ES3042065T3

ES3042065T3 - Adp-ribose binding peptide having anticancer activity and use thereof

Info

Publication number: ES3042065T3
Application number: ES22864983T
Authority: ES
Inventors: Keun-Yeong Jeong; Min Hee Park
Original assignee: PearlsInMires Co Ltd
Current assignee: PearlsInMires Co Ltd
Priority date: 2021-09-02
Filing date: 2022-08-29
Publication date: 2025-11-18
Anticipated expiration: 2042-08-29
Also published as: CN116529255A; JP2025084888A; AU2022338621A1; US20230416316A1; AU2022338621B2; JP7854224B2; PL4335862T3; KR20250028322A; EP4335862B1; EP4335862A4; KR102557456B1; JP2024532528A; EP4335862A1; CA3222862A1; EP4335862C0; AU2026200568A1; KR20230033991A; KR102774674B1; KR20230113494A; WO2023033481A1

Abstract

La presente invención se refiere a un péptido que se une al difosfato de adenosina ribosa (ADP-ribosa) y que posee actividad anticancerígena. En particular, se refiere a un péptido que se une a la ADP-ribosa con una secuencia específica de aminoácidos, a un producto modificado del mismo, a una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer y a una composición farmacéutica adyuvante anticancerígena que lo contiene como ingrediente activo. El péptido que se une a la ADP-ribosa de la presente invención induce la muerte de las células cancerosas mediante la acumulación de ADP-ribosa en dichas células y la alteración del equilibrio celular, a la vez que ejerce un excelente efecto anticancerígeno sin toxicidad para las células normales. Además, cuando se administra concomitantemente con otros fármacos anticancerígenos o radioterapia, presenta un excelente efecto adyuvante anticancerígeno al potenciar la respuesta a estos fármacos y a la radioterapia. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Péptido de unión a ADP-ribosa con actividad anticancerosa y su uso

[0003] [Campo técnico]

[0004] La presente divulgación se refiere a un péptido de unión a adenosina difosfato (ADP)-ribosa con actividad anticancerígena, y específicamente, a un péptido de unión a ADP-ribosa con una secuencia de aminoácidos específica y una modificación de la misma, a una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer que lo comprende como principio activo, y a una composición farmacéutica como adyuvante anticancerígeno.

[0005] [Antecedentes de la técnica]

[0006] La poli ADP-ribosilación (PARilación) es uno de los procesos de modificación postraduccional en el que el polímero de ADP-ribosa (poli(adenosina difosfato-ribosa)) se une covalentemente a una proteína por la PAR polimerasa. La PARilación produce una cadena polimérica de ADP-ribosa y puede inducir una acción bioquímica intracelular única que no consiste en una modificación a nivel molecular pequeño, como la acetilación o la metilación, ni presenta una forma como la ubiquitinación o la SUMOilación. El equilibrio de la PARilación desempeña un papel importante en la reparación del daño al ADN, la regulación de la transcripción, la modificación de la estructura de la cromatina, la homeostasis oxidativa/reductora, la transducción de diversas señales intracelulares, la formación de estructuras no membranosas, las interacciones huésped-patógeno y la regulación del metabolismo del ARN (Juan et al., Cancers, 2020, 12(3): 739).

[0007] La PARilación se ha relacionado con la patogénesis de enfermedades sistémicas, como el cáncer, las infecciones virales y la neurodegeneración. En particular, dado que la PARilación se deriva de la activación de la poli [ADP-ribosa] polimerasa 1 (PARP-1), los efectos anticancerígenos del tratamiento del cáncer de ovario, el cáncer de próstata, el cáncer de mama y otros cánceres por los métodos de la inhibición de la actividad de PARP-1 son bien conocidos (J Mateo et al., Ann Oncol., 2019, 30(9): 1437).

[0008] Recientemente se ha obtenido información sobre los mecanismos bioquímicos implicados en la muerte celular mediada por PARilación, y la activación de la PARilación puede inducir típicamente la muerte celular a través de tres vías principales (Rebecca Gupte et al., Genes Dev. 2017, 31(2): 101).

[0009] El agotamiento de nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+) puede afectar el metabolismo celular que se produce durante una crisis energética celular (agotamiento de ATP), especialmente en un proceso de fosforilación oxidativa. Se ha sugerido que la activación de la PARilación inducida por un daño extenso del ADN consume NAD+, lo que puede provocar la muerte celular como efecto posterior de esta acción de consumo. Además, los polímeros PAR liberados del núcleo tras la reparación del ADN pueden liberar factores inductores de muerte celular unidos a la membrana mitocondrial en el citoplasma y activar vías que movilizan factores de inducción de muerte celular en el núcleo. Cuando los factores de muerte celular se translocan al núcleo, se media una fragmentación a gran escala del ADN, lo que induce la muerte celular. Se sabe que el agotamiento de energía inducido por la PARilación y los factores que inducen la muerte celular participan en la transducción de señales de PAR, que controla las vías de la proteína quinasa-fosfatasa, como la vía PI3K-Akt o la vía de la MAP quinasa, y este proceso de muerte celular dependiente de PAR contribuye significativamente a la complejidad del mecanismo de muerte.

[0010] Además, se ha informado que la autoPARilación de PARP-1 puede degradar la propia PARP-1 e inducir la muerte celular, aunque aún no se ha identificado un mecanismo bioquímico claro. Sin embargo, el cáncer puede evadir esta muerte de forma inteligente activando diversas enzimas proteolíticas para prevenir el proceso de muerte, degradando así el exceso de polímeros PAR que participan en diversos procesos bioquímicos necesarios para la supervivencia del cáncer.

[0011] Por lo tanto, a diferencia de los intentos convencionales de inhibir la PARilación, como los inhibidores de PARP-1, la activación de la PARilación o la inhibición de la degradación de los polímeros PAR también puede ser una estrategia para descubrir terapias anticancerígenas eficaces. En particular, la activación de la PARilación o la inhibición de la degradación de los polímeros PAR puede considerarse una diana muy prometedora en regiones específicas de las células cancerosas que experimentan procesos metabólicos de forma diferente a la de las células normales.

[0012] [Divulgación]

[0013] [Problema técnico]

[0014] Los presentes inventores realizaron un gran esfuerzo para desarrollar un nuevo fármaco anticancerígeno y, como resultado, confirmaron que los péptidos con la nueva secuencia de aminoácidos de la presente divulgación podían unirse a la ADP-ribosa e impedir, en última instancia, la utilización de la ADP-ribosa o del polímero PAR por la acción de diversas enzimas degradantes o proteínas de señalización en las células, sobreactivando de esta manera la PARilación y alterando el proceso de degradación de la PAR polimerasa. Esta alteración podría inducir la muerte de las células cancerosas, lo que resulta en una revolucionaria eficacia anticancerígena, y completaron la presente divulgación.

[0015] [Solución técnica]

[0016] Un objetivo de la presente divulgación es proporcionar un péptido de unión a la adenosina difosfato (ADP)-ribosa con cualquier secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 14.

[0017] Otro objetivo de la presente divulgación es proporcionar un polinucleótido que codifica el péptido de unión a la ADP-ribosa como se describió anteriormente.

[0018] Otro objetivo de la presente divulgación es proporcionar un vector y un transformante que comprende el polinucleótido descrito anteriormente.

[0019] Otro objetivo de la presente divulgación es proporcionar una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer, una composición farmacéutica para adyuvantes anticancerígenos que mejoren la reactividad a un segundo fármaco anticancerígeno, y una composición farmacéutica para adyuvantes anticancerígenos que mejoren la reactividad a la radioterapia anticancerígena, comprendiendo cada composición: el péptido de unión a ADP-ribosa descrito anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo.

[0020] Otro objetivo de la presente divulgación es proporcionar el uso del péptido o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la prevención o el tratamiento del cáncer, y un método para prevenir o tratar el cáncer que comprende la administración del péptido o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un sujeto que lo necesite.

[0021] [Efectos ventajosos]

[0022] El péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación tiene un excelente efecto anticancerígeno al acumular ADP-ribosa en las células cancerosas, para destruir el equilibrio y provocando así la muerte de las células cancerosas, pero sin ser tóxico para las células normales, y cuando se administra en combinación con otros fármacos anticancerígenos o radioterapia anticancerígena, tiene un excelente efecto como adyuvante anticancerígeno al mejorar la reactividad a los fármacos anticancerígenos y la radioterapia.

[0023] [Descripción de los dibujos]

[0024] La FIG. 1 muestra el nivel de poli ADP-ribosa intracelular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con diferentes concentraciones de péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 4.

[0025] La FIG. 2 muestra el nivel de poli ADP-ribosa intracelular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con diferentes concentraciones de péptidos de las SEQ ID NO: 5 a 8.

[0026] La FIG. 3 muestra el nivel de poli ADP-ribosa intracelular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con diferentes concentraciones de péptidos de las SEQ ID NO: 9 a 12.

[0027] La FIG. 4 muestra el nivel de poli ADP-ribosa intracelular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con diferentes concentraciones de péptidos de las SEQ ID NO: 13 y 14.

[0028] La FIG. 5 muestra los resultados de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 16, en las que imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0029] La FIG. 6 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 18, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0030] La FIG. 7 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 6 y SEQ ID NO: 20, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0031] La FIG. 8 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 22, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0032] La FIG. 9 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NO: 24, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0033] La FIG. 10 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 12 y SEQ ID NO: 26, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0034] La FIG. 11 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 14 y SEQ ID NO: 28, en las que las imágenes superiores muestran células y los gráficos inferiores, la viabilidad celular.

[0035] La FIG. 12 muestra el resultado de la confirmación de la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28.

[0036] La FIG. 13 muestra la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con bevacizumab (izquierda) u osimertinib (derecha), solos o en combinación con los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14. La FIG. 14 muestra la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con gemcitabina (izquierda) o docetaxel (derecha), solos o en combinación con los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28. La FIG. 15 muestra la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con 2 Gy de radiación, sola o en combinación con los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14.

[0037] La FIG. 16 muestra la viabilidad celular tras el tratamiento de diferentes células cancerosas con 2 Gy de radiación, sola o en combinación con los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28.

[0038] La FIG. 17 muestra el cambio en el volumen tumoral a lo largo del tiempo tras la administración subcutánea de los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28 en un modelo animal de injerto tumoral.

[0039] La FIG. 18 muestra una imagen de tejido tumoral confirmada tras la administración subcutánea de los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28 en el modelo animal de injerto tumoral.

[0040] La FIG. 19 muestra el cambio en el volumen tumoral a lo largo del tiempo tras la administración oral de los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14 en el modelo animal de injerto tumoral.

[0041] La FIG. 20 muestra una imagen de tejido tumoral confirmada tras la administración oral de los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14 en el modelo animal de injerto tumoral.

[0042] La FIG. 21 muestra los resultados de la evaluación de la toxicidad para células normales (CCD-18Co) del péptido de la SEQ ID NO: 7, utilizado como péptido representativo de la presente divulgación.

[0043] La FIG. 22 muestra los resultados de la evaluación de la toxicidad para células normales (HDPC) del péptido de la SEQ ID NO: 7, utilizado como péptido representativo de la presente divulgación.

[0044] La FIG. 23 muestra la estructura del péptido de la SEQ ID NO: 7.

[0045] [Mejor modo]

[0046] La presente divulgación se describirá en detalle a continuación. Cada descripción y realización divulgada en la presente divulgación puede aplicarse a cada una de las demás descripciones y realizaciones. En otras palabras, todas las combinaciones de los diversos elementos divulgados en la presente divulgación se incluyen en el alcance de la presente divulgación. Además, no puede considerarse que el alcance de la presente divulgación esté limitado por las descripciones específicas que se describen a continuación, sino por las reivindicaciones.

[0047] Una realización de la presente divulgación para lograr el objetivo anterior es un péptido de unión a adenosina difosfato (ADP)-ribosa que presenta una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 14.

[0048] Como se usa en el presente documento, el término "ADP-ribosa" se utiliza como un concepto que incluye tanto la propia ADP-ribosa aislada como el polímero de ADP-ribosa (poli ADP-ribosa), y el término "péptido de unión a ADP-ribosa" se refiere a cualquier péptido con actividad de unión a ADP-ribosa o a un polímero de ADP-ribosa e inhibición de la degradación. La presente divulgación incluye no solo péptidos formados por enlaces peptídicos entre los aminoácidos que constituyen los péptidos, sino también modificaciones de todas las formas de análogos peptídicos, derivados y similares, con algunas formas modificadas para mejorar propiedades como la estabilidad, la eficacia, etc., desde la perspectiva de los fármacos proteicos.

[0049] En un aspecto completamente diferente a los numerosos informes sobre la eficacia anticancerígena obtenida al inhibir la PARilación (poli-ADP-ribosilación) con inhibidores convencionales de PARP-1, los presentes inventores prestaron atención a que cabría esperar efectos anticancerígenos incluso mediante la activación de la PARilación o la inhibición de la degradación del polímero PAR. En particular, dado que las células cancerosas se dividen a un ritmo más rápido que las células normales y metabolizan activamente, se esperaba que, al sobreactivar la PARilación o inhibir la degradación del polímero PAR, las células cancerosas pudieran ser eliminadas específicamente sin ningún efecto particular sobre las células normales que no sobreactivaron la PARilación.

[0051] Todos los péptidos de unión a adenosina difosfato (ADP)-ribosa con cualquier secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 14 (Tabla 1) de la presente divulgación se derivaron del dominio WWE. El dominio WWE es un dominio globular conservado en muchas proteínas, incluyendo deltex, Trip12 y homólogos de la poli-ADP-ribosa polimerasa, entre otras, y recibe su nombre del residuo más conservado del dominio (L. Aravind, TRENDS in Biochemical Sciences, 2001, 26(5): 273). Se sabe que en algunas proteínas que poseen el dominio WWE, existe un motivo de unión a ADP-ribosa en el dominio. Se ha descrito que el dominio WWE de las enzimas intracelulares se une principalmente a la ADP-ribosa para inducir la degradación. En otras palabras, la unión de una enzima específica a<p>A<r>o ADPR a través del dominio WWE puede considerarse un factor clave para la supervivencia de las células cancerosas (PNAS, August 23, 2011 108(34) 14103-14108).

[0053] Sin embargo, a diferencia de lo anterior, no se ha reportado que, al preparar una porción del dominio WWE como péptido aislado y tratarla con células, se inhiba la degradación de ADP-ribosa y se acumule ADP-ribosa en las células, proporcionando así excelentes efectos anticancerígenos, como en la presente divulgación.

[0054] En una realización específica de la presente divulgación, se sintetizaron fragmentos a partir de dominios WWE presentes en diversos tipos de proteínas y se investigó su actividad anticancerígena. Como resultado, se confirmó que, al tratar diversos tipos de células cancerosas con los péptidos de unión a ADP-ribosa (SEQ ID NO: 1 a 14) de los Ejemplos 1 a 14, el nivel de ADP-ribosa en las células cancerosas aumentó significativamente (FIGS. 1 a 4). Además, se confirmó mediante experimentosin vitroque el tratamiento de los péptidos alteró el equilibrio intracelular de ADP-ribosa, de modo que se suprimió el crecimiento de células cancerosas y la mayoría de ellas murieron (FIGS. 5 a 11), y también se confirmó en modelos animales de injerto tumoral que, al administrar por vía subcutánea u oral los péptidos de unión a ADP-ribosa de los Ejemplos 1 a 14, el crecimiento del tejido tumoralin vivose redujo rápidamente (FIG. 19 y FIG. 20).

[0056] Además, en otra realización específica de la presente divulgación, se trataron células normales con un péptido de la SEQ ID NO: 7, utilizado como péptido representativo, y se evaluó la citotoxicidad contra las células normales. Como resultado, se confirmó que no se observó toxicidad en las células normales (FIGS. 21 y 22).

[0057] Por lo tanto, los péptidos de unión a ADP-ribosa de las SEQ ID NO: 1 a 14 de la presente divulgación presentan excelentes efectos anticancerígenos, independientemente del tipo de cáncer, y no presentan citotoxicidad para las células normales, lo que puede ser útil como composición para la prevención o el tratamiento del cáncer.

[0058] Todos los péptidos de unión a ADP-ribosa pertenecen al alcance de la presente divulgación, siempre que no solo los péptidos con la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de las SEQ ID NO: 1 a 14, sino también los péptidos con secuencias en las que se añaden, sustituyen o eliminan uno o más aminoácidos de estas secuencias, se encuentren dentro del intervalo equivalente.

[0060] Por ejemplo, es obvio que si un péptido tiene al menos un 80 % o más, un 90 % o más, un 95 % o más, un 97 % o más, o un 99 % o más de homología con un péptido que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1 a 14 de la presente divulgación y exhibe una eficacia equivalente a la del péptido que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácidos de los números 1 a 14, es decir, actividad de unión a ADP-ribosa y actividad anticancerígena, incluso si el péptido tiene una secuencia de aminoácidos en la que se añaden, sustituyen o eliminan algunas secuencias de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1 a 14, el péptido está incluido dentro del alcance de la presente divulgación.

[0062] Además, si el péptido presenta una actividad correspondiente a la del péptido que consiste en una cualquiera de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1 a 14, las mutaciones que puedan añadir secuencias sin sentido antes y después de la secuencia de aminoácidos, o que puedan ocurrir de forma natural, o mutaciones silenciosas de la misma, también pueden incluirse dentro del alcance de la presente divulgación.

[0063] En el presente documento, el término "homología" se refiere al grado de coincidencia con una secuencia de aminoácidos o secuencia de bases, y la homología puede expresarse como un porcentaje. En la presente memoria descriptiva, una secuencia homóloga con una actividad idéntica o similar a la de la secuencia de aminoácidos o de bases dada se expresa como " % de homología". Por ejemplo, la homología puede confirmarse mediante software estándar, en concreto BLAST 2.0, que calcula parámetros como la puntuación, la identidad y la similitud, o mediante la comparación de secuencias mediante experimentos de hibridación Southern en condiciones rigurosas definidas, en la que las condiciones de hibridación adecuadas que se definirán están dentro del alcance de la tecnología y pueden determinarse mediante métodos bien conocidos por los expertos en la materia (por ejemplo, J. Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989; F.M. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York).

[0065] Además, los péptidos de la presente divulgación pueden incluir modificaciones, como la derivatización química, entre otras, en uno o más aminoácidos que constituyen los péptidos para mejorar aún más las propiedades deseadas. La derivatización puede incluir, entre otras, acetilación, hidroxilación, metilación, amidación, pegilación y la adición de componentes de carbohidratos o lípidos, vehículos y similares.

[0067] Como aspecto específico de la presente divulgación, el péptido puede utilizarse adicionalmente fusionado con un péptido de penetración celular para aumentar su capacidad de penetración. En otras palabras, el péptido de unión a ADP-ribosa puede incluir además péptidos de penetración celular en el extremo terminal N, el extremo terminal C o ambos terminales. En este caso, puede incluirse adicionalmente un enlazador entre el péptido de unión a ADP-ribosa y el péptido de penetración celular, lo cual puede ser realizado adecuadamente por los expertos en la materia.

[0069] Como se utiliza en el presente documento, el término "péptido de penetración celular" se refiere a un péptido con características capaces de promover la captación/absorción en las células de diversos materiales, como nanopartículas, compuestos,<a>D<n>, proteínas y similares. Específicamente, el péptido de penetración celular puede incluir, y similares, TAT, maurocalcina, penetratina, un péptido derivado de poliarginina, antennapedia, transportano, VP22, Hph-1, poliarginina, R11(R9), Pep-1, HP4, LAH4, vetofusing-1, un péptido basado en una secuencia señal o un péptido anfipático, y puede ser seleccionado adecuadamente por los expertos en la materia siempre que el péptido de penetración celular sea capaz de promover el movimiento intracelular del péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación.

[0071] En una realización específica de la presente divulgación, TAT, un péptido de penetración celular, se fusionó al extremo terminal N de los péptidos de unión a ADP-ribosa de las SEQ ID NO: 1 a 14 de la presente divulgación para evaluar su actividad anticancerígena (SEQ ID NO: 15 a 24, Tabla 2). Como resultado, se pudo confirmar que la fusión tuvo una actividad anticancerígena superior a la del péptido de unión a ADP-ribosa solo (FIGS. 5 a 12, 17 y 18). Por lo tanto, no solo los péptidos de unión a ADP-ribosa de las SEQ ID NO: 1 a 14 de la presente divulgación, sino también la proteína de penetración celular fusionada con estos péptidos de unión a ADP-ribosa pueden emplearse de forma muy útil como composición para la prevención o el tratamiento del cáncer.

[0072] Además, los expertos en la materia pueden modificar y utilizar adecuadamente el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación para su aplicación según el tipo de péptido de penetración celular empleado. En otras palabras, incluso cuando el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación se fusiona con el péptido de penetración celular que se va a utilizar, no se limita a la secuencia de aminoácidos presentada en la presente divulgación, sino que es posible utilizar secuencias de aminoácidos añadidas/sustituidas/ eliminadas en una forma adecuada para la aplicación del péptido de penetración celular dentro del intervalo obvio para los expertos en la materia, es decir, el intervalo equivalente.

[0074] Además, el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación puede emplearse junto con reactivos conocidos en la técnica capaces de administrar proteínas a las células o de mejorar la eficiencia de administración para aumentar la capacidad de penetración celular. El reactivo puede incluir, por ejemplo, no solo reactivos disponibles comercialmente como Chariot™ (motivo activo, Cat. 30025), Xflect™ (Takara, Cat.

[0075] 631324), Pierce™ (ThermoFisher Scientific, Cat. 89850), ProteoJuice™ (Merck, Cat. 71281), PULSinTM (transfección Poylplus) y similares, sino también otros reactivos no comerciales, y no se limita particularmente a los ejemplos descritos anteriormente, siempre que el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación pueda administrarse a las células.

[0077] Otro aspecto de la presente divulgación es un polinucleótido que codifica el péptido de unión a ADP-ribosa descrito anteriormente.

[0079] Otro aspecto adicional de la presente divulgación es un vector que comprende el polinucleótido descrito anteriormente.

[0081] Otro aspecto adicional de la presente divulgación es un transformante que comprende el polinucleótido descrito anteriormente.

[0083] El péptido de unión a ADP-ribosa es el mismo que el descrito anteriormente.

[0085] El polinucleótido puede tener una secuencia de nucleótidos que codifica el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación, o una secuencia de nucleótidos con al menos 80 % o más, 90 % o más, 95 % o más, 97 % o más o 99 % o más de homología con esta, y si algún polipéptido traducido a partir de este presenta una eficacia equivalente a la del péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación, cualquier caso en el que se añada una secuencia sin sentido, o se elimine, modifique o sustituya una secuencia parcial en el extremo terminal 5' y/o 3' de la secuencia de nucleótidos también puede incluirse en el alcance de la presente divulgación. El polinucleótido puede utilizarse en forma de casete de expresión unido operativamente a una secuencia promotora conocida o a un vector que comprende el polinucleótido, y el polinucleótido, casete de expresión o vector pueden prepararse adecuadamente mediante un método conocido por los expertos en la materia. El tipo de promotor y vector no está particularmente limitado y puede ser seleccionado adecuadamente por los expertos en la materia según la finalidad. Además, puede prepararse un transformante para su uso transformando el polinucleótido, casete de expresión o vector en una célula huésped, y los métodos de transformación a emplear también pueden realizarse, sin limitación, mediante métodos conocidos por los expertos en la materia. El transformante, que está sujeto a la expresión del péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación, puede ser un microorganismo, una planta o un animal, y puede ser no humano, pero no se limita a estos.

[0087] Los expertos en la materia pueden preparar y utilizar un polinucleótido que codifica el péptido de unión a ADP-ribosa descrito anteriormente, un vector que lo comprende o un transformante que lo comprende para aplicar/producir el péptido de unión a ADP-ribosa con diversos fines. Por ejemplo, el polinucleótido o el vector puede utilizarse directamente para el tratamiento del cáncer, y el transformante que expresa el péptido de unión a ADP-ribosa, que incluye el polinucleótido o el vector, puede utilizarse para producir el péptido o usarse con fines terapéuticos, pero sin limitarse a los mismos.

[0089] Otro aspecto de la presente divulgación es una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer, que comprende el péptido de unión a ADP-ribosa descrito anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo.

[0091] Otro aspecto de la presente divulgación es el uso del péptido descrito anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la prevención o el tratamiento del cáncer, y un método para prevenir o tratar el cáncer que comprende la administración del péptido o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un sujeto que lo necesite.

[0093] Como se describió anteriormente, el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación tiene un excelente efecto en la prevención y/o tratamiento del cáncer.

[0095] En la presente divulgación, el término "cáncer" se refiere a una enfermedad relacionada con la regulación de la muerte celular y se refiere a una enfermedad causada por la proliferación excesiva de células cuando se altera el equilibrio normal de muerte celular. En este documento, el cáncer incluye tumores malignos y benignos, y puede ser, por ejemplo, cáncer de cerebro, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, cáncer de mama, timoma, cáncer de esófago, cáncer de colon, cáncer de hígado, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de vías biliares, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer testicular, tumor de células germinales, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de endometrio, cáncer colorrectal, linfoma, leucemia aguda, leucemia crónica, mieloma múltiple, sarcoma, melanoma maligno o cáncer de piel. Sin embargo, los tipos de cáncer de la presente divulgación no se limitan a los ejemplos anteriores. La composición para la prevención o el tratamiento del cáncer de la presente divulgación tiene un efecto terapéutico en todos los cánceres en los que la ADP-ribosa se acumula en las células, lo que provoca la muerte celular.

[0097] Por ejemplo, el cáncer puede ser un tumor sólido como el cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico o cáncer de ovario, pero no se limita a estos.

[0099] Como se usa en el presente documento, el término "tratamiento" se refiere a la intervención para alterar los procesos naturales de individuos o células que padecen enfermedades, el cual puede realizarse durante la progresión de la patología o para prevenir la patología. Los efectos terapéuticos deseados incluyen la prevención de la aparición o recurrencia de la enfermedad, el alivio de los síntomas, la reducción de cualquier consecuencia patológica directa o indirecta de la enfermedad, la prevención de la metástasis, la disminución de la tasa de progresión de la enfermedad, la reducción o el alivio temporal de la enfermedad y la remisión o mejora del pronóstico. En particular, la presente divulgación incluye todas las acciones que retrasan la progresión del cáncer mediante la administración de la composición que contiene el péptido de unión a ADP-ribosa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo. Además, el término "prevención" se refiere a cualquier actividad que inhiba o retrase la aparición del cáncer mediante la administración de la composición.

[0101] El porcentaje en peso del péptido de unión a ADP-ribosa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo contenido en la composición farmacéutica no está particularmente limitado, pero puede ser del 0.0001 al 90 % en peso, específicamente del 0.001 al 50 % en peso, y más específicamente del 0.01 al 20 % en peso, basado en el peso total de la composición final.

[0103] La composición farmacéutica puede prepararse conteniendo además vehículos, excipientes o diluyentes apropiados comúnmente utilizados en la fabricación de productos farmacéuticos. Específicamente, cada una de las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación puede formularse según métodos convencionales en forma de polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, suspensiones, emulsiones, jarabes, aerosoles, formulaciones orales como parches orales y similares, preparaciones tópicas, parches tópicos, supositorios e inyecciones estériles.

[0105] Cuando la composición farmacéutica se utiliza para administración oral, puede prepararse como una preparación de liberación sostenida mediante encapsulación, recubrimiento entérico, mezcla de polímeros, etc., adecuados.

[0107] En una realización, la preparación de liberación sostenida puede prepararse como una preparación de acción prolongada.

[0109] En una realización, la preparación de acción prolongada puede mezclarse con un polímero y un lípido en una proporción adecuada.

[0111] La composición farmacéutica de la presente divulgación puede administrarse a un sujeto que ha desarrollado o está en riesgo de desarrollar cáncer. Como se usa en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a todos los animales, incluidos los humanos.

[0113] La composición farmacéutica de la presente divulgación puede administrarse a un sujeto en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Como se usa en el presente documento, el término "administración" se refiere a la introducción de la composición farmacéutica de la presente divulgación a un sujeto diana mediante cualquier método adecuado, y la administración puede realizarse por diversas vías orales o parenterales, siempre que sea posible alcanzar el tejido diana. Los ejemplos de la vía de administración pueden incluir, pero no se limitan a, las vías oral, intramuscular, intravenosa, arterial, subcutánea, intraperitoneal, pulmonar y nasal, y, por ejemplo, pueden incluir la administración subcutánea u oral.

[0115] Como se usa en el presente documento, el término "cantidad farmacéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para prevenir y/o tratar el cáncer con una relación beneficio/riesgo razonable aplicable al uso médico. La dosis y la frecuencia de administración adecuadas pueden seleccionarse según un método conocido en la técnica, donde la dosis y la frecuencia de administración de la composición farmacéutica de la presente divulgación que se vaya a administrar realmente pueden determinarse adecuadamente en función de diversos factores, como el tipo de síntoma a tratar, la vía de administración, el sexo, el estado de salud, la dieta, la edad y el peso del sujeto, y la gravedad de la enfermedad.

[0117] En la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable se refiere a sales comúnmente utilizadas en la industria farmacéutica, y puede incluir, por ejemplo, sales de iones inorgánicos que incluyen sodio, potasio, calcio, magnesio, litio, cobre, manganeso, zinc, hierro y similares, y sales de ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido fosfórico y ácido sulfúrico, y además de los mismos, puede incluir sales de ácidos orgánicos tales como ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido propiónico, ácido acético, ácido orotato, ácido acetilsalicílico y similares, y sales de aminoácidos tales como lisina, arginina, guanidina y similares. Además, se pueden incluir sales de iones orgánicos como tetrametilamonio, tetraetilamonio, tetrapropilamonio, tetrabutilamonio, benciltrimetilamonio y bencetonio, que pueden utilizarse en reacciones farmacéuticas, purificación y procesos de separación. Sin embargo, los tipos de sales a los que se refiere la presente divulgación no se limitan a las sales enumeradas.

[0119] Dado que el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación tiene una excelente actividad anticancerígena, el péptido de unión a ADP-ribosa puede prepararse tanto en forma de composición alimentaria funcional como de composición farmacéutica.

[0121] Cuando la composición de la presente divulgación se prepara en forma de composición alimentaria, la composición alimentaria puede incluir ingredientes adicionales de uso común en alimentos que mejoran el olor, el sabor y las propiedades visuales. Por ejemplo, se pueden añadir aditivos alimentarios. El aditivo se selecciona según el tipo de alimento y se utiliza en la cantidad adecuada.

[0123] La composición alimentaria puede prepararse como un alimento funcional para la salud, en la que el alimento funcional para la salud es el mismo término que el alimento para uso especial de la salud (FoSHU), que se refiere a alimentos con altos efectos médicos y terapéuticos, procesados para ejercer eficazmente funciones biorreguladoras, además de aportar nutrientes. El alimento funcional para la salud puede prepararse en diversas presentaciones, como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, líquidos y píldoras, para obtener efectos beneficiosos en la mejora del cáncer.

[0125] Otro aspecto de la presente divulgación es una composición farmacéutica para un adyuvante anticancerígeno que mejora la reactividad a un segundo fármaco anticancerígeno, que comprende: el péptido de unión a ADP-ribosa, como se describió anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como principio activo.

[0126] Otro aspecto de la presente divulgación es una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer, que comprende: (i) el péptido de unión a ADP-ribosa, como se describió anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y (ii) un segundo fármaco anticancerígeno como principio activo.

[0127] El péptido de unión a ADP-ribosa y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo son los mismos que los descritos anteriormente.

[0129] El péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación también tiene un excelente efecto como composición farmacéutica para adyuvante anticancerígeno para mejorar la reactividad al segundo fármaco anticancerígeno, además de tener un efecto anticancerígeno por sí solo. Por lo tanto, es posible utilizar una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento del cáncer que comprende: el segundo fármaco anticancerígeno como principio activo junto con el péptido de unión a ADP-ribosa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0131] Como se usa en el presente documento, el término "segundo fármaco anticancerígeno", se refiere a cualquier fármaco con actividad anticancerígena distinta del péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación. En la presente divulgación, el alcance del segundo fármaco anticancerígeno no está particularmente limitado, y los expertos en la materia pueden seleccionar y utilizar un tipo apropiado del segundo fármaco anticancerígeno según el propósito de curación, control o alivio de los síntomas del cáncer, y similares, y dependiendo del tipo y estadio del cáncer. El segundo fármaco anticancerígeno puede ser, por ejemplo, un fármaco anticancerígeno citotóxico, un fármaco anticancerígeno dirigido, un fármaco anticancerígeno inmunitario o un fármaco anticancerígeno metabólico, pero no se limita a estos.

[0133] En la presente divulgación, el fármaco citotóxico anticancerígeno es un fármaco que exhibe un efecto anticancerígeno al atacar las células cancerosas que se dividen indiscriminadamente a una velocidad mayor que las células normales, lo cual es similar al uso común en el campo técnico al que pertenece la presente divulgación. El fármaco citotóxico anticancerígeno incluye agentes alquilantes, antimetabolitos y fármacos anticancerígenos naturales.

[0135] El agente alquilante puede incluir mostazas nitrogenadas (por ejemplo, ciclofosfamida, clormetina, uramustina, melfalán, clorambucilo, ifosfamida, bendamustina y similares), alquilsulfonatos (por ejemplo, busulfano, procarbazina y similares), nitrosoureas (por ejemplo, carmustina, lomustina, estreptozocina y similares), agentes alquilantes a base de platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, dicicloplatino, eptaplatino, lobaplatino, miriplatino, nedaplatino, oxaliplatino, picoplatino, satraplatino, tetranitrato de triplatino y similares), pero no se limita a los mismos. El agente alquilante puede causar la destrucción de células cancerosas al unirse al ADN en células cancerosas y dañar la estructura del ADN.

[0137] El antimetabolito puede incluir derivados de pirimidina (por ejemplo, 5-fluorouracilo, capecitabina, cistarabina, gemcitabina, fludarabina y similares), derivados de folato (por ejemplo, metotrexato, pemetrexed y similares), derivados de purina (por ejemplo, mercaptopurina y similares), pero no se limita a los mismos. El antimetabolito puede inducir la muerte de células cancerosas al inhibir el metabolismo necesario para la supervivencia celular y la replicación del ADN.

[0139] El fármaco anticancerígeno natural puede incluir inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, camptotecina, epipodofilotoxina, fármacos basados en taxanos [docetaxel, paclitaxel]), antibióticos (por ejemplo, dactinomicina, doxorrubicina, daunorrubicina, mitomicina, fleomicina, idarrubicina, clorhidrato de mitoxantrona y similares), pero no se limita a los mismos.

[0141] En la presente divulgación, el fármaco anticancerígeno es un fármaco anticancerígeno que induce la muerte de células cancerosas mediante la inhibición de una proteína diana (receptor o enzima) implicada en el crecimiento del cáncer, lo que significa lo mismo que se utiliza comúnmente en el campo técnico al que pertenece la presente divulgación. El fármaco anticancerígeno citotóxico incluye compuestos inhibidores de moléculas pequeñas de proteínas diana (tales como la tirosina quinasa, etc.), y anticuerpos monoclonales.

[0142] Por ejemplo, el fármaco anticancerígeno dirigido puede ser un inhibidor del receptor de la tirosina quinasa dirigido a al menos una diana seleccionada del grupo que consiste en VEGF-A y e Gf R.

[0144] En una realización, el fármaco anticancerígeno dirigido, que puede administrarse en combinación con el péptido de unión a ADP-ribosa, es un inhibidor de VEGF-A. En la presente divulgación, el inhibidor del VEGF-A puede incluir anticuerpos monoclonales como bevacizumab, ranibizumab, aflibercept y ramucirumab, y compuestos de moléculas pequeñas como sunitinib, pazopanib, sorafenib y axitinib, pero sin limitarse a los mismos.

[0145] En una realización, el fármaco anticancerígeno dirigido, que puede administrarse en combinación con el péptido de unión a ADP-ribosa, es un inhibidor del EGFR. En la presente divulgación, el inhibidor del EGFR puede incluir anticuerpos monoclonales como cetuximab, panitumumab, zalutumumab, nimotuzumab y matuzumab, junto con compuestos de moléculas pequeñas como osimertinib, gefitinib, erlotinib, afatinib, brigatinib, icotinib y vandetanib, pero sin limitarse a los mismos.

[0146] Además, el fármaco anticancerígeno dirigido de la presente divulgación también puede incluir fármacos anticancerígenos dirigidos a HER2, como lapatinib, neratinib y afatinib; fármacos anticancerígenos dirigidos a Bcr-Abl, como imatinib, dasatinib y nilotinib; fármacos anticancerígenos dirigidos a Src, como bosutinib; fármacos anticancerígenos dirigidos a JAK, como lestaurtinib, ruxolitinib y pacritinib; fármacos anticancerígenos dirigidos a la quinasa MAP2, como cobimetinib, selumetinib, trametinib y binimetinib; fármacos anticancerígenos dirigidos a MEL4-ALK, como ceritibina y crizotinib, pero no está particularmente limitado en cuanto a su tipo.

[0148] Además, el segundo fármaco anticancerígeno de la presente divulgación puede ser una combinación de uno o más fármacos anticancerígenos citotóxicos y/o fármacos anticancerígenos dirigidos, que pueden administrarse simultáneamente o en momentos diferentes.

[0150] En la presente divulgación, un fármaco inmunooncológico se refiere a fármacos que activan el sistema inmunitario del cuerpo para combatir las células cancerosas. En la presente divulgación, el fármaco inmunooncológico puede incluir inhibidores de puntos de control inmunitarios, agentes terapéuticos para células inmunitarias, vacunas anticancerígenas y conjugados anticuerpo-fármaco, en los que el tipo apropiado de estos puede seleccionarse para curar, controlar y aliviar los síntomas del cáncer según el tipo y el estadio del cáncer.

[0151] En una realización, el fármaco inmunooncológico puede ser un inhibidor de puntos de control inmunitario, y puede ser uno o más seleccionados del grupo que consiste en un anticuerpo PD-1, un anticuerpo PD-L1, un anticuerpo CTLA-4, un anticuerpo CD28, un anticuerpo KIR, un anticuerpo TCR, un anticuerpo LAG-3, un anticuerpo TIM-3, un anticuerpo TIGIT, un anticuerpo A2aR, un anticuerpo ICOS, un anticuerpo OX40, un anticuerpo 4-1BB y un anticuerpo GITR. Por ejemplo, el inhibidor de puntos de control inmunitario puede ser anticuerpos PD-1 como nivolumab, pembrolizumab, cemiplimab, pidilizumab, toripalimab; anticuerpos PD-L1 como atezolizumab, avelumab, duralumab; anticuerpos<c>T<l>A-4 como ipilimumab y tremelimumab, pero no se limitan a los mismos.

[0153] En una realización, el fármaco inmunooncológico puede ser un agente terapéutico para células inmunitarias, y puede ser un agente receptor de antígeno quimérico-asesino natural (CAR)-NK o agentes receptores de antígeno quimérico (CAR)-T, como tisagenlecleucel o axicabtagene ciloleucel, pero no se limita a los mismos.

[0154] En la presente divulgación, un fármaco para el metabolismo del cáncer se refiere a un fármaco que participa en el crecimiento y la supervivencia de las células cancerosas, como el suministro de nutrientes a las células cancerosas, o que participa en diversas reacciones metabólicas esenciales para destruir las células cancerosas. El fármaco para el metabolismo del cáncer puede incluir, por ejemplo, IM-156, ácido 3-bromopirúvico (3BP), NYH817100, WZB117, GNE-140, AZ93, AZD3965, CPI-613, MKT-077, CB-839, CB-1158, CPI-444, TVB-2640, NDI-010976, TCD-717, ADI-PEG20, epacadostat, indoximod, PX478, CPI-0610, RTA402, APO866, GMX1778, AG-221 o AG-120, y similares, pero sin limitarse a los mismos.

[0156] Dado que el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación aumenta la reactividad al segundo fármaco anticancerígeno al alterar el equilibrio de ADP-ribosa en las células cancerosas, lo que lo hace útil como adyuvante anticancerígeno, el tipo de segundo fármaco anticancerígeno utilizado o el tipo de cáncer no están particularmente limitados. Por ejemplo, el cáncer puede ser un tumor sólido como cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico o cáncer de ovario, pero no se limita a los mismos.

[0158] El péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación puede administrarse en combinación con el segundo fármaco anticancerígeno en una forma que existe independientemente de los otros o, según el propósito, puede administrarse en un estado en el que se forma un enlace físico-químico con el segundo fármaco anticancerígeno mediante cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, el péptido de unión a ADP-ribosa puede utilizarse acoplado directamente al segundo fármaco anticancerígeno o puede usarse en un estado que está conectado al segundo fármaco anticancerígeno a través de un ligador conocido. El método de aplicación del péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación no está particularmente limitado, siempre que actúe junto con el segundo fármaco el péptido de unión a ADP-ribosa actúe junto con el segundo fármaco anticancerígeno para exhibir un efecto anticancerígeno sinérgico.

[0160] En una realización específica de la presente divulgación, se confirmó que, al tratar diferentes tipos de cáncer con el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación junto con bajas concentraciones de bevacizumab, osimertinib, gemcitabina y docetaxel, la reactividad al fármaco anticancerígeno aumentó en todas las células cancerosas (FIGS. 13 y 14). Por lo tanto, el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación puede mejorar la reactividad del segundo fármaco anticancerígeno, el cual puede emplearse de forma muy útil como adyuvante anticancerígeno y puede presentar una excelente actividad anticancerosa incluso cuando el segundo fármaco anticancerígeno se trata a baja concentración, lo que permite minimizar los efectos secundarios que pueda causar.

[0162] Otro aspecto adicional de la presente divulgación es una composición farmacéutica para un adyuvante anticancerígeno que mejora la reactividad a la radioterapia anticancerosa, que comprende: el péptido de unión a ADP-ribosa descrito anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como ingrediente activo.

[0164] El péptido de unión a ADP-ribosa y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo son los mismos que los descritos anteriormente.

[0166] Como se usa en el presente documento, el término "radioterapia anticancerosa" se refiere a la acción terapéutica de irradiar células cancerosas o tejidos tumorales con radiación para destruir las células cancerosas. En general, la radioterapia anticancerígena es un tratamiento estándar para controlar tumores irresecables o inoperables, o metástasis tumorales, y se basa en el principio de que la radiación administrada a un sitio diana causa la muerte de las células reproductivas. La radioterapia anticancerígena de la presente divulgación puede ser radioterapia ionizante, radioterapia electromagnética, braquiterapia o radioterapia de haz externo, pero no se limita a las mismas.

[0168] Dado que la composición que contiene el péptido de unión a ADP-ribosa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según la presente divulgación, exhibe un efecto anticancerígeno sinérgico al combinarse con radioterapia, la composición puede utilizarse como adyuvante anticancerígeno para radioterapia o como sensibilizador a la radiación que mejora la sensibilidad a la radiación, en la que el tipo de cáncer al que puede aplicarse no está particularmente limitado. Por ejemplo, el cáncer puede ser tumores sólidos como cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico y cáncer de ovario, pero no se limita a los mismos.

[0170] Como realización, el tumor sólido puede ser resistente a la radioterapia. Dado que el efecto anticancerígeno de la radioterapia se manifiesta mediante la formación de escisión del ADN, la resistencia a la radioterapia generalmente se determina por un mecanismo capaz de reparar el daño al ADN inducido por la radioterapia. Como método para aumentar la eficacia anticancerígena de la radioterapia, se han realizado varios intentos para inhibir los mecanismos de reparación del ADN, y la sensibilidad de la radioterapia puede aumentar al bloquear la reparación de las cadenas de ADN rotas. Los dos tipos principales de daño al ADN son las roturas de cadena sencilla (SSB) y las roturas de cadena doble (DSB). Por lo tanto, las categorías de dos vías de reparación dirigidas a SSB y DSB pueden describirse como ejemplos. La reparación por escisión de bases (BER) es una de las diversas vías implicadas en la reparación de ciertos tipos de SSB del ADN.

[0172] PARP1 desempeña un papel importante en la BER de las SSB del ADN mediante un proceso conocido como ADP-ribosilación. En el núcleo, PARP1 detecta el daño al ADN de SSB y, para su reparación, recluta complejos de reparación del ADN mediante ADP-ribosilación a los sitios SSB. Dado que la sobreacumulación de poli-ADP-ribosa sintetizada mediante la ribosilación de ADP por la actividad de PARP-1 finalmente conduce a la muerte celular, para prevenir este fenómeno, las células cancerosas activan las actividades de señalización de supervivencia mediante la degradación de la poli-ADP-ribosa a través de proteasomas como PARG, ARH3 y similares. Los presentes inventores observaron que la acumulación de ADP-ribosa o polímero de ADP-ribosa en células cancerosas podría actuar como un vehículo capaz de alterar estos mecanismos bioquímicos de supervivencia de las células cancerosas, lo que hace posible su uso como un importante adyuvante anticancerígeno para superar la resistencia a la radioterapia.

[0174] En una realización específica de la presente divulgación, se confirmó que cuando el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación se trató en combinación con radiación de baja dosis en diferentes tipos de cáncer, la reactividad a la radioterapia aumentó en todos los tipos de cáncer (FIGS. 15 y 16). Por lo tanto, el péptido de unión a ADP-ribosa de la presente divulgación puede mejorar la reactividad a la radioterapia, lo que lo hace muy útil como adyuvante anticancerígeno, e incluso cuando se irradia con radiación con una dosis tolerable, se puede obtener una excelente actividad anticancerígena, lo que minimiza los efectos secundarios de la radiación.

[0176] Las realizaciones de la presente divulgación se proporcionan para explicar con mayor detalle la presente divulgación a los expertos en la materia. Asimismo, el término "que comprende" un componente a lo largo de la memoria descriptiva no implica excluir otros componentes, sino que permite la inclusión de otros componentes, a menos que se indique lo contrario.

[0178] [Modo de realización de la invención]

[0180] A continuación, se describirán con más detalle la constitución y los efectos de la presente divulgación mediante ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente divulgación, pero el alcance de la presente divulgación no se limita a estos ejemplos, sino por medio de las reivindicaciones.

[0182] Ejemplos 1 a 14.Preparación de péptidos de unión a adenosina difosfato (ADP)-ribosa

[0184] Los péptidos de unión a ADP-ribosa de los ejemplos 1 a 14 se sintetizaron a partir de dominios WWE presentes en diversos tipos de proteínas y se utilizaron en experimentos. La información específica sobre los péptidos utilizados se muestra en la Tabla 1 a continuación.

[0185] [Tabla 1]

[0186]

[0188] Además, los péptidos de los Ejemplos 15 a 28 se prepararon mediante la unión de un péptido penetrante celular al extremo terminal N de los péptidos de los Ejemplos 1 a 14. Las secuencias peptídicas de los Ejemplos 15 a 28 se muestran en la Tabla 2.

[0189] [Tabla 2]

[0190]

[0191]

[0194] Ejemplo experimental 1:Confirmación del cambio en el nivel de adenosina difosfato (ADP)-ribosa en células cancerosas

[0196] Los péptidos de los ejemplos 1 a 28 de la presente divulgación están diseñados para inhibir la acción de la enzima de degradación de poli ADP-ribosa. En el ejemplo experimental 1, se confirmó mediante experimentos celulares si la poli ADP-ribosa se inhibía de la degradación de cada uno de los péptidos y su acumulación en las células cancerosas.

[0198] 1-1. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células U-87MG

[0200] Se dividieron 5 * 105 células U-87MG en un grupo sin tratar con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32 pM del péptido del Ejemplo 1 (SEQ ID NO: 1) o del Ejemplo 8 (SEQ ID NO: 8) y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) suplementado con 10 % de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPA y 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0202] La parte superior izquierda de la FIG. 1 y la parte inferior derecha de la FIG. 2 muestran el aumento de ADP-ribosa (expresado como las veces que cambia) en células U-87MG en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos del Ejemplo 1 u 8, lo que indica que, en comparación con el grupo sin tratamiento, ambos grupos de péptidos tratados mostraron un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa, dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0204] 1-2. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células H1975

[0206] Se dividieron 5 * 105 células H1975 en un grupo sin el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1,2, 4, 8, 16 y 32 pM del péptido del Ejemplo 2 (SEQ ID NO: 2), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio RPMI-1640 suplementado con 10 % de f Bs , 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPA y 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0207] La parte superior derecha de la FIG. 1 y la parte superior izquierda de la FIG. 3 mostraron el aumento de ADP-ribosa (expresado como las veces que cambia) en células H1975 en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos del ejemplo 2 o 9, lo que indica que, en comparación con el grupo sin tratamiento, el grupo tratado con péptidos mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa, dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0209] 1-3. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células Aspc-1

[0211] Se dividieron 5 * 105 células Aspc-1 en un grupo sin tratar con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32 pM del péptido del Ejemplo 3 (SEQ ID NO: 3), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio RPMI-1640 suplementado con 10 % de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPA y 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0212] La parte inferior izquierda de la FIG. 1 y la parte superior derecha de la FIG. 3 mostraron el aumento de ADP-ribosa (expresado como las veces que cambia) en células Aspc-1 en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos del ejemplo 3 o 10, lo que indica que, en comparación con el grupo sin tratamiento, el grupo tratado con péptidos mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa, dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0213] 1-4. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células Hep G2

[0214] Se dividieron 5 * 105 células Hep G2 en un grupo sin tratar con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32 |jM del péptido del Ejemplo 4 (SEQ ID NO: 4), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio EMEM suplementado con 10 % de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 jg/m l de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPA y 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa. La parte inferior derecha de la FIG. 1 y la parte inferior izquierda de la FIG. 3 mostraron el aumento de ADP-ribosa (expresada como las veces que cambia) en células Hep G2 en comparación con el grupo de control de acuerdo con el tratamiento con péptidos del Ejemplo 4 u 11, lo que indica que, en comparación con el grupo no tratado, el grupo de péptidos tratado mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0215] 1-5. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células MDA-MB-231

[0216] Se dividieron 5 * 105 células MDA-MB-231 en un grupo no tratado con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32<j>M del péptido del Ejemplo 5 (SEQ ID NO: 5), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio L-15 de Leibovitz suplementado con 10 % de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 jg/m l de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPAy 1 % de<s>D<s>. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0217] La parte superior izquierda de la FIG. 2 y la parte inferior derecha de la FIG. 3 muestran el aumento de ADP-ribosa (expresado como las veces que cambia) en células MDA-MB-231 en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos del ejemplo 5 o 12, lo que indica que, en comparación con el grupo sin tratamiento, el grupo tratado con péptidos mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa, dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0218] 1-6. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células HCT116

[0219] Se dividieron 5 * 105 células HCT116 en un grupo sin tratar con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32 j M del péptido del Ejemplo 6 (SEQ ID NO: 6), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio 5A de McCoy suplementado con 10 % de<f>B<s>, 100 unidades/ml de penicilina y 100 jg/m l de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPAy 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0220] La parte superior derecha de la FIG. 2 y el gráfico izquierdo de la FIG. 4 muestra el aumento de ADP-ribosa como factor de cambio en las células HCT116 en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos del ejemplo 6 o 13, lo que indica que, en comparación con el grupo sin tratamiento, el grupo tratado con péptidos mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0221] 1-7. Cambio en el nivel de ADP-ribosa en células Caki-1

[0222] Se dividieron 5 * 105 células Caki-1 en un grupo sin tratar con el péptido del Ejemplo y un grupo tratado con 0.2, 1, 2, 4, 8, 16 y 32<j>M del péptido del Ejemplo 7 (SEQ ID NO: 7), y se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>en medio 5A de McCoy suplementado con 10 % de f Bs , 100 unidades/ml de penicilina y 100 jg/m l de estreptomicina. Se eliminó el medio de cultivo de las células y las muestras se trataron con tampón RIPAy 1 % de SDS. El sobrenadante preparado se utilizó para el análisis ELISA para detectar y analizar la ADP-ribosa.

[0223] La parte inferior izquierda de la FIG. 2 y el gráfico derecho de la FIG. 4 muestran el aumento de ADP-ribosa como las veces que cambia en células Caki-1 en comparación con el grupo de control, según el tratamiento con péptidos de los ejemplos 7 o 14, lo que indica que, en comparación con el grupo no tratado, el grupo tratado con péptidos mostró un aumento significativo en la cantidad de ADP-ribosa dependiente de la concentración (** p < 0.001).

[0224] Ejemplo experimental 2:Cambio en la viabilidad de las células cancerosas según el tratamiento con péptidos de los ejemplos

[0225] Las células mantienen un equilibrio entre la producción y la degradación de ADP-ribosa, manteniendo al mismo tiempo la homeostasis bioquímica. Mientras tanto, ya que las células cancerosas se dividen y crecen rápidamente de forma continua, si este equilibrio se altera, la supervivencia de las células cancerosas puede verse significativamente afectada en comparación con la de las células normales.

[0226] En referencia a los resultados del ejemplo experimental 1 anterior, cuando las células cancerosas se tratan con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación, la cantidad de ADP-ribosa en las células aumenta significativamente y, por lo tanto, el equilibrio homeostático de las células cancerosas puede verse alterado. Por lo tanto, en el Ejemplo Experimental 2, se midió la viabilidad de las células cancerosas según el tratamiento con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28.

[0227] 2-1. Cambio en la viabilidad de las células U-87MG según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa Tras cultivar 3 * 103células U-87MG en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 |jM, respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez completada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0228] La parte superior izquierda de la FIG. 5 y la parte superior derecha de la FIG. 8 son fotomicrografías representativas de grupos de células U-87MG tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 1, 15, 8 y 22, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células U-87MG, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células U-87MG inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al péptido de penetración celular (CPP) de los ejemplos 15 y 22.

[0229] 2-2. Cambio en la viabilidad de las células H1975 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa Tras cultivar 3 * 103células H1975 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0230] La parte superior derecha de la FIG. 5 y la parte superior izquierda de la FIG. 9 son fotomicrografías representativas de grupos de células H1975 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 2, 16, 9 y 23, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células H1975, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células H1975 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los ejemplos 16 y 23.

[0231] 2-3. Cambio en la viabilidad de las células Aspc-1 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa Tras cultivar 3 * 103células Aspc-1 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0232] La parte superior izquierda de la FIG. 6 y la parte superior derecha de la FIG. 9 son fotomicrografías representativas de grupos de células Aspc-1 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 3, 17, 10 y 24, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células Aspc-1, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células Aspc-1 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los Ejemplos 17 y 24.

[0233] 2-4. Cambio en la viabilidad de las células Hep G2 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa Tras cultivar 3 * 103células Hep G2 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0234] La parte superior derecha de la FIG. 6 y la parte superior izquierda de la FIG. 10 son fotomicrografías representativas de grupos de células Hep G2 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 4, 18, 11 y 25, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células Hep G2, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células Hep G2 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los Ejemplos 18 y 25.

[0236] 2-5. Cambio en la viabilidad de las células MDA-MB-231 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa

[0238] Tras cultivar 3 * 103células MDA-MB-231 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16|jM, respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0240] La parte superior izquierda de la FIG. 7 y la parte superior derecha de la FIG. 10 son fotomicrografías representativas de grupos de células MDA-MB-231 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 5, 19, 12 y 26, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células MDA-MB-231, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células MDA-MB-231 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los Ejemplos 19 y 26.

[0242] 2-6. Cambio en la viabilidad de las células HCT116 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa

[0243] Tras cultivar 3 * 103células HCT116 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0245] La parte superior derecha de La FIG. 7 y la parte superior izquierda de La FIG. 11 son fotomicrografías representativas de grupos de células HCT116 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 6, 20, 13 y 27, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células HCT116, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células HCT116 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los Ejemplos 20 y 27.

[0247] 2-7. Cambio en la viabilidad de las células Caki-1 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa

[0248] Tras cultivar 3 * 103células Caki-1 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 1 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0250] La parte superior izquierda de la FIG. 8 y la parte superior derecha de la FIG. 11 son fotomicrografías representativas de grupos de células Caki-1 tratados con y sin los péptidos de los Ejemplos 7, 21, 14 y 28, respectivamente. En común, se pudo observar que el grupo no tratado con el péptido mostró un rápido crecimiento de células Caki-1, mientras que los grupos tratados con los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación mostraron que las células Caki-1 inhibieron su crecimiento y murieron. En particular, se confirmó que las células cancerosas murieron completamente en los grupos tratados con los péptidos unidos al CPP de los Ejemplos 21 y 28.

[0252] 2-8. Cambio en la viabilidad de las células SNU-1 y OVCAR-3 según el tratamiento con el péptido de unión a ADP-ribosa

[0254] Tras cultivar 3 * 103células SNU-1 u OVCAR-3 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se dejaron sin tratar o se trataron con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28 a una concentración de 16 jM , respectivamente. Posteriormente, se cultivaron las células durante 96 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 j l de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 j l de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0255] Como resultado, se confirmó que la mayoría de las células cancerosas murieron en los grupos tratados con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28, respectivamente, tanto en células SNU-1 como en células OVCAR-3 (FIG.

[0256] 12).

[0258] Ejemplo experimental 3:Cambio en la viabilidad de las células cancerosas mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y fármacos anticancerígenos de baja concentración

[0260] El efecto anticancerígeno, representado por la reducción de la supervivencia de las células cancerosas, y similares efectos, provocado por los fármacos anticancerígenos existentes, puede verse potenciado por la señalización de ADP-ribosa. Por lo tanto, se esperaba que, si se induce la acumulación de ADP-ribosa durante el tratamiento de células cancerosas con los fármacos anticancerígenos existentes, se observaría un efecto anticancerígeno sinérgico incluso si las células se tratan con los fármacos anticancerígenos existentes a una concentración inferior a la requerida. Como se confirmó en el Ejemplo Experimental 1, los péptidos de la presente divulgación aumentaron significativamente la cantidad de ADP-ribosa en células cancerosas, y, por lo tanto, en el Ejemplo Experimental 3, se intentó confirmar si se observaba un efecto anticancerígeno sinérgico tras el tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos y un fármaco anticancerígeno de baja concentración.

[0262] 3-1. Cambio en la viabilidad de las células U-87MG mediante el tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos y bevacizumab de baja concentración

[0264] Tras cultivar 3 * 103células U-87MG en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con 18 mM de bevacizumab, solo o en combinación con los péptidos de los Ejemplos 1 a 14, a una concentración de 0.2, 1 u 8 pM. A continuación, las células se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, y se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0266] Como resultado, se confirmó que cuando las células U-87MG se trataron solo con bevacizumab, aproximadamente el 49 % de todas las células cancerosas fueron viables, pero en todos los casos en que se trataron con bevacizumab y los péptidos de los Ejemplos en combinación, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con una concentración baja de bevacizumab (* p < 0.05, ** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen izquierda de la FIG. 13).

[0268] 3-2. Cambio en la viabilidad de las células H1975 mediante el tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos y osimertinib a baja concentración

[0270] Tras cultivar 3 * 103células H1975 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con osimertinib 1 nM, solo o en combinación con los péptidos de los Ejemplos 1 a 14, a una concentración de 0.2, 1 u 8 pM. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Tras completar la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0272] Como resultado, se confirmó que, al tratar las células H1975 con osimertinib 1 nM solo, aproximadamente el 49 % de todas las células cancerosas eran viables, pero en todos los casos en que se trataron con osimertinib y los péptidos de los Ejemplos en combinación, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con una baja concentración de osimertinib (* p < 0.05, ** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen derecha de la FIG. 13).

[0274] 3-3. Cambio en la viabilidad de las células Aspc-1 mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y gemcitabina a baja concentración.

[0276] Tras cultivar 3 * 103células Aspc-1 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con gemcitabina 1 nM, sola o en combinación con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28, a una concentración de 0.2, 1 u 8 pM. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0277] Como resultado, cuando las células Aspc-1 se trataron solo con gemcitabina, aproximadamente el 50 % de todas las células cancerosas sobrevivieron, pero en todos los casos en que se trataron con gemcitabina y los péptidos de los Ejemplos en combinación, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con una concentración baja de gemcitabina (* p < 0.05, ** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen izquierda de la FIG. 14).

[0279] 3-4. Cambio en la viabilidad de las células MDA-MB-231 mediante el tratamiento combinado de los péptidos de los Ejemplos y docetaxel a baja concentración

[0280] Tras cultivar 3 * 103células MDA-MB-231 en una placa de 96 pocilios durante 24 horas a 37 °C y 5%de CO2, las células se trataron con docetaxel 50 pM solo o en combinación con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28 a una concentración de 0.2, 1 u 8 pM. A continuación, las células se cultivaron durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, y se dejó reaccionar durante 1 hora. Tras completar la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0282] Como resultado, cuando las células MDA-MB-231 se trataron solo con docetaxel, aproximadamente el 52 % de las células cancerosas sobrevivieron, sin embargo, en todos los casos en que se trataron con docetaxel y los péptidos de los ejemplos en combinación, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con una concentración baja de docetaxel (* p < 0.05, ** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen derecha de la FIG. 14).

[0284] Ejemplo experimental 4:Cambio en la viabilidad de las células cancerosas mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y radiación

[0286] Se espera que la radioterapia tenga un efecto anticancerígeno mediante la muerte celular al dañar el material genético, sin embargo, para contrarrestar el efecto anticancerígeno, las células cancerosas reparan continuamente las cadenas de ADN mediante un proceso conocido como ADP-ribosilación. Sin embargo, se esperaba que si la ADP-ribosa, que aumenta solo temporalmente debido a la acción reparadora, se acumula continuamente mediante la irradiación, se produciría un efecto anticancerígeno sinérgico incluso con una dosis tolerable de radiación. Como se confirmó en el Ejemplo experimental 1, los péptidos de los Ejemplos de la presente divulgación aumentaron significativamente la cantidad de ADP-ribosa en las células cancerosas, y, por lo tanto, en el Ejemplo experimental 4, los presentes inventores intentaron confirmar si se observaría un efecto anticancerígeno sinérgico al momento del tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y una dosis tolerable de radiación.

[0288] 4-1. Cambio en la viabilidad de las células H1975 mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y una dosis tolerable de radiación

[0290] Tras cultivar 3 * 103células H1975 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con una dosis de radiación única de 2 Gy, sola o en combinación con 1.6 o 3.2 pM de los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Tras completar la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0291] Como resultado, se confirmó que, al tratar las células H1975 con solamente con una dosis de radiación de 2 Gy, aproximadamente el 76 % de las células cancerosas mostraron tolerancia a la supervivencia en comparación con el grupo no tratado, sin embargo, en todos los casos de tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con la irradiación a una dosis tolerable (** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen izquierda de la FIG. 15).

[0293] 4-2. Cambio en la viabilidad de las células Aspc-1 mediante el tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos y la dosis tolerable de radiación.

[0295] Tras cultivar 3 * 103células Aspc-1 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con una dosis de radiación única de 2 Gy, sola o en combinación con 1.6 o 3.2 pM de los péptidos de las SEQ ID NO: 1 a 14. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Una vez finalizada la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0296] Como resultado, se confirmó que cuando las células Aspc-1 se trataron con una dosis de 2 Gy de radiación sola, aproximadamente el 86 % de las células cancerosas mostraron tolerancia a la supervivencia en comparación con el grupo no tratado, sin embargo, en todos los casos de tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con la irradiación a una dosis tolerable (** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen derecha de la FIG. 15).

[0298] 4-3. Cambio en la viabilidad de las células MDA-MB-231 mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y una dosis tolerable de radiación

[0300] Tras cultivar 3 * 103células MDA-MB-231 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, las células se trataron con una dosis de 2 Gy de radiación, sola o en combinación con 1.6 o 3.2 pM de los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO2, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Tras completar la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0301] Como resultado, se confirmó que, al tratar las células MDA-MB-231 con una dosis de radiación de 2 Gy únicamente, aproximadamente el 86 % de las células cancerosas mostraron tolerancia a la supervivencia en comparación con el grupo no tratado, sin embargo, en todos los casos de tratamiento combinado con los péptidos de los ejemplos, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con la irradiación a una dosis tolerable (** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen izquierda de la FIG. 16).

[0302] 4- 4. Cambio en la viabilidad de las células Caki-1 mediante el tratamiento combinado de péptidos de los Ejemplos y una dosis tolerable de radiación

[0303] Tras cultivar 3 * 103 células Caki-1 en una placa de 96 pocillos durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>, las células se trataron con una dosis de 2 Gy de radiación, sola o en combinación con 1.6 o 3.2 pM de los péptidos de las SEQ ID NO: 15 a 28. Posteriormente, se cultivaron las células durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>, y se añadieron 10 pl de reactivo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio a cada pocillo, tras lo cual se dejó reaccionar durante 1 hora. Tras completar la reacción, se retiró el reactivo, se añadieron 200 pl de dimetilsulfóxido a cada pocillo y se midió la absorbancia para confirmar la viabilidad celular.

[0304] Como resultado, se confirmó que, al tratar las células Caki-1 con una dosis de radiación de 2 Gy únicamente, aproximadamente el 96 % de las células cancerosas mostraron tolerancia a la supervivencia en comparación con el grupo no tratado, sin embargo, en todos los casos de tratamiento combinado con los péptidos de los Ejemplos, la viabilidad de las células cancerosas se redujo significativamente incluso con la irradiación a una dosis tolerable (** p < 0.001, *** p < 0.001; imagen derecha de la FIG. 16).

[0305] Ejemplo experimental 5:Comparación y verificación de la eficacia y el efecto anticancerígeno según la vía de administración de los péptidos de los Ejemplos utilizando modelos animales

[0306] 5- 1. Cambio en el volumen tumoral en modelos animales inyectados subcutáneamente con péptidos de los Ejemplos

[0307] Se inocularon células Aspc-1 (1 * 107) en el flanco posterior de ratones desnudos BALB/c de 5 semanas de edad, y los ratones se dividieron en 15 grupos: el grupo de control sin tratamiento (control) y grupos inyectados subcutáneamente con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28. Cuando los tumores alcanzaron un volumen aproximado de 150 mm3, se inyectaron subcutáneamente los péptidos de cada Ejemplo a una dosis de 20 mg/kg tres veces por semana. El tamaño del tumor se midió con un calibrador digital y los resultados de los cambios en el volumen tumoral se compararon por grupo.

[0308] Como resultado, se confirmó que, tras la dosis final, el grupo de control mostró un gran crecimiento tumoral con un volumen final de aproximadamente 3136 mirP, sin embargo, todos los grupos inyectados subcutáneamente con los péptidos de los Ejemplos 15 a 28 mostraron una inhibición significativa del crecimiento tumoral (** p < 0.001; FIG. 17).

[0309] La FIG. 18 muestra tumores representativos obtenidos tras la autopsia en todos los grupos, y se observó que, en comparación con el grupo de control, el crecimiento del tejido tumoral se inhibió significativamente en todos los grupos inyectados subcutáneamente con los péptidos de los Ejemplos de la presente divulgación.

[0310] 5-2. Cambio en el volumen tumoral en modelos animales inyectados oralmente con péptidos de los Ejemplos Se inocularon células Aspc-1 (1 * 107) en el flanco posterior de ratones desnudos BALB/c de 5 semanas de edad, y los ratones se dividieron en 15 grupos: el grupo de control sin tratamiento (control) y grupos inyectados oralmente con los péptidos de los Ejemplos 1 a 14. Cuando los tumores alcanzaron un volumen aproximado de 150 mm3, se inyectaron oralmente los péptidos de cada Ejemplo a una dosis de 20 mg/kg cinco veces por semana. El tamaño del tumor se midió con un calibrador digital y los resultados de los cambios en el volumen tumoral se compararon por grupo.

[0311] Como resultado, se confirmó que, tras la dosis final, el grupo de control mostró un gran crecimiento tumoral con un volumen final de aproximadamente 3517 mirP, sin embargo, todos los grupos inyectados oralmente con los péptidos de los Ejemplos 1 a 14 mostraron una inhibición significativa del crecimiento tumoral (** p < 0.001; FIG. 19).

[0312] La FIG. 20 muestra tumores representativos obtenidos tras la autopsia en todos los grupos, y se observó que, en comparación con el grupo de control, el crecimiento del tejido tumoral se inhibió significativamente en todos los grupos inyectados oralmente con los péptidos de los Ejemplos de la presente divulgación.

[0313] Ejemplo experimental 6:Confirmación de la citotoxicidad de los péptidos de los Ejemplos en células normales Posteriormente, se confirmó adicionalmente si los péptidos de la presente divulgación mostraron citotoxicidad incluso en células normales. Como células normales para la prueba, se utilizaron CCD-18Co, un fibroblasto de colon humano, y HDPC, una célula de papila dérmica humana. Además, el péptido de la SEQ ID NO: 7 se utilizó como péptido representativo de los ejemplos de la presente divulgación.

[0314] Primero, se inocularon 5 * 103 células de cada célula normal en una placa de 96 pocilios y se cultivaron en medio DMEM durante 24 horas a 37 °C y 5 % de CO<2>. Los pocillos respectivos se dividieron en un grupo sin tratar con el péptido y grupos tratados con el péptido de la SEQ ID NO: 7 (25, 50 y 100<j>M, respectivamente) y se analizaron.

[0316] Como resultado del experimento, no se encontró ninguna diferencia significativa entre todos los grupos tratados con el péptido (24, 48 o 72 horas después del tratamiento) y el grupo de control sin tratar (FIGS. 21 y 22). Por lo tanto, se confirmó que los péptidos de los ejemplos de la presente divulgación exhibieron una fuerte actividad anticancerígena en células cancerosas, pero no mostraron citotoxicidad en células normales, por lo que tuvieron un efecto notablemente excelente como uso anticancerígeno.

[0318] A partir de la descripción anterior, los expertos en la materia a la que se refiere la presente divulgación comprenderán que la presente divulgación puede implementarse en otras formas específicas sin alterar sus características esenciales. En este sentido, debe entenderse que las realizaciones descritas anteriormente son ilustrativas en todos los aspectos y no restrictivas.

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Un péptido de unión a adenosina difosfato (ADP)-ribosa que tiene:

cualquier secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1 a 14.

2. El péptido de unión a ADP-ribosa de la reivindicación 1, que comprende, además:

un péptido que penetra en las células en el extremo Terminal N, el extremo terminal C o ambos extremos terminales.

3. El péptido de unión a ADP-ribosa de la reivindicación 2, en el que el péptido que penetra en las células es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en TAT, maurocalcina, penetratina, péptidos derivados de poliarginina, Antennapedia, transportano, VP22 y Hph-1, poliarginina, R11(R9), Pep-1, HP4, LAH4, vetofusing-1, péptidos basados en secuencias señal y péptidos anfipáticos.

4. El péptido de unión a ADP-ribosa de la reivindicación 2, en el que el péptido tiene cualquier secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 15 a 28.

5. Un polinucleótido que codifica el péptido de unión a ADP-ribosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Un vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 5.

7. Un transformante que comprende el polinucleótido de la reivindicación 5.

8. Una composición farmacéutica que comprende el péptido de unión a ADP-ribosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo, para uso en la prevención o el tratamiento de un cáncer.

9. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8, en la que el cáncer es al menos un tumor sólido seleccionado del grupo que consiste en cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico y cáncer de ovario.

10. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8 o la reivindicación 9, en la que la composición farmacéutica se administra por vía subcutánea u oral.

11. Una composición farmacéutica que comprende un péptido de unión a ADP-ribosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo, para uso como un adyuvante anticancerígeno para mejorar la reactividad con un segundo fármaco anticancerígeno en el tratamiento o prevención de un cáncer.

12. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 11, en la que el segundo fármaco anticancerígeno es un fármaco anticancerígeno citotóxico, un fármaco anticancerígeno dirigido o una combinación de los mismos.

13. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 11 o la reivindicación 12, en la que el cáncer al que se dirige el segundo fármaco anticancerígeno es al menos un tumor sólido seleccionado del grupo que consiste en cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico y cáncer de ovario.

14. Una composición farmacéutica que comprende un péptido de unión a ADP-ribosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo, para uso como un adyuvante anticancerígeno para mejorar la reactividad a la radioterapia anticancerígena en el tratamiento o prevención de un cáncer;

opcionalmente en la que el cáncer objetivo para la radioterapia anticancerígena es al menos un tumor sólido seleccionado del grupo que consiste en cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de riñón, cáncer gástrico y cáncer de ovario.

15. Una composición farmacéutica para prevenir o tratar un cáncer, que comprende

un péptido de unión a ADP-ribosa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

opcionalmente en la que la composición farmacéutica comprende además un segundo fármaco anticancerígeno como principio activo.