ES3036500T3 - Pyrazine derivative as chk1 inhibitor - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a compuestos que inhiben o modulan la actividad de la quinasa Chk-1. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y sus usos terapéuticos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivado de pirazina como inhibidor de Chk1

Esta invención se refiere a un compuesto que inhibe o modula la actividad de la quinasa Chk-1. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto y los usos terapéuticos del compuesto.

Antecedentes de la invención

La Chk-1 es una serina/treonina quinasa implicada en la inducción de los puntos de control del ciclo celular en respuesta a daños en el ADN y al estrés replicativo [Clin. Can. Res. 2007; 13(7)]. Los puntos de control del ciclo celular son vías reguladoras que controlan el orden y la regulación temporal de las transiciones del ciclo celular. La mayoría de las células cancerosas tienen deteriorada la activación del punto de control G1 debido a una proteína supresora de tumores p53 defectuosa. Hahn et al., "Rules for making human tumor cells" N. Engl. J. Med. 2002; 347: 1593-603 y Hollstein et al., "p53 mutations in human cancers" Science 1991; 253: 49-53) han informado de que los tumores están asociados a mutaciones en el gen p53, un gen supresor de tumores que se encuentra en aproximadamente el 50% de todos los cánceres humanos.

La inhibición de Chk-1 suprime los puntos de control intra S y G2/M y se ha demostrado que sensibiliza selectivamente a las células tumorales a agentes dañinos para el ADN bien conocidos. Entre los ejemplos de agentes dañinos para el ADN en los que se ha demostrado este efecto sensibilizador se incluyen la gemcitabina, el pemetrexed, la citarabina, el irinotecán, la camptotecina, el cisplatino, el carboplatino [Clin. Cancer Res. 2010, 16, 376], la temozolomida [Journal of Neurosurgery 2004, 100., 376], 1060], la doxorrubicina [Bioorg. Med. Chem. Lett.

2006;16:421-6], el paclitaxel [WO2010149394], la hidroxiurea [Nat. Cell. Biol. Febrero de 2005;7(2): 195-20], el fármaco TH-302 dirigido a la hipoxia de nitroimidazol (Meng et al., AACR, 2013 Resumen N° 2389) y radiación ionizante [Clin. Cancer Res. 2010, 16, 2076]. Véase también el artículo de revisión por McNeely, S., et al., "CHEK again: Revisiting the development of CHK1 inhibitors for cancer therapy", Pharmacology & Therapeutics (2014), http://dx.doi.org/10.1016/ j.pharmthera.2013.10.005.

Datos publicados recientemente también han demostrado que los inhibidores de Chk-1 pueden actuar sinérgicamente con inhibidores de PARP [Cancer Res.; 66: (16)], inhibidores de Mek [Blood. 15 de septiembre de 2008; 112(6): 2439-2449], inhibidores de farnesiltransferasa [Blood. 15 de febrero de 2005;105(4):1706-16], Rapamicina [Mol. Cancer Ther. marzo de 2005;4(3):457-70], inhibidores de Src [Blood. 10 de febrero de 2011;117(6):1947-57] e inhibidores de WEE1 (Chaudhuri et al., Haematologica, 2013.093187).

La resistencia a la quimioterapia y la radioterapia, un problema clínico para la terapia convencional, se ha asociado con la activación de la respuesta a daños en el ADN en los que ha estado implicada la Chk-1 (la activación de Chk-1 se asocia con la radioresistencia en el glioblastoma [Nature; 2006; 444(7):756-760] y la inhibición de Chk-1 sensibiliza las metástasis cerebrales del cáncer de pulmón a la radioterapia [Biochem. Biophys. Res. Commun. 4 de marzo de 2011;406(1):53-8]).

También se prevé que los inhibidores de Chk-1, ya sea como agentes únicos o en combinación, puedan ser útiles en el tratamiento de células tumorales en las que la activación constitutiva de las vías del daño del ADN y los puntos control impulsan la inestabilidad genómica. Este fenotipo se asocia a cariotipos complejos en muestras de pacientes con leucemia mieloide aguda (LMA) [Cancer Research 2009, 89, 8652]. La antagonización in vitro de la quinasa Chk-1 con un inhibidor de molécula pequeña o mediante ARN de interferencia reduce fuertemente las propiedades clonogénicas de las muestras de LMA con alto nivel de daño en el ADN. Por el contrario, la inhibición de Chk-1 no tiene ningún efecto sobre los progenitores hematopoyéticos normales. Además, estudios recientes han demostrado que el microambiente tumoral impulsa la inestabilidad genética [Nature; 2008;(8): 180-192] y la pérdida de Chk-1 sensibiliza a las células a la hipoxia/reoxigenación [Cell Cycle; 2010; 9(13):2502]. En el neuroblastoma, un cribado de interferencia de ARN del kinoma demostró que la pérdida de Chk-1 inhibía el crecimiento de ocho líneas celulares de neuroblastoma. Las células tumorales deficientes en la reparación del ADN de la anemia de Fanconi han mostrado sensibilidad a la inhibición de Chk-1 [Molecular Cancer 2009, 8:24]. Se ha demostrado que el inhibidor específico de Chk-1 PF-00477736 inhibe el crecimiento de treinta líneas celulares de cáncer de ovario [Bukczynska et al, 23a Lorne Cancer Conference] y de células de cáncer de mama triple negativo [Cancer Science 2011, 102, 882]. Además, el PF-00477736 ha mostrado actividad selectiva como agente único en un modelo de cáncer espontáneo murino impulsado por el oncogén MYC [Ferrao et al, Oncogene (15 de agosto de 2011)]. La inhibición de Chk-1, ya sea mediante ARN de interferencia o mediante inhibidores selectivos de molécula pequeña, da como resultado la apoptosis de las células que sobreexpresan MYC tanto in vitro como en un modelo de ratón in vivo de linfoma de células B [Hoglund et al., Clinical Cancer Research, primero Online 20 de septiembre de 2011]. Estos últimos datos sugieren que los inhibidores de Chk-1 tendrían utilidad para el tratamiento de enfermedades malignas impulsadas por MYC, como el linfoma/leucemia de células B, el neuroblastoma y algunos cánceres de mama y pulmón. También se ha informado de que las líneas celulares de sarcoma de Ewing son sensibles a los inhibidores de la quinasa Chk (McCalla et al., Kinase Targets in Ewing's Sarcoma Cell Lines using RNAi-based & lnvestigational Agents Screening Approaches, Molecular Targets 2013, Boston, EE.UU.).

También se ha informado de que las mutaciones que reducen la actividad de las vías de reparación del ADN pueden dar como resultado interacciones sintéticamente letales con la inhibición de Chk1. Por ejemplo, las mutaciones que alteran el complejo RAD50 y la señalización ATM aumentan la capacidad de respuesta a la inhibición de Chk1 [Al-Ahmadie et al., Synthetic lethality in ATM-deficient RAD50-mutant tumors underlie outlier response to cancer therapy]. De igual manera, las deficiencias en la vía de reparación del ADN homóloga a la anemia de Fanconi llevan a la sensibilidad a la inhibición de Chk1 [Chen et al., Chk1 inhibition asd a strategy fortargeting fanconi anemia (FA) DNA repair pathway deficient tumors. Mol. Cancer 20098:24, Duan et al., Fanconi anemia repair pathway dysfunction, a potential therapeutic target in lung cancer. Frontiers in Oncology 20144:1]. Además, las células humanas que tienen pérdida de función en el producto génico Rad17 son sensibles a la supresión de Chk1 [Shen et al., Synthetic lethal interaction between tumor suppressor RAD17 and Chk1 kinase in human cancer cells. 2014 SACNAS National Conference Abstract]. Min Teng et al. "Structure-Based Design of (5-Arylamino-2H-pyrazol-3-yl) biphenyl-2',4'-diols as Novel and Potent Chk1 Inhibitors", J. Med. Chem. (2007), 50(22), pp.5253-5256 describe una serie de inhibidores de Chk1 que contienen un núcleo de bifenil-pirazol. Foloppe et al. "Structure-Based Design of Novel Chk1 Inhibitors: Insight into Hydrogen Bonding and Protein-Ligand Affinity", J. Med. Chem., (2005), 48(13), págs. 4332-4345 describe la síntesis y el modo de unión cristalográfica de inhibidores de furanopirimidina y pirrolopirimidina de Chk1.

Se han realizado varios intentos de desarrollar inhibidores de la quinasa Chk-1. Por ejemplo, los documentos WO 03/10444 y WO 2005/072733 (ambos a nombre de Millennium) divulgan compuestos de aril/heteroaril urea como inhibidores de la quinasa Chk-1. El documento US2005/215556 (Abbott) divulga ureas macrocíclicas como inhibidores de quinasas. Los documentos WO 02/070494, WO2006014359 y WO2006021002 (todos a nombre de lcos) divulgan aril y heteroaril ureas como inhibidores de Chk-1. Nuestras solicitudes anteriores WO2011/141716 y WO2013/072502 divulgan ambas pirazinil-fenil ureas sustituidas como inhibidores de la quinasa Chk-1. Los documentos WO2005/009435 (Pfizer) y WO2010/077758 (Eli Lilly) divulgan aminopirazoles como inhibidores de la quinasa Chk-1.

La invención

La presente invención proporciona un compuesto que tiene actividad como inhibidor de la quinasa Chk-1.

Por consiguiente, en una primera realización (Realización 1.0), la invención proporciona el compuesto, 5-[[5-[4-(4-fluoro-1-metil-4-piperidil)-2-metoxifenil]-1H-pirazol-3-il]amino]pirazina-2-carbonitrilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El compuesto de la Realización 1.0 tiene la fórmula (1), como se muestra a continuación:

Las realizaciones particulares de la invención se exponen a continuación en las Realizaciones 1.1 a 1.3.

1.1 Un compuesto de acuerdo con la Realización 1.1 que está en forma de una sal.

1.2 Un compuesto de acuerdo con la Realización 1.1 en donde la sal es una sal de adición del ácido.

1.3 Un compuesto de acuerdo con la Realización 1.1 o la Realización 1.2 en donde la sal es una sal farmacéuticamente aceptable.

Sales

El compuesto de la invención puede presentarse en forma de sal.

Las sales (como se definen en las Realizaciones 1.1 a 1.3) son típicamente sales de adición de ácidos.

Las sales pueden sintetizarse a partir del compuesto original mediante métodos químicos convencionales, como los métodos descritos en Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, tapa dura, 388 páginas, agosto de 2002. Generalmente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar la forma de base libre del compuesto con el ácido en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de ambos; por lo general, se usan medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo.

Las sales de adición de ácidos (como se definen en la Realización 1.2) pueden formarse con una amplia variedad de ácidos, tanto inorgánicos como orgánicos. Los ejemplos de sales de adición de ácidos incluyen sales formadas con un ácido seleccionado del grupo que consiste en ácido acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (por ejemplo L-ascórbico), L-aspártico, bencenosulfónico, benzoico, 4-acetamidobenzoico, butanoico, (+) canforico, alcanfor-sulfónico, (+)-(1S)-alcanfor-10-sulfónico, cáprico, caproico, caprílico, cinámico, cítrico, ciclámico, dodecilsulfúrico, etano-1,2-disulfónico, etanosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, glucoheptónico, D-glucónico, glucurónico (por ejemplo, D-glucurónico), glutámico (por ejemplo, Lglutámico), a-oxoglutárico, glicólico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, hidriódico, isetiónico, (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico, lactobiónico, maleico, málico, (-)-L-málico, malónico, (±)-DL-mandélico, metanosulfónico, naftaleno-2-sulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, 1-hidroxi-2-naftoico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamóico, fosfórico, propiónico, L-piroglutámico, salicílico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, succínico, sulfúrico, tánico, (+)-L-tartárico, tiocianico, p-toluenosulfónico, undecilénico y valérico, así como aminoácidos acilados y resinas de intercambio catiónico.

Las formas de sal del compuesto de la invención son típicamente sales farmacéuticamente aceptables, y ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se analizan en Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, págs. 1-19. Sin embargo, las sales que no son farmacéuticamente aceptables también pueden prepararse como formas intermedias que pueden convertirse después en sales farmacéuticamente aceptables. Tales formas de sales no farmacéuticamente aceptables, que pueden ser útiles, por ejemplo, en la purificación o separación del compuesto de la invención, también forman parte de la invención.

Isómeros geométricos y tautómeros

El compuesto de la invención puede existir en una serie de formas isoméricas geométricas y tautoméricas diferentes y las referencias al compuesto de fórmula (1) incluyen todas esas formas. Para evitar dudas, cuando un compuesto pueda existir en una de las varias formas isoméricas geométricas o tautoméricas y sólo se describa o muestre específicamente una, aun así todas las demás estarán abarcadas por la fórmula (1) o en subgrupos, subconjuntos, preferencias y ejemplos de la misma.

Por ejemplo, el compuesto puede existir en cualquiera o ambas de las formas tautoméricas A y B siguientes.

tautoméricas.

Isómeros ópticos

Cuando los compuestos contienen uno o más centros quirales, y pueden existir en forma de dos o más isómeros ópticos, las referencias a los compuestos incluyen todas las formas isoméricas ópticas de los mismos (por ejemplo, enantiómeros, epímeros y diastereoisómeros), ya sea como isómeros ópticos individuales, o mezclas (por ejemplo, mezclas racémicas) o dos o más isómeros ópticos, a menos que el contexto requiera lo contrario.

Los isómeros ópticos pueden caracterizarse e identificarse por su actividad óptica (es decir, como isómeros y -, o isómerosdyl) opueden caracterizarse en términos de su estereoquímica absoluta usando la nomenclatura "R y S" desarrollada por Cahn, Ingold y Prelog, véase Advanced Organic Chemistry por Jerry March, 4a Edición, John Wiley & Sons, Nueva York, 1992, páginas 109-114, y véase también Cahn, Ingold & Prelog, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1966, 5, 385-415.

Los isómeros ópticos pueden separarse mediante una variedad de técnicas, incluyendo la cromatografía quiral (cromatografía sobre un soporte quiral), y tales técnicas son bien conocidas por los expertos en la materia.

Como alternativa a la cromatografía quiral, los isómeros ópticos pueden separarse formando sales diastereoisoméricas con ácidos quirales como el ácido (+)-tartárico, el ácido (-)-piroglutámico, el ácido (-)-di-toluoil-L-tartárico, el ácido (+)-mandélico, el ácido (-)-málico y el (-)-canforsulfónico, separando los diastereoisómeros por cristalización preferencial y disociando después las sales para dar el enantiómero individual de la base libre.

Cuando los compuestos de la invención existen como dos o más formas isoméricas ópticas, un enantiómero de un par de enantiómeros puede presentar ventajas sobre el otro enantiómero, por ejemplo, en términos de actividad biológica. Así, en ciertas circunstancias, puede ser deseable usar como agente terapéutico sólo uno de un par de enantiómeros, o sólo uno de una pluralidad de diastereoisómeros. Por consiguiente, la invención proporciona composiciones que contienen un compuesto que tiene uno o más centros quirales, en donde por lo menos el 55% (por ejemplo, por lo menos el 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95%) del compuesto de la fórmula (1) está presente como un único isómero óptico (por ejemplo, enantiómero o diastereoisómero). En una realización general, el 99% o más (por ejemplo, prácticamente la totalidad) de la cantidad total del compuesto de la fórmula (1) puede estar presente como un único isómero óptico (por ejemplo, enantiómero o diastereoisómero).

Isótopos

El compuesto de la invención como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 puede contener una o más sustituciones isotópicas, y una referencia a un elemento particular incluye dentro de su alcance todos los isótopos del elemento. Por ejemplo, una referencia al hidrógeno incluye dentro de su alcance 1H, 2H (D) y 3H (T). De manera similar, las referencias al carbono y al oxígeno incluyen dentro de su alcance respectivamente 12C, 13C y 14C y 16O y 18O.

Los isótopos pueden ser radiactivos o no radiactivos. En una realización de la invención, el compuesto no contiene isótopos radiactivos. Tal compuesto se prefiere para uso terapéutico. En otra realización, sin embargo, el compuesto puede contener uno o más radioisótopos. Los compuestos que contienen tales radioisótopos pueden ser útiles en un contexto de diagnóstico.

Solvatos

Los compuestos como se define en cualquiera de las realizaciones 1.0 a 1.3 pueden formar solvatos.

Los solvatos preferidos son los formados por la incorporación a la estructura en estado sólido (por ejemplo, estructura cristalina) del compuesto de la invención de moléculas de un solvente no tóxico farmacéuticamente aceptable (denominado en lo sucesivo solvente de solvatación). Ejemplos de tales solventes incluyen agua, alcoholes (como etanol, isopropanol y butanol) y dimetilsulfóxido. Los solvatos pueden prepararse recristalizando los compuestos de la invención con un solvente o mezcla de solventes que contenga el solvente de solvatación. En un caso dado puede determinarse si se ha formado o no un solvato sometiendo los cristales del compuesto a análisis usando técnicas bien conocidas y normalizadas, como el análisis termogravimétrico (TGE), la calorimetría diferencial de barrido (DSC) y la cristalografía de rayos X.

Los solvatos pueden ser solvatos estequiométricos o no estequiométricos.

Los solvatos particularmente preferidos son los hidratos, y los ejemplos de hidratos incluyen los hemihidratos, los monohidratos y los dihidratos.

Para un análisis más detallado de los solvatos y los métodos usados para elaborarlos y caracterizarlos, véase Bryn et al., Solid-State Chemistry of Drugs, segunda edición, publicado por SSCI, Inc de West Lafayette, IN, EE.UU., 1999, ISBN 0-967-06710-3.

Profármacos

Los compuestos definidos en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 pueden presentarse en forma de un profármaco.

Por "profármaco" se entiende, por ejemplo, cualquier compuesto que se convierta in vivo en un compuesto biológicamente activo, como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3.

Por ejemplo, algunos profármacos son ésteres del compuesto activo (por ejemplo, un éster fisiológicamente aceptable metabólicamente lábil). Durante el metabolismo, el grupo éster (-C(=O)OR) se escinde para producir el fármaco activo. Tales ésteres pueden formarse por esterificación, por ejemplo, de cualquier grupo hidroxilo presente en el compuesto original con, en su caso, protección previa de cualquier otro grupo reactivo presente en el compuesto original, seguida de desprotección si es necesario.

Además, algunos profármacos se activan enzimáticamente para producir el compuesto activo, o un compuesto que, tras una reacción química posterior, produce el compuesto activo (por ejemplo, como en ADEPT, GDEPT, LIDEPT, etc.). Por ejemplo, el profármaco puede ser un derivado de azúcar u otro conjugado glucósido, o puede ser un derivado de éster de aminoácido.

Complejos y clatratos

En la fórmula (1) o los subgrupos, subconjuntos, preferencias y ejemplos de la misma también se incluyen los complejos (por ejemplo, complejos de inclusión o clatratos con compuestos como ciclodextrinas, o complejos con metales) de los compuestos.

Actividad biológica

El compuesto de fórmula (1) es un potente inhibidor de Chk-1 y, en consecuencia, se espera que sea beneficioso solo o en combinación con varios agentes quimioterapéuticos o radiación para tratar un amplio espectro de trastornos proliferativos.

Por consiguiente, en realizaciones adicionales (Realizaciones 2.1 a 2.14), la presente memoria descriptiva también divulga:

2.1 Un compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso en medicina o terapia.

2.2 Un compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso como un inhibidor de la quinasa Chk-1.

2.7 Un compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso en la mejora de un efecto terapéutico de la radioterapia o la quimioterapia en el tratamiento de una enfermedad proliferativa como el cáncer.

2.8 Un compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa como el cáncer.

2.13 Un compuesto para uso como se define en cualquiera de las Realizaciones 2.7 a 2.8 en donde el cáncer se selecciona entre carcinomas, por ejemplo carcinomas de vejiga, mama, colon, riñón, epidermis, hígado, pulmón, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata, sistema gastrointestinal o piel, tumores hematopoyéticos como leucemia, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas o linfoma de Burkett; Tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, por ejemplo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico o leucemia promielocítica; cáncer folicular de tiroides; tumores de origen mesenquimal, por ejemplo fibrosarcoma o habdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central o periférico, por ejemplo astrocitoma, neuroblastoma, glioma o schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xeroderma pigmentoso; queratocantoma; cáncer folicular de tiroides; sarcoma de Ewing o sarcoma de Kaposi.

2.14 Un compuesto para su uso de acuerdo con la realización 2.13, en donde el cáncer se selecciona entre cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, glioma, sarcoma de Ewing y leucemia.

También se prevé que el inhibidor de Chk-1 de la invención pueda ser útil en el tratamiento de tumores en los que hay un mecanismo defectuoso de reparación del ADN o un ciclo celular defectuoso, por ejemplo un cáncer en el que las mutaciones (por ejemplo en p53) han llevado a la pérdida del punto de control de daño del ADN G1/S (véase la sección introductoria de esta solicitud). El inhibidor de Chk-1 de la invención también puede ser útil en el tratamiento de tumores mutantes RAD17, tumores mutantes RAD50 deficientes en ATM y anemia de Fanconi.

Por consiguiente, en realizaciones adicionales (Realizaciones 2.15 a 2.24), la presente memoria descriptiva también divulga:

2.15 Un compuesto para su uso como se define en cualquiera de las Realizaciones 2.7 a 2.14, en donde el cáncer es uno que se caracteriza por un mecanismo defectuoso de reparación del ADN o un ciclo celular defectuoso. 2.16 Un compuesto para su uso de acuerdo con la Realización 2.15, en donde el cáncer es un tumor p53 negativo o mutado.

2.17 Un compuesto para su uso como se define en cualquiera de las Realizaciones 2.7 a 2.14, en donde el cáncer es un cáncer impulsado por el oncogén MYC.

2.18 Un compuesto para su uso de acuerdo con la Realización 2.16, en donde el cáncer impulsado por el oncogén MYC es un linfoma de células B, leucemia, neuroblastoma, cáncer de mama o cáncer de pulmón.

2.19 Un compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso en el tratamiento de un paciente que padece un tumor p53 negativo o mutado (por ejemplo, un cáncer seleccionado entre cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, glioma y leucemia) en combinación con radioterapia o quimioterapia.

2.20 Un compuesto para su uso de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 2.7 a 2.19 en donde, además de la administración de un compuesto de fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3, el tratamiento comprende la administración a un paciente de un agente quimioterapéutico seleccionado entre citarabina, etopósido, gemcitabina y SN-38.

2.25 Un compuesto para su uso como se define en cualquiera de las Realizaciones 2.7 a 2.14, en donde el cáncer es un tumor mutante RAD17 o un tumor mutante RAD50 deficiente en ATM.

2.26 Un compuesto de fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 para su uso en el tratamiento de la anemia de Fanconi.

El compuesto inhibidor de Chk-1 de la invención puede usarse solo o en combinación con fármacos anticancerígenos que dañan el ADN y/o radioterapia para tratar sujetos con cánceres resistentes a múltiples fármacos. Se considera que un cáncer es resistente a un fármaco cuando reanuda una tasa normal de crecimiento tumoral mientras se está sometiendo a tratamiento con el fármaco después de que el tumor haya respondido inicialmente al fármaco. Se considera que un tumor "responde a un fármaco" cuando presenta una disminución de la masa tumoral o una disminución de la tasa de crecimiento tumoral.

Formulaciones farmacéuticas

Aunque es posible que el compuesto activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (por ejemplo, formulación).

Por consiguiente, en otra realización (Realización 4.1) de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

El excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, un portador (por ejemplo, un portador sólido, líquido o semisólido), un diluyente o agente de carga, un agente granulante, un agente de recubrimiento, un agente aglutinante, un disgregante, un agente lubricante, un conservante, un antioxidante, un agente tampón, un agente de suspensión, un agente espesante, un agente aromatizante, un edulcorante, un agente enmascarador del sabor o cualquier otro excipiente usado convencionalmente en las composiciones farmacéuticas. A continuación se exponen con más detalle ejemplos de excipientes para varios tipos de composiciones farmacéuticas.

Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse en cualquier forma adecuada para la administración oral, parenteral, tópica, intranasal, oftálmica, ótica, rectal, intravaginal o transdérmica. Cuando las composiciones están destinadas a administración parenteral, pueden formularse para administración intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea o para administración directa en un órgano o tejido diana mediante inyección, infusión u otros medios de administración. La administración puede realizarse mediante inyección en bolo, infusión a corto plazo o infusión a largo plazo y puede ser mediante administración pasiva o mediante la utilización de una bomba de infusión adecuada.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, cosolventes, mezclas de solventes orgánicos, agentes de formación de complejos de ciclodextrinas, agentes emulsionantes (para formar y estabilizar formulaciones en emulsión), componentes de liposomas para formar liposomas, polímeros gelificables para formar geles poliméricos, protectores de liofilización y combinaciones de agentes para, entre otras cosas, estabilizar el principio activo en una forma soluble y hacer que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto. Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral también pueden adoptar la forma de suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes (R. G. Strickly, Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations, Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, p 201-230).

Una molécula de fármaco que sea ionizable puede solubilizarse hasta la concentración deseada mediante el ajuste del pH si el pKa del fármaco se aleja lo suficiente del valor de pH de la formulación. El intervalo aceptable es de pH 2-12 para la administración intravenosa e intramuscular, pero por vía subcutánea el intervalo es de pH 2,7-9,0. El pH de la solución se controla mediante la forma salina del fármaco, ácidos/bases fuertes como el ácido clorhídrico o el hidróxido de sodio, o mediante soluciones de tampones que incluyen, entre otras, soluciones tampón formadas a partir de glicina, citrato, acetato, maleato, succinato, histidina, fosfato, tris(hidroximetil)-aminometano (TRIS) o carbonato.

En formulaciones inyectables se usa a menudo la combinación de una solución acuosa y un solvente/surfactante orgánico soluble en agua (es decir, un cosolvente). Los solventes y surfactantes orgánicos solubles en agua usados en formulaciones inyectables incluyen, entre otros, propilenglicol, etanol, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400, glicerina, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirrolidona (NMP; Pharmasolve), dimetilsulfóxido (DMSO), Solutol HS 15, Cremophor EL, Cremophor RH 60 y polisorbato 80. Habitualmente estas formulaciones pueden diluirse antes de la inyección, aunque no siempre es así.

El propilenglicol, el PEG 300, el etanol, el Cremophor EL, el Cremophor RH 60 y el polisorbato 80 son los solventes y surfactantes totalmente orgánicos miscibles en agua que se usan en las formulaciones inyectables disponibles en el mercado y pueden usarse en combinaciones entre sí. Las formulaciones orgánicas resultantes se diluyen habitualmente por lo menos 2 veces antes del bolo intravenoso o la infusión intravenosa.

Alternativamente, puede lograrse una mayor solubilidad en agua mediante la formación de complejos molecular con ciclodextrinas.

Las formulaciones pueden presentarse en envases unidosis o multidosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse secadas por congelación (liofilizadas), requiriendo únicamente la adición del portador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso.

La formulación farmacéutica puede prepararse liofilizando un compuesto de fórmula (1) o una sal de adición de ácido del mismo. La liofilización se refiere al procedimiento de secar por congelación una composición. Por lo tanto, el secado por congelación y la liofilización se usan en la presente como sinónimos. Un proceso típico consiste en solubilizar el compuesto y la formulación resultante se aclar, se filtra estérilmente y se transfiere asépticamente a recipientes apropiados para la liofilización (por ejemplo, viales). En el caso de los viales, se tapan parcialmente con tapones Iyo. La formulación puede enfriarse hasta la congelación y someterse a liofilización en condiciones estándar y, a continuación, taparla herméticamente formando una formulación liofilizada estable y seca. La composición tendrá típicamente un bajo contenido de agua residual, por ejemplo menos del 5%, por ejemplo menos del 1% en peso sobre la base del peso del liofilizado.

La formulación de liofilización puede contener otros excipientes, por ejemplo, agentes espesantes, agentes dispersantes, tampones, antioxidantes, conservantes y ajustadores de la tonicidad. Los tampones típicos incluyen fosfato, acetato, citrato y glicina. Los ejemplos de antioxidantes incluyen el ácido ascórbico, el bisulfito sódico, el metabisulfito sódico, el monotioglicerol, la tiourea, el butilhidroxitolueno, el butilhidroxilanisol y las sales de ácido etilendiaminotetraacético. Los conservantes pueden incluir ácido benzoico y sus sales, ácido sórbico y sus sales, ésteres alquílicos del ácido parahidroxibenzoico, fenol, clorobutanol, alcohol bencílico, timerosal, cloruro de benzalconio y cloruro de cetilpiridinio. Si es necesario, para ajustar la tonicidad pueden usarse los tampones mencionados anteriormente, así como la dextrosa y el cloruro sódico,.

Los agentes de carga se usan generalmente en la tecnología de liofilización para facilitar el proceso y/o proporcionar volumen y/o integridad mecánica a la torta liofilizada. Por agente de carga se entiende un diluyente sólido en partículas, soluble en agua, que cuando se coliofiliza con el compuesto o sal del mismo, proporciona una torta liofilizada físicamente estable, un proceso de secado por congelación más óptimo y una reconstitución rápida y completa. El agente de carga también puede utilizarse para hacer que la solución sea isotónica.

El agente de carga soluble en agua puede ser cualquiera de los materiales sólidos inertes farmacéuticamente aceptables que se usan típicamente para la liofilización. Tales agentes de carga incluyen, por ejemplo, azúcares como glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa; polialcoholes como sorbitol o manitol; aminoácidos como glicina; polímeros como polivinilpirrolidina; y polisacáridos como dextrano.

La relación entre el peso del agente de carga y el peso del compuesto activo está comprendida típicamente en el intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 5, por ejemplo, de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1 a 2.

Alternativamente, pueden suministrarse en forma de solución que puede concentrarse y sellarse en un vial adecuado. La esterilización de las formas de dosificación puede realizarse mediante filtración o autoclave de los viales y su contenido en las etapas adecuadas del proceso de formulación. La formulación suministrada puede requerir una dilución o preparación adicionales antes de la administración, por ejemplo, dilución en envases de infusión estériles adecuados.

Las soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas pueden prepararse a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

En una realización preferida de la invención, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para la administración i.v., por ejemplo por inyección o infusión.

En otra realización preferida, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para la administración subcutánea (s.c.).

Las formas de dosificación adecuadas para la administración oral incluyen comprimidos, cápsulas, comprimidos oblongos, píldoras, pastillas para chupar, jarabes, soluciones, polvos, gránulos, elixires y suspensiones, comprimidos sublinguales, obleas o parches y parches bucales.

Las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de la fórmula (1) pueden formularse de acuerdo con técnicas conocidas, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, EE.UU.

Por tanto, las composiciones de comprimidos pueden contener una dosificación unitaria de compuesto activo junto con un diluyente o portador inerte como un azúcar o alcohol de azúcar, por ejemplo; lactosa, sacarosa, sorbitol o manitol; y/o un diluyente no derivado del azúcar como carbonato sódico, fosfato cálcico, carbonato cálcico, o una celulosa o derivado de la misma como metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, y almidones como almidón de maíz. Los comprimidos también pueden contener ingredientes estándar como agentes aglutinantes y granulantes como la polivinilpirrolidona, disgregantes (por ejemplo, polímeros reticulados hinchables como la carboximetilcelulosa reticulada), agentes lubricantes (por ejemplo, estearatos), conservantes (por ejemplo, parabenos), antioxidantes (por ejemplo, BHT), agentes tampón (por ejemplo, tampones de fosfato o citrato) y agentes efervescentes como mezclas de citrato/bicarbonato. Tales excipientes son bien conocidos y no es necesario analizarlos en detalle en la presente.

Las formulaciones en cápsulas pueden ser de la variedad de gelatina dura o de gelatina blanda y pueden contener el componente activo en forma sólida, semisólida o líquida. Las cápsulas de gelatina pueden formarse a partir de gelatina animal o equivalentes sintéticos o vegetales de la misma.

Las formas de dosificación sólidas (por ejemplo, comprimidos, cápsulas, etc.) pueden estar recubiertas o no recubiertas, pero normalmente tienen un recubrimiento, por ejemplo, un recubrimiento de película protectora (por ejemplo, una cera o barniz) o un recubrimiento que controla la liberación. El recubrimiento (por ejemplo, un polímero del tipo Eudragit™) puede estar diseñado para liberar el componente activo en la localización deseada dentro del tracto gastrointestinal. Por tanto, el recubrimiento puede seleccionarse para que se degrade en ciertas condiciones de pH dentro del tracto gastrointestinal, liberando selectivamente de este modo el compuesto en el estómago o en el íleon o el duodeno.

En lugar de, o además de, un recubrimiento, el fármaco puede presentarse en una matriz sólida que comprenda un agente controlador de la liberación, por ejemplo un agente retardador de la liberación que pueda adaptarse para liberar selectivamente el compuesto en condiciones de acidez o alcalinidad variables en el tracto gastrointestinal. Alternativamente, el material de la matriz o el recubrimiento retardador de la liberación puede adoptar la forma de un polímero erosionable (por ejemplo, un polímero de anhídrido maleico) que se erosiona de manera sustancialmente continua a medida que la forma de dosificación pasa a través del tracto gastrointestinal. Como alternativa adicional, el compuesto activo puede formularse en un sistema de administración que proporcione un control osmótico de la liberación del compuesto. Las formulaciones de liberación osmótica y otras formulaciones de liberación retardada o sostenida pueden prepararse de acuerdo con métodos bien conocidos por los expertos en la materia.

El compuesto de fórmula (1), como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3, o un profármaco del mismo, puede formularse con un portador y administrarse en forma de nanopartículas. Las nanopartículas ofrecen la posibilidad de penetración directa en la célula. Los sistemas de administración de fármacos en nanopartículas se describen en "Nanoparticle Technology for Drug Delivery", editado por Ram B Gupta y Uday B. Kompella, Informa Healthcare, ISBN 9781574448573, publicado 13 de marzo de 2006. Las nanopartículas para la administración de fármacos también se describen en J. Control. Release, 2003, 91 (1-2), 167-172, y en Sinha et al., Mol. Cancer Ther. 1 de agosto, (2006) 5, 1909.

Las fórmulas farmacéuticas pueden presentarse al paciente en "envases para pacientes" que contienen un curso completo de tratamiento en un único envase, normalmente un blíster. Los envases para pacientes tienen una ventaja sobre las recetas tradicionales, en las que un farmacéutico divide el suministro de un producto farmacéutico para un paciente de un suministro a granel, en que el paciente siempre tiene acceso al prospecto del envase contenido en el envase para pacientes, que normalmente falta en las recetas para pacientes. Se ha demostrado que la inclusión de un prospecto de envase mejora el cumplimiento por parte del paciente de las instrucciones del médico.

Las composiciones para uso tópico incluyen pomadas, cremas, espráis, parches, geles, gotas líquidas e insertos (por ejemplo, insertos intraoculares). Tales composiciones pueden formularse de acuerdo con métodos conocidos.

Las composiciones para administración parenteral se presentan típicamente como soluciones acuosas u oleosas estériles o suspensiones finas, o pueden proporcionarse en forma de polvo estéril finamente dividido para prepararlas extemporáneamente con agua estéril para inyección.

Ejemplos de formulaciones para administración rectal o intravaginal incluyen pesarios y supositorios que pueden formarse, por ejemplo, a partir de un material moldeable o ceroso que contiene el compuesto activo.

Las composiciones para administración por inhalación pueden adoptar la forma de composiciones en polvo inhalables o espráis líquidos o en polvo, y pueden administrarse en forma estándar usando dispositivos inhaladores de polvo o dispositivos dispensadores de aerosoles. Tales dispositivos son bien conocidos. Para la administración por inhalación, las formulaciones en polvo comprenden típicamente el compuesto activo junto con un diluyente en polvo sólido inerte, como la lactosa.

El compuesto de la fórmula (1) se presentará generalmente en forma de dosificación unitaria y, como tal, contendrá típicamente suficiente compuesto para proporcionar un nivel deseado de actividad biológica. Por ejemplo, una formulación puede contener de 1 nanogramo a 2 gramos de principio activo, por ejemplo, de 1 nanogramo a 2 miligramos de principio activo. Dentro de este intervalo, los subintervalos particulares de compuesto son de 0,1 miligramos a 2 gramos de principio activo (más habitualmente de 10 miligramos a 1 gramo, por ejemplo de 50 miligramos a 500 miligramos), o de 1 microgramo a 20 miligramos (por ejemplo de 1 microgramo a 10 miligramos, por ejemplo de 0,1 miligramos a 2 miligramos de principio activo).

Para las composiciones orales, una forma de dosificación unitaria puede contener de 1 miligramo a 2 gramos, más típicamente de 10 miligramos a 1 gramo, por ejemplo de 50 miligramos a 1 gramo, por ejemplo de 100 miligramos a 1 gramo, de compuesto activo.

El compuesto activo se administrará a un paciente que lo necesite (por ejemplo, un paciente humano o animal) en una cantidad suficiente para lograr el efecto terapéutico deseado.

Métodos de tratamiento

Se prevé que el compuesto de fórmula (1) definido en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 definidas en la presente sea útil solo o en terapia combinada con agentes quimioterapéuticos (en particular agentes que dañan el<a>D<n>) o radioterapia en la profilaxis o el tratamiento de una serie de estados de enfermedad o afecciones proliferativos. Más arriba se han expuesto ejemplos de tales estados de enfermedad y afecciones.

El compuesto de fórmula (1), ya sea administrado solo, o en combinación con agentes que dañan el ADN y otros agentes y terapias anticancerígenas, se administran generalmente a un sujeto que necesite dicha administración, por ejemplo un paciente humano o animal, preferiblemente un humano.

De acuerdo con otra realización de la invención, Realización 5.1, se proporciona una combinación de un compuesto de fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 junto con otro agente quimioterapéutico, por ejemplo un fármaco anticancerígeno.

Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos que pueden coadministrarse con el compuesto de fórmula (1) definido en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 incluyen:

• Inhibidores de la topoisomerasa I

• Antimetabolitos

• Agentes dirigidos a la tubulina

• Aglutinante del ADN e inhibidores de la topoisomerasa II

• Agentes alquilantes

• Anticuerpos monoclonales.

• Antihormonas

• Inhibidores de la transducción de señales

• Inhibidores del proteasoma

• ADN metil transferasas

• Citoquinas y retinoides

• Agentes dañinos del ADN desencadenados por la hipoxia (por ejemplo, tirapazamina, TH-302)

Ejemplos particulares de agentes quimioterapéuticos que pueden administrarse en combinación con el compuesto de fórmula (1) definido en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 incluyen:

mostazas nitrogenadas como mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalán y clorambucilo; nitrosoureas como carmustina, lomustina y semustina;

compuestos de etilenimina/metilmelamina, como la trietilenemelamina, la trietilenotiofosforamida y la hexametilmelamina

alquilsulfonatos como el busulfán;

triazinas como la dacarbazina

Antimetabolitos como folatos, metotrexato, trimetrexato, 5-fluorouracilo, fluorodesoxiuridina, gemcitabina, arabinósido de citosina, 5-azacitidina, 2,2'-difluorodesoxicitidina, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, azatioprina, 2'-desoxicoformicina, eritrohidroxinonil-adenina, fosfato de fludarabina y 2-clorodesoxiadenosina;

inhibidores de la topoisomerasa de tipo I, como la camptotecina, el topotecán y el irinotecán;

inhibidores de la topoisomerasa de tipo II, como las epipodofilotoxinas (por ejemplo, etopósido y tenipósido); fármacos antimitóticos como paclitaxel, Taxotere, alcaloides de la Vinca (por ejemplo, vinblastina, vincristina, vinorelbina) y estramustina (por ejemplo, fosfato de estramustina)

antibióticos como actimomicina D, daunomicina (rubidomicina), doxorrubicina (adriamicina), mitoxantrona, idarrubicina, bleomicina, mitramicina, mitomicina C y dactinomicina

enzimas como la L-asparaginasa

citoquinas y modificadores de la respuesta biológica, como interferón (a, p,<y>), interleucina-2G-CSF y GM-CSF retinoides como los derivados del ácido retinoico (por ejemplo, el bexaroteno);

radiosensibilizadores como metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina, 5-yododesoxiuridina y bromodesoxicitidina;

compuestos de platino como el cisplatino, el carboplatino, el espiroplatino, el iproplatino, el onnaplatino, el tetraplatino y el oxaliplatino;

antracenedionas como la mitoxantrona;

ureas como la hidroxiurea;

derivados de la hidracina, como la N-metilhidracina y la procarbazina;

supresores adrenocorticales, como el mitotano y la aminoglutetimida

adrenocorticosteroides y antagonistas como la prednisona, la dexametasona y la aminoglutetimida; progestágenos como la hidroxiprogesterona (por ejemplo, caproato de hidroxiprogesterona), la medroxiprogesterona (por ejemplo, acetato de medroxiprogesterona) y el megestrol (por ejemplo, acetato de megestrol);

estrógenos como el dietilestilbestrol y el etil estradiol;

antiestrógenos como el tamoxifeno;

andrógenos como la testosterona (por ejemplo, el propionato de testosterona) y la fluoximesterona; antiandrógenos como la flutamida y la leuprolida;

antiandrógenos no esteroideos como la flutamida; y

inhibidores de la transducción de señales, como los inhibidores de PARP [por ejemplo, como se divulga en Cancer Res.; 66: (16)], inhibidores de Mek [por ejemplo, como se divulga en Blood. 15 de septiembre de 2008; 112(6): 2439- 2449], inhibidores de farnesiltransferasa [por ejemplo, como se divulga en Blood. 15 de febrero de 2005;105(4):1706-16], inhibidores de wee1 [por ejemplo, como se divulga en Haematologica 2013.3318 (epub antes de la impresión)], rapamicina e inhibidores de Src [por ejemplo, como se divulga en Blood. 10 de febrero de 2011;117(6): 1947-57].

Los ejemplos de los agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en combinación con el compuesto inhibidor de Chk-1 de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente incluyen los agentes quimioterapéuticos descritos en Blasina et al. Cancer Ther, 2008, 7(8), 2394-2404, Ashwell et al. Cancer Res., 2008, 14(13), 4032-4037, Ashwell et al., Expert Opin. lnvestig. Drugs, 2008, 17(9), 1331-1340, Trends in Molecular Medicine febrero de 2011, Vol. 17, N° 2 y Clin Cancer Res; 16(2) 15 de enero de 2010.

Ejemplos particulares de agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en combinación con el compuesto inhibidor de Chk-1 de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente incluyen antimetabolitos (como capecitabina, citarabina, fludarabina, gemcitabina y pemetrexed), nhibidores de la topoisomerasa-I (como SN38, topotecán, irinotecán), compuestos de platino (tales como carboplatino, oxaloplatino y cisplatino), inhibidores de la topoisomerasa II (como daunorrubicina, doxorrubicina y etopósido), inhibidores de la timidilato sintasa (como 5-fluoruracilo), inhibidores mitóticos (como docetaxel, paclitaxel, vincristina y vinorelbina) y agentes alquilantes (como mitomicina C).

Un conjunto adicional de agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en combinación con el compuesto inhibidor de Chk-1 de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente incluye agentes que inducen el bloqueo de las horquillas de replicación (véase Ashwell et al., Clin. Cancer Res., supra), y ejemplos de tales compuestos incluyen gemcitabina, 5-fluorouracilo e hidroxiurea.

El compuesto de la invención y las combinaciones con agentes quimioterapéuticos o radioterapias como se ha descrito anteriormente pueden administrarse durante un periodo prolongado para mantener los efectos terapéuticos beneficiosos o pueden administrarse sólo durante un periodo corto. Alternativamente, pueden administrarse de manera pulsátil o continua.

El compuesto de la invención se administrará en una cantidad eficaz, es decir, una cantidad que sea eficaz para producir el efecto terapéutico deseado, ya sea solo (en monoterapia) o en combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos o radioterapia. Por ejemplo, la "cantidad eficaz" puede ser una cantidad de compuesto que, cuando se administra solo o junto con un fármaco que daña el ADN u otro fármaco anticancerígeno a un sujeto que padece cáncer, ralentiza el crecimiento del tumor, mejora los síntomas de la enfermedad y/o aumenta la longevidad. Más particularmente, cuando se usa en combinación con radioterapia, con un fármaco que daña el ADN u otro fármaco anticancerígeno, una cantidad eficaz del inhibidor de Chk-1 de la invención es la cantidad en la que se logra una mayor respuesta cuando el inhibidor de Chk-1 se coadministra con el fármaco anticancerígeno que daña el ADN y/o la radioterapia en comparación con cuando se administran solos el fármaco anticancerígeno que daña el ADN y/o la radioterapia. Cuando se usa como una terapia combinada, se administra al sujeto una "cantidad eficaz" del fármaco que daña el ADN y/o una dosis de radiación "eficaz", que es una cantidad en la que normalmente se logran efectos anticancerígenos. Los inhibidores de Chk-1 de la invención y el fármaco anticancerígeno que daña el ADN pueden coadministrarse al sujeto como parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, como composiciones farmacéuticas separadas.

Cuando se administran como composiciones farmacéuticas separadas, el inhibidor de Chk-1 de la invención y el fármaco anticancerígeno que daña el ADN (y/o radioterapia) pueden administrarse simultáneamente o en momentos diferentes, siempre que se mantenga el efecto potenciador del inhibidor de Chk-1.

En una realización, un compuesto de cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3, como se define en la presente, se administra antes (por ejemplo, hasta 8 horas o hasta 12 horas o hasta un día antes) de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN.

En otra realización, un compuesto de cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente se administra después (por ejemplo, hasta 8 horas o hasta 12 horas o hasta 24 horas o hasta 30 horas o hasta 48 horas después) de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN. En otra realización, una primera dosis de un compuesto de cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente se administra un día después de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN y una segunda dosis de dicho compuesto se administra dos días después de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN.

En una realización adicional, una primera dosis de un compuesto de cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente se administra un día después de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN, una segunda dosis de dicho compuesto se administra dos días después de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN, y una tercera dosis de dicho compuesto se administra tres días después de la administración del fármaco anticancerígeno que daña el ADN.

Los regímenes de dosificación particulares que comprenden la administración de un compuesto de cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3 como se define en la presente, y un fármaco anticancerígeno que daña el ADN pueden ser los expuestos en el documento WO2010/118390 (Array Biopharma).

La cantidad de compuesto inhibidor de Chk-1 de la invención y (en el caso de la terapia combinada) el fármaco anticancerígeno que daña el ADN y la dosis de radiación administrada al sujeto dependerán de la naturaleza y potencia del fármaco anticancerígeno que daña el ADN, del tipo y gravedad de la enfermedad o afección y de las características del sujeto, como el estado general de salud, la edad, el sexo, el peso corporal y la tolerancia a los fármacos. Los expertos en la materia podrán determinar las dosificaciones adecuadas dependiendo de estos y otros factores. Las dosificaciones eficaces de los fármacos anticancerígenos y la radioterapia usados habitualmente son bien conocidas por los expertos en la materia.

Una dosis diaria típica del compuesto de fórmula (1), ya se administre por sí solo en monoterapia o se administre en combinación con un fármaco anticancerígeno que daña el ADN, puede estar en el intervalo de 100 picogramos a 100 miligramos por kilogramo de peso corporal, más típicamente de 5 nanogramos a 25 miligramos por kilogramo de peso corporal, y más habitualmente de 10 nanogramos a 15 miligramos por kilogramo (por ejemplo, de 10 nanogramos a 10 miligramos, y más típicamente de 1 microgramo por kilogramo a 20 miligramos por kilogramo, por ejemplo de 1 microgramo a 10 miligramos por kilogramo) por kilogramo de peso corporal, aunque pueden administrarse dosis mayores o menores cuando sea necesario. El compuesto puede administrarse diariamente o de forma repetida cada 2, o 3, o 4, o 5, o 6, o 7, o 10 o 14, o 21, o 28 días, por ejemplo.

En última instancia, sin embargo, la cantidad de compuesto administrado y el tipo de composición usada serán proporcionales a la naturaleza de la enfermedad o condición fisiológica que se esté tratando y quedarán a discreción del médico.

Métodos de diagnóstico

Antes de la administración de un compuesto de fórmula (1) como se define en cualquiera de las Realizaciones 1.0 a 1.3, puede examinarse a un paciente para determinar si el cáncer que padece o puede padecer es susceptible de tratamiento con un compuesto inhibidor de la quinasa Chk-1 o una combinación de un agente quimioterapéutico (como un agente que daña el ADN) y un compuesto inhibidor de la quinasa Chk-1.

Más particularmente, puede examinarse a un paciente para determinar si el cáncer que padece o puede padecer se caracteriza por un mecanismo defectuoso de reparación del ADN o un ciclo celular defectuoso, por ejemplo un ciclo celular defectuoso debido a una mutación p53 o si se trata de un cáncer p53 negativo.

Los cánceres que se caracterizan por mutaciones de p53 o la ausencia de p53 pueden identificarse, por ejemplo, mediante los métodos descritos en Allred et al., J. Nat. Cancer Institute, Vol. 85, N° 3, 200-206 (1993) y los métodos descritos en los artículos enumerados en la parte introductoria de esta solicitud. Por ejemplo, la proteína p53 puede detectarse mediante métodos inmunohistoquímicos como la inmunotinción.

Las pruebas diagnósticas se realizan normalmente en una muestra biológica seleccionada entre muestras de biopsia tumoral, muestras de sangre (aislamiento y enriquecimiento de células tumorales excretadas), biopsias de heces, esputo, análisis cromosómico, líquido pleural, líquido peritoneal u orina.

Además de p53, las mutaciones de otros factores de reparación del ADN como RAD17, RAD50 y miembros del grupo de complementación de la anemia de Fanconi pueden ser predictivos de la respuesta a los inhibidores de Chk1 solos o en combinación con quimioterapia. Los cánceres que contienen mutaciones en estas vías de reparación del ADN pueden identificarse mediante el análisis de la secuencia de ADN del tejido de la biopsia tumoral o del ADN tumoral circulante (ADNct) o, en el caso de la anemia de Fanconi, mediante la evaluación de la formación de focos de ADN en especímenes de biopsia tumoral usando un anticuerpo contra FANCD2, como se describe en Duan et al.,Frontiers in Oncology vol.4, 1-8 (2014).

Por tanto, los compuestos de cualquiera de las realizaciones 1.0 a 1.3 pueden usarse para tratar a miembros de una subpoblación de pacientes que han sido examinados (por ejemplo, analizando una o más muestras biológicas tomadas de dichos pacientes) y se ha descubierto que padecen un cáncer caracterizado por una mutación de p53 o un cáncer negativo para p53, o un cáncer que contiene una mutación RAD17 o RAD50, o una mutación en un miembro del grupo de complementación de la anemia de Fanconi.

EJEMPLOS

La invención se ilustrará ahora, pero no se limitará, por referencia a las realizaciones específicas descritas en los siguientes ejemplos.

En los ejemplos, se usan las siguientes abreviaturas.

DCM diclorometano

DMSO dimetilsulfóxido

Et<2>O éter dietílico

EtOAc acetato de etilo

HCl cloruro de hidrógeno

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

LCMS cromatografía líquida-espectrometría de masas

MeCN acetonitrilo

MeOH metanol

NaBH(AcO)<3>triacetoxiborohidruro sódico

NaHCO<3>hidrogenocarbonato sódico

Na2SO4sulfato sódico

NMR resonancia magnética nuclear

THF tetrahidrofurano

Los espectros de resonancia magnética de protones (1H NMR) se registraron en un instrumento Bruker400 que funcionaba a 400 MHz, en DMSQ-d6 o MeOH-d<4>(según se indica) a 27°C, a menos que se indique lo contrario, y se notifican de la siguiente manera: desplazamiento químico 5/ppm (multiplicidad donde s=singlete, d=doblete, dd, doblete doble, t=triplete, q=cuarteto, m=multiplete, br= amplio, número de protones). El solvente prótico residual se usó como referencia interna.

Los análisis de cromatografía líquida y espectroscopia de masas se llevaron a cabo usando el sistema y las condiciones de funcionamiento que se exponen a continuación. Cuando hay átomos con isótopos diferentes y se cita una única masa, la masa citada para el compuesto es la masa monoisotópica (es decir, 35CI; 79Br, etc.).

CONDICIONES de LCMS

Los datos de LCMS que se proporcionan en los siguientes ejemplos se obtuvieron usando el Método B como se expone a continuación.

Método B de LCMS

Las muestras se analizaron mediante HPLC-MS de fase inversa usando un HPLC Waters 2795 Alliance, un espectrómetro de masas Acquity QDA y un detector de UV de matriz de fotodiodos Waters 996. La LCMS usó ionización por electropulverización y el sistema de cromatografía fue el siguiente:

La LCMS se llevó a cabo usando una columna X-BRIDGE C18 de 100 x 4,6 mm y 5 mieras. El flujo de la columna fue de 1,0 ml/min y las fases móviles usadas fueron ácido fórmico al 0,1% en agua (A) y metanol (B), con un volumen de inyección de l0 pl.

El gradiente fue como se describe a continuación.

EJEMPLOS

Se ha preparado el compuesto del Ejemplo 64 mostrado en la Tabla 1 siguiente. Sus propiedades de NMR y LCMS se exponen en la Tabla 2.

Tabla 1

METODOS SINTETICOS

Para preparar el compuesto del Ejemplo 64 se usó el Método Sintético L. A continuación se muestra el esquema de reacción para el Método Sintético L.

Tabla 2

Ruta sintética L

(Ilustrada con referencia al Ejemplo 64):

Ejemplo 64

Clorhidrato de 5-[[5-[4-(4-Fluoro-1-metil-4-piperidil)-2-metoxi-fenil1-1H-pirazol-3-il1aminoJpirazina-2-carbonitrilo) 64A. 2-(4-bromo-2-metoxi-fen¡l)-1.3-d¡oxolano

Se calentó a reflujo en condiciones Dean-Stark durante 5 horas una mezcla de 4-bromo-2-metoxibenzaldehído (25.0 g. 117 mmol). etanodiol (9.7 ml, 175 mmol) y ácido p-toluenosulfónico (67 mg, 0.35 mmol) en tolueno (250 ml). La solución enfriada se vertió en solución saturada de NaHCO<3>(100 ml) y la fase acuosa separada se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml). se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a presión reducida para dejar un residuo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice neutro usando un 5% de EtOAc/hexano como eluyente para dar el compuesto del título (6.8 g.

23%).

64B. 4-[4-(1.3-d¡oxolan-2-¡l)-3-metox¡-fen¡ll-4-h¡drox¡-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-butilo

Se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón de n-Bul¡ (1.6 M en hexano. 21.5 ml. 34.3 mmol) a una soluc¡ón ag¡tada de 2-(4-bromo-2-metox¡-fen¡l)-1.3-d¡oxolano (6.8 g. 26.4 mmol) en THF seco (90 ml) a -78°C bajo atmósfera de n¡trógeno. La mezcla se ag¡tó durante 30 m¡nutos y después se añad¡ó gota a gota una soluc¡ón de 4-oxop¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (5.26 g. 26.4 mmol) en THF (45 ml) manten¡endo la temperatura a -78°C. Se dejó que la mezcla de la reacc¡ón calentase lentamente hasta temperatura amb¡ente y se cont¡nuó ag¡tando durante 12 horas. La mezcla se vert¡ó en soluc¡ón de cloruro de amon¡o saturada fría (100 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera (50 ml). se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando EtOAc/hexano al 45% como eluyente para dar el compuesto del título (2.9 g. 29%).

64C. 4-fluoro-4-(4-form¡l-3-metox¡-fen¡l)-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo

Se añad¡ó gota a gota tr¡fluoruro de d¡et¡lam¡nosulfuro (1.1 ml. 8.4 mmol) a una soluc¡ón ag¡tada de 4-[4-(1.3-d¡oxolan-2-¡l)-3-metox¡-fen¡l]-4-h¡drox¡-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (2.9 g. 7.6 mmol) en DCM (10 ml) a -78°C bajo atmósfera de n¡trógeno. Se dejó que la mezcla de reacc¡ón calentase a temperatura amb¡ente y se cont¡nuó ag¡tando durante 5 horas. La mezcla se vert¡ó en soluc¡ón saturada de carbonato sód¡co (50 ml) y la fase acuosa separada se extrajo con DCM (3 x 50 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con soluc¡ón de ác¡do cítr¡co 1N (30 ml). se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando EtOAc/hexano al 10% como eluyente para dar el compuesto del título (1.8 g. 70%).

64D. 4-[4-(2-c¡ano-1-h¡drox¡-et¡l)-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo

A una suspens¡ón ag¡tada de 4-fluoro-4-(4-form¡l-3-metox¡-fen¡l)-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (1.8 g.

5.3 mmol) y polvo de z¡nc (0.69 g. 10.6 mmol) en THF seco (10 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón de 2-bromoaceton¡tr¡lo (1.1 g. 9.0 mmol) en THF seco (10 ml). La mezcla se ag¡tó durante 30 m¡nutos y después se vert¡ó en soluc¡ón saturada de cloruro amón¡co (100 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera (50 ml). se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando EtOAc/hexano al 20% como eluyente para dar el compuesto del título (1.7 g. 84%).

64E. 4-[4-(2-c¡anoacet¡l)-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo

A una soluc¡ón ag¡tada de 4-[4-(2-c¡ano-1-h¡drox¡-et¡l)-3-metox¡-fen¡l]-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de tercbut¡lo (1.7 g. 4.5 mmol) en DCM (50 ml) bajo atmósfera de n¡trógeno se le añad¡ó peryod¡nano de Dess-Mart¡n (2.29 g. 5.4 mmol) en porc¡ones. La soluc¡ón se ag¡tó durante 30 m¡nutos y después se f¡ltró a través de una almohad¡lla de cel¡te lavando con DCM (50 ml). El f¡ltrado se evaporó a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando EtOAc/hexano al 15% como eluyente para dar el compuesto del título (1.6 g. 95%).

64F. 4-[4-(3-am¡no-1H-p¡razol-5-¡l)-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo

Se calentó a reflujo durante 18 horas una soluc¡ón de 4-[4-(2-c¡anoacet¡l)-3-metox¡-fen¡l]-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (1.6 g. 4.3 mmol) e h¡drato de h¡draz¡na (99% en agua. 0.33 g. 6.5 mmol) en etanol (15 ml). Se dejó que la mezcla enfr¡ase a temperatura amb¡ente y los solventes se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando EtOAc/hexano al 75% como eluyente para dar el compuesto del título (0.73 g. 44%).

64G. 4-[4-[3-[(5-c¡anop¡raz¡n-2-¡l)am¡no 1-1H-p¡razol-5-¡ll-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo

Se calentó a 80°C durante 24 horas una soluc¡ón ag¡tada de 4-[4-(3-am¡no-1H-p¡razol-5-¡l)-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (0.73 g. 1.9 mmol). d¡¡soprop¡let¡lam¡na (1.0 ml. 5.7 mmol) y 5-bromop¡raz¡na-2-carbon¡tr¡lo (1.04 g. 5.7 mmol) en 1.4-d¡oxano seco (8 ml). Después de enfr¡arse a temperatura amb¡ente. la mezcla de la reacc¡ón se vert¡ó en agua con h¡elo (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Los extractos orgán¡cos comb¡nados se lavaron con salmuera (30 ml). se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un res¡duo que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce neutro usando MeOH/CHCh al 4% como eluyente para dar el compuesto del título (0.52 g. 56%).

64H. Clorh¡drato de 5-[[5-[4-(4-Fluoro-4-p¡per¡d¡l)-2-metox¡-fen¡ll-1H-p¡razol-3-¡llam¡nolp¡raz¡na 2-carbon¡tr¡lo

Se añad¡ó HCI 4N en d¡oxano (4 ml) a una soluc¡ón ag¡tada de 4-[3-[(5-c¡anop¡raz¡n-2-¡l)am¡nol-1H-p¡razol-5-¡ll-3-metox¡-fen¡ll-4-fluoro-p¡per¡d¡na-1-carbox¡lato de terc-but¡lo (0.37 g. 0.75 mmol) en una mezcla de MeCN seco (6 ml) y THF seco (10 ml) y la mezcla resultante se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. Los solventes se evaporaron a pres¡ón reduc¡da para dejar un sól¡do que se tr¡turó con EtOAc ( 3x2 ml) y se secó para dar el compuesto del título (0,30 g, 92%) como un sólido blanquecino.

64I. Clorhidrato de 5-[[5-[4-(4-fluoro-1-metil-4-piperidil)-2-metoxi-fenil1-1H-pirazol-3-il1amino1pirazina-2-carbonitrilo

A una suspensión agitada de clorhidrato de 5-[[5-[4-(4-fluoro-4-piperidil)-2-metoxi-fenil]-1H-pirazol-3-¡l]aiTi¡no]p¡raz¡na-2-carbon¡tr¡lo (0,10 g, 0,23 mmol) en una mezcla de MeOH (2 ml) y MeCN (8 ml) se le añadió diisopropiletilamina (0,08 ml, 0,46 mmol) y la mezcla se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. Se añadió formalina (37-41% p/v en agua; 0,014 g, 0,46 mmol) y la mezcla se agitó durante 20 minutos adicionales, después se enfrió a 0°C y se añadió NaBH(OAc)<3>(0,16 g, 0,74 mmol) en porciones durante 10 minutos. Se dejó que la mezcla calentase a temperatura ambiente y se agitó durante una hora más y luego se vertió en agua helada (30 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (4 x 25 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron (Na<2>SO<4>) y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice neutro usando MeOH/CHCh al 8% como eluyente para dejar un sólido blanquecino. El sólido se disolvió en una mezcla de THF (5 ml) y MeCN (5 ml) y se añadió una solución de HCI 4N en dioxano (0,5 ml) y la mezcla resultante se agitó durante una hora. Los solventes se evaporaron a presión reducida para dejar un sólido que se trituró con Et<2>O ( 3 x 5 ml) y se secó para dar el compuesto del título (80 mg, 45%) como un sólido blanquecino.

ACTIVIDAD BIOLÓGICA

EJEMPLO A

Actividad inhibidora de la quinasa Chk-1

Se probó la actividad del compuesto de la invención frente a la quinasa Chk-1 usando los materiales y protocolos que se exponen a continuación.

Tampón de reacción:

Tampón de reacción base: 20 mM de Hepes (pH 7,5), 10 mM de MgCh, 1 mM de EGTA, 0,02% de Brij35, 0,02 mg/ml de BSA, 0,1 mM de Na<a>VO<4>, 2 mM de DTT, 1% de DMSO

*Los cofactores necesarios se añaden individualmente a cada reacción de quinasa.

Procedimiento de reacción:

(i) Preparar el sustrato indicado en Tampón base de reacción recién preparado

(ii) Introducir cualquier cofactor necesario a la solución de sustrato anterior.

(iii) Introducir la quinasa indicada en la solución de sustrato y mezclar suavemente

(iv) Introducir los compuestos en DMSO en la mezcla de reacción de la quinasa.

(v) Introducir 33P-ATP (actividad específica 0,01 j C¡/j I final) en la mezcla de reacción para iniciar la reacción. (vi) Incubar la reacción de quinasa durante 120 minutos a temperatura ambiente.

(vii) Las reacciones se depositan sobre papel de intercambio iónico P81 (Whatman N° 3698-915).

(viii) Lavar los filtros abundantemente en ácido fosfórico al 0,1%.

(ix) Secar los filtros y medir los recuentos en un contador de centelleo.

Información sobre la quinasa:

CHK-1 - N° de Registro de Genbank AF016582

Constructo recombinante de longitud completa, etiquetado con GST N-terminal, purificado a partir de células de insecto.

Para activar esta quinasa no se adoptaron medidas especiales.

Concentración final en el ensayo = 0,5 nM

Substrato: CHKtide

Secuencia del péptido: [KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR]

Concentración final en el ensayo = 20|jM

A la mezcla de reacción no se añaden cofactores adicionales

A partir de los resultados obtenidos siguiendo el protocolo anterior, se determinaron los valores de IC<50>frente a la quinasa Chk-1 del compuesto del Ejemplo 64, que se muestran en la Tabla 3.

ND = No determinado

EJEMPLO B

Ensayo celular de combinación con gemcitabina

Se tratan células MIA PaCa-2 (ATCC CRL-1420) en crecimiento exponencial con tripsina para eliminar las células de la superficie de la placa. Se colocan aproximadamente 10.000 células/pocillo en placas de 96 pocillos en RPMI que contiene un 10% de suero bovino fetal, un 1% de piruvato sódico y un 1% de L-GlutaMax. Se deja que las células se adhieran a la superficie de la placa durante la noche. Se realizan diluciones en serie medio logarítmicas de los compuestos de prueba inhibidores de Chk1 y gemcitabina con una concentración final máxima de 3000nM y 100nM, respectivamente. Los inhibidores de Chk1 y la gemcitabina se combinan de tal manera que cada concentración de inhibidor de Chk1 se añade a cada concentración de gemcitabina. Cada fármaco también se prueba como agente individual. Los fármacos se añaden a las células adherentes (por duplicado) y se incuban durante 72h. A las 72h las células se tratan con el reactivo Promega Cell Titer Glo durante aproximadamente 15 minutos. La luminiscencia (unidades de luz relativas, RLU) se registra usando un lector de placas BMG Polarstar Omega. La concentración de agente único que da como resultado una reducción del 50% de la señal total (IC<50>) se calcula usando el software PRISM y un ajuste de curva de regresión no lineal de cuatro parámetros. Para los estudios de combinación, las RLU se trazan con PRISM en un gráfico XY con la concentración de gemcitabina en el eje X y las RLU en el eje Y. Las RLU para cada concentración de inhibidor de Chk1 se representan en función de la concentración de gemcitabina. La IC50 para gemcitabina sola y en cada concentración de Chk1 se determina usando un ajuste de curva de regresión no lineal de cuatro parámetros. Se calcula la concentración aproximada del inhibidor de Chk1 que da como resultado una reducción de dos y diez veces en la IC<50>de la gemcitabina sola como indicación de la potencia sinérgica.

A partir de los resultados obtenidos siguiendo el protocolo anterior, en la Tabla 4 se muestran los valores de IC<50>frente a células MIAPaca-2 del inhibidor de Chk1 solo (IC<50>de Chk1), la concentración aproximada de inhibidor de Chk1 que da como resultado una reducción de dos veces (2xLS) y de 10 veces (10xLS) en la IC<50>de gemcitabina sola del compuesto del Ejemplo 64.

EJEMPLO C FORMULACIONES FARMACÉUTICAS

(i) Formulación en comprimido

Una composición de comprimido que contiene un compuesto de la fórmula (1) se prepara mezclando 50 mg del compuesto con 197 mg de lactosa (BP) como diluyente, y 3 mg de estearato de magnesio como lubricante y comprimiendo para formar un comprimido de manera conocida.

(ii) Formulación en cápsula

Se prepara una formulación en cápsula mezclando 100 mg de un compuesto de la fórmula (1) con 100 mg de lactosa y llenando la mezcla resultante en cápsulas de gelatina dura opacas estándar.

(¡ii) Formulación inyectable I

Una composición parenteral para administración por inyección puede prepararse disolviendo un compuesto de la fórmula (1) (por ejemplo, en forma de sal) en agua que contenga un 10% de propilenglicol para dar una concentración de compuesto activo del 1,5% en peso. A continuación, la solución se esteriliza por filtración, se introduce en una ampolla y se sella.

(iv) Formulación inyectable II

Una composición parenteral inyectable se preparar disolviendo en agua un compuesto de la fórmula (1) (por ejemplo, en forma de sal) (2 mg/ml) y manitol (50 mg/ml), filtrando estérilmente la solución e introduciéndola en viales o ampollas de 1 ml sellables.

v) Formulación inyectable III

Una formulación para administración i.v. por inyección o infusión puede prepararse disolviendo el compuesto de fórmula (1) (por ejemplo, en forma de sal) en agua a 20 mg/ml. A continuación, se cierra el vial y se esteriliza en autoclave.

vi) Formulación inyectable IV

Una formulación para administración i.v. por inyección o infusión puede prepararse disolviendo el compuesto de fórmula (1) (por ejemplo, en forma de sal) en agua que contenga un tampón (por ejemplo, acetato 0,2 M pH 4,6) a 20 mg/ml. A continuación, se cierra el vial y se esteriliza en autoclave.

(vii) Formulación para inyección subcutánea

Una composición para administración subcutánea se prepara mezclando un compuesto de la fórmula (1) con aceite de maíz de calidad farmacéutica para obtener una concentración de 5 mg/ml. La composición se esteriliza y se introduce en un recipiente adecuado.

viii) Formulación liofilizada

Las alícuotas del compuesto formulado de fórmula (1) se introducen en viales de 50 ml y se liofilizan. Durante la liofilización, las composiciones se congelan usando un protocolo de congelación en un solo paso a (-45°C). La temperatura se eleva a -10°C para el apareamiento, luego se baja a congelación a -45°C, seguido de un secado primario a 25°C durante aproximadamente 3400 minutos, seguido de un secado secundario con pasos incrementados si temperatura a 50°C. La presión durante el secado primario y secundario se fija en 80 militor.

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. 5-[[5-[4-(4-fluoro-1-metil-4-piperidil)-2-metoxifenil]-1H-pirazol-3-il]amino]pirazina-2-carbonitrilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. 5-[[5-[4-(4-fluoro-1-metil-4-piperidil)-2-metoxifenil]-1H-pirazol-3-il]amino]pirazina-2-carbonitrilo.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

4. Una combinación que comprende un compuesto como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 y otro agente quimioterapéutico.

5. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el otro agente quimioterapéutico es un fármaco anticancerígeno.

6. Un compuesto como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 3 o una combinación como se define en la reivindicación 4 o 5 para su uso en medicina.

7. Un compuesto como se define en la reivindicación 1 o en la reivindicación 2, una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 3 o una combinación como se define en la reivindicación 5 para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

8. Un compuesto como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en combinación con otro agente quimioterapéutico o radioterapia, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa.