ES3038913T3 - Beta-carboline derivatives as dyrk1a inhibitors for the treatment of e.g. diabetes - Google Patents

Abstract

Se describen aquí compuestos con la siguiente estructura: fórmula (I) o un estereoisómero, sal, óxido o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma. También se describen composiciones que contienen los compuestos, métodos para inhibir la actividad de DYRK1A en una célula, métodos para aumentar la proliferación celular en una población de células beta pancreáticas, métodos para tratar a un sujeto con una afección asociada con la secreción insuficiente de insulina y métodos para tratar a un sujeto con un trastorno neurológico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de beta-carbolina como inhibidores de DYRK1A para el tratamiento de, por ejemplo, diabetes

Esta solicitud reivindica el beneficio prioritario de solicitud de patente provisional de Estados Unidos n.° de serie 62/645,560, presentada el 20 de marzo de 2018.

Esta invención se realizó con el apoyo del gobierno bajo la subvención número R01 DK105015 otorgada por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene ciertos derechos sobre la invención.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos inhibidores de quinasas y composiciones y métodos para su uso. Las referencias en la presente descripción a métodos de tratamiento médico o usos médicos deben entenderse como referencias a los compuestos de la presente invención para su uso en métodos de tratamiento médico. Los métodos de tratamiento médico o usos médicos no están abarcados por la invención reivindicada.

Antecedentes

Las quinasas reguladas por tirosina de doble especificidad ("DYRK") pertenecen a la familia CMCG de proteínas quinasas eucariotas que incluyen las quinasas similares a CDK (CLK), la glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK3), las quinasas dependientes de ciclina (CDK) y las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK). Las proteínas de la familia DYRK se autoactivan mediante la autofosforilación del residuo de tirosina conservado en el bucle de activación y luego fosforilan sustratos solo en residuos de serina y treonina (Lochhead et al., "Activation-Loop Autophosphorylation is Mediated by a Novel Transitional Intermediate Form of DYRKs," Cell 121(6): 925-936 (2005); Walte et al., "Mechanism of Dual Specificity Kinase Activity of DYRK1A," FEBS J. 280(18): 4495-4511 (2013); y Becker et al., "Activation, Regulation, and Inhibition of DYRK1A," FEBS J. 278(2): 246-256 (2011)). La familia DYRK tiene cinco subtipos, incluidos 1A, 1B, 2, 3 y 4. Entre ellos, DYRK1A es el subtipo más estudiado. Se expresa de forma ubicua y se ha demostrado que desempeña un papel importante en el desarrollo y el funcionamiento del cerebro (Becker et al., "DYRK1A: A Potential Drug Target for Multiple Down Syndrome Neuropathologies," CNS Neurol. Disord.: Drug Targets 13(1): 26-33 (2014)), enfermedades neurodegenerativas (Wegiel et al., "The Role of DYRK1A in Neurodegenerative Diseases," FEBS J. 278(2): 236-245 (2011) y Smith et al., "Recent Advances in the Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Selective DYRK1A Inhibitors: A New Avenue for a Disease Modifying Treatment of Alzheimer's?," ACS Chem. Neurosci. 3(11): 857-872 (2012)), tumorigenesis, apoptosis (Ionescu et al., "DYRK1A Kinase Inhibitors With Emphasis on Cancer," Mini-Rev. Med. Chem. 12(13): 1315-1329 (2012) y Fernandez-Martinez et al., "DYRK1A: The Double-Edged Kinase as a Protagonist in Cell Growth and Tumorigenesis," Mol. Cell. Oncol. 2(1): e970048 (2015)), y la proliferación de células p pancreáticas humanas (Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015); Shen et al., "Inhibition of DYRK1A and GSK3B Induces Human p-cell Proliferation," Nat. Commun. 6: 8372 (2015); Rachdi et al., "Dyrk1A Induces Pancreatic p Cell Mass Expansion and Improves Glucose Tolerance," Cell Cycle 13(14): 2221-2229 (2014); y Dirice et al., "Inhibition of DYRK1A Stimulates Human Beta-Cell Proliferation," Diabetes 65:(6):1660-1671 (2016)).

La expresión regulada de DYRK1A durante la vida fetal y postnatal, así como en adultos, es esencial para el desarrollo neuronal normal y la función cerebral. DYRK1A se encuentra en la región crítica del síndrome de Down (DSCR) en el cromosoma humano 21, una región genómica que tiene un papel importante en la patogénesis del síndrome de Down (DS), uno de los trastornos genéticos humanos más comunes y frecuentes (Becker et al., "Activation, Regulation, and Inhibition of DYRK1A," FEBS J. 278(2): 246-256 (2011) y Becker et al., "Structural and Functional Characteristics of Dyrk, a Novel Subfamily of Protein Kinases With Dual Specificity," Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 62: 1-17 (1999)). La sobreexpresión de DYRK1A en modelos de ratón y Drosophila imita las anomalías del desarrollo neurológico asociadas con el síndrome de Down (Becker et al., "DYRK1A: A Potential Drug Target for Multiple Down Syndrome Neuropathologies," CNS Neurol. Disord.: Drug Targets 13(1): 26-33 (2014); Wegiel et al., "The Role of DYRK1A in Neurodegenerative Diseases," FEBS J. 278(2): 236-245 (2011); Park et al., "Function and Regulation of Dyrk1A: Towards Understanding Down Syndrome," Cell. Mol. Life Sci. 66(20):3235-3240 (2009); y Ogawa et al., "Development of a Novel Selective Inhibitor of the Down Syndrome-Related Kinase Dyrk1A," Nat. Commun. 1: Artículo Número 86 (2010)). Evidencias recientes también implicaron a DYRK1A en la disfuncióntauy la patologíataude la enfermedad de Alzheimer (EA), la demencia con cuerpos de Lewy y la enfermedad de Parkinson (Wegiel et al., "The Role of DYRK1A in Neurodegenerative Diseases," FEBS J. 278(2): 236-245 (2011); Smith et al., "Recent Advances in the Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Selective DYRK1A Inhibitors: A New Avenue for a Disease Modifying Treatment of Alzheimer's?," ACS Chem. Neurosci. 3(11): 857-872 (2012); y Stotani et al., "DYRK1A Inhibition as Potential Treatment for Alzheimer's Disease," Future Med. Chem. 8(6): 681-696 (2016)).

Se ha informado que DYRK1A se sobreexpresa en varios tumores como el cáncer de ovario, el cáncer de colon, el cáncer de pulmón y el cáncer de páncreas, lo que indica su papel en la tumorigénesis y la proliferación celular descontrolada (Ionescu et al., "DYRK1A Kinase Inhibitors With Emphasis on Cáncer," Mini-Rev. Med. Chem.

12(13): 1315-1329 (2012) y Fernandez- Martínez et al., "DYRK1A: The Double-Edged Kinase as a Protagonist in Cell Growth and Tumorigenesis," Mol. Cell. Oncol. 2(1): e970048 (2015)). La inhibición de DYRK1A conduce a una desestabilización del EGFR y a una reducción del crecimiento tumoral dependiente del EGFR en el glioblastoma (Pozo et al., "Inhibition of DYRK1A Destabilizes EGFR and Reduces EGFR-Dependent Glioblastoma Growth," J. Clin. Invest. 123(6): 2475-2487 (2013)). Además, la inhibición de DYRK1A induce la activación de la caspasa-9, lo que conduce a una apoptosis masiva en tipos específicos de células cancerosas (Seifert et al., "DYRK1A Phosphorylates Caspase 9 at an Inhibitory Site and is Potently Inhibited in Human Cells by Harmine," FEBS J. 275(24): 6268-6280 (2008)).

A diferencia de su función en las células cancerosas, se ha demostrado que la inhibición de DYRK1A impulsa la proliferación de células p humanas, lo que la convierte en un objetivo terapéutico potencial para la regeneración de células p en la diabetes tipo 1 y tipo 2 (Wang et al.,"A High- Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015); Shen et al., "Inhibition of DYRK1A and GSK3B Induces Human p-cell Proliferation," Nat. Commun. 6: 8372 (2015); Rachdi et al., "DyrkIA Induces Pancreatic p Cell Mass Expansion and Improves Glucose Tolerance," Cell Cycle 13(14):2221-2229 (2014); y Dirice et al., "Inhibition of DYRK1A Stimulates Human Beta-cell Proliferation," Diabetes 65:(6):1660-1671 (2016)).Se ha propuesto que la inhibición de DYRK1A impulsa la proliferación de células p al inducir la translocación de la familia de factores de transcripción del factor nuclear de células T activadas (NFAT) al núcleo, lo que permite el acceso a los promotores de genes que posteriormente activan la proliferación de células p humanas (Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4):383-388 (2015) y Rachdi et al., "Dyrk1A Induces Pancreatic p Cell Mass Expansion and Improves Glucose Tolerance," Cell Cycle 13(14):2221-2229 (2014)).

Debido a su participación en enfermedades neurodegenerativas, cáncer y diabetes, DYRK1A ha atraído un interés creciente como posible objetivo terapéutico. Se ha realizado una cantidad significativa de trabajo no solo para comprender su papel subyacente en las enfermedades, sino también para identificar nuevos inhibidores de DYRK1A (Becker et al., "Activation, Regulation, and Inhibition of Dy Rk 1A," FEBS J. 278(2): 246-256 (2011); Becker et al., "DYRK1A: A Potential Drug Target for Multiple Down Syndrome Neuropathologies," CNS Neurol. Disord.: Drug Targets 13(1): 26-33 (2014); Wegiel et al., "The Role of DYRK1A in Neurodegenerative Diseases," FEBS J.278(2): 236-245 (2011); Smith et al., "Recent Advances in the Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Selective DYRK1A Inhibitors: A New Avenue for a Disease Modifying Treatment of Alzheimer's?," ACS Chem. Neurosci. 3(11): 857-872 (2012); Ionescu et al., "DYRK1A Kinase Inhibitors with Emphasis on Cancer," Mini-Rev. Med. Chem. 12(13): 1315-1329 (2012); Fernandez-Martinez et al., "DYRK1A: The Double-Edged Kinase as a Protagonist in Cell Growth and Tumorigenesis," Mol. Cell. Oncol.

2(1):e970048 (2015); Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of d Yr K1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015); Shen et al., "Inhibition of DYRK1A and GSK3B Induces Human p-cell Proliferation," Nat. Commun. 6:8372 (2015); y Dirice et al., "Inhibition of DYRK1A Stimulates Human Beta-cell Proliferation," Diabetes 65: (6): 1660-1671 (2016)).

Se han identificado, sintetizado y caracterizado varios inhibidores de DYRK1A. Además de la harmina, otros productos naturales que han demostrado inhibir la DYRK1A y otras quinasas son el EGCg y otros flavan-3-oles (Guedj et al., "Green Tea Polyphenols Rescue of Brain Defects Induced by Overexpression of DYRK1A," PLoS One 4(2) :e4606 (2009) y Bain et al., "The Specificities of Protein Kinase Inhibitors: An Update," Biochem. J.

371(1):199-204 (2003)), leucetinas (Tahtouh et al., "Selectivity, Cocrystal Structures, and Neuroprotective Properties of Leucettines, a Family of Protein Kinase Inhibitors Derived from the Marine Sponge Alkaloid Leucettamine B," J. Med. Chem. 55(21):9312-9330 (2012) y Naert et al., "Leucettine L41, a DYRK1A-preferential DYRKs/CLKs Inhibitor, Prevents Memory Impairments and Neurotoxicity Induced by Oligomeric Ap25-35 Peptide Administration in Mice," Eur. Neuropsychopharmacol. 25(11): 2170-2182 (2015)), quinalizarina (Cozza et al., "Quinalizarin as a Potent, Selective and Cell-permeable Inhibitor of Protein Kinase CK2," Biochem. J. 421(3): 387-395 (2009)), peltoginoides, Acanilol A y B (Ahmadu et al, "Two New Peltogynoids from Acacia nilotica Delile with Kinase Inhibitory Activity," Planta Med. 76(5): 458-460 (2010)), benzocumarinas (dNBC) (Sarno et al., "Structural Features Underlying the Selectivity of the Kinase Inhibitors NBC and dNBC: Role of a Nitro Group that Discriminates Between CK2 and DYRK1A," Cell. Mol. Life Sci. 69(3): 449-460 (2012)), e indolocarbazoles (Estaurosporina, rebecamicina, y sus análogos) (Sanchez et al., "Generation of Potent and Selective Kinase Inhibitors by Combinatorial Biosynthesis of Glycosylated Indolocarbazoles," Chem. Commun.

27: 4118-4120 (2009)). Entre los otros andamios identificados a partir de los intentos de descubrimiento de fármacos de moléculas pequeñas, INDY (Ogawa et al., "Development of a Novel Selective Inhibitor of the Down Syndrome-Related Kinase Dyrk1A," Nat. Commun. 1: Article Number 86 (2010)), DANDY (Gourdain et al., "Development of DANDYs, New 3,5-Diaryl-7-Azaindoles Demonstrating Potent DYRK1A Kinase Inhibitory Activity," J. Med. Chem. 56(23): 9569-9585 (2013)), FINDY (Kii et al., "Selective Inhibition of the Kinase DYRK1A by Targeting its Folding Process," Nat. Commun. 7:11391 (2016)), pirazolidina-dionas(Koo et al., "QSAR Analysis of Pyrazolidine-3,5-Diones Derivatives as Dyrk1A Inhibitors," Bioorg. Med. Chem. Lett.19(8):2324-2328 (2009); Kim et al., "Putative Therapeutic Agents for the Learning and Memory Deficits of People with Down Syndrome," Bioorg. Med. Chem. Lett. 16(14):3772-3776 (2006)), amino-quinazolinas (Rosenthal et al., "Potent and Selective Small Molecule Inhibitors of Specific Isoforms of Cdc2-Like Kinases (Clk) and Dual Specificity Tyrosine-Phosphorylation-Regulated Kinases (Dyrk)," Bioorg. Med. Chem. Lett.

21(10):3152-3158 (2011)), meriolinas (Giraud et al., "Synthesis, Protein Kinase Inhibitory Potencies, and In Vitro Antiproliferative Activities of Meridianin Derivatives," J. Med. Chem. 54(13): 4474-4489 (2011); Echalier et al., "Meriolins (3-(Pyrimidin-4-yl)-7-Azaindoles): Synthesis, Kinase Inhibitory Activity, Cellular Effects, and Structure of a CDK2/Cyclin A/Meriolin Complex," J. Med. Chem. 51(4): 737-751 (2008); y Akue-Gedu et al., "Synthesis and Biological Activities of Aminopyrimidyl-Indoles Structurally Related to Meridianins," Bioorg. Med. Chem.

17(13):4420-4424 (2009)), piridina y pirazinas (Kassis et al., "Synthesis and Biological Evaluation of New 3-(6-hydroxyindol-2-yl)-5-(Phenyl) Pyridine or Pyrazine V-Shaped Molecules as Kinase Inhibitors and Cytotoxic Agents," Eur. J. Med. Chem. 46(11): 5416-5434 (2011)), cromenoidoles (Neagoie et al., "Synthesis of Chromeno[3,4-b] indoles as Lamellarin D Analogues: A Novel DYRK1A Inhibitor Class," Eur. J. Med. Chem.

49:379-396 (2012)), ácidos 11H-indolo[3,2-c]quinolin-6-carboxílicos (Falke et al., "10-yodo-11H-Indolo[3,2-c]Quinoline-6-Carboxylic Acids are Selective Inhibitors of DYRK1A," J. Med. Chem. 58(7):3131-3143 (2015)), tiazolo[5,4-f]quinazolinas (EHT 5372) (Foucourt et al., "Design and Synthesis of Thiazolo[5,4-f] Quinazolines as DYRK1A Inhibitors, Part I.," Molecules 19(10):15546-15571 (2014) y Coutadeur et al., "A Novel DYRK1A (Dual Specificity Tyrosine Phosphorylation-Regulated Kinase 1A) Inhibitor for the Treatment of Alzheimer's Disease: Effect on Tau and Amyloid Pathologies In Vitro," J. Neurochem. 133(3): 440-451 (2015)), y 5-yodotubercidina (Dirice et al., "Inhibition of DYRK1A Stimulates Human Beta-cell Proliferation," Diabetes 65: (6):1660-1671 (2016) y Annes et al., "Adenosine Kinase Inhibition Selectively Promotes Rodent and Porcine Islet p-cell Replication," Proc. Natl. Acad. Sci. 109(10): 3915-3920 (2012)) mostró una potente actividad de DYRK1A con diversos grados de selectividad de quinasa. La mayoría de estos compuestos son inhibidores no selectivos de DYRK1A y presentan efectos secundarios farmacológicos, como actividad del CNS o apoptosis. En particular, se sabe que la harmina exhibe propiedades alucinógenas actuando como estimulante del CNS, debido a su afinidad por la serotonina, triptamina y otros receptores (Brierley et al., "Developments in Harmine Pharmacology-Implications for Ayahuasca Use and Drug-Dependence Treatment," Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiatry 39(2): 263-272 (2012) y Airaksinen et al., "Tremorigenic Effect and Inhibition of Tryptamine and Serotonin Receptor Binding by p-Carbolines," Pharmacol. Toxicol. (Copenhagen) 60(1), 5-8 (1987)). Los estudios han revelado múltiples efectos psicoactivos de la harmina, incluidos excitación, temblores, convulsiones y ansiedad (Fuentes et al., "Central Effects of Harmine, Harmaline, and Related p-Carbolines," Neuropharmacology 10(1): 15-23 (1971)).

Entre todos los inhibidores de DYRK1A, la harmina y sus análogos (p-carbolinas) son los más estudiados y siguen siendo la clase de inhibidores más potente y biodisponible por vía oral cubierta hasta la fecha (Becker et al.,"Activation, Regulation, and Inhibition of DY<r>K1A," FEBS J. 278(2):246-256 (2011) y Smith et al., "Recent Advances in the Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Selective DYRK1A Inhibitors: A New Avenue for a Disease Modifying Treatment of Alzheimer's?," ACS Chem. Neurosci. 3(11): 857-872 (2012)). Se ha descubierto que la harmina y varios análogos relacionados inhiben la fosforilación mediada por DYRK1A de la proteínatau,que se cree que es relevante para la EA y el SD (Frost et al., "p-Carboline Compounds, Including Harmine, Inhibit DYRK1A and Tau Phosphorylation at Multiple Alzheimer's Disease-Related Sites," PLoS One 6:5 e19264 (2011)).

La harmina también ha atraído un gran interés para la terapia contra el cáncer (Chen et al., "Antitumor and Neurotoxic Effects of Novel Harmine Derivatives and Structure-Activity Relationship Analysis," Int. J. Cancer 114(5): 675-682 (2005); Ishida et al., "Antitumor Agents 201.1 Cytotoxicity of Harmine and p-carboline Analogs," Bioorg. Med. Chem. Lett. 9(23):3319-3324 (1999); Cao et al., "Synthesis, Acute Toxicities, and Antitumor Effects of Novel 9-Substituted p-Carboline Derivatives," Bioorg. Med. Chem. 12(17):4613-4623 (2004); Cao et al., "Synthesis and Structure-Activity Relationships of Harmine Derivatives as Potential Antitumor Agents," Eur. J. Med. Chem. 60:135-143 (2013); y Zhang et al., "Synthesis and Mechanisms of Action of Novel Harmine Derivatives as Potential Antitumor Agents," Sci. Rep. 6:33204 (2016)). Utilizando modificaciones sistemáticas de la estructura, se han identificado varios análogos de harmina que muestran una potente actividad antitumoralin vitroein vivoa través de múltiples mecanismos de acción, incluida la inhibición de la topoisomerasa I (Cao et al., "DNA Binding Properties of 9-Substituted Harmine Derivatives," Biochem. Biophys. Res. Commun.

338(3):1557-1563 (2005) y Sobhani et al., "An In Vitro Evaluation of Human DNA Topoisomerase I Inhibition by Peganum harmala L. Seeds Extract and its p-Carboline Alkaloids," J. Pharm. Pharm. Sci. 5(1):18-22 (2002)), inhibición de las CDK (Song et al., "Specific Inhibition of Cyclin-Dependent Kinases and Cell Proliferation by Harmine," Biochem. Biophys. Res. Commun. 317(1):128-132 (2004)), inducción de apoptosis celular (Cao et al., "Harmine Induces Apoptosis in HepG2 Cells via Mitochondrial Signaling Pathway," Hepatobiliary Pancreatic Dis. Int. 10(6):599-604 (2011)), e intercalación de ADN (Taira et al., "Intercalation of Six p-Carboline Derivatives into DNA," Jpn. J. Toxicol. Environ. Health 43(2):83-91 (1997)).

La harmina también se identificó como una nueva clase de compuestos que causan una inducción de aproximadamente 10 a 15 veces en la proliferación de células p humanas, que está en el intervalo relevante para la expansión terapéutica de células p humanas (Wang et al., Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015)). DYRK1A se definió como el objetivo probable de la harmina a través del silenciamiento genético y otros estudios, probablemente trabajando a través de la familia NFAT de factores de transcripción como mediadores de la proliferación y diferenciación de las células p humanas (Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015)). Utilizando tres modelos diferentes de implantes de islotes en ratones, ratas y humanos, también se demostró que la harmina puede inducir la proliferación de células p, aumentar la masa de los islotes y mejorar el control glucémico en ratones y ratasin vivo(Wang et al., "A High-Throughput Chemical Screen Reveals That Harmine-Mediated Inhibition of DYRK1A Increases Human Pancreatic Beta Cell Replication," Nat. Med. 21(4): 383-388 (2015)).

Balint et al "Structure-Based Design and Synthesis of Harmine Derivatives with Different Selectivity Profiles in Kinase versus Monoamine Oxidase Inhibition". ChemMedChem 12: 932-939 (2017) se refiere a análogos de harmina con selectividad ajustable hacia DYRK1A y MAO-A. El compuesto 20-2b descrito en este documento se divulga en Balint et al. como el Compuesto 14.

Dado que DYRK1A y NFAT se expresan ampliamente fuera de las células p, se sabe que los análogos de harmina tienen efectos fuera del objetivo, lo que lleva a efectos secundarios farmacológicos, incluida la actividad sobre el CNS y antitumoral, lo que limita su utilidad terapéutica y el potencial para el desarrollo farmacéutico para una enfermedad crónica como la diabetes. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de desarrollar estrategias para identificar análogos de harmina selectivos con actividades limitadas fuera del objetivo tanto en las quinasas como en otros receptores. Se necesitan análogos de harmina selectivos optimizados para una administración específica y dirigida a la célula p.

La presente invención está dirigida a superar deficiencias en la técnica.

Resumen

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición que comprende un compuesto o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se describió anteriormente, y un vehículo. En diversas realizaciones, la composición puede comprender además un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp),

un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4).

En un tercer aspecto, la invención proporciona un compuesto o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se describió anteriormente, para su uso en el tratamiento de una afección asociada con una secreción insuficiente de insulina. En diversas realizaciones, el tratamiento puede comprender además la administración de un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp), un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4). En diversas realizaciones, la afección asociada con la secreción insuficiente de insulina puede ser diabetes tipo I (T1D), diabetes tipo II (T2D), diabetes gestacional, diabetes congénita, diabetes de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con fibrosis quística, diabetes relacionada con hemocromatosis, diabetes inducida por fármacos, diabetes monogénica, síndrome metabólico o resistencia a la insulina, o ha sido inducida por una pancreatectomía, trasplante de páncreas o trasplante de islotes pancreáticos.

En el presente documento se divulga un compuesto de fórmula (I) que tiene la siguiente estructura:

o un estereoisómero, sal, óxido o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

R1 es un alcoxi C1-6 ramificado o no ramificado opcionalmente sustituido con Y, - NHR5, -C(O)NHCH(CH3)2, o -O(CH2)2OR6, donde el alcoxi está opcionalmente halogenado o deuterado;

R2 es H, o alquilo C1-6, alquenilo C2-6, o alquinilo C2-6 ramificado o no ramificado, donde el alquilo C1-6, alquenilo C2-6, o alquinilo C2-6 ramificado o no ramificado está opcionalmente sustituido con Z;

R3 es alquilo C1-6, halógeno, hidroxialquilo C1.6 ramificado o no ramificado, -C(O)CH3, -OH, o heterociclilo opcionalmente sustituido con R7;

R4 es H, -OH, hidroxialquilo C1-6 ramificado o no ramificado, o -C(O)CH3;

R5 es H, -C(O)CH3, o -C(O)Ar;

R6 es alquilo C1-6 ramificado o no ramificado, -(CH2)2NHBoc, -(CH2)2NH(O)CH3, o -(CH2)2NH3Cl;

R7 es -ArX o -CH2ArX;

R8 es opcional y cuando está presente es O;

X es H o halógeno;

Y es -CO<2>CH<3>, -NHBoc, -C(O)NH<2>, -CO<2>H, -NH<3>Cl, -NHC(O)CH<3>; y

Z es -CO<2>CH<3>, -CO<2>H, -C(O)NH<2>, o un heteroarilo sustituido con amino seleccionado del grupo que consiste en furano, tiofeno, pirrol, oxazol, tiazol, imidazol, pirazol, isoxazol, isotiazol, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxadiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, tetrazol y 1,2,3,4-oxatriazol;

con las siguientes condiciones:

cuando R<1>es -OCH<3>, R<3>es -CH<3>, y R<4>es H, R<2>no puede ser -(CH<2>)<2>CO<2>CH<3>, - (CH<2>)<2>CO<2>H, o -(CH<2>)<2>C(O)NH<2>; cuando R<1>es -OCH<3>, R<2>es H, y R<4>es H, R<3>no puede ser -CH<2>OH o Cl; y

cuando R<1>es -OCH<3>, R<2>es H, R<3>es -CH<3>, R<4>no puede ser H.

También se describe en este documento un método para inhibir la actividad de la quinasa 1A regulada por fosforilación de tirosina de especificidad dual (DYRK1A) en una célula. Este método implica poner en contacto la célula con un compuesto de fórmula (I) en condiciones efectivas para inhibir la actividad de DYRK1A en la célula.

También se divulga en este documento un método para aumentar la proliferación celular en una población de células beta pancreáticas. Este método implica poner en contacto una población de células beta pancreáticas con un compuesto de fórmula (I) en condiciones efectivas para aumentar la proliferación celular en la población de células beta pancreáticas.

También se divulga en este documento una composición que comprende un compuesto de fórmula (I) y un vehículo.

También se divulga en este documento un método para tratar a un sujeto por una afección asociada con una secreción insuficiente de insulina. Este método implica administrar a un sujeto que necesita tratamiento para una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina, un compuesto o composición descritos en este documento, en condiciones efectivas para tratar al sujeto por dicha afección.

También se divulga en este documento un método para tratar a un sujeto por un trastorno neurológico. Este método implica administrar a un sujeto que necesita tratamiento para un trastorno neurológico un compuesto de fórmula (I) en condiciones efectivas para tratar la afección del sujeto.

Aunque se han realizado esfuerzos para descubrir inhibidores potentes y selectivos de DYRK1A, la mayoría de ellos todavía se encuentran en las primeras etapas de identificación de pistas.

En el presente documento se describe más adelante la identificación y evaluación de una clase altamente potente y novedosa de inhibidores de DYRK1A basados en harmina.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de un compuesto análogo de 1-amino harmina. Reactivos y condiciones: (a) NaNO<2>(1.03 eq.), HCl, 10 °C, 1 hora, (b) 2-oxopiperidina-3-carboxilato de etilo (1.05 eq.), KOH (1.2 eq.), agua, 150 °C, 5 horas; (c) ácido fórmico, reflujo, 1 hora; (d) DDQ (1.2 eq.), 1,4-dioxano, 0 °C-temperatura ambiente, 1 hora, 23 % (etapa 4); (e) POCI<3>, 150 °C, 24 horas, 79 %; (f) R<1>R<2>NH (10 eq.), 170 °C, 24 horas, 43-87%(para 1 -6b-1-6j); (g) Ruphos (1 %mol), RuPhos Precat (1 %mol), azetidina (1.2 eq.), LiHMDS (1 M en THF, 2.4 eq.), 90 °C, 96 horas, 12 % (para 1-6a).

La Figura 2 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de compuestos análogos de 1 -hidroximetil y 3-hidroximetil harmina. Reactivos y condiciones: (a) m-CPBA (3 eq.), Ch CI3, 70 °C, 12 horas, 47 %; (b) anhídrido de TFA (2.5 eq.), CH<2>CI<2>, reflujo, durante la noche, 49 %; (c) N<2>H<4>OH.HCI (1 eq.), MeOH, CHCI<3>, temperatura ambiente, 24 horas, 81 %; (d) 2-3 (1 eq.), K<2>CO<3>(5.5 eq.), DCM, temperatura ambiente, 24 horas, 34 %; (e) Polvo de Zn, AcOH, temperatura ambiente, durante la noche, 96 %; (f) Acetaldehído (1 eq.), TFA (5 %), DCM, temperatura ambiente, durante la noche; (g) S (2 eq.), xileno, reflujo, durante la noche, 75 %; (h) L iA lH (2 eq.), THF, temperatura ambiente, 12 horas, 91 %; (i) Et<a>SiH (16 eq.), PdCh (0.2 eq.), EtOH, 90 °C, 5 h, 27 %.

La Figura 3 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de compuestos análogos de 1-(1-hidroxi)etil y 1-acetil harmina. Reactivos y condiciones: (a(i)) aldehído pirúvico (1.2 eq.), TFA (5 %), DCM, temperatura ambiente, 12 horas; (a(ii)) KMnO<4>(4 eq.), THF, temperatura ambiente, 12 horas, 16 % (2 etapas); (b) NaBH<4>(2 eq.), MeOH, temperatura ambiente, 12 horas, 49 %.

Las Figuras 4A-4F demuestran los efectos de los compuestos análogos de harmina de la divulgación sobre la proliferación de células beta humanas. La Figura 4A es un gráfico que muestra los resultados de la evaluación inicial de análogos de harmina en la proliferación de células beta humanas a 10|jM. Se utilizó DMSO como control negativo y harmina como control positivo (n = 4). La Figura 4B son imágenes que muestran un ejemplo representativo de la Figura 4A de células doblemente positivas para Ki-67 e insulina inducidas por el análogo 2-8. Las Figuras 4C-4D son gráficos que muestran los resultados de las curvas de respuesta a la dosis para el compuesto 2-2 y el compuesto 2-8 en células p humanas (n = 4 para cada dosis). La Figura 4E es un gráfico que muestra la cuantificación de la frecuencia nuclear deNFATC1-GFPadenoviral en líneas celulares beta de roedores R7T1 tratadas con harmina, compuesto 2-2, y compuesto 2-8 (10<j>M, 24 horas; n = 3 para cada compuesto). La Figura 4F son un par de imágenes que muestran un ejemplo representativo del compuesto 2 8 (10<j>M, 24 h) que aumenta la frecuencia nuclear deNFATC1-GFPadenoviral en líneas de células beta de roedores R7T1. En todos los paneles relevantes, las barras de error indican sem *p < 0.05. Se contó un mínimo de 1,000 células beta para cada gráfico.

La Figura 5 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de compuestos análogos de harmina sustituidos en 7. Reactivos y condiciones: (a) AcOH, 48 % HBr, reflujo, 12 horas; (b) Cs<2>CO<3>(1.5 eq.), RBr (1.5 eq.), DMF, 50 °C, 12 horas; (c) NH<3>7 N en MeOH (20 eq.), 90 °C, 12 horas; (d) TFA/DCM (1:1), temperatura ambiente, 12 horas; (e) HCl 4 N en dioxano, dioxano, temperatura ambiente, 12 horas; (f) Anhídrido acético (1 eq), Et<3>N (2.2 eq.), DCM, temperatura ambiente, 12 horas; (g) TfO<2>(1.2 eq.), piridina, DCM, 0 °C-temperatura ambiente, 12 horas; (h) NaNO<2>(2 eq.), Pd<2>(dba)<3>(5 % mol), BrettPhos (12 % mol), TDA (5 % mol), t-BuOH, 150 °C, 24 horas; (i) 10 % en peso de Pd sobre C, N<2>H<4>.H<2>O (20 eq.), MeOH, reflujo, 2 horas; (j) Cloruro de benzoilo (1.05 eq.), Et<3>N (2 eq.), THF, 0 °C-temperatura ambiente, 12 horas; (k) Anhídrido acético (1.2 eq), Et<3>N (2 eq.), THF, temperatura ambiente, 24 horas; (1) Isopropilisocianato (1.1 eq.), DMF, temperatura ambiente, 12 horas.

La Figura 6 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de compuestos análogos de harmina sustituidos en 7. Reactivos y condiciones: (a) NaH (2 eq.), RBr (2 eq.), DMF, 50 °C, 12 horas; (b) NH<3>7 N en MeOH (20 eq.), 90 °C, 12 horas; (c) TFA/DCM (1:1), temperatura ambiente, 12 horas; (d) Et<3>SiH (8 eq.), Pd-C, MeOH, reflujo; (e) monohidrato de hidracina (20 eq.), MeOH, reflujo, 3 horas; (f) Anhídrido acético (1 eq), Et<3>N (2.2 eq.), d Cm , temperatura ambiente, 12 horas; (g) (i) formiato de etilo (0.5 eq.), EtOH, microondas, 150 °C, 30 minutos; (ii) LiAlH<4>(3 eq.), THF, reflujo, 4 horas; (h) formaldehido (2.5 eq.), NaCNBH<3>(5 eq.), EtOH, temperatura ambiente, 2 horas; (i) HATU (1.1 eq.), DI<p>E<a>(2 eq.), RNH<2>(1 eq.), D<m>F, temperatura ambiente, 12 horas; (j) NH<2>OH.HCI (1.5 eq.), Et<3>N (1.5 eq.), EtOH, reflujo, 12 horas; (k) CCI<3>COCI (1.2 eq.), piridina (4 eq.), tolueno, 85 °C, 24 horas; (1) NH<3>7 N en MeOH, temperatura ambiente, 12 horas; (m) (i) EtMgBr (2 eq.), Ti(OiPr)<4>(1.1 eq.), THF, temperatura ambiente, 1 hora; (ii) BF<3>.Et<2>O (2 eq.), temperatura ambiente, 1 hora; (n) AcOH:THF:H<2>O (16:4:4 mL), reflujo, 3 horas; (o) (i) TMSCN (1.2 eq.), Zn<h>(0.05 eq.), THF, reflujo, 12 horas; (ii) NH<3>7 N en MeOH, temperatura ambiente, 12 horas; (p) 1 N NaOH, H<2>O<2>(35 %), MeOH, temperatura ambiente, 1 hora; (q) (i) TMSCF<3>(1.2 eq.), TBAF (0.01 eq.), THF, 0 °C, temperatura ambiente, 12 horas; (ii) TBAF (0.1 eq.), agua (5.5 eq.), 0 °C, temperatura ambiente, 2 horas; (r) Tf<2>O (1.1 eq.), piridina (2 eq.), d Cm , -40 °C-temperatura ambiente, 12 horas; (s) Azida sódica (2 eq.), DMSO, 40 °C, 4 horas; (t) Pd-C (20 % mol), formiato de amonio (5 eq.), MeOH, reflujo, 3 horas; (u) HCl gaseoso, EtOH, temperatura ambiente, 12 horas; (v) Fosfonato de 2-oxopropil diazodimetilo (2 eq.), MeOH/THF (1:1), K<2>CO<3>(3 eq.), temperatura ambiente, 24 horas; (w) MeOCH<2>CH<2>N<3>(1.05 eq.), CuSO<4>.5H<2>O (0.01 eq.), Ascorbato de sodio (0.1 eq.), f-BuOH/agua, temperatura ambiente, 12 horas; (x) metil propargil éter (1 eq.), CuSO<4>.5H<2>O (0.1 eq.), ascorbato de sodio (0.1 eq.), t-BuOH/agua, temperatura ambiente, 12 horas; (y) n-BuLi (1.2 eq.), ZnCh (1.1 eq.), isocianato de tricloroacetilo (1.1 eq.), K<2>CO<3>(1.5 eq.), MeOH, THF, -20 °C-ta, 2 horas; (z) L iA lH (1.5 eq.), THF, reflujo, 6 horas.

La Figura 7 es una ilustración esquemática que muestra la síntesis de análogos de harmina 7-deuterometoxi. Reactivos y condiciones: (a) Cs<2>CO<3>(1.1 eq.), CD<3>I (1.1 eq.), DMF, temperatura ambiente, 12 horas; (b) NaH (2 eq.), bromuro de 4-bromoalquilnitrilo o propargilo (2 eq.), DMF, 50 °C, 12 horas; (c) H<2>O<2>(60 % en agua), K<2>CO<3>(0.15 eq.), DMSO, temperatura ambiente, 12 horas; (d) NH<2>OH.HCl (1.5 eq.), Et<3>N (1.5 eq.), EtOH, reflujo, 12 horas; (e) CC<h>COCl (1.2 eq.), tolueno, 85 °C, 24 horas; (f) NH<3>7 N en MeOH, temperatura ambiente, 12 horas; (g) acetaldehído (1 eq.), TFA, DCM, temperatura ambiente, 12 horas; (h) 10 % de paladio sobre carbono, LÍ2Co 3 (2 eq.), jW, 150 °C, 10 minutos.

Descripción detallada

La presente invención se expone en las reivindicaciones adjuntas. En un primer aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de acuerdo con la reivindicación 1 adjunta.

En el presente documento se divulgan compuestos inhibidores de quinasas y composiciones y métodos para su uso. Un aspecto de la divulgación se refiere a un compuesto de fórmula (I) que tiene la siguiente estructura:

o un estereoisómero, sal, óxido o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, como se estableció anteriormente. Como se utilizó anteriormente y en toda la descripción incluida aquí, los siguientes términos, a menos que se indique lo contrario, se entenderá que tienen los siguientes significados. A menos que se defina lo contrario en este documento, todos los términos técnicos y científicos utilizados aquí tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece esta tecnología.

El término "alcoxi" significa grupos de 1 a 6 átomos de carbono de configuración lineal, ramificada o cíclica y combinaciones de los mismos unidos a la estructura original a través de un oxígeno. Los ejemplos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclohexiloxi y similares. Alcoxi también incluye metilendioxi y etilendioxi en los que cada átomo de oxígeno está unido al átomo, cadena o anillo del que pende el grupo metilendioxi o etilendioxi de manera que forma un anillo. Por lo tanto, por ejemplo, el fenilo sustituido por alcoxi puede ser, por ejemplo,

El término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo. El término "halogenado" significa que contiene un sustituyente halógeno. Por lo tanto, por ejemplo, un alcoxi halogenado es un alcoxi sustituido con un halógeno.

El término "deuterado" significa que uno o más de los átomos de hidrógeno contenidos en el compuesto han sido reemplazados por su isótopo estable más pesado, el deuterio.

El término "ArX" significa Arilo-X, o un grupo arilo sustituido con H o un halógeno. El término "arilo" significa un sistema de anillo aromático monocíclico o multicíclico (policíclico) (incluidos los sistemas de anillos fusionados, puenteados o espiro) de 6 a aproximadamente 19 átomos de carbono, preferiblemente de 6 a aproximadamente 10 átomos de carbono, e incluye grupos arilalquilo. En el caso de un sistema de anillos multicíclico, solo uno de los anillos necesita ser aromático para que el sistema de anillos se defina como "arilo". El sistema de anillo del grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con halógeno. Los grupos arilo representativos incluyen, pero no se limitan a, grupos tales como fenilo, naftilo, azulenilo, fenantrenilo, antracenilo, fluorenilo, pirenilo, trifenilenilo, crisenilo y naftacenilo.

El término "alquilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que puede ser lineal o ramificado y que tiene de aproximadamente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena (o el número de carbonos designado por "C<n>-C<n>", donde n es el intervalo numérico de átomos de carbono). Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferiores, como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena de alquilo lineal. Los grupos alquilo ejemplares incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo y 3-pentilo.

El término "alquenilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene un doble enlace carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado y que tiene aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena, o de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferiores, como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena de alquenilo lineal. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen, sin limitación, etenilo, propenilo, n-butenilo e i-butenilo.

El término "alquinilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene un triple enlace carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado que tiene aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena, o de 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferiores, como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena de alquinilo lineal. Los grupos alquinilo ejemplares incluyen etinilo, propinilo, n-butinilo, 2-butinilo, 3-metilbutinilo y n-pentinilo.

El término "heterociclilo" se refiere a un anillo estable de 3 a 18 miembros (radical) de átomos de carbono y de uno a cinco heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. El heterociclilo puede ser un sistema de anillo monocíclico o policíclico, que puede incluir sistemas de anillo fusionados, puenteados o espiro; y los átomos de nitrógeno, carbono o azufre en el heterociclilo pueden estar opcionalmente oxidados; el átomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado; y el anillo puede estar parcial o totalmente saturado. Los ejemplos de dichos heterociclilos incluyen, sin limitación, azepinilo, azocanilo, piranilo dioxanilo, ditianilo, 1,3-dioxolanilo, tetrahidrofurilo, dihidropirrolidinilo, decahidroisoquinolilo, imidazolidinilo, isotiazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, octahidroindolilo, octahidroisoindolilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxoazepinilo, oxazolidinilo, oxiranilo, piperidinilo, piperazinilo, 4-piperidonilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, tiazolidinilo, tetrahidropiranilo, tiamorfolinilo, sulfóxido de tiamorfolinilo y tiamorfolinil sulfona.

El término "heteroarilo" significa un sistema de anillo monocíclico o multicíclico aromático de aproximadamente 5 a aproximadamente 14 átomos en el anillo, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, en el que uno o más de los átomos en el sistema de anillo es/son elemento(s) distintos del carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre. En el caso de sistemas de anillos multicíclicos, solo uno de los anillos necesita ser aromático para que el sistema de anillos se defina como "heteroarilo". El heteroarilo puede contener aproximadamente de 5 a 6 átomos en el anillo. El prefijo aza, oxa, tia o tio antes de heteroarilo significa que al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, está presente como átomo del anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo se oxida opcionalmente al N-óxido correspondiente. Los heteroarilos representativos incluyen piridilo, 2-oxo-piridinilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirazinilo, triazinilo, furanilo, pirrolilo, tiofenilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, indolilo, isoindolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, indolinilo, 2-oxoindolinilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotiofenilo, indazolilo, benzimidazolilo, benzooxazolilo, benzotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoisotiazolilo, benzotriazolilo, benzo[1,3]dioxolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinazolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinoxalinilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, benzo[1,2,3]triazinilo, benzo[1,2,4]triazinilo, 4H-cromenilo, indolizinilo, quinolizinilo, 6aH-tieno[2,3-d]imidazolilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, imidazo[1,2-a]piridinilo, pirazolo[1,5-a]piridinilo, [1,2,4]triazolo[4,3-a]piridinilo, [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridinilo, tieno[2,3-b] furanilo, tieno[2,3-b]piridinilo, tieno[3,2-b]piridinilo, furo[2,3-b]piridinilo, furo[3,2-b]piridinilo, tieno[3,2-c] pirimidinilo, furo[3,2-c]pirimidinilo, tieno[2,3-b]pirazinilo, imidazo[1,2-a]pirazinilo, 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]pirazinilo, 6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oxazinilo, 2-oxo-2,3-dihidrobenzo[d] oxazolilo, 3,3-dimetil-2-oxoindolinilo, 2-oxo-2,3-dihidro-1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, benzo [c][1,2,5]oxadiazolilo, benzo[c][1,2,5] tiadiazolilo, 3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazinilo, 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazinilo, [1,2,4] triazolo[4,3-a]pirazinilo, 3-oxo-[1,2,4]triazolo[4,3-a]piridin-2(3H)-ilo y similares.

Se describen otros heterociclilos y heteroarilos en Katritzky et al., eds., Comprehensive Heterocyclic Chemistry: The Structure, Reactions, Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds, Vol. 1-8, Pergamon Press, N.Y (1984).

Las frases "sustituido o no sustituido" y "opcionalmente sustituido" significan que un grupo puede (pero no necesariamente) tener un sustituyente en cada átomo sustituible del grupo (incluido más de un sustituyente en un solo átomo), y la identidad de cada sustituyente es independiente de los demás.

El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos de un átomo designado se reemplazan con una selección del grupo indicado, siempre que no se exceda la valencia normal del átomo designado. Los átomos "no sustituidos" portan todos los átomos de hidrógeno dictados por su valencia. Cuando un sustituyente es oxo (es decir, =O), entonces se reemplazan 2 hidrógenos en el átomo. Sin embargo, existen excepciones a estas reglas en el compuesto de fórmula (I), específicamente con respecto a los N-óxidos (es decir, cuando R<8>está presente como O). Las combinaciones de sustituyentes y/o variables sólo son permisibles si dichas combinaciones dan como resultado compuestos estables. Por "compuesto estable" se entiende un compuesto que es lo suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza a partir de una mezcla de reacción y formulación en un agente terapéutico eficaz.

El término "compuesto(s)" y expresiones equivalentes en relación con la presente invención significa compuestos de la invención y sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos, por ejemplo, hidratos de los mismos.

Los compuestos descritos en este documento pueden contener uno o más centros asimétricos y, por lo tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisómeras. Cada centro quiral puede definirse en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-. La presente invención pretende incluir todos esos isómeros posibles, así como sus mezclas, incluidas las formas racémicas y ópticamente puras. Los isómeros ópticamente activos (R)- y (S)-, (-)- y (+)-, o (D)- y (L)- se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o resolver utilizando técnicas convencionales. También se pretende incluir todas las formas tautoméricas.

La mención de "un compuesto" en relación con la presente divulgación pretende incluir sales, solvatos, óxidos y complejos de inclusión de ese compuesto, así como cualquier forma estereoisómera, o una mezcla, de cualquiera de dichas formas de ese compuesto en cualquier proporción. Por lo tanto, de acuerdo con algunas realizaciones, un compuesto como se describe en este documento, incluso en los contextos de composiciones farmacéuticas, métodos de tratamiento y compuestos de por sí, se proporciona en forma de sal.

El término "solvato" se refiere a un compuesto en estado sólido, donde las moléculas de un disolvente adecuado están incorporadas en la red cristalina. Un disolvente adecuado para la administración terapéutica es fisiológicamente tolerable a la dosis administrada. Ejemplos de disolventes adecuados para la administración terapéutica son el etanol y el agua. Cuando el agua es el disolvente, el solvato se denomina hidrato. En general, los solvatos se forman disolviendo el compuesto en el disolvente apropiado y aislando el solvato mediante enfriamiento o utilizando un antidisolvente. El solvato normalmente se seca o se convierte en azeótropo en condiciones ambientales.

Los complejos de inclusión se describen en Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed. 1: 176-177 (1995). Los complejos de inclusión más comúnmente empleados son aquellos con ciclodextrinas, y todos los complejos de ciclodextrina, naturales y sintéticos, están específicamente abarcados por la presente divulgación.

El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales preparadas a partir de ácidos o bases no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluidos ácidos y bases inorgánicos y ácidos y bases orgánicos.

El término "farmacéuticamente aceptable" significa que, dentro del alcance del criterio médico sólido, es adecuado para su uso en contacto con células de seres humanos y animales inferiores sin toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares, y que es proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<1>es un alcoxi C<1-6>ramificado o no ramificado. Por ejemplo, y sin limitación alguna, R<1>puede ser metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclohexiloxi. En una realización, el alcoxi C<1-6>no está ramificado. En otra realización, el alcoxi C<1-6>está ramificado. En una realización, el alcoxi C<1-6>ramificado o no ramificado está sustituido con Y, como se define en este documento (es decir, -CO<2>CH<3>, -NHBoc, -C(O)NH<2>, -CO<2>H, -NH<a>Cl, -NHC(O)CH<a>). En otra realización, el alcoxi C<1.6>ramificado o no ramificado está sustituido con -NHR<5>, -C(O)NHCH(CH<3>)<2>, o -O(CH<2>)<2>OR<6>. En una realización, el alcoxi está halogenado. En otra realización, el alcoxi está deuterado.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<2>es H. En otra realización, R<2>es alquilo C<1-6>ramificado o no ramificado, alquenilo C<2-6>ramificado o no ramificado, o alquinilo C<2-6>ramificado o no ramificado. El alquilo C<1-6>ramificado o no ramificado, alquenilo C<2-6>ramificado o no ramificado, o alquinilo C<2-6>ramificado o no ramificado está, en una realización, opcionalmente sustituido con Z, como se define en este documento.

En una realización el compuesto de fórmula (I), R<3>se selecciona de alquilo C<i -6>, halógeno, hidroxialquilo C<i -6>ramificado o no ramificado, -C(O)CH<3>, -OH, o heterociclilo opcionalmente sustituido con R<7>, tal como se define en este documento (es decir, -ArX o -CH<2>ArX).

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<4>se selecciona entre H, -OH, hidroxialquilo C<1-6>ramificado o no ramificado, o -C(O)CH<3>.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<5>es H, -C(O)CH<3>, o - C(O)Ar.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<6>es alquilo C<1-6>ramificado o no ramificado, -(CH<2>)<2>NHBoc, -(CH<2>)<2>NH(O)CH<3>, o -(CH<2>)<2>NH<3>Cl.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<7>es -ArX o -CH<2>ArX, donde "Ar" significa "arilo" como se define en este documento. "Arilo-X" significa un grupo arilo sustituido con H o un halógeno.

En una realización del compuesto de fórmula (I), R<8>es opcional y cuando está presente es O. Por lo tanto, cuando R<8>está presente, el compuesto de fórmula (I) es un N-óxido.

En una realización del compuesto de fórmula (I), X es H o halógeno.

En una realización del compuesto de fórmula (I), Y se selecciona entre los siguientes sustituyentes: -CO<2>CH<3>, -NHBoc, -C(O)NH<2>, -CO<2>H, -NH<3>C -NHC(O)CH<3>.

En una realización del compuesto de fórmula (I), Z es -CO<2>CH<3>, -CO<2>H, - C(O)NH<2>, o un heteroarilo sustituido con amino. Cuando Z es un heteroarilo sustituido con amino, los sustituyentes heteroarilo adecuados incluyen furano, tiofeno, pirrol, oxazol, tiazol, imidazol, pirazol, isoxazol, isotiazol, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxadiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, tetrazol y 1,2,3,4-oxatriazol.

Los compuestos de fórmula (I) tienen las siguientes condiciones:

cuando R<1>es -OCH<3>, R<3>es -CH<3>, y R<4>es H, R<2>no puede ser -(CH<2>)<2>CO<2>CH<3>, -(CH<2>)<2>CO<2>H, o -(CH<2>)<2>C(O)NH<2>; cuando R<1>es -OCH<3>, R<2>es H, y R<4>es H, R<3>no puede ser -CH<2>OH o Cl; y

cuando R<1>es -OCH<3>, R<2>es H, R<3>es -CH<3>, R<4>no puede ser H.

En una realización del compuesto de fórmula (I),

R<1>es -OCH<3>;

R<2>es alquilo C<1-6>ramificado o no ramificado sustituido con -CO<2>CH<3>;

R<3>es metilo; y

R<4>es H

De acuerdo con esta realización, R<2>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización del compuesto de fórmula (I),

R<1>es -OCH<3>;

R<2>es alquilo C<1>-<6>ramificado o no ramificado sustituido con -CO<2>H;

R<3>es metilo; y

R<4>es H.

De acuerdo con esta realización, R<2>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización más del compuesto de fórmula (I),

R1 es -OCH3;

R2 es alquilo C1-6 ramificado o no ramificado sustituido con -C(O)NH2;

R3 es metilo; y

R4 es H.

De acuerdo con esta realización, R2 se selecciona del grupo que consiste en

En una realización adicional del compuesto de fórmula (I),

R1 es -OCH3;

R2 es alquilo C1-6 ramificado o no ramificado sustituido con un heteroarilo sustituido con amino;

R3 es metilo; y

R4 es H.

En una realización específica, el heteroarilo sustituido con amino es 1,2,4-oxadiazol. De acuerdo con esta realización, R2 se selecciona del grupo que consiste en

En una realización adicional del compuesto de fórmula (I),

R<2>es H;

R<3>es metilo; y

R<4>es H.

De acuerdo con esta realización, R<1>es alcoxi C<1-6>sustituido con -CO<2>CH<3>. En realizaciones específicas, R<1>se selecciona del grupo que consiste en

y

En otra realización, R1 es alcoxi C1-6 sustituido con -NHBoc. En realizaciones específicas, R1 se selecciona del grupo que consiste en

En una realización adicional, R1 es alcoxi C1-6 sustituido con -C(O)NH2. En realizaciones específicas, R1 se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización más, R<1>es alcoxi C<1-6>sustituido con -CO<2>H. En realizaciones específicas, R<1>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización, R1 es alcoxi C1-6 sustituido con -NH3Cl. De acuerdo con esta realización, R1 puede seleccionarse del grupo que consiste en

En una realización, R1 es alcoxi C1-6 sustituido con -NHC(O)CH3. En realizaciones específicas, R1 se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización, R<1>es -NH<2>.

En una realización adicional, R<1>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización más, R1 es -O(CH2)2OR6 En realizaciones específicas, R1 se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización más, R<1>se selecciona de -OCD<3>o -OCF<3>.

En otra realización del compuesto de fórmula (I),

R<1>es -OCH<3>;

R<2>es H; y

R<4>es H.

Según esta realización, R<3>puede ser halógeno. En una realización particular, R<3>es Cl.

En otra realización, R<3>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización del compuesto de fórmula (I),

R<1>es -OCH<3>;

R<3>es metilo; y

R<4>es H.

Según esta realización, R<2>se selecciona del grupo que consiste en

En otra realización, el compuesto de fórmula (I) se selecciona del grupo que consiste en:

Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para inhibir la actividad de la quinasa 1A regulada por fosforilación de tirosina de especificidad dual (DYRK1A) en una célula. Este método implica poner en contacto la célula con un compuesto de fórmula (I) para inhibir la actividad de DYRK1A en la célula.

Según este aspecto, en una realización la célula es una célula de mamífero. Las células de mamífero pueden incluir células de, por ejemplo, ratones, hámsteres, ratas, vacas, ovejas, cerdos, cabras, caballos, monos y perros(porejemplo,Canis familiaris),gatos, conejos, cobayas y primates, incluidos los humanos. Por ejemplo, la célula puede ser una célula humana.

En una realización, la célula es una célula beta pancreática. Si es necesario, en la técnica se conocen métodos para determinar si una célula tiene un fenotipo de célula beta pancreática e incluyen, sin limitación, incubar la célula con glucosa y probar si la expresión de insulina en la célula aumenta o se induce. Otros métodos incluyen la prueba de si se expresan factores de transcripción específicos de las células beta, la detección de productos genéticos específicos de las células beta con la ayuda de PCR cuantitativa de ARN, el trasplante de una célula candidata en ratones diabéticos y la prueba posterior de la respuesta fisiológica después de dicho trasplante, así como el análisis de las células con microscopía electrónica.

En otra realización, la célula es una célula cancerosa.

En otra realización más, la célula es una célula neuronal.

Los métodos descritos en este documento pueden llevarse a caboex vivooin vivo.Cuando se lleva a caboex vivo,una población de células puede proporcionarse, según una realización, obteniendo células de un páncreas y cultivando las células en un medio líquido adecuado para el cultivoin vitrooex vivode células de mamíferos, en particular células humanas. Por ejemplo, y sin limitación, un medio de cultivo adecuado y no limitante puede basarse en un medio disponible comercialmente como RPMI1640 de Invitrogen.

Un aspecto adicional de la presente divulgación se refiere a un método para aumentar la proliferación celular en una población de células beta pancreáticas. Este método implica poner en contacto una población de células beta pancreáticas con un compuesto de fórmula (I) para aumentar la proliferación celular en la población de células beta pancreáticas.

En una realización, el contacto se lleva a cabo con una composición (es decir, una única composición) que comprende el compuesto.

El método puede implicar además poner en contacto la población de células beta pancreáticas con un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp). De acuerdo con esta realización, el método puede llevarse a cabo con una composición que comprende un compuesto de fórmula (I) y el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp. En otra realización, el compuesto de fórmula (I) y el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp se ponen en contacto por separado con una población de células beta pancreáticas de manera simultánea o en secuencia.

Los inhibidores de la vía de señalización de la superfamilia TGFp incluyen moléculas pequeñas y otros inhibidores (por ejemplo, anticuerpos monoclonales neutralizantes, inhibidores de péptidos sintéticos/recombinantes y ARNip) de la familia de receptores BMP, receptores de activina e inhibina y receptores GDF11 y receptores relacionados.

Los inhibidores de la vía de señalización de la superfamilia TGFp son conocidos en la técnica e incluyen, sin limitación, SB431542, SB505124, A-83-01, Decorina, receptor TGF-p soluble, lerdelimumab, metelimumab, AP-12009, Folistatina, FLRG, GAST-1, propéptido GDF8, MYO-029, Nogina, cordina, Cer/Dan, ectodina y Esclerostina (véase Tsuchida et al., "Inhibitors of the TGF-beta Superfamily and their Clinical Applications," Mini Rev. Med. Chem. 6(11): 1255-61(2006)).

Otros inhibidores de la señalización de TGF-p incluyen, sin limitación, 2-(3-(6-Metilpiridin-2-il)-1H-pirazol-4-il)-1,5-naftiridina; [3-(Piridin-2-il)-4-(4-quinoil)]-1H-pirazol; 3-(6-Metilpiridin-2-il)-4-(4-quinolil)-1-feniltiocarbamoil-1H-pirazol; SB-431542; SM16; SB-505124; y 2-(3-(6-Metilpiridin-2-il)-1H-pirazol-4-il)-1,5-naftiridina (Inhibidor II de Al K5) (véase la patente de los Estados Unidos n.° 8,298,825).

Los inhibidores de la señalización de TGF-p se describen en Callahan et al., "Identification of Novel Inhibitors of the Transforming Growth Factor p1 (TGF-p1) Type 1 Receptor (ALK5)," J. Med. Chem. 45:999-1001 (2002); Sawyer et al., "Synthesis and Activity of New Aryl- and Heteroaryl-substituted Pyrazole Inhibitors of the Transforming GroWth Factor-beta Type I Receptor Kinase Domain," J. Med. Chem. 46: 3953-3956 (2003); Gellibert et al., "Identification of 1,5-naphthyridine Derivatives as a Novel Series of Potent and Selective TGF-beta Type I Receptor Inhibitors," J. Med. Chem. 47: 4494-4506 (2004); Tojo et al., Cancer Sci. 96: 791-800 (2005); Valdimarsdottir et al., "Functions of the TGFbeta Superfamily in Human Embryonic Stem Cells," APMIS 113: 773-389 (2005); Petersen et al., "Oral Administration of GW788388, an Inhibitor of TGF-beta Type I and II Receptor Kinases, Decreases Renal Fibrosis," Kidney International 73: 705-715 (2008); Yingling et al., "Development of TGF-beta Signalling Inhibitors for Cancer Therapy," Nature Rev. Drug Disc. 3: 1011-1022 (2004); Byfield et al., "SB-505124 Is a Selective Inhibitor of Transforming Growth Factor-p Type Receptors ALK4, Al K5, and ALK7," Mol. Pharmacol. 65: 744-752 (2004); Dumont et al., "Targeting the Tg F Beta Signaling Network in Human Neoplasia," Cancer Cell 3: 531-536 (2003); publicación PCT n.° WO 2002/094833; publicación PCT n.° WO 2004/026865; publicación PCT n.° WO 2004/067530; publicación PCT n.° WO 2009/032667; publicación PCT n.° WO 2004/013135; publicación PCT n.° WO 2003/097639; publicación PCT n.° WO 2007/048857; publicación PCT n.° WO 2007/018818; publicación PCT n.° WO 2006/018967; publicación PCT n.° WO 2005/039570; publicación PCT n.° WO 2000/031135; publicación PCT n.° WO 1999/058128; patente de los Estados Unidos n.° 6,509,318; patente de los Estados Unidos n.° 6,090,383; patente de los Estados Unidos n.° 6,419,928; patente de los Estados Unidos n.° 9,927,738; patente de los Estados Unidos n.° 7,223,766; patente de los Estados Unidos n.° 6,476,031; patente de los Estados Unidos n.° 6,419,928; patente de los Estados Unidos n.° 7,030,125; patente de los Estados Unidos n.° 6,943,191; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2005/0245520; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2004/0147574; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2007/0066632; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2003/0028905; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2005/0032835; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2008/0108656; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2004/015781; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2004/0204431; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2006/0003929; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2007/0155722; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2004/0138188 y la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2009/0036382.

Los inhibidores ejemplares de la señalización de TGF-p incluyen, entre otros, AP-12009 (oligonucleótido antisentido del receptor de TGF-p tipo II), Lerdelimumab (CAT 152, anticuerpo contra el receptor de TGF-p tipo II), GC-1008 (anticuerpo contra todas las isoformas del TGF-p humano), ID11 (anticuerpo contra todas las isoformas del TGF-p murino), TGF-p soluble, receptor de TGF-p tipo II soluble, análogos de dihidropirroloimidazol. (por ejemplo, SKF-104365), análogos de triarilimidazol (por ejemplo, SB-202620 (ácido 4-(4-(4-fluorofenil)-5-(piridin-4-il)-1H-imidazol-2-il)benzoico) y SB-203580 (4-(4-fluorofenil)-2-(4-metilsulfinil fenil)-5-(4-piridil)-1H-imidazol)), RL-0061425, 1,5-naftiridina aminotiazol y derivados de pirazol (por ejemplo, 4-(6-metil-piridin-2-il)-5-(1,5-naftiridin-2-il)-1,3-tiazol-2-amina y 2-[3-(6-metil-piridin-2-il)-1H-pirazol-4-il]-1,5-naftiridina), SB-431542 (4-(5-Benzol[1,3]dioxol-5-il-4-piridin-2-il-1H-imidazol-2-il)-benzamida), GW788388 (4-(4-(3-(piridin-2-il)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)benzamida), A-83-01 (3-(6-metil-2-piridinil)-N-fenil-4-(4-quinolinil)-1H-pirazol-1 -carbotioamida), Decorina, Lefty 1, Lefty 2, Folistatina, Nogina, Cordina, Cerberus, Gremlina, Inhibina, BIO (6-bromo-indirrubin-3'-oxima), proteínas Smad (por ejemplo, Smad6, Smad7) y Cistatina C.

Los inhibidores de la señalización de TGF-p también incluyen moléculas que inhiben el receptor de TGF-p tipo I. Los inhibidores del receptor de TGF-p tipo I incluyen, pero no se limitan a, receptor de TGF-p tipo I soluble; AP-11014 (oligonucleótido antisentido del receptor de TGF-p tipo I); Metelimumab (CAT 152, anticuerpo del receptor de TGF-p tipo I); LY550410; LY580276 (3-(4-fluorofenil)-5,6-dihidro-2-(6-metilpiridin-2-il)-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol); LY364947 (4-[3-(2-piridinil)-1H-pirazol-4-il]-quinolina); LY2109761; LY573636 (N-((5-bromo-2-tienil)sulfonil)-2,4-diclorobenzamida);<s>B-505124 (2-(5-Benzo[1,3]dioxol-5-il-2-terc-butil-3H-imidazol-4-il)-6-metilpiridina); S<d>-208 (2-(5-Cloro-2-fluorofenil)-4-[(4-piridil)amino]pteridina); SD-093; KI2689; SM16; proteína FKBP12; y 3-(4-(2-(6-metilpiridin-2-il)H-imidazo[1,2-a]piridin-3-il)quinolin-7-iloxi)-N,N-dimetilpropan-1-amina.

Los inhibidores del receptor TGF-p tipo I se describen en Byfield y Roberts, Byfield and Roberts, "Lateral Signaling Enhances TGF-beta Response Complexity," Trends Cell Biol. 14: 107-111 (2004); Sawyer et al., "Synthesis and Activity of New Aryl- and Heteroaryl-substituted 5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazole Inhibitors of the Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Kinase Domain," Bioorg. Med. Chem. Lett. 14: 3581-3584 (2004); Sawyer et al., "Synthesis and Activity of New Aryl- and Heteroaryl-substituted Pyrazole Inhibitors of the Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Kinase Domain," J. Med. Chem. 46: 3953-3956 (2003); Byfield et al., "SB-505124 Is a Selective Inhibitor of Transforming Growth Factor-beta Type I Receptors ALK4, ALK5, and ALK7," Mol. Pharmacol. 65: 744-752 (2004); Gellibert et al., "Identification of 1,5-naphthyridine Derivatives as a Novel Series of Potent and Selective TGF-beta Type I Receptor Inhibitors," J. Med. Chem. 47: 4494-4506 (2004); Yingling et al., "Development of TGF-beta Signalling Inhibitors for Cancer Therapy," Nature Rev. Drug Disc. 3: 1011-1022 (2004); Dumont et al., "Targeting the TGF Signaling Network in Human Neoplasia," Cancer Cell 3: 531-536 (2003); Tojo et al., "The ALK-5 Inhibitor A-83-01 Inhibits Simad Signaling and Epithelial-to-mesenchymal Transition by Transforming Growth Factor-p," Cancer Sci. 96: 791-800 (2005) ; publicación PCT n.° WO 2004/026871; publicación PCT n.° WO 2004/021989; publicación PCT n.° WO 2004/026307; publicación PCT n.° WO 2000/012497; patente de los Estados Unidos n.° 5,731,424; patente de los Estados Unidos n.° 5,731,144; patente de los Estados Unidos n.° 7,151,169; publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2004/00038856 y la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2005/0245508.

En una realización, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp incluye compuestos que interfieren con los ligandos, receptores y/o moléculas de señalización secuencia abajo de la superfamilia TGFp (por ejemplo., SMAD) u objetivos nucleares (por ejemplo, complejos modificadores de cromatina y factores de transcripción).

En una realización, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp pueden ser antisueros que neutralizan, por ejemplo, el ligando TGFp.

En otra realización, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de la unión del receptor TGFp/TGFp, la unión del receptor de activina o inhibina/activina y la unión del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP)/BMP.

En una realización específica, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor de la unión del receptor TGFp/TGFp seleccionado del grupo que consiste en LY364947 y GW788388.

En otra realización específica, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor de la unión del receptor de activina o inhibina/activina seleccionado del grupo que consiste en SB431542 y el inhibidor II de Alk5. Se pueden seleccionar inhibidores ejemplares adicionales de la unión del receptor de activina o inhibina/activina del grupo que consiste en SB-505124, BYM388, folistatina, proteína relacionada con la folistatina (FSRP), dominios de folistatina (es decir, Fs2, Fs12, Fs123), A-83-01, Cripto, GW788388, BAMBI y Sotatercept (véase Byfield et al., "SB-505124 is a Selective Inhibitor of Transforming Growth Factor-Beta Type I Receptors ALK4, ALK5, and ALK7," Mol. Pharmacol. 65(3): 744-52 (2004); Lach-Trifilieffa et al., "An Antibody Blocking Activin Type II Receptors Induces Strong Skeletal Muscle Hypertrophy and Protects from Atrophy," Mol. Cell. Biol. 34(4): 606-18 (2014); Zhang et al., "Inhibition of Activin Signaling Induces Pancreatic Epithelial Cell Expansion and Diminishes Terminal Differentiation of Pancreatic p-Cells," Diabetes 53(8): 2024-33 (2004); Harrington et al., "Structural Basis for the Inhibition of Activin Signalling by Follistatin," EMBO J. 25(5): 1035-45 (2006) ; Tojo et al., "The ALK-5 Inhibitor A-83-01 Inhibits Smad Signaling and Epithelial-to-Mesenchymal Transition by Transforming Growth Factor-Beta," Cancer Sci. 96(11): 790-800 (2005); Yan et al., "Human bAm BI Cooperates with Smad7 to Inhibit Transforming Growth Factor-Beta Signaling," J. Biol. Chem. 284(44): 30097-104 (2009); Tan et al., "Targeted Inhibition of Activin Receptor-Like Kinase 5 Signaling Attenuates Cardiac Dysfunction Following Myocardial Infarction," Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 298(5): H1415-25 (2010); y Gokoffski et al., "Activin and GDF11 Collaborate in Feedback Control of Neuroepithelial Stem Cell Proliferation and Fate," Develop. 138(19): 4131-42 (2011)).

En otra realización específica, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor de la unión del receptor BMP/BMP. Un inhibidor ejemplar de la unión del receptor BMP/BMP es LDN193189. Se pueden seleccionar inhibidores de BMP ejemplares adicionales del grupo que consiste en nogina, Esclerostina, Cordina, CTGF, Folistatina, Gremlina, Inhibina, DMH1, DMH2, Dorsomorfina, K02288, LDN212854, DM 3189, BMP-3 y BAMBI (véase la publicación PCT n.° WO 2014/018691 y Mohedas et al., "Development of an ALK2-Biased BMP Type I Receptor Kinase Inhibitor," ACS Chem. Biol. 8(6): 1291-302 (2013); Yan et al., "Human BAMBI Cooperates with Smad7 to Inhibit Transforming Growth Factor-Beta Signaling," J. Biol. Chem. 284(44): 30097-104 (2009)).

Según otra realización, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor de la vía de señalización SMAD. Se pueden seleccionar inhibidores ejemplares de la vía de señalización de SMAD del grupo que incluye, sin limitación, ARNip de SMAD3, ARNip de SMAD 2/3, PD169316, SB203580, SB202474, inhibidor específico de Smad3 (SIS3), HSc025 y SB525334. (véase Qureshi et al., "Simad Signaling Pathway is a Pivotal Component of Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-3 Regulation by Transforming Growth Factor Beta in Human Chondrocytes," BBA Mol. Cell Res. 1783(9): 1605-12 (2008); Hasegawa et al., "A Novel Inhibitor of Smad-Dependent Transcriptional Activation Suppresses Tissue Fibrosis in Mouse Models of Systemic Sclerosis," Arthritis Rheum. 60(11): 3465-75 (2009); y Ramdas et al., "Canonical Transforming Growth Factorp Signaling Regulates Disintegrin Metalloprotease Expression in Experimental Renal Fibrosis via miR-29," Am. J. Pathol. 183(6): 1885-96 (2013)).

Los inhibidores adicionales de la vía de señalización de SMAD ejemplares incluyen, sin limitación, miR-100, LDN 193189, aptámeros de péptidos de unión a SMAD (por ejemplo, Trx-FoxH1, Trx-Le1, Trx-CBP, Trx-SARA), pirfenidona y LDN193189 (véase, Fu et al., "MicroRNA-100 Inhibits Bone Morphogenetic Protein-Induced Osteoblast Differentiation by Targeting Smad," Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 20(18): 3911-19 (2016); Boergermann et al., "Dorsomorphin and LDN-193189 Inhibit BMPMediated Smad, p38 and Akt signalling in C2C12 Cells," Int. J. Biochem. Cell Biol. 42(11): 1802-7 (2010); Cui et al., "Selective Inhibition of TGF-Responsive Genes by Smad-Interacting Peptide Aptamers from FoxH1, Lef1 and CBP," Oncogene 24: 3864-74 (2005); Zhao et al., "Inhibition of Transforming Growth Factor-Beta1-Induced Signaling and Epithelial-to-Mesenchymal Transition by the Smad-Binding Peptide Aptamer Trx-SARA," Mol. Biol. Cell 17: 3819-31 (2006); Li et al., "Oral Pirfenidone Protects Against Fibrosis by Inhibiting Fibroblast Proliferation and TGF-p Signaling in a Murine Colitis Model," Biochem. Pharmacol. 117: 57-67 (2016); y Cook et al., "BMP Signaling Balances Murine Myeloid Potential Through SMAD-Independent p38MAPK and NOTCH Pathways," Blood 124(3): 393-402 (2014)).

En otra realización específica, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor del complejo trithorax. Los inhibidores del complejo trithorax ejemplares incluyen, sin limitación, WDR5-0103, MI-1, MI-2, MI-2-2, MLS001171971-01, ML227, MCP-1, ARNip RBB5 y ARNip MLL1. (véase Senisterra et al., "Small-Molecule Inhibition of MLL Activity by Disruption of its Interaction with WDR5," Biochem. J. 449(1): 151-9 (2013); Cierpicki et al., "Challenges and Opportunities in Targeting the Menin-MLL Interaction, "Future Med. Chem. 6(4): 447-62 (2014); Lee et al., "Roles of DPY30 in the Proliferation and Motility of Gastric Cancer Cells," PLOS One 10(7): e0131863 (2015); y Zhou et al., "Combined Modulation of Polycomb and Trithorax Genes Rejuvenates p Cell Replication," J. Clin. Invest. 123(11): 4849-4858 (2013)).

En otra realización, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp es un inhibidor del complejo represor polycomb 2 ("PRC2"). Los ejemplos de inhibidores de<p>R<c>2 incluyen GSK926, EPZ005687, GSK126, g Sk 343, E11, UNC1999, EPZ6438, Compuesto 3 Constellation, ARNip EZH2 y 3-deazaneplanocina A. /véase Verma et al., "Identification of Potent, Selective, Cell-Active Inhibitors of the Histone Lysine Methyltransferase EZH2," ACS Med. Chem. Lett. 3: 1091-6 (2012); Xu et al., "Targeting EZH2 and PRc 2 Dependence as Novel Anticancer Therapy," Exp. Hematol. 43: 698-712 (2015); Knutson et al., "A Selective Inhibitor of EZH2 Blocks H3K27 Methylation and Kills Mutant Lymphoma Cells," Nat. Chem. Biol. 8: 890-6 (2012); Qi et al., "Selective Inhibition of Ezh2 by a Small Molecule Inhibitor Blocks Tumor Cells Proliferation," Proc. Natl Acad. Sci. USA 109: 21360-65 (2012); McCabe et al., "EZH2 Inhibition as a Therapeutic Strategy for Lymphoma with EZH2-Activating Mutations," Nature 492: 108-12 (2012); Nasveschuk et al., "Discovery and Optimization of Tetramethylpiperidinyl Benzamides as Inhibitors of EZH2," ACS Med. Chem. Lett. 5: 378-83 (2014); Brooun et al., "Polycomb Repressive Complex 2 Structure with Inhibitor Reveals a Mechanism of Activation and Drug Resistance," Nature Comm. 7: 11384 (2016); Fiskus et al., "Histone Deacetylase Inhibitors Deplete Enhancer of Zeste 2 and Associated Polycomb Repressive Complex 2 Proteins in Human Acute Leukemia Cells," Mol. Cancer Ther. 5(12): 3096-104 (2006); y Fiskus et al., "Combined Epigenetic Therapy with the Histone Methyltransferase EZH2 Inhibitor 3-Deazaneplanocin A and the Histone Deacetylase Inhibitor Panobinostat Against Human AML Cells," Blood 114(13): 2733-43 (2009). El método puede implicar además poner en contacto la población de células beta pancreáticas con un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV ("DPP4"). De acuerdo con esta realización, el método puede llevarse a cabo con una composición que comprende un compuesto como se divulga o reivindica en este documento y el agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o el inhibidor de DPP4 y, opcionalmente, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp. En otra realización, el compuesto de fórmula (I), el agonista de GLP1R o el inhibidor de DPP4 y, opcionalmente, el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp entran en contacto cada uno con la población de células beta pancreáticas simultáneamente o en secuencia.

Los agonistas del receptor del péptido-1 similar al glucagón imitan los efectos de la hormona incretina GLP-1, que se libera del intestino en respuesta a la ingesta de alimentos. Sus efectos incluyen aumentar la secreción de insulina, disminuir la liberación de glucagón, aumentar la saciedad y retardar el vaciamiento gástrico. Un enfoque alternativo para mejorar las concentraciones de GLP1 en la sangre es la prevención de su degradación por la enzima dipeptidil peptidasa IV ("DPP4"). Los agonistas del receptor GLP1 y los inhibidores de DPP4 se encuentran entre los fármacos más utilizados para el tratamiento de la diabetes tipo 2 (Campbell et al., "Pharmacology, Physiology and Mechanisms of Incretin Hormone Action, "Cell Metab. 17: 819-37 (2013); Guo X-H., "The Value of Short- and Long-Acting Glucagon-Like Peptide Agonists in the Management of Type 2 Diabetes Mellitus: Experience with Exenatide," Curr. Med. Res. Opinión 32(1): 61-76 (2016); Deacon et al., "Dipeptidyl Peptidase-4 Inhibitors for the Treatment of Type 2 Diabetes: Comparison, Efficacy and Safety," Expert Opinion on Pharmacotherapy 14: 2047-58 (2013); Lovshin, "Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Agonists: A Class Update for Treating Type 2 Diabetes," Can. J. Diabetes 41: 524-35 (2017); y Yang et al., "Lixisenatide Accelerates Restoration of Normoglycemia and Improves Human Beta Cell Function and Survival in Diabetic Immunodeficient NOD-scid IL2rg(null) RIP-DTR Mice Engrafted With Human Islets," Diabetes Metab. Syndr. Obes. 8: 387-98 (2015)).

Los agonistas de GLP1R adecuados incluyen, por ejemplo y sin limitación, exenatida, liraglutida, exenatida LAR, taspoglutida, lixisenatida, albiglutida, dulaglutida y semaglutida. Exenatide y Exenatide LAR son análogos sintéticos de la exendina-4 obtenidos de la saliva de laHeloderma suspectum(lagarto). La liraglutida es un análogo acilado de GLP-1 que se autoasocia en una estructura heptamérica que retrasa la absorción desde el sitio de inyección subcutánea. La taspoglutida comparte un 3 % de homología con el GLP-1 nativo y es totalmente resistente a la degradación de DPP-4. Lixisenatida es un agonista de GLP1R humano. Albiglutida es un mimético de GLP-1 de acción prolongada, resistente a la degradación de DPP-4. Dulaglutida es un análogo de GLP1 de acción prolongada. Semaglutida es un agonista de GLP1R aprobado para el uso en pacientes con T2D. Los agonistas de GLP1R clínicamente disponibles incluyen, por ejemplo, exenatida, liraglutida, albiglutida, dulaglutida, lixisenatida, semaglutida.

En algunas realizaciones de los métodos y composiciones divulgados o reivindicados en este documento, el agonista de GLP1R se selecciona del grupo que consiste en GLP1(7-36), análogos de GLP1, extendina-4, liraglutida, lixisenatida, semaglutida y combinaciones de los mismos.

Los agonistas de GLP1 adecuados adicionales incluyen, sin limitación, compuestos de 7-aril-5,5-bis(trifluorometil)-5,8-dihidropirimido[4,5-d]pirimidina-2,4(1H,3H)-diona disustituidos y derivados de los mismos, por ejemplo, 7-(4-clorofenil)-1,3-dimetil-5,5-bis(trifluorometil)-5,8-dihidropirimido[4,5-d]pirimidina-2,4(1H,3H)-diona (véase, por ejemplo, Nance et al., "Discovery of a Novel Series of Orally Bioavailable and CNS Penetrant Glucagon-like Peptide-1 Receptor (GLP-1R) Noncompetitive Antagonists Based on a 1,3-Disubstituted-7-aryl-5,5-bis(trifluoromethyl)-5,8-dihydropyrimido[4,5-d]pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione Core," J. Med. Chem. 60: 1611-1616 (2017)).

Otros agonistas de GLP1 adecuados incluyen moduladores alostéricos positivos ("PAMS") de GLP1R, por ejemplo, (S)-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a] indol -4-carboxamida; 2-ciclopentil-N-(((S)-1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirazino [1,2-a]indol-4-carboxamida; N-(((S)-1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-2-((S)-tetrahidro furan-3-il) -1.2- dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; N-(((R)-1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-2-((S)-tetrahidrofuran-3-il)-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-2-ciclopentil-8-fluoro-N-((1-isopropil pirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-2-ciclopentil-8-fluoro-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-2-ciclopentil-N-(((S)-1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro pirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-2-ciclopentil-N-(((S)-1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2,3,4-tetrahidropirazino [1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-10-cloro-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol -4-carboxamida; (R)-10-cloro-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a] indol-4-carboxamida; (S)-10-bromo-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1-oxo-1,2-dihidropirazino [1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-10-bromo-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1-oxo-1,2-dihidro pirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-2-fenil-1,2-dihidro pirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-10-ciano-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1 -oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-2-ciclopentil-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-1 -oxo-10-vinil-1.2- dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (S)-N-((1-isopropil pirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-2-(piridin-3-il)-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; (R)-N-((1-isopropilpirrolidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-2-(piridin-3-il)-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; N-(azetidin-2-ilmetil)-2-ciclopentil-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; y 2-ciclopentil-N-((1-isopropilazetidin-2-il)metil)-10-metil-1-oxo-1,2-dihidropirazino[1,2-a]indol-4-carboxamida; o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos (véase la publicación p Ct n.° WO 2017/117556).

Los inhibidores de DPP4 adecuados incluyen, sin limitación, sitagliptina, vildagliptina, saxagliptina, alogliptina, teneligliptina y anagliptina.

Según una realización, las "células beta pancreáticas" son células beta pancreáticas humanas primarias.

En una realización de este y otros métodos descritos en este documento, el contacto no induce la muerte de células beta ni daño al ADN. Además, el contacto puede inducir la diferenciación de las células beta y aumentar la secreción de insulina estimulada por la glucosa.

En otra realización, el método se lleva a cabo para mejorar la supervivencia celular. Por ejemplo, el método puede llevarse a cabo para mejorar la supervivencia celular de una población de células tratadas en relación con una población de células no tratadas. Alternativamente, el método puede llevarse a cabo para disminuir la muerte celular o la apoptosis de una población de células tratadas en relación con una población de células no tratadas.

Un aspecto adicional de la presente divulgación se refiere a una composición que comprende un compuesto de fórmula (I) y un vehículo. Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende un compuesto y un vehículo como se establece en la reivindicación 5 adjunta.

En realizaciones de la presente invención y divulgación, la composición puede comprender además un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp).

En otras realizaciones, la composición puede comprender además un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4).

El portador puede ser un portador farmacéuticamente aceptable.

Si bien es posible que los compuestos divulgados o reivindicados en este documento se administren como compuestos químicos sin procesar, puede ser preferible presentarlos como una composición farmacéutica. De acuerdo con una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se divulga o reivindica en este documento o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más vehículos farmacéuticos del mismo y opcionalmente uno o más de otros ingredientes terapéuticos.

El o los vehículos deben ser “aceptables” en el sentido de ser compatibles con los demás ingredientes de la formulación y no ser perjudiciales para el receptor de los mismos. Además, a pesar de las declaraciones contenidas en este documento respecto al término "compuesto" incluyendo también sus sales, de modo que las reivindicaciones independientes que mencionen "un compuesto" se entenderán como referencias también a sus sales, si en una reivindicación independiente se hace referencia a un compuesto o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se entenderá que las reivindicaciones que dependen de esa reivindicación independiente que se refieren a dicho compuesto también incluyen las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto, incluso si no se hace referencia explícita a las sales en la reivindicación dependiente.

Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, parenteral (incluida subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa e intraarticular), rectal y tópica (incluida dérmica, bucal, sublingual e intraocular). La vía más adecuada puede depender de la afección y el trastorno del receptor. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Dichos métodos incluyen la etapa de asociar un compuesto como se divulga o reivindica en este documento o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo ("ingrediente activo") con el vehículo, que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando de manera uniforme e íntima el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos y luego, si es necesario, moldeando el producto hasta obtener la formulación deseada.

Las formulaciones adecuadas para administración oral pueden presentarse como unidades discretas, tales como cápsulas, cápsulas lisas o tabletas, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como polvo o gránulos; como solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también puede presentarse en forma de bolo, electuario o pasta.

Una tableta puede fabricarse por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre, tal como un polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente lubricante, tensioactivo o dispersante. Las tabletas moldeadas se pueden fabricar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Las tabletas pueden estar opcionalmente recubiertas o ranuradas y pueden formularse de manera que proporcionen una liberación sostenida, retardada o controlada del ingrediente activo que contienen.

Las composiciones farmacéuticas pueden incluir un "vehículo inerte farmacéuticamente aceptable", y esta expresión pretende incluir uno o más excipientes inertes, que incluyen, por ejemplo y sin limitación, almidones, polioles, agentes de granulación, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares. Si se desea, las dosis en tabletas de las composiciones divulgadas se pueden recubrir mediante técnicas acuosas o no acuosas estándar. "Vehículo farmacéuticamente aceptable" también abarca medios de liberación controlada.

Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir opcionalmente otros ingredientes terapéuticos, agentes antiaglomerantes, conservantes, agentes edulcorantes, colorantes, saborizantes, desecantes, plastificantes, tintes y similares. Cualquier ingrediente opcional debe ser compatible con el compuesto de fórmula (I) o de la invención para asegurar la estabilidad de la formulación. La composición puede contener otros aditivos según sea necesario, incluidos, por ejemplo, lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, almidón, xilitol, manitol, mioinositol y similares, e hidratos de los mismos, y aminoácidos, por ejemplo, alanina, glicina y betaína, y péptidos y proteínas, por ejemplo, albúmina.

Los ejemplos de excipientes para uso como vehículos farmacéuticamente aceptables y vehículos inertes farmacéuticamente aceptables y los ingredientes adicionales mencionados anteriormente incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, rellenos, desintegrantes, lubricantes, agentes antimicrobianos y agentes de recubrimiento.

Los intervalos de dosis para humanos adultos varían, pero generalmente pueden ser de aproximadamente 0.005 mg a 10 g/día por vía oral. Las tabletas u otras presentaciones en unidades discretas pueden contener convenientemente una cantidad del compuesto de fórmula (I) o según se reivindica, que sea eficaz a dicha dosis o como un múltiplo de la misma; por ejemplo, unidades que contengan de 5 mg a 500 mg, o de alrededor de 10 mg a 200 mg. La cantidad exacta del compuesto administrada al paciente será responsabilidad del médico tratante. Sin embargo, la dosis empleada dependerá de varios factores, entre ellos la edad y el sexo del paciente, el trastorno específico que se esté tratando y su gravedad.

Una unidad de dosificación (por ejemplo, una unidad de dosificación oral) puede incluir, por ejemplo, de 1 a 30 mg, de 1 a 40 mg, de 1 a 100 mg, de 1 a 300 mg, de 1 a 500 mg, de 2 a 500 mg, de 3 a 100 mg, de 5 a 20 mg, de 5 a 100 mg.(porejemplo, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg) de un compuesto descrito en este documento.

Información adicional sobre las composiciones farmacéuticas y su formulación se describe en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2000.

Los agentes pueden administrarse, por ejemplo, mediante inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección subcutánea, inyección intraperitoneal, tópica, sublingual, intraarticular (en las articulaciones), intradérmica, bucal, oftálmica (incluida la intraocular), intranasal (incluido el uso de una cánula) o por otras vías. Los agentes pueden administrarse por vía oral, por ejemplo, como una tableta o comprimido que contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo, gel, píldora, pasta, jarabe, bolo, electuario, suspensión, cápsula, polvo, gránulos, como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso, como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite, a través de una formulación micelar (véase, por ejemplo, la publicación PCT n.° WO 97/11682) a través de una formulación liposomal (véase, por ejemplo, la patente EP n.° 736299, publicación PCT n.° WO 99/59550, y la publicación PCT n.° WO 97/13500), a través de formulaciones descritas en la publicación PCT n.° WO 03/094886 o en alguna otra forma. Los agentes también pueden administrarse por vía transdérmica (es decir, mediante parches tipo reservorio o tipo matriz, microagujas, poración térmica, agujas hipodérmicas, iontoforesis, electroporación, ultrasonido u otras formas de sonoforesis, inyección a chorro o una combinación de cualquiera de los métodos anteriores (Prausnitz et al., "Current Status and Future Potential of Transdermal Drug Delivery," Nature Reviews Drug Discovery 3: 115 (2004)). Los agentes pueden administrarse localmente.

Los agentes pueden administrarse en forma de supositorio o por otros medios vaginales o rectales. Los agentes se pueden administrar en una formulación transmembrana como se describe en la publicación PCT n.° WO 90/07923. Los agentes pueden administrarse de forma no invasiva a través de las partículas deshidratadas descritas en la patente de los Estados Unidos n.° 6,485,706. Los agentes se pueden administrar en una formulación de fármaco con recubrimiento entérico como se describe en la publicación PCT n.° WO 02/49621. Los agentes pueden administrarse por vía intranasal utilizando la formulación descrita en la patente de los Estados Unidos n.° 5,179,079. Las formulaciones adecuadas para inyección parenteral se describen en la publicación PCT n.° WO 00/62759. Los agentes se pueden administrar utilizando la formulación de caseína descrita en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2003/0206939 y la publicación PCT n.° WO 00/06108. Los agentes se pueden administrar utilizando las formulaciones particuladas descritas en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 20020034536.

Los agentes, solos o en combinación con otros componentes adecuados, pueden administrarse por vía pulmonar utilizando varias técnicas que incluyen, entre otras, instilación intratraqueal (administración de solución a los pulmones mediante una jeringa), administración intratraqueal de liposomas, insuflación (administración de formulación en polvo mediante una jeringa o cualquier otro dispositivo similar a los pulmones) e inhalación de aerosol. Aerosoles (por ejemplo, nebulizadores ultrasónicos o de chorro, inhaladores de dosis medida ("MDI") e inhaladores de polvo seco ("DPI")) también se pueden utilizar en aplicaciones intranasales. Las formulaciones de aerosol son dispersiones o suspensiones estables de material sólido y gotitas de líquido en un medio gaseoso y se pueden colocar en propelentes presurizados aceptables, como hidrofluoroalcanos (HFA, es decir, HFA-134a y HFA-227, o una mezcla de los mismos), diclorodifluorometano (u otros propelentes clorofluorocarbonados como una mezcla de propelentes 11, 12 y/o 114), propano, nitrógeno y similares. Las formulaciones pulmonares pueden incluir potenciadores de la permeación como ácidos grasos y sacáridos, agentes quelantes, inhibidores de enzimas (por ejemplo, inhibidores de la proteasa), adyuvantes (por ejemplo, glicocolato, surfactina, span 85 y nafamostat), conservantes (por ejemplo, cloruro de benzalconio o clorobutanol) y etanol (normalmente hasta un 5 %, pero posiblemente hasta un 20 %, en peso). El etanol se incluye comúnmente en composiciones de aerosoles, ya que puede mejorar la función de la válvula dosificadora y en algunos casos también mejorar la estabilidad de la dispersión.

Las formulaciones pulmonares también pueden incluir surfactantes que incluyen, pero no se limitan a, sales biliares y aquellas descritas en la patente de los Estados Unidos n.° 6,524,557 y las referencias contenidas en la misma. Los surfactantes descritos en la patente de los Estados Unidos n.° 6,524,557, por ejemplo, una sal de ácido graso Cs-C-16, una sal biliar, un fosfolípido o un sacárido de alquilo son ventajosos porque algunos de ellos también mejoran la absorción del compuesto en la formulación.

También son adecuadas las formulaciones de polvo seco que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto activo mezclado con un vehículo apropiado y adaptado para su uso en conexión con un inhalador de polvo seco. Los potenciadores de la absorción que se pueden añadir a las formulaciones de polvo seco incluyen los descritos en la patente de los Estados Unidos n.° 6,632,456. La publicación PCT n.° WO 02/080884, describe nuevos métodos para la modificación de la superficie de polvos. Las formulaciones de aerosol pueden incluir las descritas en las patentes de los Estados Unidos n.os 5,230,884 y 5,292,499; las publicaciones PCT n.os WO 017/8694 y 01/78696; y las publicaciones de las solicitudes de patente de los Estados Unidos n.os 2003/019437, 2003/0165436; y la publicación PCT n.° WO 96/40089 (que incluye aceite vegetal). Las formulaciones de liberación sostenida adecuadas para inhalación se describen en las publicaciones de las solicitudes de patente de los Estados Unidos n.os 2001/0036481, 2003/0232019, y 2004/0018243 así como en las publicaciones PCT n.osWO 01/13891, 02/067902, 03/072080, y 03/079885.

Las formulaciones pulmonares que contienen micropartículas se describen en la publicación PCT n.° WO 03/015750, la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2003/0008013, y la publicación PCT n.° WO 00/00176. Las formulaciones pulmonares que contienen polvo en estado vítreo estable se describen en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2002/0141945 y la patente de los Estados Unidos n.° 6,309,671. Se describen otras formulaciones de aerosol en la patente EP n.° 1338272, la publicación PCT n.° WO 90/09781, las patentes de los Estados Unidos n.os 5,348,730 y 6,436,367, la publicación PCT n.° WO 91/04011, y las patentes de los Estados Unidos n.os 6,294,153 y 6,290,987, que describen una formulación basada en liposomas que puede administrarse mediante aerosol u otros medios.

Las formulaciones en polvo para inhalación se describen en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2003/0053960 y la publicación PCT n.° WO 01/60341. Los agentes pueden administrarse por vía intranasal como se describe en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2001/0038824.

Las soluciones de medicamento en solución salina tamponada y vehículos similares se emplean comúnmente para generar un aerosol en un nebulizador. Los nebulizadores simples funcionan según el principio de Bernoulli y emplean una corriente de aire u oxígeno para generar las partículas de aerosol. Los nebulizadores más complejos emplean ultrasonidos para crear las partículas de aerosol. Ambos tipos son bien conocidos en la técnica y se describen en libros de texto estándar de farmacia como Joseph Barnett Sprowls, Sprowls' American Pharmacy (7th ed., Lippincott 1974) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy (21st ed., Lippincott 2005).

Otros dispositivos para generar aerosoles emplean gases comprimidos, generalmente hidrofluorocarbonos y clorofluorocarbonos, que se mezclan con el medicamento y cualquier excipiente necesario en un recipiente presurizado. Estos dispositivos también se describen en libros de texto estándar como Joseph Barnett Sprowls, Sprowls' American Pharmacy (7th ed. Lippincott 1974) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy (21st ed., Lippincott 2005).

El agente puede incorporarse a un liposoma para mejorar la vida media. El agente también se puede conjugar con cadenas de polietilenglicol ("PEG"). Métodos de pegilación y formulaciones adicionales que contienen conjugados de PEG (es decir, hidrogeles basados en PEG, liposomas modificados con PEG) se pueden encontrar en Harris and Chess, "Effect of Pegylation on Pharmaceuticals, "Nature Reviews Drug Discovery 2: 214-221, y las referencias citadas allí. El agente se puede administrar a través de un vehículo de administración de nanococleato o cocleato (BioDelivery Sciences International). Los agentes pueden administrarse por vía transmucosa (es decir, a través de una superficie mucosa como la vagina, el ojo o la nariz) utilizando formulaciones como la descrita en la patente de los Estados Unidos n.° 5,204,108. Los agentes pueden formularse en microcápsulas como se describe en la publicación PCT n.° WO 88/01165. El agente se puede administrar por vía intraoral utilizando las formulaciones descritas en la publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos n.° 2002/0055496, la publicación PCT n.° WO 00/47203, y la patente de los Estados Unidos n.° 6,495,120. El agente se puede administrar mediante formulaciones de nanoemulsión descritas en la publicación PCT n.° WO 01/91728.

Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para tratar a un sujeto por una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina. Un tercer aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto para su uso en un método de tratamiento de una afección asociada con una secreción insuficiente de insulina, como se establece en la reivindicación 7 adjunta. El método implica administrar a un sujeto que necesita tratamiento para una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina un compuesto o composición descritos en este documento en condiciones efectivas para tratar al sujeto por la afección.

En una realización, los métodos de tratamiento descritos en este documento se llevan a cabo en condiciones efectivas para aumentar la masa de células beta pancreáticas en el sujeto para tratar al sujeto por un nivel insuficiente de secreción de insulina.

En una realización, el compuesto o composición se puede administrar con o coincidiendo con un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp. Los inhibidores adecuados de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp) se describieron en detalle anteriormente.

En otra realización, el compuesto o composición se puede administrar con o coincidentemente con un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4). Se describen en detalle más arriba los agonistas del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o los inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4) adecuados. De acuerdo con esta realización, la administración se lleva a cabo en condiciones efectivas para provocar un aumento sinérgico en la masa de células beta pancreáticas en el sujeto para tratar al sujeto por un nivel insuficiente de secreción de insulina.

Como se utiliza en este documento, una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina significa una afección en la que un sujeto produce un nivel en plasma de insulina menor que el requerido para mantener niveles normales de glucosa en la sangre, de modo que el sujeto con la afección asociada con la secreción insuficiente de insulina se vuelve hiperglucémico. En tal afección, las células beta pancreáticas del sujeto afectado secretan un nivel insuficiente de insulina para mantener la presencia de una concentración normal de glucosa en la sangre (es decir, normoglucémica).

Según una realización, una de las condiciones asociadas con un nivel insuficiente de secreción de insulina es la resistencia a la insulina. La resistencia a la insulina es una afección en la cual las células de un sujeto se vuelven menos sensibles a los efectos reductores de glucosa de la insulina. La resistencia a la insulina en las células musculares y grasas reduce la captación de glucosa (y, por lo tanto, el almacenamiento local de glucosa como glucógeno y triglicéridos), mientras que la resistencia a la insulina en las células hepáticas produce una reducción de la síntesis y el almacenamiento de glucógeno y una incapacidad para suprimir la producción y liberación de glucosa en la sangre. La resistencia a la insulina normalmente se refiere a los efectos reducidos de disminución de la glucosa de la insulina. Sin embargo, otras funciones de la insulina también pueden verse afectadas. Por ejemplo, la resistencia a la insulina en las células grasas reduce los efectos normales de la insulina sobre los lípidos y da como resultado una menor absorción de lípidos circulantes y un aumento de la hidrólisis de los triglicéridos almacenados. El aumento de la movilización de los lípidos almacenados en estas células eleva los ácidos grasos libres en el plasma sanguíneo. Las concentraciones elevadas de ácidos grasos en sangre, la reducción de la captación de glucosa en los músculos y el aumento de la producción de glucosa en el hígado contribuyen a niveles elevados de glucosa en sangre. Si existe resistencia a la insulina, el páncreas necesita secretar más insulina. Si no se produce este aumento compensatorio, las concentraciones de glucosa en sangre aumentan y se produce diabetes tipo II.

Según otra realización, una de las condiciones asociadas con un nivel insuficiente de secreción de insulina es la diabetes. La diabetes se puede dividir en dos grandes tipos de enfermedades: tipo I (T1D) y tipo II (T2D). El término "diabetes" también se refiere en este documento a un grupo de enfermedades metabólicas en las que los pacientes tienen niveles altos de glucosa en sangre, incluyendo diabetes tipo I (T1D), diabetes tipo II (T2D), diabetes gestacional, diabetes congénita, diabetes de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con fibrosis quística, diabetes relacionada con hemocromatosis, diabetes inducida por fármacos (por ejemplo, diabetes por esteroides) y varias formas de diabetes monogénica.

Por lo tanto, en una realización, al sujeto se le ha diagnosticado una o más de diabetes tipo I (T1D), diabetes tipo II (T2D), diabetes gestacional, diabetes congénita, diabetes de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con la fibrosis quística, diabetes relacionada con la hemocromatosis, diabetes inducida por fármacos o diabetes monogénica. Por ejemplo, al sujeto se le ha diagnosticado diabetes tipo 1. O bien, al sujeto se le ha diagnosticado diabetes tipo II.

Según otra realización, una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina es el síndrome metabólico. El síndrome metabólico se utiliza generalmente para definir una constelación de anomalías que se asocia con un mayor riesgo de desarrollar diabetes tipo II y enfermedad vascular aterosclerótica. Las afecciones y síntomas relacionados incluyen, entre otros, hiperglucemia en ayunas (diabetes mellitus tipo II o glucosa en ayunas alterada, tolerancia a la glucosa alterada o resistencia a la insulina), presión arterial alta, obesidad central (también conocida como adiposidad visceral, de patrón masculino o en forma de manzana), es decir, sobrepeso con depósitos de grasa principalmente alrededor de la cintura; colesterol HDL disminuido y triglicéridos elevados.

En una realización, al sujeto se le ha diagnosticado síndrome metabólico o resistencia a la insulina.

Otras afecciones que pueden estar asociadas con un nivel insuficiente de secreción de insulina incluyen, sin limitación, hiperuricemia, hígado graso (especialmente en obesidad concurrente) que progresa a enfermedad del hígado graso no alcohólico, síndrome de ovario poliquístico (en mujeres) y acantosis nigricans.

También se pueden tratar trastornos relacionados, incluyendo, sin limitación, cualquier enfermedad asociada con un nivel de glucosa en sangre o plasma fuera del intervalo normal, preferiblemente hiperglucemia. En consecuencia, el término "trastornos relacionados" incluye la tolerancia a la glucosa alterada (IGT), la glucosa en ayunas alterada (IFG), la resistencia a la insulina, el síndrome metabólico, la hiperglucemia posprandial y el sobrepeso/obesidad. Estos trastornos relacionados también pueden caracterizarse por un nivel anormal de insulina en sangre y/o plasma.

De acuerdo con otra realización, los métodos descritos en este documento se llevan a cabo para tratar a un sujeto con afecciones asociadas con insuficiencia o deficiencia de células beta. Estas condiciones incluyen, sin limitación, diabetes tipo I (T1D), diabetes tipo II (T2D), diabetes gestacional, diabetes congénita, diabetes de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con la fibrosis quística, diabetes relacionada con la hemocromatosis, diabetes inducida por fármacos o diabetes monogénica. La diabetes inducida por fármacos se relaciona con una afección que se produce por el uso de fármacos que son tóxicos para las células beta (por ejemplo, esteroides, antidepresivos, antipsicóticos de segunda generación e inmunosupresores. Los fármacos inmunosupresores ejemplares incluyen, pero no se limitan a, miembros de la familia de la cortisona (por ejemplo, prednisona y dexametasona), rapamicina/sirolimus, everolimus e inhibidores de la calcineurina (por ejemplo, FK-506/tacrolimus).

Las afecciones adicionales asociadas con la deficiencia de células beta incluyen, sin limitación, hipoglucemia asintomática, diabetes dependiente de insulina lábil, pancreatectomía, pancreatectomía parcial, trasplante de páncreas, alotrasplante de islotes pancreáticos, autotrasplante de islotes pancreáticos y xenotrasplante de islotes pancreáticos. Por lo tanto, los métodos descritos en este documento pueden llevarse a cabo para tratar a un sujeto con diabetes inducida por pancreatectomía. En algunas realizaciones, los métodos descritos en este documento se llevan a cabo para tratar a un sujeto que se ha sometido a un alotrasplante de islotes (por ejemplo, para T1D) o autotrasplante de islotes (por ejemplo, para un sujeto sometido a pancreatectomía por pancreatitis crónica).

Como se utiliza en este documento, la hipoglucemia asintomática es una complicación de la diabetes en la que el paciente no es consciente de una caída profunda del azúcar en sangre porque no desencadena la secreción de epinefrina que genera los síntomas característicos de la hiperglucemia (por ejemplo, palpitaciones, sudoración, ansiedad) que sirven para advertir al paciente de la bajada de glucosa en sangre.

El trasplante de páncreas puede realizarse solo, después o en combinación con el trasplante de riñón. Por ejemplo, el trasplante de páncreas por sí solo puede considerarse médicamente necesario en pacientes con complicaciones gravemente incapacitantes y potencialmente mortales debido a la falta de reconocimiento de la hipoglucemia y a una diabetes dependiente de insulina lábil que persiste a pesar de un tratamiento médico óptimo. El trasplante de páncreas después de un trasplante de riñón previo puede ocurrir en un paciente con diabetes dependiente de insulina. El trasplante de páncreas puede realizarse en combinación con el trasplante de riñón en un paciente diabético dependiente de insulina con uremia. Se puede considerar el retrasplante de páncreas después de un trasplante de páncreas primario fallido.

Tal como se utiliza en este documento, el trasplante de islotes pancreáticos es un procedimiento en el que solo se aíslan y se trasplantan a un paciente los islotes de Langerhans, que contienen las células endocrinas del páncreas, incluidas las células beta productoras de insulina y las células alfa productoras de glucagón. El alotrasplante de islotes pancreáticos ocurre cuando se aíslan los islotes de Langerhans del páncreas de uno o más donantes humanos. Los islotes pancreáticos también pueden derivarse de células madre embrionarias humanas o de células madre pluripotentes inducidas. El xenotrasplante de islotes pancreáticos ocurre cuando se aíslan islotes de Langerhans de uno o más páncreas no humanos (por ejemplo, un páncreas porcino o un páncreas de primate). El autotrasplante de islotes pancreáticos ocurre cuando se aíslan los islotes de Langerhans del páncreas de un paciente sometido a pancreatectomía (por ejemplo, para pancreatitis crónica causada por cálculos biliares, fármacos y/o causas genéticas familiares) y se devuelve al mismo paciente, por ejemplo, mediante infusión en la vena porta, mediante laparoscopia hasta el epiplón, mediante endos hasta la pared gástrica o por vía subcutánea a través de una incisión menor. Al igual que el trasplante de páncreas, el trasplante de islotes pancreáticos se puede realizar solo, después o en combinación con el trasplante de riñón. Por ejemplo, el trasplante de islotes pancreáticos puede realizarse solo para restablecer la conciencia de la hipoglucemia, proporcionar control glucémico y/o proteger a un paciente de eventos hipoglucémicos graves (Hering et al., "Phase 3 Trial of Transplantation of Human Islets in Type 1 Diabetes Complicated by Severe Hypoglycemia," Diabetes Care 39(7): 1230-1240 (2016)).

El trasplante de islotes pancreáticos puede realizarse en combinación con una pancreatectomía total. Por ejemplo, se puede realizar un trasplante de islotes pancreáticos después de una pancreatectomía total para prevenir o mejorar la diabetes inducida quirúrgicamente al preservar la función de las células p (Johnston et al., "Factors Associated with Islet Yield and Insulin Independence after Total Pancreatectomy and Islet Cell Autotransplantation in Patients with Chronic Pancreatitis Utilizing Off-Site Islet Isolation: Cleveland Clinic Experience," J. Chem. Endocrinol. Metab. 100(5): 1765-1770 (2015)). Por lo tanto, el trasplante de islotes pancreáticos puede proporcionar una independencia de insulina sostenida a largo plazo.

En algunas realizaciones, el trasplante de islotes pancreáticos ocurre en el contexto de un dispositivo de encapsulación para proteger las células de los islotes pancreáticos trasplantadas de la respuesta autoinmune del huésped, mientras se permite que la glucosa y los nutrientes lleguen a las células de los islotes pancreáticos trasplantadas.

Los métodos descritos en este documento se pueden llevar a cabo para mejorar el páncreas, el alotrasplante de islotes pancreáticos, el autotrasplante de islotes pancreáticos y/o el xenotrasplante de islotes pancreáticos mediante la regeneración de células p pancreáticas en un paciente. Por ejemplo, los métodos pueden usarse para prevenir o mejorar la diabetes inducida quirúrgicamente preservando la función de las células p, restablecer el conocimiento de la hipoglucemia, proporcionar control glucémico y/o proteger a un paciente de eventos hipoglucémicos graves. Por lo tanto, otro aspecto de la divulgación se refiere a un método de regeneración de células beta pancreáticas en un paciente trasplantado. Este método implica administrar a un paciente trasplantado un compuesto de fórmula (I) y, opcionalmente, un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp, un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) y/o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4), donde dicha administración se lleva a cabo en condiciones efectivas para regenerar las células beta pancreáticas en el paciente.

En otra realización, los métodos descritos en este documento se llevan a cabo para tratar a un sujeto en riesgo de desarrollar diabetes tipo II. En una realización, un paciente en riesgo de desarrollar diabetes tipo II tiene prediabetes/síndrome metabólico. En otra realización, el paciente en riesgo de desarrollar diabetes tipo II ha sido tratado con un fármaco psicoactivo, incluidos, entre otros, inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina ("SSRI") para la depresión, el trastorno obsesivo compulsivo ("OCD"), etc.

Al llevar a cabo los métodos de tratamiento, se administran un compuesto o composición de la presente invención y, opcionalmente, un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp, un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) y/o un inhibidor de DPP4, en condiciones eficaces para aumentar la masa de células beta pancreáticas en el sujeto para tratar al sujeto por una afección asociada con un nivel insuficiente de secreción de insulina.

De acuerdo con una realización, se administra un compuesto de fórmula (I) o una composición que contiene un compuesto de fórmula (I) y/o un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp para aumentar la masa de células beta pancreáticas en el sujeto, lo que dará como resultado un mayor nivel de secreción de insulina en el sujeto.

El compuesto y/o composición y un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp se formulan, según una realización, como composiciones farmacéuticas separadas o una única composición farmacéutica que comprende tanto el compuesto de fórmula (I) como el inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp. Según una realización, dicha composición(es) farmacéuticas comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) y/o del inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp.

Por lo tanto, según una realización, se administra una combinación o terapia o tratamiento combinatorio de un compuesto de la presente invención y un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp. Los términos "combinación" o "terapia combinatoria" o "tratamiento combinatorio" significan un tratamiento en el que al menos dos compuestos se coadministran a un sujeto para provocar un efecto biológico, en este caso un efecto sinérgico. En una terapia combinatoria, los al menos dos fármacos pueden administrarse juntos o por separado, al mismo tiempo o secuencialmente. No se requiere la administración simultánea, siempre que los fármacos produzcan un efecto sinérgico en el sujeto para mejorar las condiciones del sujeto. Además, los al menos dos fármacos pueden administrarse a través de vías y protocolos diferentes. Como resultado, aunque pueden formularse juntos, los fármacos de una combinación también pueden formularse por separado.

Al llevar a cabo los métodos de tratamiento, la administración de compuestos a un sujeto puede implicar la administración de composiciones farmacéuticas que contienen el o los compuestos (es decir, un compuesto de fórmula (I) e inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp) en cantidades terapéuticamente efectivas, lo que significa una cantidad de compuesto eficaz para tratar las condiciones y/o trastornos indicados en el sujeto. Estas cantidades suelen variar en función de una serie de factores que están dentro del alcance de los expertos normalmente cualificados. Estos incluyen, sin limitación, el sujeto en particular, así como su edad, peso, altura, condición física general e historial médico, el compuesto particular utilizado, así como el vehículo en el que está formulado y la vía de administración seleccionada para él; la duración del tratamiento; y la naturaleza y gravedad de la afección que se está tratando.

La administración generalmente implica administrar formas de dosificación farmacéuticamente aceptables, lo que significa formas de dosificación de compuestos descritos en este documento e incluye, por ejemplo, tabletas, grageas, polvos, elixires, jarabes, preparaciones líquidas, incluidas suspensiones, aerosoles, tabletas inhalantes, pastillas, emulsiones, soluciones, gránulos, cápsulas y supositorios, así como preparaciones líquidas para inyecciones, incluidas preparaciones de liposomas. Las técnicas y formulaciones generalmente se pueden encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edición.

Al llevar a cabo los métodos de tratamiento, el fármaco (es decir, un compuesto de fórmula (I) y, opcionalmente, un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia TGFp, un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) y/o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4) pueden estar contenidos, en cualquier cantidad apropiada, en cualquier sustancia portadora adecuada. El fármaco puede estar presente en una cantidad de hasta el 99 % en peso del peso total de la composición. La composición puede proporcionarse en una forma de dosificación que sea adecuada para la administración oral, parenteral (por ejemplo, en forma intravenosa, intramuscular), rectal, cutánea, nasal, vaginal, inhalante, cutánea (parche) u ocular. Por lo tanto, la composición puede estar en forma de, por ejemplo, tabletas, cápsulas, píldoras, polvos, granulados, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles incluidos hidrogeles, pastas, ungüentos, cremas, apósitos, pociones, dispositivos de administración osmótica, supositorios, enemas, inyectables, implantes, atomizadores o aerosoles.

Las composiciones farmacéuticas según la presente invención pueden formularse para liberar el fármaco activo prácticamente de inmediato tras la administración o en cualquier momento o período de tiempo predeterminado después de la administración.

Las formulaciones de liberación controlada incluyen (i) formulaciones que crean una concentración sustancialmente constante del fármaco(s) dentro del cuerpo durante un período prolongado de tiempo; (ii) formulaciones que después de un tiempo de retraso predeterminado crean una concentración sustancialmente constante del fármaco(s) dentro del cuerpo durante un período prolongado de tiempo; (iii) formulaciones que sostienen la acción del fármaco(s) durante un período de tiempo predeterminado al mantener un nivel de fármaco relativamente constante y efectivo en el cuerpo con la minimización concomitante de efectos secundarios indeseables asociados con fluctuaciones en el nivel en plasma de la sustancia activa del fármaco; (iv) formulaciones que localizan la acción del fármaco(s), por ejemplo, mediante la colocación espacial de una composición de liberación controlada adyacente o en el tejido u órgano enfermo; y (v) formulaciones que dirigen la acción del fármaco(s) mediante el uso de portadores o derivados químicos para administrar el fármaco a un tipo de célula objetivo particular.

La administración de fármacos en forma de una formulación de liberación controlada es especialmente preferida en los casos en los que el fármaco tiene (i) un índice terapéutico estrecho (es decir, la diferencia entre la concentración en plasma que produce efectos secundarios nocivos o reacciones tóxicas y la concentración en plasma que produce un efecto terapéutico es pequeña; en general, el índice terapéutico ("TI") se define como la relación entre la dosis letal media (LD<50>) a la dosis efectiva media (ED<50>)); (ii) una ventana de absorción estrecha en el tracto gastrointestinal; o (iii) una vida media biológica muy corta, de modo que se requieren dosis frecuentes durante el día para mantener el nivel en plasma a un nivel terapéutico.

Se pueden seguir diversas estrategias para obtener una liberación controlada en la que la tasa de liberación supere la tasa de metabolismo del fármaco en cuestión. La liberación controlada se puede obtener mediante la selección adecuada de varios parámetros de formulación e ingredientes, incluidos, por ejemplo, varios tipos de composiciones y recubrimientos de liberación controlada. De esta forma, el fármaco se formula con excipientes apropiados en una composición farmacéutica que, tras su administración, libera el fármaco de manera controlada (composiciones de tabletas o cápsulas de una o varias unidades, soluciones oleosas, suspensiones, emulsiones, microcápsulas, microesferas, nanopartículas, parches y liposomas).

Por lo tanto, la administración podrá realizarse por vía oral, tópica, transdérmica, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, por instilación intranasal, por instilación intracavitaria o intravesical, intraocular, intraarterial, intralesional o por aplicación a membranas mucosas. En una realización, la administración se realiza por vía oral, transdérmica, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular o intraperitoneal. Los compuestos pueden administrarse solos o con vehículos farmacéuticos adecuados y pueden estar en forma sólida o líquida, como tabletas, cápsulas, polvos, soluciones, suspensiones o emulsiones.

El sujeto puede ser un sujeto mamífero. En una realización, el sujeto es un sujeto humano. Los sujetos humanos adecuados incluyen, sin limitación, niños, adultos y sujetos de edad avanzada que tienen una deficiencia de células beta y/o insulina.

En otras realizaciones, el sujeto puede ser bovino, ovino, porcino, felino, equino, murino, canino, lapino, etc.

En una realización, la etapa de administración puede aumentar el número de células beta pancreáticas proliferantes en el sujeto en al menos aproximadamente un 5 %, 6 %, 7 % o más.

En algunas realizaciones, la administración aumenta la secreción de insulina estimulada por glucosa en las células beta pancreáticas del sujeto.

En una realización de este y otros aspectos, la designación de un compuesto pretende designar el compuesto en sí, así como cualquier sal, hidrato, estereoisómero, racemato, éster o éter farmacéuticamente aceptable del mismo. La designación de un compuesto pretende designar el compuesto como específicamente designado en sí mismo, así como cualquier sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En el contexto de la presente invención, por “tratar” se entiende un tratamiento preventivo o curativo.

En una realización, el término tratamiento designa en particular la corrección, disminución de la tasa de cambio o reducción de una homeostasis de glucosa deteriorada. El nivel de glucosa en la sangre fluctúa a lo largo del día. Los niveles de glucosa suelen ser más bajos por la mañana, antes de la primera comida del día y aumentan después de las comidas durante algunas horas. En consecuencia, el término tratamiento incluye el control del nivel de glucosa en sangre aumentando o disminuyendo el nivel de glucosa en sangre dependiendo de la afección del sujeto y del horario del día para alcanzar niveles normales de glucosa. El término tratamiento incluye más particularmente una reducción temporal o persistente del nivel de glucosa en sangre en un sujeto que tiene diabetes o un trastorno relacionado. El término "tratamiento" o "tratar" también designa una mejora en la liberación de insulina (por ejemplo, por las células beta pancreáticas).

Como se utiliza en este documento, la frase "control del nivel de glucosa en sangre" se refiere a la normalización o regulación del nivel de glucosa en sangre o plasma en un sujeto que tiene niveles anormales. (es decir, niveles que están por debajo o por encima de un valor de referencia, mediano o promedio conocido para un sujeto correspondiente con una homeostasis de glucosa normal).

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1 -Materiales y métodos para los ejemplos de referencia 2-5

Espectros de RMN de<1>Hy13C.Los espectros de RMN de<1>Hy13Cse adquirieron en un espectrómetro Bruker DRX-600 a 600 MHz para<1>H y 150 MHz para<13>C. La TLC se realizó en láminas de aluminio recubiertas de sílice (espesor 200 pm) o láminas de aluminio recubiertas de alúmina (espesor 200 pm) suministradas por Sorbent Technologies y la cromatografía en columna se llevó a cabo en un Teledyne ISCO combiflash equipado con un detector de longitud de onda variable y un colector de fracciones utilizando columnas ultrarrápidas de sílice de alto rendimiento RediSep Rf de Teledyne ISCO. El análisis por LCMS se realizó en un espectrómetro de masas API-TOF de alta resolución Agilent Technologies G1969A conectado a un sistema de HPLC Agilent Technologies 1200. Las muestras se ionizaron mediante ionización por electroaspersión (ESI) en modo positivo. La cromatografía se realizó en una columna Zorbax 300SB-C18 de 2.1 * 150 mm y 5 pm con agua que contenía 0.1 % de ácido fórmico como disolvente A y acetonitrilo que contenía 0.1 % de ácido fórmico como disolvente B a un caudal de 0.4 mL/min. El programa de gradiente fue el siguiente: 1 % de B (0-1 minutos), 1-99 % de B (1-4 minutos) y 99 % de B (4-8 minutos). La temperatura de la columna se mantuvo a 50 °C durante todo el análisis. Los productos químicos y reactivos se adquirieron de Aldrich Co., Alfa Aesar, Enamine, TCI USA. Todos los disolventes se adquirieron anhidros de Acros Organics y se utilizaron sin purificación adicional.

Ensayos de unión de DYRK1A. Los compuestos se probaron para determinar la actividad de unión de DYRK1A en un servicio de creación de perfiles de quinasas comercial, Life Technologies, que utiliza el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu basado en FRET. Los compuestos se analizaron para determinar la actividad de DYRK1A en concentraciones de 1000 nM y 300 nM por duplicado. La IC<50>se determinó por el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu de 10 puntos por duplicado.

Ensayo de proliferación de células B. Los islotes pancreáticos humanos se obtuvieron del Programa de Distribución Integrada de Islotes (IIDP) respaldado por el NIH/NIDDK. Los islotes se dispersaron primero con Accutase (Sigma, St. Louis, MO) sobre cubreobjetos como se describió anteriormente (Wang et al., 2015, que se incorpora al presente documento como referencia en su totalidad). Después de 2 horas, las células de los islotes humanos dispersas se trataron con el compuesto en medio completo RPMI1640 durante 96 horas. Luego, las células se fijaron y se tiñeron para detectar insulina y tinción de Ki67 (Wang et al., 2015, que se incorpora al presente documento como referencia en su totalidad). Se obtuvieron imágenes y contaron las células totales positivas para insulina y las células dobles Ki67 y positivas para insulina. Se contaron al menos 1000 células.

Ensayo de translocación NFAT2T. Las células beta de roedores R7T1 se infectaron con adenovirus que expresaba NFAT2-GFP durante 48 horas, luego las células se trataron con diferentes compuestos a 10 pM durante otras 24 horas. Se tomaron imágenes de las células y se contaron para la translocación nuclear NFAT2-GFP Se contaron al menos 1000 células.

Perfil de escaneo del Kinoma. Los compuestos se analizaron contra 468 quinasas en una concentración única de 10 pM por duplicado en DiscoverX utilizando su Ensayo patentado KINOMEscan<®>(Fabian et al., "A Small Molecule-Kinase Interaction Map for Clinical Kinase Inhibitors," Nat. Biotechnol. 23(3): 329-336 (2005)). Los resultados de las interacciones de unión de detección primaria se reportan como '% de control de DMSO', donde los valores más bajos indican una afinidad más fuerte.

Síntesis de 7-metoxi-2,9-dihidro-,6-carbolin-1-ona (1-4). Se disolvió m-anisidina (1.096 mL, 38.56 mmol) en 15 mL de ácido clorhídrico concentrado y, después de enfriar, se añadieron 15 mL de agua a la solución. Se añadió gota a gota nitrito de sodio (2.74 g, 39.71 mmol) en 15 mL de agua a la suspensión fría y se agitó durante 1 hora, manteniendo la temperatura por debajo de 10 °C. Esta solución se añadió a una solución fría de etil 3-carboxi-2-piperidona (7.0 g, 40.88 mmol) e hidróxido de potasio (2.63 g, 47.01 mmol) en 20 mL de agua, que se había mantenido a temperatura ambiente durante la noche. El pH de la mezcla de reacción se ajustó a 4-5 mediante una solución acuosa saturada de acetato de sodio. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El sólido amarillo se filtró y se lavó con una pequeña cantidad de agua y etanol para obtener 6-metoxifenilhidrazona 1-2, que se llevó inmediatamente a la siguiente etapa. La fenilhidrazona 1-2 se sometió a reflujo en 25 mL de ácido fórmico durante 1 hora. La solución se neutralizó con solución acuosa saturada de carbonato de sodio y se extrajo con 100 mL de acetato de etilo tres veces. Se recogió la capa orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó el disolvente mediante un evaporador rotatorio para obtener la tetrahidro-oxo-p-carbolina 2-3 deseada. A una solución del Compuesto 2-3 en 60 mL de 1,4-dioxano se le añadió DDQ (2.65 g, 11.7 mmol) en 40 mL de 1,4-dioxano gota a gota a 0 °C y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Una vez finalizada la reacción, se añadieron 100 mL de agua a la reacción. La mezcla de productos se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (100 mL X 3) tres veces. La capa orgánica se lavó con solución de hidróxido de sodio 0.1 N (50 mL X 3). Luego, la capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró para proporcionar la 7-metoxi-2,9-dihidro-p-carbolin-1-ona 1-4 deseada (1.91 g, 23 % en 4 etapas) como un sólido amarillo. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 87.85 (d, 1H,J= 9 Hz), 7.12 (d, 1H,J= 4.8 Hz), 7.06-7.08 (m, 2H), 6.86 (d, 1H,J= 6.6 Hz), 3.89 (s, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8159.40, 155.72, 140.74, 127.75, 125.12, 122.58, 116.40, 110.78, 99.85, 94.69, 55.61; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C12H11N2O2+: 215.0815, encontrado: 215.0806.

Síntesis de 1-cloro-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-5). Una solución de 7-metoxi-2,9-dihidro-p-carbolin-1-ona (1.80 g, 8.49 mmol) en POCh(20 mL) se agitó a 150 °C durante 24 horas. La mezcla se neutralizó con la solución acuosa saturada de carbonato de sodio. La solución se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (50 mL X 3). La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró para proporcionar la 1-cloro-7-metoxi-9H-p-carbolina 1-5 deseada (1.56 g, 79 %) como un sólido amarillo. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.31 (s, 1H), 8.19 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.96 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.78 (s, 1H,J= 5.4 Hz), 7.0 (s, 1H), 6.95 (m, 1H), 3.93 (s, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8161.14, 142.87, 138.10, 132.93, 132.83, 130.73, 123.44, 115.06, 114.39, 110.60, 95.28, 55.78; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C12H10ClN2O+: 233.0476, encontrado: 233.0471.

Procedimiento general para la síntesis de 1-amino-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6). Una solución de 1-cloro-7-metoxi-9H-(3-carbolina (1 mmol) y amina (10 mmol) en un recipiente a presión sellado se calentó a 170 °C durante 24 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por LCMS, la mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH como eluyente para proporcionar la 1-amino-7-metoxi-9H-(3-carbolina) 1-6 deseada como un sólido blanco.

Síntesis de 1-(azetidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6a). Se cargó un recipiente a presión con tapa de rosca, equipado con una barra agitadora magnética, con 1-5 (50 mg, 0.21 mmol) de RuPhos (1 mg, 1 % mol) y precatalizador de RuPhos (P1) (1.75 mg, 1 % mol). Se evacuó el vial, se volvió a llenar con argón y se selló con un tapón de rosca de teflón. Se añadió LiHMDS (1 M en THF, 2.4 eq.) mediante jeringa, seguido de azetidina (0.25 mmol, 1.2 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 96 horas. La solución se dejó enfriar a temperatura ambiente, luego se inactivó mediante la adición de HCl 1 M (1 mL), se diluyó con EtOAc y se vertió en NaHCO<3>saturado. Después de extraer con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, luego se concentraron y se purificaron por cromatografía en columna ultrarrápida usando MeOH/DCM (10/90) como eluyente para obtener el compuesto 1-6a (6.5 mg, 12 %) como un sólido blanco. Rendimiento del 64 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 87.98 (m, 1H), 7.90 (d, 1H,J= 9 Hz), 7.30 (m,1 H), 6.94 (m,1 H), 6.89 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.38 (t, 4 H,J= 7.2 Hz), 3.90 (s, H), 2.52 (m, 2 H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 159.83, 149.05, 141.87, 136.84, 128.30, 123.52, 122.33, 115.48, 109.56, 106.39, 95.22, 55,61, 51.82, 17.42; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C<15>H<16>N<3>O+: 254.1288, encontrado: 254.1284; Pureza >95 %

1-(Pirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1 -6b). Sólido blanco. Rendimiento del 64 %. RMN de<1>H (600 MHz, de-DMSO): 68.32 (s, 1H), 7.94 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.89 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.22 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 6.93 (s, H), 6.88 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 3.90 (m, 7H), 2.07 (s, 4 H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6159.64, 146.72, 141.52, 136.88, 128.60, 123.63, 122.09, 115.48, 109.43, 104.82, 95.28, 55.58, 48.39, 25.35; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C16H18N3O+: 268.1444, encontrado: 268.1460; Pureza >95 %.

1-(Piperidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6c). Sólido blanco. Rendimiento del 87 %. RMN de<1>H (600 MHz, de-DMSO): 68.05 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.90 (d, 1H,J=8.4 Hz), 7.48 (d, 1H,J= 4.8 Hz), 7.04 (s, 1H), 6.90 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.48 (s ancho, 4H), 1.84 (s ancho, 4H), 1.70 (m, 2H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6 159.98, 149.23, 141.74, 136.57, 129.05, 126.62, 122.33, 115.66, 109.43, 108.75, 95.20, 55.60, 49.92, 26.09, 24.82; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C17H20N3O+: 282.1601, encontrado: 282.1590; Pureza >95 %.

1-(2-Fenilpirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6d). Sólido marrón. Rendimiento del 80 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 67.98 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.82 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.61 (s, 1H), 7.51 (d, 2H,J= 7.2 Hz), 7.44 (t, 2H,J= 7.8 Hz), 7.34 (t, 2H,J= 7.2 Hz), 7.24 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 6.79 (m, 1H), 6.49 (d, 1H,J= 1.8 Hz), 5.48 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.06 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.82 (s, 3 H), 2.46 (m, 1H), 2.04 (m, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6159.75, 146.24, 145.92, 141.60, 136.78, 128.85, 128.39, 126.45, 126.28, 124.43, 122.15, 115.49, 109.43, 105.63, 95.25, 61.35, 55.62, 50.48, 24.53; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C22H22N3O+: 344.1757, encontrado: 344.1761; Pureza >95%.

1-(3-Fenilpirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6e). Sólido marrón. Rendimiento del 59 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 68.17 (s, 1H), 7.98 (d, 1H,J= 6 Hz), 7.91 (d, 1H,J= 9 Hz), 7.37 (m, 4H), 7.27 (m, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.88 (d, 2H,J= 9 Hz), 4.33 (t, (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.09 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.94 (t, 1H,J= 8.4 Hz), 3.81 (s, 3H), 3.60 (m, 1H), 2.49 (m, 1H), 2.24 (m, 1H); RMN de<13>C (150 MHz, CDCl<a>): 6161.19, 143.50, 141.54, 139.47, 130.03, 128.60, 126.97, 121.83, 114.64, 112.61, 104.69, 95.30, 55.53, 50.12, 43.47, 32.24; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C22H22N3O+: 344.1757, encontrado: 344.1750; Pureza >95 %.

1-(2-Bencilpirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6f). Sólido marrón. Rendimiento del 65 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 68.05 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.91 (d, 2H,J= 9 Hz), 7.28 (m, 5H), 6.88 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 3.90 (m, 5H), 3.22 (m,1H), 2.79 (m, 1H), 1.97 (m, 3H), 1.84 (m, 1H); RMN de<13>C (150 MHz, CDCh): 6 160.66, 142.04, 138.44, 129.63, 128.26, 126.31, 121.94, 115.48, 110.80, 105.33, 94.95, 60.45, 55.54, 50.04, 39.36, 29.77, 23.65; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C23H24N30+: 358.1914, encontrado: 358.1900; Pureza >95 %.

1-(3-Bencilpirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6g). Sólido marrón. Rendimiento del 71 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 68.14 (s, 1H), 7.96 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.90 (d, 2H,J= 9 Hz), 7.32 (m, 2H), 7.25 (m, 4H), 6.93 (s,1H), 6.87 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 4.01 (m, 2H), 3.90 (m, 4H), 1.08 (t, 1H, J= 9 Hz), 2.87 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.69 (m,1H), 2.17 (m, 1H), 1.83 (m, 1H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6159.62, 146.71, 141.52, 141.15, 137.03, 129.15, 128.76, 126.38, 123.56, 122.08, 115.49, 109.41, 104.81, 95.29, 55.58, 53.80, 47.95, 31.18; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C23H24N3O+: 358.1914, encontrado: 358.1901; Pureza >95 %.

1-(2-(2-Clorofenil)pirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6h). Sólido amarillo. Rendimiento del 77 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 67.98 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.83 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.52 (m, 3H), 7.25 (m, 3H), 6.80 (m, 1H), 6.59 (d, 1H,J= 2.4 Hz), 5.80 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.10 (m, 2H), 3.84 (s, 3 H), 2.54 (m, 1H), 2.04 (m, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6 159.82, 145.77, 142.92, 141.72, 136.88, 131.91, 129.73, 129.08, 128.20, 127.30, 124.39, 122.17, 115.53, 109.47, 105.73, 95.33, 59.41, 55.62, 50.31, 32.65, 24.60; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C22H21ClN3O+: 378.1368, encontrado: 378.1366; Pureza >95 %.

1-(2-(3-Clorofenil)pirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6i). Sólido amarillo. Rendimiento del 68 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 67.96 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.86 (d, 1H, J= 8.4 Hz), 7.69 (s, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.37 (d, 1H,J= 7.8 Hz), 7.33 (t, 1H,J= 7.2 Hz), 7.28 (m, 2H), 6.83 (m, 1H), 6.65 (m, 1H), 5.51 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.07 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.46 (m, 1H), 2.04 (m, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6 159.84, 148.77, 146.08, 141.72, 136.73, 133.18, 130.33, 129.03, 126.48, 125.14, 122.20, 115.53, 109.51, 105.94, 95.30, 61.51, 55.62, 50.60, 35.23, 24.75; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C22H21ClN3O+: 378.1368, encontrado: 378.1377; Pureza >95 %.

1-(2-(4-Clorofenil)pirrolidin-1-il)-7-metoxi-9H-p-carbolina (1-6j). Sólido amarillo. Rendimiento del 43 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 67.97 (d, 1H,J= 5.4 Hz), 7.84 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.66 (s, 1H), 7.44 (d, 2H,J= 8.4 Hz), 7.38 (d, 2H,J= 8.4 Hz), 7.27 (m, 1H), 6.83 (m, 1H), 6.64 (m, 1H), 5.50 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 4.06 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.47 (m, 1H), 2.04 (m, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 6 159.80, 146.08, 144.98, 141.66, 136.78, 130.85, 128.95, 128.33, 124.47, 122.16, 115.51, 109.46, 105.81, 95.28, 60.99, 55.61, 50.49, 35.26, 24.63; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C22H21ClN3O+: 378.1368, encontrado: 378.1365; Pureza >95 %.

Síntesis de p-carbolina-N-óxido (2-1). A una solución de harmina (500 mg, 2.35 mmol) en 8 mL de cloroformo se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (1.22 g, 7.05 mmol) y se calentó a reflujo durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía ultrarrápida usando DCM/MeOH como eluyente para obtener el producto deseado p-carbolina-N-óxido 2-1 (255 mg, 47 %) como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 811.60 (s, 1H), 8.04 (d, 1H,J= 6.6 Hz), 8.00 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.86 (d, 1H,J= 6.6 Hz), 6.97 (s, 1H), 6.85 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.61 (s, 3H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8159.82, 143.39, 136.55, 132.79, 131.31, 122.35, 119.13, 115.62, 113.67, 109.57, 95.18, 55.78, 13.00; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C13H13N2O2+: 229.0972, encontrado: 229.0962; Pureza >95 %.

Síntesis de 1-hidroximetil-7-metoxi-9H-p-carbolina (2-2). Se añadió anhídrido trifluoroacético (2.20 mL, 15.87 mmol) a una mezcla agitada de p-carbolina-N-óxido (2-1) (724 mg, 3.17 mmol) y CH<2>Ch (20 mL) a 0 °C. Tras agitar durante 30 min, la mezcla se mantuvo a reflujo durante 12 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por TLC, la mezcla se concentró y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH como eluyente para obtener el 1-hidroximetil-7-metoxi-9H-p-carbolina 2-2 (358 mg, 49 %) como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.39 (d, 1H,J= 6 Hz ), 8.27 (d, 1H,J= 6 Hz ), 8.22 (d, 1H,J= 9 Hz), 7.15 (s, 1H), 7.06 (m, 1H), 5.31 (s, 2H), 3.96 (s, 3 H); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8163.11, 145.98, 140.04, 133.09, 131.95, 129.49, 124.80, 115.17, 113.83, 112.77, 94.96, 58.27, 56.10; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C13H13N2O2+: 229.0972, encontrado: 229.0967; Pureza >95 %.

Síntesis del éster etílico del ácido 3-bromo-2-hidroxiimino-propiónico (2-3). Se añadió clorhidrato de hidroxilamina (1.81 g, 25.63 mmol) a una solución agitada de bromopiruvato de etilo (5.01 g, 25.63 mmol) en cloroformo (50 mL) y metanol (70 mL) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas y se concentró a presión reducida. El crudo se disolvió en diclorometano (300 mL) y se lavó con 0.1 N de ácido clorhídrico y salmuera. La capa orgánica se recogió, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró para obtener el éster etílico del ácido 3-bromo-2-hidroxiimino-propiónico 2-3 (4.36 g, 81 %) como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 810.08 (bs, 1H), 4,38 (q,J= 7.2 Hz, 2H), 4.27 (s, 2H), 1.39 (t,J= 7.2 Hz, 3H); ESI:m/z[M H]+ 209.97.

Síntesis de éster etílico del ácido 3-(6-metoxi-]H-indol-3- il)-propiónico (2-4). Una solución de éster etílico del ácido 3-bromo-2-hidroxiimino-propiónico 2-2 (1.75 g, 8.35 mmol) en CH<2>Ch (20 mL) se añadió lentamente gota a gota a una mezcla agitada de 6-metoxiindol (1.23 g, 8.35 mmol) y Na<2>CO<3>(4.86 g, 45.92 mmol) en CH<2>Ch (20 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 48 h, se filtró a través de Celite, se concentró y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando acetato de etilo\hexanos como eluyente para obtener éster etílico del ácido 3-(6-metoxi-1H-indol-3-il)-propiónico 2-4 (800 mg, 34 %) como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 87.91 (s, 1 H), 7.65 (d, 1 H,J= 12 Hz ), 7.00 (s, 1 H), 6.81 (m, 1 H), 4.05 (s, 2 H), 4.26 (m, 2 H), 1.31 (t, 3 H,J= 6 Hz); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8164.20, 155.94, 150.66, 137.05, 122.75, 121.74, 119.65, 109.07, 94.78, 61.15, 55.53, 20.47, 14.36; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C14H17N2O4+: 227.1183, encontrado: 227.1192; Pureza >95 %.

Síntesis de éster etílico del ácido 2-amino-3-(6-metoxi-1H-indol-3-il)-propiónico (2-5). Se añadió polvo de Zn (3.11 g, 47.62 mmol) en porciones a una solución agitada de 2-4 (1.64 g, 5.95 mmol) en ácido acético (20 mL) durante 30 min. Tras la adición, la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción controlada por LCMS, la mezcla se filtró a través de Celite, se lavó con ácido acético (20 mL) y se concentró. El residuo se neutralizó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (30 mL X 3). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para obtener el éster etílico del ácido 2-amino-3-(6-metoxi-1H-indol-3-il)-propiónico 2-5 (1.5 g, 96 %) como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 810.64 (s, 1H), 7.35 (d, 1H,J= 8.4 Hz ), 6.96 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.63 (m, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.56 (m, 1H), 2.86-2.97 (m, 2H), 1.90 (s, 1H), 1.10 (t, 3H,J= 7.2 Hz); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-DMSO): 8155.85, 137.21, 122.60, 119.31, 110.32, 108.92, 94.81, 60.28, 55.60, 31.29, 14.42; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C14H19N2O3+: 263.1390, encontrado: 263.1399; Pureza >95 %.

Síntesis de 1-metil-7-metoxi-9H-pirido[3,4-b]indol-3-carboxilato de etilo (2-7). A la mezcla de 2-4 (1 g, 3.81 mmol) y acetaldehído (40 % en agua, 0.46 mL, 4.19 mmol) en 15 mL de diclorometano, se le añadieron 0.4 mL de ácido trifluoroacético gota a gota a 0 °C. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por TLC, la mezcla de reacción se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con 50 mL de solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener 2-6 como un sólido blanco que se llevó a la siguiente etapa sin purificación. Una mezcla de 2-6 (1.04 g, 3.81 mmol) y azufre (248 mg, 7.63 mmol) en xileno (150 mL) se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego, la mezcla se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCMVMeOH como eluyente para proporcionar 1-metil-7-metoxi-9H-pirido[3,4-b]indol-3-carboxilato de etilo 2-7 (755 mg, 75 %) como un sólido marrón. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.49 (s, 1 H), 9.10 (s, 1 H), 8.62 (d, 1 H, J= 8.4 Hz ), 7.54 (s, 1 H), 7.38 (m, 1 H), 4.84 (q, 2 H,J= 7.2 Hz), 4.33 (s, 3 H), 3.22 (s, 3 H), 1.82 (t, 1 H,J= 6.6 Hz); RMN de<13>C (150 MHz, d<6>-Acetona): 8166.31, 161.50, 143.09, 141.66, 137.98, 136.84, 128.25, 123.03, 116.01, 115.32, 110.61, 95.33, 60.72, 55.36, 19.94, 14.30; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C16H17N2O3+: 185.1234, encontrado: 285.1237; Pureza >95 %.

Síntesis de (1-metil-7-metoxi-9H-pirido[3,4-b]indol-3-il)metanol (2-8). A una solución del éster 2-7 (160 mg, 0.56 mmol) en THF (15 mL) se le añadió LiAlH<4>(44 mg, 1.17 mmol) en porciones a 0 °C y luego la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Luego, la reacción se inactivó con agua y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, la suspensión se filtró, la torta se lavó con diclorometano, el filtrado se concentró para obtener 2-8 (135 mg, 91 %) como un sólido blanco. RMN d e 1H (600 MHz, d6-DMSO): 8 11.31 (s, 1H), 8.05 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 7.83 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.82 (d, 1H,J= 8.4 Hz), 5.25 (s, 1H), 4.64 (d, 2H,J= 5.4 Hz) 3.86 (s, 3 H), 2.68 (s, 3 H); RMN de 13C (150 MHz, d6-DMSO): 8160.43, 150.39, 142.71, 140.30, 133.87, 128.53, 122.95, 115.41, 109.31, 108.51, 94.99, 65.02, 55.71, 20.56; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C14H15N2O2+: 243.1128, encontrado: 243.1131; Pureza >95 %.

Síntesis de 1-metil-3-metil-7-metoxi-9H-p-carbolina (2-9). A una solución de 2-8 (20 mg, 0.082 mmol) y PdCh (4 mg, 0.016 mmol) en EtOH (1 mL) se le añadió Et<a>SiH (0.201 mL, 1.28 mmol) y la mezcla se agitó a 90 °C durante 5 horas. Una vez finalizada la reacción controlada por TLC, el catalizador se filtró sobre Celite y el filtrado se evaporó. La mezcla de reacción cruda se purificó por cromatografía en columna usando acetato de etilo como eluyente para proporcionar 2-9 (5 mg, 27 %) como sólido blanco. RMN de1H (600 MHz, d6-DMSO): 8 8.01 (d, 1H,J= 7.8 Hz ), 7.66 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.81 (d, 1H,J= 7.8 Hz), 3.86 (s, 3H), 2.68 (s, 3 H), 2.53 (s, 3 H).

Síntesis de 1-acetil-7-metoxi-9H-p-carbolina (3-2). A la mezcla de 6-metoxitriptamina (300 mg, 1.57 mmol) y aldehido pirúvico (45 % en agua, 0.34 mL, 1.89 mmol) en 6 mL de diclorometano, se le añadieron gota a gota 0.157 mL de ácido trifluoroacético a 0 °C. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por TLC, la mezcla de reacción se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con 50 mL de solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener 3-1 como un sólido amarillo que se llevó a la siguiente etapa sin purificación. Una mezcla de 3-1 (1.57 mmol) y KMnO<4>(744 mg, 4.71 mmol) en THF (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Luego, la mezcla se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando acetato de etilo como eluyente para obtener 1-acetil-7-metoxi-9H-p-carbolina 3-2 (60 mg, 16 %) como un sólido marrón. RMN de 1H (600 MHz, d6-DMSO): 811.75 (s, 1 H), 8.45 (d, 1 H,J= 5.4 Hz), 8.30 (d, 1 H,J= 4.8 Hz), 8.16 (d, 1 H, JiHz), 7.31 (m, 1 H), 6.92 (m, 1 H), 3.86 (s, 3 H), 2.77 (s, 3 H); RMN de 13C (150 MHz, d6-DMSO): 8201.88, 161.20, 144.06, 138.14, 135.78, 134.69, 131.58, 123.18, 118.88, 113.89, 110.24, 96.40, 55.76, 26.32; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C14H13N2O2+: 241.0972, encontrado: 241.0966; Pureza >95 %.

Síntesis de 1-(1-hidroxietil)-7-metoxi-9H-p-carbolina (3-3). A una solución de 3-2 (12 mg, 0.05 mmol) en MeOH (2 mL) se le añadió NaBH<4>(4 mg, 0.1 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Luego, la reacción se inactivó con agua, se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo. Se recogió la capa orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó por agitación rotatoria para obtener el compuesto deseado 3-3 (6 mg, 49 %) como un sólido amarillo. RMN de 1H (600 MHz, d6-DMSO): 811.09 (s, 1 H), 8.17 (d, 1 H,J= 4.8 Hz), 8.05 (d, 1 H,J= 8.4 Hz ), 7.86 (d, 1 H,J= 4.8 Hz), 7.17 (m, 1 H), 6.82 (m, 1 H), 5.67 (d, 1 H,J= 4.8 Hz), 5.16 (m, 1 H), 3.85 (s, 3 H), 1.53 (d, 3 H,J= 6 Hz); RMN de 13C (150 MHz, d6-DMSO): 8160.46, 148.37, 142.56, 137.25, 132.78, 128.93, 122.66, 114.66, 113.15, 109.32, 95.46, 69.59, 55.67, 23.36; HRMS (ESI):m/z[M H]+ calculado para C14H15N2O2+: 243.1128, encontrado: 243.1131; Pureza >95 %.

Ejemplo de referencia 2:Síntesis química de análogos de harmina seleccionados

Los análogos de amina harmina en posición 1 se sintetizaron siguiendo la secuencia de reacción descrita en la Figura 1. La m-anisidina se sometió a diazotización clásica para formar la sal de arildiazonio correspondiente que se acopló con 3-carboxi-2-piperidona para obtener arilhidrazona 1-2 (Luis et al., "The Fischer Indole Synthesis of 8-Methyl-5-Substituted-1-Oxo-p-Carbolines: ARemarkable High Yield of a [1,2]-Methyl Migration," Tetrahedron 47(9):1737-44 (1991)). La ciclización de indol de Fisher de la arilhidrazona resultante en presencia de ácido fórmico produjo 1,2,3,4-tetrahidro-1-oxo-p-carbolina 1-3 (Luis et al., "The Fischer Indole Synthesis of 8-Methyl-5-Substituted-1-Oxo-p-Carbolines: A Remarkable High Yield of a [1,2]-Methyl Migration," Tetrahedron 47(9): 1737-44 (1991)). La oxidación de 1-3 usando DDQ seguida de cloración con oxicloruro de fósforo generó 1-cloro-p-carbolina 1-5 con un rendimiento del 79 % (Roggero et al., "Efficient Synthesis of Eudistomin U and Evaluation of its Cytotoxicity," Bioorg. Med. Chem. Lett. 24(15): 3549-3551 (2014) y Thompson et al., "Synthesis and Evaluation of 1-Amino-6-Halo-p-Carbolines as Antimalarial and Antiprion Agents," ChemMedChem 7(4): 578-586 (2012), que se incorporan al presente documento por referencia en su totalidad). Finalmente, las 1-amino-p-carbolinas 1-6 (10 análogos) se prepararon mediante aminación de precursores de 1-cloro 1-5 calentando con un exceso de amina pura a 170 °C con un rendimiento del 43-87 % (Thompson et al., "Synthesis and Evaluation of 1-Amino-6-Halo-p-Carbolines as Antimalarial and Antiprion Agents," ChemMedChem 7(4): 578-586 (2012)). El análogo 1-6a se sintetizó por aminación catalizada por Pd de 1-5 (Henderson et al., "Palladium-Catalyzed Amination of Unprotected Halo-7-Azaindoles," Org. Lett. 12(20): 4438-4441 (2010), que se incorpora al presente documento por referencia en su totalidad).

Se sintetizaron p-carbolinas sustituidas con 1-hidroximetilo y 3-hidroximetilo utilizando la secuencia que se muestra en la Figura 2. La oxidación de la harmina con m-CPBA generó el N-óxido 2-1 correspondiente, que posteriormente experimentó una transposición de Boekelheide en presencia de anhídrido trifluoroacético para obtener la p-carbolina de 1-hidroximetilo 2-2 como un sólido blanco con un rendimiento del 49 % (Lin et al., "A Facile Synthesis of 3-Substituted 9H-Pyrido[3,4-b]Indol-1(2H)-One Derivatives from 3-Substituted p-Carbolines," Molecules 15: 5680-5691 (2010) y Fontenas et al., "The Boekelheide Reaction: Trifluoroacetic Anhydride as a Convenient Acylating Agent," Synth. Commun. 25(5): 629-33 (1995)). Alternativamente, el 6-metoxiindol se hizo reaccionar con oxima 2-3, preparada a partir de 3-bromo-2-oxopropanoato de etilo, en presencia de carbonato de sodio a temperatura ambiente para obtener indol-oxima 2-4 (Park et al., "Synthesis and Activity of Tryptophan Sulfonamide Derivatives as Novel Non-Hydroxamate TNF-a Converting Enzyme (TACE) Inhibitors," Bioorg. Med. Chem. 17(11): 3857-3865 (2009)). Reducción de oxima de 2-4 con polvo de zinc en ácido acético proporcionó entonces éster triptofanílico 2-5 que se sometió a ciclización de Pictet-Spengler con acetaldehído para proporcionar la 1-metil-3-hidroximetil tetrahidro-p-carbolina 2-6 (Park et al., "Synthesis and Activity of Tryptophan Sulfonamide Derivatives as Novel Non-Hydroxamate TNF-a Converting Enzyme (TACE) Inhibitors," Bioorg. Med. Chem. 17(11): 3857-3865 (2009) y Song et al., Synthesis and Antiviral and Fungicidal Activity Evaluation of p-Carboline, Dihydro-p-carboline, Tetrahydro-p-carboline Alkaloids, and Their Derivatives," J. Agric. Food Chem. 62(5):1010-1018 (2014)). La aromatización del compuesto 2-6 seguido de la reducción del éster produjo el compuesto final 2-8 como un sólido blanco (Song et al., Synthesis and Antiviral and Fungicidal Activity Evaluation of p-Carboline, Dihydro-p-carboline, Tetrahydro-p-carboline Alkaloids, and Their Derivatives," J. Agric. Food Chem. 62(5): 1010-1018 (2014)).

La síntesis de análogos de 1-(1-hidroxi)etilo y 1-acetil harmina se describe en la Figura 3. La 6-metoxi triptamina se sometió a ciclización de Pictet-Spengler con aldehído pirúvico en presencia de 5 % de TFA para proporcionar 1-acetil-7-metoxi-tetrahidro-p-carbolina 3-1. La aromatización del compuesto 3-1 seguido de la reducción del grupo acetilo produjo el análogo 1 -(1-hidroxietil) harmina 3-3 como un sólido blanco con un rendimiento del 49 %.

Ejemplo de referencia 3:Estudios de la relación estructura-actividad (SAR) de análogos de harmina seleccionados

Se introdujeron modificaciones estructurales en la posición 1 de la harmina para identificar nuevos inhibidores de DYRK1A basados en harmina que puedan vincularse a los agonistas de GLP-1 para la administración dirigida a las células p. Se sintetizaron un total de 15 análogos de harmina siguiendo las rutas descritas en las Figuras 1-2. La actividad de unión de DYRK1A de estos análogos se evaluó utilizando el ensayo de unión LanthaScreen basado en FRET (Life Technologies), inicialmente a 1000 nM y 300 nM. Aquellos compuestos que mostraron > 50 % de inhibición a 300 nM se titularon utilizando diez diluciones seriadas triples (por duplicado) para la determinación de IC<50>.

Se investigó el efecto de las cicloalquilaminas en la posición 1 de la harmina sobre la unión de DYRK1A. En primer lugar, se sintetizaron tres análogos con sustituyentes azetidina (1-6a), pirrolidina (1 -6b) y piperidina (1-6c) en la posición 1. El compuesto 1-6a mostró la mejor actividad con IC<50>de 159 nM. Sin embargo, este compuesto era cinco veces menos activo que la harmina. Aumentar el tamaño del anillo a 5 miembros (pirrolidina, 1 -6b) y de 6 miembros (piperidina, 1-6c) redujo la actividad inhibidora de DYRK1A, con DYRK1A IC<50>de 264 nM y 1500 nM, respectivamente. Se sintetizaron 7 análogos de harmina a partir de bloques de construcción disponibles comercialmente que tienen sustituyentes en la pirrolidina en la posición 1 de la harmina. Como se predijo, el patrón de sustitución en el anillo de pirrolidina fue muy sensible a la actividad de inhibición de DYRK1A. Entre estos análogos, 1-6d y 1-6f mostraron una potente actividad de inhibición de DYRK1A (Tabla 1). Los análogos de pirrolidina sustituidos en 2 fueron inhibidores más potentes en comparación con sus análogos sustituidos en 3. El compuesto 1-6d con sustituyente 2-fenil pirrolidina mostró un IC<50>de DYRK1A de 123 nM comparable a 1-6a (azetidina), y una mejora del doble sobre el análogo correspondiente 1 -6b (Tabla 1). La introducción de un grupo 3-cloro en el 2-fenilo del análogo de pirrolidina 1-harmina fue perjudicial para la actividad (compuesto 1-6i, 22 % de inhibición a 300 nM) (Tabla 1).

Como se muestra en la Tabla 1, la simple sustitución del grupo I-metilo de la harmina con un átomo de cloro (1-5) mejoró significativamente la inhibición de DYRK1A en 3 veces en comparación con la harmina con IC<50>de 8.81 nM. También se investigó el efecto de introducir grupos polares como hidroxilo, metilhidroxilo y acetilo en la posición 1 de la harmina. La sustitución del 1-metilo por el sustituyente hidroxilo redujo drásticamente la inhibición de DYRK1A, volviendo inactivo el compuesto. Por el contrario, la introducción del grupo 1-hidroximetilo (2-2) mostró una potente inhibición de DYRK1A con IC<50>de 55 nM, comparable pero ligeramente menos potente que la harmina y una mejora de 2 veces sobre el análogo de 1-(2-fenilpirrolidin-1-il)harmina 1-6d (Tabla 1). Una versión del compuesto 2-2 con un grupo hidroximetilo en la posición 3-carbolina de la harmina se sintetizó como se muestra en la Figura 4B. El análogo sustituido con 3-hidroximetilo 2-8 mostró una IC<50>comparable al compuesto 2-2 (Tabla 1). La eliminación del grupo hidroxilo (análogo de 3-metil carbolina) tuvo una IC<50>= 971 nM lo que indica la importancia del grupo hidroxilo en 2-8.

La introducción de un grupo alfa metilo en el sustituyente 1-hidroximetilo de la harmina 3-3 condujo a una pérdida completa de la actividad de unión de DYRK1A en la concentración de detección, mientras que el análogo sustituido con 1-acetilo planar (3-2) tenía un IC<50>(66.7 nM) similar a los compuestos 2-2 y 2-8. Esto indica que el grupo 1-hidroximetilo de 2-2 ocupa un espacio restringido que no admite más volumen estérico, probablemente en ninguno de los modos de enlace.

Ejemplo de referencia 4:Ensayo de proliferación de células p humanas

Ocho compuestos, 1-5, 1-6a, 1 -6b, 1-6d, 1-6f, 2-2, 2-8, y 3-2 que mostraron una IC<50>de inhibición de DYRK1A < 250 nM (Tabla 1) se evaluaron por su capacidad para inducir la proliferación de células p humanasin vitro.Entre los análogos de la harmina, los compuestos 2-2, 2-8, y 1-5 exhibieron una muy buena proliferación de células p humanas a 10 pM comparable a la harmina, medida mediante el marcado con KI67 de células de insulina (Figuras 4A-4B) (Wang et al., 2015). El compuesto 3-2 con sustituyente acetilo en la posición 1 de la harmina, a pesar de tener una IC<50>comparable a 2-2 y 2-8 (Tabla 1) mostró una proliferación reducida de células p a 10 pM (Tabla 2). Sin embargo, cuando el compuesto se probó en una concentración más alta de 30 pM, se observó una proliferación en un intervalo comparable a la harmina. Ambos compuestos 2-2 y 2-8 provocaron proliferación de manera dependiente de la dosis (Figuras 4C-4D) con el compuesto 2-8 mostrando una proliferación superior de células p humanas a dosis más bajas en comparación con 2-2. A diferencia de la harmina, que causa toxicidad en las células beta en dosis superiores a 10 pM, el compuesto 2-2 y 2-8 no causó toxicidad incluso a 30 pM. Esto sugiere que estos compuestos podrían administrarse en concentraciones más altas (> 10 pM)in vivo/in vitropara la proliferación de células p con potencial reducido de citotoxicidad. Los compuestos 2-2 y 2-8 también impulsaron la translocación de NFAT2 al núcleo como se observó para la harmina. Estos datos indican que estos compuestos impulsan la proliferación de células p como la harmina, al inducir la translocación de los NFAT al núcleo, probablemente permitiendo el acceso al promotor de genes que posteriormente impulsan la proliferación de células p humanas (Figuras 4E-4F).

Desafortunadamente, los análogos de harmina sustituidos en 1-amino 1-6a, 1 -6b, 1-6d y 1-6f no mostraron ninguna proliferación de células p a pesar de mostrar una inhibición de DYRK1A <200 nM, lo que puede indicar un umbral de potencia de DYRK1A para la proliferación de células p. Una explicación alternativa es que algunos de los compuestos con proliferación reducida de células p podrían estar apuntando a otras quinasas antiproliferativas además de DYRK1A.

��Ejemplo de referencia 5:Perfil de escaneo del Kinoma

Para comprender la selectividad de las quinasas en un subconjunto de compuestos, se realiza el perfil del kinoma del compuesto 2-2 y la harmina se llevó a cabo en 468 quinasas a una concentración de 10 pM (Tabla 3, actividades < 20 % indicadas a continuación). La harmina inhibió 16 quinasas (<20 % de actividad restante) además de DYRK1A a una concentración de detección de 10 pM. El compuesto 2-2 exhibió un perfil del kinoma más limpio en comparación con la harmina sin inhibición contra DYRK1B, CSNK1G2, CSNK2A1, HIPK2, HIPK3, IRAK1 y VPS3 a 10 pM (Tabla 3). Además, en comparación con la harmina, solo mostró una afinidad mayor que la harmina hacia PIK4CB en la concentración de detección. Un perfil del kinoma más selectivo indica que se han logrado mejoras en la selectividad para el compuesto 2-2 en comparación con la harmina.

Tabla 3. Escaneo del Kinoma del Compuesto de referencia 2-2 y harmina3

Ejemplo de referencia 6 -A n á l is is d e lo s e je m p lo s d e r e fe r e n c ia 1 -5

L o s e je m p lo s 1 -4 d e s c r ib e n la s r e la c io n e s e s t r u c tu r a - a c t iv id a d d e la in h ib ic ió n d e D Y R K 1 A y la p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p p a ra n u e v o s a n á lo g o s d e h a r m in a . V a r io s a n á lo g o s d e 1 - a m in o h a r m in a ( 1 - 6 a - 1 - 6 j) s e s in te t iz a r o n p a r a in v e s t ig a r s u e fe c to s o b r e la u n ió n d e la q u in a s a D Y R K 1 A y la p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p h u m a n a s . L a m a y o r ía d e lo s c o m p u e s to s m o s t r a r o n u n a a c t iv id a d d e in h ib ic ió n d e D Y R K 1 A r e d u c id a e n la c o n c e n t r a c ió n d e d e te c c ió n d e 10 p M c o n la e x c e p c ió n d e lo s a n á lo g o s d e h a r m in a 1 -6 a , 1 - 6 b , 1 -6 d . E s to s a n á lo g o s m o s t r a r o n u n a a c t iv id a d in h ib id o r a d e D Y R K 1 A r e d u c id a d e 5 a 9 v e c e s e n c o m p a r a c ió n c o n la h a r m in a .

P o r e l c o n t r a r io , lo s a n á lo g o s d e h a r m in a 2 -2 , 2 - 8 , y 3 -2 ( c a d a u n o c o n p e q u e ñ o s g r u p o s p o la r e s , p o r e je m p lo , h id r o x im e t i lo o a c e t i lo ) e x h ib ie r o n u n a p o te n te in h ib ic ió n d e D Y R K 1 A c o n u n a IC<50>e n e l in t e r v a lo d e 49 - 67 n M , 2 v e c e s m á s a c t iv o q u e e l a n á lo g o d e h a r m in a 1 - a z e t id in a 1 - 6 b . S in e m b a r g o , la in t r o d u c c ió n d e l s u s t i t u y e n te 1 - h id r o x i u n id o d ir e c ta m e n te fu e p e r ju d ic ia l p a r a la in h ib ic ió n d e D Y R K 1 A . E l a n á lo g o d e h a r m in a s u s t i tu id o c o n 1 - c lo r o m e jo r ó s ig n i f ic a t iv a m e n te la in h ib ic ió n d e D Y R K 1 A y fu e e l c o m p u e s to m á s p o te n te c o n u n a IC<50>d e 8.8 n M . E n t r e lo s 8 c o m p u e s to s c o n u n a IC<50>< 250 n M c o n t r a D Y R K 1 A , ( 1 -5 , 1 -6 a , 1 -6 b , 1 -6 d , 1 -6 f , 2 -2 , 2 -8 , 3 - 2 ) 1 -5 , 2 -2 , 2 -8 , y 3 -2 e x h ib ie r o n u n a p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p h u m a n a s c o m p a r a b le a la d e la h a r m in a e n c o n c e n t r a c io n e s s im i la r e s o r e d u c id a s . A n á lo g o s d e h a r m in a 2 - 2 y 2 - 8 fu e r o n m á s e f ic a c e s p a r a in d u c i r la p r o l i f e r a c ió n d e c é lu la s p h u m a n a s , lo q u e in d ic a q u e la in t r o d u c c ió n d e g r u p o s p o la r e s c o m o e l h id r o x im e t i lo e n la s p o s ic io n e s 1 y 3 d e la h a r m in a m e jo r a la p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p p o s ib le m e n te a l m e jo r a r la s e le c t iv id a d d e la q u in a s a . N in g u n o d e lo s a n á lo g o s d e 1 - a m in o h a r m in a p r o v o c ó p r o l i fe r a c ió n . E l e s c a n e o d e l k in o m a d e l c o m p u e s to 2 - 2 p a r a 468 q u in a s a s m o s t r ó q u e e x h ib e u n p e r f i l d e l k in o m a m á s l im p io e n c o m p a r a c ió n c o n la h a r m in a . E s to s d a to s in d ic a n e l p o te n c ia l d e m e jo r a d e l a n d a m ia je d e h a r m in a p a r a la s e le c t iv id a d d e la q u in a s a , lo q u e r e s u l ta e n la p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p a m e n o r c o n c e n t r a c ió nin vitro,lo q u e p o d r ía c o n d u c i r a u n p e r f i l m á s s e g u r o , fu e r a d e l o b je t iv o . E s to s r e s u l ta d o s m u e s t r a n la m o d i f ic a c ió n e x i t o s a d e la h a r m in a p a ra id e n t i f ic a r u n n u e v o in h ib id o r s e le c t iv o d e la q u in a s a D Y R K 1 A 2 - 8 c o n c a p a c id a d m e jo r a d a d e p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p.

Ejemplo de referencia 7 -M a te r ia le s y m é to d o s p a r a e l e je m p lo d e r e fe r e n c ia 8

S ín te s is d e 1 - m e t i l - 9 H - p i r id o [3 ,4 - b ] in d o l - 7 - o l ( 10 - 1 ) . U n a s o lu c ió n d e h a r m in a ( 1.0 g , 4.02 m m o l) e n á c id o a c é t ic o g la c ia l ( 16 m L ) y s o lu c ió n d e á c id o b r o m h íd r ic o a l 48 % ( 20 m L ) s e c a le n tó a r e f lu jo d u r a n te 10 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a te m p e r a t u r a a m b ie n te , la m e z c la s e a ju s tó a p H 8 c o n u n a s o lu c ió n a c u o s a s a tu r a d a d e N a H C O<3>. L a s u s p e n s ió n a m a r i l la s e f i l t r ó y la to r ta s e la v ó c o n a g u a p a r a o b t e n e r h a r m o l 10 -1 c o m o u n s ó lid o b la n c o (0.91 g , 99 % ) . R M N d e<1>H ( 600 M H z , d e -D M S O ) : 6 11.24 (s , 1 H ), 9.72 (s , 1 H ) , 8.11 (d ,J= 5.2 H z , 1 H ) , 7.94 (d ,J= 8.0 H z , 1 H ) , 7.75 (d ,J= 5.2 H z , 1 H ) , 6.90 (d ,J= 1.2 H z , 1 H ) , 6.69 (d d ,J= 8.4 H z , 1 H ,) , 2.69 (s , 3 H ) ; M S ( E S I )m /z199.08 ( M H ) .

P r o c e d im ie n to g e n e r a l p a ra la s ín te s is d e 10 -2. U n a s o lu c ió n d e h a r m a lo l 10 -1 ( 2.02 m m o l) y c a r b o n a to d e c e s io (1.5 e q . ) e n D M F (7 m L ) s e a g itó a 60 ° C d u r a n te 1 h o ra . A e s ta s o lu c ió n s e a ñ a d ió b r o m u r o d e a lq u i lo ( 1.5 e q . ) y s e a g i tó a 50 ° C d u r a n te 12 h o r a s . U n a v e z c o m p le ta d a la r e a c c ió n c o n f i r m a d a p o r T L C , la m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a , s e t r a n s f i r ió a u n e m b u d o d e d e c a n ta c ió n y s e e x t r a jo c o n a c e ta to d e e t i lo (50 m L X 2 ) . L a c a p a o r g á n ic a s e la v ó c o n a g u a , s e s e c ó s o b r e s u lf a t o d e m a g n e s io , s e f i l t r ó , s e e v a p o r ó y s e p u r i f ic ó p o r c r o m a to g r a f í a e n c o lu m n a u lt r a r r á p id a p a ra o b t e n e r e l p r o d u c to d e s e a d o 10 -2 c o m o u n s ó lid o b la n c o .

É s te r m e t í l ic o d e l á c id o 2 - ( 1 - o x i - 1 - m e t i l - 9 - H - b - c a r b o l in ) a c é t ic o ( 10 - 2 a ) . S ó lid o b la n c o . R e n d im ie n to d e l d e 59 % . R M N d e<1>H ( 600 M H z , C D<3>O D ) : 6 8.07 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ) , 7.96 (d ,J= 9 H z , 1 H ) , 7.75 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ) , 6.96 (d ,J= 2.4 H z , 1 H ) , 6.87 (m , 1 H ) , 4.79 (s , 2 H ) , 3.80 (s , 3 H ) , 2.73 (s , 3 H ) ; M S ( E S I )m /z271.18 ( M H ) . É s te r m e t í l ic o d e l á c id o 3 - ( 1 - o x i - 1 - m e t i l - 9 - H - b - c a r b o l in ) p r o p ió n ic o ( 10 - 2 b ) . S ó l id o b la n c o . R e n d im ie n to d e l 44 % . R M N d e<1>H ( 600 M H z , C D<3>O D ) : 6 8.08 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ), 7.96 (d ,J= 8.4 H z , 1 H ), 7.80 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ), 6.92 (s , 1 H ) , 6.79 (m , 1 H ) , 4.84 (t,J= 7.2 H z , 2 H ) , 3.57 (s , 3 H ) , 2.98 (s , 3 H ) , 2.80 (t,J= 7.2 H z , 2 H ) ; M S ( E S I )m /z285.6 ( M H ) .

É s te r m e t í l ic o d e l á c id o 4 - ( 1 - o x i - 1 - m e t i l - 9 - H - b - c a r b o l in ) b u t a n o ic o ( 10 - 2 c ) . S ó l id o b la n c o . R e n d im ie n to d e l 68 % . R M N d e<1>H ( 600 M H z , C D<3>O D ) : 6 8.08 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ), 7.98 (d ,J= 8.4 H z , 1 H ) , 7.79 (d ,J= 5.4 H z , 1 H ) , 7.02 (s, 1H), 6.84 (d,J =9 Hz, 1H), 4.11 (t,J = 6 Hz,2H), 3.68 (s, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.56 (t,J =7.2 Hz, 2H), 2.13 (t,J= 6.6 Hz, 2H); MS (ESI)m/z299.8 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 5-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)pentanoico (10-2d). Sólido blanco. Rendimiento del 50 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.79 (d,J= 6 Hz, 1H), 7.02 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 4.10 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.65 (s, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.45 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.85 (m, 2H); MS (ESI)m/z313.6 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 6-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)hexanoico (10-2e). Sólido blanco. Rendimiento del 50 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.78 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.01 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.83 (m, 1H), 4.06 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.65 (s, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.38 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.54 (m, 2H); MS (ESI)m/z327.5 (M+H)+.

Éster terc-butílico del ácido 2-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)acético (10-2f). Sólido blanco. Rendimiento del 42 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.49 (s, 1H), 8.15 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.93 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.83 (m, 1H), 4.77 (s, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.45 (s, 9H); MS (ESI)m/z313.1 (M+H)+.

Éster terc-butílico del ácido 3-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)propiónico (10-2g). Sólido blanco. Rendimiento del 32 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 89.82 (s, 1H), 8.12 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.93 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.74 (m, 1H), 4.72 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.62 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.24 (s, 9H); MS (ESI)m/z327.1 (M+H)+.

Éster terc-butílico del ácido 4-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)butanoico (10-2h). Sólido blanco. Rendimiento del 55 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.37 (s, 1H), 8.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.98 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.83 (m, 1H), 4.08 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.41 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); MS (ESI)m/z341.1 (M+H)+.

Éster terc-butílico del ácido 5-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)pentanoico (10-2i). Sólido blanco. Rendimiento del 40 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 89.40 (s, 1H), 8.31 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.85 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.89 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.00 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.31 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 1.81 (m, 4H), 1.45 (s, 9H); MS (ESI)m/z355.2 (M+H)+.

Éster terc-butílico del ácido 6-(7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)hexanoico (10-2j). Sólido blanco. Rendimiento del 39 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 89.83 (s, 1H), 8.31 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.94 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.84 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 3.96 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.25 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.50 (m, 2H), 1.44 (s, 9H); MS (ESI)m/z369.2 (M+H)+.

Carbamato de terc-butilo de 2-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etilo (10-2k). Sólido blanco. Rendimiento del 67 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.78 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.10 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 3.48 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.75 (s, 3H), 1.44 (s, 9H); MS (ESI)m/z342.21 (M+H)+.

Carbamato de terc-butilo de 3-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)propilo (10-2l). Sólido blanco. Rendimiento del 57 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.38 (s, 1H), 8.13 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.04 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.79 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.97 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.94 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 6.82 (m, 1H), 4.07 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 3.12 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.89 (m, 2 H), 1.38 (s, 9H); MS (ESI)m/z356.21 (M+H)+.

Carbamato de terc-butilo de 4-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)butilo (10-2m). Sólido blanco. Rendimiento del 67 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.39 (s, 1H), 8.13 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.04 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.97 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.87 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 6.82 (m, 1H), 4.06 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.75 (m, 2 H), 1.56 (m, 2H), 1.37 (s, 9H); MS (ESI)m/z370.22 (M+H)+.

Carbamato de terc-butilo de 2-((7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etoxi)etilo (10-2n). Sólido blanco. Rendimiento del 46 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.40 (s, 1H), 8.13 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.04 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.0 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.84 (m, 1H), 6.81 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 4.19 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.78 (t,J= 4.2 Hz, 2H), 3.48 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.12 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.37 (s, 9H); MS (ESI)m/z386.22 (M+H)+.

2- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)metoxietilo (10-20). Sólido blanco. Rendimiento del 38 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.01 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.83 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.22 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.80 (t,J= 4.2 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H), 2.77 (s, 3H); MS (ESI)m/z257.34 (M+H)+.

3- (7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etoxietilo (10-2p). Sólido blanco. Rendimiento del 48 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.0 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.06 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.90 (m, 1H), 4.22 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.84 (t,J= 4.2 Hz, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 2.76 (s, 3H), 1.23 (t,J= 6.6 Hz, 2H); MS (ESI)m/z271.76 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis de 10-3. Una solución de 10-2a a 10-2e (0.175 mmol) y 7 N de amoníaco en metanol (4 mL) en un recipiente a presión sellado se agitó a 90 °C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se evaporó y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/amoníaco (90/9/1) como eluyente para obtener el compuesto 10-3 final deseado como un sólido blanco.

2- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)acetamida (10-3a). Sólido blanco. Rendimiento del 91 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 811.45 (s, 1H), 8.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.0 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.90 (m, 1H), 4.53 (s, 2H), 2.71 (s, 3H); MS (ESI)m/z256.1 (M+H)+.

3- (7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)propionamida (10-3b). Sólido blanco. Rendimiento del 97%. MS (ESI)m/z270.1 (M+H)+. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 89.84 (s, 1H), 8.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.96 (s, 2H), 6.73 (m, 1H), 4.67 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 4.53 (s, 2H), 2.71 (s, 3H); MS (ESI)m/z270.1 (M+H)+.

4- (7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)butanamida (10-3c). Sólido blanco. Rendimiento del 84 %. MS (ESI)m/z284.16 (M+H)+. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 8 11.39 (s, 1H), 8.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.82 (m, 2H), 4.06 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.27 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 1.98 (m, 2H); MS (ESI)m/z284.16 (M+H)+.

5- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)pentanamida (10-3d). Sólido blanco. Rendimiento del 85 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 8 11.38 (s, 1H), 8.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.98 (d,J= 2.4 Hz,1H), 6.82 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.07 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.13 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.69 (m, 2H); MS (ESI)m/z298.1 (M+H)+.

6- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)hexanamida (10-3e). Sólido blanco. Rendimiento del 94 %. MS (ESI)m/z312.1 (M+H)+. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 8 11.38 (s, 1H), 8.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.98 (d,J= 2.4 Hz,1H), 6.82 (m, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.07 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.09 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.45 (m, 2H); MS (ESI)m/z312.1 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis de 10-4. Una solución de 10-2f a 10-2j (0.18 mmol) y TFA/DCM (1:1, 4 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se evaporó y se trituró con éter dietílico para obtener el ácido 10-4 deseado como un sólido blanco.

Ácido 2-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)acético (10-4a). Sólido blanco. Rendimiento del 89 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.73 (s, 1H), 8.48 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.43 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.38 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.09 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 2.97 (s, 3H); MS (ESI)m/z257.1 (M+H)+.

Ácido 3-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)propiónico (10-4b). Sólido blanco. Rendimiento del 98 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.59 (s, 1H), 10.64 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.40 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.30 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.97 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.81 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.82 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H); MS (ESI)m/z271.4 (M+H)+.

Ácido 4-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)butanoico (10-4c). Sólido blanco. Rendimiento del 82 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.71 (s, 1H), 12.23 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.40 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.35 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.05 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.17 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.45 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.03 (m, 2H); MS (ESI)m/z285.4 (M+H)+.

Ácido 5-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)pentanoico (10-4d). Sólido blanco. Rendimiento del 85 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.68 (s, 1H), 12.10 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.40 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.35 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.05 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.16 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.32 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.83 (m, 2H); MS (ESI)m/z299.8 (M+H)+.

Ácido 6-(7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)hexanoico (10-4e). Sólido blanco. Rendimiento del 91 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.71 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.40 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.35 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.05 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.16 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.26 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.59 (m, 2H), 1.47 (m, 2H); MS (ESI)m/z313.5 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis de 10-5. A una solución de 10-2k a 10-2n (1.93 mmol) en 1,4-dioxano (4 mL) se le añadió HCl 4 N en dioxano (4 eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por LCMS, la mezcla se evaporó para obtener el producto 10-5 deseado como un sólido blanco.

Ácido clorhídrico 2-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etilamina (10-5a). Sólido blanco. Rendimiento del 90 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 813.08 (s, 1H), 8.47 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.38 (m, 2H), 8.33 (bs, 2H), 7.19 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.10 (m, 1H), 4.37 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 3.30 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H); MS (ESI)m/z242.22 (M+H)+.

Ácido clorhídrico 3-(7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)propilamina (10-5b). Sólido blanco. Rendimiento del 98 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 813.03 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.38 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.09 (bs, 2H), 7.15 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 7.06 (m, 1H), 4.25 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.03 (m, 5H), 2.12 (m, 2H); MS (ESI)m/z256.11 (M+H)+.

Ácido clorhídrico 4-(1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)butilamina (10-5c). Sólido blanco. Rendimiento del 99 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 812.98 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.38 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.35 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.97 (bs, 2H), 7.14 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.05 (d,J= 9 Hz,1H), 4.17 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.87 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.77 (m, 2H); EM (ESI)m/z270.45 (M+H)+.

Ácido clorhídrico 2-((7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etoxi)etilamina (1-5d). Sólido blanco. Rendimiento del 97 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 813.14 (s, 1H), 8.45 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.36 (m, 2H), 8.10 (bs, 2H), 7.18 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.06 (d,J= 9 Hz,1H), 4.31 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.88 (t,J= 4.2 Hz, 2H), 3.73 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H), 3.0 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.77 (m, 2H); EM (ESI)m/z286.27 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis de 10-6. A una solución de 10-5 (0.36 mmol) y trietilamina (2.2 eq.) en DCM se le añadió anhídrido acético gota a gota y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, la mezcla se diluyó con DCM, se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con agua. Se recogió la capa orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para obtener el producto 10-6 deseado como un sólido blanco.

2- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)-2-acetil-etilamina (10-6a). Sólido blanco. Rendimiento del 74 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.39 (s, 1H), 8.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.36 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.95 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 7.90 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 6.99 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.82 (m, 1H), 4.08 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.21 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.81 (s, 3H); EM (ESI)m/z284.62 (M+H)+.

3- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)-2-acetil-propilamina (10-6b). Sólido blanco. Rendimiento del 79 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.39 (s, 1H), 8.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.36 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.95 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 7.90 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 6.99 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.82 (m, 1H), 4.08 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.22 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.90 (m, 2H), 1.81 (s, 3H); MS (ESI)m/z298.71 (M+H)+.

4- (1-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)-2-acetil-butilamina (10-6c). Sólido blanco. Rendimiento del 70 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.47 (s, 1H), 8.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.05 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.93 (m, 1H), 7.80 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.01 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.84 (m, 1H), 4.08 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 3.10 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.80 (m, 5H), 1.59 (m, 2H); MS (ESI)m/z312.18 (M+H)+.

2-((7-oxi-1-metil-9-H-b-carbolin)etoxi)-2-acetil-etilamina (10-6d). Sólido blanco. Rendimiento del 49 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.40 (s, 1H), 8.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.06 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.84 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 6.99 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.84 (m, 1H), 4.20 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.79 (m, 2H), 3.50 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.55 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.79 (s, 3H); MS (ESI)m/z328.44 (M+H)+.

0 - Trifluorometanosulfonil-1-metil-9H-b-carbolin-7-ol (10-7). A una solución de 10-1 (500 mg, 2.52 mmol) y piridina (25.2 mmol) en DCM (4 mL) se le añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (1.2 eq.) a 0 °C gota a gota. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara temperatura ambiente y se agitó durante 12 horas. Una vez finalizada la reacción, la mezcla se evaporó y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida utilizando DCM/MeOH (95/5) como eluyente para obtener el producto 10-7 deseado como sólido blanco (875 mg, 92 %). RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 8 13.01 (s, 1H), 8.67 (d,J= 9 Hz, 1H), 8.61 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.51 (d,J= 6 Hz, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.51 (d,J= 9 Hz, 1H), 2.99 (s, 3H); MS (ESI)m/z331.5 (M+H)+.

7-nitro-1-metil-9H-b-carbolina (10-8). Se cargó un recipiente a presión con 1-7 (100 mg, 0.30 mmol), Pd2(dba)3 (5 % mol), BrettPhos (6 % mol) y nitrito de sodio (42 mg, 0.6 mmol) y se evacuó y se volvió a llenar con argón tres veces. A la mezcla se le añadió terc-butanol (0.6 mL) y TDA (5 % mol) bajo atmósfera de argón. La presión se selló y se calentó a 150 °C durante 24 horas. Una vez finalizada la reacción, la mezcla se evaporó y se purificó mediante cromatografía en columna para obtener 10-8 como un sólido amarillo (80 mg, 77 %). RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>DO): 88.41 (m, 1H), 8.30 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.23 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.08 (m, 1H), 8.01 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 2.82 (s, 3H); MS (ESI)m/z228.31 (M+H)+.

7-amino-1-metil-9H-b-carbolina (10-9). A una solución de 10-8 (80 mg, 0.35 mmol) y paladio sobre carbono (10 % en peso, 100 mg) en metanol (4 mL) se le añadió monohidrato de hidracina (0.34 mL, 7 mmol) y se calentó a 85 °C durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, el catalizador se filtró sobre Celite y el filtrado se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (90/10) como eluyente para obtener el compuesto amino 10-9 deseado como sólido marrón (65 mg, 98 %). RMN de<1>H (600<m>H<z>, CD<3>OD): 88.02 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.82 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.68 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H); MS (ESI)m/z198.16 (M+H)+.

1- benzamida-1-metil-9H-b-carbolina (10-10). A una solución de 10-9 (20 mg, 0.10 mmol) y trietilamina (0.028 mL, 0.20 mmol) en THF (1 mL) se le añadió cloruro de benzoilo a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Una vez finalizada la reacción monitoreada por LCMS, la mezcla se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (95/5) como eluyente para obtener el producto 10-10 deseado como un sólido blanco (23 mg, 77%). RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 811.53 (s, 1H), 10.47 (s, 2H), 8.32 (s, 1H), 8.17 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.13 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.0 (d,J= 7.2 Hz, 2H), 7.85 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.61 (t,J= 7.8 Hz, 1H), 2.55 (m, 3H), 2.74 (s, 3H); MS (ESI)m/z302.29 (M+H)+.

1-acetamida-1-metil-9H-b-carbolina (10-11). A una solución de 10-9 (20 mg, 0.10 mmol) y trietilamina (0.028 mL, 0.20 mmol) en THF (2 mL) se le añadió anhídrido acético gota a gota a 0 ° C y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez finalizada la reacción, la mezcla se diluyó con DCM, se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con agua. Se recogió la capa orgánica, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para obtener el producto 10-6 deseado como un sólido blanco (18 mg, 75 %). RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 811.44 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.15 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.06 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (m, 1H), 7.23 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.10 (s, 3H); MS (ESI)m/z240.52 (M+H)+.

Isopropilcarbamato de 1-metil-9H-pirido[3,4-b]indol-7-ilo (10-12). A una solución de harmalol 10-1 (50 mg, 0.25 mmol) en DMF (2 mL) se le añadió isocianato de isopropilo (0.030 mL, 0.3 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (95/5) como eluyente para obtener el producto 10-12 deseado como un sólido blanco (23 mg, 32 %). RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.09 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 8.12 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.90 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.09 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 1.23 (d,J= 6.6 Hz, 6H); EM (ESI)m /z298.77 (M+H)+.

Ensayos de unión de DYRK1A. Los compuestos se probaron para determinar la actividad de unión de DYRK1A en un servicio de creación de perfiles de quinasas comercial, Life Technologies, que utiliza el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu basado en FRET. Los compuestos se analizaron para determinar la actividad de DYRK1A en concentraciones de 1000 nM y 300 nM por duplicado. La IC<50>se determinó en un ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu de 10 puntos por duplicado.

Ensayo de proliferación de células B. Los islotes pancreáticos humanos se obtuvieron del Programa de Distribución Integrada de Islotes (IIDP) respaldado por el NIH/NIDDK. Los islotes se dispersaron primero con Accutase (Sigma, St. Louis, MO) y se sembraron en cubreobjetos como se describió anteriormente (Wang et al., 2015). Después de 2 horas, las células de los islotes humanos dispersas se trataron con el compuesto en medio completo RPMI1640 durante 96 horas. Luego, las células se fijaron y se tiñeron para insulina y Ki67 (Wang et al., 2015). Se obtuvieron imágenes y contaron las células totales positivas para insulina y las células dobles Ki67 y positivas para insulina. Se contaron al menos 1000 células.

Ejemplo de referencia 8:Síntesis, análisis SAR y ensayos de proliferación de células p humanas de análogos de harmina sustituidos en 7

Los análogos de harmina sustituidos en 7 se sintetizaron siguiendo la secuencia de reacción descrita en la Figura 5. La Tabla 4 muestra que el análogo 10-3b tenía una IC<50>contra DYRK1A de 91 nM, mientras que el análogo 10-4a inhibió DYRK1A con una IC<50>de 71 nM. Por el contrario, los análogos 10-4b y 10-11 tenían una IC<50>contra DYRK1A de 1810 nM y 389 nM, respectivamente. Los compuestos 10-2b, 10-3b, y 10-3e se evaluaron por su capacidad para inducir la proliferación de células p humanasin vitro.La Tabla 5 muestra que estos compuestos mostraron una proliferación de células p reducida en comparación con la harmina, en las dosis probadas.

Tabla 5. Proliferación de células p de análogos de harmina sustituidos de referencia

Compuesto R Proliferación de células p humanas IC<50>(nM)

(Concentración j M)

7

Harmina

1.5 (10) 27

Ejemplo 9- Materiales y métodos para el Ejemplo 10 (compuestos de referencia y compuestos de ejemplo)

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 1-1. A una solución de harmina (1 mmol) en DMF (7 mL) se le añadió NaH (2 eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A esta solución se le añadió bromuro de alquilo (1.5 eq.) a 50 °C y se agitó a esa temperatura durante 12 horas. Una vez completada la reacción confirmada por TLC, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (50 mL X 2). La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida utilizando DCM/MeOH (9/1) como eluyente para obtener el producto 1-1 deseado como un sólido blanco.

Éster metílico del ácido 2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acético (Compuesto de referencia 20-1a). Sólido blanco. Rendimiento del 67 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.12 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.01 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.03 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.87 (s, 3H); MS (ESI)m/z285.33 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propiónico (Compuesto de referencia 20-1b). Sólido blanco. Rendimiento del 81 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.01 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 4.2 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.90 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.90 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.82 (t,J= 7.2 Hz, 2HJ; MS (ESI)m/z299.18 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-1c). Sólido blanco. Rendimiento del 74 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.02 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.90 (m, 1H), 4.61 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.47 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.10 (m, 2H); MS (ESI)m/z213.33 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 5-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanoico (Compuesto de referencia 20-1d). Sólido blanco. Rendimiento del 79 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.03 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 4.52 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.37 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (m, 2H); MS (ESI)m/z327.19 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 6-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexanoico (Compuesto de referencia 20-1e). Sólido blanco. Rendimiento del 82 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.01 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.50 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.29 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.40 (m, 2H); MS (ESI)m/z341.23 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 2-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-1f). Sólido blanco. Rendimiento del 72 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.09 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.99 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.06 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.50 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.65 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.23 (d,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z327.76 (M+H)+.

Éster metílico del ácido 2,2-dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-1g).

Sólido blanco. Rendimiento del 68%. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.11 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.90 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.49 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 1.92 (t,J= 8.4 Hz, 1H), 1.30 (s, 6H); MS (ESI)m/z341.92 (M+H)+.

Éster t-butílico del ácido 2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acético (Compuesto de referencia 20-1h). Sólido blanco. Rendimiento del 100%. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.22 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.03 (bs, 1H), 6.92 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 1.42 (s, 9H); MS (ESI)m/z327.44 (M+H)+.

Éster t-butílico del ácido 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propiónico (Compuesto de referencia 20-1i). Sólido blanco. Rendimiento del 21 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.84 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.71 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.23(s, 9H); MS (ESI)m/z341.54 (M+H)+.

Éster t-butílico del ácido 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-1j). Sólido blanco. Rendimiento del 82%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.24 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.55 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.35 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.38 (s, 9H); MS (ESI)m/z355.31 (M+H)+.

Éster t-butílico del ácido 5-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanoico (Compuesto de referencia 20-1k). Sólido blanco. Rendimiento del 80 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CDCh): 88.28 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.89 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.48 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.02 (s, 3H), 2.28 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); MS (ESI)m/z369.45 (M+H)+.

Éster t-butílico del ácido 6-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexanoico (Compuesto de referencia 20-11). Sólido blanco. Rendimiento del 76 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 88.28 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.89 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 4.46 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.21 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.41 (m, 11H); MS (ESI)m/z383.81 (M+H)+.

N-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)ftalimida (Compuesto de referencia 20-1m). Sólido blanco.

Rendimiento del 60 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.08 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.95 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.83-7.78 (m, 5H), 7.02 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 4.64 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.84 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.24 (m, 2H); MS (ESI)m/z400.71 (M+H)+.

N-(4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butil)ftalimida (Compuesto de referencia 20-1n). Sólido blanco.

Rendimiento del 84%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.06 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.83 (m, 4H), 7.20 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.84 (m, 1H), 4.57 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.61 (t,J= 6 Hz, 2H), 2.90 (s, 3H), 1.74 (m, 4H); MS (ESI)m/z414.23 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propionitrilo (Compuesto de referencia 20-1o). Sólido blanco. Rendimiento del 80 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.82 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.90 (m, 1H), 4.65 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.54 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.11 (m, 2H); MS (ESI)m/z280.71 (M+H)+.

Dimetilacetal de 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propionaldehído (Compuesto de referencia 20-1p.). Sólido blanco. Rendimiento del 100%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.2 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.14 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.60 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 4.42 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.23 (s, 6H), 2.95 (s, 3H), 2.11 (m, 2H); MS (ESI)m/z315.90 (M+H)+.

Dimetilacetal de 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butiraldehído (Compuesto de referencia 20-1q). Sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.09 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.99 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.01 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.52 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 4.36 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.27 (s, 6H), 2.95 (s, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.68 (m, 2H); MS (ESI)m/z329.96 (M+H)+.

5- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-pent-1-ino (Compuesto de referencia 20-1r). Sólido blanco. Rendimiento del 63 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.90 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.03 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.98 (m, 1H), 4.67 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.35 (m, 2H), 2.15 (m, 1H), 2.07 (m, 2H); MS (ESI)m/z279.52 (M+H)+.

6- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-hex-]-ino (Compuesto de referencia 20-1s). Sólido blanco. Rendimiento del 62 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.08 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.20 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.56 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.23 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.54 (m, 2H); MS (ESI)m/z293.36 (M+H)+.

3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-propan-1-eno (Compuesto de referencia 20-1t). Sólido blanco. Rendimiento del 72%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.66 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.54 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.29 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.54 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 6.64 (m, 1H), 5.72 (m, 2H), 5.59 (d,J =10.2 Hz, 1H), 5.19 (d,J =16.8 Hz, 1H), 4.37 (s, 3H), 3.38 (s, 3H); MS (ESI)m/z253.23 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-but-1-eno (Compuesto de referencia 20-1u). Sólido blanco. Rendimiento del 81 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.66 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.52 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.28 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 6.37 (m, 1H), 5.61 (d,J= 16.8 Hz, 1H), 5.49 (d,J= 10.8 Hz, 1H), 5.15 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 4.30 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.08 (m, 2H); MS (ESI)m/z267.44 (M+H)+.

5- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-pent-1-eno (Compuesto de referencia 20-1v). Sólido blanco. Rendimiento del 77%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.65 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.52 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.27 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.60 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 6.37 (m, 1H), 5.55 (d,J= 16.8 Hz, 1H), 5.47 (d,J= 9.6 Hz, 1H), 5.08 (d,J= 7.2 Hz, 2H), 4.39 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 2.69 (m, 2H), 2.40 (m, 2H); MS (ESI)m/z281.28 (M+H)+.

6- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-hex-1-eno (Compuesto de referencia 20-1w). Sólido blanco. Rendimiento del 82%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.08 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.18 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.78 (m, 1H), 5.00 (d,J= 16.8 Hz, 1H), 4.94 (d,J= 10.2 Hz, 1H), 4.55 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.07 (d,J= 7.2 Hz, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.47 (m, 2H); MS (ESI)m/z295.66 (M+H)+.

1- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-fenilmetano (Compuesto de referencia 20-1x). Sólido blanco. Rendimiento del 69%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.18 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.15 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.93 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.28 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 7.23 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.91 (m, 3H), 5.89 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.73 (s, 3H); MS (ESI)m/z303.54 (M+H)+.

2- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-feniletano (Compuesto de referencia 20-1y). Sólido blanco. Rendimiento del 54%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.08 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.24 (m, 5H), 7.08 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.85 (m, 1H), 4.78 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.87 (m, 3H), 3.06 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H); MS (ESI)m/z317.82 (M+H)+.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-fenilpropano (Compuesto de referencia 20-1z). Sólido blanco. Rendimiento del 55%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.15 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.08 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.30 (m, 4H), 7.20 (m, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.53 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 2.79 (s, 3H), 2.73 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.06 (m, 2H); MS (ESI)m/z331.52 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-fenilbutano (Compuesto de referencia 20-1z'). Sólido blanco. Rendimiento del 74%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.64 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.51 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.26 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.70 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 7.65 (d,J= 7.2 Hz, 2H), 7.58 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 5.09 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 4.37 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.15 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.35 (m, 2H), 2.27 (m, 2H); MS (ESI)m/z345.13 (M+H)+.

1-azido-3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propano (Compuesto de referencia 20-1a'). Sólido blanco.

Rendimiento del 100%. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.83 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.94 (m, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.61 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.40 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.09 (m, 2H); MS (ESI)m/z297.15 (M+H)+.

1- azido-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butano (Compuesto de referencia 20-1b'). Sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.01 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.83 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.90 (m, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.53 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.35 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.12 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.69 (m, 2H); MS (ESI)m/z311.16 (M+H)+.

3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)t-buticarboxi-1-propanamida (Compuesto de referencia 20-1c'). Sólido blanco. Rendimiento del 78 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CDCh): 88.27 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.95 (m, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.44 (s, 9H); MS (ESI)m/z370.21 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-2. Una solución de 20-1a a 20-1f (0.175 mmol) y 7 N de amoníaco en metanol (4 mL) en un recipiente a presión sellado se agitó a 90 °C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se evaporó y se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/amoníaco (90/9/1) como eluyente para obtener el compuesto final 20-2 deseado como un sólido blanco.

2- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acetamida (Compuesto de referencia 20-2a). Sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.15 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 715 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.18 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.85 (s, 3H);

MS (ESI)m/z270.61 (M+H)+.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propionamida (Compuesto de referencia 20-2b (Compuesto 14 de Balint et al, arriba). Sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.08 (d,J = 8.4Hz, 1H), 7.87 (d,J = 5.4Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.23 (d,J =1.8 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.78 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.57 (t,J= 7.8 Hz, 2H); MS (ESI)m/z284.43 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de ejemplo 20-2c). Sólido blanco. Rendimiento del 99 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.28 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.53 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.19 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H); MS (ESI)m/z298.31 (M+H)+.

5- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanamida (Compuesto de ejemplo 20-2d). Sólido blanco. Rendimiento del 99 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.19 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.10 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.59 (m, 2H); MS (ESI)m/z312.26 (M+H)+.

6- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexanamida (Compuesto de ejemplo 20-2e). Sólido blanco. Rendimiento del 80 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.17 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.53 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.02 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.36 (m, 2H); MS (ESI)m/z326.66 (M+H)+.

2-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de ejemplo 20-2f). Sólido blanco. Rendimiento del 40 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.91 (bs, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.89 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.46 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.11 (d,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z312.21 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-3. Una solución de 20-1h a 20-11 (0.18 mmol) y TFA/DCM (1:1, 4 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se evaporó y se trituró con éter dietílico para obtener el ácido 1-3 deseado como un sólido blanco.

Ácido 2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acético (Compuesto de referencia 20-3a). Sólido blanco. Rendimiento del 91 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.54 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.41 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.38 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.50 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 7.07 (m, 1H), 5.60 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.10 (s, 3H); MS (ESI)m/z271.17 (M+H)+.

Clorhidrato de ácido 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propiónico (Compuesto de referencia 20-3b). Sólido blanco. Rendimiento del 60%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.31 (d, J= 6 Hz, 1H), 8.25 (d,J= 9 Hz, 2H), 7.37 (s, 1H), 6.99 (m, 1H), 4.88 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 2.82 (t,J= 7.8 Hz, 2H); MS (ESI)m/z285.67 (M+H)+.

Clorhidrato de ácido 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-3c). Sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.53 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.44 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.39 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.66 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.44 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.00 (m, 2H); MS (ESI)m/z299.13 (M+H)+.

Clorhidrato de ácido 5-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanoico (Compuesto de referencia 20-3d). Sólido blanco. Rendimiento del 99%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.53 (d, J= 6 Hz, 1H), 8.43 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.39 (d,J= 8.4 Hz,1H), 7.40 (s, 1H), 7.08 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 4.68 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.30 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.81 (m,2H), 1.63 (m, 2H); MS (ESI)m/z313.38 (M+H)+.

Clorhidrato de ácido 6-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexanoico (Compuesto de referencia 20-3e). Sólido blanco. Rendimiento del 100%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.53 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.43 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.39 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.39 (s,1H), 7.08 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.66 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.20 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.56 (m,2H), 1.41 (m, 2H); MS (ESI)m/z327.17 (M+H)+.

Ácido 2-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-4a). A una solución de éster bencílico del ácido 2-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (216 mg, 0.53 mmol) y Pd-C (45 mg) en MeOH (3 mL) se le añadió trietilsilano (0.84 mL, 5.3 mmol) gota a gota y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Una vez completada la reacción, el catalizador se filtró sobre Celite, el filtrado se evaporó por agitación rotatoria y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9/1) como eluyente para obtener el ácido 20-4a deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 64 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.11 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 (bs, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.89 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.55 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.59 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.19 (d,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z313.63 (M+H)+.

Ácido 2,2-dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (Compuesto de referencia 20-4b). Similar al compuesto 20-4a, se obtuvo ácido 2,2-dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butírico (20-4b) como un sólido blanco. Rendimiento del 60%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.11 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.51 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 1.90 (m, 2H), 1.27 (s, 6H); MS (ESI)m/z327.99 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-5. Una solución de 20-1m o 20-1n (0.12 mmol) y monohidrato de hidracina (20 eq.) en metanol (4 mL) se calentó a reflujo durante 4 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/Et.<3>N (9:1:0,1) como eluyente para obtener el producto 20-5 deseado como un sólido blanco.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propilamina (Compuesto de referencia 20-5a). Sólido blanco. Rendimiento del 36 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.10 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.61 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.75 (m, 2H), 1.97 (m, 2H); MS (ESI)m/z270.30 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butilamina (Compuesto de referencia 20-5b). Sólido blanco. Rendimiento del 34 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.13 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.06 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.17 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.84 (m, 1H), 4.52 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.54 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.40 (m, 2H); MS (ESI)m/z284.27 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-6. A una solución de 20-5 (0.21 mmol) y DIPEA (1.2 eq.) en cloruro de metileno (2 mL) se le añadió anhídrido acético (1.1 eq.) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-6 deseado como un sólido blanco.

N-acetil-3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propilamina (Compuesto de referencia 20-6a). Sólido blanco. Rendimiento del 47%. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.20 (t,J= 6 Hz, 1H), 8.06 (m, 2H), 7.40 (m, 1H), 7.06 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.67 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.52 (m, 5H), 2.16 (m, 2H), 2.08 (s, 3H); MS (ESI)m/z312.39 (M+H)+.

N-acetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butilamina (Compuesto de referencia 20-6b). Sólido blanco. Rendimiento del 63 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.12 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.05 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.91 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.09 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.61 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.19 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.00 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.58 (m, 2H); MS (ESI)m/z326.34 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-7. Una solución de 20-5 (0.35 mmol) y formiato de etilo (0.5 eq.) en etanol (1 mL) se calentó en un microondas CEM a 150 °C durante 30 minutos. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y la mezcla de reacción cruda se disolvió en THF (2 mL) y se añadió LiAlH<4>(3 eq.) en porciones a temperatura ambiente. Después de la adición, la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas. El disolvente se evaporó y la mezcla de reacción cruda se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-7 deseado como un sólido blanco.

N-metil-3-(7-metoxi-p-metil-p-carbolin-9-il)propilamina (Compuesto de referencia 20-7a). Sólido blanco. Rendimiento del 41 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.82 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.06 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.60 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.04 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.61 (s, 3H); MS (ESI)m/z284.53 (M+H)+.

N-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butilamina (Compuesto de referencia 20-7b). Sólido blanco. Rendimiento del 27 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.07 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.96 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.78 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.98 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.46 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.92 (s, 3H), 2.53 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.78 (s, 2H), 1.54 (m, 2H); MS (ESI)m/z298.41 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-8. A una solución de 20-7 (0.03 mmol) y DIPEA (1.2 eq.) en cloruro de metileno (1 mL) se le añadió anhídrido acético (1.1 eq.) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-8 deseado como un sólido blanco.

N-acetil-N-metil-3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propilamina (Compuesto de referencia 20-8a). Sólido blanco. Rendimiento del 41 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 88.27 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.97 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.77 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.51 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.52 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.02 (m, 2H); MS (ESI)m/z326.80 (M+H)+.

N-acetil-N-metil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butilamina (Compuesto de referencia 20-8b). Sólido blanco. Rendimiento del 38 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.26 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.96 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.94 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.51 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.41 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.79 (m,2H), 1.62 (m, 2H); MS (ESI)m/z340.83 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-9. A una solución de 20-5 (0.21 mmol) y formaldehído (37 % en agua, 2.5 eq.) en etanol (1 mL) se le añadió cianoborohidruro de sodio (5 eq.) y unas gotas de ácido acético. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-9 deseado como un sólido blanco.

N,N-dimetil-3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propilamina (Compuesto de referencia 20-9a). Sólido blanco. Rendimiento del 38%. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.27 (s, 1H), 7.97 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.97 (m, 1H), 6.89 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.56 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 2.33 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.24 (s, 6H), 1.98 (m, 2H); MS (ESI)m/z298.27 (M+H)+.

N,N-dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butilamina (Compuesto de referencia 20-9b). Sólido blanco. Rendimiento del 100%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.44 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.38 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.34 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.35 (m, 1H), 6.51 (m, 1H), 4.65 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 3.03 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.70 (s, 6H), 2.46 (s, 3H), 1.76 (m,2H), 1.70 (m, 2H); MS (ESI)m/z312.42 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-10. A una solución de 20-3c o 20-4a,4b (0.24 mmol) y HATU (1.2 eq.) en DMF (2 mL) se le añadió DIPEA (2 eq.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió alquilamina (1 eq.) a la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante otras 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se inactivó con agua (50 mL) y se transfirió a un embudo de decantación. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo tres veces y posteriormente, la capa orgánica combinada se lavó con salmuera y agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna utilizando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-10 deseado como un sólido blanco.

N-(isopropil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de referencia 20-10a). Sólido blanco. Rendimiento del 31 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.28 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.21 (m, 2H), 7.82 (d,J= 6 Hz, 1H), 7.27 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 7.06 (m, 1H), 4.68 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.91 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.32 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.16 (m, 2H), 1.10 (d,J= 6.6 Hz, 6H); MS (ESI)m/z340.42 (M+H)+.

N-(t-butil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de referencia 20-10b). Sólido blanco. Rendimiento del 52 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.32 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.22 (m, 2H), 7.52 (bs, 1H), 7.30 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.08 (m, 1H), 4.67 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.19 (s, 3H), 2.31 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.14 (m, 2H), 1.30 (s, 9H); MS (ESI)m/z354.37 (M+H)+.

N-(2-metoxietil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de referencia 20-10c). Rendimiento del 36 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.28-8.33 (m, 2H), 7.96 (t,J= 5.4 Hz, 1H), 7.38 (bs, 1H), 7.02 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.61 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.31 (m, 5H), 3.21 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.25 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.99 (m, 2H); MS (ESI)m/z356.51 (M+H)+.

N-(butil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de referencia 20-10d). Sólido blanco. Rendimiento del 44 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.29 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.21 (m, 2H), 7.90 (bs, 1H), 7.28 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.06 (m, 1H), 4.69 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 3.19 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.39 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.17 (m, 2H), 1.44 (m, 2H), 1.34 (m, 2H), 0.92 (t,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z354.90 (M+H)+.

N-(1-metilbutil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de referencia 20-10e). Sólido blanco. Rendimiento del 46%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.43 (bs, 1H), 8.39 (m, 1H), 8.35 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 7.68 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.06 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.64 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.76 (m, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.22 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.25 (m, 4H), 2.75 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 2.70 (s, 6H), 0.84 (t,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z368.45 (M+H)+.

N-(isopropil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-a-metilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10f). Sólido blanco. Rendimiento del 33 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.14 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.99 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.10 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.96 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.47 (m, 1H), 3.99 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.48 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 1.14-1.18 (m, 9H); MS (ESI)m/z354.57 (M+H)+.

N-(t-butil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-ilo)-a-metilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10g). Rendimiento del 28 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11-8.16 (m, 3H), 7.60 (bs, 1H), 7.15 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 7.00 (m, 1H), 4.59 (m, 1H), 4.44 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 2.53 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 1.83 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.16 (d,J= 6.6 Hz, 3H); MS (ESI)m/z368.59 (M+H)+.

N-(2-metoxietil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-ilo)-a-metilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10h). Sólido blanco. Rendimiento del 41 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.13 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 6 Hz, 1H), 7.15 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.99 (m, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.00 (m, 3H), 3.39-3.48 (m, 3H), 3.33-3.35 (m, 4H), 3.09 (s, 3H), 2.56 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.20 (d,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z370.87 (M+H)+.

N-(butil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-ilo)-a-metilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10i). Sólido blanco. Rendimiento del 42 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.16-8.19 (m, 3H), 7.96 (bs, 1H), 7.18 (bs, 1H), 7.03 (d,J =7.8 Hz, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.18 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (m, 1H), 2.19 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 1.49 (m, 2H), 1.36 (m, 2H), 1.20 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 0.94 (t,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z368.87 (M+H)+.

N-(1-metilbutil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-ilo)-a-metilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10j). Sólido blanco. Rendimiento del 44 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.92 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.96 (m, 4H), 3.00 (s, 3H), 2.49 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.38-1.45 (m, 4H), 1.18 (d,J= 7.2 Hz, 3H), 1.14 (t,J= 7.2 Hz, 3H), 0.93 (t,J= 6.6 Hz, 3H); MS (ESI)m/z382.60 (M+H)+.

N-(2-metoxietil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-a,a-dimetilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10k). Sólido blanco. Rendimiento del 31 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.12 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.96 (d,J= 4.2 Hz, 1H), 7.73 (bs, 1H), 7.13 (bs, 1H), 6.94 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.52 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.53 (m, 2H), 3.47 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 2.01 (m, 2H), 1.34 (s, 6H); MS (ESI)m/z385.02 (M+H)+.

N-(1-metilbutil)-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-ilo)-a,a-dimetilbutanamida (Compuesto de referencia 20-10l). Sólido blanco. Rendimiento del 29 %. RMN d e<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.15 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.13 (d,J= 9 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.31 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.20 (bs, 1H), 6.99 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.57 (m, 2H), 4.06 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.56 (m, 1H), 1.46 (m, 1H), 1.38 (m, 8H), 1.18 (d,J= 6.6 Hz, 3H), 0.94 (t,J= 7.8 Hz, 3H); MS (ESI)m/z396.99 (M+H)+.

N'-hidroxi-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanimidamida (Compuesto de referencia 20-11). Una solución de 20-1o (300 mg, 1.07 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (93 mg, 1.34 mmol) y trimetilamina (0.22 mL, 1.60 mmol) en etanol (2 mL) se calentó a reflujo durante 12 horas. Se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/NH<3>(9:1:0.5) como eluyente para obtener el producto 20-11 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 74 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 8 8.15 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.20 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.50 (bs, 2H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.76 (m, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.10 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.95 (m, 2H); MS (ESI)m/z313.46 (M+H)+.

3-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)-5-triclorometil-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-12). A una solución de 20-11 (150 mg, 0.48 mmol) y piridina (0.154 mL, 1.92 mmol) en tolueno se le añadió cloruro de tricloroacetilo (0.06 mL, 0.57 mmol) a 0 °C y se agitó durante otra hora a la misma temperatura. Luego, la mezcla de reacción se calentó a 85 °C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-12 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 8 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.31 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.01 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 6.98 (m, 2H), 4.66 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 2.97 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.38 (m, 2H); MS (ESI)m/z439.27 (M+H)+.

3-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-13). Una solución de 20-12 (18 mg, 0.04 mmol) y 7 N de amoníaco en metanol (2 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/NH<3>(9:1:1) como eluyente para obtener el producto 20-13 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 46 %. RMN de<1>H (600 M<h z>, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.72 (bs, 2H), 7.23 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.62 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.90 (s, 3H), 2.57 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.06 (m, 2H); MS (ESI)m/z338.43 (M+H)+.

1-(3-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il))propil)-1-aminociclopropano (Compuesto de referencia 20-14). A una solución de 20-1o (146 mg, 0.52 mmol) e isopropóxido de titanio (IV) (0.168 mL, 0.57 mmol) en THF (5 mL) se le añadió bromuro de etilmagnesio (1 M en THF, 1.04 mL, 1.04 mmol) a temperatura ambiente gota a gota y se agitó durante 1 hora. Después de eso, se añadió BF3.OEt2 (0.128 mL, 1.04 mmol) a la reacción y se agitó durante 30 minutos más. La reacción se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (15 mL). La solución se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (3 veces, 20 mL). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se evaporaron y se purificaron mediante cromatografía en columna ultrarrápida utilizando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-14 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 5 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.17 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.12 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.17 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.66 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 2.01 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 0.88 (m, 2H), 0.80 (m, 2H); MS (ESI)m/z310.55 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-15. Una solución de 20-1p o 20-1q (5.44 mmol) en AcOH/1,4-dioxano/agua (4:2:1, 14 mL) se calentó a 110 °C durante 4 horas. La reacción se enfrió y se neutralizó con una solución saturada de bicarbonato de sodio. La mezcla de reacción se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (3 veces, 50 mL). Se recogieron las capas orgánicas, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para obtener el compuesto 20 15 final como un sólido blanco.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propanal (Compuesto de referencia 20-15a). Rendimiento del 95 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.12 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.70 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.02 (s, 3H), 2.06 (m, 2H); MS (ESI)m/z269.20(M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanal (Compuesto de referencia 20-15b). Rendimiento del 92 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.09 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.05 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 1.88 (m, 2H), 1.67 (m, 2H); MS (ESI)m/z283.50 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-16. Se añadió hidróxido de amonio (1.59 mL) a una mezcla de cianuro de potasio (109 mg, 1.67 mmol) y cloruro de amonio (89 mg, 1.67 mmol) a 0 ° C y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió solución de 20-15 (150 mg, 0.56 mmol) y MeOH (2 mL) y se agitó a 80 °C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/NH<3>(9:1:1) como eluyente para obtener el producto 20-16 deseado como un sólido blanco.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-cianopropilmina (Compuesto de referencia 20-16a). Rendimiento del 31 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.24 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.82 (m, 1H), 2.97 (s, 3H), 2.12 (m, 1H), 2.04 (m, 1H); MS (ESI)m/z295.28 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-cianobutilamina (Compuesto de referencia 20-16b). Rendimiento del 61 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.23 (bs, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.59 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.77 (m, 1H), 2.95 (s, 3H), 1.85 (m, 2H), 1.75 (m, 2H); MS (ESI)m/z309.36 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-17. A una solución de 20-16 (15 mg, 0.05 mmol) y MeOH (0.5 mL) se le añadió solución de NaOH 1 N (0.104 mL), seguida de peróxido de hidrógeno al 35 % (0.02 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH/NH<3>(9:1:1) como eluyente para obtener el producto 20-17 deseado como un sólido blanco.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-(carboxilamida)propilamina (Compuesto de referencia 20-17a). Rendimiento del 60%. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.86 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.15 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.68 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.54 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 2.04 (m, 1H); MS (ESI)m/z313.42 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-(carboxilamida)butilamina (Compuesto de referencia 20-17b). Rendimiento del 61 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.09 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.59 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.41 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 1.91 (m, 2H), 1.78 (m, 1H), 1.68 (m, 1H); MS (ESI)m/z327.18 (M+H)+.

4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-trifluorometilbutanol (Compuesto de referencia 20-18). A una solución de 20-15b (384 mg, 1.36 mmol) y TMSCF<3>(0.5 M en THF, 1.77 mmol) en THF (2 mL) se le añadió TBAF (1 M en THF, 0.013 mL, 0.013 mmol) a 0 °C y la solución se agitó durante 30 minutos a esa temperatura y durante 12 horas a temperatura ambiente. La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió agua (0.134 mL, 7.48 mmol) y TBAF (1 M en THF, 0.136 mL, 0.136 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida utilizando acetato de etilo como eluyente para obtener el producto 20-18 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 75 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.11 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 7.85 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.09 (bs, 1H), 6.90 (d,J= 9 Hz, 1H), 3.94 (m,4H), 2.99 (s, 3H), 1.94-2.04 (m, 2H), 1.79 (m, 1H), 1.66 (m, 1H); MS (ESI)m/z353.79 (M+H)+.

4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-1-trifluorometilbutilamina (Compuesto de referencia 20-21). A una solución de 20-18 (78 mg, 0,22 mmol) y piridina (0.035 mL, 0.44 mmol) en diclorometano (1.5 mL) a -40 °C se le añadió gota a gota una solución de anhídrido trifluorometanosulfónico (0.044 mL, 0.265 mmol) en diclorometano (0.2 mL). La solución se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces, 20 mL). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para obtener el compuesto 20-19 como un sólido blanco que se llevó a la siguiente etapa sin purificación. Una solución de 20-19 (115 mg, 0.23 mmol) y azida sódica (30 mg, 0.47 mmol) en DMSO (2 mL) se calentó a 40 °C durante 5 horas. La reacción se inactivó mediante la adición de agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 veces, 20 mL). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para obtener el compuesto 20-20 como un sólido blanco que se llevó a la siguiente etapa sin purificación. Una solución de 2020 (60 mg, 0.16 mmol), formiato de amonio (50 mg, 0.80 mmol) y 10%mol de Pd/C en metanol (2 mL) se calentó a reflujo durante 3 horas. El catalizador se filtró sobre Celite y se evaporó el disolvente. La mezcla de reacción cruda se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1:1) como eluyente para obtener el producto 20-21 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 51 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.26 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.87 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.57 (m, 2H), 3.90 (m, 3H), 3.24 (m, 1H), 2.96 (s, 3H), 1.94 (m, 2H), 1.82 (m, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.46 (m, 1H); MS (ESI)m/z352.42 (M+H)+.

Clorhidrato de 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanocarboximidato de etilo (Compuesto de referencia 20 22). A una solución de 1-10 (100 mg, 0.35 mmol) en etanol (0.3 mL) se le burbujeó gas ácido clorhídrico durante 1 hora y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez finalizada la reacción monitoreada por LCMS, se evaporó el disolvente para obtener el compuesto 20-22 final como un sólido blanco. Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.38 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.27 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.23 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.09 (d,J= 9 Hz, 1H), 4.60 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.88 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 2.43 (m, 2H), 2.02 (m, 2H), 1.06 (t,J= 7.2 Hz, 3H); MS (ESI)m/z327.39 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-23. A una solución de 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propanal o 2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)etanal (1.12 mmol) y K<2>CO<3>(3 eq.) en MeOH/THF (1:1, 3 mL) se le añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (10 % en acetonitrilo, 2 eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-23 deseado como un sólido blanco.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-propan-1-ino (Compuesto de referencia 20-23a). Rendimiento del 71 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.20 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.33 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.37 (t,J= 2.4 Hz, 1H), 3.04 (s, 3H); MS (ESI)m/z251.94 (M+H)+.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-but-1-ino (Compuesto de referencia 20-23b). Rendimiento del 67 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCl<a>): 88.30 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.73 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.91 (m, 2H), 4.70 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.05 (s, 3H), 2.70 (m, 2H), 2.05 (t,J= 3 Hz, 1H); MS (ESI)m/z265.86 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-24. A una solución de 3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-propan-1-ino o 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-pentan-1-ino (0.44 mmol) y 1-azido-2-metoxietano (10 eq.) en t-butanol/agua (1:1,4 mL) se le añadió ascorbato de sodio (0.1 eq.) y sulfato de cobre pentahidratado (0.01 eq.) secuencialmente y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-24 deseado como un sólido blanco.

4-(2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)etil)-1-(2-metoxietil)-1,2,3-triazol (Compuesto de referencia 20-24a). Rendimiento del 73 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.93 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.73 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 6.84 (m, 1H), 6.69 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 4.86 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 4.34 (t,J= 5.4 Hz, 2H),3.89 (s, 3H), 3.53 (t,J= 5.4 Hz, 2H), 3.22 (m, 5H), 3.01 (s, 3H); MS (ESI)m/z367.14 (M+H)+.

4-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)-1-(2-metoxietil)-1,2,3-triazol (Compuesto de referencia 20-24b). Rendimiento del 64 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 87.96 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.76 (bs, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.93 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.61 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 4.49 (t,J= 4.8 Hz, 2H),3.94 (s, 3H), 3.73 (t,J= 4.8 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.82 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.26 (m, 2H); MS (ESI)m/z381.07 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-25. A una solución de 3-(7-metoxi-1-metil-(3-carbolin-9-il)-propilazida o 4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-pentilazida (0.31 mmol) y metil propargil éter (1.0 5 eq.) en t-butanol/agua (1:1, 4 mL) se le añadió ascorbato de sodio (0.1 eq.) y sulfato de cobre pentahidratado (0.01 eq.) secuencialmente y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-25 deseado como un sólido blanco.

1-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)-4-(metoximetil)-1,2,3-triazol (Compuesto de referencia 20-25a). Rendimiento del 72 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.97 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.89 (m, 1H), 6.81 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 4.61 (m, 4H), 4.40 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.92 (s, 3H), 2.47 (m, 2H), 3.01 (s, 3H); MS (ESI)m/z366.96 (M+H)+.

1-(4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butil)-1-(metoximetil)-1,2,3-triazol (Compuesto de referencia 20-25b). Rendimiento del 63 %. RMN de<1>H (600 MHz, CDCh): 88.30 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.97 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.89 (m, 1H), 6.84 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.51 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.86 (m, 2H); MS (ESI)m/z381.04 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-26. A una solución de 20-1r - 20-1s o 20-23 (0.179 mmol) en Th F (0.2 mL) se le añadió BuLi (2,5 M en hexanos, 1.05 eq.) a -20 °C y se agitó durante 30 min, seguido de la adición de cloruro de zinc (0.7 M en THF, 1.1 eq.) mientras se mantenía la temperatura a -20 °C. Después de agitar durante 5 minutos, se añadió isocianato de tricloroacetilo (1.1 eq.) a la reacción y se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas. Posteriormente, se añadió secuencialmente carbonato de potasio (1.5 eq.) y MeOH (2 mL) y la reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-25 deseado como un sólido blanco.

4- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-but-1-inamida (Compuesto de referencia 20-26a). Rendimiento del 75 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.31 (s, 1H), 8.20 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.97 (s,1H), 7.89 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.36 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.92 (m, 1H), 5.65 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.04 (s, 3H); MS (ESI)m/z294.26 (M+H)+.

5- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-pent-1-inamida (Compuesto de referencia 20-26b). Rendimiento del 70 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.31 (s, 1H), 8.18 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.28 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.80 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.88 (t,J= 7.2 Hz, 2H); MS (ESI)m/z308.22 (M+H)+.

6- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-hex-1-inamida (Compuesto de referencia 20-26c). Rendimiento del 28 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.18 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.23 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.65 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 2.45 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 1.96 (m, 2H); MS (ESI)m/z322.67 (M+H)+.

Procedimiento general para la síntesis del Compuesto de referencia 20-27. A una solución de 10-1a/b (2.32 mmol) en THF (25 mL) se le añadió LiAlH<4>(1.5 eq.) a 0 °C en porciones. Después de la adición, la reacción se calentó a reflujo durante 6 horas. La reacción se inactivó con agua y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El precipitado se filtró y el filtrado se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (50 mL X 3). Las capas orgánicas se recogieron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se evaporaron y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20-27 deseado como un sólido blanco.

2- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)etanol (Compuesto de referencia 20-27a). Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.09 (d,J= 1.2 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 4.69 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.92 (m, 5H), 3.01 (s, 3H); MS (ESI)m/z257.42 (M+H)+.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propanol (Compuesto de referencia 20-27b). Rendimiento del 100 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.10 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J= 9 Hz, 1H), 7.83 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.67 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.63 (t,J= 6 Hz, 2H), 3.00 (s, 3H), 2.01 (m, 2H); MS (ESI)m/z271.69 (M+H)+.

Ensayos de unión de DYRK1A. Los compuestos se probaron para determinar la actividad de unión de DYRK1A en un servicio de creación de perfiles de quinasas comercial, Life Technologies, que utiliza el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu basado en FRET. Los compuestos se analizaron para determinar la actividad de DYRK1A en concentraciones de 1000 nM y 300 nM por duplicado. La IC<50>se determinó por el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen<®>Eu de 10 puntos por duplicado.

Ensayo de proliferación de células B. Los islotes pancreáticos humanos se obtuvieron del Programa de Distribución Integrada de Islotes (IIDP) respaldado por el NIH/NIDDK. Los islotes se dispersaron primero con Accutase (Sigma, St. Louis, MO) sobre cubreobjetos como se describió anteriormente (Wang et al., 2015). Después de 2 horas, las células de los islotes humanos dispersas se trataron con el compuesto en medio completo RPMI1640 durante 96 horas. Luego, las células se fijaron y se tiñeron para detectar insulina y tinción de Ki67 (Wang et al., 2015). Se obtuvieron imágenes y contaron las células totales positivas para insulina y las células Ki67 dobles y positivas para insulina. Se contaron al menos 1000 células.

Ejemplo 10- Análisis de SAR y ensayos de proliferación de células p humanas de análogos de harmina sustituidos en 9

Los análogos de harmina sustituidos en 9 se sintetizaron como se describe en la Figura 6. La Tabla 6 muestra que varios análogos de harmina sustituidos en 9 tienen una IC<50>contra DYRK1A comparable al de la harmina. Más específicamente, el Compuesto de referencia 20-1c y el Compuesto de ejemplo 20-2c tienen una IC<50>de 26.8 nM y 25 nM, respectivamente (Tabla 6). Las Tablas 7 y 8 muestran la capacidad de varios análogos de harmina adicionales sustituidos en 9 para inhibir DYRK1A. La Tabla 9 muestra que estos compuestos modulan de forma diferencial la proliferación de las células p. En particular, el compuesto 20-13 en una concentración de 5 |jM de la Tabla 6 indujo la proliferación de células p humanas en mayor medida que la harmina en una concentración de 10<j>M.

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Tabla 9. Proliferación de células p de referencia y ejemplos de análogos de harmina sustituidos

1.5 (10) 27Harmina

Ejemplo 11 -Perfil de escaneo del Kinoma

Para comprender la selectividad de las quinasas en un subconjunto de compuestos, se realiza el perfil del kinoma de Compuestos de referencia 2-23a, 20-13 y 2-8, y el Compuesto de ejemplo 20-2c se llevó a cabo en 468 quinasas a una concentración de 10 j M (Tabla 10, actividades < 20 % indicadas a continuación).

Tabla 10. Escaneo del kinoma de los Compuestos 2-23a, 20-13, 20-2c y 2-8 a

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Ejemplo 12 -A c t iv id a d fu e r a d e l o b je t iv o d e l C N S d e la h a r m in a y e l C o m p u e s to d e e je m p lo 20 - 2 c

D a d o q u e s e s a b e q u e la h a r m in a e x h ib e p r o p ie d a d e s a lu c in ó g e n a s a l a c tu a r c o m o e s t im u la n te d e l s is te m a n e r v io s o c e n t r a l, d e b id o a s u a f in id a d p o r la s e r o to n in a , la t r ip ta m in a y o t r o s r e c e p to r e s r e la c io n a d o s , e l c o m p u e s to 20 - 2 c y la h a r m in a s e c o m p a r a r o n c o n u n p a n e l d e o b je t iv o s n o d e s e a d o s d e l C N S c o n o c id o s p o r la h a r m in a ( y o b je t iv o s e s t r e c h a m e n te r e la c io n a d o s ) a 10 p M ( D e te c c ió n d e E u r o f in s C E R E P ) (T a b la 11 ). E l C o m p u e s to 20 - 2 c fu e m á s s e le c t iv o q u e la h a r m in a y n o m o s t r ó a c t iv id a d d e u n ió n a n in g ú n r e c e p t o r e x c e p to a la m o n o a m in o o x id a s a A e n la d o s is d e d e te c c ió n . D e e s te m o d o , s e p u e d e n id e n t i f ic a r a n á lo g o s c o n p o te n te a c t iv id a d in h ib id o r a d e D Y R K 1 A , c a p a c id a d m e jo r a d a d e p r o l i fe r a c ió n d e c é lu la s p y u n p e r f i l m á s s e g u r o fu e r a d e l o b je t iv o , m e d ia n te la m o d i f ic a c ió n s is te m á t ic a d e la h a r m in a .

T a b la 11. A c t iv id a d fu e r a d e l o b je t iv o d e l C N S d e lo s a n á lo g o s d e h a r m in a 3

Ejemplo 13 -M a te r ia le s y m é to d o s p a r a e l E je m p lo 14 ( C o m p u e s to s d e r e fe r e n c ia y C o m p u e s to s d e e je m p lo ) 7 - d e u te r o m e t o x i - 1 - m e t i l - 9 H - p i r id o [3 ,4 - b ] - in d o l ( C o m p u e s to d e r e fe r e n c ia 20 - 28 ) . U n a s o lu c ió n d e h a r m a lo l ( 600 m g , 3.03 m m o l) y c a r b o n a to d e c e s io ( 1.18 g , 3.63 m m o l) e n D M F ( 10 m L ) s e a g i tó a te m p e r a t u r a a m b ie n te d u r a n te 1 h o ra . A e s ta s o lu c ió n s e le a ñ a d ió c h - y o d u r o d e m e t i lo ( 0.224 m L , 3.63 m m o l) y s e a g itó a te m p e r a tu r a ambiente durante 12 horas. Una vez completada la reacción confirmada por TLC, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (50 mL X 2). La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20 28 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 45 % RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.36 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.25 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.09 (d,J= 9 Hz, 1H), 3.04 (s, 3H); MS (ESI)m/z216.32 (M+H)+.

4-(7-deuterometoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butironitrilo (Compuesto de referencia 20-29). A una solución de 20 28 (177 mg, 0.82 mmol) en DMF (3 mL) se le añadió NaH (66 mg, 1.64 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A esta solución se le añadió 4-bromobutironitrilo (0.163 mL, 1.64 mmol) a 50 °C y se agitó a esa temperatura durante 12 horas. Una vez completada la reacción confirmada por TLC, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se transfirió a un embudo de decantación y se extrajo con acetato de etilo (50 mL X 2). La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20 29 deseado como un sólido blanco. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.21 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.14 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.95 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.24 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.91 (m, 1H), 4.63 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.66 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.06 (t,J= 7.8 Hz, 2H); MS (ESI)m/z283.24 (M+H)+. El mismo procedimiento se utilizó para la síntesis de 20-33, 20-36a a 20-36d y 20-39.

4-(7-deuterometoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de ejemplo 20-30). A una solución de 20-29 (60 mg, 0.21 mmol) en DMSo (0.5 mL) se le añadió solución de peróxido de hidrógeno al 50 % (0.024 mL) a 0 °C seguido de carbonato de potasio (5 mg, 0.03 mmol). Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se secó al vacío y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida con una mezcla de DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto final como un sólido blanco. Rendimiento del 81 %. RMN d e<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (m, 1H), 8.08 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.87 (m, 2H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.95 (s, 3H), 2.19 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.94 (m, 2H); MS (ESI)m/z301.42 (M+H)+. Se utilizó el mismo procedimiento para la síntesis del Compuesto de ejemplo 20-40.

N'-hidroxi-4-(7-deuterometoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanimidamida (20-31). Una solución de 20-29 (142 mg, 0.50 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (139 mg, 2.01 mmol) y trimetilamina (0.28 mL, 2.01 mmol) en etanol (2 mL) se calentó a reflujo durante 12 horas. Se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20 31 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 74 %. R<m>N de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.26 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.22 (d,J= 9.6 Hz, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.96 (m, 1H), 4.60 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.23 (m, 2H), 2.02 (m, 2H); MS (ESI)m/z316.46 (M+H)+. El mismo procedimiento se utilizó para la síntesis de los Compuestos de referencia 20-37a a 20-37d.

3-(3-(7-deuterometoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-32). A una solución de 20-11 (150 mg, 0.48 mmol) y piridina (0.154 mL, 1.92 mmol) en tolueno se le añadió cloruro de tricloroacetilo (0.06 mL, 0.57 mmol) a 0 °C y se agitó durante otra hora a la misma temperatura. Luego la mezcla de reacción se calentó a 85 °C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y se añadió 7 N de amoníaco en metanol (2 mL) al crudo y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se evaporó el disolvente y el crudo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para obtener el producto 20 32 deseado como un sólido blanco. Rendimiento del 46 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.72 (bs, 2H), 7.23 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 4.62 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 2.90 (s, 3H), 2.57 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 2.08 (m, 2H); MS (ESI)m/z341.72 (M+H)+. El mismo procedimiento se utilizó para la síntesis de 20-38a a 20-38d.

3-(7-deuterometoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)-propan-1-ino (Compuesto de referencia 20-33). Sólido blanco. Rendimiento del 51 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.19 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.33 (d,J= 2.4 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H), 5.78 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 5.45 (d,J= 2.4 Hz, 2H), 3.04 (s, 3H); MS (ESI)m/z354.72 (M+H)+.

7-trifluorometoxi-1-metil-9H-pirido[3,4-b]-indol (Compuesto de referencia 20-35). A la mezcla de 6-trifluorometoxi triptamina (200 mg, 0.81 mmol) y acetaldehído (40 % en agua, 0.058 mL, 0.81 mmol) en 1.5 mL de diclorometano, se le añadieron gota a gota 0.08 mL de ácido trifluoroacético a 0 °C. A continuación, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Una vez completada la reacción monitoreada por LCMS, la mezcla de reacción se evaporó para obtener 20-34 como un sólido blanco que se llevó al siguiente paso sin purificación. Una mezcla de 20-34, carbonato de litio (60 mg, 0.81 mmol) y Pd sobre carbono (10 mg, 0.008 mmol) en etanol (2.5 mL) se calentó en un reactor de microondas CEM a 150 °C durante 10 minutos. El catalizador se filtró sobre Celite, se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida usando DCM/MeOH (9:1) como eluyente para proporcionar 20-35 como un sólido marrón. Rendimiento del 25 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 811.82 (s, 1H), 8.34 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.25 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.98 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.21 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H); MS (ESI)m/z367.72 (M+H)+.

2- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acetonitrilo (Compuesto de referencia 20-36a). Sólido blanco. Rendimiento del 61 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<a>-DMSO): 88.25 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.13 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.92 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.96 (m, 1H), 5.89 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.02 (s, 3H); MS (ESI)m/z252.61 (M+H)+.

3- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propionitrilo (Compuesto de referencia 20-36b). Sólido blanco. Rendimiento del 57%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.19 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.36 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.90 (m, 1H), 4.92 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.09 (t,J= 6.6 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H); MS (ESI)m/z266.45 (M+H)+.

5- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanonitrilo (Compuesto de referencia 20-36c). Sólido blanco. Rendimiento del 34 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.23 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.59 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.57 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.65 (m, 2H); MS (ESI)m/z294.23 (M+H)+.

6- (7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexanonitrilo (Compuesto de referencia 20-36d). Sólido blanco. Rendimiento del 42%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.20 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 6.885(m, 1H), 4.55 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 1.73 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.48 (m, 2H); MS (ESI)m/z308.33 (M+H)+.

N'-hidroxi-2-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)acetanimidamida (Compuesto de referencia 20-37a). Sólido blanco. Rendimiento del 54%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 89.99 (bs, 2H), 8.48 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.36 (m, 2H), 7.88 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.43 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.06 (m, 1H), 1.86 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.16 (s, 3H); MS (ESI)m/z285.71 (M+H)+.

N'-hidroxi-3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)propionanimidamida (Compuesto de referencia 20-37b). Sólido blanco. Rendimiento del 69 %. MS (ESI)m/z299.53 (M+H)+.

N'-hidroxi-5-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentanimidamida (Compuesto de referencia 20-37c). Sólido blanco. Rendimiento del 44%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (m, 1H), 8.10 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.90 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.88 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 5.50 (bs, 2H), 4.55 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.05 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 1.62 (m, 2H); MS (ESI)m/z327.88 (M+H)+.

N'-hidroxi-6-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)hexananimidamida (Compuesto de referencia 20-37d). Sólido blanco. Rendimiento del 74%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.24 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.18 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.94 (m, 1H), 4.58 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 2.18 (t,J= 7.2 Hz, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.40 (m, 2H); MS (ESI)m/z341.22 (M+H)+.

1-(1-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)metil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-38a). Sólido blanco. Rendimiento del 35%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.17 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.85 (bs, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.89 (m, 1H), 5.72 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.95 (s, 3H); MS (ESI)m/z310.33 (M+H)+.

3-(3-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)etil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-38b). Sólido blanco. Rendimiento del 46 %. MS (ESI)m/z324.55 (M+H)+.

5- (5-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-38c). Sólido blanco. Rendimiento del 72%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.26 (m, 1H), 8.21 (d,J= 6.6 Hz, 1H), 8.15 (m, 1H), 7.63 (bs, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.95 (m, 1H), 4.61 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.71 (m, 2H); MS (ESI)m/z352.27 (M+H)+.

6- (6-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)pentil)-5-amino-1,2,4-oxadiazol (Compuesto de referencia 20-38d). Sólido blanco. Rendimiento del 46%. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.16 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 8.09 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.88 (d,J= 4.8 Hz, 1H), 7.62 (bs, 2H), 7.17 (s, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.54 (t,J= 7.8 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.93 (s, 3H), 2.42 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.65 (tm, 2H), 1.42 (m, 2H); MS (ESI)m/z366.82 (M+H)+.

2.2- dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butironitrilo (Compuesto de referencia 20-39). Sólido amarillo. Rendimiento del 71 %. RMN de<1>H (600 MHz, CD<3>OD): 88.12 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 8.03 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.85 (d,J= 5.4 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.91 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 4.67 (t,J= 8.4 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.03 (m, 2H), 1.49 (s, 6H); MS (ESI)m/z308.23 (M+H)+.

2.2- dimetil-4-(7-metoxi-1-metil-p-carbolin-9-il)butanamida (Compuesto de ejemplo 20-40). Sólido amarillo. Rendimiento del 81 %. RMN de<1>H (600 MHz, d<6>-DMSO): 88.29 (d,J= 6 Hz, 1H), 8.25 (d,J= 8.4 Hz, 1H), 7.21 (bs, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.28 (d,J= 1.8 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.99 (m, 1H), 4.51 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 1.91 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 1.24 (s, 6H); MS (ESI)m/z326.71 (M+H)+.

Ejemplo 14 -Inhibición de DYRK1A de análogos de 7-deuterometoxi harmina

Los análogos de 7-deuterometoxi harmina se sintetizaron siguiendo la secuencia de reacción descrita en la Figura 7. La Tabla 12 muestra que el Compuesto de referencia 20-33 mostró la mejor actividad con una IC<50>de n M . E l C o m p u e s to d e r e fe r e n c ia 20 - 28 , e l C o m p u e s to d e e je m p lo 20 - 30 , y e l C o m p u e s to d e r e fe r e n c ia 20 2 te n ía n u n a IC<50>c o n t r a D Y R K 1 A d e 39 n M , 37 n M y 35 n M , r e s p e c t iv a m e n te .

T a b la 12. In h ib ic ió n d e D Y R K 1 A d e n u e v o s a n á lo g o s d e h a r m in a

C o m p u e s to R<1>R<2>% In h ib ic ió n d e D Y R K 1 A IC<50>( n M ) a 1000 n M

20 - 28 D<3>C O - * H -* 39

H a r m in a - 27

a =L o s v a lo r e s d e IC<50>s e d e te r m in a n u t i l iz a n d o d ie z d i lu c io n e s s e r ia d a s t r ip le s ( p o r d u p l ic a d o )

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
2. o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Un compuesto según se reivindica en la reivindicación 1, seleccionado entre:
3. o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 3. Un compuesto según se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, seleccionado entre:
4. o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 4. El compuesto
5. 5. Una composición que comprende: un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador.
6. 6. La composición según la reivindicación 5 que comprende, además: un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp), un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4).
7. 7. Un compuesto o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, para su uso en el tratamiento de una afección asociada con una secreción insuficiente de insulina, tratamiento que comprende la administración de dicho compuesto a un sujeto que necesita tratamiento para una afección asociada con una secreción insuficiente de insulina en condiciones eficaces para tratar al sujeto por la afección.
8. 8. El compuesto o sal o solvato farmacéuticamente aceptable para uso según se reivindica en la reivindicación 7, comprendiendo además el tratamiento: administrar un inhibidor de la vía de señalización de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGFp), un agonista del receptor del péptido-1 similar al glucagón (GLP1R) o un inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV (DPP4).
9. 9. El compuesto o sal o solvato farmacéuticamente aceptable para uso según se reivindica en la reivindicación 7, en el que la afección asociada con la secreción insuficiente de insulina es diabetes tipo I (T1D), diabetes tipo II (T2D), diabetes gestacional, diabetes congénita, diabetes de inicio en la madurez (MODY), diabetes relacionada con fibrosis quística, diabetes relacionada con hemocromatosis, diabetes inducida por fármacos, diabetes monogénica, síndrome metabólico o resistencia a la insulina, o ha sido inducida por una pancreatectomía, un trasplante de páncreas o un trasplante de islotes pancreáticos.