ES3041327T3 - Liquid formulations of glucagon analogues - Google Patents

Liquid formulations of glucagon analogues

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ES3041327T3 ES21712156T ES21712156T ES3041327T3 ES 3041327 T3 ES3041327 T3 ES 3041327T3 ES 21712156 T ES21712156 T ES 21712156T ES 21712156 T ES21712156 T ES 21712156T ES 3041327 T3 ES3041327 T3 ES 3041327T3
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Jesper Skodborg VILLADSEN
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Abstract

La presente invención se refiere a formulaciones de análogos de glucagón, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos y/o un derivado de los mismos; y a su uso médico, por ejemplo, en el tratamiento de la hipoglucemia. En particular, la presente invención se refiere a formulaciones líquidas acuosas estables de análogos de glucagón que comprenden combinaciones de excipientes que las hacen aptas para el almacenamiento a largo plazo en estado líquido y que pueden utilizarse en formulaciones de dosis única (DU) o multidosis (MD). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Formulaciones líquidas de análogos del glucagón
Campo de la invención
La presente invención se refiere a formulaciones de análogos del glucagón y a su uso médico, por ejemplo, en el tratamiento de la hipoglucemia. Concretamente, la presente invención se refiere a formulaciones líquidas acuosas estables de análogos del glucagón.
Antecedentes de la invención
El preproglucagón humano es un polipéptido precursor de 158 aminoácidos que se procesa de forma diferencial en los tejidos para formar una serie de péptidos derivados del proglucagón estructuralmente relacionados, incluidos glucagón (Glu), péptido 1 similar al glucagón (GLP-1), péptido 2 similar al glucagón (GLP-2) y oxintomodulina (OXM). Estas moléculas intervienen en una gran variedad de funciones fisiológicas, incluidas homeostasis de la glucosa, secreción de insulina, vaciado gástrico y crecimiento intestinal, así como la regulación de la ingesta de alimentos.
El glucagón nativo es un péptido de 29 aminoácidos que corresponde a los aminoácidos 53 a 81 del preproglucagón. El glucagón ayuda a mantener el nivel de glucosa en la sangre al unirse a los receptores de glucagón de los hepatocitos, haciendo que el hígado libere glucosa, almacenada en forma de glucógeno, a través de la glucogenólisis. A medida que estos almacenes se agotan, el glucagón también estimula al hígado para que sintetice glucosa adicional mediante la gluconeogénesis. Esta glucosa se libera en el torrente sanguíneo, previniendo la aparición de hipoglucemias. Esto ha conducido al desarrollo de formulaciones terapéuticas de glucagón o análogos del glucagón destinadas a utilizarse en situaciones de "rescate" para aliviar la hipoglucemia aguda en sujetos diabéticos, por ejemplo, para tratar a sujetos que han recibido una dosis excesivamente alta de insulina. Sin embargo, debido a la relativamente baja estabilidad física y química del glucagón nativoper se,la mayoría de los productos de glucagón disponibles actualmente en el mercado se suministran en forma de preparados sólidos liofilizados que deben reconstituirse en un medio líquido apropiado inmediatamente antes de su uso. Como los sujetos hipoglucémicos pueden presentar síntomas de mareo y/o confusión, o en algunos casos pueden incluso llegar a estar inconscientes o semiinconscientes, esto significa que pueden ser incapaces de realizar o completar la reconstitución líquida inicial requerida y la posterior inyección de la formulación de glucagón en cuestión. Como resultado, esta reconstitución e inyección puede tener que ser realizada por otra persona que no tenga experiencia en el procesamiento del producto en el limitado tiempo disponible antes de que se produzca una agregación excesiva de glucagón.
Esto ha llevado a realizar esfuerzos en este campo para producir formulaciones de análogos del glucagón que, además de tener una actividad satisfactoriamente elevada en el receptor del glucagón, son suficientemente solubles (especialmente a pH fisiológico, mientras que el glucagón nativo es esencialmente insoluble a pH neutro) y física y químicamente estables en formulaciones líquidas que permiten su uso inmediato sin necesidad de reconstitución. Estos análogos (i) pueden suministrarse ventajosamente en forma de una formulación farmacéutica líquida lista para su uso y adaptada para inyección inmediata y (ii) pueden poder almacenarse (incluso ser transportados por el sujeto o paciente en cuestión en condiciones ambientales) durante un periodo de tiempo suficientemente largo antes de su uso.
El documento WO 2011/117417 (Novo Nordisk A/S) divulga péptidos de glucagón modificados que incluyen una mutación en la posición aminoacídica 25 del glucagón 1-29 que son resistentes a la agregación en soluciones acuosas.
El documento WO 2016/133863 (Eli Lilly and Company) describe composiciones en polvo de glucagón para administración nasal que incluyen una ciclodextrina y un tensioactivo fosfolípido en una fase caracterizada por un mesopeak XRPD.
El documento WO 2019/110838 (Adocia) se refiere a formulaciones de glucagón, rellenos de carboxilato con copoliaminoácidos y radicales hidrófobos.
El documento WO 2008/084237 (Arecor Limited) describe composiciones acuosas de proteínas en las que se utiliza un tampón de desplazamiento que tiene un pKa al menos una unidad mayor que el pH al que se estabiliza la proteína.
El documento WO 2014/016300 (Zealand Pharma A/S) divulga análogos del glucagón adecuados para su uso en formulaciones líquidas, donde los análogos tienen una solubilidad y/o estabilidad mejoradas en comparación con el glucagón humano nativo. Uno de los análogos del glucagón descritos en el documento WO 2014/016300 se denomina dasiglucagón y se encuentra en fase de ensayo clínico como tratamiento listo para su uso de la hipoglucemia grave para el tratamiento de la diabetes de tipo 1 y para el tratamiento del hiperinsulinismo congénito. Las características farmacocinéticas y farmacodinámicas del dasiglucagón y su comparación con GlucaGen® se divulgan en Hovelmann et al, Diabetes Care, 2017 (https://doi.org/10.2337/dc17-1402).
El documento WO 2017/053822 (Xeris Pharmaceuticals, Inc.) divulga formulaciones líquidas del péptido glucagón nativo que utilizan dimetilsulfóxido (DMSO) como sistema disolvente aprótico polar. También pueden añadirse excipientes estabilizadores de la ionización para mejorar la solubilización. El documento WO 2014/124151 (Xeris Pharmaceuticals, Inc.) divulga formulaciones líquidas del péptido glucagón en DMSO que incluyen además un crioprotector, tal como trehalosa, para proteger las formulaciones contra los ciclos de congelación y descongelación. Sin embargo, el uso de DMSO en el sistema de disolventes para estas formulaciones tiene varias desventajas significativas, ya que hace que la viscosidad de las formulaciones sea relativamente alta, lo que dificulta la inyección y provoca efectos secundarios no deseados, tales como reacciones cutáneas, piel seca, cefalea, mareo, somnolencia, náuseas, vómitos, diarrea, estreñimiento, problemas respiratorios, problemas de visión, problemas sanguíneos y reacciones alérgicas. El DMSO también produce un sabor parecido al ajo, aliento y olor corporal. Además, el DMSO disuelve los plásticos y el caucho, lo que puede ser un inconveniente cuando la administración se realiza mediante un dispositivo de administración, por ejemplo, un lápiz inyector, una jeringa o un sistema de bombeo. En algunos casos, el DMSO se utiliza en combinación con un 15-20 % de un co-disolvente, tales como propilenglicol o etanol, para evitar la temperatura de congelación relativamente alta de las formulaciones que contienen 80-100 % de DMSO. Sin embargo, si se incluye más de un 5 % de agua en las formulaciones que utilizan DMSO y co-disolventes, esto disminuye la estabilidad química del glucagón en la formulación.
Por lo tanto, sigue siendo un problema en este ámbito mejorar la formulación de los análogos del glucagón, en particular, proporcionar formulaciones líquidas estables que sean capaces de almacenarse a largo plazo sin que se produzcan niveles indebidos de degradación física y química de la forma monomérica activa del péptido y que superen algunas de las desventajas asociadas a las formulaciones existentes de glucagón o análogos del glucagón.
Sumario de la invención
En términos generales, la presente invención se basa en los estudios descritos en los ejemplos que han investigado e identificado excipientes que pueden utilizarse en formulaciones líquidas acuosas de análogos del glucagón que son adecuados para el almacenamiento a largo plazo como líquidos y que pueden utilizarse en formulaciones de monodosis (MD) o multidosis (MD).
En estos estudios, los presentes inventores descubrieron que el agente tampón utilizado en las formulaciones de los análogos del glucagón tenía un efecto importante en la estabilidad de las formulaciones acuosas que comprendían análogos del glucagón, en particular dasiglucagón. Los experimentos divulgados en el presente documento demuestran que los tampones TRIS, ACES y MES y/o los tampones acetato, citrato o succinato, proporcionan estabilidad química a las formulaciones de análogos del glucagón a pH de ligeramente ácido a neutro, como lo demuestra la detección y cuantificación de productos de degradación. El análisis comparativo de los perfiles de degradación muestra que estos tampones proporcionan una mayor estabilidad en relación con otros sistemas tampón ensayados, tales como histidina o fosfato, incluso cuando, por lo demás, las formulaciones tenían el mismo pH, es decir, que la estabilidad proporcionada por los tampones es, al menos en parte, independiente de sus propiedades moduladoras del pH. De manera destacada, en aspectos de la presente invención en los que las formulaciones comprenden además un conservante, tal como metacresol, las formulaciones tienen estabilidad a largo plazo en forma líquida, por lo que son adecuadas para la multidosificación. Esto abre la posibilidad de proporcionar formulaciones de análogos del glucagón en forma de dispositivo de administración de fármacos, y en particular dispositivos de administración de monodosis o multidosis, tal como una jeringa precargada, un dispositivo de inyección, un lápiz inyector, un autoinyector de dosis ajustable, un autoinyector desechable, un inyector portátil o una bomba de infusión, proporcionando así a los pacientes una formulación lista para usar en un dispositivo más simple, más seguro y más cómodo para el paciente.
La solicitud describe una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde la formulación comprende:
(a) el análogo del glucagón, o la sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml,
(b) TRIS, Bis-TRIS, ACES o MES presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad; y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; y
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón, que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
en donde la formulación comprende:
(a) el análogo del glucagón presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml;
(b) TRIS, ACES o MES están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM y/o citrato, acetato o succinato están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; y
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0.
En algunas realizaciones de una formulación que comprende un análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la formulación comprende el análogo del glucagón, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, por ejemplo, aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 0,6 mg/ml, aproximadamente 0,7 mg/ml, aproximadamente 0,8 mg/ml, aproximadamente 0,9 mg/ml o aproximadamente 1,0 mg/ml.
En algunos aspectos, los presentes inventores descubrieron que los tampones TRIS, ACES o MES son capaces de estabilizar químicamente de forma directa el análogo del glucagón, independientemente del pH de la formulación proporcionada por el tampón. La mejora de la estabilización química directa puede determinarse en relación con la estabilidad del análogo del glucagón en una formulación correspondiente en un tampón fosfato y/o un tampón histidina en las mismas condiciones de ensayo.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona procesos para producir las composiciones farmacéuticas líquidas acuosas estables de la presente invención.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un dispositivo de administración que contiene una formulación líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón de la presente invención. A modo de ejemplo, el dispositivo de administración incluye una jeringa precargada, un dispositivo de inyección, un lápiz inyector, un autoinyector de dosis ajustable, un autoinyector desechable, un inyector portátil o una bomba de infusión.
La solicitud describe un artículo de fabricación o un kit que comprende un recipiente que contiene una composición farmacéutica líquida acuosa estable de la invención.
La solicitud describe una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención para su uso en terapia.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección seleccionada entre hipoglucemia (incluyendo, entre otros, hipoglucemia grave, hipoglucemia aguda e hipoglucemia crónica), diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, obesidad, cardiopatía coronaria, ateroesclerosis, hipertensión, dislipidemia, esteatosis hepática, intoxicación por '-bloqueantes, insulinoma o enfermedad de Von Gierkes. Concretamente, la formulación puede utilizarse para el tratamiento de formas de hipoglucemia, por ejemplo, cuando la hipoglucemia se selecciona del grupo que consiste en hipoglucemia diabética, hipoglucemia aguda inducida por insulina, hipoglucemia hiperinsulinémica, hipoglucemia no diabética, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por fármacos, hipoglucemia hiperinsulinémica congénita, hipoglucemia inducida por el alcohol, hipoglucemia inducida por derivación gástrica (incluidas, entre otras, hipoglucemia posprandial tras derivación gástrica en Y de Roux), hipoglucemia posbariátrica o hipoglucemia durante el embarazo. En algunas realizaciones, el método comprende administrar a un paciente que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención.
En algunas realizaciones, la hipoglucemia grave se caracteriza por un nivel muy bajo de azúcar en sangre. En algunas realizaciones, el tratamiento de la hipoglucemia aguda incluye el tratamiento de un episodio agudo de hipoglucemia grave, incluyendo, pero sin limitación, un episodio de hipoglucemia grave caracterizado por un nivel muy bajo de azúcar en sangre.
La solicitud describe un método de tratamiento de un paciente que padece una enfermedad o afección seleccionada entre hipoglucemia (incluyendo, entre otros, hipoglucemia grave, hipoglucemia aguda e hipoglucemia crónica), diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, obesidad, cardiopatía coronaria, ateroesclerosis, hipertensión, dislipidemia, esteatosis hepática, intoxicación por '-bloqueantes, insulinoma o enfermedad de Von Gierkes. Concretamente, la formulación puede utilizarse para el tratamiento de formas de hipoglucemia, por ejemplo, cuando la hipoglucemia se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia diabética, hipoglucemia aguda inducida por insulina, hipoglucemia hiperinsulinémica, hipoglucemia no diabética, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por fármacos, hipoglucemia hiperinsulinémica congénita, hipoglucemia inducida por el alcohol, hipoglucemia inducida por derivación gástrica, hipoglucemia posbariátrica (incluida, entre otras, la hipoglucemia posprandial tras una derivación gástrica en Y de Roux), o hipoglucemia durante el embarazo, comprendiendo el método administrar a un paciente que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención.
La solicitud describe el uso de una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección seleccionada entre hipoglucemia (incluyendo, entre otros, hipoglucemia grave, hipoglucemia aguda e hipoglucemia crónica), diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, obesidad, cardiopatía coronaria, ateroesclerosis, hipertensión, dislipidemia, esteatosis hepática, intoxicación por '-bloqueantes, insulinoma o enfermedad de Von Gierkes. Concretamente, la formulación puede utilizarse para el tratamiento de formas de hipoglucemia, por ejemplo, cuando la hipoglucemia se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia diabética, hipoglucemia aguda inducida por insulina, hipoglucemia hiperinsulinémica, hipoglucemia no diabética, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por fármacos, hipoglucemia hiperinsulinémica congénita, hipoglucemia inducida por el alcohol, hipoglucemia inducida por derivación gástrica (incluidas, entre otras, hipoglucemia posprandial tras derivación gástrica en Y de Roux), hipoglucemia posbariátrica o hipoglucemia durante el embarazo, comprendiendo el método administrar a un paciente que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación líquida acuosa estable del análogo del glucagón de la presente invención.
En algunas realizaciones, un paciente tratado con una formulación según la presente invención no se encuentra en estado de inanición, no tiene insuficiencia suprarrenal y/o no tiene hipoglucemia crónica. En algunas realizaciones, un paciente tratado con una formulación según la presente invención no experimenta una disminución del glucógeno hepático. En algunas realizaciones, un paciente tratado con una formulación según la divulgación no tiene un tumor en su glándula suprarrenal, incluyendo, pero sin limitación, un feocromocitoma. En algunas realizaciones, un paciente tratado con una formulación según la presente invención no tiene un tumor en el páncreas, incluyendo, pero sin limitación, un insulinoma.
En algunas realizaciones, un paciente tratado con una formulación según la divulgación tiene seis años de edad o más.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un proceso para producir una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
comprendiendo el proceso formular (a) el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml; (b) TRIS, ACES o MES presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM; (c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad; y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; (d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0; y opcionalmente (e) metacresol a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml para producir la formulación farmacéutica líquida acuosa estable. En realizaciones preferidas, el proceso proporciona una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que es capaz de almacenarse de forma estable a 2-8 °C durante al menos 6 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses o al menos 24 meses.
En algunas realizaciones, el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, tal como aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 0,6 mg/ml, aproximadamente 0,7 mg/ml, aproximadamente 0,8 mg/ml, aproximadamente 0,9 mg/ml o aproximadamente 1,0 mg/ml.
La solicitud describe el uso de una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo;
para proporcionar una formulación farmacéutica líquida acuosa que es estable durante 24 meses cuando se almacena a 2-8 °C, en donde la formulación comprende:
(a) el análogo del glucagón presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml;
(b) TRIS, ACES o MES presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad; y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM;
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0; y opcionalmente
(e) meta-cresol a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml para producir la formulación farmacéutica líquida acuosa estable.
En algunas realizaciones, el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, tal como aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 0,6 mg/ml, aproximadamente 0,7 mg/ml, aproximadamente 0,8 mg/ml, aproximadamente 0,9 mg/ml o aproximadamente 1,0 mg/ml.
La solicitud describe una formulación farmacéutica líquida acuosa que comprende un análogo del glucagón que consiste esencialmente o está constituida por el análogo del glucagón y los demás componentes de la formulación definidos en el presente documento. Otros aspectos y realizaciones de la presente invención serán evidentes para los expertos en la materia a la vista de la presente divulgación.
Cuando en el presente documento se utiliza "y/o" debe interpretarse que se refiere a la divulgación específica de cada una de las dos características o componentes especificados, con o sin el otro. Por ejemplo, "A y/o B" ha de interpretarse como la divulgación específica de cada uno de (i) A, (ii) B y (iii) A y B, como si cada uno de ellos se estableciera individualmente en el presente documento.
A menos que el contexto indique otra cosa, las descripciones y definiciones de las características establecidas anteriormente no se limitan a ningún aspecto o realización particular de la invención y se aplican igualmente a todos los aspectos y realizaciones que se describen.
Descripción detallada de la invención
Definiciones
A menos que se especifique lo contrario, las siguientes definiciones se proporcionan para términos específicos, que se utilizan en la descripción escrita anterior.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones se utilizan los códigos convencionales de una y tres letras para los aminoácidos naturales. Todos los restos de aminoácidos en los péptidos de la invención son preferentemente de configuración L, Sin embargo, también pueden estar presentes aminoácidos de configuración D. Aib significa ácido • -aminoisobutírico.
Análogos del glucagón
La expresión "glucagón nativo" se refiere al glucagón humano nativo que tiene la secuencia H-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH (s Eq ID NO: 1).
Los compuestos preferidos utilizados en las formulaciones de la presente invención tienen al menos actividad agonista del glucagón. Esto se puede evaluar en ensayosin vitro,por ejemplo, según lo descrito en el documento WO 2014/016300, en el que se utiliza la producción de AMP cíclico celular (AMPc) para monitorizar la actividad del receptor de glucagón humano en presencia de análogos del glucagón.
Entre las secuencias divulgadas en el presente documento hay secuencias que incorporan una fracción "Hy-" en el extremo amino (N-terminal) de la secuencia, y una fracción "-OH" en el extremo carboxi (C-terminal) de la secuencia. En tales casos, y salvo que se indique lo contrario, una fracción "Hy-" en el N-terminal de la secuencia en cuestión indica un átomo de hidrógeno, mientras que una fracción "-OH" en el extremo C de la secuencia indica un grupo hidroxi.
Los análogos del glucagón presentes en las formulaciones de la presente invención tienen una o más sustituciones de aminoácidos, deleciones, inversiones o adiciones en comparación con el glucagón nativo. Esta definición también incluye los términos sinónimos miméticos de glucagón y/o agonistas del glucagón. Además, los análogos de la presente invención pueden tener de manera adicional una modificación química de uno o más de sus grupos laterales de aminoácidos, átomos de carbono •, grupo amino terminal o grupo ácido carboxílico terminal. Una modificación química incluye, pero sin limitación, la adición de restos químicos, la creación de nuevos enlaces y la eliminación de restos químicos. Las modificaciones en los grupos laterales de aminoácidos incluyen, sin limitación, acilación de grupos •-amino de lisina, N-alquilación de arginina, histidina o lisina, alquilación de grupos de ácido carboxílico, glutámico o aspártico y desamidación de glutamina o asparagina. Las modificaciones del extremo amino incluyen, sin limitación, el des-amino, N-alquilo inferior, N-di-alquilo inferior y modificaciones de N-acilo. Las modificaciones del grupo carboxiterminal incluyen, sin limitación, las modificaciones de amida, alquil amida inferior, dialquilamida y ésteres alquílicos inferiores. Preferentemente en el presente documento, el alquilo inferior es alquilo C<1>-C<4>. Por otro lado, uno o más grupos laterales, o grupos terminales, pueden protegerse mediante grupos protectores conocidos por el químico en péptidos habitualmente experto. El carbono • de un aminoácido puede estar mono o di-metilado.
Las formulaciones líquidas de la presente invención emplean un análogo del glucagón representado por la fórmula: Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH (SEQ ID NO: 2), el Compuesto 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En código de aminoácidos de tres letras, este análogo del glucagón (dasiglucagón) está representado por la fórmula:
H-H¡s-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Aíb-Ala-Arg-Ala-Glu-
Glu-Phe-Val-Lys-Trp-Leu-Glu-Ser-Thr-OH
El compuesto 1 (SEQ ID NO: 2) demuestra actividad agonistain vitroen el receptor de glucagón humano, con valores de CE<50>de 0,0095 nM y 0,030 nM, respectivamente, como se indica en el documento WO 2014/016300.
Debe entenderse que los péptidos (sustancia farmacológica) de la invención también se pueden proporcionar en forma de sal u otro derivado. Las sales incluyen sales farmacéuticamente aceptables, como se describe en las definiciones.
Otros derivados de los análogos del glucagón de la invención incluyen complejos de coordinación con iones metálicos tales como Mn<2+>y Zn<2+>, ésteres tales como ésteres hidrolizablesin vivo,ácidos o bases libres, hidratos, profármacos o lípidos. Los ésteres se pueden formar entre grupos de ácido hidroxilo o ácido carboxílico presentes en el compuesto y un compañero de reacción de ácido carboxílico o alcohol adecuado, utilizando técnicas bien conocidas en este campo. Los derivados que, como profármacos de los compuestos, se conviertenin vivooin vitroen uno de los compuestos originales. Normalmente, al menos una de las actividades biológicas del compuesto se reducirá en la forma de profármaco del compuesto y se puede activar mediante la conversión del profármaco para liberar el compuesto o un metabolito del mismo. Los ejemplos de profármacos incluyen el uso de grupos protectores que pueden eliminarsein situmediante la liberación del compuesto activo o pueden servir para inhibir la eliminación del fármacoin vivo.
Los análogos del glucagón utilizados en las formulaciones de la presente invención pueden sintetizarse utilizando técnicas de síntesis de péptidos en fase sólida bien conocidas en la materia. A modo de ejemplo, esto puede llevarse a cabo en un sintetizador de péptidos CEM Liberty utilizando resina Tentagel S PHB-Thr(tBu) (1,13 g, 0,24 mmol/g), COMU como reactivo de acoplamiento, DMF como disolvente y química Fmoc como se ha descrito anteriormente. Pseudoprolinas Fmoc-Phe-Thr (• Me, Me pro)-OH (en posición 6/7) y Fmoc-Glu-Ser ( • , Me, Me pro)-OH (en posición 15/16) se utilizaron en la secuencia. Una vez sintetizado, el análogo del glucagón puede escindirse de la resina y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5 cm, C18, 10 micrómetros) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA acuoso al 0,1 %) y tampón B (solución acuosa que contiene TFA al 0,1 % y MeCN al 90 %). Las fracciones agrupadas pueden liofilizarse y volver a disolverse en agua antes de su posterior purificación. La pureza del producto puede determinarse mediante HPLC analítica y la masa monoisotópica mediante EM.
Formulaciones de análogos del glucagón
Tal como se describe en el presente documento, la formulación farmacéutica líquida acuosa estable según la presente invención comprende un análogo del glucagón, un tampón, un modificador de la tonicidad y están formuladas para tener un pH fisiológicamente compatible con la administración a un paciente. En algunas realizaciones, las formulaciones de la presente invención comprenden además un conservante, por ejemplo, permitiendo la producción de formulaciones multidosis. En los ejemplos a continuación, los presentes inventores determinaron que la elección del tampón utilizado para formular las composiciones de la presente invención tenía un efecto decisivo en su estabilidad a largo plazo y que muchos de los tampones comúnmente utilizados, incluidos tampón fosfato, tampón histidina, ácido maleico agua Milli-Q (MQW) no proporcionaron suficiente estabilidad en una formulación líquida acuosa, por ejemplo, para su almacenamiento durante 13, 26 o 52 semanas a 25 °C. No obstante, otros tipos de tampón, especialmente TRIS, Bis-TRIS, ACES o MES pudieron utilizarse para formular formulaciones líquidas acuosas estables de los análogos del glucagón. Los experimentos descritos en el presente documento también descubrieron que la estabilidad proporcionada por estos tampones era capaz de estabilizar químicamente de forma directa el análogo del glucagón, es decir, de manera independiente del pH de la formulación proporcionado por el tampón. Este efecto puede determinarse en relación con un tampón fosfato y/o un tampón histidina en las mismas condiciones de ensayo.
Tampón TRIS se refiere a (tris(hidroximetil)aminometano o 2-Amino-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol) en la nomenclatura IUPAC.
El tampón Bis-TRIS hace referencia al (Bis-Tris metano o 2-[Bis(2-hidroxietil)amino]-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol) en la nomenclatura IUPAC.
El tampón ACES hace referencia a (W-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfónico o ácido 2-(carbamoilmetilamino)etanosulfónico) en la nomenclatura IUPAC.
El tampón MES se refiere al ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico o como ácido 2-morfolino-4-iletanosulfónico en la nomenclatura IUPAC.
Otros tampones que pueden utilizarse como alternativa o además de estos tampones son citrato, acetato o succinato, por ejemplo, en forma de citrato de sodio, acetato sódico o succinato sódico. Preferentemente, estos tampones están presentes a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM, más preferentemente de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 30 mM y más preferentemente a una concentración de aproximadamente 15 mM. La concentración real utilizada puede tener en cuenta si los tampones se utilizan individualmente o combinados.
El trabajo experimental que conduce a la presente invención muestra que las formulaciones estables de análogos del glucagón pueden evitar la inclusión de un disolvente aprótico polar en la formulación líquida, tal como el uso de dimetilsulfóxido (DMSO), tal como se utiliza en los documentos WO 2017/053822 y WO 2014/124151, con las desventajas que ello conlleva para las formulaciones en uso. Por consiguiente, preferentemente las formulaciones de la presente invención no incluyen sustancialmente disolvente aprótico polar y más preferentemente las formulaciones no incluyen sustancialmente dimetilsulfóxido (DMSO). En realizaciones particularmente preferidas, el agua es el único disolvente utilizado para elaborar la formulación líquida acuosa.
El trabajo descrito en el presente documento también muestra que, contrariamente a la experiencia con formulaciones basadas en el uso de DMSO, opcionalmente en combinación con co-disolventes, es posible producir formulaciones en las que esté presente el agua sin afectar sustancialmente a la estabilidad química o física de los análogos del glucagón en las formulaciones. Realizaciones particularmente útiles de formulaciones farmacéuticas líquidas de la invención son formulaciones acuosas, es decir, formulaciones que comprenden agua. Dichas formulaciones pueden estar en forma de una solución acuosa o una suspensión acuosa. Realizaciones preferidas de formulaciones farmacéuticas acuosas de la invención son soluciones acuosas. En el contexto de la invención, la expresión "formulación acuosa" se referirá normalmente a una formulación que comprende al menos un 50 % en peso (50 % p/p) de agua como disolvente, más preferentemente al menos un 75 % p/p de agua, más preferentemente al menos un 80 % p/p de agua, más preferentemente al menos un 85 % p/p de agua, más preferentemente al menos un 90 % p/p de agua, más preferentemente al menos un 95 % p/p de agua. Asimismo, la expresión "solución acuosa" se referirá normalmente a una solución que comprenda al menos un 50 % p/p de agua, y el término "suspensión acuosa" a una suspensión que comprenda al menos un 50 % p/p de agua. En determinadas realizaciones, las formulaciones acuosas de la presente invención sustancialmente no incluyen disolventes polares apróticos, tal como dimetilsulfóxido (DMSO). Sustancialmente en este sentido significa que las formulaciones acuosas incluyen menos del 5 % en volumen (v/v) de disolvente aprótico, más preferentemente menos del 2 % en volumen (v/v) de disolvente aprótico y aún más preferentemente menos del 1 % en volumen (v/v) de disolvente aprótico. El agua es el único disolvente utilizado para hacer las formulaciones líquidas acuosas según ciertas realizaciones.
En algunos aspectos de la presente invención, las formulaciones líquidas acuosas estables de un análogo del glucagón, sal farmacéuticamente aceptable y/o derivado del mismo comprenden:
(a) el análogo del glucagón presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml;
(b) TRIS, ACES o MES presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad; y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; y
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0.
En algunas realizaciones de una formulación que comprende un análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la formulación comprende el análogo del glucagón, sales farmacéuticamente aceptables del mismo o solvatos del mismo, presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, tal como aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 0,6 mg/ml, aproximadamente 0,7 mg/ml, aproximadamente 0,8 mg/ml, aproximadamente 0,9 mg/ml o aproximadamente 1,0 mg/ml.
La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera de los vehículos o diluyentes farmacéuticos convencionales, tales como los utilizados en composiciones o formulaciones adecuadas para administración oral, pulmonar, rectal, nasal, tópica, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, intradérmica, transdérmica o vaginal. Los vehículos farmacéuticamente aceptables para uso terapéutico se conocen bien en la materia farmacéutica y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit.
1985). Las formulaciones líquidas suelen emplear soluciones acuosas tamponadas o no tamponadas como vehículos. Por ejemplo, se puede usar solución salina estéril o solución salina tamponada con fosfato (PBS) ligeramente ácida o un pH ligeramente alcalino o fisiológico. Entre los agentes tampón del pH se incluyen tris(hidroximetil)aminometano (TRIS), 2-[Bis-(2-hidroxietil)amino]-2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (Bis-TRIS), ácido 2-(carbamoilmetilamino)etanosulfónico (ACES), ácido maleico, ácido 2-morfolino-4-iletanosulfónico (MES), así como mezclas de los mismos. El término abarca además cualquier agente enumerado en la Farmacopea de EE. UU. para su uso en animales o seres humanos.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" en el contexto de la invención se refiere a una sal que no es perjudicial para el paciente o sujeto que va a ser tratado con ella. Dichas sales son, en general, sales de adición de ácido o sales básicas. Las sales de adición de ácidos incluyen sales de ácidos inorgánicos y sales de ácidos orgánicos. Entre los ejemplos no limitantes de sales de adición de ácidos adecuadas se incluyen las sales de hidrocloruro, sales de fosfato, sales de formiato, sales de acetato, sales de trifluoroacetato y sales de citrato. Los ejemplos de sales básicas incluyen sales en las que el catión se selecciona entre iones de metales alcalinos, tales como sodio y potasio, iones de metales alcalinotérreos, tales como calcio, así como iones de amonio sustituidos, por ejemplo, del tipo NR(R')<3+>, donde R y R' designan independientemente alquilo C<1-6>opcionalmente sustituido, alquenilo C<2-6>opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17a edición. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, EE. UU., 1985 y ediciones más recientes, y en la Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology.
El término "tratamiento" (así como "tratar" y otras variantes gramaticales del mismo), tal como se emplea en el contexto de la invención, se refiere a un enfoque para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Para los fines de la presente invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización (es decir, sin empeoramiento) del estado de enfermedad, retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o alivio de la patología y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede referirse a la prolongación de la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada en ausencia de tratamiento. "Tratamiento" es una intervención realizada con la intención de prevenir el desarrollo o alterar la patología de, un trastorno. Por consiguiente, "tratamiento" se refiere tanto a tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas o preventivas. Como se usa en el contexto de las medidas profilácticas o preventivas, no es necesario que la formulación farmacéutica prevenga completamente el desarrollo de la enfermedad o trastorno. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen los que ya tienen el trastorno, así como aquellos en los que se quiere prevenir el desarrollo del trastorno. "Tratamiento" también significa inhibición o reducción de un aumento de la patología o los síntomas (por ejemplo, aumento de peso o hipoglucemia) en comparación con la ausencia de tratamiento, y no implica necesariamente el cese completo de la afección pertinente.
Una formulación "estable" es aquella en la cual el péptido en la misma retiene esencialmente su estabilidad física y/o su estabilidad química y/o su actividad biológica tras el almacenamiento. Preferentemente, la formulación conserva esencialmente su estabilidad física y química, así como su actividad biológica durante el almacenamiento. El período de almacenamiento generalmente se selecciona en función de la vida útil prevista de la formulación. Las formulaciones de la presente invención se proporcionan como formulaciones líquidas estables, por ejemplo, formulaciones líquidas acuosas estables. Diversas técnicas analíticas para medir la estabilidad de las proteínas están disponibles en la técnica y se revisan en Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y., Pubs. (1991) y Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por ejemplo. En la presente invención, las formulaciones "estables" incluyen formulaciones en las que al menos el 80 %, más preferentemente al menos el 85 %, más preferentemente al menos el 90 %, más preferentemente al menos el 95 %, más preferentemente al menos el 96 %, más preferentemente al menos el 97 %, más preferentemente, al menos el 98 % y lo más preferentemente, al menos el 99 % del análogo del glucagón no se degrada en la formulación tras su almacenamiento a 2-8 °C durante 18 meses. También es posible probar la estabilidad en condiciones aceleradas que, por lo general, utilizan un aumento de la temperatura de almacenamiento para evaluar la estabilidad en periodos de tiempo reducidos. Por ejemplo, el almacenamiento a 25 °C, a veces denominado en condiciones aceleradas, puede utilizarse para evaluar la estabilidad durante un período de 13, 26, 39 o 52 semanas. A modo de comparación, el uso de otros tampones, tales como el tampón fosfato o el tampón histidina, conduce a niveles de estabilidad que suelen ser inferiores al 80 % tras el almacenamiento durante el periodo correspondiente.
La estabilidad puede medirse a una temperatura seleccionada durante un período de tiempo seleccionado, por ejemplo, utilizando una temperatura elevada para reducir el periodo durante el cual se prueba una formulación. En general, el almacenamiento a una temperatura comprendida entre 2 y 8 °C denota un almacenamiento en condiciones normales de refrigeración. En determinadas realizaciones, la formulación es estable en tales condiciones durante al menos 6 meses, más preferentemente al menos 12 meses, más preferentemente al menos 18 meses, más preferentemente al menos 24 meses. La estabilidad se puede evaluar cualitativa y/o cuantitativamente en una variedad de formas diferentes, incluida la evaluación de la formación de agregados (por ejemplo, mediante cromatografía de exclusión por tamaño, dispersión de luz ultravioleta, dispersión dinámica de luz, dicroísmo circular, midiendo la turbidez y/o mediante inspección visual); evaluando la heterogeneidad de carga mediante cromatografía de intercambio catiónico, imagen de enfoque isoeléctrico capilar (iclEF) o electroforesis de zona capilar; análisis de secuencia aminoterminal o carboxiterminal; análisis por espectrometría de masas; análisis SDS-PAGE para comparar anticuerpos reducidos e intactos; análisis de mapas peptídicos (por ejemplo, tríptico o LYS-C); evaluación de la actividad biológica o la función de unión a antígeno del anticuerpo; etc. La inestabilidad puede implicar uno cualquiera o más de: agregación, desamidación (por ejemplo desamidación de Asn), oxidación (por ejemplo, oxidación de Met), isomerización (por ejemplo, isomerización de Asp), recorte/hidrólisis/fragmentación (por ejemplo, fragmentación de la región bisagra), formación de succinimida, cisteína(s) no apareada(s), extensión N-terminal, procesamiento C-terminal, diferencias de glicosilación, formación de aductos, etc.
Un péptido "conserva su estabilidad física" en una formulación farmacéutica si no muestra signos (o muy pocos) de agregación, precipitación y/o desnaturalización por. por ejemplo, examen visual de color y/o claridad, o medido por dispersión de luz UV, dispersión dinámica de luz, dicroísmo circular, o por cromatografía de exclusión por tamaño y se considera que aún conserva su actividad biológica.
Un péptido "retiene su estabilidad química" en una formulación farmacéutica, si la estabilidad química en un momento dado es tal que se considera que el péptido aún conserva su actividad biológica, tal como se define a continuación. La estabilidad química puede evaluarse detectando y cuantificando formas químicamente alteradas del péptido. La alteración química puede implicar isomerización, oxidación, modificación del tamaño (por ejemplo, recorte) que puede evaluarse mediante HPLC o cromatografía de exclusión por tamaño, SDS-PAGE y/o espectrometría de masas, por ejemplo. Otros tipos de alteración química incluyen la alteración de la carga (por ejemplo, la que se produce como resultado de la desamidación), que puede evaluarse mediante HPLC o cromatografía de intercambio iónico o iclEF, por ejemplo.
Como se divulga en el presente documento, las formulaciones líquidas acuosas estables de un análogo del glucagón, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la presente invención comprenden generalmente:
(a) el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml;
(b) TRIS, ACES o MES presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad; y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 200 mM; y
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0.
En algunas realizaciones de una formulación que comprende un análogo del glucagón, o la sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, la formulación comprende el análogo del glucagón, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, por ejemplo, aproximadamente 0,5 mg/ml, aproximadamente 0,6 mg/ml, aproximadamente 0,7 mg/ml, aproximadamente 0,8 mg/ml, aproximadamente 0,9 mg/ml o aproximadamente 1,0 mg/ml.
A modo de ejemplo, en algunas realizaciones, el análogo del glucagón está presente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml o aproximadamente 4,0 mg/ml.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, el TRIS o ACES está presente como tampón a una concentración de aproximadamente 50 mM.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, el cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM, a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 500 mM, a una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM o a una concentración de aproximadamente 60 mM a aproximadamente 120 mM.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, la formulación tiene un pH entre 5,8 y 6,7 aproximadamente, o un pH entre 6,0 y 7,0 aproximadamente, y más preferentemente un pH de 6,0 o 6,5 aproximadamente. En algunas realizaciones divulgadas en el presente documento, la formulación monodosis (MD) tiene un pH de aproximadamente 6,5, mientras que las formulaciones destinadas a un uso multidosis tienen un pH de aproximadamente 6,0 o un pH de aproximadamente 6,5.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, la formulación no incluye un excipiente estabilizador de la ionización seleccionado entre ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico o una combinación de los mismos.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, la formulación es una formulación lista para usar.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, una formulación es estable a aproximadamente 2-8 °C durante al menos 6 mes, al menos 12 meses, al menos 18 meses o al menos 24 meses. Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, el análogo del glucagón en la formulación conserva al menos aproximadamente el 90% de su actividad biológica tras 18 meses de almacenamiento a 2-8 °C. Mientras que el almacenamiento a 2-8 °C refleja el almacenamiento en condiciones refrigeradas desde la producción hasta el uso final, las formulaciones líquidas de la presente invención tienen preferentemente una estabilidad de almacenamiento a largo plazo en condiciones ambientales, por ejemplo, durante el tiempo que transcurre entre la venta al usuario final y la administración.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención son estériles.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, la formulación se administra a un sujeto mediante inyección, por ejemplo mediante inyección subcutánea.
Preferentemente, en las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención, el tampón es TRIS.
En algunos aspectos, las formulaciones líquidas acuosas estables de la presente invención pueden comprender además un conservante. Preferiblemente, el conservante es meta-cresol, opcionalmente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml.
En una realización, la presente invención proporciona una formulación líquida acuosa estable en la que el análogo del glucagón está presente a una concentración de aproximadamente 0,75 mg/ml a aproximadamente 1,25 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 7,0. En este aspecto, preferentemente, la formulación líquida acuosa estable comprende el análogo del glucagón presente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 50 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 175 mM a y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,5. Por lo general, esta formulación se prevé como una formulación monodosis.
En otra realización, la presente invención proporciona una formulación líquida acuosa estable en la que el análogo del glucagón está presente a una concentración de aproximadamente 3,0 a 5,0 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 60 mM a aproximadamente 120 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 7,0. En este aspecto, preferentemente, el análogo del glucagón está presente a una concentración de aproximadamente 4 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 50 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 90 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de 6,5 aproximadamente. En este aspecto, la formulación se concibe generalmente como una formulación multidosis y, por lo tanto, incluye un conservante. Un ejemplo de formulación multidosis tiene un pH de aproximadamente 6,5, 4,0 mg/ml de dasiglucagón, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 50 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 90 mM y el meta-cresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,15 mg/ml.
En una realización adicional, la presente invención proporciona una formulación líquida acuosa estable en la que el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 3,0 a 5,0 mg/ml, TRIS o MES está presente como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM y/o citrato, acetato o succinato están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a 7,0. En este aspecto, preferentemente, el análogo del glucagón, o la sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 4 mg/ml, los tampones TRIS, ACE, MES están presentes a una concentración de aproximadamente 50 mM o los tampones citrato, acetato y/o succinato están presentes a una concentración de unos 15 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 90 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de 6,5 aproximadamente.
La expresión "formulación estabilizada", tal como se emplea en el presente documento, se refiere a una formulación que tiene una mayor estabilidad física, mayor estabilidad química o mayor estabilidad física y química.
La expresión "estabilidad física", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una medida de la tendencia de un péptido (por ejemplo, un compuesto de la invención) a formar agregados solubles o insolubles del péptido como resultado de la exposición del péptido a tensiones y/o interacción con interfaces y superficies que son desestabilizadoras, tales como las superficies e interfaces hidrófobas. La estabilidad física de las formulaciones acuosas de péptidos puede evaluarse mediante inspección visual y/o mediciones de turbidez tras exponer la formulación, cargadas en recipientes adecuados (por ejemplo, cartuchos o viales), a tensiones mecánicas/físicas (por ejemplo, agitación) a diferentes temperaturas durante diversos períodos de tiempo. Una formulación puede clasificarse como físicamente inestable con respecto a la agregación peptídica cuando presenta turbidez visual. Como alternativa, la turbidez de una formulación puede evaluarse mediante simples mediciones de turbidez bien conocidas por el experto.
La estabilidad física de una formulación peptídica acuosa también puede evaluarse utilizando un agente que funcione como sonda espectroscópica del estado conformacional del péptido. La sonda es preferentemente una molécula pequeña que se une preferentemente a un conformador no nativo del péptido. Un ejemplo de este tipo de sonda espectroscópica de moléculas pequeñas es la tioflavina T, que es un colorante fluorescente ampliamente utilizado para la detección de fibrillas amiloides. En presencia de fibrillas, y quizás también de otras configuraciones peptídicas, la tioflavina T da lugar a un nuevo máximo de excitación a aproximadamente 450 nm y a una mayor emisión a aproximadamente 482 nm cuando se une a una forma fibrilar de un péptido. La tioflavina T no unida es esencialmente no fluorescente en las longitudes de onda en cuestión.
La expresión "estabilidad química", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a la estabilidad de un péptido con respecto a los cambios químicos covalentes/ quirales en la estructura peptídica que conducen a la formación de productos químicos de degradación con una potencia biológica potencialmente menor y/o una inmunogenicidad potencialmente mayor en comparación con la estructura peptídica nativa. Pueden formarse diversos productos químicos de degradación, dependiendo del tipo y la naturaleza detallada del péptido nativo y del entorno al que esté expuesto el péptido. En la práctica, la eliminación de la degradación química en las formulaciones peptídicas en general no puede evitarse por completo, y a menudo se observa la formación de cantidades crecientes de productos de degradación química durante el almacenamiento y el uso de dichas formulaciones, como bien saben los expertos en la materia. Muchos péptidos son susceptibles de sufrir un proceso de degradación en el que el grupo amida de la cadena lateral de los residuos glutaminilo o asparaginilo se hidroliza para formar un ácido carboxílico libre. Otras vías de degradación implican la formación de productos de transformación de alto peso molecular en los que dos o más moléculas peptídicas se unen covalentemente entre sí mediante transamidación y/o interacciones disulfuro, dando lugar a la formación de productos de degradación de polímeros y oligómeros unidos covalentemente (véase, por ejemplo, Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. y Manning M.C., Plenum Press, Nueva York 1992). Por otro lado, la hidrólisis del esqueleto peptídico que da lugar a fragmentos peptídicos es bien conocida. La oxidación (por ejemplo, de los restos de metionina) es otra forma de degradación química de los péptidos. La estabilidad química de una formulación peptídica puede evaluarse midiendo las cantidades de productos químicos de degradación en varios puntos temporales tras la exposición a diferentes condiciones ambientales (por ejemplo, la formación de productos de degradación puede acelerarse a menudo al aumentar la temperatura). La cantidad de cada producto de degradación individual puede determinarse mediante la separación de los productos de degradación para generar un "perfil de degradación". La separación suele realizarse en función del tamaño molecular y/o la carga utilizando diversas técnicas cromatográficas (por ejemplo, SEC-HPLC y/o RP-HPLC). Los oligómeros pueden ser oligómeros covalentes u oligómeros no covalentes. Un oligómero covalente es que dos o más moléculas están unidas mediante un enlace químico covalente y entonces el enlace es generalmente irreversible. Por el contrario, en los oligómeros no covalentes, una o varias moléculas están unidas mediante una interacción que no es un enlace químico covalente, por ejemplo, una interacción iónica, una interacción hidrófoba, etc. Aunque en algunos casos esto puede ser reversible, generalmente las interacciones son tan fuertes que son prácticamente irreversibles y, como ocurre con los oligómeros covalentes, hacen que el principio activo no esté disponible farmacéuticamente.
La inestabilidad química del glucagónper sea pH bajo se debe principalmente a la isomerización y escisión de los restos de ácido aspártico, desamidación de los restos de glutamina y oxidación de la metionina. En términos generales, la desamidación de Asn y Gln se produce a pH elevado, con tasas significativas a pH fisiológico alrededor de pH 7,4 a través de un anillo cíclico de imida intermedio que puede abrirse para crear L-Asp y L-isoAsp o L-Glu y L-isoGlu, respectivamente. El anillo intermedio de imida cíclica también puede dar lugar a la formación de pequeñas cantidades de los isómeros D correspondientes, lo que indica una racemización lenta de la imida cíclica.
A valores de pH inferiores al pH fisiológico, se reduce la tasa de desamidación de Asn y Gln, pero la velocidad de formación de una imida cíclica a partir de Asp y Glu, y por tanto la isomerización, aumenta al disminuir el pH. La formación de imidas cíclicas es mayor entre pH 4 y pH 6. La formación de la imida cíclica intermedia también puede provocar la escisión de la secuencia peptídica.
Como se ha expuesto anteriormente, una "formulación estabilizada" puede referirse a una formulación con mayor estabilidad física, o mayor estabilidad química, o mayor estabilidad física y química. En general, una formulación debe ser estable durante su uso y almacenamiento (respetando las condiciones de uso y almacenamiento recomendadas) al menos hasta que se alcance la fecha de caducidad especificada.
En determinadas realizaciones de las formulaciones farmacéuticas líquidas de la invención, la formulación es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos 6 meses de almacenamiento. En realizaciones adicionales, la formulación es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos un año de almacenamiento. En otras realizaciones adicionales más, la formulación es estable durante al menos 2 semanas de uso y durante al menos dos años de almacenamiento. En otras realizaciones, la formulación es estable durante al menos 4 semanas de uso y durante al menos dos años de almacenamiento, o incluso durante al menos 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento. Realizaciones particularmente útiles de dichas formulaciones farmacéuticas de la invención son estables durante al menos 6 semanas de uso y durante al menos 3 años de almacenamiento. En este sentido, el término "uso", a efectos del presente párrafo, se refiere a sacar la formulación farmacéutica del almacén con el fin de emplear la formulación con fines terapéuticos, sometiéndola así a condiciones ambientales variables (condiciones de luz, oscuridad, temperatura, agitación, etc.), mientras que el término "almacenamiento" a efectos de este párrafo se refiere al almacenamiento en condiciones no agitadas en un frigorífico o congelador a una temperatura no superior a unos 5 °C. El trabajador especializado comprenderá la gama típica de condiciones de uso y almacenamiento a las que pueden someterse estas formulaciones farmacéuticas.
Tal como se describe en el presente documento, las formulaciones líquidas acuosas estables de los análogos del glucagón de la presente invención incluyen un tampón para proporcionar el pH y un modificador de la tonicidad. De acuerdo con la práctica farmacéutica convencional, las formulaciones de la presente invención son estériles y/o están exentas de agente reductor. Las formulaciones líquidas de la presente invención son formulaciones líquidas acuosas.
El término "tampón", tal como se utiliza en el presente documento, designa un agente farmacéuticamente aceptable que estabiliza el pH de una formulación farmacéutica. En la técnica se conocen bien tampones adecuados y pueden encontrarse en la bibliografía. En realizaciones preferidas, el tampón se selecciona del grupo que consiste en un tampón TRIS, un tampón ACES o un tampón MES y/o tampones citrato, acetato o succinato, ya que estos tampones proporcionaban formulaciones estables en las que los análogos del glucagón se disolvían y no se volvían viscosos, turbios o precipitan el fármaco peptídico. En realizaciones preferidas, el tampón es TRIS. En general, el tampón de histidina estará presente a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM. En determinadas realizaciones, el tampón estará presente a una concentración de aproximadamente 50 mM. En determinadas realizaciones, los tampones TRIS, ACES o MES proporcionan una estabilización química directa del análogo del glucagón, independientemente del pH de la formulación. En otras realizaciones, los tampones TRIS, ACES o MES proporcionan una mejor estabilización química directa determinada en relación con un tampón fosfato y/o un tampón histidina en las mismas condiciones de ensayo. En otras realizaciones, en particular las relativas a las formulaciones multidosis en las que está presente un conservante tal como metal cresol, los tampones también incluyen el uso de citrato, acetato o succinato a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM. En algunas realizaciones, la formulación proporciona una estabilización química mejorada en relación con una formulación en la que los tampones TRIS, ACES o MES se sustituyen por un tampón fosfato y/o un tampón histidina de la misma concentración y pH evaluados en las mismas condiciones de ensayo. Por ejemplo, la formulación puede tener un perfil de degradación tras 52 semanas de almacenamiento a 25 °C, después de las cuales la formulación contiene uno o más de menos del 5 % de Piro-Glu 4-29, menos del 7 % de oxidación de Trp/Tyr, menos del 4 % de cinurenina, menos del 5 % de F-4-29 F5-29 y/o menos del 2 % de F3.29 tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C, en donde todos los porcentajes se determinan por HPLC.
La expresión "modificador de la tonicidad", tal como se utiliza en el presente documento, denota agentes de tonicidad farmacéuticamente aceptables que se utilizan para modular la tonicidad de la formulación. Las formulaciones de la presente invención son, preferentemente, isosmóticas, es decir, tienen una presión osmótica sustancialmente igual a la del suero sanguíneo humano. El modificador de la tonicidad utilizado en las formulaciones es, preferentemente, cloruro sódico. La concentración del modificador de la tonicidad dependerá de la concentración de otros componentes de la formulación, especialmente cuando se pretende que la formulación sea isosmótica. Normalmente, el cloruro sódico se empleará como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 50 mM a 600 mM. En determinadas realizaciones, la concentración de cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad en las presentes formulaciones puede ser de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 125 mM, de aproximadamente 75 mM a aproximadamente 120 mM, de aproximadamente 90 mM a aproximadamente 115 mM, o aproximadamente 110 mM. En determinadas realizaciones, la concentración de cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad en las presentes formulaciones puede ser de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM, opcionalmente aproximadamente 175 mM. En una realización preferida, el cloruro sódico puede estar presente como modificador de la tonicidad en formulaciones que comprenden un conservante a concentraciones de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM, y más preferentemente a una concentración de aproximadamente 90 mM, o aproximadamente 75 mM o aproximadamente 125 mM.
En general, los componentes y las cantidades de las formulaciones líquidas de la presente invención se eligen para proporcionar una formulación con un pH de aproximadamente 5,6 o un pH de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 7,0. En una realización preferida, las formulaciones pueden tener un pH entre aproximadamente 6,2 y aproximadamente 6,8. Más preferentemente, las formulaciones pueden tener un pH entre aproximadamente 6,3 y aproximadamente 6,7. Más preferentemente, las formulaciones pueden tener un pH entre aproximadamente 6,4 y aproximadamente 6,6. Como alternativa, o adicionalmente, las formulaciones pueden tener un pH de aproximadamente 6,5 tanto para las formulaciones monodosis como multidosis.
En determinadas realizaciones, las formulaciones de la presente invención comprenden además un conservante. En realizaciones preferidas, el conservante es meta-cresol, presente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml, más preferentemente de aproximadamente 2,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y, lo más preferentemente, a una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml. La cantidad de conservante depende de la necesidad de poder eliminar eficazmente una serie de tipos de bacterias, tal como se requiere para la aprobación reglamentaria.
Las formulaciones de la presente invención tienen un perfil de degradación determinado por separación cromatográfica (por ejemplo, por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) y/o cromatografía de fase inversa (RPC)). Concretamente, otra conclusión de los experimentos descritos en el presente documento es que el perfil de los productos de degradación de los tampones que produjeron formulaciones estables según la presente invención fue muy similar tras su almacenamiento durante 52 semanas a 25 °C, mientras que los perfiles de los productos de degradación de los tampones que no produjeron formulaciones estables fueron diferentes. En la tabla siguiente se midió el % de los productos de degradación mediante HPLC.
Pyro-Glu(4-29) es un producto en el que el nitrógeno del esqueleto de Gln en posición 4 reacciona con la amida de la cadena lateral y forma un anillo lactámico interno. La hidrólisis posterior del enlace amida entre Ser en posición 3 y la fracción Glu lactamizada da lugar a un producto de degradación en el que los tres primeros aminoácidos se han escindido y hay una fracción piro-Glu en el N-terminal. La oxidación de Tyr/Trp conduce a la incorporación de un grupo hidroxilo en los anillos aromáticos de Tyr y Trp. La quinurenina es un producto de oxidación bien conocido de los restos de Trp. La adición de ácido succínico se relaciona con la adición de dasiglucagón al doble enlace en el tampón de ácido maleico. FX1-X2 es un fragmento que contiene los aminoácidos X1 a X2.
Resumiendo, TRIS, Bis-TRIS, MES y ACES protegen al dasiglucagón de la hidrólisis y la oxidación en comparación con el fosfato, histidina y ácido maleico y no hay reacciones significativas entre TRIS, Bis-TRIS, MES y dasiglucagón. A lo largo de 52 semanas se forma una pequeña cantidad (0,9 % tras 52 semanas a 25 °C) de dasiglucagón condensado con ACES (+165 Da)).
Por consiguiente, en algunos aspectos, las formulaciones de la presente invención tendrán menos del 5 % de Piro-Glu 4-29 tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C determinado por HPLC, más preferentemente menos del 4 %, más preferentemente menos del 3 %, más preferentemente menos del 2 %, más preferentemente menos del 1 % y, lo más preferentemente, menos del 0,5 %.
Por consiguiente, en algunos casos, las formulaciones de la presente invención tendrán menos del 7 % de oxidación Trp/Tyr tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C, determinado por HPLC. más preferentemente menos de más preferentemente menos del 5 %, más preferentemente menos del 4 %, más preferentemente menos del 3 %, más preferentemente menos del 2 %, más preferentemente menos del 1 % y, lo más preferentemente, menos del 0,5 %.
Por consiguiente, en algunos casos, las formulaciones de la presente invención tendrán menos del 4 % de quinurenina tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C determinado por HPLC; más preferentemente menos del 3 %, más preferentemente menos del 2 %, más preferentemente menos del 1 % y, lo más preferentemente, menos del 0,5 %.
Por consiguiente, en algunos casos, las formulaciones de la presente invención tendrán menos del 5 % de F-4-29 F5-29 tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C determinado por HPLC, más preferentemente menos del 4 %, más preferentemente menos del 3 %, más preferentemente menos del 2 %, más preferentemente menos del 1 % y, lo más preferentemente, menos del 0,5 %.
Por consiguiente, en algunos casos, las formulaciones de la presente invención tendrán menos del 2 % de F3.29 tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C determinado por HPLC, más preferentemente menos del 1 % y, lo más preferentemente, menos del 0,5 %.
En un aspecto, la formulación líquida acuosa estable comprende el análogo del glucagón a una concentración de aproximadamente 0,75 mg/ml a aproximadamente 1,25 mg/ml, TRIS a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,2 a aproximadamente 6,8.
En otro aspecto, la formulación líquida acuosa estable comprende el análogo del glucagón a una concentración de aproximadamente 3,0 a 5,0 mg/ml, TRIS a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 60 mM a aproximadamente 120 mM, meta-cresol como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0.
En determinadas realizaciones, la formulación líquida estable de los análogos del glucagón es una formulación lista para usar. La expresión "listo para usar" como se usa en el presente documento, se refiere a una formulación que no requiere constitución o dilución con una cantidad prescrita de diluyente, por ejemplo, agua para inyección u otro diluyente adecuado, antes de su uso por la vía de administración designada.
Afecciones médicas
Las formulaciones farmacéuticas análogas al glucagón de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de diversas afecciones o trastornos. Opcionalmente, las formulaciones pueden utilizarse en combinación con una o más sustancias terapéuticamente activas adicionales. Así pues, los usos terapéuticos relevantes incluyen: tratamiento o prevención de la hipoglucemia (incluidas, entre otras, hipoglucemia aguda, hipoglucemia crónica o hipoglucemia grave), diabetes de tipo 2 (incluida la progresión de la enfermedad en la diabetes de tipo 2), intolerancia a la glucosa, diabetes de tipo 1, obesidad (incluidas las enfermedades o estados relacionados con el sobrepeso o la obesidad), cardiopatía coronaria, ateroesclerosis, hipertensión, dislipidemia, esteatosis hepática, intoxicación por • bloqueantes, insulinoma y enfermedad de Von Gierkes; prevención del sobrepeso de un sujeto; reducción del peso corporal; disminución de la ingesta de alimentos; incremento del gasto energético; retraso de la progresión de la intolerancia a la glucosa (ATG) a la diabetes de tipo 2; retraso de la progresión de la diabetes de tipo 2 a la diabetes insulinodependiente; regulación del apetito o inducción de la saciedad (incluidos el tratamiento de la bulimia y el tratamiento de los atracones); y prevención de la recuperación de peso tras una pérdida de peso satisfactoria. Como principio general, las formulaciones farmacéuticas de la invención pueden ser útiles para controlar los niveles de glucosa en sangre.
Entre las formas de hipoglucemia susceptibles de tratamiento o prevención de acuerdo con la invención se encuentran hipoglucemia diabética, hipoglucemia aguda inducida por insulina, hipoglucemia hiperinsulinémica, hipoglucemia grave, hipoglucemia no diabética, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por fármacos, hipoglucemia hiperinsulinémica congénita, hipoglucemia inducida por el alcohol, hipoglucemia inducida por derivación gástrica (incluidas, entre otras, hipoglucemia posprandial tras derivación gástrica en Y de Roux), hipoglucemia posbariátrica o hipoglucemia durante el embarazo.
En una realización adicional, la formulación líquida que comprende un análogo del glucagón de la presente invención está contenida en un dispositivo de administración. En algunas realizaciones, el dispositivo de administración es una jeringa precargada, un dispositivo de inyección, un lápiz inyector, un autoinyector de dosis ajustable, un autoinyector desechable, un inyector portátil o una bomba de infusión.
Las formulaciones de la invención pueden administrarse en diversas formas de dosificación, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones, y son útiles en la formulación de sistemas de administración de fármacos de liberación controlada, sostenida, prolongada, retardada o lenta. Más específicamente, pero no exclusivamente, las formulaciones farmacéuticas de la invención son útiles en relación con sistemas parenterales de liberación controlada y sostenida, bien conocidos por el experto en la materia. A este respecto, puede hacerse referencia general al Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D. L., ed., Marcel Dekker, Nueva York, 2000) y Drugs and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed., Marcel Dekker, Nueva York, 2000).
Puede realizarse la administración parenteral (de una formulación farmacéutica líquida de la invención), por ejemplo, por inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa con una jeringa, tal como una jeringa tipo lápiz y/o una jeringa precargada.
Puede realizarse la administración parenteral (de una formulación farmacéutica líquida de la invención), por ejemplo, por inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa utilizando un autoinyector, tal como un autoinyector que comprende una jeringa. Un autoinyector puede ser de un solo uso o multiuso y puede proporcionar (y/o estar configurado para proporcionar) una o más dosis de la formulación farmacéutica líquida. En algunas realizaciones, la administración parenteral se realiza inyectando una formulación de la divulgación en la parte inferior del abdomen, los glúteos, los muslos o la parte superior del brazo (incluyendo, pero sin limitaciones, la parte exterior del brazo) del paciente. Como alternativa, la administración parenteral puede realizarse mediante una bomba de infusión, por ejemplo, en forma de un dispositivo o sistema portado por un sujeto o paciente y que comprende un depósito que contiene una formulación líquida de la invención y una bomba de infusión para la liberación/administración de la formulación al sujeto o paciente, o en forma de un dispositivo miniaturizado correspondiente adecuado para su implantación dentro del cuerpo del sujeto o paciente.
En algunos casos, un paciente puede ser tratado mediante la administración de una monodosis de la formulación al paciente o mediante la administración de múltiples dosis al paciente. En algunos casos, se puede administrar a un paciente una primera dosis de la formulación y, posteriormente, se le administrará una segunda dosis de formulación. En algunos casos, se puede administrar a un paciente una primera dosis de la formulación y, posteriormente, se le administrará una segunda dosis de la formulación y, posteriormente, se le administrarán una o más dosis adicionales de la formulación (por ejemplo, una tercera dosis y, posiblemente, una cuarta dosis o más).
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar aspectos preferidos de la invención y no se pretende que limiten el alcance de la invención.
Ejemplo 1
Materiales y métodos
Síntesis del dasiglucagón
El dasiglucagón fue sintetizado por Bachem AG. Las formulaciones de dasiglucagón fueron preparadas y analizadas por Zealand Pharma, A/S, Dinamarca. Como alternativa, los análogos del glucagón pueden sintetizarse como se describe en el documento WO 2014/016300 (Zealand Pharma A/S)
Experimentos de estabilidad química
El dasiglucagón se disolvió en agua MilliQ hasta alcanzar una concentración madre de 25 mg/ml. Las formulaciones se prepararon alicuotando la solución madre del péptido (937 pl) en tubos, añadiendo a continuación una solución madre del componente tampón y añadiendo después agua MiliQ hasta el 90 % del volumen. Se midió el pH y se ajustó si era necesario antes de añadir agua MiliQ para obtener el volumen final. A continuación, todas las formulaciones se filtraron con un filtro Minisart de alto flujo de 0,2 um. La solución filtrada se roció con nitrógeno y se alicuotó en viales con 1,0 ml en cada vial. Los viales se engarzaron y se colocaron en cámaras de estabilidad.
Las formulaciones se analizaron en condiciones aceleradas a 5 °C y 25 °C y se probaron a las 0, 9, 13, 26, 34, 39 y 52 semanas. La pureza de las formulaciones se determinó mediante HPLC y el perfil de los productos de degradación se determinó mediante análisis LC-MS.
La composición de las formulaciones de monodosis (MD) de la presente invención se presentan enla Tabla 1y laTabla 5.Todas las formulaciones contienen mg/ml de dasiglucagón y se formularon a pH 6,5. Las formulaciones 1 a 3 investigaron el efecto de variar la cantidad de cloruro sódico en las formulaciones, mientras que en las formulaciones 4 a 10 se investigó el efecto del tampón utilizado para elaborar las formulaciones. La Formulación 11 es una formulación de control en agua Milli-Q y la Formulación 12 está diseñada como una formulación multidosis incluida en este estudio a modo de comparación con las formulaciones monodosis. La composición de la Formulación 12 (formulación MD) es pH 6,5, 4,0 mg/ml del análogo del glucagón, TRIS 50 mM, NaCl 90 mM y 3,15 mg/ml de metacresol.
La composición de las formulaciones multidosis de la presente invención se presentan en lasTablas 2 a 4y6. Todas las formulaciones incluyen meta-cresol y 4 mg/ml de dasiglucagón y se formularon a pH 6,0 o pH 6,5. LasTablas 2a, 3ay4ainforman de los resultados de los ensayos de HPLC. LasTablas 2b, 3by4binforman del resultado de los ensayos SEC.
En las formulaciones de laTabla 2se investigó el efecto del uso de diferentes tampones (Tris, Bis-TRIS, MES, citrato sódico, acetato sódico y succinato sódico) sobre la estabilidad de las formulaciones a pH 6,0 y pH 6,5 y dos concentraciones de cloruro sódico (90mM y 125mM) como modificador de la isotonicidad.
Las formulaciones de laTabla 3.LaTabla 4y laTabla 6son similares a las expuestas en la Tabla 2 e investigan el efecto del uso de combinaciones de tampones sobre la estabilidad de las formulaciones a pH 6,0 y pH 6,5 y a una concentración de cloruro sódico (75 mM) como modificador de la isotonicidad.
HPLC
La pureza de las muestras de dasiglucagón se determinó mediante HPLC. Las muestras se analizaron en el sistema HPLC Dionex Ultimate3000. Se utilizó Chromeleon como software de análisis. El dasiglucagón se separó de los productos de degradación utilizando una columna Kinetex C8 (150 mm x 4,6 mm, 2,6 pm). La fase móvil consistió en A: 0,45 % de TFA (V/V) en agua MilliQ (MQW) y B: 0,45 % de TFA (V/V) en MeCN/MQW (90:10). El gradiente fue de 35 a 38 % de B durante 40 minutos con un flujo de 0,5 ml/min. La temperatura del horno de la columna se fijó en 30 °C, la longitud de onda del detector se ajustó a 220 nm y se inyectaron 2 pl.
SEC
Los experimentos de cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) se llevaron a cabo en un sistema HPLC Dionex Ultimate 3000 (Thermo Fisher), utilizando elución isocrática con un caudal de 0,5 ml/min para analizar las formulaciones en busca de la presencia de oligómeros. La fase móvil consistió en 0,1 % de TFA, 45 % de acetonitrilo en MQW. Para la detección se utilizó una longitud de onda de 215 nm. La cantidad de inyección fue de 2 pg de péptido. La columna utilizada para el análisis SEC fue una TSKgel SuperSW2000 (TOSOH Corporation), 4 pm, 30 x 4,6 mm y la temperatura de la columna fue de 25 °C. El tiempo de funcionamiento fue de 12 minutos.
Resultados
Tras 52 semanas de almacenamiento en condiciones aceleradas a 25 °C, se obtuvieron los siguientes resultados para el % de pureza del dasiglucagón restante en las formulaciones.
Los estudios de estabilidad demostraron que los tampones TRIS, Bis-TRIS, ACES y MES producían todos ellos niveles aceptables de estabilidad tras su almacenamiento durante 52 semanas a 25 °C, con un 80 % o más del dasiglucagón intacto a pesar de las condiciones de estrés acelerado utilizadas para los experimentos, en relación con otros tampones y controles (agua Milli-Q), teniendo en cuenta las condiciones de almacenamiento acelerado utilizadas en los experimentos.
Para las formulaciones multidosis que incluyen meta-cresol, TRIS, Bis-TRIS, ACES o MES, así como citrato, acetato o succinato como tapón se proporcionaron formulaciones con buenos niveles de estabilidad evaluados por HPLC y SEC.
Tabla 5
Tabla 5b
Las observaciones son sorprendentes, dados los retos señalados en la técnica anterior en relación con la estabilización de las formulaciones de glucagón que incluyen agua.
Los resultados también son inesperados, ya que aunque el TRIS y el Bis-TRIS tienen estructuras químicas similares, las estructuras de ACES y MES son diferentes.
Los experimentos también demostraron que los tampones utilizados habitualmente en las formulaciones líquidas de péptidos, a saber, fosfato, histidina y ácido maleico no proporcionaron formulaciones capaces de almacenar el dasiglucagón intacto a largo plazo (75 %, 68 % y 57 %), respectivamente.
Los experimentos demuestran además que es posible incluir cantidades adecuadas de NaCl como modificador de la tonicidad sin afectar a la estabilidad proporcionada por los cuatro tampones.
Los datos muestran una tendencia similar de pérdida de dasiglucagón entre las formulaciones de monodosis (MD) (0,31 % por semana, formulación 1) y la formulación multidosis (MS) (0,32 % por semana, formulación 12).
Los experimentos también demuestran que es posible incluir un conservante (meta-cresol) en las formulaciones preservando la estabilidad de almacenamiento, lo que permite el desarrollo de formulaciones multidosis y formulaciones para su uso en conexión con dispositivos de administración.
Ejemplo 2 - El dasiglucagón mejora la hipoglucemia posprandial tras la derivación gástrica en Y de Roux
La hipoglucemia posprandial es una complicación frecuente y debilitante tras la derivación gástrica en Y de Roux (RYGB), y no existe ningún tratamiento eficaz. En un estudio de prueba de concepto, los inventores investigaron los efectos del dasiglucagón, un novedoso análogo estable del glucagón, sobre la hipoglucemia posprandial tras la RYGB. El objetivo principal del presente estudio fue examinar los efectos de dos dosis de dasiglucagón sobre la concentración de glucosa en plasma (PG) nadir posprandial y el tiempo de hipoglucemia (<3,9 mmol/l) en individuos operados de RYGB con hipoglucemia posprandial confirmada.
Material y métodos
Diez individuos operados de RYGB (dos varones, ocho mujeres; IMC 34,6 (21,8-39,0) kg/m2; edad 46 (29-67) años; HbA<1>c 32 (29-42) mmol/mol; tiempo transcurrido desde la operación 9,3 (6-11,5) años; pérdida de peso desde la operación 53,9 (25,1-92,0) kg)) con hipoglucemia posprandial sintomática confirmada (PG <3,5 mmol/I verificado por una monitorización continua de glucosa de 6 días) completaron un estudio doble ciego, aleatorizado de grupos cruzados que comprende tres días de tratamiento separados, cada una de las cuales incluye una prueba estandarizada de comida líquida mixta (25 kJ por kg de masa corporal; 50 E % de hidratos de carbono, 35 E % de grasa y 15 E % de proteína). Una inyección subcutánea de placebo, 80 o 200 pg de dasiglucagón (D<80>pg y D<200>pg) se administró después del pico posprandial de PG, aproximadamente 10 minutos antes del punto temporal previsto en el que los PG volvían a los niveles de ayuno mediante un modelo de regresión lineal específico para cada sujeto. La toma de muestras de sangre y la evaluación de los síntomas de hipoglucemia, mediante la Escala de Síntomas de Hipoglucemia de Edimburgo, se realizaron a intervalos de tiempo fijos. Los datos se analizaron mediante modelos lineales mixtos y el modelo de correcciones de Tukey para comparaciones múltiples.
Resultados
En comparación con el placebo, el tratamiento tanto con ü<soMg>como con Ü<2ooMg>aumentó significativamente la PG nadir (placebo: 3,0±0,2 mmol/l; Ü<soMg>: 3,9±0,3 mmol/l; Ü<2ooMg>: 4,5±0,2 mmol/l; p=0,002 y p=0,0002) y AUC incremental de P<g (iAUC70-240min) tras la administración del fármaco (placebo: 752±19 minxmmol/l; Üs0Mg : 917±22 minxmmol/l; Ü200Mg :>992±28 minxmmol/l; p<0,0001 y p<0,0001). Por otra parte, ambas dosis redujeron el tiempo de hipoglucemia en comparación con el placebo (<3,9 mmol/l) (placebo: 62,0±8 min; Ü<s0Mg>: 27,5±12 min; Ü<200Mg>: 14,0±9 min; p = 0,05 y p = 0,003). Cinco participantes experimentaron hipoglucemia de nivel 2 (<3,1 mmol/l) tras la administración de placebo, mientras que ninguno de los participantes lo experimentó tras la administración de Ü<200Mg>(tiempo transcurrido en hipoglucemia de nivel 2 (n=5): placebo: 31,0±5 min; Ü<s0Mg>: 7±5 min; Ü<200Mg>: 0,0±0 min; p>0,05 y p=0,01). No hubo cambios significativos en los síntomas de hipoglucemia entre los tres días del estudio.
Conclusiones
La administración de una monodosis de dasiglucagón mejora eficazmente la hipoglucemia posprandial y representa una nueva y prometedora opción terapéutica para el tratamiento de la hipoglucemia posprandial tras la RYGB.
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La formulación 12 (formulación MD) tiene pH 6,5, 4,0 mg/ml de dasiglucagón, TRIS 50 mM, NaCI 90 mM y 3,15 mg/ml de meta-cresol.
Tabla 2a
Tabla 2b
Tabla 2c
Tabla 2d
Tabla 3a
Tabla 3b
Tabla 3c
Tabla 3d
Tabla 4
Tabla 4a
Tabla 4b
Tabla 4c
Tabla 4d
Tabla 6
Tabla 6a
Tabla 6b

Claims (17)

REIVINDICACIONES
1. Una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón, que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
en donde la formulación comprende:
(a) el análogo del glucagón presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml;
(b) TRIS, ACES o MES están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM y/o citrato, acetato o succinato están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM;
(c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; y
(d) un pH de aproximadamente 5,6 a aproximadamente 7,0.
2. La formulación líquida acuosa estable de la reivindicación 1, en donde los tampones TRIS, ACES o MES estabilizan químicamente directamente el análogo del glucagón, independientemente del pH de la formulación proporcionado por el tampón.
3. La formulación líquida acuosa estable de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en donde la formulación:
la formulación proporciona una estabilización química mejorada en relación con una formulación en la que los tampones TRIS, ACES o MES se sustituyen por un tampón fosfato y/o un tampón histidina de la misma concentración y pH evaluados en las mismas condiciones de ensayo;
ii) tiene un perfil de degradación tras 52 semanas de almacenamiento a 25 °C, después de las cuales la formulación contiene uno o más de menos del 5 % de Piro-Glu 4-29, menos del 7 % de oxidación de Trp/Tyr, menos del 4 % de cinurenina, menos del 5 % de F-4-29 F5-29 y/o menos del 2 % de F3.29 tras un almacenamiento de 52 semanas a 25 °C, en donde todos los porcentajes se determinan por HPLC;
iii) tiene un perfil de degradación en el que el análogo del glucagón está libre de adición de ácido succínico a ácido maleico;
iv) no incluye sustancialmente disolvente aprótico polar; y/o
v) no incluye sustancialmente dimetilsulfóxido (DMSO).
4. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el agua es el único disolvente utilizado para elaborar la formulación líquida acuosa.
5. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde:
i) el análogo del glucagón, o la sal y/o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,7 mg/ml, 1,0 mg/ml o aproximadamente 4,0 mg/ml; ii) los tampones TRlS, ACES o MES están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 50 mM;
iii) el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM o a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM; y/o
iv) la formulación tiene un pH de 5,8 a 6,7, opcionalmente en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,5.
6. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la formulación:
i) no incluye un excipiente estabilizador de la ionización seleccionado entre ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico o una combinación de los mismos;
ii) es una formulación lista para usar;
iii) es estable a aproximadamente 2-8 °C durante al menos 6 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses o al menos 24 meses, opcionalmente, en donde el análogo del glucagón de la formulación conserva al menos aproximadamente el 90 % de su actividad biológica tras 18 meses de almacenamiento a 2-8 °C;
iv) es estéril y/o está libre de un agente reductor;
v) está formulada para su administración a un sujeto mediante inyección, opcionalmente, en donde la inyección es inyección subcutánea.
7. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el tampón es TRIS.
8. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un conservante, opcionalmente, en donde el conservante es meta-cresol, opcionalmente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml.
9. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 0,75 mg/ml a aproximadamente 1,25 mg/ml, los tampones TRIS, ACES o MES están presentes a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 150 mM a aproximadamente 200 mM y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 6,8, opcionalmente en el que el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 50 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 175 mM a y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,5.
10. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde:
a) el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 3,0 a 5,0 mg/ml, los tampones TRIS, ACES o MES están presentes a una concentración de aproximadamente 40 mM a aproximadamente 60 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM, el metacresol está presente como conservante en una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a 7,0; opcionalmente en donde el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 4 mg/ml, TRIS está presente a una concentración de aproximadamente 50 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 90 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de 6,5;
o
b) el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 3,0 a 5,0 mg/ml, TRIS, ACES o MES están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM y/o citrato, acetato o succinato están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM, el metacresol está presente como conservante en una concentración de aproximadamente 3,0 mg/ml a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de aproximadamente 6,0 a 7,0; opcionalmente en donde el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente a una concentración de aproximadamente 4 mg/ml, los tampones TRIS, ACE, MES están presentes a una concentración de aproximadamente 50 mM o los tampones citrato, acetato y/o succinato están presentes a una concentración de unos 15 mM, el cloruro sódico está presente como modificador de la tonicidad a una concentración de aproximadamente 90 mM, el metacresol está presente como conservante a una concentración de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 4,0 mg/ml y la formulación tiene un pH de 6,5 aproximadamente.
11. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el tampón comprende además citrato, acetato o succinato.
12. La formulación líquida acuosa estable de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde el citrato, el acetato o el succinato están presentes en la formulación a una concentración de 10 mM a 30 mM.
13. Un dispositivo de administración que comprende la formulación líquida de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, opcionalmente en donde el dispositivo de administración es una jeringa precargada, un dispositivo de inyección, un lápiz inyector, un autoinyector de dosis ajustable, un autoinyector desechable, un inyector portátil o una bomba de infusión.
14. Una formulación del análogo del glucagón de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o una afección seleccionadas entre hipoglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, obesidad, cardiopatía coronaria, ateroesclerosis, hipertensión, dislipidemia, esteatosis hepática, intoxicación por • -bloqueantes, insulinoma o enfermedad de Von Gierkes.
15. La formulación del análogo del glucagón para su uso en el método de tratamiento de la reivindicación 14, en donde la enfermedad o la afección son hipoglucemia, opcionalmente en donde la hipoglucemia se selecciona entre el grupo que consiste en: hipoglucemia diabética, hipoglucemia aguda inducida por insulina, hipoglucemia grave, hipoglucemia aguda, hipoglucemia crónica, hipoglucemia no diabética, hipoglucemia reactiva, hipoglucemia en ayunas, hipoglucemia inducida por fármacos, hipoglucemia inducida por el alcohol, hipoglucemia inducida por derivación gástrica o hipoglucemia durante el embarazo, opcionalmente, en donde la hipoglucemia inducida por la derivación gástrica es una hipoglucemia posprandial tras una derivación gástrica en Y de Roux.
16. La formulación del análogo del glucagón para su uso en el método de tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 14 o 15, en donde el análogo del glucagón se utiliza para el tratamiento de un paciente humano.
17. Un proceso para producir una formulación farmacéutica líquida acuosa estable que comprende un análogo del glucagón que es:
Hy-HSQGTFTSDYSKYLD-Aib-ARAEEFVKWLEST-OH
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
comprendiendo el proceso formular (a) el análogo del glucagón, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, presente a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml; (b) TRIS, ACES o MES están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 75 mM y/o citrato, acetato o succinato están presentes como tampón a una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM; (c) cloruro sódico presente como modificador de la tonicidad y a una concentración de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 600 mM; (d) un pH de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 7,0; y opcionalmente (e) meta-cresol a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 5,0 mg/ml para producir la formulación farmacéutica líquida acuosa estable.
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