ES3040639T3 - Blood cell lysis compositions and uses thereof - Google Patents

Blood cell lysis compositions and uses thereof

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ES3040639T3 ES22176850T ES22176850T ES3040639T3 ES 3040639 T3 ES3040639 T3 ES 3040639T3 ES 22176850 T ES22176850 T ES 22176850T ES 22176850 T ES22176850 T ES 22176850T ES 3040639 T3 ES3040639 T3 ES 3040639T3
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alcohol ethoxylate
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Miklos Erdosy
Hyoungsik Yim
Emily Mcdowell
Prasad V A Pamidi
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Abstract

Una composición de ejemplo para la lisis de células sanguíneas incluye un tampón y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración de entre el 2,5 % y el 20 % p/v. El etoxilato de alcohol secundario puede ser Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9. La composición puede configurarse para lisar al menos el 90 % de las células sanguíneas en una muestra de sangre. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Composiciones para la lisis de células sanguíneas y usos de las mismas
Campo técnico
Esta memoria descriptiva se refiere en general a composiciones de lisis de células sanguíneas de ejemplo y a sus usos.
Antecedentes
Durante el diagnóstico óptico, las muestras de sangre completa causan dispersión de la luz que puede afectar la precisión de la medición. La lisis celular de la muestra de sangre completa puede reducir dicha dispersión de la luz. Chow S. et al. describen un protocolo de fijación y permeabilización de sangre completa con lisis de glóbulos rojos para la citometría de flujo de epítopos fosforilados intracelulares en subpoblaciones leucocitarias (CYTOMETRY, vol. 67, n.° 1, páginas 4-17). El documento US 4 978 688 A describe un método para el tratamiento de glóbulos blancos. Además, la patente internacional W02004/042003 describe composiciones que comprenden etoxilatos de alcoholes secundarios.
Compendio
La invención se refiere al uso de una composición para la lisis de células sanguíneas para lisar células sanguíneas como se define en las reivindicaciones. el uso de una composición para la lisis de células sanguíneas para lisar células sanguíneas, la composición de la composición para la lisis de células sanguíneas comprende un tampón y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v). La composición para la lisis de células sanguíneas puede incluir una o más de las siguientes características, ya sea solas o en combinación.
El etoxilato de alcohol secundario puede incluir al menos uno de los siguientes: Tergitol™ Tipo 15-S-12, TergitolTM Tipo 15-S-30, Tergitol™ Tipo 15-S-5, Tergitol™ Tipo 15-S-7, Tergitol™ Tipo 15-S-9, Tergitol™ Tipo NP-10, Tergitol™ Tipo NP-4, un nonilfenol etoxilado de Tergitol™ Tipo NP-40, un (3,9-dietiltridecan-6-sulfonato) de sodio de Tergitol™ Tipo NP-7, un (2-etilhexilsulfato) de sodio de Tergitol™ Tipo 8, Tergitol™ Tipo NP-9, Tergitol™ TMN-100X, un (7-etil-2-metilundecan-4-il)sulfato de sodio de TEOS Tergitol™, Tergitol™ TMN-10 o Tergitol™ TMN-6. El etoxilato de alcohol secundario puede ser Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9. La invención reivindicada se refiere además a una composición para la lisis de células sanguíneas que comprende un tampón y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 9 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v), en donde el etoxilato de alcohol secundario comprende uno o más de: un primer etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde x es 5, 7, 9, 11, 12, 13, 14 o 15,
o
un segundo etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde n es 6, 10, 11, 12, 13, 14 o 15,
El etoxilato de alcohol secundario puede comprender:
(a) el primer etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde x=9
; o
(b) el segundo etoxilato de alcohol secundario que comprende una relación 70:30 de un tercer etoxilato de alcohol secundario a un cuarto etoxilato de alcohol secundario;
en donde el tercer etoxilato de alcohol secundario tiene la siguiente fórmula estructural donde n=10:
en donde el cuarto etoxilato de alcohol secundario tiene la siguiente fórmula estructural donde n=6:
El uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según la invención reivindicada y la composición para la lisis de células sanguíneas según la invención reivindicada puede incluir una o más de las siguientes características, ya sea solas o en combinación.
El tampón puede incluir al menos uno de ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS), tampón fosfato (PBS), ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico (HEPES), ácido 2-[[1,3-dihidroxi-2-(hidroximetilpropan-2-il]amino]etanosulfónico (TES), 2,2-bis(hidroximetil)-2,2',2"-nitrilotrietanol o 2-bis(2-hidroxietil)amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol (Bis-Tris).
La composición para la lisis de células sanguíneas puede incluir un biocida. El biocida puede incluir al menos uno de 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMIT), 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (MIT), Proclin 300, 1,2-benzisotiazolin-3-ona (BIT), hidrocloruro de dodecilguanidina (DGH), gentamicina, levofloxacina, colistina, octilisotiazolinona (OIT) o amikacina. El biocida puede incluir CMIT y MIT. CMIT y MIT pueden estar en una proporción de 3:1 (CMIT:MIT). La CMIT:MIT puede estar en una concentración de 1 % (p/v) en la composición para la lisis de células sanguíneas.
La composición para la lisis de células sanguíneas puede tener un pH entre 6 y 8. El etoxilato de alcohol secundario puede estar presente en una concentración en el intervalo de 9 % a 14 % (p/v). El etoxilato de alcohol secundario puede ser biodegradable. La composición para la lisis de células sanguíneas puede estar configurada para lisar al menos el 90 % de las células sanguíneas de una muestra en menos de 2 segundos. El etoxilato de alcohol secundario puede tener una altura de espuma de 75 milímetros (mm) a 125 mm en 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo). El etoxilato de alcohol secundario puede tener una altura de espuma de 40 mm a 75 mm en 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo), midiéndose la altura de la espuma utilizando el método de Ross-Miles.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método para determinar un nivel de hemoglobina en una muestra de sangre que incluye (i) mezclar la composición de lisis de células sanguíneas como se define en la reivindicación 1 con una muestra de sangre, lisando así una o más células en la muestra de sangre, y (ii) determinar el nivel de hemoglobina en la muestra de sangre. El método de ejemplo puede incluir una o más de las siguientes características, ya sea solas o en combinación.
La hemoglobina puede incluir al menos una de oxihemoglobina, desoxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina, sulfohemoglobina, cianometahemoglobina o hemoglobina fetal. El método puede incluir la medición del nivel de bilirrubina.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método para elaborar una composición para la lisis sanguínea que incluye mezclar un tampón con un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v). El método de ejemplo puede incluir una o más de las siguientes características, ya sea solas o en combinación.
El etoxilato de alcohol secundario puede tener una altura de espuma de 40 mm a 75 mm (0,1 % en peso de ingrediente activo) en 5 minutos, midiéndose la altura de espuma utilizando el método de Ross-Miles. El etoxilato de alcohol secundario puede ser o incluir Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9.
Un ejemplo de composición para la lisis de células sanguíneas incluye (i) un tampón y (ii) un etoxilato de alcohol secundario que es o incluye Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9. La composición para la lisis de células sanguíneas puede incluir una o más de las siguientes características, ya sea solas o en combinación.
El etoxilato de alcohol secundario puede estar en una concentración en el intervalo de 9 % a 14 % (p/v). La composición puede configurarse para lisar al menos el 90 % de las células de una muestra en menos de 2 segundos.
Dos o más de las características descritas en esta memoria descriptiva, incluida esta sección de compendio, pueden combinarse para formar implementaciones no descritas específicamente en esta memoria descriptiva. Los detalles de una o más implementaciones se exponen en los dibujos adjuntos y en la descripción posterior. Otras características y ventajas serán evidentes a partir de la descripción, los dibujos y las reivindicaciones. Descripción de los dibujos
La -Fig. 1A es un diagrama de bloques que muestra un sistema óptico de ejemplo para realizar mediciones de cooximetría en una muestra de sangre.
La Fig. 1B es un gráfico que muestra las mediciones de absorbancia obtenidas utilizando el sistema óptico de ejemplo.
La Fig. 2 es un gráfico de barras que compara las mediciones de hemoglobina total (tHb) de dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
La Fig. 3 es un diagrama de puntos que muestra las mediciones de hemoglobina total (tHb) para dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo en relación con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
La Fig. 4 es un diagrama de puntos que muestra las mediciones de hemoglobina oxigenada (O2Hb) para dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo en relación con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
La Fig. 5 es un diagrama de puntos que muestra las mediciones de carboxihemoglobina (COHb) para dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo en relación con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
La Fig. 6 es un diagrama de puntos que muestra las mediciones de metahemoglobina (MetHb) para dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo en relación con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
La Fig. 7 es un diagrama de puntos que muestra las mediciones de desoxihemoglobina (HHb) para dos composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo en relación con una composición para la lisis de células sanguíneas de control.
Descripción detallada
Un cooxímetro es un dispositivo que mide las concentraciones de diferentes hemoglobinas y la saturación de oxígeno de la hemoglobina en una muestra de sangre. La saturación de oxígeno, o "sO2", de una muestra de sangre corresponde a la proporción de hemoglobinas funcionales con oxígeno unido en la muestra de sangre.
Un ejemplo de cooxímetro incluye un sistema óptico configurado para medir diferentes formas de hemoglobina y saturación de oxígeno en base a la absorbancia óptica de las formas de hemoglobina en una muestra de sangre. Por ejemplo, un cooxímetro puede configurarse para medir la absorbancia óptica de una o más de las siguientes: especies de hemoglobina funcional, incluyendo la oxihemoglobina (O2Hb) y la desoxihemoglobina (HHb), transportadoras de oxígeno, o derivados disfuncionales de la hemoglobina, tales como la carboxihemoglobina (COHb), la metahemoglobina (MetHb), la sulfohemoglobina (SHb) y la cianometahemoglobina (CNmetHb). Un ejemplo de cooxímetro del tipo descrito en la presente memoria también puede configurarse para medir simultáneamente la hemoglobina fetal, la hemoglobina adulta y la concentración de bilirrubina en una muestra de sangre. La bilirrubina es un subproducto de la degradación de la hemoglobina, como se describe a continuación.
Las mediciones de cooximetría pueden utilizarse para diagnosticar diversas afecciones médicas que incluyen, pero no se limitan a, anemia, sospecha de intoxicación por monóxido de carbono u otros trastornos hipóxicos no respiratorios, trastornos sanguíneos, problemas circulatorios y enfermedades pulmonares. Las mediciones de cooximetría pueden depender de las mediciones precisas de la dispersión de la luz en el sistema óptico. En este sentido, las muestras de células sanguíneas completas pueden dispersar más luz en un sistema óptico que las muestras de células sanguíneas lisadas. Por lo tanto, puede ser beneficioso lisar las muestras de sangre antes de obtener mediciones espectrales de cooximetría utilizando esas muestras. Las muestras de sangre lisadas pueden reducir la dispersión óptica, lo que permite producir mediciones de cooximetría más exactas y precisas.
Por consiguiente, los sistemas y procesos de ejemplo descritos en la presente memoria incluyen la mezcla de composiciones para la lisis de células sanguíneas con muestras de sangre completa antes de obtener mediciones espectrales de cooximetría. Las composiciones para la lisis de células sanguíneas lisan la muestra de sangre. La lisis implica la ruptura de las membranas celulares de las células sanguíneas completas, liberando así el lisado, incluida la hemoglobina, de las células sanguíneas completas. Una o más cualquiera de las composiciones de ejemplo para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria (denominadas colectivamente como "la composición para la lisis de células sanguíneas") puede utilizarse para lisar muestras de sangre completa en el contexto de la cooximetría u otros procesos.
Como se ha indicado, una muestra de sangre lisada puede producir menos dispersión de luz que la sangre completa durante la cooximetría, lo que puede dar como resultado mediciones de cooximetría más precisas. Las composiciones de ejemplo para la lisis de células sanguíneas incluyen uno o más tensioactivos, una o más disoluciones tampón Hampones"), biocida y agua DI (desionizada). Los tensioactivos incluyen compuestos que lisan las células alterando las membranas celulares para liberar el lisado. Un tensioactivo puede sintetizarse, por ejemplo, mediante la reacción de un alcohol graso con óxido de etileno. Un ejemplo de tensioactivo que puede utilizarse para lisar una muestra de sangre completa incluye un etoxilato de alcohol. Un ejemplo de etoxilato de alcohol tiene la fórmula química de R(OC2H4)nOH. Aquí, R se refiere a un hidrógeno o una cadena lateral hidrocarbonada unida, y n se refiere al número de unidades de óxido de etileno (OC2H4). Según la invención reivindicada, el tensioactivo comprende un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v).
Un ejemplo de composición para la lisis de células sanguíneas incluye un tensioactivo no iónico, tal como un etoxilato de alcohol secundario, en un tampón con que tiene un conservante en él, posiblemente con agua DI y un biocida. El etoxilato de alcohol secundario funciona para lisar la muestra de sangre cuando la composición para la lisis de células sanguíneas se mezcla con sangre completa antes de realizar la cooximetría. El etoxilato de alcohol secundario puede incluir 11 a 15 unidades de óxido de etileno, que se pueden comercializar bajo el nombre comercial de Tergitol™. Los ejemplos de etoxilatos de alcoholes secundarios bajo este nombre comercial incluyen, pero no se limitan a, Tergitol™ Tipo 15-S-12, Tergitol™ Tipo 15-S-30, Tergitol™ Tipo 15-S-5, Tergitol™ Tipo 15-S-7, Tergitol™ Tipo 15-S-9, Tergitol™ Tipo NP-10, Tergitol™ Tipo NP-4, un nonilfenol etoxilado de Tergitol™ Tipo NP-40, un sulfato de sodio (3,9-dietiltridecano-6-sulfonato) de Tergitol™ Tipo NP-7, un sulfato de sodio (2-etilhexilsulfato) de Tergitol™ Tipo 8, Tergitol™ Tipo NP-9, Tergitol™ TMN-100X, un sulfato de sodio (7-etil-2-metilundecan-4-ilo) de TEOS Tergitol™, Tergitol™ TMN-10 o Tergitol™ TMN-6. Otros ejemplos de etoxilatos de alcohol secundario que pueden incluirse en una composición para la lisis de células sanguíneas incluyen, pero no se limitan a, ECO<s>U<r>F™, por ejemplo, ECOSURF™ EH-9 y ECOSURF™ SA-9.
Las estructuras químicas de etoxilato de alcohol secundario de ejemplo que pueden representar tensioactivos no iónicos que pueden ser parte de la composición para la lisis de células sanguíneas de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, los siguientes.
(1) Tergitol™ NP-10, donde z=10, y donde la estructura química es la siguiente.
(2) Tergitol™ 15-S-7, donde x=7 y Tergitol™ 15-S-9, donde x=9, y donde la estructura química es la siguiente.
(3) Tergitol™ TMN-6, donde n=6 y Tergitol™ TMN-10, donde n=10, y donde la estructura química es la siguiente.
(4) Tergitol™ TMN-100X, que puede incluir una relación 70:30 de Tergitol™ TMN-10 a Tergitol™ TMN-6.
En algunas implementaciones, una composición para la lisis de células sanguíneas de ejemplo que incluye un tensioactivo descrito en la presente memoria puede incluir uno o más de los etoxilatos de alcohol secundario en una o más de las siguientes concentraciones: entre 2,5 % a 20 % en peso por volumen (p/v), entre 5 % a 18 % (p/v), entre 9 % a 14 % (p/v), entre 9 % a 11 % (p/v), entre 9 a 10 % (p/v), entre 9,0 % a 9,5 % (p/v), entre 10 % a 12 % (p/v), entre 10 % a 11 % (p/v), entre 10,0 % a 10,5 % (p/v), entre 11 % a 13 % (p/v), entre 11 % a 12 % (p/v), entre 11,0 % a 11,5 % (p/v), entre 12 % a 14% (p/v), entre 12 % a 13 % (p/v), entre 12,0 % a 12,5 % (p/v), entre 13 % a 14 % (p/v) o entre 13,0 % a 13,5 % (p/v).
Los tensioactivos utilizados para la lisis, incluyendo los etoxilatos de alcohol secundario descritos en la presente memoria, pueden reducir la tensión superficial en una muestra de sangre líquida e inducir la formación de espuma en la muestra de sangre al mezclar aire en la muestra de sangre. La espuma es perjudicial para las mediciones de absorbancia óptica porque causa dispersión adicional de la luz. En algunas implementaciones, los tensioactivos para realizar la lisis celular en la cooximetría pueden reducir o minimizar la formación de espuma y/o producir espuma que se disipa rápidamente antes de las mediciones espectrales. Los tensioactivos de ejemplo utilizados para la lisis pueden incluir un etoxilato de alcohol secundario con que tiene una tensión superficial de entre 20 a 40 dinas/cm (centímetro) inclusive, cuando se mide con 1 % de ingredientes activos a 25 °C (Celsius). Los tensioactivos de ejemplo utilizados para la lisis pueden incluir un etoxilato de alcohol secundario con que tiene una altura de espuma medida de menos de 110 mm (milímetro) en disoluciones a base de agua a 0,1 % en peso de ingredientes activos. Las mediciones estándar de la altura de la espuma pueden tomarse, por ejemplo, cinco minutos después de añadir el tensioactivo a una disolución con base acuosa. La altura de la espuma producida por un etoxilato de alcohol secundario se mide mediante el método de Ross-Miles. En una implementación de ejemplo, el tensioactivo presenta una altura de espuma de 75 milímetros (mm) a 125 mm en 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo). En una implementación de ejemplo, el tensioactivo tiene una altura de espuma de 40 mm a 75 mm en 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo).
En el contexto de la cooximetría, la turbidez es una medición de la cantidad de dispersión de luz que experimenta el sistema óptico cuando la luz incide a través de una muestra de sangre. La claridad óptica puede depender de la turbidez de la muestra de sangre, por ejemplo, cuanto menor sea la luz dispersada por la muestra de sangre, mayor será la claridad óptica asociada con la muestra sanguínea. En algunas implementaciones, las composiciones para la lisis de células sanguíneas de ejemplo descritas en la presente memoria lisan el 90 % al 100 % de las células de una muestra de sangre completa en un periodo de 1 a 3 segundos para reducir los efectos de la dispersión y mejorar la claridad óptica del objetivo durante la cooximetría. En este sentido, se pueden utilizar tensioactivos que contienen etoxilatos de alcohol secundario con que tengan estructuras similares a las de Tergitol™ 15-S-9 y/o Tergitol™ TMN-100X para lisar al menos el 90 % de las células sanguíneas en un periodo de 1 a 3 segundos.
En algunas implementaciones (que no forman parte de la presente invención), se pueden utilizar tensioactivos no iónicos distintos de los descritos previamente para realizar la lisis de células sanguíneas en un contexto de cooximetría o en otros entornos. Por ejemplo, los etoxilatos de octilfenol pueden formar parte de una composición de lisis de células sanguíneas utilizada para lisar una muestra de sangre, tal como una muestra de sangre completa. Los etoxilatos de octilfenol de ejemplo incluyen un aducto de óxido de etileno de octilfenol.
Tritón X-100 es un etoxilato de octilfenol de ejemplo que puede utilizarse para lisar muestras de sangre. Tritón X-100 tiene la siguiente estructura química.
Según la invención reivindicada, las composiciones para la lisis de células sanguíneas incluyen un tampón además del etoxilato de alcohol secundario. Un tampón de ejemplo incluye una disolución acuosa que resiste los cambios de pH neutralizando pequeñas cantidades de ácido o base añadidos utilizando un ácido débil y su sal, o una base débil y su sal. Ejemplos de tampones que pueden utilizarse en las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS), tampón de fosfato (PBS), ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfónico (HEPES), ácido 2-[[1,3-dihidroxi-2-(hidroximetil)propan-2-il]amino]etanosulfónico (TES), 2,2-bis(hidroximetil)-2,2',2"-nitrilotrietanol o 2-bis(2-hidroxietil)amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol (Bis-Tris). En algunas implementaciones, el tampón puede incluir ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS). En algunas implementaciones, el tampón mantiene el pH de la composición para la lisis de células sanguíneas entre 6 y 8. En algunas implementaciones, el tampón se selecciona para reducir el impacto de los cambios espectrales de la hemoglobina a partir del pH en las mediciones de cooximetría, por ejemplo, el cambio en el pH puede alterar el espectro de absorbancia y las mediciones de MetHb u otras sustancias.
En algunas implementaciones, las composiciones de ejemplo para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria pueden incluir un biocida. Un ejemplo de biocida incluye compuestos que tienen como fin destruir, impedir, volver inocuo o ejercer un efecto controlador sobre cualquier organismo dañino que puede estar presente en la composición para la lisis de células sanguíneas. Los ejemplos de biocidas que pueden utilizarse en la composición para la lisis de células sanguíneas incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMIT), 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (MIT), CMIT:MIT en una relación de aproximadamente 3:1 bajo el nombre comercial Proclin™ 300, 1,2-benzisotiazolin-3-ona (BIT), hidrocloruro de dodecilguanidina (DGH), gentamicina, levofloxacina, colistina, octilisotiazolinona (OIT) o amikacina. En algunas implementaciones, el biocida CMIT :MIT puede estar en una concentración de 1 % en peso por volumen (p/v) en la composición para la lisis de células sanguíneas.
Un cooxímetro puede formar parte de un sistema que realiza mediciones en un punto de atención al paciente (POC) o en un laboratorio central. La anemia, los trastornos sanguíneos, los problemas circulatorios y las enfermedades pulmonares afectan a los niveles de saturación de oxígeno en sangre y, si no se tratan, pueden causar daño orgánico o la muerte. Los cooxímetros pueden utilizarse en puntos POC y/o en laboratorios centrales para determinar la saturación de oxígeno de la hemoglobina, la hemoglobina total o las hemoglobinas funcionales o disfuncionales en una muestra de sangre, lo que puede ser la evidencia de dichos trastornos. Las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria pueden utilizarse para mejorar las mediciones de cooximetría al reducir los efectos de dispersión de los glóbulos rojos y tamponar las muestras de sangre lisada para reducir o minimizar el impacto del pH en Las mediciones espectrales realizadas por el cooxímetro. En este sentido, en algunas implementaciones, el sistema de cooxímetro también puede medir pH, pO2, pCO2, Na+, Ca2+, Cl-, glucosa, lactato y/o hematocrito de una muestra de sangre, además de realizar mediciones de cooximetría y/o bilirrubina.
La Fig. 1A muestra un ejemplo del sistema de cooxímetro 5. El sistema de cooxímetro 5 incluye un sistema de absorbancia óptica configurado para iluminar una muestra de sangre y determinar una absorbancia espectral de la muestra de sangre. La muestra de sangre analizada por el sistema de cooxímetro 5 puede ser una muestra de sangre completa que se lisa utilizando una o más de las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria. Más específicamente, en el cooxímetro 5 de ejemplo, se introducen una composición para la lisis de células sanguíneas y una muestra de sangre en una cámara de mezcla (p. ej., a través de una válvula mezcladora) en una celda óptica 7. El movimiento de la muestra de sangre y la composición para la lisis de células sanguíneas a través de la cámara de mezcla, bajo la activación simultánea implementada por un solenoide, causa que la muestra de sangre y la composición para la lisis se mezclen simultáneamente y lisen los glóbulos rojos. La mezcla resultante constituye una muestra de sangre lisada que se puede utilizar para obtener mediciones de absorbancia óptica mediante el cooxímetro, con una reducción o eliminación de los efectos de dispersión causados por los glóbulos rojos.
El cooxímetro 5 también incluye una fuente de luz 10 con diodo emisor de luz (LED) blanca de amplio espectro para iluminar la sangre lisada en las cámaras de mezcla/óptica, y una luz de neón 11 con que tiene una alta relación señal-ruido, que puede utilizarse como referencia de longitud de onda para mediciones de absorbancia óptica. El cooxímetro 5 de ejemplo también incluye un espectrómetro 12 de alta resolución que tiene una rejilla 14 de difracción holográfica y un dispositivo de carga acoplada (CCD) 19 contenido en el compartimento 13. El CCD 19 incluye un circuito integrado que puede incluir una matriz de condensadores para proporcionar imágenes digitales con alta relación señal-ruido. El CCD 19 se comunica con un sistema informático 17. Esta comunicación puede ser por cable o inalámbrica y se representa mediante la línea de puntos 18. El sistema informático 17 está configurado para realizar análisis computacionales para resolver los espectros de las muestras detectadas por el cooxímetro, como se describe a continuación.
En el cooxímetro 5, la muestra de sangre lisada se ilumina en la celda óptica 7 mediante la luz 4 emitida desde la fuente 10. La luz 4 se refleja por los espejos 20a y 20b a través de la celda óptica 7 que contiene la muestra de sangre lisada hasta el espectrómetro 12. En algunas implementaciones, la celda óptica 7 incluye dos ventanas ópticas 8 de placa paralelas separadas por una longitud de trayectoria 9 a través de la cual pasa la luz 4 hacia el espectrómetro 12. Los constituyentes de longitud de onda de la luz que pasa a través de la muestra de sangre lisada se separan, en el espectrómetro 12, mediante una rejilla 14 de difracción holográfica. Los constituyentes se dirigen e impactan en el CCD 19. El CCD 19 genera carga basada en la luz incidente, que es leída por la electrónica y convertida en una copia digital de los patrones de luz que inciden en el CCD 19.
La fuente de luz 10 puede controlarse, por ejemplo, mediante el sistema informático 17, para iluminar la muestra de sangre lisada en un intervalo de longitudes de onda, tal como de 480 nm (nanómetros) a 650 nm. El espectrómetro 12 puede medir la luz que pasa a través de la muestra de sangre lisada en diferentes longitudes de onda. La realización de mediciones en diferentes longitudes de onda, o en un intervalo de longitudes de onda diferente, permite al cooxímetro 5 distinguir entre los espectros de absorbancia de diferentes tipos o derivados de hemoglobina. En un ejemplo, la absorbancia de un componente de la muestra de sangre, por ejemplo, un derivado de la hemoglobina, incluye la atenuación de la potencia radiante transmitida a través del componente causada por el proceso físico de absorción, teniendo en cuenta la reflexión, la dispersión u otros fenómenos físicos. A partir de los valores espectrales medidos, se puede determinar una absorbancia con corrección de ruido de la hemoglobina o del derivado de la hemoglobina en la muestra de sangre usando la siguiente ecuación:
En la ecuación anterior, IB se refiere a los espectros de intensidad con corrección de oscuridad para una disolución de control de proceso (PCS) B. La PCS-B es una disolución incolora utilizada para proporcionar una referencia de concentración cero para el proceso de cooximetría. En la ecuación anterior, IS se refiere a los espectros de intensidad con corrección de oscuridad de la hemoglobina o del derivado de hemoglobina.
El dato respecto a la absorción de diferentes hemoglobinas o derivados de la hemoglobina en la muestra de sangre se envía desde el espectrómetro 12 al sistema informático 18, donde ese dato se analiza, procesa y presenta al usuario en una interfaz gráfica de usuario (GUI). Por ejemplo, los espectros de absorbancia de la hemoglobina y/o productos relacionados con la hemoglobina se pueden recopilar y almacenar en la memoria del ordenador. El sistema informático 17 puede utilizar este dato para determinar la concentración de hemoglobina y/o productos relacionados con la hemoglobina en una muestra de sangre. En base a esta información, se pueden obtener mediciones tales como la hemoglobina total (tHb), que puede referirse a la concentración total de hemoglobina en una muestra de sangre.
En referencia a la Fig. 1B, el sistema informático 17 también puede generar una GUI 25. Esta GUI 25 representa gráficamente la absorbancia óptica (eje y) para diversas longitudes de onda de luz diferentes (eje x) para diferentes hemoglobinas y/o productos relacionados con la hemoglobina en una muestra de sangre lisada. En la GUI 25, las diferentes hemoglobinas y/o productos relacionados con la hemoglobina incluyen O2Hb 21, HHb 22, COHb 23, MetHb 24 y bilirrubina 25.
Como se mencionó anteriormente, la saturación de oxígeno o "sO2" corresponde a la fracción de hemoglobina saturada de oxígeno en relación con la hemoglobina funcional total en una muestra de sangre. La sO2 puede ser predictivo de la cantidad de oxígeno disponible para la perfusión tisular. En algunas implementaciones, el sistema informático puede utilizar las concentraciones de O2Hb y HHb que se basan en mediciones de cooximetría para determinar la saturación de oxígeno de la hemoglobina en una muestra de sangre. Una ecuación para determinar la saturación de oxígeno en la muestra de sangre es la siguiente:
<s>O<j>=100 x {OiHb/(0}Hb+HHb)]%
El cooxímetro 5 y el sistema informático 17 pueden configurarse para determinar la cantidad de bilirrubina en una muestra de sangre lisada. En este sentido, la bilirrubina es un compuesto amarillo que se produce durante la degradación de la hemoproteína (“hemo”) en vertebrados, a través de la vía catabólica normal. Este catabolismo puede ser un proceso necesario en el aclaramiento de los productos de desecho corporales que surgen de la destrucción de glóbulos rojos envejecidos o anormales. Para medir la bilirrubina, su absorbancia de luz como se determina por el cooxímetro 5, puede compararse con estándares predefinidos basados en la Ley de Beer-Lambert. En este sentido, el sistema informático puede utilizar la siguiente ecuación para determinar la absorbancia de luz de la bilirrubina en una muestra de sangre.
A " to Q w Q B n S )= £ C L
Arriba, A es el valor correspondiente a la absorbancia de la luz de la muestra de sangre lisada, IB e IS son como se describen anteriormente, C es la concentración de la disolución que contiene la muestra de sangre lisada, £ es el coeficiente de extinción molar y L es la longitud de la trayectoria por la cual viaja la luz. La bilirrubina total puede expresarse como concentración plasmática equivalente. En este sentido, cuando se analiza la sangre completa, el sistema informático puede realizar una corrección del hematocrito para ajustar el efecto de dilución de los eritrocitos y, de este modo, obtener la concentración plasmática equivalente. La corrección del hematocrito se puede realizar utilizando la siguiente ecuación.
Arriba, Bilip corresponde a la concentración de bilirrubina total en la fase plasmática, Bilib corresponde a la concentración de bilirrubina total en sangre completa, y Hct representa el hematocrito expresado como fracción. El Hct se determina multiplicando los gramos por decilitro (g/dL) de hemoglobina total por una constante de 0,03. La constante de 0,03 se basa en un ejemplo de concentración promedio de ejemplo de hemoglobina en glóbulos rojos.
La composición para la lisis de células sanguíneas descrita en la presente memoria puede utilizarse para química clínica óptica o inmunoensayos no descritos específicamente en la presente memoria y con instrumentos distintos a los mostrados en la Fig. 1A. A continuación se describen experimentos realizados utilizando tensioactivos que pueden incluirse en las composiciones para la lisis de células sanguíneas de ejemplo.
En un primer ejemplo, se seleccionó un tensioactivo para que cumpliera con los siguientes criterios: el tensioactivo lisa el 100 % de las células sanguíneas en una escala de tiempo de 1 a 2 segundos o menos a la concentración probada; el tensioactivo es compatible con los tampones y otros productos químicos utilizados en la composición para la lisis de células sanguíneas; el tensioactivo no interfiere con las mediciones de absorbancia óptica previstas; el tensioactivo no interactúa con la química de la hemoglobina sanguínea; el tensioactivo no interactúa con la química de la bilirrubina; el tensioactivo presenta un grado relativamente bajo de formación de espuma; el tensioactivo cumple con las reivindicaciones de producto establecidas para analizadores de cooximetría; y el tensioactivo es respetuoso con el medio ambiente. Los criterios del ejemplo anterior no pretenden ser limitantes en la selección de otros tensioactivos para otras composiciones para la lisis de células sanguíneas.
Se evaluaron múltiples tensioactivos en base a los criterios anteriores. Se determinó que el etoxilato de alcohol secundario Tergitol™ TMN-100X (en adelante denominado como etoxilato de alcohol secundario1) y el Tergitol™ Tipo 15-S-9 (en adelante denominado como etoxilato de alcohol secundario2) cumplían ambos con los criterios anteriores. La composición de cada composición para la lisis de células sanguíneas incluye el etoxilato de alcohol secundario en un tampón junto con un conservante, como se describió anteriormente.
La tabla 1 a continuación muestra la tensión superficial y la altura de la espuma cinco minutos después de mezclar la composición para la lisis de células sanguíneas con agua para el etoxilato de alcohol secundario1, el etoxilato de alcohol secundario2 y Triton-X100 durante la lisis. Triton-X100 es un tensioactivo de control (o de referencia) con el que se comparan los tensioactivos de etoxilato de alcohol secundario. Como se muestra, la altura de la espuma tanto para el etoxilato de alcohol secundario1 como para el etoxilato de alcohol secundario2 se reduce mucho más rápido con el tiempo que la altura de espuma del tensioactivo Triton X-100. Una altura de espuma similar y una rápida disipación de la espuma pueden ser una ventaja de los etoxilatos de alcohol secundario, ya que la formación de espuma puede causar dispersión óptica que puede interferir o afectar negativamente las mediciones de cooximetría. En la tabla 1 a continuación, "% en peso de ingredientes activos" se refiere a la tensión superficial, que es una propiedad del tensioactivo que indica o se relaciona con la eficacia el material como tensioactivo.
Tabla 1
La tabla 2 a continuación muestra los componentes de una composición para la lisis de células sanguíneas de ejemplo. En un procedimiento de prueba de ejemplo, se incluyeron etoxilato de alcohol secundario1 y etoxilato de alcohol secundario2 en la composición para la lisis de células sanguíneas de ejemplo descrita con respecto a la tabla 2 a continuación en concentraciones del 9 % al 14 % y se probaron en un sistema de cooximetría del tipo descrito en la presente memoria.
Tabla 2
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas de la tabla 2, que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 o etoxilato de alcohol secundario2, cumplen los criterios descritos anteriormente. Por ejemplo, las muestras de sangre completa mezcladas con composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 o etoxilato de alcohol secundario2 mostraron una lisis de aproximadamente el 100 % (por ejemplo, lisis del 90 % o superior) de células sanguíneas completas después de 1 a 2 segundos. Además, los espectros de absorción de las disoluciones de calibración y las muestras de sangre lisada, obtenidos a múltiples longitudes de onda, no se vieron sustancialmente afectados por ninguno de los tensioactivos de prueba.
La Fig. 2 es un gráfico de barras que compara la concentración de hemoglobina total (tHb) de muestras de sangre mezcladas con composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario2 26 con muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye T riton X-10027. El eje y representa el "sesgo Delta (tHb-tHb de referencia promedio)", que se refiere a la diferencia entre las concentraciones de hemoglobina total obtenidas usando cada una de las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas (26 y 28) y el promedio de las concentraciones de hemoglobina total, como se indica mediante la línea de puntos 29 obtenida con Triton X-10027. Las líneas de puntos 30 y 31 muestran el intervalo analítico (+0,5 a -0,5) para un sesgo aceptable alrededor del promedio 29 para las composiciones para la lisis de células sanguíneas basadas en T riton X-10027. Las composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 26 o el etoxilato de alcohol secundario2 28 mostraron intervalos de concentración de tHb total de 7 a 21 g/dL, que es similar al de la composición para la lisis de células sanguíneas, que incluye Triton X-100 27, con solo pequeños sesgos negativos. Los datos del ejemplo demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar igual o mejor que de Triton X-100 27 en composiciones para la lisis de células sanguíneas, considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, un efecto relativamente bajo o nulo en los espectros de la muestra, y la precisión y exactitud de las mediciones de tHb.
Los experimentos descritos a continuación se realizaron por triplicado. Algunos experimentos se realizaron en días diferentes, como se indica (“12-20” o “01-08”).
La Fig. 3 es un diagrama de puntos que compara la concentración de hemoglobina total (tHb) de muestras de sangre mezcladas con composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas, que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o etoxilato de alcohol secundario2 26, con la de muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas, que incluye T riton X-10027. El eje y representa "Delta (tHb-Referencia)", que se refiere a la diferencia entre el valor de hemoglobina total obtenido utilizando las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas con el de la composición de control para la lisis de células sanguíneas, que incluye T riton X-10027. El eje x representa " tHbcal de control promedio (g/dL)", que se refiere al valor promedio de hemoglobina total en g/dL obtenido utilizando la composición de control para la lisis de células sanguíneas 27. Los valores de hemoglobina total obtenidos utilizando las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas, que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28, etoxilato de alcohol secundario2 26, y la composición de control para la lisis de células sanguíneas, que incluye Triton X-100 27 se representan gráficamente de forma conjunta. Los datos demuestran una superposición al menos parcial en todos los niveles de hemoglobina total.
En este sentido, la Fig. 3 muestra mediciones de la muestra de tHb de diferentes tipos de muestras, agrupadas por valores de tHb (g/dL). Los grupos de tHb mostrados en la Fig. 3 incluyen (i) muestras con tHb baja y lipémicas 34; (ii) muestras con tHb normal, todos los niveles de COHb, todos los niveles de HHb y todos los niveles de MetHb, y de Intralipid™ 35; (iii) muestras de Intralipid™ 36; muestras con tHb alta 37; y muestras con tHb alta 38. Las líneas punteadas 32 y 33 muestran el intervalo analítico de sesgo aceptable para las composiciones para la lisis de células sanguíneas de prueba. Los datos demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar tan bien o mejor que la composición para la lisis de células sanguíneas de control que incluye Triton X-100 27 al determinar la hemoglobina total utilizando mediciones de cooximetría considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, el efecto relativamente pequeño o nulo en los espectros de la muestra y la precisión y exactitud de las mediciones de tHb.
La FIG. 4 es un diagrama de puntos que compara la concentración de hemoglobina oxigenada (O2Hb) de muestras de sangre mezcladas con composiciones para la lisis de células sanguíneas de prueba del tipo descrito en la presente memoria que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o etoxilato de alcohol secundario2 26 con muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. El eje y representa "Delta (% de O2Hb-Referencia)", que se refiere a la diferencia entre la hemoglobina oxigenada obtenida utilizando cada una de las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas y la de la composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. El eje x representa "Promedio de O2Hb de Control (%)", que se refiere al promedio porcentual del valor de hemoglobina oxigenada obtenido utilizando la composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. Los valores de hemoglobina oxigenada obtenidos utilizando composiciones de control para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28, etoxilato de alcohol secundario2 26 y la composición de control para la lisis 27, se representan gráficamente de manera conjunta para demostrar la superposición en todos los niveles de hemoglobina oxigenada.
En este sentido, la gráfica de la Fig. 4 muestra las mediciones de O2Hb de la muestra a partir de muestras agrupadas mediante valores de O2Hb (g/dL). Los grupos de O2Hb mostrados incluyen: muestras con 60 % de Hb desoxigenada (HHb) 41; muestras con 30 % de HHb 42; muestras con 20 % de MetHb y 20 % de COHb 43; muestras con 5-10 % de MetHb 44; muestras con 5-10 % de COHb 45; muestras con 0 % de Intralipid™ 46; y todas las muestras con LD (lipodémicas), 1 % de COHb, 0,5-1 % de Intralipid™ y 0-1 % de MetHb 47. Las líneas de puntos 39 y 40 muestran el intervalo analítico para un sesgo aceptable para las composiciones para la lisis de células sanguíneas de prueba. Los datos demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar tan bien o mejor que la composición para la lisis de células sanguíneas de control para determinar la hemoglobina oxigenada utilizando mediciones de cooximetría considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, el efecto relativamente pequeño o nulo en los espectros de la muestra y la precisión y exactitud de las mediciones de O2Hb.
La Fig. 5 es un diagrama de puntos que compara (i) la concentración de carboxihemoglobina (COHb) disfuncional en muestras de sangre mezcladas con composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas, que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o etoxilato de alcohol secundario2 26, con (ii) muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas, que incluye Triton X-100 27. El eje y representa "Delta (COHb-Referencia)", que se refiere a la diferencia entre la carboxihemoglobina obtenida utilizando cada una de las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas y la obtenida utilizando la composición de control para la lisis celular, que incluye Triton X-100. El eje x representa "COHb de control promedio (%)" que se refiere al porcentaje promedio de un valor de carboxihemoglobina obtenido utilizando la composición para la lisis de células sanguíneas 27. Los valores de carboxihemoglobina obtenidos usando composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28, etoxilato de alcohol secundario2 26 y la composición para la lisis de células de control 27 se representan gráficamente en conjunto y demuestran superposición en todos los niveles de carboxihemoglobina.
En este sentido, la gráfica de la Fig. 5 muestra las mediciones de muestras de COHb agrupadas por valores de COHb (g/dL). Los grupos de COHb mostrados en la Fig. 5 incluyen: todas las muestras de LD (lipodémicas), tHb, Intralipid™, HHb y MetHb 50; muestras con 5 % de COHb 51; muestras con 10 % de COHb 52; y muestras con 20 % de COHb 53. Las líneas de puntos 48 y 49 muestran el intervalo analítico para un sesgo aceptable en las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas. Los datos demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar igual o mejor que la composición de control para la lisis celular que incluye Triton X-100 27, para la determinación de carboxihemoglobina en mediciones de cooximetría, considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, la ausencia de efectos en los espectros de las muestras y la exactitud y precisión de las mediciones de COHb.
La FIG. 6 es una gráfica de puntos que compara la concentración de hemoglobina disfuncional metahemoglobina (MetHb) en muestras de sangre mezcladas con composiciones para la lisis celular que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o etoxilato de alcohol secundario226 con la de muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. El eje y representa "Delta (MetHb-Referencia)", que se refiere a la diferencia entre la metahemoglobina obtenida utilizando cada una de las composiciones para la lisis de células sanguíneas a la de la composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100. El eje x representa el " MetHb de control promedio (%)", que se refiere al promedio porcentual del valor de metahemoglobina obtenido utilizando la composición para la lisis de células sanguíneas de control 27. Los valores de metahemoglobina obtenidos utilizando composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28, etoxilato de alcohol secundario2 26 y la composición para la lisis de células sanguíneas de control 27, se representan gráficamente en conjunto y demuestran superposición en todos los niveles de metahemoglobina.
La Fig. 6 muestra mediciones de donantes agrupadas por valores de MetHb (g/dL). Los grupos de MetHb mostrados en la FIG. 6 incluyen: todas las muestras de LD (donante lipémico), tHb, COHb, Intralipid™, HHb y 0 % MetHb 56; muestras de MetHb al 5 % 57; muestras de MetHb al 10 % 58; y muestras de MetHb al 20 % 59. Las líneas de puntos 54 y 55 muestran el intervalo analítico para un sesgo aceptable para las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas. Los datos demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar igual o mejor que la referencia en composiciones para la lisis de células sanguíneas para la determinación de metahemoglobina en mediciones de cooximetría, considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, un efecto relativamente bajo o nulo en los espectros de las muestras, y la exactitud y precisión de las mediciones de MetHb.
La Fig. 7 es un diagrama de puntos que compara la concentración de desoxihemoglobina (HHb) en muestras de sangre mezcladas con composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 28 o etoxilato de alcohol secundario2 26 con la de muestras de sangre mezcladas con una composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. El eje y representa "Delta (HHb-Referencia)", que se refiere a la diferencia entre la desoxihemoglobina obtenida utilizando cada una de las composiciones para la lisis de células sanguíneas a la de la composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100. El eje x representa el " HHb de control promedio (%)", que se refiere al promedio porcentual de los valores de desoxihemoglobina obtenidos utilizando la composición para la lisis de células sanguíneas de control 27. Se representan gráficamente conjuntamente los valores de desoxihemoglobina obtenidos utilizando las composiciones de prueba para la lisis de células sanguíneas, que incluyen el etoxilato de alcohol secundario1 28, el etoxilato de alcohol secundario2 26 y la composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 27. La gráfica de estos valores demuestra superposición en todos los niveles de desoxihemoglobina.
En este sentido, la FIG. 7 muestra mediciones de HHb de muestras agrupadas por valores de HHb (g/dl). Los grupos de HHb mostrados en la FIG. 7 incluyen: todas las muestras de LD (donante lipémico), tHb, COHb, Intralipid™, MetHb y 0 % de HHb 62; muestras con 30 % de HHb 63; y muestras con 60 % de HHb 64. Las líneas de puntos 60 y 61 muestran el intervalo analítico de sesgo aceptable para composiciones para la lisis de células sanguíneas que contienen etoxilato de alcohol secundario1 y etoxilato de alcohol secundario2. Los datos muestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar igual o mejor que la referencia en la composición para la lisis de células sanguíneas en la determinación de la desoxihemoglobina en base a mediciones de cooximetría, considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, el efecto relativamente bajo o nulo en los espectros de la muestra, y la exactitud y precisión de las mediciones de HHb.
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas producen resultados de tHb, O2Hb, COHb, MetHb y HHb dentro de intervalos de referencia predefinidos aceptables.
En otro ejemplo, Multi-4 ("M4") es un material de control de 3 niveles utilizado en un ensayo para obtener mediciones de lisis de células sanguíneas humanas mediante cooximetría. La tabla 3 a continuación muestra que, para cada ensayo Multi-4 de 3 niveles de ejemplo realizado (L1, L2 y L3), tanto el etoxilato de alcohol secundario1 ("1" en la tabla) como el etoxilato de alcohol secundario2 ("2" en la tabla), las composiciones para la lisis de células sanguíneas de ejemplo producen resultados de tHb, O2Hb, COHb, MetHb y HHb dentro de los intervalos de referencia asignados ("Intervalo") que son comparables a los valores producidos utilizando la composición para la lisis de células sanguíneas de control ("Ctrl") que incluye Triton-X 100. Se muestra el intervalo aceptable de resultados, donde "mín." se refiere al resultado mínimo aceptable y "máx." se refiere al resultado máximo aceptable de M4 para cada especie L1 a L3. También se muestran el promedio (“prom.”), la desviación estándar (“DE”) y el promedio delta (“delta”) de cada etoxilato de alcohol secundario con respecto al promedio del control. Los datos demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden funcionar igual o mejor que la composición para la lisis de las células sanguíneas de control al determinar la hemoglobina oxigenada utilizando mediciones de cooximetría, considerando la velocidad y la totalidad de la lisis, un efecto relativamente bajo o nulo en los espectros de la muestra y la exactitud y precisión de las mediciones de tHb, O2Hb, COHb, MetHb y HHb.
Tabla 3
En referencia a la tabla 4 a continuación, las composiciones para la lisis de células sanguíneas que incluyen etoxilato de alcohol secundario1 o etoxilato de alcohol secundario2 también arrojaron resultados muy similares (Delta < 0,1) a una composición de control para la lisis de células sanguíneas que incluye Triton X-100 cuando se utiliza para medir la hemoglobina total (tHb) en muestras altamente turbias. Dichas muestras incluyen muestras turbias que ocurren de manera natural. En la tabla a continuación, "LD" se refiere a la identificación (ID) de la muestra del donante (paciente) lipémico, como se indica (1-6), y dichas muestras incluyen hasta un 1 % de Intralipid-20™.
La tabla 4 a continuación muestra que las composiciones para la lisis de células sanguíneas de etoxilato de alcohol secundario 1 y 2 ambas produjeron valores de tHb cercanos o dentro de una desviación estándar de los valores de tHb producidos por la composición para la lisis de células sanguíneas de control que incluye Triton-X 100. Los datos en la tabla 4 demuestran que tanto el etoxilato de alcohol secundario1 como el etoxilato de alcohol secundario2 pueden realizarse tan bien o mejor que el Triton X-100 en composiciones para la lisis de células sanguíneas cuando se determina la hemoglobina total en base a las mediciones de cooximetría de muestras de sangre con alto contenido de lípidos.
Tabla 4
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria pueden presentar una o más de las siguientes ventajas. Como se describió anteriormente, las composiciones para la lisis de células sanguíneas pueden cumplir uno o más umbrales objetivo para: la eficiencia y la velocidad con la que la composición para la lisis de células sanguíneas lisa las células sanguíneas; el grado de interferencia que presenta la composición para la lisis de células sanguíneas en las mediciones ópticas previstas; el grado de interferencia que la composición para la lisis de células sanguíneas presenta en la química de la hemoglobina sanguínea; el grado de interferencia que la composición para la lisis de células sanguíneas presenta en la química de la bilirrubina; y el grado de formación de espuma que causa dispersión en las mediciones ópticas.
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria, los tensioactivos contenidos en ellas o ambos pueden ser biodegradables.
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas y los tensioactivos contenidos en ellas se han descrito con respecto a un sistema de cooximetría. Sin embargo, las composiciones para la lisis de células sanguíneas y tensioactivos contenidos en ellas pueden utilizarse en cualquier contenido apropiado y no se limitan a su uso en el contexto de la cooximetría.
Las composiciones para la lisis de células sanguíneas descritas en la presente memoria se pueden mezclar con muestras de sangre de cualquier mamífero apropiado, que incluyen pero no se limitan a, seres humanos, ratones, primates, perros o ganado, con el propósito de lisis de células sanguíneas.
Al menos una parte de los sistemas de cooximetría descritos en esta memoria descriptiva y sus diversas modificaciones pueden configurarse o controlarse, al menos parcialmente, mediante uno o más ordenadores, tales como los sistemas informáticos 17, que utilizan uno o más programas informáticos incorporados de forma tangible en uno o más vehículos de información, tal como en uno o más medios de almacenamiento legibles por máquina no transitorios. Un programa informático puede escribirse en cualquier lenguaje de programación, incluidos los compilados o interpretados, y puede implementarse de cualquier forma, ya sea como programa independiente o como módulo, parte, subrutina u otra unidad adecuada para su uso en un entorno informático. Un programa informático puede implementarse para su ejecución en uno o varios ordenadores en una ubicación, o bien distribuirse en varias ubicaciones e interconectarse mediante una red.
Las acciones asociadas con la configuración o el control del sistema de prueba descrito en la presente memoria pueden ser realizadas por uno o más procesadores programables que ejecutan uno o más programas informáticos para controlar o realizar todas o algunas de las operaciones descritas en la presente memoria. Todo o parte de los sistemas y procesos de prueba pueden configurarse o controlarse mediante circuitos lógicos específicos, como una FPGA (matriz de puertas programables en campo) y/o un ASIC (circuito integrado de aplicación específica) o microprocesadores integrados localizados en el hardware del instrumento.
Los procesadores adecuados para la ejecución de un programa informático incluyen, por ejemplo, microprocesadores de propósito tanto general como especial, y cualquiera o más procesadores de cualquier tipo de ordenador digital. Generalmente, un procesador recibe instrucciones y datos de un área de almacenamiento de solo lectura, un área de almacenamiento de acceso aleatorio o ambos. Los elementos de un ordenador incluyen uno o más procesadores para ejecutar instrucciones y uno o más dispositivos de área de almacenamiento para almacenar instrucciones y datos. Generalmente, un ordenador también incluirá, o estará acoplado operativamente para recibir datos de, o transferir datos a, o ambos, uno o más medios de almacenamiento legibles por máquina, tales como dispositivos de almacenamiento masivo para almacenar datos, como discos magnéticos, magnetoópticos o discos ópticos.
Los medios de almacenamiento legibles por máquina no transitorios adecuados para expresar instrucciones y datos de programas de computadora incluyen todas las formas de área de almacenamiento no volátil, que incluyen, a modo de ejemplo, dispositivos de área de almacenamiento de semiconductores, tales como EPROM (memoria de sólo lectura programable y borrable), EEPROM (memoria de sólo lectura programable y borrable eléctricamente) y dispositivos de área de almacenamiento flash; discos magnéticos, tales como discos duros internos o discos extraíbles; discos magnetoópticos; y CD-ROM (memoria de sólo lectura de disco compacto) y DVD-ROM (memoria de sólo lectura de disco versátil digital).
Las marcas comerciales mencionadas en la presente solicitud representan los siguientes compuestos (en orden de aparición):
T e rg ito l™ TM N -100X una relación 70:30 de T erg ito l™ TMN-10 a Terg ito l™
'

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Uso de una composición de lisis de células sanguíneas para lisar células sanguíneas, comprendiendo la composición de lisis de células sanguíneas: un tampón; y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v).
  2. 2. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 1, en donde el etoxilato de alcohol secundario comprende al menos uno de los siguientes: Tergitol™ Tipo 15-S-12, Tergitol™ Tipo 15-S-30, Tergitol™ Tipo 15-S-5, Tergitol™ Tipo 15-S-7, Tergitol™ Tipo 15-S-9, Tergitol™ Tipo NP-10, Tergitol™ Tipo NP-4, un nonilfenol etoxilado de Tergitol™ Tipo NP-40, un (3,9-dietiltridecano-6-sulfonato) de sodio de Tergitol™ Tipo NP-7, un (2-etilhexilsulfato) de sodio de Tergitol™ Tipo 8, Tergitol™ Tipo NP-9, Tergitol™ TMN-100X, un (7-etil-2-metilundecan-4-il)sulfato de sodio de TEOS Tergitol™, Tergitol™ TMN-10 o Tergitol™ TMN-6, en donde el etoxilato de alcohol secundario comprende preferiblemente Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9.
  3. 3. Una composición para la lisis de células sanguíneas, que comprende: un tampón; y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 9 por ciento (%) a 20 % en peso por volumen (p/v), en donde el etoxilato de alcohol secundario comprende uno o más de: un primer etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde x es 5, 7, 9, 11, 12, 13, 14 o 15,
    o un segundo etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde n es 6, 10, 11, 12, 13, 14 o 15,
  4. 4. La composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 3, en donde el etoxilato de alcohol secundario comprende: (a) el primer etoxilato de alcohol secundario que tiene la siguiente fórmula estructural donde x=9
    (b) el segundo etoxilato de alcohol secundario que comprende una relación 70:30 de un tercer etoxilato de alcohol secundario a un cuarto etoxilato de alcohol secundario; donde el tercer etoxilato de alcohol secundario tiene la siguiente fórmula estructural donde n=10:
    ; y en donde el cuarto etoxilato de alcohol secundario tiene la siguiente fórmula estructural donde n=6:
  5. 5. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 1 o 2 o la composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 3 o 4, en donde el tampón comprende al menos uno de ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico (MOPS), tampón de fosfato (PBS), ácido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazinetanosulfónico (HEPES), ácido 2-[[1,3-dihidroxi-2-(hidroximetilpropan-2-il]amino]etanosulfónico (TES), 2,2-bis(hidroximetil)-2,2',2"-nitrilotrietanol, o 2-bis(2-hidroxietil)amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol (Bis-T ris).
  6. 6. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 5 o de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, que comprende además un biocida, en donde el biocida comprende al menos uno de 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona (CMIT), 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (MIT), Proclin 300, 1,2-benzisotiazolin-3-ona (BIT), hidrocloruro de dodecilguanidina (DGH), gentamicina, levofloxacina, colistina, octilisotiazolinona (OIT) o amikacina, en donde el biocida comprende preferiblemente CMIT y MIT.
  7. 7. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 6 o la composición para la lisis de células sanguíneas según la reivindicación 6, en donde CMIT y MIT están en una relación de 3:1 (CMIT:MIT), y/o en donde el CMIT:MIT está en una concentración del 1 % (p/v) en la composición para la lisis de células sanguíneas.
  8. 8. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 5 a 7 o la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, en donde la composición para la lisis de células sanguíneas tiene un pH entre 6 y 8.
  9. 9. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 5 a 8 o la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, en donde el etoxilato de alcohol secundario está presente en una concentración en el intervalo de 9 % a 14 % (p/v).
  10. 10. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 5 a 9 o la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, en donde el etoxilato de alcohol secundario es biodegradable, y/o en donde la composición está configurada para lisar al menos el 90 % de las células sanguíneas en una muestra en menos de 2 segundos.
  11. 11. Uso de la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 5 a 10 o la composición para la lisis de células sanguíneas según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 10, en donde el etoxilato de alcohol secundario tiene una altura de espuma de 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo) de aproximadamente 75 milímetros (mm) a aproximadamente 125 mm, o en donde el etoxilato de alcohol secundario tiene una altura de espuma de 5 minutos (0,1 % en peso de ingredientes activos) de aproximadamente 40 mm a aproximadamente 75 mm, midiéndose la altura de la espuma utilizando el método de Ross-Miles.
  12. 12. Un método para determinar el nivel de hemoglobina en una muestra de sangre, comprendiendo el método: (i) mezclar una composición para la lisis de células sanguíneas con una muestra de sangre, lisando así una o más células en la muestra de sangre, comprendiendo la composición para la lisis de células sanguíneas: un tampón; y un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) al 20 % peso por volumen (p/v); y (ii) determinar el nivel de hemoglobina en la muestra de sangre, en donde preferiblemente la hemoglobina comprende al menos una de oxihemoglobina, desoxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina, sulfohemoglobina, cianometahemoglobina o hemoglobina fetal.
  13. 13. El método según la reivindicación 12, que comprende además medir un nivel de bilirrubina.
  14. 14. Un método para elaborar una composición para la lisis de sangre, que comprende: mezclar un tampón con un etoxilato de alcohol secundario en una concentración en el intervalo de 2,5 por ciento (%) a 20 % de peso por volumen (p/v).
  15. 15. El método según la reivindicación 13, en donde el etoxilato de alcohol secundario tiene una altura de espuma de 5 minutos (0,1 % en peso de ingrediente activo) de aproximadamente 40 mm a aproximadamente 75 mm, midiéndose la altura de la espuma utilizando el método de Ross-Miles, y/o en donde el etoxilato de alcohol secundario es Tergitol™ TMN-100X o Tergitol™ 15-S-9.
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