ES3043708T3

ES3043708T3 - Lectin for use in methods for treating a sequela of coronavirus infection

Info

Publication number: ES3043708T3
Application number: ES21788894T
Authority: ES
Inventors: Fisher, Jr; Rosalia De Necochea Campion; Steven P Larosa; Annette Marleau; Michael Jacobs
Original assignee: Aethlon Medical Inc
Current assignee: Aethlon Medical Inc
Priority date: 2020-04-12
Filing date: 2021-04-08
Publication date: 2025-11-25
Anticipated expiration: 2041-04-08
Also published as: US12409260B2; US20230158222A1; AU2021256402A1; CA3178687A1; EP4136453B1; EP4647092A3; WO2021211351A1; EP4136453C0; IL297109A; EP4647092A2; EP4136453A1; JP2023522133A; EP4136453A4

Abstract

Los dispositivos y métodos de la presente invención se pueden utilizar para capturar y eliminar nanopartículas y/o exosomas mediadores de COVID-19 asociados con COVID-19 o enfermedades similares del sistema circulatorio de pacientes que lo necesiten, incluidos aquellos con síndrome post-COVID-19 o secuelas similares posteriores a la enfermedad, los llamados síntomas de "larga duración" de COVID-19 o enfermedades similares. La presente invención beneficia a los pacientes al proporcionar métodos extracorpóreos basados en lectina para unir y eliminar físicamente viriones SA RS-C7oV-2, o fragmentos de los mismos, del sistema circulatorio. También se proporcionan métodos extracorpóreos basados en lectina para unir y eliminar físicamente nanopartículas mediadoras de COVID-19 no virales. También se divulgan en el presente documento dispositivos y métodos para reducir los niveles de biomarcadores y marcadores de morbilidad/mortalidad de enfermedades como COVID-19 y enfermedades similares, incluidas citocinas, como IL-6, troponina T y dímero D. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Lectina para su uso en métodos para tratar una secuela de la infección por coronavirus

[0003] REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

[0004] Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la solicitud de patente provisional estadounidense n° 63/008.786, presentada el 12 de abril de 2020.

[0005] CAMPO

[0006] La presente divulgación se refiere al campo de las metodologías y dispositivos terapéuticos para tratar o inhibir infecciones víricas incluyendo infecciones por coronavirus, infecciones por beta-coronavirus o infecciones por COVID-19, incluyendo infecciones por variantes de COVID-19, y la secuela asociada con dichas infecciones. La invención se expone en el conjunto adjunto de reivindicaciones.

[0007] ANTECEDENTES

[0008] La pandemia de coronavirus de 2019-20 es una pandemia en curso de la enfermedad de coronavirus 2019 (COVID-19), provocada por el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave 2 (SARS-CoV-2). El virus SARS-CoV-2 se propaga principalmente durante un contacto estrecho y por pequeñas gotitas producidas cuando los infectados tosen, estornudan o hablan. La gente también puede infectarse al tocar una superficie contaminada y entonces su cara. El virus puede sobrevivir sobre superficies durante hasta 72 horas. Es lo más contagioso durante los primeros tres días tras la aparición de síntomas, aunque la propagación puede ser posible antes de que aparezcan síntomas y en fases posteriores de la enfermedad. Los síntomas comunes incluyen fiebre, tos y dificultad para respirar. Las complicaciones pueden incluir neumonía, síndrome de dificultad respiratoria aguda, complicaciones cardiacas, complicaciones neurológicas, choque séptico y muerte. Las vacunas solo se han aprobado recientemente. La aparición de muchas variantes de SARS-CoV-2 ha conducido a preocupaciones relativas a la eficacia de las vacunas actuales.

[0009] La pandemia de COVID-19 ha conducido a una pérdida significativa de vidas humanas. Aproximadamente el 15-20% de los pacientes desarrollan síndrome de dificultad respiratoria grave o choque séptico. El tratamiento de estos pacientes enfermos de manera crítica es particularmente difícil, requiriendo sedación, oxígeno suplementario y respiradores de soporte vital. Además, algunos pacientes presentan síntomas persistentes incluso tras la aclaración del virus. Se notifica que estos denominados pacientes “de larga duración” con síndrome post-COVID-19 tienen una secuela debilitante que incluye aquellas que afectan a los sistemas pulmonar, cardiaco y neurológico. La morbilidad y la mortalidad asociadas con el COVID-19 son máximas en las personas mayores y entre la gente con comorbilidades.

[0010] Por consiguiente, existe una necesidad urgente de intervenciones terapéuticas, particularmente para pacientes enfermos de manera crítica con o que corran un riesgo grave de enfermedad por COVID-19 avanzada.

[0011] Los documentos WO2010/065765 A2 y WO2009/023332 A2 dan a conocer dispositivos extracorpóreos que comprenden un cartucho de fibras huecas que comprende aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), en los que sangre o plasma puede fluir a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas.

[0012] Bittneret al(“Extracorporeal Virus Elimination for the Treatment of Severe Ebola Virus Disease - First Experience with Lectin Affinity Plasmapheresis”) dan a conocer un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (GNA), comprendiendo el dispositivo extracorpóreo un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina.

[0013] Kochet al.(“Lectin Affinity Plasmapheresis for Middle East Respiratory Syndrome-Coronavirus and Marburg Virus Glycoprotein Elimination”) dan a conocer una lectina (GNA), comprendida en un dispositivo extracorpóreo, para su uso en el tratamiento o la inhibición de una infección por coronavirus (Mers-CoV).

[0014] RONCO CLAUDIOET AL:“Coronavirus Epidemic and Extracorporeal Therapies in Intensive Care: si vis pacem para bellum”, revisan terapias extracorpóreas para tratar COVID-19.

[0015] Ninguno de los documentos da a conocer un uso en el tratamiento o la inhibición de coagulopatía asociada a COVID-19 (CAC).

[0016] SUMARIO

[0017] Las referencias a métodos de tratamiento mediante métodos de terapia o de diagnósticoin vivode esta descripción deben interpretarse como referencias a compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos para su uso en aquellos métodos. Tales métodos no forman parte de la invención reivindicada.

[0018] Los aspectos de la presente divulgación descritos en el presente documento incluyen dispositivos y métodos para la captura y la eliminación de partículas víricas de coronavirus, beta-coronavirus o COVID-19, incluyendo partículas víricas de la variante COVID-19, o nanopartículas subcelulares relacionadas con las mismas, por ejemplo, exosomas, o ambas del sistema circulatorio de un sujeto, que está o se ha infectado con tal virus o que presenta una secuela resultante de tales infecciones o ambos, incluso cuando el virus en circulación en dicho sujeto está disminuido, en comparación con la infección inicial de dicho sujeto, o ausentes completamente. Estas nanopartículas subcelulares pueden incluir partículas víricas o componentes de las mismas, u otras moléculas tales como citocinas, quimiocinas, o miARN que provocan o están asociados con una infección por coronavirus o un síntoma o una secuela de la misma tal como un trastorno de coagulación o hipoxia. Algunas de las alternativas expuestas en el presente documento benefician directamente a pacientes con COVID-19, que o bien tienen una infección en curso o bien tras el aclaramiento de la infección, proporcionando métodos extracorpóreos basados en lectina, que se unen a y eliminan físicamente las nanopartículas subcelulares, tales como exosomas, o partículas víricas o ambas, de la sangre del paciente tratando o inhibiendo de ese modo la infección por COVID-19 o un síntoma o una secuela de la misma. Algunas alternativas descritas en el presente documento proporcionan métodos extracorpóreos basados en lectina para unirse a y eliminar físicamente nanopartículas mediadoras de COVID-19 no víricas, tales como exosomas, del sistema circulatorio, reduciendo de ese modo la infección por COVID-10 mediada por exosomas o secuelas de la misma y mejorando los niveles o las cantidades de recuento de linfocitos totales o para reducir la gravedad de la enfermedad o la aparición de linfopenia. Para pacientes afectados gravemente por o que corren un riesgo alto de enfermedad por COVID-19 grave debido a una infección por SARS-CoV, los dispositivos y métodos descritos en el presente documento pueden usarse para reducir el tiempo pasado en respiradores mecánicos, reducir la probabilidad de complicaciones cardiacas o coagulación sanguínea, reducir la probabilidad de fallo multiorgánico, reducir la probabilidad de enfermedad renal aguda, sepsis y/u otras complicaciones. Realizaciones adicionales se refieren de manera más general al uso de uno o más de los métodos extracorpóreos basados en lectina, que se unen a y eliminan físicamente las nanopartículas subcelulares, tales como exosomas, o partículas víricas o ambas, de la sangre de un paciente para tratar, inhibir, reducir o mejorar una coagulopatía o hipoxia en dicho paciente, preferiblemente pero no necesariamente un paciente que está infectado o se ha infectado con virus, por ejemplo, COVID-19. La coagulopatía es un estado en el que el sistema de coagulación se activa y se forma fibrina dentro de los vasos sanguíneos. Este estado puede provocar un flujo sanguíneo y una oxigenación de tejidos alterados.

[0020] Los aspectos de los métodos descritos en el presente documento pueden usarse para inhibir la aparición de una coagulopatía, tal como una coagulopatía asociada con COVID-19, o la cantidad o el nivel de un marcador de la misma, tal como la cantidad o el nivel de dímero D, proteína C reactiva y/o troponina T. Por ejemplo, para pacientes con COVID-19 afectados gravemente que tienen inflamación sistémica y/o compuestos que contribuyen a la coagulopatía, los dispositivos y métodos descritos en el presente documento pueden usarse para suprimir o reducir la producción o presencia de quimiocinas y/o citocinas en circulación tales como IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de las mismas. Opcionalmente, una medida de los niveles o las cantidades de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de las mismas, en una muestra de plasma o sangre del paciente se hace antes de realizar el método extracorpóreo basado en lectina y tras haber completado el método extracorpóreo basado en lectina (por ejemplo, a los 4 días o más tras la terapia).

[0022] La presente divulgación se refiere también a métodos para usar lectinas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum(denominada en el presente documento cianovirina)) que se unen a partículas víricas de coronavirus, beta-coronavirus o COVID-19, incluyendo partículas víricas de la variante COVID-19, o nanopartículas subcelulares relacionadas con las mismas, por ejemplo, exosomas, o ambas, en particular viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos, y nanopartículas subcelulares no víricas, tales como exosomas, relacionadas con los mismos para eliminarlos de sangre o plasma infectados en un entorno extracorpóreo. Por consiguiente, algunas alternativas proporcionan un método para tratar o inhibir una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un individuo que comprende obtener sangre o plasma del individuo, hacer pasar la sangre o el plasma a través de una membrana de filtro, preferiblemente una membrana de fibras huecas porosa, en el que moléculas de lectina (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)están inmovilizadas dentro de la porción exterior de la membrana, preferiblemente en una porción porosa de la membrana, recogiendo de ese modo la sangre o el plasma que pasan a través o ambos y reinfundiendo la sangre o el plasma que pasan a través o ambos al individuo.

[0024] El paso de la sangre a través de las fibras huecas que tienen lectina inmovilizada, por ejemplo, provoca que los viriones de SARS-CoV-2 y fragmentos de los mismos y nanopartículas subcelulares no víricas, tales como exosomas, que contienen glicoproteínas, se unan a las lectinas reduciendo de ese modo la carga vírica y la cantidad de nanopartículas subcelulares no víricas, tales como exosomas, en el efluente. En algunas realizaciones, lectinas que se unen a proteínas de la envoltura vírica, por ejemplo, la proteína espicular, de muchos subtipos, variantes o mutantes de coronavirus se emplean en los dispositivos descritos en el presente documento. Los métodos descritos en el presente documento reducen de manera efectiva el número de viriones de SARS-CoV-2 y fragmentos de los mismos y nanopartículas subcelulares no víricas, tales como exosomas, en la sangre y permiten rápidamente a un paciente recuperarse de la infección o del síntoma o de la secuela de la misma.

[0025] Por tanto, un objeto de la divulgación es proporcionar un método para reducir la carga vírica de COVID-19 en la sangre de un individuo infectado con COVID-19. En una realización, viriones de COVID-19 o fragmentos de proteína de los mismos o combinaciones de los mismos se eliminan de la sangre de un individuo infectado con el virus. Opcionalmente, una medida de la exposición vírica o del nivel de virus en circulación en el individuo (por ejemplo, tal como se detecta en sangre o plasma) se hace tal como midiendo los niveles de ARN de SARS-CoV-2 en plasma y se detectan muestras nasofaríngeas (por ejemplo, aisladas a partir de un hisopo nasal) del paciente, por ejemplo, antes de realizar cada método extracorpóreo basado en lectina, cada 2 horas durante la terapia y/o tras haberse completado la terapia.

[0027] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un método para reducir la carga vírica de COVID-19 o la cantidad de nanopartículas subcelulares, tales como exosomas, o ambas en la sangre o el plasma de un paciente que está o se ha infectado con COVID-19 mediante la circulación extracorpórea de la sangre del paciente a través de un cartucho que comprende fibras huecas que contienen lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que tienen afinidad por las glicoproteínas de COVID-19 víricas u otras nanopartículas subcelulares, tales como exosomas. Preferiblemente, dicho paciente se identifica, diagnostica o selecciona como uno que tiene una infección por COVID-19 o que ha tenido una infección por COVID-19 antes de la implementación de este método y, opcionalmente, se mide la carga vírica de COVID-19 o un marcador de infección por COVID-19 en dicho sujeto, por ejemplo, en una muestra biológica tal como sangre, fluido nasal o saliva, antes de o tras la implementación del método o ambos. En algunas realizaciones, el paciente que recibe el método se selecciona como uno que tiene una cantidad disminuida, reducida o ninguna cantidad de partículas víricas de COVID-19 en circulación en la sangre o el plasma, en comparación con una infección inicial, pero dicho paciente presenta una secuela resultante de la infección por COVID-19, por ejemplo, un paciente “de larga duración” o un paciente que tiene una secuela resultante de la infección por COVID-19 pero ninguna cantidad o una cantidad despreciable de partículas víricas de COVID-19 en el plasma o la sangre del paciente.

[0029] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un método para reducir la cantidad o el nivel de IL-1, IL-6, IL-10, iL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en la sangre o el plasma de un paciente que está preferiblemente infectado con un virus o se ha infectado con un virus, por ejemplo, COVID-19 mediante la circulación extracorpórea de la sangre del paciente a través de un cartucho que comprende fibras huecas que contienen lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que tienen afinidad por las glicoproteínas de COVID-19 víricas u otras nanopartículas subcelulares, tales como exosomas. Preferiblemente, dicho paciente se identifica, diagnostica o selecciona como uno que tiene una infección por COVID-19 o que ha tenido una infección por COVID-19 antes de la implementación de este método y, opcionalmente, se mide la carga vírica de COVID-19 o un marcador de infección por COVID-19, o los niveles o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en dicho sujeto, por ejemplo, en una muestra biológica tal como sangre, fluido nasal (por ejemplo, aislado a partir de un hisopo nasal) o saliva, antes de o tras la implementación del método o ambos. En algunas realizaciones, el paciente que recibe el método se selecciona como uno que tiene una cantidad disminuida, reducida o ninguna cantidad de partículas víricas de COVID-19 en circulación en la sangre o el plasma, en comparación con una infección inicial, pero dicho paciente presenta una secuela resultante de la infección por COVID-19, por ejemplo, un paciente “de larga duración” o un paciente que tiene una secuela resultante de la infección por COVID-19 pero ninguna cantidad o una cantidad despreciable de partículas víricas de COVID-19 en el plasma o la sangre del paciente.

[0031] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un método para reducir el biomarcador dímero D en la sangre o el plasma de un paciente, preferiblemente pero no necesariamente un paciente que está o se ha infectado con un virus, por ejemplo, COVID-19 mediante la circulación extracorpórea de la sangre del paciente a través de un cartucho que comprende fibras huecas que contienen lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que tienen afinidad por las glicoproteínas de COVID-19 víricas u otras nanopartículas subcelulares, tales como exosomas. Preferiblemente, dicho paciente se identifica, diagnostica o selecciona como uno que tiene una infección por COVID-19 o que ha tenido una infección por COVID-19 o que necesita una terapia, con niveles de dímero D elevados (por ejemplo, un paciente que tiene una coagulopatía o que corre el riesgo de tener una coagulopatía) antes de la implementación de este método y, opcionalmente, se mide la carga vírica de COVID-19 o un marcador de infección por COVID-19, o los niveles de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP) o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en dicho sujeto, por ejemplo, en una muestra biológica tal como sangre, fluido nasal (por ejemplo, un aislado a partir de un hisopo nasal) o saliva, antes de o tras la implementación del método o ambos. En algunas realizaciones, el paciente que recibe el método se selecciona como uno que tiene una cantidad disminuida, reducida o ninguna cantidad de partículas víricas de COVID-19 en circulación en la sangre, en comparación con una infección inicial, pero dicho paciente presenta una secuela resultante de la infección por COVID-19, por ejemplo, un paciente “de larga duración” o un paciente que tiene una secuela resultante de la infección por COVID-19 pero ninguna cantidad o una cantidad despreciable de partículas víricas de COVID-19 en el plasma o la sangre del paciente.

[0033] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un método para reducir el biomarcador troponina T en el plasma o la sangre de un paciente que está preferiblemente pero no necesariamente infectado con un virus o se ha infectado con un virus, por ejemplo, COVID-19 mediante la circulación extracorpórea de la sangre del paciente a través de un cartucho que comprende fibras huecas que contienen lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que tienen afinidad por las glicoproteínas de COVID-19 víricas u otras nanopartículas subcelulares, tales como exosomas. Preferiblemente, dicho paciente se identifica, diagnostica o selecciona como uno que tiene una infección por COVID-19 o que ha tenido una infección por COVID-19 antes de la implementación de este método y, opcionalmente, se mide la carga vírica de COVID-19 o un marcador de infección por COVID-19, o los niveles o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP) o dímero D, o cualquier combinación de los mismos en dicho sujeto, por ejemplo, en una muestra biológica tal como sangre, fluido nasal (por ejemplo, aislado a partir de un hisopo nasal) o saliva, antes de o tras la implementación del método o ambos. En algunas realizaciones, el paciente que recibe el método se selecciona como uno que tiene una cantidad disminuida, reducida o ninguna cantidad de partículas víricas de COVID-19 en circulación en la sangre o el plasma, en comparación con una infección inicial, pero dicho paciente presenta una secuela resultante de la infección por COVID-19, por ejemplo, un paciente “de larga duración” o un paciente que tiene una secuela resultante de la infección por COVID-19 pero ninguna cantidad o una cantidad despreciable de partículas víricas de COVID-19 en el plasma o la sangre del paciente.

[0035] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un método para reducir nanopartículas subcelulares, tales como exosomas, que comprenden miR-424-5p (miR-424), miR-16-2-3p (miR-16) o ambos en el plasma o la sangre de un paciente que está, preferiblemente, infectado con un virus o se ha infectado con un virus, por ejemplo, COVID-19, mediante la circulación extracorpórea de la sangre del paciente a través de un cartucho que comprende fibras huecas que contienen lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que tienen una afinidad por nanopartículas subcelulares, tales como exosomas, en particular exosomas que comprenden miR-424, miR-16 o ambos. Preferiblemente, dicho paciente se identifica, diagnostica o selecciona como uno que tiene una infección por COVID-19 o que ha tenido una infección por COVID-19 antes de la implementación de este método y, opcionalmente, se mide la carga vírica de COVID-19 o un marcador de infección por COVID-19, o los niveles o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos o la cantidad de exosomas que comprenden miR-424, miR-16 o ambos, en dicho sujeto, por ejemplo, en una muestra biológica tal como sangre, fluido nasal (por ejemplo, aislado a partir de un hisopo nasal) o saliva, antes de o tras la implementación del método o ambos. En algunas realizaciones, el paciente que recibe el método se selecciona como uno que tiene una cantidad disminuida, reducida o ninguna cantidad de partículas víricas de COVID-19 en circulación en la sangre, en comparación con una infección inicial, pero dicho paciente presenta una secuela resultante de la infección por COVID-19, por ejemplo, un paciente “de larga duración” o un paciente que tiene una secuela resultante de la infección por COVID-19 pero ninguna cantidad o una cantidad despreciable de partículas víricas de COVID-19 en el plasma o la sangre del paciente.

[0037] Otro objeto de la presente divulgación es proporcionar un aparato que comprende fibras huecas, estando la superficie exterior de las fibras en proximidad estrecha con lectinas inmovilizadas (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)para su uso en la eliminación de COVID-19 y/o glicoproteínas no víricas u otras nanopartículas subcelulares de un sujeto.

[0039] BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0041] Además de las características descritas anteriormente, características y variaciones adicionales resultarán fácilmente evidentes a partir de las siguientes descripciones de los dibujos y las realizaciones a modo de ejemplo. Debe entenderse que estos dibujos representan realizaciones típicas y no se pretende que limiten el alcance.

[0042] La FIG. 1 es una ilustración esquemática de una sección transversal longitudinal de un cartucho de afinidad.

[0043] La FIG. 2 es una ilustración esquemática de una sección transversal horizontal en el plano 2 en la FIG. 1.

[0045] La FIG. 3 es una ilustración de un canal de la FIG. 2. Una estructura de membrana de fibras huecas 40 se compone de una sección tubular que comprende una membrana de ultrafiltración relativamente compacta 42 y una porción exterior relativamente porosa 44 en la que pueden inmovilizarse moléculas de afinidad 46, tal como lectinas.

[0046] La FIG. 4 es una representación gráfica de la captura de glicoproteínas de la espícula 1 (S1) de SARS-CoV-2 con un cartucho de afinidad por lectina. Se realizaron experimentosin vitrohaciendo circular de manera continua una disolución con adición conocida de glicoproteína S1 de SARS-COV-2 por un dispositivo de membrana de fibras huecas porosa, habiéndose inmovilizado moléculas de lectina que consisten en aglutinina deGalanthus nivalis(GNA) dentro de la porción exterior porosa de la membrana. Brevemente, se hicieron circular 10 ml de una disolución de 1 microgramo/ml de S1 de SARS-COV-2 en solución salina tamponada con fosfato por un dispositivo que contenía 0,7 g de resina de afinidad de GNA a una tasa de flujo de 50 ml/min. La tasa de captura de S1 vírica, expresada como un porcentaje de S1 que queda en disolución frente al tiempo, se estableció eliminando muestras de fluido a intervalos de tiempo definidos. El control consistía en S1 mantenida en la mesa de trabajo (es decir, que no se hacía pasar a través del dispositivo). Los resultados muestran el aclaramiento de glicoproteína de SARS-CoV-2 de la disolución mediante el dispositivo de captura de afinidad por lectina.

[0048] La FIG. 5 representa la ausencia de ARN de SARS-CoV-2 detectable en un paciente. Una PCR de control positiva usando moldes de ácido nucleico de SARS-CoV-2 demuestra la amplificación de la proteína de la espícula (S) de SARS-CoV-2, proteína de nucleocápside (N) y secuencias ORF1 ab. La misma reacción realizada con una muestra de plasma del paciente no dio como resultado ninguna amplificación para ninguno de los tres genes de SARS-CoV-2. La amplificación concurrente de un gen de control de ARNasa P (ya sea como parte del molde de control o como ARN aislado a partir de la muestra de plasma) confirmó la integridad del ácido nucleico del ARN constituyente en las muestras antes de y durante la reacción. Por consiguiente, este paciente no tenía partículas víricas de COVID-19 en circulación.

[0050] La FIG. 6A representa la disminución en la concentración de nanopartículas en plasma de paciente sin procesar tras terapia con Hemopurifier®. Pre (t=0) representa mediciones de muestra antes de la terapia y Post (t=6) representa mediciones de muestra tras la terapia.

[0052] La FIG. 6B representa poblaciones de tamaño de partícula en plasma de paciente sin procesar, que están generalmente inalteradas tras terapia con Hemopurifier®. Pre (t=0) representa mediciones de muestra antes de la terapia y Post (t=6) representa mediciones de muestra tras la terapia.

[0054] La FIG. 7A representa la disminución en la concentración de exosomas en circulación en una muestra fraccionada de plasma de paciente tras terapia con Hemopurifier®. Pre (t=0) representa mediciones de muestra antes de la terapia y Post (t=6) representa mediciones de muestra tras la terapia.

[0056] La FIG. 7B representa el tamaño de poblaciones de exosomas en una muestra fraccionada de plasma de paciente, que están generalmente inalteradas tras terapia con Hemopurifier®. Pre (t=0) representa mediciones de muestra antes de la terapia y Post (t=6) representa mediciones de muestra tras la terapia.

[0058] La FIG. 8 representa gráficos de amplificación mediante qRT-PCR de cel-miR-39-3p deCaenorhabditis elegans(cel-39) añadido de manera conocida a fracciones de exosomas como control.

[0060] La FIG. 9 representa gráficos de amplificación mediante qRT-PCR a modo de ejemplo del miARN sometido a prueba en fracciones de exosomas del muestras de plasma de paciente. El miARN sometido a prueba son miR-424-5p (miR-424) y miR-16-2-3p (miR-16) humanos.

[0062] La FIG. 10 representa diferencias en la abundancia de miARN en relación con el control en fracciones de exosomas de muestras de plasma de paciente antes y después de terapia con Hemopurifier®.

[0064] La FIG. 11 representa una correlación entre el agotamiento de exosomas asociada con la terapia y la reducción de miARN (se sometieron a prueba los días 2-4).

[0066] La FIG. 12A representa la abundancia de miARN en relación con el control en muestras de plasma completo de día 4 del paciente con COVID-19.

[0068] La FIG. 12B representa una reducción proporcional del contenido de miARN inicial que es mayor en la fracción de exosomas procesada en comparación con plasma sin procesar del paciente con COVID-19.

[0070] La FIG. 13A representa la abundancia de los miARN miR-424 y miR-16, y la abundancia de exosomas en muestras de paciente de los días 1 y 4 de tratamiento.

[0072] La FIG. 13B representa la abundancia de los miARN miR-424 y miR-16, y la abundancia de exosomas en muestras de paciente de los días 5 y 8 de tratamiento.

[0074] La FIG. 14 representa un esquema a modo de ejemplo para eluir material unido de un dispositivo Hemopurifier®.

[0075] La FIG. 15A representa la amplificación de dianas genéticas específicas de SARS-CoV-2 de un molde obtenido a partir de un eluato de un dispositivo Hemopurifier® usado en un paciente con COVID-19.

[0076] La FIG. 15B representa la variabilidad en la amplificación de tres dianas genéticas de SARS-CoV-2 distintas a partir de la diana de eluato de Hemopurifier®.

[0078] DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0080] En el presente documento se dan a conocer dispositivos extracorpóreos y sus usos para tratar o inhibir una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como COVID-19, o un síntoma o una secuela asociado con la infección por coronavirus. El grave impacto de la pandemia de COVID-19 extendida ha necesitado el rápido desarrollo de agentes terapéuticos y profilaxis efectivos y seguros del agente causante, SARS-CoV-2. Aunque ahora se han aprobado algunas vacunas y tratamientos, ha resultado evidente que la aparición de mutantes y variantes de SARS-CoV-2, incluyendo aquellos que tienen una mayor virulencia y/o potencial para eludir los agentes terapéuticos actuales, amenazan con prolongar la pandemia. Además, muchos pacientes que han superado una infección por COVID-19 continúan presentando síntomas y secuela debilitantes, incluyendo cicatrices pulmonares permanentes y fibrosis, complicaciones y fallo cardiacos, accidentes cerebrovasculares, convulsiones y trastornos inmunológicos tal como síndrome de Guillain-Barre. Los dispositivos dados a conocer en el presente documento funcionan de modos que son efectivos frente a variantes de SARS-CoV-2, así como tratando o inhibiendo las causas subyacentes de secuela asociada con una infección por COVID-19 actual o pasada, incluyendo dentro de una subpoblación de pacientes que no tienen partículas víricas en circulación pero continúan presentando secuelas asociadas con infección por COVID-19, por ejemplo, el paciente “de larga duración”.

[0082] Definiciones

[0084] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado al entendido comúnmente por un experto habitual en la técnica. En el caso de que haya una pluralidad de definiciones para un término en el presente documento, aquellas en esta sección prevalecen a menos que se establezca lo contrario.

[0086] Los artículos “un” y “una” se usan en el presente documento para hacer referencia a uno o a más de uno (por ejemplo, al menos uno) del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, “un elemento” significa un elemento o más de un elemento.

[0088] Los términos “aproximadamente” o “alrededor de” tal como se usan el presente documento hacen referencia a una cantidad, nivel, valor, número, frecuencia, porcentaje, dimensión, tamaño, cantidad, peso o longitud que varía en tanto como el 30, el 25, el 20, el 15, el 10, el 9, el 8, el 7, el 6, el 5, el 4, el 3, el 2 o el 1% con respecto a una cantidad, nivel, valor, número, frecuencia, porcentaje, dimensión, tamaño, cantidad, peso o longitud de referencia.

[0089] Por toda esta memoria descriptiva, a menos que el contexto requiera lo contrario, se entenderá que las palabras “comprender”, “comprende” y “que comprende” implican la inclusión de una etapa o elemento o un grupo de etapas o elementos establecido, pero no la exclusión de cualquier otra etapa o elemento o grupo de etapas o elementos.

[0090] Con “que consiste en” quiere decirse que incluye, y limitado a, lo que quiera que siga a la frase “que consiste en”. Por tanto, la frase “que consiste en” indica que los elementos listados se requieren o son obligatorios, y que ningún otro elemento puede estar presente. Con “que consiste esencialmente en” quiere decirse que incluye cualquier elemento listado después de la frase y limitado a otros elementos que no interfieren con o contribuyen a la actividad o acción especificada en la divulgación para los elementos listados. Por tanto, la frase “que consiste esencialmente en” indica que los elementos listados se requieren o son obligatorios, pero que otros elementos son opcionales y pueden estar presentes o no dependiendo de si afectan de manera material o no a la actividad o acción de los elementos listados.

[0092] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado al entendido comúnmente por un experto habitual en la técnica a la que pertenece esta divulgación. Si hay una pluralidad de definiciones para un término en el presente documento, aquellas en esta sección prevalecen a menos que se establezca lo contrario. La práctica de la presente divulgación empleará, a menos que se indique específicamente lo contrario, métodos convencionales de biología molecular y técnicas de ADN recombinantes dentro de la habilidad de la técnica, muchos de los cuales se describen más adelante con propósito de ilustración.

[0094] Los términos “individuo”, “sujeto” o “paciente” tal como se usan en el presente documento, significan un humano o un mamífero no humano, por ejemplo, un perro, un gato, un ratón, una rata, una vaca, una oveja, un cerdo, una cabra, un primate no humano o un ave, por ejemplo, un pollo, así como cualquier otro vertebrado o invertebrado.

[0095] El término “mamífero” se usa en su sentido biológico usual. Por tanto, incluye específicamente, pero no se limita a, primates, incluyendo simios (chimpancés, antropoides, monos) y humanos, ganado bovino, caballos, ovejas, cabras, cerdos, conejos, perros, gatos, roedores, ratas, ratones, cobayas o similares.

[0096] Los términos “función” y “funcional” tal como se usan en el presente documento hacen referencia a una función biológica, enzimática o terapéutica.

[0098] El término “aislado” tal como se usa en el presente documento se refiere a material que está sustancial o esencialmente libre de componentes que lo acompañan normalmente en su estado nativo. Por ejemplo, una “célula aislada”, tal como se usa en el presente documento, incluye una célula que se ha purificado con respecto al medio u organismos en su estado que se produce de manera natural, una célula que se ha eliminado de un sujeto o de un cultivo, por ejemplo, no está asociada significativamente con sustanciasin vivooin vitro.

[0100] “Formulación”, “composición farmacéutica” y “composición” tal como se usan de manera intercambiable en el presente documento son términos equivalentes que hacen referencia a una composición de materia para su administración a un sujeto.

[0102] El término “farmacéuticamente aceptable” significa compatible con la terapia para un sujeto y, en particular, un humano.

[0104] Los términos “agente” se refiere a un agente activo que tiene actividad biológica y puede usarse en una terapia. Además, un “agente” puede ser sinónimo a “al menos un agente”, “compuesto” o “al menos un compuesto”, y puede hacer referencia a cualquier forma del agente, tal como un derivado, análogo, sal o un profármaco del mismo. El agente puede estar presente en diversas formas, componentes de complejos moleculares y sales farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, hidrocloruros, hidrobromuros, sulfatos, fosfatos, nitratos, boratos, acetatos, maleatos, tartratos o salicilatos). El término “agente” puede hacer referencia también a cualquier molécula o compuesto farmacéutico, molécula o compuesto terapéutico, molécula o compuesto formador de matriz, polímero, molécula y compuesto sintético, molécula y compuesto natural, y cualquier combinación de los mismos.

[0105] El término “pureza” de cualquier sustancia, compuesto o material dado tal como se usa en el presente documento se refiere a la abundancia real de la sustancia, compuesto o material en relación con la abundancia esperada. Por ejemplo, la sustancia, compuesto o material puede ser al menos un 80, un 85, un 90, un 91, un 92, un 93, un 94, un 95, un 96, un 97, un 98, un 99 o un 100% puro, incluyendo todos los decimales entremedias. La pureza puede verse afectada por impurezas no deseadas, incluyendo, pero sin limitarse a, productos secundarios, isómeros, enantiómeros, productos de degradación, disolvente, portador, vehículo o contaminantes, o cualquier combinación de los mismos. La pureza puede medirse tecnologías incluyendo, pero sin limitarse a, cromatografía, cromatografía de líquidos, cromatografía de gases, espectroscopía, espectrometría de UV-visible, espectrometría infrarroja, espectrometría de masas, resonancia magnética nuclear, gravimetría o titulación, o cualquier combinación de las mismas.

[0107] Algunas realizaciones dadas a conocer en el presente documento estaban relacionadas con seleccionar un sujeto o paciente que necesite uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que necesita tratamiento o inhibición de una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha recibido previamente una terapia para una infección por coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha recibido previamente una terapia por correr el riesgo de una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha desarrollado una recurrencia de una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha desarrollado resistencia a terapias para una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que presenta un síntoma o una secuela de una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha aclarado una infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, por ejemplo, no tiene ninguna cantidad o una cantidad disminuida o reducida de partículas víricas en circulación en el plasma o la sangre, pero continúa presentando un síntoma o una secuela de la infección por coronavirus, por ejemplo, una infección por beta-coronavirus, tal como una infección por SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha desarrollado una coagulopatía, tal como una coagulopatía asociada con COVID-19, o que corre el riesgo de desarrollar una coagulopatía (por ejemplo, un paciente que tiene niveles o cantidades de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos, que superan los niveles de un control o una referencia, tal como el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos encontrado en un paciente sano o un paciente que no tiene una coagulopatía o un paciente que no corre el riesgo de una coagulopatía). Estos pacientes que tienen una coagulopatía o que corren el riesgo de desarrollar una coagulopatía pueden tener o haber tenido o no una infección vírica, tal como COVID-19. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que ha desarrollado hipoxia (por ejemplo, un paciente que tiene niveles de oxígeno que están reducidos en comparación con un paciente sano o un paciente que no tiene hipoxia. Estos pacientes que tienen hipoxia pueden tener o haber tenido o no una infección vírica, tal como COVID-19. En algunas realizaciones, se selecciona un paciente para uno cualquiera o más de los métodos extracorpóreos descritos en el presente documento que puede tener cualquier combinación de los criterios de selección mencionados anteriormente. Tales selecciones pueden hacerse mediante la evaluación clínica o diagnóstica del sujeto tal como es rutina en el campo.

[0109] Los términos “tratar”, “de tratamiento”, “tratamiento”, “terapéutico” o “terapia” tal como se usan en el presente documento tienen su significado ordinario tal como se entiende a la luz de la memoria descriptiva, y no significan necesariamente una cura total o abolición de la enfermedad o del estado. El término “de tratamiento” o “tratamiento” tal como usa en el presente documento (y tal como se entiende ampliamente en la técnica) también significa un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados en el estado de un sujeto, incluyendo resultados clínicos. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados pueden incluir, pero no se limitan a, el alivio o la mejora de uno o más síntomas o estados, la disminución de la extensión de una enfermedad, la estabilización (es decir, no empeoramiento) del estado patológico, la prevención de una transmisión o propagación de la enfermedad, el retardo o la ralentización de la progresión de la enfermedad, la mejora o paliación del estado patológico, la disminución de la recurrencia de la enfermedad, y la remisión, ya sea parcial o total y ya sea detectable o indetectable. “De tratamiento” y “tratamiento” tal como se usan en el presente documento incluyen también el tratamiento profiláctico. Los métodos de tratamiento comprenden administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente activo o el uso de un dispositivo terapéutico. La etapa de administración puede consistir en una única administración o puede comprender una serie de administraciones. Las composiciones se administran o aplican al sujeto en una cantidad, durante una duración o durante un número o repeticiones suficientes para tratar al paciente. La duración del periodo de tratamiento depende de una variedad de factores, tales como la gravedad del estado, la edad y el perfil genético del paciente. Se apreciará también que el tratamiento o la profilaxis pueden modificarse a lo largo del curso de un régimen de tratamiento o de profilaxis particular. En algunos casos puede requerirse administración o aplicación crónica. El término “tratamiento profiláctico” se refiere a tratar a un sujeto que aún no presenta síntomas de una enfermedad o un estado, pero que es susceptible de, o que de otro modo corre el riesgo de, una enfermedad o un estado particular, con lo que el tratamiento reduce la probabilidad de que el paciente desarrolle la enfermedad o el estado. El término “tratamiento terapéutico” se refiere a administrar tratamiento a un sujeto que ya sufre de o está desarrollando una enfermedad o un estado.

[0111] El término “inhibir” tal como se usa en el presente documento tiene su significado ordinario tal como se entiende a la luz de la memoria descriptiva, y puede hacer referencia a la reducción o prevención de una infección vírica, tal como SARS-CoV-2, o un síntoma o una secuela de la misma. La reducción puede ser del 10%, del 20%, del 30%, del 40%, del 50%, del 60%, del 70%, del 80%, del 90% o del 100%, o una cantidad que esté dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los valores mencionados anteriormente. Tal como se usa en el presente documento, el término “retardar” tiene su significado ordinario tal como se entiende a la luz de la memoria descriptiva, y se refiere a una ralentización, una postergación o un aplazamiento de un evento, tal como una infección vírica, o un síntoma o una secuela de la misma, hasta un momento que es posterior al que se esperaría de lo contrario. El retardo puede ser un retardo del 0%, del 10%, del 20%, del 30%, del 40%, del 50%, del 60%, del 70%, del 80%, del 90%, del 100% o una cantidad dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los valores mencionados anteriormente. Los términos inhibir y retardar pueden no necesariamente indicar una inhibición o un retardo del 100%. Puede alcanzarse una inhibición o un retardo parcial.

[0113] Los términos “ácido nucleico” o “molécula de ácido nucleico” tal como se usan en el presente documento se refieren a polinucleótidos, tales como ácido desoxirribonucleico (ADN) o ácido ribonucleico (ARN), oligonucleótidos, fragmentos generados mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), y fragmentos generados mediante cualquiera de ligación, escisión, acción de endonucleasa y acción de exonucleasa. Las moléculas de ácido nucleico pueden componerse de monómeros que son nucleótidos que se producen de manera natural (tal como ADN y ARN), o análogos de nucleótidos que se producen de manera natural (por ejemplo, formas enantioméricas de nucleótidos que se producen de manera natural), o una combinación de ambos. Los nucleótidos modificados pueden tener alteraciones en restos sacáricos y/o en restos de base de pirimidina o purina. Las modificaciones sacáricas incluyen, por ejemplo, el reemplazo de uno o más grupos hidroxilo por halógenos, grupos alquilo, aminas y grupos azido, o los azúcares pueden estar funcionalizados como éteres o ésteres. Además, todo el resto sacárico puede reemplazarse por estructuras estérica y electrónicamente similares, tales como aza-azúcares y análogos sacáricos carbocíclicos. Los ejemplos de modificaciones en un resto de base incluyen purinas y pirimidinas alquiladas, purinas o pirimidinas aciladas, u otros sustituidos heterocíclicos ampliamente conocidos. Los monómeros de ácido nucleico pueden estar ligados mediante enlaces fosfodiéster o análogos de tales ligamientos. Los análogos de ligamientos de fosfodiéster incluyen fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforanilidato o fosforamidato. El término “molécula de ácido nucleico” incluye también los denominados “ácidos nucleicos peptídicos”, que comprenden bases de ácido nucleico que se producen de manera natural o modificados unidos a una estructura principal de poliamida. Los ácidos nucleicos pueden ser o bien monocatenarios o bien bicatenarios. “Oligonucleótido” puede usarse de manera intercambiable con ácido nucleico y puede hacer referencia a cualquiera de ADN o ARN bicatenario o monocatenario. Un ácido nucleico o ácidos nucleicos puede(n) estar contenido(s) en un vector de ácido nucleico o constructo de ácido nucleico (por ejemplo, plásmido, virus, bacteriófago, cósmido, fósmido, fagémido, cromosoma artificial bacteriano (BAC), cromosoma artificial de levadura (YAC) o cromosoma artificial humano (HAC)) que puede usarse para la amplificación y/o expresión del ácido nucleico o de los ácidos nucleicos en diversos sistemas biológicos. Normalmente, el vector o constructo contendrá también elementos que incluye, pero no se limitan a, promotores, potenciadores, terminadores, inductores, sitios de unión a ribosoma, sitios de iniciación de la traducción, codones de inicio, codones de terminación, señales de poliadenilación, orígenes de replicación, sitios de clonación, sitios de clonación múltiple, sitios de enzima de restricción, epítopos, genes indicadores, marcadores de selección, marcadores de selección de antibiótico, secuencias de selección como diana, etiquetas de purificación peptídicas o genes accesorios, o cualquier combinación de los mismos.

[0115] Un ácido nucleico o una molécula de ácido nucleico puede comprender una o más secuencias que codifican diferentes péptidos, polipéptidos o proteínas. Estas una o más secuencias pueden estar unidas en el mismo ácido nucleico o molécula de ácido nucleico de manera adyacente, o con ácidos nucleicos extra entremedias, por ejemplo, ligadores, repeticiones o sitios de enzima de restricción, o cualquier otra secuencia que tenga una longitud de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 o 300 bases, o cualquier longitud en un intervalo definido por cualesquiera dos de las longitudes mencionadas anteriormente. El término “en el sentido de 3’” en un ácido nucleico tal como se usa en el presente documento se refiere a que una secuencia está después del extremo 3’ de una secuencia previa, en la cadena que contiene la secuencia codificante (cadena sentido) si el ácido nucleico es bicatenario. El término “en el sentido de 5’” en un ácido nucleico tal como se usa en el presente documento se refiere a que una secuencia está antes del extremo 5’ de una secuencia posterior, en la cadena que contiene la secuencia codificante (cadena sentido) si el ácido nucleico es bicatenario. El término “agrupadas” en un ácido nucleico tal como se usa en el presente documento se refiere a dos o más secuencias que aparecen en proximidad o bien directamente o bien con ácidos nucleicos extra entremedias, por ejemplo, ligadores, repeticiones o sitios de enzima de restricción, o cualquier otra secuencia tenga una longitud de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 o 300 bases, o cualquier longitud en un intervalo definido por cualesquiera dos de las longitudes mencionadas anteriormente, pero generalmente no con una secuencia entremedias que codifique para un polipéptido, proteína o dominio de proteína en funcionamiento o catalítico.

[0117] Los términos “péptido”, “polipéptido” y “proteína” tal como se usan en el presente documento se refieren a macromoléculas compuestas por aminoácidos ligados mediante enlaces peptídicos. Las numerosas funciones de los péptidos, polipéptidos y proteínas se conocen en la técnica, e incluyen, pero no se limitan a, enzimas, estructura, transporte, defensa, hormonas o señalización. Los péptidos, polipéptidos y proteínas se producen a menudo, pero no siempre, biológicamente mediante un complejo ribosómico usando un molde de ácido nucleico, aunque también están disponibles síntesis químicas. Manipulando el molde de ácido nucleico pueden realizarse mutaciones de péptido, polipéptido y proteína tales como sustituciones, deleciones, truncamientos, adiciones, duplicaciones o fusiones de más de un péptido, polipéptido o proteína. Estas fusiones de más de un péptido, polipéptido o proteína pueden estar unidas en la misma molécula de manera adyacente, o con aminoácidos extra entremedias, por ejemplo, ligadores, repeticiones, epítopos o etiquetas, o cualquier otra secuencia que tenga una longitud de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200 o 300 bases, o cualquier longitud en un intervalo definido por cualesquiera dos de las longitudes mencionadas anteriormente. El término “en el sentido de 3’” en un polipéptido tal como se usa en el presente documento se refiere a que una secuencia está después del extremo C-terminal de una secuencia previa. El término “en el sentido de 5’” en un polipéptido tal como se usa en el presente documento se refiere a que una secuencia está antes del extremo N-terminal de una secuencia posterior.

[0119] Tal como se usa en el presente documento, una “lectina” es una proteína que se une selectivamente a polisacáridos y glicoproteínas. Aunque muchas son insuficientemente específicas para ser útiles, ciertas lectinas son altamente selectivas para virus con envoltura. Entre las lectinas que tienen esta propiedad están aquellas derivadas deGalanthus nivalisen la forma de aglutinina deGalanthus nivalis(“GNA”),Narcissus pseudonarcissusen la forma de aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(“NPA”) y una lectina derivada de las algas verde-azuladasNostoc ellipsosporumdenominada “cianovirina”. La GNA no es tóxica y es suficientemente segura de modo que se ha incorporado a arroz y patatas modificados mediante ingeniería genética (Bellet al.Transgenic Res 10(1): 35-42, 2001; Raoet al.Plant J 15(4): 469-477, 1998). Estas lectinas se unen a glicoproteínas que tienen un alto contenido de manosa tal como se encuentran en proteínas de superficie de VIH (Chervenaket al.Biochemistry 34(16): 5685 5695, 1995).

[0121] Tal como se usa en el presente documento, una “glicoproteína con alto contenido de manosa” se refiere a una glicoproteína que tiene ligamientos manosa-manosa en la forma de ligamientos manosa-manosa a -1 ^3 o a-1^ 6.

[0122] El término “coronavirus” tal como se usa en el presente documento se refiere a la familia de virus de ARN monocatenario, de sentido positivo, con envoltura, que pertenecen a la familiaCoronaviridaeque infectan a mamíferos y aves. En humanos, las infecciones por coronavirus pueden provocar síntomas leves tal como un resfriado común, o estados respiratorios más graves tales como síndrome respiratorio agudo grave (SARS), síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS), tos, congestión, dolor de garganta, dificultad respiratoria, neumonía, bronquitis e hipoxia. Otros síntomas incluyen, pero no se limitan a, fiebre, fatiga, mialgia y síntomas gastrointestinales tales como vómitos, diarrea y dolor abdominal. Para infectar a las células huésped, los virus con envoltura tienen que fusionarse con la membrana de la célula huésped y suministrar su genoma a la célula. La envoltura vírica comprende proteínas estructurales transmembrana de espícula (“S”), envoltura (“E”), membrana (“M”) y hemaglutinina esterasa (“HE”). Los coronavirus tienen diámetros promedio de 80-120 nm y superficies de virión que están densamente cubiertas en proyecciones de glicoproteínas S triméricas que están decoradas con secuencias de glicosilación ligadas a N. La proteína S comprende un dominio de unión a receptor (“RBD”), una región altamente inmunogénica que determina la especificidad de receptor huésped de la cepa de virus. La nucleocápside vírica comprende múltiples proteínas de nucleocápside (“N” o “NP”) que recubren el genoma de ARN. Durante la infección, la proteína S se acopa a un receptor de célula huésped e inicia la entrada en la célula huésped a través de endocitosis o fusión de la membrana de envoltura. El genoma de ARN se traduce por el ribosoma del huésped para producir nuevas proteínas estructurales y ARN polimerasas dependientes de ARN, que replican el genoma vírico. Las partículas víricas se ensamblan en el retículo endoplasmático del huésped y se liberan mediante exocitosis mediada por Golgi. Más información sobre la estructura y el ciclo de infección de los coronavirus puede encontrarse en Fehr AR y Perlman S. “Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis” Methods Mol. Biol. (2015); 1282:1-23.

[0124] Los términos “SARS-CoV-2” y “2019-nCoV” tal como se usan en el presente documento se refieren a la cepa o cepas de coronavirus responsable(s) de la pandemia por enfermedad por coronavirus humana 2019 (COVID-19). La capacidad de contagio, el largo periodo de incubación y la globalización moderna han conducido a la propagación a nivel mundial del virus. El desarrollo de SARS y otros problemas respiratorios en individuos infectados ha dado como resultado un inmenso estrés sobre la infraestructura médica. Tratamientos y vacunas para SARS-CoV-2 y otros coronavirus en humanos están empezando a aprobarse, pero son necesarias pruebas adicionales. Las realizaciones dadas a conocer en el presente documento pueden aplicarse a otros coronavirus, incluyendo, pero sin limitarse a, HCoV-229E, HCoV-OC43, SARS-CoV-1, HCoV NL63, HCoV-HKU1 y MERS-CoV, así como variantes de SARS-CoV-2, incluyendo, pero sin limitarse a, 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324,1) o CAL.20C (B.1.429). Está previsto que los dispositivos y métodos de uso sean efectivos frente a una infección por coronavirus provocada por otras variantes de SARS-CoV-2 que se identifiquen o que sean actualmente desconocidas.

[0126] Según el Instituto Nacional para la Salud y la Excelencia Asistencial (NICE) del Reino Unido, una infección por COVID-19 se categoriza como cualquiera de los siguientes: “COVID-19 agudo” está asociado con signos y síntomas de COVID-19 durante hasta 4 semanas; “COVID-19 sintomático en curso” está asociado con signos y síntomas de COVID-19 desde 4 hasta 12 semanas; y “síndrome post-COVID-19” está asociado con signos y síntomas que se desarrollan durante o después de una infección consistente con COVID19, continúan durante más de 12 semanas y no se explican mediante un diagnóstico alternativo.

[0128] Tal como se usa en el presente documento “coagulopatía asociada a COVID-19” (CAC) se refiere a complicaciones trombóticas asociadas con una infección por COVID-19. Como el SARS-CoV-2 es capaz de infectar células endoteliales vasculares a través de ACE2, el paciente puede experimentar inflamación significativa y daño en el sistema cardiovascular a lo largo del curso de la enfermedad. Algunas marcas distintivas asociadas con CAC implican una disminución en el recuento de plaquetas, un aumento en el dímero D en circulación, una prolongación del tiempo de protrombina (PT) y la presencia de macrotrombosis y/o microtrombosis. Información adicional sobre CAC puede encontrarse en Ibaet al.J. Clin. Med. (2021) 10;191.

[0130] Tal como se usa en el presente documento, una “glicoproteína derivada de SARS-CoV-2” incluye cualquier glicoproteína contenida o expresada por el virus SARS-CoV-2. Por ejemplo, una glicoproteína derivada de SARS-CoV-2 abarcada por la presente divulgación es la proteína S (de espícula) de SARS-CoV-2, que comprende los restos decorados con glicoproteína más externos de la envoltura vírica, o subunidades de la misma, incluyendo las subunidades S1, S2 y RBD.

[0132] Tal como se usa en el presente documento, la “proteína de la espícula S de SARS-CoV-2” o “proteína de la espícula de COVID-19” incluye la proteína S que es una proteína de fusión vírica de clase I que consiste en una única cadena de aproximadamente 1.300 aminoácidos que se trimeriza tras el plegado, que comprende una subunidad S1 N-terminal con el dominio de unión a receptor, y una subunidad S2 C-terminal responsable de la fusión de membrana. Durante el ensamble vírico, las proteínas de coronavirus experimentan numerosas modificaciones postraduccionales, incluyendo una glicosilación pesada que tiene un papel esencial en la patogénesis vírica. Los trímeros S en la superficie del coronavirus están decorados extensamente con glicanos ligados a N que representan restos críticos para la función vírica. Los restos glicano ligados a N en las superficies de coronavirus son críticos tanto para el ensamblaje como para las funciones víricas. Estos glicanos son necesarios para la estabilidad durante la generación de proteínas S; la inhibición de N-glicosilación mediante tunicamicina dio como resultado la síntesis de viriones “sin espícula”. El recubrimiento de la envoltura vírica mediante N-glicanos también enmascara epítopos proteicos inmunogénicos, formando una pantalla de glicano que permite a los coronavirus evadir el sistema inmune del huésped y las proteasas del huésped. Por tanto, las glicoproteínas del coronavirus son determinantes antigénicos principales que representan dianas primarias de intervenciones y vacunas terapéuticas. Por tanto, se cree que estas glicoproteínas altamente conservadas en SARS-CoV-2 y otros coronavirus, por ejemplo, un beta-coronavirus tal como COVID-19 y variantes del mismo, son dianas ideales para los dispositivos de afinidad basada en lectina descritos en el presente documento. Por consiguiente, se contempla que los dispositivos y procedimientos descritos en el presente documento sean útiles para la eliminación de SARS-CoV-2 y otros coronavirus, por ejemplo, un beta-coronavirus tal como COVID-19 y variantes del mismo, así como exosomas que tienen antígenos de dicho virus, incluso si tal mutante de virus a lo largo del tiempo, por ejemplo, genera nuevas variantes.

[0134] Tal como se usa en el presente documento, “exosomas” son nanopartículas de 200 nm de tamaño o menos que forman parte de un sistema de comunicación que transporta señales hasta células diana cercanas o distantes y reprograma sus funciones. Los contenidos de los exosomas varían, y pueden incluir ácidos nucleicos, proteínas y lípidos. Pueden transferirse desde células huésped a receptoras para alterar la función celular. Funcionan como modo de comunicación intercelular y transferencia molecular, y facilitan la transferencia extracelular directa de proteínas y lípidos específicos, así como, miARN, ARNm y ADN entre células. Los exosomas están presentes en la circulación sistémica y se distribuyen por todo el cuerpo. En individuos sanos, normales, un nivel basal de liberación de exosomas ayuda en la comunicación célula a célula y promueve la eliminación de desecho celular. Sin embargo, se contempla que un aumento en la cantidad de exosomas refleja un estado fisiológico alterado. Los exosomas se liberan en abundancia en estados patológicos en los que se despliegan mediante células activadas en grandes cantidades y transfieren su composición de membrana y carga interna a tejidos distantes por medio del sistema circulatorio, por ejemplo. Información adicional sobre exosomas y la purificación de material constituyente puede encontrarse en la Publicación PCT WO 2016/172598.

[0136] Tal como se usa en el presente documento, “nanopartícula mediadora de COVID-19” incluye cualquier nanopartícula, es decir, de 200 nm o menos de tamaño, que contiene o expresa una glicoproteína derivada de SARS-CoV-2, o una nanopartícula subcelular asociada con COVID-19, o un síntoma o una secuela del mismo, que no se deriva necesariamente de una partícula de SARS-CoV-2. Por ejemplo, una nanopartícula mediadora de COVID-19 puede ser un virión de SARS-CoV-2, o fragmentos del mismo tal como glicoproteína derivada de SARS-CoV-2, así como, una nanopartícula mediadora de COVID-19 no vírica o un exosoma.

[0138] Tal como se usa en el presente documento, el término “porción” se refiere a una cantidad de un material que es menos que un todo. Una porción menor se refiere a una cantidad que es, por ejemplo, menos del 50%, y una porción mayor se refiere, por ejemplo, a una cantidad de más del 50%. Por tanto, una unidad de partículas de coronavirus, nanopartículas mediadoras de COVID-19 o exosomas que es menos que la cantidad total de partículas de coronavirus, nanopartículas mediadoras de COVID-19 o exosomas eliminados de un sujeto es una porción de las partículas de coronavirus, nanopartículas mediadoras de COVID-19 o exosomas eliminados. En referencia a la divulgación en el presente documento, partículas de coronavirus, nanopartículas mediadoras de COVID-19 o exosomas, o una unidad de los mismos pueden hacer referencia a la cantidad total de las partículas de coronavirus, las nanopartículas mediadoras de COVID-19 o los exosomas eliminados de un sujeto, o una cantidad que es menos que la cantidad total de partículas de coronavirus, nanopartículas mediadoras de COVID-19 o exosomas eliminados de un sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto incluye animales de sangre caliente, preferiblemente mamíferos, incluyendo humanos. En una realización preferida, el sujeto es un primate. En una realización más preferida, el sujeto es un humano.

[0140] Tal como se usa en el presente documento, el término “microARN” o “miARN” se refiere a moléculas ARN no codificantes altamente conservadas, de aproximadamente 21-25 nucleótidos de longitud, que desempeñan papeles críticos en la regulación de la expresión génica postranscripcional seleccionando como diana ARN mensajero (ARNm) de genes que codifican proteínas. Los miARN maduros existes en el citoplasma celular como dúplex de ARN a los que se unen una proteína argonauta (Ago2) y una proteína que contiene repeticiones de glicina-triptófano, formando el núcleo de un complejo de múltiples unidades denominado complejo de silenciamiento mediador de miARN (miRISC). El dúplex de miARN contiene dos cadenas identificada con el sufijo o bien “-5p” (del brazo 5’ de pre-miARN) o bien “-3p” (del brazo 3’ del pre-miARN). Una de las cadenas del dúplex se descarta normalmente (cadena pasajera), mientras que la cadena conservada guía la selección como diana de ARNm (cadena guía). Sin embargo, en algunos casos, se ha notificado que dos miARN maduros escindidos de los brazos 5’ y 3’ del mismo pre-miARN en horquilla son funcionales y seleccionan como diana ARNm diferente. Una vez ensamblados en el miRISC a través de interacciones apareamiento de bases entre los nucleótidos 2 y 8 del miARN y nucleótidos complementarios predominantemente en las regiones no traducidas 3’ (UTR) de los ARNm, los miARN actúan como represores de la traducción. Cada miARN se une a muchos ARNm diana específicos y a menudo no a aquellos en la misma vía molecular. Los miARN existen tanto como entidades que flotan libremente en el plasma y otros fluidos biológicos como empaquetados en exosomas. Se cree que los miARN no exosomales, extracelulares, en circulación, son subproductos de células muertas unidos de manera estable a la proteína Ago2.

[0141] Los exosomas, que se producen en grandes cantidades por células enfermas y activadas, están empaquetados con un complemento completo de la carga de la célula parental, incluyendo miARN.

[0143] Algunos miARN se han identificado como asociados ubicuamente con diversas enfermedades. miARN específicos se han descrito como “ajustadores finos” de respuestas inmunitarias que o bien pueden promover un estado inflamatorio o bien tienen efectos antiinflamatorios regulando la señalización de receptor tipo toll. Los miARN son también no antigénicos, permitiéndoles escapar la vigilancia inmune, lo que puede ser beneficioso para el virus. En infecciones víricas, ciertos miARN pueden servir tanto como herramientas antivirales que estimulan los sistemas inmunes innato y adaptativo, mientras que otros tienen papeles en la propagación vírica. Los miARN del huésped pueden regularse mediante virus y los virus pueden usurpar también recursos celulares para producir sus propios miARN que participan en la evasión inmune y en el mantenimiento de la infección. La presencia de los diversos miARN víricos y de huésped puede monitorizarse cuando se evalúa el desenlace de una estrategia terapéutica.

[0144] Se cree que los exosomas son cruciales a la hora de diseminar material patógeno así como moléculas derivadas del huésped durante infecciones víricas, contribuyendo de ese modo a la infectividad vírica y las complicaciones de la enfermedad. Por ejemplo, la diseminación de miARN por medio de exosomas puede servir como mecanismo que usan los virus para escapar al sistema inmune y permitir una infección continua de células huésped. Un ejemplo es la infección de hepatocitos con virus de la hepatitis B (HBV), que conduce a la liberación de miARN exosomales a partir de células infectadas por virus que atenúan la producción de citocinas implicadas en la inmunidad antivírica. Se ha planteado la hipótesis de que vesículas extracelulares producidas en respuesta a muchos virus, incluyendo los coronavirus, contribuyen a la coagulopatía así como al mantenimiento del estado patológico y promueven la propagación de la infección. En COVID-19, miARN víricos y/o de huésped transportados en exosomas y dispersados sistémicamente pueden actuar como mediadores de la trombosis, disfunción inmune y lesión multiorgánica. La existencia de miARN que se transfiere entre células por medio de exosomas y que tiene un papel patógeno distintivo de viriones infecciosos es un componente importante para entender la patogenia de COVID-19. Los dispositivos dados a conocer en el presente documento, en virtud de su afinidad por restos de glicoproteína con alto contenido en manosa, tienen la capacidad de unirse a y eliminar SARS-CoV2 así como exosomas del sistema circulatorio.

[0146] Cuando se proporcione un intervalo, se entiende que el límite superior e inferior, y cada valor interviniente entre el límite superior y el inferior del intervalo está abarcado dentro de las realizaciones.

[0148] El término “% p/p” o “% peso/peso” tal como se usa en el presente documento tiene su significado ordinario tal como se entiende a la luz de la memoria descriptiva y se refiere a un porcentaje expresado en términos del peso del ingrediente o agente con respecto al peso total de la composición multiplicado por 100. El término “% v/v” o “% vol/vol” tal como se usa en el presente documento tiene su significado ordinario tal como se entiende a la luz de la memoria descriptiva y se refiere a un porcentaje expresado en términos de volumen de líquido del compuesto, sustancia, ingrediente o agente con respecto al volumen de líquido total de la composición multiplicado por 100.

[0149] Síntomas y secuela de COVID-19

[0151] A medida que ha surgido información relativa a la patogenia del SARS-CoV-2, ha resultado evidente que este virus no solo selecciona como diana el tracto respiratorio, si no que, en casos más serios, también es capaz de provocar una inflamación sistémica masiva y explotar las vulnerabilidades de otros órganos, lo que puede conducir a fallo respiratorio, lesión cardiaca aguda, lesión renal aguda, trastornos neurológicos, sepsis u otras complicaciones. Hay también evidencia de “ARNemia” (es decir, la presencia de ARN vírico en sangre) en pacientes con COVID-19, lo que indica que una carga vírica sistémica puede promover inflamación y lesión tisular tal como se describe adicionalmente en el presente documento.

[0153] Enfermedad por COVID-19-Tormenta de citocinas.Datos recientes sugieren que eventos inmunopatológicos inducidos por SARS-CoV-2 subyacen al ARDS así como otras secuelas sistémica que se producen en COVID-19. Un subconjunto de pacientes con COVID-19, en particular aquellos con enfermedad grave, muestran evidencia de la “tormenta de citocinas” en sangre: inflamación desenfrenada y desregulada que se cree que culmina en daño tisular, edema pulmonar y deterioro de las funciones inmunes normales. Cuando se comparan casos de COVID-19 moderados frente a graves, los casos graves se presentaban más frecuentemente con disnea e hipoalbuminemia, con niveles más altos de alanina aminotransferasa, lactato deshidrogenasa, proteína C reactiva (CRP), ferritina y dímero D así como niveles sistémicos marcadamente elevados de citocinas y receptores; concretamente, IL-2R, IL-6, IL-10 y TNF-a. Debido a la asociación que existe entre inflamación grave y malos desenlaces en pacientes con COVID-19, los marcadores inflamatorios pueden servir como sustitutos para evaluar los desenlaces de una intervención terapéutica en pacientes con COVID-19 midiendo cambios en citocinas específicas, quimiocinas y combinaciones de las mismas incluyendo IL-1 beta, IL-6, IL-8, IL-10, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), proteína 10 inducida por interferón gamma (IP-10), proteína quimioatrayente de monocitos-1 (MCP-1) y proteínas inflamatorias de macrófagos (MIP-1 alfa y MIP-1 beta). Se ha mostrado que las citocinas en circulación tal como IL-6 son un biomarcador para la gravedad de la infección por COVID-19 (Zhanget al.J. Translational Medicine (2020) 18(1 ):406).

[0154] Enfermedad por COVID-19-Supresión inmune.Los niveles elevados de citocinas en la patogenia de COVID-19 se correlacionan también con la disminución de células T CD4+, células T CD8+ y células asesinas naturales (NK) en infecciones por SARS-CoV-2. Los números totales de células T CD4+ y CD8+ se reducen dramáticamente en pacientes con COVID-19, especialmente entre pacientes > 60 años de edad y en aquellos que requieren cuidado en la UCI. El virus conduce o bien directa o bien indirectamente a pérdida de linfocitos y/o al proceso inflamatorio, alimentado por subproductos de la infección, y provoca la apoptosis de linfocitos. Hay evidencia de que los números absolutos de linfocitos en sangre y/o los porcentajes de linfocitos entre glóbulos blancos son indicativos de progresión de la enfermedad y desenlaces para pacientes con COVID-19, con lo que pacientes con síntomas de enfermedad de moderados a graves que se recuperan presentan mejoras en los niveles de linfocitos y los pacientes enfermos de manera crítica que mueren no se recuperan de la linfopenia. Por tanto, pueden usarse recuentos absolutos de linfocitos para identificar la presencia de linfopenia usando intervalos de referencia de laboratorio conocidos en la técnica y pueden usarse para predecir el estado y el pronóstico de pacientes con COVID-19. Adicionalmente, los números de linfocitos específicos (por ejemplo, células T y células NK) y de subconjuntos de linfocitos específicos (células T CD4+ y células T CD8+) en la sangre periférica de pacientes con COVID-19 pueden servir para identificar el estado del sistema inmune, en particular de tipos de células que están implicados en respuestas antivíricas.

[0156] Enfermedad por COVID-19 - ARNemia.Se ha demostrado ARN vírico en plasma (“ARNemia”) en pacientes admitidos en el hospital que dieron positivo en la prueba de COVID-19. También se ha observado ARNemia en pacientes enfermos de manera crítica con COVID-19 y se correlaciona con niveles elevados de la citocina proinflamatoria IL-6. Esto indica que las cargas víricas de SARS-CoV-2 sistémicas se correlacionan con la gravedad de COVID-19. Por consiguiente, reducir las cargas víricas o el ARN vírico en circulación usando los métodos descritos en el presente documento mejorará la recuperación de pacientes enfermos de manera crítica con COVID-19.

[0158] El término “carga vírica” tal como se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de partículas víricas, ARN vírico o fragmentos de los mismos en un fluido biológico, tal como sangre o plasma. “Carga vírica” abarca todas las partículas víricas (ya sean infecciosas, replicativas o no infecciosas), y fragmentos de las mismas. Por tanto, carga vírica representa el número total de partículas víricas y/o fragmentos de las mismas en circulación en el fluido biológico. Por tanto, la carga vírica puede ser una medida de cualquiera de una variedad de indicadores de la presencia de un virus, tales como número de copias víricas por unidad de sangre o plasma o unidades de proteínas víricas o fragmentos de las mismas por unidad de sangre o plasma. La presencia de ARN vírico de SARS-CoV-2 en circulación se correlaciona con malos desenlaces. Los cambios en la carga vírica en circulación pueden evaluarse mediante RT-PCR. El aclaramiento vírico puede cuantificarse mediante la elución de partículas víricas unidas a lectina, incluyendo aquellas dadas a conocer en el presente documento.

[0160] Enfermedad por COVID-19-Complicaciones cardiacas.La lesión miocárdica está asociada significativamente con un desenlace fatal de COVID-19, mientras que el pronóstico de pacientes con enfermedad cardiovascular (CVD) subyacente, pero sin lesión miocárdica es relativamente favorable. La lesión miocárdica está asociada con disfunción cardiaca y arritmias. La inflamación puede ser un mecanismo potencial para lesión miocárdica. El uso de uno cualquiera o más de los métodos descritos en el presente documento puede considerarse para pacientes que corran un alto riesgo de lesión miocárdica y tales métodos pueden emplearse múltiples veces (por ejemplo, una, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez veces) a lo largo de un periodo de terapia.

[0162] Tal como se da a conocer en el presente documento, la “troponina” es un tipo de proteína encontrado en los músculos de tu corazón. La troponina, y subunidades de la misma (por ejemplo, troponina C, troponina I, troponina T) no se encuentra normalmente en la sangre. Cuando los músculos cardiacos se dañan, se envía troponina al torrente sanguíneo. A medida que aumenta del daño cardiaco, se liberan mayores cantidades de troponina en la sangre.

[0164] Entre los pacientes con COVID-19, aquellos que corren el riesgo de lesión miocárdica, tal como se evalúa mediante niveles de troponina T elevados, son mayores y tienen una mayor prevalencia de hipertensión, enfermedad arterial coronaria, fallo cardiaco y diabetes. Los pacientes con lesión miocárdica tienen también evidencia de inflamación sistémica más grave, incluyendo recuentos de leucocitos mayores y niveles más altos de proteína C reactiva y procalcitonina así como niveles altos de otros biomarcadores de lesión miocárdica y estrés, tal como creatina cinasa, mioglobina y péptido natriurético de tipo pro-B N-terminal (NT-proBNP). Estos pacientes tienen también una mayor incidencia de inflamación sistémica así como de una necesidad de ventilación asistida que pacientes con COVID-19 sin lesión miocárdica. Las troponinas pueden incluir y/o denominarse: troponina cardiaca I (cTnI), troponina cardiaca T (cTnT), troponina cardiaca (cTN), troponina específica cardiaca I y troponina T. Se ha mostrado que la troponina T en circulación es un biomarcador para la gravedad de la infección por COVID-19 (Gaze. Ann. Clin. Biochem. (2020) 57(3):202-205).

[0166] Enfermedad por COVID-19 - Fallo multiorgánico, sepsis, enfermedad renal aguda, trastornos neurológicos, trastornos olfativos, hiperinflamación y otras complicaciones.Para pacientes enfermos de manera crítica con COVID-19, mejoras en marcadores de inflamación sistémica y/o lesión en órganos pueden servir como medidas de una intervención terapéutica clínicamente efectiva. Los marcadores que se espera que se reduzcan en respuesta a una intervención terapéutica pueden incluir proteína C reactiva (CRP), ferritina, lactato deshidrogenasa, alanina aminotransferasa (ALT), interleucina-6 (IL-6), IL-1 beta, factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-a), proteína inflamatoria de macrófagos 1 -alfa, factor estimulante de colonias de granulocitos, proteína inducible por interferón-gamma 10 y/o proteína quimioatrayente de monocitos 1. Para evaluar desenlaces clínicos relacionados con una intervención terapéutica para COVID-19, pueden monitorizarse evaluaciones de supervivencia, la duración y la necesidad de ventilación asistida, el fallo de sistemas multiorgánicos y complicaciones cardiacas.

[0168] Enfermedad por COVID-19 - Coagulación.Una prueba de dímero D busca el dímero D en la sangre. El dímero D es un fragmento de proteína producido por la degradación de fibrina reticulada, que es el componente principal de la coagulación sanguínea. Durante la coagulación sanguínea, la trombina activa el factor XIII, que entonces reticula la fibrina en sus regiones D. La actividad de la serina proteasa plasmina degrada la fibrina reticulada, produciendo dímero D en circulación. La infección por SARS-CoV-2 se ha atribuido a la desregulación de la coagulación sanguínea en pacientes, dando como resultado trombosis potencialmente letal, accidente cerebrovascular y embolia pulmonar. Se ha mostrado que el dímero D en circulación es un biomarcador para la gravedad de la infección por COVID-19 (Yaoet al.J. Intensive Care. (2020) 8:49). Otros nombres: fragmento dímero D, fragmento de degradación de fibrina.

[0170] Dispositivos de hemofiltración a base de lectina a modo de ejemplo

[0172] En el presente documento se dan a conocer dispositivos extracorpóreos y métodos de uso para el tratamiento de enfermedades víricas, tal como una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela asociado con la enfermedad, incluyendo una secuela a largo plazo que un paciente puede experimentar incluso tras el aclaramiento de la infección vírica, tal como aquellas vistas en pacientes con COVID-19 que se están recuperando. Los dispositivos extracorpóreos comprenden una lectina que se une a diversos componentes biológicos que contienen glicoproteína, tales como exosomas. Cuando se usa para hemofiltración, el dispositivo extracorpóreo con la lectina es capaz de filtrar, por ejemplo, partículas víricas que tienen glicoproteínas (incluyendo SARS-CoV-2 y subcomponentes constituyentes), nanopartículas mediadoras de COVID-19 no víricas y exosomas cargados con glicoproteína en circulación.

[0174] En algunas realizaciones, los dispositivos, sistemas y métodos de la divulgación comprenden uno o más cartuchos de fibras huecas que contienen un agente de afinidad que es una lectina, que preferiblemente es GNA. Otras lectinas incluyen NPA, concanavalina A y cianovirina. Ejemplos de dispositivos extracorpóreos que comprenden lectinas que pueden usarse en los métodos dados a conocer en el presente documento pueden encontrarse en los documentos WO 2007/103572, WO 2009/023332 y WO 2010/065765.

[0176] Los dispositivos extracorpóreos dados a conocer en el presente documento son útiles para capturar partículas víricas en circulación que comprenden glicoproteínas, incluyendo partículas víricas con envoltura que, durante la replicación, incorporan la membrana de la célula huésped que incluyen un conjunto rico de glicoproteínas y otras moléculas. En el caso de SARS-CoV-2 y otros coronavirus, la glicoproteína S se expresa también y decora la envoltura vírica.

[0178] Durante toda la pandemia de COVID-19, ha resultado evidente que muchos pacientes pueden experimentar efectos secundarios a largo plazo a partir de una infección por SARS-CoV-2, o síndrome post-COVID-19. El proceso inflamatorio que el cuerpo experimenta para luchar contra el virus puede conducir a complicaciones graves que afectan a un amplio rango de órganos sistémicos. En algunos casos, el daño realizado por la inflamación puede ser más grave que la propia infección. Tal como se muestra en el presente documento, los dispositivos extracorpóreos dados a conocer en el presente documento son también útiles a la hora de tratar o inhibir estas secuelas a largo plazo de una infección por coronavirus, dando como resultado un pronóstico mejorado de problemas crónicos provocados por la infección. Esta terapia puede implicar la depleción de exosomas del paciente, que pueden comprender uno o más miARN que afectan negativamente al paciente, incluso si el paciente ya no tiene una infección vírica activa.

[0180] Por consiguiente, en algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere a dispositivos extracorpóreos que comprenden una lectina para eliminar organismos patógenos, fragmentos de los mismos u otros componentes biológicos de la sangre o del plasma de un paciente. En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende uno o más cartuchos de fibras huecas que comprenden la lectina. Según la tecnología de membrana de fibras huecas proporcionada en el presente documento o conocida de otro modo en la técnica, las realizaciones de la divulgación implican un mecanismo de exclusión por tamaño para nanopartículas subcelulares (incluyendo, pero sin limitarse a, partículas víricas, nanopartículas mediadoras de COVID-19, exosomas y similares) para entrar en contacto con la matriz de afinidad, restringiendo el peso de componentes sanguíneos más grandes (incluyendo células) a través de los poros de las fibras huecas al interior del espacio capilar extra del dispositivo donde reside el agente de afinidad. En algunas realizaciones, los tamaños de poro oscilan entre 20-500 nanómetros. En algunas realizaciones, los tamaños de poro son de 200 nm o aproximadamente 200 nm.

[0181] A modo de ejemplo, sangre o plasma se hace pasar a través de un circuito de circulación extracorpóreo que usa un cartucho de fibras huecas teniendo las membranas de dichas fibras huecas una permeabilidad suficiente para las nanopartículas subcelulares encontradas en la sangre o el plasma que deben eliminarse a través de la membrana de las fibras huecas y a un área fuera de las fibras que contienen un sustrato que se une a uno solo o una pluralidad de agentes (por ejemplo, lectinas) capaces de adherirse a dichas nanopartículas subcelulares de una manera tal, que dichas nanopartículas subcelulares se acoplan a dicho agente y sustancialmente no vuelven a entrar en las fibras huecas. Dentro del conocimiento de un experto en la técnica están disponibles numerosos tipos de sistemas de fibras huecas. La selección de dicho sistema de fibras huecas depende del volumen de sangre o plasma deseado y la tasa de paso de dicho volumen de sangre o plasma a través del sistema de fibras huecas. Específicamente, pueden usarse cartuchos de fibras huecas que tienen longitudes de 250 mm y que contienen 535 fibras huecas suministrados por Amicon, y que tienen las dimensiones de fibra: D.I. 180 micras y D.E. 360 micras, y el área superficial de contacto total en el cartucho es de 750 cm2. Alternativamente, pueden usarse el cartucho de filtro de fibras huecas “Plasmaflux P2” (vendido por Fresenius) o cartuchos Plasmart PS60 (vendidos por Medical srl).

[0183] Independientemente del sistema de fibras huecas usado, el concepto necesario para la aplicación de la presente divulgación es que se requiere que dichos filtros de fibras huecas permitan el paso de células sanguíneas a través del interior de dicha fibra hueca y permitan la difusión de nanopartículas subcelulares al exterior. Con el fin de permitir tal difusión, es necesario que los poros en la membrana de la fibra hueca sean de un diámetro suficiente para permitir partículas que oscilen entre el tamaño de 20 nanómetros y 500 nanómetros de diámetro, dependiendo de las partículas de interés. En algunas realizaciones, es necesario que los poros en la membrana de la fibra hueca sean de un diámetro suficiente para permitir partículas que oscilen entre el tamaño de 50 nanómetros y 300 nanómetros de diámetro. En algunas realizaciones, es necesario que los poros en la membrana de la fibra hueca sean de un diámetro suficiente para permitir partículas que oscilen entre el tamaño de 80 nanómetros y 200 nanómetros de diámetro. Durante la experimentación con diferentes fibras huecas, un experto en la técnica encontraría útil utilizar partículas de intervalos de tamaño similares a los de las nanopartículas subcelulares con el fin de calibrar y cuantificar la capacidad de diversos tamaños de poro de filtros huecos. Un método de realizar esto es a través de la utilización de perlas MACS™ disponibles comercialmente (Milteny Biotech), que tienen un tamaño de 60 nanómetros. Perlas de látex esféricas, fluorescentes, que oscilan en tamaño entre 25 y 1000 nm también están disponibles para este propósito (por ejemplo, de Duke Scientific (Palo Alto, Calif.)).

[0185] Es necesario que el sustrato o la matriz que debe usarse en la puesta en práctica de la presente divulgación permita una permeación de flujo suficiente de modo que componentes sanguíneos no celulares que entren en el espacio exterior a la fibra hueca se distribuyan por todo el material de sustrato o de matriz, de modo que se produzca un contacto sustancial entre las nanopartículas subcelulares que permean el filtro de fibras huecas y el agente de unión que está acoplado al sustrato o a la matriz. Un experto en la técnica conoce sustratos o matrices adecuados. Dichos sustratos o matrices incluyen gel de sílice, dextrano, agarosa, polímeros de nailon, polímeros de ácido acrílico, copolímeros de etileno y anhídrido de ácido maleico, aminopropilsílice, aminocelite, perlas de vidrio, tierra de diatomeas, tierra de diatomeas que contienen silicato u otros sustratos o matrices conocidos en la técnica. Ejemplos de estos se describen en las siguientes patentes: Lentz pat. estadounidense n.° 4.708.713, Motomura pat. estadounidense n ° 5.667.684, Takashimaet alpat. estadounidense n ° 5.041.079, y Porath y Janson pat. estadounidense n ° 3.925.152. Los agentes que están acoplados a dicho sustrato pueden elegirse basándose en la afinidad conocida a nanopartículas subcelulares.

[0187] En algunas realizaciones, los métodos de la presente divulgación se llevan a cabo usando un cartucho de afinidad que usa el dispositivo ilustrado en la FIG. 1. En este dispositivo, se hace pasar sangre o plasma a través de la luz de una membrana de ultrafiltración de fibras huecas que está en contacto íntimo, en el lado no humedecido con sangre de la membrana, con lectinas inmovilizadas, que forman un medio para aceptar e inmovilizar virus y otras nanopartículas subcelulares. Por tanto, el dispositivo retiene glicoproteínas intactas (que pueden formar parte de una estructura más grande) unidas mediante lectina, al tiempo que permite que otros componentes pasen a través de la luz.

[0189] El SARS-CoV-2 es el virus prototípico para el que se describe esta divulgación, pero la divulgación puede adaptarse a la eliminación de cualquier coronavirus u otro virus. Un dispositivo a modo de ejemplo, descrito en detalle en lasFIGS. 1-3,incluye múltiples canales de membrana de ultrafiltración de fibras huecas que forma una cámara de filtración. Un puerto de entrada y un puerto de efluente están en comunicación con la cámara de filtración. La membrana de ultrafiltración es preferiblemente una membrana anisotrópica con el lado compacto o de retención dirigido hacia el torrente sanguíneo. La membrana está formada convenientemente de cualquier número de polímeros conocidos en la técnica, por ejemplo, polisulfona, polietersulfona, poliamidas, poliimidas, acetato de celulosa y poliacrilamida. Preferiblemente, la membrana tiene poros de 200-700 nm de diámetro, que permitirán el paso de nanopartículas subcelulares, por ejemplo, viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos, tales como glicoproteínas derivadas de SARS-CoV-2 (por ejemplo, viriones de SARS-CoV-2 de 110 nm de diámetro), y nanopartículas mediadoras de COVID-19 no víricas (por ejemplo, exosomas), pero no la mayoría de las células sanguíneas (glóbulos rojos, 2.000 nm de diámetro; linfocitos, 7.000-12.000 nm de diámetro; macrófagos, 10.000-18.000 nm de diámetro). Un diagrama de un dispositivo a modo de ejemplo se muestra en la FIG. 1. El dispositivo comprende un cartucho 10 que comprende una cámara de procesamiento de sangre 12 formada de material adecuado tal como policarbonato 14. Alrededor de la cámara 12 hay una cámara exterior opcional 16. Un fluido de control de temperatura puede hacerse circular al interior de la cámara 16 a través del puerto 18 y fuera del puerto 20. El dispositivo incluye un puerto de entrada 32 para la sangre y un puerto de salida 34 para el efluente. El dispositivo proporciona también uno o más puertos 48 y 50, para acceder al espacio de canal extra en el cartucho. Tal como se muestra en lasFIGS. 1 y 2, la cámara 12 contiene una pluralidad de membranas de ultrafiltración 22. Estas membranas tienen preferiblemente un diámetro interno de 0,3 mm y un diámetro externo de 0,5 min. LaFIG. 3es una representación en sección transversal de un canal 22 y muestra la naturaleza anisotrópica de la membrana. Tal como se muestra en laFIG. 3, una estructura de membrana de fibras huecas 40 se compone de un único material polimérico que se conforma para dar una sección tubular que comprende una membrana de ultrafiltración relativamente compacta 42 y una porción exterior relativamente porosa 44 en la que puede haber lectinas inmovilizadas 46. Durante el funcionamiento del dispositivo, una disolución que contiene las lectinas se carga en el dispositivo a través del puerto 48. Se permite que las lectinas se inmovilicen en el exterior 22 de la membrana en laFIG. 2. Las lectinas no unidas pueden recogerse del puerto 50 lavando con solución salina u otras disoluciones. La carcasa de cartucho está hecha de policarbonato y las fibras se mantienen en su sitio con material de encapsulamiento de poliuretano. Las lectinas se encuentran en la luz extra (o capilar extra o canal extra) unidas covalentemente a un material de resina sólido de 150-300 micras (o más ancho) de diámetro. La resina está hecha de un material de dióxido de silicio poroso (SiO2), preferiblemente tierra de diatomeas. Aproximadamente 35-45 gramos de resina unida a lectina se cargan en el espacio extra de luz alrededor de las fibras a través de los puertos laterales de policarbonato del cartucho. Durante el funcionamiento, la sangre pasa a lo largo de la longitud de las fibras y el plasma sale de los poros y entra en contacto con la lectina que está unida al sustrato de resina sólido.

[0191] Para la unión de las lectinas a la membrana de ultrafiltración, los polímeros de la membrana de ultrafiltración se activan en primer lugar, por ejemplo, se hacen susceptibles para combinarse químicamente con proteínas, usando procesos conocidos en la técnica. Puede usarse cualquier número de polímeros diferentes. Para obtener un polímero de ácido poliacrílico reactivo, por ejemplo, pueden usarse carbodiimidas (Valuevet al.,1998, Biomaterials, 19:41-3). Una vez que se ha activado el polímero, las lectinas pueden acoplarse directamente o por medio de un ligador para formar en cualquier caso una matriz de afinidad. Los ligadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, avidina, estrepavidina, biotina, proteína A o proteína G. Las lectinas pueden unirse también directamente al polímero de la membrana de ultrafiltración usando agentes de acoplamiento tales como reactivos bifuncionales, o pueden unirse indirectamente. En algunas realizaciones, puede usarse GNA acoplada covalentemente a agarosa para formar una matriz de afinidad.

[0193] Por consiguiente, un aspecto de la divulgación proporciona un cartucho de hemodiálisis de afinidad por lectina, que comprende: una cámara de filtración configurada para recibir sangre o plasma; una lectina, acoplada opcionalmente a agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite dispuesto dentro de dicha cámara de filtración; y una membrana de fibras huecas porosa, teniendo dicha membrana poros de 200-500 nm de diámetro; seleccionándose la lectina del grupo que consiste en: aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA), cianovirina y concanavalina A, y mezclas de las mismas, estando configurado el cartucho para eliminar nanopartículas subcelulares de la sangre o del plasma.

[0195] Los procesos que pueden usarse para aislar lectinas tal como GNA se conocen generalmente en la técnica. Por ejemplo, Van Dammeet al.demuestran el aislamiento de la lectina de bulbos deGalantus nivalis(campanilla de las nieves) mediante purificación por afinidad con manosa u otros azúcares (Van Dammeet al.FEBS Letters (1987) 215(1):140-144). El uso de GNA purificada con fines de purificación por afinidad se ha demostrado previamente, tal como para aislar glicoproteínas tales como inmunoglobulinas (Shibuyaet al.Archives Biochem. Biophys. (1988) 267(2):676-680).

[0197] La presente divulgación proporciona también un dispositivo con una cámara de filtración que comprende además un puerto de entrada y un puerto de salida; estando un canal de dicha membrana de fibras huecas en comunicación fluídica con dicho puerto de entrada y dicho puerto de salida; teniendo dicho cartucho un espacio de canal extra dentro de dicha cámara que rodea dicha membrana de fibras huecas; y estando dicha lectina, opcionalmente, acoplada covalentemente a agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite que está dispuesto dentro de dicho espacio de canal extra próximo a una superficie exterior de dicha membrana.

[0199] Para algunos métodos de la presente divulgación, se extrae sangre o plasma que tiene nanopartículas subcelulares (que pueden contener o no partículas víricas de SARS-CoV-2) de un paciente y se pone en contacto con una membrana de ultrafiltración. En algunas realizaciones, la sangre se separa en primer lugar en su plasma y componentes celulares. La sangre o plasma se pone entonces en contacto con las lectinas para eliminar las nanopartículas subcelulares mediante la unión entre glicoproteínas y lectinas. El plasma puede recombinarse entonces con los componentes celulares y devolverse al paciente. Alternativamente, los componentes celulares pueden devolverse al paciente por separado. La terapia puede repetirse periódicamente hasta haber obtenido una respuesta deseada. En algunas realizaciones, la terapia puede llevarse a cabo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23 o 24 horas en el plazo de un periodo de 24 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, la terapia puede repetirse cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días.

[0201] En algunas realizaciones, los métodos y dispositivos de la presente divulgación comprenden adicionalmente agentes de afinidad que son anticuerpos monoclonales que se unen a glicoproteínas derivadas de SARS-CoV-19, tal como la proteína de la espícula S 1 descrita en el presente documento, en el circuito extracorpóreo. En determinadas realizaciones de la divulgación, los métodos y dispositivos de la presente divulgación comprenden un agente de afinidad de GNA y un agente de afinidad de anticuerpo monoclonal.

[0203] Un experto en la técnica reconocerá que una muestra biológica puede tomarse de, pero sin limitarse a, los siguientes fluidos corporales: sangre periférica, plasma, suero, ascitis, líquido cefalorraquídeo (CSF), esputo, saliva, médula ósea, líquido sinovial, humor acuoso, fluido amniótico, cerumen, leche materna, fluido de lavado bronquioalveolar, semen (incluyendo fluido prostático), fluido de Cowper o fluido preeyaculatorio, eyaculación femenina, sudor, materia fecal, cabello, lágrimas, fluido quístico, fluido pleural y peritoneal, fluido pericárdico, linfa, quimo, quilo, bilis, fluido intersticial, menstruación, pus, sebo, vómito, secreciones vaginales, secreción mucosa, fluido nasal (por ejemplo, un aislado a partir de hisopo nasal), agua de heces, orina, jugo pancreático, fluidos de lavado de cavidades sinusales, aspirados broncopulmonares u otros fluidos de lavado. Una muestra biológica puede incluir también la cavidad del blastocisto, sangre de cordón umbilical o circulación maternal que puede ser de origen fetal o materno. La muestra biológica puede ser también una muestra de tejido o biopsia.

[0205] Métodos de terapia o uso

[0207] La presente divulgación se refiere a métodos para usar lectinas para la hemofiltración de sangre o plasma en un entorno extracorpóreo. Por consiguiente, la presente divulgación proporciona métodos para reducir nanopartículas subcelulares, tales como aquellas asociadas con COVID-19 o un síntoma o una secuela del mismo, del sistema circulatorio de un individuo que comprende las etapas de obtener sangre o plasma del individuo, hacer pasar la sangre o el plasma a través de una membrana de fibras huecas porosa en la que moléculas de lectina están inmovilizadas dentro de la porción exterior porosa de la membrana, recoger la sangre o el plasma que pasan a través y volver a infundir la sangre o el plasma que pasan a través al individuo.

[0209] En algunas realizaciones no limitativas, los dispositivos y métodos de la presente divulgación tienen la capacidad de capturar y eliminar físicamente la proteína S1 (de espícula) de SARS-CoV-2 con una alta eficiencia. Por consiguiente, la presente divulgación proporciona métodos para capturar y eliminar físicamente nanopartículas mediadoras de COVID-19 del sistema circulatorio de un individuo que comprende las etapas de obtener sangre o plasma del individuo, hacer pasar la sangre o el plasma a través de una membrana de fibras huecas porosa en la que moléculas de lectina están inmovilizadas dentro de la porción exterior porosa de la membrana, recoger la sangre o el plasma que pasan a través y volver a infundir la sangre o el plasma que pasan a través al individuo. Sin embargo, en algunas realizaciones, los dispositivos y métodos dados a conocer en el presente documento pueden usarse para un paciente que ya no tiene una infección vírica activa, pero todavía presenta un síntoma o una secuela de la misma.

[0211] Una vez que se ha identificado un sujeto que lo necesite, por ejemplo, un sujeto con enfermedad por COVID-19 grave, que corre el riesgo de enfermedad por COVID-19 grave (por ejemplo, un sujeto que necesite terapia con oxígeno), o ha superado el COVID-19 pero todavía tiene uno o más síntomas o secuelas, un método de agotar nanopartículas subcelulares que pueden estar asociadas con COVID-19 puede incluir las siguientes etapas: a) proporcionar un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina u otro agente de unión por afinidad que se une selectivamente a las superficies externas de las nanopartículas subcelulares; b) retirar una muestra biológica, por ejemplo, sangre o plasma, de un sujeto usando el sistema, teniendo la muestra biológica una concentración de las nanopartículas subcelulares; c) procesar la muestra biológica usando el cartucho de fibras huecas de modo que los agentes de afinidad estén en contacto con la muestra biológica; d) capturar al menos una porción de las nanopartículas subcelulares de la muestra biológica de modo que dicha porción de las nanopartículas subcelulares se retenga en el cartucho de fibras huecas; y e) reintroducir la muestra biológica sin dicha porción de nanopartículas subcelulares capturadas en el paciente sin retirar la muestra biológica del sistema antes de que la muestra biológica esté lista para administrarse al paciente. Opcionalmente, una muestra biológica de dicho sujeto, tal como un fluido nasal (por ejemplo, un aislado a partir de un hisopo nasal), sangre o plasma, de dicho sujeto se obtiene antes o después de la terapia o ambos y dicha muestra biológica se analiza para el nivel o la cantidad de nanopartículas subcelulares.

[0213] Para su uso en pacientes enfermos de manera crítica con COVID-19, la captura de viriones de SARS-CoV-2 del sistema circulatorio puede tener varios beneficios positivos tal como sigue: (1 ) disminuir la carga sistémica de SARS-CoV-2; (2) reducir la gravedad de la respuesta inflamatoria sistémica (por ejemplo, tormenta de citocinas) que se produce durante la infección; (3) mejorar las funciones de células inmunes incluyendo células con funciones antivíricas; y (4) reducción de la infección celular continua, daño progresivo a órganos afectados, y/o síntomas relacionados con la enfermedad debido al propio virus y/o la respuesta inflamatoria.

[0214] Tal como se describe en el presente documento, se ha demostrado que los dispositivos extracorpóreos son capaces de capturar exosomas de la sangre o el plasma de un paciente. En algunas realizaciones, el paciente puede tener una infección por coronavirus en curso, tal como COVID-19. En otras realizaciones, el paciente puede no tener ya una infección por coronavirus activa (por ejemplo, tiene una cantidad reducida o ninguna cantidad de virus en circulación que se detecta mediante enfoques convencionales), pero el paciente todavía presenta un síntoma o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los exosomas agotados mediante los dispositivos extracorpóreos pueden comprender miR-424-5p, miR-16-2-3p o ambos. Estos miARN pueden estar implicados en efectos negativos del síntoma o de la secuela de coronavirus en el paciente, incluso si el paciente ya no tiene una infección por coronavirus activa.

[0216] En el presente documento en algunas realizaciones se dan a conocer métodos para reducir viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos, en un paciente con COVID-19 que lo necesite. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que se une a viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos, presentes en la sangre o el plasma, se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos, en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal, de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24 a 48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional (PT/INR) prolongado, choque séptico o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y en el que la sangre o el plasma fluye a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; medir los niveles o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos, en una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada tras (b) en relación con una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada antes de (b). En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; o exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 201/501YV1 (B.1.1.7), 20H/501YV2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min a través de dicho dispositivo extracorpóreo, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 200 a 240 ml/min o lo más preferiblemente de 240 ml/min. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende la administración de favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0218] En el presente documento en algunas realizaciones se dan a conocer también métodos para reducir nanopartículas mediadoras de COVID-19 en un paciente con COVID-19 que lo necesite. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina que se une a nanopartículas mediadoras de COVID-19 (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum);(b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que las nanopartículas mediadoras de COVID-19 se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de las nanopartículas mediadoras de COVID-19, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos, o nanopartículas mediadoras de COVID-19 en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal (por ejemplo, obtenida a partir de un hisopo nasal), de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce nanopartículas mediadoras de COVID-19, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional (PT/INR) elevado, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 201/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (<b>.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min, a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0220] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para reducir exosomas que comprenden un antígeno de COVID-19 en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina que se une a los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum);(b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar viriones de SARS-CoV-2, o porciones de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal, de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce exosomas que comprenden un antígeno de COVID-19, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional elevado (PT/INR), choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, más preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 200 a 240 ml/min, o 240 ml/min a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0222] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para reducir los niveles o cantidades de interleucina 6 (IL-6) en circulación en un sujeto, por ejemplo, un paciente con COVID-19, en comparación con un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que se une a viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas que comprenden un antígeno de COVID-19; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos, o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) medir el nivel o la cantidad de IL-6 en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce los niveles o la cantidad de IL-6 en una muestra de plasma o sangre, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 mg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma), ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (b .1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min o de 200 a 240 ml/min o lo más preferiblemente de 240 ml/min a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0224] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para reducir el nivel o la cantidad de dímero D en circulación en un sujeto, por ejemplo, un paciente con COVID-19, en comparación con un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que se une a viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas que comprenden un antígeno de COVID-19; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) medir el nivel o la cantidad de dímero D en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce el nivel o la cantidad de dímero D en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional elevado (PT/INR), choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma) ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 200 a 240 ml/min, lo más preferiblemente de 240 ml/min, a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a) , (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0226] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para reducir el nivel o la cantidad de troponina T en circulación en un paciente con COVID-19, en comparación con un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma de un paciente infectado con COVID-19 en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum)que se une a viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas que comprenden un antígeno de COVID-19; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19 se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o los exosomas que comprenden el antígeno de COVID-19, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) medir el nivel o la cantidad de troponina T en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene COVID-19 para recibir una terapia que reduce los niveles o la cantidad de troponina T en una muestra de sangre o de plasma, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, el COVID-19 está provocado por una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 201/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min o de 200 ml/min a 240 ml/min, lo más preferiblemente de 240 ml/min a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, el flujo de sangre se inicia a una tasa de flujo inicial de 100 ml/min y se aumenta gradualmente hasta 200 ml/min (por ejemplo, en un aumento paso a paso a lo largo de un periodo de cinco minutos). En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0228] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para tratar o inhibir una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un paciente que lo necesite. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma que comprende coronavirus o una porción del mismo de un paciente que tiene una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina que se une a dicho coronavirus o una porción del mismo (por ejemplo, aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), aglutinina deNarcissus pseudonarcissus(NPA) o cianovirina deNostoc ellipsosporum); (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que el coronavirus o una porción del mismo presente en la sangre o el plasma, se una a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida del coronavirus, o una porción del mismo, en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar el coronavirus o porciones del mismo en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal (por ejemplo, un aislado de hisopo nasal), de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene una infección por coronavirus, o un síntoma o secuela de la misma, para recibir una terapia que reduce dicho coronavirus o una porción del mismo. En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24-48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional elevado (PT/INR), choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D sérico elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos, en una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada tras (b) en relación con una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada antes de (b). En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en una muestra biológica tal como sangre o plasma del paciente antes o después de la terapia o ambos. En algunas realizaciones, la infección por coronavirus está provocada por un coronavirus seleccionado de SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, MERS-CoV, HCoV-229E, HCoV-Oc43, HCoV Nl63 o HCoV-HKU1. En algunas realizaciones, el SARS-CoV-2 es una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 200 ml/min a 240 ml/min, lo más preferiblemente de 240 ml/min, a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0230] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para tratar o inhibir una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un paciente que lo necesite. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma que comprende exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, de un paciente que tiene una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina que se une a dichos exosomas; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los exosomas presentes en la sangre o el plasma se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los exosomas en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar los exosomas en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal (por ejemplo, aislada a partir de un hisopo nasal), de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, para recibir una terapia que reduce dichos exosomas. En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección por coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el coronavirus antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección por coronavirus. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional elevado (PT/INR), choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos, en una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada tras (b) en relación con una muestra de la sangre del paciente tomada antes de (b). En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende determinar una mejora en ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en el paciente en relación con antes del tratamiento. En algunas realizaciones, la infección por coronavirus está provocada por un coronavirus seleccionado de SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, MERS-CoV, HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV NL63 o HCoV-HKU1. En algunas realizaciones, el SARS-CoV-2 es una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501 Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 20 ml/min a 240 ml/min, lo más preferiblemente de 240 ml/min, a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0232] En el presente documento en algunas realizaciones también se dan a conocer métodos para tratar o inhibir una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un paciente que lo necesite, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma coagulopatía asociada a COVID-19 (CAC). En algunas realizaciones, los métodos son más generalmente para tratar o inhibir una coagulopatía (CAC) en un paciente que lo necesite. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) introducir sangre o plasma que comprende exosomas asociados con una infección vírica o bacteriana (por ejemplo, COVID-19), o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, de un paciente que tiene una infección vírica o bacteriana (por ejemplo, COVID-19), o un síntoma o una secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, en un dispositivo extracorpóreo que comprende una lectina (por ejemplo, GNA, NPA o cianovirina) que se une a dichos exosomas; (b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los exosomas presentes en la sangre o el plasma se unan a dicha lectina; (c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los exosomas en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y (d) opcionalmente, detectar o identificar los exosomas en una muestra de dicho paciente, tal como una muestra nasal (por ejemplo, aislada a partir de un hisopo nasal), de sangre o de plasma, antes de (a) o tras (b) o ambos, y/u opcionalmente seleccionar o identificar un paciente que tiene una infección vírica o bacteriana (por ejemplo, COVID-19), o un síntoma o una secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, para recibir una terapia que reduce dichos exosomas. En algunas realizaciones, el paciente no comprende una infección vírica o bacteriana (por ejemplo, COVID-19) antes de la etapa (a), pero presenta síntomas o una secuela de la infección, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC. En algunas realizaciones, el paciente ha aclarado la infección antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma del paciente no comprende el virus o bacteria (por ejemplo, COVID-19) antes de la etapa (a), pero el paciente todavía presenta síntomas o una secuela de la infección, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene CAC, lesión pulmonar aguda (ALI) prematura, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro, disnea, frecuencia respiratoria > 30 respiraciones/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300, infiltrados pulmonares >50%, fallo respiratorio en el plazo de 24 a 48 horas, ferritina elevada, lactato elevado, lactato deshidrogenasa (LDH) elevada, recuento de linfocitos absoluto (ALC) bajo, recuento de plaquetas bajo, tiempo de protrombina/relación normalizada internacional elevado (PT/INR), choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos antes de (a) o tras (b) o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente has CAC antes de (a) o tras (b), o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de IL-6 sérica elevado es mayor de o igual a 2 pg/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de dímero D sérico elevado es mayor de o igual a 500 ng/ml. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar si el paciente tiene un nivel o cantidad de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel o cantidad de control (por ejemplo, un nivel o una cantidad encontrado en una muestra de sangre o de plasma de un paciente sano o un paciente que no experimenta inflamación o infección por COVID-19 o una secuela asociada con la misma). En algunas realizaciones, el nivel de troponina T sérica elevado es mayor de o igual a 15 ng/l. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalanthus nivalis(GNA). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, las fibras huecas del cartucho de fibras huecas comprenden un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 20-500 nm o de aproximadamente 20-500 nm. En algunas realizaciones, el tamaño de poro es de 200 nm o de aproximadamente 200 nm. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido comprende tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar viriones de coronavirus, o porciones de los mismos, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además aislar exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, unidos a la lectina del dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además determinar los contenidos de los exosomas aislados. En algunas realizaciones, los exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, comprenden miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar o medir una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; el número de exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos, en una muestra de la sangre o plasma del paciente tomada tras (b) en relación con una muestra de la sangre del paciente tomada antes de (b). En algunas realizaciones, los métodos comprenden además observar una mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, en el paciente tras (b) o (c) o ambos. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, comprende determinar una mejora en la CAC, ALI prematura, ARDS prematuro, frecuencia respiratoria, saturación de oxígeno en sangre, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado, infiltrados pulmonares, fallo respiratorio, ferritina, lactato, LDH, ALC, recuento de plaquetas, PT/INR, choque séptico, o disfunción o fallo de múltiples órganos, o cualquier combinación de los mismos, en el paciente. En algunas realizaciones, observar la mejora en la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma, comprendiendo el síntoma o la secuela de la misma CAC, comprende observar una reducción en el número de viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o el síntoma o la secuela de la misma; o medir el nivel o la cantidad de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en el paciente en relación con antes del tratamiento. En algunas realizaciones, la infección por coronavirus está provocada por un coronavirus seleccionado de SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, MERS-CoV, HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV Nl63 o HCoV-HKU1. En algunas realizaciones, el SARS-CoV-2 es una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo está imprimado con un anticoagulante, preferiblemente heparina, para prevenir la coagulación de la sangre antes de (a). En algunas realizaciones, la sangre se hace fluir a una tasa de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 ml/min, preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 240 ml/min o de 200 ml/min a 240 ml/min, lo más preferiblemente de 240 ml/min, a través de dicho dispositivo extracorpóreo. En algunas realizaciones, reintroducir la sangre de vuelta en el paciente comprende lavar el dispositivo extracorpóreo con solución salina. En algunas realizaciones, la sangre o el plasma se pone en contacto con el dispositivo extracorpóreo durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, las etapas (a), (b), (c), y opcionalmente (d), se repiten cada día durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, los métodos comprenden además administrar una terapia antivírica adicional al paciente. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente, o cualquier combinación de los mismos.

[0234] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos, en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas de viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (d) reducir al menos una porción de viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos de modo que dicha porción de viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos, se retenga en el cartucho de fibras huecas; y (e) reintroducir la sangre sin dicha porción de viriones de SARS-CoV-2, o fragmentos de los mismos al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0236] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de nanopartículas mediadoras de COVID-19 en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas de nanopartículas mediadoras de COVID-19; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (d) reducir al menos una porción de nanopartículas mediadoras de COVID-19 de modo que dicha porción de nanopartículas mediadoras de COVID-19 se retenga en el cartucho de fibras huecas; y (e) reintroducir la sangre sin dicha porción de nanopartículas mediadoras de COVID-19 al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0238] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de exosomas mediadores de COVID-19 en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas de exosomas mediadores de COVID-19; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (d) reducir al menos una porción de exosomas mediadores de COVID-19 de modo que dicha porción de exosomas mediadores de COVID-19 se retenga en el cartucho de fibras huecas; y (e) reintroducir la sangre sin dicha porción de exosomas mediadores de COVID-19 al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0239] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de IL-6 en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) medir los niveles de IL-6 en la sangre; (d) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (e) reducir al menos una porción de exosomas mediadores de COVID-19 de modo que dicha porción de viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 se retenga en el cartucho de fibras huecas; (f) medir los niveles de IL-6 en la sangre; y (g) reintroducir la sangre sin dicha porción de superficies viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0240] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de dímero D en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) medir los niveles de dímero D en la sangre; (d) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (e) reducir al menos una porción de exosomas mediadores de COVID-19 de modo que dicha porción de viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 se retenga en el cartucho de fibras huecas; (f) medir los niveles de dímero D en la sangre; y (g) reintroducir la sangre sin dicha porción de superficies viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0242] En el presente documento se dan a conocer también métodos para reducir la cantidad de troponina T en un paciente con COVID-19. En algunas realizaciones, los métodos comprenden (a) proporcionar un dispositivo extracorpóreo que comprende un cartucho de fibras huecas que comprende una lectina que se une selectivamente a las superficies externas viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19; (b) retirar sangre de un paciente con COVID-19; (c) medir los niveles de troponina T en la sangre; (d) procesar la sangre del cartucho de fibras huecas de modo que la lectina esté en contacto con la sangre; (e) reducir al menos una porción de exosomas mediadores de COVID-19 de modo que dicha porción de viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 se retenga en el cartucho de fibras huecas; (f) medir los niveles de troponina T en la sangre; y (g) reintroducir la sangre sin dicha porción de superficies viriones de SARS-CoV-2 o fragmentos de los mismos o exosomas mediadores de COVID-19 al paciente. En algunas realizaciones, la lectina es GNA.

[0244] En el presente documento se dan a conocer también dispositivos extracorpóreos que comprenden una lectina para su uso en el tratamiento o la inhibición de una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, o para reducir los niveles o las cantidades de IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa, VCAM-1, TNF-alfa, proteína C reactiva (CRP), dímero D o troponina T, o cualquier combinación de los mismos en un paciente que lo necesite. En el presente documento se dan a conocer también dispositivos extracorpóreos que comprenden una lectina para su uso en el tratamiento o la inhibición de coagulopatía asociada a COVID-19 en un paciente que lo necesite. En el presente documento se dan a conocer también dispositivos extracorpóreos que comprenden una lectina para su uso en un método de tratamiento o de inhibición de una infección por coronavirus, o un síntoma o una secuela de la misma, en un paciente que lo necesite, comprendiendo el método hacer fluir sangre del paciente a través del dispositivo extracorpóreo de modo que la sangre entre en contacto con la lectina, dando como resultado de ese modo sangre procesada; y reintroducir la sangre procesada de vuelta en el paciente. En algunas realizaciones preferidas, la lectina es aglutinina deGalantus nivalis.En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo comprende un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina, fluyendo la sangre del paciente a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas. En algunas realizaciones, la lectina está inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y el cartucho de fibras huecas comprende la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido. En algunas realizaciones, el soporte sólido es agarosa, tierra de diatomeas o aminocelite. En algunas realizaciones, el soporte sólido es tierra de diatomeas. En algunas realizaciones, la lectina se une selectivamente a viriones de coronavirus, o porciones de los mismos; exosomas asociados con la infección por coronavirus, o los síntomas o una secuela de la misma, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la infección por coronavirus está provocada por un coronavirus seleccionado de SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, MERS-CoV, HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV NL63 o HCoV-HKU1. En algunas realizaciones, el SARS-CoV-2 es una variante de SARS-CoV-2. En algunas realizaciones, la variante de SARS-CoV-2 se selecciona de 20I/501Y.V1 (B.1.1.7), 20H/501Y.V2 (B.1.351), 20J/501Y.V3 (P.1), B.1.1.207, VUI-202102/03 (B.1.525), VUI-202101/01 (P.2), VUI-202102/01 (A.23.1), VUI 202102/04 (B.1.1.318), VUI 202103/01 (B.1.324.1) o CAL.20C (B.1.429). En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo se usa durante 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 horas de una vez, o cualquier cantidad de tiempo dentro de un intervalo definido por cualesquiera dos de los tiempos mencionados anteriormente. En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo se usa cada día durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días. En algunas realizaciones, el dispositivo extracorpóreo se usa con una terapia antivírica adicional. En algunas realizaciones, la terapia antivírica adicional comprende favipiravir, favilavir, remdesivir, tocilizumab, galidesivir, sarilumab, lopinavir, ritonavir, darunavir, ribavirina, interferón-a, interferón-a pegilado, interferón alfa-2b, suero de convaleciente o cualquier combinación de los mismos.

[0246] La invención, que se define mediante las reivindicaciones adjuntas, se da a conocer de manera general en el presente documento usando lenguaje afirmativo para describir las numerosas realizaciones.

[0248] Ejemplos

[0249] Algunos aspectos de las realizaciones discutidas anteriormente se dan a conocer en detalle adicional en los siguientes ejemplos, que no se pretende que limiten de modo alguno el alcance de la presente divulgación. Los expertos en la técnica apreciarán que muchas otras realizaciones también se encuentran dentro del alcance de la invención, tal como se describe en las reivindicaciones.

[0251] Ejemplo 1: Preparación de una matriz de afinidad de lectina-agarosa a modo de ejemplo

[0253] Este ejemplo demuestra la preparación de una matriz de afinidad que usa GNA acoplada covalentemente a agarosa usando bromuro de cianógeno. Se usó agarosa activada con bromuro de cianógeno (CNBr) para el acoplamiento directo esencialmente según Cuatrecasas,et al(Cuatracasaset al.Proc Natl Acad Sci USA 61(2): 636-643, 1968). En resumen, se añade 1 ml de GNA a una concentración de 10 mg/ml en NaHCO30,1 M pH 9,5 a 1 ml de agarosa activada con CNBr (Sigma, St. Louis, Mo.) y se permite que reaccione durante la noche en frío. Cuando se ha completado la reacción, se aspiran los materiales sin reaccionar y se lava extensamente la agarosa acoplada con lectina con PBS fría estéril. La matriz de afinidad de lectina-agarosa se almacena entonces en frío hasta que esté lista para su uso. Alternativamente, GNA-agarosa está disponible comercialmente de Vector Labs (Burlingame, Calif.).

[0255] Ejemplo 2: Preparación de una matriz de afinidad de lectina-sílice a modo de ejemplo

[0257] Este ejemplo demuestra la preparación de la matriz de afinidad de lectina usando GNA acoplada covalentemente a perlas de vidrio por medio de base de Schiff y reducción con cianoborohidruro. La matriz de afinidad de lectinasílice se preparó mediante una modificación del método de Hermanson (Hermanson. Bioconjugate Techniques: 785, 1996). La lectina GNA se disolvió hasta una concentración de proteína final de 10 mg/ml en borato de sodio 0,1 M pH 9,5 y se añadió a perlas de vidrio de sílice derivatizada con aldehído (BioConnexant, Austin Tex.). La reacción es lo más eficiente a pH alcalino, pero funcionará a pH 7-9 y se hace normalmente a un exceso de 2-4 veces de GNA sobre sitios de acoplamiento. A esta mezcla se le añadieron 10 gl de NaCNBH35 M en NaOH 1 N (Aldrich, St Louis, Mo.) por ml de reacción de acoplamiento y se permitió que la mezcla reaccionase durante 2 horas a temperatura ambiente. Al final de la reacción, el aldehído sin reaccionar restante sobre las superficies de vidrio se ocupa con 20 gl de etanolamina 3 M pH 9,5 por ml de reacción. Tras 15 minutos a temperatura ambiente, la disolución de reacción se decantó y las proteínas y reactivos no unidos se eliminar lavando extensivamente en PBS. La matriz se almacenó entonces en el refrigerador hasta que estuvo lista para su uso.

[0259] Ejemplo 3: Preparación de una matriz de afinidad de lectina-aminocelite a modo de ejemplo

[0261] Este ejemplo demuestra la preparación de GNA acoplada covalentemente a aminocelite usando glutaraldehído. Se preparó aminocelite mediante la reacción de celite (tierra de diatomeas que contiene silicato) mediante reacción durante la noche en una disolución acuosa al 5% de aminopropiltrietoxisilano. El celite aminado se liberó mediante lavado reactivo en exceso con agua y etanol y se secó durante la noche para dar un polvo blanquecino. Un gramo del polvo se suspendió entonces en 5 ml de glutaraldehído al 5% (Sigma) durante 30 minutos. El glutaraldehído en exceso se eliminó entonces mediante filtración y lavando con agua hasta que no quedó nada de aldehído detectable en el lavado usando reactivo de Schiff. La torta de filtrado se resuspendió entonces en 5 ml de tampón de acoplamiento de borohidruro de Sigma que contenía 2-3 mg/ml de GNA y se permitió que la reacción avanzara durante la noche a temperatura ambiente. Al final de la reacción, la GNA sin reaccionar se eliminó mediante lavado y el aldehído sin reaccionar se aminó con etanolamina tal como se describe. Tras el lavado final en PBS estéril, el material se almacenó en frío hasta que estuvo listo para su uso.

[0263] Ejemplo 4: Preparación de una matriz de afinidad de lectina-tierra de diatomeas a modo de ejemplo

[0265] Se hace un dispositivo de hemodiálisis vírica de afinidad por lectina vertiendo un polvo seco que consiste en GNA inmovilizada sobre tierra de diatomeas (CHROMOSORB GAW 60/80; Celite Corp, Lompoc, Calif.) en el compartimento externo de una columna de plasmaféresis de fibras huecas (PLASMART 60; Medica, srl, Medollo Italia) usando un embudo acoplado a los puertos de salida de la columna. El polvo (40 gramos) se introduce bajo flujo de gravedad con agitación para llenar el espacio de fibras extra disponible. Para uso terapéutico, los cartuchos que contienen la resina de afinidad se sella térmicamente en bolsas de envío TYVEK y se esterilizan con irradiación de gamma 25-40 kGy. Muestras del producto se someten entonces a prueba para esterilidad y endotoxina y se encontró que cumplen las normas de la FDA. El producto terminado puede almacenarse durante al menos 6 meses a temperatura ambiente en un sitio seco frío hasta que esté listo para su uso.

[0267] Ejemplo 5: Preparación de un cartucho de matriz de afinidad de lectina a modo de ejemplo

[0269] Este ejemplo demuestra la preparación de un dispositivo de hemodiálisis por afinidad de lectina GNA. Se hizo el dispositivo vírico bombeando una suspensión de GNA inmovilizada particulada sobre perlas de agarosa o celite en tampón de PBS estéril en el compartimento externo de una columna de diálisis de fibras huecas usando una jeringa. Para muestras de sangre de hasta 15 ml se usaron cartuchos de diálisis de fibras huecas de polietersulfona Microkros equipados con accesorios Luer (200 gm de D.I., 240 gm de D.E., diámetro de poro de 200-500 nm, aproximadamente 0,5 ml de volumen interno) obtenidos de Spectrum Labs (Rancho Domínguez, Calif.). Los cartuchos que contenían la resina de afinidad se equilibraron con 5-10 volúmenes de columna de PBS estéril. Ejemplo 6: La lectina GNA se une a proteína de la espícula de SARS-CoV-2

[0270] Los dispositivos y métodos de la presente divulgación capturan glicoproteínas de la espícula 1 (S1) de SARS-CoV-2 y las agotan de una muestra. Se realizaron experimentos haciendo circular de manera continua una disolución a la que se añadió de manera conocida glicoproteína S1 de SARS-COV-2 a través de la minicolumna de dispositivoin vitro.Brevemente, se hicieron circular 10 ml de una disolución 1 pg/ml de S1 de SARS-COV-2 (es decir, proteína recombinante de la espícula S1-His de SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (verificada mediante HPLC) Sino Biological número de catálogo: 40591-V08H) en solución salina tamponada con fosfato a través de un Hemopurifier® que contenía 0,7g de resina de afinidad (que comprende GNA y CHROMOSORB GAW 60/80) a una tasa de flujo de 50 ml/min. La tasa de captura de S1 vírica, expresada como porcentaje de S1 que queda en disolución frente al tiempo, se estableció eliminando muestras de fluido a intervalos de tiempo definidos. El control consistía en S1 mantenido en la mesa de trabajo (es decir, que no se hacía pasar a través del dispositivo). Como se ve en la FIG.

[0271] 4, más del 90% de la proteína S1 en la muestra de prueba está agotada en el primer punto de tiempo a los 15 minutos, y no se detecta nada de S1 tras 60 minutos de flujo a través de la columna.

[0272] Ejemplo 7: Tratamiento de COVID-19 con un dispositivo de hemofiltración por afinidad de lectina GNA

[0273] Este ejemplo pertenece a los métodos de uso de un dispositivo de hemofiltración clínico para el tratamiento de COVID-19. Se realizará un estudio clínico para evaluar el uso de un dispositivo de hemofiltración por afinidad de lectina extracorpóreo para capturar y eliminar nanopartículas mediadoras de COVID-19 para el tratamiento de la enfermedad por virus SARS-CoV-2 (COVID-19).

[0274] El dispositivo de la presente divulgación es un cartucho de plasmaféresis de fibras huecas de un solo uso que está modificado para contener una matriz de afinidad que consiste en la lectina aglutinina deGalanthus nivalis(GNA), que se incorpora entre fibras huecas que pasan por la longitud del cartucho. A medida que la sangre entra en el dispositivo, los virus con envoltura en la sangre se transportan por medio de convección y difusión a través de poros en las fibras huecas que tienen tamaños de poro nominales de 200 nm donde entran en contacto con la matriz de afinidad. Los virus se capturan mediante GNA y se impide que vuelvan a entrar en la circulación. Mientras tanto, los componentes celulares de la sangre permanecen dentro de la luz de las fibras y se excluyen del contacto con la matriz de afinidad. El dispositivo se hace funcionar estableciendo acceso al sistema circulatorio de un sujeto con un catéter central de luz doble y utilizando una infraestructura de diálisis estándar para conseguir hemofiltración.

[0275] Los objetivos del estudio serán los siguientes: Evaluación de la seguridad del dispositivo de hemofiltración. Evaluar los cambios en la carga vírica en circulación en sangre mediante RT-PCR. Elución de partículas víricas a partir de cartuchos de hemofiltración usados y medir la carga vírica. Evaluar los desenlaces clínicos incluye evaluar la tasa de supervivencia, el tiempo con respirador, la incidencia de fallo de sistemas multiorgánicos y medir marcadores de inflamación, coagulación y daño tisular.

[0276] Los siguientes sujetos se inscribirán en el estudio: Sujetos a los que se les ha diagnosticado con COVID-19 con cualquiera de las siguientes características patológicas: lesión pulmonar aguda (ALI) prematura/síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) prematuro; y/o enfermedad por COVID-19 grave o correr el riesgo de enfermedad por COVID-19 grave tal como se define como: disnea, frecuencia respiratoria > 30/min, saturación de oxígeno en sangre < 93%, relación de presión parcial de oxígeno arterial con respecto a fracción de oxígeno inspirado de <300 y/o infiltrados pulmonares >50% en el plazo de 24 a 48 horas; y/o enfermedad potencialmente mortal, definida como: fallo respiratorio, choque séptico y/o disfunción o fallo de múltiples órganos.

[0277] Procedimientos para pacientes antes del tratamiento con el dispositivo de hemofiltración: se recogerán muestras de sangre para la evaluación pretratamiento de citocinas/marcadores inflamatorios y de coagulación y otros biomarcadores sanguíneos de daño de órganos, así como para recuentos de células sanguíneas. Además, se usará una muestra de sangre pretratamiento para la detección de material vírico. Por ejemplo, el ARN de SARS-CoV-2 puede evaluarse mediante RT-PCR. Una muestra de sangre adicional puede usarse para la evaluación de exosomas presentes en el sistema circulatorio del paciente antes del tratamiento para su comparación posterior con los exosomas postratamiento. En preparación para el tratamiento, un catéter de hemodiálisis se colocará en el paciente.

[0278] Preparación del dispositivo para hemopurificación:

[0279] El circuito extracorpóreo debe conectarse;

[0280] El circuito extracorpóreo se imprima y se enjuaga con un mínimo de dos litros de disolución de imprimación; Se añadirá un anticoagulante tal como heparina por litro de disolución de imprimación si es necesario para impedir la coagulación del circuito sanguíneo;

[0282] La tasa de flujo inicial para la imprimación será de 200-250 ml/min y hasta 400-500 ml/min durante varios minutos para aumentar las fuerzas de cizallamiento dentro de las fibras para incentivar el desprendimiento de microburbujas. Durante este procedimiento, todas las burbujas se eliminan del tubo y del cartucho mediante golpeo suave.

[0284] Terapia:

[0286] Para su uso en un paciente con acceso vascular establecido, el paciente se conectará a la máquina de diálisis, que bombea sangre del paciente a través del cartucho y devuelve la sangre purificada al paciente. Las tasas de flujo de sangre se mantienen normalmente a de 200 a 400 ml/min a la discreción del médico tratante. Lo más a menudo se usan inyecciones de heparina para prevenir la coagulación sanguínea. Los tiempos de tratamiento típicos son de hasta 4 horas para pacientes de diálisis. Pueden usarse tiempos más largos para aumentar la efectividad del tratamiento. Al final del tratamiento, la sangre en el tubo y el cartucho se lava de vuelta al paciente usando solución salina estéril. La máquina se desconecta entonces del paciente y el cartucho y el tubo de sangre contaminados se desechan de manera apropiada.

[0288] Durante la terapia con el dispositivo se realizarán pruebas para medir los tiempos de coagulación activados (ACT) para monitorizar la anticoagulación.

[0290] Procedimientos tras la terapia:

[0292] El dispositivo de hemofiltración usado se retirará del circuito, se lavará con solución salina fisiológica y se evacuará tanto fluido como sea posible del cartucho.

[0294] El dispositivo de hemofiltración usado debe colocarse en una bolsa de plástico transparente y sellarse, tras lo cual debe almacenarse en un congelador hasta que se envíe a la instalación de laboratorio apropiada para su análisis.

[0295] Se recogerá una muestra de sangre del paciente para la evaluación postratamiento de citocinas/marcadores inflamatorios, otros biomarcadores sanguíneos de daño de órganos y recuentos de células sanguíneas.

[0297] Resultados:

[0299] Las muestras de sangre pre- y postratamiento de un paciente con COVID-19 que reciba la terapia anterior tendrán una carga reducida significativamente de ARN vírico en la sangre tras la terapia. Puede detectarse SARS-CoV-2 basándose en ARN vírico usando RT-PCR. Pueden usarse ensayos de inmunoabsorción ligados a enzima (ELISA) para detectar y/o cuantificar proteínas víricas (por ejemplo, las glicoproteínas de la espícula (“S”) o la proteína de la nucleocápside). Ensayos serológicos para detectar proteínas víricas pueden utilizar anticuerpos que presentan especificidad para uno o más epítopos conservados en SARS-CoV-2.

[0301] Para el análisis de material vírico capturado mediante el dispositivo de hemofiltración se realizará una de las técnicas mencionadas anteriormente para la medición de material vírico (por ejemplo, ARN mediante RT-PCR) para detectar SARS-CoV-2 que se eliminó del sistema circulatorio del paciente.

[0303] Los resultados de análisis del dispositivo de hemofiltración usado mostrarán la captura de SARS-CoV-2 de la circulación mediante el dispositivo de hemofiltración.

[0305] Muestras de sangre recogidas de un paciente con COVID-19 a diversos intervalos tras el tratamiento con un dispositivo de hemofiltración mostrarán niveles reducidos de dímero D, un producto de degradación de la fibrina.

[0306] Muestras de sangre recogidas de un paciente con COVID-19 a diversos intervalos tras la terapia con un dispositivo de hemofiltración mostrarán niveles reducidos de troponina T tras el tratamiento con el dispositivo de hemofiltración frente a pretratamiento.

[0308] Los análisis de laboratorio de muestras de sangre antes de la terapia pueden mostrar evidencia de linfopenia y, específicamente, pueden mostrar la presencia de concentraciones anómalamente bajas de células T y células NK en la sangre periférica. Las muestras de sangre tras la terapia mostrarán una restauración parcial o completa de las concentraciones de linfocitos, células T y células NK totales en los días y las semanas tras el tratamiento con el dispositivo.

[0310] Las muestras séricas se someterán a análisis de laboratorio usando ELISA para cuantificar concentraciones de marcadores tales como IL-6, IL-10, IL-15, CXCL-10 y/o CCL-2. Las evaluaciones de laboratorio incluirán lo siguiente: recuento de sangre completa con diferencial; panel metabólico completo incluyendo LDH, ferritina y proteína C reactiva (CRP); concentraciones de citocinas y quimiocinas inflamatorias (IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2; mieloperoxidasa; VCAM-1; LDH; dímero D y PT-INR; muestra nasofaríngea para SARS-CoV-2; cuantificación de ARN vírico (SARS-CoV-2) a partir de plasma; cuantificación de ARN vírico (SARS-CoV-2) a partir de cartuchos Hemopurifier® postratamiento. Un paciente con COVID-19 demostrará concentraciones de IL-6, IL-10, IL-15, CXCL-10 y/o CCL-2 reducidas en suero tras el tratamiento con el dispositivo de hemofiltración.

[0312] Las muestras séricas se someterán a análisis de laboratorio usando ELISA para cuantificar las concentraciones de proteína C reactiva (CRP). Un paciente con COVID-19 presentará concentraciones de CRP reducidas en suero tras el tratamiento con el dispositivo de hemofiltración.

[0314] Los desenlaces clínicos en pacientes con COVID-19 que recibieron la terapia mencionada anteriormente con el dispositivo de hemofiltración mostrarán mejoras en parámetros clínicos, que pueden incluir una reducción o resolución en lesiones pulmonares basándose en escáneres de CT de tórax y un tiempo reducido pasado en un respirador y una mejora del fallo multiorgánico.

[0316] Los dispositivos y métodos de la presente divulgación pueden usarse para reducir el tiempo pasado en respiradores mecánicos, reducir la probabilidad de síndrome de dificultad respiratoria aguda, reducir la probabilidad de complicaciones cardiacas incluyendo arritmias y fallo cardiaco, reducir la probabilidad de fallo multiorgánico, reducir la probabilidad de enfermedad renal aguda, sepsis y/u otras complicaciones. Por ejemplo, para pacientes con COVID-19 afectados gravemente con inflamación sistémica, los dispositivos y métodos de la presente divulgación pueden suprimir o reducir la producción o presencia de citocinas tales como IL-6.

[0318] Los dispositivos y métodos de la presente divulgación pueden usarse para mejorar la coagulopatía en pacientes con COVID-19, tal como se indica mediante la reducción en los niveles de dímero D en sangre, el acortamiento del tiempo de protrombina y la relación normalizada internacional (PT/INR), y el aumento en el recuento de plaquetas.

[0320] Ejemplo 8: La hemofiltración de un paciente tras la infección con una matriz de afinidad de lectina dio como resultado una mejora significativa en el estado clínico

[0322] Un paciente presentaba insuficiencia respiratoria persistente grave y una saturación de O2 del 40%-50% tras una infección por COVID-19. Sin embargo, el paciente no mostraba una mejora en su estado y permanecía al 100% de ventilación con O2. El uso de urgencia del cartucho de matriz de afinidad de lectina GNA dado a conocer en el presente documento (usando un soporte CHROMOSORB GAW 60/80) fue autorizado por el paciente. El paciente se sometió a hemodiálisis de sangre completa con el cartucho de lectina a una tasa de flujo de 200 ml/min durante 6 horas al día durante un total de 8 días, usando un cartucho nuevo cada día. Se tomaron muestras de extracción de sangre antes de la terapia y tras la terapia. Las muestras de extracción de sangre antes de la terapia recogidas el día 1 no contenían nada de viremia de COVID-19 en circulación detectable tal como se sometió a prueba mediante qPCR de plasma de paciente (FIG. 5). El día 1, la terapia se interrumpió debido a problemas de coagulación sanguínea, pero no surgieron problemas en los días restantes. Tras la terapia de hemofiltración, el paciente experimentó una recuperación notable, mostrando una presión parcial de oxígeno (PaO2) de 105 mmHg y no requiriendo ya oxígeno puro.

[0324] Las muestras de las extracciones de sangre del paciente y los contenidos de los cartuchos Hemopurifier® se examinaron para determinar los componentes que se aislaron del paciente mediante hemodiálisis. 700 gl de cada una de las 8 muestras de plasma pretratamiento y 8 postratamiento (con anticoagulante EDTA) se procesaron en tampón AVL (Qiagen) para aislar ácidos nucleicos para la detección de genoma vírico y miARN. 1 ml adicional de cada una de las 8 muestras de plasma antes de la terapia y 8 tras la terapia (con anticoagulante EDTA) se almacenaron sin procesar para la detección de exosomas intactos y carga de exosomas (incluyendo proteína y miARN). Los Hemopurifier® usados se procesaron con 1) alfa-metilmanósido 1 M (a-MM; un competidor de unión a lectina) y posteriormente 2) reactivo TRIzol® (Thermo Fisher) (para liberar los ácidos nucleicos restantes) para eluir los componentes sanguíneos unidos a la lectina GNA. Aproximadamente 200 ml de eluato se obtuvieron de cada etapa y para cada uno de los 4 Hemopurifier®.

[0326] Una visión general del desenlace del paciente y resultados del análisis de exosomas a partir de muestras de paciente se proporciona en este ejemplo. Información adicional relativa al análisis de exosomas se proporciona en los ejemplos 9-10. La tabla 1 resume esta visión general.

[0328] 1) 8 días antes de la terapia (30 de julio de 2020), el paciente tenía evidencia de lesión tisular con una LDH de 2370 U/l, y evidencia de inflamación sistémica con ferritina de 3599,5 ng/ml.

[0330] 2) El 1 de agosto de 2020 (6 días antes de la terapia), el paciente tenía evidencia de daño endotelial/coagulopatía con un dímero D > 7650 ng/ml.

[0332] 3) El 3 de agosto de 2020 (4 días antes de la terapia), el paciente tenía evidencia de hipoxia tisular con un lactato de 3,6 mmol/l.

[0333] 4) La concentración exosomal total disminuyó de antes a después de la terapia a lo largo de los días 2-4 después de administrar la terapia.

[0335] 5) Los miARN exosomales miR-424 y miR-16 disminuyeron a lo largo de los primeros 4 días tras administrar la terapia.

[0337] 6) El 7 de agosto de 2020 (Día n.° 1, el primer día de tratamiento con HP), el paciente tenía evidencia en curso de daño endotelial/coagulopatía con un recuento de plaquetas que era bajo a 115.000/mcl, así como un PT-INR prolongado a 1,2 (13,6 segundos). El paciente tenía evidencia de ARDS con una relación de PaO2/FIO2 de 93 (PaO265 mmHg con una FIO2 de 0,70). El paciente tenía también evidencia de inflamación sistémica con un nivel de IL-6 de 641,7 pg/ml, WBC total de 15.500/mcl y linfopenia con un recuento de linfocitos absoluto de 780/mcl.

[0339] 7) El 8 de agosto de 2020 (Día n ° 2, el segundo día de tratamiento con HP), la relación de PaO2/FIO2 era de 98 (PaO298 mmHg con una FIO2 de 1,0). El lactato del paciente ha disminuido hasta 2,3 mmol/l.

[0341] 8) El 9 de agosto de 2020 (Día mo 3, el tercer día de tratamiento con HP), la relación de PaO2/FIO2 era de 75,5 (PaO2 de 68 mmHg con una FIO2 de 0,90).

[0343] 9) El 10 de agosto de 2020 (Día mo 4, el cuarto día de tratamiento con HP), la PaO2/FIO2 era de 88,57 (PaO2 de 62 mmHg con una FIO2 de 0,70).

[0345] 10) El 12 de agosto de 2020, antes del Día mo 5 de tratamiento, el paciente tenía evidencia de mejora en coagulopatía inducida por COVID-19 con una disminución de dímero D hasta 3703 ng/ml, PT cayendo hasta 11,3 segundos (PT-INR 1,0) y un recuento de plaquetas mejorando hasta 162.000/mcl. Se cree que la disminución en el miR-424 exosomal mediante el Hemopurifier® ha desempeñado un papel en esta mejora, ya que los niveles de miR-424 se han aumentado en trombosis asociada con COVID-19. El paciente tenía también una mejora en la función pulmonar con la PaO2/FIO2 subiendo hasta 136,25 (PaO2 de 109 mmHg con requisito de FIO2 de 0,80). El miR-16 aumentado se ha asociado con lesión pulmonar aguda inducida por LPS y el miR-424 aumentado se ha asociado con ARDS. Se cree que las disminuciones en estos dos miARN exosomales mediante la terapia han desempeñado un papel en la mejora en oxigenación del paciente. La inflamación sistémica había mejorado, con la ferritina disminuyendo hasta 622,4 ng/ml y la linfopenia se resolvió con un ALC hasta 1180/mcl. La lesión tisular había mejorado con una disminución de LDH hasta 978 U/l. La hipoxia tisular mejoró con lactato que era normal a 0,8 mmol/l.

[0347] 11) El nivel de miR-424 y miR-16 exosomales disminuyó el 12 de agosto de 2020.

[0349] 12) La concentración exosomal total subió de antes a después de la terapia.

[0351] 13) A lo largo de los días 6-8 tras la terapia (13 de agosto - 15 de agosto 2020) no se observó un cambio en la relación de PaO2/FIO2, siendo de 117,14, 126,6 y 120, respectivamente, con el paciente permaneciendo en una FIO2 de 0,70 el 15 de agosto de 2020.

[0353] 14) Los niveles de miARN exosomales disminuyeron tras la terapia el día n° 8, ocho días tras administrarse la terapia.

[0355] 15) El 19 de agosto de 2020, la relación de PaO2/FIO2 era de hasta 149,23 (PaO2 de 92 mmHg con FIO2 de 0,65).

[0357] 16) El 20 de agosto de 2020, la relación de PaO2/FIO2 había subido hasta 175 (PaO2 de 105 mmHg con FIO2 de 0,60).

[0359] 17) Los resultados de laboratorio del 24 de agosto de 2020 indicaron la presencia de inflamación significativa con ferritina de vuelta hasta 1583,8 ng/ml y una CRP > 270 mg/l. Adicionalmente, la coagulopatía había empeorado de nuevo con un dímero D de 5595 ng/ml y un PT-INR de 1,3. Debe observarse que la procalcitonina del paciente había subido hasta 2,11 ng/ml en este día tras haber sido normal a 0,19 ng/ml el 12 de agosto de 2020. Esto aumentó la posibilidad de que estuviera presente una superinfección bacteriana y explica el empeoramiento clínico del paciente.

[0361] Tabla 1: Sumario de datos de paciente con COVID-19

[0362]

[0365] Ejemplo 9: Los exosomas se agotaron del paciente mediante hemofiltración

[0367] Se determinaron los efectos de los tratamientos con Hemopurifier® sobre las cantidades y la carga de exosomas en circulación en el paciente con COVID-19 tratados durante 8 días (6 horas/tratamiento) del ejemplo 8. El análisis se realizó en conjuntos de plasma de paciente recogidos los días 1-4 de terapia. El plasma antes de la terapia se recogió antes de la terapia con Hemopurifier®. El plasma tras la terapia se recogió tras el tratamiento con Hemopurifier® de 6 horas. El día 1, la terapia con Hemopurifier® se interrumpió debido a problemas de coagulación sanguínea, y más de 13 horas de lapso entre las extracciones de sangre pre- y postratamiento. Para resumir brevemente los métodos, tras un análisis de caracterización de partículas inicial del plasma sin procesar, los exosomas aislados se purifican del resto de los componentes de plasma usando un procedimiento de mini columna de exclusión por tamaño (mini-SEC) que elimina otras partículas de tamaño similar y contaminantes proteicos abundantes. Usando la metodología de mini-SEC, muestras de exosomas purificados se recogen en el eluyente de fracción n ° 4 y se usaron para un análisis comparativo. Los resultados presentados representan rendimientos a partir de 1 ml del plasma de paciente con COVID-19. La tabla 2 representa las muestras clínicas de COVID-19 que se recogieron.

[0369] Tabla 2: Sumario de muestras de plasma de COVID-19 recogidas

[0371]

[0372]

[0375] Aislamiento de exosomas a partir de plasma de paciente: Los exosomas se purificaron a partir de plasma de paciente usando una metodología establecida en la técnica (Ludwiget al.Curr. Protoc. Immunol. (2019) 127:e91). Se aclaró previamente 1 ml de plasma de paciente a través de un proceso de centrifugación de dos etapas para eliminar las partículas de plasma más grandes, entonces se filtró a través de una membrana de PES de 0,22 pM y se cargó en una columna Sepharose® de 10 ml. Los exosomas se aislaron del resto de los componentes del plasma a través de cromatografía de exclusión por tamaño añadiendo incrementos de 1 ml de PBS a la columna Sepharose® hasta que se recoge el eluyente de fracción n.° 4, que contiene exosomas de plasma.

[0377] Con el fin de obtener mediciones de cuantificación fiables, las muestras de exosomas de plasma tuvieron que diluirse en PBS filtrada a 0,22 pM hasta una concentración de aproximadamente 108-109 exosomas/ml. Pudieron observarse aproximadamente 20-100 partículas en el campo de vista Nanosight una vez que las muestras de exosomas se habían diluido hasta el intervalo de concentración apropiado. Para mejorar la detección de cualquier población más pequeña de exosomas que pueda estar presente en la muestra de plasma, se recogieron mediciones de seguimiento de nanopartículas usando un nivel de cámara de 12 y un umbral de detección de 3. Se evaluaron tres vídeos de captura de 30 segundos de diferente segmentos de la muestra de exosomas homogénea con el software NTA 3.3 con el fin de determinar la cuantificación de partículas y las mediciones de tamaño.

[0378] Los recuentos de nanopartículas en plasma de paciente sin procesar se evaluaron para cada muestra antes y después de la terapia. Normalmente, los recuentos de nanopartículas globales disminuyeron tras el tratamiento (FIG. 6A). Se sospechó que el día 1 era un caso atípico debido a una interrupción de la terapia. Sin embargo, los tamaños de partícula relativos en las muestras de plasma sin procesar permanecieron inalterados mediante el tratamiento (FIG. 6B).

[0380] Las muestras de plasma se procesaron mediante mini-SEC y se eluyeron en 8 fracciones. La tabla 3 representa la concentración de proteína relativa (mg/ml) de cada fracción mediante ensayo BCA. La fracción 4 se consideró por contener exosomas purificados. El día 1 tras la terapia, el plasma tenía un contenido de proteínas mayor que el 60-80 mg/ml típico notificado en la técnica (Leemanet al.Anal. Bioanal. Chem. (2018); 410:4867-73). Los exosomas aislados en la fracción 4 representan aproximadamente el 0,1% de las proteínas en plasma totales, lo que es consistente con las cantidades de proteínas en exosomas notificadas en la técnica (Shtamet al. J. Hematol.(2018); 7:149-53). Estos datos sugieren que la terapia con Hemopurifier® solo tiene un efecto menor sobre los niveles de proteínas en plasma globales.

[0382] Tabla 3: Contenido de proteínas de fracciones de mini-SEC de plasma de paciente (mg de proteína/ml de plasma)

[0384]

[0385] Los recuentos de exosomas se cuantificaron en la fracción 4 de cada muestra de plasma. LaFIG.7Amuestra que, generalmente, la abundancia de exosomas que quedan en el plasma se redujo tras el tratamiento. Se consideró que el día 1 era un caso atípico, posiblemente debido a la interrupción de la terapia. Esto sugiere que aunque la terapia con Hemopurifier® no reduce sustancialmente el contenido de proteínas en plasma global, sí agota exosomas en un grado significativo.

[0387] Se evaluaron los tamaños relativos de los exosomas en la fracción 4 de cada muestra de plasma. LaFIG. 7Bdemuestra que los tamaños relativos de las poblaciones de exosomas en circulación no se ven alterados por el tratamiento con Hemopurifier®.

[0389] Ejemplo 10: Los exosomas purificados contenían miARN que puede asociarse con fenotipos de enfermedad

[0390] Como se sabe que los miARN están asociados con inflamación y enfermedad, se evaluó el contenido de miARN de los exosomas purificados mediante mini-SEC a partir de muestras de plasma de paciente (del ejemplo 9), comparando muestras tanto antes como después de la terapia, así como, con plasma humano normal. El plasma humano normal se procesó de la misma manera que las muestras de paciente mediante mini-SEC y se analizó la fracción 4 que contiene exosomas. La tabla 4 identifica los miARN que se sometieron a prueba. Se aisló miARN a partir de los exosomas de plasma usando un kit de aislamiento miRNA easy de Qiagen e incorporando un control en espícula de miARN exógeno. El miARN se transcribió de manera inversa a un molde de ADNc usando el kit de síntesis de ADNc de miARN TaqMan Advanced. Dianas de miARN específicas se amplificaron en una máquina de qPCR Quant 3 usando conjuntos de cebadores/sondas de miARN TaqMan Advanced específicos (Thermo Fisher n ° A25576). La cuantificación de secuencias de miARN se realizó mediante normalización con respecto a un control de miARN cel-miR-39-3p en espícula exógeno.

[0392] Tabla 4: miARN sometidos a prueba (2 dianas endógenas y 1 control en espícula exógeno)

[0394]

[0397] Se añadió miARN cel-miR-39-3p en espícula exógeno (cel-39) a cada muestra para controlar la variabilidad introducida mediante el proceso de aislamiento de miARN y la síntesis posterior del molde de ADNc. El control cel-39 se usó a 5,6 x 108 copias por muestra. LaFIG. 8muestra los gráficos de amplificación mediante qRT-PCR del control en espícula cel-39 y el intervalo limitado de variabilidad entre muestras que tiene que controlarse. El valor Ct medio de todos los amplicones de cel-39 se usó para normalizar la señal de las dianas de miARN en cada muestra. Se usó el método 2-AACt (Livak y Schmittgen, Methods (2001) 25(4):402-8) para calcular la cantidad de cada miARN en relación con la diana cel-39 en espícula. La cantidad de miARN medida en los exosomas se normalizó adicionalmente para reflejar un volumen de muestra de partida de 1 ml de plasma.

[0399] Cada uno del miARN sometido a prueba en la fracción 4 del paciente con COVID-19 y muestras de plasma de control humano se cuantificaron mediante qRT-PCR. LaFIG. 9muestra gráficos de amplificación mediante qRT-PCR a modo de ejemplo para el miARN y cómo su intensidad de señal que refleja abundancia puede variar en muestras recogidas en distintos puntos de tiempo de la terapia. La abundancia relativa del miARN para muestras de días 1-4 se muestra en laFIG. 10.En general, se observa una disminución en la abundancia del miARN sometido a prueba en las muestras de exosomas postratamiento en relación con muestras de exosomas pretratamiento, lo que sugiere que la terapia con Hemopurifier® agota los exosomas que contienen estos miARN. LaFIG. 11muestra que la reducción de la abundancia de miARN es directamente proporcional al agotamiento de exosomas en las muestras durante algunos de los días iniciales de terapia.

[0401] Para comparar la abundancia relativa y el agotamiento del miARN sometido a prueba en las fracciones de exosomas y el plasma sin procesar, se cuantificó el miARN de las muestras de plasma completo de día 4 del paciente con COVID-19 (FIG. 12A). El agotamiento del miARN se observó de manera similar en las muestras de plasma completo postratamiento, y tanto miR-424-5p como miR-16-2-3p se agotaron en un mayor grado en la fracción de exosomas en comparación con plasma completo (FIG. 12B). En global, esto indica que los miARN se encuentran en diversas formas (por ejemplo, como carga de exosomas, asociados con otras estructuras biológicas, o como ácidos nucleicos que flotan libremente) en plasma, y el cartucho Hemopurifier® con lectina GNA es capaz de agotar todos los tipos en un grado. Pero el mayor agotamiento observado en la fracción de exosomas indica que estos miARN se eliminan más selectivamente a través de la capacidad de la lectina GNA para capturar exosomas con características patológicas.

[0402] Tras el análisis de las muestras de los días 1-4, se aislaron exosomas y se analizaron para las muestras de plasma de día 5 y día 8 también. Hubo un hueco de dos días entre el día 4 y el día 5 de terapia durante el que se obtuvo una segunda autorización de uso de urgencia. LaFIG. 13Amuestra la abundancia de 1) miR-424 y miR-16 encontrados en exosomas aislados a partir de plasma, y 2) exosomas en plasma para las muestras de plasma de día 1 (7 de agosto de 2020) y día 4 (10 de agosto de 2020). LaFIG. 13Bmuestra lo mismo para las muestras de plasma de día 5 (12 de agosto de 2020) y día 8 (15 de agosto de 2020). Se observa una disminución consistente en la abundancia de miR-424 y miR-16 tras la terapia con Hemopurifier®, tal como resulta evidente mediante las muestras pre- y postratamiento de cada día.

[0404] En resumen, el dispositivo Hemopurifier® es capaz de eliminar miARN patológicos a través de la captura de exosomas que promueven enfermedad, independientemente de los recuentos de exosomas globales pre- y postratamiento. Los miARN miR-424 y miR-16, que se han asociado con coagulopatía asociada a COVID-19 y lesión pulmonar aguda, pueden agotarse de la sangre en circulación de un paciente con COVID-19 agudo.

[0405] Ejemplo 11: Aislamiento de material unido a partir de cartuchos Hemopurifier®

[0407] En este ejemplo se dan a conocer detalles adicionales que describen métodos para eluir un cartucho Hemopurifier® de exosomas y virus unidos, y extraer material tal como proteínas y ácidos nucleicos tras el tratamiento de un sujeto humano. En el caso de material genómico vírico, las muestras pueden procesarse entonces usando qPCR para evaluar la concentración vírica.

[0409] Los Hemopurifier® usados pueden almacenarse en hielo o a -20°C hasta el procesamiento. Sin embargo, es preferible un envío y procesamiento inmediatos. Los dispositivos deben enviarse y manipularse en una bolsa de peligro biológico etiquetada que esté dentro de una bolsa secundaria más grande. Tras la recepción, el dispositivo sellado debe ponerse inmediatamente en almacenamiento refrigerado a de 2°C a 8°C.

[0411] Cuando el Hemopurifier® está listo para el procesamiento, se preparan 250-300 ml de solución salina estéril o PBS filtrada para fluido de enjuagado. El dispositivo se pone verticalmente en una abrazadera en un soporte anular u otro aparato estabilizador. La caperuza de bloqueo por torsión superior del puerto de sangre superior del dispositivo Hemopurifier® se desconecta. Se acoplan tubos MPC-850-16 y MPC-865. Una jeringa se llena con el fluido de enjuague y la jeringa se conecta al extremo abierto del tubo MPC-865. El Hemopurifier® se rota entonces de modo que el otro extremo esté dirigido hacia arriba, y la caperuza de bloqueo por torsión se desconecta del otro puerto de sangre. Se acopla el tubo MPC-875. El extremo abierto del tubo MPC-875 se pone en el receptáculo de residuos de peligro biológico apropiado, y el dispositivo se reorienta de modo que el extremo abierto del tubo pueda permanecer en el receptáculo de residuos mientras se enjuaga el dispositivo. El fluido de enjuague se empuja lentamente a través del Hemopurifier® y al interior del receptáculo de residuos. Esto se repite 2-3 veces. El fluido que sale del dispositivo no debe ser rojo, pero puede tener todavía un color ligeramente rosa. Entonces, la jeringa se llena con aire, que se empuja a través del dispositivo, forzando el fluido residual fuera del Hemopurifier® y al interior del receptáculo de residuos. Repetir 2-3 veces para eliminar tanto fluido como sea posible antes de almacenar el dispositivo. Cuando se ha terminado, el tubo se desconecta y se desecha en el contenedor de peligro biológico apropiado. Las caperuzas de puerto de sangre vuelven a acoplarse y el dispositivo puede almacenarse a -20°C

[0413] Configuración del circuito de elución: El Hemopurifier® se retira de la bolsa de peligro biológico y se pone en una toalla o almohadilla adsorbente. Se permite que el dispositivo se equilibre hasta temperatura ambiente (15-20 minutos). Ambas caperuzas de bloqueo por torsión se desenroscan de los puertos de sangre; una de las caperuzas de bloqueo luer de los puertos de dializado laterales también se desenrosca. Todas las caperuzas retiradas deben conservarse para el nuevo acoplamiento tras el procedimiento de elución. El tubo con un bloqueo por torsión se acopla al puerto de extremo del cartucho. El otro extremo de este tubo se pone en un frasco o botella de vidrio, garantizando que el tubo llegue cerca del fondo. Otro tubo con un bloqueo por torsión está acoplado al otro puerto de extremo del cartucho, poniendo su otro extremo de tubo en el contenedor de vidrio. Un tubo de drenaje con un accesorio luer macho se acopla al puerto lateral abierto del dispositivo, poniendo el otro extremo de tubo en el contenedor de vidrio. Una vez que todos los tubos están acoplados de manera segura y en su sitio, abrazaderas de tubo o hemostatos se acoplan a todos los tubos. El Hemopurifier® se monta entonces en posición vertical usando un soporte/elemento de retención anular, garantizando que el puerto lateral abierto esté encima. Véase laFIG. 14para un esquema a modo de ejemplo de está configuración.

[0415] Elución de alfa-metilmanósido (a-MM): Se prepara una disolución de 200 ml de alfa-metilmanósido (a-MM) 1 M en 1 x PBS. La disolución de a-MM se añade al contenedor de vidrio que sostiene el tubo. Una bomba empieza hacer fluir la disolución de a-MM a una tasa de 50 ml/min a través del cartucho Hemopurifier®. La disolución debe drenarse desde uno o ambos puertos de drenaje superiores. Una vez que el cartucho está lleno con disolución de a-MM, el tubo acoplado al puerto de sangre de salida se sujeta mediante abrazadera (“sitio de abrazadera A”) y se permite que la disolución de a-MM fluya a través de las fibras y el espacio de luz extra del cartucho durante 20 minutos. Después de esto, la abrazadera se retira y el tubo de puerto lateral se sujeta mediante abrazadera (“sitio de abrazadera B”) para permitir que la disolución de a-MM fluya a través de la luz de las fibras del cartucho durante 20 minutos. Cuando se termina la circulación, la disolución de a-MM restante se drena tanto de las fibras como del espacio de luz extra del cartucho. El eluato puede cuantificarse o almacenarse congelado a -20°C para su uso posterior.

[0417] Extracción con reactivo TRI®/TRIzol®: Inmediatamente tras la elución de a-MM, todos los extremos de tubo se ponen en un contenedor de vidrio que contiene 200 ml de reactivo TRI® o TRIzol®. Esto proceso debe realizarse en una campana extractora o una cabina de bioseguridad apropiada. Una vez que todos los tubos están en su sitio de manera segura, una bomba empieza a hacer fluir el reactivo TRI® a una tasa de 50 ml/min a través del cartucho Hemopurifier®. La disolución debe drenarse desde uno o ambos puertos de drenaje superiores. Una vez que el cartucho está lleno con la disolución, el tubo de drenaje de salida de luz se sujeta mediante abrazadera (“sitio de abrazadera A”) y se permite que la disolución fluya a través de las fibras y del espacio de luz extra del cartucho durante 20 minutos. La disolución de reactivo TRI® empezará a fundir las fibras en el cartucho, y algunos de los conectores de tubo. El sistema debe observarse frecuentemente para fugas. El material de resina puede obstruir el tubo. La circulación debe comprobarse a menudo para garantizar un flujo consistente por todo el sistema. La trayectoria de tubo debe ajustarse para evitar la obstrucción del tubo de entrada. Si se produce una obstrucción, la bomba debe detenerse y la obstrucción debe aclararse, reemplazando el tubo si es necesario. La abrazadera del sitio de abrazadera A puede retirarse, y el sitio de abrazadera B puede sujetarse mediante abrazadera para permitir que la disolución fluya a través de la luz del cartucho durante 20 minutos. Cuando ha terminado la circulación, el reactivo restante debe drenarse desde tanto las fibras como el espacio de luz extra del cartucho. El eluato puede cuantificarse o almacenarse a -20°C para su uso posterior.

[0419] Enjuague final: Inmediatamente tras la etapa de reactivo TRI®, todos los extremos de tubo se ponen en un contenedor de vidrio que contiene 200 ml de 1x PBS nueva. Este enjuague se hace fluir a través del cartucho a una tasa de 50 ml/min durante 5 minutos. Cuando se termina la circulación, la disolución tampón restante se drena desde tanto las fibras como el espacio de luz extra del cartucho. Una muestra del tampón de enjuague se almacena a -20°C. Todos los tubos se retiran y todos los puertos del cartucho se tapan. Todo se desecha en un receptáculo de residuos de peligro biológico apropiado.

[0421] Ejemplo 12: Visión general del uso del Hemopurifier® para un segundo paciente con COVID-19 agudo

[0423] El 14 de enero de 2021, el dispositivo Hemopurifier® se aprobó para un único paciente en uso de urgencia. El sujeto era un hombre de 67 años de edad con un historial de reparación de la tetralogía de Fallot, enfermedad arterial coronaria y diabetes mellitus recién diagnosticada. Se presentó en el hospital con un historial de 1 semana de tos y dificultad respiratoria. Se encontró que era positivo para COVID-19 mediante PCR y fue admitido en el hospital. También se observó que el paciente tenía lesión renal aguda. A pesar del tratamiento con remdesivir, dexametasona, baricitinib, plasma de convaleciente y anticoagulación de dosis completa, el paciente desarrolló empeoramiento de fallo sistémico de múltiples órganos. Estuvo con ventilación mecánica con una fracción de oxígeno inspirado (FIO2) del 100% y presión positiva al final de la espiración (PEEP) de 12 cm H2O, un único vasopresor para hipotensión y CRRT para fallo renal agudo. Dado el deterioro del paciente, se aprobó el dispositivo Hemopurifier® para uso de urgencia para “filtración de componentes víricos así como exosomas en el torrente sanguíneo”.

[0425] El sujeto completó una terapia con Hemopurifier® de 6 horas y 15 minutos. Originariamente se proporcionaron un total de 4 dispositivos de investigación al hospital. De los 4 dispositivos proporcionados, se usó 1 dispositivo y se procesó posteriormente.

[0427] Tal como se muestra en laFIG. 15A,se observa amplificación positiva de 3 regiones genómicas víricas de SARS-CoV-2 distintas usando los contenidos del Hemopurifier® eluidos con TRIzol®. La tabla 5 muestra la cuantificación del umbral de ciclo (Ct). Valores Ct < 37 se consideran positivos para la presencia del virus SARS-CoV-2.

[0429] Tabla 5: Valores Ct de amplificación de SARS-CoV-2

[0431]

[0434] Se usó el método 2-AACt (Livak y Schmittgen, Methods (2001) 25(4):402-8) para calcular la cantidad de cada diana génica vírica en relación con un control positivo que contenía un número de copias conocido. Tal como se muestra en laFIG. 15B,cada una de las tres dianas de SARS-CoV-2 amplificadas a partir del eluato de Hemopurifier® a diferentes relaciones en relación con el control. Mientras que las dianas de proteína N y de proteína S se amplificaban a niveles más altos que el control, lo que sugiere una abundancia más alta de estas dianas víricas de SARS-CoV-2 en la muestra aislada, la diana de ORF1 ab no se amplificó también.

[0435] En resumen, el segundo paciente con COVID-19 descrito en este ejemplo puede haber tenido viriones de SARS-CoV-2 intactos circulando a través de su corriente sanguínea basado en la amplificación positiva de genes de SARS-CoV-2 a partir de muestras eluidas del dispositivo Hemopurifier® usado para tratar al paciente. Esto demuestra que o bien partículas víricas de SARS-CoV-2, o bien fragmentos que contiene el material genético de ARN, estaban adsorbidos sobre la resina de afinidad de lectina GNA, y el lavado con TRIzol® eluyó los contenidos capturados. Era posible detectar la presencia del genoma de SARS-CoV-2 en ARN purificado a partir de 1 ml del eluato. Distintas cantidades de las tres dianas genómicas víricas detectadas en la amplificación podría ser el resultado de una fragmentación vírica o genómica, una captura de otras nanopartículas en circulación que contienen contenidos genómicos víricos, distintos perfiles de adsorción o elución de lectina GNA, o la presencia de inhibidores de PCR en las muestras de ARN purificadas.

[0437] Debe entenderse que la terminología usada en el presente documento es con el propósito de describir realizaciones particulares de la divulgación. Además, se entiende que pueden usarse un número de métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en el presente documento. Las realizaciones descritas anteriormente se han proporcionado a modo de ejemplo. Múltiples variaciones y modificaciones a las realizaciones dadas a conocer se les ocurrirán, en el grado que no sean mutuamente excluyentes, a los expertos en la técnica en consideración de la descripción anterior. Adicionalmente, otras combinaciones, omisiones, sustituciones y modificaciones resultarán evidentes al experto en la técnica en vista de la divulgación en el presente documento. Por consiguiente, la presente invención debe definirse mediante referencia a las reivindicaciones adjuntas.

[0439] Con respecto al uso de sustancialmente cualquier término en plural y/o en singular en el presente documento, los expertos en la técnica pueden traducir del plural al singular y/o del singular al plural según sea apropiado con respecto al contexto y/o a la aplicación. Las diversas permutaciones singular/plural pueden exponerse de manera expresa en el presente documento en aras de la claridad.

[0441] Los expertos en la técnica entenderán que, en general, los términos usados en el presente documento, y especialmente en las reivindicaciones adjuntas (por ejemplo, cuerpos de las reivindicaciones adjuntas) están previstos generalmente como términos “abiertos” (por ejemplo, el término “que incluye” debe interpretarse como “que incluye pero no se limita a”, el término “que tiene” debe interpretarse como “que tiene al menos”, el término “incluye” debe interpretarse como “incluye pero no se limita a”, etc.). Los expertos en la técnica entenderán además que si existe la intención de un número específico de una cita de reivindicación introducida, una intención de este tipo se citará explícitamente en la reivindicación, y en ausencia de tal cita no hay tal intención. Por ejemplo, como ayuda a la compresión, las siguientes reivindicaciones adjuntas pueden contener la utilización de las frases introductorias “al menos uno” y “uno o más” para introducir citas de reivindicación. Sin embargo, no debe interpretarse que el uso de tales frases implique que la introducción de una cita de reivindicación mediante los artículos indefinidos “un” o “una” limite cualquier reivindicación particular que contenga tal cita de reivindicación introducida a realizaciones que contengan solo una cita de este tipo, incluso cuando la misma reivindicación incluya las frases introductorias “uno o más” o “al menos uno” y artículos indefinidos tales como “un” o “una” (por ejemplo, “un” y/o “una” deben interpretarse como que significan “al menos uno” o “uno o más”); lo mismo es válido para el uso de artículos definidos usados para introducir citas de reivindicación. Además, incluso si un número específico de una cita de reivindicación introducida se cita explícitamente, los expertos en la técnica reconocerán que tal cita debe interpretarse que significa al menos el número cita (por ejemplo, la mera cita de “dos citas”, sin otros modificadores, significa al menos dos citas, o dos o más citas). Además, en aquellos casos en los que se use una convención análoga a “al menos uno de A, B y C, etc.”, en general una construcción de este tipo se prevé en el sentido que un experto en la técnica entendería la convención (por ejemplo, “un sistema que tiene al menos uno de A, B y C” incluiría, pero no estaría limitado a, sistemas que tienen A solo, B solo, C solo, A y B juntos, A y C juntos, B y C juntos, y/o A, B y C juntos, etc.). En aquellos casos en los que se use una convención análoga a “al menos uno de A, B o C, etc.”, en general una construcción de este tipo se prevé en el sentido que un experto en la técnica entendería la convención (por ejemplo, “a sistema que tiene al menos uno de A, B o C” incluiría, pero no estaría limitado a, sistemas que tienen A solo, B solo, C solo, A y B juntos, A y C juntos, B y C juntos, y/o A, B y C juntos, etc.). Los expertos en la técnica entenderán además que prácticamente cualquier palabra y/o frase disyuntiva que presente dos o más términos alternativos, ya sea en la descripción o las reivindicaciones, debe entenderse que contempla las posibilidades de incluir uno de los términos, cualquiera de los términos o ambos términos. Por ejemplo, se entenderá que la frase “A o B” incluye las posibilidades de “A” o “B” o “A y B”.

[0443] Además, cuando las características o los aspectos de la divulgación se describen en términos de grupos de Markush, los expertos en la técnica reconocerán que la divulgación se describe de este modo también en términos de cualquier miembro individual o subgrupo de miembros del grupo de Markush.

[0445] Tal como entenderá un experto en la técnica, para cualquiera y todos los propósitos, tal como en términos de proporcionar una descripción escrita, todos los intervalos dados a conocer en el presente documento abarcan también cualquiera y todos los posibles subintervalos y combinaciones de subintervalos de los mismos. Cualquier intervalo listado puede reconocerse fácilmente como que describe suficientemente y posibilita que el mismo intervalo esté dividido en al menos mitades, tercios, cuartos, quintos, décimos, etc. iguales. Como ejemplo no limitativo, cada intervalo discutido en el presente documento puede dividirse fácilmente en un tercio inferior, tercio central y tercio superior, etc. Tal como entenderá también un experto en la técnica, toda expresión tal como “hasta”, “al menos”, “mayor de”, “menor de” y similar incluye el número citado y la referencia a intervalos que pueden dividirse posteriormente en subintervalos tal como se discutió anteriormente. Finalmente, tal como entenderá un experto en la técnica, un intervalo incluye cada miembro individual. Por tanto, por ejemplo, un grupo que tiene 1 -3 artículos se refiere a grupos que tienen 1, 2 o 3 artículos. De manera similar, un grupo que tiene 1-5 artículos se refiere a grupos que tienen 1, 2, 3, 4 o 5 artículos, etcétera.

[0446] Aunque se han dado a conocer diversos aspectos y realizaciones en el presente documento, otros aspectos y realizaciones resultarán evidentes para los expertos en la técnica. Los diversos aspectos y realizaciones dados a conocer en el presente documento son con fines de ilustración y no se pretende que sean limitativos, indicándose el verdadero alcance mediante las reivindicaciones adjuntas.

[0447] Referencias

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Claims

1. REIVINDICACIONES

1. - Una lectina, comprendida en un dispositivo extracorpóreo, para su uso en un método de tratamiento o de inhibición de unas secuelas asociadas con infección por COVID-19, comprendiendo la secuela asociada con infección por COVID-19 coagulopatía asociada a COVID-19 (CAC), en un paciente que no tiene partículas víricas de COVID-19 y que presenta la CAC, comprendiendo el método:

a) introducir sangre o plasma obtenido del paciente que comprende exosomas asociados con la secuela asociada con una infección por COVID-19 en el dispositivo extracorpóreo que comprende la lectina que se une a dichos exosomas;

b) poner en contacto la sangre o el plasma del paciente con la lectina en el dispositivo extracorpóreo durante un tiempo suficiente para permitir que los exosomas presentes en la sangre o el plasma se unan a dicha lectina; c) reintroducir la sangre o el plasma obtenido tras (b) en dicho paciente, teniendo la sangre o el plasma obtenido tras (b) una cantidad reducida de los exosomas en comparación con la sangre o el plasma de dicho paciente antes de (b); y

d) medir niveles de dímero D, proteína C reactiva, troponina T, IL-1, IL-6, IL-10, IL-15, CXCL10, CCL2, mieloperoxidasa,VCAM-1 y/o TNF-alfa en una muestra de la sangre del paciente tomada tras (b) en relación con una muestra de la sangre del paciente tomada antes de (b).

2. - La lectina según la reivindicación 1, siendo la lectina aglutinina deGalanthus nivalis(GNA).

3. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo el dispositivo extracorpóreo un cartucho de fibras huecas que comprende la lectina y fluyendo la sangre o el plasma a través de fibras huecas del cartucho de fibras huecas.

4. - La lectina según la reivindicación 3, comprendiendo las fibras huecas del cartucho de fibras huecas un tamaño de poro que excluye componentes celulares de la sangre o del plasma de entrar en contacto con la lectina.

5. - La lectina según la reivindicación 4, siendo el tamaño de poro de 200 nm o de aproximadamente 200 nm.

6. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, estando la lectina inmovilizada o adsorbida sobre un soporte sólido, y comprendiendo el cartucho de fibras huecas según cualquiera de las reivindicaciones 3-5 la lectina inmovilizada o adsorbida sobre el soporte sólido.

7. - La lectina según la reivindicación 6, comprendiendo el soporte sólido tierra de diatomeas.

8. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo además el método determinar si el paciente tiene un nivel de dímero D elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel de control.

9. - La lectina según cualquiera de la reivindicación 8, siendo el nivel elevado de dímero D antes de (a) o tras (b) o ambos mayor de o igual a 500 ng/ml.

10. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo además el método determinar si el paciente tiene un nivel de troponina T elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel de control.

11. - La lectina según la reivindicación 10, siendo el nivel elevado de troponina T sérica antes de (a) o tras (b) o ambos mayor de o igual a 15 ng/l.

12. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo además el método determinar si el paciente tiene un nivel de IL-6 elevado en una muestra de sangre o de plasma ya sea antes de (a) o tras (b) o ambos, en comparación con un nivel de control.

13. - La lectina según la reivindicación 12, siendo el nivel elevado de IL-6 sérica antes de (a) o tras (b) o ambos mayor de o igual a 2 pg/ml.

14. - La lectina según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo los exosomas asociados con una infección por coronavirus miR-424-5p, o miR-16-2-3p, o ambos.