ES3033834T3

ES3033834T3 - Washing and cleaning agents with improved enzyme stability

Info

Publication number: ES3033834T3
Application number: ES19187522T
Authority: ES
Inventors: Nina Mussmann; Christian Degering; Susanne Wieland; Thomas Weber; Inken Prueser; Thorsten Bastigkeit
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2019-07-22
Filing date: 2019-07-22
Publication date: 2025-08-08
Anticipated expiration: 2039-07-22
Also published as: EP4588933A2; WO2021013684A1; EP4588933A3; CN114174485A; EP3770237A1; EP3770237B1; US20230313074A1; PL3770237T3

Abstract

La invención se refiere a agentes de lavado o limpieza que comprenden (i) al menos una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 70% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que tiene una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones correspondientes a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 o 222, en cada caso basada en la numeración según SEQ ID NO: 1, y (ii) al menos un compuesto estabilizador seleccionado del grupo que consiste en un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, un inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Detergentes y productos de limpieza con estabilidad enzimática mejorada

La invención pertenece al campo de la tecnología enzimática. La invención se refiere a detergentes o productos de limpieza que comprenden al menos una proteasa de Bacillus gibsonii y al menos un compuesto estabilizador, en los que el compuesto estabilizador se selecciona del grupo formado por derivados del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidores de peptidasa y combinaciones de los mismos. También forman parte de la invención los correspondientes procedimientos de lavado y limpieza, el uso de los productos aquí descritos y el uso de un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por derivados del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidores de peptidasas y combinaciones de los mismos, para mejorar la estabilidad de una proteasa de Bacillus gibsonii en detergentes o productos de limpieza y/o en otras enzimas que puedan estar contenidas en el detergente o producto de limpieza. El uso de enzimas en detergentes y productos de limpieza está establecido desde hace décadas en el estado de la técnica. Sirven para ampliar el espectro de prestaciones de los productos en cuestión de acuerdo con sus actividades específicas. Entre ellas se incluyen, en particular, las enzimas hidrolíticas como las proteasas, las amilasas, las lipasas y las celulasas. Las tres primeras hidrolizan proteínas, almidón y grasas, contribuyendo así directamente a la eliminación de la suciedad. Las celulasas se utilizan especialmente por su efecto sobre los tejidos. Otro grupo de enzimas presentes en detergentes y productos de limpieza son las enzimas oxidativas, en particular las oxidasas, que, en combinación con otros componentes, sirven preferiblemente para blanquear la suciedad o generar agentes blanqueadores in situ. Además de estas enzimas, que son objeto de una optimización continua, se desarrollan constantemente otras enzimas para su uso en detergentes y productos de limpieza, con el fin de poder tratar de forma óptima la suciedad especial, como por ejemplo pectinasas, p-glucanasas, mananasas u otras hemicelulasas (glicosidasas) para la hidrólisis, en particular, de polímeros vegetales especiales.

Las enzimas más establecidas y presentes en prácticamente todos los detergentes y productos de limpieza modernos y eficaces son las proteasas. Por lo tanto, se encuentran entre las enzimas más importantes desde el punto de vista técnico. Entre ellas, son especialmente importantes las proteasas de tipo subtilisina (subtilasas, subtilopeptidasas, EC 3.4.21.62), que son proteasas debido a los aminoácidos catalíticamente activos serina. Actúan como endopeptidasas no específicas e hidrolizan cualquier enlace ácido-amida que se encuentre en el interior de péptidos o proteínas. Su pH óptimo se encuentra generalmente en el intervalo claramente alcalino. El artículo “Subtilases: Subtilisinlike Proteases” de R. Siezen, páginas 75-95, en “Subtilisin enzymes”, editado por R. Bott y C. Betzel, Nueva York, 1996, ofrece una visión general de esta familia. Las subtilasas son producidas de forma natural por microorganismos. Entre ellas, cabe destacar las subtilisinas producidas y secretadas por especies de Bacillus, que constituyen el grupo más importante dentro de las subtilasas.

En los detergentes y productos de limpieza, las proteasas sirven para descomponer la suciedad proteica de los objetos que se limpian. Sin embargo, también se hidrolizan a sí mismas (autoproteólisis) y a todas las demás proteínas contenidas en los productos en cuestión, es decir, en particular a otras enzimas presentes en los detergentes y productos de limpieza. Esto ocurre especialmente durante el proceso de limpieza, es decir, en el líquido acuoso de lavado o limpieza, cuando se dan condiciones de reacción relativamente favorables. Sin embargo, esto también ocurre en menor medida durante el almacenamiento de los productos en cuestión, por lo que un almacenamiento prolongado siempre va acompañado de cierta pérdida de la actividad proteasa y de las actividades de otras enzimas. Debido a la pérdida de actividad enzimática, ya no ofrecen un rendimiento de limpieza óptimo. Esto es especialmente problemático en formulaciones gelatinosas o líquidas y, en particular, en formulaciones que contienen agua, ya que en estas el agua presente proporciona tanto el medio de reacción como el reactivo de hidrólisis.

En general, solo algunas proteasas seleccionadas son adecuadas para su uso en preparaciones líquidas que contienen tensioactivos. Muchas proteasas no muestran un rendimiento catalítico suficiente en este tipo de preparaciones o no son lo suficientemente estables. Por lo tanto, para el uso de proteasas en detergentes es especialmente deseable una alta actividad catalítica y estabilidad en las condiciones que se dan durante un proceso de lavado.

Por lo tanto, uno de los objetivos del desarrollo de fórmulas de detergentes y productos de limpieza es estabilizar las enzimas que contienen, especialmente durante el almacenamiento, y protegerlas contra la desnaturalización y/o la escisión o degradación y/o descomposición por influencias físicas u oxidación, etc., especialmente durante el almacenamiento y/o la aplicación del detergente o producto de limpieza. Uno de los aspectos centrales de estos desarrollos es la protección de las proteínas y/o enzimas contenidas contra la escisión (auto)proteolítica. Esto puede lograrse mediante la creación de barreras físicas, por ejemplo, encapsulando las enzimas en gránulos enzimáticos especiales o envasando los productos en sistemas de dos o más cámaras. La otra vía más utilizada consiste en añadir compuestos químicos que inhiben las proteasas y, por lo tanto, actúan como estabilizadores de las proteasas y de las demás proteínas y enzimas contenidas. Sin embargo, deben ser inhibidores reversibles de la proteasa, ya que la actividad de la proteasa solo debe inhibirse temporalmente, en especial durante el almacenamiento, pero no durante el proceso de limpieza.

En el estado actual de la técnica se describen diversos inhibidores reversibles de proteasas, por ejemplo, polialcoholes, en particular glicerina y 1,2-propilenglicol, clorhidrato de benzamidina, bórax, ácidos bórico, ácidos de boro o sus sales o ésteres. También se conoce el uso de derivados del ácido bórico junto con polialcoholes. El ácido 4-formilfenilborónico (4-FPBA) es también un inhibidor de proteasas conocido en el estado actual de la técnica. Además, se han descrito para este fin los peptidaldehídos, es decir, oligopéptidos con extremo C reducido, en particular los formados por entre 2 y 50 monómeros. Entre los inhibidores de péptidos reversibles de la proteasa se encuentran, entre otros, el ovomucoide y la leupeptina. También se utilizan inhibidores de péptidos específicos y reversibles, así como proteínas de fusión de proteasas e inhibidores de péptidos específicos. En los documentos US 2017/0342349 A1, WO 2018/060216 A1 y<u>S 10308899 B<2>, se describen, por ejemplo, variantes estabilizadas de la savinasa.

Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de mejorar el rendimiento de limpieza de los detergentes y productos de limpieza que contienen enzimas, así como de estabilizar mejor las enzimas contenidas en los detergentes y productos de limpieza.

Sorprendentemente, ahora se ha descubierto que una proteasa de Bacillus gibsonii que tiene al menos un 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO:1 en toda su longitud y que tiene una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones correspondientes a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222, en cada caso basado en la numeración según la SEQ iD NO: 1, puede estabilizarse mejor que las proteasas convencionales mediante un compuesto estabilizador seleccionado del grupo que consiste en un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos, y por lo tanto es particularmente adecuado para su uso en detergentes o agentes de limpieza.

Por lo tanto, el objeto de la invención es, en un primer aspecto, un detergente o producto de limpieza que comprende al menos una proteasa de Bacillus gibsonii que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1, y al menos un compuesto estabilizador, en donde el compuesto estabilizador se selecciona del grupo que consiste en un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos.

En el contexto de la presente invención, se entiende por “inhibidor de péptidos” un compuesto de la fórmula general (I) o un compuesto de la fórmula general (II), en donde opcionalmente el compuesto de la fórmula (I) o (II) está presente junto con una sal de la fórmula (III).

El compuesto de la fórmula (I) tiene la siguiente fórmula estructural:

Z-A-NH-CH(R)-C(O)-X (I),

en donde A es un resto de aminoácido; X es hidrógeno; Z es un resto enmascarador de N seleccionado de fosforamidato [(R'O)<2>(O)P-], sulfenamida [(SR')<2>-], sulfonamida [(R'(O)<2>S-], ácido sulfónico [SO<3>H], fosfinamida [(R')<2>(O)P-], derivados de sulfamoílo [R'O(O)<2>S-], tiourea [(R')<2>N(O)C-], tiocarbamato [R'O(S)C-], fosfonato [R'-P(O) OH], fosfato de amida [R'O(OH)(O)P-], carbamato (R'o (o )C-) y urea (R'NH(O)C-), en donde cada R' se selecciona, de modo independiente, de restos de alquilo C<1>-C<6>no sustituido de cadena lineal o ramificada, fenilo, alquilarilo C<7>-C<9>y cicloalquilo, en donde el anillo cicloalquilo puede ser un anillo cicloalquilo C<4>-C<8>y puede contener uno o varios heteroátomos seleccionados de O, N y S; y R está seleccionado de restos alquilo C<1>-C<6>no sustituido de cadena lineal o ramificada, fenilo y alquilarilo C<7>-C<9>; y estereoisómeros, tautómeros y sales de los mismos.

El compuesto de la fórmula (II) tiene la siguiente fórmula estructural:

Y-B<1>-B<0>-X (II),

en donde X es hidrógeno; B<1>es un residuo de aminoácido D o L único; B<0>es un residuo de aminoácido e Y está compuesto por uno o varios, preferiblemente uno o dos, residuos de aminoácido y, opcionalmente, por un residuo enmascarador de N, estando definido el residuo enmascarador de N como en (I).

La sal de la fórmula (III) tiene la siguiente fórmula estructural:

(CE+)p(DF-)q (II),

en donde C es un catión seleccionado del grupo formado por aus Al3+, Ca2+, Li+, Mg2+, Mn2+, Ni2+, K+, NR'V y Na+, en donde cada R” representa, de modo independiente, H o un grupo alquilo, arilo o alquenilo lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, que pueden contener opcionalmente uno o varios heteroátomos; E es un número entero de 1 a 3 y corresponde a la valencia/valor del catión; p corresponde al número de cationes en la sal; D es un anión seleccionado del grupo formado por CH<3>COO-, Br, CO<3>2-, Cl-, C<3>HsO(COO)<3>3-, HCOO-, HCO<3>-, HSO<4>- , C<2>O<4>2-, SO<4>2- y SO<3>2-; F es un número entero de 1 a 3 y corresponde a la valencia/valor del anión; q corresponde al número de aniones en la sal; siendo la carga neta de la sal 0, es decir, se cumple ((E)p) - ((F)q) = 0.

Los restos R preferidos se seleccionan de metilo, isopropilo, sec-butilo, isobutilo, C<6>H<5>, -CH<2>-C<6>H<5>, y -CH<2>-CH<2>-C<6>H<5>, de modo que la parte -NH-CH(R)-C(O)-X del compuesto de la fórmula (I) se deriva de los aminoácidos Ala, Val, Ile, Leu, PGly (fenilglicina), Phe y HPhe (homofenilalanina), al convertir el grupo carboxilo en un grupo aldehido o trifluorometilcetona. Aunque estos restos no son aminoácidos (aunque pueden sintetizarse a partir de un precursor de aminoácidos), en los estabilizadores enzimáticos enumerados a modo de ejemplo, por simplicidad, la parte aldehído de los inhibidores, que se deriva de los aminoácidos correspondientes, se designa añadiendo “H” después del aminoácido análogo (por ejemplo, “-AlaH” representa el resto “-NHCH(CH<3>)C(O)H”). Las trifluorometilcetonas se designan de la misma manera añadiendo “CF<3>” después del aminoácido análogo (por ejemplo, “-AlaCF<3>” representa el resto “-NHCH(CH<3>)C(O)CF<3>”).

En el contexto de la presente invención, se entiende por “derivado del ácido fenilborónico” un compuesto con la fórmula (IV). El compuesto de la fórmula (IV) tiene la siguiente fórmula estructural:

en donde R es hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo C<1>-C<6>, un grupo alquilo C<1>-C<6>sustituido, un grupo alquenilo C<1>-C<6>o un grupo alquenilo C<1>-C<6>sustituido.

Otro objeto de la invención es un detergente o producto de limpieza que comprende al menos una proteasa de Bacillus gibsonii que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta al menos una de las sustituciones de aminoácidos Q12L, I43V, M122L, D127P, N154S, T156A, G160S, M211N, M211L, P212D, P212H o A222S en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1, y al menos un compuesto estabilizador, en donde el compuesto estabilizador se selecciona del grupo que consiste en un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, un inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos.

Otro objeto de la invención es un procedimiento para la fabricación de dicho detergente o producto de limpieza. Otro objeto de la invención es el uso de dicho detergente o producto de limpieza para la limpieza de textiles y/o superficies duras, en particular vajilla.

Otro objeto de la invención es el uso de un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, un inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos, para mejorar la estabilidad de una proteasa de Bacillus gibsonii en detergentes o productos de limpieza y/o, en su caso, otras enzimas presentes en el detergente o producto de limpieza.

Otro objeto de la invención es el uso de un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por derivados del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos, para mejorar la estabilidad de una proteasa de Bacillus gibsonii en detergentes o productos de limpieza, en donde la proteasa tiene al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que tiene una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1, en particular una proteasa de Bacillus gibsonii que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta al menos una de las sustituciones de aminoácidos Q12L, I43V, M122L, D127P, N154S, T156A, G160S, M211N, M211L, P212D, P212H o A222S en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222, correspondientes a la numeración según SEQ ID NO: 1, y/o una enzima adicional contenida opcionalmente en el detergente o producto de limpieza.

Estos y otros aspectos, características y ventajas de la invención resultarán evidentes para el experto en la técnica tras el estudio de la siguiente descripción detallada y de las reivindicaciones. Cada característica de un aspecto de la invención puede aplicarse a cualquier otro aspecto de la invención. Además, es evidente que los ejemplos aquí incluidos tienen por objeto describir e ilustrar la invención, pero no la limitan y, en particular, la invención no se limita a estos ejemplos.

Salvo que se indique lo contrario, todos los porcentajes se expresan en%en peso. Los intervalos numéricos expresados en el formato “de x a y” incluyen los valores mencionados. Si se indican varios intervalos numéricos preferidos en este formato, es evidente que también se incluyen todos los intervalos resultantes de la combinación de los distintos extremos. “Al menos uno”, tal como se utiliza en la presente, significa uno o más, es decir, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o más. El término “productos de lavado y limpieza” o “productos de lavado o limpieza”, tal como se utiliza en la presente, es sinónimo del término “productos” y se refiere a una composición para la limpieza de textiles y/o superficies duras, en particular vajilla, tal como se explica en la descripción. “Aproximadamente”, “aprox.” o “más o menos”, tal como se utilizan aquí en relación con un valor numérico, se refieren al valor numérico correspondiente ± 10 %, preferiblemente ± 5 %.

Se considera que existe una “mejora de la estabilidad de una enzima” en el sentido de la invención cuando la presencia de un compuesto estabilizador hace que un detergente o producto de limpieza que contenga al menos una proteasa y al menos un compuesto estabilizador (detergente o producto de limpieza según la invención) presente, tras su almacenamiento, una mayor actividad enzimática de la proteasa y/o, en su caso, de otras enzimas contenidas en el detergente o producto de limpieza, en comparación con una preparación de control que solo se diferencia del detergente o producto de limpieza según la invención por la ausencia del compuesto estabilizador (control). Tras el almacenamiento, el detergente o producto de limpieza según la invención según la invención presenta una mayor actividad residual de la proteasa contenida y/o, en su caso, de otras enzimas contenidas en comparación con el control, teniendo el detergente o producto de limpieza según la invención y el control la misma actividad enzimática inicial al inicio del almacenamiento, y siendo ambos productos tratados de la misma manera, en particular en lo que respecta a las condiciones de almacenamiento y la determinación de la actividad enzimática. Cada vez es más preferible que el almacenamiento se realice durante al menos 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas y, especialmente, durante 7 semanas. También es preferible que el almacenamiento se realice a una temperatura de, cada vez más preferible, 20 °C, 25 °C, 30 °C o 40 °C.

El compuesto estabilizador utilizado en detergentes o productos de limpieza según la invención puede ser un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) o (II), tal como se ha definido con anterioridad.

Los aldehídos de los inhibidores de péptidos, tal como se utilizan aquí, pueden producirse a partir de los aminoácidos correspondientes, transformando el grupo carboxilo C-terminal del aminoácido en un grupo aldehido. Dichos aldehídos pueden producirse mediante procedimientos conocidos, como por ejemplo en los documentos US5015627, EP0185930, EP0583534 y DE3200812.

Las trifluorometilcetonas utilizadas aquí también pueden prepararse a partir de los aminoácidos correspondientes, convirtiendo el grupo carboxilo C-terminal en un grupo trifluorometilcetonas. Dichas trifluorometilcetonas pueden prepararse mediante procedimientos conocidos, como los descritos en el documento EP0583535.

En formas de realización preferidas, el sustituyente A se selecciona de Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe y Lys.

El extremo N-terminal del inhibidor de péptidos según la fórmula (I) y/o del inhibidor de péptidos según la fórmula (II) está protegido por un grupo protector que recubre el extremo N-terminal, estando el grupo seleccionado del grupo formado por carbamatos, ureas, sulfonamidas, fosfonamidas, tiourea, sulfenamida, ácido sulfónico, fosfinamida, tiocarbamato, fosfato de amida y fosfonamida. Sin embargo, en una forma de realización preferida, el extremo N-terminal está protegido por un grupo metilo, etilo o bencilcarbamato [CH<3>O-(O)C-; CH<3>CH<2>O-(O)C-; o CaH<5>CH<2>O-(O)C-], un grupo metil-, etil- o bencilharnstoff [CH<3>NH-(O)C-; CH<3>CH<2>NH-(O)C-; o CaH<5>CH<2>NH-(O)C-], un grupo metil-, etil- o bencil-sulfonamida [CH<3>SO<2>-; CH<3>CH<2>SO<2>-; o C<6>H<5>CH<2>SO<2>-], o un grupo metil-, etil- o bencilamidofosfato [CH<3>O(OH)(O)P-; CH<3>CH<2>O(OH)(O)P-; o CaH<5>CH<2>O(OH)(O)P-].

La síntesis de los grupos de enmascaramiento N puede realizarse mediante procedimientos conocidos por los expertos, véase, por ejemplo, el documento EP3263289 o las citas mencionadas en el mismo.

Los medios según la invención pueden comprender, además de un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) o (II), sales de la fórmula (III). Estas sales pueden estar presentes en una concentración de 50 a 2000 mM, preferiblemente de 70 a 1500 mM, más preferiblemente de 100 a 1000 mM, aún más preferiblemente de 150 a 500 mM y más preferiblemente de 200 mM. En otras formas de realización preferidas, la sal de la fórmula (III) es Na<2>SO<4>.

El término “alquilo”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático que puede ser lineal o ramificado y que comprende de 1 a 20 átomos de carbono en la cadena. El término “arilo”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o policíclicos aromáticos que comprende de 6 a 14 átomos de carbono. El término “alquenilo”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado y comprender de 2 a 15 átomos de carbono en la cadena.

En formas de realización preferidas, B<0>es un resto de aminoácido D o L seleccionado del grupo formado por Tyr, mtirosina, 3,4-dihidroxifenilalanina, Phe, Val, Met, Nva, Leu, Ile y Nle, y/o B<1>es un resto de aminoácido D o L con un pequeño grupo lateral alifático (opcionalmente sustituido), preferiblemente Ala, Cys, Gly, Pro, Ser, Thr, Val, Nva o Nle. En otras formas de realización preferidas, Y es B<2>, B<3>-B<2>, Z-B<2>, Z-B<3>-B<2>, en donde B<2>y B<3>son cada uno independientemente un resto de aminoácido y Z es un resto enmascarador de N, en donde el resto enmascarador de N se define como con anterioridad. En otras formas de realización preferidas, B<2>se selecciona de Val, Gly, Ala, Arg, Leu, Phe y Thr, y/o B<3>se selecciona de Phe, Tyr, Trp, fenilglicina, Leu, Val, Nva, Nle e Ile.

A menos que se indique lo contrario, los aminoácidos de las fórmulas anteriores están unidos por enlaces peptídicos y todos los péptidos o compuestos similares a péptidos se representan siempre desde el extremo N-terminal al C-terminal, a menos que se indique lo contrario.

Los medios según la invención pueden contener un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) y, de forma alternativa o adicional a un inhibidor de péptidos de la fórmula (I), un inhibidor de péptidos de la fórmula (II).

Los medios según la invención pueden contener el inhibidor de péptidos de la fórmula (I) y/o (II) en una concentración de 0,01 a 50 mM, preferiblemente de 0,05 a 5 mM y más preferiblemente de 0,1 a 0,5 mM. Si se incluyen varios inhibidores de péptidos de las fórmulas (I) y/o (II), estos datos se refieren a la concentración total. Los inhibidores de péptidos ejemplares de las fórmulas (I) y (II) que pueden utilizarse según la invención incluyen, pero sin limitación, los siguientes: Cbz-Arg-Ala-Tyr-H, Ac-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Val-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Phe-H, Cbz-Gly-Ala-Val-H, Cbz-Gly-Gly-Tyr-H, Cbz-Gly-Gly-Phe-H, Cbz-Arg-Val Tyr-H, Cbz-Leu-Val-Tyr-H, Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H, Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H, Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H, MeO-CO-Val-Ala-Leu-H, MeNCO-Val-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H, MeSO<2>-Phe-Gly-Ala-Leu-H, Me- SO<2>-Val-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)P-Val-Ala-Leu-H, EtSO<2>-Phe-Gly-Ala-Leu-H, PhCH<2>SO<2>-Val-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)P-Leu-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)P-Phe-Ala-Leu-H, MeO(OH)(O)P-Leu-Gly-Ala-Leu-H, a-MAPI, p - MAPI, Phe-urea-Arg-Val-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Gly-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Ala-Phe-H, Phe-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-urea- Gly-Ala-Leu-H, Phe-urea-Gly-Ala-Nva-H, Phe-urea-Gly-Ala-Nle-H, Tyr-urea-Arg-Val-Tyr-H, Tyr-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val-Phe-H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Gly-Ala-Tyr-H, antipaína, GE20372A, GE20372B, quimostatina A, quimostatina B y quimostatina C.

Tal como se utiliza en la presente, el término “Cbz” se refiere al grupo benciloxicarbonilo con la fórmula molecular C<7>H<7>O. Se utiliza como grupo protector. Otros grupos terminales en los inhibidores de péptidos de la presente invención pueden ser: “Ph”: fenilo; “Ac”: acetilo y “Me”: metilo. El término “urea”, tal como se utiliza en la presente, es sinónimo de urea.

En diversas formas de realización, la invención también incluye todos los estereoisómeros, en particular los enantiómeros y diastereómeros, los tautómeros y las sales de los compuestos descritos con anterioridad.

Sin querer estar vinculado a ninguna teoría, se parte de la base de que la adición de una sal de la fórmula (III) a un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) o (II) estabiliza aún más el complejo enzima-inhibidor de péptidos mediante la eliminación de moléculas de agua reactivas libres. Esto aumenta la eficacia de unión del inhibidor de péptidos a la enzima y/o aumenta la fuerza iónica, lo que finalmente estabiliza el complejo enzima-inhibidor de péptidos. Mediante el uso de al menos una sal de la fórmula (III), es posible utilizar los inhibidores de péptidos en concentraciones moderadas (0,01 a 50 mM). De este modo, la proteasa y, en su caso, otras proteínas contenidas, en particular otras enzimas, se protegen contra la proteólisis por esta enzima, en particular las proteasas (se estabilizan contra la proteólisis), y conservan así su eficacia sin restricciones incluso después del almacenamiento.

Además, los compuestos relevantes para la invención tienen una buena solubilidad en agua, por lo que pueden incorporarse fácilmente a los medios correspondientes y se evita su precipitación durante el almacenamiento.

Los medios según la invención pueden contener un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) y/o un inhibidor de péptidos de la fórmula (II). Los productos según la invención pueden contener, de forma alternativa y/o adicional a un inhibidor de péptidos de la fórmula (I) y/o (II), un derivado del ácido fenilborónico y/o ácido bórico.

El compuesto estabilizador utilizado en productos de lavado o limpieza según la invención puede ser ácido bórico. En un detergente o producto de limpieza según la invención, el ácido bórico se contiene preferiblemente en una cantidad del 0,05 al 5,5 % en peso y, de forma cada vez más preferible, del 0,075 al 4,5 % en peso, del 0,09 al 3,5 % en peso y del 0,1 al 2,49 % en peso.

El compuesto estabilizador utilizado en los detergentes o productos de limpieza según la invención puede ser un derivado del ácido fenilborónico de la fórmula (IV):

En una forma de realización preferida, el resto R en el derivado del ácido fenilborónico es un grupo alquilo C<1>-C<6>y, entre estos, son aún más preferidos -CH<3>, -CH<3>CH<2>o -CH<3>CH<2>CH<2>. En otra forma de realización preferida, el resto R en el derivado del ácido fenilborónico es hidrógeno. En una forma de realización especialmente preferida, el derivado del ácido fenilborónico es el ácido 4-formilfenilborónico (4-FPBA). La proporción en peso del ácido 4 -formilfenilborónico en el peso total del detergente o producto de limpieza es preferiblemente del 0,0005 al 2,0 % en peso, preferiblemente del 0,001 al 1,0 % en peso, más preferiblemente del 0,01 al 0,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,02 al 0,2 % en peso.

Los derivados del ácido fenilborónico utilizables según la invención pueden presentar además otras modificaciones químicas en el anillo fenilo, en particular pueden contener uno o varios grupos metilo, amino, nitro, cloro, flúor, bromo, hidroxilo, formilo, etilo, acetilo, t-butilo, anisilo, bencilo, trifluoroacetilo, N-hidroxisuccinimida, t -butoxicarbonilo, benzoilo, 4-metilbencilo, tioanizilo, tiocresilo, benciloximetilo, 4-nitrofenilo, benciloxicarbonilo, 2,2-nitrofenilsulfenilo, 4-toluenosulfonilo, pentafluorofenilo, difenilmetilo, 2-clorobenciloxicarbonilo, 2,4,5-triclorofenilo, 2-bromobenciloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo, trifenilmetilo, 2,2,5,7,8-pentametilcromano-6-sulfonilo, o combinaciones de los mismos.

Todos los compuestos previstos como compuestos estabilizadores en el marco de la presente invención pueden estar presentes en el detergente o producto de limpieza en todas sus formas protonadas o desprotonadas. Además, todos estos compuestos, en particular sus formas desprotonadas, pueden estar asociados con cationes. Los cationes preferidos a este respecto son cationes monovalentes o multivalentes, en particular bivalentes, especialmente iones Na (Na+), iones K (K+), iones Li (L¡+), iones Ca (Ca2+), iones Mg (Mg2+), iones Mn (Mn2+) e iones Zn (Zn2+). Son especialmente preferidos los iones Na (Na+).

Además de los compuestos estabilizadores mencionados, un agente según la invención puede contener, en otras formas de realización, al menos un estabilizador adicional, en particular un poliol, como glicerina o 1,2-etilenglicol, y/o un antioxidante. En formas de realización preferidas, la interacción de los compuestos estabilizadores, en particular la interacción del ácido bórico, el 4-FPBa y el inhibidor de péptidos, da como resultado una estabilización enzimática sinérgica. Por ello se entiende una estabilización enzimática mejorada mediante la combinación de los compuestos en comparación con la estabilización enzimática mediante cada uno de estos compuestos por separado y también en comparación con la suma de las prestaciones individuales de los compuestos en lo que respecta a la estabilización enzimática.

En los detergentes o productos de limpieza según la invención, que en una forma de realización se presentan en forma predominantemente sólida y en otra forma de realización de forma predominantemente líquida, pastosa o gelatinosa, el detergente o producto de limpieza, en cada caso en relación con el peso total del detergente o producto de limpieza, comprende la enzima, es decir, la proteasa, en una cantidad del 0,005 al 5 % en peso, preferiblemente del 0,05 al 2 % en peso, más preferiblemente del 0,01 al 0,5 % en peso y aún más preferiblemente de 0,02 a 0,2 % en peso, y, si el compuesto estabilizador es un inhibidor de péptidos, este en una cantidad del 0,01 al 15 % en peso, preferiblemente del 0,05 al 5 % en peso, más preferiblemente del 0,1 al 1 % en peso y aún más preferiblemente del 0,2 al 0,75 % en peso; y/o si el compuesto estabilizador es un derivado del ácido fenilborónico, en particular 4-FPBA, este en una cantidad de 0,0005 a 2,0 % en peso, preferiblemente de 0,001 a 1,0 % en peso, más preferiblemente del 0,01 al 0,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,02 al 0,2 % en peso; y/o si el compuesto estabilizador es ácido bórico, este en una cantidad del 0,05 al 5,5 % en peso, preferiblemente del 0,075 al 4,5 % en peso, más preferiblemente del 0,09 al 3,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,1 al 2,49 % en peso.

En diferentes formas de realización, la enzima y el compuesto estabilizador pueden estar preformulados en una composición enzimática. Como se desprende de las explicaciones anteriores, la proteína enzimática solo constituye una fracción del peso total de los preparados enzimáticos habituales. Las preparaciones de proteasa utilizadas preferiblemente contienen entre un 0,1 y un 40 % en peso, preferiblemente entre un 0,2 y un 30 % en peso, especialmente preferiblemente entre un 0,4 y un 20 % en peso y, en particular, entre un 0,8 y un 10 % en peso de la proteína enzimática. En tales composiciones, el compuesto estabilizador puede estar presente en una cantidad del 0,05 al 35 % en peso, preferiblemente del 0,05 al 10 % en peso, en relación con el peso total de la composición enzimática. Esta composición enzimática, que también forma parte de la presente invención, puede utilizarse entonces en detergentes o productos de limpieza según la invención, en cantidades que den lugar a las concentraciones finales indicadas con anterioridad en el detergente o producto de limpieza.

La presente invención se basa en el sorprendente descubrimiento de los inventores de que una proteasa de Bacillus gibsonii que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta al menos una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 o 222 de la proteasa de Bacillus gibsonii según SEQ ID NO: 1, en particular al menos una de las sustituciones de aminoácidos seleccionadas de Q12L, I43V, M122L, D127P, N154S, T156A, G160S, M211N, M211L, P212D, P212H o A222S, puede estabilizarse mejor en detergentes o productos de limpieza que las proteasas convencionales mediante un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por el derivado del ácido fenilborónico, el ácido bórico, el inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos.

Esto es especialmente sorprendente, ya que hasta ahora ninguno de los compuestos estabilizadores mencionados se había asociado con una estabilidad mejorada de dicha proteasa de Bacillus gibsonii en detergentes o productos de limpieza. Además, ninguno de los compuestos estabilizadores mencionados se ha asociado hasta ahora con una estabilidad mejorada de otras enzimas contenidas en el detergente o producto de limpieza cuando están presentes junto con la proteasa de Bacillus gibsonii mencionada en el detergente o producto de limpieza.

Las proteasas utilizadas según la invención presentan actividad enzimática, es decir, son capaces de hidrolizar péptidos y proteínas, especialmente en detergentes o productos de limpieza. Por lo tanto, una proteasa utilizada según la invención es una enzima que cataliza la hidrólisis de enlaces amida/péptido en sustratos proteicos/péptidos y, por lo tanto, es capaz de escindir proteínas o péptidos. Además, una proteasa utilizada según la invención es preferiblemente una proteasa madura, es decir, la molécula catalíticamente activa sin señal y/o propéptido(s). Salvo que se indique lo contrario, las secuencias indicadas se refieren también a enzimas maduras (procesadas).

En diversas formas de realización de la invención, la proteasa es una enzima libre. Esto significa que la proteasa puede actuar directamente con todos los componentes de un agente y, si el agente es un agente líquido, que la proteasa está en contacto directo con el disolvente del agente (por ejemplo, agua). En otras formas de realización, un agente puede contener proteasas que forman un complejo de interacción con otras moléculas o que contienen una “envoltura”. En este caso, una o varias moléculas de proteasa pueden estar separadas de los demás componentes del agente por una estructura que las rodea. Dicha estructura separadora puede estar formada, entre otros, por vesículas, como una micela o un liposoma. Sin embargo, la estructura circundante también puede ser una partícula viral, una célula bacteriana o una célula eucariótica. En diversas formas de realización, un agente puede contener células de Bacillus gibsonii o Bacillus subtilis que expresan las proteasas según la invención, o sobrenadantes de cultivos celulares de dichas células.

La proteasa de Bacillus gibsonii utilizada según la invención contiene, en diferentes formas de realización, al menos una sustitución de aminoácidos que se selecciona del grupo formado por Q12L, I43V, M122L, D127P, N154S, T156A, G160S, M211N, M211L, P212D, P212H o A222S, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1. En formas de realización más preferidas, la proteasa utilizada según la invención contiene una de las siguientes variantes de sustitución de aminoácidos: (i) I43V; (ii) M122L, N154S y T156A; (iii) M211N y P212D; (iv) M211L y P212D; (v) G160S; (vi) D127P, M211L y P212D; (vii) P212H; o (viii) Q12L, M122L y A222S, en donde la numeración se refiere en cada caso a la numeración según SEQ ID NO: 1.

En otra forma de realización de la invención, la proteasa utilizada según la invención comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 % y, de forma cada vez más preferida, al menos un 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % y 98,8 %, y en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 o 222 en el recuento según SEQ ID NO: 1, una o varias de las sustituciones de aminoácidos 12L, 43V, 122L, 127P, 154S, 156A, 160S, 211N, 211L, 212D, 212H o 222S.

En el contexto de la presente invención, la característica de que una proteasa presenta las sustituciones indicadas significa que contiene al menos uno de los aminoácidos correspondientes en las posiciones correspondientes, es decir, que no todas las 10 posiciones están mutadas de otro modo o, por ejemplo, eliminadas por fragmentación de la proteasa.

Las posiciones ventajosas para modificaciones secuenciales, en particular sustituciones, de la proteasa de Bacillus gibsonii, que, transferidas a posiciones homólogas de las proteasas utilizadas según la invención, son preferiblemente significativas y confieren a la proteasa propiedades funcionales ventajosas, son, por lo tanto, las posiciones que, en una alineación, corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 y 222 en SEQ ID NO: 1, es decir, en el recuento según SEQ ID NO: 1. En las posiciones mencionadas se encuentran los siguientes residuos de aminoácidos en la molécula de tipo salvaje de la proteasa de Bacillus gibsonii: Q12, I43, M122, D127, N154, T156, G160, M211, P212 y A222.

La determinación de la identidad de secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos se realiza mediante una comparación de secuencias. Esta comparación de secuencias se basa en el algoritmo BLAST establecido y habitualmente utilizado en el estado actual de la técnica (véase, por ejemplo, Altschul et al. (1990) “Basic local alignment search tool”, J. Mol. Biol. 215:403-410 y Altschul et al. (1997) “Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs”, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) y, en principio, consiste en asignar secuencias similares de nucleótidos o aminoácidos en las secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos. La asignación tabular de las posiciones correspondientes se denomina alineación. Otro algoritmo disponible en el estado actual de la técnica es el algoritmo FASTA. Las comparaciones de secuencias (alineaciones), en particular las comparaciones de secuencias múltiples, se realizan con programas informáticos. Se utilizan con frecuencia, por ejemplo, la serie Clustal (véase, por ejemplo, Chenna et al. (2003) “Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs”, Nucleic Acid Res. 31:3497-3500), T-Coffee (véase, por ejemplo, Notredame et al. (2000) “T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments”, J. Mol. Biol. 302:205-217) o programas basados en estos programas o algoritmos. También es posible realizar comparaciones de secuencias (alineaciones) con el programa informático Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, EE. UU.) con los parámetros estándar predeterminados, cuyo módulo AlignX para comparaciones de secuencias se basa en ClustalW. Salvo que se indique lo contrario, la identidad de secuencias aquí indicada se determina mediante el algoritmo BLAST.

Dicha comparación también permite realizar afirmaciones sobre la similitud de las secuencias comparadas entre sí. Por lo general, se expresa en porcentaje de identidad, es decir, la proporción de nucleótidos o residuos de aminoácidos idénticos en posiciones iguales o correspondientes en una alineación. El término más amplio de homología incluye en las secuencias de aminoácidos los intercambios de aminoácidos conservados, es decir, aminoácidos con actividad química similar, ya que estos suelen ejercer actividades químicas similares dentro de la proteína. Por lo tanto, la similitud de las secuencias comparadas también puede expresarse en porcentaje de homología o porcentaje de similitud. La información sobre la identidad y/o la homología puede referirse a polipéptidos o genes completos o solo a áreas individuales. Por lo tanto, las áreas homólogas o idénticas de diferentes secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos se definen por las coincidencias en las secuencias. Estas áreas suelen tener funciones idénticas. Pueden ser pequeñas y comprender solo unos pocos nucleótidos o aminoácidos. A menudo, estas pequeñas áreas desempeñan funciones esenciales para la actividad global de la proteína. Por lo tanto, puede ser conveniente referir las coincidencias de secuencias solo a áreas individuales, que pueden ser pequeñas. Salvo que se indique lo contrario, las indicaciones de identidad o homología en la presente solicitud se refieren a la longitud total de la secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos indicada en cada caso. En el contexto de la presente invención, la indicación de que una posición de aminoácido corresponde a una posición designada numéricamente en SEQ ID NO: 1 significa, por lo tanto, que la posición correspondiente de la posición designada numéricamente en SEQ ID NO: 1 se asigna en una alineación definida como con anterioridad.

Otro objeto de la presente invención es un detergente o producto de limpieza que comprende al menos una proteasa y al menos uno de los compuestos estabilizadores mencionados con anterioridad, caracterizado porque la proteasa se puede obtener a partir de una proteasa según la invención como molécula de partida mediante una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos. El término “sustitución conservadora de aminoácidos” significa la sustitución de un resto de aminoácido por otro resto de aminoácido, sin que dicha sustitución provoque un cambio en la polaridad o la carga en la posición del aminoácido sustituido, por ejemplo, la sustitución de un resto de aminoácido no polar por otro resto de aminoácido no polar. Las sustituciones conservadoras de aminoácidos en el contexto de la invención incluyen, por ejemplo: G=A=S, I=V=L=M, D=E, N=Q, K=R, Y=F, S=T, G=A=I=V=L=M=Y=F=W=P=S=T

Otro objeto de la presente invención es un detergente o producto de limpieza que comprende al menos una proteasa y al menos uno de los compuestos estabilizadores mencionados con anterioridad, caracterizado porque la proteasa se puede obtener a partir de una proteasa según la invención como molécula de partida mediante fragmentación, mutagénesis por deleción, inserción o sustitución, y comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una longitud de al menos 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268 o 269 aminoácidos relacionados coinciden con la molécula de partida.

Así, por ejemplo, es posible eliminar aminoácidos individuales en los terminales o en los bucles de la enzima sin que se pierda o se reduzca la actividad proteolítica. Además, mediante este tipo de fragmentación, mutagénesis por deleción, inserción o sustitución, también se puede reducir la alergenicidad de las enzimas en cuestión y, por lo tanto, mejorar su aplicabilidad general. Ventajosamente, las enzimas conservan su actividad proteolítica incluso después de la mutagénesis, es decir, su actividad proteolítica es al menos igual a la de la enzima original. Las sustituciones también pueden tener efectos beneficiosos. Se pueden sustituir aminoácidos individuales o varios aminoácidos relacionados entre sí por otros aminoácidos.

Una proteasa según la invención puede estabilizarse adicionalmente, en particular mediante una o varias mutaciones, por ejemplo, sustituciones, o mediante acoplamiento a un polímero. Esto se debe a que un aumento de la estabilidad durante el almacenamiento y/o durante el uso, por ejemplo, durante el proceso de limpieza, hace que la actividad enzimática se mantenga durante más tiempo y, por lo tanto, mejora el rendimiento de la limpieza. En principio, se pueden considerar todas las posibilidades de estabilización descritas en el estado de la técnica y/o adecuadas. Son preferibles aquellas estabilizaciones que se consiguen mediante mutaciones de la propia enzima, ya que estas no requieren pasos adicionales tras la obtención de la enzima. Otras posibilidades de estabilización son, por ejemplo:

- modificación de la unión de iones metálicos, en particular de los sitios de unión del calcio, por ejemplo, mediante la sustitución de uno o varios aminoácidos que participan en la unión del calcio por uno o varios aminoácidos con carga negativa y/o mediante la introducción de modificaciones en la secuencia de al menos una de las secuencias de los dos aminoácidos arginina/glicina.

- protección contra la influencia de agentes desnaturalizantes, como los tensioactivos, mediante mutaciones que provocan un cambio en la secuencia de aminoácidos en la superficie de la proteína;

- sustitución de aminoácidos situados cerca del extremo N-terminal por otros que se supone que entran en contacto con el resto de la molécula a través de interacciones no covalentes y, por lo tanto, contribuyen al mantenimiento de la estructura globular.

Las formas de realización preferidas son aquellas en las que la enzima se estabiliza de varias maneras, ya que varias mutaciones estabilizadoras tienen un efecto aditivo o sinérgico.

Otro objeto de la invención es una proteasa como la descrita con anterioridad, caracterizada por presentar al menos una modificación química. Una proteasa con tal modificación se denomina derivado, es decir, la proteasa está derivada. Por derivados se entienden, en el sentido de la presente solicitud, aquellas proteínas cuya cadena de aminoácidos pura ha sido modificada químicamente. Dichas derivatizaciones pueden realizarse, por ejemplo, in vivo a través de la célula huésped que expresa la proteína. A este respecto, cabe destacar especialmente los acoplamientos de compuestos de bajo peso molecular, como los lípidos u oligosacáridos. Sin embargo, las derivatizaciones también pueden realizarse in vitro, por ejemplo, mediante la transformación química de una cadena lateral de un aminoácido o mediante la unión covalente de otro compuesto a la proteína. Por ejemplo, es posible acoplar aminas a grupos carboxilo de una enzima para modificar el punto isoeléctrico. Otro compuesto de este tipo puede ser otra proteína que se une a una proteína inventada mediante compuestos químicos bifuncionales. La derivatización también se refiere a la unión covalente a un portador macromolecular o a la inclusión no covalente en estructuras macromoleculares adecuadas. Las derivatizaciones pueden influir, por ejemplo, en la especificidad del sustrato o en la fuerza de unión al sustrato, o provocar un bloqueo temporal de la actividad enzimática si la sustancia acoplada es un inhibidor. Esto puede ser útil, por ejemplo, durante el período de almacenamiento. Además, estas modificaciones pueden influir en la estabilidad o la actividad enzimática. También pueden servir para reducir la alergenicidad y/o la inmunogenicidad de la proteína y, por lo tanto, aumentar, por ejemplo, su tolerancia cutánea. Por ejemplo, los acoplamientos con compuestos macromoleculares, como el polietilenglicol, pueden mejorar la proteína en términos de estabilidad y/o tolerancia cutánea. Por derivados de una proteína según la invención se pueden entender, en el sentido más amplio, también preparaciones de estas proteínas. Dependiendo de la obtención, el procesamiento o la preparación, una proteína puede estar asociada a diversas otras sustancias, por ejemplo, procedentes del cultivo de los microorganismos productores. Una proteína también puede haber sido mezclada específicamente con otras sustancias, por ejemplo, para aumentar su estabilidad de almacenamiento. Por lo tanto, según la invención, también se incluyen todas las preparaciones de una proteína según la invención. Esto es independiente de si realmente desarrolla esta actividad enzimática en una preparación determinada. Porque puede ser deseable que no tenga ninguna actividad o solo una actividad mínima durante el almacenamiento y que solo desarrolle su función enzimática en el momento de su uso. Esto se puede controlar, por ejemplo, mediante sustancias acompañantes adecuadas.

Numerosas proteasas, y en particular las subtilisinas, se forman como proteínas precursoras, es decir, junto con un propéptido y un péptido señal, en las que la función del péptido señal suele consistir en garantizar la expulsión de la proteasa de la célula que la produce al periplasma o al medio que rodea la célula, y el propéptido suele ser necesario para el plegamiento correcto de la proteasa. El péptido señal y el propéptido suelen ser la parte N-terminal de la preproteína. En condiciones naturales, el péptido señal se separa del resto de la proteasa mediante una proteasa señal. A continuación, se produce el plegamiento final correcto de la proteasa, asistido por el propéptido. La proteasa se encuentra entonces en su forma activa y se separa del propéptido. Tras la escisión del propéptido, la proteasa madura, en particular la subtilisina, ejerce su actividad catalítica sin los aminoácidos N-terminales originalmente presentes. Para aplicaciones técnicas en general y, en particular, en el contexto de la invención, se prefieren las proteasas maduras, es decir, las enzimas procesadas después de su producción, frente a las preproteínas. Las proteasas también pueden ser modificadas por las células que las producen después de la producción de la cadena polipeptídica, por ejemplo, mediante la unión de moléculas de azúcar, formilaciones, aminaciones, etc. Estas modificaciones son modificaciones postraduccionales y pueden, pero no necesariamente, influir en la función de la proteasa.

El término “variante”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a variaciones naturales o artificiales de una proteasa nativa que presenta una secuencia de aminoácidos modificada con respecto a la forma de referencia. Además de los cambios en los aminoácidos descritos con anterioridad, las proteasas según la invención pueden presentar otros cambios en los aminoácidos, en particular sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos. Dichas proteasas se han desarrollado, por ejemplo, mediante modificaciones genéticas específicas, es decir, mediante procedimientos de mutagénesis, y se han optimizado para determinados fines o en lo que respecta a propiedades especiales (por ejemplo, en lo que respecta a su actividad catalítica, estabilidad, etc.). Además, los ácidos nucleicos según la invención pueden introducirse en procesos de recombinación y utilizarse así para producir proteasas u otros polipéptidos completamente nuevos. El objetivo es introducir mutaciones específicas, como sustituciones, inserciones o deleciones, en las moléculas conocidas para, por ejemplo, mejorar el rendimiento de limpieza de las enzimas. Para ello, se pueden modificar, en particular, las cargas superficiales y/o el punto isoeléctrico de las moléculas y, con ello, sus interacciones con el sustrato. De este modo, se puede modificar la carga neta de las enzimas para influir en la unión al sustrato, especialmente para su uso en detergentes y productos de limpieza. De forma alternativa o complementaria, se puede aumentar la estabilidad o la actividad catalítica de la enzima mediante una o varias mutaciones adecuadas, mejorando así su capacidad de limpieza. Las propiedades ventajosas de mutaciones individuales, por ejemplo, sustituciones individuales, pueden complementarse entre sí. Por lo tanto, una proteasa ya optimizada en cuanto a determinadas propiedades puede seguir desarrollándose en el marco de la invención, por ejemplo, en cuanto a su estabilidad frente a tensioactivos y/o blanqueadores y/u otros componentes.

Para describir las sustituciones que afectan exactamente a una posición de aminoácido (intercambios de aminoácidos), se utiliza la siguiente convención: en primer lugar, se designa el aminoácido presente de forma natural con el código de una letra utilizado internacionalmente, a continuación se indica la posición de la secuencia correspondiente y, por último, el aminoácido insertado. Las sustituciones múltiples dentro de la misma cadena polipeptídica se separan entre sí mediante barras inclinadas. En el caso de las inserciones, se nombran los aminoácidos adicionales después de la posición en la secuencia. En el caso de las deleciones, el aminoácido que falta se sustituye por un símbolo, por ejemplo, un asterisco o un guion, o se indica un A delante de la posición correspondiente. Por ejemplo, P14H describe la sustitución de prolina en la posición 14 por histidina, P14HT la inserción de treonina después del aminoácido histidina en la posición 14 y P14* o AP14 la deleción de prolina en la posición 14. Esta nomenclatura es conocida por los expertos en el campo de la tecnología enzimática.

Las posiciones de los aminoácidos se definen mediante una alineación de la secuencia de aminoácidos de una proteasa utilizada según la invención con la secuencia de aminoácidos de la proteasa de Bacillus gibsonii, tal como se indica en SEQ ID NO: 1. Además, la asignación de las posiciones se basa en la proteína madura. Esta asignación se aplicará en particular cuando la secuencia de aminoácidos de una proteasa utilizada según la invención comprenda un número mayor de residuos de aminoácidos que la proteasa de Bacillus gibsonii según SEQ ID NO: 1. Partiendo de las posiciones mencionadas en la secuencia de aminoácidos de la proteasa de Bacillus gibsonii, las posiciones de cambio en una proteasa utilizada según la invención son aquellas que se asignan a estas posiciones en una alineación.

En otra forma de realización de la invención, la proteasa utilizada según la invención se caracteriza porque su capacidad de purificación no se reduce significativamente en comparación con la de una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que corresponde a la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1, es decir, posee al menos el 80 % de la capacidad de lavado de referencia, preferiblemente al menos el 100 %, y más preferiblemente al menos el 110 % o más.

Por capacidad de lavado o limpieza se entiende la capacidad de un detergente o producto de limpieza para eliminar parcial o totalmente la suciedad existente. En el marco de la invención, tanto el detergente o producto de limpieza que contiene la proteasa, o la solución de lavado o limpieza formada por este producto, como la propia proteasa presentan un rendimiento de limpieza respectivo. El rendimiento de limpieza de la proteasa contribuye así al rendimiento de limpieza del producto o de la solución de lavado o limpieza formada por el producto.

Por “solución de lavado o limpieza” se entiende la solución de uso que contiene el detergente o producto de limpieza, que actúa sobre los tejidos o superficies duras y, por lo tanto, entra en contacto con la suciedad presente en los tejidos o superficies duras. Por lo general, la solución de lavado o limpieza se forma cuando comienza el proceso de lavado o limpieza y el detergente o producto de limpieza se diluye con agua, por ejemplo, en una lavadora, lavavajillas u otro recipiente adecuado.

El rendimiento de limpieza puede determinarse en un sistema que contenga un detergente para lavavajillas a máquina en la dosis indicada aquí, así como la proteasa, en donde las proteasas que se comparan se utilizan en la misma concentración (en relación con la proteína activa) y el rendimiento de limpieza se determina frente a la suciedad de té, carne, espaguetis y/o créme brulée según el método IKW en un Miele GSL (programa 45 °C, 21 °dH). La concentración de la proteasa en el producto destinado a este sistema de lavado es del 0,001 al 0,1 % en peso, preferiblemente del 0,01 al 0,06 % en peso, en relación con la proteína activa purificada. Un producto líquido de referencia (formulación de dos componentes) para un sistema de lavado de este tipo puede tener la siguiente composición:

continuación

El uso de la proteasa con la misma actividad garantiza que, incluso en caso de una posible divergencia en la relación entre la sustancia activa y la proteína total (los valores de la actividad específica), se puedan comparar las propiedades enzimáticas respectivas, es decir, por ejemplo, el rendimiento de limpieza en determinadas impurezas. Por lo general, una actividad específica baja puede compensarse añadiendo una mayor cantidad de proteína. Además, las enzimas que se van a examinar también pueden utilizarse en la misma cantidad de sustancia o en el mismo peso si, en una prueba de actividad, muestran una afinidad diferente por el sustrato de prueba. En este contexto, la expresión “misma cantidad de sustancia” se refiere a un uso equivalente en moles de las enzimas que se van a examinar. La expresión “misma cantidad en peso” se refiere a un uso equivalente en peso de las enzimas que se van a examinar.

Los procedimientos para determinar la actividad proteasa son conocidos por los expertos en el campo de la tecnología enzimática y son utilizados por ellos de forma habitual. Por ejemplo, dichos procedimientos se describen en Tenside, volumen 7 (1970), pág. 125-132. Alternativamente, la actividad proteasa puede determinarse mediante la liberación del cromóforo para-nitroanilina (pNA) del sustrato suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-nitroanilida (AAPF). La proteasa divide el sustrato y libera pNA. La liberación de pNA provoca un aumento de la extinción a 410 nm, cuya evolución temporal es una medida de la actividad enzimática (véase Del Mar et al., 1979). La medición se realiza a una temperatura de 25 °C, a un pH de 8,6 y a una longitud de onda de 410 nm. El tiempo de medición es de 5 minutos y el intervalo de medición de 20 a 60 segundos. La actividad de la proteasa se expresa normalmente en unidades de proteasa (PE). Las actividades de proteasa adecuadas son, por ejemplo, 2,25, 5 o 10 PE por ml de líquido de enjuague o por proceso de enjuague. Sin embargo, la actividad de la proteasa no es igual a cero.

La concentración de proteínas puede determinarse mediante métodos conocidos, por ejemplo, el método BCA (ácido bicinconínico; ácido 2,2'-biquinolil-4,4'-dicarboxílico) o el método del biuret (Gomall et al., 1948, J. Biol. Chem., 177:751-766). La concentración de proteína activa puede determinarse mediante una titulación de los centros activos utilizando un inhibidor irreversible adecuado y determinando la actividad residual (Bender et al., 1966, J. Am. Chem. Soc. 88(24):5890-5913).

Por detergente o producto de limpieza se entiende, según la invención, todos los tipos de detergentes o productos de limpieza imaginables, tanto concentrados como productos que se utilizan sin diluir, para uso a escala comercial, en lavadoras o para el lavado o la limpieza a mano. Entre ellos se incluyen, por ejemplo, los detergentes para textiles, alfombras o fibras naturales, para los que se utiliza la denominación “detergente”. También se incluyen, por ejemplo, los detergentes para lavavajillas (detergentes para lavavajillas automáticos) o detergentes manuales para vajilla, o los limpiadores para superficies duras como metal, vidrio, porcelana, cerámica, azulejos, piedra, superficies lacadas, plásticos, madera o cuero, para los que se utiliza la denominación “productos de limpieza”, es decir, además de los detergentes para lavavajillas manuales y automáticos, por ejemplo, también los productos abrasivos, los limpiacristales, los ambientadores para inodoros, etc. Entre los detergentes y productos de limpieza incluidos en la invención se incluyen también los auxiliares de lavado que se añaden al detergente propiamente dicho durante el lavado manual o a máquina de textiles para conseguir un efecto adicional. También se incluyen en los detergentes y productos de limpieza incluidos en la invención los productos para el tratamiento previo y posterior de textiles, es decir, aquellos productos con los que se pone en contacto la prenda antes del lavado propiamente dicho, por ejemplo, para disolver la suciedad persistente, y también aquellos productos que, en una etapa posterior al lavado propiamente dicho, confieren a la ropa lavada otras propiedades deseables, como un tacto agradable, la ausencia de arrugas o una baja carga estática. Entre estos últimos se incluyen, entre otros, los suavizantes.

El producto para lavavajillas según la invención puede ser un producto para lavavajillas automático o manual. Los productos para lavavajillas automáticos son productos de limpieza optimizados para su uso en lavavajillas automáticos. Los detergentes para lavavajillas manuales están optimizados para el lavado a mano. Los productos según la invención son preferiblemente detergentes para lavavajillas. Son especialmente preferibles los detergentes para lavavajillas líquidos según la invención.

Los detergentes o productos de limpieza según la invención, que pueden presentarse en forma de sólidos pulverulentos, en forma de partículas redensificadas, como soluciones homogéneas o suspensiones, pueden contener, además de una proteasa según la invención y un compuesto estabilizador según la invención, todos los ingredientes conocidos y habituales en este tipo de productos, estando presente preferiblemente al menos otro ingrediente en el producto. Los productos según la invención pueden contener, en particular, tensioactivos, formadores de estructura, polímeros, inhibidores de la corrosión del vidrio, inhibidores de la corrosión, agentes blanqueadores como compuestos de peróxido, activadores de blanqueo o catalizadores de blanqueo. Además, pueden contener disolventes orgánicos miscibles en agua, otras enzimas, estabilizadores de enzimas, agentes secuestrantes, electrolitos, reguladores del pH y/u otros aditivos, como abrillantadores ópticos, inhibidores del envejecimiento, inhibidores de la transferencia de color, reguladores de la espuma, así como colorantes y fragancias, y combinaciones de los mismos.

Un componente preferido de los detergentes y productos de limpieza según la invención son los tensioactivos no iónicos, en particular los tensioactivos no iónicos de la fórmula general R1-CH(OH)CH2O-(A0)w-(A'O)x-(A"O)y-(AmO)z-R2, en la que R1 representa un resto alquilo o alquenilo C6-24- de cadena lineal o ramificada, saturado o mono o poliinsaturado; R2 representa un resto hidrocarbonado lineal o ramificado con 2 a 26 átomos de carbono; A, A', A"' y A"" representan, de modo independiente entre sí, un resto del grupo -CH<2>CH<2>, -CH<2>CH<2>-CH<2>, -CH<2>-CH(CHa), - CH<2>-CH<2>-CH<2>-CH<2>, -CH<2>-CH(CHa)-CH<2>-, -CH<2>-CH(CH<2>-CH<3>), w, x, y y z representan valores entre 0,5 y 120, pudiendo x, y y/o z ser también 0, siendo preferibles.

Mediante la adición de los tensioactivos no iónicos mencionados con anterioridad, de la fórmula general R1-CH(OH) CH<2>O-(AO)w-(A'O)x-(A"O)y-(A"O)z-R2, denominados en lo sucesivo “hidroxiéteres mixtos”, se puede mejorar sorprendentemente el rendimiento de limpieza de las preparaciones que contienen enzimas según la invención, tanto en comparación con sistemas sin tensioactivos como en comparación con sistemas que contienen tensioactivos no iónicos alternativos, por ejemplo, del grupo de los alcoholes grasos polialcoxilados.

Mediante el uso de estos tensioactivos no iónicos con uno o varios grupos hidroxilo libres en uno o ambos restos alquílicos terminales, se puede mejorar considerablemente la estabilidad de las enzimas contenidas en las preparaciones detergentes o limpiadoras según la invención.

Son especialmente preferibles los tensioactivos no iónicos polioxialquilados con grupos terminales bloqueados que, según la fórmula R1O[CH<2>CH<2>O]xCH<2>CH(OH)R2, además de un resto R1, que representa restos hidrocarbonados lineales o ramificados, saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos con 2 a 30 átomos de carbono, preferiblemente con 4 a 22 átomos de carbono, tienen además un resto R2 de hidrocarburo lineal o ramificado, saturado o insaturado, alifático o aromático con 1 a 30 átomos de carbono, en donde x representa valores entre 1 y 90, preferiblemente valores entre 30 y 80 y, en particular, valores entre 30 y 60.

Son especialmente preferidos los tensioactivos de la fórmula R1O[CH<2>CH(CH<3>)O]x[CH<2>CH<2>O]yCH<2>CH(OH)R2, en la que R1 representa un resto hidrocarbonado alifático lineal o ramificado con 4 a 18 átomos de carbono o mezclas de los mismos, R2 representa un resto hidrocarbonado lineal o ramificado con 2 a 26 átomos de carbono o mezclas de los mismos, y x representa valores entre 0,5 y 1,5, e y representa un valor de al menos 15. A este grupo de tensioactivos no iónicos pertenecen, por ejemplo, los éteres de alcohol graso C<2 - 2 6>(PO)<1>-(EO)<15-40>-<2>-hidroxialquiléteres, en particular también los éteres de (PO)1-(EO)22-2-hidroxidecilo de alcohol graso C<8-10>.

Son especialmente preferidos los tensioactivos no iónicos de grupos terminales cerrados de polioxialquilo de la fórmula R1O[CH<2>CH<2>O]x[CH<2>CH(R3)O]yCH<2>CH(OH)R2, en la que R1 y R2 representan, de modo independiente entre sí, un resto hidrocarbonado lineal o ramificado, saturado o mono o poliinsaturado con 2 a 26 átomos de carbono, R3 se selecciona, de modo independiente entre sí, entre -CH<3>, -CH<2>CH<3>, -CH<2>CH<2>-CH<3>, -CH(CH<3>)<2>, pero preferiblemente para -CH<3>, y x e y representan valores independientes entre 1 y 32, siendo especialmente preferibles los tensioactivos con R3 = -CH<3>y valores para x de 15 a 32 y para y de 0,5 y 1,5.

Otros niotensioactivos preferibles son los tensioactivos nioténicos poli(oxialquilados) con grupos terminales cerrados de la fórmula R1O[CH<2>CH(R3)O]x[CH<2>]kCH(OH)[CH<2>]jOR2, en la que R1 y R2 representan restos hidrocarbonados lineales o ramificados, saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos con 1 a 30 átomos de carbono, R3 representa H o un resto metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, 2-butilo o 2-metil-2-butilo, x representa valores entre 1 y 30, k y j representan valores entre 1 y 12, preferiblemente entre 1 y 5. Si el valor x es > 2, cada R3 en la fórmula anterior R1O[CH<2>CH(R3)O]x[CH<2>]kCH(OH)[CH<2>]jOR2 puede ser diferente. R1 y R2 son preferiblemente restos hidrocarbonados lineales o ramificados, saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos con 6 a 22 átomos de carbono, siendo especialmente preferibles los restos con 8 a 18 átomos de carbono. Para el resto R3 son especialmente preferibles H, -CH<3>o -CH<2>CH<3>. Los valores especialmente preferidos para x están en el intervalo de 1 a 20, en particular de 6 a 15.

Como se ha descrito con anterioridad, cada R3 en la fórmula anterior puede ser diferente si x > 2. De este modo, se puede variar la unidad de óxido de alquileno entre corchetes. Si x es, por ejemplo, 3, el resto R3 puede seleccionarse para formar unidades de óxido de etileno (R3 = H) u óxido de propileno (R3 = CH<3>), que pueden estar unidas en cualquier orden, por ejemplo, (EO)(PO)(EO), (EO)(EO)(PO), (EO)(EO)(EO), (PO)(EO)(PO), (PO) (PO)(EO) y (PO)(PO)(PO). El valor 3 para x se ha elegido aquí a modo de ejemplo y puede ser mayor, aumentando el intervalo de variación con el aumento de los valores de x e incluyendo, por ejemplo, un gran número de grupos (EO) combinados con un pequeño número de grupos (PO), o viceversa.

Los alcoholes poli(oxialquilados) con grupos terminales cerrados especialmente preferidos de la fórmula anterior presentan valores de k = 1 y j = 1, de modo que la fórmula anterior se simplifica a R1O[CH<2>CH(R3)O]xCH<2>CH(OH)CH<2>OR2. En la última fórmula, R1, R2 y R3 se definen como con anterioridad y x representa números del 1 al 30, preferiblemente del 1 al 20 y, en particular, del 6 al 18. Son especialmente preferidos los tensioactivos en los que los restos R1 y R2 tienen de 9 a 14 átomos de carbono, R3 representa H y x toma valores de 6 a 15.

Finalmente, los tensioactivos no iónicos de la fórmula general R1-CH(OH)CH<2>O-(AO)w-R2 han demostrado ser especialmente eficaces, en la que R1 representa un resto alquilo o alquenilo C6-24 de cadena lineal o ramificada, saturado o mono o poliinsaturado; R2 representa un resto hidrocarbonado lineal o ramificado con 2 a 26 átomos de carbono; A representa un resto del grupo -CH<2>CH<2>, -CH<2>CH<2>-CH<2>, -CH<2>-CH(CH<3>), y w representa valores entre 1 y 120, preferiblemente entre 10 y 80, en particular entre 20 y 40. Entre este grupo de tensioactivos no iónicos se encuentran, por ejemplo, los éteres (de Eo)<10-80>-<2>-hidroxialquilo de alcohol graso C<4 -22>, en particular los éteres de (EO)22-2-hidroxidecilo de alcohol graso C<8 -12>y los éteres de (EO)40-80-2-hidroxialquilo de alcohol graso C<4 -22>.

Los detergentes y productos de limpieza preferidos se caracterizan por contener al menos un tensioactivo no iónico, preferiblemente un tensioactivo no iónico del grupo de los hidroxiéteres mixtos, en donde la proporción en peso del tensioactivo no iónico con respecto al peso total del detergente y producto de limpieza es preferiblemente del 0,2 al 10 % en peso, preferiblemente entre un 0,4 y un 7,0 % en peso y, en particular, entre un 0,6 y un 6,0 % en peso.

Los productos preferidos según la invención para su uso en procesos de lavado de vajilla a máquina pueden contener, además de los tensioactivos no iónicos descritos con anterioridad, otros tensioactivos, en particular tensioactivos anfóteros. Sin embargo, la proporción de tensioactivos aniónicos en el peso total de estos productos es preferiblemente limitada. Así, los detergentes para lavavajillas preferidos se caracterizan por contener, en relación con su peso total, menos del 5,0 % en peso, preferiblemente menos del 3,0 % en peso y, especialmente, menos del 2,0 % en peso de tensioactivos aniónicos. Se evita el uso de tensioactivos aniónicos en grandes cantidades, en particular para evitar la formación excesiva de espuma.

Otro componente preferido de los productos según la invención son los agentes complejantes. Los agentes complejantes especialmente preferidos son los fosfonatos, siempre que su uso esté permitido por la normativa. Los fosfonatos complejantes incluyen, además del ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico, una serie de compuestos diferentes, como por ejemplo ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP). En esta solicitud se prefieren especialmente los hidroxialcano o aminoalcano fosfonatos. Entre los hidroxialcano fosfonatos, el 1-hidroxietano1,1-difosfonato (HEDP) es de especial importancia como coformador. Se utiliza preferiblemente como sal sódica, siendo la sal disódica neutra y la tetrasódica alcalina (pH 9). Como aminoalcanfosfonatos se utilizan preferiblemente el etilendiamintetrametilenfosfonato (EDTMP), el dietilentiaminpentametilenfosfonato (DTPMP) y sus homólogos superiores. Se utilizan preferiblemente en forma de sales sódicas de reacción neutra, por ejemplo, como sal hexasódica del EDTMP o como sal hepta- y octasódica del DTPMP. Como formador, se utiliza preferiblemente HEDP de la clase de los fosfonatos. Los aminoalcanfosfonatos también tienen una marcada capacidad de unión con metales pesados. Por consiguiente, especialmente si los productos también contienen blanqueadores, puede ser preferible utilizar aminoalcanfosfonatos, en particular DTPMP, o mezclas de los fosfonatos mencionados.

Un compuesto preferido en el marco de esta solicitud contiene uno o varios fosfonatos del grupo del ácido aminotrimetilénico fosfónico (ATMP) y/o sus sales; etilendiaminotetra(metilenfosfónico) (EDTMP) y/o sus sales; ácido dietilentriaminopenta(dietilentiaminopentafosfónico) (DTPMP) y/o sus sales; ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico (HEDP) y/o sus sales; ácido 2-fosfonobutano-1,2,4-tricarboxílico (PBTC) y/o sus sales; ácido hexametilendiaminotetra(metilenfosfónico) (HDTMP) y/o sus sales; nitrilotri( ácido metilenfosfónico) (NTMP) y/o sus sales.

Son especialmente preferidos los agentes que contienen como fosfonatos ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico (HEDP) o ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP). Por supuesto, los agentes según la invención pueden contener dos o más fosfonatos diferentes. Los agentes preferidos según la invención se caracterizan por contener al menos un agente complejante del grupo de los fosfonatos, preferiblemente 1-hidroxietano-1,1-difosfonato, en donde la proporción en peso del fosfonato con respecto al peso total del agente es preferiblemente del 0,1 y el 8,0 % en peso, preferiblemente del 0,2 y el 5,0 % en peso y, en particular, del 0,5 y el 3,0 % en peso. Los agentes según la invención contienen además preferiblemente un agente estructurante. Entre los agentes estructurantes se incluyen en particular los silicatos, los carbonatos y los coformadores orgánicos.

Como coformadores orgánicos cabe mencionar en particular los policarboxilatos/ácidos policarboxílicos, los policarboxilatos poliméricos, el ácido aspártico, los poliacetales, las dextrinas, otros coformadores orgánicos y los fosfonatos. Estas clases de sustancias se describen a continuación. Las sustancias coformantes orgánicas pueden estar presentes, si se desea, en cantidades de hasta un 40 % en peso, en particular hasta un 25 % en peso y preferiblemente de 1 a 8 % en peso.

Las sustancias orgánicas de estructura útiles son, por ejemplo, los ácidos policarboxílicos que pueden utilizarse en forma de ácido libre y/o sus sales sódicas, entendiéndose por ácidos policarboxílicos aquellos ácidos carboxílicos que tienen más de una función ácida. Por ejemplo, el ácido cítrico, el ácido adípico, el ácido succínico, el ácido glutárico, el ácido málico, el ácido tartárico, el ácido maleico, el ácido fumárico, los ácidos sacarínicos y las carboximetilulinas, los ácidos aminopolicarboxílicos monoméricos y poliméricos, en particular el ácido glicindiacético, ácido metilglicínico, ácido glutamínico, ácido nitrilotriacético (NTA), iminodisuccinato como el ácido etilendiamin-N,N'-disuccínico e hidroximinodisuccinatos, ácido etilendiaminotetraacético, así como ácido poliaspártico, ácidos polifosfónicos, en particular ácido aminotris(metilenfosfónico), ácido etilendiaminotetrakis(metilenfosfónico), ácido lisintetra(metilenfosfórico) y ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico, compuestos hidroxilados poliméricos como la dextrina, así como ácidos (poli)carboxílicos poliméricos, en particular policarboxilatos accesibles por oxidación de polisacáridos o dextrinas, y/o ácidos acrílicos poliméricos, ácidos metacrílicos, ácidos maleicos y polímeros mixtos de estos, que también pueden contener pequeñas proporciones de sustancias polimerizables sin funcionalidad de ácido carboxílico. Si se desea, estas sustancias orgánicas formadoras de estructura pueden estar presentes en cantidades de hasta el 50 % en peso, en particular hasta el 25 % en peso y preferiblemente del 10 al 20 % en peso. Además de su efecto formador, los ácidos libres suelen tener también la propiedad de ser componentes acidificantes y, por lo tanto, también sirven para ajustar un valor de pH más bajo y más suave en detergentes y productos de limpieza. En este sentido, cabe destacar especialmente el ácido cítrico, el ácido succínico, el ácido glutárico, el ácido adípico, el ácido glucónico y cualquier mezcla de estos. Como sustancia estructural se utiliza con especial preferencia el ácido cítrico o las sales del ácido cítrico. Otras sustancias estructurales especialmente preferidas son el ácido metilglicindiacético (MGDA), el diacetato de ácido glutámico (GLDA), el diacetato de ácido aspártico (ASDA), hidroxietilimino diacetato (HEIDA), iminodisuccinato (IDS) y etilendiaminodisuccinato (EDDS), carboximetilina y poliaspartato.

En las formas de realización preferidas, se utiliza ácido cítrico y/o citrato como formador orgánico soluble en agua. Es especialmente preferible el uso de entre un 5 y un 25 % en peso, preferiblemente entre un 7,5 y un 12,5 % en peso, de ácido cítrico y/o entre un 5 y un 25 % en peso, preferiblemente entre un 7,5 y un 12,5 % en peso, de citrato, preferiblemente citrato alcalino y, aún más preferible, citrato de sodio. El ácido cítrico/citrato pueden utilizarse en forma de hidratos, por ejemplo, el ácido cítrico en forma de monohidrato y el citrato en forma de citrato trisódico dihidratado.

Como sustancias estructurantes también son adecuados los policarboxilatos poliméricos, como por ejemplo las sales de metales alcalinos del ácido poliacrílico o del ácido polimetacrílico, por ejemplo aquellos con una masa molecular relativa de 500 a 70000 g/mol. Las masas molares indicadas para los policarboxilatos poliméricos se refieren, en el sentido de este documento, a las masas molares medias en peso Mw de la forma ácida correspondiente, que se determinaron básicamente mediante cromatografía de permeación en gel (GPC), utilizando un detector U<v>. La medición se realizó con respecto a un estándar externo de ácido poliacrílico que, debido a su similitud estructural con los polímeros investigados, proporciona valores de peso molecular realistas. Estos datos difieren considerablemente de los datos de peso molecular en los que se utilizan ácidos de poliestirenosulfónico como estándar. Las masas molares medidas con ácidos de poliestirenosulfato son, por regla general, considerablemente superiores a las indicadas en este documento.

Los polímeros adecuados son, en particular, los poliacrilatos, que presentan preferiblemente una masa molecular de entre 2000 y 20 000 g/mol. Debido a su solubilidad superior, dentro de este grupo pueden ser preferibles los poliacrilatos de cadena corta, que tienen masas molares de 2000 a 10000 g/mol, y especialmente de 3000 a 5000 g/mol.

También son adecuados los policarboxilatos copolímeros, en particular los de ácido acrílico con ácido metacrílico y los de ácido acrílico o ácido metacrílico con ácido maleico. Los copolímeros de ácido acrílico con ácido maleico que contienen entre un 50 y un 90 % en peso de ácido acrílico y entre un 5 y un 10 % en peso de ácido maleico han demostrado ser especialmente adecuados. Su masa molecular relativa, en relación con los ácidos libres, es generalmente de 2000 a 70000 g/mol, preferiblemente de 20000 a 50000 g/mol y, en particular, de 30000 a 40000 g/mol.

Como complemento a los agentes estructurantes descritos con anterioridad, el detergente o producto de limpieza puede contener polímeros con propiedades limpiadoras. El porcentaje en peso de los polímeros con actividad limpiadora respecto al peso total de los detergentes o productos de limpieza según la invención es preferiblemente del 0,1 al 20 % en peso, preferiblemente del 1,0 al 15 % en peso y, en particular, del 2,0 al 12 % en peso.

Como polímeros con actividad limpiadora se utilizan preferiblemente polímeros que contienen grupos de ácido sulfónico, en particular del grupo de los polisulfonatos copolímeros. Estos polisulfonatos copolímeros contienen, además de monómeros que contienen grupos de ácido sulfónico, al menos un monómero del grupo de los ácidos carboxílicos insaturados.

Como ácido(s) carboxílico(s) insaturado(s) se utilizan con especial preferencia ácidos carboxílicos insaturados de la fórmula R1(R2)<c>=C(R3)COOH, en la que R1 a R3 representan, de modo independiente entre sí, -H, -CH<3>, un resto alquilo saturado de cadena lineal o ramificada con 2 a 12 átomos de carbono, un resto alquenilo de cadena lineal o ramificada, mono- o poliinsaturado con 2 a 12 átomos de carbono, con -NH<2>, -OH o -COOH, como se han definido con anterioridad, o para -COOH o -COOR4, en donde R4 es un resto hidrocarbonado saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, con 1 a 12 átomos de carbono. Los ácidos carboxílicos insaturados especialmente preferidos son el ácido acrílico, el ácido metacrílico, el ácido etacrílico, el ácido a-cloroacrílico, el ácido a -cianoacrílico, el ácido crotónico, el ácido a-fenilacrílico, el ácido maleico, el anhídrido maleico, el ácido fumárico, el ácido itacónico, ácido citracónico, ácido metilenmalónico, ácido sorbínico, ácido cinámico o mezclas de los mismos. Por supuesto, también se pueden utilizar los ácidos dicarboxílicos insaturados.

En el caso de los monómeros que contienen grupos de ácido sulfónico, son preferibles los de la fórmula R5(R6)C=C(R7)-X-SO<3>H, en la que R5 a R7 representan, de modo independiente entre sí, -H, -CH<3>, un resto alquilo saturado de cadena lineal o ramificada con 2 a 12 átomos de carbono, un resto alquenilo de cadena lineal o ramificada, mono- o poliinsaturado con 2 a 12 átomos de carbono, con -NH<2>, -OH o -COOH, o para -COOH o -COOR4, en los que R4 es un resto hidrocarbonado saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada, con 1 a 12 átomos de carbono, y X representa un grupo espaciador opcional, seleccionado de -(CH<2>)n- con n = 0 a 4, -COO-(CH<2>)k- con k = 1 a 6, -C(O)-NH-C(CH3)2-, -C(O)-NH-C(CH3)2-CH2- y -C(O)-NH-CH(CH2CH3)-.

Entre estos monómeros se prefieren los de las fórmulas H<2>C=CH-X-SO<3>H, H<2>C=C(CH<3>)-X-SO<3>H y HO<3>S-X-(R6)C=C(R7)-X-SO<3>H, en las que R6 y R7 se seleccionan de modo independiente entre sí de -H, -CH<3>, -CH<2>CH<3>, -CH<2>CH<2>CH<3>, -CH(CH3)2 y X representa un grupo espaciador opcional seleccionado de -(CH<2>)n- con n = 0 a 4, -COO-(CH<2>)k- con k = 1 a 6, -C(O)-NH-C(CH3)2-,-C(O)-NH-C(CH3)2-CH2- y -C(O)-NH CH(CH2CH3)-.

Los monómeros que contienen grupos de ácido sulfónico especialmente preferidos son el ácido 1-acrilamido-1-propansulfónico, el ácido 2-acrilamido-2-propansulfónico, el ácido 2-acrilamido-2-metil-1-propansulfónico, el ácido 2-metacrilamido-2-metil-1-propansulfónico, ácido 3-metacrilamido-2-hidroxi-propansulfónico, ácido alilsulfónico, ácido metalisulfónico, ácido aliloxibencenosulfónico, ácido metaliloxibencenosulfónico, ácido 2-hidroxi-3-(2-propeniloxi)propansulfónico, ácido 2-metil-2-propen-1-sulfónico, ácido estirenosulfónico, ácido vinilsulfónico, acrilato de 3-sulfopropilo, metacrilato de 3-sulfopropilo, sulfometacrilamida, sulfometilmetacrilamida, así como mezclas de los ácidos mencionados o sus sales solubles en agua.

En los polímeros, los grupos de ácido sulfónico pueden estar presentes total o parcialmente en forma neutralizada. Según la invención, es preferible el uso de copolímeros que contengan grupos de ácido sulfónico parcial o totalmente neutralizados. La masa molar de los copolímeros sulfatados preferidos según la invención puede variarse para adaptar las propiedades de los polímeros al uso deseado. Los detergentes para lavavajillas a máquina preferidos se caracterizan por que los copolímeros tienen masas molares de 2000 a 200000 g/mol, preferiblemente de 4000 a 25000 g/mol y, en particular, de 5000 a 15000 g/mol.

En otra forma de realización preferida, los copolímeros comprenden, además de monómeros que contienen grupos carboxilo y monómeros que contienen grupos sulfónicos, al menos un monómero no iónico, preferiblemente hidrófobo. Mediante el uso de estos polímeros modificados hidrófobos, se ha podido mejorar en particular el rendimiento de aclarado de los detergentes para lavavajillas según la invención.

Se prefieren los detergentes y productos de limpieza que contienen un copolímero que comprende i) monómero(s) que contiene(n) grupos de ácido carboxílico, ii) monómero(s) que contiene(n) grupos de ácido sulfónico, iii) monómero(s) no iónico(s). Mediante el uso de estos terpolímeros, se ha mejorado el rendimiento de aclarado de los detergentes para lavavajillas mecánicos según la invención en comparación con detergentes para lavavajillas comparables que contienen sulfopolímeros sin adición de monómeros no iónicos.

Como monómeros no iónicos se utilizan preferiblemente monómeros de la fórmula general R1(R2)C=C(R3)-X-R4, en la que R1 a R3 representan, de modo independiente entre sí, -H, -CH<3>o -C<2>H<5>, X representa un grupo espaciador opcional, seleccionado de -CH<2>-, -C (O)O-y -C(O)-NH-, y R4 representa un resto alquilo saturado de cadena lineal o ramificada con 2 a 22 átomos de carbono o un resto insaturado, preferiblemente aromático, con 6 a 22 átomos de carbono. Los monómeros no iónicos especialmente preferidos son buteno, isobuteno, penteno, 3-metilbuteno, 2 -metilbuteno, ciclopenteno, hexeno, hexeno-1, 2-metilpenteno-1, 3-metilpenteno-1, ciclohexeno, metilciclopenteno, ciclohepteno, metilciclohexeno, 2,4,4-trimetilpenteno-1, 2,4,4-trimetilpenteno-2, 2,3-dimetilhexeno-1, 2,4-dimetilhexeno-1, 2,5-dimetilhexeno-1, 3,5-dimetilhexeno-1, 4,4-dimetilhexano-1, etilciclohexina, 1-octeno, a -olefinas con 10 o más átomos de carbono, como por ejemplo 1-deceno, 1-dodeceno, 1-hexadeceno, 1-octadeceno y C22-a-olefina, 2-estireno, a-metilestireno, 3-metilestireno, 4-propilestireno, 4-ciclohexilestireno, 4 -dodecilestireno, 2-etil-4-bencilestireno, 1-vinilnaftaleno, 2-vinilnaftaleno, metil éster de ácido acrílico, etil éster de ácido acrílico, propil éster de ácido acrílico, butil éster de ácido acrílico, pentil éster de ácido acrílico, hexil éster de ácido acrílico, metil éster de ácido metacrílico, N-metilacrilamida, 2-etilhexil éster de ácido acrílico, 2-etilhexil éster de ácido metacrílico, N-2-etilhexilacrilamida, octil éster de ácido acrílico, octil éster de ácido metacrílico, N-octilacrilamida, lauril éster de ácido acrílico, lauril éster de ácido metacrílico, N-(lauril)acrilamida, estearil éster de ácido acrílico, estearil éster de ácido metacrílico, N-(estearil)acrilamida, behenil éster de ácido acrílico, behenil éster de ácido metacrílico y N-(behenil)acrilamida o sus mezclas.

La proporción en peso de los copolímeros que contienen grupos de ácido sulfónico en el peso total de los medios según la invención es preferiblemente del 0,1 al 15 % en peso, preferiblemente del 1,0 al 12 % en peso y, en particular, del 2,0 al 10 % en peso.

Como compuestos de peróxido adecuados para su uso en los medios según la invención, se utilizan en particular perácidos orgánicos o sales perácidas de ácidos orgánicos, como el ácido ftalimidopercaproico, ácido perbenzoico o sales del diácido diperdodecanoico, peróxido de hidrógeno y, en condiciones de lavado, sales inorgánicas que liberan peróxido de hidrógeno, entre las que se incluyen el perborato, el percarbonato, el persilicato y/o el persulfato, como el caroato, así como compuestos de inclusión de peróxido de hidrógeno, como los aductos de H<2>O<2>-urea. El peróxido de hidrógeno también puede generarse con ayuda de un sistema enzimático, es decir, una oxidasa y su sustrato. Si se van a utilizar compuestos de peróxido sólidos, estos pueden emplearse en forma de polvos o gránulos, que en principio también pueden estar recubiertos de la manera conocida. Los compuestos de peróxido de hidrógeno pueden añadirse al detergente tal cual o en forma de agentes que los contengan, los cuales, en principio, pueden contener todos los componentes habituales de los detergentes, productos de limpieza o desinfectantes. Se prefiere especialmente el percarbonato alcalino o el perborato alcalino monohidratado. Si un producto según la invención contiene compuestos de peróxido de hidrógeno, estos deben estar presentes en cantidades preferibles de hasta un 50 % en peso, en particular de entre un 5 y un 30 % en peso, y más preferiblemente de entre un 0,1 y un 20 % en peso.

Como activadores de blanqueo, se pueden utilizar en los productos compuestos que, en condiciones de perhidrólisis, dan lugar a ácidos peroxocarboxílicos alifáticos con preferiblemente de 1 a 10 átomos de carbono, en particular de 2 a 4 átomos de carbono, y/o, en su caso, ácido perbenzoico sustituido. Son adecuadas las sustancias que contienen grupos O - y/o N-acilo con el número de átomos de carbono mencionado y/o grupos benzoilo sustituidos, si procede. Son preferibles las alquilendiaminas aciladas múltiples, en particular la tetraacetiletilendiamina (TAED), los derivados acilados de la triazina, en particular la 1,5-diacetil-2,4-dioxohexahidro-1,3,5-triazina (DADHT), las glicolurilas aciladas, en particular la tetraacetilglicolurila (TAGU), N-acilimidas, en particular nonanoilsuccinimida (NOSI), fenolsulfonatos o carboxilatos acilados o los ácidos sulfónicos o carboxílicos de estos, en particular nonanoil- o isononananoiloxibencenosulfonato o laroiloxibencenosulfonato (NOBS o iso-NOBS o LOBS), 4-(2-decanoiloxietoxicarboniloxi)bencenosulfonato (DECOBS) o decanoiloxibenzoato (DOBA), anhídridos de ácidos carboxílicos, en particular anhídrido Itálico, alcoholes polivalentes acilados, en particular triacetina, diacetato de etilenglicol, 2,5-diacetoxi-2,5-dihidrofurano y ésteres de enol, así como sorbitol acetilado y manitol o sus mezclas descritas (SORMAN), derivados acilados de azúcares, en particular pentaacetilglucosa (PAG), pentaacetilfructosa, tetraacetilxilosa y octaacetillactosa, glucamina acetilada, en su caso N-alquilada, y gluconolactona, lactamas N-aciladas, por ejemplo, N-benzoilcaprolactama, nitrilos, a partir de los cuales se forman ácidos perimídicos, en particular derivados de aminoacetonitrilo con átomo de nitrógeno cuaternario, y/o sulfoniminas que transfieren oxígeno y/o acilhidrazonas. También se utilizan preferiblemente los acilacetales sustituidos por grupos hidrófilos y las acil-lactamas. También se pueden utilizar combinaciones de activadores de blanqueo convencionales. Estos activadores de blanqueo pueden estar presentes, especialmente en presencia de los agentes blanqueadores que aportan peróxido de hidrógeno mencionados con anterioridad, en las cantidades habituales, preferiblemente en cantidades del 0,5 al 10 % en peso, en particular del 1 al 8 % en peso, en relación con el producto total, pero es preferible que no estén presentes cuando se utiliza ácido percarboxílico como único agente blanqueador.

Además de los activadores de blanqueo convencionales o en sustitución de estos, los productos sólidos también pueden contener sulfoniminas y/o sales de metales de transición que potencian el blanqueo o complejos de metales de transición, denominados catalizadores de blanqueo.

Un detergente para lavavajillas según la invención comprende además un activador de blanqueo. Estas sustancias son preferiblemente sales de metales de transición que potencian el blanqueo o complejos de metales de transición, como por ejemplo complejos salen o carbonílicos de Mn, Fe, Co, Ru o Mo. También se pueden utilizar como catalizadores blanqueadores complejos de Mn, Fe, Co, Ru, Mo, Ti, V y Cu con ligandos tripódicos que contienen N, así como complejos de Co, Fe, Cu y Ru con aminas.

Se utilizan con especial preferencia los complejos de manganeso en los estados de oxidación II, III, IV o IV, que contienen preferiblemente uno o varios ligandos macrocíclicos con las funciones donantes N, NR, PR, O y/o S. Se utilizan preferiblemente ligandos que presentan funciones donantes de nitrógeno. Es especialmente preferible utilizar catalizadores de blanqueo en los medios según la invención, que contienen como ligandos macromoleculares 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclonona (Me-TACN), 1,4,7-triazaciclononano (TACN), 1,5,9-trimetil-1,5,9-triazaciclododecano (Me-TACD), 2-metil-1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclonona (Me/Me-TACN) y/o 2-metil-1,4,7-triazaciclonona (Me/TACN). Los complejos de manganeso adecuados son, por ejemplo: [Mnm<2>(ji-O)<1>(ji-OAc)<2>(TACN)<2>] (ClO<4>)<2>, [MnmMnIV(M-O)2(M-OAc)i(TACN)2](BPh4)2, [MnIV 4(j-O)6(TACN)4](CLO4)4, [Mnm<2>(ji-O)<1>(ji-OAc)<2>(Me-TACN)2](ClO4)2, [MnmMnIV(|j-O)i(|j-OAc)2(Me-TACN)2](ClO4)3, [MnIV<2>( j O)3(Me-TACN)2](PFa)2 und [MnIV 2(j-O)3 (Me/Me-TACN)<2>](PFa)<2>(OAc = OC(O)CH ).

Detergente para lavavajillas, en particular detergente para lavavajillas a máquina, caracterizado por contener un catalizador de blanqueo seleccionado del grupo de las sales de metales de transición potenciadoras del blanqueo y los complejos de metales de transición, preferiblemente del grupo de los complejos de manganeso con 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclonona (Me-TACN) o 1,2,4,7-tetrametil-1,4,7-triazaciclonona (Me/Me-TACN), son preferidos según la invención, ya que los catalizadores de blanqueo mencionados con anterioridad pueden mejorar significativamente el resultado de la limpieza.

Los complejos de metales de transición potenciadores del blanqueo mencionados con anterioridad, en particular con los átomos centrales Mn y Co, se utilizan preferiblemente en una cantidad de hasta un 5 % en peso, en particular del 0,0025 al 1 % en peso y, de forma especialmente preferida, del 0,01 al 0,30 % en peso, en cada caso en relación con el peso total de los agentes que contienen catalizadores de blanqueo. Sin embargo, en casos especiales también se puede utilizar más catalizador de blanqueo.

Como componente adicional, los medios según la invención pueden contener un disolvente orgánico. La adición de disolventes orgánicos tiene un efecto beneficioso sobre la estabilidad enzimática y el poder limpiador de estos productos. Los disolventes orgánicos preferidos pertenecen al grupo de los alcoholes monovalentes o polivalentes, las alcanolaminas o los éteres de glicol. Se seleccionan preferiblemente disolventes como etanol, n- o i-propanol, butanol, glicol, propanodiol o butanodiol, glicerina, diglicol, propil- o butildiglicol, hexilenglicol, etilenglicol metil éter, etilenglicol etil éter, etilenglicol propil éter, etilenglicol monobutil éter, dietilenglicol metil éter, dietilenglicol etil éter, propilenglicol metil, etil o propil éter, dipropilenglicol metil o etil éter, metoxi, etoxi o butoxitriglicol, 1-butoxietoxi-2-propanol, 3-metil-3-metoxibutanol, propilenglicol-t-butil éter, así como mezclas de estos disolventes. La proporción en peso de estos disolventes orgánicos con respecto al peso total de los medios según la invención es preferiblemente del 0,1 al 10 % en peso, preferiblemente del 0,2 al 8,0 % en peso y, en particular, del 0,5 al 5,0 % en peso. Un disolvente orgánico especialmente preferido y particularmente eficaz para la estabilización de los medios es la glicerina, así como el 1,2-propilenglicol. Son preferidos según la invención los medios líquidos que contienen al menos un poliol, preferiblemente del grupo de la glicerina y el 1,2-propilenglicol, en los que la proporción en peso del poliol en el peso total del medio es preferiblemente del 0,1 al 10 % en peso, preferiblemente del 0,2 al 8,0 % en peso y, en particular, del 0,5 al 5,0 % en peso. Otros disolventes orgánicos preferidos son las aminas orgánicas y las alcanolaminas. Los productos según la invención contienen estas aminas preferiblemente en cantidades del 0,1 al 10 % en peso, preferiblemente del 0,2 al 8,0 % en peso y, en particular, del 0,5 al 5,0 % en peso, en cada caso en relación con su peso total. Una alcanolamina especialmente preferida es la etanolamina.

Otro componente preferido de los detergentes y productos de limpieza según la invención es un alcohol de azúcar (alditol). El grupo de los alditoles comprende polioles no cíclicos de la fórmula HOCH<2>[CH(OH)]nCH<2>OH. Entre los alditoles se encuentran, por ejemplo, el manitol (manitol), la isomalta, el lactitol, el sorbitol (sorbitol) y el xilitol (xilitol), la treitol, el eritritol y el arabitol. El sorbitol ha demostrado ser especialmente beneficioso en lo que respecta a la estabilidad enzimática. La proporción en peso del alcohol de azúcar en el peso total del detergente y producto de limpieza es preferiblemente del 1,0 al 10 % en peso, preferiblemente del 2,0 al 8,0 % en peso y, en particular, del 3,0 al 6,0 % en peso.

Un producto según la invención contiene la proteasa, preferiblemente en una cantidad de 2 |jg a 20 mg, preferiblemente de 5 jg a 17,5 mg, de especial preferencia de 20 jg a 15 mg y de muy especial preferencia, de 50 jg a 10 mg por g del producto. Además, la proteasa contenida en el producto y/u otros componentes del mismo pueden estar recubiertos con una sustancia impermeable a la enzima a temperatura ambiente o en ausencia de agua, que se vuelve permeable a la enzima en las condiciones de uso del producto. Una forma de realización de la invención se caracteriza, por lo tanto, por el hecho de que la proteasa está recubierta con una sustancia impermeable a la proteasa a temperatura ambiente o en ausencia de agua. Además, el detergente o producto de limpieza también puede estar envasado en un recipiente, preferiblemente permeable al aire, del que se libera poco antes de su uso o durante el proceso de lavado/enjuague.

Estas formas de realización de la presente invención comprenden todas las formas de administración sólidas, pulverulentas, granulares, en comprimidos, líquidas, gelatinosas o pastosas de los medios según la invención, que también pueden consistir en varias fases y estar en forma comprimida o no comprimida. El agente puede presentarse en forma de polvo fluido, en particular con un peso aparente de 300 a 1200 g/l, en particular de 500 a 900 g/l o de 600 a 850 g/l. Entre las formas de administración sólidas del producto se incluyen además extrudados, granulados, comprimidos o bolsas que contienen productos sólidos, que pueden presentarse tanto en envases grandes como en envases individuales. Alternativamente, el producto también puede ser líquido, gelatinoso o pastoso, por ejemplo, en forma de producto no acuoso o pasta no acuosa, o en forma de producto acuoso o pasta acuosa. Además, el producto puede presentarse como un sistema de un solo componente. Estos productos constan de una sola fase. Alternativamente, un producto también puede estar compuesto por varias fases (sistema multicomponente). Por lo tanto, dicho producto se divide en varios componentes, por ejemplo, dos fases líquidas, dos fases sólidas o una fase líquida y una fase sólida. La forma líquida a base de agua y/o disolventes orgánicos puede estar espesada, en forma de geles.

Una sustancia, por ejemplo, una composición o un agente, se considera sólida según la definición de la invención si se encuentra en estado sólido a 25 °C y 1,013 mbar.

Una sustancia, por ejemplo, una composición o un agente, se considera líquida según la definición de la invención si se encuentra en estado líquido a 25 °C y 1,013 mbar. El término “líquido” también incluye el estado gelatinoso. Los agentes según la invención se presentan preferiblemente en forma líquida. Los detergentes y productos de limpieza preferidos contienen, en relación con su peso total, más del 40 % en peso, preferiblemente entre el 50 y el 90 % en peso y, en particular, entre el 60 y el 80 % en peso de agua.

Los productos aquí descritos, en particular los detergentes para lavavajillas, y más preferiblemente los detergentes para lavavajillas automáticos, se presentan preferiblemente en unidades de dosificación preconfeccionadas. Estas unidades de dosificación contienen preferiblemente la cantidad de sustancias activas de limpieza necesaria para un ciclo de limpieza. Las unidades de dosificación preferidas tienen un peso de entre 12 y 30 g, preferiblemente entre 14 y 26 g y, en particular, entre 15 y 22 g. El volumen de las unidades de dosificación mencionadas con anterioridad, así como su forma espacial, se eligen con especial preferencia de manera que se garantice la dosificación de las unidades prefabricadas a través de la cámara de dosificación de un lavavajillas. Por lo tanto, el volumen de la unidad de dosificación es preferiblemente de entre 10 y 35 ml, preferiblemente de entre 12 y 30 ml.

Los productos, en particular los detergentes para lavavajillas, y en particular las unidades de dosificación prefabricadas, presentan con especial preferencia un envoltorio soluble en agua. El envoltorio soluble en agua está formado preferiblemente por un material laminar soluble en agua, seleccionado del grupo que consiste en polímeros o mezclas de polímeros. La envoltura puede estar formada por una o dos o más capas del material laminar soluble en agua. El material laminar soluble en agua de la primera capa y de las capas adicionales, si las hay, puede ser igual o diferente. Son especialmente preferibles las láminas que, por ejemplo, pueden pegarse y/o sellarse para formar envases como tubos o almohadillas después de haber sido llenadas con un producto.

El envase soluble en agua puede tener una o más cámaras. El agente puede estar contenido en una o varias cámaras, si las hay, de la envoltura soluble en agua. La cantidad de agente corresponde preferiblemente a la dosis completa o a la mitad de la dosis necesaria para un ciclo de lavado.

Es preferible que el recubrimiento soluble en agua contenga alcohol polivinílico o un copolímero de alcohol polivinílico. Los recubrimientos solubles en agua que contienen alcohol polivinílico o un copolímero de alcohol polivinílico presentan una buena estabilidad con una solubilidad en agua suficientemente alta, especialmente en agua fría. Las láminas solubles en agua adecuadas para la fabricación del recubrimiento soluble en agua se basan preferiblemente en un alcohol polivinílico o un copolímero de alcohol polivinílico cuyo peso molecular se encuentra en el intervalo de 5000 a 1000000 g/mol, preferiblemente de 20000 a 500000 g/mol, de especial preferencia de 30 000 a 100000 g/mol y, en particular, de 40 000 a 80000 g/mol. Las láminas solubles en agua adecuadas para su uso en los envoltorios solubles en agua de los envases solubles en agua según la invención son láminas comercializadas por la empresa MonoSol LLC, por ejemplo, con la denominación M8630, Cs400 o M8900. Otras láminas adecuadas son las láminas con la denominación Solublon® PT, Solublon® GA, Solublon® KC o Solublon® KL de Aicello Chemical Europe GmbH o las láminas VF-HP de Kuraray.

Estos recubrimientos solubles en agua también se describen en las solicitudes de patente WO2004031338A y WO2003099985A, cuya divulgación se menciona aquí en su totalidad.

Por lo general, las enzimas no se suministran en forma de proteína pura, sino en forma de preparaciones estabilizadas que pueden almacenarse y transportarse. Entre estas preparaciones preconfeccionadas se encuentran, por ejemplo, las preparaciones sólidas obtenidas por granulación, extrusión o liofilización o, especialmente en el caso de los productos líquidos o gelatinosos, soluciones de las enzimas, preferiblemente lo más concentradas posible, con bajo contenido en agua y/o mezcladas con estabilizadores u otros aditivos. Además, es posible combinar dos o más enzimas, de modo que un solo gránulo tenga varias actividades enzimáticas.

Los detergentes o productos de limpieza según la invención pueden contener exclusivamente una proteasa de Bacillus gibsonii, tal como se define aquí. Alternativamente, también pueden contener otras enzimas en una concentración adecuada para la eficacia del producto. Por lo tanto, otra forma de realización de la invención son los productos que además contienen una o varias enzimas adicionales. Como enzimas adicionales se pueden utilizar preferiblemente todas las enzimas que pueden desarrollar una actividad catalítica en el producto según la invención, en particular una lipasa, amilasa, celulasa, hemicelulasa, mananasa, tanasa, xilanasa, xantanasa, xiloglucanasa, pglucosidasa, pectinasa, carrageninasa, perhidrolasa, oxidasa, oxidorreductasa u otras proteasas distinguibles de la proteasa según la invención, así como sus mezclas. Es preferible que el producto contenga otras enzimas en una cantidad de 1 x 10-8 a 5 % en peso con respecto a la proteína activa. Cada vez es más preferible que cada enzima adicional esté presente en una cantidad de 1 x 10-7 a 3 % en peso, del 0,00001 al 1 % en peso, del 0,00005 al 0,5 % en peso, del 0,0001 al 0,1 % en peso y, especialmente preferible, del 0,0001 al 0,05 % en peso en los medios según la invención, en relación con la proteína activa. Las enzimas muestran de manera especialmente preferida propiedades de limpieza sinérgicas frente a determinadas suciedades o manchas, es decir, las enzimas contenidas en la composición del medio se refuerzan mutuamente en su capacidad de limpieza. Es especialmente preferible que exista tal sinergia entre la proteasa contenida en la invención y otra enzima de un producto según la invención, en particular entre la proteasa mencionada y una amilasa y/o una lipasa y/o una mananasa y/o una celulasa y/o una pectinasa. Los efectos sinérgicos no solo pueden producirse entre diferentes enzimas, sino también entre una o varias enzimas y otros ingredientes del producto según la invención.

Algunos ejemplos de proteasas son la subtilisina BPN' de Bacillus amyloliquefaciens y Carlsberg de Bacillus licheniformis, la proteasa PB92, las subtilisinas 147 y 309, la proteasa de Bacillus lentus, la subtilisina DY y las enzimas termitas, proteinasa K y las proteasas TW3 y TW7, que ya no se pueden clasificar como subtilisinas en sentido estricto, pero sí como subtilasas. La subtilisina Carlsberg está disponible en una forma más avanzada con el nombre comercial Alcalase® de la empresa Novozymes. Las subtilisinas 147 y 309 se comercializan con los nombres comerciales Esperase® y Savinase® por la empresa Novozymes. De la proteasa del Bacillus lentus DSM 5483 se derivan las variantes de proteasa comercializadas con la denominación BLAP®. Otras proteasas útiles son, por ejemplo, las comercializadas con los nombres comerciales Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym®, Natalase®, Kannase® y Ovozyme® por la empresa Novozymes, y con los nombres comerciales Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime, Excellase® y Properase® por la empresa Danisco/Genencor, con el nombre comercial Protosol® de la empresa Advanced Biochemicals Ltd., con el nombre comercial Wuxi® de la empresa Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., con los nombres comerciales Proleather® y Protease P® de la empresa Amano Pharmaceuticals Ltd., y con la denominación Proteinase K-16 de la empresa Kao Corp. También se utilizan de forma especialmente preferente las proteasas de Bacillus gibsonii y Bacillus pumilus, descritas en las solicitudes de patente internacional WO2008086916 y WO2007131656. Otras proteasas que pueden utilizarse de forma ventajosa se describen en las solicitudes de patente WO9102792, WO2008007319, WO9318140, WO0144452, GB1243784, WO9634946, WO2002029024 y WO2003057246. Otras proteasas utilizables son las que se encuentran de forma natural en los microorganismos Stenotrophomonas maltophilia, en particular Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius y Bacillus sphaericus.

Ejemplos de amilasas son las a-amilasas de Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens o Bacillus stearothermophilus, así como, en particular, sus desarrollos mejorados para su uso en detergentes o productos de limpieza. La enzima procedente de Bacillus licheniformis está disponible en el mercado con el nombre de Termamyl®, comercializada por la empresa Novozymes, y con el nombre de Purastar® ST, comercializada por la empresa Danisco/Genencor. Los productos derivados de esta a-amilasa están disponibles en el mercado con los nombres comerciales Duramyl® y Termamyl® ultra, comercializados por la empresa Novozymes; con el nombre Purastar® OxAm, comercializado por la empresa Danisco/Genencor; y con el nombre Keistase®, comercializado por la empresa Daiwa Seiko Inc. La a-amilasa de Bacillus amyloliquefaciens es comercializada por la empresa Novozymes con el nombre BAN®, y las variantes derivadas de la a-amilasa de Bacillus stearothermophilus con los nombres BSG® y Novamyl®, también por la empresa Novozymes. Además, cabe destacar para este fin la a-amilasa de Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) y la ciclodextrina-glucanotransferasa (CGTasa) de Bacillus agaradherens (DSM 9948). También se pueden utilizar las enzimas amilolíticas descritas en las solicitudes de patente internacional WO2003002711, WO2003054177 y WO2007079938, a cuya divulgación se hace referencia expresa o cuyo contenido divulgativo se incluye expresamente en la presente solicitud de patente. También se pueden utilizar productos de fusión de todas las moléculas mencionadas. Además, son adecuados los desarrollos posteriores de la a-amilasa de Aspergillus niger y A. oryzae disponibles bajo el nombre comercial Fungamyl® de la empresa Novozymes. Otros productos comerciales que pueden utilizarse de forma ventajosa son, por ejemplo, Amylase-LT® y Stainzyme® o Stainzyme ultra® y Stainzyme plus®, así como Amplify™ o Amplify Prime™, también de la empresa Novozymes. Las variantes de estas enzimas obtenidas mediante mutaciones puntuales también pueden utilizarse según la invención.

Ejemplos de celulasas (endoglucanasas, EG) son el preparado de celulasa rico en endoglucanasa (EG) de origen fúngico y sus derivados, comercializados por la empresa Novozymes con el nombre comercial Celluzyme®. Los productos Endolase® y Carezyme®, también disponibles en Novozymes, se basan en la EG de 50 kD y la EG de 43 kD de Humicola insolens DSM 1800. Otros productos comerciales de esta empresa son Cellusoft®, Renozyme® y Celluclean®. También se pueden utilizar, por ejemplo, las celulasas comercializadas por la empresa AB Enzymes con los nombres comerciales Ecostone® y Biotouch®, que se basan, al menos en parte, en la EG de 20 kD procedente de Melanocarpus. Otras celulasas de la empresa AB Enzymes son Econase® y Ecopulp®. Otras celulasas adecuadas son las procedentes de Bacillus sp. CBS 670.93 y CBS 669.93, estando la procedente de Bacillus sp. CBS 670.93 disponible a través de la empresa Danisco/Genencor con el nombre comercial Puradax®. Otros productos comerciales utilizables de la empresa Danisco/Genencor son “Genencor detergent cellulase L” e IndiAge®Neutra.

Ejemplos de lipasas o cutinasas que se utilizan especialmente por su actividad de escisión de triglicéridos, pero también para producir perácidos in situ a partir de precursores adecuados, incluyen, por ejemplo, las lipasas disponibles originalmente a partir de Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus), en particular aquellas con uno o varios de los siguientes intercambios de aminoácidos a partir de la lipasa mencionada en las posiciones D96L, T213R y/o N233R, especialmente preferidas T213R y N233R. Las lipasas son comercializadas, por ejemplo, por la empresa Novozymes con los nombres comerciales Lipolase®, Lipolase® Ultra, LipoPrime®, Lipozyme® y Lipex®. Otra lipasa que se puede utilizar de forma ventajosa está disponible con el nombre comercial Lipoclean® de la empresa Novozymes. Además, se pueden utilizar, por ejemplo, las cutinas, que se aislaron originalmente de Fusarium solani pisi y Humicola insolens. La empresa Amano comercializa otras lipasas igualmente útiles con los nombres Lipase Ce®, Lipase P®, Lipase B®, Lipase CES®, Lipase AKG®, Bacillus sp. Lipase®, Lipase AP®, Lipase M-AP® y Lipase AML®. La empresa Danisco/Genencor comercializa, por ejemplo, lipasas y cutinasas cuyas enzimas originales se aislaron originalmente de Pseudomonas mendocina y Fusarium solanii. Otros productos comerciales importantes son las preparaciones M1 Lipase® y Lipomax®, comercializadas originalmente por la empresa Gist-Brocades (ahora Danisco/Genencor), y las enzimas comercializadas por la empresa Meito Sangyo KK con los nombres Lipase MY-30®, Lipase OF® y Lipase PL®, así como el producto Lumafast® de la empresa Danisco/Genencor.

Para aumentar el efecto blanqueador, según la invención se pueden utilizar oxirreductasas, por ejemplo, oxidasas, oxigenasas, catalasas, peroxidasas, como haloperoxidasas, peroxidasas de cloro, peroxidasas de bromo, peroxidasas de lignina, peroxidasas de glucosa o peroxidasas de manganeso, dioxigenasas o lacrasas (fenoloxidasas, polifenoloxidasas). De manera ventajosa, se añaden además compuestos orgánicos, especialmente aromáticos, que interactúan con las enzimas, para reforzar la actividad de las oxirreductasas en cuestión (potenciadores) o para garantizar el flujo de electrones en caso de potenciales redox muy diferentes entre las enzimas oxidantes y la suciedad (mediadores).

Otro objeto de la invención es un procedimiento para la limpieza de textiles y/o superficies duras, en particular vajilla, caracterizado porque en al menos una etapa del procedimiento se utiliza un agente según la invención.

Un método de limpieza preferido es el lavado a máquina. La dosificación del producto según la invención en el líquido de limpieza puede realizarse en dicho procedimiento, por ejemplo, mediante la cámara dosificadora situada en la puerta o mediante un recipiente dosificador adicional en el interior del lavavajillas. Alternativamente, el producto también puede aplicarse directamente sobre la vajilla sucia o sobre una de las paredes interiores del lavavajillas, por ejemplo, el interior de la puerta. El procedimiento según la invención se lleva a cabo en el interior de un lavavajillas convencional. En un lavavajillas, el programa de limpieza puede ser seleccionado y fijado por el consumidor antes de iniciar el proceso de lavado. El programa de limpieza del lavavajillas utilizado en el procedimiento según la invención comprende al menos un ciclo de prelavado y un ciclo de limpieza. Según la invención, se prefieren los programas de limpieza que incluyen otros ciclos de limpieza o aclarado, por ejemplo, un ciclo de aclarado. El procedimiento según la invención es, con especial preferencia, parte de un programa de limpieza que incluye un ciclo de prelavado, un ciclo de limpieza y un ciclo de aclarado. El procedimiento según la invención se utiliza preferiblemente en combinación con programas de limpieza en los que el líquido de lavado se calienta durante el ciclo de limpieza. En una forma de realización preferida del procedimiento según la invención, el ciclo de limpieza durante el cual se dosifica el producto según la invención en el interior del lavavajillas se caracteriza porque, durante su transcurso, la temperatura del líquido de limpieza aumenta hasta valores superiores a 30 °C, preferiblemente superiores a 40 °C y, en particular, superiores a 50 °C.

En diferentes formas de realización, el procedimiento descrito con anterioridad se caracteriza por el hecho de que la proteasa se utiliza a una temperatura de 0 a 100 °C, preferiblemente de 10 a 70 °C, más preferiblemente de 30 a 50 °C y más preferiblemente a 45 °C.

Las formas de realización alternativas de la presente invención también incluyen procedimientos para la limpieza de textiles, así como procedimientos para el tratamiento de materias primas textiles o para el cuidado de textiles, en los que se utiliza un agente según la invención en al menos una etapa del procedimiento. Se prefieren los procedimientos para materias primas textiles, fibras o textiles con componentes naturales, y muy especialmente para aquellos con lana o seda.

Otro objeto de la invención es el uso de un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por derivados del ácido fenilborónico, ácido bórico, inhibidores de peptidasas y combinaciones de los mismos, para mejorar la estabilidad de una proteasa de Bacillus gibsonii en detergentes o productos de limpieza y/o, en su caso, otras enzimas presentes en el detergente o producto de limpieza.

Todos los hechos, objetos y formas de realización descritos para la proteasa según la invención y los medios que la contienen son también aplicables a estos objetos de la invención. Por lo tanto, se hace referencia expresa a la divulgación en el lugar correspondiente, con la indicación de que esta divulgación también se aplica al uso anterior según la invención.

Ejemplo

Estabilidad de almacenamiento de las enzimas en detergente para lavavajillas

Se utilizó un detergente líquido para lavavajillas disponible en el mercado. La matriz del detergente para lavavajillas tenía la siguiente composición:

continuación

Si se utiliza ácido bórico como compuesto estabilizador, se incorpora a la matriz en una proporción del 1 % y se ajusta el valor del pH antes de incorporar las enzimas.

Si se utiliza 4-FPBA como compuesto estabilizador, se añade a la preparación enzimática en una proporción del 2 %.

Si se utiliza un inhibidor de péptidos como compuesto estabilizador, se añade a la preparación enzimática en una proporción del 0,5 mM. Como ejemplo de inhibidor de péptidos se ha utilizado en este caso Cbz-Gly-Ala-Tyr-H. Las enzimas, mezcladas con el inhibidor si es necesario, se incorporan a la matriz del detergente para lavavajillas con un contenido de enzima activa del 0,12 %. Se utilizan las siguientes proteasas:

P1: proteasa según SEQ ID NO: 5 de WO2017215925

P2: Coronase 48L (disponible comercialmente en Novozymes)

P3: proteasa según SEQ ID NO: 2 de WO2011032988

P4: proteasa según SEQ ID NO: 2 de WO2013060621

La matriz del detergente para lavavajillas con la enzima y el inhibidor se almacenó durante una semana a 40 °C. La actividad de la proteasa se determina mediante la liberación del cromóforo para-nitroanilina (pNA) del sustrato succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-para-nitroanilida (AAPFpNA; Bachem L-1400). La liberación de pNA provoca un aumento de la extinción a 410 nm, cuya evolución temporal es una medida de la actividad enzimática. La medición se realizó a una temperatura de 25 °C, pH 8,6 y una longitud de onda de 410 nm. El tiempo de medición fue de 5 minutos con un intervalo de medición de 20 a 60 segundos.

Método de medición:

10 |jl de solución AAPF (70 mg/ml)

1000 j l de Tris/HCl (0,1 M, pH 8,6 con 0,1 % de Brij 35)

10 j l de solución de proteasa diluida

Cinética durante 5 minutos a 25 °C (410 nm)

Resultados del rendimiento del estabilizador de proteasa

Los resultados tras un almacenamiento de 1 semana a 40 °C se indican en % de estabilización, en relación con la actividad residual de la composición sin adición de un compuesto estabilizador (también almacenado durante 1 semana a 40 °C):

Queda claro que la proteasa P1 se estabiliza mejor con los tres compuestos estabilizadores que las proteasas P2, P3 o P4.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Detergente o producto de limpieza que comprende (i) al menos una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 o 222, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1, y (ii) al menos un compuesto estabilizador seleccionado del grupo que consiste en un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, un inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos.
2. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la al menos una sustitución de aminoácido está seleccionada del grupo que consiste en Q12L, I43V, M122L, D127P, N154S, T156A, G160S, M211N, M211L, P212D, P212H o A222S, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1.
3. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde la proteasa presenta una de las siguientes variantes de sustitución de aminoácidos, en cada caso con respecto a la numeración según SEQ ID NO: 1: (i) I43V; (ii) M122L, N154S y T156A; (iii) M211N y P212D; (iv) M211L y P212D; (v) G160S; (vi) D127P, M211L y P212D; (vii) P212H; o (viii) Q12L, M122L y A222S.
4. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el porcentaje en peso de la proteasa con respecto al peso total del detergente o producto de limpieza, en relación con la proteína activa, es del 0,005 al 5,0 % en peso, preferiblemente del 0,05 al 2 % en peso, más preferiblemente del 0,01 al 0,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,02 al 0,2 % en peso.
5. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el inhibidor de péptidos se selecciona del grupo formado por un compuesto de la fórmula (I), un compuesto de la fórmula (II) y combinaciones de los mismos, en donde opcionalmente el compuesto de la fórmula (I) y/o el compuesto de la fórmula (II) están presentes junto con una sal de la fórmula (III), en donde el compuesto de la fórmula (I) presenta la siguiente fórmula estructural: Z-A-NH-CH(R)-C(O)-X (I), en donde A es un resto de aminoácido; X es hidrógeno; Z es un resto enmascarador de N seleccionado de fosforamidato [(R'O)<2>(O)P-], sulfenamida [(SR')<2>-], sulfonamida [(R'(O)<2>S-], ácido sulfónico [SO<3>H], fosfinamida [(R')<2>(O)P-], derivados de sulfamoílo [R'O(O)<2>S-], tiourea [(R')<2>N(O)C-], tiocarbamato [R'O(S)C-], fosfonato [R'-P(O) OH], fosfato de amida [R'O(OH)(O)P-], carbamato (R'<o>(<o>)C-) y urea (R'NH(O)C-), en donde cada R' se selecciona, de modo independiente, de restos de alquilo C<1>-C<6>no sustituido de cadena lineal o ramificada, fenilo, alquilarilo C<7>-C<9>y cicloalquilo, en donde el anillo cicloalquilo puede ser un anillo cicloalquilo C<4>-C<8>y puede contener uno o varios heteroátomos seleccionados de O, N y S; y R está seleccionado de restos alquilo C<1>-C<6>no sustituido de cadena lineal o ramificada, fenilo y alquilarilo C<7>-C<9>; y estereoisómeros, tautómeros y sales de los mismos; en donde el compuesto de la fórmula (II) presenta la siguiente fórmula estructural: Y-B<1>-B<0>-X (II), en donde X es hidrógeno; B<1>es un resto de aminoácido D o L único; B<0>es un resto de aminoácido e Y está compuesto por uno o varios, preferiblemente uno o dos, restos de aminoácido y, opcionalmente, por un resto enmascarador de N, en donde el resto enmascarador de N se define como en (I); en donde la sal de la fórmula (III) presenta la siguiente fórmula estructural: (CE+)p(DF-)q (III), en donde C es un catión seleccionado del grupo formado por Al3+, Ca2+, Li+, Mg2+, Mn2+, Ni2+, K+, NR"<4>+ y Na+, en donde cada R” representa, de modo independiente, H o un grupo alquilo, arilo o alquenilo lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, que pueden contener opcionalmente uno o varios heteroátomos; E es un número entero de 1 a 3 y corresponde a la valencia/valor del catión; p corresponde al número de cationes en la sal; D es un anión seleccionado del grupo formado por CH<3>COO-, Br, CO<3>2-, Cl-, C<3>HsO(COO)<3>3-, HCOO-, HCO<3>-, HSO<4>- , C<2>O<4>2-, SO<4>2- y SO<3>2-; F es un número entero de 1 a 3 y corresponde a la valencia/valencia del anión; q corresponde al número de aniones en la sal; siendo la carga neta de la sal 0.
6. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con la reivindicación 5, en donde A se selecciona de Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe y Lys; y/o R está seleccionado de metilo, isopropilo, sec-butilo, isobutilo, -C<6>H<5>, -CH<2>-C<6>H<5>y -CH<2>-CH<2>-C<6>H<5>; y/o Z está seleccionado de grupos metil-, etil- o bencilcarbamato [CH<3>O-(O)C-; CH<3>CH<2>O-(O)C-; o C<6>H<5>CH<2>O-(O)C-], grupos metil-, etil- o bencilurea [CH<3>NH-(O)C-; CH<3>CH<2>NH-(O)C-; o CaH<5>CH<2>NH-(O)C-], grupos metil-, etil- o bencilsulfonamida [CH<3>SO<2>-; CH<3>CH<2>SO<2>-; o CaH<5>CH<2>SO<2>-], y grupos metil-, etil- o bencilamidofosfato [CH<3>O(OH)(O)P-; CH<3>CH<2>O(OH)(O)P-; o CaH<5>CH<2>O(OH)(O)P-]; y/o Bo es un resto de aminoácido D o L seleccionado de Tyr, m-tirosina, 3,4-dihidroxifenilalanina, Phe, Val, Met, Nva, Leu, Ile y Nle; y/o B<1>es un resto de aminoácido con un grupo lateral alifático pequeño (opcionalmente sustituido), preferiblemente Ala, Cys, Gly, Pro, Ser, Thr, Val, Nva o Nle; y/o Y es B<2>, B<3>-B<2>, Z-B<2>, Z-B<3>-B<2>, en donde B<2>y B<3>son, cada uno de modo independiente, un resto de aminoácido y Z es un resto enmascarador de N, en donde el resto enmascarador de N se define como en la reivindicación 1 en (I), en donde B<2>se selecciona preferiblemente de Val, Gly, Ala, Arg, Leu, Phe y Thr, y/o B<3>se selecciona preferiblemente de Phe, Tyr, Trp, fenilglicina, Leu, Val, Nva, Nle e Ile.
7. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el derivado del ácido fenilborónico presenta la fórmula estructural general (IV):

en donde R es hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo Ci-Ca, un grupo alquilo Ci-Ca sustituido, un grupo alquenilo Ci-Ca o un grupo alquenilo Ci-Ca sustituido.
8. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el derivado del ácido fenilborónico es ácido 4-formilfenilborónico (4-FPBA).
9. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el compuesto estabilizador se selecciona del grupo compuesto por 4-FPBA, ácido bórico, inhibidor de péptidos, combinación de 4-FPBA y ácido bórico, combinación de 4-FPBA e inhibidor de péptidos, combinación de ácido bórico e inhibidor de péptidos y combinación de 4-FPBA, ácido bórico e inhibidor de péptidos, y/o en donde el inhibidor de péptidos se selecciona preferiblemente del grupo formado por Cbz-Arg-Ala-Tyr-H, Ac-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly Ala-Tyr-H, Cbz-Val-Ala-Tyr-H, Cbz-Gly-Ala-Phe-H, Cbz-Gly-Ala-Val-H, Cbz-Gly-Gly-Tyr-H, Cbz-Gly- Gly-Phe-H, Cbz-Arg-Val-Tyr-H, Cbz-Leu-Val-Tyr-H, Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H, Ac-Tyr-Gly- Ala-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H, Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H, Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H, Ac- Trp-Leu-Val-Tyr-H, MeO-CO-Val-Ala-Leu-H, MeNCO-Val-Ala-Leu-H, MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeO-CO COPhe- Gly-Ala-Phe-H, MeSO<2>-Phe-Gly-Ala-Leu-H, MeSO<2>-Val-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)P-Val-Ala-Leu-H, Et- SO<2>-Phe-Gly-Ala-Leu-H, PhCH<2>SO<2>-Val-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)P-Leu-Ala-Leu-H, PhCH<2>O(OH)(O)Pphe-Ala-Leu-H, MeO(OH)(O)P-Leu-Gly-Ala-Leu-H, a-MAPI, P-mAp I, Phe-urea-Arg-Val-Tyr-H, Phe-urea-Gly- Gly-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Ala-Phe-H, Phe-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-urea-Gly-Ala-Leu-H, Phe-urea-Gly-Ala- Nva-H, Phe-urea-Gly-Ala-Nle-H, Tyr-urea-Arg-Val-Tyr-H, Tyr-urea-Gly-Ala-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val-Phe- H, Phe-Cys-Ser-Arg-Val-Tyr-H, Phe-Cys-Ser-Gly-Ala-Tyr-H, antipaína, GE20372A, GE20372B, quimostatina A, quimostatina B y quimostatina C, y/o en donde la sal de la fórmula (III) es preferiblemente Na<2>SO<4>.
10. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde si el al menos un compuesto estabilizador es un inhibidor de péptidos, este se encuentra en una cantidad del 0,01 al 15 % en peso, preferiblemente del 0,05 al 5 % en peso, más preferiblemente del 0,1 al 1 % en peso y aún más preferiblemente del 0,2 al 0,75 % en peso, con respecto al peso total del detergente o producto de limpieza que lo contiene; y/o si el compuesto estabilizador es un derivado del ácido fenilborónico, en particular 4-FPBA, este se encuentra en una cantidad del 0,0005 al 2,0 % en peso, preferiblemente del 0,001 al 1,0 % en peso, más preferiblemente del 0,01 al 0,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,02 al 0,2 % en peso, en relación con el peso total del detergente o producto de limpieza que lo contiene; y/o si el al menos un compuesto estabilizador es ácido bórico, este se encuentra en una cantidad del 0,05 al 5,5 % en peso, preferiblemente del 0,075 al 4,5 % en peso, más preferiblemente del 0,09 al 3,5 % en peso y aún más preferiblemente del 0,1 al 2,49%en peso, en relación con el peso total del detergente o producto de limpieza que lo contiene.
11. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde comprende al menos otra enzima que se selecciona de amilasas, celulasas, hemicelulasas, mananasas, tannasas, xilanasas, xantanasas, xiloglucanasas, p-glucosidasas, pectinasas, carrageninasas, perhidrolasas, oxidasas, oxidorreductasas, lipasas y combinaciones de las mismas, preferiblemente al menos una amilasa.
12. Detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que es un detergente para lavavajillas, preferiblemente un detergente para lavavajillas a máquina, más preferiblemente un detergente líquido para lavavajillas a máquina.
13. Procedimiento para la limpieza de textiles y/o superficies duras, caracterizado porque en al menos una etapa del procedimiento se utiliza un producto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.
14. Uso de un detergente o producto de limpieza de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para eliminar la suciedad que contiene péptidos o proteínas de textiles o superficies duras.
15. Uso de un compuesto estabilizador seleccionado del grupo formado por un derivado del ácido fenilborónico, ácido bórico, un inhibidor de péptidos y combinaciones de los mismos, para mejorar la estabilidad de una proteasa en detergentes o productos de limpieza, en donde la proteasa comprende una secuencia de aminoácidos que presenta al menos un 80 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO: 1 en toda su longitud y que presenta una sustitución de aminoácidos en al menos una de las posiciones que corresponden a las posiciones 12, 43, 122, 127, 154, 156, 160, 211, 212 o 222, en cada caso según la numeración de la SEQ ID NO: 1, y/o una enzima adicional contenida opcionalmente en el detergente o producto de limpieza.