ES3035837T3

ES3035837T3 - Recombinant pmhc class ii molecules

Info

Publication number: ES3035837T3
Application number: ES17870043T
Authority: ES
Inventors: Pedro Santamaria
Original assignee: UTI LP
Current assignee: UTI LP
Priority date: 2016-11-09
Filing date: 2017-11-08
Publication date: 2025-09-10
Anticipated expiration: 2037-11-08
Also published as: KR20240036138A; JP2020500015A; EP3538559B1; EP3538559A1; AU2017357865A1; MX2019005497A; KR20190104320A; NZ753596A; AU2025200608A1; EP4613336A2; US20180127481A1; RU2019114627A3; US20250051420A1; AU2017357865B2; KR102646495B1; SG10201913956RA; KR20260011774A; RU2019114627A; CN110291111A; BR112019009477A2

Abstract

Español Se describen aquí heterodímeros que contienen al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido contiene una protuberancia diseñada que se puede colocar en una cavidad diseñada en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido contiene un dominio MHC clase II α1, un dominio MHC clase II α2 o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio MHC clase II β1, un dominio MHC clase II β2 o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido contiene un dominio MHC clase II β1, un dominio MHC clase II β2 o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio MHC clase II α1, un dominio MHC clase II α2 o una combinación de los mismos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Moléculas de PMHC de clase II recombinantes

Antecedentes

Las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II se encuentran normalmente en células presentadoras de antígenos en donde presentan antígeno a linfocitos T CD4+ afines que ayudan a regular las respuestas inmunitarias. Las moléculas de MHC de clase II se forman por dimerización de una cadena alfa y beta, y se estabilizan en presencia de un antígeno polipeptídico que se asocia en un surco de unión formado por la cadena alfa y beta. Sin embargo, la producción de MHC de clase II en sistemas manipulados por ingeniería genéticain vitroha sido un reto debido a la inestabilidad intrínseca de los heterodímeros de proteína, incluso en presencia de un polipéptido.

El documento WO 98/06749 describe proteínas de fusión monovalentes y multivalentes que comprenden dominios de unión al MHC de Clase II humanos en donde sustancialmente todos los dominios transmembrana y citoplásmicos C-terminales se han reemplazado por dominios de dimerización de superhélice, tales como dominios de cremallera de leucina.

Hee Haet al.(2016) describe conceptos y estrategias para la generación de proteínas Fc heterodiméricas, y su aplicación en el desarrollo de anticuerpos biespecíficos.

El documento US 2015/344586 describe una proteína multifuncional multivalente unida a disulfina que contiene el dominio extracelular del MHC de clase I y la p-microglobulina.

El documento WO 2014/080286 describe un método para tratar la esclerosis múltiple (EM) o un trastorno relacionado mediante la administración de un complejo antígeno-MHC-nanopartícula, en donde el antígeno está relacionado con EM.

El documento US 2015/209446 también describe un método para tratar la esclerosis múltiple (EM) o un trastorno relacionado mediante la administración de un complejo antígeno-MHC-nanopartícula, en donde el antígeno está relacionado con EM.

El documento WO 2015/063616 describe composiciones y métodos para promover la formación, expansión y reclutamiento de células TR1 y/o células Breg de una manera específica de antígeno y tratar enfermedades y trastornos autoinmunitarios.

Compendio

En el presente documento se describen heterodímeros de antígeno-MHC aislados y purificados y métodos eficientes para fabricar los mismos. Los heterodímeros se modifican por ingeniería genética para facilitar la producción y el aislamiento. Se emplean múltiples métodos para aumentar la producción de heterodímeros aislados. En primer lugar, las cadenas alfa y beta se fusionan por separado a una porción de una cadena pesada de IgG, luego la IgG se diseña con una arquitectura de botón en ojal (con una de la IgG de cadena alfa o beta que comprende un botón y la IgG de cadena alfa o beta opuesta que comprende el ojal). En algunos casos, el heterodímero puede estabilizarse adicionalmente mediante una trampa de cisteína entre el antígeno y un resto del surco de unión al MHC de clase II. Para emplear una trampa de cisteína, el antígeno puede comprender una cisteína endógena o diseñada por ingeniería genética que forma un enlace disulfuro con una cisteína diseñada por ingeniería genética en la cadena alfa o beta de la molécula del MHC que está en estrecha proximidad al surco de unión. Esta trampa de cisteína puede aumentar adicionalmente la estabilidad de una molécula de péptido del MHC. Inesperadamente, se ha observado que la arquitectura botón en ojal funciona en ausencia de dominios de dimerización heterólogos que se han empleado previamente. De hecho, se observó que un dominio de dimerización heterólogo es perjudicial para la formación de heterodímeros.

Por tanto, según la presente invención se proporciona una composición que comprende al menos un heterodímero aislado conjugado con una nanopartícula,

en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido y

en donde el heterodímero aislado comprende al menos un primer polipéptido, al menos un segundo polipéptido y un antígeno relevante para enfermedades autoinmunitarias, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido,

en donde la protuberancia diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 53,

en donde la cavidad diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 51; en donde

(i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II soluble, un dominio a2 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II soluble, un dominio (32 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; o

(ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II soluble, un dominio p2 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II soluble, un dominio a2 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; y

en donde el antígeno relevante para la enfermedad autoinmunitaria es un polipéptido que tiene al menos 11 aminoácidos de longitud conectado al dominio a1 del MHC de clase II o al dominio p1 del MHC de clase II mediante un enlazador flexible; y

en donde ni el primer polipéptido ni el segundo polipéptido comprenden un dominio de cremallera de leucina, o un sitio de biotinilación extraño o un marcador de purificación.

En un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende la composición descrita en el presente documento, y un excipiente, estabilizante o diluyente farmacéutico.

En otro aspecto adicional, se proporciona la composición farmacéutica descrita en el presente documento para su uso en un método para tratar una enfermedad autoinmunitaria o afección inflamatoria.

En otro aspecto adicional, se proporciona la composición farmacéutica descrita en el presente documento para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

En el presente documento, en un aspecto, se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen no natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más aminoácidos seleccionados de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano y cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de arginina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de fenilalanina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de tirosina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de triptófano. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína y un resto de triptófano. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de aminoácido de origen no natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de aminoácido natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende uno o más aminoácidos seleccionados de alanina, serina, treonina, valina y cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de alanina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de serina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de treonina.

En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de valina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína, un residuo de serina, un residuo de alanina y un resto de valina. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido se interconectan a través de un dominio C<h>3 de un anticuerpo. En algunas realizaciones, el dominio C<h>3 es de una IgG. En algunas realizaciones, la IgG es del subtipo IgG1. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un marcador de Strep. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por laSEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por laSEQ ID NO: 2. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por laSEQ ID NO: 3. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por laSEQ ID NO: 4. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido codificado por una secuencia de ADN que comprende una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado comprende al menos un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 27-63, o un fragmento del mismo.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan multímeros que comprenden dos o más heterodímeros aislados descritos en el presente documento. En algunas realizaciones, el multímero comprende además avidina.

En algunas realizaciones, cada uno de los dos o más heterodímeros está conectado a la avidina. En algunas realizaciones, el multímero comprende además una cadena principal polimérica, en donde cada uno de los dos o más heterodímeros está conectado a la cadena principal polimérica. En algunas realizaciones, la estructura polimérica es dextrano o polietilenglicol (PEG).

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio a1 del MHC de clase II o el dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la protuberancia diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio a2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354<c>, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU).

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio p1 del MHC de clase II o el dominio p2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la protuberancia diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio p2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354C, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU).

En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen no natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más aminoácidos seleccionados de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano y cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de arginina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de fenilalanina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de tirosina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de triptófano. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína y un resto de triptófano.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio a1 del MHC de clase II o el dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la cavidad diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio a2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una cavidad diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismos.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio p1 del MHC de clase II o el dominio p2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la cavidad diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio p2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una cavidad diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de aminoácido de origen no natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de aminoácido natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende uno o más aminoácidos seleccionados de alanina, serina, treonina, valina y cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de alanina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de serina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de treonina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de valina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína, un residuo de serina, un residuo de alanina y un resto de valina.

En algunas realizaciones, la protuberancia está ubicada en un dominio constante C<h>3 de anticuerpo. En algunas realizaciones, la cavidad está ubicada en un dominio constante C<h>3 de anticuerpo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende además un resto de cisteína C-terminal.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos codificados por una secuencia de ADN que comprende una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 27-63, o un fragmento de los mismos.

En el presente documento, en otro aspecto, se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento; y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido. En algunas realizaciones, el núcleo sólido es un núcleo de oro u óxido de hierro. En algunas realizaciones, el al menos un heterodímero está unido covalentemente o no covalentemente a la nanopartícula. En algunas realizaciones, el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula a través de un enlazador. En algunas realizaciones, el enlazador comprende polietilenglicol.

En el presente documento también se describen métodos para preparar un heterodímero que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos;

que comprenden las etapas de: (a) cultivar una célula hospedadora que comprende ácido nucleico que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido que incluye las interfaces de los mismos, en donde el ácido nucleico que codifica la interfaz del primer polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del primer polipéptido para codificar la protuberancia o el ácido nucleico que codifica la interfaz del segundo polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del segundo polipéptido para codificar la cavidad o ambas, y en donde el cultivo es tal que se expresan el primer polipéptido y el segundo polipéptido; y (b) recuperar el heterodímero del cultivo de células hospedadoras.

En algunas realizaciones de la divulgación, el ácido nucleico que codifica el primer polipéptido se ha alterado con respecto al ácido nucleico original para codificar la protuberancia y el ácido nucleico que codifica el segundo polipéptido se ha alterado con respecto al ácido nucleico original para codificar la cavidad.

En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa (a) está precedida por una etapa en donde cada uno de uno o más ácidos nucleicos que codifican un resto de aminoácido original de la interfaz del primer polipéptido se reemplaza con ácido nucleico que codifica un resto de aminoácido importado, en donde la protuberancia comprende uno o más restos importados. En algunas realizaciones, el resto importado se selecciona de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano y cisteína. En algunas realizaciones, el resto importado es arginina. En algunas realizaciones, el resto importado es fenilalanina.

En algunas realizaciones, el resto importado es tirosina. En algunas realizaciones, el resto importado es triptófano. En algunas realizaciones, el resto importado es cisteína.

En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa (a) está precedida por una etapa en donde cada uno de uno o más ácidos nucleicos que codifican un resto de aminoácido original en la interfaz del segundo polipéptido se reemplaza con ácido nucleico que codifica un resto de aminoácido importado, en donde la cavidad comprende uno o más restos importados. En algunas realizaciones, el resto importado se selecciona de cisteína, alanina, serina, treonina o valina. En algunas realizaciones, el resto importado es cisteína.

En algunas realizaciones, el resto importado es alanina. En algunas realizaciones, el resto importado es serina. En algunas realizaciones, el resto importado es treonina. En algunas realizaciones, el resto importado es valina.

En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden cada uno un dominio constante de anticuerpo. En algunas realizaciones, el dominio constante de anticuerpo es un dominio C<h>3. En algunas realizaciones, el dominio constante de anticuerpo es de una IgG. En algunas realizaciones, la IgG es IgG1 humana. En algunas realizaciones, el dominio constante de anticuerpo es un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3. En ciertas realizaciones, el dominio C<h>3 además una protuberancia (botón) o cavidad (ojal) diseñada por ingeniería genética.

En el presente documento también se describen métodos para preparar un conjugado de heterodímeronanopartícula que comprende unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido. En algunas realizaciones, el núcleo sólido es un núcleo de oro u óxido de hierro. En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa de unión comprende unir covalente o no covalentemente el al menos un heterodímero a la nanopartícula. En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa de unión comprende unir covalentemente el al menos un heterodímero a la nanopartícula a través de un enlazador. En algunas realizaciones, el enlazador comprende polietilenglicol.

En otro aspecto, en el presente documento se describe un heterodímero aislado que comprende al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen no natural. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más aminoácidos seleccionados de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano y cisteína. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 80 % idéntica a laSEQ ID NO: 54. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende un dominio C<h>3 y el dominio C<h>3 comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354C, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU). En ciertas realizaciones, la cavidad comprende un resto de aminoácido de origen no natural. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende uno o más aminoácidos seleccionados de alanina, serina, treonina, valina y cisteína. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En ciertas realizaciones, el primer o segundo polipéptido del heterodímero aislado comprende un dominio C<h>3 y el dominio C<h>3 comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismas.

En ciertas realizaciones de la divulgación, uno o ambos del primer polipéptido o el segundo polipéptido no comprenden un dominio de dimerización heterólogo. En ciertas realizaciones de la divulgación, uno o ambos del primer polipéptido o el segundo polipéptido no comprende una cremallera de leucina. En ciertas realizaciones de la divulgación, uno o ambos del primer polipéptido o el segundo polipéptido no comprenden un sitio de biotinilación específico de sitio. En ciertas realizaciones, el heterodímero aislado comprende además un antígeno relevante para una enfermedad autoinmunitaria. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la enfermedad comprende un polipéptido de al menos 11 aminoácidos de longitud. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para enfermedades autoinmunitarias está conectado al dominio a1 del MHC de clase II o al dominio p1 del MHC de clase II mediante un enlazador flexible. En ciertas realizaciones, el antígeno está conectado covalentemente al dominio a1 del MHC de clase II o al dominio p1 del MHC de clase II mediante un enlace disulfuro formado entre un aminoácido de cisteína asociado con el péptido antigénico y un aminoácido de cisteína del dominio a1 del MHC de clase II o el dominio p1 del MHC de clase II. En ciertas realizaciones, el aminoácido de cisteína del dominio a1 del MHC de clase II o el dominio p1 del MHC de clase II está a menos de 10 aminoácidos de un resto que forma parte de un surco de unión al MHC de clase II. En ciertas realizaciones, el resto de cisteína del dominio a1 del MHC de clase II o el dominio p1 del MHC de clase II está a menos de 3 aminoácidos de un resto que forma parte de un surco de unión al MHC de clase II. En ciertas realizaciones, el aminoácido de cisteína del dominio a1 del MHC de clase II o el dominio p1 del MHC de clase II se ha introducido en la secuencia que se produce de forma natural del dominio a1 del m Hc de clase II o el dominio p1 del MHC de clase II. En ciertas realizaciones, el heterodímero aislado es para su uso en el tratamiento de un individuo al que se ha diagnosticado o se sospecha que tiene una enfermedad autoinmunitaria. En ciertas realizaciones, el heterodímero aislado está codificado por un polinucleótido que codifica el primer o el segundo polipéptido descrito en el presente documento. En ciertas realizaciones de la divulgación, una célula hospedadora comprende el polinucleótido. En ciertas realizaciones de la divulgación, el polinucleótido se integra de manera estable en el genoma. En ciertas realizaciones, al menos un heterodímero se conjuga con una nanopartícula para formar un conjugado de heterodímero-nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido. En ciertas realizaciones, el núcleo sólido es un núcleo de oro, hierro u óxido de hierro. En ciertas realizaciones, el núcleo sólido tiene un diámetro de menos de 100 nanómetros. En ciertas realizaciones, el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula. En ciertas realizaciones, el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula a través de un enlazador que comprende polietilenglicol (PEG). En ciertas realizaciones, el polietilenglicol está funcionalizado con maleimida. En ciertas realizaciones, el polietilenglicol es de menos de 5 kD. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende el conjugado heterodímeronanopartícula se forma con un excipiente, estabilizante o diluyente farmacéutico. En ciertas realizaciones, el heterodímero aislado o la composición farmacéutica es para su uso en un método para tratar una enfermedad autoinmunitaria o afección inflamatoria. En ciertas realizaciones de la divulgación, un método para tratar una enfermedad autoinmunitaria o afección inflamatoria comprende administrar a un individuo el conjugado heterodímero-nanopartícula aislado o la composición farmacéutica.

En el presente documento también se describe un método para preparar un heterodímero que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; que comprende las etapas de: (a) cultivar una célula hospedadora que comprende un ácido nucleico que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido que incluye las interfaces de los mismos, en donde el ácido nucleico que codifica la interfaz del primer polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del primer polipéptido para codificar la protuberancia o el ácido nucleico que codifica la interfaz del segundo polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del segundo polipéptido para codificar la cavidad o ambas, y en donde el cultivo es tal que se expresan el primer polipéptido y el segundo polipéptido; y (b) recuperar el heterodímero a partir del cultivo de células hospedadoras. En ciertas realizaciones de la divulgación, el ácido nucleico que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido se integra de manera estable en el genoma de la célula hospedadora. En ciertas realizaciones de la divulgación, la célula hospedadora comprende una célula de ovario de hámster chino (CHO). En ciertas realizaciones de la divulgación, recuperar el heterodímero del cultivo de células hospedadoras o cultivos de células hospedadoras comprende aplicar un líquido que comprende el heterodímero a una columna para cromatografía de líquidos. En ciertas realizaciones de la divulgación, la columna de cromatografía de líquidos comprende proteína A, proteína G, proteína L o una combinación de las mismas.

En el presente documento también se describe un método para preparar un heterodímero que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 del MHC de clase II, un dominio a2 del MHC de clase II, o una combinación de los mismos; que comprende las etapas de: (a) cultivar una primera célula hospedadora que comprende un ácido nucleico que codifica el primer polipéptido; (b) cultivar una segunda célula hospedadora que comprende un ácido nucleico que codifica el segundo polipéptido; (c) recuperar los polipéptidos de los cultivos de la célula hospedadora; y (d) formar el heterodímero incubando el primer y segundo polipéptidos entre sí; en donde el ácido nucleico que codifica la interfaz del primer polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del primer polipéptido para codificar la protuberancia o el ácido nucleico que codifica la interfaz del segundo polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del segundo polipéptido para codificar la cavidad o ambos. En ciertas realizaciones de la divulgación, el ácido nucleico que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido se integra de manera estable en el genoma de la célula hospedadora. En ciertas realizaciones de la divulgación, las células hospedadoras primera y segunda comprenden una célula de ovario de hámster chino (CHO). En ciertas realizaciones de la divulgación, el método comprende además recuperar el heterodímero o los polipéptidos del cultivo de células hospedadoras o cultivos de células hospedadoras que comprende aplicar un líquido que comprende el heterodímero o los polipéptidos a una columna de cromatografía de líquidos. En ciertas realizaciones de la divulgación, la columna de cromatografía de líquidos comprende proteína A, proteína G, proteína L o una combinación de las mismas.

En el presente documento, en un aspecto, se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

En el presente documento, en un aspecto, se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

Breve descripción de los dibujos

LasFIG. 1A-Bmuestran un vector lentivírico forma tanto linealizada(A)como circular(B).

LaFIG. 2muestra un ejemplo de modificación por ingeniería genética de pMHC usando una cremallera de leucina.

LaFIG. 3muestra diseños esquemáticos de pMHC con botón en ojal (con y sin la cremallera de leucina).

FIG. 4A-CLaFIG. 4Amuestra el análisis por citometría de flujo de la expresión de eGFP en células CHO transducidas con lentivirus que codifican pMHC BDC2.5mi/IAg7-botón-en-ojal con (izquierda) o sin (derecha) la cremallera de leucina. LaFIG. 4By laFIG. 4Cmuestran perfiles de elución de cromatografía de afinidad de proteína G de sobrenadantes de cultivo de células CHO que expresan pMHC basadas en botón en ojal sin la cremallera de leucina(FIG. 4B), y con la cremallera de leucina(FIG. 4C).

LaFIG. 5muestra la movilidad electroforética de pMHC basados en botón en ojal sin cremallera por SDS-PAGE nativa (izquierda) y desnaturalizante (derecha).

LaFIG.6muestra los perfiles de tinción FACS de linfocitos T BDC2.5-CD4+ usando tetrámeros producidos con monómeros de pMHC convencionales (panel izquierdo), o un diseño basado en botón en ojal sin cremallera (paneles central y derecho).

LaFIG.7muestra imágenes de gel de SDS-PAGE no desnaturalizante (izquierda) y desnaturalizante (derecha) de nanopartículas de PFM conjugadas con pMHC BDC2.5mi/IAg7-botón-en-ojal sin cremallera.

LaFIG. 8muestra respuestas de linfocitos T de ratones tratados con nanopartículas de 2.5mi/IAg7-botón-enojal sin cremallera (izquierda) o nanopartículas de 2.5mi/Ag7 convencionales con cremallera (no basadas en botón en ojal) (derecha). Se trataron ratones con 10 dosis (2 dosis por semana durante 5 semanas), después de lo cual se aislaron los linfocitos T esplénicos, se clasificaron en las fracciones positivas y negativas al tetrámero 2.5mi/IAg7, y se estimularon con perlas recubiertas con mAb anti-CD3/anti-CD28. Se analizó el ARNm para detectar la presencia de transcritos relevantes para células TR1 a partir de las fracciones positivas y negativas para el tetrámero.

LasFIG. 9A-Bmuestran la liberación de citocinas de los linfocitos T aislados de ratones tratados como en laFIG. 8. Los ratones se trataron con nanopartículas de 2.5mi/IAg7- botón-en-ojal sin cremallera(A),o nanopartículas de 2.5mi/Ag7 convencionales con cremallera (no basadas en botón en ojal)(B).

LaFIG. 10muestra el perfil de purificación de mono-Q de la proteína BDC-PEG-biotina. Se recogieron las fracciones número 19 a 38 para el ELISA de detección de biotina y el análisis por SDS-PAGE.

LaFIG. 11muestra los perfiles de SDS-PAGE de fracciones purificadas con mono-Q. Los carriles se etiquetan con el número de cada fracción de FPLC. Se cargaron 20 gl de cada fracción en el gel.

LaFIG. 12muestra que el análisis de transferencia de Western de las fracciones 22-25 (carriles 5-9) mostró presencia de biotina exclusivamente en la cadena alfa del monómero pMHC, en comparación con el monómero de pMHC BDC2.5mi/IAg7 que lleva una secuencia de biotinilación en la cadena alfa y biotinilado con la enzima BirA (carril 1). Las fracciones n.° 25-29 se agruparon y se usaron para preparar tetrámeros de pMHC. Los carriles 11-17 muestran las fracciones 30-36.

LaFIG. 13muestra el perfil de citometría de flujo de linfocitos T BDC2.5-CD4+ teñidos con tetrámeros producidos usando BDC2.5mi/I-Ag7-maleimida-PEG2-biotina.

LaFIG. 14Ay laFIG. 14Bmuestran los perfiles de elución de FPLC, laFIG. 14Cy laFIG. 14Dmuestran el análisis por SDS-PAGE de las fracciones eluidas indicadas laFIG. 14Ay laFIG. 14B.

LasFIG. 15A-Dmuestran el análisis por citometría de flujo de células JURMA marcadas con GFP que expresan un TCR específico para DR complejado con el polipéptido IGRP13-25. LaFIG. 15Amuestra la línea celular sola; laFIG. 15Bmuestra la línea celular incubada con DR3 IGRP13-25 marcado con PE producido mediante tecnología de dimerización con cremallera de leucina estándar; laFIG. 15Cmuestra la línea celular incubada con DR3 IGRP13-25 marcado con PE producido mediante tecnología de dimerización de botón el ojal y trampa de cys, que carece de una cremallera de leucina; laFIG. 15Dmuestra la línea celular incubada con heterodímeros de MHC de clase II marcados con PE irrelevantes.

LaFIG. 16Ay laFIG. 16Bmuestran la estimulación de células JURMA que expresan un TCR específico para DR complejado con el polipéptido IGRP13-25 conjugado a una nanopartícula.

Descripción detallada

A continuación se describen diversas realizaciones. Debe observarse que las realizaciones específicas no pretenden ser una descripción exhaustiva o una limitación a los aspectos más amplios analizados en el presente documento. Un aspecto descrito junto con una realización particular no se limita necesariamente a esa realización y puede ponerse en práctica con cualesquiera otras realizaciones.

En el presente documento, en un aspecto, se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos. El primer polipéptido, el segundo polipéptido o ambos pueden comprender un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. Opcionalmente, el primer polipéptido, el segundo polipéptido o ambos comprenden un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre el MHC (cadena a o p) y el dominio C<h>3. En ciertas realizaciones, el primer polipéptido comprende un dominio CH3 de anticuerpo, y el dominio CH3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354C, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU). En ciertas realizaciones, el segundo polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismos. En realizaciones adicionales, el heterodímero aislado comprende un péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias, opcionalmente unido covalentemente al primer o al segundo polipéptido. Opcionalmente, el péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias comprende un resto de cisteína que interactúa con un resto de cisteína en el primer o segundo polipéptido para crear una trampa de cisteína.

En un aspecto, un polipéptido del heterodímero comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio a l del MHC de clase II o el dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la protuberancia diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio a2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354C, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU). En realizaciones adicionales, el polipéptido comprende un péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias. Opcionalmente, el péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias comprende un resto de cisteína que interactúa con un resto de cisteína en el dominio a1 o p1 de MHC para crear una trampa de cisteína.

En un aspecto, un polipéptido del heterodímero comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio p1 del MHC de clase II o el dominio p2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la protuberancia diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio C<h>2 de anticuerpo localizado entre un dominio p2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en S354C, T366W, y tanto S354C como T366W (numeración de EU). En realizaciones adicionales, el polipéptido comprende un péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias. Opcionalmente, el péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias comprende un resto de cisteína que interactúa con un resto de cisteína en el dominio a1 o p1 de MHC para crear una trampa de cisteína.

En un aspecto, un polipéptido del heterodímero comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio a1 del MHC de clase II o el dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la cavidad diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio CH2 de anticuerpo localizado entre un dominio a2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una cavidad diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismos. En realizaciones adicionales, el polipéptido comprende un péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias. Opcionalmente, el péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias comprende un resto de cisteína que interactúa con un resto de cisteína en el dominio a1 o p1 de MHC para crear una trampa de cisteína.

En un aspecto, un polipéptido del heterodímero comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética no está localizada en el dominio p1 del MHC de clase II o el dominio p2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la cavidad diseñada por ingeniería genética se localiza en un dominio C<h>3 de anticuerpo fusionado al polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende opcionalmente un dominio CH2 de anticuerpo localizado entre un dominio p2 de MHC de clase II y el dominio C<h>3 con una cavidad diseñada por ingeniería genética. En ciertas realizaciones, el polipéptido comprende un dominio C<h>3 de anticuerpo, y el dominio C<h>3 de anticuerpo comprende al menos una mutación seleccionada de la lista que consiste en Y349C, T366S, L368A, Y407V (numeración de EU), y combinaciones de los mismos. En realizaciones adicionales, el polipéptido comprende un péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias. Opcionalmente, el péptido relevante para enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias comprende un resto de cisteína que interactúa con un resto de cisteína en el dominio a1 o p1 de MHC para crear una trampa de cisteína.

Como se usa en el presente documento, "aproximadamente" se entenderá por los expertos en la técnica y variará en cierta medida dependiendo del contexto en donde se usa. Si hay usos del término que no están claros para los expertos en la técnica, dado el contexto en donde se usa, "aproximadamente" significará hasta más o menos el 10 % del término particular.

El uso de los términos "un" y "una" y "el" y referentes similares en el contexto de la descripción de los elementos (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) debe interpretarse que abarca tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en el presente documento o se contradiga claramente por el contexto. La mención de intervalos de valores en el presente documento está destinada simplemente a servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentra dentro del intervalo, a menos que se indique lo contrario en el presente documento, y cada valor separado se incorpora en la memoria descriptiva como si se enumerara individualmente en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otro modo en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o lenguaje ilustrativo (por ejemplo, "tal como") proporcionados en el presente documento, pretende meramente ilustrar mejor las realizaciones y no supone una limitación en el alcance de las reivindicaciones a menos que se indique lo contrario. Ningún lenguaje en la memoria descriptiva debe interpretarse como indicativo de que cualquier elemento no reivindicado sea esencial.

Como se usa en el presente documento, "heterodímero" se refiere a una molécula que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el segundo polipéptido difiere en la secuencia de aminoácidos del primer polipéptido en al menos un resto de aminoácido. Un "multímero" se refiere a una molécula que comprende dos o más heterodímeros o que comprende cuatro o más polipéptidos descritos en el presente documento.

Como se usa en el presente documento, "individuo" es sinónimo de "sujeto". Al individuo se le puede diagnosticar una enfermedad. Puede sospecharse que el individuo tiene una enfermedad particular basándose en que manifieste al menos un síntoma de dicha enfermedad, tenga antecedentes familiares de dicha enfermedad, tenga un genotipo relevante para definir el riesgo de dicha enfermedad, o tenga una o más mediciones fenotípicas "pruebas analíticas" en o cerca de un nivel que situarían a un individuo en riesgo de la enfermedad. El individuo puede ser un mamífero, tal como un caballo, gato, perro, cerdo, vaca, cabra u oveja. El individuo puede ser en ciertos casos una persona humana.

Como se usa en el presente documento, "polipéptido" se refiere generalmente a péptidos y proteínas que tienen más de aproximadamente diez aminoácidos.

Como se usa en el presente documento, el "primer polipéptido" es cualquier polipéptido que se va a asociar con un segundo polipéptido. Los polipéptidos primero y segundo se encuentran en una "interfaz" (definida a continuación). Además de la interfaz, el primer polipéptido puede comprender uno o más dominios adicionales, tales como "dominios de unión" (por ejemplo., un dominio de unión a ligando) o dominios constantes de anticuerpo (o partes de los mismos) incluidos los dominios C<h>2, C<h>1 y C<l>. En algunas realizaciones, el primer polipéptido comprende al menos un dominio que procede de un anticuerpo. En realizaciones adicionales, el dominio es convenientemente un dominio constante, tal como el dominio C<h>3 de un anticuerpo. En otras realizaciones adicionales, el dominio forma la interfaz del primer polipéptido.

Como se usa en el presente documento, el "segundo polipéptido" es cualquier polipéptido que se va a asociar con el primer polipéptido a través de una "interfaz". Además de la interfaz, el segundo polipéptido puede comprender dominios adicionales, tales como un "dominio de unión" (por ejemplo, un dominio de unión a ligando), o dominios constantes de anticuerpo (o partes de los mismos) incluidos los dominios C<h>2, C<h>1 y C<l>. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido comprende al menos un dominio que procede de un anticuerpo. En realizaciones adicionales, el dominio es convenientemente una región constante, tal como el dominio C<h>3 de un anticuerpo. En otras realizaciones adicionales, el dominio forma la interfaz del segundo polipéptido.

Como se usa en el presente documento, un "dominio de unión" comprende cualquier región de un polipéptido que es responsable de la unión selectiva a una molécula de interés (por ejemplo, un antígeno).

Como se usa en el presente documento, "surco de unión" se refiere al bolsillo o hendidura que existe en un heterodímero de MHC de clase II formado entre un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio p2 de MHC de clase II. Esta es la parte del heterodímero de MHC de clase II que interactúa con los antígenos. Los antígenos son generalmente antígenos polipeptídicos, pero pueden modificarse adicionalmente por restos lipídicos, restos glicólicos o restos de glucolípidos. Los restos que constituyen el surco de unión muestran polimorfismo y representan las diferencias en la unión al antígeno entre diferentes alelos de HLA. Una característica importante del surco de unión para las moléculas de MHC de clase II es que los extremos del surco están abiertos y permiten que el antígeno se extienda más allá de uno o ambos lados del surco de unión.

Como se usa en el presente documento, la "interfaz" comprende aquellos restos de aminoácidos de "contacto" en el primer polipéptido que interaccionan con uno o más restos de aminoácidos de "contacto" en la interfaz del segundo polipéptido. En algunas realizaciones, la interfaz comprende el dominio CH3 de una inmunoglobulina. En realizaciones adicionales, la inmunoglobulina procede de un anticuerpo IgG. El anticuerpo IgG puede ser de isotipo IgG1, IgG2, IgG3o IgG4. En otras realizaciones adicionales, la inmunoglobulina procede de un anticuerpo IgG 1 humano.

Como se usa en el presente documento, una "protuberancia" se refiere a al menos una cadena lateral de aminoácidos que sobresale de la interfaz del primer polipéptido y, por lo tanto, se puede colocar en una cavidad compensatoria en la interfaz adyacente (es decir, la interfaz del segundo polipéptido) para estabilizar el heterodímero, y, por ejemplo, favorecer así la formación del heterodímero sobre la formación del homodímero.

La protuberancia puede existir en la interfaz original o puede introducirse sintéticamente (por ejemplo, alterando el ácido nucleico que codifica la interfaz). Una "protuberancia modificada por ingeniería genética" se introduce sintéticamente. En algunas realizaciones, un ácido nucleico que codifica la interfaz del primer polipéptido se altera para codificar la protuberancia. Para lograr esto, el ácido nucleico que codifica al menos un resto de aminoácido "original" en la interfaz del primer polipéptido se reemplaza con un ácido nucleico que codifica al menos un resto de aminoácido "importado" que tiene un volumen de cadena lateral mayor que el resto de aminoácido original. Se apreciará que puede haber más de un resto importado original y correspondiente. En algunas realizaciones, el límite superior para el número de restos originales que se reemplazan es el número total de restos en la interfaz del primer polipéptido. En algunas realizaciones, los restos importados para la formación de una protuberancia son generalmente restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, los restos importados se seleccionan de arginina (R), cisteína (C), fenilalanina (F), tirosina (Y) y triptófano (W). En algunas realizaciones, los restos importados se seleccionan de arginina (R), fenilalanina (F), tirosina (Y) y triptófano (W). En algunas realizaciones, los restos importados son triptófano y tirosina. En algunas realizaciones, los restos importados son triptófano y cisteína. En algunas realizaciones, el resto original para la formación de la protuberancia tiene un pequeño volumen de cadena lateral, tal como alanina, asparagina, ácido aspártico, glicina, serina, treonina o valina. En algunas realizaciones, un resto de serina se reemplaza con cisteína y un resto de treonina se reemplaza con triptófano. En algunas realizaciones, la serina en la posición 354 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la protuberancia. En algunas realizaciones, la treonina en la posición 366 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la protuberancia. En realizaciones adicionales, las sustituciones de aminoácidos comprenden S354C y T366W (numeración de EU). Todas las numeraciones son según Edelman, Gerald M.etal.PNAS 63(1) (1969): 78-85.

Como se usa en el presente documento, una "cavidad" se refiere a al menos una cadena lateral de aminoácido que está rebajada respecto de la interfaz del segundo polipéptido y, por lo tanto, acomoda una protuberancia correspondiente en la interfaz adyacente del primer polipéptido. La cavidad puede existir en la interfaz original o puede introducirse sintéticamente (por ejemplo, alterando el ácido nucleico que codifica la interfaz). Una "cavidad modificada por ingeniería genética" se introduce sintéticamente. En algunas realizaciones, el ácido nucleico que codifica la interfaz del segundo polipéptido se altera para codificar la cavidad. Para lograr esto, el ácido nucleico que codifica al menos un resto de aminoácido "original" en la interfaz del segundo polipéptido se reemplaza con ADN que codifica al menos un resto de aminoácido "importado" que tiene un volumen de cadena lateral más pequeño que el resto de aminoácido original. Se apreciará que puede haber más de un resto importado original y correspondiente. El límite superior para el número de restos originales que se reemplazan es el número total de restos en la interfaz del segundo polipéptido. En algunas realizaciones, los restos importados para la formación de una cavidad son normalmente restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, los restos importados se seleccionan de alanina (A), cisteína (C), serina (S), treonina (T) y valina (V). En algunas realizaciones, los restos importados se seleccionan de alanina (A), serina (S), treonina (T) y valina (V). En algunas realizaciones, los restos importados se seleccionan de alanina (A), cisteína (C), serina (S) y valina (V). En algunas realizaciones, los restos importados son serina, alanina o treonina. En algunas realizaciones, los restos importados son alanina (A), cisteína (C), serina (S) y valina (V). En algunas realizaciones, la tirosina en la posición 349 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la cavidad. En algunas realizaciones, la treonina en la posición 366 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la cavidad. En algunas realizaciones, la leucina en la posición 368 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la cavidad. En algunas realizaciones, la tirosina en la posición 407 se reemplaza con otro resto de aminoácido para formar parte o toda la cavidad. En algunas realizaciones, el resto original para la formación de la protuberancia tiene un gran volumen de cadena lateral, tal como tirosina, arginina, fenilalanina o triptófano. En otras realizaciones, el resto original se selecciona de tirosina, treonina y leucina. En algunas realizaciones, uno o más restos de tirosina se reemplazan por cisteína o valina, un resto de treonina se reemplaza por serina, y un resto de leucina se reemplaza por alanina. En realizaciones adicionales, las sustituciones de aminoácidos comprenden Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU). Todas las numeraciones son según Edelman, Gerald M.et al.PNAS 63(1) (1969): 78-85.

Como se usa en el presente documento, un resto de aminoácido "original" es uno que se reemplaza por un resto "importado" que puede tener un volumen de cadena lateral más pequeño o más grande que el resto original. El resto de aminoácido importado puede ser un resto de aminoácido de origen natural o no natural, pero preferiblemente es el primero. Los restos de aminoácidos "de origen natural" son aquellos restos codificados por el código genético. Por resto de aminoácido "no natural" se entiende un resto que no está codificado por el código genético, pero que es capaz de unirse covalentemente a restos de aminoácido adyacentes en la cadena polipeptídica. Algunos ejemplos de restos de aminoácidos no naturales son norleucina, ornitina, norvalina, homoserina y otros análogos de restos de aminoácidos, tales como los descritos en Ellmanet al.,Meth. Enzym. 202:301-336 (1991), por ejemplo. Para generar dichos restos de aminoácidos que no se producen de manera natural, pueden emplearse los procedimientos de Norenet al.Science 244: 182 (1989) y Ellmanet al.,citados anteriormente. En resumen, esto implica activar químicamente un ARNt supresor con un resto de aminoácido de origen no natural seguido de transcripción y traducciónln vltrodel ARN. El método de la presente invención implica reemplazar al menos un resto de aminoácido original, pero se puede reemplazar más de un resto original. Normalmente, no más de los restos totales en la interfaz del primer o segundo polipéptido comprenderán restos de aminoácidos originales que se sustituyen. Los restos originales preferidos para la sustitución están "enterrados". Por "enterrado" se entiende que el resto es esencialmente inaccesible al disolvente. En ciertas realizaciones, el resto importado no es cisteína para evitar la posible oxidación o emparejamiento incorrecto de enlaces disulfuro.

La protuberancia es "posicionable" en la cavidad, lo que significa que la localización espacial de la protuberancia y la cavidad en la interfaz del primer polipéptido y el segundo polipéptido respectivamente y los tamaños de la protuberancia y la cavidad son tales que la protuberancia puede localizarse en la cavidad sin perturbar significativamente la asociación normal de los polipéptidos primero y segundo en la interfaz. Puesto que las protuberancias que comprenden uno o más aminoácidos tales como, pero sin limitación, Cys, Tyr, Phe y Trp no se extienden típicamente perpendicularmente desde el eje de la interfaz y tienen conformaciones preferidas, la alineación de una protuberancia con una cavidad correspondiente se basa en el modelado del par protuberancia/cavidad basado en una estructura tridimensional tal como la obtenida por cristalografía de rayos X o resonancia magnética nuclear (RMN). Esto puede conseguirse usando técnicas ampliamente aceptadas en la técnica.

Un "ácido nucleico original" es un ácido nucleico que codifica un polipéptido de interés que puede "alterarse" (es decir, manipularse o mutarse genéticamente) para codificar una protuberancia o cavidad. El ácido nucleico original o de partida puede ser un ácido nucleico de origen natural o puede comprender un ácido nucleico que se ha sometido a alteración previa (por ejemplo, un fragmento de anticuerpo humanizado). Por "alterar" el ácido nucleico se entiende que el ácido nucleico original se muta insertando, eliminando o reemplazando al menos un codón que codifica un resto de aminoácido de interés. Normalmente, un codón que codifica un resto original se reemplaza por un codón que codifica un resto importado. Las técnicas para modificar genéticamente un ADN de esta manera se han revisado en Mutagenesis: a Practical Approach, M. J. McPherson, Ed., (IRL Press, Oxford, Reino Unido. (1991) e incluyen, por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis de casete y mutagénesis por reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

La protuberancia o cavidad puede "introducirse" en la interfaz del primer o segundo polipéptido por medios sintéticos, por ejemplo, por técnicas recombinantes, síntesis peptídicain vitro,aquellas técnicas para introducir restos de aminoácidos de origen no natural previamente descritas, por acoplamiento enzimático o químico de péptidos o alguna combinación de estas técnicas. Por consiguiente, la protuberancia o cavidad que se "introduce" es "de origen no natural" o "no nativo", lo que significa que no existe en la naturaleza o en el polipéptido original (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal humanizado).

Preferiblemente, el resto de aminoácido importado para formar la protuberancia tiene un número relativamente pequeño de rotámeros (por ejemplo, aproximadamente 3-6). Un "rotámero" es una conformación energéticamente favorable de una cadena lateral de aminoácido. El número de rotámeros de los diversos restos de aminoácidos se revisa en Ponders y Richards, J. Mol. Biol. 193: 775-791 (1987).

Como se usa en el presente documento, "botón en ojal" se refiere a una arquitectura de polipeptidilo que requiere una protuberancia (o "botón") en una interfaz de un primer polipéptido y una cavidad correspondiente (o un "ojal") en una interfaz de un segundo polipéptido, de manera que la protuberancia se puede colocar en la cavidad para promover la formación de heterodímeros. Las protuberancias pueden construirse reemplazando cadenas laterales de aminoácidos pequeños de la interfaz del primer polipéptido con cadenas laterales más grandes (por ejemplo, fenilalanina o tirosina). Pueden crearse cavidades de tamaño idéntico o similar a las protuberancias en la interfaz del segundo polipéptido reemplazando cadenas laterales grandes de aminoácidos con cadenas laterales más pequeñas (por ejemplo, alanina o treonina). Las protuberancias y cavidades pueden producirse por medios sintéticos, tales como alterando el ácido nucleico que codifica los polipéptidos o por síntesis peptídica, usando métodos rutinarios para un experto en la técnica. En algunas realizaciones, la interfaz del primer polipéptido está localizada en un dominio Fc en el primer polipéptido; y la interfaz del segundo polipéptido está localizada en un dominio Fc en el segundo polipéptido. Los heterodímeros de botón en ojal y los métodos para su preparación y uso se divulgan en las patentes de EE. UU. número 5,731,168; 5,807,706; 5,821,333; 7,642,228; 7,695,936; 8,216,805; y 8,679,785; y en Merchantet al,,Nature Biotechnology, 1998, 16:677-681.

Como se usa en el presente documento, heterodímero "aislado" significa heterodímero que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su entorno de cultivo celular natural. Los componentes contaminantes de su entorno natural son materiales que interferirían con usos diagnósticos o terapéuticos para el heterodímero, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteicos o no proteicos. En realizaciones preferidas, el heterodímero se purificará (1) a más del 95 % en peso de proteína según se determina por el método de Lowry, y lo más preferiblemente más del 99 % en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 restos de secuencia de aminoácidos N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de cubeta giratoria, o (3) a homogeneidad mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras usando azul de Coomassie o tinción con plata.

Por "nanoesfera", "NP" o "nanopartícula" se entiende en el presente documento una partícula discreta pequeña que se administra de manera individual o plural a un sujeto, espécimen de célula o espécimen de tejido, según sea necesario. En ciertas realizaciones, el término "nanopartícula", como se usa en el presente documento, incluye cualquier capa alrededor del núcleo de la nanopartícula. En ciertas realizaciones, las nanopartículas son de forma sustancialmente esférica. En ciertas realizaciones, la nanopartícula no es un liposoma o una partícula vírica. En realizaciones adicionales, la nanopartícula está compuesta por cualquier material apropiado, por ejemplo, un sólido, un núcleo sólido, un metal, un dendrímero, una micela polimérica, un óxido metálico, o una proteína o fragmento o combinaciones de los mismos. La expresión "sustancialmente esférica", como se usa en el presente documento, significa que la forma de las partículas no se desvía de una esfera en más de aproximadamente un 10 %. Se pueden aplicar a las partículas diversos complejos de antígeno o péptido conocidos de la divulgación. Las nanopartículas de la presente divulgación tienen un tamaño en el intervalo de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 1 pm, de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 500 nm o como alternativa, de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 100 nm, o como alternativa, de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 50 nm, o como alternativa, de aproximadamente 5 nm a aproximadamente 100 nm, y en algunos aspectos se refiere al diámetro promedio o mediano de una pluralidad de nanopartículas cuando se trata de una pluralidad de nanopartículas. Las partículas de tamaño nanométrico más pequeñas pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el proceso de fraccionamiento mediante el cual se permite que las partículas más grandes se depositen en una solución acuosa. La porción superior de la solución se recupera entonces por métodos conocidos por los expertos en la técnica. Esta parte superior está enriquecida en partículas de menor tamaño. El proceso puede repetirse hasta que se genere un tamaño promedio deseado. El término "nanoestructura" se usa generalmente para describir estructuras más pequeñas que aproximadamente 1 pm.

Un complejo antígeno-MHC-nanopartícula ("complejo NP" o "complejo" o pMHC-NP o "complejo de nanopartícula") se refiere a la presentación de un péptido, carbohidrato, lípido u otro segmento antigénico, fragmento o epítopo de una molécula o proteína antigénica (es decir, autopéptido o autoantígeno) sobre una superficie, tal como un núcleo de nanopartícula.

El "núcleo de nanopartícula" es el sustrato de nanopartícula que incluye o no capas o recubrimientos. El complejo de nanopartícula comprende el núcleo con al menos el complejo antígeno-MHC acoplado al núcleo.

La "densidad", cuando se refiere a pMHC por nanopartícula, se calcula como el área superficial del núcleo de nanopartícula con o sin capas externas que también pueden incluir enlazadores. El área superficial es el área superficial total disponible de la construcción usada. En un aspecto, cuando se usa un enlazador de PEG, esto puede aumentar el diámetro total del núcleo de nanopartícula en aproximadamente 20 nm2 de la nanopartícula que aumenta la superficie según la superficie total disponible de la nanopartícula. En otras palabras, es el área superficial final de la nanopartícula sin la adición de uno o más de pMHC, moléculas coestimuladoras y/o citocinas.

"Antígeno", como se usa en el presente documento, se refiere a todo, parte, fragmento o segmento de una molécula que puede inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto o una expansión de una célula inmunitaria, preferiblemente un linfocito T o B.

Como se usa en el presente documento, la expresión antígeno "relevante para la enfermedad" se refiere a un antígeno o fragmento del mismo seleccionado para tratar una enfermedad seleccionada y está implicado en el proceso de la enfermedad. Por ejemplo, un antígeno relevante para la diabetes es un antígeno o fragmento del mismo que, cuando se presenta, produce una respuesta inmunitaria que sirve para tratar la diabetes; por tanto, se selecciona un antígeno relevante para la diabetes que produce dicho efecto para tratar la diabetes. Se selecciona un antígeno relevante para la esclerosis múltiple (EM) para tratar la EM. No se seleccionaría un antígeno relevante para diabetes para tratar la EM. De manera similar, un antígeno relacionado con la autoinmunidad es un antígeno que es relevante para una enfermedad autoinmunitaria y no se seleccionará para el tratamiento de un trastorno o enfermedad distinta de la autoinmunidad, por ejemplo, cáncer. En el presente documento se divulgan antígenos relevantes para la enfermedad ilustrativos, no limitantes, y además, dichos antígenos pueden determinarse para una enfermedad particular basándose en técnicas, mecanismos y métodos documentados en la bibliografía.

Heterodímeros del MHC de clase II y arquitectura de botón en ojal

La expresión de moléculas de MHC de clase II ha sido difícil, porque las cadenas a y p del MHC de clase II secretadas que carecen de los dominios transmembrana y citoplasmático no forman heterodímeros estables, incluso en presencia de un ligando peptídico. Las regiones transmembrana de las cadenas a y p del MHC de clase II facilitan el ensamblaje apropiado del heterodímero ap, presumiblemente a través de la interacción de los dos segmentos transmembrana a-helicoidales.

Actualmente, el estado de la técnica es producir moléculas de pMHC de clase II recombinantes para generar tetrámeros de pMHC usando una cremallera de leucina. Esto también es cierto para la instalación de tetrámeros de NIH y los proveedores comerciales de tetrámeros de pMHC.

Esta estrategia, sin embargo, ofrece sus propias limitaciones como plataforma con la que construir monómeros de pMHC de clase II para la producción de compuestos de nanopartículas de pMHC de clase II relevantes para la enfermedad: 1) la posibilidad de que las secuencias jun/fos pudieran reconocerse como "extrañas" y por tanto ser inmunogénicas en individuos tratados con nanopartículas de pMHC, que podrían limitar potencialmente la actividad terapéutica, particularmente después de administración repetida; 2) separación cromatográfica de complejos de pMHC del cultivo de células eucariotas (es decir, los sobrenadantes de ovario de hámster chino -CHO-) son difíciles si no se introducen marcadores de separación por afinidad en el complejo pMHC; y 3) los marcadores de afinidad también son problemáticos debido a la antigenicidad de marcadores de afinidad tales como FLAG o 6xHIS. Debido a la posibilidad de antigenicidad y su uso extendido potencial en la purificación de diferentes proteínas, estos marcadores son desfavorecidos para su uso con agentes terapéuticos humanos. Desafortunadamente, la adición de marcadores de afinidad a estas proteínas podría desencadenar la generación de anticuerpos antifármaco (AAF).

En el presente documento, en un aspecto, se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan heterodímeros aislados que comprenden un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que puede colocarse en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio a2 de MHC de clase II; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II y un dominio p2 de MHC de clase II; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II y un dominio p2 de MHC de clase II; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio a2 de MHC de clase II.

En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden cada uno un dominio C<h>3 de un anticuerpo y forman la interfaz a través de los dominios C<h>3. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden cada uno un dominio C<h>2 de un anticuerpo y forman la interfaz a través de los dominios C<h>2. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden cada uno un dominio CH2 y un dominio CH3 de un anticuerpo y forman la interfaz a través de los dominios C<h>2, los dominios C<h>3, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden cada uno un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3 de un anticuerpo y forman la interfaz a través de los dominios C<h>3. En algunas realizaciones, el dominio C<h>3 es de una IgG. En algunas realizaciones, el dominio C<h>2 es de una IgG. La IgG puede ser del subtipo IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. En algunas realizaciones, la IgG es del subtipo IgG1.

En algunas realizaciones, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones, el primer polipéptido o el segundo polipéptido comprenden además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones, el primer polipéptido comprende además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido comprende además un resto de cisteína C-terminal.

La biotinilación de pMHC a través de BirA es una técnica usada rutinariamente para producir monómeros de pMHC biotinilados adecuados para tetramerización usando estreptavidina. Dichos tetrámeros de pMHC y sus derivados de orden superior (pentámeros, dextrameros u otros multímeros) son útiles como reactivos capaces de enumerar la frecuencia de linfocitos T específicos de antígeno en muestras biológicas. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido o el segundo polipéptido comprenden además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido comprende además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el segundo polipéptido comprende además un sitio de biotinilación.

En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y/o el segundo polipéptido comprenden además un marcador de Strep. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido y el segundo polipéptido comprenden además un marcador de Strep. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido o el segundo polipéptido comprenden además un marcador de Strep. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido comprende además un marcador de Strep. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el segundo polipéptido comprende además un marcador de Strep.

En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el heterodímero aislado comprende además una cremallera de leucina. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el primer polipéptido comprende un fragmento C-Jun y el segundo polipéptido comprende un fragmento C-Fos. En realizaciones, el heterodímero aislado no comprende una cremallera de leucina.

En realizaciones, el heterodímero aislado carece de secuencias de proteína extrañas que podrían ser la diana de inmunorreactividad, tal como la secuencia de biotinilación que la enzima BirA se dirige para unir una molécula de biotina o un epítopo/afinidad/marcador de purificación (por ejemplo, c-Myc, FLAG, V5, polihistidina, 6xHIS, etc.). A menudo, los dímeros de MHC se producen usando dominios de dimerización heterólogos. Algunos ejemplos incluyen cremalleras de leucina (dímeros Fos/Jun, Acid-p1/Base-p1, o GCN4), dímeros de proteína de inmunidad a DNasa E9/E9 de colicina, o dímeros de dominio T1 de Kv1.2. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado carece de un dominio de dimerización distinto de una arquitectura botón en ojal. En realizaciones, el heterodímero aislado carece de un dominio de dimerización de cremallera de leucina. En algunas realizaciones, el heterodímero aislado carece de dominios de dimerización c-FOS/c-JUN.

En ciertas realizaciones, el dominio a1 del MHC de clase II y un dominio a2 del MHC de clase II y el dominio p1 del MHC de clase II y el dominio p2 del MHC de clase II del heterodímero derivan de una molécula de antígeno leucocitario humano (HLA) tal como HLA-DR, HLA-DQ o HLA-DP. En ciertas realizaciones, el dominio a1 de MHC de clase II y el dominio a2 de MHC de clase II derivan de DRA, DQA1 o DPA1. En ciertas realizaciones, el dominio a1 de MHC de clase II o el dominio a2 de MHC de clase II se derivan de DRA, DQA1 o DPA1. En ciertas realizaciones, el dominio p1 del MHC de clase II y el p2 del MHC de clase II derivan de HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DQB1 o HLA-DPB1. En ciertas realizaciones, el dominio p1 del MHC de clase II o el p2 del MHC de clase II se derivan de HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DQB1 o HLA-DPB1.

En algunas realizaciones, dos o más heterodímeros están unidos covalentemente entre sí a través de una cadena principal polimérica para formar un multímero. En algunas realizaciones, la estructura polimérica es dextrano o polietilenglicol. En algunas realizaciones, cada uno de los polipéptidos dentro del heterodímero está unido a la estructura polimérica. En algunas realizaciones, cada uno de los polipéptidos dentro del heterodímero está unido a la estructura polimérica a través de un resto de cisteína terminal en cada uno de los polipéptidos. En algunas realizaciones, cada uno de los polipéptidos dentro del heterodímero está unido a la estructura polimérica a través de un sitio de biotinilación en cada uno de los polipéptidos.

En algunas realizaciones, dos heterodímeros están unidos covalentemente entre sí a través de avidina para formar un multímero.

Antígenos

En ciertas realizaciones, los heterodímeros descritos en el presente documento comprenden además un antígeno. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno polipeptídico que tiene al menos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o más aminoácidos de longitud y, en ciertas realizaciones, no más de 50, 60, 70, 80, 90 o 100 aminoácidos de longitud. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno relevante para una enfermedad. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno relevante para una enfermedad autoinmunitaria. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno relevante para una enfermedad inflamatoria. Los antígenos descritos en el presente documento se unen al extremo N-terminal de un polipéptido MHC de clase Ila o MHC de clase IIp. En ciertas realizaciones, los antígenos se unen por un enlazador peptídico flexible. El enlazador puede, por ejemplo, ser un enlazador polipeptídico y comprender glicina y serina.

En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno relevante para la autoinmunidad. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para diabetes tipo I, esclerosis múltiple, enfermedad celíaca, cirrosis biliar primaria, hepatitis autoinmunitaria, colangitis esclerosante primaria, pénfigo, pénfigo foliáceo, pénfigo vulgar, trastorno del espectro de la neuromielitis óptica, artritis (incluida la artritis reumatoide), asma alérgica, enfermedad inflamatoria intestinal (incluidas la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa), lupus eritematoso sistémico, ateroesclerosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfisema, psoriasis, hepatitis autoinmunitaria, uveítis, síndrome de Sjogren, esclerodermatitis, síndrome antifosfolípido, vasculitis asociada a ANCA o síndrome del hombre rígido. En un aspecto adicional, el antígeno relevante para la enfermedad es un antígeno relevante para tumores o cáncer. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la diabetes tipo I. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la esclerosis múltiple. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la artritis reumatoide. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la enfermedad de Crohn. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la enfermedad de colitis ulcerosa. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la enfermedad celíaca. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad es un antígeno relevante para la enfermedad autoinmunitaria hepatobiliar. En ciertas realizaciones, el antígeno relevante para la autoinmunidad hepatobiliar es un antígeno relevante para la enfermedad cirrosis biliar primaria, hepatitis autoinmunitaria o colangitis esclerosante primaria. En ciertas realizaciones, el antígeno se deriva de un microbio del tubo digestivo. En ciertas realizaciones, el antígeno derivado de un microbio del tubo digestivo es flagelina, Fla-2, Fla-X, proteína deE. coIíno caracterizada (YIDX) o integrasa de Bacterioides. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno alimentario. En ciertas realizaciones, el antígeno alimentario es gliadina. En ciertas realizaciones, el antígeno alimentario es ovoalbúmina. En ciertas realizaciones, el antígeno alimentario es un antígeno derivado de cacahuete.

Trampa de cisteína

Se puede utilizar una trampa de cisteína para estabilizar un heterodímero descrito en el presente documento. La captura de cisteína implica formar complejos polipeptídicos unidos covalentemente a partir de parejas polipeptídicas no unidas. En algunas realizaciones, la captura de cisteína comprende introducir una cisteína en una posición estratégicamente seleccionada dentro de la interfaz de interacción de los compañeros polipeptídicos para formar un complejo polipeptídico estabilizado. En algunas realizaciones, la captura de cisteína puede estabilizar el complejo polipeptídico para favorecer una conformación específica y para prevenir la disociación. La trampa de cisteína también se denomina trampa de disulfuro y reticulación de disulfuro. Se revisan ejemplos de métodos y aplicaciones de trampa de cisteína en Kufareva,et al.,Methods Enzymol. 570: 389-420 (2016). En el contexto del MHC, se diseña por ingeniería genética una cisteína en un polipéptido que se sabe o se sospecha que se asocia en el surco de unión de un dímero del MHC de clase II. A continuación, se diseña por ingeniería genética una cisteína en o cerca del surco de unión de manera que, cuando el polipéptido se asocia con el surco de unión, la cisteína del surco de unión puede acercarse y formar un enlace disulfuro con una cisteína del polipéptido.

Emplear una trampa de cisteína requiere que dos cisteínas se diseñen por ingeniería genética en los polipéptidos que constituyen los heterodímeros. La primera cisteína es una "cisteína de surco de unión" que está dentro o cerca del surco de unión al MHC de clase II. La cisteína del surco de unión puede estar a menos de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 aminoácidos del surco de unión. La cisteína puede localizarse en cualquiera de las cadenas alfa o beta y en el extremo N o C del surco de unión. La segunda cisteína es una "cisteína de polipéptido" que está dentro o cerca de un polipéptido antigénico que se asocia en el surco de unión. La cisteína de polipéptido puede estar a menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 aminoácidos del polipéptido antigénico. La cisteína de polipéptido puede estar en el extremo N o C del polipéptido antigénico. Normalmente, el polipéptido antigénico se une a una cadena alfa o a una cadena beta mediante un enlazador flexible y se coloca una cisteína entre el enlazador y el polipéptido antigénico. En algunas realizaciones, la disposición de la cadena polipeptídica es polipéptido antigénico-polipéptido cisteína-enlazador-dominio a1 del MHC de clase II, dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la disposición de la cadena polipeptídica es polipéptido antigénico-polipéptido cisteína-enlazador-dominio p1 del MHC de clase II, dominio p2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la disposición de la cadena polipeptídica es polipéptido cisteína-polipéptido antigénicoenlazador-dominio a1 del MHC de clase II, dominio a2 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la disposición de la cadena polipeptídica es polipéptido cisteína-polipéptido antigénico-enlazador-dominio p1 del MHC de clase II, dominio p2 del MHC de clase II. Estos polipéptidos del MHC de clase II pueden comprender además un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3 con un botón diseñado por ingeniería genética en un polipéptido, y un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3 con un agujero diseñado por ingeniería genética en el otro polipéptido. En ciertos casos, un polipéptido antigénico puede comprender una cisteína de origen natural que suprima la necesidad de añadir un resto de cisteína.

En algunas realizaciones, los polipéptidos de los heterodímeros descritos en el presente documento comprenden una o más mutaciones para introducir una cisteína. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en la cadena alfa del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en la cadena beta del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en el dominio a1 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en el dominio p1 del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la mutación puede estar cerca del surco de unión que se forma entre las cadenas a1 y p1 del MHC de clase II, en cualquiera o en ambas de las cadenas alfa y beta. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en un antígeno polipeptídico que está asociado con el surco de unión. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en el extremo N del polipéptido antigénico que se asocia con el surco de unión. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en el extremo C del polipéptido antigénico que se asocia con el surco de unión. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo N de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo N del surco de unión localizado en la cadena alfa del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo N de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un residuo en el extremo C del surco de unión localizado en la cadena alfa del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo C de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo N del surco de unión localizado en la cadena alfa del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo C de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo C del surco de unión localizado en la cadena alfa del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo N de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo N del surco de unión localizado en la cadena beta del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo N de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un residuo en el extremo C del surco de unión localizado en la cadena beta del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo C de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo N del surco de unión localizado en la cadena beta del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la trampa de cisteína puede formarse entre un resto de cisteína en el extremo C de un péptido antigénico que se asocia en el surco de unión al MHC y un resto en el extremo C del surco de unión localizado en la cadena beta del MHC de clase II. En algunas realizaciones, la mutación puede estar en un polipéptido de núcleo de unión. En algunas realizaciones, la mutación comprende reemplazar un resto de aminoácido con una cisteína. En algunas realizaciones, la mutación comprende añadir un resto de cisteína en marco con otros restos.

Algunos ejemplos no limitantes de polipéptidos que comprenden una trampa de cisteína incluyen, pero sin limitación, los polipéptidos expuestos en lasSEQ ID NO: 60y61. En algunas realizaciones, los polipéptidos para trampas de cisteína comprenden una secuencia de aminoácidos con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con los polipéptidos expuestos en una cualquiera de lasSEQ ID NO: 60y61. En algunas realizaciones, la mutación a cisteína puede estar en uno cualquiera o más de los restos de los polipéptidos expuestos en lasSEQ ID NO: 62y63. En algunas realizaciones, los polipéptidos para trampas de cisteína comprenden una secuencia de aminoácidos con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con los polipéptidos expuestos en una cualquiera de lasSEQ ID NO: 62y63. En algunas realizaciones, la mutación a cisteína puede estar en uno cualquiera o más de los restos de los polipéptidos expuestos en lasSEQ ID NO: 62y63.

Conjugados de heterodímero-nanopartícula

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido. En ciertas realizaciones, el núcleo sólido puede ser un metal o un óxido metálico. En ciertas realizaciones, el núcleo sólido puede ser hierro, óxido de hierro u oro. El núcleo sólido puede ser un núcleo de alta densidad de manera que la densidad sea mayor que aproximadamente 2,0 g/cm3, aproximadamente 3,0 g/cm3, aproximadamente 4,0 g/cm3, aproximadamente 5,0 g/cm3, aproximadamente 6,0 g/cm3 o aproximadamente 7,0 g/cm3. En ciertas realizaciones, la densidad del núcleo sólido es de entre aproximadamente 4,0 g/cm3 y aproximadamente 8,0 g/cm3. En ciertas realizaciones, la densidad del núcleo sólido es de entre aproximadamente 5,0 g/cm3 y aproximadamente 8,0 g/cm3. En ciertas realizaciones, la densidad del núcleo sólido es de entre aproximadamente 5,0 g/cm3 y aproximadamente 7,0 g/cm3. En ciertas realizaciones, la densidad del núcleo sólido es de entre aproximadamente 5,0 g/cm3 y aproximadamente 6,0 g/cm3.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de óxido de hierro.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de oro.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de óxido de hierro; y el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula a través de un enlazador.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan conjugados de heterodímero-nanopartícula que comprenden al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de óxido de hierro; y el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula a través de un enlazador que comprende polietilenglicol. En algunas realizaciones, el conjugado de heterodímero-nanopartícula comprende al menos un heterodímero descrito en el presente documento y una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de óxido de hierro; y el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula a través de un enlazador que comprende polietilenglicol con una masa molecular de menos de 500 Dalton. En algunas realizaciones, el polietilenglicol tiene una masa molecular de menos de 1 kD, 2 kD, 3 kD, 4 kD, 5 kD, 6 kD, 7 kD, 8 kD, 9 kD o 10 kD. En algunas realizaciones, el polietilenglicol se funcionaliza con maleimida. En algunas realizaciones, el polietilenglicol tiene una masa molecular de entre aproximadamente 1 kD y aproximadamente 5 kD, entre aproximadamente 2 kD y aproximadamente 5 kD, entre aproximadamente 3 kD y aproximadamente 5 kD. En algunas realizaciones, el polietilenglicol se funcionaliza con maleimida. En ciertas realizaciones, el extremo del enlazador que está en contacto con el núcleo sólido está incrustado en el núcleo sólido.

En algunos aspectos, el núcleo de nanopartícula tiene un diámetro seleccionado del grupo de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 100 nm; de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 75 nm; de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 50 nm; de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 25 nm; de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 25 nm; de aproximadamente 5 nm a aproximadamente 100 nm; de aproximadamente 5 nm a aproximadamente 50 nm; de aproximadamente 5 nm a aproximadamente 25 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 25 nm, o de aproximadamente 5 nm a aproximadamente 20 nm. En algunas realizaciones, el núcleo de nanopartículas tiene un diámetro de aproximadamente 25 nm a aproximadamente 60 nm, de aproximadamente 25 nm a aproximadamente 50 nm, de aproximadamente 20 nm a aproximadamente 40 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 50 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 40 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 35 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 30 nm, o de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 25 nm, como alternativa aproximadamente 15 nm, aproximadamente 20 nm, aproximadamente 25 nm, aproximadamente 30 nm, aproximadamente 35 nm o aproximadamente 40 nm.

En algunos aspectos, el número de pMHC por núcleo de nanopartícula (denominado en el presente documento "valencia" del complejo de nanopartícula) puede variar entre aproximadamente 1 complejo de pMHC y 1 núcleo de nanopartícula y aproximadamente 6000 complejos de pMHC y 1 núcleo de nanopartícula, como alternativa entre aproximadamente 10:1 y aproximadamente 6000:1, como alternativa entre aproximadamente 11:1 y aproximadamente 6000:1, como alternativa entre aproximadamente 12:1 y aproximadamente 6000:1, como alternativa al menos 2:1, como alternativa al menos 8:1, como alternativa al menos 9:1, como alternativa al menos 10:1, como alternativa al menos 11:1 o como alternativa al menos 12:1. En algunas realizaciones, el número de pMHC por núcleo de nanopartícula es de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 6000:1, de aproximadamente 20:1 a aproximadamente 5500:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 5000:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 4000:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 3500:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 3000:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 2500:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 2000:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1500:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a 1000:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 500:1, como alternativa de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 100:1, como alternativa de aproximadamente 20:1 a aproximadamente 50:1, como alternativa de aproximadamente 25:1 a aproximadamente 60:1; como alternativa de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 50:1, como alternativa de aproximadamente 35:1 a aproximadamente 45:1, o como alternativa aproximadamente 40:1. En algunas realizaciones, el número de pMHC por núcleo de nanopartícula es de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 110:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 120:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 130:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 140:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 150:1, o de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 160:1. En algunas realizaciones, el número de pMHC por núcleo de nanopartícula es de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 110:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 120:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 130:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 140:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 150:1, o de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 160:1. En algunas realizaciones, el número de pMHC por núcleo de nanopartícula es de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 110:1, de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 120:1, de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 130:1, de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 140:1, de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 150:1, o de aproximadamente 32:1 a aproximadamente 160:1.

En algunos aspectos, el núcleo de nanopartícula tiene una valencia definida por área superficial del núcleo, también denominada en el presente documento "densidad". En estos aspectos, la densidad de pMHC por nanopartícula es de aproximadamente 0,025 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 100 pMHC/100 nm2 de la superficie del núcleo de la nanopartícula, como alternativa de aproximadamente 0,406 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 50 pMHC/100 nm2 o como alternativa de aproximadamente 0,05 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 25 pMHC/100 nm2. En ciertos aspectos, la densidad de pMHC por nanopartícula es de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 25 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 20 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 15 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 14 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 13 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 12 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 11,6 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 11.5 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 11 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 10 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 9 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 8 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 7 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 6 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 5 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 4 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 3 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 2,5 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 2 pMHC/100 nm2, o de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,5 pMHC/100 nm2.

En otro aspecto, la nanopartícula puede tener una densidad de pMHC de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 10 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 9 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 8 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 7 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 6 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 5 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 4 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 3 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 2 pMHC/100 nm2, o de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,5 pMHC/100 nm2. En algunos aspectos, la nanopartícula tiene una densidad de pMHC de aproximadamente 0,22 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 10 pMHC/100 nm2, de 0,24 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 9 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,26 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 8 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,28 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 7 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,24 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 4 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,5 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 3 pMHC/100 nm2 o de aproximadamente 0,6 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,5 pMHC/100 nm2. En un aspecto adicional, la nanopartícula tiene una densidad de pMHC de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,3 pMHC/100 nm2, como alternativa de aproximadamente 0,5 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 0,9 pMHC/100 nm2 o como alternativa de aproximadamente 0,6 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 0,8 pMHC/100 nm2.

En algunas realizaciones, la nanopartícula puede tener una densidad de pMHC de aproximadamente 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1,2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2.8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1,4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1,8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8.8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4, 11,5, 11,6, 11,7, 11,8, 11,9 o 12,0 pMHC/100 nm2. En realizaciones específicas, la nanopartícula puede tener una densidad de pMHC de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,5 pMHC/100 nm2, de 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 2,5 pMHC/100 nm2, de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 6 pMHC/100 nm2 o de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 12 pMHC/100 nm2.

En otro aspecto más, la nanopartícula tiene una densidad de pMHC como se define en el presente documento de aproximadamente 0,4 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 1,3 pMHC/100 nm2, como alternativa de aproximadamente 0,5 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 0,9 pMHC/100 nm2 o como alternativa de aproximadamente 0,6 pMHC/100 nm2 a aproximadamente 0,8 pMHC/100 nm2 y además en donde el núcleo de nanopartícula tiene un diámetro de aproximadamente 25 nm a aproximadamente 60 nm, de aproximadamente 25 nm a aproximadamente 50 nm, de aproximadamente 20 nm a aproximadamente 40 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 50 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 40 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 35 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 30 nm, de aproximadamente 15 nm a aproximadamente 25 nm, como alternativa aproximadamente 15 nm, aproximadamente 20 nm, aproximadamente 25 nm, aproximadamente 30 nm, aproximadamente 35 nm o aproximadamente 40 nm o aproximadamente 50 nm.

Componentes de moléculas coestimuladoras

En ciertos aspectos de la divulgación, las NP comprenden adicionalmente, o como alternativa consisten esencialmente en, o además consisten en al menos una molécula coestimuladora. Las moléculas coestimuladoras son moléculas que producen una señal secundariain vivoque sirve para activar linfocitos T vírgenes en linfocitos T específicos de antígeno capaces de producir una respuesta inmunitaria frente a células que poseen dicho antígeno específico. La presente divulgación no se limita a ninguna molécula coestimuladora específica. Las diversas moléculas coestimuladoras son bien conocidas en la técnica. Algunos ejemplos no limitantes de moléculas coestimuladoras son 4-IBBL, OX40L, CD40, IL-15/IL-15Ra, CD28, CD80, CD86, CD30L e ICOSL. Solo una molécula coestimuladora específica puede acoplarse a una nanopartícula o una variedad de moléculas coestimuladoras pueden acoplarse a la misma nanopartícula. En ciertas realizaciones, la molécula coestimuladora es una proteína tal como un anticuerpo que es capaz de agonizar un receptor coestimulador en un linfocito T. En este caso, el anticuerpo es capaz de inducir una señal coestimuladora que es necesaria para activar los linfocitos T vírgenes e inducir una respuesta inmunitaria de forma específica de antígeno. Además o como alternativa, la expresión "molécula coestimuladora" como se usa en el presente documento también puede referirse a un agente capaz de generar una señal coestimuladora al tener un efecto agonista sobre una molécula de señalización coestimuladora nativa, por ejemplo, ligando anti-CD28 o CD28 que genera una respuesta coestimuladora de CD28.

En realizaciones específicas, las moléculas coestimuladoras de la presente divulgación pueden ser una cualquiera o más de las siguientes moléculas B7-1/CD80, BTLA, B7-2/CD86, CD28, B7-H1/PD-L1, CTLA-4, B7-H2, Gi24/VISTA/B7-H5, B7-H3, ICOS, B7-H4, PD-1, B7-H6, PD-L2/B7-DC, B7-H7, PDCD6, LILRA3/CD85e, LILRB2/CD85d/ILT4, LILRA4/CD85g/ILT7, LILRB3/CD85a/ILT5, LILRB1/CD85j/ILT2, LILRB4/CD85k/ILT3, 4-1BB/TNFRSF9/CD137, GITR ligando/TNFSF18, ligando de 4-1BB/TNFSF9, HVEM/TNFRSF14, BAFF/BLyS/TNFSF13B, LIGHT/TNFSF14, BAFF R/TNFRSF13C, linfotoxina-alfa/TNF-beta, CD27/TNFRSF7, OX40/TNFRSF4, CD27 ligando/TNFSF7, OX40 ligando/TNFSF4, CD30/TNFRSF8, RELT/TNFRSF19L, ligando de CD30/TNFSF8, TACI/TNFRSF13B, CD40/TNFRSF5, TL1A/TNFSF15, Ligando de CD40/TNFSF5, TNF-alfa, DR3/TNFRSF25, TNF RN/TNFRSF1B, GITR/TNFRSF18, 2B4/CD244/SLAMF4, CD84/SLAMF5, BLAME/SLAMF8, CD229/SLAMF3, CD2, CRACC/SLAMF7, CD2F-10/SLAMF9, NTB-A/SLAMF6, CD48/SLAMF2, SLAM/CD150, CD58/LFA-3, CD7, DPPIV/CD26, CD96, EphB6, CD160, integrina alfa 4 beta 1, CD200, integrina alfa 4 beta 7/LPAM-1, CD300a/LMIR1, LAG-3, CRTAM, TIM-1/KIM-1/HAVCR, DAP12, TIM-4, Dectina-1/CLEC7A, TSLP R, ICOSL, y/o equivalentes biológicos de los mismos.

La molécula coestimuladora puede acoplarse a la nanopartícula de la misma manera que el complejo pMHC. En una realización de la presente divulgación, la molécula coestimuladora y el complejo antígeno/MHC se unen por separado a la nanopartícula. En otra realización de la divulgación, la molécula coestimuladora y el complejo pMHC se complejan primero entre sí y luego se complejan posteriormente con la nanopartícula. Se pueden acoplar múltiples moléculas coestimuladoras a la nanopartícula; éstas pueden ser múltiplos de la misma molécula coestimuladora o múltiples moléculas coestimuladoras diferentes. Típicamente, se añaden complejos polipeptídicos a las nanopartículas para producir nanopartículas con complejos polipeptídicos adsorbidos o acoplados que tienen una relación de número de moléculas coestimuladoras:número de nanopartículas de aproximadamente 1 a 6000 moléculas por nanopartícula, o como alternativa al menos aproximadamente o como máximo aproximadamente 0,1, 0,5, 1, 10, 100, 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000 o más a:1, y oscila entre ellos, típicamente entre aproximadamente 0,1:1 y aproximadamente 50:1. En otro aspecto, la relación de la molécula coestimuladora al complejo pMHC puede ser de aproximadamente 0,1,0,5, 1,2, 5, 10, 50 o más a 1, preferiblemente se obtiene una relación de 1:1, 1:2, 1:9, 1:10, 1:100, 2:1, 9:1, 10:1 o 100:1 de complejo molécula coestimuladora:pMHC. De manera similar, la densidad de las moléculas coestimuladoras con respecto al área superficial de las nanopartículas puede calcularse según la misma fórmula relativa que los complejos de pMHC. En ciertas realizaciones, la densidad de la molécula coestimuladora por unidad de área superficial de la nanopartícula está entre aproximadamente 0,0022 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 13,26 moléculas coestimuladoras/100 nm2. En algunas realizaciones, el intervalo de densidad de las moléculas coestimuladoras puede ser el mismo o diferente del intervalo de densidad para los complejos de pMHC.

En algunas realizaciones, en donde la nanopartícula comprende una o más moléculas coestimuladoras y no comprende un complejo de pMHC, la nanopartícula tiene una densidad coestimuladora de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 6,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 6 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5,8 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5,75 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, f de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1.5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,25 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1 molécula coestimuladora/100 nm2 o de aproximadamente 0,2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,75 moléculas coestimuladoras/100 nm2.

En otro aspecto, la nanopartícula puede tener una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4.5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1 pMHC/100 nm2 o de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,75 moléculas coestimuladoras/100 nm2. En algunos aspectos, el núcleo de nanopartícula tiene una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,11 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de 0,12 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,13 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,14 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3.5 molécula coestimuladora/100 nm2, de aproximadamente 0,12 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,25 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o de aproximadamente 0,3 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,75 moléculas coestimuladoras/100 nm2. En un aspecto adicional, el núcleo de nanopartícula tiene una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,2 molécula coestimuladora/100 nm2 a aproximadamente 0,65 moléculas coestimuladoras/100 nm2, como alternativa de aproximadamente 0,25 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,45 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o como alternativa de aproximadamente 0,3 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2.

En algunas realizaciones, en donde la nanopartícula comprende un complejo de pMHC y una o más moléculas coestimuladoras, la nanopartícula tiene una densidad coestimuladora de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 13 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 12 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 11,6 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 11.5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 11 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 10 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 9 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 8 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 7 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 6 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2.5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o de aproximadamente 0,4 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2.

En otro aspecto, la nanopartícula puede tener una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 10 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 9 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 8 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 7 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 6 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 5 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 2 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2. En algunos aspectos, el núcleo de nanopartícula tiene una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,22 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 10 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de 0,24 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 9 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,26 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 8 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,28 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 7 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,24 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 4 moléculas coestimuladoras/100 nm2, de aproximadamente 0,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 3 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o de aproximadamente 0,6 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 1,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2. En un aspecto adicional, la nanopartícula tiene una densidad de moléculas coestimuladoras de aproximadamente 0,4 molécula coestimuladora/100 nm2 a aproximadamente 1,3 moléculas coestimuladoras/100 nm2, como alternativa de aproximadamente 0,5 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,9 moléculas coestimuladoras/100 nm2 o como alternativa de aproximadamente 0,6 moléculas coestimuladoras/100 nm2 a aproximadamente 0,8 moléculas coestimuladoras/100 nm2.

En un aspecto de la divulgación, la nanopartícula comprende una molécula coestimuladora y no comprende ningún componente péptido-MHC. En ciertas realizaciones, este complejo de nanopartículas de moléculas de citocina se mezcla con un complejo de nanopartículas de péptido-MHC para formar una composición que comprende dos poblaciones diferentes de nanopartículas, una que comprende solo moléculas de citocina y una que comprende solo MHC de péptido. Estas dos poblaciones pueden mezclarse en cualquier proporción adecuada incluyendo 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8 o 1:9 de nanopartícula que comprende molécula coestimuladora a nanopartícula que comprende péptido-MHC; o 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 de nanopartícula que comprende péptido-MHC a nanopartícula que comprende molécula coestimuladora.

Citocinas

En ciertos aspectos de la divulgación, las NP comprenden además, o como alternativa consisten esencialmente en, o consisten además en al menos una molécula de citocina. Como se usa en el presente documento, el término "citocina" abarca proteínas de baja masa molecular secretadas por diversas células en el sistema inmunitario que actúan como moléculas de señalización para regular una amplia gama de procesos biológicos dentro del cuerpo a los niveles molecular y celular. "Citocinas" incluyen proteínas inmunomoduladoras individuales que se encuentran dentro de la clase de linfocinas, interleucinas o quimiocinas.

En la presente memoria se describen ejemplos no limitantes: por ejemplo, IL-1A e IL-1B son dos miembros distintos de la familia de la interleucina-1 (IL-1) humana. La IL-1A madura es una proteína de 18 kDa, también conocida como factor activador de fibroblastos (FAF), factor activador de linfocitos (LAF), factor activador de linfocitos B (BAF), mediador endógeno de leucocitos (LEM), etc. La IL-4 es una citocina que induce la diferenciación de linfocitos T colaboradores-2 (Th2), y está estrechamente relacionada con y tiene funciones similares a la IL-13. La IL-5 se produce por los linfocitos Th2 y los mastocitos. Actúa estimulando el crecimiento de linfocitos B e incrementando la secreción de inmunoglobulinas. También está implicada en la activación de eosinófilos. La IL-6 es una interleucina que puede actuar como citocina proinflamatoria o antiinflamatoria. Se secreta por los linfocitos T y los macrófagos para estimular la respuesta inmunitaria a traumatismos u otros daños tisulares que conducen a la inflamación. La IL-6 también se produce a partir del músculo en respuesta a la contracción muscular. La IL-8 es una quimiocina producida por macrófagos y otros tipos celulares tales como células epiteliales y células endoteliales, y actúa como un mediador importante de la reacción inmunitaria en la respuesta innata del sistema inmunitario. La IL-12 está implicada en la diferenciación de linfocitos T vírgenes a linfocitos T colaboradores (Th1 o Th2). Como citocina heterodimérica, la IL-12 se forma después de que dos subunidades codificadas por dos genes independientes, IL-12A (p35) e IL-12B (p40), se dimericen después de la síntesis de proteínas. IL-12p70 indica esta composición heterodimérica. La IL-13, una citocina secretada por muchos tipos celulares, especialmente los linfocitos Th2, es un mediador importante de la inflamación y enfermedad alérgicas. La IL-17 es una citocina producida por los linfocitos T colaboradores y se induce por la IL-23, dando como resultado un daño tisular destructivo en reacciones de tipo retardado. La IL17 funciona como una citocina proinflamatoria que responde a la invasión del sistema inmunitario por patógenos extracelulares e induce la destrucción de la matriz celular del patógeno. La proteína inducida por interferón gamma 10, o IP-10, también se conoce como quimiocina 10 con motivo C-X-C (CXCL10) o citocina B10 inducible pequeña. Como una pequeña citocina que pertenece a la familia de quimiocinas CXC, IP-10 se secreta por varios tipos celulares (incluidos monocitos, células endoteliales y fibroblastos) en respuesta al IFN-Y. Las proteínas inflamatorias de macrófagos (MIP) pertenecen a la familia de las quimiocinas. Existen dos formas principales de MIP, MIP-1a y MIP-1 p humanas, que también se conocen como ligando 3 de quimiocina (motivo C-C) (CCL3) y CCL4, respectivamente. Ambas se producen por macrófagos después de estimulación con endotoxinas bacterianas. El factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF o GCSF), también conocido como factor estimulante de colonias 3 (CSF 3), es una hormona de factor estimulante de colonias. El G-CSF es una glucoproteína, factor de crecimiento y citocina producida por varios tejidos diferentes para estimular la médula ósea para producir granulocitos y células madre. El G-CSF también estimula la supervivencia, proliferación, diferenciación y función de precursores de neutrófilos y neutrófilos maduros. El factor de crecimiento epidérmico o EGF es un factor de crecimiento que desempeña un papel importante en la regulación del crecimiento, proliferación y diferenciación celular mediante la unión con alta afinidad a su receptor, EGFR. El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es una familia de factores de crecimiento que son proteínas de señalización importantes implicadas tanto en la vasculogénesis (la formaciónde novodel sistema circulatorio embrionario) como en la angiogénesis (el crecimiento de vasos sanguíneos desde la vasculatura preexistente).

La citocina o citocinas pueden acoplarse a la nanopartícula de la misma manera que el complejo pMHC. En una realización de la presente divulgación, la citocina o citocinas y el complejo de pMHC se unen por separado a la nanopartícula. En otra realización de la divulgación, la molécula de citocina o citocinas y el complejo de pMHC se complejan primero entre sí y después se complejan posteriormente con la nanopartícula. Pueden acoplarse múltiples citocinas a la nanopartícula; éstas pueden ser múltiples de la misma citocina o citocinas diferentes.

En algunas realizaciones, la citocina se compleja con un anticuerpo anticitocina para formar un complejo de citocina/anticuerpo anticitocina, complejo que posteriormente se compleja con la nanopartícula. En algunas realizaciones, el complejo de citocina/anticuerpo anticitocina incluye, pero sin limitación, complejos de IL-2/anti-IL-2. Los complejos de IL-2/anti-IL-2 pueden tener propiedades agonistas o propiedades antagonistas.

En algunas realizaciones, la citocina se compleja con un receptor de citocina para formar un complejo de citocina/receptor de citocina, complejo que posteriormente se compleja con la nanopartícula. En algunas realizaciones, el complejo de citocina/receptor de citocina incluye, pero sin limitación, IL15/IL-15Ra y/o IL-1/IL-2Ra. En algunas realizaciones, el complejo IL15/IL-15Ra puede funcionar como coestimulador de linfocitos T.

Típicamente, se añaden complejos polipeptídicos a las nanopartículas para producir nanopartículas con complejos polipeptídicos adsorbidos o acoplados que tienen una relación de número de citocinas:número de nanopartículas de aproximadamente 1 a 5999 moléculas por nanopartícula, o como alternativa al menos aproximadamente o como máximo aproximadamente 0,1,0,5, 1, 10, 100, 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000 o más a 1, y oscila entre, por ejemplo entre aproximadamente 0,1:1 y aproximadamente 50:1. En otros aspectos, la proporción de la citocina al complejo antígeno/MHC puede ser de aproximadamente 0,1, 0,5, 1,2, 5, 10, 50 o más a 1, preferiblemente se obtiene una proporción de 1:1, 1:2, 1:9, 1:10, 1:100, 2:1, 9:1, 10:1 o 100:1 de complejo citocina:antígeno/MHC. De manera similar, la densidad de las citocinas con respecto al área superficial de nanopartículas puede calcularse según la misma fórmula relativa que los complejos antígeno/MHC. En ciertas realizaciones, la densidad de las citocinas por unidad de área superficial de la nanopartícula es de entre aproximadamente 0,0022 citocinas/100 nm2 a aproximadamente 13,26 citocinas/100 nm2. En algunas realizaciones, el intervalo de densidad de las citocinas puede ser el mismo o diferente del intervalo de densidad para los complejos de antígeno/MHC.

En un aspecto de la divulgación, la nanopartícula comprende una molécula de citocina y no comprende ningún componente péptido-MHC. En ciertas realizaciones, este complejo de nanopartículas de moléculas de citocina se mezcla con un complejo de nanopartículas de péptido-MHC para formar una composición que comprende dos poblaciones diferentes de nanopartículas, una que comprende solo moléculas de citocina y una que comprende solo péptido-MHC. Estas dos poblaciones pueden mezclarse en cualquier proporción adecuada, incluidas 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 de nanopartícula que comprende molécula de citocina a nanopartícula que comprende péptido-MHC; o 1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 de péptido-MHC que comprende nanopartícula a nanopartícula que comprende molécula de citocina.

Síntesis de NP

Las nanopartículas pueden formarse poniendo en contacto una fase acuosa que contiene las moléculas coestimuladoras, el complejo pMHC y/o la citocina, y un polímero y una fase no acuosa seguido de la evaporación de la fase no acuosa para provocar la coalescencia de las partículas de la fase acuosa como se enseña en la patente de EE. UU. número 4,589,330 o 4,818,542. Ciertos polímeros para dichas preparaciones son copolímeros o polímeros naturales o sintéticos que incluyen gelatina, agar, almidón, arabinogalactano, albúmina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicólido-L(-)lactida, poli(épsilon-caprolactona), poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido láctico), poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido glicólico), poli(ácido phidroxibutírico), poli(óxido de etileno), polietileno, poli(alquil-2-cianoacrilato), poli(metacrilato de hidroxietilo), poliamidas, poli(aminoácidos), poli(2-hidroxietil DL-aspartamida), poli(éster urea), poli(L-fenilalanina/etilenglicol/1,6-diisocianatohexano) y poli(metacrilato de metilo). En particular, ciertos polímeros son poliésteres, tales como ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicólido-L(-)lactida, poli(épsilon-caprolactona), poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido láctico) y poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido glicólico). Los disolventes útiles para disolver el polímero incluyen: agua, hexafluoroisopropanol, cloruro de metileno, tetrahidrofurano, hexano, benceno o sesquihidrato de hexafluoroacetona.

Las nanopartículas de oro (GNP) se sintetizan usando reducción química de cloruro de oro con citrato de sodio como se describe (Perrault, S.D.etal.(2009) Nano Lett 9:1909-1915). En resumen, se añaden 2 ml de HAuCU al 1 % (Sigma Aldrich) a 100 ml de H2O con agitación vigorosa y la solución se calienta en un baño de aceite. Se añaden seis (para GNP de 14 nm) o dos ml (para GNP de 40 nm) de citrato de Na al 1 % a la solución de HAuCl4 en ebullición, que se agita durante 10 min más y después se enfría a temperatura ambiente. Las GNP se estabilizan mediante la adición de 1 pMol de enlazadores tiol-PEG (Nanocs, MA) funcionalizados con grupos -COOH o -NH2 como aceptores del MHC. Las GNP pegiladas se lavan con agua para eliminar el tiol-PEG libre, se concentran y se almacenan en agua para análisis adicional. La densidad de NP se determina por espectrofotometría y se calcula según la ley de Beer.

Las NP de óxido de hierro de la serie SFP (SFP IONP) también se pueden producir por descomposición térmica de acetato de hierro en disolventes orgánicos en presencia de tensioactivos, después se convierte en disolvente en tampones acuosos por pegilación (Xie, J.et al.(2007) Adv Mater 19:3163; Xie, J.et al.(2006) Pure Appl. Chem. 78:1003-1014; Xu, C.et al.(2007) Polymer International 56:821-826). En resumen, se disuelven 2 mMol de Fe(acac)3 (Sigma Aldrich, Oakville, ON) en una mezcla de 10 ml de éter bencílico y oleilamina y se calientan a 100 °C durante 1 hora seguido de 300 °C durante 2 horas con reflujo bajo la protección de una manta de nitrógeno. Las NP sintetizadas se precipitan mediante la adición de etanol y se resuspenden en hexano. Para la pegilación de las IONP, se disuelven 100 mg de diferentes enlazadores de DPA-PEG de 3,5 kDa (JenKem Tech USA) en una mezcla de CHCta y HCON(CH3)2 (Dimetilformamida (DMF)). La solución de NP (20 mg de Fe) se añade a continuación a la solución de DPA-PEG y se agita durante 4 h a temperatura ambiente. Las NP de SFP pegiladas se precipitan durante una noche mediante la adición de hexano y después se resuspenden en agua. Se eliminan cantidades traza de agregados mediante centrifugación a alta velocidad (20.000 xg, 30 min), y las NP de SFP monodispersas se almacenan en agua para una caracterización adicional y conjugación de pMHC. La concentración de hierro en los productos de IONP se determina por espectrofotometría a A410 en HCl 2 N. Basándose en la estructura molecular y el diámetro de las NP de SFP (Fe3O4; 8 ± 1 nm de diámetro) (Xie, J.et al.(2007) Adv Mater 19:3163; Xie, J.et al.(2006) Pure Appl. Chem.

78:1003-1014), el solicitante estima que las soluciones de SFP que contienen 1 mg de hierro contienen 5x1014 NP.

Las nanopartículas también pueden prepararse mediante descomposición térmica o calentamiento de un precursor de nanopartículas. En una realización, la nanopartícula es una nanopartícula de metal o de óxido metálico. En una realización, la nanopartícula es una nanopartícula de óxido de hierro. En una realización, la nanopartícula es una nanopartícula de oro. En una realización, se proporcionan en el presente documento las nanopartículas preparadas según la presente tecnología. En una realización, en el presente documento se proporciona un método para preparar nanopartículas de óxido de hierro que comprende una reacción de descomposición térmica de acetilacetonato de hierro. En una realización, la nanopartícula de óxido de hierro obtenida es soluble en agua. En un aspecto, la nanopartícula de óxido de hierro es adecuada para la conjugación de proteínas. En una realización, el método comprende una reacción de descomposición térmica en una sola etapa.

En un aspecto, la descomposición térmica se produce en presencia de moléculas de PEG funcionalizadas.

En un aspecto, la descomposición térmica comprende calentar acetilacetonato de hierro. En una realización, la descomposición térmica comprende calentar acetilacetonato de hierro en presencia de moléculas de PEG funcionalizadas. En una realización, la descomposición térmica comprende calentar acetilacetonato de hierro en presencia de éter bencílico y moléculas de PEG funcionalizadas.

Sin estar limitados por la teoría, en una realización, se usan moléculas de PEG funcionalizadas como reactivos reductores y como tensioactivos. El método de producción de nanopartículas proporcionado en el presente documento simplifica y mejora métodos convencionales, que usan tensioactivos que son difíciles de desplazar, o no se desplazan hasta su terminación, por moléculas de PEG para hacer que las partículas sean solubles en agua. Convencionalmente, los tensioactivos pueden ser caros (por ejemplo, fosfolípidos) o tóxicos (por ejemplo, ácido oleico u oleilamina). En otro aspecto, sin estar ligado a teoría alguna, el método de fabricación de nanopartículas evita la necesidad de usar tensioactivos convencionales, logrando de este modo un alto grado de pureza molecular y solubilidad en agua.

En una realización, la descomposición térmica implica acetilacetonato de hierro y éter bencílico y en ausencia de tensioactivos convencionales distintos de los empleados en el presente documento.

En una realización, la temperatura para la descomposición térmica es de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 300 °C, o de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 200 °C, o de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 150 °C, o de aproximadamente 100 °C a aproximadamente 250 °C, o de aproximadamente 100 °C a aproximadamente 200 °C, o de aproximadamente 150 °C a aproximadamente 250 °C, o de aproximadamente 150 °C a aproximadamente 250 °C. En una realización, la descomposición térmica se produce en de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 horas.

En una realización, el método de fabricación de nanopartículas de óxido de hierro comprende una etapa de purificación, tal como mediante el uso de una columna magnética Miltenyi Biotec LS.

En una realización, las nanopartículas son estables a aproximadamente 4 °C en solución salina tamponada con fosfato (PBS) sin ninguna degradación o agregación detectable. En una realización, las nanopartículas son estables durante al menos 6 meses.

En un aspecto, en el presente documento se proporciona un método para preparar complejos de nanopartículas que comprende poner en contacto pMHC con nanopartículas de óxido de hierro proporcionadas en el presente documento. Sin estar ligados por la teoría, pMHC codifica una cisteína en su extremo carboxilo terminal, que puede reaccionar con el grupo maleimida en PEG funcionalizado a de aproximadamente pH 6,2 a aproximadamente pH 6,5 durante de aproximadamente 12 a aproximadamente 14 horas.

En un aspecto, el método de preparación de complejos de nanopartículas comprende una etapa de purificación, tal como mediante el uso de una columna magnética Miltenyi Biotec LS.

Antígenos relevantes para la enfermedad

El complejo pMHC del pMHC-NP se selecciona para su uso basándose en la enfermedad que se va a tratar. Por ejemplo, un antígeno relevante para la diabetes es un antígeno o fragmento del mismo que se expresa en la célula, tejido u órgano dirigido a esa enfermedad autoinmunitaria y que se expone al sistema inmunitario tras el daño celular, tisular u orgánico provocado por la respuesta autoinmunitaria, incluso si el antígeno no es el desencadenante del proceso de enfermedad o un jugador clave en su patogénesis, y cuando se presenta, produce una respuesta inmunitaria que sirve para tratar la diabetes; por tanto, se selecciona un antígeno relevante para la diabetes que cumple esta definición para tratar la diabetes. Se selecciona un antígeno relevante para la EM para tratar la EM. No se seleccionaría un antígeno relevante para diabetes para tratar la EM. Un antígeno relevante para el cáncer o relevante para tumores trataría cánceres y/o tumores. En el presente documento se divulgan antígenos relevantes para la enfermedad ilustrativos, no limitantes, y además, dichos antígenos pueden determinarse para una enfermedad particular basándose en técnicas, mecanismos y métodos bien documentados en la bibliografía.

En ciertos aspectos, el antígeno relevante para la enfermedad comprendido en el complejo antígeno-MHC se selecciona de un antígeno relevante para la enfermedad autoinmunitaria, un antígeno relevante para la inflamación o un antígeno relevante para la enfermedad alérgica. En aspectos adicionales, el antígeno relevante para la inflamación inmunitaria es uno o más seleccionados del grupo de un antígeno relevante para el asma, un antígeno relevante para la diabetes, un antígeno relevante para la prediabetes, un antígeno relevante para la esclerosis múltiple, un antígeno relevante para el asma alérgica, un antígeno relevante para la cirrosis biliar primaria, un antígeno relevante para la cirrosis, un antígeno relevante para el trastorno del espectro de la neuromielitis óptica (enfermedad de Devic, NMO), un antígeno relevante para la encefalitis autoinmunitaria, un antígeno relevante para síndromes neurológicos mediados por autoanticuerpos, un antígeno relevante para el síndrome del hombre rígido, un antígeno relevante para la enfermedad paraneoplásica, antígenos relevantes para otras enfermedades de los sistemas nerviosos central y periférico, un antígeno relevante para el pénfigo vulgar, antígeno relevante para la enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), antígeno relevante para la enfermedad de Crohn, antígeno relevante para la colitis ulcerosa, un antígeno relevante para la artritis, un antígeno relevante para la artritis reumatoide, un antígeno relevante para lupus eritematoso sistémico (LES), un antígeno relevante para enfermedad celíaca, un antígeno relevante para psoriasis, un antígeno relevante para alopecia areata, un antígeno relevante para púrpura trombocitopénica adquirida, un antígeno relevante para miocardiopatía autoinmunitaria, un antígeno relevante para miocardiopatía dilatada idiopática (IDCM), un antígeno relevante para miastenia grave, un antígeno relevante para uveítis, un antígeno relevante para espondilitis anquilosante, un antígeno relevante para enfermedad de Grave, un antígeno relevante para tiroiditis de Hashimoto, un antígeno relevante para miopatías mediada por sistema inmunitario, un antígeno relevante para el síndrome antifosfolípido (ANCA+), un antígeno relevante para ateroesclerosis, un antígeno relevante para esclerodermatitis, un antígeno relevante para hepatitis autoinmunitaria, un antígeno relevante para dermatomiositis, un antígeno relevante para enfermedad pulmonar obstructiva crónica, un antígeno relevante para la lesión de la médula espinal, un antígeno relevante para la lesión traumática, un antígeno relevante para la destrucción pulmonar inducida por tabaco, un antígeno relevante para la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), un antígeno relevante para el enfisema pulmonar, un antígeno relevante para la colangitis esclerosante, un antígeno relevante para la neuropatía periférica, un antígeno relevante para la narcolepsia, un antígeno relevante para el síndrome de Goodpasture, un antígeno relevante para la enfermedad de Kawasaki, un antígeno relevante para la uveítis autoinmune, un antígeno relevante para la colitis, un antígeno relevante para el enfisema, un antígeno relevante para el pénfigo, un antígeno relevante para el pénfigo foliáceo, un antígeno relevante para la artritis, un antígeno relevante para el síndrome de Sjogren un antígeno relevante para la vasculitis asociado con ANCA, un antígeno relevante para la colangitis esclerosante primaria, un antígeno relevante para la inflamación del tejido adiposo/diabetes tipo II, o un antígeno relevante para la inflamación del tejido adiposo/resistencia a la insulina asociado a la obesidad.

En ciertos aspectos, el antígeno relevante para la enfermedad procede de uno o más del grupo: PPI, IGRP, GAD, periferina, aGlía, PDC-E2, insulina, DG1EC2, DG3, AQP4, PLP, MOG, MBP, CII, DERP1, DERP2, OVA, BacInt, CBir, Fla-X, Fla-2, YIDX, AChR, peroxidasa tiroidea, receptor tiroideo, antígeno fosfolipídico, H4, H2B, H1, ADN, ApoB, ApoE, NMDAR, canal de potasio activado por voltaje, elastina, arrestina, mieloperoxidasa PERM_HUMAN, PRTN3_HUMAN mieloblastina, CP2D6_HUMAN citocromo P450 2D6, SPCS_HUMAN O-fosfoseril-ARNt(Sec) selenio transferasa, péptido antimicrobiano de catelicidina CAMP_HUMAN, ADN topoisomerasa I, CeNP-C, APOH_Hu Ma N beta-2-glicoproteína 1, RO60_HUMAN proteína s S-A/Ro ribonucleoproteína de 60 kDa, proteína LA_HUMAN lupus La, IRBP, miosina, antígenos lipídicos de unión a CD1d, Cap18, CP2D6, SPCS, RO60, RO52, LA, APOH, MPO, PRTN3 o HSP.

En algunas realizaciones, el antígeno relevante para la enfermedad es:

a) un antígeno relevante para la diabetes y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: preproinsulina (PPI), glucosa-6-fosfatasa específica de islotes (IGRP), glutamato descarboxilasa (GAD), autoantígeno-2 de células de islotes (ICA2), insulina, proinsulina o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

b) un antígeno relevante para la esclerosis múltiple y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: proteína básica de mielina, glicoproteína asociada a mielina, proteína de oligodendrocitos de mielina, proteína proteolipídica, oligoproteína de mielina de oligodendrocitos, proteína básica de oligodendrocitos asociada a mielina, proteína específica de oligodendrocitos, proteínas de choque térmico, proteínas específicas de oligodendrocitos, NOGO A, glicoproteína Po, proteína periférica de mielina 22, 3'-fosfodiesterasa de nucleótido 2'3'-cíclico, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

c) un antígeno relevante para la enfermedad celíaca y se deriva de gliadina o un fragmento o un equivalente de la misma;

d) un antígeno primario relevante para la cirrosis biliar y se deriva de PDC-E2 o un fragmento o un equivalente del mismo;

e) un antígeno relevante para el pénfigo foliáceo y/o antígeno relevante para pénfigo vulgar y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DG1, DG3, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

f) un antígeno relevante para el trastorno del espectro de la neuromielitis óptica y se deriva de AQP4 o un fragmento o un equivalente del mismo;

g) un antígeno relevante para la artritis y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: proteínas de choque térmico, proteína de unión a inmunoglobulina, RNP nucleares heterogéneos, anexina V, calpastatina, colágeno de tipo II, glucosa-6-fosfato isomerasa, factor de elongación gp39 de cartílago humano, lectina de unión a manosa, vimentina citrulinada, colágeno de tipo II, fibrinógeno, alfa enolasa, proteína anticarbamilada (anti-CarP), peptidil arginina desiminasa de tipo 4 (PAD4), BRAF, cadena gamma de fibrinógeno, cadena pesada H1 del inhibidor de inter-alfa-tripsina, alfa-1-antitripsina, inhibidor de proteasa plasmática C1, gelsolina, glicoproteína alfa 1-B, ceruloplasmina, cadena pesada H4 del inhibidor de inter-alfa-tripsina, factor H del complemento, alfa 2 macroglobulina, amiloide sérico, proteína C reactiva, albúmina sérica, cadena beta de fibrógeno, serotransferrina, glicoproteína alfa 2 HS, vimentina, complemento C3, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

h) un antígeno relevante para el asma alérgico y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DERP1, DERP2, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

i) un antígeno relevante para la enfermedad inflamatoria intestinal y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: Flagelina, Fla-2, Fla-X, YIDX, integrasa de bacteroides, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

j) un antígeno relevante para lupus eritematoso sistémico y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: ADN bicatenario (ds), ribonucleoproteína (RNP), Smith (Sm), antígeno relacionado con el síndrome de Sjogren A (SS-A)/Ro, antígeno relacionado con el síndrome de Sjogren B (SS-B)/La, RO60, RO52, histonas o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

k) un antígeno relevante para la ateroesclerosis y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: ApoB, ApoE o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

l) un antígeno relevante para la EPOC y/o un antígeno relevante para el enfisema y se deriva de elastina o un fragmento o un equivalente de la misma;

m) un antígeno relevante para la psoriasis y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: Cap18, ADMTSL5, ATL5, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

n) un antígeno relevante para la autoinmunidad para la hepatitis y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: CYP2D6, SLA, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos; o) un antígeno relevante para uveítis y se deriva de arrestina o un fragmento o un equivalente de la misma; p) un antígeno relevante para el síndrome de Sjogren y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: (SS-A)/Ro, (SS-B)/La, MR3, RO60, RO52, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

q) un antígeno relevante para la esclerodermatitis y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: CENP-C, TOP 1, ARN polimerasa III, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

r) un antígeno relevante para el síndrome antifosfolípido y se deriva de APOH o un fragmento o un equivalente del mismo;

s) un antígeno relevante para vasculitis asociado a ANCA y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: MPO, PRTN3, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos; o t) un antígeno relevante para el síndrome de hombre rígido y se deriva de GAD o un fragmento o un equivalente de la misma.

Antígenos relevantes para la diabetes

Algunos antígenos relevantes para la diabetes incluyen, pero sin limitación, los derivados de PPI, IGRP, GAD, autoantígeno-2 de células de islotes (ICA2) y/o insulina. Algunos péptidos antigénicos autorreactivos relevantes para la diabetes incluyen, pero sin limitación, los enumerados en laTabla 1a continuación, además de los péptidos y proteínas divulgados en la publicación de EE. UU. 2005/0202032, así como los equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la EM

Los antígenos de la divulgación incluyen antígenos relacionados con la esclerosis múltiple. Dichos antígenos incluyen, por ejemplo, los descritos en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. número 2012/0077686 y antígenos derivados de la proteína básica de mielina, glicoproteína asociada a mielina, proteína de oligodendrocitos de mielina, proteína proteolipídica, oligoproteína de mielina de oligodendrocitos, proteína básica de oligodendrocitos asociada a mielina, proteína específica de oligodendrocitos, proteínas de choque térmico, proteínas específicas de oligodendrocitos NOGO A, glicoproteína Po, proteína periférica de mielina 22, o 3'-fosfodiesterasa de nucleótido 2'3'-cíclico. En ciertas realizaciones, el antígeno se deriva de la glicoproteína de oligodendrocitos de mielina (MOG).

En otros aspectos adicionales, los antígenos peptídicos para el tratamiento de la EM y trastornos relacionados con la EM incluyen, sin limitación, los enumerados en laTabla 2, así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos:

Antígenos relevantes para la enfermedad celíaca (CD)

Los antígenos relevantes para la enfermedad celíaca incluyen, pero sin limitación, los derivados de gliadina. En algunas realizaciones, los tipos no limitantes de gliadina incluyen gliadina alfa/beta, gliadina y, o gliadina w. Otros antígenos relevantes para la enfermedad celíaca ilustrativos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 3así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la cirrosis biliar primaria (CBP)

Los antígenos relevantes para la cirrosis biliar primaria incluyen, pero sin limitación, los derivados de PDC-E2. Algunos ejemplos no limitantes de antígenos ilustrativos incluyen los enumerados enTabla 4así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para el pénfigo foliáceo (PF) y el pénfigo vulgar (PV)

Los antígenos relevantes para el PF y el PV incluyen, pero sin limitación, los derivados de desmogleína 3 (DG3) y/o desmogleína 1 (DG1). Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 5así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para el trastorno del espectro de la neuromielitis óptica (NMO)

Los antígenos relevantes para NMO incluyen, pero sin limitación, los derivados de AQP4 o acuaporina 4. Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 6así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la artritis

Los antígenos relevantes para la artritis incluyen, pero sin limitación, los derivados de proteínas de choque térmico, proteína de unión a inmunoglobulina, RNP nucleares heterogéneos, anexina V, calpastatina, colágeno de tipo II, glucosa-6-fosfato isomerasa, factor de elongación gp39 de cartílago humano, lectina de unión a manosa, vimentina citrulinada, colágeno de tipo II, fibrinógeno, alfa enolasa, proteína anticarbamilada (anti-CarP), peptidil arginina desiminasa de tipo 4 (PAD4), BRAF, cadena gamma de fibrinógeno, cadena pesada H1 del inhibidor de inter-alfa-tripsina, alfa-1-antitripsina, inhibidor de proteasa plasmática C1, gelsolina, glicoproteína alfa 1-B, ceruloplasmina, cadena pesada H4 del inhibidor de inter-alfa-tripsina, factor de complemento H, alfa 2 macroglobulina, amiloide sérico, proteína C reactiva, albúmina sérica, cadena beta de fibrógeno, serotransferrina, Glucoproteína alfa 2 HS, vimentina, C3 del Complemento, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para el asma alérgica

Los antígenos relevantes para el asma alérgica incluyen, pero sin limitación, los derivados de DERP1 y DERP2. Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 7así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la enfermedad inflamatoria intestinal

Los antígenos relevantes para la enfermedad inflamatoria intestinal incluyen, pero sin limitación, antígenos relevantes para la enfermedad de Crohn y antígenos relevantes para la colitis ulcerosa. En algunas realizaciones, los antígenos relevantes para la enfermedad inflamatoria intestinal incluyen, pero sin limitación, los derivados de integrasa de bacteroides, flagelina, flagelina 2 (Fla-2/Fla-X) o proteína deE. coIíno caracterizada (YIDX). Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 8así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para el lupus eritematoso sistémico (LES)

Los antígenos relevantes para el LES incluyen, pero sin limitación, los derivados de H4, H2B, H1', ADNbc, RNP, Smith (Sm), Antígeno A relacionado con el síndrome de Sjogren (SS-A)/Ro, Antígeno B relacionado con el síndrome de Sjogren (SS-B)/La, y/o histonas. En algunas realizaciones, SS-A incluye, pero sin limitación, RO60 y RO52. En algunas realizaciones, las histonas incluyen, pero sin limitación, H4, H2B, H1'. Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en la Tabla 9, así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la ateroesclerosis

Los antígenos relevantes para la ateroesclerosis incluyen, pero sin limitación, los derivados de apolipoproteína B (ApoB) o apolipoproteína E (ApoE). Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 10así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y/o el enfisema pulmonar

Los antígenos relevantes para la EPOC y/o el enfisema incluyen, pero sin limitación, los derivados de elastina. Algunos ejemplos no limitantes incluyen los enumerados en laTabla 11así como equivalentes y/o combinaciones de cada uno de los mismos.

Antígenos relevantes para la psoriasis

Los antígenos relevantes para la psoriasis incluyen, pero sin limitación, los enumerados a continuaciónTabla 12, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Otros antígenos relevantes para la psoriasis ilustrativos no limitantes pueden derivarse de la proteína 5 de tipo adamis humana (ATL5), el péptido antimicrobiano de catelicidina (CAP18) y/o la proteína 5 de tipo ADa Mt S (ADMTSL5).

Antígenos relevantes para la hepatitis autoinmunitaria

Los antígenos relevantes para la hepatitis autoinmunitaria incluyen, pero sin limitación, los descritos a continuación en laTabla 13, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Otros antígenos relevantes para la hepatitis autoinmunitaria ilustrativos no limitantes pueden derivarse del citocromo P450IID6 microsomal (CYP2D6) y/o del antígeno hepático soluble (SLA).

Antígenos relevantes para la uveítis

Los antígenos relevantes para la uveítis incluyen, pero sin limitación, los descritos a continuación en laTabla 14, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Otros antígenos relevantes para la uveítis ilustrativos no limitantes pueden derivarse de arrestina, antígeno S retiniano humano y/o proteína de unión a retinoides interfotorreceptora (IRBP).

Antígenos relevantes para el síndrome de Sjogren

Los antígenos relevantes para el síndrome de Sjogren incluyen, pero sin limitación, los divulgados a continuación en laTabla 15, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Otros antígenos relevantes para el síndrome de Sjogren ilustrativos no limitantes pueden derivarse de (SS-A)/Ro, (SS-B)/La, RO60, Ro 52 y/o receptor muscarínico 3 (MR3).

Antígenos relevantes para la esclerodermatitis

Los antígenos relevantes para la esclerodermatitis incluyen, pero sin limitación, los descritos a continuación en laTabla 16, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Los antígenos relevantes para esclerodermatitis ilustrativos no limitantes pueden derivarse de proteína C centromérica del autoantígeno centromérico (CENP-C), ADN topoisomerasa I (TOP1) y/o ARN polimerasa III.

Antígenos relevantes para el síndrome antifosfolípido

Los antígenos relevantes para el síndrome antifosfolípido incluyen, pero sin limitación, los descritos a continuación en laTabla 17, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Los antígenos relevantes para el síndrome antifosfolípidos ilustrativos no limitantes pueden derivarse de beta-2-glicoproteína 1 (BG2P1 o APOH).

Antígenos relevantes para la vasculitis asociados a ANCA

Los antígenos relevantes para la vasculitis asociados a ANCA incluyen, pero sin limitación, los divulgados a continuación en laTabla 18, así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Los antígenos relevantes para la vasculitis asociados a ANCA ilustrativos no limitantes pueden derivarse de mieloperoxidasa (MPO), proteinasa (PRTN3) o factor de aumento de permeabilidad bacteriana (BPI).

Antígenos relevantes para el síndrome del hombre rígido

Los antígenos relevantes para el síndrome del hombre rígido incluyen, pero sin limitación, los divulgados a continuación en laTabla 14,así como equivalentes y/o combinaciones de los mismos. Los antígenos relevantes para el síndrome del hombre rígido ilustrativos no limitantes pueden derivarse de glutamato descarboxilasa (GAD). En algunas realizaciones, GAD incluye, pero sin limitación, GAD65.

Se contempla que en las composiciones de la divulgación, haya entre aproximadamente 0,001 mg y aproximadamente 10 mg de proteína total por ml en la composición. Por tanto, la concentración de proteína en una composición puede ser de aproximadamente, al menos aproximadamente o como máximo aproximadamente 0,001, 0,010, 0,050, 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 50, 100 pg/ml o mg/ml o más (o cualquier intervalo derivable en el mismo). De esto, aproximadamente, al menos aproximadamente, o como máximo aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51,52, 53, 54, 55, 56,

57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85,

86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100 % puede ser un complejo de péptido/MHC/nanopartícula.

La presente divulgación contempla la administración de un complejo péptido/MHC/nanopartícula para efectuar

un diagnóstico, tratamiento o terapia preventiva contra el desarrollo de una enfermedad o afección asociada

con respuestas autoinmunitarias o cáncer.

Además, la patente de EE. UU. número 4,554,101 (Hopp) enseña la identificación y preparación de epítopos a

partir de secuencias de aminoácidos primarias basándose en la hidrofilia. Mediante los métodos descritos en

Hopp, un experto en la técnica sería capaz de identificar posibles epítopos dentro de una secuencia de aminoácidos y confirmar su inmunogenicidad. También se han dedicado numerosas publicaciones científicas

a la predicción de la estructura secundaria y a la identificación de epítopos, a partir de análisis de secuencias

de aminoácidos (Chou y Fasman, 1974a,b; 1978a,b; 1979). Cualquiera de estos puede usarse, si se desea,

para complementar las enseñanzas de Hopp en la patente de EE. UU. número 4,554,101.

Otros componentes antigénicos

Se pueden usar moléculas distintas de péptidos como antígenos o fragmentos antigénicos en complejo con moléculas del MHC. Dichas moléculas incluyen, pero sin limitación, carbohidratos, lípidos, moléculas pequeñas

y similares. Los carbohidratos son componentes principales de la superficie externa de una variedad de células.

Ciertos carbohidratos son característicos de diferentes etapas de diferenciación y muy a menudo estos carbohidratos son reconocidos por anticuerpos específicos. La expresión de distintos carbohidratos puede restringirse a tipos celulares específicos. Se ha demostrado que las respuestas de autoanticuerpos a antígenos endometriales y séricos son una característica común de la endometriosis. Se ha descrito una respuesta de autoanticuerpos en suero en la endometriosis a varios antígenos previamente identificados, incluyendo glicoproteína de 2-Heremans Schmidt y anhidrasa carbónica, que es específica para un epítopo de carbohidrato.

Complejos antígeno-MHC ilustrativos, no limitantes

En ciertas realizaciones, las combinaciones específicas de antígeno y MHC pueden optimizarse para el tratamiento de una enfermedad específica. Algunos ejemplos no limitantes incluyen, pero sin limitación, los

siguientes ejemplos:

Para el tratamiento de la diabetes tipo I, el antígeno del complejo pPPI puede derivarse de un antígeno del

grupo: PPI76-90 (K88S), IGRP13-25, GAD555-567, GAD555-567 (5571), IGRP23-35, B24-C36, PPI76-90 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y el MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DRB 1 *0401/DRA, HLA-DRB 1 *0301/DRA, o un fragmento o un equivalente de

cada uno de los mismos.

En algunas realizaciones, el antígeno del complejo pMHC comprende:

a) un antígeno relevante para la diabetes y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: preproinsulina (PPI), glucosa-6-fosfatasa específica de islotes (IGRP), glutamato descarboxilasa (GAD), autoantígeno-2 de células de islotes (ICA2), insulina, proinsulina o un fragmento o un equivalente de cada

uno de los mismos;

b) un antígeno relevante para la esclerosis múltiple y se deriva de un antígeno seleccionado de uno o más

del grupo: proteína básica de mielina, glicoproteína asociada a mielina, proteína de oligodendrocitos de

mielina, proteína proteolipídica, oligoproteína de mielina de oligodendrocitos, proteína básica de oligodendrocitos asociada a mielina, proteína específica de oligodendrocitos, proteínas de choque térmico,

proteínas específicas de oligodendrocitos, NOGO A, glicoproteína Po, proteína periférica de mielina 22, 3'-fosfodiesterasa de nucleótido 2'3'-cíclico, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

c) un antígeno relevante para la enfermedad celíaca y se deriva de gliadina o un fragmento o un equivalente

de la misma;

e) un antígeno relevante para el pénfigo foliáceo y/o antígeno relevante para pénfigo vulgar y se deriva de

un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DG1, DG3, o un fragmento o un equivalente de cada

uno de los mismos;

En algunas realizaciones de la divulgación, la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de una proteína MHC de clase I clásica, proteína MHC de clase I no clásica, proteína MHC de clase II clásica, proteína MHC de clase II no clásica, dímeros de MHC (fusiones Fc), tetrámeros de MHC o una forma polimérica de una proteína MHC, en donde la proteína MHC comprende opcionalmente un heterodímero o multímero de MHC-alfa-Fc/MHC-beta-Fc basado en botón en ojal.

En algunas realizaciones, la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA DR, HLA DQ, HLA DP, HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F, HLA-G, CD1d, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

En algunas realizaciones, la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

En algunas realizaciones, la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DRB1/DRA, HLA-DRB3/DRA, HLA-DRB4/DRA, HLA-DRB5/DRA, HLA-DQA1/HLA-DQB1, HLA-DPB1/HLA-DPA1, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

En ciertos aspectos, el complejo pMHC comprende:

a) un antígeno relevante para la diabetes derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: hInsB10-18, hIGRP228-236, hIGRP265-273, IGRP206-214, hIGRP206-214, NRP-A7, NRP-I4, NRP-V7, YAI/Db, INS B15-23, PPI76 -90(K88S), IGRP13-25, GAD555-567, GAD555-567(557I), IGRP23-35, B24-C36, PPI76-90, INS-I9, TUM, G6Pasa, Pro-insulinaL2-10, Pro-insulinaL3-11, Pro-insulinaL6-14, Pro-insulinaB5-14, Pro-insulinaB10-18, Pro-insulinaBu-22, Pro-insulinaB15-24, Pro-insulinaB17-25, Pro-insulinaB18-27, Pro-insulinaB20-27, Pro-insulinaB21-29, Pro-insulinaB25-C1, Pro-insulinaB27-C5, Pro-insulinaC20-28, Pro-insulinaC25-33, Pro-insulinaC29-A5, Pro-insulinaA1-10, Pro-insulinaA2-10, Pro-insulinaA12-20, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

b) un antígeno relevante para la esclerosis múltiple derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: MOG35-55, MOG36-55, MAG287-295, MAG509-517, MAG556-564, MBP110-118, MOG114-122, MOG166-175, MOG172-180, MOG179-188, MOG188-196, MOG181-189, MOG205-214, PLP80-88, MAG287-295, MAG509-517, MAG556-564, MOG97-109 MOG97-109 (E107S), MBP89-101, PLP175-192, PLP94-108, MBP86-98, PLP54-68, PLP249-263, MOG156-170, MOG201-215, MOG38-52, MOG203-217, PLP250-264, MPB13-32, MPB83-99, MPB111-129, MPB146-170, MOG223-237, MOG6-20, PLP88-102, PLP139-154 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

c) un antígeno relevante para la enfermedad celíaca derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: aGlia57-68, aGlia62-72, aGlia217-229 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

d) un antígeno primario relevante para la cirrosis biliar derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: PDC-E2122-135, PDC-E2249-262, PDC-E2249-263, PDC-E2629-643, PDC-E272-86, PDC-E2353-367, PDC-E2422-436, PDC-E2629-643, PDC-E280-94, PDC-E2353-367, PDC-E2535-549 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

e) un antígeno relevante para el pénfigo foliáceo y/o antígeno relevante para el pénfigo vulgar, cada uno de los cuales deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DG1216-229, DG397-111, DG3251-265, DG3441-455, DG3351-365, DG3453-467, DG3540-554, DG3280-294, DG3326-340, DG3367-381, DG313-27, DG3323-337, DG3438-452, DG148-62, DG1206-222, DG1363-377, DG13-17, DG1192-206, DG1326-340, DG11-15, DG135-49, DG1325-339 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

f) un antígeno relevante para el trastorno del espectro de la neuromielitis óptica derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: AQP4129-143, AQP4284-298, AQP463-76, AQP4129-143, AQP439-53 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

g) un antígeno alérgico relevante para el asma derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DERP116-30, DERP1171-185, DERP 1110-124, DERP-226-40, DERP-2 107-121 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

h) un antígeno relevante para la enfermedad inflamatoria intestinal derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: antígeno de integrasa de bacteroides183-197, antígeno de integrasa de bacteroides146-160, antígeno de integrasa de bacteroides175-189, antígeno de integrasa de bacteroides1-15, antígeno de integrasa de bacteroides183-197, antígeno de integrasa de bacteroides30-44, antígeno de integrasa de bacteroides70-84, antígeno de integrasa de bacteroides337-351, antígeno de integrasa de bacteroides171-185, antígeno de integrasa de bacteroides4-18, antígeno de integrasa de bacteroides256-270, Fla-2/Fla-X366-380, Fla-2/Fla-X164-178, Fla-2/Fla-X261-275, Fla-2/Fla-X1-15, Fla-2/Fla-X51-65, Fla-2/Fla-X269-283, Fla-2/Fla-X4-18, Fla-2/Fla-X271-285, YIDX78-92, YIDX93-107, YIDX98-112, YIDX23-37, YIDX78-92, YIDX195-209, YIDX22-36, YIDX80-94, YIDX101-115, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

i) un antígeno relevante para lupus eritematoso sistémico derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: H471-94, H474-88, H476-90, H475-89, H478-92, H480-94, H2B10-24, H2B16-30, H1'22-42, H1'27-41 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

j) un antígeno relevante para ateroesclerosis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: ApoB3501-3516, ApoB1952-1966, ApoB978-993, ApoB3498-3513, ApoB210A, ApoB210B, ApoB210C o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

k) un antígeno relevante para EPOC y/o un antígeno relevante para el enfisema, cada uno de los cuales deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: elastina89-103, elastina698-712, elastina8-22, elastina94-108, elastina13-27, elastina695-709, elastina563-577, elastina558-572, elastina698-712, elastina566-580, elastina645-659 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

l) un antígeno relevante para psoriasis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: Cap1864-78, Cap1834-48, Cap1847-61, Cap18151-165, Cap18149-163, Cap18152-166, Cap18131-145, Tapa1824-38, ADMTSL5245-259, ADMTSL5267-281, ADMTSL5372-386, ADMTSL5289-303, ADMTSL5396-410, ADMTSL5433-447, ADMTSL5142-156, ADMTSL5236-250, ADMTSL5301-315, ADMTSL5203-217, ADMTSL5404-418 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

m) un antígeno relevante para la autoinmunidad para la hepatitis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: (CYP2D6)193-207, CYP2D676-90, CYP2D6293-307, CYP2D6313-332, CYP2D6393-412,

CYP2D6199-213, CYP2D6450-464, CYP2D6301-315, CYP2D6452-466, CYP2D659-73, CYP2D6130-144, CYP2D6193-212,

CYP2D 6305-324, CYP2D6131-145, CYP2D 6216-230, CYP2D6238-252, CYP2D6199-213, CYP2D6235-252, CYP2D6293-

307, CYP2D6381-395, CYP2D 6429-443, SLA334-348, SLA196-210, SLA115-129, SLA373-386, SLA186-197, SLA317-331,

SLA171-185, SLA417-431, SLA359-373, SLA215-229, SLA111-125, SLA110-124, SLA299-313, SLA342-356, SLA49-63, SLA119-133, SLA260-274, SLA26-40, SLA86-100, SLA331-345 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

n) un antígeno relevante para uveítis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: arrestina199-213, arrestina77-91, arrestina250-264, arrestina172-186, arrestina354-368, arrestina239-253, arrestina102-116, arrestina59-73, arrestina280-294, arrestina291-306, arrestina195-209, arrestina200-214 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

o) un antígeno relevante para el síndrome de Sjogren derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: RO60127-141, RO60523-537, RO60243-257, RO6Ü484-498, RO6Ü347-361, RO6Ü369-383, R060426-440, RO60267-281, RO60178-192, R060358-372, RO60221-235, R060318-332, RO60407-421, RO60459-473, RÜ6Ü51-65, RO60312-326, LA241-255, LA101-115, LA153-167, LA178-192, LA19-33, LA37 -51, LA133-147, LA50-64, LA32-46, LA153-167, LA83-97, LA136-150, LA297-311, LA59-73, LA151-165, LA86-100, LA154-168 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

p) un antígeno relevante para esclerodermatitis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: TOP1346-360, TOP1420-434, TOP1750-764, TOP1419-433, TOP1591-605, TOP1695-709, TOP1305-319, TOP1346-

360, TOP1419-433, TOP1425-439, TOP1614-628, CENP-C297-311, CENP-C857-871, CENP-C887-901, CENP-C212-226,

CENP-C643-657, CENP-C832-846, CENP-C167-181, CENP-C246-260, CENP-C846-860, CENP-C149-163, CENP-C833-847, CENP-C847-861 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

q) un antígeno relevante para el síndrome antifosfolípido derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: APOH235-249, APOH306-320, APOH237-251, APOH295-309, APOH28-42, APOH173-187, APOH264-278, APOH295-309, APOH49-63, APOH269-283, APOH295-309, APOH321-355, APOH322-336, APOH324-338 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

r) un antígeno relevante para vasculitis asociado a ANCA derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: MPO506-520, MPO302-316, MPO7-21, MPO689-703, MPO248-262, MPO444-458, MPO513-527, MPO97-111, MPO616-630, MPO462-476, MPO617-631, MPO714-728, PRTN344-58, PRTN3234-248, PRTN359-73, PRTN3117-131, PRTN3164-178, PRTN371-85, PRTN3241-255, PRTN359-73, PRTN3183-197, PRTN362-76, PRTN3118-132, PRTN3239-253 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos; o

s) un antígeno relevante para el síndrome de hombre rígido derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: GAD212-226, GAD555-569, GAD297-311 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

En ciertos aspectos, el complejo pMHC comprende:

a) un antígeno relevante para la diabetes derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: hInsB10-18, hIGRP228-236, hIGRP265-273, IGRP206-214, hIGRP206-214, NRP-A7, NRP-I4, NRP-V7, YAI/Db, INS B15-23, PPI76 -90(K88S), IGRP13-25, GAD555-567, GAD555-567(557I), IGRP23-35, B24-C36, PPI76-90, INS-I9, TUM, G6Pasa, Pro-insulinaL2-10, Pro-insulinaL3-11, Pro-insulinaL6-14, Pro-insulinaB5-14, Pro-insulinaB10-18, Pro-insulinaBu-22, Pro-insulinaB15-24, Pro-insulinaB17-25, Pro-insulinaB18-27, Pro-insulinaB20-27, Pro-insulinaB21-29, Pro-insulinaB25-C1, Pro-insulinaB27-C5, Pro-insulinaC20-28, Pro-insulinaC25-33, Pro-insulinaC29-A5, Pro-insulinaA1-10, Pro-insulinaA2-10, Pro-insulinaA12-20, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

b) un antígeno relevante para la esclerosis múltiple derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: MOG35-55, MOG36-55, MAG287-295, MAG509-517, MAG556-564, MBP110-118, MOG114-122, MOG166-175, MOG172-180, MOG179-188, MOG188-196, MOG181-189, MOG205-214, PLP80-88, MAG287-295, MAG509-517, MAG556-564, MOG97-109 MOG97-109 (E107S), MBP89-101, PLP175-192, PLP94-108, MBP86-98, PLP54-68, PLP249-263, MOG156-170, MOG201-215, MOG38-52, MOG203-217, PLP250-264, MPBl3-32, MPB83-99, MPBl11-129, M PBl46-170, MOG223-237, MOG6-20, PLP88-102, PLP139-154 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

c) un antígeno relevante para la enfermedad celíaca derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: aGlia57-68, aGlia62-72, aGlia217-229 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DQ o un fragmento o un equivalente del mismo;

d) un antígeno primario relevante para la cirrosis biliar derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: PDC-E2122-135, PDC-E2249-262, PDC-E2249-263, PDC-E2629-643, PDC-E272-86, PDC-E2353-367, PDC-E2422-436, PDC-E2629-643, PDC-E280-94, PDC-E2353-367, PDC-E2535-549 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento de un equivalente del mismo;

e) un antígeno relevante para el pénfigo foliáceo y/o antígeno relevante para el pénfigo vulgar, cada uno de los cuales deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DG1216-229, DG397-111, DG3251-265, DG3441-455, DG3351-365, DG3453-467, DG3540-554, DG3280-294, DG3326-340, DG3367-381, DG313-27, DG3323-337, DG3438-452, DG148-62, DG1206-222, DG1363-377, DG13-17, DG1192-206, DG1326-340, DG11-15, DG135-49, DG1325-339 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

f) un antígeno relevante para el trastorno del espectro de la neuromielitis óptica derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: AQP4129-143, AQP4284-298, AQP463-76, AQP4129-143, AQP439-53 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

g) un antígeno alérgico relevante para el asma derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: DERP116-30, DERP1171-185, DERP1110-124, DERP-226-40, DERP-2 107-121 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DR, HLA-DP, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

h) un antígeno relevante para la enfermedad inflamatoria intestinal derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: antígeno de integrasa de bacteroides183-197, antígeno de integrasa de bacteroides146-160, antígeno de integrasa de bacteroides175-189, antígeno de integrasa de bacteroides1-15, antígeno de integrasa de bacteroides183-197, antígeno de integrasa de bacteroides30-44, antígeno de integrasa de bacteroides70-84, antígeno de integrasa de bacteroides337-351, antígeno de integrasa de bacteroides171-185, antígeno de integrasa de bacteroides4-18, antígeno de integrasa de bacteroides256-270, Fla-2/Fla-X366-380, Fla-2/Fla-X164-178, Fla-2/Fla-X261-275, Fla-2/Fla-X1-15, Fla-2/Fla-X51-65, Fla-2/Fla-X269-283, Fla-2/Fla-X4-18, Fla-2/Fla-X271-285, YIDX78-92, YIDX93-107, YIDX98-112, YIDX23-37, YIDX78-92, YIDX195-209, YIDX22-36, YIDX80-94, YIDX101-115, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

i) un antígeno relevante para lupus eritematoso sistémico derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: H471-94, H474-88, H476-90, H475-89, H478-92, H480-94, H2B10-24, H2B16-30, HV22-42, H1'27-41o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: I-Ad, HLA-DR, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

j) un antígeno relevante para ateroesclerosis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: ApoB3501-3516, ApoB1952-1966, ApoB978-993, ApoB3498-3513, ApoB210A, ApoB210B, ApoB210C o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de I-Ab o un fragmento o un equivalente del mismo;

k) un antígeno relevante para EPOC y/o un antígeno relevante para el enfisema, cada uno de los cuales deriva de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: elastina89-103, elastina698-712, elastina8-22, elastina94-108, elastina13-27, elastina695-709, elastina563-577, elastina558-572, elastina698-712, elastina566-580, elastina645-659 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

l) un antígeno relevante para psoriasis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: Cap1864-78, Cap1834-48, Cap1847-61, Cap18151-165, Cap18149-163, Cap18152-166, Cap18131-145, Tapa1824-38, ADMTSL5245-259, ADMTSL5267-281, ADMTSL5372-386, ADMTSL5289-303, ADMTSL5396-410, ADMTSL5433-447, ADMTSL5142-156, ADMTSL5236-250, ADMTSL5301-315, ADMTSL5203-217, ADMTSL5404-418 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

m) un antígeno relevante para la autoinmunidad para la hepatitis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: CYP2D6193-207, CYP2D676-90, CYP2D6293-307, CYP2D6313-332, CYP2D6393-412,

CYP2D6199-213, CYP2D6450-464, CYP2D6301-315, CYP2D6452-466, CYP2D 659-73, CYP2D 6130-144, CYP2D6193-212,

CYP2D6305-324, CYP2D6131-145, CYP2D6216-230, CYP2D6238-252, CYP2D6199-213, CYP2D6235-252, CYP2D6293-307, CYP2D6381-395, CYP2D 6429-443, SLA334-348, SLA196-210, SLA115-129, SLA373-386, SLA186-197, SLA317-331, SLA171-185, SLA417-431, SLA359-373, SLA215-229, SLA111-125, SLA110-124, SLA299-313, SLA342-356, SLA49-63, SLA119-133, SLA260-274, SLA26-40, SLA86-100, SLA331-345 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

n) un antígeno relevante para uveítis derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: arrestina199-213, arrestina77-91, arrestina250-264, arrestina172-186, arrestina354-368, arrestina239-253, arrestina102-116, arrestina59-73, arrestina280-294, arrestina291-306, arrestina195-209, arrestina200-214 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

o) un antígeno relevante para el hepatitis autoinmunitaria derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: RO60127-141, RO60523-537, RO60243-257, RO6Ü484-498, RO60347-361, RO6Ü369-383, RO60426-440, RO6Ü267-281, RO60178-192, RO60358-372, RO60221-235, RO60318-332, RO60407-421, RO60459-473, RO6051-65, RO60312-326, LA241-255, LA101-115, LA153-167, LA178-192, LA19-33, LA37-51, LA133-147, LA50-64, LA32-46, LA153-167, LA83-97, LA136-150, LA297-311, LA59-73, LA151-165, LA86-100, LA154-168 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DR, HLA-DP, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos;

CENP-C643-657, CENP-C832-846, CENP-C167-181, CENP-C246-260, CENP-C846-860, CENP-C149-163, CENP-C833-847, CENP-C847-861 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

q) un antígeno relevante para el síndrome antifosfolípido derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: APOH235-249, APOH306-320, APOH237-251, APOH295-309, APOH28-42, APOH173-187, APOH264-278, APOH295-309, APOH49-63, APOH269-283, APOH295-309, APOH321-355, APOH322-336, APOH324-338 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo;

r) un antígeno relevante para vasculitis asociado a ANCA derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: MPO506-520, MPO302-316, MPO7-21, MPO689-703, MPO248-262, MPO444-458, MPO513-527, MPO97-111, MPO616-630, MPO462-476, MPO617-631, MPO714-728, PRTN344-58, PRTN3234-248, PRTN359-73, PRTN3117-131, PRTN3164-178, PRTN371-85, PRTN3241-255, PRTN359-73, PRTN3183-197, PRTN362-76, PRTN3118-132, PRTN3239-253 o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos, y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de HLA-DR o un fragmento o un equivalente del mismo; o

s) un antígeno relevante para el síndrome de hombre rígido derivado de un antígeno seleccionado de uno o más del grupo: GAD212-226, GAD555-569, GAD297-311 y la proteína MHC del complejo pMHC comprende la totalidad o parte de un polipéptido del grupo: HLA-DR, HLA-DQ, o un fragmento o un equivalente de cada uno de los mismos.

En ciertos aspectos, el complejo pMHC es para el tratamiento de:

a) diabetes tipo I y el complejo pPPI se selecciona del grupo de: PPI76-90 (K88S)-HLA-DRB1*0401/DRA,

IGRP13-25-HLA-DRB1*0301/DRA, GAD555 -567-HLA-DRB1*0401/DRA, GAD555-567 (557I)-HLA-

DRB1*0401/DRA, IGRP23-35-HLA-DRB1*0401/DRA, B24-C36-HLA-DRB1*0301/DRA, o PPI76-90-HLA-DRB1*0401/DRA;

b) esclerosis múltiple y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: MBP86-98-HLA-DRB1*1501/DRA,

MBP89-101-HLA-DRB5*0101/DRA, MOG38-52-HLA-DRB4*0101/DRA, MOG97-109 (E107S)-HLA-

DRB1*0401/DRA, MOG203-217-HLA-DRB3*0101/DRA, PLP54-68-HLA-DRB3*0101/DRA, PLP94-108-HLA-DRB1*0301/DRA, PLP250-264-HLA-DRB4*0101/DRA, MPB13-32-HLA-DRB5*Ü1Ü1/DRA, MPB83-99-HLA-DRB5*0101/DRA, MPB111-129-HLA-DRB5*Ü1Ü1/DRA, MPB146-170-HLA-DRB5*Ü1Ü1/DRA, MOG223-237-HLA-DRB3*0202/DRA, MOG6-20-HLA-DRB5*Ü1Ü1/DRA, PLP88-102-HLA-DRB3*Ü2Ü2/DRA o PLP139-154-HLA-DRB5*0101/DRA;

c) enfermedad celíaca y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: aGlia57-68- HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, aGlia62-72- HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, aGlia217-229-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0302, o aGlia217-229-HLA-DQA1 *03/HLA-DQB1*0302;

d) cirrosis biliar primaria y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: PDC-E2122-135-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E2249-262-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E2249-263-HLA-DRB1*0801/DRA, PDC-E2629-643-HLA-DRB1*0801/DRA, PDC-E272-86-HLA-DRB3*0202/DRA, PDC-E2353-367-HLA-DRB3*0202/DRA, PDC-E2422-436-HLA-DRB3*0202/DRA, PDC-E2629-643-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E280-94-HLA-DRB5*0101/DRA, PDC-E2353-367-HLA-DRB5*0101/DRA o PDC-E2535-549-HLA-DRB5*0101/DRA, mPDC-E2166-181 -I-Ag7 o mPDC-E282-96-I-Ag7;

e) pénfigo foliáceo y/o pénfigo vulgar y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: DG1216-229-HLA-DRB1*0101/DRA, DGb16-229-HLA-DRB1*0102/DRA, DG397-111-HLA-DRB1*0402/DRA, DG3251-265-HLA-DRB1*0402/DRA, DG3251-265-HLA-DRB1*0401/DRA, DG3441-455-HLA-DRB1*0402/DRA, DG3351-365-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3453-467-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3540-554-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3280-294-HLA-DRB4*0101/DRA, DG3326-34<ü>-HLA-DRB4*0101/DRA, DG3367-381-HLA-DRB4*0101/DRA, DG313-27-HLA-DRB5*0101/DRA, DG3323-337-HLA-DRB5*0101/DRA, DG3438-452-HLA-DRB5*0101/DRA, DG148-62-HLA-DRB3*0202/DRA, DG1206-222-HLA-DRB3*0202/DRA, DG1363-377-HLA-DRB3*0202/DRA, DG13-17-HLA-DRB4*0101/DRA, DG1192-206-HLA-DRB4*0101/DRA, DG1326-340-HLA-DRB4*0101/DRA, DG11-15-HLA-DRB5*0101/DRA, DG135-49-HLA-DRB5*0101/DRA o DG1325-339-HLA-DRB5*0101/DRA;

f) trastorno del espectro de la neuromielitis óptica y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: AQP4129-143-HLA-DRB1*0101/DRA, AQP4284-298-HLA-DRB1*0301/DRA, AQP463-76-HLA-DRB1*0301/DRA, AQP4129-143-HLA-DRB1*0401/DRA, o AQP439-53-HLA-DRB1*1501/DRA;

g) asma alérgica y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: DERP-116-30-HLA-DRB1*0101/DRA, DERP-116-30 -HLA-DRB1*1501/DRA, DERP1171-185 - HLA-DRB1*1501/DRA, DERP-1<hü>-124-HLA-DPB1*0401/DRA, DERP-226-40 -HLA-DRB1*0101/DRA; DERP-226-40-HLA-DRB1*1501/DRA o DERP-2107-121-HLA-DRB1*0301/DRA;

h) enfermedad inflamatoria intestinal y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: antígeno de integrasa de bacteroides183-197- HLA-DRB3*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides146-160- HLA-DRB3*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides175-189- HLA-DRB3 *0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides-15- HLA-DRB5*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides183-197- HLA-DRB5*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides183-197-HLA-DRB3*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides30-44- HLA-DRB5*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides7ü-84-HLA-DRB4*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides337-351- HLA-DRB4*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides171-185- HLA-DRB4*0101/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides4-18-HLA-DRB3*0202/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides171-1855-HLA-DRB3*0202/DRA, antígeno de integrasa de bacteroides256-270-HLA-DRB3 *0202/DRA, Fla-2/Fla-X366-380- HLA-DRB3*0101/DRA, Fla-2/Fla-X164-178- HLA-DRB3 *0101/DRA, Fla-2/Fla-X261-275- HLA-DRB5*0101/DRA, Fla-2/Fla-X1-15- HLA-DRB5*0101/DRA, Fla-2/Fla-X51-65- HLA-DRB4*0101/DRA, Fla-2/Fla-X269-283- HLA-DRB4*0101/DRA, Fla-2/Fla-X4-18-HLA-DRB3*0202/DRA, Fla-2/Fla-X261-275-HLA-DRB3*0202/DRA, Fla-2/Fla-X271-285-HLA-DRB3*0202/DRA, YIDX78-92- HLA-DRB3*0101/DRA, YIDX78-92-HLA-DRB4*0101/DRA, YIDX93-107- HLA-DRB3*0101/DRA, YIDX98-112- HLA-DRB5*0101/DRA, YIDX23-37- HLA-DRB5*0101/DRA, YIDX78-92- HLA-DRB4*0101/DRA, YIDX195-209- HLA-DRB4*0101/DRA, YIDX22-36-HLA-DRB3*0202/DRA, YIDX80-94-HLA-DRB3*0202/DRA o YIDX1ü1-115-HLA-DRB3*0202/DRA;

i) EPOC y/o enfisema y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: elastina89-103-HLA-DRB3*0101/DRA, elastina698-712-HLA-DRB5*0101/DRA, elastina8-22-HLA-DRB5*0101/DRA, elastina94-108-HLA-DRB5*0101/DRA, elastina13-27-HLA-DRB4*0101/DRA, elastina695-709-HLA-DRB4*0101/DRA, elastina563-577-HLA-DRB4*0101/DRA, elastina558-572-HLA-DRB4*0101/DRA, elastina698-712-HLA-DRB5*0101/DRA, elastina566-580-HLA-DRB3*0202/DRA, o elastina645-659-HLA-DRB3*0202/DRA;

j) psoriasis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: Cap1864-78-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap1834-48-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap1847-61-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap18151-165-HLA-DRB4*0101/DRA, Cap18149-163-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap18152-166-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap18131-145-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap1824-38-BLA-DRB3*0202/DRA, ADMTSL5245-259-HLA-DRB3*0101/DRA, ADMTSL5267-281-HLA-DRB3*0101/DRA, ADMTSL5372-386-HLA-DRB3*0101/DRA, ADMTSL5289-303-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5396-410-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5433-447-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5142-156-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL5236-250-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL5301-315-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL5203-217-HLA-DRB3*0202/DRA, ADMTSL54ü4-418-HLA-DRB3*0202/DRA, o ADMTSL5433-447-HLA-DRB3*0202/DRA;

k) hepatitis autoinmunitaria y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: CYP2D6193-207-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D676-9<ü>-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6293-3<ü>7-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6313332-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6393-412-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6i99-213-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D 6450-464-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D63<ü>1-315-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D 6452-466-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D659-73-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D613ü-144-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D6193-212-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D63ü5-324-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D6131-145-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D6216-23<ü>-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D 6238-252-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D6199-213-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D 6235-252-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D6293-3<ü>7-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D 6238-252-HLA-DRB5*0101/DRA, CYP2D 6381-395-HLA-DRB5*0101/DRA, CYP2D6429-443-HLA-DRB5*0101/DRA, SLA334-348-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA196-21ü-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA115-129-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA373-386-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA186-197-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA317-331-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA171-185-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA417-431-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA359-373-HLA-DRB1*0701/DRA, SLA215-229-HLA-DRB1*0701/DRA, SLAm-125-HLA-DRB1*0701/DRA, SLA110-124-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA299-313-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA342-356-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA49-63-HLA-DRB4*0101/DRA, SLAn9-133-HLA-DRB4*0101/DRA, SLA26ü-274-HLA-DRB4*0101/DRA, SLA26-40-HLA-DRB5*0101/DRA, SLA86-1üü-HLA-DRB5*0101/DRA o SLA331-345-HLA-DRB5*0101/DRA;

l) uveítis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: arrestina199-213-HLA-DRB3*0101/DRA, arrestina77-91-HLA-DRB3*0101/d Ra , arrestina250-264-HLA-DRB3*0101/DRA, arrestina172-186-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina354-368-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina239-253-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina102-116-HLA-DRB5*0101/DRA, arrestina59-73-HLA-DRB5*0101, arrestina280-294-HLA-DRB5*0101, arrestina291-306-HLA-DRB1*0301/DRA, arrestina195-2ü9-HLA-DRB3*0202/DRA, arrestina199-213-HLA-DRB3*0202/DRA, o arrestina2oo-214-HLA-DRB3*0202/DRA;

m) síndrome de Sjogren y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: R06Ü127-141-HLA-DRB1*0301/DRA, RO60523-537-HLA-DRB1*0301/DRA, RO60243-257-HLA-DRB1*0301/DRA, RO6Ü484-498-HLA-DRB3*0101/DRA, RO6Ü347-361-HLA-DRB3*0101/DRA, RO60369-383-HLA-DRB3*0101/DRA, RO6Ü426-440-HLA-DRB4*0101/DRA, RO60267-281-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü178-192-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6O358-372-HLA-DRB5*0101/DRA, RO60358-372-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü221-235-HLA-DRB5*0101/DRA, RO60221-235-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü318-332-HLA-DRB5*0101/DRA, RO6O318-332-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü4<ü>7-421-HLA-DRB4*0101/DRA, RO604<ü>7-421-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201 , RO60459-473-HLA-DRB4*0101/DRA, RO60459-473-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, RO6O318-332-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, RO6051-65-HLA-DRB3*0202/DRA, RO60312-326-HLA-DRB3*0202/DRA, RO60347-361-HLA-DRB3*0202/DRA, LA241-255-HLA-DRB1*0301/DRA, LA1<ü>1-115-HLA-DRB1*0301/DRA, LA153-167-HLA-DRB1*0301/DRA, LA178-192-HLA-DRB3*0101/DRA, LA19-33-HLA-DRB3*0101/DRA, LA37-51-HLA-DRB3*0101/DRA, LA133-147-HLA-DRB4*0101/DRA, LA5<ü>-64-HLA-DRB4*0101/DRA, LA32-46-HLA-DRB4*0101/DRA, LA153-167-HLA-DRB5*0101/DRA, LA83-97-HLA-DRB5*0101/DRA, LA136-15Ü-HLA-DRB5*0101/DRA, LA297-311-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*02<ü>1, LA59-73-HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*02<ü>1 , LA59-73-HLA-DRB4*0101/DRA, LA151-165-HLA-DQA1 *0501/HLA-DQB1*0201, LA151-165-HLA-DRB4*0101/DRA, LA297-311-HLA-DRB4*0101/DRA, LA5<ü>-64-HLA-DRB3*0202/DRA, LA86-1<üü>-HLA-DRB3*0202/DRA o LA154-168-HLA-DRB3 *0202/DRA;

n) esclerodermatitis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: TOP1346-36o-HLA-DRB3*0101/DRA, TOP142ü-434-HLA-DRB3*0101/DRA, TOP175ü-764-HLA-DRB3*0101/DRA, TOP1419-433-HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1591-605- HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1695-709- HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1305-319-HLA-DRB5*010/DRA, TOP1346-360- HLA-DRB5*0101/DRA, TOP1419-433- HLA-DRB5*0101/DRA, TOP1420-434-HLA-DRB3*0202/DRA, TOP1425-439-HLA-DRB3*0202/DRA, TOP1s14-628-HLA-DRB3*0202/DRA, CENP-C297-311-HLA-DRB3*0101/DRA, CENP-C857-871-HLA-DRB3*0101/DRA, CENP-C887-901-HLA-DRB3*0101/DRA, CENP-C212-226-HLA-DRB4*0101/DRA, CENP-Cs43-657-HLA-DRB4*0101/DRA, CENP-C832-846-HLA-DRB4*0101/DRA, CENP-C167-181-HLA-DRB5*0101/DRA, CEN P-C246-260-HLA-DRB5*0101/DRA, CENP-C846-86ü-HLA-DRB5*0101/DRA, CENP-C149-163-HLA-DRB3*0202/DRA, CENP-C833-847-HLA-DRB3*0202/DRA, o CENP-C847-861-HLA-DRB3*0202/DRA;

o) síndrome antifosfolípido y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: APOH235-240-HLA-DRB3*0101/DRA, APOH3<ü>6-32<ü>-HLA-D<r>B3*0101/DRA, APOH237-251-HLA-DRB3*01<ü>1/DRA, APOH295-3Ü9-HLA-DRB3*0101/DRA, APOH28-42-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH173-187-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH264-278-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH295-3ü9-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH49-63-HLA-DRB5*01ü1/DRA, APOH269-283-HLA-DRB5*01ü1/DRA, APOH295-3ü9-HLA-DRB5*0101/DRA, APOH321-355-HLA-DRB3*0202/DRA, APOH322-336-HLA-DRB3*0202/DRA o APOH324-338-HLA-DRB3*0202/DRA;

p) vasculitis asociada a ANCA y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: MPO506-520-HLA-DRB3*0101/DRA, MPO3ü2-316-HLA-DRB3*0101/DRA, MPO7-21-HLA-DRB3*01ü1/DRA, MPO689-703-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO248-262-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO444-458-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO513-527-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO97-111-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO616-63ü-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO462-476-HLA-DRB3*0202/DRA, MPO617-631-HLA-DRB3*0202/DRA, MPO714-728-HLA-DRB3*0202/DRA, PRTN344-58-HLA-DRB3*0101/DRA, PRTN3234-248-HLA-DRB3*0101/DRA, PRTN359-73-HLA DRB3*0101/DRA, PRTN359-73-HLA-DRB5*0101/DRA, PRTN3n7-131-HLA-DRB4*0101/DRA, PRTN3164-178-HLA-DRB4*0101/DRA, PRTN371-85-HLA-DRB4*0101/DRA, PRTN3241-255-HLA-DRB5*0101/DRA, PRTN3183-197-HLA-DRB5*0101/DRA, PRTN362-76-HLA-DRB3*0202/DRA, PRTN3n8-132-HLA-DRB3*0202/DRA o PRTN3239-253HLA-DRB3*0202/DRA; o

q) síndrome del hombre rígido y el complejo pGAD se selecciona del grupo de: GAD212-226-HLA-DRB1*0801/DRA, GAD555-569-HLA-DRB1*0801/DRA o GAD297-311-HLA-DRB1*0301/DRA.

En algunos aspectos, el complejo pMHC es para el tratamiento de:

DRB1*0401/DRA, IGRP23-35-HLA-DRB1*0401/DRA, o PPI76-90-HLA-DRB1*0401/DRA;

MBP89-101-HLA-DRB5*0101/DRA, MOG38-52-HLA-DRB4*0101/DRA, MOG97-109 (E1<ü>7S)-HLA-

DRB1*0401/DRA, MOG203-217-HLA-DRB3*0101/DRA, PLP54-68-BLA-DRB3*0101/DRA, PLP94-108-HLA-DRB1*0301/DRA, PLP250-264-HLA-DRB4*0101/DRA, MPB13-32-HLA-DRB5*0101/DRA, MPB83-99-HLA-DRB5*0101/DRA, MPBm-129-HLA-DRB5*0101/DRA, MPB146-170-HLA-DRB5*0101/DRA, MOG223-237-HLA-DRB3*0202/DRA, MOG6-20-HLA-DRB5*0101/DRA, PLP88-1ü2-HLA-DRB3*0202/DRA o PLP139-154-HLA-DRB5*0101/DRA;

c) enfermedad celíaca y el complejo pMHC se seleccionan del grupo de: aGlia57-68- HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, aGlia62-72- HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1*0201, o aGlia217-229- HLA-DQA1*0501/HLA-DQB1 *0302;

d) cirrosis biliar primaria y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: PDC-E2122-135-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E2249-262-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E2249-263-HLA-DRB1*0801/DRA, PDC-E2629-

643-HLA-DRB1*0801/DRA, PDC-E272-86-HLA-DRB3*0202/DRA, PDC-E2353-367-HLA-DRB3*0202/DRA,

PDC-E2422-436-HLA-DRB3*0202/DRA, PDC-E2629-643-HLA-DRB4*0101/DRA, PDC-E280-94-HLA-

DRB5*0101/DRA, PDC-E2353-367-HLA-DRB5*0101/DRA o PDC-E2535-549-HLA-DRB5*0101/DRA;

e) pénfigo foliáceo y/o pénfigo vulgar y el complejo pMHC se selecciona del grupo de DG1216-229- HLA-DRB1*0101/DRA, DG397-111-HLA-DRB1*0402/DRA, DG3251-265-HLA-DRB1*0401/DRA, DG3441-455-HLA-DRB1*0402/DRA, DG3351-365-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3453-467-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3540-554-HLA-DRB3*0202/DRA, DG3280-294-HLA-DRB4*0101/DRA, DG3326-34ü-HLA-DRB4*0101/DRA, DG3367-381-HLA-DRB4*0101/DRA, DG313-27-HLA-DRB5*0101/DRA, DG3323-337-HLA-DRB5*0101/DRA, DG3438-452-HLA-DRB5*0101/DRA, DG148-62-HLA-DRB3*0202/DRA, DG1206-222-HLA-DRB3*0202/DRA, DG1363-377-HLA-DRB3*0202/DRA, DG13-17-HLA-DRB4*0101/DRA, DG1192-2Ü6- HLA-DRB4*0101/DRA, DG1326-340- HLA-DRB4*0101/DRA, DG11-15-HLA-DRB5*0101/DRA, DG135-49-HLA-DRB5*0101/DRA o DG1325-339- HLA-DRB5*0101/DRA;

f) trastorno del espectro de la neuromielitis óptica y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: AQP4284-298-HLA-DRB1*0301/DRA, AQP463-76-HLA-DRB1*0301/DRA, AQP4129-143-HLA-DRB1*0401/DRA, o AQP439-53-HLA-DRB1*1501/DRA;

g) asma alérgica y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: DERP-116-3o-HLA-DRB1*0101/DRA, DERP-116-3<ü>-HLA-DRB1*1501/DRA, DERP1171-185 - HLA-DRB1*1501/DRA, DERP-1no-124-HLA-DPB1*0401/DRA, DERP-226-40 -HLA-DRB1*0101/DRA; DERP-226-4<ü>-HLA-DRB1*1501/DRA o DERP-2107-121-HLA-DRB1*0301/DRA;

h) enfermedad inflamatoria del intestino y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: antígeno integrasa de bacteroides1-l5 - HLA-DRB5*0101/DRA, antígeno integrasa de bacteroides183-197-HLA-DRB3*0101/DRA, antígeno integrasa de bacteroides7o-84- HLA-DRB4*0101/DRA, antígeno integrasa de bacteroides4-18-HLA-DRB3*0202/DRA, antígeno integrasa de bacteroides171-185-HLA-DRB3 *0202/DRA, antígeno integrasa de bacteroides256-27o-HLA-DRB3 *0202/DRA, Fla-2/FlaX366-38o- HLA-DRB3*0101/DRA, Fla-2/Fla-X261-275- HLA-DRB5*0101/DRA, Fla-2/Fla-X51-65-HLA-DRB4*0101/DRA, Fla-2/Fla-X4-18-HLA-DRB3*0202/DRA, Fla-2/Fla-X261-275-HLA-DRB3*0202/DRA, Fla-2/Fla-X271-285-HLA-DRB3*0202/DRA, YIDX78-92-HLA-DRB3*0101/DRA,

YIDX78-92-HLA-DRB4*0101/DRA, YIDX98-112-HLA-DRB5*0101/DRA, YIDX22-36-HLA-DRB3*0202/DRA,

YIDX8ü-94-HLA-DRB3*0202/DRA o YIDX101-115-HLA-DRB3*02Ü2/DRA;

i) enfisema y el complejo pMHC se elige en el grupo de la elastina89-103-HLA-DRB3*Ü1Ü1/DRA, elastina698-712-HLA-DRB5*0101/DRA, elastina558-572-HLA-DRB4*0101/DRA, elastina566-58o-HLA-DRB3*0202/DRA, o elastina645-659-HLA-DRB3*0202/DRA;

j) psoriasis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: Cap1864-78-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap1834-48-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap1847-61-HLA-DRB3*0101/DRA, Cap18151-165-HLA-DRB4*0101/DRA, Cap18u9-163-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap18152-166-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap18131-145-HLA-DRB5*0101/DRA, Cap1824-38-HLA-DRB3*0202/DRA, ADMTSL5245-259-HLA-DRB3*0101/DRA, ADMTSL5267-281-HLADRB3*0101/DRA, ADMTSL5372-386-HLA-DRB3*0101/DRA, ADMTSL5289-303-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5396-410-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5433-447-HLA-DRB4*0101/DRA, ADMTSL5142-156-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL5236.26ü-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL53ü1-316-HLA-DRB5*0101/DRA, ADMTSL52ü3-217-HLA-DRB3*0202/DRA, ADMTSL54ü4-418-HLA-DRB3*0202/DRA, o ADMTSL5433-447-HLA-DRB3*0202/DRA;

k) hepatitis autoinmunitaria y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: CYP2D6193-207- HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D676-9ü-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6293-3ü7-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6313-332-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6393-412-HLA-DRB1*0301/DRA, CYP2D6199-213-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D645ü-464-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D63ü1-315-HLA-DRB1*0401/DRA, CYP2D 6452-466-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D659-73-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D613ü-144-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D6193-212-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D63ü5-324-HLA-DRB1*0701/DRA, CYP2D6131-145-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D6216-23<ü>-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D 6238-252-HLA-DRB3*0202/DRA, CYP2D6199-213-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D 6235-252-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D6293-3ü7-HLA-DRB4*0101/DRA, CYP2D 6238-252-HLA-DRB5*0101/DRA, CYP2D 6381-395-HLA-DRB5*0101/DRA, CYP2D6429-443-HLA-DRB5*0101/DRA, SLA334-348-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA196-21<ü>-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA115-129-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA373-386-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA186-197-HLA-DRB1*0301/DRA, SLA317-331-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA 171-185-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA417-431-HLA-DRB1*0401/DRA, SLA359-373-HLA-DRB1*0701/DRA, SLA215-229-HLA-DRB1*0701/DRA, SLAm-125-HLA-DRB1*0701/DRA, SLA11Ü-124-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA299-313-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA342-356-HLA-DRB3*0202/DRA, SLA49-63-HLA-DRB4*0101/DRA, SLAn9-133-HLA-DRB4*0101/DRA, SLA26<ü>-274-HLA-DRB4*0101/DRA, SLA26-40-HLA-DRB5*0101/DRA, SLA86-1üü-HLA-DRB5*0101/DRA o SLA331-345-HLA-DRB5*0101/DRA;

l) uveítis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: arrestina199-213-HLA-DRB3*0101/DRA, arrestina77-91-HLA-DRB3*0101/ d Ra , arrestina25ü-264-HLA-DRB3*0101/DRA, arrestina172-186-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina354-368-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina239-253-HLA-DRB4*0101/DRA, arrestina102-116-HLA-DRB5*0101/DRA, arrestina59-73-HLA-DRB5*0101, arrestina28ü-294-HLA-DRB5*0101, arrestina291-306-HLA-DRB1*0301/DRA, arrestina195-2ü9-HLA-DRB3*0202/DRA, arrestina199-213-HLA-DRB3*0202/DRA, o arrestina2oo-214-HLA-DRB3*0202/DRA;

m) síndrome de Sjogren y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: RO6O127-141-HLA-DRB1*0301/DRA, R06Ü523-537-HLA-DRB1*0301/DRA, RO6Ü243-257-HLA-DRB1*0301/DRA, RO6Ü484-498-HLA-DRB3*0101/DRA, RO6Ü347-361-HLA-DRB3*0101/DRA, RO6Ü369-383-HLA-DRB3*0101/DRA, RO6O426-44ü-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü267-281-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü178-192-HLA-DRB4*0101/DRA, RO6Ü358-372-HLA-DRB5*0101/DRA, RO6Ü221-235-HLA-DRB5*0101/DRA, RO60313-332-HLA-DRB5*0101/DRA, RO6Ü51-65-HLA-DRB3*0202/DRA, RO6Ü312-326-HLA-DRB3*0202/DRA, RO6O347-361-HLA-DRB3*0202/DRA, LA241-255-HLA-DRB1*0301/DRA, LA1ü1-115-HLA-DRB1*0301/DRA, LA153-167-HLA-DRB1*0301/DRA, LA178-192-HLA-DRB3*0101/DRA, LA19-33-HLA-DRB3*0101/DRA, LA37-51-HLA-DRB3*0101/DRA, LA133-147-HLA-DRB4*0101/DRA, LA5ü-64-HLA-DRB4*0101/DRA, LA32-46-HLA-DRB4*0101/DRA, LA153-167-HLA-DRB5*0101/DRA, LA83-97-HLA-DRB5*ü 101/DRA, LA136-15Ü-HLA-DRB5*0101/DRA, LA5ü-64-HLA-DRB3*0202/DRA, LA86-1üü-HLA-DRB3*0202/DRA, o LA154-168-HLA-DRB3*0202/DRA;

n) esclerodermatitis y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: TOP1346-36ü-HLA-DRB3*0101/DRA, TOP142<ü>-434-HLA-D<r>B3*0101/DRA, TOP175<ü>-764-HLA-DRB3*0101/DRA, TOP1419-433-HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1591-605- HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1695-709- HLA-DRB4*0101/DRA, TOP1305-319-HLA-DRB5*0101/DRA, TOP1346-36ü-HLA-DRB5*0101/DRA, TOP1419-433-HLA-DRB5*01ü1/DRA, TOP1420-434-HLA-DRB3*0202/DRA, TOP1425-439-HLA-DRB3*0202/DRA, TOP1s14-628-HLA-DRB3*0202/DRA, CENP-C297-311-HLA-DRB3*0101/DRA, CENP-C857-871-HLA-DRB3*0101, CENP-C887-9<ü>1-HLA-DRB3*0101, CENP-C212-226-HLA- DRB4*0101/DRA, CENP-Cs43-657-HLA-DRB4*0101/DRA, CEN P-C832-g46-HLA-DRB4*0101/DRA, CENP-C167-181-HLA-DRB5*0101/DRA, CENP-C246-26ü-HLA-DRB5*0101/DRA, CENP-C846-86<ü>-HLA-DRB5*0101/DRA, CENP-C149-163-HLA-DRB3*0202/DRA, CENP-C833-847-HLA-DRB3*0202/DRA, o CENP-C847-861-HLA-DRB3*0202/DRA;

o) síndrome antifosfolípido y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: APOH235-249-HLA-DRB3*0101/DRA, APOH3<ü>6-32<ü>-HLA-DRB3*0101/DRA, APOH237-251-HLA-DRB3*01<ü>1/DRA, APOH295-3Ü9-HLA-DRB3*0101/DRA, APOH28-42-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH173-187-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH264-278-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH295-3ü9-HLA-DRB4*0101/DRA, APOH49-63-HLA-DRB5*01ü1/DRA, APOH269-283-HLA-DRB5*01ü1/DRA, APOH295-3ü9-HLA-DRB5*0101/DRA, APOH321-355-HLA-DRB3*0202/DRA, APOH322-336-HLA-DRB3*0202/DRA o APOH324-338-HLA-DRB3*0202/DRA;

p) vasculitis asociada a ANCA y el complejo pMHC se selecciona del grupo de: MPO506-520-HLA-DRB3*0101/DRA, MPO3<ü>2-316-HLA-DRB3*0101/DRA, MPO7-21-HLA-DRB3*01<ü>1/DRA, MPO689-703-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO248-262-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO444-458-HLA-DRB4*0101/DRA, MPO513-527-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO97-111-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO616-63ü-HLA-DRB5*0101/DRA, MPO462-476-HLA-DRB3*0202/DRA, MPO617-631-HLA-DRB3*0202/DRA, MPO714-728-HLA-DRB3*0202/DRA, PRTN344-58-HLADRB3*0101/DRA, PRTN3234-248-HLA-DRB3*0101/DRA, PRTN359-73-HLA DRB3*0101/DRA, PRTN359-73-HLA-DRB5*0101/DRA, PRTN3n7-131-HLA-DRB4*0101/DRA, PRTN3164-178-HLA-DRB4*0101/DRA,

PRTN371-85-HLA-DRB4*0101/DRA, PRTN3241-255-HLA-DRB5*0101/DRA, PRTN3183-197-HLA-

DRB5*0101/DRA, PRTN362-76-HLA-DRB3*0202/DRA, PRTN3m-132-HLA-DRB3*0202/DRA o PRTN3239-253-HLA-DRB3*0202/DRA; o

La selección de la molécula o moléculas coestimuladoras que se van a acoplar al complejo pMHC/NP también se puede optimizar de manera similar y dependerá en gran medida de la naturaleza de la población de células inmunitarias que necesite diferenciación o expansión. Por ejemplo, si la intención es expandir o diferenciar poblaciones de linfocitos T reguladores, las combinaciones relevantes pueden incluir, pero sin limitación, moléculas coestimuladoras y citocinas tales como IL15-IL15Ra, IL-2, IL-10, IL-35, ICOS-L, complejo de IL2/AcM anti-IL2, TGF-beta, IL-21, ITE o ICOSL. Por el contrario, en ciertas realizaciones, tal como con ciertos tipos de cánceres, una expansión y/o diferenciación del fenotipo regulador T puede no ser la respuesta deseada. Por tanto, las moléculas coestimuladoras alternativas y las citocinas se optimizarían para el tratamiento particular.

Polipéptidos

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, el dominio a1 del MHC de clase II y el dominio a2 del MHC de clase II derivan de una molécula de antígeno leucocitario humano (HLA) tal como HLA-DR, HLA-DQ o HLA-DP. En ciertas realizaciones, el dominio a1 de MHC de clase II y el dominio a2 de MHC de clase II derivan de DRA, DQA1 o DPA1. En algunas realizaciones, el dominio a1 del MHC de clase II o el dominio a2 del MHC de clase II derivan de DRA, DQA1 o DPA1.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, el dominio p1 del MHC de clase II y el dominio p2 del MHC de clase II derivan de una molécula de antígeno leucocitario humano (HLA) tal como HLA-DR, HLA-DQ o HLA-DP. En ciertas realizaciones, el dominio p1 del MHC de clase II y el p2 del MHC de clase II derivan de HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DQB1 o HLA-DPB1. En algunas realizaciones, el dominio p1 del MHC de clase II o el p2 del MHC de clase II se derivan de HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DQB1 o HLA-DPB1.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética.

En otro aspecto, en el presente documento se proporcionan polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética.

En otro aspecto, se proporcionan en el presente documento polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio a2 de MHC de clase II; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética.

En otro aspecto, se proporcionan en el presente documento polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II y un dominio p2 de MHC de clase II; y al menos una protuberancia diseñada por ingeniería genética.

En otro aspecto, se proporcionan en el presente documento polipéptidos que comprenden un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio a2 de MHC de clase II; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética.

En otro aspecto, se proporcionan en el presente documento polipéptidos que comprenden un dominio p1 de MHC de clase II y un dominio (32 de MHC de clase II; y al menos una cavidad diseñada por ingeniería genética.

En algunas realizaciones, el polipéptido comprende además un resto de cisteína C-terminal. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el polipéptido comprende además un sitio de biotinilación. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el polipéptido comprende además un marcador de Strep.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento está codificado por una secuencia de ADN que comprende una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 25.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende laSEQ ID NO: 26.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento está codificado por una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-8.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento está codificado por una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-6.En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento está codificado por una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

Esto incluye al menos un 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-8.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88,<89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una cualquiera de las>SeQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-6.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-6.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 85 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-6.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 90 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 1-26, 64 o 65.

En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con laSEQ ID NO: 1.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con laSEQ ID NO: 2.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con laSEQ ID NO: 3.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con laSEQ ID NO: 4.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-6.En algunas realizaciones, el polipéptido está codificado por una secuencia de ADN que comprende una secuencia de ADN con al menos un 95 % de identidad con una cualquiera de lasSEQ ID NO: 5-8.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento es un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 27-63, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de lasSEQ ID NO: 35-50, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 51, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 52, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 53, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 54, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos de lasSEQ ID NO: 55-59, o un fragmento del mismo. Como se usa en el presente documento, un "fragmento" de una secuencia de aminoácidos o un polipéptido comprende al menos 5 aminoácidos. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, una protuberancia diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, una cavidad diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, una protuberancia diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, una cavidad diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento, o cualquier combinación de los mismos.

En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II y una protuberancia diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II y una cavidad diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II y una protuberancia diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento. En algunas realizaciones, el fragmento comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II y una cavidad diseñada por ingeniería genética descrita en el presente documento.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera<de las SEQ ID n>O: 27-63<, o un fragmento del mismo. Esto incluye al menos un 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una cualquiera de las>SeQ ID NO: 27-63.<En>algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 35-50, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 51, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 52, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 53, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 54, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,

92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las

SEQ ID NO: 55-59, o un fragmento del mismo.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia

de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

de lasSEQ ID NO: 27-63, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado

en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad

con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 35-50, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 %

de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 51, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 52, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 53, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 54, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 85 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

de lasSEQ ID NO: 55-59, o un fragmento del mismo.

de aminoácidos que tiene al menos un 90 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 % de identidad

con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 35-50, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 %

de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 51, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 52, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 53, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 54, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 90 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

de lasSEQ ID NO: 55-59, o un fragmento del mismo.

de aminoácidos que tiene al menos un 95 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 % de identidad

con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 35-50, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 %

de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 51, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 52, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 53, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 identidad con una secuencia de aminoácidos de laSEQ ID NO: 54, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de una cualquiera

de lasSEQ ID NO: 55-59, o un fragmento del mismo.

En algunas realizaciones, el polipéptido proporcionado en el presente documento es un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 60-61, o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos

un 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con una secuencia

de aminoácidos de una cualquiera de lasSEQ ID NO: 60-61, o un fragmento del mismo.

En algunas realizaciones, cuatro o más polipéptidos descritos en el presente documento están unidos covalentemente a una estructura polimérica para formar un multímero. En algunas realizaciones, la estructura polimérica es dextrano o polietilenglicol. En algunas realizaciones, cada uno de los polipéptidos está unido a la

cadena principal polimérica a través de un resto de cisteína terminal en cada uno de los polipéptidos. En algunas realizaciones, cada uno de los polipéptidos está unido a la cadena principal polimérica a través de un

sitio de biotinilación en cada uno de los polipéptidos.

En algunas realizaciones, cuatro o más polipéptidos están unidos covalentemente a avidina para formar un multímero.

Protuberancia y/o cavidad

En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen no natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende uno o más aminoácidos seleccionados de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano y cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de fenilalanina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de arginina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de tirosina. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de triptófano. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la protuberancia comprende un resto de cisteína y un resto de triptófano.

En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una cavidad diseñada por ingeniería genética. En algunas realizaciones, la cavidad comprende uno o más restos de aminoácidos de origen no natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende uno o más restos de aminoácidos de origen natural. En algunas realizaciones, la cavidad comprende uno o más aminoácidos seleccionados de alanina, serina, treonina, valina y cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de alanina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de serina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de treonina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de valina. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína. En algunas realizaciones, la cavidad comprende un resto de cisteína, un residuo de serina, un residuo de alanina y un resto de valina.

En algunas realizaciones, la protuberancia o cavidad no se localiza en un dominio de MHC de clase II en el polipéptido. En algunas realizaciones, la protuberancia o cavidad se localiza en un dominio constante C<h>3 de anticuerpo en el polipéptido. En algunas realizaciones, la protuberancia está ubicada en un dominio constante CH3 de anticuerpo en el polipéptido. En algunas realizaciones, la cavidad está ubicada en un dominio constante CH3 de anticuerpo en el polipéptido.

En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 85 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 90 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 95 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 98 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 25. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSe Q ID NO: 25.

En ciertas realizaciones de la divulgación, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones de la divulgación, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 85 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 95 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51. En algunas realizaciones de la divulgación, la cavidad comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 51.

En ciertas realizaciones, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio CH2 o CH3 de una molécula de inmunoglobulina. En ciertas realizaciones, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio C<h>3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio Ch3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 95 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio Ch3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 52. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la cavidad se diseña por ingeniería genética en el dominio Ch3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos<expuesta en la s>Eq ID NO: 52<.>

En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 90 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 95 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 98 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En ciertas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos expuesta en laSEQ ID NO: 26. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, la protuberancia comprende una secuencia de nucleótidos con al menos un 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89,<90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de nucleótidos expuesta en la>SeQ ID NO: 26.

En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 90 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 95 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53. En algunas realizaciones de la divulgación, la protuberancia comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 53.

En ciertas realizaciones, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH2 o CH3 de una molécula de inmunoglobulina. En ciertas realizaciones, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 80 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 90 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 95 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 98 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54. En ciertas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54. En algunas realizaciones de la divulgación, la protuberancia se diseña por ingeniería genética en el dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina y comprende una secuencia de aminoácidos con al menos un 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos expuesta en laSEQ ID NO: 54.

Una protuberancia y una cavidad pueden modificarse mediante mutación específica en el dominio C<h>3 de una IgGi fusionado a un dominio alfa o beta del MHC de clase II. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una mutación S354C (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región Ch3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una mutación T366W (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una mutación S354C y T366W (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región Ch3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la protuberancia comprende una mutación S354C y T366W (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región Ch3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la protuberancia consiste en una mutación S354C y T366W (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una mutación Y349C (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región Ch3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una mutación T366S (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una mutación L368A (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región Ch3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una mutación Y407V (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad comprende una mutación Y349C, T366S, L368A e Y407V (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1. En ciertas realizaciones, la cavidad consiste en una mutación Y349C, T366S, L368A e Y407V (esquema de numeración de anticuerpos de EU) en la región C<h>3 de una molécula de IgG1.

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG.

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio Ch2 de IgG, y un dominio Ch3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio Ch3 de IgG; y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio Ch3 de IgG.

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio Ch2 de IgG, y un dominio Ch3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio Ch2 de IgG, y un dominio Ch3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio Ch3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio Ch3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio Ch2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido consiste en un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG y (ii) el segundo polipéptido consiste en un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio CH2 de IgG y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG.

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido consiste en un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG; y (ii) el segundo polipéptido consiste en un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG.

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido consiste en un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido consiste en un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

En una realización, los heterodímeros aislados comprenden al menos un primer polipéptido y al menos un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido consiste en un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la protuberancia está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a S354C y T366W (numeración de EU); y (ii) el segundo polipéptido consiste en un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, un dominio C<h>2 de IgG, y un dominio C<h>3 de IgG, en donde la cavidad está formada por mutaciones en el dominio C<h>3 de IgG correspondientes a Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeración de EU).

Métodos de preparación

En el presente documento se proporcionan métodos para preparar un heterodímero descrito en el presente documento. Esta divulgación contempla métodos para producir heterodímeros en donde los heterodímeros comprenden un primer polipéptido que comprende un dominio a1 de MHC de clase II y un dominio a2 de MHC de clase II, y un segundo polipéptido que comprende un dominio p1 de MHC de clase II y un dominio p2 de MHC de clase II. En algunas realizaciones, cada polipéptido comprende además un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3. En algunas realizaciones, el dominio C<h>3 comprende además o bien un botón (protuberancia) diseñado por ingeniería genética o bien un ojal (cavidad) diseñado por ingeniería genética. Si el botón está asociado con el polipéptido que comprende el dominio a1 y a2 del MHC de clase II, el ojal está asociado con el polipéptido que comprende el dominio p1 y p2 del MHC de clase II. La configuración puede cambiarse con el botón asociado con el polipéptido que comprende el dominio p1 y p2 del MHC de clase II, y el ojal asociado con el polipéptido que comprende el dominio a1 y a2 del MHC de clase II. El heterodímero también comprende un polipéptido inmunológicamente relevante asociado en el surco de unión que se forma entre las cadenas alfa y beta del MHC de clase II. El polipéptido puede ser una parte de cualquiera de la primera o segunda cadena polipeptídica asociada con la misma por un enlazador de aminoácidos flexible.

En algunas realizaciones de la divulgación, los polipéptidos de los heterodímeros están codificados por polinucleótidos que se introducen en una línea celular eucariota. En ciertas realizaciones de la divulgación, la línea celular eucariota es una línea celular de mamífero. En ciertas realizaciones de la divulgación, la línea celular eucariota es una línea celular de CHO (ovario de hámster chino). El polinucleótido puede introducirse mediante métodos conocidos en la técnica tales como transducción vírica (retrovírica o lentivírica) o produciendo una línea celular estable que comprende una copia del polinucleótido integrado en el genoma. Después de la expresión, los heterodímeros se ensamblan en la célula y se secretan al medio de cultivo. En esta etapa, el medio de cultivo se somete a al menos una etapa de purificación adicional. En ciertas realizaciones de la divulgación, esta etapa de purificación comprende una cualquiera o más de centrifugación, ultracentrifugación, diálisis, filtración, cromatografía o cromatografía en columna. En ciertas realizaciones de la divulgación, puesto que los polipéptidos comprenden un dominio C<h>2 y un dominio C<h>3 de una inmunoglobulina humana, la etapa de cromatografía comprende cromatografía de afinidad usando Proteína A, Proteína G, Proteína L, o cualquier combinación de las mismas. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía comprende cromatografía de afinidad usando proteína A. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía comprende cromatografía de afinidad usando proteína G. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía comprende cromatografía de afinidad usando proteína A/G. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía consiste en cromatografía de afinidad usando proteína A. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía consiste en cromatografía de afinidad usando proteína G. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía consiste en cromatografía de afinidad usando proteína A/G. En ciertas realizaciones de la divulgación, la etapa de cromatografía no utiliza un reactivo de afinidad distinto de proteína A, proteína G, proteína L o una combinación de los mismos (esto no incluye etapas de cromatografía no basadas en afinidad tales como desalación o cromatografía de exclusión por tamaño).

En algunas realizaciones de la divulgación, son métodos para preparar un heterodímero que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido, en donde el primer polipéptido y el segundo polipéptido se encuentran en una interfaz, en donde la interfaz del primer polipéptido comprende una protuberancia diseñada por ingeniería genética que se puede colocar en una cavidad diseñada por ingeniería genética en la interfaz del segundo polipéptido; y (i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio p2 de MHC de clase II o una combinación de los mismos; o (ii) el primer polipéptido comprende un dominio p1 de MHC de clase II, un dominio (32 de MHC de clase II o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II, un dominio a2 de MHC de clase II, o una combinación de los mismos; que comprende las etapas de: (a) cultivar una célula hospedadora que comprende ácido nucleico que codifica el primer polipéptido y el segundo polipéptido que incluye las interfaces de los mismos, en donde el ácido nucleico que codifica la interfaz del primer polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del primer polipéptido para codificar la protuberancia o el ácido nucleico que codifica la interfaz del segundo polipéptido se ha alterado a partir del ácido nucleico que codifica una interfaz original del segundo polipéptido para codificar la cavidad, o ambos, y en donde el cultivo es tal que se expresan el primer polipéptido y el segundo polipéptido; y (b) recuperar el heterodímero a partir del cultivo de células hospedadoras. En algunas realizaciones, el ácido nucleico que codifica el primer polipéptido se ha alterado con respecto al ácido nucleico original para codificar la protuberancia y el ácido nucleico que codifica el segundo polipéptido se ha alterado con respecto al ácido nucleico original para codificar la cavidad. En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa (a) está precedida por una etapa en donde cada uno de uno o más ácidos nucleicos que codifican un resto de aminoácido original de la interfaz del primer polipéptido se reemplaza con ácido nucleico que codifica un resto de aminoácido importado, en donde la protuberancia comprende uno o más restos importados. En realizaciones adicionales, uno o más restos importados tienen un volumen de cadena lateral mayor que el resto de aminoácido original. En algunas realizaciones de la divulgación, la etapa (a) está precedida por una etapa en donde cada uno de uno o más ácidos nucleicos que codifican un resto de aminoácido original en la interfaz del segundo polipéptido se reemplaza con ácido nucleico que codifica un resto de aminoácido importado, en donde la cavidad comprende uno o más restos importados. En realizaciones adicionales, uno o más restos importados tienen un volumen de cadena lateral más pequeño que el resto de aminoácido original.

En algunas realizaciones, el resto importado se selecciona de fenilalanina, arginina, tirosina, triptófano, alanina, serina, treonina, valina y cisteína. En algunas realizaciones, el resto importado es arginina. En algunas realizaciones, el resto importado es fenilalanina. En algunas realizaciones, el resto importado es tirosina. En algunas realizaciones, el resto importado es triptófano. En algunas realizaciones, el resto importado es alanina. En algunas realizaciones, el resto importado es serina. En algunas realizaciones, el resto importado es treonina. En algunas realizaciones, el resto importado es valina. En algunas realizaciones, el resto importado no es cisteína. En algunas realizaciones, el resto importado es cisteína. En algunas realizaciones, los restos importados son cisteína y triptófano. En algunas realizaciones, los restos importados son cisteína, serina, alanina y valina.

También se proporcionan en el presente documento métodos para preparar un conjugado de heterodímeronanopartícula descrito en el presente documento. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo sólido. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal o tiene un núcleo sólido. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo sólido de oro. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo sólido de óxido de hierro. En algunas realizaciones de la divulgación, los métodos comprenden unir al menos un heterodímero descrito en el presente documento a una nanopartícula, en donde la nanopartícula no es liposomal y tiene un núcleo de óxido de hierro; y la etapa de unión comprende unir covalentemente el al menos un heterodímero a la nanopartícula a través de un enlazador.

Métodos para tratar enfermedades

En el presente documento se proporcionan métodos para tratar enfermedades usando composiciones que comprenden, consisten en o consisten esencialmente en heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados de heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento. En algunas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad o trastorno autoinmunitario.

Los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados de la presente divulgación son útiles para reprogramar/diferenciar linfocitos T autorreactivos en linfocitos T reguladores o TR1. En ciertas realizaciones, los linfocitos TR1 expresan IL-10. En ciertas realizaciones, los linfocitos TR1 secretan IL-10. En ciertas realizaciones, los linfocitos TR1 expresan CD49b. En ciertas realizaciones, los linfocitos TR1 expresan LAG-3. Los linfocitos T que tienen estas características fenotípicas son útiles para tratar afecciones inflamatorias o autoinmunitarias de individuos.

"Enfermedad o trastorno autoinmunitario" incluye enfermedades o trastornos que surgen y se dirigen contra los propios tejidos u órganos de un individuo o la manifestación de los mismos, o una afección que surge de estos. En una realización, se refiere a una afección que es el resultado de, o que se ve agravada por, la producción de linfocitos T que reaccionan con los tejidos y antígenos corporales normales. Algunos ejemplos de enfermedades autoinmunitarias o trastornos incluyen, pero sin limitación, artritis (artritis reumatoide, tal como artritis aguda, artritis reumatoide crónica, gota o artritis gotosa, artritis gotosa aguda, artritis inmunológica aguda, artritis inflamatoria crónica, artritis degenerativa, artritis inducida por colágeno tipo II, artritis infecciosa, artritis de Lyme, artritis proliferativa, artritis psoriásica, enfermedad de Still, artritis vertebral y artritis reumatoide de inicio juvenil, artrosis, artritis crónica progrediente, artritis deformante, poliartritis crónica primaria, artritis reactiva y espondilitis anquilosante), enfermedades inflamatorias hiperproliferativas de la piel, psoriasis (tal como psoriasis en placas, psoriasis gotosa, la psoriasis pustulosa y psoriasis de las uñas), atopia (incluidas enfermedades atópicas como fiebre del heno y síndrome de Job), dermatitis (incluidas dermatitis de contacto, dermatitis de contacto crónica, dermatitis exfoliativa, dermatitis alérgica, dermatitis de contacto alérgica, dermatitis herpetiforme, dermatitis numular, dermatitis seborreica, dermatitis inespecífica, dermatitis de contacto irritante primaria, y dermatitis atópica), síndrome de hiper IgM ligado al cromosoma X, enfermedades inflamatorias alérgicas intraoculares, urticaria (como urticaria alérgica crónica y urticaria idiopática crónica, incluida la urticaria crónica autoinmunitaria), miositis, polimiositis/dermatomiositis, dermatomiositis juvenil, necrólisis epidérmica tóxica, esclerodermia (incluida la esclerodermia sistémica), esclerosis (como la esclerosis sistémica; esclerosis múltiple (EM), tal como EM espino-óptica, EM primaria progresiva (EMPP) y EM remitente recurrente (EMRR); esclerosis sistémica progresiva, ateroesclerosis, arteriesclerosis, esclerosis diseminada y esclerosis atáxica), trastorno del espectro de la neuromielitis óptica (NMO, también conocido como enfermedad de Devic o síndrome de Devic), enfermedad inflamatoria intestinal (EII) (por ejemplo, enfermedad de Crohn; enfermedades gastrointestinales autoinmunitarias; colitis, tal como colitis ulcerosa, colitis microscópica, colitis colagenosa, colitis polipoidea, enterocolitis necrotizante y colitis transmural; y enfermedad inflamatoria intestinal autoinmunitaria), inflamación intestinal, piodermitis gangrenosa, eritema nodoso, colangitis esclerosante primaria, síndrome de dificultad respiratoria (incluido síndrome de dificultad respiratoria aguda o del adulto), meningitis, inflamación total o parcial de la úvea, iritis, coroiditis, un trastorno hematológico autoinmunitario, espondilitis reumatoide, sinovitis reumatoide, angioedema hereditario, lesiones de los nervios craneales, tal como meningitis, herpes gestacional, penfigoide gestacional, prurito escrotal, fallo ovárico prematuro autoinmunitario, pérdida repentina de audición debida a una enfermedad autoinmunitaria, enfermedades mediadas por IgE, tales como anafilaxia y rinitis alérgica y atópica, encefalitis, tal como encefalitis de Rasmussen y encefalitis límbica y/o del tronco encefálico, uveítis (tal como uveítis anterior, uveítis anterior aguda, uveítis granulomatosa, uveítis no granulomatosa, uveítis facoantigénica, uveítis posterior o uveítis autoinmunitaria), glomerulonefritis (GN) con y sin síndrome nefrótico (tal como glomerulonefritis crónica o aguda, tal como GN primaria, GN inmunomediada, GN membranosa (nefropatía membranosa), GN membranosa idiopática o nefropatía membranosa idiopática, GN proliferativa membranosa o membranosa (GNMP), incluidos los tipos I y II, y GN rápidamente progresiva, o nefritis proliferativa), insuficiencia endocrina poliglandular autoinmunitaria, balanitis, incluida balanitis circunscripta plasmacelular, balanopostitis, eritema anular centrífugo, eritema discrómico perstans, eritema multiforme, granuloma anular, liquen nítido, liquen escleroso y atrófico, liquen simple crónico, liquen espinoso, liquen plano, ictiosis lamelar, hiperqueratosis epidermolítica, queratosis premaligna, piodermitis gangrenosa, afecciones y respuestas alérgicas, reacción alérgica, eccema (incluido eccema alérgico o atópico, eccema asteatósico, eczema dishidrótico y eczema vesicular palmoplantar), asma (como asma bronquial y asma autoinmunitaria), enfermedades que implican infiltración de linfocitos T y respuestas inflamatorias crónicas, reacciones inmunitarias contra antígenos extraños como los grupos sanguíneos A-B-O fetales durante el embarazo, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, miocarditis autoinmunitaria, deficiencia de adhesión leucocitaria, lupus (incluyendo nefritis lúpica, cerebritis lúpica, lupus pediátrico, lupus no renal, lupus extrarrenal, lupus discoide y lupus eritematoso discoide, alopecia lúpica, lupus eritematoso sistémico (LES) como LES cutáneo o LES cutáneo subagudo, síndrome de lupus neonatal (NLE) y lupus eritematoso diseminado), diabetes de tipo I, diabetes de tipo II y diabetes autoinmunitaria latente en adultos (o diabetes de tipo 1.5). También se contemplan respuestas inmunitarias asociadas a la hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citocinas y linfocitos T, sarcoidosis, granulomatosis (incluidas granulomatosis linfomatoide, granulomatosis de Wegener o agranulocitosis), vasculitis (incluidas vasculitis, vasculitis de grandes vasos (incluidas polimialgia reumática y arteritis de células gigantes (de Takayasu)), vasculitis de vasos medianos (incluidas enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nodosa/periarteritis nodosa), poliarteritis microscópica, inmunovasculitis, vasculitis del SNC, vasculitis cutánea, vasculitis por hipersensibilidad, vasculitis necrotizante, tal como vasculitis necrotizante sistémica, y vasculitis asociada a ANCA (tal como vasculitis o síndrome de Churg-Strauss (CSS) y vasculitis de vasos pequeños asociada a ANCA), arteritis temporal, anemia aplásica, anemia aplásica autoinmunitaria, anemia de Coombs positiva, anemia de Diamond Blackfan, anemia hemolítica, anemia hemolítica inmunitaria, incluida anemia hemolítica autoinmunitaria (AHAI), enfermedad de Addison, neutropenia autoinmunitaria, pancitopenia, leucocitopenia, enfermedades que implican diapedesis leucocitaria, trastornos inflamatorios del SNC, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, síndrome de lesión multiorgánica (como los secundarios a septicemia, traumatismo o hemorragia), enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, síndrome antifosfolípido, neuritis alérgica, enfermedad/síndrome de Behget, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome de Reynaud, Síndrome de Sjogren, síndrome de Stevens-Johnson, penfigoide, tal como penfigoide bulloso y penfigoide cutáneo, pénfigo (incluidos pénfigo vulgar, pénfigo foliáceo, pénfigo mucomembranoso y pénfigo eritematoso), polendocrinopatías autoinmunitarias, enfermedad o síndrome de Reiter, lesión térmica, preeclampsia, un trastorno del inmunocomplejo, tal como nefritis por inmunocomplejos, nefritis mediada por anticuerpos, polineuropatías, neuropatía crónica como polineuropatías por IgM o neuropatía mediada por IgM, trombocitopenia autoinmunitaria o inmunomediada, tal como púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), incluida PTI crónica o aguda, púrpura trombocitopénica adquirida, escleritis, tal como ceratoescleritis idiopática, epiescleritis, enfermedad autoinmunitaria de testículos y ovarios, incluidas orquitis y ooforitis autoinmunitarias, hipotiroidismo primario, hipoparatiroidismo, enfermedades endocrinas autoinmunitarias (incluidas tiroiditis (tal como tiroiditis autoinmunitaria, enfermedad de Hashimoto, tiroiditis crónica o tiroiditis subaguda), enfermedad tiroidea autoinmunitaria, hipotiroidismo idiopático o enfermedad de Graves), síndromes poliglandulares, tales como síndromes poliglandulares autoinmunitarios (o síndromes de endocrinopatía poliglandular), síndromes paraneoplásicos, incluidos síndromes paraneoplásicos neurológicos, tal como síndrome miasténico de Lambert-Eaton o síndrome de Eaton-Lambert, síndrome del hombre rígido o de la persona rígida, encefalomielitis, tales como encefalomielitis alérgica y encefalomielitis alérgica experimental (EAE), miastenia grave, tal como miastenia grave asociada al timoma, degeneración cerebelosa, neuromiotonía, opsoclono o síndrome opsoclono-mioclono (OMS), neuropatía sensorial, neuropatía motora multifocal, síndrome de Sheehan, hepatitis autoinmunitaria, hepatitis crónica, hepatitis lupoide, hepatitis de células gigantes, hepatitis crónica activa o hepatitis crónica activa autoinmunitaria, neumonitis intersticial linfoide (NIL), bronquiolitis obliterante (no trasplante) frente a NSIP, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad de Berger (nefropatía por IgA), nefropatía por IgA idiopática, dermatosis por IgA lineal, dermatosis neutrofílica febril aguda, dermatosis pustulosa subcorneal, dermatosis acantolítica transitoria, cirrosis, tal como cirrosis biliar primaria y neumonocirrosis, síndrome de enteropatía autoinmunitaria, enfermedad celíaca o celiaquía, esprúe celíaco (enteropatía por gluten), esprúe refractario, esprúe idiopático, crioglobulinemia, esclerosis lateral amilotrófica (ELA; enfermedad de Lou Gehrig), arteriopatía coronaria, enfermedad autoinmunitaria del oído, tal como enfermedad autoinmunitaria del oído interno (AIED), hipoacusia autoinmunitaria, policondritis como la policondritis refractaria o recidivante o recidivante, proteinosis alveolar pulmonar, síndrome de Cogan/queratitis intersticial no sifilítica, parálisis de Bell, enfermedad/síndrome de Sweet, rosácea autoinmunitaria, dolor asociado al zóster, amiloidosis, una linfocitosis no cancerosa, una linfocitosis primaria, incluida linfocitosis monoclonal de linfocitos B (por ejemplo, gammapatía monoclonal benigna y gammapatía monoclonal de significado indeterminado, MGUS), neuropatía periférica, síndrome paraneoplásico, canalopatías, tales como epilepsia, migraña, arritmia, trastornos musculares, sordera, ceguera, parálisis periódica, canalopatías del SNC, autismo, miopatía inflamatoria, glomeruloesclerosis focal o segmentaria (GEFS), oftalmopatía endocrina, uveorretinitis, coriorretinitis, trastorno hepatológico autoinmunitario, fibromialgia, insuficiencia endocrina múltiple, síndrome de Schmidt, adrenalitis, atrofia gástrica, demencia presenil, enfermedades desmielinizantes, tales como enfermedades desmielinizantes autoinmunitarias y polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, síndrome de Dressler, alopecia grave, alopecia total, síndrome de CREST (calcinosis, fenómeno de Raynaud, dismotilidad esofágica, esclerodactilia y telangiectasia), infertilidad autoinmunitaria masculina y femenina (por ejemplo, debido a anticuerpos antiespermatozoides), enfermedad mixta del tejido conjuntivo, enfermedad de Chagas, fiebre reumática, aborto recurrente, pulmón de granjero, eritema multiforme, síndrome postcardiotomía, síndrome de Cushing, pulmón de granjero, angiitis granulomatosa alérgica, angiitis linfocítica benigna, síndrome de Alport, alveolitis, tal como alveolitis alérgica y alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar intersticial, reacción transfusional, lepra, paludismo, enfermedades parasitarias, tales como leishmaniasis, cifanosomiasis, esquistosomiasis, ascariasis, aspergilosis, síndrome de Sampter, síndrome de Caplan, dengue, endocarditis, fibrosis endomiocárdica, fibrosis pulmonar intersticial difusa, fibrosis pulmonar intersticial, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística, endoftalmitis, eritema elevatum et diutinum, eritroblastosis fetal, faciitis eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariasis, ciclitis, tales como ciclitis crónica, ciclitis heterocrónica, iridociclitis (aguda o crónica), o ciclitis de Fuchs, púrpura de Henoch-Schonlein, infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), SCID, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), infección por ecovirus, septicemia, endotoxemia, pancreatitis, tiroxicosis, infección por parvovirus, infección por el virus de la rubéola, síndromes posvacunales, infección congénita por rubéola, infección por el virus de Epstein-Barr, parotiditis, síndrome de Evan, insuficiencia gonadal autoinmunitaria, corea de Sydenham, nefritis postestreptocócica, tromboangitis ubiterante, tirotoxicosis, tabes dorsal, corioiditis, polimialgia de células gigantes, neumonitis por hipersensibilidad crónica, queratoconjuntivitis seca, queratoconjuntivitis epidémica, síndrome nefrítico idiopático, nefropatía por cambios mínimos, lesión familiar benigna y por isquemia-reperfusión, reperfusión de órganos trasplantados, autoinmunidad retiniana, inflamación articular, bronquitis, enfermedad obstructiva crónica de las vías respiratorias/pulmonar, silicosis, aftas, estomatitis aftosa, trastornos arterioscleróticos, asperniogénesis, hemólisis autoinmunitaria, enfermedad de Boeck, crioglobulinemia, contractura de Dupuytren, endoftalmitis facoanafiláctica, enteritis alérgica, eritema nodoso leproso, parálisis facial idiopática, síndrome de fatiga crónica, fiebre reumática, enfermedad de Hamman-Rich, hipoacusia sensoneural, hemoglobinuria paroxística, hipogonadismo, ileítis regional, leucopenia, mononucleosis infecciosa, mielitis transversa, mixedema idiopático primario, nefrosis, oftalmia sinfática, orquitis granulomatosa, pancreatitis, polirradiculitis aguda, pioderma gangrenoso, tiroiditis de Quervain, atrofia esplénica adquirida, timoma no maligno, vitíligo, síndrome de choque tóxico, intoxicación alimentaria, afecciones que implican infiltración de linfocitos T, deficiencia de adhesión leucocitaria, respuestas inmunitarias asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citocinas y linfocitos T, enfermedades que implican diapedesis leucocitaria, síndrome de lesión orgánica múltiple, enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo, enfermedad de la membrana basal antiglomerular, neuritis alérgica, polendocrinopatías autoinmunitarias, ooforitis, mixedema primario, gastritis atrófica autoinmunitaria, oftalmitis simpática, enfermedades reumáticas, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, síndrome nefrótico, insulitis, insuficiencia polendocrina, síndrome poliglandular autoinmune de tipo I, hipoparatiroidismo idiopático de inicio en la edad adulta (AOIH), miocardiopatía, tal como miocardiopatía dilatada, epidermolisis bullosa adquirida (EBA), hemocromatosis, miocarditis, síndrome nefrótico, colangitis esclerosante primaria, sinusitis purulenta o no purulenta, sinusitis aguda o crónica, sinusitis etmoidal, frontal, maxilar o esfenoidal, un trastorno relacionado con los eosinófilos, tal como eosinofilia, eosinofilia por infiltración pulmonar, síndrome eosinofiliamialgia, síndrome de Loffler, neumonía eosinofílica crónica, eosinofilia pulmonar tropical, aspergilosis bronconeumónica, aspergiloma o granulomas que contengan eosinófilos, anafilaxia, espondiloartritis seronegativas, enfermedad autoinmunitaria polendocrina, colangitis esclerosante, esclerodermia, epiesclerodermia, candidiasis mucocutánea crónica, síndrome de Bruton, hipogammaglobulinemia transitoria de la infancia, síndrome de Wiskott-Aldrich, síndrome de ataxia telangiectasia, angiectasia, trastornos autoinmunitarios asociados a enfermedad del colágeno, reumatismo, enfermedad neurológica, linfadenitis, reducción de la respuesta de la presión arterial, disfunción vascular, lesión tisular, isquemia cardiovascular, hiperalgesia, isquemia renal, isquemia cerebral y enfermedad que acompaña a la vascularización, trastornos de hipersensibilidad alérgica, glomerulonefritis, lesión por reperfusión, trastorno de reperfusión isquémica, lesión por reperfusión del miocardio u otros tejidos, traqueobronquitis linfomatosa, dermatosis inflamatorias, dermatosis con componentes inflamatorios agudos, insuficiencia orgánica múltiple, enfermedades ampollosas, necrosis cortical renal, meningitis purulenta aguda u otros trastornos inflamatorios del sistema nervioso central, trastornos inflamatorios oculares y orbitarios, síndromes asociados a la transfusión de granulocitos, toxicidad inducida por citocinas, narcolepsia, inflamación aguda grave, inflamación crónica intratable, pielitis, hiperplasia endarterial, úlcera péptica, valvulitis, enfisema, alopecia areata, inflamación del tejido adiposo/diabetes tipo II, inflamación del tejido adiposo asociada a la obesidad/resistencia a la insulina y endometriosis.

En algunas realizaciones, el trastorno o enfermedad autoinmunitaria puede incluir, pero sin limitación, diabetes mellitus de tipo I y tipo II, prediabetes, rechazo de trasplantes, esclerosis múltiple, un trastorno relacionado con la esclerosis múltiple, insuficiencia ovárica prematura, esclerodermatitis, enfermedad/síndrome de Sjogren, lupus, vitíligo, alopecia (calvicie), insuficiencia poliglandular, enfermedad de Graves, hipotiroidismo, polimiositis, pénfigo, enfermedad de Crohn, colitis, hepatitis autoinmunitaria, hipopituitarismo, miocarditis, enfermedad de Addison, enfermedades autoinmunitarias de la piel, uveítis, anemia perniciosa, hipoparatiroidismo y/o artritis reumatoide. Otras indicaciones de interés incluyen, pero sin limitación, asma, asma alérgica, cirrosis biliar primaria, cirrosis, trastorno del espectro de la neuromielitis óptica (enfermedad de Devic, esclerosis múltiple opticoespinal (OSMS)), pénfigo vulgar, enfermedad inflamatoria intestinal (EII), artritis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES), enfermedad celíaca, psoriasis, miocardiopatía autoinmune, miocardiopatía dilatada idiopática (IDCM), una miastenia grave, uveítis, espondilitis anquilosante, miopatías mediadas por sistema inmunitario, cáncer de próstata, síndrome antifosfolípido (ANCA+), ateroesclerosis, dermatomiositis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfisema, lesión de la médula espinal, lesión traumática, una destrucción pulmonar inducida por tabaco, vasculitis asociada a ANCA, psoriasis, colangitis esclerosante, colangitis esclerosante primaria, y enfermedades de los sistemas nerviosos central y periférico.

En algunas realizaciones, el trastorno o enfermedad autoinmunitaria puede incluir, pero sin limitación, diabetes tipo I, esclerosis múltiple, enfermedad celíaca, cirrosis biliar primaria, pénfigo, pénfigo foliáceo, pénfigo vulgar, trastorno del espectro de la neuromielitis óptica, artritis (incluida artritis reumatoide), asma alérgica, enfermedad inflamatoria del intestino (incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), lupus eritematoso sistémico, ateroesclerosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfisema, psoriasis, hepatitis autoinmunitaria, uveítis, síndrome de Sjogren, esclerodermatitis, síndrome antifosfolípido, vasculitis asociada a ANCA y síndrome del hombre rígido. En un aspecto adicional, el antígeno relevante para la enfermedad es un antígeno relevante para tumores o cáncer.

En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados de la presente divulgación se incluyen en una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes, vehículos y diluyentes farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados de la presente divulgación se administran suspendidos en una solución estéril. En ciertas realizaciones, la solución comprende NaCl al 0,9 %. En ciertas realizaciones, la solución comprende además uno o más de: tampones, por ejemplo, acetato, citrato, histidina, succinato, fosfato, bicarbonato e hidroximetilaminometano (Tris); tensioactivos, por ejemplo, polisorbato 80 (Tween 80), polisorbato 20 (Tween 20) y poloxámero 188; poliol/disacárido/polisacáridos, por ejemplo, glucosa, dextrosa, manosa, manitol, sorbitol, sacarosa, trehalosa y dextrano 40; aminoácidos, por ejemplo, glicina o arginina; antioxidantes, por ejemplo, ácido ascórbico, metionina; o agentes quelantes, por ejemplo, EGTA o EGTA. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados de la presente divulgación se envían/almacenan liofilizados y se reconstituyen antes de la administración. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados liofilizados o formulaciones de complejos heterodímero-nanopartícula aislados comprenden un agente de carga tal como manitol, sorbitol, sacarosa, trehalosa o dextrano 40. La formulación liofilizada puede estar contenida en un vial de vidrio. Los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados, cuando se formulan, ya sean reconstituidos o no, pueden tamponarse a un determinado pH, generalmente menor de 7,0. En ciertas realizaciones, el pH puede ser de entre 4,5 y 6,5, 4,5 y 6,0, 4,5 y 5,5, 4,5 y 5,0, o 5,0 y 6,0. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados pueden formularse para inyección intravenosa. En ciertas realizaciones, se pueden formular heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados para ingestión oral. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados pueden formularse para inyección parenteral, intramuscular o intratisular. En ciertas realizaciones, los heterodímeros aislados o complejos heterodímero-nanopartícula aislados pueden formularse y/o administrarse sin ningún adyuvante inmunológico u otro compuesto o polipéptido destinado a aumentar o disminuir una respuesta inmunitaria.

También se proporcionan en el presente documento métodos para detectar y/o monitorizar una población de células inmunitarias, preferiblemente linfocitos T, que comprenden administrar un complejo antígeno marcado-MHC, donde un sujeto ha recibido heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento.

En ciertos aspectos de la divulgación, se proporcionan en el presente documento métodos para detectar una población de linfocitos T<r>1 y/o linfocitos T efectores de una manera específica de antígeno en un sujeto que ha recibido heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento. El método comprende, como alternativa consiste en, o consiste además esencialmente en, poner en contacto una muestra sospechosa de comprender los linfocitos T<r>1 con una cantidad eficaz de complejo pMHC marcado para formar un complejo de multímero, y detectar cualquier complejo multímero, detectando de este modo la población linfocitos T<r>1. En algunas realizaciones, el método comprende además, como alternativa consiste además en, o consiste además esencialmente en teñir cualquier población de linfocitos T usando un complejo de multímero marcado. En algunas realizaciones, la etapa de detectar la población de linfocitos T<r>1 comprende citometría de flujo para detectar cualquier complejo de multímero. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el método comprende además, o como alternativa consiste en, o consiste además esencialmente en administrar el complejo o composición al sujeto.

En ciertos aspectos de la divulgación, se proporcionan en el presente documento métodos para detectar una población de linfocitos T<r>1 y/o linfocitos T efectores de una manera específica de antígeno en un sujeto que ha recibido heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento. El método comprende, como alternativa consiste en, o consiste además esencialmente en uno cualquiera de los siguientes ensayos: ensayo ELISPOT de citocinas, un análisis de epítopos guiado por multímero o un ensayo de extracción de multímero. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el método comprende además, como alternativa consiste además en, o consiste además esencialmente en administrar heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados de heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento.

En otros aspectos de la divulgación, se proporcionan en el presente documento métodos para monitorizar la expansión de una población linfocitos T<r>1 específicos de antígeno y/o linfocitos T efectores en un sujeto. El método comprende, como alternativa consiste en, o consiste además esencialmente en: a) administrar a un sujeto una cantidad eficaz de heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento, en donde el antígeno relevante para la enfermedad del complejo pMHC se selecciona para expandir los linfocitos T<r>1 específicos de antígeno y/o los linfocitos T efectores; b) aislar una muestra adecuada del sujeto que se sospecha que contiene la población; c) poner en contacto la muestra con una cantidad eficaz de complejo de pMHC marcado para formar un complejo de multímero, y detectar cualquier complejo de multímero; y d) cuantificar el número linfocitos T<r>1 específicos de antígeno y/o linfocitos T efectores en la población. En algunas realizaciones, el método comprende además, como alternativa consiste además en, o consiste además esencialmente en teñir cualquier complejo de multímero. En algunas realizaciones, la etapa de cuantificar el número de linfocitos T<r>1 específicos de antígeno y/o linfocitos T efectores comprende citometría de flujo y/o ELISA. En algunas realizaciones de la divulgación y no de la invención, el método comprende además, como alternativa consiste además en, o consiste además esencialmente en administrar heterodímeros divulgados en el presente documento y/o conjugados de heterodímero-nanopartícula divulgados en el presente documento.

Existen muchos tipos de inmunoensayos que pueden aplicarse. Los inmunoensayos abarcados por la presente divulgación incluyen, pero sin limitación, los descritos en la patente de EE. UU. número 4,367,110 (ensayo en sándwich con dos anticuerpos monoclonales) y la patente de EE. UU. número 4,452,901 (transferencia de Western). Otros ensayos incluyen inmunoprecipitación de ligandos marcados e inmunocitoquímica, tantoin vitrocomoin vivo.

Un método para cuantificar el número de células inmunitarias específicas de antígeno circulantes es el ensayo de tetrámero. En este ensayo, un epítopo específico se une a formas multiméricas sintéticas de moléculas de MHC marcadas fluorescentemente. Puesto que las células inmunitarias reconocen antígenos en forma de péptidos cortos unidos a moléculas del MHC, las células con el receptor de linfocitos T adecuado se unirán a los tetrámeros marcados y se pueden cuantificar por citometría de flujo. Aunque este método consume menos tiempo que un ensayo ELISPOT, el ensayo de multímero mide únicamente la unión, no la función. No todas las células que se unen a un antígeno particular se activan necesariamente. Sin embargo, se ha demostrado la correlación entre ELISPOT, multímero y ensayos de citotoxicidad.

Los inmunoensayos generalmente son ensayos de unión. Se conocen en la técnica ciertos inmunoensayos, incluidos los diversos tipos de enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA), radioinmunoensayos (RIA) o ensayos basados en perlas, tales como la tecnología Luminex®. También es útil la detección inmunohistoquímica usando secciones de tejido.

En un ejemplo de ELISA, los anticuerpos o antígenos se inmovilizan sobre una superficie seleccionada, tal como un pocillo en una placa de microtitulación de poliestireno, varilla de inmersión o soporte de columna. Después, se añade a los pocillos una composición de ensayo que se sospecha que contiene el antígeno o anticuerpo deseado, tal como una muestra clínica. Después de la unión y lavado para eliminar complejos inmunitarios unidos no específicamente, se puede detectar el antígeno o anticuerpo unido. La detección se logra generalmente mediante la adición de otro anticuerpo específico para el antígeno o anticuerpo deseado que está unido a un marcador detectable. Este tipo de ELISA se conoce como "ELISA tipo sándwich". La detección también puede conseguirse mediante la adición de un segundo anticuerpo específico para el antígeno deseado, seguido de la adición de un tercer anticuerpo que tiene afinidad de unión por el segundo anticuerpo, estando unido el tercer anticuerpo a un marcador detectable. Las variaciones en las técnicas de ELISA son conocidas por los expertos en la técnica.

También son posibles ELISA de competición, en donde las muestras de ensayo compiten por la unión con cantidades conocidas de antígenos o anticuerpos marcados. La cantidad de especies reactivas en la muestra desconocida se determina mezclando la muestra con las especies marcadas conocidas antes o durante la incubación con pocillos recubiertos. La presencia de especies reactivas en la muestra actúa reduciendo la cantidad de especies marcadas disponibles para la unión al pocillo y por tanto, en última instancia, reduce la señal.

Independientemente del formato empleado, los ELISA tienen ciertas características en común, tales como recubrimiento, incubación o unión, lavado para eliminar especies unidas de manera inespecífica, y detección de los complejos inmunitarios unidos.

El antígeno o anticuerpos también pueden unirse a un soporte sólido, tal como en forma de placa, perlas, varilla de inmersión, membrana o matriz de columna, y la muestra que va a analizarse se aplica al antígeno o anticuerpo inmovilizado. Al recubrir una placa con antígeno o anticuerpo, generalmente se incubarán los pocillos de la placa con una solución del antígeno o anticuerpo, durante la noche o durante un periodo específico. Los pocillos de la placa se lavarán entonces para eliminar el material adsorbido de manera incompleta. Cualquier superficie disponible restante de los pocillos se "recubre" después con una proteína no específica que es antigénicamente neutra con respecto a los antisueros de ensayo. Estos incluyen albúmina de suero bovino (BSA), caseína y soluciones de leche en polvo. El recubrimiento permite el bloqueo de sitios de adsorción no específicos sobre la superficie inmovilizante y reduce así el fondo causado por la unión no específica de antisueros sobre la superficie.

En los ELISA, es más habitual usar un medio de detección secundario o terciario en lugar de un procedimiento directo. Por tanto, después de la unión del antígeno o anticuerpo al pocillo, el recubrimiento con un material no reactivo para reducir el fondo, y el lavado para eliminar el material no unido, la superficie inmovilizante se pone en contacto con la muestra clínica o biológica que va a analizarse en condiciones eficaces para permitir la formación de complejo inmunitario (antígeno/anticuerpo). La detección del complejo inmunitario requiere entonces un ligando o anticuerpo de unión secundario marcado, o un ligando o anticuerpo de unión secundario junto con un anticuerpo terciario marcado o tercer ligando de unión.

Adicionalmente, puede usarse citometría de flujo para detectar y cuantificar subtipos celulares particulares según los marcadores de la superficie celular. Los medios comunes de detección y cuantificación mediante citometría de flujo incluyen el uso de perlas marcadas fluorescentes que se unen a marcadores de la superficie celular específicos para cada subtipo de célula inmunitaria, por ejemplo, perlas específicas para CD4, para seleccionar linfocitos T CD4+, etc.

Las composiciones descritas en el presente documento pueden administrarse convencionalmente por vía parenteral, mediante inyección, por ejemplo, por vía intravenosa, subcutánea o intramuscular. Las composiciones de nanopartículas de pMHC pueden suspenderse en solución salina estéril, solución salina tamponada o solución salina tamponada con fosfato. Adicionalmente, en ciertas realizaciones, las formulaciones intravenosas comprenden dextrosa, glucosa, manitol, tampones de pH o bicarbonato sódico. Las formulaciones adicionales que son adecuadas para otros modos de administración incluyen formulaciones orales. Las formulaciones orales incluyen excipientes empleados normalmente tales como, por ejemplo, calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio y similares. Estas composiciones toman la forma de soluciones, suspensiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, formulaciones o polvos de liberación sostenida y contienen de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 95 % del principio activo, preferiblemente de aproximadamente el 25 % a aproximadamente el 70 %. La preparación de una composición acuosa que contiene un complejo antígeno-MHC-nanopartícula que modifica la afección inmunitaria del sujeto será conocida por los expertos en la técnica a la luz de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una composición puede inhalarse (por ejemplo, patente de EE. UU. número 6,651,655). En una realización, el complejo antígeno-heterodímero-nanopartícula (es decir, el complejo antígeno-pMHC-NP) se administra sistémicamente. En realizaciones específicas, el complejo pMHC-NP descrito en el presente documento o las composiciones que comprenden una pluralidad de complejos pMHC-NP descritos en el presente documento se administran por vía intravenosa.

Ejemplos

Ejemplo 1. Expresión de complejos péptido-MHC (pMHC) con una cremallera de leucina.

Para expresar complejos de pMHC en células CHO-S, se clonan fragmentos de ADN que codifican un complejo de pMHC (en diferentes configuraciones, véase laFIG. 2) en el vector de expresión lentivírico pLV/CMV-GW (FIG. 1Ay1B). Las cadenas tanto alfa como beta del complejo de pMHC están codificadas por una única ORF, ya sea en forma de dos cadenas independientes separadas por una secuencia de salto ribosómico P2A (FIG.

2, panel superior) o en forma de dos cadenas independientes clonadas en dos vectores diferentes (FIG. 2, panel inferior). El fragmento que codifica la pMHC se clona cadena arriba de un casete de IRES-EGFP. El producto de la cadena beta expresada consiste en una secuencia líder, la secuencia del epítopo, un enlazador GS, seguido del dominio extracelular de la cadena beta y un fragmento C-Jun (40 aa). La cadena alfa expresada contiene una secuencia líder, el dominio extracelular de la cadena alfa, un fragmento C-fos (40 aa), un sitio de biotinilación BirA (14 aa) y marcadores 6X Histidina y/o Strep con una cisteína C-terminal. Un diseño de vector preferido (FIG. 2, panel inferior) codifica ambas cadenas en plásmidos independientes.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende al menos un heterodímero aislado conjugado con una nanopartícula,

en donde la nanopartícula no es liposomal y/o tiene un núcleo sólido y

(i) el primer polipéptido comprende un dominio a1 de MHC de clase II soluble, un dominio a2 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; y el segundo polipéptido comprende un dominio (31 de MHC de clase II soluble, un dominio p2 de MHC de clase II soluble, o una combinación de los mismos; o

2. La composición de la reivindicación 1, en donde la protuberancia diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 53 o la SEQ ID NO: 54.

3. La composición de la reivindicación 2, en donde la protuberancia diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 98 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 53 o la SEQ ID NO: 54.

4. La composición de la reivindicación 3, en donde la protuberancia diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 53 o la SEQ ID NO: 54.

5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la cavidad diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51 o la SEQ ID NO: 52.

6. La composición de la reivindicación 5, en donde la cavidad diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 98 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51 o la SEQ ID NO: 52.

7. La composición de la reivindicación 6, en donde la cavidad diseñada por ingeniería genética comprende una secuencia de aminoácidos que es la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51 o la SEQ ID NO: 52.

8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el núcleo sólido es un núcleo de oro, hierro u óxido de hierro.

9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el núcleo sólido tiene un diámetro de menos de 100 nanómetros.

10. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el al menos un heterodímero está unido covalentemente a la nanopartícula, opcionalmente a través de un enlazador que comprende polietilenglicol (PEG).

11. La composición de la reivindicación 10, en donde el polietilenglicol está funcionalizado con maleimida.

12. La composición de la reivindicación 10 o la reivindicación 11, en donde el polietilenglicol es menor de 5 kD.

13. Una composición farmacéutica que comprende la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y un excipiente, estabilizante o diluyente farmacéutico.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, para su uso en un método para tratar una enfermedad autoinmunitaria o una afección inflamatoria.