ES3015227T3 - Use of lambda interferons in the treatment of an obesity-related disorder, atherosclerosis or a coagulation disorder - Google Patents

Abstract

La invención se refiere al campo del tratamiento o la prevención de trastornos relacionados con la obesidad, la aterosclerosis o un trastorno de la coagulación. En particular, la presente invención se refiere al uso de un activador del receptor de IFN-γ para el tratamiento o la prevención de dichos trastornos o afecciones, y a los métodos de tratamiento correspondientes. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de interferones lambda en el tratamiento de un trastorno relacionado con la obesidad, la aterosclerosis o un trastorno de la coagulación

Campo de la invención

La presente invención se refiere a usos médicos para el tratamiento o la prevención de trastornos relacionados con la obesidad, tales como obesidad, prediabetes, diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, ateroesclerosis, coagulación, hiperlipidemia y dislipidemia, enfermedades cardiovasculares y procesos patológicos asociados a las mismas. En particular, la presente invención se refiere al uso de un activador de IFNA, receptor para el tratamiento o la prevención de dichos trastornos o afecciones. La presente invención se refiere además al uso de un activador de IFNA para la reducción no terapéutica del peso corporal.

Antecedentes

Biología molecular de los IFNX

Los IFN lambda (IFNA), los IFN de tipo III o IL-28/29 constituyen una de las incorporaciones más recientes en la familia de los interferones (Lazearet al.,2015). Consisten en cuatro miembros en seres humanos (IFNA1/IL-29, IFNA2/IL-28A, IFNA3/IL-28B e IFNA4) y dos en ratones (IFNA2/IL-28A, IFNA3/IL-28B) (Kotenko etal.,2003; Sheppard etal.,2003; Prokunina-Olsson etal.,2013; Galani et al. 2015). En los seres humanos, todos los genes correspondientes están estrechamente situados en el cromosoma 19. En los ratones, en el cromosoma 5 hay una organización genómica similar, aunque en este caso, IFNA1 es un pseudogén; hay un codón de terminación en el primer exón que impide que se exprese el transcrito completo (Lasfar etal.,2006).

Como su nombre indica, los IFNA (IFN de tipo III) comparten homología con los IFN de tipo I y II. Sin embargo, también comparten homología con la superfamilia de<i>L-10 y son estructuralmente más similares a los miembros de la familia IL-10 que los IFN de tipo I (Gad etal.,2009). En todos los casos, esta homología es baja: 15-19 % de identidad de secuencia de aminoácidos con IFNa e IL-22, y 11-13 % de identidad de secuencia de aminoácidos con IL-10 (Sheppard etal.,2003). Dentro de la familia de IFNA, el IFNA2 y el IFNA3 están más estrechamente relacionados entre sí que cualquiera de ellos con el IFNA1: el IFNA1 y el IFNA2 comparten una identidad de secuencia de aminoácidos del 81 %, mientras que el IFNA2 y el IFNA3 son casi idénticos, con una identidad de secuencia de aminoácidos del 96 % (Sheppard etal.,2003). Esto se debe a que el IFNA2 y el IFNA3 son el resultado de un acontecimiento de duplicación reciente durante la evolución.

Cabe decir que, a diferencia de los IFN de tipo I, que carecen por completo de intrones, los genes de IFN-A tienen una organización similar a la familia de genes de IL-10, con múltiples exones e intrones (Sheppard etal.,2003).

Los IFNA señalizan a través de un complejo receptor heterodimérico distinto que consiste en la cadena única de IFNARa (IL28R/IL28Ra/CRF2-12), que proporciona alta afinidad por el ligando y confiere especificidad de ligando, y en la cadena IL-10Rp/CRF2-4, que es común a todos los miembros de la superfamilia de IL-10 (IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24 e IL-26) y tiene un dominio intracelular relativamente largo que comprende un sitio de acoplamiento para la señalización cadena abajo (Kotenko etal.,2003, Sheppard etal.,2003). Aun así, los IFNA inducen señalización cadena abajo que guarda un notable parecido con la de los IFN de tipo I; esto implica la fosforilación de las cinasas de la familia JAK y la activación de factores STAT(Signal Transducer and Activator of Transcription,transductores de señales y activadores de la transcripción) y de factores (de transcripción) regulados por interferón (IRF,interferon-regulated factors),impulsando la expresión de genes estimulados por interferón (ISG,interferonstimulated genes)y la inducción de respuestas contra virus (Durbinet al.,2013; Kotenko, 2011).

Los IFNA se inducen en respuesta a una infección vírica. Actualmente se ha demostrado que numerosos virus desencadenan la producción de IFNA en muchos tipos de células, incluidos el virus de la gripe, rinovirus, virus Sendai, virus de la hepatitis C, virus hepatotrópicos, virus de la estomatitis vesicular (VSV), virus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), VSV o VHS-2, Reovirus (Reo), virus Sindbis (SV), virus del dengue (DV) 2 y virus de la encefalomiocarditis (Anket al.,2006, Kotenkoet al.,2003, Sheppardet al.,2003). Diversos patógenos bacterianos tales comoListeria monocytogenes, Staphylococcus aureus,Staphylococcus epidermidis y Enterococcus faecalis también inducen los IFNA. En línea con eso, los ligandos TLR y RIG-I constituyen fuertes inductores de los IFNAin vitroein vivo.

Aunque una amplia gama de patógenos puede inducir los IFNA, las fuentes celulares de los IFNA son relativamente limitadas e incluyen células epiteliales, especialmente en las interfaces mucosas, células dendríticas convencionales y plasmocitoides, y monocitos. Los IFNA se regulan a nivel de transcripción y dependen de detectores intracelulares de infección vírica y de moléculas cadena abajo tales como TLR3, gen I inducible por treitoína (RIG-I), estimulador 1 del promotor de interferón p (IPS-1), cinasa 1 de unión a TANK (TBK1) y los |Rf , que también controlan la producción de IFN de tipo I (Onoguchiet al.,2007). Por consiguiente, se han identificado varios sitios de unión a IRF y NF-kB en las regiones promotoras de los genes IFNA humanos que pueden utilizarse de forma diferencial para impulsar su expresión en diferentes células y en respuesta a diferentes estímulos (Onoguchiet al.,2007, Osterlundet al.,2007). Por tanto, IFNA1 está regulado principalmente por IRF3 e IRF7 activados por virus, similar al gen IFNp, mientras que la expresión génica de IFNA2/3 está controlada principalmente por IRF7, parecido a la inducción de genes IFNa (Osterlund etal.,2007). En los hepatocitos, IRF1 puede ser también importante para la inducción del ARNm de IFNA1 (Odendall etal.,2014). NF-<k>B también participa en la inducción de los IFNA. Se ha descubierto un grupo de sitios de unión a NF-<k>B distales al promotor de IFNA1 que son necesarios para la producción máxima de IFNA1 en células dendríticas (CD) humanas derivadas de monocitos tras la estimulación con LPS (Thomson etal.,2009). No obstante, aunque la interrupción de los sitios de IRF y NF-<k>B reduce significativamente la transcripción de los IFNA, aún puede detectarse una activación residual, lo que sugiere la existencia de elementos reguladores en cis aún no identificados que guían la expresión de IFNA (Onoguchi etal.,2007). Por otro lado, la organización de genes de IFNA con múltiples exones e intrones sugiere una regulación postranscripcional adicional, ausente en los genes de IFN de tipo I, que puede ser crucial para la producción de IFNA.

El hecho de que los IFNA compartan homología, patrones de expresión, cascadas de señalización y funciones contra virus con los IFN de tipo I avivó la especulación inicial de que los IFNA son funcionalmente redundantes con respecto a los IFN de tipo I. Sin embargo, posteriormente se demostró que los IFNA e IFNAR1 presentan un patrón de expresión mucho más restringido en comparación con los IFN de tipo I y el receptor de IFN de tipo I (IFNAR1/IFNAR2) que está presente de forma ubicua en todas las células nucleadas. IFNAR1 se expresa principalmente en células de origen epitelial, incluidas las células epiteliales respiratorias o intestinales, hepatocitos y queratinocitos (Sommereyns etal.,2008), aunque las células de linaje mieloide como las CDc (células dendríticas convencionales) (Mennechet y Uze, 2006) y las CDp (células dendríticas plasmacitoides) también expresan el receptor. Esto sugirió que los IFNA pueden ser particularmente importantes en las interfaces mucosas y en el hígado, y su función "limitadora" se rige por la disponibilidad del ligando y la distribución del receptor (Durbin etal.,2013). En apoyo de ello, se ha demostrado una compartimentación de los dos sistemas de IFN en el tubo gastrointestinal (Hernández etal.,2015; Mahlakoiv etal.,2015; Pott etal.,2011) y en el hígado.

En las vías respiratorias, no se ha descrito una distinción tan clara entre la disponibilidad de receptor-ligando en las células epiteliales e inmunitarias, pero los IFNA se consideran en general actores importantes de la defensa contra virus también allí (Mordstein etal.,2010a).

Aplicaciones terapéuticas de los IFNA

Infecciones víricas

Por su parecido con los IFN de tipo I, los IFNA han despertado un gran interés en el tratamiento de las infecciones víricas. Se ha demostrado que los IFNA inhiben la replicación de virus de la hepatitis B y Cin vitroen líneas celulares de hepatocitos. La inhibición fue igual de eficaz que la de los IFN de tipo I (Robeket al.,2005), que se utilizan actualmente junto con el compuesto antivírico ribavirina como método estándar de atención a los pacientes con hepatitis C. Sin embargo, ya que los IFN de tipo I son tóxicos y provocan varios efectos adversos, como la enfermedad pseudogripal y las manifestaciones neurológicas y neuropsiquiátricas (Aspinall y Pockros, 2004), los IFNA han atraído la atención como alternativa más segura. Por tanto, una forma pegilada de IFNA1 (ZymoGenetics Inc./Bristol Myers Squibb) llegó a los ensayos de fase 3 para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis C. Los datos comunicados mostraron un resultado positivo de la terapia, que es ventajosa frente a los tratamientos con IFN-a, con menos efectos secundarios y buena respuesta clínica. Es probable que esto se deba al patrón de expresión más restringido del IFNAR, que está ausente en las células progenitoras hematopoyéticas y en el SNC, por lo que no provoca citopenia, ni trastornos neurológicos comúnmente observados tras el tratamiento con IFN-a (Ramos, 2010; Sommereynset al.,2008).

En el sistema respiratorio, la producción deficiente de IFNA se ha relacionado con la gravedad del asma y las exacerbaciones de la enfermedad debido a una mayor carga de virus e inflamación de las vías respiratorias (Bullenset al.,2008, Contoliet al.,2006, Koltsidaet al.,2011). En modelos experimentales de asma, se ha demostrado además que la administración de IFNA suprime las infecciones víricas respiratorias e inhibe la inflamación y la enfermedad alérgica de las vías respiratorias. Esto proporciona una sólida justificación para la administración terapéutica de IFNA recombinantes en las exacerbaciones del asma con el objetivo de reducir la carga vírica y, al mismo tiempo, inhibir la base inmunológica subyacente de la enfermedad. Por ello, se esperan con impaciencia ensayos clínicos al respecto.

Finalmente, los IFNA son opciones terapéuticas prometedoras para el tratamiento de diversas infecciones víricas y del cáncer. Por ejemplo, dado que los queratinocitos y los melanocitos expresan IFNAR y responden a los IFNA (Witteet al.,2009), varias infecciones víricas y carcinomas cutáneos pueden ser tratables con la aplicación de estas citocinas. Además, varias infecciones gastrointestinales y sistémicas también pueden abordarse mediante la administración de los IFNA. Cabe destacar que los IFNA también pueden instruir la inmunidad adaptativa y potenciar las funciones citotóxicas de los linfocitos T CD8+in vivoen ratones (Misumi y Whitmire, 2014) y macacos (Morrowet al.,2010). Por lo tanto, son candidatos atractivos para reforzar las defensas inmunitarias antimicrobianas y mejorar la eficacia de las vacunas.

Inmunomodulación

Además de inhibir la replicación vírica, los IFN de tipo III también pueden influir en la respuesta inmunitaria innata y adaptativa. Los experimentos iniciales con IFNA demostraron que estas citocinas pueden regular al alza la expresión del MHC(major histocompatibility complex,complejo mayor de histocompatibilidad) de clase I de forma comparable a la de los IFN de tipo I (Kotenko etal.,2003). La alta expresión de moléculas del MHC de clase I y II en las células presentadoras de antígeno, células tumorales o células epiteliales infectadas se asocia generalmente a la inducción de una inmunidad más eficaz del hospedador. Estudios posteriores sugirieron que el IFNA1 podía regular al alza la producción de las citocinas IL-6, -8 y -10 en monocitos humanos (Jordan etal.,2007a) e inducir las quimiocinas MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10 e I-TAC/CXCL11, normalmente desencadenadas por IFNy (Pekareket al.,2007). Sin embargo, la salvedad de estos estudios es que todos se realizaron en cultivos mixtos de células mononucleares de sangre periférica humana, dejando abierta la posibilidad de que muchos de estos efectos sean indirectos. Varios informes han propuesto también un papel de los IFNA en la regulación de la función de las CD. Megjugoracet al.y Yinet al.indicaron que las CDp humanas producen IFNA y responden a ellos regulando al alza la expresión de CD80 e ICOS-L (Megjugoracet al.,2009, Yinet al.,2012). Mennechetet al.demostraron que el tratamiento con IFN-A de CD convencionales (CDc) humanas inducía la proliferación de linfocitos T supresores Foxp3+, y propusieron una función inmunorreguladora de los IFN de tipo III (Mennechet y Uze, 2006). Finalmente, Koltsidaet al.demostraron que los IFNA señalizan en las CDc para regular a la baja OX40L, regular al alza IL-12 y actuar como mediadores en la polarización de Th1 en el contexto de inflamación respiratoria (Koltsidaet al.,2011). Otros estudiosin vitro,también han sugerido un papel de los IFNA en la modulación de la respuesta de Th1/Th2 a través de la reducción de GATA3 e IL-13, y posiblemente en el aumento de IFN-<y>(Jordanet al.,2007b) (Daiet al.,2009). Sin embargo, la cuestión de si los IFNA pueden actuar directamente sobre los linfocitos T CD4+ humanos o si lo hacen a través de células presentadoras de antígeno profesionales, tales como las CD, sigue siendo controvertida.

Asma, enfermedades alérgicas y respiratorias

Además de la inmunidad antivírica, en dos importantes estudios se insinuó un papel de los IFNA en la enfermedad alérgica de las vías respiratorias (Contoliet al.,2006, Bullenset al.,2008). Contoliet al.comunicaron un deterioro en la producción de los IFNA por parte de células epiteliales bronquiales primarias y macrófagos alveolares durante las exacerbaciones de asma alérgica en pacientes con infecciones por VR. Los niveles de IFNA estaban inversamente correlacionados con la carga vírica y la gravedad de la enfermedad (Contoliet al.,2006). Bullenset al.detectaron mayores niveles de ARNm de IFNA en el esputo de personas asmáticas frente a sanas, en ausencia de evidencia de infección vírica, y éstos se correlacionaron con síntomas de asma más leves en pacientes sin tratamiento previo con esteroides (Bullenset al.,2008). Aun así, posteriormente se demostró un papel inmunoprotector de los IFNA en el asma gracias a un tercer estudio que aportó pruebasin vivode que los IFNA podían regular al alza la IL-12, inducir la inmunidad de Th1 (Thelper 1,linfocitos T 1 auxiliares) y suprimir las respuestas inmunitarias patógenas mediadas por Th2 (Thelper2,linfocitos T 2 auxiliares) que provocan el asma (Koltsidaet al.,2011). Estas acciones antivíricas y antiinflamatorias concertadas de los IFNA en el pulmón los establecen como posibles compuestos inmunoterápicos atractivos para el tratamiento de las exacerbaciones del asma normalmente desencadenadas por virus y mediadas por respuestas aumentadas de Th2.

Cáncer, funciones antitumorales y otras de los IFNA

También se demostró que los IFN de tipo III presentaban actividad antitumoral.In vitro,los IFNA ejercieron efectos antiproliferativos en la línea celular neuroendocrina pancreática BON-1 (Zitzmannet al.,2006) y en la línea celular de queratinocitos humanos HaCaT (Maheret al.,2008), e indujeron la apoptosis en células de adenocarcinoma colorrectal HT29 (Liet al.,2008). Células de melanoma B16 genomodificadas para expresar de forma constitutiva IFNA2 de ratón, fueron menos tumorígenas en ratonesin vivo,un efecto mediado por la acción del IFNA2 sobre las células inmunitarias del hospedador, en lugar de directamente sobre las células tumorales (Lasfaret al.,2006). De manera similar, Numasakiet al.documentaron una reducción del crecimiento tumoral y de las metástasis de fibrosarcoma en los pulmones de ratones tratados con IFNA, en un proceso que implicó la acción de células inmunitarias (Numasakiet al.,2007). En un modelo de ratón de carcinoma hepatocelular, el IFNA actuó sobre las CD potenciando la acción antitumoral de los linfocitos citolíticos naturales(Natural Killer cells)(Abushahbaet al.,2010). Por el contrario, Sato et al demostraron que el efecto antitumoral de los IFNA en modelos murinos de células de cáncer de melanoma B16 y de Colon26 lo ejercía el IFNA a través de efectos directos e indirectos; inhibición del crecimiento tumoral e inducción de la actividad citotóxica de los linfocitos NK/NKTin vivo(Satoet al.,2006).

Trastornos relacionados con la obesidad y su tratamiento

Los trastornos tales como obesidad, prediabetes, diabetes, resistencia a la insulina, síndrome metabólico, ateroesclerosis, enfermedades cardiovasculares, hiperlipidemia o dislipidemia y las patologías relacionadas con estas representan importantes retos para la salud pública y los sistemas sanitarios en términos de morbilidad, mortalidad y costes. Son enfermedades muy prevalentes que también pueden provocar un infarto de miocardio, cardiopatía e ictus, o incluso aumentar el riesgo de padecer diversas formas de cáncer.

La obesidad, en particular, está formalmente reconocida como una epidemia mundial de nuestro tiempo, con una prevalencia mundial estimada de 1900 millones de personas con sobrepeso (30 % de la población mundial) y 600 millones de adultos obesos (Organización Mundial de la Salud 2014). A pesar de los grandes esfuerzos de la investigación académica y la industria farmacéutica por comprender la(s) causa(s) de esta enfermedad y desarrollar medicamentos eficaces para prevenir o tratar la obesidad y las enfermedades relacionadas, los tratamientos médicos siguen siendo limitados y, en muchos casos, inexistentes.

Por tanto, a pesar de los enfoques preventivos o terapéuticos existentes, siguen siendo necesarios enfoques eficaces para el tratamiento o la prevención de los trastornos relacionados con la obesidad, como los enumerados anteriormente.

Sumario de la invención

La presente invención se basa en el sorprendente hallazgo de que un activador del receptor de IFNA es eficaz para prevenir o tratar trastornos relacionados con la obesidad, aterosclerosis y trastornos de la coagulación.

Los inventores descubrieron que la administración de un activador del receptor de IFNA reduce los niveles de insulina y leptina en un modelo animal¡n vivo.La administración de un activador del receptor de IFNA produce además una pérdida de peso al disminuir la ingesta de alimento y priorizar el consumo de grasas sobre el de hidratos de carbono. Además, los inventores pudieron demostrar que la administración de un activador del receptor de IFNA potencia la sensibilidad a la insulina y trata la resistencia a la insulina en ratones. Adicionalmente, el tratamiento con un activador del receptor de IFNA disminuye la aterosclerosis y el riesgo de complicaciones tromboembolíticas al reducir el tamaño de la lesión aterosclerótica y la inflamación intralesional, tal como indica la acumulación de macrófagos en las placas. Los inventores pudieron demostrar también que el IFNA reducía las actividades procoagulantes y protrombóticas.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en (a) la prevención o el tratamiento de un trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación en un sujeto; o (b) determinar la susceptibilidad de un sujeto que padece un trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación al tratamiento con un activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA se administra al sujeto y el efecto sobre el trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación, se determina, respectivamente, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

En una realización, la presente invención se refiere a un activador del receptor de IFNA para su uso en la reducción terapéutica del peso corporal en un sujeto, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. Por tanto, la invención proporciona un uso médico para reducir el peso corporal en un sujeto que comprende, administrar al sujeto un activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

En una realización, la presente invención se refiere al uso de un activador del receptor de IFNA para la reducción no terapéutica del peso corporal, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. Por tanto, la invención proporciona un uso terapéutico para reducir el peso corporal en un sujeto que comprende, administrar al sujeto un activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

También se proporciona una composición farmacéutica que comprende un activador del receptor de IFNA y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de trastornos relacionados con la obesidad, aterosclerosis o trastornos de la coagulación, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

En una realización preferida, el activador del receptor de IFNA es IFNA. En una realización particularmente preferida, el IFNA es IFNA humano. Por otro lado, el IFNA, y en particular, el IFNA humano, puede seleccionarse del grupo que consiste en IFNA1, IFNA2, IFNA3 e IFNA4.

Descripción de las figuras

Figura 1. La administración sistémica de IFNA expresado en adenovirus disminuye los niveles de insulina en el suero ratonesApoe-'-de 10 semanas de vida tratados por vía intravenosa con vehículo (PBS), con 5*108 adenovirus de imitación (Ad0) o con 5*108 adenovirus que expresaban IFNA2 (AdIFNA) los días 0 y 21. Se recogieron los sueros y se analizaron el día 24. Se muestran los niveles totales de IFNA (A) e insulina (B) en los sueros de los animales de experimentación. Los datos se expresan como media ± EEM de n=3 ratones por grupo. *p<0,05

Figura 2. La administración sistémica de IFNA recombinante disminuye los niveles de insulina y leptina en el suero de ratonesApoe--de 10 semanas de vida tratados con o sin o con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón), por vía intraperitoneal dos veces por semana durante un total de 16 semanas. Los grupos de control recibieron solución salina. A continuación, se recogieron los sueros y se analizó la presencia de insulina (A) y leptina (B). Los datos se expresan como media ± EEM de n=10-14 ratones por grupo. **p<0,01, ***p<0,001

Figura 3. El IFNA recombinante restablece la sensibilidad a la insulina en ratonesApoe--RatonesApoe-'de 10 semanas de vida se trataron con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón) o con solución salina como control, por vía intraperitoneal dos veces por semana durante un total de 16 semanas. Los grupos de control recibieron solución salina. La prueba de tolerancia a la glucosa (PTG) precedió a la prueba de tolerancia a la insulina (PTI) en 1 semana. La PTG se realizó después de una noche de ayuno. Para la PTG, los ratones recibieron una inyección intraperitoneal de D-glucosa al 10 % (1 g/kg de peso corporal) y para la PTI, una inyección intraperitoneal de insulina humana regular a una dosis de 0,75 U/kg de peso corporal. En la PTG, se analizó sangre de la vena de la cola (5-10 pl) con respecto a la glucosa a los 0, 20, 40, 60, 90 y 120 minutos y en la PTI a los 0, 20, 40, 60 y 120 minutos con el glucómetro Contour Next Meter de Bayer. Los datos se expresan como media ± EEM de n=3-4 ratones por grupo. *p<0,05, **p<0,01

Figura 4. El IFNA recombinante impide el aumento de peso de ratonesApoe-/-RatonesApoe--de 10 semanas de vida se trataron con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón) dos veces por semana durante un total de 16 semanas. Los ratones de control recibieron solución salina. El peso se midió semanalmente desde la semana 10 hasta la 26. Los datos se expresan como media ± EEM de n=3-5 ratones por grupo. *p<0,05, **p<0,01

Figura 5. El IFNA recombinante disminuye el consumo de alimento y reduce la tasa de quema de hidratos de carbono de ratonesApoe'1-RatonesApoe-'de 10 semanas de vida se trataron con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón) dos veces por semana durante un total de 16 semanas. Los ratones de control recibieron solución salina. Las mediciones metabólicas se realizaron utilizando un sistema Oxymax de calorimetría indirecta según protocolos estándar. El consumo de alimento (A), la tasa metabólica (B), la tasa de intercambio respiratorio (C) y la actividad de la tasa de oxidación (D) se evaluaron durante un período de 48 horas. Los datos se expresan como media ± EEM de n=3-4 ratones por grupo. *p<0,05

Figura 6. La administración sistémica de IFNA expresado en adenovirus reduce la aterosclerosis en ratonesApoe--RatonesApoe-'de 10 semanas de vida se trataron por vía intravenosa con vehículo (PBS), con 5*108 adenovirus de imitación (Ad0) o con 5*108 adenovirus que expresaban IFNA2 (AdIFNA) a intervalos de 3 semanas y se analizó el desarrollo de la aterosclerosis a las 22 semanas. (A) Se muestran microfotografías de luz representativas de secciones teñidas con ORO(OH Red O)a nivel de la válvula aórtica y análisis morfométrico del tamaño de la lesión. (B) Se muestran microfotografías de fluorescencia representativas de secciones teñidas con CD68 y DAPI a nivel de la válvula aórtica y análisis morfométrico. Los datos se expresan como media ± EEM de n=4-6 ratones por grupo. *p<0,05

Figura 7. El IFNA recombinante reduce la aterosclerosis en ratonesApoe-RatonesApoe-/-de 10 semanas de vida se trataron sin o con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón), por vía intraperitoneal dos veces por semana durante un total de 12 semanas. Los ratones de control recibieron solución salina. A las 22 semanas, se analizó el desarrollo de la aterosclerosis en los ratones. (A) Se muestran microfotografías de luz representativas de secciones teñidas con ORO a nivel de la válvula aórtica y análisis morfométrico del tamaño de la lesión. (B) Se muestran microfotografías de fluorescencia representativas de secciones teñidas con CD68 y DAPI a nivel de la válvula aórtica y análisis morfométrico. Los datos se expresan como media ± EEM de n=10-14 ratones por grupo. ***p<0,001

Figura 8. El IFNA recombinante reduce la aterosclerosis en ratonesApoe-RatonesApoe-/-de 10 semanas de vida se trataron sin o con IFNA3 recombinante (5 pg/ratón), por vía intraperitoneal dos veces por semana durante un total de 12 semanas. Los grupos de control recibieron solución salina. A las 22 semanas, se analizó el desarrollo de la aterosclerosis en los ratones examinando macroscópicamente el arco aórtico después de tinción con Sudán IV. Los datos se expresan como media ± EEM de n=7-8 ratones por grupo. ***p<0,001

Figura 9. El IFNA recombinante reduce las actividades procoagulante y protrombótica

Neutrófilos sumamente purificados procedentes de ratones C57BL/6 de tipo natural, se expusieron a 100 ng/ml de IFNA3 recombinante durante 8 h y se realizó un análisis transcripcional mediante secuenciación de ARN. Se muestran los niveles de expresión relativos del factor tisular (FT), de la Catepsina G (CTSG) de la elastasa (ELANE), de la peptidil arginina desaminasa tipo IV (PADI4) y del IL-1ra (antagonista del receptor de interleucina 1). Los datos se expresan como media ± EEM de n=3 experimentos independientes. *p<0,05, **p<0,01

Descripción detallada de la invención

Definiciones

Como se describe o reivindica en el presente documento, el término "activador del receptor de IFNA" se refiere a cualquier sustancia, compuesto o molécula que active el receptor de IFNA. El receptor de IFNA comprende las subunidades IL10R2 (CRF2-4) e IFNAR1 (IL28RA, CRF2-12). La activación del receptor de IFNA desencadena la activación de cinasas Janus (Jak1 y Tyk2) y la fosforilación y activación de los factores de transcripción STAT1, STAT2 y STAT3, y de los factores de transcripción IRF regulados por interferón. Después de la fosforilación, Los STAT se translocan al núcleo para inducir cientos de genes denominados en general genes estimulados por IFN o ISG(IFN-stimulated genes).Por consiguiente, un activador del receptor de IFNA puede ser cualquier sustancia, compuesto o molécula que desencadene estos (u otros) acontecimientos de señalización a través del receptor de IFNA. De acuerdo con la invención reivindicada, el activador del receptor de IFNA es un polinucleótido que expresa IFNA, o un IFNA. Como se describe en el presente documento, un activador del receptor de IFNA puede ser también un agente que desencadene un aumento de IFNA endógeno en un sujeto tras la administración del agente al sujeto.

Como se utiliza en el presente documento, el término "IFNK" se refiere a interferones lambda, también conocidos como IFN de tipo III o IL-28/29. La familia de IFNA comprende actualmente cuatro miembros conocidos en seres humanos (IFNA1/IL-29, IFNA2/IL-28A, IFNA3/IL-28B e IFNA4) y dos en ratones (IFNA2/IL-28A, IFNA3/IL-28B). En una realización preferida, el IFNA1 humano tiene la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 1. En una realización preferida, el IFNA2 humano tiene la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 2. En una realización preferida, el IFNA3 humano tiene la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 3 o la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 4. En una realización más preferida, el IFNA3 humano tiene la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 4. En una realización preferida, el IFNA4 humano tiene la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 5. En una realización preferida adicional, el IFNA1 humano comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 1. En una realización preferida adicional, el IFNA2 humano comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 2. En una realización preferida adicional, el IFNA3 humano comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 3 o la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 4. En una realización más preferida, el IFNA3 humano comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 4. En una realización preferida adicional, el IFNA4 humano comprende la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 5.

El término IFNA comprende además variantes y equivalentes funcionales de IFNA1/IL-29, IFNA2/IL-28A, IFNA3/IL-28B e IFNA4. Por variantes se entiende secuencias de aminoácidos sustancialmente similares. Los polipéptidos de IFNA de acuerdo con la presente invención pueden alterarse de diversas maneras, incluyendo sustituciones, deleciones, truncamientos e inserciones de aminoácidos. También pueden sufrir modificaciones postraduccionales. Pueden crearse nuevas proteínas que tengan propiedades de interés combinando elementos y fragmentos de proteínas de IFNA o de sus receptores, así como con otras proteínas. Los métodos para tales manipulaciones son generalmente conocidos en la técnica. Las proteínas de IFNA abarcan proteínas de origen natural, así como variaciones y formas modificadas de las mismas. Dichas variantes seguirán poseyendo la actividad IFNA deseada. Evidentemente, las mutaciones que se realicen en el ADN que codifica la variante no deben situar la secuencia fuera del marco de lectura y preferentemente no deben crear regiones complementarias que puedan producir una estructura secundaria de ARNm. Las variantes de una secuencia de proteínas particular tendrán, por lo general, una identidad de secuencia de al menos aproximadamente 90 %, preferentemente de al menos aproximadamente 95 % y más preferentemente de al menos aproximadamente 98 % con esa secuencia de proteínas particular, según lo determinado por los programas de alineamiento de secuencias. Al calcular el porcentaje de identidad, las secuencias que se están comparando normalmente se alinean de un modo que proporciona el máximo grado de coincidencia entre las secuencias. Un ejemplo de un programa informático que puede usarse para determinar el porcentaje de identidad es el paquete del programa GCG, que incluye GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387; Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wl). El algoritmo informático GAP se usa para alinear los dos polipéptidos o polinucleótidos para los que se va a determinar el porcentaje de identidad de secuencia. Las secuencias se alinean con respecto a un emparejamiento óptimo de sus aminoácidos respectivos (el "tramo emparejado", determinado por el algoritmo). Una penalización por apertura de hueco (que se calcula como 3 veces la diagonal promedio, en donde la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se utiliza; la "diagonal" es la puntuación o el número asignado a cada coincidencia perfecta de aminoácidos por la matriz de comparación particular) y una penalización por extensión de hueco (que normalmente es 1/10 veces la penalización por apertura de hueco), así como también se utiliza una matriz de comparación tal como PAM 250 o BLOSUM 62 junto con el algoritmo.

Interferón lambda-1 [Homo sapiens]

Registro: NP_742152.1

SEQ ID NO:1

MAAAWTVVLVTLVLGLAVAGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLKNWSC

SSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTA

GPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLCLRTSTHPEST

Interferón lambda-2 [Homo sapiens]

Registro: NP_742150.1

SEQ ID NO:2

MKLDMTGDCTPVLVLMAAVLTVTGAVPVARLHGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEES

LLLKDCRCHSRLFPRTWDLRQLQVRERPMALEAELALTLKVLEATADTDPALVDVLDQPLHTLHHILS

QFRACIQPQPTAGPRTRGRLHHWLYRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV

Interferón lambda-3 isoforma 1 [Homo sapiens]

Registro: NP_001333866.1

SEQ ID NO:3

MKLDMTGDCMPVLVLMAAVLTVTGAVPVARLRGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEES

LLLKDCKCRSRLFPRTWDLRQLQVRERPVALEAELALTLKVLEATADTDPALGDVLDQPLHTLHHILSQ

LRACIQPQPTAGPRTRGRLHHWLHRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV

Interferón lambda-3 isoforma 2 [Homo sapiens]

Registro: NP_742151.2

SEQ ID NO:4

MTGDCMPVLVLMAAVLTVTGAVPVARLRGALPDARGCHIAQFKSLSPQELQAFKRAKDALEESLLLK

DCKCRSRLFPRTWDLRQLQVRERPVALEAELALTLKVLEATADTDPALGDVLDQPLHTLHHILSQLRA

CIQPQPTAGPRTRGRLHHWLHRLQEAPKKESPGCLEASVTFNLFRLLTRDLNCVASGDLCV

Interferón lambda-4 [Homo sapiens]

Registro: NP_001263183.2

SEQ ID NO:5

MRPSVWAAVAAGLWVLCTVIAAAPRRCLLSHYRSLEPRTLAAAKALRDRYEEEALSWGQRNCSFRP

RRDPPRPSSCARLRHVARGIADAQAVLSGLHRSELLPGAGPILELLAAAGRDVAACLELARPGSSRKV

PGAQKRRHKPRRADSPRCRKASWFNLLRLLTWELRLAAHSGPCL

La expresión "trastornos relacionados con la obesidad" se refiere a cualquier enfermedad o afección relacionada directa o indirectamente con el sobrepeso y/o la obesidad. Los trastornos relacionados con la obesidad pueden ser hereditarios o adquiridos. Son ejemplos de trastornos relacionados con la obesidad, la obesidad, prediabetes, diabetes, resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, ateroesclerosis, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, hiperglucemia, tolerancia alterada a la glucosa, deficiencia de células beta, esteatosis hepática no alcohólica, esteatosis hepática, síndrome de ovario poliquístico, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipercetonemia, hiperglucagonemia, pancreatitis, neoplasias pancreáticas, enfermedad cardiovascular, hipertensión, arteriopatía coronaria, insuficiencia renal, neuropatía, retinopatía diabética, cataratas, trastornos endocrinos, apnea del sueño, síndrome de ovario poliquístico, neoplasias de mama, colon, próstata, recto y ovario, artrosis, hiperuricemia, insuficiencia cardiaca y enfermedad cerebrovascular. De acuerdo con la invención, un "trastorno relacionado con la obesidad" se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia.

Como se utiliza en el presente documento, el término "aterosclerosis" se refiere a una enfermedad que afecta a los vasos sanguíneos arteriales, que consiste en el endurecimiento (calcificación) de las arterias, el desarrollo de placas ateromatosas en las arterias y la formación de trombos, desencadenando acontecimientos trombóticos o tromboembolíticos. La aterosclerosis puede considerarse un problema de cicatrización de heridas e inflamación crónica. Da lugar a una remodelación hacia dentro o hacia fuera que provoca estenosis e infarto de los vasos sanguíneos o agrandamiento de los vasos sanguíneos y aneurisma, respectivamente. En cualquier caso, las placas ateroscleróticas pueden erosionarse o romperse y desencadenar complicaciones clínicas repentinas tales como ictus cerebrales, infartos de miocardio y enfermedades oclusivas de las arterias periféricas en las extremidades inferiores. La fisiopatología de la aterosclerosis comprende varios etapas importantes, incluido el aumento de la adhesividad focal endotelial, permeabilidad y procoagulación (disfunción endotelial), expresión de moléculas de adhesión, adhesión e inmigración de monocitos, formación de macrófagos espumosos y estrías grasas, migración de células musculares lisas (CML) de la túnica media a la túnica íntima, formación de placa y, finalmente, rotura de la placa y formación de trombos. Una cuestión frecuente en la aterosclerosis es, por tanto, la presencia de estrés oxidativo e inflamación, debido a la oxidación de las LDL(low-density lipoproteins,lipoproteínas de baja densidad) y otros materiales ricos en lípidos.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "trastorno de la coagulación" se refiere a afecciones en donde se produce un aumento de la coagulación sanguínea (hipercoagulación). El aumento de la coagulación sanguínea puede dar lugar a la formación de trombos, p. ej., formación de trombos en las venas, arterias o cámaras cardíacas. Los trombos pueden obstruir el flujo sanguíneo en el lugar donde se forma. Los trombos también pueden desprenderse y obstruir vasos sanguíneos distantes. En la cascada de la coagulación intervienen > de 50 mediadores con actividad pro o anticoagulante y se desencadena mediante la activación de las plaquetas y/o la inducción del factor tisular que activan las vías de contacto (intrínseca) y del factor tisular (extrínseca), respectivamente. El trastorno de la coagulación puede ser el resultado de factores predisponentes, p. ej., mutaciones genéticas. El trastorno de la coagulación también puede ser consecuencia de, p. ej., cirugía o traumatismo, inmovilización prolongada, medicamentos, obesidad o aterosclerosis.

Como se utiliza en el presente documento, el término "obesidad" significa obesidad de acuerdo con cualquier sistema de clasificación de peso corporal. Dichos sistemas incluyen, pero sin limitación, el índice de masa corporal (IMC), IMC ideal o equivalentes. El IMC, por ejemplo, es una herramienta analítica utilizada para comparar la altura de una persona con su peso, como medición aproximada de la adiposidad. El IMC se calcula dividiendo la masa (en kg) por el cuadrado de la estatura (en m) de una persona. Un individuo humano se clasifica como obeso, cuando el valor del IMC es superior o igual a 30 (kg/m2). El término "obesidad" incluye la obesidad mórbida (es decir, un IMC superior o igual a 40 (kg/m2)), obesidad infantil y cualquier otro tipo de obesidad en el que el IMC del sujeto es mayor o igual a 30 (kg/m2). La obesidad es el resultado de interacciones complejas entre los genes y el entorno que regulan el equilibrio energético, los procesos fisiopatológicos relacionados, y el peso. A través de una red coordinada de mecanismos centrales y señales periféricas, incluidas las entradas del sistema nervioso sensorial, ejes neuroendocrinos, y múltiples células y procesos dentro del tejido adiposo, estómago, páncreas e hígado, la ingesta de alimento y el gasto calórico se controlan y pueden provocar un exceso de adiposidad, aumento de peso y diversos efectos metabólicos y fisiológicos.

Como se utiliza en el presente documento, el término "sobrepeso" significa sobrepeso de acuerdo con cualquier sistema de clasificación de peso corporal. Un individuo se clasifica como con sobrepeso, según el IMC, por ejemplo, cuando su valor de IMC es igual o superior a 25.

Como se utiliza en el presente documento, el término "diabetes" se refiere a cualquier enfermedad caracterizada por una concentración elevada de glucosa en sangre (hiperglucemia). Por ejemplo, la diabetes se diagnostica demostrando uno cualquiera de lo siguiente: (i) un nivel de glucosa plasmática en ayunas igual o superior a 126 mg/dl (7,0 mmol/l), (ii) una glucosa plasmática igual o superior a 200 mg/dl (11,1 mmol/l) dos horas después de una carga oral de glucosa de 75 g como en una prueba de tolerancia a la glucosa o (iii) síntomas de hiperglucemia y glucosa plasmática casual igual o superior a 200 mg/dl (11,1 mmol/l). Como se utiliza en el presente documento, el término diabetes se refiere a la "diabetes de tipo 1 ", también conocida como diabetes infantil, diabetes juvenil y diabetes insulinodependiente. Como se utiliza en el presente documento, el término diabetes también se refiere a la "diabetes de tipo 2", también conocida como diabetes del adulto, diabetes relacionada con la obesidad y diabetes no insulinodependiente. Como se utiliza en el presente documento, el término diabetes también se refiere a otras formas de diabetes, incluida la diabetes gestacional, diabetes de tipo 1 resistente a la insulina (o "diabetes doble"), diabetes autoinmunitaria latente de los adultos y diabetes juvenil de aparición en la madurez, que es un grupo de varios trastornos de un solo gen (monogénicos) con fuertes antecedentes familiares que se presentan como diabetes de tipo 2 antes de los 30 años.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "resistencia a la insulina" se refiere a una afección en donde las células del cuerpo, en particular, las células del musculo, grasa e hígado, no responden eficazmente a la insulina. Por consiguiente, el páncreas aumenta la producción de insulina. El exceso de peso también contribuye al desarrollo de resistencia a la insulina, ya que el exceso de grasa interfiere en la capacidad del cuerpo para usar la insulina. La falta de ejercicio reduce aún más la capacidad del cuerpo para usar la insulina. Otros factores de riesgo para desarrollar resistencia a la insulina incluyen factores genéticos, hipertensión, edad y estilo de vida.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "síndrome metabólico" o "enfermedad metabólica" se refiere al estado fisiológico de los mamíferos que normalmente se caracteriza por obesidad, resistencia a la insulina, hiperlipidemia e hipertensión. Además, puede abarcar anomalías vasculares tales como disfunción endotelial, afección proinflamatoria vascular y afecciones procoagulantes y protrombóticas vasculares. El síndrome metabólico también se refiere a síndromes acompañados de factores de riesgo para la salud tales como hipertrigliceridemia, hipertensión, trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono, trastornos de la coagulación sanguínea y obesidad. El síndrome metabólico puede incluir también intolerancia a la glucosa, dislipidemia con triglicéridos elevados, colesterol de las HDL (high-density lipoproteins,lipoproteínas de alta densidad) bajo, microalbuminuria, predominio de pequeñas partículas densas de colesterol de las LDL(low-density lipoproteins,lipoproteínas de baja densidad), disfunción endotelial, estrés oxidativo, inflamación y trastornos relacionados con el síndrome de ovario poliquístico, esteatosis hepática y gota. La enfermedad metabólica o síndrome metabólico es un presunto precursor de una amplia gama de enfermedades, incluyendo la diabetes de tipo 2 , enfermedad cardiovascular, ictus, cáncer, síndrome de ovario poliquístico, gota y asma.

Como se utiliza en el presente documento, el término "dislipidemia" se refiere a niveles anormales de lípidos (p. ej, triglicéridos, colesterol y/o fosfolípidos grasos) en la sangre. En el sentido de la presente invención, la dislipidemia es, en particular, hiperlipidemia.

Como se utiliza en el presente documento, el término "hiperlipidemia" se refiere a niveles anormalmente elevados de alguno o todos los lípidos y/o lipoproteínas en la sangre. Las hiperlipidemias pueden clasificarse básicamente como hereditarias (también llamadas primarias) causadas por anomalías genéticas específicas, o adquiridas (también llamadas secundarias) cuando son el resultado de otro trastorno subyacente que provoca alteraciones en el metabolismo de los lípidos y lipoproteínas plasmáticos. Además, la hiperlipidemia puede ser idiopática, es decir, sin causa conocida. Las hiperlipidemias también se clasifican según qué tipos de lípidos están elevados, es decir, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia o ambas en hiperlipidemia combinada. Los niveles elevados de lipoproteína(a) también pueden clasificarse como una forma de hiperlipidemia.

Como se utiliza en el presente documento, "hipercolesterolemia" se refiere a la presencia de niveles anormalmente altos de colesterol en la sangre. Es una forma de niveles elevados de lípidos en la sangre e "hiperlipoproteinemia" (niveles elevados de lipoproteínas en la sangre). Los niveles elevados de colesterol no HDL y LDL en la sangre pueden ser consecuencia de la dieta, obesidad, enfermedades hereditarias (genéticas) (como las mutaciones del receptor de LDL en la hipercolesterolemia hereditaria), o la presencia de otras enfermedades como la diabetes y una tiroides hipoactiva.

Como se utiliza en el presente documento, "trastorno cardiovascular" o "enfermedad cardiovascular" se refiere a afecciones que afectan al corazón y/o a los vasos sanguíneos. Las enfermedades cardiovasculares incluyen, pero sin limitación, arteriopatías coronarias, ictus, insuficiencia cardíaca, cardiopatía hipertensiva, cardiopatía reumática, miocardiopatía, arritmia cardíaca, cardiopatía congénita, cardiopatía valvular, carditis, aneurisma aórtico, arteriopatía periférica y trombosis venosa.

Como se utiliza en el presente documento, "cardiopatía coronaria" se refiere es un grupo de enfermedades que incluye: angina estable, angina inestable, infarto de miocardio y muerte cardíaca súbita. Pertenece al grupo de las enfermedades cardiovasculares. Entre los factores de riesgo para desarrollar cardiopatía coronaria se incluyen: hipertensión arterial, tabaquismo, diabetes, falta de ejercicio, obesidad, niveles altos de colesterol en sangre, mala alimentación y exceso de alcohol.

Usos médicos o tratamiento o prevención

En una realización de la invención, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en el tratamiento de trastornos relacionados con la obesidad, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. El uso médico para tratar un trastorno relacionado con la obesidad puede comprender administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un activador del receptor de IFNA a un sujeto que necesite dicho tratamiento. En otra realización, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en la prevención de trastornos relacionados con la obesidad, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. El uso médico para prevenir un trastorno relacionado con la obesidad puede comprender administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un activador del receptor de IFNA a un sujeto que necesite dicha prevención.

Un trastorno relacionado con la obesidad puede ser obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, ateroesclerosis, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, coagulación, dislipidemia, hiperlipidemia o hipercolesterolemia.

En una realización de la invención, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en el tratamiento de la aterosclerosis, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. El uso médi

En una realización, la aterosclerosis es aterosclerosis, arteriosclerosis de Monckeberg o arteriolosclerosis.

En una realización de la invención, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en el tratamiento de trastornos de la coagulación, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. El uso médico para tratar un trastorno de la coagulación puede comprender administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un activador del receptor de IFNA a un sujeto que necesite dicho tratamiento. En otra realización, se proporciona un activador del receptor IFNA para su uso en la prevención de trastornos de la coagulación, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. El uso médico para prevenir un trastorno de la coagulación puede comprender administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un activador del receptor de IFNA a un sujeto que necesite dicha prevención.

En una realización, el trastorno de la coagulación es trombosis, trombosis venosa, trombosis venosa profunda, trombosis arterial, isquemia de extremidades, ictus o infarto de miocardio.

En una realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de la obesidad. En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de la prediabetes o la diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional)

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de enfermedades metabólicas o síndrome metabólico.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de cardiopatía coronaria.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de ictus.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de trombosis. En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en el tratamiento de hipercolesterolemia.

En una realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de la obesidad. En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de la prediabetes o la diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional).

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de enfermedades metabólicas o síndrome metabólico.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de cardiopatía coronaria.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención del ictus.

En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de trombosis. En otra realización preferida, el activador del receptor de IFNA es para su uso en la prevención de hipercolesterolemia.

En una realización preferida de la presente invención, también se proporciona el activador del receptor de IFNA para su uso en la reducción de la formación y rotura de placas ateromatosas.

En una realización preferida de la presente invención, también se proporciona el activador del receptor de IFNA para su uso en la prevención de la formación y rotura de placas ateromatosas.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona además el uso de un activador del receptor de IFNA para la reducción no terapéutica de peso corporal, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. Dicha reducción de peso puede lograrse a través de la supresión del apetito. Además, dicha reducción de peso puede lograrse reduciendo la sobrealimentación. En una realización, se proporciona un uso del activador del receptor de IFNA para la reducción de peso en un individuo. En el presente documento también se describe el uso de un activador del receptor de IFN<a>para mantener un peso determinado en un individuo. El mantenimiento del peso puede ser deseable tras la pérdida de peso.

De acuerdo con la presente invención, también se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en la reducción terapéutica de peso corporal, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. Dicha reducción de peso puede lograrse a través de la supresión del apetito. Además, dicha reducción de peso puede lograrse reduciendo la sobrealimentación. En una realización, se proporciona el activador del receptor de IFNA para su uso en la reducción terapéutica de peso en un individuo. Por otro lado, en el presente documento se describe un activador del receptor de IFNA para su uso en el mantenimiento de un peso determinado en un individuo. El mantenimiento del peso puede ser deseable tras la pérdida de peso.

El uso no terapéutico o terapéutico para la reducción del peso corporal en un sujeto, puede comprender administrar al sujeto de una cantidad eficaz de un activador del receptor de IFNA. Dicha reducción de peso puede lograrse a través de la supresión del apetito. Además, dicha reducción de peso puede lograrse reduciendo la sobrealimentación. En el presente documento se describe además un método para mantener el peso de un individuo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un activador del receptor de IFNA. El mantenimiento del peso puede ser deseable tras la pérdida de peso.

Los pacientes o sujetos por tratar, analizados o diagnosticados de acuerdo con los usos de la presente invención, pueden ser cualquier tipo de mamíferos, tales como ratones, ratas, hámsteres, cobayas, gatos, perros, caballos, monos, camellos, llamas, leones, tigres y elefantes. En una realización preferida, el paciente o sujeto es un ser humano.

Como se describe en el presente documento, el activador del receptor de IFNA es una molécula pequeña. Como se describe en el presente documento, el activador del receptor de IFNA es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo. El activador del receptor de IFNA puede ser un péptido. En otra realización más, el activador del receptor de IFNA es un polinucleótido que expresa IFNA. Además, el activador del receptor de IFNA puede ser un IFNA Como se describe en el presente documento, el activador del receptor de IFNA es un agente que desencadena un aumento de IFNA endógeno.

En una realización, el activador del receptor de IFNA se une al receptor de IFNA y desencadena la activación Jak1 y Tyk2. En una realización adicional, el activador del receptor de IFNA se une al receptor de IFNA y actúa como mediador en la fosforilación de STAT1, STAT2 y/o STAT3. En otra realización, el activador del receptor de IFNA se une al receptor de IFNA y actúa como mediador en la traslocación de STAT1, STAT2 y/o STAT3 en el núcleo. En otra realización, el activador del receptor de IFNA se une al receptor de IFNA y actúa como mediador en la transcripción de genes.

En una realización, el activador del receptor de IFNA es IFNA. El IFNA puede ser IFNA humano. En una realización, el IFNA es IFNA1, en particular, IFNA1 humano. En una realización adicional, el IFNA es IFNA2, en particular, IFNA2 humano. En otra realización, el IFNA es IFNA3, en particular, IFNA3 humano. En otra realización más, el IFNA, es IFNA4, en particular, IFNA4 humano.

El IFNA que se va a usar o administrar de acuerdo con la presente invención puede proceder de cualquier especie de mamífero. En una realización preferida, el IFNA es homólogo con respecto al mamífero, es decir, representa el IFNA de la misma especie que la del mamífero a tratar. Por ejemplo, en una realización en la que el paciente o sujeto es un ratón, se administrará IFNA murino. Además, cuando el paciente o sujeto es un ser humano, el IFNA que se va a usar o administrar en relación con el tratamiento o la prevención de la presente invención es IFNA humano.

El IFNA puede prepararse a partir de diversas fuentes. Por ejemplo, el IFNA recombinante puede expresarse en una célula utilizando diversos sistemas de expresión diferentes (tanto procariotas como eucariotas) y aislarse. Opcionalmente, el IFNA puede fusionarse a una etiqueta de proteína. El IFNA recombinante puede expresarse, secretarse en el sobrenadante y después, el IFNA puede purificarse del sobrenadante. En la técnica se conocen métodos mediante los cuales se puede expresar y purificar el polipéptido recombinante a partir de células. Dichos métodos se han divulgado, p. ej., en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2001. 3a edición. El IFNA también puede sintetizarse sintéticamente en un sistema acelular¡n vitro.Este puede utilizar ARN polimerasa purificada, ribosomas, ARNt y ribonucleótidos.

En una realización, el IFNA se conjuga con PEG. En una realización, el IFNA está monopegilado. La PEGilación es un método en donde un polipéptido o compuesto peptidomimético se modifica de tal manera que una o más moléculas de polietilenglicol (PEG) se unen covalentemente a la cadena lateral de uno o más aminoácidos o derivados de los mismos. Es una de las técnicas de química estructural de alteración de moléculas (MASC,molecule altering structural chemistry)más importantes. También pueden utilizarse otras técnicas MASC. Dichas técnicas pueden mejorar las propiedades farmacodinámicas del iFNA, por ejemplo aumentar la semividain vivo.Un conjugado de PEG-proteína puede formarse activando primero la fracción de PEG para que reaccione con ella y se acople a, la proteína o al compuesto peptidomimético. El peso molecular y la conformación de las fracciones de PEG pueden variar considerablemente. El PEG2 implica el acoplamiento de un PEG de 30 kDa (o inferior) a un aminoácido de lisina (aunque la PEGilación puede ampliarse a la adición de PEG a otros aminoácidos) que se hace reaccionar posteriormente para formar una estructura ramificada que se comporta como un PEG lineal de mucho mayor peso molecular (Kozlowskiet al.,(2001), Biodrugs 15, 419 - 429). Los métodos que pueden utilizarse para unir covalentemente las moléculas de PEG a polipéptidos se describen con más detalle en Robertset al.,(2002) Adv. Drug Deliv Rev 54, 459 - 476, Bhadraet al.,(2002) Pharmazie 57, 5 - 29, Kozlowskiet al.,(2001) J Control Release 72, 217 - 224 y Veronese (2001) Biomaterials, 22, 405 - 417 y en las referencias mencionadas en esos documentos. El IFNA pegilado también puede prepararse como se describe, p. ej., en el documento WO 2013028233.

El IFNA puede conjugarse con cualquier otra fracción adecuada. Por ejemplo, el IFNA puede conjugarse con una fracción de óxido de polialquilo.

Usos y métodos de diagnóstico

En una realización, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en la determinación de la susceptibilidad de un paciente que padece un trastorno relacionado con la obesidad al tratamiento con el activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA se administra al paciente y se determina el efecto sobre el trastorno relacionado con la obesidad, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. En el presente documento también se describe un método para determinar la susceptibilidad de un paciente que padece un trastorno relacionado con la obesidad, para su tratamiento con un activador del receptor de IFNA, en donde el método comprende administrar el activador del receptor de IFNA al paciente y determinar el efecto sobre el trastorno relacionado con la obesidad.

Una mejora del trastorno relacionado con la obesidad indica que el paciente es susceptible al tratamiento con un activador del receptor de IFNA. La mejora del trastorno relacionado con la obesidad puede medirse utilizando medios establecidos, tales como determinando los niveles de compuestos metabólicos en un sujeto o determinando la pérdida de peso en un sujeto.

En una realización, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en la determinación de la susceptibilidad de un paciente que padece aterosclerosis al tratamiento con el activador del receptor de IFNA, en donde el activador de IFNA, se administra al paciente y se determina el efecto sobre la aterosclerosis, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. En el presente documento también se describe un método para determinar la susceptibilidad de un paciente que padece aterosclerosis al tratamiento con un activador del receptor de IFNA, en donde el método comprende administrar el activador del receptor de IFNA al paciente y determinar el efecto sobre la aterosclerosis.

Una mejora de la aterosclerosis indica que el paciente es susceptible al tratamiento con un activador del receptor de IFNA.

En una realización, se proporciona un activador del receptor de IFNA para su uso en la determinación de la susceptibilidad de un paciente que padece un trastorno de la coagulación al tratamiento con el activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA se administra al paciente y se determina el efecto sobre el trastorno de la coagulación, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA. En el presente documento también se describe un método para determinar la susceptibilidad de un paciente que padece un trastorno de coagulación al tratamiento con un activador del receptor de IFNA, en donde el método comprende administrar el activador del receptor de IFNA al paciente y determinar el efecto sobre el trastorno de coagulación.

Una mejora del trastorno de coagulación indica que el paciente es susceptible al tratamiento con un activador del receptor de IFNA.

Modos de administración

El activador del receptor de IFNA puede formularse como una composición farmacéutica que comprende el activador del receptor de IFNA y un excipiente farmacéuticamente aceptable. El activador del receptor de IFNA, o la composición que comprende el activador del receptor de IFNA, puede emplearse en solitario o junto con otros agentes terapéuticos (combinación) para el tratamiento o la prevención de las afecciones, o con fines de diagnóstico, descritos o reivindicados en el presente documento. El/los agente(s) terapéutico(s) adicional(es) puede(n) ser uno o más agentes que presenten actividad terapéutica en uno o más de los trastornos metabólicos descritos en el presente documento, o en las afecciones patológicas asociadas a los mismos. Otros agentes terapéuticos que pueden administrarse junto con el activador del receptor de IFNA incluyen, pero sin limitación, insulina, metformina (Glucophage), meglitinidas (Prandin y Starlix), sulfonilureas (gliburida/DiaBeta, glipizida/Glucotrol y Glimepirida/Amaryl), canagliflozina (Invokana) y dapagliflozina (Farxiga), tiazolidinedionas tales como pioglitazona (Actos), acarbosa (Precose), pramlintida (Symlin), exenatida (Byetta), liraglutida (Victoza), exenatida de acción prolongada (Bydureon), albiglutida (Tanzeum), dulaglutida (Trulicity), inhibidores de DPP-IV (sitagliptina, saxagliptina, linagliptina), fentermina, dietilpropión, fendimetrazina, benzfetamina, oxintomodulina, clorhidrato de fluoxetina, qnexa (topiramato y fentermina), excalia (bupropión y zonisamida), contrave (bupropión y naltrexona), xenical (Orlistat), cetilistat, y GT 389-255, estatinas, hipocolesterolemiantes, tales como inhibidores de la proproteína convertasa subtilisina kexina tipo 9 (PCSK9,proprotein convertase subtilisin kexin type9), inhibidores de ACE, inhibidores de aldosterona, bloqueantes de receptores de angiotensina II, beta-bloqueantes, bloqueantes de los canales de calcio, antiagregantes plaquetarios tales como ácido acetilsalicílico (aspirina), clopidogrel (Plavix) o dipiridamol (Persantine), anticoagulantes tales como warfarina (Coumadin), heparina, inhibidores directos del factor Xa, inhibidores directos de trombina, hidralazina, fármacos diuréticos, corticoesteroides, antiinflamatorios no esteroideos, anti-TNF, anti-IL-1 y anti-IL-6.

En algunas realizaciones, los compuestos o composiciones proporcionados en el presente documento y el agente o agentes terapéuticos adicionales se administran conjuntamente, mientras que, en otras realizaciones, los compuestos o composiciones proporcionados en el presente documento y el agente o agentes terapéuticos adicionales se administran por separado. Cuando se administran por separado, la administración puede tener lugar simultánea o secuencialmente, en cualquier orden.

El experto seleccionará las cantidades de los compuestos o de las composiciones proporcionadas en el presente documento y del otro u otros agentes terapéuticos, así como el momento relativo de administración, para conseguir el efecto terapéutico combinado deseado. La administración en combinación de un compuesto o de una composición proporcionado en el presente documento con otros agentes de tratamiento puede ser en combinación mediante administración concomitante en una composición unitaria que incluya ambos agentes terapéuticos o en composiciones separadas que incluyan, cada una de ellas, uno de los agentes terapéuticos. Como alternativa, la combinación puede administrarse por separado de forma secuencial en donde primero se administra un agente de tratamiento y después el otro oviceversa.Dicha administración secuencial puede ser próxima o remota en el tiempo.

El activador del receptor de IFNA, la composición que comprende el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, pueden administrarse por cualquier vía, incluyendo inyección intravenosa, intraperitoneal, subcutánea e intramuscular; administración por vía oral, tópica, transmucosa; o por inhalación nasal o pulmonar. También puede utilizarse la inyección de depósito. En la técnica se conocen métodos para formular y suministrar polipéptidos por diversas vías de administración. Véase, por ejemplo, Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins, Segunda Edición, Lars Hovgaard, Sven Frokjaer, Marco van de Weert; 14 de noviembre de 2012 por CRC Press.

Los péptidos que activan el IFNA pueden administrarse mediante genoterapia. En una realización, el IFNA se administra mediante genoterapia. Una molécula de ácido nucleico que codifica el IFNA se administra a un paciente para que se suministre en sus células, donde el ácido nucleico se transcribe y se traduce en polipéptido de IFNA. Dicho suministro puede realizarse mediante métodos víricos y no víricos.

En una realización, los compuestos y combinaciones de la invención pueden suministrase a través de un dispositivo en miniatura tal como una bomba de infusión implantable diseñada para proporcionar una infusión de fármacos prolongada continua o intermitente. Dichos dispositivos pueden utilizarse para administrar un activador del receptor de IFNA por vía intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal, intratecal, epidural o intraventricular.

Posología

El activador del receptor de IFNA puede administrarse de acuerdo con cualquier esquema de posología adecuado.

El activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, pueden administrarse a diversos intervalos. Los intervalos posológicos se seleccionan para conseguir el efecto terapéutico deseado. En caso de usos y métodos no terapéuticos, el intervalo posológico se selecciona para conseguir el efecto deseado sobre la pérdida o el mantenimiento de peso. En una realización preferida, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran en un intervalo posológico semanal.

En una realización adicional, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran dos veces por semana. En otra realización, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran cada dos días. En otra realización más, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran diariamente.

En una realización adicional, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran cada dos semanas. En otra realización, el activador del receptor de IFNA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran cada tres semanas. En otra realización más, el activador del receptor de INFA, las composiciones que comprenden el activador del receptor de IFNA y las combinaciones, se administran una vez al mes.

La cantidad de activador del receptor de IFNA administrada se selecciona para conseguir el efecto terapéutico deseado. En caso de usos no terapéuticos, la cantidad de activador del receptor de IFNA administrada se selecciona para conseguir el efecto deseado sobre la pérdida o el mantenimiento de peso. El activador del receptor de IFNA puede administrarse como una dosis fija o como una dosis basada en el peso.

En una realización, se administra una dosis fija de 10 |jg a 10 mg de IFNA. En una realización adicional, se administra una dosis fija de 100 jg a 9 mg de IFNA. En otra realización, se administra una dosis fija de 500 jg a 8 mg de IFNA. En otra realización más, se administra una dosis fija de 1 mg a 7 mg de IFNA. En una realización preferida, se administra una dosis fija de 2 mg a 6 mg de IFNA. En una realización más preferida, se administra una dosis fija de 5 mg de IFNA.

En una realización, se administra una dosis de IFNA de 0,1 jg/kg de peso corporal a 150 jg/kg de peso corporal. En una realización adicional, se administra una dosis de IFNA de 0,5 jg/kg de peso corporal a 100 jg/kg de peso corporal. En otra realización, se administra una dosis de IFNA de 1 jg/kg de peso corporal a 90 jg/kg de peso corporal. En una realización preferida, se administra una dosis de IFNA de 10 jg/kg de peso corporal a 80 jg/kg de peso corporal. En otra realización preferida, se administra una dosis de IFNA de 20 jg/kg de peso corporal a 70 jg/kg de peso corporal. En una realización más preferida, se administra una dosis de IFNA de 60 jg/kg de peso corporal.

En una realización, se administra una dosis de 10 jg a 10 mg de IFNA con un intervalo posológico semanal. En una realización preferida, se administra una dosis fija de 2 mg a 6 mg de IFNA con un intervalo posológico semanal. En una realización más preferida, se administra una dosis fija de 5 mg de IFNA con un intervalo posológico semanal.

En otra realización, se administra una dosis de IFNA de 0,1 jg/kg de peso corporal a 150 jg/kg de peso corporal con un intervalo posológico semanal. En una realización preferida, se administra una dosis de IFNA de 10 jg/kg de peso corporal a 80 jg/kg de peso corporal con un intervalo posológico semanal. En una realización más preferida, se administra una dosis de IFNA de 60 jg/kg de peso corporal con un intervalo posológico semanal.

Formulaciones

El activador del receptor de IFNA puede estar presente o administrarse en cualquier formulación adecuada.

El IFNA y las composiciones que comprenden IFNA proporcionados en el presente documento pueden liofilizarse para su conservación y reconstituirse en un líquido adecuado antes de su uso. El líquido puede ser agua estéril o una solución estéril adecuada. Puede emplearse cualquier método de liofilización (p. ej., secado por pulverización, secado en torta) y/o técnicas de reconstitución adecuados. En una realización particular, la invención proporciona una composición que comprende un IFNA liofilizado (secado por pulverización).

En una realización, el IFNA liofilizado o la composición liofilizada que comprende IFNA se proporciona junto con un líquido adecuado para su reconstitución y una jeringa para la inyección.

En una realización adicional, se proporciona una formulación líquida de IFNA. La formulación líquida puede comprender uno o más estabilizantes. En una realización, la formulación líquida no contiene estabilizantes. De acuerdo con un aspecto, la formulación líquida es estable durante un periodo de tiempo de 3 meses, preferentemente 6 meses y más preferentemente 12 meses durante el almacenamiento a 4 °C. De acuerdo con otro aspecto, la formulación líquida es estable durante un periodo de tiempo de 3 meses, preferentemente 6 meses y más preferentemente 12 meses durante el almacenamiento a temperatura ambiente.

En una realización, la formulación comprende una proteína transportadora. La proteína transportadora puede ser albúmina. El papel de la albúmina como molécula transportadora y su naturaleza inerte son propiedades deseables para su uso como portadora y transportadora de polipéptidosin vivo.En una realización, la proteína transportadora se fusiona con IFNA. Por ejemplo, el IFNA puede fusionarse con la albúmina. La fusión de la proteína transportadora, tal como albúmina, a IFNA, puede lograrse mediante manipulación genética, de tal manera que el ADN que codifica la proteína transportadora, p. ej., albúmina, o un fragmento de la misma, se une al ADN que codifica el IFNA.

En una realización, se proporciona una formulación de liberación lenta. Dichas formulaciones permiten que cantidades terapéuticamente eficaces del IFNA o de la composición que comprende el IFNA, se suministren al torrente circulatorio durante muchas horas o días después de la inyección o administración.

Los compuestos o composiciones también pueden administrarse en una formulación de gelin situ.Dichas formulaciones normalmente se administran como líquidos que forman un gel, ya sea por disipación del disolvente orgánico miscible en agua o por agregación de dominios hidrófobos presentes en la matriz. Como ejemplos no limitativos se incluyen la tecnología FLUID CRYSTAL (Camurus) y la tecnología SABER (Durect), y las formulaciones descritas en los documentos US 5714159, u S 6413539, US 6004573 y US 6117949.

Ejemplos

Métodos

Adenovirus que expresan IFNA2 e IFNA3 recombinante

Utilizando el sistema Gateway (Invitrogen), se construyeron adenovirus recombinantes con deleción E1/E3 deficientes para la replicación que expresaban IFNA2 (AdIFNA2) y adenovirus de imitación (Ad0) de control. El ADNc de IFNA2 utilizado se ha descrito anteriormente (Koltsidaet al.2011). El IFNA3 recombinante de ratón se adquirió en eBioscience.

Animales de experimentación y tratamientos

Ratones macho Apoe-/- (Jackson Laboratories) se alimentaron con una dieta de pienso normal que contenía 18,5 % de proteínas y 5,5 % de grasas (Harlan Tekland) y se analizaron a distintos momentos, tal y como se indica. Para la evaluación de los efectos invivodel IFNA, ratones macho Apoe-/- de 10 semanas de vida se trataron por vía intravenosa cada tres semanas con 5*108 AdIFNA2 en 200 pl de PBS estéril, Ad0 o vehículo de control (PBS), según se indique.

En un enfoque alternativo, se administraron 5 pg de IFNA3 recombinante de ratón (eBioscience) en 200 pl de PBS estéril por vía intraperitoneal dos veces por semana a ratones macho Apoe-/- de 10 semanas de vida. Al final del tratamiento, los ratones se sacrificaron y se recogieron suero y tejidos.

Mediciones del suero

Los niveles de insulina y leptina en suero se midieron con el Milliplex Map Mouse Adipokine Magnetic Bead Panel (Merck Millipore).

Pruebas de tolerancia a la glucosa y a la insulina

Los estudios se realizaron como describen Li etal.,2000 y Tordjman etal.,2001. La prueba de tolerancia a la glucosa (PTG) precedió a la prueba de tolerancia a la insulina (PTI) en 1 semana. La pTg se realizó después de un ayuno nocturno (lo que explica los niveles más bajos de glucosa en ayunas en comparación con los que siguieron a un ayuno de 5 horas). Para la PTG, los ratones recibieron una inyección intraperitoneal de D-glucosa al 10 % (1 g/kg de peso corporal) y para la PTI, una inyección intraperitoneal de insulina humana regular (Eli Lilly and Co.) a una dosis de 0,75 U/Kg de peso corporal. En la PTG, se analizó sangre de la vena de la cola (5-10 pl) con respecto a la glucosa a los 0, 20, 40, 60, 90 y 120 minutos y en la PTI a los 0, 20, 40, 60 y 120 minutos con el glucómetro Contour Next de Bayer (Bayer AG).

Método de calorimetría indirecta

La medición metabólica se realizó utilizando un sistema Oxymax de calorimetría indirecta (Columbus Instruments). En resumen, los ratones, previamente pesados, se instalaron individualmente en cámaras calorimétricas Oxymax específicamente diseñadas, con acceso a libre demanda a pienso y agua durante 72 h con un ciclo de 12 h de luz/12 h de oscuridad a una temperatura ambiente de 22 °C. Los ratones se instalaron individualmente durante 2 días antes de transferirlos a la cámara calorimétrica. El VO<2>, VCO<2>y las tasas se determinaron con los siguientes ajustes del sistema Oxymax: flujo de aire, 0,6 l/min, flujo de muestra, 0,5 l/min. El sistema se calibró con una mezcla de gases estándar para medir el O<2>consumido (VO<2>, ml/kg/h) y el CO<2>generado (VCO<2>, ml/kg/h). La tasa metabólica, el cociente respiratorio (relación de VCO<2>/VO<2>, RER(respiratory exchange ratio,razónde intercambio respiratorio)) y la actividad (recuentos), se evaluaron durante un periodo de 48 h. El gasto calórico se calculó como el producto del valor calorífico de oxígeno (3,815+1,232 * cociente respiratorio) y el volumen de O<2>consumido.

Análisis de lesiones ateroscleróticas

Secciones en serie de la válvula aórtica teñidas con Oil Red O (Sigma-Aldrich), que abarcaban una zona de 500 |jm y de aortas enteras teñidas con Sudán V (Sigma-Aldrich), se analizaron utilizando el programa informático Image J (Wayne Rasband).

Inmunofluorescencia-Inmunohistoquímica

Se tiñeron criosecciones de seno aórtico de ratón con anticuerpo CD68 de ratón (clon FA-11; Serotec), alfa actina de músculo liso (clon 1A4, Sigma-Aldrich), o anticuerpos monoclonales de control de isotipo y se realizó tinción de contraste con 4-,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI, Molecular Probes). Las zonas de tinción positiva se cuantificaron utilizando el programa informático Image J (Wayne Rasband).

Aislamiento de neutrófilos, estimulación y análisis de secuenciación de ARN

Para el aislamiento de neutrófilos, se extrajeron células de médula ósea de fémures y tibias de ratones macho TN (tipo natural) C57BL/6J y las suspensiones se filtraron a través de un tamiz celular de 40 jm . Los neutrófilos se purificaron con una pureza >99,7 % con el kit EasySep™ Mouse Neutrophil Enrichment (StemCell Technologies), siguiendo las instrucciones del fabricante. Los neutrófilos purificados se sembraron a 1*106 células/ml en placas de 24 pocillos y se dejaron sin tratar o se cultivaron durante 8 h en medio RPMI completo en presencia de 100 ng/ml de IFN<á>3 (eBioscience). Al final de la incubación, las células de recogieron y se purificó el ARN total con el kit RNeasy Micro (Qiagen) y se cuantificó en un NanoDrop (Thermo Scientific). Las bibliotecas de sec. de ARN se prepararon con el kit TruSeq RNA Library Prep v2 (Illumina) siguiendo las instrucciones del fabricante. La calidad de las bibliotecas se validó con un kit Agilent DNA 1000 ejecutado en un bioanalizador Agilent 2100. Las bibliotecas de ADNc con código de barras se agruparon en un grupo con las mismas concentraciones y se secuenciaron en un HiSeq2000 (Illumina) en el Genomics Core Facility del EMBL (Heidelberg, Alemania). A continuación, las muestras se analizaron utilizando protocolos estándar. Resumiendo, las lecturas en bruto se preprocesaron utilizando FastQC v.0.11.2 y cutadapt v.1.6, y después se mapearon en el genoma del ratón(Mus musculusUCSC versión mm10) utilizando la versión 2.0.13 de TopHat, Bowtie v.1.1.1 y Samtools versión v.1.1. La tabla de recuento de lecturas se elaboró con HTSeq v.0.6. La normalización y el análisis de expresión diferencial se realizaron utilizando R/Bioconductor DESeq2.

Análisis estadístico

La significación estadística de las diferencias se evaluó utilizando la prueba paramétrica de la t de Student para datos distribuidos normalmente y la prueba no paramétrica de la U de Mann-Whitney (MWW) para datos sesgados que se desvían de la normalidad.

Ejemplo 1. El IFNÁ disminuye los niveles de insulina en el suero.

Se diseñaron experimentos para investigar el efecto de la administración de IFNÁ en los niveles circulantes de insulina. RatonesApoe-/-de 10 semanas de vida se trataron por vía intravenosa con vehículo (PBS), con 5*108 adenovirus de imitación (Ad0) o con 5*108 adenovirus que expresaban IFNÁ2 (AdIFNÁ2) los días 0 y 21. Se recogieron los sueros y se analizaron el día 24. Los resultados de estos experimentos se muestran en la Figura 1. El tratamiento con ADIFNÁ indujo niveles elevados de IFNÁ y redujo notablemente los niveles de insulina (p<0,05) en los sueros de los animales de experimentación. También se trataron ratonesApoe-/-de 10 semanas de vida por vía intraperitoneal dos veces por semana con IFNÁ3 recombinante (5 jg/ratón durante un total de 16 semanas. Los grupos de control recibieron solución salina. A continuación se recogieron los sueros y se analizaron para detectar la presencia de insulina y leptina. Como se indica en la Figura 2, el IFNÁ3 recombinante redujo totalmente los niveles circulantes de insulina y leptina (p<0,05). Dado que la secreción de insulina se desencadena por el aumento de los niveles de glucemia y que la reducción de los niveles de insulina en la circulación indica una mejora de la capacidad de respuesta a la insulina de las células y los tejidos y una mejora de la captación de glucosa, estos datos sugieren un papel importante del IFNÁ en el metabolismo del cuerpo. La observación de que el tratamiento con IFNÁ también suprime la producción de leptina, una hormona clave segregada por los adipocitos en proporción directa a la cantidad de grasa corporal almacenada con el objetivo de contrarrestar el apetito y aumentar el gasto calórico, apunta además a un efecto central del IFNÁ en el almacenamiento de grasa y el aumento de peso.

Ejemplo 2. El IFNÁ promueve la sensibilidad a la insulina y mejora la captación de glucosa.

En una continuación del Ejemplo 1, se diseñaron experimentos para investigar los efectos directos del tratamiento con IFNÁ en la sensibilidad a la insulina. Ratones Apoe-/- de 10 semanas de vida se trataron con IFNÁ3 recombinante (5 jg/ratón) o con solución salina como control, por vía intraperitoneal dos veces por semana durante un total de 16 semanas. Los grupos de control recibieron solución salina. La prueba de tolerancia a la glucosa (PTG) precedió a la prueba de tolerancia a la insulina (PTI) en 1 semana. La PTG se realizó después de una noche en ayunas. Para la PTG, los ratones recibieron una inyección intraperitoneal de D-glucosa al 10%(1 g/kg de peso corporal) y para la PTI, una inyección intraperitoneal de insulina humana regular a una dosis de 0,75 U/kg de peso corporal. En la PTG, se analizó sangre de la vena de la cola (5-10 j l ) con respecto a la glucosa a los 0, 20, 40, 60, 90 y 120 minutos y en la PTI a los 0, 20, 40, 60 y 120 minutos con el glucómetro Contour Next Meter de Bayer. Los resultados se muestran en la Figura 3. El tratamiento con IFNA recombinante mejoró totalmente la sensibilidad a la insulina en ratones al potenciar la captación de glucosa después de la administración de insulina exógena. Es bien conocido que la resistencia a la insulina coexiste con la obesidad. También está demostrado que el aumento de los niveles de insulina favorece la obesidad, y ésta, a su vez, la resistencia a la insulina. Por lo tanto, este hallazgo aporta pruebas directas de que el IFNA es terapéuticamente eficaz para aumentar la sensibilidad a la insulina y tratar la resistencia a la insulina. Como la resistencia a la insulina favorece la obesidad, enfermedad metabólica y, finalmente, evoluciona hacia la diabetes, este hallazgo indica que el IFNA también puede utilizarse para tratar o impedir la obesidad, enfermedad metabólica, diabetes y comorbilidades relacionadas.

Ejemplo 3. El IFNA impide el aumento de peso en ratones Apoe-/-

Para abordar el efecto del tratamiento con IFNA en el aumento de peso y la obesidad se utilizaron animales de experimentación. Ratones Apoe^ de 10 semanas de vida se trataron con IFNA3 recombinante (5 jg/ratón) cada quince días durante un total de 16 semanas. El grupo de ratones de control recibió solución salina. Se midió el peso diariamente desde la semana 10 hasta la 26. Como se muestra en la Figura 4, el tratamiento con IFNA recombinante inhibió significativamente el aumento de peso. Estos datos demuestran que el IFNA puede impedir o tratar eficazmente la obesidad.

Ejemplo 4. El IFNA disminuye el consumo de alimento y reduce la tasa de quema de hidratos de carbono.

Se realizaron experimentos para arrojar luz sobre los efectos supresores del tratamiento con IFNA en el aumento de peso. Ratones Apoe^ de 10 semanas de vida se trataron con IFNA3 recombinante (5 jg/ratón) cada quince días durante un total de 16 semanas, como se ha indicado anteriormente. Los ratones de control recibieron solución salina. A continuación se realizaron mediciones metabólicas utilizando un sistema Oxymax de calorimetría indirecta según protocolos estándar. El consumo de alimento, la tasa metabólica, la tasa de intercambio respiratorio y la actividad de la tasa de oxidación, se evaluaron durante un período de 48 h. Los resultados se muestran en la Figura 5 y revelan un fuerte efecto del tratamiento con IFNA recombinante en la disminución de la ingesta de alimento y la reducción del consumo de hidratos de carbono, ambos determinantes clave del peso corporal. Estos datos concuerdan con el menor peso y la reducción de los niveles circulantes de insulina y leptina de los ratones tratados con IFNA, y demuestran que éste corrige el desequilibrio entre la ingesta de alimento y el gasto calórico e impide la acumulación excesiva de grasa.

Ejemplo 5. El IFNA reduce la aterosclerosis e impide la vulnerabilidad de la placa aterosclerótica

RatonesApoe-/-de 10 semanas de vida se trataron por vía intravenosa con vehículo (PBS), con 5*108 adenovirus de imitación (Ad0) o con 5*108 adenovirus que expresaban IFNA2 (AdIFNA) a intervalos de 3 semanas durante 12 semanas. Como alternativa, ratones Apoe_/' de 10 semanas de vida recibieron una administración cada quince días de IFNA3 recombinante(5 jg/ratón) por vía intraperitoneal durante un total de 12 semanas. Los ratones de control recibieron solución salina. En ambos casos, a las 22 semanas, se analizó el desarrollo de la aterosclerosis en los ratones. En las Figuras 6 y 7 se muestran microfotografías de luz representativas de secciones teñidas con ORO y microfotografías fluorescentes de secciones teñidas con CD68 a nivel de la válvula aórtica. Los resultados incluyen sus respectivos análisis morfométricos. El análisis macroscópico del arco aórtico con tinción Sudán IV se muestra en la Figura 8. Dado que los ratonesApoe--son el modelo animal de aterosclerosis mejor establecido, estos datos demuestran la fuerza del IFNA en el tratamiento de la aterosclerosis al reducir el tamaño de la lesión y la acumulación de macrófagos en las lesiones ateroscleróticas en desarrollo. Además, dado que la presencia de lípidos y células CD68+ indican un fenotipo de placa más propenso a la rotura o "vulnerable", estos hallazgos subrayan los efectos beneficiosos del tratamiento con IFNA en la reducción del riesgo de que las lesiones ateroscleróticas se rompan y den lugar a infarto de miocardio o ictus.

Ejemplo 6. El IFNA reduce la coagulación y la trombosis

Se aislaron neutrófilos de ratones C57BL/6 con una pureza >99 % y se expusieron a 100 ng/ml de IFNA3 recombinante durante 8 h. A continuación, se realizó un perfil transcripcional mediante secuenciación de ARN y los datos se analizaron mediante metodologías estándar. El tratamiento con IFNA2 reduce los niveles relativos de expresión del factor tisular (FT), de la Catepsina G (CTSG), de la elastasa (ELANE), de la peptidil arginina desaminasa tipo IV (PADI4) y del Il-1 ra, como se muestra en la Figura 9. La capacidad del IFNA2 para reducir estos mediadores clave implicados en la coagulación, activación de neutrófilos y formación de trampas extracelulares de neutrófilos, pone de relieve la fuerza del IFNA para suprimir la formación de coágulos y la trombosis.

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Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un activador del receptor de IFNA para su uso en

(a) la prevención o el tratamiento de un trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación en un sujeto; o

(b) determinar la susceptibilidad de un sujeto que padece un trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación al tratamiento con el activador del receptor de IFNA, en donde el activador del receptor de IFNA se administra al sujeto y se determina el efecto sobre el trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o el trastorno de la coagulación, respectivamente,

en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

2. El activador del receptor de IFNA para el uso de la reivindicación 1, en donde la aterosclerosis provoca la formación y rotura de placas ateromatosas, o el trastorno de la coagulación es la trombosis.

3. Un activador del receptor de IFNA para su uso en la reducción terapéutica del peso corporal o el sobrepeso en un sujeto, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

4. Uso de un activador del receptor de IFNA para la reducción no terapéutica del peso corporal o el sobrepeso en un sujeto, opcionalmente, en donde la reducción no terapéutica del peso corporal o del sobrepeso implica la supresión del apetito y/o la supresión de la sobrealimentación, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.

5. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, o el uso de la reivindicación 4, en donde el sujeto es un sujeto mamífero, opcionalmente, en donde el sujeto es un sujeto humano.

6. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5, o el uso de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde el activador del receptor de IFNA se administra junto con uno o más agente(s) terapéutico(s) adicional(es), opcionalmente, en donde el(los) agente(s) terapéutico(s) adicional(es) se selecciona(n) del grupo que consiste en insulina, metformina (Glucophage), meglitinidas (Prandin y Starlix), sulfonilureas (gliburida/DiaBeta, glipizida/Glucotrol y Glimepirida/Amaryl), canagliflozina (Invokana) y dapagliflozina (Farxiga), tiazolidinadionas, tales como pioglitazona (Actos), acarbosa (Precose), pramlintida (Symlin), exenatida (Byetta), liraglutida (Victoza), exenatida de acción prolongada (Bydureon), albiglutida (Tanzeum), dulaglutida (Trulicity), inhibidores de DPP-IV (sitagliptina, saxagliptina, linagliptina), fentermina, dietilpropión, fendimetrazina, benzfetamina, oxintomodulina, clorhidrato de fluoxetina, qnexa (topiramato y fentermina), excalia (bupropión y zonisamida), contrave (bupropión y naltrexona), xenical (Orlistat), cetilistat, y GT 389-255, estatinas, hipocolesterolemiantes, tales como inhibidores de la proproteína convertasa subtilisina kexina tipo 9 (PCSK9), inhibidores de ACE, inhibidores de aldosterona, bloqueantes de receptores de angiotensina II, beta-bloqueantes, bloqueantes de los canales de calcio, antiagregantes plaquetarios tales como ácido acetilsalicílico (aspirina), clopidogrel (Plavix) o dipiridamol (Persantine), anticoagulantes tales como warfarina (Coumadin), heparina, inhibidores directos del factor Xa, inhibidores directos de trombina, hidralazina, fármacos diuréticos, corticoesteroides, antiinflamatorios no esteroideos, anti-TNF, anti-IL-1 y anti-IL-6.

7. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-6, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA.

8. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-7, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-7, en donde el IFNA es IFNA humano, opcionalmente, en donde el IFNA se selecciona del grupo que consiste en IFNA1, IFNA2, IFNAA e IFNA4.

9. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-8, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-8, en donde un mamífero se trata con IFNA homólogo.

10. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-9, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en donde el IFNA está pegilado, en particular, monopegilado o conjugado con una fracción de óxido de polialquilo.

11. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-10, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-10, en donde el IFNA se administra mediante inyección intravenosa, intraperitoneal, subcutánea e intramuscular; administración por vía oral, tópica o transmucosa; por inhalación nasal o pulmonar o mediante genoterapia.

12. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-11, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-11, en donde el IFNA se administra

(i) semanalmente,

(ii) cada dos semanas, o

(iii) dos veces por semana.

13. El activador del receptor de IFNA para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o 5-12, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 4-12, en donde el IFNA se administra a una dosis seleccionada entre

(i) de 10 |jg a 10 mg, de 100 |jg a 9 mg, de 500 |jg a 8 mg, de 1 mg a 7 mg, de 2 mg a 6 mg y 5 mg; o (ii) 0,1-150 jg/kg de peso corporal, 0,5-100 jg/kg de peso corporal, 1-90 jg/kg de peso corporal, 10-80 jg/kg de peso corporal, 20-70 jg/kg de peso corporal y 60 jg/kg de peso corporal.

14. Una composición farmacéutica que comprende un activador del receptor de IFNA y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con la obesidad, aterosclerosis o un trastorno de la coagulación, en donde el trastorno relacionado con la obesidad se selecciona del grupo que consiste en obesidad, prediabetes, diabetes (incluida la diabetes de tipo 1 , la diabetes de tipo 2 y la diabetes gestacional), resistencia a la insulina, enfermedad metabólica, síndrome metabólico, cardiopatía coronaria, arteriopatía de carótida, infarto de miocardio, ictus, trombosis, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, y en donde el activador del receptor de IFNA es IFNA, o un polinucleótido que expresa IFNA.