en la prevención de la pérdida progresiva de células beta pancreáticas. También se relaciona con un agonista de LRH-1 para su uso en la preservación o restauración de las células beta pancreáticas. Además, se relaciona con un agonista LRH-1 para su uso en la prevención o tratamiento de la diabetes tipo I o diabetes mellitus insulinodependiente, el incremento de la supervivencia de las células beta pancreáticas, el incremento del rendimiento de las células beta pancreáticas, el incremento de la supervivencia de un injerto de células beta, la preservación in vitro de las células beta pancreáticas, el mantenimiento de la secreción de insulina y/o en un procedimiento de trasplante de células de islotes pancreáticos.
La diabetes mellitus (DM) suele denominarse simplemente diabetes. La diabetes es una enfermedad en la que el nivel de azúcar (glucosa) en sangre es elevado debido a que el organismo no produce suficiente insulina o a que las células no responden adecuadamente a la insulina producida.
En personas sanas, los niveles de glucosa en sangre se mantienen dentro de un estrecho margen, principalmente por acciones de la hormona insulina. Las células beta del páncreas liberan insulina a un ritmo adecuado en respuesta a las concentraciones de glucosa circulante, respuesta que está modulada por otros factores, como otros nutrientes circulantes, la inervación de los islotes y las hormonas incretinas. La insulina mantiene las concentraciones de glucosa limitando la tasa de liberación hepática de glucosa para que coincida con la tasa de eliminación de glucosa.
La insulina permite así a las células del cuerpo absorber la glucosa, para convertirla en energía. Si las células del organismo no absorben la glucosa, ésta se acumula en la sangre (hiperglucemia), lo que puede provocar diversas complicaciones médicas. En consecuencia, la diabetes se caracteriza por un aumento de la glucosa en sangre que provoca complicaciones secundarias como enfermedades cardiovasculares, insuficiencia renal, retinopatía y neuropatía si no se controla adecuadamente. Hay dos fisiopatologías principales relacionadas con el aumento de la glucemia. La primera es un ataque autoinmune contra las células beta pancreáticas productoras de insulina (diabetes de tipo 1 o diabetes insulinodependiente), mientras que la segunda está asociada a una función deficiente de las células beta y a una mayor resistencia periférica a la insulina (diabetes de tipo 2 o diabetes no insulinodependiente). Al igual que en la diabetes de tipo 1, en la diabetes de tipo 2 también se observa la muerte de las células beta. La diabetes de tipo 1 y a menudo la de tipo 2 requieren que la persona se inyecte insulina.
La DM tipo 1 se caracteriza típicamente por la pérdida de las células beta productoras de insulina de los islotes de Langerhans en el páncreas, lo que conduce a una deficiencia de insulina. Este tipo de diabetes puede clasificarse a su vez como inmunomediada o idiopática. La mayor parte de la diabetes de tipo 1 es de naturaleza inmunomediada, en la que la pérdida de células beta es un ataque autoinmune mediado por células T La sensibilidad y la capacidad de respuesta a la insulina suelen ser normales, sobre todo en las fases iniciales. La diabetes de tipo 1 puede afectar a niños o adultos, pero tradicionalmente se denominaba "diabetes juvenil" porque representa la mayoría de los casos de diabetes en niños.
La DM tipo 2 se caracteriza por disfunción de las células beta en combinación con resistencia a la insulina. Se cree que la respuesta defectuosa de los tejidos corporales a la insulina está relacionada con el receptor de insulina. De forma similar a la diabetes de tipo 1, una masa insuficiente de células beta también es un factor patogénico en muchos pacientes diabéticos de tipo 2, En la fase inicial de la diabetes de tipo 2, la hiperglucemia puede revertirse por medio de una serie de medidas y medicamentos que mejoran la secreción de insulina y reducen la producción de glucosa por el hígado. A medida que la enfermedad progresa, se produce una alteración de la secreción de insulina, y a veces puede ser necesaria la sustitución terapéutica de la insulina en determinados pacientes. En ciertas realizaciones, el tratamiento de la diabetes por medio de la administración de los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva se realiza en combinación con la administración de insulina.
La diabetes sin los tratamientos adecuados puede causar muchas complicaciones. Las complicaciones agudas incluyen hiperglucemia, cetoacidosis diabética o coma hiperosmolar no cetósico. Las complicaciones graves a largo plazo incluyen enfermedades cardiovasculares, insuficiencia renal crónica y daños en la retina.
En ciertas realizaciones, esta divulgación se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva para su uso en procedimientos de tratamiento o prevención de la enfermedad cardiovascular en un individuo que lo necesite.
En ciertas realizaciones, la enfermedad cardiovascular es arteriopatía coronaria (EAC), angina de pecho, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, cardiopatía hipertensiva, cardiopatía reumática, cardiomiopatía, arritmia cardiaca, cardiopatía congénita, cardiopatía valvular, carditis, aneurismas aórticos, arteriopatía periférica y trombosis venosa.
En ciertas realizaciones, esta divulgación se relaciona con un compuesto como el desvelado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de tratamiento del cáncer en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el cáncer es cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de colon o tumores gastrointestinales.
Benod et al. informan de que LRH-1 regula el crecimiento y la proliferación celular del cáncer de páncreas. Proc Natl Acad Sci USA, 2011, 108(41):16927-31, Pan et al. informan de que la programación dependiente de LRH-1 del procesamiento mitocondrial de glutamina impulsa el cáncer de hígado. Genes Dev, 2016, 30(11): 1255-1260, Holly et al. LRH-1 impulsa el crecimiento celular del cáncer de colon reprimiendo la expresión del gen CDKN1A de forma dependiente de p53, Nucleic Acids Res, 2016, 44(2): 582-594,
En ciertas realizaciones, el cáncer se selecciona entre cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de recto, cáncer de endometrio, cáncer de riñón, leucemia, cáncer de pulmón, melanoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de páncreas, cáncer de próstata y cáncer de tiroides.
Los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva pueden usarse solos en el tratamiento de cada una de las afecciones anteriores o pueden usarse para proporcionar efectos aditivos o potencialmente sinérgicos con ciertas quimioterapias, radiaciones, terapias biológicas o inmunoterapéuticas (incluyendo anticuerpos monoclonales) y vacunas existentes. Los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva pueden ser útiles para restaurar la eficacia de ciertas quimioterapias y radiaciones existentes y/o para aumentar la sensibilidad a ciertas quimioterapias y/o radiaciones existentes.
Coste et al. informan de que la síntesis de glucocorticoides mediada por LRH-1 en los enterocitos protege frente a la enfermedad inflamatoria intestinal. PNAS, 2007, 104 (32) 13098-l3l03, Véase también Fernández-Marcos et al.. Emerging actions of the nuclear receptor LRH-1 in the gut, Biochim Biophys Acta. 2011 Agosto ; 1812(8): 947 955, Mueller et al. El receptor nuclear LRH-1 regula críticamente la síntesis extra-adrenal de glucocorticoides en el intestino, Journal of Experimental Medicine Sep 2006, 203 (9) 2057-2062,
De este modo, en ciertas realizaciones, esta divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de inflamación de barriga, intestino o colon en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de, exhibir síntomas de, o ser diagnosticado con inflamación intestinal y del colon.
En otro aspecto, la divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales (EII) en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer enfermedades inflamatorias intestinales (EII), presenta síntomas de las mismas o ha sido diagnosticado de ellas.
En otro aspecto, la divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de la enfermedad de Crohn en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer la enfermedad de Crohn, presenta síntomas de la misma o se le ha diagnosticado.
En otro aspecto, la divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de colitis o colitis ulcerosa en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer colitis o colitis ulcerosa, presenta síntomas de colitis o se le ha diagnosticado colitis ulcerosa.
El sobrepeso y la obesidad son afecciones cada vez más frecuentes en el mundo. Los médicos miden el índice de masa corporal (IMC) para detectar la obesidad. La obesidad es una afección médica grave que puede causar complicaciones como síndrome metabólico, hipertensión arterial, aterosclerosis, cardiopatías, diabetes, colesterol sérico elevado, cánceres y trastornos del sueño. Así pues, es necesario reducir la obesidad.
Hígado graso, o esteatosis hepática, es un término que describe la acumulación de grasa en el hígado. El consumo excesivo de alcohol provoca la acumulación de grasa, daña el hígado y puede desarrollar cirrosis. La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) es una enfermedad del hígado graso asociada a trastornos relacionados con la obesidad, como la diabetes de tipo 2 y el síndrome metabólico, que se da en personas que beben poco o nada de alcohol. La esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) es un subtipo más avanzado y grave de la HGN<a>en el que la esteatosis se complica con lesiones e inflamación de las células hepáticas, con o sin fibrosis. La EHNA puede ser grave y derivar en cirrosis, en la que el hígado queda dañado y cicatrizado de forma permanente y ya no puede funcionar correctamente. La resistencia a la insulina, la alteración del almacenamiento y el metabolismo de los lípidos, la acumulación de colesterol en el hígado, el estrés oxidativo que provoca un aumento de la lesión hepática y la translocación bacteriana secundaria a la alteración de la microbiota intestinal se han señalado como cofactores importantes que contribuyen a la progresión de la EHNA. Debido a la creciente epidemia de obesidad y diabetes, se prevé que la EHNA se convierta en la causa más común de enfermedad hepática avanzada y la indicación más frecuente de trasplante de hígado.
Lee et al. informan de que la dilauroilfosfatidilcolina (DLPC) es un ligando agonista de LRH-1 in vitro. El tratamiento con DLPC induce enzimas biosintéticas de ácidos biliares en el hígado de ratón, aumenta los niveles de ácidos biliares y reduce los triglicéridos hepáticos y la glucosa sérica. El tratamiento con DLPC también disminuye la esteatosis hepática y mejora la homeostasis de la glucosa en dos modelos de ratón de resistencia a la insulina. Nature volume 474, pages 506-510 (2011). Sahini et al. informan de que se han identificado genes expresados diferencialmente (DEG) que están relacionados mecánicamente con la formación de gotas lipídicas (GL) en los hepatocitos. Se identificaron DEGs asociados a GL regulados frecuentemente en muestras de pacientes. El homólogo-1 del receptor hepático (NR5A2), fue comúnmente reprimido entre los pacientes examinados. Translational Research, 177: 41- 69 (2016).
En ciertas realizaciones, esta divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de esteatosis hepática o síndrome metabólico en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de, exhibir síntomas de, o ser diagnosticado con enfermedad de hígado graso no alcohólico (EHGNA). En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella. En determinadas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer una enfermedad hepática alcohólica (EHA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer esteatohepatitis alcohólica (EHA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella.
En ciertas realizaciones, un individuo está en riesgo de EHGNA debido a obesidad, resistencia a la insulina, un hígado agrandado, signos de cirrosis o niveles anormales de enzimas hepáticas, triglicéridos y/o colesterol. Los signos de resistencia a la insulina incluyen manchas oscuras en la piel de los nudillos, codos y rodillas. Los signos de cirrosis incluyen la ictericia, una afección que hace que la piel y el blanco de los ojos se vuelvan amarillos. Un signo de EHGNA o EHNA es un análisis de sangre que muestra un aumento de los niveles de las enzimas hepáticas alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST). Un hígado agrandado o una cantidad anormal de grasa en el hígado pueden identificarse por medio de ecografía, tomografía computarizada (TC), resonancia magnética o combinaciones de éstas. Puede utilizarse una biopsia hepática para detectar la inflamación y el daño hepáticos con el fin de diagnosticar la EHNA.
El síndrome metabólico se diagnostica típicamente en presencia de tres o más de los siguientes problemas médicos: gran tamaño de los residuos, por ejemplo, 40 pulgadas o más, triglicéridos altos por ejemplo, nivel de triglicéridos de 150 mg/dL o superior, niveles bajos de colesterol HDL inferiores a 50 mg/dL, presión arterial alta, por ejemplo, 130/85 mmHg o superior, y niveles altos de glucosa en sangre (o azúcar en sangre), un nivel de azúcar en sangre en ayunas de 100 mg/dL o superior.
En otro aspecto, la divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de control o reducción del nivel de colesterol sérico en un individuo que lo necesite. En ciertas realizaciones, el individuo tiene un nivel de colesterol sérico limítrofe alto, 200-239 mg/dL. En ciertas realizaciones, el individuo tiene un nivel elevado de colesterol sérico, >240 mg/dL. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de hipercolesterolemia, presenta síntomas o se le ha diagnosticado hipercolesterolemia.
En otro aspecto, la divulgación se relaciona con un compuesto como el reivindicado en la presente memoria descriptiva para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de esteatosis hepática en un individuo que lo necesite. En determinadas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer una enfermedad hepática alcohólica (EHA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer esteatohepatitis alcohólica (EHA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella. En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de, exhibir síntomas de, o ser diagnosticado con enfermedad de hígado graso no alcohólico (EHGNA). En ciertas realizaciones, el individuo está en riesgo de padecer esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), presenta síntomas de la misma o ha sido diagnosticado de ella. En ciertas realizaciones, un individuo está en riesgo de EHGNA debido a obesidad, resistencia a la insulina, un hígado agrandado, signos de cirrosis o niveles anormales de enzimas hepáticas, triglicéridos y/o colesterol. Los signos de resistencia a la insulina incluyen manchas oscuras en la piel de los nudillos, codos y rodillas. Los signos de cirrosis incluyen la ictericia, una afección que hace que la piel y el blanco de los ojos se vuelvan amarillos. Un signo de EHGNA o EHNA es un análisis de sangre que muestra un aumento de los niveles de las enzimas hepáticas alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST). Un hígado agrandado o una cantidad anormal de grasa en el hígado pueden identificarse por medio de ecografía, tomografía computarizada (TC), resonancia magnética o combinaciones de éstas. Puede utilizarse una biopsia hepática para detectar la inflamación y el daño hepáticos con el fin de diagnosticar la EHNA.
La cantidad terapéuticamente eficaz precisa de los compuestos de la presente divulgación dependerá de un número de factores. Existen variables inherentes a los compuestos que incluyen, pero sin limitarse a, las siguientes: peso molecular, absorción, biodisponibilidad, distribución en el organismo, penetración tisular, semivida, metabolismo, unión a proteínas y excreción. Estas variables determinan qué dosis de compuesto debe administrarse en un porcentaje y durante un tiempo suficientes para que tenga el efecto deseado sobre la afección que se está tratando (por ejemplo, una neoplasia). La duración de la exposición al fármaco sólo estará limitada por la semivida del compuesto y los efectos secundarios del tratamiento que requieran la interrupción de la dosis. La cantidad de compuesto administrado también dependerá de factores relacionados con los pacientes y la enfermedad, incluidos, pero sin limitarse a, los siguientes: la edad, el peso, la medicación concomitante y el estado médico del individuo tratado, la afección precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y la vía de administración. En última instancia, la dosis quedará a discreción del médico o veterinario que le atienda. Típicamente, el compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva se administrará para el tratamiento en el intervalo de 0,01 a 30 mg/kg de peso corporal del receptor (mamífero) por día o por dosis o por ciclo de tratamiento y más usualmente en el intervalo de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal por día o por dosis o por ciclo de tratamiento. Así, para un ser humano adulto tratado por una afección, la cantidad real por día o por dosis o por ciclo de tratamiento sería normalmente de 1 a 2000 mg y esta cantidad puede administrarse en una dosis única o múltiple por día o por dosis o por ciclo de tratamiento. Los regímenes de dosificación pueden variar significativamente y se determinarán y modificarán en función de la experiencia clínica con el compuesto. Puede emplearse todo el espectro de regímenes de dosificación, desde la dosificación continua (con dosis diarias) hasta la dosificación intermitente. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva puede determinarse como una proporción de la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto como base libre.
Composiciones farmacéuticas
Si bien es posible que, para su uso en terapia, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según se reivindica en la presente memoria descriptiva pueda administrarse como sustancia química bruta, típicamente se presenta como el ingrediente activo de una composición o formulación farmacéutica. En consecuencia, la divulgación proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva. La composición farmacéutica puede comprender además uno más portadores, diluyentes y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. El o los portadores, diluyentes y/o excipientes deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no ser perjudiciales para el receptor de los mismos. De acuerdo con otro aspecto de la divulgación se proporciona también un proceso para la preparación de una formulación farmacéutica que incluye la mezcla por adición de un compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Las formulaciones farmacéuticas pueden presentarse en forma de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada del ingrediente activo por unidad de dosis. Dicha unidad puede contener, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, preferentemente de 1 mg a 700 mg, más preferentemente de 5 mg a 100 mg de un compuesto desvelado en la presente memoria descriptiva (como base libre, solvato (incluyendo hidrato) o sal, en cualquier forma), dependiendo de la afección a tratar, la vía de administración y la edad, peso y estado del paciente. Las formulaciones de dosificación unitaria preferentes son las que contienen una dosis diaria, una dosis semanal, una dosis mensual, una subdosis o una fracción adecuada de las mismas, de un principio activo. Además, dichas formulaciones farmacéuticas pueden prepararse por cualquiera de los procedimientos bien conocidos en el arte farmacéutico.
Las formulaciones farmacéuticas pueden ser adaptadas para su administración por cualquier ruta apropiada, por ejemplo, por la oral (incluyendo cápsulas, tabletas, cápsulas rellenas de líquido, tabletas que se desintegran, tabletas de expulsión controlada, desfasada e inmediata, bandas orales, soluciones, jarabes, bucal y sublingual), rectal, nasal, inhalación, ruta tópica (incluyendo transdermal), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradermal). Tales formulaciones pueden prepararse por cualquier procedimiento conocido en la técnica de la farmacia, por ejemplo, mezclando el principio activo con el portador o portadores o el excipiente o excipientes o diluyente. Generalmente, el portador, excipiente o diluyente empleado en la formulación farmacéutica es "no tóxico", lo que significa que se considera seguro para el consumo en la cantidad suministrada en la composición farmacéutica, e "inerte", lo que significa que no reacciona apreciablemente con la actividad terapéutica del principio activo ni produce un efecto no deseado sobre ella.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración oral pueden ser presentadas como unidades discretas tales como cápsulas rellenas de líquido o sólidas; tabletas de expulsión controlada, desfasada e inmediata; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o cremas comestibles; emulsiones líquidas de aceite en agua, emulsiones líquidas de agua en aceite o bandas orales, tales como bandas impregnadas en gel.
Por ejemplo, para la administración oral en forma de tableta o cápsula, el componente activo de la droga puede combinarse con un portador farmacéuticamente aceptable, tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan triturando el compuesto hasta un tamaño fino adecuado y mezclándolo con un portador farmacéutico triturado de forma similar, tal como un carbohidrato comestible, por ejemplo, almidón o manitol. El agente saborizante, preservativo, dispersor y coloreador puede estar también presente.
Las cápsulas sólidas se fabrican preparando una mezcla en polvo, como se ha descrito anteriormente, y rellenando vainas de gelatina formadas. Antes de la operación de llenado, pueden añadirse a la mezcla de polvos agentes deslizantes y lubricantes, tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol sólido. También puede añadirse un agente desintegrador o solubilizante, tal como agar-agar, carbonato cálcico o carbonato sódico, para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la cápsula.
Además, cuando se desee o sea necesario, también pueden incorporarse a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen, sin limitación, almidón; gelatina; azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa; edulcorantes de maíz; gomas naturales y sintéticas tales como acacia, tragacanto o alginato sódico, carboximetilcelulosa; polietilenglicol; ceras y similares. Los lubricantes utilizados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana y similares. Las tabletas se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o granulando, añadiendo un lubricante y un desintegrante y prensando para formar comprimidos. Una mezcla de polvo es preparada mezclando el compuesto, triturado adecuadamente, con un diluyente o base como se describió anteriormente, y opcionalmente, con un aglutinante tal como carboximetilcellulosa, un alginato, gelatina, o polivinil pirrolidona, una solución retardante tal como parafina, un acelerador de resorción tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorción tal como bentonita, caolina o fosfato de dicalcio. La mezcla de polvo puede granularse mojando con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidón, mucílago de acadia o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos y forzando a través de una malla. Como alternativa a la granulación, se puede hacer pasar la mezcla de polvo por la máquina de tabletas y el resultado son tacos imperfectamente formados que se rompen en gránulos. Los gránulos pueden lubricarse para evitar que se peguen a las matrices de formación de tabletas por medio de la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. A continuación, la mezcla lubricada se comprime en pastillas. Los compuestos desvelados en la presente memoria descriptiva también pueden combinarse con un portador inerte de flujo libre y comprimirse en tabletas directamente sin pasar por las etapas de granulación o babeo. Puede proporcionarse una capa protectora transparente u opaca formada por una capa de sellado de goma laca, una capa de azúcar o material polimérico y una capa de pulido de cera. Se pueden añadir colorantes a estos revestimientos para distinguir las distintas dosis unitarias.
Los fluidos orales tales como soluciones, jarabes y elixires pueden prepararse en forma de unidades de dosificación de manera que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Las soluciones y jarabes pueden prepararse disolviendo el compuesto en una solución acuosa convenientemente aromatizada, mientras que los elixires se preparan mediante el uso de un portador alcohólico farmacéuticamente aceptable. Las suspensiones pueden formularse dispersando el compuesto en un portador farmacéuticamente aceptable. También pueden añadirse solubilizantes y emulsionantes, tales como alcoholes isostearílicos etoxilados y éteres polioxietílicos de sorbitol, conservantes, aditivos aromatizantes, tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales, y similares.
En su caso, las formulaciones de dosificación unitaria para administración oral pueden microencapsularse. La formulación también puede prepararse para prolongar o mantener la liberación, por ejemplo, revistiendo o incrustando el material particulado en polímeros, cera o similares.
Los compuestos de la divulgación también pueden administrarse en forma de sistemas de administración liposomal, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de fosfolípidos, tales como el colesterol, la estearilamina o las fosfatidilcolinas.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar, pastillas y colutorios.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal pueden presentarse como supositorios o como enemas.
Las formulaciones adecuadas para la administración nasal, en las que el portador es un sólido, pueden incluir un polvo grueso con un tamaño de partícula, por ejemplo, del orden de 20 a 500 micrones, que se administra de la forma en que se toma el tabaco, es decir, por inhalación rápida a través del conducto nasal desde un recipiente con el polvo acercado a la nariz. Las formulaciones adecuadas en las que el portador es un líquido, para su administración como aerosol nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación incluyen polvos o nieblas de partículas finas, que pueden generarse por medio de varios tipos de aerosoles presurizados de dosis medida, inhaladores de dosis medida, inhaladores de polvo seco, nebulizadores o insufladores.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal pueden presentarse en forma de pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o aerosoles.
Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas, que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea sustancialmente isotónica con la sangre del receptor previsto, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en envases de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales herméticamente cerrados, y pueden conservarse en condición deshidratada por congelación (liofilizada) que únicamente requiere la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyección inmediatamente antes de ser utilizadas. Pueden prepararse soluciones y suspensiones para inyección improvisadas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
Debe entenderse que además de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica teniendo en cuenta el tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, las adecuadas para administración oral pueden incluir agentes aromatizantes.
Ejemplos
Estructura de cristal de RJW100 unida a LRH-1
Para comprender cómo interactúa RJW100 con LRH-1 y afecta a la conformación del receptor, se determinó la estructura cristalina de rayos X de LBD de LRH-1 unida al agonista y a un fragmento del coactivador, Tif2, a una resolución de 1,85 A (Fig. 3A). Aunque el RJW100 utilizado para la cristalización era una mezcla racémica de dos exo estereoisómeros (Fig. 1B), la densidad electrónica en la estructura indica inequívocamente que se une un solo enantiómero (Fig. 3B). El isómero unido tiene estereoquímica R tanto en la posición 1 (sustituido por hidroxilo) como en la posición 3a (sustituido por estireno) (en adelante RR-RJW100, Fig. 1B). El ligando se une en un único sitio profundo del bolsillo de unión y queda totalmente engullido en él. Este modo de unión es notablemente diferente del de los ligandos PL, DLPC y PIP3, que se extienden más abajo en el bolsillo con los grupos de cabeza sobresaliendo en el disolvente (visto por superposición con PDBs 4DOS y 4RWV, respectivamente, Fig. 3C y D). Los ligandos PL también aumentan el volumen y la anchura del bolsillo en comparación con RJW100, Por ejemplo, la boca del bolsillo es ~3 A más ancha y casi un 40% más grande en volumen cuando se une DLPC frente a RJW100 (Fig. 3E). Este efecto parece deberse principalmente a un desplazamiento de H6, que se aleja de la boca del bolsillo en la estructura DLPC en ~3 A (Fig. 3E). La dirección y magnitud del desplazamiento de H6 son similares en otras estructuras de LRH-1-PL; la comparación de cuatro estructuras humanas de LRH-1-PL publicadas muestra un desplazamiento medio de H6 de 3,0 ± 0,2 A con respecto a LRH-1 en el estado apo o cuando se unen ligandos sintéticos. Aunque estas estructuras presentan diversos tipos de empaquetamiento cristalino, el movimiento de H6 parece estar relacionado con el hecho de que el ligando sea una molécula PL o pequeña y no con la forma cristalina o los contactos de empaquetamiento. Probablemente ocurre para evitar choques esteáricos con el grupo de cabeza PL. En particular, la región H6/p-hoja se ha identificado recientemente como un sitio a través del cual los ligandos PL se comunican alostéricamente con el SAF para modular la actividad LRH-1, El hecho de que los agonistas sintéticos no desplacen a H6 con respecto al apo-receptor sugiere que utilizan un mecanismo diferente para la activación del receptor.
Reposicionamiento de RJW100 en comparación con un agonista sintético estrechamente relacionado
Quizás la observación más sorprendente de la estructura proviene de la comparación de RJW100 con LRH-1 unido a GSK8470 (PBD 3PLZ). En general, la conformación de la proteína es muy similar; el mayor movimiento se produce en la parte inferior de H3, que se desplaza en la dirección de H6 (en 2 A en la estructura RR-RJW100 y en 4 A en la estructura GSK8470 con respecto a apo-LRH-1). Sin embargo, existe una diferencia sustancial en el posicionamiento de estos agonistas dentro del bolsillo de unión. Aunque el GSK8470 y el RR-RJW100 se unen en la misma vecindad, están girados casi 180° entre sí. Los anillos bicíclicos de los núcleos de cada molécula son perpendiculares entre sí, lo que hace que las colas apunten en direcciones opuestas (Fig. 4A). En particular, la razón para añadir un grupo hidroxilo en la posición 1 de este andamiaje era promover una interacción con un "parche polar", formado por los residuos Arg-393 e is-390 en un bolsillo que de otro modo sería hidrófobo. Esta interacción se predijo basándose en la posición del ligando en la estructura de LRH-1-GSK8470; sin embargo, la posición real de RR-RJW100 en el bolsillo sitúa al grupo hidroxilo a más de 6 A de estos residuos (Fig. 4B). Un modo de unión tan radicalmente diferente para moléculas estrechamente relacionadas era inesperado, y una propensión a rotar dentro del bolsillo puede contribuir a las dificultades para mejorar la actividad agonista por medio de la modificación del andamio GSK8470,
Descubrimiento de una interacción de LRH-1 mediada por el grupo hidroxilo de RJW100
Se examinaron las interacciones proteína-ligando realizadas por GSK8470 y los estereoisómeros de RJW100 para obtener información sobre los factores que influyen en el modo de unión al ligando. Una vista de cerca del bolsillo de unión a LRH-1 revela que RR-RJW100 hace varios contactos hidrofóbicos, muchos de los cuales también los hace GSK8470 (mostrados en, Fig. 5A). Además, RR-RJW100 establece varios contactos únicos (mostrados en la Fig. 5A). Muchos de estos contactos únicos también son hidrofóbicos; sin embargo, el grupo hidroxilo RR-RJW100 forma un contacto polar indirecto con el residuo Thr-352 a través de una molécula de agua. En la Fig. 5A se muestra una porción del mapa de densidad electrónica para enfatizar la fuerte evidencia de esta interacción. SR-RJW100 también interactúa con Thr-352 a través de la misma molécula de agua, a pesar de las diferentes conformaciones del grupo hidroxilo (Fig. 5B). La posición del grupo hidroxilo de SR-RJW100 también permite una segunda interacción de enlace de hidrógeno mediada por agua con el nitrógeno del esqueleto del residuo Val-406 (Fig. 5B).
Aunque la interacción con Thr-352 es indirecta, la molécula de agua implicada forma parte de una red de aguas que se encuentra en todas las estructuras cristalinas de LRH-1 en el mismo lugar. Los factores B de los átomos de ligación ofrecen un apoyo adicional para modelar el agua en estos lugares de la bolsa. Así pues, esta red de agua parece ser una característica conservada del bolsillo de unión y puede desempeñar un papel en la función o estabilidad del receptor. Para probar la hipótesis de que la interacción OH-agua-Thr-352 influía en el posicionamiento del ligando, se analizó la estabilidad de este enlace por medio de simulaciones de dinámica molecular (SDM). A lo largo de cada simulación (200 ns), las cuatro moléculas de agua conservadas en red permanecieron en las mismas posiciones (si una determinada molécula de agua salía ocasionalmente, se sustituía inmediatamente por otra en el mismo lugar). El residuo Thr-352 mantuvo un enlace de hidrógeno con la molécula de agua durante el 100% de cada simulación, independientemente del ligando unido. Además, tanto RR-RJW100 como SR-RJW100 mantuvieron el enlace de hidrógeno con la molécula de agua durante la mayor parte de las simulaciones (53,7% del tiempo para RR-RJW100 y 64,4% del tiempo para SR-RJW100). Cuando se mutó el residuo Thr-352 a valina en la SDM, el tiempo de interacción con la molécula de agua coordinada con Thr-352 se redujo drásticamente (22,9 y 0,5% cuando se unieron RR-RJW100 y SR-RJW100, respectivamente), lo que demuestra que esta mutación probablemente interrumpe esta interacción mediada por agua realizada por estos ligandos.
Diferencias en el Apilamiento n -n con el Residuo His-390 entre los Agonistas LRH-1
El apilamiento n -n de GSK8470 con el residuo His-390 se ha descrito como importante para la activación de LRH-1 por compuestos sintéticos. Los diastereómeros de RJW100 también participan en el apilamiento n -n con His-390, pero con algunas diferencias clave. El apilamiento n -n es cara a cara para GSK8470 y borde a cara para los isómeros RJW100, Además, en virtud de las orientaciones muy diferentes en el bolsillo de unión, los agonistas no utilizan anillos de fenilo análogos para el apilamiento n-n; GSK8470 utiliza el grupo anilina, mientras que los isómeros de RJW100 utilizan el sustituyente fenilo adyacente. Además, las SDM demuestran diferencias dependientes del ligando en la estabilidad de esta interacción.
Papel de Thr-352 e His-390 en la activación de LRH-1 por agonistas sintéticos
La importancia de las interacciones Thr-352 e His-390 para la unión y activación de LRH-1 por los agonistas se investigó por medio de mutagénesis. La unión y estabilización de LRH-1 se detectaron mediante el uso de DSF. Aunque la mutación T352V (diseñada para eliminar el enlace de hidrógeno mediado por agua con los ligandos unidos) tuvo poco efecto sobre la termoestabilidad general de la LRH-1 unida a DLPC, anuló por completo el efecto estabilizador de RR-RJW100 y SR-RJW100, Del mismo modo, la interrupción de esta interacción mediante el uso de un análogo de RJW100 que carece del grupo hidroxilo impidió el desplazamiento positivo de Tm en LRH-1 de tipo salvaje (WT) (Fig. 6A). El GSK8470 no afectó al perfil de fusión del LRH-1 en la proteína WT o T352V, lo que apoya la idea de que el grupo hidroxilo es importante para estabilizar el complejo proteína-ligando.
También se descubrió que la interacción Thr-352 era importante para la activación de LRH-1 por agonistas de molécula pequeña. El compuesto que carece del grupo hidroxilo y no puede realizar esta interacción, fue un activador de LRH-1 extremadamente pobre en ensayos de reportero de luciferasa. El endo-RJW100 también fue un agonista débil, aunque se alcanzó una activación estadísticamente significativa a la dosis más alta con WT LRH-1 (~1,4 veces superior a DMSO, Fig. 6D). RR-RJW100 y GSK8470 fueron igualmente eficaces frente a LRH-1 w T, y ambos aumentaron la actividad en ~2,5 veces en comparación con DMSO en la dosis más alta, y ambos tuvieron valores de EC<50>de alrededor de 4 pm (Fig. 6B y 6C). En particular, la mutación T352V redujo en gran medida la capacidad de RR-RJW100 para activar LRH-1 en comparación con la proteína WT, mientras que no afectó significativamente a la actividad basal. Inesperadamente, esta mutación atenuó de forma similar la activación por GSK8470, sugiriendo quizás un papel más amplio para este residuo (o quizás para la red de agua que coordina) en la activación mediada por ligando. De hecho, la introducción de una mutación T352V en el LRH-1 unido a GSK8470 en la SDM interrumpe la red de agua, causando el desplazamiento completo de la molécula de agua típicamente coordinada por Thr-352, La mutación T352V también reduce significativamente la cantidad de tiempo que GSK8470 pasa n-n-apilándose con His-390 (25,7% frente al 89,5% de la simulación). Tanto la desestabilización de la red de agua como la interrupción del apilamiento His-390 n -n estable por la mutación T352V podrían contribuir a la pérdida de actividad observada para GSK8470 en el contexto de esta mutación.
Aunque la mutación T352V dio lugar a una pérdida de actividad tanto para RR-RJW100 como para GSK8470, mutar His-390 a alanina tuvo un efecto diferente sobre la activación de LRH-1 dependiendo del agonista implicado. GSK8470 fue completamente incapaz de activar H390A-LRH-1, pero esta mutación tuvo poco o ningún efecto sobre la activación mediada por RR-RJW100, Esta dependencia diferencial de His-390 para la activación es coherente con la observación de que GSK8470 interactúa con His-390 de forma más estable que RR-RJW100 en SDM. Esto también proporciona pruebas de que RR-RJW100 utiliza un mecanismo de acción diferente al de GSK8470 para la activación de LRH-1,
Síntesis de derivados del hexahidropentaleno
La estrategia general para preparar derivados de hexahidropentaleno se ilustra en la figura 1 por medio del uso de procedimientos expuestos en, o modificados adecuadamente a partir de, Whitby et al.. (2011). Pequeñas moléculas agonistas de los receptores nucleares huérfanos factor esteroidogénico-1 (SF-1, NR5A1) y receptor hepático homólogo-1 (LRH-1,<n>R5A2). Journal of Medicinal Chemistry, 54, 2266-2281,
Esquema sintético para Enina (4)
5-fenilpent-4-¡n-1-ol. 99%
A un matraz de fondo redondo secado en horno se añadió dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (0,03 equiv.) y yoduro de cobre (0,06 equiv.). Se añadió trietilamina para obtener una solución 1,0 M antes de añadir yodobenceno (1,0 equiv.). La mezcla amarilla resultante se inyectó burbujeando la solución con nitrógeno durante 30 minutos, momento en el que se añadió porciones de 4-pentil-1-ol (1,2 equiv.) y se sustituyó la aguja de inyección por una entrada de nitrógeno. La solución se oscureció rápidamente y formó una suspensión, y se calentó a 60 C durante 2 horas, momento en el que la reacción se completó por TLC. La solución negra resultante se enfrió y se añadió éter para precipitar un sólido negro. La suspensión resultante se filtró sobre un tapón de celita y se eluyó con éter. El filtrado se concentróin vacuopara obtener un aceite marrón rojizo, que se purificó sobre sílice en EtOAc/hex al 30% para obtener un aceite rojo.
5-fenilpent-4-inal. 83%
A un matraz de 3 bocas secado en horno bajo nitrógeno, se enfrió cloruro de oxalilo (1,1 equiv.) en DCM (0,1M) a -78C en un baño de hielo seco/acetona. Se añadió gota a gota dimetilsulfóxido (DMSO) (1,3 equiv.) como solución en DCM. La solución se dejó agitar unos 10 minutos hasta que cesó el burbujeo. A continuación, se añadió gota a gota el alcohol necesario como solución en DCM. La mezcla de reacción se agitó y se mantuvo a -78 °C durante 1 hora. A continuación se añadió trietilamina (2,5 equiv.) a -78C y se dejó calentar a temperatura ambiente. La reacción se apagó con una solución acuosa de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO<4>y se concentraronin vacuo.El residuo resultante se purificó sobre sílice en 10-20% EtOAc/Hexanos para obtener un aceite amarillo claro.
7-fenilhept-1-en-6-¡n-3-ol. 81%
A un matraz de 3 cuellos secado en horno bajo nitrógeno se añadió aldehído, (1,0 equiv.) como solución en THF seco. La solución se enfrió a -78 C y se añadió bromuro de vinilmagnesio (1,0 M, 1,5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente durante 5 h. La reacción se apagó con cloruro amónico, se vertió sobre agua y se extrajo con acetato de etilo. Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO<4>y se concentraronin vacuo.El aceite resultante se purificó sobre sílice en 5-10% EtOAc/Hexanos para obtener un aceite claro e incoloro.
(5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-il)benceno (4), 68%
Se disolvió alcohol alílico (1,0 equiv.) en DCM y se enfrió a 0 C. Se añadió diisopropiletil amina (1,25 equiv.), seguido de cloro(metoxi)metano (1,5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas, se vertió sobre agua y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 1M HCl, a continuación con salmuera , a continuación se secaron sobre MgSO<4>y se concentraronin vacuo.El aceite resultante se purificó en EtOAc/Hexanos al 5% para obtener un aceite claro e incoloro.
Síntesis de compuestos de dibromo
Procedimiento general para la formación de dioles protegidos con TBDPS
En un matraz de fondo redondo abierto al aire se disolvió el diol requerido (2,0 equiv.) en THF para hacer una solución 0,1M. Se añadió imidazol (1,0 equiv.), seguido de cloruro de terc-butil difenil sililo (TBDPSCl) (1,0 equiv.). La solución resultante se dejó agitar durante 18 h, tras lo cual se formó un precipitado blanco sólido. La solución se filtró y el filtrado se concentróin vacuo.El material resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice en 5-15 % EtOAc/Hexanos para obtener un aceite claro e incoloro.
Procedimiento general para la formación de aldehidos protegidos con TBDPS
A un matraz de fondo redondo abierto al aire se disolvió el diol requerido monoprotegido con TBDPS(1a-8a)en diclorometano para formar una solución 0,1M. Se añadió ácido tridoroisocianúrico (1,0 equiv.) a la mezcla de reacción, seguido de (2,2,6,6,-Tetrametil-piperidin-1-il)oxil (TEMPO) (0,01 equiv.). La reacción se controló por TLC hasta que se consumió el diol de partida (menos de 10 minutos). La solución resultante se vertió sobre agua y se apagó con bicarbonato sódico saturado. La capa acuosa se extrajo con diclorometano tres veces. A continuación, las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl 1 M y salmuera, tras lo cual la capa orgánica se secó con MgSO<4>y se concentróin vacuo.El aceite resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hexanos para obtener un aceite claro e incoloro.
Procedimiento general para la formación de los compuestos gem-dibromados terminales 1c-8c
Se añadió trifenilfosfito (1,1 equiv) a un matraz de tres cuellos secado en horno bajo nitrógeno, se disolvió en diclorometano (DCM) y se enfrió a -78 C en un baño de hielo seco/acetona. Se añadió bromo (1,1 equiv) por partes. Se añadió gota a gota trietilamina (1,1 equiv.) y se dejó agitar la solución durante 5 minutos. El aldehído requerido(1b-8b)se añadió como solución en diclorometano y la mezcla se dejó agitar durante 5 horas. Una vez completada, la mezcla de reacción se filtró sobre un tapón de sílice (eluyendo con acetato de etilo) y el filtrado se concentróin vacuo.El aceite resultante se sometió a un tapón corto de sílice y se eluyó con hexanos al 100% para obtener un aceite claro e incoloro.
Compuestos 5.5-bicíclicos bisprotegidos
Procedimiento general para alcoholes 2° protegidos con MOM, 1° desprotegidos (5d-12d)
El dicloruro de bis(ciclopentadienilo)circonio(IV) (dicloruro de circoneceno) (1,2 equiv.) se secó azeotropeando el agua latente con benceno cuatro veces antes de colocarlo bajo nitrógeno, disolverlo en tetrahidrofurano (THF) seco y desgasificado y enfriarlo a -78 °C en un baño de hielo seco/acetona. La solución resultante de dicloruro de zirconeceno se trató con nBuLi (1,6M en hex, 2,4 equiv.) para formar una solución clara de color amarillo claro y se dejó agitar. Después de aproximadamente 30 minutos, se añadió azeotroped (5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)benceno (4) (1,0 equiv.) en THF seco, desgasificado en porciones para proporcionar una solución de color rosa-naranja, y la mezcla de reacción se mantuvo a -78 ° C durante 30 minutos antes de permitir que se caliente a temperatura ambiente y se agitó durante 2,5 horas. A continuación, la mezcla de reacción se volvió a enfriar a -78 °C y se añadieron en THF seco desgasificado los azeótropos necesarios del alcohol protegido 1,1-dibromoalcano (5c-12c) (1,1 equiv.). Se añadió diisopropilamina de litio recién preparada (LDA, 1,0 M, 1,1 equiv.) a -78 °C y se agitó durante 15 minutos. El fenilacetiluro de litio recién preparado (3,6 equiv.) se añadió a la mezcla de reacción gota a gota en THF seco y desgasificado. La solución marrón rojiza oscura resultante se agitó a -78 °C durante 1,5 horas. A continuación, la reacción se apagó con metanol y bicarbonato sódico acuoso saturado y se dejó calentar a temperatura ambiente para formar una pasta de color amarillo claro. La solución espesa se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo cuatro veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera , se secaron con MgSO<4>y se concentraron in vacuo. El aceite amarillo coloreado resultante se purificó aproximadamente sobre un tapón de sílice y se eluyó con EtOAc/Hexanos al 20% para obtener un aceite que es una mezcla de acetiluro de fenilo apagado, compuestos bicíclicos bis-protegidos [3,3,0] deseados (y en algunos casos subproducto de protonólisis), que se llevó a cabo sin purificación adicional. El aceite crudo fue entonces disuelto en un matraz de fondo redondo cargado con una barra de agitación y abierto al aire. Se añadió TBAF (aprox. 2,0 equiv. de material de partida enina). La solución se oscureció rápidamente y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 h. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se concentró y se sometió directamente a purificación por cromatografía en gel de sílice para obtener los productos de alcohol primario libre ciclados 5d-12d deseados.
Procedimiento general para dioles (5e-12e)
A una solución de alcoholes primarios ciclizados requeridos(5d-12d)en acetonitrilo se le añadió HCl concentrado en exceso (5-20 equiv.). La mezcla se agitó durante 18 h o hasta que la reacción se completó por medio de TLC. La solución resultante se concentróin vacuoy se sometió a HPLC preparativa para aislar el producto deseado como el diastereómero principalexo.
Datos de caracterización de los dioles
5e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,33 -7,24 (m, 6H), 7,23 (s, 2H), 7,20 -7,16 (m, 2H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,55 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,36 (dd, J = 16,9, 9,3 Hz, 1H), 2,29 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,10 - 2,02 (m, 4H), 1,74 - 1,61 (m, 3H), 1,50 - 1,37 (m, 4H). 13C RMN (500 MHz, cloroformo-d) 8154,60, 144,10, 140,77, 139,42, 137,31, 129,62, 127,71, 127,67, 127,63, 126,61, 116,56, 114,84, 81,80, 69,29, 62,39, 55,65, 40,13, 33,94, 32,65, 32,01, 29,44, 24,03, 22,45, 10,57, HRMS calcd para C26H31O2 [M+H]+ : 375,23186, encontrado 375,23145 IR (cm-1): 3344(b), 3079 (w), 2937, 2191(w), 1737, 1669, 1597, 1490, 1440, 1378, 1349, 1229, 1217, 1070, 1028,
6e:
1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 87,43 - 7,28 (m, 7H), 7,28 - 7,19 (m, 3H), 5,09 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,97 (s, 1H), 3,61 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,38 (dd, J = 16,8, 9,4 Hz, 1H), 2,31 (d, J = 9,3, 1,5 Hz, 1H), 2,16 -2,03 (m, 4H), 1,77 - 1,65 (m, 3H), 1,56 - 1,48 (m, 3H), 1,43 - 1,25 (m, 3H). 13C RMN (500 MHz, cloroformo-d) 8 154,50, 144,12, 140,79, 139,31, 137,27, 131,51, 129,64, 128,19, 127,72, 127,64, 126,66, 126,64, 115,04, 82,03, 69,32, 62,85, 61,85, 55,76, 40,25, 33,98, 32,51, 32,05, 31,33, 29,65, 27,62, 25,75, 15,98, HRMS calcd para C-27H33O2 [M+H]+ : 389,24751, encontrado 398,24762 IR (cm-1): 3332 (b), 3079(w), 2933, 1490, 1441, 1342, 1191, 1071, 1035,
Ze:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,36 - 7,25 (m, 6H), 7,24 - 7,15 (m, 4H), 5,05 (s, 1H), 4,97 (s, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,58 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,35 (dd, J = 16,9, 9,4 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 2,11 - 1,97 (m, 4H), 1,75 - 1,62 (m, 3H), 1,53 - 1,46 (m, 2H), 1,38 - 1,15 (m, 6H). 13C RMN (600 MHz, Cloroformo-d) 8 154,52, 144,14, 140,94, 139,23, 137,33, 129,68, 127,70, 127,62, 126,66, 126,61, 115,04, 109,98, 82,03, 69,33, 62,96, 55,76, 40,25, 33,97, 32,63, 32,08, 29,57, 29,38, 27,73, 25,46, HRMS calcd para C28H35O2 [M+H]+ : 403,26316, encontrado 403,26338 IR (cm-1) 3330 (b), 3051 (w), 2929, 2855, 1490, 1440, 1340,74, 1262,75, 1191, 1071, 1028,
8e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,25 (m, 5H), 7,24 - 7,15 (m, 5H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,60 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,35 (dd, J = 16,9, 9,3 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 2,09 - 1,98 (m, 5H), 1,73 - 1,61 (m, 3H), 1,36 - 1,19 (m, 10H). 13C RMN (500 MHz, cloroformo-d) 8 154,50, 144,12, 140,79, 139,31, 137,27, 131,51, 129,64, 127,61, 127,72, 127,64, 126,66, 126,64, 69,31, 82,03, 69,32, 62,85, 61,85, 55,76, 40,25, 33,98, 32,51, 32,05, 31,33, 29,65, 27,62, 25,75, 15,98, HRMS calcd para C29H36O2CI [M+Cl]- : 451,24093, encontrado 451,24179 IR(cm-1): 3347 (b), 3079 (w), 3052 (w), 2929, 2855, 1491, 1441, 1342, 1261, 1192, 1028,
9e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,25 (m, 6H), 7,24 - 7,16 (m, 4H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,61 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,35 (dd, J = 16,9, 9,3 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 2,10 -2,01 (m, 2H), 2,00 -1,97 (m, 2H), 1,74 -1,61 (m, 3H), 1,35 -1,16 (m, 13H). HRMS calcd para C30H38O2CI [M+Cl]-: 465,25658, encontrado 465,25703 IR (cm-1): 3344 (b), 3079 (w), 3052 (w), 2927, 2854, 1491, 1440, 1343, 1261, 1192, 1071, 1029,
10e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,39 - 7,26 (m, 5H), 7,24 - 7,14 (m, 5H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,62 (t, J = 9,4 Hz, 2H), 2,34 (dd, J = 16,7, 9,4 Hz, 1H), 2,27 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 2,12 -2,03 (m, 2H), 2,01 -1,96 (m, 1H), 1,74 - 1,58 (m, 3H), 1,34 -1,17 (m, 18H). 13C RMN (500 MHz, cloroformo-d) 8154,50, 144,12, 140,79, 139,31, 137,27, 131,51, 129,64, 127,70, 127,72, 127,64, 126,66, 126,64, 82,05, 82,03, 69,32, 62,85, 61,85, 55,76, 40,25, 33,98, 32,51, 32,05, 31,33, 29,65, 27,62, 25,75, 15,98, HRMS calcd para C31H40O2Cl [M+Cl]- : 479,27223, 479,27260 IR (cm-1) : 3343 (b), 3079 (w), 3052 (w), 2928, 2854, 1670,41, 1598, 1491, 1440, 1344, 1192, 1071, 1055, 1029,
11e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,25 (m, 5H), 7,24 - 7,16 (m, 5H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,61 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,34 (dd, J = 16,9, 9,4 Hz, 1H), 2,27 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 2,11 - 2,00 (m, 3H), 1,73 - 1,62 (m, 3H), 1,54 (dq, J = 8,2, 6,7 Hz, 2H), 1,34 - 1,17 (m, 17H). LRMS [APCI] calcd para C32H41O2 [M -H]-: 457,3, encontró 457,2
12e:
1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,34 - 7,25 (m, 4H), 7,24 - 7,16 (m, 5H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,61 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,33 (dd, J = 17,2, 9,8 Hz, 1H), 2,26 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 2,02 - 1,99 (m, 5H), 1,72 - 1,61 (m, 3H), 1,57 - 1,51 (m, 2H), 1,40 - 1,11 (m, 10H). LRMS [APCI] calcd para C33H43O2 [M -H]-: 471,3, encontró 471,0
Esquema sintético de los ácidos carboxílicos bicíclicos r3.3.01
Procedimiento general para ácidos carboxílicos (5f-12f)
Una solución de perrutenato de tetrapropilamonio (TPAP) (0,1 equiv.) y óxido de n-metilmorfolina (NMO) (10,0 equiv.) en acetonitrilo fue realizada y añadida al alcohol primario ciclizado requerido (5d-12d) (1,0 equiv.) en un vial de centelleo abierto al aire. Se añadió agua de grado reactivo (10,0 equiv.) y la solución se dejó agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, o hasta que la reacción se completó por TLC. La solución negra resultante se concentróin vacuoy se pasó a través de un tapón corto de sílice y se eluyó con EtOAc/Hexanos al 50 % con ácido acético al 0,1 % añadido para proporcionar los intermedios de ácido carboxílico protegidos.
El aceite transparente e incoloro resultante se tomó posteriormente en acetonitrilo, y se añadió HCl concentrado (5-10 equiv.). La solución se dejó agitar durante 30 minutos o hasta que se completó por TLC. La solución resultante se concentróin vacuoy se sometió a HPLC preparativa para aislar el producto deseado como el principal diasterómeroe xo.
Datos de caracterización de los ácidos carboxílicos
5f:
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,38 - 7,16 (m, 10H), 5,08 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,97 (s, 1H), 2,42 - 2,36 (m, 1H), 2,37 - 2,31 (m, 2H), 2,30 - 2,23 (m, 2H), 2,14 - 2,06 (m, 4H), 1,75 - 1,65 (m, 5H). LRMS (ESI, APCI) m/z: calc para C26H27O3 [M-H]- 387,2, encontrado 387,1 HRMS calc para C26H27O3 [M-H]-: 387,19657, encontrado 387,19687
6f:
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,56 -6,96 (m, 10H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 2,38 - 2,23 (m, 4H), 2,13 -1,97 (m, 5H), 1,74 - 1,62 (m, 3H), 1,53 (p, J = 7,4 Hz, 2H), 1,44 - 1,32 (m, 2H).13
13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8177,81, 154,47, 144,11, 140,26, 139,83, 137,17, 129,65, 127,75, 127,73, 126,75, 126,71, 115,11, 82,02, 69,37, 55,77, 40,12, 34,00, 33,46, 32,09, 29,29, 27,19, 24,61, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C27H30O3 [M-H]- 401,2, encontrado 401,5, Calc'd para C27H29O2 [M-OH]+ 385,2, encontrado 385,2 HRMS calcd para C27H31O3 [M+H]+ : 403,22677, encontrado 403,22661, IR (cm-1): 3386(b), 3079 (w), 3052 (2), 2940, 1707 (s),<1 4 9 1>,<1 4 4 0>, 1410, 1342, 1236, 1192, 1071, 1029,
Zíl
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,49 - 7,05 (m, 10H), 5,05 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 2,36 - 2,21 (m, 4H), 2,10 - 1,97 (m, 5H), 1,73 - 1,61 (m, 3H), 1,59 - 1,51 (m, 2H), 1,34 (p, J = 7,6 Hz, 2H), 1,28 - 1,20 (m, 2H).LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H31O3 [M-H]- 415,2, encontrado 414,9, Calc'd para C28H31O2 [M-OH]+ 399,2, encontrado 399,2 HRMS calcd para C28H32O3Na [M+Na]+ : 439,22353, encontrado 439,22370 IR (cm-1) : 3386(b), 3079 (w), 2934, 2856, 1708(s), 1491, 1440, 1407, 1342, 1230, 1191, 1072, 1028,
8í:
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,37 - 7,14 (m, 9H), 5,05 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 2,38 -2,25 (m, 4H), 2,11 -1,97 (m, 4H), 1,76 - 1,47 (m, 4H), 1,33 (p, J = 7,6 Hz, 2H), 1,29 -1,14 (m, 6H). LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H33O3 [M-H]- 429,3, encontrado 429,3, Calc'd para C29H33O2 [M-OH]+ 413,2, encontrado 413,28 HRMS calcd para C29H33O3 [M-H]-: 429,24352, encontrado 429,2378
9f:
1H RMN (600 MHz, CDCI3) 87,81 - 7,13 (m, 10H), 5,05 (s, 1H), 4,97 (s, 1H), 3,93 (s, 1H), 2,37 - 2,22 (m, 5H), 2,09 -1,94 (m, 5H), 1,79 - 1,58 (m, 6H), 1,38 -1,16 (m, 5H).
LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C30H35O3 [M-H]- 443,3, encontrado 443,2, Calc'd para C30H35O2 [M-OH]+ 427,3, encontrado 427,4 HRMS calcd para C30-H3503 [M-H]-: 443,25917, encontrado 443,25927
10f:
1H RMN (500 MHz, CDCI3) 87,41 - 7,15 (m, 10H), 5,07 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 1H), 2,39 - 2,27 (m, 5H), 2,12 -1,97 (m, 5H), 1,76 - 1,56 (m, 6H), 1,40 -1,15 (m,
7H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8179,49, 154,55, 144,14, 141,10, 139,16, 137,35, 129,69, 127,74, 127,71, 127,63, 126,67, 126,61, 115,00, 82,09, 69,33, 55,71,40,23, 33,95, 32,08, 29,64, 29,53, 29,16, 29,10, 29,00, 24,65, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C31H37O3 [M-H]-457,3, encontrado 457,3, Calc'd para C31H37O2 [M-OH]+ 441,3, encontrado 440,8 HRMS (ESI) m/z : calc'd para C31H37O3 [M-H]- 457,27482, encontrado 457,27487 FT-IR (puro): 3361, 3079, 3052, 3019, 2928, 2854, 1708, 1598, 1491, 1441, 1410, 1340, 1278, 1241, 1192, 1073, 1029, 903, 766, 703 cm-1,
11f:
1H RMN (500 MHz, CDCI3) 87,39 - 7,15 (m, 10H), 5,07 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 1H), 2,41 - 2,24 (m, 5H), 2,15 - 1,94 (m, 5H), 1,75 - 1,50 (m, 6H), 1,42 - 1,09 (m, 9H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8 179,44, 154,57, 144,15, 141,15, 139,11, 137,37, 129,69, 127,74, 127,71, 127,62, 126,66, 126,60, 115,00, 82,10, 69,33, 55,71, 40,25, 33,98, 33,94, 32,08, 29,65, 29,59, 29,30, 29,28, 29,19, 29,01, 27,78, 24,68, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C32H39O3 [M-H]- 471,3, encontrado 471,3, Calc'd para C32H39O2 [M-OH]+ 455,3, encontrado 454,8 HRMS (ESI) m/z: calc'd para C32H39O3 [M-H]- 471,28819, encontrado 471,29047, FT-IR (puro): 3360, 3079, 3052, 3019, 2926, 2854, 1708, 1598, 1491, 1441, 1410, 1340, 1279, 1231, 1097, 1073, 1029, 953, 902, 773, 702 cm-1,
12f:
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,41 - 7,12 (m, 10H), 5,07 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 3,99 - 3,92 (s, 1H), 2,38 - 2,26 (m, 5H), 2,11 - 1,98 (m, 5H), 1,75 - 1,58 (m, 6H), 1,36 - 1,17 (m, 11H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 179,38, 154,57, 144,15, 141,17, 139,10, 137,37, 129,69, 127,74, 127,71, 127,62, 126,65, 126,59, 114,99, 82,11, 69,33, 55,69, 40,23, 33,99, 33,94, 32,08, 29,65, 29,57, 29,40, 29,33, 29,19, 29,03, 27,76, 24,68, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C33H41O3 [M-H]- 485,3, encontrado 485,3, Calc'd para C33H41O2 [M-OH]+ 469,3, encontrado 468,9 HRMS (ESI) m/z : calc'd para C33H41O3 [M-H]- 485,30612, encontrado 485,30646 FT-IR (puro): 1352, 3079, 3052, 3019, 2925, 2853, 1708, 1598, 1491, 1441, 1410, 1340, 1281, 1230, 1096, 1073, 1029, 954, 902, 773, 702 cm-1,
Esquema sintético de las fosforilcolinas bicíclicas r3.3.01
Procedimiento general para fosforilcolinas
Los alcoholes primarios ciclados requeridos(5d-12d)(1,0 equiv.) se disolvieron en tolueno y se enfriaron a 0 °C. Se añadió trietilamina (2,0 equiv.) y la solución se agitó brevemente. A continuación se añadió gota a gota 2-óxido de 2-cloro 1,3,2,-dioxafosfolano (2,0 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas en las que el tiempo completado fue detectado por LCMS. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de algodón para eliminar la mayoría de las sales de trietilamonio resultantes, se concentróin vacuo,y se hizo reaccionar sin purificación adicional. Los intermediarios fosfolanos ciclizados requeridos (1,0 equiv.) se disolvieron en acetonitrilo, se colocaron en un tubo de presión abierto al aire, equipado con una barra agitadora y se congelaron a -78 °C. La trimetilamina (en exceso) se condensó en el tubo de presión frío, que se tapó y se dejó calentar a temperatura ambiente antes de calentar a 90 °C durante 16 h. Después de reaccionar durante 16 h, la mezcla de reacción se enfrió a -78 °C, se destapó y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se concentróin vacuoy se continuó sin purificación adicional.
El material crudo de la reacción anterior se disolvió en acetonitrilo. Se añadió HCl concentrado (5-10equiv.) y se dejó agitar la mezcla durante 30 minutos a temperatura ambiente. Cuando la reacción se completó, según se determinó por LCMS, la mezcla de reacción se concentróin vacuoy se sometió a HPLC preparativa para aislar el producto deseado como el principal diasterómeroexo.
Datos de caracterización de las fosforilcolinas (5g-12g)
5g:
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,28 - 7,13 (m, 10H), 5,02 (s, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,19 (s, 2H), 3,81 (s, 1H), 3,76 (s, 2H), 3,64 (s, 2H), 3,21 (s, 9H), 2,26 -2,05 (m, 3H), 2,01 -1,87 (m, 1H), 1,68 - 1,36 (m, 9H). 31P RMN (121 MHz, CDCl3) 8 -0,76, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C31H4305NP [M+H]+ : 540,3, encontró 540,3
6g:
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,31 - 7,24 (m, 4H), 7,25 - 7,14 (m, 6H), 4,99 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,86 (s, 1H), 3,75 (s, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,20 (s, 9H), 2,25 -2,18 (m, 1H), 2,16 -2,04 (m, 2H), 1,95 - 1,87 (m, 1H), 1,70 - 1,60 (m, 1H), 1,60 -1,52 (m, 4H), 1,53 - 1,43 (m, 1H), 1,42 - 1,30 (m, 3H), 1,31 -1,18 (m, 2H).31P RMN (121 MHz, CDCl3) 8-0,82, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C32H45O5NP [M+H]+ : 554,3, encontró 554,2
Zg:
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,41 - 7,26 (m, 4H), 7,28 - 7,12 (m, 6H), 5,03 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,88 (s, 1H), 3,80 - 3,67 (m, 4H), 3,28 (s, 9H), 2,28 - 2,05 (m, 3H), 2,01 - 1,80 (m, 1H), 1,72 - 1,49 (m, 3H), 1,40 - 0,82 (m, 10H). 31P RMN (121 MHz, cloroformo-d) 8 -0,59, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C33H47O5NP [M+H]+ 568,3, encontrado 568,2
8g:
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,37 - 7,11 (m, 10H), 5,02 (s, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,21 (s, 2H), 3,87 (s, 1H), 3,77 (s, 2H), 3,67 (s, 1H), 3,25 (s, 9H), 2,29 -2,16 (m, 1H), 2,15 -2,02 (m, 2H), 2,00 - 1,90 (m, 1H), 1,72 - 1,57 (m, 3H), 1,57 -1,48 (m, 3H), 1,37 - 1,14 (m, 9H). 13C RMN (300 MHz, CDCl3) 8154,59, 144,07, 140,89, 139,62, 137,37, 129,56, 127,83, 127,67, 126,64, 114,74, 81,46, 69,08, 66,14, 65,72, 59,20, 55,70, 54,25, 39,99, 34,18, 32,02, 30,77, 29,47, 29,31, 29,17, 27,57, 25,56, 31P RMN (121 MHz, CDCl3) 8 -0,76, HRMS (ESI) m/z: calc'd para C34H49O5NP [M+H]+ : 582,33429, encontrado 582,33380 IR(cm-1) : 3373 (b), 2930, 2854, 1709, 1668, 1598, 1490, 1440, 1343, 1227, 1090,9a:
1RNMH (600 MHz, CDCI3) 87,33 -7,15 (m, 10H), 5,00 (s, 1H), 4,96 (s, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,89 (s, 1H), 3,81 - 3,75 (m, 2H), 3,74 -3,66 (m, 2H), 3,27 (s, 9H), 2,28 -2,17 (m, 2H), 2,10 -2,04 (m, 1H), 1,96 - 1,87 (m, 1H), 1,71 -1,58 (m, 3H), 1,57 - 1,48 (m, 2H), 1,36 - 1,13 (m, 12H). 13C RMN (151 MHz, CDCI3) 8 154,59, 144,14, 141,04, 139,50, 137,40, 129,61, 127,78, 127,63, 126,61, 126,55, 114,80, 81,66, 69,23, 66,29, 59,11, 55,61, 54,37, 53,41, 40,05, 37,14, 34,27, 32,02, 30,82, 29,35, 29,17, 28,91, 28,84, 27,47, 25,57, 22,61, 31P RMN (300 MHz, CDCI3) 8-0,43, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C35H51O5NP [M+H]+ 596,3, encontrado 596,3, HRMS (ESI) m/z: calc'd para C35H51O5NP [M+H]+ : 596,34994, encontró 596,3939 IR (cm-1): 3355 (b), 2927, 2854, 2187, 1669, 1491, 1440, 1227, 1090
10a:
1H RMN (600 MHz, CDCI3) 87,32 - 7,14 (m, 10H), 5,01 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,20 (s, 2H), 3,87 (s, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,25 (s, 9H), 2,27 - 2,18 (m, 2H), 2,06 - 1,98 (m, 2H), 1,94 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 1,70 -1,58 (m, 4H), 1,58 -1,48 (m, 3H), 1,36 -1,10 (m, 12H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8154,65, 144,17, 141,06, 139,41, 137,41, 129,65, 127,76, 127,67, 127,62, 126,63, 126,57, 114,85, 81,72, 69,29, 66,24, 65,92, 59,30, 55,66, 54,36, 40,17, 34,15, 32,09, 30,89, 29,51, 29,28, 29,23, 27,66, 27,61, 25,76, 31P RMN (121 MHz, CDCI3) 8 - 0,73, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C36H53O5NP [M+H]+ 610,4, encontrado 609,8, HRMS (ESI) m/z: calc'd para C36=H53O5NP [M+H]+ : 610,36559, encontrado 610,36552 IR (cm-1) : 3372(b), 2926, 2853, 1653, 1491, 1440, 1228, 1090
11a:
1H RMN (600 MHz, CDCI3) 87,34 - 7,14 (m, 10H), 5,03 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,90 (s, 1H), 3,79 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 3,74 (s, 2H), 3,28 (s, 9H), 2,34 - 2,23 (m, 2H), 2,10 - 1,92 (m, 3H), 1,64 (q, J = 10,2, 6,5 Hz, 2H), 1,56 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,37 - 1,10 (m, 16H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8 154,71, 144,23, 141,07, 139,40, 137,43, 129,69, 127,73, 127,70, 127,60, 126,63, 126,56, 81,67, 69,33, 66,20, 65,87, 59,29, 55,64, 54,31, 40,23, 34,08, 32,18, 30,91, 30,86, 29,55, 29,32, 29,22, 29,17, 27,60, 25,82, 31P RMN (121 MHz, CDCI3) 8 - 0,75, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C37HSSOSNP [M+H]+ : 624,4, encontró 624,3
12a:
1H RMN (600 MHz, CDCI3 ) 87,35 - 7,15 (m, 12H), 5,03 (s, 1H), 4,96 (s, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,91 (s, 1H), 3,85 - 3,77 (m, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,29 (s, 9H), 2,32 (dd, J = 16,7, 9,4 Hz, 1H), 2,26 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,10 - 1,94 (m, 4H), 1,71 -1,61 (m, 3H), 1,61 - 1,53 (m, 2H), 1,38 - 1,14 (m, 16H). 31P RMN (121 MHz, CDCI3) 8 -0,90, 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8 154,72, 144,22, 141,10, 139,32, 137,43, 129,69, 114,91, 81,70, 69,33, 66,20, 65,88, 59,31, 55,67, 54,37, 40,25, 34,02, 32,18, 31,58, 30,91, 30,86, 29,60, 29,51, 29,43, 29,40, 29,36, 29,34, 29,24, 27,65, 25,76, 22,65, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C38H57O5NP [M+H]+ 638,4, encontrado 637,8 HRMS (ESI) m/z: calc'd para C38-H57O5NP [M+H]+ : 638,39689, encontrado 638,39741 FT-IR (puro) : 3362 (b), 2924, 2853, 1667, 1490, 1440, 1227, 1090 cm-1,
Esquema sintético del imitador sintético de fosfolípidos bloqueado (13b)
1-((R)-3-(h¡drox¡met¡l)p¡rrol¡d¡n-1-¡l)-8-(6-(exo)-(metox¡metox¡)-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6ahexahidropentalen-2-il)octan-1-ona (13a)
En un tubo de reacción equipado con una barra de agitación, se disolvió 8d en acetonitrilo. Se añadieron perrutenato de tetrapropilamonio (TPAP, 0,1 equiv.), N-metilmorfolina-N-óxido (NMO, 10,0 equiv.) y agua (10,0 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar hasta completarse por TLC y LCMS, 1-16 h. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se concentró y se sometió directamente a sílice para purificación en 20-50% EtOAc/Hex (0,1% ácido acético) para obtener el compuesto deseado como un aceite claro e incoloro (96%).
Este ácido carboxílico resultante se disolvió en DMF en un tubo de reacción equipado con una barra agitadora. (Se añadió 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio hexafluorofosfato (HBTU, 1,2 equiv.). Se añadió (3R)-pirrolidin-3-ilmetanol (1,2 equiv.) en DMF antes de añadir diisopropiletilamina (2,0 equiv.). La mezcla de reacción se calentó y se dejó agitar a 60 °C durante 1 h, hasta completarse por LCMS. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente antes de verterse en agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4 y se concentraron antes de purificarse por cromatografía en gel de sílice en EtOAc/Hex al 100% para obtener el compuesto deseado 13a como un aceite claro e incoloro (99%).
((3R)-1-(8-(6-(exo)-h¡drox¡-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)octano¡l)p¡rrol¡d¡n-3-il)metil (2-(tr¡met¡lamonio)et¡l) fosfato (13b)
En un vial de centelleo equipado con una barra de agitación, se disolvió 13a en tolueno. Se añadió 2-óxido de 2-cloro-1,3,2-dioxafosfolano (2,0 equiv.), seguido de trietilamina (2,0 equiv.) La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1-4 h, hasta que la reacción se completó por TLC. La mezcla resultante que contenía el intermediario fosfolano cíclico se filtró sobre un tapón de algodón para eliminar el exceso de sales de amonio y se concentró. La mezcla de reacción bruta se tomó en acetonitrilo, se transfirió a un tubo de presión y se enfrió a -78 °C. Se condensó trimetilamina (pura, 2-5 mL) en el tubo de presión a -78 °C. Se tapó el tubo, se dejó calentar a temperatura ambiente y después se calentó a 90 °C durante 16 h. Se tapó el tubo, se dejó calentar a temperatura ambiente y después se calentó a 90 °C durante 16 h. Una vez completada la reacción, se dejó enfriar el tubo de presión a temperatura ambiente antes de enfriarlo de nuevo a -78 °C y destaparlo. Se dejó que la solución volviera a calentarse a temperatura ambiente antes de concentrarla en el interior de una campana extractora y continuar sin más purificación. La mezcla de reacción cruda se disolvió en acetonitrilo y se añadieron 2-5 gotas de HCl concentrado. La mezcla se dejó agitar hasta que la reacción se completó (5-30 min, monitorizado por LCMS), y después se concentró. La mezcla de reacción cruda se purificó sobre alúmina en 65/35/5 CH2Cl2/MeOH/NH4OH para obtener el compuesto deseado 13b.
1H RMN (600 MHz, CD3OD) 87,37 - 7,14 (m, 10H), 4,97 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 4,27 (s, 2H), 3,94 - 3,88 (m, 1H), 3,87 (s, 1H), 3,85 - 3,80 (m, 1H), 3,69 - 3,64 (m, 2H), 3,63 - 3,47 (m, 2H), 3,34 (s, 2H), 3,24 (s, 9H), 2,63 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 2,54 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 2,35 -2,24 (m, 5H), 2,14 -2,02 (m, 2H), 2,01 (t, J = 8,7, 6,7 Hz, 2H), 1,90 - 1,80 (m, 1H), 1,79 - 1,64 (m, 1H), 1,68 - 1,59 (m, 2H), 1,59 - 1,45 (m, 2H), 1,40 - 1,17 (m, 7H). 13C RMN (151 MHz, CD3OD) 8172,47, 155,17, 144,09, 140,82, 139,49, 137,35, 129,41, 127,54, 127,26, 126,34, 113,56, 81,37, 69,28, 66,46, 66,18, 66,02, 59,02, 55,08, 53,28, 45,99, 44,89, 39,84, 34,02, 33,82, 33,12, 31,72, 29,13,18, 66,02, 59,02, 55,08, 53,28, 45,99, 44,89, 39,84, 34,02, 33,82, 33,12, 31,72, 29,13, 29,10, 28,95, 28,91, 28,79, 28,75, 27,80, 27,30, 27,28, 26,19, 24,60, 24,59, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C40H58N2O6P [M+H]+: 693,4, encontrado 693,6 HRMS (ESI) m/z: calc'd para C40H58N2O6P [M+H]+ 693,40300, encontrado 693,40270
Proced¡m¡ento sintético del ¡m¡tador fosfolíp¡do 14d
El procedimiento sintético para preparar el compuesto 14d se proporciona en la figura 7,
(R)-3-((terc-but¡ld¡fen¡ls¡l¡l)ox¡)-2-h¡drox¡prop¡l 8-(6-(exo)-(metox¡metox¡)-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lvin¡l)-1.3a.4.5.6.6ahexahidropentalen-2-¡l)octanoato de (14a)
En un vial de centelleo equipado con barra agitadora, se disolvió 8d en acetonitrilo. Tetrapropilamonio perrutenato (TPAP, 0,1 equiv.), N-metilmorfolina-N-Oxido (NMO, 10,0 equiv.), y agua (10,0 equiv.) fueron añadidos. La mezcla de reacción se dejó agitar hasta completarse por TLC y LCMS, 1-16 h. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se concentró y se sometió directamente a sílice para purificación en 20-50% EtOAc/Hex (0,1% ácido acético) para obtener el compuesto deseado como un aceite claro e incoloro (96%). En un tubo de reacción equipado con una barra agitadora, se disolvió (R)-terc-butil(oxiran-2-ilmetoxi)difenilsilano en éter dietílico. Se añadió Co[Salen] (S,S)-(+)-N,N'bix(3,5-di-terc-butilsalicilideno)-1,2-ciclohexanodiamono cobalto (II) (0,01 equiv.) y se dejó agitar la reacción durante 1 h abierta al aire para activarla. Después de 1h, se evaporó el dietileter. El ácido carboxílico preparado previamente (1,0 equiv.) y la diisopropiletilamina (1,0 equiv.) se añadieron al tubo de reacción y la reacción se dejó agitar, pura, a temperatura ambiente durante 3-16 h, hasta completarse por TLC y LCMS. Cuando se determinó que la reacción era completa, la mezcla de reacción cruda se purificó directamente por cromatografía en gel de sílice en 5-10% EtOAc/Hex para obtener el compuesto deseado 14a (28%).
(R)-3-((terc-but¡ld¡fen¡ls¡l¡l)ox¡)-2-(prop¡on¡lox¡)prop¡l________8-(6-(exo)-(metox¡metoxh-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡nih-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-il)octanoato de (14b)
En un vial de centelleo equipado con una barra de agitación, se disolvió 14a en DCM. Clorhidro de Propionil (4,0 equiv.) fue añadido a temperatura ambiente, seguido por trietilamina (4,0 equiv.). La reacción se dejó agitar hasta completarse por TLC (4 h). La mezcla de reacción resultante se concentró y purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en 5-10% EtOAc/Hex para obtener el compuesto deseado 14b (74%).
8-(6-(exo)-(metox¡metox¡)-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-il)octanoato de (S)-3-hidroxi-2-(propioniloxi)propilo (14c)
En un vial de centelleo equipado con una barra agitadora, se disolvió 14b en THF. Fluoruro de tetrabutilamonio (1,1 equiv.) fue añadido, y la mezcla de reacción se dejó estirar durante 16 h. La mezcla resultante se concentró y purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en 20-50% EtOAc/Hex para lograr el compuesto deseado 14c (>99%).
(2R)-3-((8-(6-(exo)-hidrox¡-3-fen¡l-3 a-(1-fen¡lvin¡l)-1.3 a.4. 5.6. 6a-hexahidropentalen-2-¡l)octanoil)ox¡)-2-(propioniloxi)propil (2-(tr¡met¡lamonio)et¡l) fosfato (14d).
En un vial de centelleo equipado con una barra agitadora, se disolvió 14c en tolueno. Se añadió 2-óxido de 2-cloro-1,3,2-dioxafosfolano (2,0 equiv.), seguido de trietilamina (2,0 equiv.) La mezcla de reacción resultante se agitó durante 1- 4 h, hasta que la reacción se completó por TLC. La mezcla resultante que contenía el intermediario fosfolano cíclico se filtró sobre un tapón de algodón para eliminar el exceso de sales de amonio y se concentró. La mezcla de reacción bruta se tomó en acetonitrilo, se transfirió a un tubo de presión y se enfrió a -78 °C. Se condensó trimetilamina (pura, 2- 5 mL) en el tubo de presión a -78 °C. Se tapó el tubo, se dejó calentar a temperatura ambiente y después se calentó a 90 °C durante 16 h. Se tapó el tubo, se dejó calentar a temperatura ambiente y después se calentó a 90 °C durante 16 h. Una vez completada la reacción, se dejó enfriar el tubo de presión a temperatura ambiente antes de enfriarlo de nuevo a -78 °C y destaparlo. Se dejó que la solución volviera a calentarse a temperatura ambiente antes de concentrarla en el interior de una campana extractora y continuar sin más purificación. La mezcla de reacción cruda se disolvió en acetonitrilo y se añadieron 2-5 gotas de HCl concentrado. La mezcla se dejó agitar hasta que la reacción se completó (5-30 min, monitorizado por LCMS), y después se concentró. La mezcla de reacción cruda se purificó por medio de HPLC preparativa para obtener el compuesto deseado 14d.
1H RMN (600 MHz, CDCI3) 57,37 - 7,15 (m, 10H), 5,04 (s, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,51 (s, 0H), 4,44 - 4,28 (m, 4H), 4,28 -4,17 (m, 2H), 4,18 - 4,06 (m, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,80 - 3,69 (m, 2H), 3,30 (s, 9H), 2,38 - 2,22 (m, 6H), 2,12 - 1,93 (m, 4H), 1,60 - 1,48 (m, 4H), 1,38 - 1,13 (m, 9H), 1,10 (t, J = 7,5 Hz, 3H). LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C41 [M]+ 739,4, encontrado 739,6 HRMS (ESI) m/z: calc'd para C41H59O9NP [M+H]+ 740,39393, encontrado 740,39220, Calc'd para C41H48O9NPNa [M+Na]+ 762,37569, encontrado 762,37414, FT-IR (puro): 3357, 3079, 3020, 2925, 2854, 1736, 1715, 1686, 1618, 1598, 1555, 1490, 1463, 1440, 1363, 1250, 1201, 1175, 1085, 1025, 967, 912, 800, 760, 702 cm-1,
Esquema sintético para las modificaciones internas del estireno (15f-18f, 15g-18g).
El procedimiento sintético para preparar los compuestos 15f-18f, 15g-18g se proporciona en la figura 1D.
Procedimiento general de acoplamiento Sonogashira (15a-18b)
A un matraz de fondo redondo secado en horno se añadió dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (0,03 equiv.) y yoduro de cobre (0,06 equiv.). Se añadió trietilamina para obtener una solución 1,0 M antes de añadir el haluro de arilo necesario (1,0 equiv.). La mezcla amarilla resultante se inyectó burbujeando la solución con nitrógeno durante 30 minutos, momento en el que se añadió porciones de 4-pentil-1-ol (1,2 equiv.) y se sustituyó la aguja de inyección por una entrada de nitrógeno. La solución se oscureció rápidamente y formó una suspensión, y se calentó a 60 °C durante 2 horas, momento en el que la reacción se completó por TLC. La solución negra resultante se enfrió y se añadió éter para precipitar un sólido negro. La suspensión resultante se filtró sobre un tapón de celita y se eluyó con éter. El filtrado se concentró in vacuo para obtener un aceite marrón rojizo, que se purificó sobre sílice en EtOAc/hex al 30% para obtener un aceite amarillo.
5-(3-bromofenil)pent-4-in-1-ol (15a)
Se siguió el procedimiento general de acoplamiento de Sonogashira por medio del uso de 1-bromo-3-yodobenceno como haluro de arilo. El compuesto se purificó en 10-30% EtOAc/Hex (3,1 g 92%).
5-(3 -bromo-2-fluorofenil)pent-4-in-1 -ol (16a)
Se siguió el procedimiento general de acoplamiento de Sonogashira por medio del uso de 4-bromo-1-fluoro-2-iodobenceno como haluro de arilo. El compuesto se purificó en 10-30% EtOAc/Hex (3,9 g, 75%).
5-(5-bromo-2-met¡l¡lfen¡l)pent-4-¡n-1-ol (17a)
Se siguió el procedimiento general de acoplamiento de Sonogashira mediante el uso de 4-metil-2-iodo-1-metilbenceno como haluro de arilo. El compuesto se purificó en 10-30% EtOAc/Hex como eluyente, (3,6 g, 81%).
5-(3-bromo-5-fluorofen¡l)pent-4-¡n-1-ol (18a)
Se siguió el procedimiento general de acoplamiento de Sonogashira mediante el uso de 1-bromo-3-fluoro-5-iodobenceno como haluro de arilo. El compuesto se purificó en EtOAc/Hex al 20% (3,5 g 90%).
Procedimiento general de oxidación de Swern (15b-18b)
A un matraz de fondo redondo de tres cuellos secado en horno y cargado con una barra agitadora se añadió cloruro de oxalilo (1,1 equiv.) en DCM (0,1M). La solución se enfrió a -78 °C antes de añadir gota a gota dimetilsulfóxido (1,3 equiv.) en DCM. Tras cesar la efervescencia, se añadió gota a gota el alcohol necesario (1,0 equiv.) en DCM. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 1,5 h antes de enfriarla con trietilamina (2,5 equiv.) y dejar que se calentara a temperatura ambiente antes de enfriarla de nuevo con cloruro de amonio saturado. A continuación, la mezcla de reacción se vertió sobre agua y se extrajo con DCM, se secó con MgSO4, se concentró y se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice para obtener un aceite (típicamente amarillo pálido).
5-(3-bromofenM)pent-4-inal (15b)
Se siguió el procedimiento general para la oxidación de Swern, por medio del uso de 5-(3-bromofenil)pent-4-in-1-ol como alcohol. El material crudo se purificó por cromatografía sobre sílice con 10-50% EtOAc/Hex (3,4g, 81%).5-(5-bromo-2-fluorofen¡l)pent-4-¡nal (16b)
Se siguió el procedimiento general para la oxidación de Swern mediante el uso de 5-(5-bromo-2-fluorofenil)pent-4-in-1 -ol como el alcohol. El material crudo se purificó por cromatografía sobre sílice con 10-50% EtOAc/Hex (2,4g, 62%).
5-(5-bromo-2-met¡lfen¡l)pent-4-¡nal (17b)
Se siguió el procedimiento general para la oxidación de Swern mediante el uso de 5-(5-bromo-2-metilfenil)pent-4-in-1 -ol como el alcohol. El aceite crudo se purificó en gel de sílice con EtOAc/Hex al 10% (0,6 g, 17%).
5- (3-bromo-5-fluorofenil)pent-4-inal (18b)
Se siguió el procedimiento general para la oxidación de Swern, por medio del uso de 5-(3-bromo-5-fluorofenil)pent-4-in-1-ol como alcohol. El material crudo se purificó por cromatografía sobre sílice con 10-20% EtOAc/Hex, (3,5 g, 90).
Procedimiento general para la adición de Grignard (15c-18c)
A un matraz de 3 cuellos secado a horno equipado con una barra de agitación se añadió el aldehído requerido (1,0 equiv.) en THF. La solución se enfrió a -78 °C antes de añadir bromuro de vinilmagnesio (1,5 equiv.). La reacción se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche antes de enfriarla con cloruro de amonio saturado. La mezcla de reacción se vertió sobre agua y se extrajo con acetato de etilo, se secó con MgSO4 y se concentró antes de purificarse por cromatografía en gel de sílice.
7-(3-bromofenM)hept-1-en-6-in-3-ol (15c)
Se siguió el procedimiento general para la adición de Grignard, por medio del uso de 5-(3-bromofenil)pent-4-inal como aldehído. A continuación, el aceite crudo se purificó en gel de sílice con 5-10% EtOAc/Hex, (1,12g, 55%).
7-(5-bromo-2-fluorofen¡l)hept-1-en-6-¡n-3 -ol (16c)
Se siguió el procedimiento general para la adición de Grignard, mediante el uso de 5-(5-bromo-2-fluorofenil)pent-4-inal como aldehído. A continuación, el aceite crudo se purificó en gel de sílice con EtOAc/Hex al 20%, (3,3 g, 90%).
7-(5-bromo-2-met¡lfen¡l)hept-1-en-6-¡n-3-ol (17c):
Se siguió el procedimiento general para la adición de Grignard, por medio del uso de 5-(5-bromo-2-metilfenil)pent-4-inal como aldehído. A continuación, el aceite crudo se purificó en gel de sílice con 20% EtOAc/Hex, (1,4 g, 60%).
7-(3-bromo-5-fluorofen¡l)hept-1-en-6-¡n-3-ol (18c):
Se siguió el procedimiento general para la adición de Grignard, mediante el uso de 5-(3-bromo-5-fluorofenil)pent-4-in-1 -ol como aldehído. A continuación, el aceite crudo se purificó en gel de sílice con 20% EtOAc/Hex, (3,0 g, 81%).Procedimientos generales de protección y datos de caracterización de las eninas protegidas (15d-18d, 19)Tert-butildimetil((7-fenilhept-1-en-6-in-3-il)oxi)silano (19): En un matraz de tres bocas secado al horno, equipado con barra agitadora y enjuagado con nitrógeno, se añadieron imidazol (4,0 equiv.) y 4-dimetilaminopiridina (2,0 equiv.). Tras una nueva evacuación y relleno con nitrógeno, los sólidos se disolvieron en THF seco y se enfriaron a -78 °C. Tras añadir una solución del alcohol (1,0 equiv.) en THF, se añadió gota a gota triflato de terc-butildimetilsililo (2,0 equiv.) y se dejó agitar durante 6 horas. La reacción se apagó con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con éter (3 veces); las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 5-10% EtOAc/Hex para obtener un aceite amarillo claro (8,0 g, 99% de rendimiento). Los datos espectrales comunicados concuerdan con los de la bibliografía.
Procedimiento general para la protección del alcohol con metoximetil (MOM) éter (15d-18d)
La enina no protegida requerida (15c-18c) (1,0 equiv.) se disolvió en DCM, seguido de diisopropiletil amina (1,25 equiv.). Se añadió clorometil metil éter (1,5 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó a 30 °C hasta su finalización (normalmente 1-4 horas). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente antes de verterla sobre agua, lavarla con HCl diluido (1 M) y extraerla con DCM. Las capas orgánicas se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron antes de someterlas a cromatografía en gel de sílice.
1-bromo-3-(5-(metox¡metox¡)hept-6-en-1-¡n-1-¡l)benceno (15d)
Se siguió el procedimiento general para la protección con éter MOM, por medio del uso de 7-(3-bromofenil)hept-1-en-6- in-3-ol como enina. El aceite crudo se purificó en EtOAc/Hex al 5% (2,1 g, 92%).
4-bromo-1-fluoro-2-(5-(metox¡metox¡)hept-6-en-1-¡n-1-¡l)benceno (16d)
Se siguió el procedimiento general para la protección con éter MOM, por medio del uso de 7-(5-bromo-2-fluorofenil)hept-1-en-6-in-3-ol como enina. El aceite crudo se purificó en 2-10% EtOAc/Hex (1,1g, 88%).
4-bromo-2-(5-(metox¡metox¡)hept-6-en-1-¡n-1-¡l)-1-met¡lbenceno (17d)
Se siguió el procedimiento general para la protección con éter MOM, por medio del uso de 7-(5-bromo-2-metilfenil)hept-1-en-6-in-3-ol como enina. El aceite crudo se purificó en 2-10% EtOAc/Hex (0,2g, 78%).
1-bromo-3-fluoro-5-(5-(metox¡metox¡)hept-6-en-1-¡n-1-¡l)benceno (18d)
Se siguió el procedimiento general para la protección con éter MOM, por medio del uso de 7-(3-bromo-5-fluorofenil)hept-1-en-6-in-3-ol como enina. El aceite crudo se purificó en 2-10% EtOAc/Hex (1,0g, 77%).
Procedimiento general para la ciclización mediada por zirconoceno y la desprotección MOM (15e-18e)
El dicloruro de bis(ciclopentadienilo)circonio(IV) (dicloruro de circoneceno) (1,2 equiv.) se secó azeotropando el agua latente con benceno cuatro veces antes de colocarlo bajo nitrógeno, disolverlo en tetrahidrofurano (THF) y enfriarlo a -78 °C en un baño de hielo seco/acetona. La solución resultante de dicloruro de circoneceno se trató con nBuLi (2,4 equiv.) para formar una solución clara de color amarillo claro y se dejó agitar. Después de aproximadamente 30 minutos, se añadió porciones de enina requerida azeotropada (1,0 equiv.) en THF seco para obtener una solución rojo-anaranjada, y la mezcla de reacción se mantuvo a -78 °C durante 30 minutos antes de permitir que se calentara a temperatura ambiente y se agitara durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar a -78 °C y se añadió 1,1-dibromoheptano (1,1 equiv.) en THF seco. Se añadió diisopropilamina de litio recién preparada (LDA, 1,0 M, 1,1 equiv.) a -78 °C y se agitó durante 15 minutos. A continuación se preparó fenilacetiluro de litio (3,6 equiv.) y se añadió a la mezcla de reacción gota a gota en THF- seco. La solución marrón rojiza oscura resultante se agitó a -78 °C durante 48 horas. A continuación, la reacción se apagó con metanol y bicarbonato sódico acuoso saturado y se dejó calentar a temperatura ambiente para formar una pasta de color amarillo claro. La solución espesa resultante se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo cuatro veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4 y se concentraron in vacuo. El aceite coloreado resultante (típicamente amarillo, naranja o marrón), se purificó aproximadamente sobre un tapón de sílice y se eluyó con EtOAc/Hex al 20% para obtener un aceite amarillo que es una mezcla de fenilacetileno, compuestos bicíclicos [3,3,0] protegidos deseados y (en algunos casos) subproducto de protonólisis protegido. Este aceite se utilizó sin purificación adicional. Con este procedimiento se obtienen los diastereómeros exo y endo en una proporción de 7:1, según determinan las señales características de RMN 1H.
La mezcla bruta (1,0 equiv.) se disolvió en acetonitrilo y se añadieron unas gotas de HCl concentrado (en exceso). La solución azul-púrpura oscura resultante se agitó abierta al aire durante aproximadamente 30 minutos (monitorizada por medio de LCMS), se concentró y se sometió directamente a cromatografía en gel de sílice en EtOAc/Hexanos al 5-20% para obtener el compuesto deseado como un aceite amarillo pálido.
(ExoM-(3-bromofen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (15e)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-bromo-3-(5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)benceno como enina. El aceite crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en 5-20% EtOAc/Hex
(Exo)-4-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-5-hex¡l-3 a-(1-fenilvinil)-1.2.3.3 a.6. 6a-hexahidropentalen-1-ol (16e)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 4-bromo-1-fluoro-2-(5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)benceno como enina. El aceite crudo fue purificado por medio de cromatografía en gel de sílice en 5-20% EtOAc/Hex, logrando tanto el compuesto deseado e intercambio de producto de halógeno de litio en una cantidad apreciable. Esta mezcla se utilizó sin purificación adicional.
(Exo)-4-(5-bromo-2-met¡lfen¡l)-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-ol (17e)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 4-bromo-2-(5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)-1-metilbenceno como enina. El aceite crudo se purificó con cromatografía de gel de sílice en 5-20% EtOAc/Hex.
(Exo)-4-(3-bromo-5-fluorofen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (18e)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-bromo-3-fluoro-5-(5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)benceno como enina. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 5-10% EtOAc/Hex, obteniéndose tanto el compuesto deseado como el subproducto de intercambio litio-halógeno en cantidad apreciable. Esta mezcla se utilizó sin purificación adicional.
Procedimiento general para el acoplamiento h¡drox¡lo (15f-18f)
Hidróxido de potasio (3,0 equiv.), tris(dibenzilideneacetona)dipaladio(0) (0,01 equiv.), y tBuXfos (0,04 equiv.) fueron colocados en un tubo de reacción, el cual fue evacuado y rellenado con nitrógeno tres veces. A continuación, los sólidos se suspendieron en 1,4-dioxano desgasificado bajo nitrógeno. El bromo [3,3,0] requerido se añadió en 1,4-dioxano. Se añadió agua (~10 equiv.). La mezcla de reacción se calienta a 80 °C y se agita durante 16 horas. Tras agitar, la mezcla se vertió sobre agua y EtOAc, y los orgánicos se lavaron con agua y salmuera para eliminar el 1,4-dioxano. Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se concentraron y se purificaron sobre sílice en EtOAc/Hex al 20%.
(Exo)-5-hex¡l-4-(3-h¡drox¡fen¡n-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (15f)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de hidroxilo, por medio del uso de (exo)-6 (3-bromofenil)-5-hexil-3-(metoximetoxi)-6a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,4,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex.1
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,30 (d, J = 41,7 Hz, 5H), 7,17 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,75 (t, J = 9,3 Hz, 2H), 6,69 (s, 1H), 5,07 (s, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,88 (s, 1H), 3,94 (s, 1H), 2,35 (dd, J = 17,3, 8,0 Hz, 1H), 2,27 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 2,05 (dt, J = 21,8, 6,9 Hz, 4H), 1,77 - 1,48 (m, 5H), 1,35 - 1,16 (m, 8H), 0,86 (t, J = 7,0 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 154,91, 154,57, 144,10, 141,44, 139,08, 138,57, 128,78, 127,72, 126,68, 122,42, 116,44, 115,08, 113,58, 82,06, 69,30, 55,82, 40,24, 34,00, 32,06, 31,66, 29,74, 29,39, 27,92, 27,78, 22,59, 14,08, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H37O2 [M+H]+ 404,3, encontrado 403,8 FTIR (puro): 3368, 3080, 2955, 2928, 2858, 1690, 1598, 1580, 1448, 1200, 1070, 755, 690 cm-1,
(ExoM-(2-fluoro-5-h¡drox¡fen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (16f)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de hidroxilo, por medio del uso de (exo)-4-(5-amino-2-fluorofenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, CDCl38 7,39 - 7,35 (m, 2H), 7,31 - 7,27 (m, 3H), 6,93 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 6,70 (dt, J = 8,6, 3,5 Hz, 1H), 6,65 (dd, J = 5,6, 3,2 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,61 (s, 1H), 3,97 (s, 1H), 2,52 (dd, J = 17,3, 9,7 Hz, 1H), 2,30 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 2,12 - 2,03 (m, 2H), 1,95 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,87 - 1,78 (m, 1H), 1,73 (dd, J = 12,3, 6,3 Hz, 1H), 1,68 (dd, J = 13,1, 5,9 Hz, 1H), 1,45 - 1,27 (m, 2H), 1,29 -1,16 (m, 6H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 156,08, 154,54, 154,20, 150,56, 144,43, 143,62, 127,89, 127,41, 126,77, 117,66, 117,63, 115,85, 115,65, 115,51, 114,92, 114,85, 81,94, 69,60, 55,39, 40,57, 33,57, 33,09, 31,63, 30,00, 29,39, 27,23, 22,59, 14,09, 19F RMN (282 MHz, cdcl3) 8 - 124,47, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36FO2 [M+H]+ 422,3, encontrado 421,9 FTIR (puro): 3358, 3081, 2955, 2929, 2856, 1737, 1491, 1443, 1204, 772, 703 cm-1,
(Exo)-5-hex¡l-4-(5-h¡drox¡-2-met¡lfen¡n-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (17f)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de hidroxilo, mediante el uso de (exo)-4-(5-bromo-2-metilfenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 87,46 -7,39 (m, 2H), 7,31 -7,27 (m, 3H), 7,09 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 8,3, 2,8 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 4,88 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,52 (s, 1H), 3,99 (s, 1H), 3,49 (s, 3H), 2,64 (dd, J = 17,3, 10,2 Hz, 1H), 2,33 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,10 -1,99 (m, 3H), 1,94 - 1,77 (m, 3H), 1,71 (ddd, J = 19,1, 13,3, 6,6 Hz, 2H), 1,42 -1,12 (m, 7H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(Exo)-4-(3-fluoro-5-h¡drox¡fen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol(18f)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de hidroxilo, por medio del uso de (exo)-4-(3-bromo-5-fluorofenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,35 - 7,28 (m, 2H), 7,26 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 6,55 - 6,45 (m, 3H), 5,09 (s, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,94 (s, 1H), 3,93 (s, 1H), 2,35 (dd, J = 17,0, 9,3 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,15 -1,99 (m, 4H), 1,73 -1,64 (m, 3H), 1,38 -1,18 (m, 6H), 0,90 -0,83 (m, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8162,01, 156,16, 154,36, 143,86, 142,29, 137,75, 127,79, 127,67, 126,79, 115,30, 112,38, 109,15, 108,98, 101,67, 101,48, 81,99, 69,26, 55,79, 40,23, 34,00, 32,02, 31,64, 29,71,29,39, 27,71, 22,59, 14,08, 19F RMN (282 MHz, cdcl3) 8 -112,75, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36FO2 [M+H]+ 423,3, encontrado 422,9 FTIR (puro): 3340, 3075, 2960, 2931, 1738, 1618, 1583, 1448, 1352, 1217, 1002, 668 cm-1,
Procedimiento general de aminación (15g-18g)
Se cargó un tubo de reacción (A) equipado con una barra de agitación magnética con tBuBrettPhos (0,04 equiv.) y terc butóxido sódico (3,0 equiv.) antes de evacuarlo y rellenarlo con nitrógeno. Se añadió el bromo [3,3,0] requerido en dioxano antes de añadir amoníaco en dioxano (10 equiv.) y se dejó agitar durante ~15 minutos. Durante este periodo, en un tubo de reacción separado (B), se añadió el precatalizador tBuBrettPhos (0,04 equiv.), se evacuó el tubo y se rellenó con nitrógeno. A continuación, el precatalizador tBuBrettPhos se disolvió en dioxano seco desgasificado. La solución de precatalizador tBuBrettPhos del tubo de reacción B se transfirió a la mezcla de reacción en agitación del tubo de reacción A. Se retiró la entrada de nitrógeno y la mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 16 horas detrás de un escudo antiexplosiones. Tras agitar, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los orgánicos se lavaron con agua y salmuera para eliminar el dioxano, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío. El aceite crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en (típicamente 20-30% ) EtOAc/Hex.
(ExoM-(3-am¡nofen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol(15g)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de aminas, por medio del uso de (exo)-6-(3-bromofenil)-5-hexil-3-(metoximetoxi)-6a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,4,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,49 - 7,20 (m, 5H), 7,09 (dd, J = 9,6, 5,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 6,55 (s, 1H), 5,06 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 1H), 3,52 (s, 2H), 2,32 (dt, J = 13,6, 6,7 Hz, 1H), 2,25 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 2,04 (ddd, J = 21,8, 11,9, 4,7 Hz, 5H), 1,77 - 1,62 (m, 3H), 1,38 - 1,06 (m, 8H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8154,73, 145,58, 144,21, 140,96, 139,04, 138,54, 128,45, 127,79, 127,68, 126,61, 120,51, 116,40, 114,90, 113,57, 109,99, 82,13, 55,91,40,20, 34,07, 32,02, 31,69, 29,78, 29,41,27,82, 22,60, 14,08, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H38NO [M+H]+ 403,3, encontrado 402,9
(Exo)-4-(5-am¡no-2-fluorofen¡l)-5-hex¡l-3 a-(1-fenilvinil)-1.2.3.3 a.6. 6a-hexahidropentalen-1-ol(16g)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de aminas, por medio del uso de (exo)-4-(5-amino-2-fluorofenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó con cromatografía de gel de sílice en 30-50% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, CDCI3) 57,38(dd, J = 6,7, 2,9 Hz, 2H), 7,32 - 7,25 (m, 2H), 6,99 - 6,79 (m, 2H), 6,56 (dt, J = 8,6, 3,5 Hz, 1H), 6,50 (dd, J = 6,0, 2,9 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,79 (s, 1H), 3,53 (s, 1H), 3,46 (s, 2H), 2,56 -2,44 (m, 1H), 2,28 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 2,10 - 2,02 (m, 2H), 1,96 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,88 - 1,78 (m, 1H), 1,75 (dd, J = 12,0, 6,4 Hz, 1H), 1,67 (dd, J = 12,9, 5,8 Hz, 1H), 1,35 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 1,32 -1,15 (m, 6H), 0,86 (t, J = 7,0 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 5154,69, 144,58, 135,54, 129,55, 127,85, 127,61, 127,48, 126,70, 120,10, 119,69, 117,73, 115,55, 115,31, 114,90, 82,02, 69,59, 55,42, 40,54, 33,61, 33,04, 31,66, 31,14, 30,02, 29,41, 28,20, 27,26, 26,84, 25,35, 23,94, 23,51, 22,61, 14,09, 19F RMN (282 MHz, CDCI3) 5 -126,95 LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H37FNO [M+H]+ 421,3, encontrado 420,9 FTIR (puro): 3361, 3085, 2956, 2930, 2856, 1494, 1258, 1213, 775, 703, 668 cm-1,
(ExoM-(5-am¡no-2-met¡lfen¡n-5-hex¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol(17g)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de aminas, por medio del uso de (exo)-4-(5-bromo-2-metilfenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo [3,3,0]. El aceite crudo se purificó con cromatografía de gel de sílice en 20-30% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 57,44 -7,38 (m, 2H), 7,33 -7,27 (m, 2H), 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 8,9, 5,0 Hz, 1H), 6,54 (dd, J = 8,0, 2,5 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,79 (s, 2H), 3,53 (s, 3H), 2,61 (dd, J = 17,2, 10,0 Hz, 1H), 2,30 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 2,06 - 1,99 (m, 2H), 1,97 - 1,79 (m, 2H), 1,77 - 1,68 (m, 2H), 1,38 - 1,07 (m, 11H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(Exo)-4-(3-am¡no-5-fluorofen¡l)-5-hex¡l-3 a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3 a.6. 6a-hexahidropentalen-1-ol(18g)
Se siguió el procedimiento general para el acoplamiento de aminas, por medio del uso de (exo)-4-(3-bromo-5-fluorofenil)-5-hexil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6a-hexahidropentalen-1-ol como el bromo[3,3,0]. El aceite crudo se purificó con cromatografía de gel de sílice en 20-30% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 57,36 - 7,30 (m, 2H), 7,31 - 7,20 (m, 3H), 6,41 - 6,21 (m, 3H), 5,08 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,79 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,70 (s, 2H), 3,53 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 2,32 (dd, J = 16,7, 9,3 Hz, 1H), 2,25 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 2,13 -1,97 (m, 4H), 1,79 - 1,63 (m, 3H), 1,42 -1,12 (m, 6H), 0,87 (t, J = 7,1, 6,5 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 164,21, 162,28, 154,51, 147,23, 147,14, 144,01, 141,78, 140,22, 140,14, 138,20, 127,73, 126,70, 119,67, 115,11, 112,05, 106,87, 106,70, 100,65, 100,46, 82,00, 69,24, 55,89, 40,20, 34,09, 31,98, 31,66, 31,14, 29,74, 29,40, 28,23, 27,74, 25,35, 23,91, 23,52, 22,60, 14,08, 19F RMN (282 MHz, cdcl3) 5 -112,75, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H37FNO [M+H]+ 422,3, encontrado 421,8 FTIR (puro): 3360, 3210, 3085, 2956, 2929, 2858, 1692, 1610, 1585, 1459, 1425, 1258, 756, 703 cm-1,
Esquema sintético de las modificaciones del estireno externo
Procedimiento General para la Ciclización Mediada por Zirconeceno y la Desprotección MOM:
El dicloruro de bis(ciclopentadienilo)circonio(IV) (dicloruro de circoneceno) (1,2 equiv.) se secó azeotropeando el agua latente con benceno cuatro veces antes de colocarlo bajo nitrógeno, disolverlo en tetrahidrofurano (THF) seco y desgasificado y enfriarlo a -78 °C en un baño de hielo seco/acetona. La solución resultante de dicloruro de circoneceno se trató con nBuLi (2,4 equiv.) para formar una solución clara de color amarillo claro y se dejó agitar. Después de aproximadamente 30 minutos, se añadió porciones de azeotrópico (5-(metoximetoxi)hept-6-en-1-in-1-il)benceno (1,0 equiv.) en THF seco y desgasificado para obtener una solución rosa anaranjada, y la mezcla de reacción se mantuvo a -78 °C durante 30 minutos antes de dejar que se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar a -78 °C y se añadió el dibromoheptano azeotrópico necesario (1,1 equiv.) en THF seco y desgasificado. Se añadió diisopropilamina de litio recién preparada (LDA, 1,0 M, 1,1 equiv.) a -78 °C y se agitó durante 15 minutos. El acetiluro de litio necesario, recién preparado (3,6 equiv.), se añadió a la mezcla de reacción gota a gota en THF seco y desgasificado. La solución marrón rojiza oscura resultante se agitó a -78 °C durante 1,5 horas. A continuación, la reacción se apagó con metanol y bicarbonato sódico acuoso saturado y se dejó calentar a temperatura ambiente para formar una pasta de color amarillo claro. La solución espesa se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo cuatro veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4 y se concentraron in vacuo. El aceite coloreado resultante (típicamente amarillo, naranja o verde), se purificó aproximadamente sobre un tapón de sílice y se eluyó con EtOAc/Hexanos al 20% para obtener un aceite que es una mezcla de acetiluro apagado y compuestos bicíclicos [3,3,0] bisprotegidos deseados (y en algunos casos subproducto de protonólisis), que se llevó a cabo sin purificación adicional.
La mezcla bruta (1,0 equiv.) se disolvió en acetonitrilo, y se añadió HCl concentrado (en exceso) y la mezcla de reacción de color azul púrpura oscuro resultante se agitó durante aproximadamente 30 minutos (monitorizado por LCMS), se concentró, y se sometió directamente a cromatografía en gel de sílice en 5-20% EtOAc/Hex para proporcionar el exocompuesto deseado.
(Exo)-3a-(1-(2-fluorofenil)vinil)-5-hexil-4-fenil-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-ol (20)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-etinil-2-fluorobenceno para formar el acetiluro de litio requerido. El aceite crudo resultante se purificó en 5-20% EtOAc/Hex.1
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,38 - 7,17 (m, 7H), 7,03 (dtt, J = 13,0, 7,5, 1,1 Hz, 2H), 5,27 (s, 1H), 5,11 (s, 1H), 3,92 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 2,31 (d, J = 14,3 Hz, 2H), 2,15 - 1,95 (m, 4H), 1,76 - 1,57 (m, 4H), 1,40 - 1,15 (m, 7H), 0,86 (td, J = 7,1, 0,9 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 160,57, 158,63, 147,86, 141,76, 138,28, 137,40, 130,40, 129,67, 128,40, 128,34, 127,69, 126,59, 123,18, 116,72, 115,43, 115,24, 81,97, 69,38, 56,83, 39,67, 34,72, 31,65, 31,22, 29,77, 29,35, 27,91, 22,58, 14,08, 19F RMN (282 MHz, cdcl3) 8 -112,75, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36FO [M+H]+ 407,3, encontrado 406,9 FTIR (puro): 3354, 3090, 3075, 2954, 2927, 2855, 1489, 1446, 1217, 755, 701 cm-1,- - - - - - - - - . . . . . - - -
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-etinil-2-metilbenceno para formar el acetiluro de litio requerido. El aceite crudo resultante se purificó en EtOAc/Hex al 10%.
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,36 - 7,30 (m, 2H), 7,30 - 7,26 (m, 1H), 7,24 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,04 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 5,08 (s, 1H), 4,95 (s, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,25 - 2,12 (m, 2H), 2,06 - 1,88 (m, 4H), 1,76 - 1,66 (m, 2H), 1,61 (dd, J = 11,9, 6,3 Hz, 1H), 1,42 - 1,28 (m, 3H), 1,28 - 1,22 (m, 1H), 1,22 - 1,15 (m, 4H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 152,27, 142,91, 141,73, 138,48, 137,68, 135,64, 130,07, 129,97, 127,62, 126,62, 126,50, 124,76, 115,47, 82,05, 74,70, 69,98, 55,74, 39,82, 34,59, 31,83, 31,67, 29,65, 29,31, 27,91, 22,63, 20,74, 14,12, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H39O [M+H]+ 403,3, encontrado 403,0 FTIR (puro): 3340, 3095, 3080, 2954, 2926, 2855, 1489, 1456, 1440, 904, 765, 730, 710 cm-1,
(Exo)-5-hex¡l-3a-(1-(2-metox¡fen¡l)v¡n¡l)-4-fenil-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (22)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-etinil-2-metoxilbenceno para formar el acetiluro de litio requerido. El aceite crudo resultante se purificó en EtOAc/Hex al 10-20%.
1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,36 - 7,18 (m, 6H), 6,95 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,88 -6,81 (m, 2H), 5,18 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,86 (s, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,50 (dd, J = 16,6, 9,1 Hz, 1H), 2,45 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,08 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 2,01 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 1,81 - 1,72 (m, 2H), 1,65 - 1,58 (m, 2H), 1,58 - 1,53 (m, 1H), 1,36 - 1,2913C RMN (151 MHz, CDCl3) 8 172,46, 169,63, 156,37, 151,45, 140,47, 137,69, 132,61, 130,06, 129,77, 127,97, 127,49, 126,39, 120,35, 115,58, 110,75, 81,67, 69,32, 57,60, 55,56, 51,31, 39,63, 34,60, 31,63, 31,08, 29,60, 29,21, 28,00, 22,58, 14,06, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H39O2 [M+H]+ 417,3, encontrado 417,9 FTIR (puro): 3355, 3085, 3075, 2950, 2928, 2855, 1738, 1490, 1462, 1240, 1030, 751, 701 cm-1,
(Exo)-3a-(1-(4-bromofen¡l)v¡n¡l)-5-hex¡l-4-fen¡l-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (23a)
Se siguió el procedimiento general para la ciclización mediada por zirconeceno y la desprotección MOM, por medio del uso de 1-bromo-4-etinilbenceno para formar el acetiluro de litio requerido. El aceite crudo resultante se purificó en EtOAc/Hex al 10%.
xo - - ex¡- a- - - ¡ rox¡ en¡ v¡n¡ - - en¡- . . . a. . a- exa ¡ ropen a en- -o
Hidróxido de potasio (3,0 equiv.), tris(dibencilideneacetona) dipaladio(O) (0,01 equiv.), y tBuXPhos (0,04 equiv.) se suspendieron en 1,4-dioxano en un tubo de reacción bajo nitrógeno. (exo)- 3a- (1-(4-bromofenil) vinil)- 5-hexil- 4-fenil-1, 2, 3, 3a, 6, 6a- hexa hidropentalen-1-ol se añadió en dioxano. Se añadió agua (~10 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 16 horas. Después de agitar, la mezcla se vertió sobre agua y acetato de etilo, y la capa orgánica fue lavada con agua y salmuera para remover el 1,4-dioxano. La capa orgánica se secó con MgSO4, se concentró y purificó con sílice en 20-50% EtOAc/Hex.
1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,38 - 7,27 (m, 4H), 7,24 - 7,14 (m, 3H), 6,78 - 6,70 (m, 2H), 5,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 3,95 (s, 1H), 2,38 (dd, J = 16,9, 9,4 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 2,12 -1,93 (m, 4H), 1,78 -1,62 (m, 3H), 1,33 (dd, J = 14,0, 6,7 Hz, 3H), 1,31 -1,17 (m, 5H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H) 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8154,56, 153,99, 141,13, 139,08, 137,37, 136,62, 129,67, 128,96, 127,61, 126,58, 114,52, 82,22, 69,46, 55,65, 40,27, 34,03, 32,03, 31,65, 29,70, 29,38, 27,83, 22,60, 14,09, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H37O2 [M+H]+ 404,3, encontrado 403,9 FTIR (puro): 3323, 3095, 3070, 3040, 2954, 2915, 2855, 1609, 1510, 1457, 1440, 1263, 1231, 837, 701 cm-1,
(Exo)-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(3-fen¡lprop-1-en-2-¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (24)
Se siguió el procedimiento general para ciclización mediada por zirconeceno y desprotección MOM, mediante el uso de prop-2-in-1-il benceno para formar el acetiluro de litio requerido. El aceite crudo resultante se purificó en 5-20% EtOAc/Hex. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,34 - 7,27 (m, 4H), 7,25 - 7,17 (m, 4H), 7,11 - 7,07 (m, 2H), 4,93 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,99 (s, 1H), 3,50 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,39 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,89 (dd, J = 17,2, 9,3 Hz, 1H), 2,39 (d, 1H), 2,25 (dd, J = 17,3, 2,0 Hz, 1H), 2,17 -2,03 (m, 3H), 1,80 - 1,70 (m, 1H), 1,56 -1,51 (m, 1H), 1,42 -1,35 (m, 2H), 1,28 -1,12 (m, 7H), 0,84 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8153,23, 140,85, 140,11, 139,13, 137,34, 129,65, 129,34, 128,28, 127,66, 126,53, 125,96, 95,51, 82,47, 70,23, 55,58, 40,66, 39,43, 34,18, 31,60, 30,21, 29,50, 29,18, 28,09, 22,61, 14,06, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H39O [M+H]+ 403,3, encontrado 403,0 FTIR (puro): 3362, 3070, 3035, 2960, 2926, 2856, 1701, 1599, 1495, 1453, 1032, 908, 753, 732, 705 cm-1,
(Exo)-5-hex¡l-1-h¡drox¡-4-fen¡l-2.3.6.6a-tetrah¡dropentalen-3a(1H)-¡l)(fen¡l)metanona (25)
Se disolvió RJW100 (1,0 equiv.) en DCM y se enfrió a -78 °C. Se burbujeó ozono (en exceso) a través de la solución hasta que la mezcla de reacción se volvió azul. En este punto, se detuvo la corriente de ozono y se agitó la reacción hasta que desapareció el color azul. Se añadió dimetilsulfuro (DMS) y la reacción se agitó brevemente. La solución de reacción después se concentró in vacuo y la mezcla de reacción cruda se purificó en sílice en 0-20% EtOAc/Hex para obtener un aceite transparente, incoloro (14 mg, 63%).
1H RMN (600 MHz, CDCI3) 57,86(d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,46 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 8,7, 6,7 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 6,87 (dd, J = 7,2, 2,3 Hz, 2H), 4,06 (s, 1H), 3,02 (dd, J = 17,5, 10,2 Hz, 1H), 2,90 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 2,76 - 2,64 (m, 1H), 2,33 (dd, J = 17,7, 3,5 Hz, 1H), 2,09 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,00 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 1,85 - 1,66 (m, 2H), 1,49 - 1,36 (m, 2H), 1,29 - 1,15 (m, 6H), 0,85 (dd, J = 14,0, 7,2 Hz, 3H). 13C RMN (101 MHz, CDCl3) 5203,40, 141,99, 139,95, 138,62, 136,24, 131,77, 129,03, 128,56, 128,13, 128,08, 126,99, 80,80, 76,25, 54,62, 40,48, 32,65, 31,62, 30,50, 29,42, 29,28, 27,80, 22,58, 21,59, 14,07, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C27H35O2 [M+H]+ 389,6, encontrado 389,2 FTIR (puro): 3405, 3080, 2955, 2927, 2857, 1698, 1680, 1597, 1446, 1254, 1180, 766, 699 cm-1,
(Exo)-3a-benzil-5-hexil-4-fenil-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-ol (26)
Se preparó una solución de 25 en etilenglicol a temperatura ambiente. Hidrato de hidracina (9,5 equiv.) fue añadido a la mezcla de la reacción antes de calentarla a 100°C durante 1 h. Hidróxido de potasio (10,0 equiv.) se añadió subsecuentemente y la mezcla de la reacción se agitó a 150 °C durante ~ 48 h. Después de agitar, la solución se enfrió a temperatura ambiente, se particionó entre agua y EtOAc, y se extrajo con EtOAc 3x. Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron al vacío. La mezcla de reacción cruda se purificó sobre sílice en 10-20% EtOAc/Hex (2,6 mg, 22%).
1H RMN (600 MHz, DMSO-CDCl3) 57,33 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,21 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,16 - 7,11 (m, 1H), 2,93 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 2,73 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 15,6, 3,2 Hz, 1H), 2,34 (td, J = 8,6, 3,2 Hz, 1H), 2,05 (dd, J = 8,8, 4,9 Hz, 1H), 1,83 (s, 1H), 1,74 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 1,49 - 1,44 (m, 1H), 1,29 -1,18 (m, 5H), 1,12 (dt, J = 6,0, 4,2 Hz, 1H), 0,82 (dt, J = 7,2, 0,6 Hz, 1H). 13C RMN (101 MHz, CDCl3) 5 140,91, 139,79, 139,35, 138,03, 130,45, 129,88, 127,91, 126,51, 126,03, 81,83, 64,26, 52,58, 43,98, 38,94, 33,84, 32,06, 31,59, 29,22, 29,02, 27,81, 22,56, 14,06, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C26H35 [M-H2O]+ 358,3, encontrado 358,3 FTIR (puro): 3440, 3070, 3020, 2965, 2930, 2855, 1498, 1456, 1263, 1185, 1029, 759, 703 cm-1,
Esquema sintético para las modificaciones del alcohol secundario
1.1-Dibromoheptano
Fosfato de trifenilo (1,1 equiv) fue suspendido en DCM y enfriado a -78 °C. Bromo (1,1 equiv) fue añadido gota a gota y agitado brevemente. A continuación, se añadió heptanal (1,0 equiv.) en DCM y se dejó que la reacción alcanzara la temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción a continuación se filtró a través de sílice y se concentró in vacuo. El aceite crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en hexanos al 100% para obtener un aceite claro e incoloro (67%).
Síntesis RJW100
Procedimiento general de ciclización mediada por zirconeceno y desprotección TBS
El dicloruro de bis(ciclopentadienilo)circonio(IV) (dicloruro de circoneceno) (1,2 equiv.) se secó azeotropando el agua latente con benceno cuatro veces antes de colocarlo bajo nitrógeno, disolverlo en tetrahidrofurano (THF) y enfriarlo a -78 °C en un baño de hielo seco/acetona. La solución resultante de dicloruro de circoneceno se trató con nBuLi (2,4 equiv.) para formar una solución clara de color amarillo claro y se dejó agitar. Después de aproximadamente 30 minutos, se añadió azeotrópico tert-butildimetil((7-fenilhept-1-en-6-in-3-il)oxi)silano (19) (1,0 equiv.) en THF seco por porciones para obtener una solución rosa-anaranjada, y la mezcla de reacción se mantuvo a -78 °C durante 30 minutos antes de permitir que se calentara y agitara a temperatura ambiente durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se volvió a enfriar a -78 °C y se añadió el dibromoheptano azeotrópico necesario (1,1 equiv.) en THF seco. Se añadió diisopropilamina de litio recién preparada (LDA, 1,0 M, 1,1 equiv.) a - 78°C y se agitó durante 15 minutos. A continuación, se preparó fenilacetiluro de litio (3,6 equiv.) y se añadió a la mezcla de reacción gota a gota en THF seco. La solución marrón rojiza oscura resultante se agitó a -78 °C durante 1,5 horas. A continuación, la reacción se apagó con metanol y bicarbonato sódico acuoso saturado y se dejó calentar a temperatura ambiente para formar una pasta de color amarillo claro. La solución espesa resultante se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo cuatro veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4 y se concentraron in vacuo. El aceite amarillo resultante se purificó aproximadamente sobre un tapón de sílice y se eluyó con EtOAc/Hexanos al 20% para obtener un aceite amarillo que es una mezcla de fenilacetileno y compuestos bicíclicos bis-protegidos [3,3,0] deseados, que se llevó a cabo sin purificación adicional. Con este procedimiento se obtienen los diastereómeros exo y endo en una proporción de 1,6:1, según determinan las señales características de RMN 1H.
La mezcla bruta (1,0 equiv.) se disolvió en THF, y se añadió fluoruro de tetrabutilamonio (1,5 equiv.) y la solución marrón oscura resultante se agitó abierta al aire durante 18 horas, se concentró y se sometió directamente a cromatografía en gel de sílice en EtOAc/Hexanos al 5-10% para separar los diastereómeros endo y exo (eluyendo endo antes que exo) de los compuestos deseados como aceites claros e incoloros.
5-hexil-4-fenil-3a-(1 -fen¡lv¡n¡l)-3.3 a.6.6a-tetrahidropentalen-1(2H)-ona (27):
Una solución de alcohol (isómero irrelevante, 1,0 equiv.) en acetonitrilo se trató con óxido de N-metilmorfolina (1,5 equiv.) y se dejó agitar hasta homogeneidad antes de añadir perrutenato de tetrapropilamonio (0,1 equiv.). La solución se agitó a temperatura ambiente hasta que se determinó completa por medio de TLC (~10 min). La solución se concentró in vacuo y se sometió directamente a cromatografía en gel de sílice en 10% EtOAc/Hex para obtener el compuesto del título como un aceite claro e incoloro (88% de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CDCl3) 87,38 - 7,25 (m, 6H), 7,24 - 7,19 (m, 4H), 5,20 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 2,44 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 2,34 - 2,23 (m, 2H), 2,15 - 1,95 (m, 5H), 1,89 (ddt, J = 16,5, 7,8, 1,1 Hz, 1H), 1,29 - 1,09 (m, 8H), 0,82 (t, J = 7,0 Hz, 3H). 13C RMN (101 MHz, CDCl3) 8222,79, 153,19, 144,91, 142,47, 137,29, 136,63, 128,95, 128,24, 128,09, 127,59, 127,03, 126,96, 115,26, 109,99, 65,39, 55,50, 38,76, 37,50, 31,54, 29,97, 29,37, 28,33, 27,60, 22,52, 14,05, LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H35O [M+H]+ 385,3, encontrado 385,3 FTIR (puro): 3080, 3053, 2955, 2926, 2855, 1743, 1598, 1574, 1491, 1458, 1441, 906, 765, 701 cm-1,
(Endo o exo)-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1■2■3■3a■6■6a-hexah¡dropentalen-1-¡l sulfamato (28 endo, 28 exo):
Se enfrió a 0°C una solución 1M de cloruro de sulfamoilo (1,2 equiv.) en DMA. Se añadió lentamente una solución del isómero de alcohol apropiado (1,0 equiv.) en DMA, seguida de trietilamina (exceso); la solución resultante se agitó durante una hora. A continuación la solución se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. A continuación, las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera para eliminar el DMA, se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El aceite se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20% EtOAc/Hex con 0,5% de trietilamina, para obtener el compuesto del título como un aceite claro (endo, 78% de rendimiento).
Endo 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,35 -7,24 (m, 8H), 7,23 -7,15 (m, 2H), 5,11 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,87 (td, J = 9,1, 5,2 Hz, 1H), 4,64 (s, 2H), 2,71 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,60 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 17,7, 9,3 Hz, 1H), 2,10 -2,01 (m, 3H), 1,92 - 1,83 (m, 1H), 1,83 - 1,76 (m, 1H), 1,68 (td, J = 12,6, 5,6 Hz, 1H), 1,45 - 1,35 (m, 2H), 1,32 - 1,16 (m, 6H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 5 153,83, 143,49, 143,24, 138,53, 136,48, 129,82, 127,88, 127,68, 127,62, 126,96, 126,78, 115,69, 84,11, 68,22, 47,13, 34,89, 31,63, 31,15, 30,54, 29,76, 29,40, 27,73, 22,59, 14,07, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36NO3S [M-H]- 465,3, encontrado 465,4 Endo FTIR (puro): 3360, 3284, 3080, 3055, 3020, 2955, 2928, 2855, 1558, 1491, 1441, 1356, 1184, 1029, 1004, 913, 851, 775, 703, 668 cm-1,
Exo 1H RMN (500 MHz, CDCI3) 57,36 -7,28 (m, 7H), 7,29 -7,16 (m, 3H), 5,10 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,62 (s, 2H), 2,68 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,40 (dd, J = 18,1, 9,4 Hz, 1H), 2,19 -2,01 (m, 6H), 1,88 - 1,73 (m, 2H), 1,38 - 1,16 (m, 7H), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, cdcl3) 5 153,55, 143,65, 141,37, 138,84, 136,83, 129,56, 127,83, 127,77, 127,71, 126,89, 126,86, 115,59, 93,70, 69,27, 52,76, 40,13, 32,14, 32,00, 31,60, 29,65, 29,36, 27,77, 22,56, 14,06, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36NO3S [M-H]- 465,3, encontrado 465,2 Exo FTIR (puro): 3377, 3284, 3080, 3053, 3019, 2955, 2926, 2854, 1598, 1572, 1558, 1491, 1457, 1440, 1356, 1182, 1073, 1028, 924, 904, 813, 773, 764, 701,667 cm-1,
(Endo o exo)-5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinih-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-il carbamato (29 endo. 29 exo):
El isómero de alcohol requerido (1,0 equiv.) se suspendió en MeCN y se enfrió a -15°C. Se añadió isocianato de clorosulfonilo (2,0 equiv.) y la reacción se agitó durante 2 horas. Después de completarse por medio de TLC, se añadió lentamente ácido hidrocloríco (0,5) y se agitó a temperatura ambiente por 4 horas. La solución se apagó con NaHCO3, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El aceite resultante se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en 5-30% EtoAc/Hex para obtener los compuestos del título como aceites amarillos (79%).
Endo 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 57,34 - 7,23 (m, 5H), 7,24 - 7,18 (m, 5H), 5,04 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,91 -4,87 (m, 0H), 4,54 (s, 2H), 2,66 (td, J = 8,9, 1,8 Hz, 1H), 2,32 (dd, J = 17,7, 1,9 Hz, 1H), 2,10 -1,95 (m, 3H), 1,93 - 1,83 (m, 1H), 1,73 - 1,59 (m, 2H), 1,36 (p, J = 7,3 Hz, 2H), 1,29 - 1,16 (m, 7H), 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Endo 13C RMN (101 MHz, CDCl3) 5156,40, 154,31, 143,67, 143,27, 138,53, 136,90, 129,71, 127,77, 127,69, 127,63, 126,73, 126,59, 115,16, 68,54, 46,99, 34,45, 31,70, 31,07, 30,10, 29,79, 29,39, 27,81,22,61, 14,10, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H39NO3 [M+H2O]- 449,3, 449,1 Endo FTIR (puro): 3490, 3343, 3085, 3050, 3015, 2955, 2926, 2855, 1716, 1598, 1491, 1440, 1392, 1335, 1041, 903, 765, 701 cm-1,
Exo 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 57,41 - 7,19 (m, 10H), 5,08 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,77 (dt, J = 4,2, 1,4 Hz, 1H), 4,56 (s, 2H), 2,42 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,36 (dd, J = 16,3, 8,9 Hz, 1H), 2,19 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 2,14 -1,88 (m, 4H), 1,85 - 1,63 (m, 3H), 1,41 -1,29 (m, 2H), 1,31 -1,16 (m, 5H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 156,59, 154,47, 143,89, 141,92, 138,53, 137,30, 129,61, 127,76, 127,71, 126,75, 126,67, 115,02, 85,61, 69,36, 53,01, 40,34, 32,36, 31,66, 31,54, 29,74, 29,40, 27,81,22,60, 14,11, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H39NO3 [M+H2O]- 449,3, 449,3 Exo FTIR (puro): 3350, 3194, 3055, 2956, 2927, 2855, 1712, 1597, 1544, 1492, 1443, 1408, 1336, 1077, 819, 759, 702 cm-1,
(Endo o exo) 5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinih-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-il metanosulfonato(30 endo. 30 exo):
En un vial de 20 dram equipado con una barra de agitación se disolvió el isómero deseado de RJW100 (1,0 equiv.). Se añadió trietilamina (5,0 equiv.), seguida de cloruro de metanosulfonilo (5,0 equiv.) La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 h antes de concentrarla in vacuo y purificarla por cromatografía en gel de sílice en EtOAc/hexanos al 30%. (Endo: 62,1 mg, 95%; Exo: 150,3 mg, 95%)
Endo 1H RMN (500 MHz, CDCI3) 57,36-7,26(m, 8H), 7,24 - 7,17 (m, 2H), 5,13 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 5,04 - 4,92 (m, 1H), 4,95 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,70 (t, J = 9,0, 1,8 Hz, 1H), 2,60 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 17,5, 9,1 Hz, 1H), 2,08 (ttd, J = 13,5, 6,8, 4,9 Hz, 4H), 1,92 - 1,76 (m, 3H), 1,72 (td, J = 12,5, 5,8 Hz, 1H), 1,40 (p, 2H), 1,33 - 1,18 (m, 4H), 0,88 (t, J = 7,2Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 5 153,71, 143,41, 143,19, 138,52, 136,45, 129,78, 127,89, 127,72, 127,64, 126,99, 126,81, 115,69, 82,85, 68,23, 47,40, 38,23, 34,86, 31,65, 31,11, 30,97, 29,76, 29,41,27,76, 22,60, 14,09, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H38O3S [M] 466,3, encontrado [M-CH3O3S] 368,9 Endo FTIR (puro): 3070, 3028, 2955, 2931,2857, 1570, 1492, 1445, 1356, 1180, 938, 908, 857, 764, 702 cm-1,
Exo 1H RMN (500 MHz, CDCI3) 57,37 -7,25 (m, 8H), 7,27 -7,19 (m, 2H), 5,11 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,63 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 2,41 (dd, J = 17,4, 9,5 Hz, 1H), 2,14 (dd, J = 17,5, 2,0 Hz, 1H), 2,11 - 1,98 (m, 4H), 1,90 - 1,75 (m, 2H), 1,40 - 1,31 (m, 2H), 1,32 - 1,17 (m, 6H), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (151 MHz, CDCI3) 5 153,50, 143,57, 141,32, 138,78, 136,75, 132,75, 129,55, 127,83, 127,76, 127,64, 126,90, 126,86, 115,62, 92,12, 69,21, 53,04, 39,96, 38,73, 32,36, 32,11, 31,58, 29,62, 29,35, 27,75, 22,55, 14,05, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H38O3S [M] 466,3, encontrado [M-CH3O3S] 368,9 Exo FTIR (puro): 3060, 3028, 2960, 2929, 2855, 1560, 1544, 1498, 1441, 1354, 1173, 930, 901, 702 cm-1,
(Endo o exo)-5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinih-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-azida (31 endo. 31 exo)
En un tubo de reacción equipado con una barra agitadora se añadió el isómero mesilado requerido (30 endo o exo, 1.0 equiv.) en DMF. Se añadió azida sódica (10,0 equiv.) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante unas 16 h a 80 °C. Tras agitar, se dejó enfriar la solución a temperatura ambiente y se vertió sobre agua y EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera para eliminar la DMF, se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío. La mezcla de reacción se purificó sobre sílice en 0-10% EtOAc/hex. (Endo: 117,2 mg, 88%; Exo: 45,6 mg, 90%) (Nota: inversión de estereoquímica).
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 57,36 - 7,26 (m, 8H), 7,23 - 7,18 (m, 2H), 5,10 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,87 (ddd, J = 10,5, 8,8, 5,9 Hz, 1H), 2,62 - 2,51 (m, 2H), 2,16 - 2,01 (m, 4H), 1,97 - 1,88 (m, 1H), 1,79 (ddd, J = 12,4, 5,9, 1,8 Hz, 1H), 1,71 (td, J = 12,4, 5,2 Hz, 1H), 1,67 - 1,59 (m, 1H), 1,40 (p, J = 7,5 Hz, 2H), 1,31 -1,19 (m, 5H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 154,20, 143,75, 143,36, 138,51, 136,77, 129,82, 127,84, 127,65, 126,89, 126,70, 115,50, 69,05, 64,86, 47,89, 35,65, 32,51, 31,68, 30,15, 29,80, 29,45, 27,77, 22,62, 14,12, Endo LRMS [ESI] calc'd para C28H34N3412,3 [M+H]+, encontrado 411,8 Endo FTIR (puro): 3085, 3053, 2955, 2929, 2855, 2098 (s), 1491, 1441, 1340, 1259, 905, 775, 763, 701 cm-1,
Exo 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 57,36 - 7,24 (m, 8H), 7,21 (dt, J = 7,5, 1,4 Hz, 2H), 5,09 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 3,64 (s, 1H), 2,44 - 2,35 (m, 2H), 2,14 -1,93 (m, 5H), 1,83 - 1,67 (m, 3H), 1,40 - 1,30 (m, 2H), 1,32 -1,17 (m, 5H), 0,86 (d, J = 7.1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 153,83, 143,76, 141,32, 139,07, 137,03, 129,64, 127,78, 127,77, 127,72, 126,80, 126,75, 115,29, 71,33, 69,34, 52,09, 41,13, 32,64, 31,63, 31,20, 29,69, 29,38, 27,80, 22,58, 14,07, Exo LRMS (ESI) m/z: calc'd para C28H34N3 [M+H]+ 412,3, encontrado 412,3 Exo FTIR (puro): 3080, 3053, 3019, 2955, 2926, 2855, 2097 (s), 1491, 1441, 1341, 1247, 904, 774, 701 cm-1,
(Endo o exo)-5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinih- 1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentaleno-1-carbonitrilo (32 endo. 32 exo)
Se suspendió cianuro de sodio (10,0 equiv.) en DMF, seguido de la adición del isómero mesilado requerido (30 endo o 30 exo) (1,0 equiv.) en DMF. La mezcla se dejó agitar a 100°C durante aproximadamente 40 horas. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera para eliminar la DMF, se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El aceite crudo fue purificado por medio de cromatografía de gel de sílice en 5% EtOAc/Hex para proteger el compuesto del título. (Endo: 21,9 mg, 26%; Exo: 19,9 mg, 47%) (Nota: También suele observarse una cantidad apreciable de producto de eliminación E2, a pesar de la considerable optimización de las condiciones de reacción. Obsérvese también la inversión de la estereoquímica).
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCI3) 57,34 - 7,23 (m, 8H), 7,22 -7,19 (m, 2H), 5,08 (s, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,91 -2,84 (m, 1H), 2,60 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 2,53 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 2,30 (dd, J = 17,6, 8,6 Hz, 1H), 2,15 -1,97 (m, 3H), 1,83 -1,75 (m, 2H), 1,74 - 1,66 (m, 1H), 1,39 (p, J = 7,6 Hz, 2H), 1,31 -1,17 (m, 6H), 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 5 153,37, 143,23, 143,22, 137,89, 136,55, 129,57, 127,88, 127,83, 127,73, 127,05, 126,90, 121,12, 115,80, 69,77, 46,49, 39,10, 34,87, 34,69, 31,59, 30,57, 29,75, 29,46, 27,68, 22,59, 14,07, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H35N [M+H]+ 396,6 encontrado 396,4 Endo FTIR (puro): 3075, 3053, 3025, 2950, 2926, 2854, 2237, 1598, 1573, 1491, 1442, 1378, 1074, 1029, 907, 765, 702 cm-1,
Exo 1H RMN (600 MHz, CDCI3) 57,38 - 7,20 (m, 10H), 5,09 (s, 1H), 5,08 (s, 1H), 2,71 (dd, J = 7,9, 4,9 Hz, 1H), 2,53 (q, J = 11,0, 5,9 Hz, 1H), 2,29 (dd, J = 17,9, 8,4 Hz, 1H), 2,12 -1,98 (m, 4H), 1,92 -1,86 (m, 2H), 1,72 (dt, J = 13,1, 5,2 Hz, 1H), 1,36 -1,15 (m, 8H), 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Exo 13C RMN (75 MHz, CDCI3) 5153,05, 142,91, 141,48, 138,61, 136,60, 129,40, 128,01, 127,92, 127,82, 126,99, 126,95, 123,09, 115,43, 69,57, 51,76, 41,68, 37,48, 33,78, 31,60, 30,52, 29,74, 29,41, 27,79, 22,57, 14,08, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H36N [M+H]+ 398,3, encontrado 398,3 Exo FTIR (puro): 3080, 3051, 3020, 2950, 2926, 2854, 2236, 1598, 1573, 1491, 1441, 1378, 1074, 1029, 905, 768, 700 cm-1,
(Endo o exo)- 5-hexil- 4-fenil- 3a- (1-fenilvinM)-1,2, 3 ,3a, 6, 6a- hexahidropentalen-1-amina (33 endo, 33 exo)
El isómero de azida requerido (31 endo o 31 exo) (1,0 equiv.) se disolvió en Et2O anhidro bajo nitrógeno y después se añadió LiAlH4 (4,0M en Et2O, 10,0 equiv.) gota a gota y se agitó a temperatura ambiente durante ~1 h, hasta que la reacción se completó por TLC. La reacción se apagó por medio de enfriamiento a 0°C y dilución con Et2O antes de la lenta adición de 1mL por gramo de LiAlH4 agua a continuación 4 M NaOH. Antes de verter sobre EtOAc. La capa orgánica se lavó con sal de Rochelle y salmuera para eliminar la DMF y las sales de litio, se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío. El aceite resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice en EtOAc/Hex al 50% con trietilamina al 1% para obtener un aceite incoloro. (endo: 47,9 mg, 95%, exo: 40,0 mg, 92%).
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 57,37 - 7,19 (m, 10H), 5,08 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 3,30 (ddd, J = 11,0, 8,8, 5,7 Hz, 1H), 2,48 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 2,42 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 2,12 -2,00 (m, 2H), 1,83 - 1,78 (m, 1H), 1,73 - 1,68 (m, 2H), 1,46 - 1,37 (m, 2H), 1,35 - 1,20 (m, 8H), 0,88 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Endo 13C RMN (151 MHz, CDCl3 5 155,08, 144,23, 142,88, 139,44, 137,15, 129,78, 127,72, 127,66, 127,56, 126,61, 126,49, 115,01, 69,46, 55,31, 49,06, 34,55, 34,08, 33,25, 31,67, 29,87, 29,49, 27,97, 22,63, 14,11, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36N [M+H]+ 386,28, encontrado 385,9 Endo FTIR 3079, 3052, 3052, 3018, 2951,2926, 2854, 1667, 1614, 1598, 1572, 1490, 1458, 1441, 1378, 1330, 1264, 1239, 1180, 1155, 1102, 1074, 1029, 1001, 945, 903, 845, 775, 761, 738, 700, 677 cm-1,
Exo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 57,33 - 7,28 (m, 4H), 7,28 - 7,21 (m, 6H), 5,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 3,01 (dt, J = 5,4, 3,9 Hz, 1H), 2,32 - 2,26 (m, 1H), 2,08 - 2,02 (m, 4H), 1,79 - 1,72 (m, 1H), 1,65 - 1,60 (m, 1H), 1,42 - 1,17 (m, 10H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 5 153,82, 143,42, 141,30, 139,03, 137,13, 129,50, 128,11, 127,77, 127,63, 126,71, 126,67, 114,91,69,20, 61,18, 40,53, 32,10, 31,62, 30,31, 29,69, 29,43, 27,82, 22,57, 14,06, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H36N [M+H]+ 386,28, encontrado 385,9 Exo FTIR 3079, 3052, 3018, 2953, 2926, 2855, 1618, 1597, 1572, 1491, 1458, 1440, 1378, 1331, 1264, 1181, 1155, 1074, 1028, 962, 901, 844, 803, 764, 736, 700, 679 cm-1,
(Endo o exo) 5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1■2■3■3a■6■6a-hexah¡dropentalen-1-¡l)-1H-1■2■3-tr¡azol (34 endo, 34 exo):
En un vial de 20 dram se disolvieron en agua ácido ascórbico (1,0 equiv.) y carbonato potásico (6,0 equiv.). Pentahidrato de sulfato de cobre (1,0 equiv.) fue añadido a continuación y la reacción fue agitada brevemente. Se añadió acetileno de trimetilo (6,0 equiv.) en MeOH y posteriormente se añadió la mezcla cruda del isómero de azida requerido (31 endo o 31 exo) (1,0 equiv.). La mezcla de reacción se dejó agitar durante la noche antes de diluirla con agua y se extraerla con EtOAc. Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 antes de concentrarse in vacuo. El aceite crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en EtOAc/hexanos al 30%.
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,70 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,36 - 7,25 (m, 8H), 7,24 - 7,21 (m, 2H), 5,14 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 4,96 (ddd, J = 11,5, 9,5, 6,7 Hz, 1H), 2,94 (td, J = 9,2, 1,9 Hz, 1H), 2,29 - 2,20 (m, 2H), 2,03 - 1,84 (m, 5H), 1,27 - 1,09 (m, 9H), 0,81 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8153,77, 143,46, 138,44, 133,33, 129,70, 127,91, 127,83, 127,69, 127,03, 126,93, 122,88, 115,86, 69,13, 63,41, 48,60, 35,66, 32,60, 31,54, 29,74, 29,39, 29,34, 27,65, 22,55, 14,06, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C30H38N3 [M+H]+ 440,3, encontrado 440,4 Endo FTIR (puro): 3080, 3053, 2956, 2927, 2854, 1598, 1573, 1491, 1441, 1288, 1073, 1029, 905, 775, 702 cm-1,
Exo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,66 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,37 - 7,20 (m, 10H), 5,13 (dd, J = 0,9 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 4,79 - 4,72 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 8,6, 3,8 Hz, 1H), 2,41 (dd, J = 17,2, 8,6 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 2,18 -1,98 (m, 4H), 1,85 - 1,77 (m, 1H), 1,40 - 1,33 (m, 2H), 1,29 -1,16 (m, 7H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (101 MHz, CDCl3) 8 153,39, 143,17, 141,25, 139,19, 136,72, 129,56, 127,96, 127,87, 127,77, 127,08, 126,92, 121,73, 115,68, 109,99, 69,99, 69,30, 53,10, 41,18, 32,97, 32,88, 31,61,29,75, 29,41,27,82, 22,58, 14,08, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C30H38N3 [M+H]+ 4,3, encontrado 439,3 Exo FTIR (puro): 3088, 3055, 2955, 2925, 2855, 1599, 1491, 1446, 1265, 1074, 910, 773, 703 cm-1,
N-((endo o exo)-5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-1.2.3.3a.6.6a-hexahidropentalen-1-il)acetamida (35 endo. 35 exo):
Una disolución en DCM de cloruro de acetilo (1,5 equiv.) se enfrió a 0°C, y se trató lentamente con una disolución del isómero de amina requerido (33 endo o 33 exo) (1,0 equiv.) en DCM, seguido de trietilamina (3,0 equiv.); la disolución resultante se agitó durante una hora. La solución se diluyó entonces con agua y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. A continuación el aceite se purificó por cromatografía en gel de sílice 35% EtOAc/Hex para obtener el compuesto del título como un aceite amarillo. (71 %)
Endo 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,35 - 7,27 (m, 5H), 7,25 - 7,22 (m, 5H), 5,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,25 (dtd, J = 10,5, 8,6, 6,2 Hz, 1H), 2,66 (ddd, J = 16,9, 8,4, 1,6 Hz, 1H), 2,14 -2,00 (m, 4H), 1,99 (s, 3H), 1,87 (dtd, J = 11,7, 6,0, 2,3 Hz, 1H), 1,76 (td, J = 12,2, 11,7, 5,8 Hz, 1H), 1,66 (ddd, J = 12,7, 5,9, 2,3 Hz, 1H), 1,43 - 1,26 (m, 1H), 1,30 - 1,18 (m, 8H), 0,87 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 169,34, 154,62, 143,56, 141,66, 138,87, 137,23, 129,62, 127,87, 127,78, 127,74, 126,87, 126,64, 114,82, 68,95, 59,48, 54,41, 40,86, 32,98, 32,10, 31,64, 29,80, 29,42, 27,82, 25,99, 23,56, 22,59, 14,08, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C30H39NO [M+H]+ 430,3, encontrado 430,3 Endo FT-IR (puro): 3284, 3079, 3055, 2954, 2924, 2853, 1646, 1551, 1491, 1441, 1375, 1301, 1249, 902, 774, 701, 668 cm-1,
Exo 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 87,35 - 7,25 (m, 8H), 7,27 - 7,19 (m, 2H), 5,35 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 5,07 (s, 2H), 3,96 (dd, J = 8,2, 4,0 Hz, 1H), 2,34 (dd, J = 17,2, 8,6 Hz, 1H), 2,25 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 2,22 - 2,16 (m, 1H), 2,08 - 2,02 (m, 2H), 1,93 (s, 3H), 1,90 - 1,82 (m, 2H), 1,75 - 1,66 (m, 1H), 1,40 - 1,14 (m, 9H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8169,45, 154,32, 143,48, 143,00, 141,25, 139,28, 136,88, 129,47, 127,99, 127,79, 127,65, 126,72, 114,96, 69,04, 53,14, 47,38, 35,24, 32,05, 31,68, 29,90, 29,55, 28,13, 23,34, 22,62, 14,09, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C30H39NO [M+H]+ 430,3, encontrado 430,3 Exo FTIR (puro): 3280, 3079, 3055, 2955, 2854, 1646, 1598, 1550, 1491, 1441, 1375, 1304, 1178, 1074, 1029, 903, 766, 701,668 cm-1,
1-((endo o exo)-5- hexil- 4-fenil-3a- (1-fenilvinil)-1.2, 3, 3a. 6, 6a- hexahidropentalen-1-il)urea (36 endo. 36 exo):
A un matraz de reacción cargado con el isómero de amina requerido (33 endo o 33 exo) (1,0 equiv.) y cianato sódico (10,0 equiv.) se añadió agua y ácido clorhídrico acuoso 1M (2,0 equiv.). La mezcla de la reacción se calentó a 90°C y se agitó durante aproximadamente 72 horas a esta temperatura antes de diluirse con 3M NaOH acuoso y extraerse con Et2O. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. A continuación el aceite se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice con EtOAc para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco. (Endo: 6,9 mg, 41%; Exo: 4,5 mg, 37%).
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,34 - 7,19 (m, 10H), 5,06 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,32 (s, 2H), 3,97 (s, 1H), 2,60 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 2,22 (d, J = 17,3 Hz, 1H), 2,09 - 2,03 (m, 2H), 1,93 -1,85 (m, 1H), 1,73 (td, J = 12,5, 5,7 Hz, 1H), 1,67 (ddd, J = 12,9, 6,1, 1,9 Hz, 1H), 1,39 -1,31 (m, 2H), 1,29 - 1,17 (m, 8H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 157,89, 154,39, 143,57, 143,15, 139,01, 136,83, 129,54, 127,88, 127,72, 127,68, 126,76, 126,69, 115,11,69,16, 47,58, 35,05, 32,13, 31,87, 31,63, 29,89, 29,51, 27,97, 22,60, 14,07, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H37N2O [M+H]+ 429,7, encontrado 428,9 Endo FT-IR (puro): 3348, 3080, 3053, 3018, 2952, 2923, 2853, 1740, 1655, 1599, 1552, 1491, 1458, 1377, 1341, 1287, 1234, 1212, 1156, 1104, 1075, 1029, 966, 902, 860, 773, 763, 725, 701, 669 cm-1,
Exo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,34 - 7,19 (m, 10H), 5,06 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,25 (s, 2H), 3,70 (s, 1H), 2,36 (dd, J = 17,2, 8,9 Hz, 1H), 2,22 - 2,17 (m, 2H), 2,05 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 1,94 - 1,80 (m, 2H), 1,72 - 1,66 (m, 1H), 1,59 - 1,52 (m, 1H), 1,33 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,28 - 1,17 (m, 6H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 157,74, 154,49, 143,59, 141,50, 138,97, 137,17, 129,61, 127,83, 127,77, 127,71, 126,84, 126,65, 114,89, 68,96, 60,87, 54,41, 41,05, 32,81, 32,37, 31,62, 29,76, 29,69, 29,40, 27,81, 22,57, 14,06, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H37N2O [M+H]+ 429,7, encontrado 428,9 Exo FTIR (puro): 3317, 3079, 3053, 3018, 2954, 2923, 2854, 1641, 1591, 1545, 1491, 1459, 1440, 1378, 1339, 1261, 1195, 1182, 1157, 1075, 1028, 903, 844, 803, 775, 764, 720, 700, 669 cm-1,
(Endo o exo)-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-¡l sulfamida (37 endo o 37 exo):
A una solución del isómero de amina requerido (33 endo o 33 exo) (1,1 equiv.) y trietilamina (2,0 equiv.) en DCM bajo nitrógeno se añadió una solución 0,5M de cloruro de 2-oxo-1,3-oxazolidin-3-sulfonilo en DCM (1,0 equiv.). (preparado de acuerdo con el procedimiento de Borghese et al.). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante tres horas y a continuación se concentróin vacuohasta llegar a un sólido. Al sólido crudo resultante se añadió amoníaco (0,5 M en dioxano, 1,5 equiv.) y trietilamina (3,0 equiv.). A continuación, la solución se calentó en un tubo sellado a 85 °C durante la noche. Tras enfriar a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con 3:3:94 MeOH:Et3N:EtOAc y después se pasó por una almohadilla de sílice. El eluyente se concentró in vacuo y se purificó por cromatografía en gel de sílice en 20-30% EtOAc/hexanos para obtener el compuesto del título como un aceite incoloro. (Endo: 21,6 mg, 60%; Exo: 5,4 mg, 36%)
Endo 1H RMN (600 MHz, CDCl3) 87,33 - 7,23 (m, 8H), 7,20 - 7,17 (m, 2H), 5,09 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,44 (s, 2H), 4,36 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,84 - 3,77 (m, 1H), 2,62 (td, J = 8,9, 2,0 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 17,5, 2,0 Hz, 1H), 2,20 -2,13 (m, 1H), 2,08 -2,04 (m, 2H), 2,00 - 1,95 (m, 1H), 1,74 - 1,70 (m, 2H), 1,50 - 1,43 (m, 1H), 1,42 -1,16 (m, 8H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Endo 13C RMN (126 MHz, CDCl3) 8 154,13, 143,56, 142,84, 139,30, 136,58, 129,64, 127,80, 127,74, 126,87, 126,78, 115,49, 68,80, 57,16, 47,44, 35,42, 32,32, 31,97, 31,60, 29,83, 29,48, 27,92, 22,59, 14,07, Endo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C28H37N2O2S [M+H]+ 465,7, encontrado 464,8 Endo FT-IR (puro): 3278, 3080, 3053, 3019, 2954, 2926, 2854, 1718, 1618, 1598, 1571, 1491, 1440, 1323, 1160, 1118, 1095, 1075, 1029, 1014, 906, 774, 763, 720, 700 cm-1,
Exo 1H RMN (600 MHz, CDCI3) 87,34 -7,24 (m, 8H), 7,23 -7,18 (m, 2H), 5,08 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,21 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,58 -3,52 (m, 1H), 2,40 (dd, J = 16,9, 8,9 Hz, 1H), 2,36 -2,31 (m, 1H), 2,18 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 2,05 (td, J = 7,5, 2,6 Hz, 2H), 1,99 - 1,85 (m, 2H), 1,76 - 1,69 (m, 2H), 1,38 - 1,30 (m, 1H), 1,30 -1,15 (m, 7H), 0,86 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Exo 13C RMN (126 MHz, CDCI3) 8 154,08, 143,53, 141,15, 139,27, 136,94, 129,62, 127,86, 127,74, 126,93, 126,75, 115,21, 68,77, 63,78, 54,03, 40,83, 32,84, 32,30, 31,62, 29,71, 29,69, 29,37, 27,81, 22,57, 14,05, Exo LRMS (ESI, APCI) m/z: calc'd para C29H37N2O [M+H]+ 465,7, encontrado 464,8 Exo FTIR (puro): 3277, 3080, 3053, 3018, 2923, 2854, 1720, 1621, 1598, 1572, 1491, 1455, 1441, 1376, 1321, 1158, 1075, 1029,
A un matraz de fondo redondo secado a la llama se añadió hidróxido potásico (10,0 eq) que estaba suspendido en THF (0,1 M). El isómero de nitrilo requerido (32 endo o 32 exo) (1,0 eq) fue entonces añadido en THF gota a gota y la solución resultante se calentó a 65°C durante 48 horas. A continuación, la solución se lavó con agua (3x) y EtOAc (3x). A continuación, las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera. La solución resultante se secó con Na2SO4 y se evaporó hasta sequedad. A continuación, el aceite se purificó por medio de cromatografía en columna en 5-10% EtOAc/hexanos.
Endo 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,18 (m, 10H), 5,12 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 3,60 (dt, J = 18,3, 6,6 Hz, 1H), 2,77 -2,66 (m, 1H), 2,40 -2,16 (m, 1H), 2,11 -1,99 (m, 2H), 1,93 - 1,75 (m, 1H), 1,66-1,56 (m, 2H), 1,47-1,23 (m, 4H), 0,97 - 0,76 (m, 3H). LCMS (90% MeCN/H2O): 2,15 min; m/z 414,2,.
Exo 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,18 (m, 10H), 5,12 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 3,43 (bs, 1H), 2,40 - 2,16 (m, 1H), 2,11 -1,99 (m, 4H), 1,93 -1,75 (m, 6H), 1,47-1,23 (m, 10H), 0,84 (td, J = 7,2, 1,1 Hz, 3H). LCMS (90% MeCN/H2O): 2,34 min; m/z 414,7,.
(Endo o exo)-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡let¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (39 endo. 39 exo)
Se cargó un matraz de fondo redondo secado a la llama con Pd/C (10 % en peso) y se colocó bajo argón. El sólido se suspendió en EtOAc (0,1 M) y se añadió gota a gota el diastereómero apropiado de RJW100 (1,0 eq) en EtOAc (0,1 M). La solución resultante se rellenó con hidrógeno y se agitó durante 18 horas. A continuación la mezcla se filtró a través de un tapón de sílice y se evaporó a secado. El aceite resultante se purificó por medio de cromatografía en columna en 5-10% EtOAc/hexanos.
Endo 1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,18 - 6,99 (p, J = 2,2 Hz, 6H), 6,98 - 6,93 (m, 2H), 6,58 - 6,54 (m, 2H), 4,49 (dt, J = 11,6, 6,6 Hz, 1H), 2,68 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 2,60 - 2,55 (m, 1H), 2,53 - 2,46 (m, 1H), 2,18 - 2,08 (m, 2H), 2,04 (dt, J = 11,8, 7,5 Hz, 1H), 1,68 - 1,57 (m, 2H), 1,37 (dd, J = 14,0, 9,6 Hz, 2H), 1,18 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,15 - 0,96 (m, 6H), 0,77 (t, J = 7,3 Hz, 3H). Endo 13C RMN (600 MHz, cloroformo-d) 8145,77, 141,05, 128,35, 127,33, 127,28, 125,50, 125,36, 77,22, 75,72, 64,65, 60,06, 53,58, 44,25, 44,01, 33,86, 32,73, 32,07, 31,76, 30,37, 29,71,29,44, 28,50, 22,52, 20,11, 14,03,
Exo 1H RMN (600 MHz, cloroformo-d) 87,08 - 7,00 (m, 3H), 6,95 - 6,88 (m, 3H), 6,68 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 6,58 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,20 (dt, J = 5,0, 2,2 Hz, 1H), 2,77 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 2,53 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,24 - 1,98 (m, 5H), 1,80 (qd, J = 8,0, 7,5, 3,4 Hz, 1H), 1,64 (ddd, J = 13,6, 9,1, 4,5 Hz, 2H), 1,48 (dd, J = 13,7, 7,1 Hz, 5H), 1,32 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,16 - 0,94 (m, 9H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo 13C RMN (400 MHz, cloroformo-d) 8 146,99, 140,97, 130,62, 128,24, 127,14, 127,03, 125,20, 124,75, 83,37, 77,19, 64,16, 62,14, 57,43, 45,46, 42,60, 38,19, 36,77, 36,36, 31,72, 31,29, 29,93, 29,69, 29,39, 28,42, 22,49, 21,08, 14,01,
((((Endo o exo)-5- hexil- 4-fenil- 3a- (1-fenilvinil)- 1, 2, 3, 3a, 6.6a-hexah¡dropentalen-1-¡l)ox¡)carbonil)ác¡do sulfámico (40 endo, 40 exo)
En un matraz de fondo redondo secado a la llama se añadió el isómero apropiado (29 endo, o 29 exo) en ACN (0,1 M). Se añadió isocianato de clorosulfonilo (2,0 eq) después de enfriar la solución a -15 °C. Tras agitar unos 10 minutos, se añadió agua (0,04 M) y se calentó a 60 °C durante unas 18 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la solución resultante se apagó con agua y se ajustó a pH 5, La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se evaporaron hasta sequedad. El aceite resultante fue purificado por medio de cromatografía de columna en 50% EtOAc/hex.
Endo 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,32 - 7,17 (m, 11H), 5,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,96 -4,87 (m, 2H), 4,62 (s, 1H), 2,66 (td, J = 8,9, 1,9 Hz, 1H), 2,33 (dd, J = 16,5, 1,4 Hz, 1H), 2,10 -1,96 (m, 5H), 1,93 - 1,86 (m, 1H), 1,70 -1,60 (m, 3H), 1,31 -1,18 (m, 9H), 0,89 - 0,84 (m, 3H).
Exo 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,32 - 7,18 (m, 10H), 5,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,98 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,75 -4,70 (m, 1H), 2,37 (td, J = 8,9, 1,1 Hz, 1H), 2,34 - 2,27 (m, 1H), 2,18 - 2,15 (m, 1H), 2,04 - 1,91 (m, 6H), 1,78 - 1,65 (m, 3H), 1,36 -1,15 (m, 9H), 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
(Endo o exo^-hexiM -fenil^a-d-fenilvinih-l^^^a^^a-hexahidropentalen-l-il sulfamoilcarbamato (41 endo, 41 exo)
En un matraz de fondo redondo secado a la llama se añadió 6 en ACN (0,1 M) y posteriormente se añadió isocianato de clorosulfonilo (2,0 eq) después de enfriar la solución a -15°C. Tras agitar unos 10 minutos, se añadió hidróxido de amonio (0,04 M) y se calentó a 60°C durante unas 18 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la solución resultante se apagó con una solución saturada de bicarbonato a pH 9, La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se evaporaron hasta sequedad. El aceite resultante se purificó por medio de cromatografía en columna en EtOAc/hex al 50% con trietilamina al 1%.
Exo 1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 87,36 -7,28 (m, 8H), 7,22 -7,18 (m, 2H), 5,16 (s, 2H), 5,12 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 2,48 - 2,41 (m, 2H), 2,21 - 2,13 (m, 1H), 2,04 (ddd, J = 8,6, 3,9, 2,0 Hz, 2H), 1,98 - 1,75 (m, 5H), 1,39 -1,18 (m, 9H), 0,87 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Endo 1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 87,35 - 7,19 (m, 10H), 5,22 (s, 2H), 5,12 - 5,04 (m, 2H), 4,97 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 2,71 (dd, J = 8,8, 1,9 Hz, 1H), 2,30 (dd, J = 17,3, 1,9 Hz, 1H), 2,12 - 2,04 (m, 2H), 1,97 (q, J = 6,3 Hz, 1H), 1,81 -1,69 (m, 3H), 1,40 - 1,20 (m, 9H), 0,94 - 0,83 (t, 3H).
5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-3■3a■6■6a-tetrah¡dropentalen-1(2H)-ona oxima (42)
Se cargó un matraz de fondo redondo secado a la llama con hidrocloruro de hidroxilamina (1,2 eq) y acetato de sodio (1,3 eq) antes de rellenarlo con argón. Los sólidos se disolvieron en una mezcla de EtOH/agua (4:1, 0,1 M). 27 (1,0 eq) en EtOH se añadió gota a gota y se calentó a 80 °C durante 6 horas. A continuación, la solución se lavó con agua (3x) y EtOAc (3x). A continuación, las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera. La solución resultante se secó con Na2SO4 y se evaporó hasta sequedad. A continuación, el aceite se purificó por medio de cromatografía en columna en EtOAc/hexanos al 5%.
1-et¡n¡l-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-ol (43)
Una solución de 27 (1,0 eq) en THF seco se enfrió a -78 °C en un matraz de fondo redondo secado a la llama bajo nitrógeno. A continuación se añadió etinil bromuro de magnesio (0,5 M, 1,5 eq) en gotas. La solución resultante se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente. Se añadió cloruro amónico a la solución y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 y se evaporaron a secado. El aceite resultante se purificó en 0-10% EtOAc/hex.
Endo 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,34 -7,14 (m, 10H), 5,06 (s, 1H), 5,00 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,11 (qd, J = 7,1, 1,1 Hz, 1H), 2,73 -2,58 (m, 2H), 2,44 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 2,12 - 1,81 (m, 5H), 1,74 (dt, J = 12,2, 5,4 Hz, 1H), 1,36 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,32 - 1,12 (m, 9H), 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (101 MHz, cloroformo-d) 8154,45, 143,66, 142,53, 139,19, 136,87, 129,76, 127,90, 127,69, 127,67, 126,73, 126,65, 114,90, 88,50, 75,17, 71,45, 68,71, 57,12, 39,84, 34,46, 32,40, 31,63, 29,78, 29,42, 27,86, 22,58, 21,06, 14,19, 14,08,
(Endo o exo) (5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡nil)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-10 ¡l)metanam¡na (48)
A un tubo de reacción secado en horno bajo nitrógeno se añadió hidruro de litio y aluminio. Después de ser suspendido en éter, el diastereómero apropiado de 32 (1,0 equiv) en éter fue añadido gota a gota. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 18 h antes de enfriarla con agua y NaOH 1M, filtrarla a través de celita y evaporarla al vacío. El aceite crudo resultante se purificó en sílice basificado en 10% MeOH/DCM.
(Endo o exo) 5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-¡l d¡h¡drogenofosfato (49)
En un vial de reacción bajo nitrógeno, se disolvió RJW100 (1,0 equiv.) en acetonitrilo. Al vial de reacción se añadió trimetilamina (4,0 equiv.) y cloruro de fosforilo (2,0 equiv.) La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 4 h antes de apagarse con agua (en exceso) y concentrarse. El aceite crudo resultante se purificó en sílice basificado en 10% MeOH/DCM.
(Endo o exo)-5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentalen-1-¡l carbamo¡lsulfamato (50)
En un tubo de reacción bajo nitrógeno se añadió NaH (1,5 equiv.) en THF. La solución se enfrió a 0 C antes de añadir una solución del sulfamato requerido (28 endo, 28 exo) (1,0 equiv.) en THF. Se añadió una solución de carbonildiimidazol (2,0 equiv.) en THF y se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta temperatura ambiente. Tras agitar durante 1 h, se añadió amoníaco (7N en MeOH) gota a gota y se agitó durante ~3h. Tras dejar agitar, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera (asegurándose de que la capa acuosa era básica). La capa orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se concentró in vacuo. El aceite crudo se purificó sobre sílice en EtOAc al 50% a 10%MeOH/DCM.
Endo: 1RMNH (400 MHz, Cloroformo-d) 87,35 (s, 2H), 7,32 - 7,25 (m, 4H), 7,24 - 7,21 (m, 2H), 7,16 (ddd, J = 7,2, 3,6, 1,8 Hz, 2H), 5,08 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,06 - 4,97 (m, 1H), 4,93 - 4,89 (m, 1H), 4,89 - 4,80 (m, 1H), 3,74 (s, 2H), 3,74 (s, 2H), 4,89 -4,80 (m, 1H) 3,74 (s, 2H), 2,67 (td, J = 8,8, 2,3 Hz, 1H), 2,62 -2,48 (m, 1H), 2,12 (ddd, J = 17,8, 9,1, 3,9 Hz, 1H), 2,06 -2,00 (m, 1H), 1,76 (ddd, J = 8,5, 6,4, 3,4 Hz,1H),1,67(td,J=12,6,5,7Hz,1H),1,35(d,J=6,4Hz,4H),1,28-1,16(m,7H),0,83(t,J=7,0 Hz, 3H). LRMS [ESI-APCI] calc'd para C28H33 [M-CH3N2O4S]+ 369,3, encontrado 369,2
Exo: 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 87,28 -7,25 (m, 2H), 7,24 -7,22 (m, 1H), 7,20 -7,12 (m, 5H), 5,39 (d, J = 48,0 Hz, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,93 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 3,54 (s, 3H), 2,64 -2,55 (m, 1H), 2,33 -2,18 (m, 1H), 1,74 - 1,57 (m, 2H), 1,31 -1,10 (m, 14H), 0,81 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Exo LRMS [ESI-APCI] calc'd para C28H33 [M-CH3N2O4S]+ 369,3, encontrado 369,2
5'-hex¡l-4'-fen¡l-3a'-(1-fen¡lv¡n¡n-3'.3a'.6'.6a'-tetrahidro-2'H-sp¡rorox¡rano- 52.1'-pentalenol
Se disolvió trimetilsililioduro (3,0 equiv.) en un vial de reacción abierto al aire. Se añadió hidróxido de potasio (12,0 equiv.) y se agitó hasta que se disolvió; a continuación, se añadió agua (~20 equiv.). 27 en acetonitrilo antes de calentar la reacción a 60 °C durante 16 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de celita. Después el filtrado se vertió en agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas se concentraron in vacuo y el aceite crudo se purificó sobre sílice en 5-10% EtOAc/Hex.
3-(am¡nomet¡l)-5-hex¡l-6-fen¡l-6a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.4.6a-hexah¡dropentalen-2-ol (51)
En un tubo de reacción bajo nitrógeno, el expoxido preparado 5'-hexil-4'-fenil-3a'-(1-fenilvinil)-3',3a',6',6a'-tetrahidro-2'H-espiro[oxirano- 52,1'-pentaleno] (1,0 equiv.) se disolvió en acetonitrilo. Se añadió amonio en metanol (7N, exceso). El tubo de reacción se tapó y se calentó a 60 C durante 18 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El aceite crudo resultante se purificó sobre sílice en -10% MeOH/DCM. ((5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-3,3a,6,6a-tetrahidropentalen-1-il)oxi)trietilsilano Bajo nitrógeno, se añadió diisopropilamida de litio recién preparada (1,1 equiv.) a THF y la solución se enfrió a -78 C y se añadió 27 (1,0 equiv.) en THF. La mezcla de reacción se agitó a -78 C durante 20 minutos antes de la adición de clorhídro de trietilsililo (2,1 equiv.). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h y se dejó templar a temperatura ambiente antes de enfriarla con cloruro amónico. La mezcla cruda fue entonces extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron in vacuo. El aceite crudo resultante se purificó por cromatografía sobre sílice eluyendo con EtOAc en heptano.
(Exo o endo) 5-hex¡l-2-h¡drox¡-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-3.3a.6.6a-tetrahidropentalen-1(2H)-ona
Bicarbonato de sodio (5,0 equiv.) y ácido meta-cloroperoxibenzoico (1,2 equiv.) fueron añadidos en un tubo de reacción y rellenado con nitrógeno. Hexanos fueron añadidos y la suspensión resultante du enfriada a -15 °C. ((5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-3,3a,6,6a-tetrahidropentalen-1-il)oxi)trietilsilano (1,0 equiv.) en hexano fue añadido al tubo de reacción y la mezcla resultante se dejó agitar durante 1 h antes de verterse en agua y extraerse con acetato de etilo. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron in vacuo. El aceite crudo resultante se purificó en EtOAc/Hex al 10%.
5-hex¡l-4-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.2.3.3a.6.6a-hexah¡dropentaleno-1.2-d¡ol (52)
(exo o endo) Se disolvió 5-hexil-2-hidroxi-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-3,3a,6,6a-tetrahidropentalen-1(2H)-ona (1,0 equiv.) en metanol y se añadió borohidruro sódico (en exceso). La mezcla de reacción se agitó hasta que cesó la efervescencia. La mezcla de reacción cruda se vertió sobre agua y se extrajo con EtOAc, se secó con sulfato de magnesio y se concentró al vacío. El aceite crudo resultante se purificó sobre sílice en 50% EtOAc/Hex.
Síntesis de derivados adicionales
El procedimiento sintético para preparar los compuestos 44, 45a, 45b, 46a, 46b y 45c se proporciona en la figura 8,
Ácido 10-(6-oxo-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-il)decano¡co (44)
Una solución de 11f (1,0 equiv.) en acetonitrilo fue tratada con óxido de N-metilmorfolina (1,5 equiv.) y se dejó agitar hasta la homogeneidad antes de añadir perrutenato de tetrapropilamonio (0,1 equiv.) La solución se agitó a temperatura ambiente hasta que se determinó completa por medio de TLC (~10 min). La solución se concentró in vacuo y se sometió directamente a cromatografía en gel de sílice en 10% EtOAc/Hex para conseguir el compuesto del título como un aceite transparente, incoloro.
Ácido 10-(endo)-6-h¡drox¡-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)decano¡co (45a)
En un vial de centelleo se disolvió 44 en MeOH. Se añadió borohidruro de sodio (1,1 equiv.), y la reacción tuvo permiso de agitarse hasta completarse (30 min). A continuación, la mezcla se concentró y se hizo pasar por un tapón corto de sílice (eluyendo con EtOAc). La reacción es selectiva para el endodiastereómero mostrado en 45a.
Ác¡do 10-(endo)-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-6-(sulfamo¡lox¡)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)decano¡co (45b)
En un vial de centelleo, 45a se disolvió en DMA. Clorhídro de sulfamoil (1,1 equiv.) fue añadido y se dejó agitar durante 1 hora antes de la adición de trietilamina (1,1 equiv.). Después la mezcla de reacción se dejó agitar durante 10 minutos más. La solución resultante se concentró y se purificó sobre sílice en 20-100% EtOAc/Hex (1% ácido acético).
Ácido 10-(exo)-3-fenil-3a-(1-fenilvinil)-6-(sulfamoiloxi)-1.3a.4.5.6.6a-hexahidropentalen-2-il)decanoico (45c)
En un vial de centelleo, se disolvió 11f en DMA. Se añadió cloruro de sulfamoilo (1,1 equiv.) y se dejó agitar durante 1 hora antes de añadir trietilamina (1,1 equiv.). Después la mezcla de reacción se dejó agitar durante 10 minutos más. La solución resultante se concentró y se purificó sobre sílice en 20-100% EtOAc/Hex (1% ácido acético).
1H RMN (500 MHz, cloroformo-d) 87,38 - 7,13 (m, 10H), 5,08 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,83 (s, 2H), 4,72 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 2,66 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 2,35 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 2,12 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 2,09 - 1,93 (m, 7H), 1,87 - 1,71 (m, 2H), 1,70 - 1,58 (m, 3H), 1,39 - 1,10 (m, 10H). 13C RMN (126 MHz, cdcl3) 8176,48, 153,48, 143,61, 141,35, 138,91, 136,81, 129,53, 127,81, 127,78, 127,72, 126,88, 115,57, 93,70, 69,29, 52,81, 40,13, 33,32, 32,08, 32,06, 29,43, 29,24, 28,87, 28,83, 28,79, 28,75, 27,51, 24,53, FT-IR (puro): 3475, 3275, 3080, 3053, 3019, 2924, 2853, 1707, 1598, 1572, 1491, 1457, 1440, 1357, 1260, 1181, 1092, 1075, 1027, 927, 904, 800, 763, 701 cm-1,Ácido 10-(endo)-6-am¡no-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)decano¡co (46a)
En un vial de reacción equipado con barra agitadora, se disolvió 44 en metanol. Tetraisopropóxido de titanio(TiO(iPr)4), (2,0 equiv.) fue añadido en porciones. A continuación, se añadió amoníaco en metanol (7N) a la mezcla de reacción y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 6 h. Se añadió lentamente borohidruro sódico (2,0 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó hasta que cesó la efervescencia. La mezcla resultante se concentró y se purificó sobre un tapón de sílice en 65/35/5 DCM/MeOH/NH4OH.
Ác¡do 10-(endo)-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-6-(sulfamo¡lam¡no)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)decano¡co (46b)
A una solución de la amina requerida (44) (1,0 equiv.) y trietilamina (2,0 equiv.) en DCM bajo nitrógeno se añadió una solución 0,5M de cloruro de 2-oxo-1,3-oxazolidin-3-sulfonilo en DCM (1,0 equiv.). (preparado de acuerdo con el procedimiento de Borghese et al.). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante tres horas y a continuación se concentróin vacuohasta llegar a un sólido. Al sólido crudo resultante se añadió amoníaco (0,5 M en dioxano, 1,5 equiv.) y trietilamina (3,0 equiv.). La solución fue entonces calentada en un tubo sellado hasta 85°C durante 4 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con 3:3:94 MeOH:Et3N:EtOAc a continuación pasó por una almohadilla de sílice. El eluyente se concentró in vacuo y se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice en 50-100% EtOAc/hexanos (1% ácido acético) para obtener el compuesto del título como un aceite incoloro.
(Exo o endo)8-(6-h¡drox¡-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)acetato de oct¡lo (47)
En un vial secado en horno bajo nitrógeno, el diol requerido (1,0 equiv.) se disolvió en DCM y se enfrió a 0 °C. Se añadió trietilamina (2,0 equiv.) a la mezcla de reacción antes de cloruro de acetilo (1,0 equiv.). La mezcla resultante se dejó templar a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min antes de ser concentrada in vacuo. El aceite crudo se purificó en una placa de alúmina preparativa con soporte de vidrio en EtOAc/Hex al 30%.
(Endo o exo) d¡et¡l (8-(6-h¡drox¡-3-fen¡l-3a-(1-fen¡lv¡n¡l)-1.3a.4.5.6.6a-hexah¡dropentalen-2-¡l)oct¡l) fosfato (53)
En un vial secado en horno, el isómero de alcohol requerido (1,0 equiv.) se disolvió en DCM. Trietilamina (2,0 equiv.) fue añadida y enfriada a 0 °C antes de que el dietil clorofosfato (1,0 equiv.) fuera añadido. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h antes de concentrarse al vacío y purificarse en una placa de alúmina preparativa con soporte de vidrio en EtOAc/Hex al 30%.
Evaluación biológica de nuevos agonistas y antagonistas de LRH-1,
Expresión y purificación de proteínas-LRH-1 LBD (residuos 299-541) en el vector pMSC7 se expresó en BL21(DE3) pLysS E. coli por medio de inducción con IPTG (1 mM) durante 4 h a 30°C. La proteína se purificó por medio de cromatografía de afinidad con níquel. La proteína utilizada para los experimentos Thermofluor se incubó con DLPC (en exceso molar de cinco veces) durante cuatro horas a temperatura ambiente y, a continuación, se repurificó por exclusión de tamaño en un tampón de ensayo de 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl y 5% de glicerol. La proteína utilizada para la cristalización se incubó con la proteasa TEV para escindir la etiqueta His. A continuación, la proteína escindida se separó de la etiqueta His y de la TEV por medio de una segunda ronda de cromatografía de afinidad con níquel. Para crear complejos proteína-ligando, las proteínas se incubaron con los ligandos durante la noche (10 veces el exceso molar) y se repurificaron por exclusión de tamaño, por medio del uso de un tampón final de 100 mM de acetato de amonio, pH 7,4, 150 mM de cloruro de sodio, 1 mM de DTT, 1 mM de EDTAy 2 mM de
CHAPS.
Ensayos termofluorados-Proteína LBD-His de LRH-1 purificada (0,2 mg/ml) se incubó durante la noche con 50 pM de cada compuesto a 4°C. La concentración final de DMSO en las reacciones fue del 1%. Tintura naranja SYPRO (Invitrógeno) fue entonces añadida a una dilución 1:1000, Las reacciones se calentaron a una velocidad de 0,5 °C por minuto, mediante el uso de un sistema de PCR en tiempo real StepOne Plus (ThermoFisher). La fluorescencia se registró a cada grado mediante el uso de el filtro ROX (602 nm). Los datos se analizaron restando primero la fluorescencia de referencia (ligandos SYPRO sin proteína) y ajustando después las curvas por medio de la ecuación de Bolzman (GraphPad Prism, v6) para determinar la Tm.
Ensayos de reportero de luciferasa-Se sembraron células HeLa a una densidad de 10,000 células por pocillo en placas de cultivo de 96 pocillos de paredes blancas y fondo transparente. Al día siguiente, las células se transfectaron con LRH-1 y reporteros, mediante el uso de Fugene HD (Roche) en una proporción de 5:2 Fugene (pl): ADN (pg). Los plásmidos transfectados incluían el LRH-1 completo en un vector pCl (5 ng/pocillo), y un reportero SHP-luc, que codifica el elemento de respuesta LRH-1 y la secuencia circundante del promotor SHP clonada aguas arriba de la luciferasa de luciérnaga en el vector básico pGL3 (50 ng/pocillo). Las células también se cotransfectaron con un reportero de luciferasa Renilla constitutiva (mediante el uso del promotor CMV), que se utilizó para la normalización de la señal de luciérnaga (1 ng/pocillo). Las células de control recibieron el vector vacío pCI a 5 ng/pocillo en lugar de LRH-1-pCI. Tras una transfección de una noche, las células se trataron con agonistas durante 24 horas a las concentraciones indicadas en las leyendas de las figuras. Los agonistas se disolvieron en DMSO y después se diluyeron en los medios, con una concentración final de 0,3% de DMSO en todos los pocillos. La señal de luciferasa se cuantificó mediante el uso del kit DualGlo (Promega). Los experimentos se realizaron al menos dos veces por triplicado.
Se sintetizaron compuestos y se evaluaron en ensayos biológicos. Se introdujeron modificaciones en el andamiaje en el sitio del hidroxilo RJW100, en el anillo de estireno, en el otro anillo de fenilo y en otros sitios del núcleo de la molécula. En particular, la sustitución del hidroxilo por una fracción de sulfamino (50-endo/exo) estabilizó en gran medida el complejo LRH-1-ligando con una activación de LRH-1 comparable o ligeramente superior. Se determinó la estructura cristalina de LRH-1 unido a 50-endo, que demuestra que el ligando desplaza la molécula de agua normalmente coordinada por el residuo T352 de LRH-1 para interaccionar directamente con esta treonina. El compuesto 40-endo también estabilizó en gran medida el complejo proteína-ligando en ensayos Thermofluor y demostró una mayor activación de LRH-1 en comparación con RJW100, El compuesto 48-endo mostró una inhibición dosis-dependiente de la actividad LRH-1,
Una segunda estrategia para mejorar la actividad implicaba modificaciones en la cola de la molécula. Se exploraron los efectos de la longitud de la cola y de la adición de diversos grupos polares al extremo de la cola. Las longitudes de cola de 8-10 carbonos confirieron la mayor activación de LRH-1,
Procedimientos
Expresión y purificación de proteínas-LRH-1 LBD (residuos 299-541) en el vector pMSC7 se expresó en BL21(DE3) pLysS E. coli por medio de inducción con IPTG (1 mM) durante 4 h a 30°C. La proteína se purificó por medio de cromatografía de afinidad con níquel. La proteína utilizada para los experimentos de termofluoración se incubó con DLPC (cinco veces el exceso molar) durante cuatro horas a temperatura ambiente y, a continuación, se repurificó por exclusión de tamaño en un amortiguador de ensayo de 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl y 5% de glicerol. La proteína utilizada para la cristalización se incubó con la proteasa TEV para escindir la etiqueta His. A continuación, la proteína escindida se separó de la etiqueta His y de la TEV por medio de una segunda ronda de cromatografía de afinidad con níquel. Para crear complejos proteína-ligando, la proteína se incubó con los ligandos durante la noche (10 veces el exceso molar) y se repurificó por exclusión de tamaño, mediante el uso de un amortiguador final de 100 mM de acetato de amonio, pH 7,4, 150 mM de cloruro sódico, 1 mM de DTT, 1 mM de EDTA y 2 mM de CHAPS.
Ensayos termofluorados-Proteína LBD-His de LRH-1 purificada (0,2 mg/ml) se incubó durante la noche con 50 pM de cada compuesto a 4°C. La concentración final de DMSO en las reacciones fue del 1%. Tintura naranja SYPRO (Invitrógeno) fue entonces añadida a una dilución 1:1000, Las reacciones se calentaron a una velocidad de 0,5 °C por minuto, mediante el uso de un sistema de PCR en tiempo real StepOne Plus (ThermoFisher). La fluorescencia se registró a cada grado mediante el uso de el filtro ROX (602 nm). Los datos se analizaron restando primero la fluorescencia de referencia (ligandos SYPRO sin proteína) y ajustando después las curvas por medio de la ecuación de Bolzman (GraphPad Prism, v6) para determinar la Tm.
Ensayos de reportero de luciferasa-Se sembraron células HeLa a una densidad de 10,000 células por pocillo en placas de cultivo de 96 pocillos de paredes blancas y fondo transparente. Al día siguiente, las células se transfectaron con LRH-1 y reporteros, mediante el uso de Fugene HD (Roche) en una proporción de 5:2 Fugene (pl): ADN (pg). Los plásmidos transfectados incluían el LRH-1 completo en un vector pCl (5 ng/pocillo), y un reportero SHP-luc, que codifica el elemento de respuesta LRH-1 y la secuencia circundante del promotor SHP clonada aguas arriba de la luciferasa de luciérnaga en el vector básico pGL3 (50 ng/pocillo). Las células también se cotransfectaron con un reportero de luciferasa Renilla constitutiva (mediante el uso del promotor CMV), que se utilizó para la normalización de la señal de luciérnaga (1 ng/pocillo). Las células de control recibieron el vector vacío pCI a 5 ng/pocillo en lugar de LRH-1-pCI. Tras una transfección de una noche, las células se trataron con agonistas durante 24 horas a concentraciones de 0,03, 0,3, 1, 3, 10 y 30 pM de cada compuesto. Los agonistas se disolvieron en DMSO y después se diluyeron en los medios, con una concentración final de 0,3% de DMSO en todos los pocillos. La señal de luciferasa se cuantificó mediante el uso del kit DualGlo (Promega).
Cristalización- Los complejos proteína-ligando se incubaron con un péptido derivado de Tif2 NR Box 3 humano o SMRT en exceso molar cuádruple durante dos horas a temperatura ambiente y después se concentraron a 6,5 mg/ml. Las condiciones de cristalización se identificaron mediante el uso de nuestro robot Phoenix para realizar cribados de alto rendimiento o se basaron en las condiciones utilizadas para producir cristales de RJW100-LRH-1,
Sumario de los datos biológicos de los cribados de compuestos
EC<50>y los valores de Actividad Relativa se calcularon a partir de ensayos reporteros de luciferasa. La actividad relativa se refiere al aumento del doble de la actividad con respecto al valor de referencia (células tratadas con DMSO) para cada compuesto en relación con el aumento del doble inducido por RJW100, Un valor de "0" indica ausencia de actividad sobre la línea de base, valores entre 0 y 1 indican compuestos menos activos, y valores superiores a 1 indican compuestos más activos que RJW100 en estos ensayos. Los valores ATm se determinaron en ensayos termofluorados y se relacionan con la diferencia en la temperatura de fusión del complejo ligando de LRH-1 en relación con LRH-1 unido a DLPC (PC 12:0/12:0, un agonista fosfolípido de LRH-1). La Tm de RJW100 con respecto a DLPC es de ~3°C.
Pioles, fosforilcolinas. ácidos carboxílicos
Otras modificaciones de la cola e híbridos
Modificaciones en el estireno interno del RJW100
Modificaciones en el estireno exterior del RJW100
Modificaciones en el sitio hidroxilo de RJW100

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene la fórmula siguiente:
    o una sal del mismo, en la que, R1 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R1 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R2 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R3 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R3 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R4 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R4 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R5 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R5 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R6 es un alquilo sustituido terminalmente con un hidroxi, un carboxi o un fosfato, en el que el hidroxi, el carboxi o el fosfato están opcionalmente sustituidos además con R10; R7 es hidrógeno, alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquilam ino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R7 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R10; R1 y R7 juntos son un oxo o oxima, en el que la oxima es opcionalmente sustituida con uno o más, el mismo o diferente, R10; R10 es alquilo, halógeno, nitro, ciano, hidroxi, amino, mercapto, formilo, carboxi, alcanoilo, carbamoilo, alcoxi, hidroxialquil, alquiltio, tioalquil, alquilamino, aminoalquil, (alquil)<2>amino, alcanoil, alcoxicarbonilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, carbociclilo, benozil, benzil, arilo o heterociclilo, en la que R10 está opcionalmente sustituido con uno o más, iguales o diferentes, R11; y R11 es halógeno, nitro, ciano, hidroxi, trifluorometoxi, trifluorometilo, amino, formilo, carboxi, carbamoil, mercapto, sulfamoil, metilo, etilo, metoxi, etoxi, isopropoxi, tert-butoxi, hidoximetil, hidroxietil, tiometil, tioetil, aminometil, aminoetil, acetil, acetoxi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilcarbamoil, N-etilcarbamoil, N,N-dimetilcarbamoil, N,N-dietilcarbamoil, N-metil-N-etilcarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinilo, etilsulfinilo, mesilo, etilsulfonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, isopropoxicarbonil, tert-butoxicarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N,N-dimetilsulfamoil, N,N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, benozil, benzil, carbociclilo, arilo o heterociclilo.
  2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R2 y R3 son hidrógeno, R4 es 1-fenilvinilo o 1-feniletilo, y R5 es fenilo.
  3. 3. El compuesto de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, que tiene una de las fórmulas siguientes
    , o
    en las que R6 es hidrógeno, alquilo o alcanoilo opcionalmente sustituido con R10,
  4. 4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que R1 es hidroxilo, alquilo, amino, aminoalquilo, carbamoilo, sulfato, sulfonato, aminosulfonilo, fosfato, fosfonato o heterociclilo, en el que R1 está opcionalmente sustituido con R10,
  5. 5. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene una de las siguientes fórmulas:
    , o
    en las que, X es -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, - SO<2>-, -NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-; Y es -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, - SO<2>-, -NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-; Z es -CH<2>-, -C(OH)(OH)-, -C(OH)H, -C(Hal)(Hal)-, -C(Hal)H-, -O-, -S-, -(S=O)-, -SO<2>-, -NH-, -(C=O)-, -(C=NH)-, o -(C=S)-; y R1 es hidrógeno, hidroxi, alquil, alcanoil, amino, aminoalquil, carbamoil, sulfato, sulfonato, aminosulfonil, fosfato, fosfonato, o heterociclilo.
  6. 6. El compuesto de la reivindicación 5, en el que: a) X es O, y R1 es alcanoil; b) X es -NH-, y R1 es alcanoilo; c) X es O, y R1 es aminosulfonilo; d) X es -NH-, y R1 es aminosulfonilo; e) X es -(C=O)-, R1 es amino; f) X es O, Y es -(C=O)-, R1 es amino; g) X es O, Y es -(C=O)-, Z es -NH-, y R1 es sulfonato; y h) X es O, Y es -(C=O)-, Z es -NH-, y R1 es aminosulfonilo.
  7. 7. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el compuesto es 5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6ahexahidropentalen-1-il sulfamida o sal del mismo.
  8. 8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el compuesto es 5-hexil-4-fenil-3a-(1-fenilvinil)-1,2,3,3a,6,6ahexahidropentalen-1-il)acetamida o sal del mismo.
  9. 9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  10. 10. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento o la prevención del cáncer en un individuo.
  11. 11. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento o la prevención de la diabetes en un individuo.
  12. 12. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9 para uso según la reivindicación 11, en la que la diabetes es diabetes mellitus insulinodependiente, diabetes mellitus no insulinodependiente o diabetes gestacional.
  13. 13. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad cardiovascular en un individuo.
  14. 14. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9 para uso según la reivindicación 13, en la que la enfermedad cardiovascular es arteriopatía coronaria (EAC), angina de pecho, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, cardiopatía hipertensiva, cardiopatía reumática, cardiomiopatía, arritmia cardiaca, cardiopatía congénita, cardiopatía valvular, carditis, aneurismas aórticos, arteriopatía periférica y trombosis venosa.
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