ES3021859T3 - Parp1 inhibitors - Google Patents

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ES3021859T3
ES3021859T3 ES20743121T ES20743121T ES3021859T3 ES 3021859 T3 ES3021859 T3 ES 3021859T3 ES 20743121 T ES20743121 T ES 20743121T ES 20743121 T ES20743121 T ES 20743121T ES 3021859 T3 ES3021859 T3 ES 3021859T3
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Martin Packer
Jeffrey Johannes
Sudhir Hande
Sebastien Degorce
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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de azaquinolona de Fórmula (I) y a su uso en medicina. Fórmula (I). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de PARP1
La presente divulgación se refiere a compuestos de azaquinolona sustituidos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos que inhiben la familia de poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) de enzimas. La presente divulgación también se refiere al uso de estos compuestos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en medicina, por ejemplo en el tratamiento de enfermedades en las que la inhibición de la función PARP1 o PARP1 es de importancia terapéutica. La presente divulgación también se refiere a métodos de tratamiento y métodos de fabricación de medicamentos que usan compuestos de acuerdo con la divulgación.
La familia de enzimas PARP desempeña un papel importante en varios procesos celulares, tales como replicación, recombinación, remodelación de la cromatina y reparación del daño en el ADN(O'Connor MJ, Mol Cell (2015) 60(4) :547-60).
Se enseñan ejemplos de inhibidores de PARP y su mecanismo de acción en, por ejemplo, el documento WO2004/080976. US 2010/0222348 divulga derivados de quinolinona que tiene actividad inhibidora de PARP
PARP1 y PARP2 son las PARP más extensamente estudiadas por su papel en la reparación del daño en el ADN. PARP1 se activa mediante roturas de daño en el ADN y funciona catalizando la adición de policadenas (ADP-ribosa) (PAR) a proteínas diana. Esta modificación postraduccional, conocida como PARilación, media en el reclutamiento de factores de reparación del ADN adicionales a lesiones de ADN.
Tras la finalización de este papel de reclutamiento, la autoPARilación de PARP desencadena la liberación de PARP unido del ADN permitiendo el acceso a otras proteínas de reparación del ADN para completar la reparación. Por tanto, la unión de PARP a sitios dañados, su actividad catalítica y su liberación final del ADN son todas etapas importantes para que una célula cancerosa responda al daño en el ADN provocado por agentes quimioterápicos y radioterapia(Bai P. Biology of poly(ADP-ribose) polymerases: the factótums of cell maintenance. Mol Cell 2015;58:947-58.).
La inhibición de enzimas de la familia PARP se ha aprovechado como estrategia para destruir selectivamente células cancerosas inactivando rutas de reparación del ADN complementarias. Varios estudios preclínicos y clínicos han demostrado que las células tumorales que llevan alteraciones perjudiciales de BRCA1 o BRCA2, proteínas supresoras de tumores clave implicadas en la reparación de roturas de ADN bicatenario (DSB) mediante recombinación homóloga (HR), son selectivamente sensibles a inhibidores de moléculas pequeñas de la familia PARP de enzimas de reparación del ADN. Tales tumores tienen rutas de reparación por recombinación homóloga (HRR) deficientes y son dependientes de la función de enzimas PARP para la supervivencia. Aunque la terapia con inhibidores de PARP ha seleccionado como diana predominantemente cánceres con mutación deBRCA,se han sometido a prueba clínicamente inhibidores de PARP en tumores sin mutación deBRCA,aquellos que presentan deficiencia de recombinación homóloga (HRD)(Turner N, Tutt A, Ashworth A. Hallmarks of 'BRCAness' in sporadic cancers. Nat Rev Cancer 2004;4: 814-9.).
Se cree que inhibidores de PARP que tienen selectividad mejorada por PARP1 pueden presentar eficacia mejorada y toxicidad reducida en comparación con otros inhibidores de PARP1/2 clínicos. Se cree también que una inhibición fuerte selectiva de PARP1 conduciría al atrapamiento de PARP1 en el ADN, dando como resultado roturas bicatenarias en el ADN (DSB) a través del colapso de las horquillas de replicación en la fase S. Se cree también que el atrapamiento de PARP1-ADN es un mecanismo eficaz para destruir selectivamente células tumorales que tienen HRD.
Existe por tanto una necesidad médica no satisfecha de inhibidores de PARP eficaces y seguros. Especialmente inhibidores de PARP que tienen selectividad por PARP1.
El solicitante ha descubierto que las azaquinolonas descritas en la presente tienen sorprendentemente actividad inhibidora de PARP, y por tanto pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades y estados en los que la función de PARP tiene significación farmacológica. Además, las azaquinolonas descritas en la presente tienen alta selectividad por PARP1 con respecto a otros miembros de la familia PARP tales como PARP2, PARP3, PARP5a y PARP6. Además, las azaquinolonas descritas en la presente tienen ventajosamente baja actividad de hERG.
En un aspecto de la invención, el solicitante pone a disposición una clase de compuestos de fórmula (Ia):
en donde:
R<1>es alquilo C<1 -4>,
R<2>se selecciona de H, halo, alquilo C<1-4>y fluoroalquilo C<1 -4>,
R<3>es H o alquilo C<1 -4>, y
R<4>es H
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto adicional, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula la, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un diluyente, excipiente o vehículo inerte farmacéuticamente aceptable.
En un aspecto adicional, se proporciona un compuesto de fórmula la o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento o la profilaxis de enfermedades y estados en los que la inhibición de PARP1 es beneficiosa. En realizaciones, la memoria descriptiva proporciona un compuesto de fórmula la o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de cáncer. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas, próstata, hematológico, gastrointestinal tal como gástrico y colorrectal, o de pulmón. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas o próstata.
En un aspecto adicional, se proporciona el compuesto de fórmula la o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o condiciones en las que la inhibición de pAr P1 es beneficiosa. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas, próstata, hematológico, gastrointestinal tal como gástrico y colorrectal, o de pulmón. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas o próstata.
En un aspecto adicional, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula la o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para usarse en el tratamiento de enfermedades o estados en los que la inhibición de PARP1 es beneficiosa. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas, próstata, hematológico, gastrointestinal tal como gástrico y colorrectal, o de pulmón. En realizaciones, el cáncer es cáncer de mama, ovario, páncreas o próstata.
En un aspecto adicional, se proporciona un compuesto de fórmula la, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en medicina.
En un aspecto adicional, el compuesto de fórmula la en forma de base libre.
En un aspecto adicional, se proporciona un compuesto de fórmula la o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento.
En un aspecto adicional, se proporcionan los ejemplos dados a conocer en la presente.
En un aspecto, se proporciona un compuesto de fórmula la que es 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
En un aspecto, se proporciona un compuesto de fórmula la que es 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida.
Aspectos adicionales de la invención resultarán evidentes para un experto en la técnica a partir de la lectura de esta memoria descriptiva.
Se sabe bien que el bloqueo del canal iónico cardiaco codificado por el gen relacionado con éter-a-gogo humano (hERG) es un factor de riesgo en el descubrimiento y desarrollo de fármacos. El bloqueo de hERG puede provocar problemas de seguridad tales como arritmia cardiaca. Ventajosamente, los compuestos de fórmula la tienen baja actividad de hERG. En una realización, se proporciona un compuesto de fórmula Ia que tiene una CI50 >10 pM. En una realización se proporciona un compuesto de fórmula la que tiene una CI50 >20 pM.
Para minimizar los riesgos de efectos fuera de diana, es deseable que las moléculas de fármaco presenten selectividad por una diana específica. Los compuestos de fórmula la presentan ventajosamente selectividad por PARP1 con respecto a otros miembros de la familia PARP incluyendo PARP2,<p>A<r>P3, PARP5a y PARP6. Ventajosamente, los compuestos de fórmula la presentan selectividad por PARP1 con respecto a PARP2. En una realización, se proporciona un compuesto de fórmula la que tiene una selectividad de 10 veces para PARP1 con respecto a PARP2. En una realización, se proporciona un compuesto de fórmula la que tiene una selectividad de 100 veces para PARP1 con respecto a Pa Rp2.
Otro aspecto adicional proporciona el uso de un compuesto de fórmula la en la preparación de un medicamento para su uso como adyuvante en la terapia del cáncer o para potenciar células tumorales para el tratamiento con radiación ionizante o agentes quimioterápicos, o terapias basadas en anticuerpos tales como inmunoconjugados o conjugados de anticuerpo-fármaco.
Otros aspectos adicionales proporcionan el tratamiento de una enfermedad mejorado por la inhibición de PARP1, que comprende administrar a un sujeto que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula la, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica y el tratamiento de cáncer, que comprende administrar a un sujeto que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula la en combinación, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica, simultánea o secuencialmente con radiación ionizante o agentes quimioterápicos.
En aspectos adicionales, puede usarse un compuesto de fórmula la en la preparación de un medicamento para el tratamiento de cáncer que es deficiente en la actividad de reparación de DSB de ADN dependiente de recombinación homóloga (HR), o en el tratamiento de un paciente de un cáncer que es deficiente en la actividad de reparación de DSB de ADN dependiente de HR, que comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto.
La ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR repara roturas bicatenarias (DSB) en el ADN por medio de mecanismos homólogos para reformar una hélice de ADN continua (K.K. Khanna y S.P Jackson, Nat. Genet.
27(3): 247-254 (2001)). Los componentes de la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR incluyen, pero no se limitan a, ATM (NM_000051), RAD51 (NM_002875), RAD51L1 (NM_002877), RAD51C (NM_002876), RAD51L3 (NM_002878), DMC1 (NM_007068), XRCC2 (NM_005431), XRCC3 (NM_005432), RAD52 (NM_002879), RAD54L (NM_003579), RAD54B (NM_012415), BRCA1 (NM_007295), BRCA2 (NM_000059), RAD50 (NM_005732), MRE11A (NM_005590) y NBS1 (NM_002485). Otras proteínas implicadas en la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR incluyen factores reguladores tales como EMSY (Hughes-Davies, etal., Cell,115, pp523-535). También se describen componentes de HR en Wood,et al., Science,291, 1284-1289 (2001).
Un cáncer que es deficiente en reparación de DSB de ADN dependiente de HR puede comprender o consistir en una o más células cancerosas que tienen una capacidad reducida o suprimida de reparar DSB de ADN a través de esa ruta, en relación con células normales, es decir, la actividad de la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR puede estar reducida o suprimida en una o más células cancerosas.
La actividad de uno o más componentes de la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR puede estar suprimida en la una o más células cancerosas de un individuo que tiene un cáncer que es deficiente en reparación de DSB de ADN dependiente de HR. Los componentes de la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR están bien caracterizados en la técnica (véase, por ejemplo, Wood,et al., Science,291, 1284-1289 (2001)) e incluyen los componentes enumerados anteriormente.
En algunas realizaciones, las células cancerosas pueden tener un fenotipo deficiente en BRCA1 y/o BRCA2, es decir, la actividad de BRCA1 y/o BRCA2 está reducida o suprimida en las células cancerosas. Las células cancerosas con este fenotipo pueden ser deficientes en BRCA1 y/o BRCA2, es decir, la expresión y/o actividad de BRCA1 y/o BRCA2 puede estar reducida o suprimida en las células cancerosas, por ejemplo por medio de mutación o polimorfismo en el ácido nucleico codificante, o por medio de amplificación, mutación o polimorfismo en un gen que codifica para un factor regulador, por ejemplo el gen EMSY que codifica para un factor regulador de BRCA2 (Hughes-Davies,et al., Cell,115, 523-535).
BRCA1 y BRCA2 son supresores de tumores conocidos cuyos alelos de tipo natural se pierden frecuentemente en tumores de portadores heterocigotos (Jasin M.,Oncogene,21(58), 8981-93 (2002); Tutt,et al., Trends Mol Med.,8 (12), 571-6, (2002)). La asociación de mutaciones de BRCA1 y/o BRCA2 con cáncer de mama está bien establecida en la técnica (Radice, P.J.,Exp Clin Cancer Res.,21(3 Suppl), 9-12 (2002)). La amplificación del gen EMSY, que codifica para un factor de unión a BRCA2, también se sabe que está asociada con cáncer de mama y ovario. Los portadores de mutaciones en BRCA1 y/o BRCA2 tienen también un riesgo elevado de determinados cánceres, incluyendo cáncer de mama, ovario, páncreas, próstata, hematológico, gastrointestinal y de pulmón.
En algunas realizaciones, el individuo es heterocigoto para una o más variaciones, tales como mutaciones y polimorfismos, en BRCA1 y/o BRCA2 o un regulador de los mismos. La detección de variación en BRCA1 y BRCA2 se conoce bien en la técnica y se describe, por ejemplo en los documentos EP 699754, EP 705903, Neuhausen, S.L. y Ostrander, E.A.,Genet. Test,1, 75-83 (1992); Chappnis, PO. y Foulkes, W.O.,Cáncer Treat Res,107, 29 59 (2002); Janatova M., etal., Neoplasma,50(4), 246-505 (2003); Jancarkova, N.,Ceska Gynekol.,68{1), 11-6 (2003)). La determinación de la amplificación del factor de unión a BRCA2 EMSY se describe en Hughes-Davies, etal., Cell,115, 523-535).
Las mutaciones y polimorfismos asociados con cáncer pueden detectarse al nivel de ácido nucleico detectando la presencia de una secuencia de ácido nucleico variante o al nivel de proteína detectando la presencia de un polipéptido variante (es decir, un mutante o variante alélica).
Definiciones
Los grupos alquilo y restos con una cadena lineal o ramificada, por ejemplo alquilo C<1 -8>, alquilo C<1 -6>, alquilo C<1-4>o alquilo C<5-6>. Ejemplos de grupos alquilo son metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo y n-octilo, tales como metil o n-hexilo.
Grupos fluoroalquilo son grupos alquilo en los que uno o más átomos de H se reemplazan por uno o más átomos de flúor, por ejemplo fluoroalquilo C<1 -8>, fluoroalquilo C<1 -6>, fluoroalquilo C<1-4>o fluoroalquilo C<5-6>. Los ejemplos incluyen fluorometilo (CH<2>F-), diflurometilo (CHF<2>-), trifluorometilo (CF<3>-), 2,2,2-trifluoroetilo (CF<3>CH<2>-), 1,1 -difluoroetilo (CH<3>CHF<2>-), 2,2-difluoroetilo (CHF<2>CH<2>-) y 2-fluoroetilo (CH<2>FCH<2>-).
Halo significa flúor, cloro, bromo y yodo. En una realización, halo es flúor o cloro.
En la presente memoria descriptiva, a no ser que se indique de otro modo, la expresión “farmacéuticamente aceptable” como se usa en el presente documento se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, a criterio médico, adecuados para emplear en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin provocar excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, con una relación riesgo/beneficio razonable.
En la presente memoria descriptiva, la expresión “cantidad eficaz” se refiere a una cantidad de un compuesto o composición que es suficiente para modificar de manera significativa y positiva los síntomas y/o afecciones que se han de tratar (p. ej., proporcionar una respuesta clínica positiva). La cantidad eficaz de un principio activo para emplear en una composición farmacéutica variará dependiendo de la afección particular que se esté tratando, la gravedad de esta, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente, el o los principios activos particulares que se utilicen, el o los excipientes/portadores farmacéuticamente aceptables particulares utilizados y factores similares con los cuales estará familiarizado el médico responsable.
El término "tratar", como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso de, retrasar la progresión de, retrasar la aparición, o prevenir el trastorno o afección a la que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de tal trastorno o afección. El término "tratamiento", como se usa en el presente documento, a menos que se indique otra cosa, se refiere al acto de tratar ya que "tratamiento" se define inmediatamente antes. El término "tratar" también incluye el tratamiento adyuvante y neoadyuvante de un sujeto. Para evitar dudas, la referencia en el presente documento a "tratamiento" incluye la referencia a un tratamiento curativo, paliativo y profiláctico, y a la administración de un medicamento para su uso en dicho tratamiento.
Los compuestos de fórmula Ia pueden formar sales de ácidos o bases farmacéuticamente aceptables estables, y en tales casos la administración de un compuesto como una sal puede ser apropiada. Los ejemplos de sales de adición de ácidos incluyen acetato, adipato, ascorbato, benzoato, bencenosulfonato, bicarbonato, bisulfato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, colina, citrato, ciclohexil sulfamato, dietilendiamina, etanosulfonato, fumarato, glutamato, glicolato, hemisulfato, 2-hidroxietilsulfonato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, hidroximaleato, lactato, malato, maleato, metanosulfonato, meglumina, 2-naftalenosulfonato, nitrato, oxalato, pamoato, persulfato, fenilacetato, fosfato, difosfato, picrato, pivalato, propionato, quinato, salicilato, estearato, succinato, sulfamato, sulfanilato, sulfato, tartrato, tosilato (p-toluenosulfonato), trifluoroacetato y undecanoato. Se prefieren las sales fisiológicamente aceptables atóxicas, aunque otras sales también pueden ser útiles, como por ejemplo, en el aislamiento o la purificación del producto.
Las sales pueden formarse por medios convencionales, como por ejemplo, haciendo reaccionar la forma de base libre del producto con uno o más equivalentes del ácido adecuado en un disolvente o medio en el que la sal sea insoluble, o en un disolvente, tal como agua, que se elimina al vacío o por liofilización, o por intercambio de los aniones de una sal existente por otro anión en una resina de intercambio iónico adecuada.
Los compuestos de fórmula la pueden tener más de un centro quiral, y ha de entenderse que la solicitud abarca todos los estereoisómeros, enantiómeros y diastereoisómeros individuales y mezclas de los mismos. Por lo tanto, se entenderá que, en la medida en que los compuestos de fórmula Ia pueden existir en formas ópticamente activas o racémicas en virtud de uno o más átomos de carbono asimétricos, la aplicación incluye en su definición cualquier forma ópticamente activa o racémica que posea la actividad mencionada anteriormente. La presente solicitud abarca todos estos estereoisómeros que tienen la actividad definida en el presente documento.
Por tanto, a lo largo de toda la memoria descriptiva, cuando se hace referencia al compuesto de fórmula Ia, ha de entenderse que el término compuesto incluye diastereoisómeros, mezclas de diastereoisómeros y enantiómeros que son inhibidores de PARP1.
También debe entenderse que ciertos compuestos de fórmula Ia, y sales farmacéuticas de los mismos, pueden existir en formas solvatadas y no solvatadas, tales como, por ejemplo, formas hidratadas y anhidras. Debe apreciarse que los compuestos en el presente documento abarcan todas estas formas solvatadas. A efectos de claridad, esto incluye tanto las formas solvatadas (p. ej., hidratadas) de la forma libre del compuesto, como las fórmulas formas solvatadas (p. ej., hidratadas) de la sal del compuesto.
La fórmula Ia tal como se describe en la presente pretende abarcar todos los isótopos de sus átomos constituyentes. Por ejemplo, H (o hidrógeno) incluye cualquier forma isotópica de hidrógeno, incluyendo 1H, 2H (D), y 3H (T); C incluye cualquier forma isotópica de carbono, incluyendo 12C, 13C, y 14C; O incluye cualquier forma isotópica de oxígeno, incluyendo 16O, 17O y 18O; N incluye cualquier forma isotópica de nitrógeno, incluyendo 13N, 14N y 15N; F incluye cualquier forma isotópica de flúor, incluyendo 19F y 18F; y similares. En un aspecto, los compuestos de fórmula Ia incluyen isótopos de los átomos abarcados en la presente en cantidades correspondientes con su abundancia natural. Sin embargo, en ciertos casos, puede ser deseable enriquecer uno o más átomos en un isótopo particular que normalmente se encontraría presente en menor abundancia. Por ejemplo, 1H estaría presente normalmente en más de un 99,98 % de abundancia; sin embargo, en un aspecto, un compuesto de cualquier fórmula presentada en el presente documento puede enriquecerse en 2H o 3H en una o más posiciones donde H esté presente. En otro aspecto, cuando un compuesto de cualquiera de las fórmulas presentadas en el presente documento se enriquece en un isótopo radioactivo, por ejemplo 3H y 14C, el compuesto puede ser útil en ensayos de distribución de fármaco y/o sustrato en tejido. Debe apreciarse que la presente solicitud abarca todas estas formas isotópicas.
Los compuestos de fórmula Ia, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se administrarán normalmente por vía oral en forma de preparaciones farmacéuticas que comprenden el principio activo o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, o un solvato de una sal de este tipo, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del trastorno y del paciente a tratar, las composiciones pueden administrarse a dosis variables.
Las formulaciones farmacéuticas del compuesto de fórmula Ia descrito anteriormente se pueden preparar para administración oral, particularmente en forma de comprimidos o cápsulas, y especialmente implicando tecnologías destinadas con el objetivo de proporcionar la liberación de fármacos dirigidos al colon (Patel, M. M. Expert Opin. Drug Deliv. 2011, 8 (10), 1247-1258).
Las formulaciones farmacéuticas del compuesto de fórmula Ia descrito anteriormente pueden administrarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985).
Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para su administración oral pueden comprender uno o más vehículos y/o excipientes fisiológicamente compatibles y pueden estar en forma sólida o líquida. Los comprimidos y cápsulas se pueden preparar con agentes aglutinantes, cargas, lubricantes y/o tensioactivos, tal como laurilsulfato de sodio. Las composiciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, agentes emulsionantes y/o conservantes. Las composiciones líquidas se pueden encapsular, por ejemplo, en gelatina para proporcionar una forma de dosificación unitaria. Las formas farmacéuticas orales sólidas incluyen comprimidos, cápsulas de cubierta dura en dos partes y cápsulas de gelatina elástica blanda (SEG). Dichas cápsulas de cubierta dura de dos piezas pueden prepararse, por ejemplo, rellenando un compuesto de fórmula (Ia) en una cubierta de gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).
Una formulación de cubierta seca comprende típicamente de aproximadamente el 40% al 60% p/p de concentración de gelatina, aproximadamente del 20% al 30% de plastificante (tal como glicerina, sorbitol o propilenglicol) y aproximadamente del 30% al 40% de concentración de agua. También pueden estar presentes otros materiales tales como conservantes, tintes, opacificantes y saporíferos. El material de relleno líquido comprende un fármaco sólido que se ha disuelto, solubilizado o dispersado (con agentes de suspensión tales como cera de abeja, aceite de ricino hidrogenado o polietilenglicol 4000) o un fármaco líquido en vehículos o combinaciones de vehículos tales como aceite mineral, aceites vegetales, triglicéridos, glicoles, polioles y agentes tensioactivos.
Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de fórmula la, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en el tratamiento terapéutico de seres humanos son aproximadamente 0,0001-100 mg/kg de peso corporal.
Se prefieren las formulaciones orales, particularmente comprimidos o cápsulas, que pueden formularse por métodos conocidos por los expertos en la técnica para proporcionar dosis del compuesto activo en el intervalo de 0,1 mg a 1000 mg.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra una difracción de polvo de rayos X del ejemplo 4 forma A.
La figura 2 muestra un perfil de DSC del ejemplo 4 forma A.
Ejemplos
Los compuestos de la solicitud ahora se explicarán con más detalle por referencia a los siguientes ejemplos no limitativos.
Condiciones experimentales generales
Se obtuvieron espectros de 1H-RMN usando un espectrómetro Bruker 300 MHz, 400 MHz o 500 MHz a 27 °C a menos que se indique otra cosa; los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (ppm, unidades 5) y se referencian al isotopólogo de mono-1H residual del disolvente (CHCh: 7,24 ppm; CHDCh: 5,32 ppm; CD3S(=O)CD2H: 2,49 ppm). Las constante de acoplamiento se facilitan en unidades de hercios (Hz). Los patrones de división describen multiplicidades evidentes y se designan como s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuartete), m (multiplete) y s a (singlete ancho). Se llevó a cabo CL-EM usando una UPLC de Waters equipada con un espectrómetro de masas SQD de Waters o LC-20AD LC-20XR LC-30AD de Shimadzu con un espectrómetro de masas Shimadzu 2020. Los iones moleculares notificados corresponden a [M+H]+ a menos que se indique otra cosa; para moléculas con patrones isotópicos múltiples (Br, Cl, etc.) el valor notificado es el obtenido para la masa isotópica más baja a menos que se especifique otra cosa.
Se realizó cromatografía ultrarrápida usando cromatografía ultrarrápida en fase lineal en un sistema de purificación SP1TM de Biotage™, CombiFlash®Rf de ISCO o en un sistema Gilson de Thermo Fisher usando cartuchos de sílice de fase normal FLASH+™ (40M, 25M o 12 M) o SNAPTM KP-Sil (340, 100, 50 o 10), columnas de sílice-CS Flash Column de Agela, con columnas ultrarrápidas C18 o cromatografía ultrarrápida convencional. En general, todos los disolventes utilizados estaban comercializados y eran de calidad analítica. Se utilizaron habitualmente disolventes anhidros para las reacciones. Los separadores de fases utilizados en los ejemplos son columnas separadoras de fases ISOLUTE®. Los intermedios y los ejemplos mencionados a continuación se nombraron usando ACD/Name 12,01 de Advanced Chemistry Development, Inc. (ACD/Labs). Los materiales de partida se obtuvieron de fuentes comerciales o se hicieron a través de rutas de la bibliografía.
Análisis de difracción de polvo de rayos x (XRPD)
Se realizó el análisis de XRPD usando un difractómetro Bruker D8, que está disponible comercialmente de Bruker AXS Inc™ (Madison, Wisconsin). Los espectros de XRPD se obtuvieron montando una muestra (aproximadamente 10 mg) del material para el análisis sobre un montaje de oblea de cristal de silicio individual (por ejemplo, un soporte de muestra de difracción de rayos X de fondo cero de silicio de Bruker) y extendiendo la muestra para formar una capa fina con la ayuda de un portaobjetos de microscopio. Se centrifugó la muestra a 30 revoluciones por minuto (para mejorar la estadística de recuento) y se irradió con rayos X generados mediante un tubo de foco largo-fino de cobre que se hace funcionar a 40 kV y 40 mA con una longitud de onda de 1,5406 angstroms (es decir, aproximadamente 1,54 angstroms). Se expuso la muestra durante 1 segundo por incremento de 0,02 grados 2-theta (modo de barrido continuo) a lo largo del intervalo de 5 grados a 40 grados 2-theta en el modo de theta-theta. El tiempo de ejecución fue de ~15 min durante D8.
Los valores 20 de XRPD pueden variar con un intervalo razonable, por ejemplo, en el intervalo ± 0,2° y esas intensidades de XRPD pueden variar cuando se miden para esencialmente la misma forma cristalina por una variedad de motivos incluyendo, por ejemplo, la orientación preferida. Se describen principios de XRPD en publicaciones, tales como, por ejemplo, Giacovazzo, C.et al.(1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. y Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, Nueva York; y Klug, H. P & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley y Sons, Nueva York.
Análisis de DSC
Se realizó el análisis de DSC sobre muestras preparadas según métodos convencionales usando un calorímetro Q SERIES™ Q1000 DSC disponible TA INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Se pesó una muestra (aproximadamente 2 mg) en una cubeta de muestras de aluminio y se transfirió al DSC. Se purgó el instrumento con nitrógeno a 50 mL/min y se recogieron datos entre 22 °C y 300 °C, usando una velocidad de calentamiento dinámica de 10 °C/minuto. Se analizaron los datos usando software convencional, por ejemplo, Universal v.4,5A de TA INSTRUMENTS®.
Se utilizan las siguientes abreviaturas: AcOH = ácido acético; ac. = acuoso; BAST = trifluoruro de bis(2-metoxietil)aminoazufre; Boc2O = decarbonato de di-terc-butilo; Boc = t-butiloxicarbonilo; CDCl3 = cloroformo deuterado; CD3OD = metanol deuterado; CH3NO2 = nitrometano; DCE = 1,2-dicloroetano; DCM = diclorometano; DEA = dietilamina; DEAD = azodicarboxilato de dietilo; peryodinano de Dess-martin = 1,1,1-Tris(acetiloxi)-1,1-dihidro-1,2-benciodoxol-3-(1H)-ona; DIPEA = N,A/-diisopropiletilamina; DMAP = 2,6-dimetilaminopiridina; DMF = N,N-dimetilformamida; DMSO = dimetilsulfóxido; DMSO-d6 = dimetilsulfóxido deuterado; DPPA= fosforazidato de difenilo; dppf = 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno; DIAD = (E)-diazeno-1,2-dicarboxilato de Di-isopropilo; DSC = calorimetría diferencial de barrido; DTAD = (E)-diazeno-1,2-dicarboxilato de Di-terc-butilo; ee = exceso enantiomérico; eq. = equivalente; ESI = ionización por electrospray; Et2O = dietil éter; EtOAc o EA = acetato de etilo; EtOH =etanol; FA = ácido fórmico; catalizador de Grubbs dicloruro de (1,3-dimesitilimidazolin-2-ilideno)(triciclohexilfosfina)rutenio; h = hora(s); HATU = hexafluorofosfato de (dimetilamino)-N,A/-dimetil(3-oxido-1H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridinil)metaniminio; HCl = ácido clorhídrico; H2O2 = peróxido de hidrógeno; HP = alta presión; IPA = alcohol isopropílico; CL = cromatografía de líquidos; LiClO4 = perclorato de litio; mmol = milimol; mCPBA = ácido meta-cloroperoxibenzoico; MeOH = metanol; min = minuto(s); MeCN o CH3CN = acetonitrilo; MeNO2 = nitrometano; EM = espectrometría de masas; NMP = N-metil-2-pirrolidona; RMN = resonancia magnética nuclear; Pd/C = paladio sobre carbono; Pd2dba3 = Tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0); PdCl2(dppf) = dicloruro de 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferrocenopaladio; PE = éter de petróleo; PPh3 = trifenilfosfina; ta = temperatura ambiente; Tr o TR = tiempo de retención; Ruphos Pd G3 = metanosulfonato de (2-ciciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxi-1,1,-bifenl)[2-(2,-amino-1,1'bifenil)]paladio(M) ; sat = saturado; SFC = cromatografía de fluidos supercríticos; T3P = 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano; TBTU = tetrafluoroborato de 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronio; TFA = ácido trifluoroacético; THF = tetrahidrofurano; CCF = cromatografía en capa fina; TMS = trimetilsililo; Xantphos = 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno; CBr4 = tetrabromuro de carbono; HCl = ácido clorhídrico; HBr = ácido bromhídrico;
Cs2CO3 = carbonato de cesio; MgSO4 = sulfato de magnesio; NaHCO3 = bicarbonato de sodio; DDQ = 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona; SOCl2 = cloruro de tionilo; DIBAL-H = hidruro de diisobutilaluminio; NH4HCO3 = bicarbonato de amonio; BINAP = 2,2,-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo.
Síntesis de materiales de partida y productos intermedios
Producto intermedio 2: 7-bromo-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona
Se añadió cloruro de butirilo (0,143 mL, 1,37 mmol) gota a gota a una disolución agitada de 4-amino-6-bromopiridin-3-carbaldehído (producto intermedio 1250 mg, 1,24 mmol), DIPEA (1,086 mL, 6,22 mmol) y DMAP (30,4 mg, 0,25 mmol) en CH2Cl2 (5 mL) a 0°C. Se agitó la disolución resultante a ta durante 4 h. Se añadieron más de 2 eq. de cloruro de butirilo y se continuó la reacción durante otras 24 h. Se diluyó la reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró para dar el producto en bruto. Se añadieron 1,5 mL de MeOH y se separó por filtración el sólido (producto), se lavó con 1 mL de MeOH para dar 7-bromo-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 2, 167 mg, 53,1 %) como un sólido blanco.
1H RMN (DMSO-d6) 1,17 (3H, t), 2,45 - 2,50 (2H, m, Solapado con pico de DMSO de disolvente), 7,35 (1H, s), 7,82 (1H, s), 8,63 (1H, s), 12,09 (1H, s a) ; m/z (ES+) [M+H]+ = 252
Producto intermedio 3 :3-etil-7-vinil-1H-1,6-naftiridin-2-ona
Se añadió PdCh(dppf) (37,6 mg, 0,05 mmol) a una mezcla agitada de 7-bromo-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 2, 130 mg, 0,51 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioxaborolano (0,105 mL, 0,62 mmol) y K2CO3 (213 mg, 1,54 mmol) en 1,4-dioxano (4 mL)/ agua (1,333 mL) y se agitó la mezcla resultante a 90 °C durante 1 h. Se diluyó la mezcla de reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron para dar el producto en bruto. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 20% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 3-etil-7-vinil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 3, 93 mg, 90 %) como un sólido amarillo.
1H RMN (DMSO-d6) 1,18 (3H, t), 2,53 (2H, m, Solapado con pico de DMSO de disolvente), 5,49 (1H, dd), 6,27 (1H, dd), 6,84 (1H, dd), 7,15 (1H, s), 7,81 (1H, s), 8,78 (1H, s), 12,00 (1H, s a) ; m/z (ES+) [M+H]+ = 201
Producto intermedio 4: 3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-carbaldehído
Se añadió tetróxido de osmio en H2O (0,024 mL, 3,00 pmol) a una disolución de 3-etil-7-vinil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 3, 30 mg, 0,15 mmol), 2,6-lutidina (0,035 mL, 0,30 mmol) y peryodato de sodio (128 mg, 0,60 mmol) en THF (1 mL)/agua (0,200 mL) y se agitó a ta durante la noche. Se diluyó la reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo y se concentró el filtrado hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 15% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-carbaldehído (producto intermedio 4, 24,00 mg, 79 %) como una espuma de color amarillo claro.
1H RMN (DMSO-d6) 1,20 (3H, t), 2,55 - 2,62 (2H, m, solapado con pico de DMSO de disolvente), 7,73 (1H, s), 7,95 (1H, s), 9,03 (1H, s), 10,00 (1H, s), 12,32 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+= 203
Producto intermedio 5: 3-etil-7-(hidroximetil)-1 H-1,6-naftiridin-2-ona
Se añadió lentamente borohidruro de sodio (61,4 mg, 1,62 mmol) a una disolución agitada de 3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-carbaldehído (producto intermedio 4, 82 mg, 0,41 mmol) en metanol (2 mL) a 0 °C y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 h. Se retiró el metanol a vacío y se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 35% MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 5, 68,0 mg, 82 %) como un sólido de color amarillo pálido.
1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,18 (3H, t), 2,52 - 2,55 (2H, m, solapado con pico de DMSO de disolvente), 4,59 (2H, s a), 5,52 (1H, s a), 7,33 (1H, s), 7,80 (1H, s), 8,71 (1H, s), 12,01 (1H, s a) ; m/z (ES+) [M+H]+ = 205
Producto intermedio 6: 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona
Se añadió CBr4 (928 mg, 2,80 mmol) a una disolución agitada de 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 5, 381 mg, 1,87 mmol) y trifenilfosfina (734 mg, 2,80 mmol) en CH2Cl2 (18,656 ml) a 0 °C y se agitó la disolución resultante a 0 °C durante 2 horas. Se concentró la reacción y se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 15% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 6, 386 mg, 77 %) como un sólido blanco (contiene óxido de trifenilfosfina, difícil de separar). Se sometió este compuesto a la siguiente etapa sin purificación adicional.
m/z (ES+) [M]+ = 267
Ejemplo de referencia 1: 5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,059 mL, 0,34 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 6, 30 mg, 0,11 mmol) y N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 13, 42,8 mg, 0,15 mmol) en acetonitrilo (1 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se purificó adicionalmente el material en bruto resultante mediante cromatografía en fase inversa (RediSep Rf Gold® C18, del 0 al 90% de acetonitrilo en agua, NH4OH al 0,1% como aditivo). Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 1, 23,60 mg, 51,7 %) como un sólido de color amarillo pálido.
1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,18 (3H, t a), 2,54 (2H, m, solapado con pico de DMSO de disolvente), 2,67 (4H, s a), 2,79 (3H, d a), 3,38 (4H, s a), 3,75 (2H, s a), 7,34 (1H, s), 7,42 (1H, dd a), 7,77 - 7,88 (2H, m), 8,29 (1H, d a), 8,40 (1H, d a), 8,75 (1H, s), 11,60 - 12,11 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 407
Ejemplo de referencia 2: 5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,082 mL, 0,47 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 6, 25 mg, 0,09 mmol) y 6-fluoro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, HCl (producto intermedio 23, 28,3 mg, 0,10 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 20% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 2, 17,00 mg, 42,8 %) como un sólido de color amarillo pálido.
1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,18 (3H, t), 2,52 - 2,55 (2H, m, solapado con pico de DMSO de disolvente), 2,64 (4H, s a), 2,77 (3H, d), 3,20 (4H, s a), 3,70 (2H, s), 7,32 (1H, s), 7,59 (1H, dd), 7,80 (1H, s), 7,86 (1H, d), 8,31 -8,49 (1H, m), 8,73 (1H, s), 11,93 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 425
Ejemplo de referencia 3: 6-clom-5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,082 mL, 0,47 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,6-naftiridin-2-ona (producto intermedio 6, 25 mg, 0,09 mmol) y 6-cloro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 47, 33,7 mg, 0,10 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20°C y se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 20% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 6-cloro-5-[4-[(3-etil-2-oxo-1H-1,6-naftiridin-7-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 3, 19,20 mg, 46,5 %) como un sólido blanco.
1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,18 (3H, t), 2,53 (2H, m, solapado con pico de DMSO de disolvente), 2,66 (4H, s a), 2,80 (3H, d), 3,15 (4H, s a), 3,72 (2H, s), 7,33 (1H, s), 7,68 (1H, d), 7,81 (1H, s), 7,95 (1H, d), 8,43 (1H, d a), 8,74 (1H, s), 11,93 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 441.
Producto intermedio 8: 6-formil-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo
Se agitó una mezcla de 6-metil-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 7, 10 g, 47,58 mmol) y dióxido de selenio (7,92 g, 71,36 mmol) n 1,4-dioxano (50 mL) a 110 °C durante 20 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente, se filtró a través de un lecho de celite y se lavó la celite con acetato de etilo. Se concentró el filtrado combinado, y se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 70% de acetato de etilo en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 6-formil-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 8, 9,70 g, 91 %) como un aceite marrón. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,48 (3H, t), 4,54 (2H, c), 8,81 (1H, d), 9,51 (1H, d), 10,32 (1H, s); m/z (ES+) [M]+= 224.
Producto intermedio 9: 6-[(e)-2-etoxicarbonilbut-1-enil]-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo (mezcla de isómeros e/z)
A una disolución agitada de hidruro de sodio (9,63 g, 240,89 mmol) (al 60% en aceite mineral) en THF anhidro (100 mL) se le añadió 2-(dietoxifosforil)butanoato de etilo (60,8 g, 240,89 mmol) gota a gota con un embudo de adición a 0°C para dar una mezcla de color gris. Se agitó la mezcla resultante a 0°C durante 10 min y se calentó hasta temperatura ambiente a lo largo de 10 minutos y se agitó a 40°C durante 5 minutos. Se enfrió la mezcla de reacción hasta -78°C y a esta mezcla de reacción enfriada se le añadió entonces lentamente disolución de 6-formil-5-nitropiridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 8, 22,5 g, 100,37 mmol) en 100 ml de THF. Se extinguió la mezcla con disolución de NH4Cl sat., se extrajo con acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4 de sodio, se filtraron y se concentraron para dar el producto en bruto. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 50% de acetato de etilo en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 6-[(E)-2-etoxicarbonilbut-1-enil]-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 9, 24,30 g, 75 %) como un aceite amarillo (1:1 y mezcla de isómeros E/Z). 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,13 (3H, t), 1,18 (3H, t), 1,23 (3H, t), 1,37 (3H, t), 1,45 (6H, c), 2,57 (2H, cd), 2,66 (2H, c), 4,11 -4,24 (2H, m), 4,32 (2H, c), 4,45 -4,56 (4H, m), 7,08 (1H, s), 7,85 (1H, s), 8,86 (2H, dd), 9,26 (1H, d), 9,43 (1H, d); m/z (ES+) [M]+ = 322
Producto intermedio 10: 7-etil-6-oxo-7,8-dihidro-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo
Se desgasificó una mezcla de 6-[(E)-2-etoxicarbonilbut-1-enil]-5-nitro-piridin-3-carboxilato de etilo (mezcla 1:1 de isómeros E/Z) (producto intermedio 9, 3,75 g, 11,63 mmol), Pd/C (1,857 g, 1,75 mmol) (10%) en etanol (30 mL), se llenó con H2 (globo) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche bajo atmósfera de H2. Se filtró la mezcla a través de un lecho de celite y se lavó el lecho de celite con etanol. Tras la concentración, se añadió HCl 4 M en dioxanos (15 ml) al residuo resultante y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 min. Se diluyó la mezcla con éter y se separó por filtración el sólido, se lavó con dietil éter y se secó a vacío para proporcionar 7-etil-6-oxo-7,8-dihidro-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 10, 2,260 g, 78 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 0,94 (3H, t), 1,33 (3H, t), 1,41 - 1,51 (1H, m), 1,69 - 1,81 (1H, m), 2,41 -2,48 (1H, m), 2,94 (1H, dd), 3,20 (1H, dd), 4,35 (2H, t), 7,67 (1H, d), 8,61 (1H, d), 10,32 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 249.
Producto intermedio 11: 7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo
Se disolvió 7-etil-6-oxo-7,8-dihidro-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 10, 2,26 g, 9,10 mmol) en 1,4-dioxano (40 mL), se añadió DDQ (2,273 g, 10,01 mmol) y se agitó la mezcla a reflujo durante 3 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida, se añadió disolución de NaHCO3 sat. y se agitó el residuo a temperatura ambiente durante 1 h. Se separó por filtración el sólido, se lavó con agua seguido por 10 ml de dietil éter. Se secó el sólido resultante a vacío para proporcionar 7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 11, 1,738 g, 78 %) como un sólido de color marrón claro.
1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,14 -1,28 (3H, m), 1,35 (3H, t), 2,58 (2H, c), 4,38 (2H, c), 7,83 (1H, s), 8,17 (1H, s), 8,90 (1H, s), 12,05 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 247.
Producto intermedio 12: 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-1,5-naftiridin-2-ona
Se añadió gota a gota hidruro de aluminio y litio, 2 M en THF (29,2 mL, 58,47 mmol) a 7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-carboxilato de etilo (producto intermedio 11, 7,2 g, 29,24 mmol) en tetrahidrofurano (150 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 45 minutos bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1,5 horas. Se extinguió la mezcla de reacción mediante adición gota a gota de HCl 1 M ac. (29 mL). Se concentró la mezcla de reacción y se diluyó el sólido con agua (~ 150 ml) y 29 ml de disolución de HCl 1 M dieron una suspensión amarilla. Se recogió el sólido mediante filtración, se lavó con agua, dietil éter y se secó para producir el producto en bruto como un sólido amarillo (contaminado por algo de sal inorgánica). Se suspendió este sólido en una mezcla de metanol y DCM (2:1) (400 ml) y se calentó hasta reflujo. Se separó por filtración el sólido. Se resuspendió este sólido en mezcla de metanol/DCM y se repitió este procedimiento 5 veces para conseguir la mayor parte del producto fuera de esta mezcla. Entonces se concentró el filtrado combinado hasta aproximadamente 100 ml y se recogió el sólido mediante filtración, se lavó con éter, se secó a vacío para producir 3-etil-7-(hidroximetii)-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 12, 4,35 g, 72,8 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,18 (3H, t), 2,52 - 2,56 (2H, m), 4,61 (2H, d), 5,44 (1H, t), 7,61 (1H, s), 7,74 (1H, s), 8,37 (1H, s), 11,87 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 205,3
Ejemplo 4:5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-Carboxamida
Se añadió cloruro de tionilo (6,41 mL, 88,14 mmol) gota a gota a una suspensión de 3-etil-7-(hidroximetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (producto intermedio 12, 3 g, 14,69 mmol) y N,N-dimetilformamida (0,114 mL, 1,47 mmol) en CH2Cl2 (60 mL) a 0°C y se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 6 horas. Se concentró la mezcla hasta sequedad para dar 7-(clorometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona en bruto (producto intermedio 17).
Se añadió DIPEA (12,83 mL, 73,45 mmol) a una disolución agitada de 7-(clorometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 17, en bruto de los anterior), yoduro de potasio (0,488 g, 2,94 mmol) y N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 13, 4,31 g, 14,69 mmol) en acetonitrilo (50,00 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 80 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío. Se diluyó el material en bruto con agua, se basificó con disolución de NaHCO3 ac. y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró para dar el producto en bruto. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 15% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo 4, 3,93 g, 65,8 %) como un sólido parcialmente cristalino blanquecino. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,53 - 2,59 (6H, m), 2,79 (3H, d), 3,33 - 3,39 (4H, m), 3,66 (2H, s), 7,39 (1H, dd), 7,64 (1H, s), 7,76 (1H, s), 7,83 (1H, d), 8,27 (1H, d), 8,36 - 8,40 (1H, m), 8,41 (1H, d), 11,85 (1H, s); m/z (ES+) [M]+ = 406.
Producto intermedio 14: 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona
Se añadió CBr4 (219 mg, 0,66 mmol) a una disolución agitada de 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 12, 90 mg, 0,44 mmol) y trifenilfosfina (173 mg, 0,66 mmol) en CH2Cl2 (4 mL) a 0 °C. Se agitó la disolución resultante a 0 °C durante 2 horas. Se concentró la reacción a vacío y se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 15% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 14, 84 mg, 71,4 %) (contiene óxido de trifenilfosfina, difícil de separar). Se sometió este compuesto a la siguiente etapa sin purificación adicional.
m/z (ES+) [M]+ = 267
Ejemplo 5: 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftirídin-3-il)metil]pipemzin-1-il]-6-fluom-N-metil-pirídin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,082 mL, 0,47 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 14, 25 mg, 0,09 mmol) y 6-fluoro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 23, 32,0 mg, 0,10 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 20% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-nafl:iridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo 5, 13,00 mg, 33 %), sólido amarillo pálido. 1H R<m>N (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,55 (2H, m, Solapado con pico de DMSO de disolvente), 2,58 (4H, d a), 2,77 (3H, d), 3,19 (4H, s a), 3,67 (2H, s), 7,57 (1H, dd), 7,63 (1H, s), 7,76 (1H, s), 7,85 (1H, d), 8,32 - 8,49 (2H, m), 11,85 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 425.
Ejemplo 6: 6-dom-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H- 1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin- 1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,082 mL, 0,47 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona (producto intermedio 14, 25 mg, 0,09 mmol) y 6-cloro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida (producto intermedio 48, 26,2 mg, 0,10 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 2 horas. Se eliminó el disolvente a vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 20% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida para proporcionar 6-cloro-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo 6, 19,80 mg, 48,0 %) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,55 (2H, m, Solapado con pico de DMSO de disolvente), 2,58 - 2,65 (4H, m), 2,79 (3H, d), 3,13 (4H, s a), 3,68 (2H, s), 7,63 (1H, d), 7,67 (1H, d), 7,76 (1H, s), 7,94 (1H, d), 8,34 - 8,50 (2H, m), 11,85 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 441.
xc
E)«rmplco7u,
Producto intermedio 16: 5-piperazin-1-ilpiridin-2-carboxilato de metilo
Se añadió HCl en dioxano (4,67 mL, 18,67 mmol) a una disolución agitada de 4-(6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 15, 600 mg, 1,87 mmol) en MeOH (1 mL) y se agitó la disolución resultante a ta durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a vacío para dar 5-piperazin-1 -ilpiridin-2-carboxilato de metilo, 2HCl (producto intermedio 16, 543 mg, 99 %) como un sólido amarillo claro.
1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 3,20 (4H, s a), 3,71 (4H, s a), 3,85 (3H, s), 7,58 (1H, d a), 7,99 (1H, d a), 8,43 (1H, s a), 9,73 (2H, a), 11,29 - 11,75 (1H, a) ; m/z (ES+) [M+H]+ = 222
Producto intermedio 18:5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxilato de metilo Se añadió DIPEA (944 |ji, 5,40 mmol) a una disolución agitada de 7-(dorometil)-3-etil-1H-1,5-naftiridin-2-ona, HCl (producto intermedio 17, 200 mg, 0,77 mmoi), yoduro de sodio (11,57 mg, 0,08 mmoi) y 5-piperazin-1-ilpiridin-2-carboxiiato de metilo, 2HCl (producto intermedio 16, 250 mg, 0,85 mmoi) en acetonitriio (6774 ji) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 80 °C durante 3 horas. Se eliminó el disolvente a vacío, se añadieron 0,4 mL de disolución saturada de bicarbonato de sodio y 1,5 mL de acetonitrilo y se agitó la reacción durante 10 min. Se separó el sólido por filtración, se lavó con 2 mL de agua seguido por 1 mL de acetonitrilo para dar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 18, 158 mg, 50,2 %) como un sólido blanquecino. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t a), 2,54 -2,61 (6H, m), 3,40 (4H, s a), 3,66 (2H, s), 3,81 (3H, s), 7,35 (1H, dd a), 7,62 (1H, s), 7,75 (1H, s), 7,88 (1H, d a), 8,28 - 8,47 (2H, m), 12,03 (1H, a); m/z (ES+) [M+H]+ = 408
Ejemplo 7: 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió amoniaco en metanol (4 mL, 28,00 mmol) a 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 18, 60 mg, 0,15 mmol) y se calentó la disolución resultante hasta 50 °C durante 24 h (tubo sellado). Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente y se separó por filtración el sólido y se lavó con 2 mL de metanol para dar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo 7, 88 mg, 90 %) como un sólido marrón claro. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,56 (6H, m, Solapado con pico de DMSO de disolvente), 3,35 (4H, d a), 3,66 (2H, s), 7,30 (1H, s a), 7,40 (1H, dd), 7,64 (1H, s), 7,76 (2H, s), 7,85 (1H, d), 8,28 (1H, d), 8,41 (1H, d), 11,61 - 11,98 (1H, m) ; m/z (ES+) [M+H]+ = 393.
Producto intermedio 20: 5-bromo-6-fluom-piridin-2-carboxilato de metilo
Se cargó un matraz secado al horno con 5-bromopiridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 19, 6 g, 27,77 mmol) en acetonitrilo (60 mL). Se añadió fluoruro de plata (II) (14,18 g, 97,21 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción a través de papel de filtro y se lavó con DCM. Se concentró el filtrado para dar un sólido marrón claro. Se suspendió el residuo en una mezcla de DCM y disolución de NH4Cl sat. y se separó por filtración la suspensión blanca. Se separó la fase orgánica, y se extrajo la fase acuosa con DCM (100 ml x 2). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 25% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 5-bromo-6-fluoro-piridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 20, 5,98 g rendimiento del 90%). 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 4,01 (3H, s), 7,93 (1H, d), 8,15 (1H, t); m/z (ES+) [M]+ = 234.
Producto intermedio 21: 4-(2-fluoro-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se agitó una mezcla de piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (13,11 g, 70,41 mmol), 5-bromo-6-fluoro-piridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 20,10,985 g, 4694 mmol), RuphosPd-G3 (2,5 g, 2,99 mmol) y Cs2CO3 (38 g, 11,3 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) a 80 °C durante la noche bajo N2. Se diluyó la mezcla con agua y acetato de etilo, se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa con DCM (100 ml x 2). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 100% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-(2-fluoro-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 21,14,00 g, 88 %) como un sólido amarillo; 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,51 (9H, s), 3,16 - 3,32 (4H, m), 3,58 - 3,72 (4H, m), 3,98 (3H, s), 7,29 - 7,34 (1H, m), 8,00 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 340.
Producto intermedio 22: 4-[2-fluoro-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se agitó 4-(2-fluoro-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 21, 12,49 g, 36,80 mmol) en metilamina (120 mL, 36,80 mmol, al 33% en peso en etanol) a t.a. durante 24 horas (tubo sellado). El disolvente se eliminó a presión reducida. Se disolvió el residuo en DCM y se filtró a través de un lecho de gel de sílice y se lavó con acetato de etilo. Se concentró el filtrado y se secó a vacío para proporcionar 4-[2-fluoro-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 22,12,45 g, 100 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,42 (9H, s), 2,77 (3H, d), 3,04 - 3,16 (4H, m), 3,43 - 3,56 (4H, m), 7,59 (1H, dd), 7,80 - 7,93 (1H, m), 8,41 (1H, c); m/z (ES+) [M+H]+ = 340.
Producto intermedio 23: 6-fluoro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida
Se añadió HCl (4 M en dioxano, 100 ml, 400,00 mmol) a una disolución de 4-[2-fluoro-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 22, 12,5 g, 36,94 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) a 0°C. Se agitó la reacción durante 5 h durante las cuales la temperatura se calentó hasta temperatura ambiente para dar una suspensión amarilla. Se diluyó la suspensión con éter, se separó el sólido por filtración y se lavó con éter. Se secó este sólido a vacío para proporcionar 6-fluoro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 23,11,42 g, 99 %) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6)5ppm 2,8 (d, J=4,6 Hz, 3 H) 3,3 (s a, 4 H) 3,4 (d a, J=4,4 Hz, 4 H) 7,6 - 7,7 (m, 1 H) 7,9 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 8,4 (d a, J=4,4 Hz, 1 H) 9,0 - 9,3 (m, 2 H); m/z (ES+) [M+H]+ = 239
Producto intermedio 15: 4-(6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se añadió Ruphos Pd G3 (4,07 g, 4,86 mmol) a una mezcla desgasificada de 5-bromopiridin-2-carboxilato de metilo (producto intermedio 19, 30 g, 138,87 mmol), piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (27,2 g, 145,81 mmol), Cs2CO3 (90 g, 277,73 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) y se agitó la mezcla a 110 °C durante 6 h bajo atmósfera de N2. Entonces se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo (150 ml x 3). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron. A este filtrado se le añadió gel de sílice funcionalizado con 3-(dietilentriamino)propilo (12 g, 1,3 mmol/g de carga) y se agitó la mezcla a t.a. durante 1 h. Se filtró la mezcla, y se concentró el filtrado hasta ~100 ml. Se separó el sólido amarillo cristalino por filtración, se lavó con éter y se secó a vacío para proporcionar 4-(6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 15, 26,36 g, 82 mmol, 59,1 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,50 (9H, s), 3,31 - 3,42 (4H, m), 3,56 - 3,68 (4H, m), 3,98 (3H, s), 8,04 (1H, d), 8,37 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 322.
Producto intermedio 24: 4-[6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Seañadió metilamina (100 ml, 1155,26 mmol, al 40% en agua) a una disolución de 4-(6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 15, 36 g, 112,02 mmol) en MeOH (100 mL) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4 h para dar una suspensión blanca. Se concentró la mezcla, se repartió el residuo entre disolución de NH4O sat. y DCM, se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa con DCM, se combinaron las fases orgánicas, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para dar 4-[6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 24, 35,9 g, 100 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,49 (9H, s), 3,02 (3H, d), 3,26 -3,35 (4H, m), 3,58 - 3,67 (4H, m), 7,23 (1H, dd), 7,81 (1H, d a), 8,07 (1H, d), 8,16 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 321.
Producto intermedio 13: carboxilato N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida
Se añadió HCl (4 M en dioxano, 150 ml, 600,00 mmol) a una suspensión de 4-[6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 24, 35,9 g, 112,05 mmol) en MeOH (50 mL) y se agitó la suspensión naranja resultante a t.a. durante 4 h. Se retiraron aproximadamente 80 ml de disolvente a presión reducida y se diluyó la mezcla con éter y hexanos (200 ml, 1/1). Se recogió el sólido mediante filtración, se lavó con hexanos, se secó y se secó a vacío para proporcionar N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, sal de 2HCl (producto intermedio 13, 37,0 g, 100 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 2,79 (3H, d), 3,22 (4H, s a), 3,53 - 3,67 (4H, m), 7,51 (1H, dd), 7,91 (1H, d), 8,33 (1H, d), 8,50 (1H, s a), 9,19 - 9,49 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 221
Producto intermedio 26: 4-(1-metoxicarbonilpropilamino)-3-nitro-benzoato de metilo
Se añadió en porciones hidrogenocarbonato de sodio (27,0 g, 321,39 mmol) a una mezcla agitada de 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 25, 16 g, 80,35 mmol) y 2-aminobutanoato de metilo, HCl (14,81 g, 96,42 mmol) en THF (100 mL). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se extinguió la reacción mediante adición de agua, se extrajo con acetato de etilo. Se lavó la fase orgánica combinada con disolución de NaHCO3 ac. saturada, se secó la fase orgánica sobre MgSO4 y se concentró hasta sequedad para dar 4-(1-metoxicarbonilpropilamino)-3-nitro-benzoato de metilo (producto intermedio 26, 22,86 g, 96 %) como un sólido amarillo brillante. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 0,91 (3H, t), 1,75 - 2,12 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,85 (3H, s), 4,63 - 4,82 (1H, m), 7,15 (1H, d), 8,00 (1H, dd), 8,52 - 8,76 (2H, m).
Producto intermedio 27: 2-etil-3-oxo-2,4-dihidro-1H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió en porciones Pd/C (4,15 g, 3,90 mmol) a una disolución agitada de 4-(1-metoxicarbonilpropilamino)-3-nitro-benzoato de metilo (producto intermedio 26, 23,1 g, 7,7 mmol) en MeOH (300 mL) y se agitó la suspensión resultante bajo atmósfera de H2 a temperatura ambiente durante 30 h. Se retiró el metanol a vacío, se añadieron 150 mL de DMF y se agitó la mezcla durante 10 min. Se separó por filtración el catalizador de paladio sobre ceilite, se lavó con 50 mL de DMF (el material tiene una solubilidad muy baja en disolventes orgánicos como MeOH/DCM/EtOAc). Se concentró el filtrado en Genevac para dar 2-etil-3-oxo-2,4-dihidro-1H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 27, 15,80 g, 87 %) como un sólido de color gris. Se analizó el material mediante RMN y se sometió a la siguiente etapa sin purificación. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 0,91 (3H, t), 1,63 - 1,73 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,90 (1H, td), 6,71 (1H, d), 6,84 (1H, s), 7,33 (1H, d), 7,41 (1H, dd), 10,39 (1H, s); m/z (ES+) [M]+ = 235.
Producto intermedio 28: 2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (15,87 g, 69,92 mmol) a una suspensión de 2-etil-3-oxo-2,4-dihidro-1H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 27, 15,6 g, 66,59 mmol) en 1,4-dioxano (150 mL). Se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió lentamente la mezcla a disolución de NaHCO3 ac. saturada (~500 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. Se filtró el precipitado, se lavó con agua (100 ml) y se secó para producir 2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo como un sólido blanquecino (producto intermedio 28, 11,40 g, 73,7 %). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,23 (3H, t), 2,83 (2H, c), 3,89 (3H, s), 7,73 - 7,86 (2H, m), 7,89 (1H, d), 12,45 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 233.
Producto intermedio 29: 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-quinoxalin-2-ona
Se añadió gota a gota hidruro de aluminio y litio, 2 M en THF (49,1 mL, 98,17 mmol) a una suspensión de 2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 28, 11,4 g, 49,09 mmol) en tetrahidrofurano (350 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 50 minutos bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 1,5 horas. Se vertió lentamente la mezcla de reacción en HCl ac. 1 M (300 mL) a 0 °C. Se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo (~ 300 ml X 2) seguido por extracción con DCM/metanol (5:1) (150 ml x 3). Se concentraron las fases orgánicas combinadas hasta 300 ml y se diluyeron con éter (200 ml) para dar una suspensión. Se recogió el sólido mediante filtración, se lavó con éter, se secó a vacío para producir 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-quinoxalin-2-ona (producto intermedio 29, 8,00 g, 80 %). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 2,80 (2H, c), 4,59 (2H, s), 5,19 - 5,61 (1H, m), 7,19 (1H, dd), 7,28 (1H, s), 7,66 (1H, d), 12,28 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 205.
Producto intermedio 30: 7-(bromometil)-3-etil-1H-quinoxalin-2-ona
Se añadió bromuro de hidrógeno (60 ml, al 48% en peso en agua) a 3-etil-7-(hidroximetil)-1H-quinoxalin-2-ona (producto intermedio 29, 7,8 g, 38,19 mmol) (da como resultado una disolución marrón transparente) y se agitó la mezcla a 80 °C durante 8 h, se enfrió la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente, se vertió en 150 mL de agua helada para dar un precipitado blanquecino. Se filtró el sólido a vacío y se lavó con agua seguido por dietil éter y se secó para dar 7-(bromometil)-3-etil-1H-quinoxalin-2-ona como un sólido beis (producto intermedio 30, 11,10 g, 84 %) con una pureza del 80%. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,20 (3H, t), 2,79 (2H, c), 4,79 (2H, s), 7,27 - 7,38 (2H, m), 7,69 (1H, d), 12,34 (1H, s a); m/z (ES+) [M]+ = 267,0.
Producto intermedio 32: 4-(2-bromo-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se agitó una mezcla de piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 31, 2,57 g, 13,80 mmol), 6-bromo-5-fluoro-piridin-2-carboxilato de metilo (1,9 g, 8,12 mmol) y carbonato de potasio (1,459 g, 10,55 mmol) en DMF (20 mL) a 110 °C durante 5 horas, la CLEM indicó conversión completa. Se enfrió la mezcla hasta t.a., se diluyó con DCM y agua, se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa dos veces con DCM y se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 50% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-(2-bromo-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 32, 2,200 g, 67,7 %) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,50 (9H, s), 3,05 - 3,20 (4H, m), 3,58 - 3,72 (4H, m), 3,98 (3H, s), 7,31 (1H, d), 8,06 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 400.
Producto intermedio 33: 4-[2-bromo-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se cargó un recipiente de presión sellado con 4-(2-bromo-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1-carboxilato de tercbutilo (producto intermedio 32, 2,2 g, 5,50 mmol) y metilamina (22 ml, 176,72 mmol) (al 33% en peso en etanol) y se calentó la mezcla a 60 °C durante 2 horas, la CLEM indicó conversión completa. Se concentró la mezcla, y se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 80% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-[2-bromo-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 33, 2,200 g, 100 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,50 (9H, s), 3,02 (3H, d), 3,05 -3,14 (4H, m), 3,56 -3,74 (4H, m), 7,36 (1H, d), 7,68 (1H, d a), 8,11 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 399.
Producto intermedio 34: 4-[6-(metilcarbamoil)-2-vinil-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se agitó una mezcla de 4-[2-bromo-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 33, 200 mg, 0,50 mmol), tributil(vinil)estanano (0,161 ml, 0,55 mmol) y ciclo de XPhos Pd de 2a gen. (19,71 mg, 0,03 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) a 100 °C bajo N2 durante 2,5 h, la CLEM indicó conversión completa. Se diluyó la mezcla con DCM, se lavó con disolución de NH4Cl sat., se secó la fase orgánica (Na2SO4 anhidro), se filtró y se concentró. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 80% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-[6-(metilcarbamoil)-2-vinil-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 34, 174 mg, 100 %) como un sólido blanco. m/z (ES+) [M+H]+ = 347
Producto intermedio 35: 4-[2-etil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se añadió Pd/C (53,5 mg, 0,05 mmol) (al 10% en peso en base seca, carga húmeda) a una disolución de 4-[6-(metilcarbamoil)-2-vinil-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 34, 174 mg, 0,50 mmol) MeOH (6 mL). Se desgasificó el matraz y se rellenó con H2 (globo). Se agitó la mezcla a t.a. durante la noche. La CLEM indicó que la reacción no era completa. Se añadió más Pd/C (53,5 mg, 0,05 mmol) y se agitó la mezcla resultante a t.a. durante 5 h bajo atmósfera de H2. Se filtró la mezcla a través de un lecho de celite, se lavó con metanol, se concentró el filtrado hasta sequedad para producir 4-[2-etil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 35, 172 mg, 98 %) como un residuo incoloro. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,37 (3H, t), 1,51 (9H, s), 2,82 - 2,95 (6H, m), 3,05 (3H, d), 3,57 - 3,73 (4H, m), 7,39 (1H, d), 7,93 - 8,13 (2H, m); m/z (ES+) [M]+ = 348
Producto intermedio 36: 6-etil-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida
Se agitó una mezcla de 4-[2-etil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 35, 172 mg, 0,49 mmol) en HCl (4 M en dioxano, 8 ml, 32,00 mmol) a t.a. durante 1 h para dar una suspensión blanca. Se diluyó la mezcla con éter y se separó el sólido por filtración y se secó a vacío para dar 6-etil-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 36, 159 mg, 100 %) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,31 (3H, t), 2,74 - 2,86 (5H, m), 3,00 - 3,14 (4H, m), 3,24 (4H, s a), 7,57 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,43 (1H, d a), 9,20 (2H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 249.
Ejemplo de referencia 8: 6-etil-5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,203 mL, 1,17 mmol) a una suspensión de 6-etil-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 36, 75 mg, 0,23 mmol) y 7-(bromometil)-3-etil-1H-quinoxalin-2-ona (producto intermedio 30, 69,3 mg, 0,23 mmol) en acetonitrilo (3 mL). Se agitó la mezcla resultante a 60 °C durante 3 h, la CLEM indicó conversión completa. Se enfrió la mezcla hasta t.a., se concentró, se purificó el residuo en una columna de fase inversa Gilson (eluida con del 0 al 95% de ACN/agua/el 0,1% de TFA, ejecución de 15 min, recogido desde 5 hasta 9 min). Se concentraron las fracciones que contenían el producto y entonces se disolvió el residuo en metanol y DCM. 300 mg de carbonita de tetraalquilamonio, unido a polímero (malla de 40-90, 2,5-3,5 mmol/g) y se agitó la mezcla a t.a. Durante 10 min. Entonces se filtró la mezcla y se lavó con metanol. Se concentró el filtrado, se redisolvió en una mezcla de agua/CAN y se liofilizó esta mezcla hasta sequedad para producir 6-etil-5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
(ejemplo de referencia 8, 60,0 mg, 59,1 %) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 1,30 (3H, t), 2,54 - 2,69 (2H, m), 2,72 - 2,86 (7H, m), 2,93 (4H, s a), 3,26 (2H, s), 3,64 (2H, s), 7,17 -7,33 (2H, m), 7,52 (1H, d), 7,69 (1H, d a), 7,80 (1H, d), 8,40 (1H, d a), 12,25 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 435.
Producto intermedio 37: 4-[6-(metilcarbamoil)-2-(trifluorometil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
A una mezcla bien agitada de fluoruro de plata (I) (176 mg, 1,39 mmol) en DMF (2 mL), se le añadió trimetil(trifluorometil)silano (0,247 mL, 1,67 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla durante 20 min seguido por adición de polvo de cobre (133 mg, 2,09 mmol). Tras agitar durante 4 h, la mezcla de reacción se volvió de color azul (indicador de la formación de CuCFa). Se añadió 4-(2-bromo-6-metoxicarbonil-3-piridil)piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 33, 150 mg, 0,38 mmol) a la mezcla y se agitó la disolución oscura resultante a 90°C durante 18 h para dar una suspensión marrón. La CLEM indicó conversión completa. Se diluyó la mezcla con acetato de etilo y se separó por filtración el sólido. Se lavó el filtrado con agua seguido por lavado con salmuera. Se secó la fase orgánica sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 70% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-[6-(metilcarbamoil)-2-(trifluorometil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 37, 146 mg, 100 %) como un residuo amarillo. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,50 (9H, s), 2,93 - 3,03 (4H, m), 3,05 (3H, d), 3,55 - 3,69 (4H, m), 7,71 (1H, d), 7,81 (1H, d a), 8,33 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 389.
Producto intermedio 38: N-metil-5-piperazin-1-il-6-(trifluorometil)piridin-2-carboxamida
Se agitó una mezcla de 4-[6-(metilcarbamoil)-2-(trifluorometil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 37, 146 mg, 0,38 mmol) en HCl (4 M en dioxano, 8 ml, 32,00 mmol) a t.a. durante 2 h. La CLEM indicó conversión completa. Se concentró el disolvente hasta el volumen de 2 ml, se diluyó la mezcla con éter/hexanos (15 ml, 5/1). Se separó por filtración el sólido y se secó a vacío para proporcionar N-metil-5-piperazin-1- il-6-(trifluorometil)piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 38, 127 mg, 94 %) como un sólido rosa. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 2,83 (3H, d), 3,21 (8H, s a), 8,09 (1H, d), 8,23 (1H, d), 8,46 (1H, d a), 9,08 (2H, d a); m/z (ES+) [M+H]+ = 289.
Ejemplo de referencia 9: 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-6-(trifluorometil)piridin-2- carboxamida
Se añadió DIPEA (0,121 mL, 0,69 mmol) a una suspensión de N-metil-5-piperazin-1-il-6-(trifluorometil)piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 38, 50 mg, 0,14 mmol) y 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 46,2 mg, 0,14 mmol) en acetonitrilo (3 mL) y se agitó la mezcla a 60 °C durante 3 h. Se enfrió la mezcla hasta t.a., se concentró, se purificó el residuo en una columna de fase inversa Gilson (eluida con del 0 al 95% de ACN/agua/el 0,1% de TFA). Se concentraron las fracciones que contenían el producto a temperatura ambiente. Entonces se disolvió el residuo en metanol y DCM seguido por adición de 250 mg de carbonita de tetraalquilamonio unida a polímero (40-90 de malla, 2,5-3,5 mmol/g) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 min. Entonces se separó el sólido por filtración, se lavó con metanol y se concentró el filtrado para dar un sólido. Entonces se redisolvió este sólido en una mezcla de agua/CH3CN y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-6-(trifluorometil)piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 9, 40,0 mg, 60,9 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,40 (3H, t), 2,70 (4H, s a), 2,98 - 3,08 (5H, m), 3,12 (4H, s a), 3,72 (2H, s a), 7,29 - 7,32 (1H, m), 7,37 (1H, dd), 7,74 (1H, d), 7,79 - 7,88 (2H, m), 8,33 (1H, d), 11,06 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 475.
Producto intermedio 39: 4-[2-formil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se añadió tetróxido de osmio en H2O (0,050 mL, 6,35 |jmol) a una disolución de 4-[6-(metilcarbamoil)-2-vinil-3-piridil]piperazin-1 -carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 34, 110 mg, 0,32 mmol), 2,6-lutidina (0,074 mL, 0,64 mmol) y peryodato de sodio (272 mg, 1,27 mmol) en THF (5 mL)/agua (1 mL)/ terc-butanol (0,304 mL, 3,18 mmol) y se agitó la mezcla a ta durante la noche para dar una suspensión amarilla. La CLEM y CCF indicaron conversión completa. Se diluyó la reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo. Tras la concentración, se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 100% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-[2-formil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 39, 100 mg, 90 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,50 (9H, s), 3,07 (3H, d), 3,14 -3,29 (4H, m), 3,66 - 3,79 (4H, m), 7,49 (1H, d), 7,86 (1H, d a), 8,28 (1H, d), 10,10 (1H, s). m/z (ES+) [M+H]+ = 349.
Producto intermedio 40: 4-[2-(difluorometil)-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se enfrió 4-[2-formil-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 39, 99 mg, 0,28 mmol) en CH2Ch (2 mL) hasta 0°C, DAST (0,710 mL, 0,71 mmol) (1M in DCM) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h. La CCF y CLEM indicaron conversión completa. Se extinguió la reacción con la adición gota a gota de disolución de NaHCO3 sat. y se extrajo con DCM. Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron para dar el producto en bruto. Se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 100% de EtOAc en hexanos. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 4-[2-(difluorometil)-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 40, 94 mg, 89 %) como un sólido blanquecino. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,51 (9H, s), 2,89 - 3,03 (4H, m), 3,06 (3H, d), 3,54 - 3,73 (4H, m), 6,82 - 7,16 (1H, m), 7,64 (1H, d), 7,94 (1H, d a), 8,29 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 371.
Producto intermedio 41: 6-(difluorometil)-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida
Se agitó una mezcla de 4-[2-(difluorometil)-6-(metilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 40, 92 mg, 0,25 mmol) en HCl 4 M en 1, 4-dioxano (6 ml, 24,00 mmol) a t.a. durante 1,5 h para dar una suspensión naranja, se diluyó la mezcla con éter, se filtró, se redisolvió el sólido en metanol, se concentró hasta sequedad para producir 6-(difluorometil)-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 41, 56,0 mg, 65,7 %) como un sólido naranja. 1H R<m>N (500 MHz, DMSO-d6) 2,83 (3H, d), 3,03 - 3,23 (5H, m), 3,30 (4H, s a), 7,06 - 7,49 (1H, m), 7,92 (1H, d), 8,13 (1H, d), 8,43 (1H, d a), 9,00 (2H, d a); m/z (ES+) [M+H]+ = 271.
Ejemplo de referencia 10: 6-(difluorometil)-5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metilpiridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,127 mL, 0,73 mmol) a una suspensión de 6-(difluorometil)-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 41, 50 mg, 0,15 mmol) y 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 48,6 mg, 0,15 mmol) en acetonitrilo (3 mL). Se agitó la mezcla resultante a 60 °C durante 3 h, la CLEM indicó conversión completa. Se concentró la mezcla, y se purificó el residuo en una columna de fase inversa Gilson (eluida con del 0 al 95% de ACN/agua/el 0,1% de TFA). Se concentraron las fracciones que contenían el producto a temperatura ambiente. Entonces se disolvió el residuo en metanol y DCM seguido por adición de 250 mg de carbonita de tetraalquilamonio unida a polímero (40-90 de malla, 2,5-3,5 mmol/g) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 min. Entonces se separó el sólido por filtración, se lavó con metanol y se concentró el filtrado para dar un sólido. Entonces se redisolvió este sólido en una mezcla de agua/CH3CN y se liofilizó hasta sequedad para proporcionar 6-(difluorometN)-5-[4-[(2-etN-3-oxo-4H-quinoxaNn-6-N)metN]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 10, 50,0 mg, 75 %) como un sólido amarillo. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 1,40 (3H, t), 2,72 (4H, s a), 2,97 - 3,17 (9H, m), 3,73 (2H, s), 6,84 - 7,15 (1H, m), 7,32 (1H, s), 7,37 (1H, d), 7,64 (1H, d), 7,83 (1H, d), 7,95 (1H, d a), 8,29 (1H, d), 11,32 - 11,62 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 457.
En un vial de 20 mL se añadió 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 0,147 g, 0,55 mmol) y N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 13, 0,161 g, 0,55 mmol). Se selló el vial, se evacuó y se rellenó con N2. Se añadieron acetonitrilo (3 mL) y DIPEA (0,481 mL, 2,75 mmol) al vial y se colocó en un bloque de calentamiento precalentado hasta 70 C. Se agitó la mezcla de reacción a la misma temperatura durante 2 horas y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se redujo el volumen de la reacción hasta 1/3 de su volumen inicial a vacío y se añadió disolución de NaHCO3 acuosa (2 mL). Se agitó la mezcla de reacción durante 30 min, se filtró y se lavó el sólido con agua (50 mL). Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía ultrarrápida en sílice usando el 0-30% de MeOH en d Cm para producir 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 11, 93,0 mg, 41,6%) como un sólido de color amarillo claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 2,52 - 2,60 (4H, m), 2,73 - 2,85 (5H, m), 3,30 (4H, m, Solapado con pico de agua), 3,62 (2H, s), 7,22 - 7,31 (2H, m), 7,39 (1H, dd), 7,69 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,23 - 8,31 (1H, m), 8,39 (1H, d a), 12,13 - 12,36 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 407.
Ejemplo de referencia 12: 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 150 mg, 0,56 mmol) a 6-fluoro-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida(producto intermedio 23, 60 mg, 0,25 mmol) y DIPEA (0,270 mL, 1,55 mmol) en NMP (2 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Shield RP18 OBD, 5um, 19x150 mm; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMOL/L, el 0,1% de NH<3>.H<2>O), fase móvil B: ACN; Caudal: 20 mL/min; gradiente: del 28% de B al 38% de B en 8 min; 254; 220 nm; TR: 8,02 min). Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 12, 9 mg, 42,9%) como un sólido blanco.<1>H RMN (400 MHz, CD<3>OD) 81,33 (3H, t), 2,65 - 2,72 (4H, m), 2,87 - 2,95 (5H, m), 3,26 - 3,30 (4H, m), 3,71 (2H, s), 7,33 - 7,41 (2H, m), 7,52 (1H, dd), 7,76 (1H, d), 7,90 (1H, dd);<19>F RMN (376 MHz, CD<3>OD) 8 -73,40; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 425.
P roducto in term edio 42 P roducto in te rm ed io 43 P roducto in term edio 44
Producto intermedio 45 Ejemplo de referencia 13
Producto intermedio 43: 5-bromo-N,6-dimetilpicolinamida
Se añadió una disolución 2 M de metilamina in THF (20 mL, 40,00 mmol) a 5-bromo-6-metilpicolinato de metilo (producto intermedio 42, 2,0 g, 8,69 mmol) y se agitó la mezcla resultante a 80 °C durante 18 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 80% de MeOH en agua (el 0,1% de NH<4>HCO<3>). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 5-bromo-N,6-dimetilpicolinamida (producto intermedio 43, 1,5 g, 75%) como un sólido de color amarillo pálido.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 52,65 (3H, s), 2,82 (3H, d), 7,75 (1H, d), 8,17 (1H, d), 8,57 - 8,76 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 229
Producto intermedio 44: 4-(2-metil-6-(metilcarbamoil)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se añadió 5-bromo-N,6-dimetilpicolinamida (producto intermedio 43, 1,0 g, 4,37 mmol) a piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (0,894 g, 4,80 mmol), BINAP (0,272 g, 0,44 mmol), Pd(OAc)<2>(0,098 g, 0,44 mmol) y CS<2>CO<3>(3,56 g, 10,91 mmol) en tolueno (20 mL) bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 16 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 30% de MeOH en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 4-(2-metil-6-(metilcarbamoil)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 44, 1,2 g, 82%) como un sólido marrón.<1>H Rm N (300 Mh z , CD<3>OD) 51,50 (9H, s), 2,58 (3H, s), 2,92 - 3,00 (7H, m), 3,62 (4H, m), 7,50 (1H, d), 7,88 (1H, d); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 335.
Producto intermedio 45: N,6-dimetil-5-(piperazin-1-il)picolinamida
Se añadió 4-(2-metil-6-(metilcarbamoil)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 44, 1,18 g, 3,53 mmol) a una disolución 4 M de HCl en el 1,4-dioxano (10 mL, 329,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con éter de petróleo (5 mL x 2), Et<2>O (5 mL x 2) y se secó a vacío para proporcionar N,6-dimetil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 45, 0,77 g, 81%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (300 MHz, CD<3>OD) 52,86 (3H, s), 3,02 (3H, s), 3,42 - 3,54 (8H, m), 8,29 (2H, d); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 235.
Ejemplo de referencia 13: 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N,6-dimetil-piridin-2-carboxamida
Se añadió 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 100 mg, 0,37 mmol) a N,6-dimetil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 45, 90 mg, 0,33 mmol) y DIPEA (0,36 mL, 2,05 mmol) en NMP (2 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C1830 x 150 mm 5 um; Fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMOL/L), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: del 30% de B al 40% de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 6,43 min). Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N,6-dimetil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 13, 68,7 mg, 43,6%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (400 MHz, CD<3>OD) 5 1,33 (3H, t), 2,55 (3H, s), 2,71 (4H, s), 2,87 - 2,99 (5H, m), 3,05 (4H, t), 3,73 (2H, s), 7,35 (1H, s), 7,38 (1H, d), 7,49 (1H, d), 7,77 (1H, d), 7,87 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]<+>= 421.
Producto intermedio 47: 6-doro-5-(piperazin-1-il)picolinato de metilo
Se añadió piperazina (1,0 g, 11,61 mmol) a 6-cloro-5-fluoropicolinato de metilo (producto intermedio 46, 1,0 g, 5,28 mmol) en MeCN (30 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 18 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 60% de MeCN en agua (el 0,1% de NH<4>HCO<3>). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 6-cloro-5-(piperazin-1-il)picolinato de metilo (producto intermedio 47, 1,28 g, 95%) como un aceite rojo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 82,81 - 2,91 (4H, m), 3,04 - 3,08 (4H, m), 3,85 (3H, s), 7,61 (1H, d), 8,00 (1H, d) (El protón de NH no se muestra); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 256.
Producto intermedio 48: 6-doro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida
Se añadió una disolución 2 M de metilamina en THF (40 mL, 80,00 mmol) a 6-cloro-5-(piperazin-1-il)picolinato de metilo (producto intermedio 47, 1,26 g, 4,93 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 18 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 60% de MeCN en agua (el 0,1% de NH<4>HCO<3>). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 6-cloro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 48, 1,12 g, 89%) como un aceite de color amarillo pálido.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) 82,79 (3H, d), 2,85 - 2,89 (4H, m), 2,97 - 3,02 (4H, m), 763 (1H, d), 7,94 (1H, d), 8,45 (1H, c) (El protón de piperazin-NH no se muestra); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 255.
Ejemplo de referencia 14: 6-dom-5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]pipemzin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió 7-(bromometil)-3-etilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 30, 200 mg, 0,75 mmol) a 6-cloro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 48, 100 mg, 0,39 mmol) y DIPEA (0,358 mL, 2,05 mmol) en NMP (2 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C1830*150 mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMOL/L), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: del 30% de B al 40% de B en 8 min; 254; 220 nm; TR: 7,3 min). Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-cloro-5-[4-[(2-etil-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 14, 52,6 mg, 30,4%) como un sólido blanco.<1>HRMN (400 MHz, CD<3>OD) 81,33 (3H, t), 2,71 (4H, s), 2,87 - 2,96 (5H, m), 3,23 (4H, s), 3,73 (2H, s), 7,33 - 7,41 (2H, m), 7,62 (1H, d), 7,77 (1H, d), 8,00 (1H, d); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 441.
Se añadió 4-bromobenceno-1,2-diamina (producto intermedio 49, 0,9 g, 4,81 mmol) a 3,3,3-trifluoro-2-oxopropanoato de metilo (0,9 g, 5,77 mmol) en tolueno (10 mL). La mezcla resultante se agitó a 100 °C durante 60 minutos. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 50% de EtOAc en éter de petróleo. Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar una mezcla regioisomérica de 7-bromo-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona y 6-bromo-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 50 producto intermedio 51, 1,28 g, 45,4%) como un sólido blanquecino. Se aisló una mezcla de regioisómeros, y el espectro de<1>H-RMN no se interpretó; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 295.
Producto intermedio 52: 7-(hidroximetil)-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió Pd(Ph<3>P)<4>(0,3 g, 0,26 mmol) a una mezcla de 7-bromo-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona y 6-bromo-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 50 producto intermedio 51, 1,2 g, 2,05 mmol) y (tributilestanil)metanol (1,2 g, 3,74 mmol) en 1,4-dioxano (40 mL). Se agitó la mezcla resultante a 100 °C durante 18 horas bajo nitrógeno. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 50% de MeCN en agua (el 0,1% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 7-(hidroximetil)-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 52, 0,32 g, 64,0%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>,) 8 4,63 (2H, d), 5,52 (1H, t), 7,30 (1H, dd), 7,38 (1H, d), 7,83 (1H, d), 13,05 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 245.
Ejemplo de referencia 15: N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(tri fluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]pipemzin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió una disolución del 33% de HBr en AcOH (3 mL, 18,23 mmol) a 7-(hidroximetil)-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 52, 111 mg, 0,45 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadieron DIEA (0,5 mL, 2,86 mmol) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 100 mg, 0,45 mmol) a la mezcla anterior en NMP (3 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C18, 30 * 150 mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMOL/L), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 22 de B a 32 de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 5,77. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 15, 44,0 mg, 21,71%) como un sólido blanco.<1>H R<m>N (400 MHz, DMSO-d<6>) 8 2,55 - 2,62 (m, 4H), 2,78 (d, 3H), 3,34 - 3,38 (t, 4H), 3,69 (s, 2H), 7,34 - 7,44 (m, 3H), 7,80 - 7,91 (m, 2H), 8,27 (d, 1H), 8,36 - 8,41 (m, 1H), 12,97 (s, 1H);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -68,36; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 447.
Ejemplo de referencia 16: 6-doro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió el 33% de HBr en AcOH (3 mL, 18,23 mmol) a 7-(hidroximetil)-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 52, 43,1 mg, 0,18 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió DIPEA (0,5 mL, 2,86 mmol) y 6-cloro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 48, 45 mg, 0,18 mmol) a la mezcla anterior en NMP (5 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C18, 30 * 150 mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 M<m>O<l>/L), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 10 de B a 50 de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 6,75. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-cloro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 16, 22,00 mg, 25,9%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 82,56 - 2,64 (s, 4H), 2,79 (d, 3H), 3,09 - 3,17 (m, 4H), 3,71 (s, 2H), 7,36 - 7,42 (m, 2H), 7,67 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,94 (d, 1H), 8,39 - 8,44 (m, 1H), 12,89 (s, 1H);<19>F RMN (376 MHz, DMSO) 8 -68,41; m/z (ES+) [M+H]<+>= 481.
Ejemplo de referencia 17: 6-fluoro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]pipemzin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió el 33% de HBr en AcOH (3 mL, 55,25 mmol) a 7-(hidroximetil)-3-(trifluorometil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 52, 102 mg, 0,42 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 23, 100 mg, 0,42 mmol) y DIPEA (0,5 mL, 2,86 mmol) a la mezcla anterior en NMP (5 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C18, 30 * 150 mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMO<l>/<l>), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 15 de B a 40 de B en 8 min; 254; 220 nm; TR: 7,2. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-fluoro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 17, 66,0 mg, 33,9%) como un sólido blanco.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,55 - 2,69 (m, 4H), 2,77 (d, 3H), 3,15 - 3,23 (m, 4H), 3,69 (s, 2H), 7,33 - 7,46 (m, 2H), 7,58 (dd, 1H), 7,78 - 7,93 (m, 2H), 8,37 - 8,42 (m, 1H), 12,99 (s, 1H);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -68,36,-72,52; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 465.
Producto intermedio 54: clorhidrato de 2-aminopentanoato de metilo
Se añadió gota a gota SOCI2 (17 mL, 232,94 mmol) a ácido 2-aminopentanoico (producto intermedio 53, 10,0 g, 85,36 mmol) en MeOH (200 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida para proporcionar clorhidrato de 2-aminopentanoato de metilo (producto intermedio 54, 15,78 g, 110%) como un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-da, 400 MHz) 80,88 (3H, t), 1,19 - 1,51 (2H, m), 1,67 - 1,83 (2H, m), 3,74 (3H, s), 3,89 - 3,93 (1H, m), 8,64 (3H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 132.
Producto intermedio 55: 4-(1-metoxi-1-oxopentan-2-ilamino)-3-nitrobenzoato de metilo
Se añadió bicarbonato de sodio (20,0 g, 238,08 mmol) a clorhidrato de 2-aminopentanoato de metilo (producto intermedio 54, 15,57 g, 92,88 mmol) y 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (9,0 g, 45,19 mmol) en THF (160 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (150 mL), y se lavó secuencialmente con agua (100 mL x 1), NaHCO3 saturado (100 mL x 1) y salmuera saturada (100 mL x 1). Se secó la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar 4-(1-metoxi-1-oxopentan-2-ilamino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 55, 14,09 g, 100%) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 80,89 (3H, t), 1,26 - 1,41 (2H, m), 1,84 -1,94 (2H, m), 3,73 (3H, s), 3,83 (3H, s), 4,68 - 4,75 (1H, m), 7,12 (1H, d), 8,00 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,63 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 311.
Producto intermedio 56: 3-oxo-2-propil-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió Pd(OH)2/C (al 20% en peso, 1,58 g, 2,25 mmol) a 4-((1-metoxi-1-oxopentan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 55, 14,05 g, 45,28 mmol) en MeOH (300 mL). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente bajo H2 durante 30 horas. La mezcla de reacción se filtró. Se lavó el precipitado con DMF (100 mL) y se evaporó el filtrado hasta sequedad para proporcionar el producto en bruto. Se lavó el producto en bruto con DCM (10 mL) y se secó a vacío para proporcionar 3-oxo-2-propil-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 56, 9,12 g, 81%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 0,87 (3H, t), 1,32 - 1,46 (2H, m), 1,57 - 1,64 (2H, m), 3,74 (3H, s), 3,88 - 3,93 (1H, m), 6,70 (1H, d), 6,83 (1H, d), 7,32 (1H, d), 7,40 (1H, dd), 10,38 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 249.
Producto intermedio 57: 3-oxo-2-propil-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (9,42 g, 41,50 mmol) a 3-oxo-2-propil-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 56, 9,12 g, 36,73 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con NaHCO3 saturado (200 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 hora. Se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con agua (1000 mL) y se secó a vacío para proporcionar 3-oxo-2-propil-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 57, 7,86 g, 87%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 80,98 (3H, t), 1,68 - 1,80 (2H, m), 2,75 - 2,83 (2H, m), 3,89 (3H, s), 7,73 - 7,85 (2H, m), 7,88 (1H, d), 12,45 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 247.
Producto intermedio 58: 7-(hidroximetil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió gota a gota una disolución 1 M de DIBAL-H en THF (100 mL, 100,00 mmol) a 3-oxo-2-propil-3,4dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 57, 7,81 g, 31,71 mmol) en THF (200 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 horas. Se extinguió la mezcla de reacción con MeOH (5 mL) y disolución acuosa saturada de tartrato de monopotasio y monosodio tetrahidratado (20 mL), se evaporó la fase orgánica para proporcionar 7-(hidroximetil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 58, 1,2 g, 17,34%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 80,97 (3H, t), 1,36 - 1,77 (2H, m), 2,71 - 2,79 (2H, m), 4,59 (2H, s), 5,39 (1H, s), 7,18 (1H, dd), 7,27 (1H, d), 7,65 (1H, d), 12,30 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 219.
producto intermedio 59: 7-(bromometil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió el 33% de HBr en AcOH (74,6 pl, 1,37 mmol) a 7-(hidroximetil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 58, 300 mg, 1,37 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. Se eliminó el disolvente a presión reducida para proporcionar 7-(bromometil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 59, 600 mg, 155%) como un sólido marrón (el producto en bruto no era puro y contenía AcOH y otras impurezas. El producto se utilizó en el paso siguiente sin purificación ulterior. El espectro de 1H-RMN no estaba limpio y no se interpretó; m/z (ES+) [M+H]+ = 282.
Ejemplo de referencia 18: N-metil-5-[4-[(3-oxo-2-propil-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (200 pL, 1,15 mmol) a 7-(bromometil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 59, 200 mg, 0,71 mmol) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 80 mg, 0,36 mmol) en NMP (3 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Shield RP18 OBD, 19 x 250mm, 10um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMOL/L, el 0,1% de NH<3>.H<2>O), fase móvil B: ACN; Caudal: 20 mL/min; gradiente: 38 de B a 50 de B en 7 min; 254/ 220 nm; TR: 6,20. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar N-metil-5-[4-[(3-oxo-2-propil-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 18, 71,0 mg, 46,5%) como un sólido blanco.<1>H RMN (400 MHz,DMSO-d<6>) 80,97 (3H, t), 1,66 - 1,80 (2H, m), 2,55 - 261 (4H, m), 2,73 - 2,85 (5H, m), 3,33 - 3,40 (4H, m), 3,62 (2H, s), 7,19 - 7,31 (2H, m), 7,40 (1H, dd), 7,68 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,27 (1H, d), 8,35 - 8,45 (1H, m), 12,26 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]<+>= 421.
Ejemplo de referencia 19: 6-cloro-N-metil-5-[4-[(3-oxo-2-propil-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (200 pL, 1,15 mmol) a 7-(bromometil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 59, 200 mg, 0,71 mmol) y 6-doro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 48, 80 mg, 0,31 mmol) en NMP (3 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Shield RP18 OBD, 19 x 250 mm, 10 um; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO2H), fase móvil B: ACN; Caudal: 20 mL/min; gradiente: 18 de B a 30 de B en 7 min; 254/ 220 nm; TR: 5,93. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-cloro-N-metil-5-[4-[(3-oxo-2-propil-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 19, 52,0 mg, 36,4%) como un sólido blanco. 1H R<m>N (400 MHz, DMSO-d6) 8 0,97 (3H, t), 1,66 - 1,79 (2H, m), 2,55 - 2,65 (4H, m), 2,71 - 2,85 (5H, m), 3,06 - 3,12 (4H, m), 3,64 (2H, s), 7,20 - 7,32 (2H, m), 7,64 - 7,72 (2H, m), 7,94 (1H, d), 8,40 - 8,50 (1H, m), 12,27 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 455.
Ejemplo de referencia 20: 6-fluoro-N-metil-5-[4-[(3-oxo-2-propil-4H-quinoxalin-6-il)metil]pipemzin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (500 pl, 2,86 mmol) a 7-(bromometil)-3-propilquinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 59, 200 mg, 0,71 mmol) y 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida, 2 HCl (producto intermedio 23, 100 mg, 0,32 mmol) en NMP (3 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. El disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna SunFire C18 OBD Prep, 100 A, 5 pm, 19 mm x 250 mm; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO<2>H), fase móvil B: ACN; Caudal: 25 mL/min; gradiente: de 10 de B a 20 de B en 13 min; 254/ 220 nm; TR: 12,13. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-fluoro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(trifluorometil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 20, 71,0 mg, 50,4%) como un sólido blanco.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 80,97 (3H, t), 1,66 - 1,78 (2H, m), 2,54 - 2,60 (4H, m), 2,71 - 2,83 (5H, m), 3,14 - 3,25 (4H, m), 3,62 (2H, s), 7,19 - 7,33 (2H, m), 7,57 (1H, dd), 7,68 (1H, d), 7,85 (1H, dd), 8,37 - 5,43 (1H, m), 12,27 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -72,51; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 439.
Producto intermedio 60 Producto intermedio 61 Producto intermedio 62
Producto intermedio 61: clorhidrato de 2-aminobutanoato de metilo
Se añadió gota a gota SOCI<2>(17 mL, 232,94 mmol) a ácido 2-aminobutanoico (producto intermedio 60, 10,0 g, 96,97 mmol) en MeOH (100 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida para proporcionar clorhidrato de 2-aminobutanoato de metilo (producto intermedio 61, 14,84 g, 100%) como un sólido blanco.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 80,91 (3H, t), 1,75 - 1,95 (2H, m), 3,73 (3H, s), 3,93 (1H, t), 8,72 (3H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 118
Producto intermedio 62: 2-fluoro-4-(1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)-5-nitrobenzoato de metilo
Se añadió DIPEA (4,02 mL, 23,03 mmol) a 2,4-difluoro-5-nitrobenzoato de metilo (1,0 g, 4,61 mmol) y clorhidrato de 2-aminobutanoato de metilo (producto intermedio 61, 0,707 g, 4,61 mmol) en NMP (10 mL). La mezcla resultante se agitó a ta durante 5 horas. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 80% de MeCN en agua (el 0,1% de NH<4>HCO<3>). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 2-fluoro-4-(1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)-5-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 62, 1,2 g, 83%) como un sólido negro.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 80,88 (3H, t), 1,78 - 2,03 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,83 (3H, s), 4,73 - 4,80 (1H, m), 7,06 (1H, d), 8,66 - 8,72 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 315.
Producto intermedio 63: 2-etil-7-fluoro-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió 2-fluoro-4-((1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-5-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 62, 1,15 g, 3,66 mmol) al 20% en peso de Pd(OH)<2>(500 mg, 0,71 mmol) en MeOH (300 mL) y acetato de etilo (50 mL) bajo hidrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La reacción no llegó hasta su finalización. La mezcla de reacción se filtró. Se evaporó la fase orgánica para proporcionar el producto en bruto, 2-etil-7-fluoro-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 63, 0,780 g, 85%), como una goma marrón. El producto en bruto se usó en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional. El producto en bruto no estaba limpio, y el espectro de<1>H-RMN no se interpretó; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 253.
Producto intermedio 64: 2-etil-7-fluoro-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió 2-etil-7-fluoro-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 63, 760 mg, 3,01 mmol) a DDQ (821 mg, 3,62 mmol) en DCM (20 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción llegó hasta su finalización. Se concentró la mezcla resultante a presión reducida para obtener un sólido marrón. Se añadió disolución saturada ac. de NaHCO<3>(10 mL) al sólido y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se enjuagó con disolución de NaHCO<3>ac. adicional (10 mL x 5). Se secó el sólido a vacío para proporcionar 2-etil-7-fluoro-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 64, 750 mg, 99%) como un sólido marrón.<1>H RMN (300 m Hz , DMSO-d<6>) 81,20 (3 H, t), 2,82 (2 H, c), 3,87 (3 H, s), 7,65 (1 H, d), 7,76 (1 H, d), 12,42 (1 H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 251.
Producto intermedio 65: 3-etil-6-fluoro-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió en porciones una disolución 1 M de hidruro de diisobutNaluminio en THF (15,35 mL, 15,35 mmol) a 2-etil-7-fluoro-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 64, 640 mg, 2,56 mmol) en THF (300 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción llegó hasta su finalización. Se extinguió la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de tartrato de potasio y sodio (20 mL) y MeOH (10 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con THF (50 mL x 3). Se evaporó la fase orgánica hasta sequedad para proporcionar el producto en bruto. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 60% de MeOH en agua (el 0,4% de HCO2H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 3-etil-6-fluoro-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 65, 110 mg, 19,37 %) como un sólido blanquecino. 1H RMN(400 MHz, DMSO-d6) 8 1,21 (3H, t), 2,80 (2H, c), 4,63 (2H, d), 5,49 (1H, t), 7,41 (1H, d), 7,49 (1H, d), 12,36 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 223.
Ejemplo de referencia 21: 5-[4-[(2-etil-7-fluoro-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metilpiridin-2-carboxamida
Se añadió 3-etil-6-fluoro-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 65, 50 mg, 0,23 mmol) al 33% de HBr en AcOH (2 mL, 12,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se evaporó la mezcla de reacción a vacío para proporcionar 7-(bromometil)-3-etil-6-fluoroquinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto). Se usó el producto en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional. Se añadió DlPEA (0,196 mL, 1,13 mmol) a 7-(bromometil)-3-etil-6-fluoroquinoxalin-2(1H)-ona y 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 23, 70 mg, 0,29 mmol) en NMP (2 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se purificó la mezcla resultante mediante HPLC preparativa (columna: columna Sunfire prep C18, 30 x 150 mm, 5 um; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO<2>H), fase móvil B:<a>C<n>; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 10 de B a 35 de B en 8 min; 254/ 220 nm; TR: 7,37. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(2-etil-7-fluoro-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metilpiridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 21, 55,0 mg, 53,7%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN(400 MHz, DMSO-d<6>) 8 1,21 (3H, t), 2,61 (4H, m), 2,73 - 2,85 (5H, m), 3,18 (4H, m), 3,68 (2H, s), 7,38 (1H, d), 7,51 - 7,61 (2H, m), 7,84 (1H, dd), 8,13 (0,29H, s), 8,38 (1H, m), 12,29 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -72,53, -124,31; m/z (ES+) [M+H]<+>= 443.
Producto intermedio 70 Producto intermedio 71 Producto intermedio 72
Producto intermedio 67: 4-(3-hidroxi-1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)-3-nitrobenzoato de metilo
Se añadió DIPEA (8,77 mL, 50,22 mmol) a 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (2,0 g, 10,04 mmol) y clorhidrato de 2- amino-3-hidroxibutanoato de metilo (producto intermedio 66, 2,04 g, 12,05 mmol) en DMF (20 mL). La mezcla resultante se agitó a ta durante 16 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), y se lavó secuencialmente con disolución acuosa saturada de NH<4>Cl (100 mL x 1) y salmuera (100 mL x 4). Se secó la fase orgánica sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 4-((3-hidroxi-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 67, 2,9 g, 92%), como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 81,15 - 1,27 (3H, m), 3,64 - 3,74 (3H, m), 3,83 (3H, s), 4,08 - 4,44 (1H, m), 4,61 -4,72 (1H, m), 5,39 -5 ,60 (1H, m), 7,03 -7 ,15 (1H, m), 7,90 - 8,03 (1H, m), 8,62 -8 ,69 (1H, m), 8,73 -8 ,89 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]<+>= 313.
Producto intermedio 68: 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió el 20% de Pd(OH)<2>/C (0,648 g, 0,92 mmol) a 4-((3-hidroxi-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 67, 2,88 g, 9,22 mmol) en MeOH (300 mL) bajo hidrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción llegó hasta su finalización. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. Se evaporó la fase orgánica para proporcionar 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 68, 2,290 g, 99%) como un sólido gris.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 81,07 (3H, m), 2,81 (1H, d), 3,72 (1H, m), 3,74 (3H, s), 4,78 (1H, d), 6,70 - 6,86 (2H, m), 7,27 (1H, d), 7,37 (1H, dd), 10,38 (1H, d); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 251.
Producto intermedio 69: 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (2,265 g, 998 mmol) a 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 68, 2,27 g, 9,07 mmol) en DCM (100 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción llegó hasta su finalización. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida para obtener un sólido marrón. Se añadió disolución saturada ac. de NaHCO<3>(100 mL) al sólido y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se enjuagó con disolución de NaHCO<3>ac. adicional (30 mL x 3). Se secó el sólido a vacío para proporcionar 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 69, 2,24 g, 99%) como un sólido gris.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 8 1,40 (3H, d), 3,88 (3H, s), 4,94 (1H, c), 7,69 (1H, dd), 7,77 (1H, d), 7,90 (1H, d) (2 protones no se muestran); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 249.
Producto intermedio 70: 2-acetil-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió peryodinano de Dess-martin (2,56 g, 6,04 mmol) a 2-(1-hidroxietil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 69, 1,0 g, 4,03 mmol) en DCM (30 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se evaporó la mezcla de reacción para proporcionar el producto en bruto. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 30% de MeCN en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 2-acetil-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 70, 0,62 g, 62,5%) como un sólido de color amarillo pálido.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,58 (3H, s), 3,91 (3H, s), 7,84 (1H, dd), 7,91 -8 ,03 (2H, m), 12,86 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 247.
Producto intermedio 71: 2-(1,1-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió BAST (1,35 mL, 7,31 mmol) a 2-acetil-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 70, 600 mg, 2,44 mmol) en DCM (20 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se evaporó para proporcionar el producto en bruto. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 30% de MeCN en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 2-(1,1-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 71, 174 mg, 26,6 %) como un sólido blanquecino.
<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,07 (3H, t), 3,91 (3H, s), 7,84 (1H, dd), 7,92 - 7,99 (2H, m), 12,90 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -93,26; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 269.
Producto intermedio 72: 3-(1,1-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió una disolución de hidruro de diisobutilaluminio 1 M en THF (2,39 mL, 2,39 mmol) a 2-(1,1 -difluoroetil)-3- oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 71, 160 mg, 0,60 mmol) en THF (50 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 16 horas. Se extinguió la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de tartrato de potasio y sodio (3 mL) y MeOH (1 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con t Hf (10 mL x 3). Se evaporó la fase orgánica para proporcionar el producto en bruto, 3-(1,1-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 72, 120 mg, 84%). El producto se usó en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,06 (3H, t), 4,63 (2H, s), 5,47 (1H, s), 7,26 (1H, dd), 7,35 (1H, d), 7,78 (1H, d), 12,75 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]<+>= 241.
Ejemplo de referencia 22: 5-[4-[[2-(1,1-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió 3-(1,1-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 72, 60 mg, 0,25 mmol) al 33% de HBr en ácido acético (2 mL, 12,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se evaporó la mezcla de reacción a vacío para proporcionar 7-(bromometil)-3-(1,1-difluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto). Se usó el producto en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional. Se añadió DIPEA (0,218 mL, 1,25 mmol) a 7-(bromometil)-3-(1,1-difluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 60 mg, 0,27 mmol) en NMP (3 mL). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa (columna: columna XBridge Shield RP18 OBD, 30 x 150 mm, 5um; fase móvil A: agua (el 0,05% de NH<3>H<2>O), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 13 de B a 33 de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 5,70. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[[2-(1,1-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 22, 47,8 mg, 43,2%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 82,06 (3H, t), 2,52 - 2,62 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,30 - 3,40 (4H, m), 3,67 (2H, s), 7,32 - 7,42 (3H, m), 7,80 - 7,86 (2H, m), 8,27 (1H, d), 8,34 - 8,42 (1H, m), 12,70 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -92,74; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 443.
Producto intermedio 74: 4-(4,4-difluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)-3-nitrobenzoato de metilo
Se añadió DIPEA (8,77 mL, 50,22 mmol) a 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (2,0 g, 10,04 mmol) y clorhidrato de 2-amino-4,4-difluorobutanoato de metilo (producto intermedio 73, 2,0 g, 10,55 mmol) en DMF (20 mL). La mezcla resultante se agitó a 40 °C durante 8 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), y se lavó secuencialmente con NH<4>Cl saturado (100 mL x 1) y salmuera (100 mL x 4). Se secó la fase orgánica sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 4-((4,4-difluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 74, 2,5 g, 74,9%), como un sólido amarillo.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) 82,50 - 2,76 (2H, m), 3,71 (3H, s), 3,82 (3H, s), 4,95 (1H, c), 6,22 (1H, tt), 7,18 (1H, d), 7,99 (1H, dd), 8,63 (1H, d), 8,66 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]<+>= 333.
Producto intermedio 75: 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió el 20% de Pd(OH)<2>/C (0,465 g, 0,66 mmol) a 4-((4,4-difluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 74, 2,2 g, 6,62 mmol) en MeOH (300 mL) bajo hidrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. Se evaporó el filtrado para proporcionar 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 75, 1,64 g, 92%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 m Hz , DMSO-d<6>) 82,24 - 2,32 (2H, m), 3,76 (3H, s), 4,10 - 4,18 (1H, m), 6,27 (1H, tt), 6,73 (1H, d), 6,89 (1H, s), 7,37 (1H, d), 7,44 (1H, dd), 10,58 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 271.
Producto intermedio 76: 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (1,478 g, 6,51 mmol) a 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 75, 1,6 g, 5,92 mmol) en DCM (100 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se retiró la mezcla resultante a presión reducida para obtener un sólido marrón. Se añadió disolución saturada ac. de NaHCO<3>(100 mL) al sólido y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se enjuagó con disolución de NaHCO<3>ac. adicional (30 mL x 3). Se secó el sólido a vacío para proporcionar 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 76, 1,58 g, 99%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 83,46 (2H, td), 3,90 (3H, s), 6,57 (1H, t), 7,79 - 7,92 (3H, m), 12,68 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 269.
Producto intermedio 77: 3-(2,2-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió en porciones una disolución 1 M de hidruro de diisobutilaluminio en THF (22,37 mL, 22,37 mmol) a 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 76, 1,0 g, 3,73 mmol) en THF (100 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 16 horas. Se extinguió la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de tartrato de potasio y sodio (20 mL) y MeOH (10 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con THF (30 mL x 3). Se evaporó la fase orgánica para proporcionar 3-(2,2-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (0,72 g, 80 %) como un sólido rojo (producto en bruto). Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 60% de MeOH en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 3-(2,2-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 77, 500 mg, 69,4%) como un sólido rojo.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) 83,42 (2H, td), 4,61 (2H, s), 5,42 (1H, s a), 6,56 (1H, tt), 7,23 (1H, dd), 7,32 (1H, d), 7,71 (1H, d), 12,55 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]<+>= 241.
Producto intermedio 78: 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído
Se añadió peryodinano de Dess-Martin (530 mg, 1,25 mmol) a 3-(2,2-difluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 77, 200 mg, 0,83 mmol) en DCM (5 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se evaporó la mezcla resultante para proporcionar el producto en bruto. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 30% de MeCN en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 78, 160 mg, 81%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 83,47 (2H, td), 6,58 (1H, tt), 7,77 - 7,85 (2H, m), 7,90 - 7,98 (1H, m), 10,09 (1H, s), 12,79 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 239.
Ejemplo de referencia 23: 5-[4-[[2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió isopropóxido de titanio (65,6 mg, 0,23 mmol) a 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 78, 55 mg, 0,23 mmol) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 60 mg, 0,23 mmol) en THF (2 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (196 mg, 0,92 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se extinguió la mezcla de reacción con MeOH (0,1 mL). Se evaporó la mezcla de reacción para proporcionar el producto en bruto que se purificó mediante HPLC preparativa (columna: columna XBridge Shield Rp 18 OBD, 30 x 150mm, 5um; fase móvil A: agua (el 0,05% de NH<3>H<2>O), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 13 de B a 33 de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 5,70. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[[2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 23, 8,76 mg, 8,57%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,56 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,32 - 3,48 (6H, m), 3,64 (2H, s), 6,55 (1H, tt), 7,27 -7 ,33 (2H, m), 7,39 (1H, dd), 7,73 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,37 (1H, m), 12,49 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -114,29; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 443.
Ejemplo de referencia 24: 5-[4-[[2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metilpiridin-2-carboxamida
Se añadió isopropóxido de titanio (59,7 mg, 0,21 mmol) a 2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 78, 50 mg, 0,21 mmol) y 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 23, 50,0 mg, 0,21 mmol) en THF (2 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (178 mg, 0,84 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción llegó hasta su finalización. Se extinguió la mezcla de reacción con MeOH (0,1 mL). La mezcla de reacción se evaporó para proporcionar el producto en bruto. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna Sunfire prep C18, 30 x 150, 5 um; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO2H), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 2 de B a 27 de B en 7 min; 254/ 220 nm; TR: 6,78. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[[2-(2,2-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 24, 21,72 mg, 22,13%) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 82,54 - 2,61 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,14 - 3,22 (4H, m), 3,41 (2H, td), 3,64 (2H, s), 6,39 - 6,71 (1H, m), 7,26 -7,33 (2H, m), 7,57 (1H, dd), 7,73 (1H, d), 7,82 - 7,86 (1H, m), 8,13 (0,16H, s), 8,37 (1H, m), 12,49 (1H, s); 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) 8 -72,52, -114,29; m/z (ES+) [M+H]+ = 461.
Producto intermedio 80: 4-(4-fluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)-3-nitrobenzoato de metilo
Se añadió DIPEA (8,77 mL, 50,22 mmol) a 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (2,0 g, 10,04 mmol) y clorhidrato de 2-amino-4-fluorobutanoato de metilo (producto intermedio 79, 1,81 g, 10,55 mmol) en DMF (20 mL). La mezcla resultante se agitó a 40 °C durante 8 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), y se lavó secuencialmente con NH4Cl saturado (100 mL x 1) y salmuera (100 mL x 4). Se secó la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 4-((4-fluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 80, 2,5 g, 79%), como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 82,25 - 2,35 (1H, m), 2,35 - 2,45 (1H, m), 3,71 (3H, s), 3,82 (3H, s), 4,36 - 4,58 (1H, m), 4,56 4,74 (1H, m), 4,84 (1H, c), 7,14 (1H, d), 7,99 (1H, dd), 8,63 (1H, d), 8,67 (1H, d); m/z (ES+) [M+H]+ = 315.
Producto intermedio 81: 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió el 20% de Pd(OH)<2>/C (0,547 g, 0,78 mmol) a 4-((4-fluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)-3-nitrobenzoato de metilo (producto intermedio 80, 2,45 g, 7,80 mmol) en MeOH (300 mL) bajo hidrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción llegó hasta su finalización. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. Se evaporó el filtrado para proporcionar 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 81, 1,9 g, 97%) como un sólido gris.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 81,91 - 2,19 (2H, m), 3,75 (3H, s), 4,03 (1H, m), 4,49 - 4,73 (2H, m), 6,73 (1H, d), 6,91 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,42 (1H, dd), 10,46 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 253.
Producto intermedio 82: 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (1,83 g, 8,07 mmol) a 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 81, 1,85 g, 7,33 mmol) en DCM (100 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se retiró la mezcla resultante a presión reducida para obtener un sólido marrón. Ac. disolución saturada ac. de NaHCO<3>(100 mL) al sólido y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se enjuagó con disolución de NaHCO<3>ac. adicional (30 mL x 3). Se secó el sólido a vacío para proporcionar 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 82, 1,8 g, 98%) como un sólido gris.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 83,23 (2H, dt), 3,89 (3H, s), 4,90 (2H, dt), 7,76 - 7,85 (2H, m), 7,88 (1H, d), 12,55 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 251.
Producto intermedio 83: 3-(2-fluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1h)-ona
Se añadió en porciones disolución 1 M de hidruro de diisobutilaluminio en THF (15,99 mL, 15,99 mmol) a 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 82, 1,0 g, 4,00 mmol) en THF (100 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 16 horas. Se extinguió la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de tartrato de potasio y sodio (20 mL) y MeOH (10 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con THF (30 mL x 3). La capa orgánica se evaporó para obtener el producto crudo. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 60% de MeOH en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 3-(2-fluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 83, 0,49 g, 55,2%) como un sólido marrón.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) 83,20 (2H, dt), 4,60 (2H, d), 4,90 (2H, dt), 5,41 (1H, t), 7,21 (1H, dd), 730 (1H, d), 7,68 (1H, d), 12,42 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]<+>= 223.
Producto intermedio 84: 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído
Se añadió peryodinano de Dess-Martin (229 mg, 0,54 mmol) a 3-(2-fluoroetil)-7-(hidroximetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 83, 100 mg, 0,45 mmol) en DCM (3 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó para proporcionar el producto en bruto. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa, gradiente de elución del 5 al 30% de MeCN en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 84, 93 mg, 94%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) 83,20 - 3,28 (2H, m), 4,90 (2H, dt), 7,74 - 7,80 (2H, m), 7,91 (1H, d), 10,06 (1H, s), 12,66 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]<+>= 221.
Ejemplo de referencia 25: 5-[4-[[2-(2-fluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió isopropóxido de titanio (64,5 mg, 0,23 mmol) a 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 84, 50 mg, 0,23 mmol) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 50,0 mg, 0,23 mmol) en THF (3 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (192 mg, 0,91 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se repitió esto en otro lote, y se combinaron dos lotes para la purificación. Se purificó la mezcla de reacción combinada mediante HPLC preparativa (columna: columna XBridge Prep OBD C18 , 30 x 150mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 M<m>O<l>/L), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 20 de B a 35 de B en 7 min; 254/ 210 nm; TR: 6,38. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[[2-(2-fluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 25, 4,83 mg, 2,54%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 82,53 - 2,59 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,17 (1H, t), 3,23 (1H, t), 3,32 - 3,38 (4H, m), 3,63 (2H, s), 4,83 (1H, t), 4,95 (1H, t), 7,25 - 7,32 (2H, m), 7,39 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,37 (1H, d), 12,36 (1H, s); 19F RMN (376 MHz, DMSO-da) 8 -217,70; m/z (ES+) [M+H]+ = 425.
Ejemplo de referencia 26: 6-fluoro-5-[4-[[2-(2-fluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metilpiridin-2-carboxamida
Se añadió isopropóxido de titanio (90 mg, 0,32 mmol) a 2-(2-fluoroetil)-3-oxo-3,4-dihidroquinoxalin-6-carbaldehído (producto intermedio 84, 70 mg, 0,32 mmol) y 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 23, 76 mg, 0,32 mmol) en THF (3 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 minutos. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (269 mg, 1,27 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se extinguió la mezcla de reacción con MeOH (0,1 mL). La mezcla de reacción se evaporó para proporcionar el producto en bruto. El producto en bruto se purificó mediante HPLC preparativa (Columna: columna XBridge Prep OBD C18, 30 * 150mm 5um; fase móvil A: agua (NH<4>HCO<3>10 MMO<l>/<l>), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 28 de B a 35 de B en 8 min; 254/ 210 nm; TR: Se evaporaron 7 fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar el producto en bruto. Se purificó adicionalmente el producto en bruto mediante HPLC preparativa (columna: columna Xselect CSH OBD 30*150mm 5um, n; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO<2>H), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 5 de B a 20 de B en 7 min; 254; 220 nm; TR: 6,83. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-[4-[[2-(2-difluoroetil)-3-oxo-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]-N-metilpiridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 26, 3,79 mg, 2,65%) como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,55 - 2,60 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,14 - 3,25 (6H, m), 3,63 (2H, s), 4,89 (2H, dt), 7,24 - 7,31 (2H, m), 7,57 (1H, dd), 7,70 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,24 (0,174H, s), 8,38 (1H, d), 12,37 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 8 -72,51, -217,71; (ES<+>) [M+H]<+>= 443.
Producto intermedio 86: 3-nitro-4-(4,4,4-trifluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-ilamino)benzoato de metilo
Se añadió DIPEA (8,77 mL, 50,22 mmol) a 4-fluoro-3-nitrobenzoato de metilo (2,0 g, 10,04 mmol) y clorhidrato de 2-amino-4,4,4-trifluorobutanoato de metilo (producto intermedio 85, 2,2 g, 10,55 mmol) en DMF (20 mL). La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 10 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), y se lavó secuencialmente con NH<4>Cl acuoso saturado (100 mL x 1) y salmuera (100 mL x 4). Se secó la fase orgánica sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 3-nitro-4-((4,4,4-trifluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)benzoato de metilo (producto intermedio 86, 3,0 g, 85%), como un sólido amarillo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<a>) 82,99 - 3,28 (2H, m), 3,73 (3H, s), 3,84 (3H, s), 5,18 (1H, td), 7,28 (1H, d), 8,01 (1H, dd), 8,65 (1H, d), 8,71 (1H, d); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 351.
Producto intermedio 87: 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió el 20% de Pd(OH)<2>/C (0,601 g, 0,86 mmol) a 3-nitro-4-((4,4,4-trifluoro-1-metoxi-1-oxobutan-2-il)amino)benzoato de metilo (producto intermedio 86, 3,0 g, 8,57 mmol) en MeOH (300 mL) bajo hidrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite. Se evaporó el filtrado hasta sequedad para proporcionar 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 87, 2,3 g, 93%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 82,64 - 2,83 (2H, m), 3,76 (3H, s), 4,32 - 4,37 (1H, m), 6,78 (1H, d), 6,90 (1H, d), 7,37 (1H, d), 7,43 (1H, dd), 10,64 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 289.
Producto intermedio 88: 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo
Se añadió DDQ (1,975 g, 8,70 mmol) a 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-1,2,3,4-tetrahidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 87, 2,28 g, 7,91 mmol) en DCM (100 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se retiró la mezcla resultante a presión reducida para obtener un sólido marrón. Ac. disolución saturada ac. de NaHCO<3>(100 mL) al sólido y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se enjuagó con disolución de NaHCO<3>ac. adicional (30 mL x 3). Se secó el sólido a vacío para proporcionar 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 88, 2,2 g, 97%) como un sólido marrón.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 83,88 - 3,98 (5H, m), 7,81 (1H, dd), 7,86 - 7,94 (2H, m), 12,75 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 287.
Producto intermedio 89: 7-(hidroximetil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona
Se añadió en porciones una disolución 1 M de hidruro de diisobutilaluminio en THF (20,96 mL, 20,96 mmol) a 3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-3,4-dihidroquinoxalin-6-carboxilato de metilo (producto intermedio 88, 1,0 g, 3,49 mmol) en THF (100 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 16 horas. Se extinguió la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de tartrato de potasio y sodio (20 mL) y MeOH (10 mL) a 0 °C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó con THF (30 mL x 3). Se evaporó la fase orgánica para proporcionar un sólido blanquecino que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 5 al 55% de MeOH en agua (el 0,4% de HCO<2>H). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar 7-(hidroximetil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 89, 650 mg, 72,2 %) como un sólido amarillo.<1>H R<m>N (300 MHz, DMSO-d<6>) 83,88 (2 H, c), 4,62 (2H, d), 5,45 (1H, t), 7,24 (1H, dd), 7,33 (1H, d), 7,73 (1H, d), 12,62 (1H, s); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 259.
Ejemplo de referencia 27: N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-4h-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió 7-(hidroximetil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 89, 50 mg, 0,19 mmol) al 33% de HBr en AcOH (2 mL, 12,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se evaporó la mezcla de reacción a vacío para proporcionar 7-(bromometil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto). Se usó el producto en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional. Se añadió DIPEA (0,169 mL, 0,97 mmol) a 7-(bromometil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto) y N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 13, 50 mg, 0,23 mmol) en NMP (2 mL) . La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción purificada mediante HPLC preparativa (columna: columna Sunfire prep C18, 30 x 150, 5 um; fase móvilA:agua (el 0,1% de HCO2H), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 10 de B a 25 de B en 7 min; 254/ 220 nm; TR: 6,57. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 27, 41,5 mg, 46,6%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 52,56 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,35 (4H, m), 3,65 (2H, s), 3,88 (2H, c), 7,29 - 7,42 (3H, m), 7,79 (2H, m), 8,25 - 8,30 (1H, m), 8,38 (1H, m),12,60 (1H, s a); 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) 5 -61,53; m/z (ES+) [M+H]+ = 461.
Ejemplo de referencia 28: 6-fluoro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-4h-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-ilpirídin-2-carboxamida
Se añadió 7-(hidroximetil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto intermedio 89, 60 mg, 0,23 mmol) al 33% de HBr en AcOH (2 mL, 12,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se evaporó la mezcla de reacción a vacío para proporcionar 7-(bromometil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto). Se usó el producto en la siguiente etapa directamente sin purificación adicional. Se añadió DIPEa (0,203 mL, 1,16 mmol) a 7-(bromometil)-3-(2,2,2-trifluoroetil)quinoxalin-2(1H)-ona (producto en bruto) y 6-fluoro-N-metil-5-(piperazin-1-il)picolinamida (producto intermedio 23, 60 mg, 0,25 mmol) en NMP (2 mL) . La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas. Se purificó la mezcla resultante mediante HPLC preparativa (columna: columna Sunfire prep C18, 30 x 150, 5um; fase móvil A: agua (el 0,1% de HCO<2>H), fase móvil B: ACN; Caudal: 60 mL/min; gradiente: 12 de B a 30 de B en 7 min; 254/ 220 nm; TR: 6,25. Se evaporaron las fracciones que contenían el compuesto deseado hasta sequedad para proporcionar 6-fluoro-N-metil-5-[4-[[3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroetil)-4H-quinoxalin-6-il]metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 28, 49,0 mg, 43,3%) como un sólido blanquecino.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 52,53 - 2,63 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,15 - 3,22 (4H, m), 3,65 (2H, s), 3,88 (2H, c), 7,28 - 7,35 (2H, m), 7,57 (1H, dd), 7,76 (1H, d), 7,84 (1H, dd), 8,17 (0,185H, s), 8,38 (1H, m), 12,57 (1H, s);<19>F RMN (376 MHz, DMSO-d<6>) 5 -61,54, -72,52; m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 479.
Ejemplo 29: 6-(difluorometil)-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (330 ^l, 1,89 mmol) a una disolución agitada de 7-(clorometil)-3-etil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona, HCl (producto intermedio 17, 70 mg, 0,27 mmol), yoduro de sodio (4,05 mg, 0,03 mmol) y 6-(difluorometil)-N-metil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 41,102 mg, 0,30 mmol) en acetonitrilo (2,4 mL) a 20°C y se agitó la disolución resultante a 50 °C durante 3 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se añadieron 50 mL de agua seguido por 3 mL de NaHCO3 sat. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Tras la concentración, se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 30% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 6-(difluorometil)-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida (ejemplo 29, 52,0 mg, 42 %) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,54 - 2,58 (2H, m), 2,63 (4H, s a), 2,84 (3H, d), 3,03 (4H, t a), 3,68 (2H, s), 7,14 (1H, t), 7,62 (1H, d), 7,76 (1H, s), 7,86 (1H, d), 8,10 (1H, d), 8,32 - 8,45 (2H, m), 11,86 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 457.
Ejemplo 30:5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H- 1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin- 1-il]-N-metil-6 (trifluorometil)piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (330 ^l, 1,89 mmol) a una disolución agitada de 7-(clorometil)-3-etil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona, HCl (producto intermedio 17, 70 mg, 0,27 mmol), yoduro de sodio (4,05 mg, 0,03 mmol) y N-metil-5-piperazin-1-il-6-(trifluorometil)piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 38,107 mg, 0,30 mmol) en acetonitrilo (2,4 mL) a 20°C y se agitó la disolución resultante a 50 °C durante 3 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se añadieron 50 mL de agua seguido por 3 mL de NaHCO3 sat. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Tras la concentración, se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 30% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-6 (trifluorometil)piridin-2-carboxamida (ejemplo 30, 58,0 mg, 45 %) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,54 - 2,62 (6H, m), 2,83 (3H, d), 3,04 (4H, t a), 3,67 (2H, s), 7,62 (1H, d), 7,75 (1H, s), 8,04 (1H, d), 8,19 (1H, d), 8,31 - 8,48 (2H, m), 11,85 (1H, s); m/z (ES+) [M+H]+ = 475.
Ejemplo 31: 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H- 1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin- 1-il]-N,6-dimetil-piridin-2-carboxamida
ro uc o n erme o emp o
Se añadió DIPEA (0,366 mL, 2,10 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (producto intermedio 14, 80 mg, 0,30 mmol) y N,6-dimetil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 45, 101 mg, 0,33 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20°C y se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 3 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se añadieron 50 mL de agua seguido por 3 mL de NaHCO<3>sat. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Tras la concentración, se purificó el residuo resultante mediante cromatografía ultrarrápida en sílice, gradiente de elución del 0 al 30% de MeOH en DCM. Se concentraron las fracciones de producto a presión reducida hasta sequedad para proporcionar 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N,6-dimetil-piridin-2-carboxamida (ejemplo de referencia 31,36,0 mg, 29 %) como un sólido de color amarillo pálido. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,19 (3H, t), 2,50 (3H, s), 2,54 - 2,57 (2H, m), 2,57 - 2,64 (4H, m), 2,81 (3H, d), 2,96 (4H, s a), 3,68 (2H, s), 7,49 (1H, d), 7,63 (1H, d), 7,76 (1H, s), 7,80 (1H, d), 8,35 - 8,47 (2H, m), 11,85 (1H, s a); m/z (ES+) [M+H]+ = 421.
Producto intermedio 90: 4-[6-(etilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Se añadió etanamina en metanol (7 M, 7,78 mL, 15,56 mmol) a una disolución de 4-(6-(metoxicarbonil)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 15, 500 mg, 1,56 mmol) y se agitó la disolución resultante a 50 °C durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se secó la muestra adicionalmente para proporcionar 4-[6-(etilcarbamoil)-3-piridil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 90, 0,495 g, 95%). 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 1,11 (3H, t), 1,43 (9H, s), 3,27 - 3,32 (6H, m), 3,44 - 3,52 (4H, m), 7,42 (1H, dd), 7,85 (1H, d), 8,28 (1H, d), 8,44 (1H, t a).
Producto intermedio 91:N-etil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida
Se añadió lentamente HCl en dioxano (0,473 mL, 15,58 mmol) a una disolución agitada de 4-(6-(etilcarbamoil)piridin-3-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 90, 521 mg, 1,56 mmol), en metanol (10 mL). La solución resultante se agitó a ta durante 17 horas. Se concentró la reacción y se secó el sólido para dar N-etil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 91, 421 mg, 88 %); m/z (ES+) [M+H]+ = 235
Ejemplo 32: N-etil-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H- 1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin- 1-il]piridin-2-carboxamida
Se añadió DIPEA (0,320 mL, 1,83 mmol) a una disolución agitada de 7-(bromometil)-3-etil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (producto intermedio 14, 70 mg, 0,26 mmol) y N-etil-5-piperazin-1-il-piridin-2-carboxamida, 2HCl (producto intermedio 91, 89 mg, 0,29 mmol) en acetonitrilo (2 mL) a 20 °C y se agitó la disolución resultante a 70 °C durante 3 horas. Se eliminó el disolvente a vacío y se añadieron 50 mL de agua seguido por 3 mL de NaHCO3 sat. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Tras la concentración, se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en fase inversa (columna: XbridC18), gradiente de elución del 20 al 50% de MeCN en agua (con el 0,2% de NH4OH). Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad para proporcionar N-etil-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida (ejemplo 32, 28,0 mg, 25 %) como un sólido blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 1,10 (3H, t), 1,19 (3H, t), 2,52 - 2,55 (2H, m), 2,55 - 2,59 (4H, m), 3,26 - 3,30 (2H, m), 3,34 (4H, d a), 3,66 (2H, s), 7,40 (1H, dd), 7,63 (1H, s), 7,76 (1H, s), 7,83 (1H, d), 8,27 (1H, d), 8,36 - 8,46 (2H, m), 11,74 - 11,94 (1H, m); m/z (ES+) [M]+ = 420.
Ejemplo 4 - forma A
En el ejemplo 4, se obtuvo 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida como un sólido parcialmente cristalino evaporando una disolución de metanol/diclorometano a presión reducida. El material cristalino así obtenido se caracterizó como forma cristalina A.
En el caso de escasa cristalinidad, la forma cristalina A podía obtenerse suspendiendo 20 mg de la muestra en bruto en 0,20 ml de agua, metanol, etanol, acetona, acetonitrilo, tetrahidrofurano, acetato de etilo u otro disolvente durante 1 día a la temperatura ambiental o 50°C.
Se analizó la forma A mediante XRPD y los resultados se tabulan a continuación (tabla 1) y se muestran en la figura 1.
T l 1. Pi XRPD r l f rm A
La forma A se caracteriza por proporcionar al menos uno de los siguientes valores de 20 medidos usando radiación de CuKa: 8,3, 12,4 y 19,4°.
Se analizó la forma A mediante técnicas térmicas. El análisis de DSC indicó que la forma A tiene un punto de fusión con un comienzo a 254 °C y un pico a 255 °C. En la figura 2 se muestra un perfil de DSC de la forma A.
Ensayos biológicos
Los siguientes procedimientos de ensayo pueden emplearse para determinar las propiedades inhibitorias de los compuestos descritos en el presente documento.
Ensayos de unión de anisotropía de fluorescencia de PARP
Se diluyó proteína PARP1 etiquetada con 6HIS de longitud completa recombinante hasta 6 nM con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM y se incubó durante cuatro horas con un volumen equivalente de sonda fluorescente 2 nM diluida con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM. La concentración en DMSO final de la sonda se mantuvo por debajo del 1% (v/v).
Se diluyó la proteína PARP2 de longitud completa recombinante hasta 6 nM con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0. 001%, MgCl<2>10 mM, NaCl 150 mM y se incubó durante cuatro horas con un volumen equivalente de sonda fluorescente 2 nM diluida con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM. La concentración en DMSO final de la sonda se mantuvo por debajo del 1% (v/v).
Se diluyó proteína la PARP3 de longitud completa recombinante hasta 100 nM con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCl<2>10 mM, NaCl 150 mM y se incubó durante cuatro horas con un volumen equivalente de sonda fluorescente 6 nM diluida con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM. La concentración en DMSO final de la sonda se mantuvo por debajo del 1% (v/v).
Se diluyó el dominio de unión a PARP5a recombinante hasta 160 nM con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCl<2>10 mM, NaCl 150 mM y se incubó durante cuatro horas con un volumen equivalente de sonda fluorescente 6 nM diluida con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM. La concentración en DMSO final de la sonda se mantuvo por debajo del 1% (v/v).
Se diluyó proteína PARP6 etiquetada con GST de longitud completa recombinante hasta 160 nM con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM y se incubó durante cuatro horas con un volumen equivalente de sonda fluorescente 6 nM diluida con Tris 50 mM pH 8, Triton X100 al 0,001%, MgCh 10 mM, NaCl 150 mM. La concentración en DMSO final de la sonda se mantuvo por debajo del 1% (v/v).
Se midió la anisotropía de fluorescencia de la sonda cuando estaba unida a las proteínas usando un BMG Pherastar FS<©>en presencia de compuestos de prueba o control de disolvente y se determinó el efecto sobre la anisotropía. Se calcularon los valores de % de inhibición para diferentes concentraciones de compuestos de prueba y se ajustaron a un gráfico logístico de cuatro parámetros con el fin de determinar el valor de CI<50>. Cuando es necesario, puede determinarse laKdel compuesto a partir del valor de CI<50>usando una ecuación de Munson Rodbard definida en Anal Biochem. 1 de septiembre de 1980;107(1):220-39 y se basa en la Kd conocida de la unión de la sonda a la proteína PARP relevante
Ensayo electrofisiológico de hERG
Se obtuvieron registros electrofisiológicos (todos realizados a TA) de células CHO hKv11,1 transfectadas de manera estable usando el Nanion Syncropatch 768PE. Se añadieron compuestos de prueba, vehículo o controles positivos con 6 placas de compuestos cada una a una concentración diferente para permitir una dosificación acumulada en las células (10 mM, 3,167 mM, 1 mM, 0,3167 mM, 0,1 mM, 0,03167 mM). Se resuspenden 600 r|l de compuesto en 90 pl de tampón de referencia (en mM, NaCl 80, KCL 4, CaCl 5, MgCl 1, NMDG Cl 60, D-glucosa monohidratada 5,<h>E<p>ES 10 (pH7,4 HCL, 298 mOsm) para una concentración de compuesto final de 39,6 pM, 13,2 pM, 4,4 pM, 1,46 pM, 0,48 pM, 0,16 pM. Para cada ejecución de Nanion Syncropatch 768PE, se mide la amplitud de corriente en cada célula en presencia de disolución extracelular (en mM, NaCl 80, KCL 4, CaCl 5, MgCl 1, NMDG Cl 60, D-glucosa monohidratada 5, HEPES 10 (pH7,4 HCL, 298 mOsm) con todas las adiciones de líquido realizadas usando el sistema de manipulación de líquidos Syncropatch. Añadir 40 pL de disolución externa (en mM, HBPS, CaCl2 2, MgCl2 1 (pH7,4, NaOH) a un chip de registro de resistencia del medio de múltiples orificios de 384 pocillos y perfundir tampón interno (en mM, k F 130, KCl 20, MgCl2 1, EGTA 10 , HEPES 10, Escin 25 (todos de Sigma-Aldrich; pH 7,2-7,30 usando KOH 10 M, 320 mOsm) a la parte inferior de la placa. Dispensar 20 pL de células a una densidad de 1e6 células/ml mantenidas a ~9°C en cada pocillo del chip seguido por 20 pL de potenciador de sellado (en mM, NaCl 80, KCl 3, CaCl 10, HEPES 10, MgCl 1 (pH7,4 NaOH). Realizar una etapa de lavado dejando un volumen residual de 40 pL. Dispensar 40 pL de tampón de referencia para establecer un nivel inicial estable antes de la adición de compuestos de prueba, con una etapa de eliminación de 40 pL después de 3 min, repetir esta etapa. Dispensar 40 pL de concentración de compuesto 1 (0,16 pM), registrar 'en tiempo real' durante una exposición de 3 min antes de la eliminación de 40 pL. Esta etapa se repite durante 5 placas de compuestos posteriores adicionales para generar un análisis de curva de acumulación. Se resta la fuga de todos los datos, 2 pulsos hasta -80 mV 100 ms con retardo de 100 ms. Entonces se evocan corrientes de K+ de salida mediante una etapa de voltaje hasta 60 mV desde un potencial de mantenimiento de -90 mV, cada pulso se suministra a una frecuencia de 2Hz con un intervalo de pulso de 15 s.
Ensayo de proliferación de PARP (4 días de dosificación de compuestos)
Se recogieron células DLD1 y BRCA2 (-/-) DLD1 hasta una densidad de 1,875E4 células/ml y 6,25E4 células/ml respectivamente en medio completo, se sembraron 40 pL/pocillo en placas de 384 pocillos (Greiner, Kremsmunster, Austria; 781090) usando un Multidrop Combi, luego se incubaron a 37°C, el 5% de CO<2>durante la noche. El día siguiente (día 1), usando un Multidrop Combi, añadir sytox green (5ul, 2uM) y saponina (10ul, 0,25% stock) a una placa del día 0, sellar la placa usando una tapa adhesiva negra e incubar durante >3 h a TA. Se obtuvieron imágenes de las células usando Cell Insight (Thermo Fisher) equipado con un objetivo 4x. Se añaden compuestos de prueba usando un Echo 555 y se colocan en un incubador mantenido a 37°C, el 5% de CO<.2>y se incuban durante 4 días. El día 5, añadir sytox green (5 ul, 2 uM) y luego saponina (10 ul, disolución madre al 0,25%) a las placas, sellar la placa usando una tapa adhesiva negra e incubar durante >3 h a TA. Leer todas las células en el Cell Insight con el objetivo 4x. La tasa de proliferación se determina en Genedata evaluando la salida del número de células total del Cell Insight para las placas del día 0 y día 5.
Tabla 2
Los ejemplos marcados con * están fuera de la divulgación reivindicada, y son sólo por referencia.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula la
    en la que: R1 es alquilo C1-4, R2 se selecciona de H, halo, alquilo C1-4 y fluoroalquilo C1-4, y R3 es H o alquilo C1-4, y R4 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, 2. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1, en el que R2 se selecciona de difluorometilo, trifluorometilo o metilo. 3. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1, en el que R2 es H o halo. 4. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1, en el que R1 es etilo, R2 se selecciona de H, cloro y flúor, y R3 es metilo. 5. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1 seleccionado de: 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida, 5- [4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-6-fluoro-N-metil-piridin-2-carboxamida, 6- cloro-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida, y 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]piridin-2-carboxamida 6. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en donde el compuesto es 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida que tiene la estructura:
    7. Un compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto es 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-piridin-2-carboxamida que tiene la estructura:
    8. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 que se selecciona de: 6-(difluorometil)-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metilpiridina -2-carboxamida, 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N-metil-6(trifluorometil)piridin-2-carboxamida, 5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-il)metil]piperazin-1-il]-N,6-dimetil-piridin-2-carboxamida, y N-etil-5-[4-[(7-etil-6-oxo-5H-1,5-naftiridin-3-ií)metil]piperazin-1-il]piridine-2-carboxamida. 9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y al menos un diluyente, excipiente o portador inerte farmacéuticamente aceptable. 10. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para su uso como medicamento. 11. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para su uso en el tratamiento de cáncer en un paciente con cáncer. 12. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según la reivindicación 11, en el que dicho cáncer es deficiente en la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR. 13. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según la reivindicación 11, en el que dicho cáncer comprende una o más células cancerosas que tienen una capacidad reducida o suprimida para reparar DSB de ADN mediante HR en relación con células normales. 14. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según la reivindicación 11 o 12, en el que dicho cáncer comprende una o más células cancerosas que tienen un fenotipo deficiente en BRCA1 o BRCA2. 15. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según la reivindicación 14, en el que dicho cáncer comprende una o más células cancerosas que son deficientes en BRCA1 o BRCA2. 16. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en el que dicho paciente es heterocigoto para una mutación en un gen que codifica para un componente de la ruta de reparación de DSB de ADN dependiente de HR. 17. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según la reivindicación 16, en el que dicho paciente es heterocigoto para una mutación enBRCA1y/oBRCA2. 18. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, en el que el cáncer se selecciona de uno cualquiera de cáncer de mama, ovario, páncreas, próstata, hematológico, gastrointestinal y de pulmón.
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