ES3036157T3 - Differential dispensing method - Google Patents

Differential dispensing method

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ES3036157T3
ES3036157T3 ES19780341T ES19780341T ES3036157T3 ES 3036157 T3 ES3036157 T3 ES 3036157T3 ES 19780341 T ES19780341 T ES 19780341T ES 19780341 T ES19780341 T ES 19780341T ES 3036157 T3 ES3036157 T3 ES 3036157T3
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Abstract

La presente invención se refiere a un método de dilución de una muestra de sangre para su análisis y a un aparato para su implementación. En este método, se utiliza un dispositivo de alicuotación que permite realizar una única toma, formar una primera dilución en una cámara, recolectar una porción de la primera dilución para formar una segunda dilución en otra cámara, contar las células sanguíneas en la primera y la segunda cámara, realizar una diferenciación basada en la primera dilución, enjuagar la primera cámara, formar una tercera dilución basada en la cantidad de líquido de la primera dilución restante en el dispositivo de alicuotación y, a continuación, realizar una diferenciación de reticulocitos basada en esta tercera dilución. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Método de dispensación diferencial
La presente invención se refiere a un método para la dilución de una muestra para su análisis y a un aparato de hematología para la implementación de este método. Esta muestra puede ser sangre u otro líquido biológico tal como, por ejemplo, un líquido de punción tal como un líquido cefalorraquídeo (LCR) que contenga glóbulos blancos o glóbulos rojos.
En general, un aparato de hematología permite contar y caracterizar los diferentes tipos de células presentes en la sangre.
El documento JPH04369461A describe un sistema de estudio cuantitativo de muestras para realizar el estudio cuantitativo de muestras de sangre entera y diluirla con una relación de dilución constante.
El documento US4726237A describe un sistema de válvulas de transferencia que tiene una válvula de tres elementos con un elemento central intercalado entre los elementos exteriores delantero y trasero. Entre una posición de aspiración y una de descarga, los elementos exteriores delantero y trasero se mueven en direcciones opuestas de distancias desiguales en la misma dirección con respecto al elemento central o un elemento exterior y el elemento central se mueven en la misma dirección o en la dirección opuesta con respecto al otro elemento exterior siempre que los elementos exteriores acaben desplazados uno con respecto al otro. En la posición de aspiración, dos segmentos de muestra están contenidos en serie dentro de la válvula.
El documento US3567390A describe un sistema de dilución equipado con una válvula de transferencia para proporcionar una pluralidad de diluciones de diferente concentración a partir de una única muestra de fluido.
El documento US3712144A describe un diluidor automático y un lector fotométrico adaptados para su uso en los ensayos microbiológicos turbidimétricos de antibióticos. El diluidor automático comprende una válvula y un par de circuitos de un volumen predeterminado.
El documento CN109959549A describe un método de análisis de muestras en donde la muestra biológica se diluye una vez en el primer tanque de reacción, para formar una muestra diluida; las líneas de muestras se accionan para extraer una muestra diluida mediante un dispositivo de accionamiento; el dispositivo de accionamiento empuja la muestra parcialmente diluida en las líneas de muestras al segundo tanque de reacción; se lleva a cabo una dilución secundaria de la muestra diluida en el segundo tanque de reacción, para formar una muestra de dilución secundaria; y detección de la muestra de dilución secundaria.
El documento JPS4833149B1 describe un método para diluir un líquido que contiene partículas con dos tipos de diluyentes que tienen diferentes relaciones de dilución.
Se conoce el documento US-7.661.326 (Beckman Coulter), que describe un aparato de hematología que comprende una válvula dispensadora para segmentar y dispensar varios volúmenes de sangre en más de dos cámaras. Este aparato requiere la recogida de una gran cantidad de sangre para distribuirla simultáneamente en varias cámaras. En consecuencia, la red fluídica en la entrada y la salida de la válvula de toma de muestras es compleja y esta última presenta riesgos de obstrucción debido a la circulación de la sangre entera en la válvula de dispensación.
También se conoce el documento US-6.333.197 (ABX), que describe una aguja para recoger sangre e inyectarla en diferentes cámaras al mismo tiempo como reactivo para producir una dilución homogénea. El sistema descrito en este documento-US 6.333.197 requiere la recogida de una gran cantidad de sangre entera que, por su diseño, no se usa totalmente. Además, la colocación de la aguja en las diferentes cámaras es compleja debido a la necesidad de alinear la aguja con la llegada del reactivo. Finalmente, las cámaras están diseñadas específicamente para permitir la homogeneización de la sangre con el reactivo.
Un objeto de la presente invención es un método de dispensación novedoso que sea rápido y sencillo de implementar.
Otro objeto de la invención es un método novedoso que use una pequeña cantidad de sangre entera para caracterizar las células sanguíneas, por ejemplo, los glóbulos blancos y los reticulocitos.
Al menos uno de los objetivos anteriormente mencionados se logra con un método según la reivindicación 1.
En el método según la invención, con una única recogida de muestra, se llevan a cabo tres diluciones, lo que permite llevar a cabo un análisis completo de la muestra. Esta única recogida puede ser, por ejemplo, una cantidad de 20 pl de sangre entera o diluida, mientras que en la técnica anterior esta recogida es generalmente del orden de 120 pl o más. Este método tiene la ventaja de ser fácil de implementar porque la retención del líquido de primera dilución en el dispositivo de alicuotado para la segunda y la tercera diluciones se usa de manera inteligente.
Además, el método según la invención permite altas velocidades de análisis.
Se entiende que los líquidos de segunda y tercera diluciones se obtienen independientemente uno del otro, es decir, el líquido de tercera dilución no se obtiene del líquido de segunda dilución sino directamente del líquido de primera dilución retenido en el dispositivo de alicuotado. Las diluciones pueden tener lugar sucesivamente en varias cámaras. Todos o algunos de los análisis pueden realizarse de forma sucesiva o simultánea (en paralelo) dependiendo de la configuración elegida con una cámara o varias cámaras.
Según una realización, el análisis puede comprender la caracterización del líquido de primera y/o segunda y/o tercera diluciones mediante medición óptica para contar y/o diferenciar las partículas contenidas en el líquido.
Según una realización, el análisis puede comprender contar partículas en los líquidos de primera y/o segunda y/o tercera dilución por medio de un sensor resistivo.
La medición óptica puede tener lugar en un banco óptico o en la cámara utilizada para la dilución, estando entonces equipada esta cámara con un dispositivo óptico.
Según la invención, uno o más sensores resistivos pueden conectarse o incorporarse en al menos una cámara o en un banco óptico.
Por “ banco óptico” se entiende un dispositivo que permite:
- contar las partículas por medios ópticos,
- caracterizar las partículas por medios ópticos,
- contar las partículas incorporando uno o más sensores resistivos en su interior, y
- caracterizar las partículas por medios ópticos mejorados por la información que se origina en los medios resistivos. Según una realización de la invención, la etapa e) puede comprender además las siguientes etapas antes de la etapa e7):
e1) inyectar en una cámara, preferiblemente en una segunda cámara, una primera cantidad del líquido de primera dilución contenido en el dispositivo de alicuotado, quedando una segunda cantidad del líquido de primera dilución en el dispositivo de alicuotado,
e2) diluir el líquido de primera dilución contenido en la segunda cámara, mediante un reactivo de dilución para constituir un líquido de segunda dilución,
e3) inyectar una solución de lisis en la primera cámara para destruir los glóbulos rojos,
e4) diferenciar los glóbulos blancos del líquido de primera dilución contenido en la primera cámara mediante medición óptica directamente en la primera cámara o en un banco óptico tras la transferencia de una parte del líquido de primera dilución a este banco óptico,
e5) contar los glóbulos rojos y/o las plaquetas en el líquido de segunda dilución, preferiblemente en la segunda cámara, aunque también se puede hacer en el banco óptico,
e6) contar los glóbulos blancos y/o medir la hemoglobina en el líquido de primera dilución, preferiblemente en la primera cámara, aunque también se puede hacer en el banco óptico y después de la etapa e9)
e10) analizar el líquido de tercera dilución.
Con solo una recogida de muestra, al menos preferiblemente dos cámaras y un banco óptico es posible llevar a cabo un conjunto de mediciones de recuento y/o diferenciación.
Con este método, la velocidad de análisis es muy alta. A modo de ejemplo, es posible llevar a cabo un mínimo de 60 pruebas por hora, comprendiendo una prueba contar los glóbulos rojos, contar los glóbulos blancos y diferenciar los glóbulos blancos.
Según una característica ventajosa de la invención, en la etapa e10), es posible transferir al banco óptico una parte del líquido de tercera dilución para la diferenciación de los glóbulos rojos, en particular los glóbulos rojos inmaduros, los reticulocitos.
Con el método según la invención, una única recogida de muestra permite la diferenciación de los glóbulos blancos y la diferenciación de los glóbulos rojos. En particular, es posible, por ejemplo, realizar dos recuentos y dos diferenciaciones con una única recogida de muestra de 20 pl, dos cámaras y un único banco óptico.
Según una característica ventajosa de la invención, es posible usar un dispositivo de alicuotado que comprenda:
- una aguja capaz de moverse entre una zona de recogida de muestras y dicha al menos una cámara,
- un dispensador de reactivos de dilución, y
- una válvula de toma de muestras que comprenda al menos dos vías de líquido y un canal de volumen calibrado, conectando una primera vía de líquido el dispensador con la aguja, conectando una segunda vía de líquido el dispensador con la segunda cámara, y activando el canal de volumen calibrado la primera vía de líquido o la segunda vía de líquido.
Se puede diseñar una válvula de toma de muestras que comprenda dos discos cerámicos de los que uno contenga el canal de volumen calibrado. Este canal se puede desplazar entre dos posiciones, una primera posición en la que el canal está comprendido dentro de la primera vía de líquido y una segunda posición en la que el canal está comprendido dentro de la segunda vía de líquido.
La invención destaca en particular por la reutilización de la primera dilución presente en la aguja hasta la válvula de toma de muestras.
En los sistemas de la técnica anterior, puede haber un riesgo de obstrucción en la válvula debido a la circulación de la sangre entera en los canales fluídicos de la válvula. En la presente invención, este riesgo es considerablemente limitado porque es la sangre diluida la que circula por los canales de la válvula.
La etapa d) se puede llevar a cabo preferiblemente recogiendo la muestra y reteniéndola dentro de la aguja y en el canal de volumen calibrado de la válvula de toma de muestras. Para inyectar el líquido de primera dilución en una cámara para llevar a cabo la segunda dilución, es posible mover el canal de volumen calibrado que contiene dicha primera cantidad del líquido de primera dilución a la segunda vía de líquido, y luego inyectar en la primera o segunda cámaras a través de la segunda vía de líquido, calibrándose dicha primera cantidad con precisión en el canal de volumen calibrado de la válvula de toma de muestras.
La válvula de toma de muestras forma parte del circuito fluídico para recoger la primera dilución.
Esto permite aumentar la velocidad y evita contaminar la aguja, que lleva a cabo una única recogida de la muestra inicial y que, posteriormente, sirve únicamente para recoger, en una realización, el líquido de primera dilución. De hecho, la aguja permite recoger la primera dilución en la primera cámara, pero la inyección en la segunda cámara se lleva a cabo directamente a través de la segunda vía de líquido. Más precisamente, un tubo permite conectar la válvula de toma de muestras a la segunda cámara. Esta característica permite, por ejemplo, llevar a cabo la segunda dilución mientras se retiene una parte de la primera dilución en la aguja, lo que permite dispensar posteriormente una parte de la misma en la primera cámara para la tercera dilución sin tener que realizar una nueva recogida de la muestra.
Según una realización de la invención, la etapa d) se puede llevar a cabo recogiendo el líquido de primera dilución y reteniéndolo dentro de la aguja y en la válvula de toma de muestras. El líquido de primera dilución se aspira preferiblemente a la válvula de toma de muestras y más allá de esta válvula a un tubo entre la válvula de toma de muestras y el dispensador. Esta realización asegura el llenado completo del canal de volumen calibrado, lo que permite una segunda dilución precisa porque el volumen del canal de volumen calibrado está calibrado con precisión; por lo tanto, se conoce exactamente el volumen inyectado en la segunda cámara.
Según otra realización de la invención, es posible usar un dispositivo de alicuotado que comprenda uno o más conjuntos de émbolos/jeringas de precisión para recoger e inyectar la muestra y las diferentes diluciones desde y dentro de las diferentes cámaras. Los volúmenes inyectados para llevar a cabo la primera dilución y la tercera dilución se determinan controlando con precisión el o los émbolos/la o las jeringas.
Las etapas de la primera y la segunda diluciones se pueden llevar a cabo preferiblemente inyectando un reactivo de dilución a través del dispositivo de alicuotado. Cuando el dispositivo de alicuotado comprende una aguja y la válvula de toma de muestras, las dos vías de líquido comprenden tubos en los que el reactivo de dilución, procedente del dispensador de reactivos de dilución, sirve como líquido para dispensar la muestra y/o el reactivo de dilución.
Según una característica de la invención, todas o algunas de las etapas de dilución se pueden llevar a cabo inyectando el reactivo de dilución desde una vía de líquido independiente del dispositivo de alicuotado y directamente en la cámara o cámaras.
Ventajosamente, se puede usar un único banco óptico unido a la primera cámara.
Según una característica ventajosa de la invención, todos o algunos de los recuentos se llevan a cabo por medio de sensores resistivos conectados a la primera y/o segunda cámaras y/o a otras cámaras si hay más de dos cámaras. A modo de ejemplo, la primera dilución puede tener una relación de 1/200, la segunda dilución puede tener una relación de 1/10.000 y la tercera dilución puede tener una relación de 1/10.000.
Según una realización de la invención, la inyección de la solución de lisis en la etapa e3) se puede llevar a cabo a través de una vía de líquido independiente del dispositivo de alicuotado y directamente en la primera cámara.
Esta solución de lisis tiene la función de destruir los glóbulos rojos y separar los glóbulos blancos. Esto también permite la estabilización de la hemoglobina en forma de un complejo estable.
Según una característica ventajosa de la invención, el método puede comprender una etapa de añadir un colorante fluorescente a la primera cámara antes de cada medición de diferenciación óptica. Se puede usar preferiblemente un banco óptico que permita detectar la fluorescencia. De este modo, es posible detectar los reticulocitos, glóbulos rojos inmaduros, gracias a la presencia del colorante fluorescente.
De hecho, es posible añadir un colorante fluorescente al líquido de primera y/o segunda y/o tercera diluciones antes de cualquier medición óptica, para mejorar la diferenciación de las células sanguíneas, por ejemplo, los glóbulos blancos y/o la caracterización de los reticulocitos usando fluorescencia.
Ventajosamente, es posible utilizar una vía de líquido independiente del dispositivo de alicuotado, estando conectada esta vía de líquido directamente a las cámaras para la etapa de enjuague.
También es posible utilizar una vía de líquido independiente del dispositivo de alicuotado, estando conectada esta vía de líquido directamente a las cámaras para la etapa de dilución (e9). Esta puede ser la misma vía de líquido que para el enjuague o una vía de líquido diferente.
Según la invención, las etapas e5) y e6) se pueden llevar a cabo en paralelo o secuencialmente.
Los recuentos en paralelo se llevan a cabo mediante un único sistema de aspiración, permitiendo la aspiración desde ambas cámaras a diferentes canales al mismo tiempo. Es perfectamente posible prever recuentos separados (no simultáneos) con uno o varios sistemas de aspiración distintos.
Según otro aspecto de la invención, se propone un aparato de hematología para el recuento y la diferenciación automáticos de células en una muestra de sangre, caracterizado por que comprende:
- al menos una cámara,
- al menos un banco óptico conectado a, al menos, una cámara,
- un dispositivo de alicuotado que comprende:
- una aguja capaz de moverse entre una zona de recogida de muestras y al menos una cámara,
- un dispensador de reactivos de dilución, y
- una válvula de toma de muestras que comprenda al menos dos vías de líquido y un canal de volumen calibrado, conectando una primera vía de líquido el dispensador con la aguja, conectando una segunda vía de líquido el dispensador con, al menos, una cámara, y activando el canal de volumen calibrado la primera vía de líquido o la segunda vía de líquido.
También se proporciona una unidad de tratamiento para implementar las diferentes etapas y controlar los diferentes componentes.
La válvula de toma de muestras según la invención puede contener un canal de volumen calibrado, siendo capaz este canal de volumen calibrado de constituir una parte de la primera vía de líquido o una parte de la segunda. En otras palabras, el canal de volumen calibrado cambia de una vía de líquido a la otra. Cuando está en la primera vía de líquido, el dispensador puede controlar la aspiración o la expulsión de una parte del líquido contenido en la primera vía de líquido, estando inoperativa la segunda vía de líquido. Cuando está en la segunda vía de líquido, el dispensador puede controlar la expulsión de una parte del líquido contenido en la segunda vía de líquido, estando entonces inoperativa la primera vía de líquido.
Se deducirán otras ventajas y características de la invención al examinar la descripción detallada de una realización, que no es en modo alguno limitativa, y los dibujos adjuntos, en los que:
la Figura 1 es una vista esquemática que ilustra unos pocos componentes que constituyen un analizador hematológico automático que está listo para su uso,
la Figura 2 es una vista esquemática que ilustra una etapa preliminar de recogida de sangre entera,
la Figura 3 es una vista esquemática que ilustra una etapa 1 de constitución de una primera dilución,
la Figura 4 es una vista esquemática que ilustra una etapa 2 de recogida de una parte de la primera dilución, la Figura 5 es una vista esquemática que ilustra una etapa 3 de constitución de una segunda dilución,
la Figura 6 es una vista esquemática que ilustra una etapa 4 de transferencia a un banco óptico para la diferenciación de glóbulos blancos,
la Figura 7 es una vista esquemática que ilustra una etapa 5 de vaciado y enjuague de las cámaras,
la Figura 8 es una vista esquemática que ilustra una etapa 7 de constitución de una tercera dilución,
la Figura 9 es una vista esquemática que ilustra una etapa 8 de transferencia al banco óptico para la diferenciación de los glóbulos rojos,
la Figura 10 es una vista esquemática que ilustra una etapa 9 de vaciado y enjuague final.
Las realizaciones que se describirán a continuación no son en modo alguno limitativas; en particular, se pueden implementar variantes de la invención que comprendan solo una selección de las características descritas a continuación, de forma aislada de las otras características descritas, si esta selección de características es suficiente para conferir una ventaja técnica o para diferenciar la invención con respecto al estado de la técnica anterior. Esta selección comprende al menos una característica, preferiblemente funcional, sin detalles estructurales, o con solo una parte de los detalles estructurales si esta parte por sí sola es suficiente para conferir una ventaja técnica o para diferenciar la invención con respecto al estado de la técnica anterior.
En particular, todas las variantes y todas las realizaciones descritas se proporcionan para combinarse entre sí en cualquier combinación en la que no haya ninguna objeción a ello desde un punto de vista técnico.
En las figuras, los elementos comunes a varias figuras conservan el mismo número de referencia.
La Figura 1 ilustra los componentes que constituyen un analizador hematológico automático que está listo para su uso, en espera de un ciclo de análisis.
Se puede observar un banco óptico 1 para caracterizar diferentes tipos de células presentes en la sangre. Una primera cámara 2 está conectada al banco óptico 1 a través de una válvula solenoide 3 capaz de bloquear o permitir el paso del fluido contenido en la primera cámara 2 al banco óptico 1. La primera cámara 2 comprende una salida 21 que se conecta al solenoide 3 y medios electrónicos, en particular al menos un sensor 22, para mediciones de resistividad. Estas mediciones se implementan, por ejemplo, durante los recuentos de células.
Para una mayor claridad del diagrama, solo se muestra el banco óptico 1; está claro que se proporciona una celda de flujo (no mostrada) dentro de este banco óptico, en la que puede fluir el fluido que se va a caracterizar.
También se puede ver un dispensador 4 de reactivos de dilución conectado a una válvula 5 de toma de muestras a través de dos conductos C1 y C2 paralelos. La válvula 5 de toma de muestras está conectada por un lado a una aguja 6 a través de un conducto C3 y por el otro lado a una segunda cámara 7 a través de un conducto C4.
La válvula 5 de toma de muestras es una válvula que comprende dos vías de líquido y un canal 8 de volumen calibrado. La primera vía de líquido permite conectar los conductos C1 y C3 a través del canal 8 de volumen calibrado. La segunda vía de líquido permite conectar los conductos C2 y C4 a través del canal 8 de volumen calibrado. Por lo tanto, este canal de volumen calibrado puede formar parte de la primera vía de líquido o de la segunda vía de líquido, pero no de ambas al mismo tiempo. Ventajosamente, este canal 8 de volumen calibrado es un conducto adecuado para cambiar de una vía de líquido a la otra y forma un depósito de fluido, cuyo volumen está predeterminado de manera muy precisa. De este modo, se puede enviar una cantidad predeterminada de líquido desde una vía de líquido a la otra.
El conducto C4 está conectado a la segunda cámara 7 a través de una entrada 71.
Esta segunda cámara 7 también comprende medios electrónicos, en particular al menos un sensor 72, para mediciones de resistividad. Estas mediciones se implementan, por ejemplo, durante los recuentos de células. También se puede proporcionar una vía de líquido 74 independiente para inyectar el reactivo de dilución.
También se puede ver una unidad de tratamiento 9 capaz de controlar los diferentes componentes.
En la Figura 1, la aguja 6, la primera y segunda vías de líquido, el canal 8 de volumen calibrado y las cámaras se llenan con un reactivo de dilución limpio. La máquina está lista para usarse.
En la etapa preliminar de la Figura 2, se recoge sangre en la aguja 6 de un tubo de sangre entera 10. A continuación, un cierto volumen de sangre se sitúa solo en una parte de la aguja. La primera vía de líquido que comprende los conductos C1 y C3 se llena principalmente con reactivo de dilución, excepto la parte de la aguja 6 que contiene sangre. La aguja recoge la sangre mediante una función de aspiración a través del dispensador de reactivos de dilución.
Al mismo tiempo, se vacía la primera cámara 2.
En la etapa 1, en la Figura 3, la aguja 6 se mueve hasta el interior de la primera cámara 2 para inyectar en ella toda la sangre recogida. Y la inyección continúa hasta llenar con el reactivo de dilución contenido en la primera vía de líquido y administrado a través del dispensador. La mezcla de sangre así depositada con un volumen de reactivo de dilución mucho mayor que el volumen de sangre recogida constituye el líquido de primera dilución con una relación, por ejemplo, de un volumen de sangre por doscientos volúmenes de reactivo de dilución.
En la etapa 2, en la Figura 4, una parte de la primera dilución se recoge de la primera cámara 2 hasta una parte del conducto C1. En consecuencia, la aguja 6, el conducto C3 y la válvula de toma de muestras, en particular el canal 8 de volumen calibrado, se llenan completamente con el líquido de primera dilución.
En la etapa 3, en la Figura 5, el canal 8 de volumen calibrado lleno de líquido de primera dilución se cambia de la primera vía de líquido a la segunda vía de líquido; esta última ya está en funcionamiento. El hecho de haber aspirado en la etapa 2 el líquido de primera dilución hasta una parte del conducto C1 permitió llenar completamente el canal 8 de volumen calibrado.
A continuación, el líquido contenido en la segunda vía de líquido se empuja para inyectar la cantidad contenida en el canal 8 de volumen calibrado, así como una gran parte del reactivo de dilución, en la segunda cámara 7 a través de la entrada 71 y el conducto C4. De este modo, se forma un líquido de segunda dilución con una relación, por ejemplo, de un volumen de sangre limpia por diez mil volúmenes de reactivo de dilución.
En la primera cámara, una vez que se ha recogido la parte deseada del líquido de primera dilución, la aguja 6 se eleva de nuevo para que no permanezca en contacto con el líquido de la primera cámara 2 y la solución de lisis se inyecta en esta primera cámara 2 a través de una entrada 23. La solución de lisis tiene la función de destruir los glóbulos rojos.
En esta etapa, se observa que el líquido de primera dilución permanece presente en la aguja 6 y en una parte de la primera vía de líquido que comprende el conducto C1 y el conducto C3.
En la etapa 4 de la Figura 6, la solución se transfiere desde la primera cámara 2 al banco óptico para la diferenciación de las poblaciones de glóbulos blancos. En paralelo, o por separado, los glóbulos blancos se cuentan en la primera cámara 2 midiendo la resistividad y se lleva a cabo una medición de la hemoglobina por medio de un espectrofotómetro (no mostrado).
En la segunda cámara 7, los glóbulos rojos y las plaquetas se cuentan midiendo la resistividad. El recuento en la segunda cámara 7 se puede llevar a cabo simultáneamente con el recuento en la primera cámara. Este caso se da particularmente cuando se usa un único sistema de aspiración (no mostrado) para ambas cámaras durante el proceso de recuento. De hecho, la secuencia de recuento requiere aspirar, mediante la generación de un vacío, el líquido contenido en la cámara a través de un orificio calibrado basándose en el principio de medición de la impedancia.
En la etapa 5 de la Figura 7, las dos cámaras se enjuagan y se vacían por completo, al igual que el circuito de fluido entre la primera cámara 2 y el banco óptico 1. Es posible utilizar el reactivo de dilución para enjuagar la cámara, con el fin de enviarlo, en el circuito de fluido, al banco óptico y así enjuagar y rellenar este circuito. El canal 8 de volumen calibrado, lleno de reactivo de dilución, se cambia entonces a la primera vía de líquido.
En la etapa 7 de la Figura 8, se lleva a cabo una tercera dilución según la invención. Para ello, se inyecta en la primera cámara 2 una cantidad de líquido de primera dilución todavía presente en la aguja 6. Se empuja un volumen específico. Al final de esta etapa, todavía puede estar presente un volumen residual de primera dilución en la aguja 6. La dilución se lleva a cabo inyectando el reactivo de dilución a través de una entrada 24 de la primera cámara 2. No se muestra el circuito de suministro de esta entrada 24 desde el dispensador 4. También se puede añadir un colorante fluorescente.
En la etapa 8 de la Figura 9, la solución se transfiere desde la primera cámara 2 al banco óptico 1; luego se lleva a cabo la diferenciación de los glóbulos rojos y los reticulocitos.
En la etapa 9 de la Figura 10, cuando se completa la diferenciación, la aguja 6 se vacía de sangre residual. Las cámaras se enjuagan y luego se rellenan con reactivo de dilución, en espera de un análisis posterior.
Por lo tanto, la invención permite realizar varias mediciones de diferenciación basadas en una única recogida, utilizando de manera inteligente un dispositivo de alicuotado que permite segmentar un líquido de primera dilución y el reactivo de dilución.
Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método para la dilución de una muestra de sangre para su análisis y a un aparato para la implementación de este método.
En el método, se utiliza un dispositivo de alicuotado que permite realizar una única recogida, formar una primera dilución en una cámara, recoger una parte de la primera dilución para formar una segunda dilución en otra cámara, contar las células sanguíneas de la primera y la segunda cámaras, llevar a cabo una diferenciación basada en la primera dilución, enjuagar la primera cámara, formar una tercera dilución a partir de una cantidad de líquido de primera dilución que queda en el dispositivo de alicuotado, para luego llevar a cabo una diferenciación de los reticulocitos basándose en esta tercera dilución.
Por supuesto, la invención no se limita a los ejemplos que se acaban de describir, y se pueden realizar numerosos ajustes a estos ejemplos sin exceder el alcance de la invención, tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    Método para la dilución de una muestra de sangre para su análisis, comprendiendo este método las siguientes etapas:
    a) una única recogida de dicha muestra mediante un dispositivo de alicuotado,
    b) inyectar dicha muestra en una primera cámara (2),
    c) diluir dicha muestra en esta cámara (2) mediante un reactivo de dilución para constituir un líquido de primera dilución,
    d) recoger una parte del líquido de primera dilución mediante el dispositivo de alicuotado, e) realizar al menos otras dos diluciones para obtener un líquido de segunda dilución y un líquido de tercera dilución, obteniéndose cada uno de los líquidos de segunda y tercera diluciones directamente del líquido de primera dilución contenido en el dispositivo de alicuotado, y
    f) durante las etapas a) a e) al menos un análisis del líquido de primera dilución y/o del líquido de segunda dilución y/o del líquido de tercera dilución,
    en donde el dispositivo de alicuotado comprende:
    - una aguja (6) capaz de moverse entre una zona de recogida de muestras y dicha al menos una cámara (2),
    - un dispensador de reactivos de dilución (4), y
    caracterizado por queel dispositivo de alicuotado comprende, además:
    - una válvula (5) de toma de muestras que comprende al menos dos vías de líquido y un canal (8) de volumen calibrado, conectando una primera vía de líquido (C2, 8, C3) el dispensador (4) con la aguja (6), conectando una segunda vía de líquido (C1, 8, C4) el dispensador (4) a una segunda cámara (7), y activando el canal (8) de volumen calibrado la primera vía de líquido (C2, 8, C3) o la segunda vía de líquido (C1, 8, C4), y en donde la etapa d) se lleva a cabo recogiendo el líquido de primera dilución y reteniéndolo dentro de la aguja (6) y en el canal (8) de volumen calibrado de la válvula (5) de toma de muestras, - ypor que, en la etapa e) para inyectar una primera cantidad del líquido de primera dilución en la segunda cámara (7) para llevar a cabo la segunda dilución, el canal (8) de volumen calibrado que contiene dicha primera cantidad del líquido de primera dilución se cambia de la primera vía de líquido (C2, 8, C3) a la segunda vía de líquido (C1, 8, C4), y luego se inyecta en la segunda cámara (7) a través de la segunda vía de líquido (C1, 8, C4), calibrándose con precisión dicha primera cantidad en el canal (8) de volumen calibrado de la válvula (5) de toma de muestras; en donde una segunda cantidad del líquido de primera dilución permanece en el dispositivo de alicuotado,
    ypor quela etapa e) comprende además las siguientes etapas:
    e7) enjuagar la primera cámara (2),
    e8) inyectar en la primera cámara (2) una parte de la segunda cantidad del líquido de primera dilución que aún está contenida en el dispositivo de alicuotado, e9) diluir el líquido contenido en la primera cámara (2) mediante un reactivo de dilución para constituir un líquido de tercera dilución, obteniéndose el líquido de tercera dilución directamente del líquido de primera dilución contenido en la aguja (6).
    Método según la reivindicación 1,caracterizado por queel análisis comprende la caracterización del líquido de primera y/o segunda y/o tercera diluciones mediante medición óptica para contar y/o diferenciar las partículas contenidas en el líquido.
    Método según la reivindicación 1 o 2,caracterizado por queel análisis comprende el recuento de partículas de los líquidos de primera y/o segunda y/o tercera dilución, mediante un sensor resistivo.
    Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por queel análisis comprende la caracterización del líquido de tercera dilución mediante medición óptica para contar y/o diferenciar las partículas contenidas en el líquido.
    Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por quela etapa e) comprende además las siguientes etapas:
    e2) diluir el líquido de primera dilución contenido en la segunda cámara, mediante un reactivo de dilución para constituir un líquido de segunda dilución,
    e3) inyectar una solución de lisis en la primera cámara para destruir los glóbulos rojos, e4) diferenciar los glóbulos blancos del líquido de primera dilución contenido en la primera cámara mediante medición óptica directamente en la primera cámara o en un banco óptico tras la transferencia de una parte del líquido de primera dilución a este banco óptico,
    e5) contar los glóbulos rojos y/o las plaquetas en el líquido de segunda dilución, e6) contar los glóbulos blancos y/o medir la hemoglobina en el líquido de primera dilución, y después de las etapas e7) a e9) tal como se define en la reivindicación 1,
    e10) analizar el líquido de tercera dilución.
    6. Método según la reivindicación 5,caracterizado por queen la etapa e10) una parte del líquido de la tercera dilución se transfiere al banco óptico para la diferenciación de los reticulocitos.
    7. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por quelas etapas de la primera y la segunda diluciones se llevan a cabo inyectando el reactivo de dilución a través del dispositivo de alicuotado.
    8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6,caracterizado por quetodas o algunas de las etapas de dilución se llevan a cabo inyectando el reactivo de dilución desde una vía de líquido (24, 74) independiente del dispositivo de alicuotado y directamente en la cámara o cámaras.
    9. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por quese utiliza un único banco óptico conectado a la primera cámara.
    10. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por quela primera dilución tiene una relación de 1/200, la segunda dilución tiene una relación de 1/10.000 y la tercera dilución tiene una relación de 1/10.000.
    11. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores,caracterizado por quese lleva a cabo un análisis utilizando un banco óptico de epifluorescencia.
    12. Aparato de hematología para el recuento y la diferenciación automáticos de células en una muestra de sangre, que comprende:
    - al menos una cámara (1),
    - al menos un banco óptico (1) conectado a, al menos, una cámara,
    - un dispositivo de alicuotado que comprende:
    - una aguja (6) capaz de moverse entre una zona de recogida de muestras y al menos una cámara (2, 7),
    - un dispensador de reactivos de dilución,
    caracterizado por queel aparato comprende, además:
    - una válvula de toma de muestras que comprende al menos dos vías de líquido y un canal (8) de volumen calibrado, conectando una primera vía de líquido (C1,8, C3) el dispensador de reactivos de dilución con la aguja, conectando una segunda vía de líquido (C2, 8, C4) el dispensador de reactivos de dilución a, al menos, una cámara, y activando el canal (8) de volumen calibrado la primera vía de líquido o la segunda vía de líquido;
    y una unidad de tratamiento (9) configurada para controlar diferentes componentes del aparato y configurada además para implementar las diferentes etapas del método tal como se define en la reivindicación 1.
    13. Aparato según la reivindicación 12,caracterizado por queel canal (8) de volumen calibrado contiene un conducto de volumen calibrado ypor queeste canal de volumen calibrado es capaz de constituir una parte de la primera vía de líquido o una parte de la segunda vía de líquido.
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