ES3044837T3 - Cysteamine for use in anti-viral therapy - Google Patents

Abstract

La invención se refiere al uso de compuestos, y composiciones que comprenden dichos compuestos, para el tratamiento de infecciones virales. Más específicamente, los compuestos para su uso en la invención tienen la fórmula estructural (1), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. La invención también se refiere a los compuestos para su uso en el tratamiento de la hiperinflamación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Cisteamina para uso en terapia antiviral

[0003] La presente invención se relaciona con el uso de compuestos y composiciones que comprenden dichos compuestos para tratar una infección viral. Más específicamente, los compuestos para uso en la presente invención son cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas. A modo de ejemplo, los compuestos pueden utilizarse para tratar la infección por un coronavirus, por ejemplo, la infección por el síndrome respiratorio agudo coronavirus 2 (SARS-CoV-2), conocida como COVID-19.

[0004] Antecedentes

[0005] La infección viral en las poblaciones humanas y animales no es un problema nuevo. Sin embargo, con el surgimiento de una sociedad más global, la capacidad de que infecciones particularmente virulentas se propaguen hasta alcanzar proporciones epidémicas o pandémicas se está volviendo más común. En 2002-2003 el mundo experimentó la infección por el síndrome respiratorio severo (SARS) causado por el coronavirus asociado al SARS (SARS-CoV), en 2012 fue el turno de la infección por el síndrome respiratorio del Oriente Medio (MERS) causado por el coronavirus del síndrome respiratorio del Oriente Medio (MERS-CoV). En 2019-2020, vimos el surgimiento de una infección viral aún más transmisible en forma de enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), causada por el coronavirus asociado al SARS 2 (SARS-CoV-2).

[0006] Como la identificación de vacunas y tratamientos terapéuticos suficientemente eficaces contra las infecciones por coronavirus, como el SARS-CoV-2, ha eludido hasta ahora a la ciencia, la principal estrategia para detener estas pandemias ha sido la de ''confinar1' a la sociedad, utilizando así el distanciamiento social para prevenir la transmisión del virus. Es evidente que estas estrategias son increíblemente perjudiciales para las economías mundiales, nuestro modo de vida y la salud mental de la población en general. Por lo tanto, existe una necesidad de nuevas terapias que puedan direccionar al tratamiento, incluso de forma profiláctica, de las infecciones virales en general, y actualmente aquellas relacionadas con la infección por coronavirus. Esto es particularmente una necesidad urgente en el caso de infecciones virales emergentes, como COVID-19. Aproximadamente el 5 % de los pacientes infectados con COVID-19 requieren ingreso a Unidades de Terapia Intensiva (ITU) y requieren soporte ventilatorio mecánico debido a la insuficiencia respiratoria, la tasa de mortalidad de estos pacientes es del 50-60 %, además muchos pacientes requerirán estadía prolongada en la ITU (>14 días) aumentando aún más la presión sobre los recursos de la ITU. Los procesos patológicos que provocan insuficiencia respiratoria no están del todo claros, pero es probable que incluyan daño directo a las células epiteliales/alveolares bronquiales por COVID-19, infección bacteriana superañadida y reacción inflamatoria asociada. Actualmente no existe ninguna composición terapéutica aprobada en Europa o Estados Unidos para tratar la infección por coronavirus.

[0007] Las intervenciones clínicas diseñadas para abordar directamente la infección viral se dividen esencialmente en tres categorías: (1) terapias antivirales, (2) viricidas o (3) vacunas. Las terapias viricidas desactivan los viriones y por lo tanto tienen como objetivo destruir la infección viral. Las terapias antivirales tienen como objetivo interrumpir la replicación viral (por ejemplo, Aciclovir). Una vacuna está diseñada para activar las respuestas inmunes adquiridas del cuerpo a la invasión viral estimulando los linfocitos B, invocando así una respuesta de anticuerpos (por ejemplo, IgA, IgM o IgG). Cada una de estas estrategias puede presentar dificultades. Diseñar una vacuna eficaz es un proceso plagado de obstáculos técnicos y a menudo lleva mucho tiempo hasta llegar a una preparación efectiva. Los viricidas a menudo tienen efectos fuera del objetivo que pueden provocar daños al huésped y, por lo tanto, rara vez se desarrollan con fines terapéuticos. Quizás las estrategias farmacológicas antivirales más exitosas son administrar "análogos" no funcionales de los nucleótidos que utiliza el virus durante la replicación, que bloquean la polimerasa viral y, por lo tanto, la replicación misma. El aciclovir, ribavirina y azidotimidina (AZT) son ejemplos de estos fármacos y han demostrado ser eficaces en el tratamiento del virus del herpes simple, hepatitis C y VIH/SIDA. Desafortunadamente, el coronavirus puede resistirse a tales estrategias, ya que “corrige” y elimina los nucleótidos no auténticos durante la replicación. Un problema adicional asociado con las terapias antivirales y viricidas es que para obtener un efecto óptimo a menudo deben administrarse directamente en el sitio de la infección. Por ejemplo, en el caso del COVID-19 normalmente serían los pulmones. La administración de tratamientos terapéuticos en los pulmones es difícil y a menudo dolorosa.

[0008] Se ha sugerido que la cistamina (2,2'-ditiobis(etilamina)) tiene propiedades radioprotectoras y potencial para tratar la enfermedad de Huntington. La cisteamina (2-aminoetanotiol) es un aminotiol que posee una serie de características que actualmente se utilizan con fines terapéuticos. La cisteamina está autorizada desde hace más de 30 años para el tratamiento de la cistinosis, un trastorno metabólico hereditario, y está en desarrollo desde hace más de 16 años para las infecciones respiratorias bacterianas asociadas con la fibrosis quística. Se ha demostrado que la cisteamina tiene potentes propiedades antibacterianas (incluidas propiedades antivirales y antibiopelícula), potenciadoras de antibióticos, mucolíticas y antiinflamatorias.

[0009] Se han llevado a cabo algunos trabajos limitados sobre el uso potencial de la cisteamina para tratar el VIH/SIDA e influenzas específicas. En estos estudios, se concluyó que la cisteamina tiene efectos antivirales sobre el VIH mediante su escisión de la glicoproteína de envoltura GP120 que es específica del VIH. Se encontraron efectos similares en relación con el tratamiento de virus de influenza específicos. Por lo tanto, se considera que la cisteamina actúa como un agente viricida que ataca las glicoproteínas de envoltura que son específicas para estas dos clases de virus (es decir, VIH, H1N1 y H7N9). Como las poblaciones de glicoproteínas de envoltura son específicas de cada clase de virus, no es posible tener ningún nivel razonable de expectativa de que la cisteamina pueda actuar sobre cualquier otro virus determinado.

[0010] Kandeel Mahmoud et al., Life Science, vol. 251, 3 April 2020 (2020-04-03), 117627 describe el acoplamiento de la cisteamina a la proteasa viral COVID-19.

[0011] Hasta la fecha, no existe evidencia empírica que demuestre que la cisteamina tenga algún efecto antiviral sobre una infección por coronavirus.

[0012] Breve resumen de la divulgación

[0013] Los solicitantes han estado investigando la utilidad terapéutica de varios compuestos en enfermedades infecciosas respiratorias, bacterianas y fúngicas durante más de 16 años y tienen una visión única del potencial terapéutico que dichos compuestos tienen para ofrecer. Gran parte del trabajo se ha centrado en dilucidar los mecanismos de acción de los compuestos cuando se dirigen a infecciones bacterianas o fúngicas; mecanismos que no tienen relevancia para la actividad antiviral. Como se mencionó anteriormente, se ha propuesto que la cisteamina tiene actividad antiviral, pero los resultados hasta la fecha y las explicaciones sobre el modo de acción solo indican que el efecto terapéutico está restringido a virus específicos. Por lo tanto, los solicitantes han descubierto sorprendentemente que la cisteamina o cistamina pueden tratar una infección por coronavirus y, de hecho, una infección viral en general.

[0014] Por consiguiente, en un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, para uso en el tratamiento de una infección viral, mediante la inhibición de la actividad de la glicina descarboxilasa. La infección viral puede ser causada por cualquier virus, excepto el VIH, H1N1 o H7N9. El virus puede ser por tanto un virus de influenza, excepto H1N1, o H7N9. Por lo tanto, el virus puede ser un virus de influenza C. El virus puede ser un virus de influenza con un contenido de hemaglutinina que no incluye H1 y no es H7N9, a menos que opcionalmente la neuraminidasa no sea N1. En consecuencia, el virus puede tener un contenido de hemaglutinina de cualquiera de H2-17, o H1 cuando el virus no incluye N1, y no es H7N9. En consecuencia, el virus puede tener un contenido de neuramaninidasa de cualquiera de N2-9, o N1 cuando el virus no incluye H1 y no es H7N9. El virus puede ser un virus de influenza con un contenido de hemaglutinina que no incluye H7 y no es H1N1, a menos que opcionalmente la neuraminidasa no sea N9. En consecuencia, el virus puede tener un contenido de hemaglutinina de cualquiera de los siguientes: 1-6 u 8-17, o H7 cuando el virus no incluye N9, y no es H1N1. En consecuencia, el virus puede tener un contenido de neuramaninidasa de cualquiera de los grupos N1-8, o N9 cuando el virus no incluye H7 y no es H1N1. La infección viral puede ser un Ribovirus (pero no H1N1, H7N9). La infección viral puede ser cualquiera de ébola, coronavirus, hepatitis C, hepatitis E, fiebre del Nilo Occidental, norovirus, rotavirus, polio, rabia, sarampión, rinovirus. El virus puede ser un coronavirus. Por ejemplo, cualquier virus de la familia Coronaviridae. Estos virus se caracterizan por ser virus envueltos con un genoma de ARN monocatenario de sentido positivo y una nucleocápside de simetría helicoidal. El tamaño del genoma de los coronavirus puede ser bastante grande, oscilando entre 26 y 32 kilobases. El virus puede ser SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, HCoV-299E, HCoV-OC43, HCoV-NL63, CoV-HKU1, Coronavirus Humano 229E (ATCC No. VR/740) o cualquier combinación de estos. El virus es preferiblemente SARS-CoV-2. El SARS-CoV-2 es un betacoronavirus con un 79 % de homología genética con SARS-CoV y un 98 % de homología con el coronavirus de murciélago RaTG13 (Zhou et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin, Nature, 2020;579 (7798):270-3). Se propaga en gotitas respiratorias e infecta las células epiteliales nasales, bronquiales y alveolares mediante el enlace de la proteína de pico viral a su receptor celular, ACE2 (Walls et al. Structure, Function, and Antigenicity of the SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein. Cell.

[0015] 2020;181(2):281-92 e6). Debido a la naturaleza propensa a errores del proceso de replicación viral, los virus de ARN como el SARS-CoV-2 acumulan mutaciones que resultan en cierta diversidad de secuencia. Sin embargo, se pueden reconocer diferentes cepas de SARS-CoV-2 mediante secuenciación y árboles de secuencias filogenéticas. Una ejemplificación de dicho análisis de árbol filogenético con secuenciación rápida de aislamientos se informa, por ejemplo, en Meredith et al. Rapid Implementation of SARS-CoV-2 sequencing to investigate cases of health-care associated COVID-19: a prospective genomic surveillance study en The Lancet, publicado en línea el 14 de julio de 2020. Las secuencias del genoma del virus del SARS amplificado se pueden comparar con la secuencia de referencia NCBI NC_045512.2 o la referencia GenBank equivalente MN908947.3 para el SARS-CoV-2 correspondiente al genoma completo del aislado del SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 (Wu et al. Nature 579, 265-269). De este modo, se pueden reconocer cepas variantes del SARS2-CoV-2 y se puede esperar que tengan una alta homología con el genoma de referencia, por ejemplo, al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 98 % o al menos el 99 %. Este tipo de vigilancia mediante secuenciación puede igualmente permitir identificar cualquier nuevo virus del SARS que infecte a seres humanos. Por lo tanto, el uso de compuestos de la presente invención puede utilizarse para tratar a seres humanos infectados con cualquier virus del SARS-CoV, especialmente cualquier cepa viral del SARS-CoV-2 (que puede incluir variantes de este).

[0017] Los solicitantes han descubierto sorprendentemente que el modo de acción antiviral de los compuestos de la presente invención (por ejemplo, cuando se dirigen a una infección por coronavirus) es diferente a los mecanismos de acción antivirales generales conocidos (por ejemplo, anti-VIH/SIDA) de algunos de esos compuestos. El solicitante ha determinado que es la acción del compuesto para inhibir la actividad de la glicina descarboxilasa en el huésped lo que produce el efecto anti-coronavirus. Con base en investigaciones adicionales, esto ha permitido a los solicitantes identificar una serie de conceptos inventivos adicionales asociados con el uso de los compuestos de la presente invención para tratar infecciones virales.

[0019] Debido a que la glicina descarboxilasa es omnipresente en los virus, el hecho de que, por ejemplo, la infección por coronavirus se pueda tratar con compuestos de la presente invención de esta manera respalda la comprensión de que todos los virus se pueden tratar de esta manera.

[0021] En consecuencia, en un aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para uso en el tratamiento de una infección viral mediante la inhibición de la actividad de la glicina descarboxilasa. La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención.

[0023] Aquellos sujetos con un nivel elevado de actividad de glicina descarboxilasa son, como resultado de lo anterior, particularmente susceptibles al tratamiento con cisteamina para la infección viral. En consecuencia, en un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para uso en el tratamiento de una infección viral en un sujeto, en donde el sujeto tiene una actividad de glicina descarboxilasa que es mayor de lo normal. La determinación de dicho sujeto puede lograrse mediante un análisis cuantitativo de cualquier biomarcador de la actividad de la glicina descarboxilasa, por ejemplo, la que se encuentra en la orina o la sangre. Un nivel más bajo de lo normal de ese biomarcador para el sujeto sería indicativo de un individuo que respondería bien al tratamiento de la infección viral mediante los compuestos de la presente invención. Es posible determinar cuándo el nivel es inferior al normal comparando el nivel del biomarcador con el de una muestra proporcionada por el sujeto a tratar antes de la infección. Si dichas muestras no están disponibles, está dentro de la habilidad del médico determinar si el nivel de cualquier biomarcador individual es inferior al normal. Como ejemplo, el biomarcador puede ser glicina. La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención.

[0024] En consecuencia, en un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para uso en el tratamiento de una infección viral en un sujeto, en donde el sujeto tiene una concentración plasmática de glicina que es menor o igual a 300, 290, 280, 250, 200, 150, 125 ^mol/L. Un intervalo preferido es menor o igual a 300 ^mol/L. Un intervalo preferido adicional es menor o igual a 125 ^mol/L. La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención.

[0025] Por lo tanto, antes de administrar cualquiera de los compuestos descritos, se puede analizar al sujeto para determinar los niveles de glicina en cualquier fluido corporal, por ejemplo, sangre (por ejemplo, plasma) u orina. Los niveles de glicina varían de acuerdo con edad y salud. La persona experimentada, por ejemplo, un médico, conocería los niveles apropiados de glicina para un sujeto. A continuación, se ofrecen algunos ejemplos de intervalos a modo de orientación:

[0027]

[0029] En un aspecto no reivindicado, se divulga también un método para: a) determinar el nivel de glicina en una muestra obtenida de un sujeto; y b) comparar el nivel de glicina con un intervalo de control, en donde si el nivel de glicina es menor que el control o está en un nivel bajo en comparación con el control, el sujeto es tratado con cisteamina o cualquiera de los compuestos descritos a continuación. Por nivel bajo se entiende, por ejemplo, que la glicina puede estar en el 10 % inferior del intervalo de control.

[0030] Alternativamente, la glicina puede estar en el 15 % inferior del intervalo de control.

[0031] Alternativamente, la glicina puede estar en el 20 % inferior del intervalo de control.

[0032] Alternativamente, la glicina puede estar en el 25%inferior del intervalo de control. Alternativamente, la glicina puede estar en el 30 % inferior del intervalo de control.

[0033] Alternativamente, la glicina puede estar en el 35 % inferior del intervalo de control.

[0034] Alternativamente, la glicina puede estar en el 40 % inferior del intervalo de control.

[0035] Alternativamente, la glicina puede estar en el 45 % inferior del intervalo de control.

[0036] Alternativamente, la glicina puede estar en el 50 % inferior del intervalo de control.

[0037] El intervalo de control en plasma para adultos sanos es de 120-554 con niveles promedio de entre 200-300 jmol/L. Por lo tanto, la glicina puede estar por debajo de 120 o entre 120-200 jmol/L. Alternativamente, la glicina puede estar por debajo de 120 o entre 120 y 150 jmol/L.

[0038] Alternativamente, la glicina puede estar por debajo de 200-300 jmol/L. Por ejemplo, por debajo de 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210, 200, 190, 180, 170, 160, 150 |jmol/L

[0039] Para sujetos obesos o diabéticos tipo II, la glicina puede estar por debajo de 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130 o 120 jmol/L.

[0040] Otros biomarcadores que podrían identificar a los pacientes elegibles para el tratamiento incluyen: glicina descarboxilasa o amoníaco (que es un subproducto de la vía de escisión de la glicina). Por lo tanto, también se divulga un método para: a) determinar la actividad de la glicina descarboxilasa en una muestra obtenida de un sujeto; y b) comparar la actividad con un intervalo de control, en donde si la actividad es mayor que el control, el sujeto es tratado con cisteamina o cualquiera de los compuestos descritos a continuación. La persona experimentada conocería los niveles normales de actividad de la glicina descarboxilasa en un sujeto. También se divulga un método para: a) determinar el nivel de amoníaco en una muestra obtenida de un sujeto; y b) comparar el nivel con un intervalo de control, en donde si el nivel es más alto que el control, el sujeto es tratado con cisteamina o cualquiera de los compuestos descritos a continuación. El intervalo normal de amoníaco en la sangre es de 15 a 45 j/dL (11 a 32 jmol/L).

[0041] También se pueden probar otros marcadores del aumento del flujo a través de la vía de escisión de glicina. Por lo tanto, también se divulga un método general para a) determinar la actividad o el nivel de un biomarcador que indica un mayor flujo a través de la vía de escisión de glicina; y administrar un compuesto descrito a continuación. Por ejemplo, cualquiera de los compuestos a continuación, para uso en un método de tratamiento de una infección viral, en donde el método comprende: a) determinar la actividad o el nivel de un biomarcador que indica un mayor flujo a través de la vía de escisión de glicina; y b) administrar el compuesto.

[0042] Además de probar los niveles de glicina o amoníaco, o la actividad de la glicina descarboxilasa, un médico puede indicar que se lleven a cabo las pruebas.

[0043] Varias afecciones se asocian con un nivel elevado de actividad de la glicina descarboxilasa, por ejemplo, el síndrome metabólico, diabetes (particularmente el tipo II) y obesidad. Los ancianos (por ejemplo, mayores de 75 años) también tienden a tener niveles elevados de glicina descarboxilasa, particularmente cuando sufren demencia. En consecuencia, las composiciones de la presente invención pueden tener una utilidad particular cuando se destinan a uso en el tratamiento de una infección viral en un sujeto, ya sea diabético (particularmente tipo II), obeso, que sufre demencia o es anciano (particularmente con demencia), o una combinación de estos. La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención.

[0044] El solicitante ha identificado además que los compuestos capaces de inhibir la reacción catalizada por la glicina descarboxilasain vivo(es decir, la escisión de glicina) pueden optimizar la actividad antiviral de la cisteamina, particularmente aquellas que logran dicha inhibición a través de medios que no involucran la inhibición de la actividad de la glicina descarboxilasa. Por ejemplo, un compuesto adecuado es el ácido aminooxiacético o el bicarbonato. Preferiblemente el compuesto es bicarbonato.

[0045] En consecuencia, en un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una composición que comprende un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y un inhibidor de la escisión de la glicina, por ejemplo, bicarbonato. Se prefiere que dichos inhibidores lleven a cabo esta actividad a través de un mecanismo distinto a la inhibición de la glicina descarboxilasa. Como dicha composición tiene valor terapéutico, la presente invención puede estar relacionada con una composición farmacéutica que comprende un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y un inhibidor de la escisión de la glicina (por ejemplo, bicarbonato) y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una composición que comprende un compuesto que comprende cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y bicarbonato para uso en terapia. El compuesto y el inhibidor de la escisión de la glicina (por ejemplo, bicarbonato) pueden prepararse para administración separada, secuencial o simultánea. Ese uso terapéutico puede ser el tratamiento de la infección viral. La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención. El compuesto de la presente invención es cisteamina, un profármaco de esta (es decir, cisteamina producidain vivopor un sujeto que está siendo tratado), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. El profármaco es cistamina.

[0046] El compuesto de cualquiera de los aspectos de la presente invención puede proporcionarse como una composición con actividad terapéutica antiviral. En consecuencia, es posible que la composición comprenda el compuesto como el único compuesto con actividad antiviral en la composición. La composición puede consistir en el compuesto, opcionalmente con excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales.

[0047] Las infecciones bacterianas oportunistas suelen seguir a las infecciones por virus, en especial las asociadas con el coronavirus, que pueden, además de la infección viral, exacerbar aún más las respuestas inmunológicas adversas, acercando al sujeto a afecciones muy graves como el síndrome de shock de citoquinas. Si solo se trata la infección viral, la infección bacteriana podrá proliferar, y viceversa si se trata solo la infección bacteriana. Las terapias combinadas pueden ser impredecibles. En consecuencia, una ventaja sorprendente del trabajo llevado a cabo por el solicitante es que se puede tratar una infección bacteriana y viral con un único agente terapéutico que es eficaz para ambas, por ejemplo, uno de cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente aceptable de estas. La actividad inmunosupresora de los compuestos de la presente invención ayuda además a reducir la progresión de los efectos nocivos de ambas infecciones. En consecuencia, los compuestos o composiciones de la presente invención muestran una utilidad sorprendente para tratar una infección viral (tal como el coronavirus) y una infección bacteriana simultáneamente. Tratar a un sujeto con solo una infección viral (por ejemplo, coronavirus) también tendrá el beneficio de proporcionar un tratamiento profiláctico de la coinfección bacteriana. Los sujetos por tratar en la presente invención pueden ser por tanto aquellos con una infección viral y bacteriana, o aquellos con una infección viral y que pueden ser vulnerables a una infección bacteriana (por ejemplo, debido al estado de fin de semana por una infección viral grave, o su presencia en un hospital). La infección viral puede ser la definida en relación con otros aspectos de la presente invención.

[0048] Debido a que las terapias antivirales convencionales funcionan de una manera diferente a la de la presente invención, la coadministración de compuestos o composiciones de la presente invención y una terapia antiviral adicional puede proporcionar un nivel mejorado de eficacia en comparación con el uso de cualquiera de las terapias por separado, por ejemplo, un nivel sinérgico de mejora. Esta ventaja se puede encontrar cuando se combina con cualquier terapia antiviral convencional, por ejemplo, aquellas que no actúan mediante la inhibición de la glicina descarboxilasa. Como ejemplo, un agente antiviral adicional puede ser Idoxuridina, Trifluridina, Brivudina, Vidarabinea, Entecavir, Telbivudina, Foscarnet, Zidovudina, Didanosina, Zalcitabinea, Estavudina, lamivudina, Abacavir, Emtricitabina, Nevirapina, Delavirdinea, Efavirenz, Etravirina, Rilpivirina, Saquinavir, Ritonavir, Indinavir, Nelfinavir, Amprenavira, lopinavir-ritonavir, Atazanavir, Fosamprenavir, Tipranavir, Darunavir, Telaprevira, Boceprevira, Simeprevir, Asunaprevirb, Paritaprevirb, Grazoprevirb, Raltegravir, Elvitegravir, Dolutegravir, RSV-IGIVa, Palivizumab, Docosanol, Enfuvirtida, Maraviroc, VZIGa, VariZIG, Aciclovir, Ganciclovir, Famciclovir, Valaciclovir, Penciclovir, Valganciclovir, Cidofovir, fumarato de tenofovir disoproxil, Adefovir Dipivoxil, Amantadinea, Ribavirina, Rimantadina, Zanamivir, Oseltamivir, octanoato de laninamivir, Peramivir, Favipiravir, interferón alfa 2b pegilado, interferón alfacon 1a, Fomivirsena, Podofilox, Imiquimod, sinecatequinas, Remdesivir, Flavipiravir o cualquier combinación de estos. Se puede preferir Remdesivir, Flavipiravir, Lopinavir-ritonavir o cualquier combinación de estos.

[0049] En consecuencia, las composiciones para uso en cualquier aspecto de la presente invención pueden incluir uno o más agentes terapéuticos antivirales adicionales. Alternativamente, los compuestos o composiciones de la presente invención pueden administrarse por separado, pero como parte del mismo régimen, para tratar la infección viral (opcionalmente coronavirus). Por lo tanto, las composiciones o compuestos de la presente invención pueden proporcionarse para uso separado, simultáneo o secuencial con uno o más agentes terapéuticos antivirales adicionales para uso en el tratamiento de una infección viral (opcionalmente coronavirus).

[0050] Las composiciones de la presente invención pueden prepararse para administración por vía intravenosa, oral, rectal, parenteral o tópica. Opcionalmente, las composiciones se preparan para su administración en el sitio de la infección, por ejemplo, los pulmones. En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para tratar una infección viral en un sujeto, comprendiendo el método la etapa de administrar cualquiera de los compuestos o composiciones anteriores en una cantidad terapéuticamente efectiva al sujeto. La infección viral puede ser una infección por coronavirus, como se define anteriormente. El método puede ser un tratamiento profiláctico.

[0051] Los inventores también han visto una reducción beneficiosa en la respuesta inflamatoria dañina inducida por IL-6 como resultado del tratamiento con cisteamina (ver la discusión de la Figura 11 en el Ejemplo 2 a continuación, donde se explica el efecto de la cisteamina corriente abajo del sistema de escisión de glicina). Por lo tanto, también se proporciona cisteamina para uso en un método de tratamiento de la hiperinflamación. La hiperinflamación puede ser el resultado de una infección viral o de una infección bacteriana o fúngica. Por ejemplo, la hiperinflamación puede ser el resultado de una neumonía causada por una infección viral o bacteriana. La hiperinflamación puede presentarse en el síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS). La hiperinflamación puede presentarse en caso de sepsis o síndrome de shock tóxico. La hiperinflamación puede deberse a otras causas, es decir, no a una infección. Por ejemplo, la hiperinflamación puede darse en una enfermedad autoinmune, por ejemplo, en un brote de una enfermedad autoinmune. Un brote autoinmune es un período de empeoramiento e intensificación de los síntomas. Esto se puede diagnosticar utilizando diversos biomarcadores dependiendo de la condición autoinmune. La enfermedad autoinmune puede ser artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico o enfermedad inflamatoria intestinal (IBD). La hiperinflamación es una inflamación sistémica aguda y puede diagnosticarse por niveles elevados de citoquinas proinflamatorias. Los tratamientos actuales incluyen anticuerpos contra el receptor IL-6 y esteroides. Los pacientes tienen una mayor incidencia de shock, insuficiencia de múltiples órganos y mayor mortalidad. La hiperinflamación también puede describirse como enfermedad o síndrome hiperinflamatorio. Alternativamente, se le puede llamar síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS).

[0052] La invención también se relaciona con una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto. Se discuten ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables en Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19. Si el compuesto es catiónico o tiene un grupo funcional que puede ser catiónico, entonces se puede formar una sal con un anión adecuado o un ácido conjugado del mismo. Ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen cloruro, bromuro, yoduro, fosfato, dihidrogenofosfato, sulfato, bisulfato, hemisulfato, persulfato, sulfonato y nitrato. Ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, butirato, alcanforato, alcanforsulfonato, cinamato, citrato, crotonato, ciclopentanopropionato, detartrato, digluconato, disuccinato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, gluconato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, heptanoato, hexanoato, 2-hidroxietano-sulfonato, lactato, maleato, mandelato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pantotenato, pectinato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, tropato, tricloroacetato, undecanoato y undecilenato.

[0053] Si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico, entonces se puede formar una sal con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen iones de metales alcalinos, como Na+ y K+, y los cationes de metales alcalinotérreos, como Ca2+ y Mg2+. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen el ion amonio (es decir, NH<4>+) e iones de amonio sustituidos (por ejemplo, NH<3>R<+>, NH<2>R<2+>, NHR<3+>, NR<4+>). Ejemplos de algunos iones de amonio sustituidos adecuados son los derivados de: etilamina, dietilamina, trietilamina, así como aminoácidos, como lisina y arginina.

[0054] Generalmente, se prefiere que la sal farmacéuticamente aceptable del compuesto sea una sal de cloruro o una sal de bitartrato.

[0055] El compuesto puede ser bitartrato de cisteamina.

[0056] La cisteamina o cistamina, de acuerdo con cualquier aspecto de la presente invención, inhibirá la actividad de la glicina descarboxilasa. Más arriba se describe cómo determinar dicha inhibición. Donde el contexto lo permita, todas las características opcionales del primer aspecto de la presente invención se aplican igualmente a los aspectos adicionales de la presente invención.

[0057] A lo largo de la especificación, a menos que el contexto exija lo contrario, los términos "comprender" o "incluir", o variaciones tales como "comprende" o "que comprende", "incluye" o "incluyendo" se entenderán como que implican que el método o kit incluye un entero o grupo de enteros indicados, pero no la exclusión de cualquier otro entero o grupo de enteros.

[0058] A continuación, se ilustrarán aspectos de la presente invención sólo a modo de ejemplo y con referencia a la siguiente experimentación y a las figuras.

[0059] Figura 1: Imágenes representativas de contraste de fase (aumento de 200 x) de controles de células de fibroblastos pulmonares MRC-5 (no infectados) o infectados con una titulación de dosis de hCoV 229E después de 4 días de infección a 33 °C en medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) con suero al 1 %. Imágenes resaltadas (es decir, imágenes en los cuadros del medio y del lado derecho para los resultados de células no tratadas a diluciones de 10<-4>y 10<-5>) fueron de pozos donde hubo destrucción completa de la monocapa de células MRC-5. Esta destrucción se observó en algunos de los pozos a dilución viral de 10<-4>hasta 10<-7>infectada en células no tratadas y no observada en ninguna de las células tratadas con cisteamina.

[0060] Figura 2: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células de fibroblastos MRC-5 infectadas por virus sin tratamiento con cisteamina.

[0061] Figura 3: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células de fibroblastos MRC-5 infectadas por virus con tratamiento de 1 mg/L de cisteamina. Figura 4: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células de fibroblastos MRC-5 infectadas por virus con tratamiento de 2 mg/l de cisteamina. Figura 5: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células epiteliales pulmonares A549 infectadas con virus sin tratamiento con cisteamina.

[0062] Figura 6: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células epiteliales pulmonares A549 infectadas por el virus con tratamiento de 1 mg/L de cisteamina.

[0063] Figura 7: Hoja de puntuación para un ensayo de inmunoperoxidasa en placa de 96 pozos practicado en células epiteliales pulmonares A549 infectadas por el virus con tratamiento de 2 mg/l de cisteamina.

[0064] Figura 8: Modulación de las respuestas de IL-6 e IFNp por cisteamina en células epiteliales de las vías respiratorias A549 a la infección con coronavirus humano 229E.

[0065] Figura 9: Efecto de la base libre de cisteamina sobre la utilización de glicina por fibroblastos MRC-5 (a las 4 horas)

[0066] Figura 10: Formación de cisteamina PLP tiazolidina

[0067] Figura 11: Una descripción general de las diversas acciones de la cisteamina como tratamiento para la infección viral. * = 14 días de terapia con cisteamina complementaria a la terapia de atención estándar (SOCT) redujeron significativamente los niveles de WBC y CRP (ensayo clínico de fase 2b CARE-CF1 de Novabiotics) en exacerbaciones pulmonares infecciosas agudas de fibrosis quística frente a SOCT solo.;[0068] Figura 12: Efecto de la aplicación de cisteamina sobre la cantidad de hCoV 229E detectada en el sobrenadante de células epiteliales pulmonares A549 infectadas.;[0069] Figura 13: Titulación de dosis única y múltiple de cisteamina en células Vero E6 MESO infectadas con SARS CoV-2 (SARS-CoV-2-CVR-Gla-1). Blanco = daño celular/Negro = monocapa celular intacta. = Control de infección positivo (sin tratamiento), - = Células no infectadas. IC<50>de 21.36 para dosis única.;[0070] Descripción detallada;[0071] Definiciones;[0072] "Virus" o "infección viral" se relaciona con cualquier virus en el contexto de la presente invención. Como la invención proporciona utilidad terapéutica principalmente a través de la inhibición de la glicina descarboxilasa, y todos los virus requieren que sus huéspedes utilicen esta enzima para permitir la replicación viral, virus e infección viral pueden relacionarse con cualquier virus. En consecuencia, el virus o infección viral pueden ser miembrosDuplodnaviria, Monodnaviria, Riboviria, Varidnaviria,o cualquier combinación de estos. Por tanto, el virus puede ser uno cualquiera de los siguientes o una combinación de ellos: un ribovirus, un virus de influenza, ébola, coronavirus, hepatitis C, hepatitis E, fiebre del Nilo Occidental, norovirus, rotavirus, polio, rabia, sarampión, rinovirus. Preferiblemente el virus es un coronavirus. El virus puede ser SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, HCoV-299E, HCoV-OC43, HCoV-NL63, CoV-HKU1, Coronavirus Humano 229E (ATCC No. VR/740) o cualquier combinación de estos. El virus más preferiblemente es SARS-CoV-2.;[0073] Ejemplo 1: Tratamiento con cisteamina de células pulmonares infectadas por coronavirus;[0074] Se estudió el efecto del tratamiento de células pulmonares infectadas por coronavirus con cisteamina. Se utilizaron dos líneas de células pulmonares separadas (es decir, A549 y MRC-5) como base para el estudio. A549 (muestra obtenida del depósito, depositado bajo ATCC CCL-185) es una línea de células epiteliales pulmonares humanas, mientras que MRC-5 (muestra obtenida del depósito, depositado bajo ATCC CCL-171) es una línea de células de fibroblastos pulmonares humanas. Antes de la exposición viral, las células se cultivaron a 37 °C en atmósfera de CO<2>al 5 % en medio de crecimiento (EMEM FBS al 10% pen-strep para células MRC-5/F-12 con modificación de Kaighn FBS al 10 % pen-strep) hasta 70-80 % de confluencia. Inmediatamente antes de la exposición viral, las células se lavaron en solución salina balanceada de Hanks y el medio se reemplazó con 100 ^l de medio de exposición por pozo (EMEM para MRC-5 y F-12 para A549) que contenía suero al 1 %. Se utilizó una placa de células separada para cada concentración de tratamiento con cisteamina, así como otra para ningún tratamiento. Las células se incubaron a 33 °C en una atmósfera de CO<2>al 5 % y se trató diariamente con la misma concentración de cisteamina hasta el 5to día, cuando se realizó el ensayo de inmunoperoxidasa de acuerdo con el protocolo descrito en Lambert et al., 2008. Se infectaron 4 pozos a la vez con un coronavirus humano hCoV 229E (un coronavirus relacionado con el SARS-CoV-2, obtenido de un depósito, depositado bajo ATCC VR/740), la concentración del virus se diluyó con cada grupo de 4 pozos subsiguiente. Se determinó que la solución madre de inóculo del que se derivó cada dilución (determinado en las células no tratadas) fue de aproximadamente 1.12 x 10<14>pfu/ml.;[0075] Todos los cultivos de células infectadas fueron tratados con dosis diarias de base libre de cisteamina. Se probaron dos regímenes de dosificación en los cultivos de células infectadas: una aplicación de 1 mg/L de cisteamina una vez al día durante 5 días en un conjunto de placas, y una aplicación de 2 mg/L de cisteamina una vez al día durante 5 días en otro conjunto de placas (5 microlitros de solución madre 20 x en 100 microlitros en la placa, y a los controles se les proporcionó un tratamiento simulado). El procedimiento anterior se llevó a cabo por cuadruplicado (es decir, en cuatro pozos paralelos, tal como se practicó anteriormente en una placa de 96 pozos).;[0076] Se analizó el efecto del tratamiento de cada cultivo de células infectadas con cada régimen de dosificación sobre la infección viral mediante examen microscópico de las células cultivadas en comparación con los mismos cultivos de células infectadas durante el mismo período, pero en ausencia de tratamiento con cisteamina. Se proporcionaron líneas celulares no infectadas (tratadas y no tratadas con cisteamina) como controles. El título viral del solución madre de virus sin diluir utilizado como solución madre original para el estudio y proporcionado por el instituto depositario se determinó como la dosis de infectividad del cultivo de tejido al 50 % (TCID<50>: es decir, el número de virus necesarios para causar citopatología en el 50 % de los pozos; un valor que puede convertirse en el título viral: pfu/ml multiplicándolo por 0.7) después del ensayo de inmunoperoxidasa (Lambert, et al., 2008, Methods in Molecular Biology, 454:93-102). A partir de esta solución madre sin diluir, se preparó el intervalo de concentraciones del virus; se prepararon 16 diluciones que se extendían desde 10-1 hasta 10-16 diluciones por volumen de la solución madre original y se utilizaron en el estudio.;[0077] Resumen de resultados: Resultados del tratamiento de células pulmonares infectadas por coronavirus;[0078] Las figuras 2 a 7 muestran las hojas de puntuación para los ensayos de inmunoperoxidasa descritos anteriormente. Una "marca de verificación" indica la identificación de la presencia de una citopatología. Una "cruz" indica que no se identificó citopatología. Los pozos marcados con un asterisco indican aquellos en los que no se identificaron células en los pozos, solo restos celulares. Se demostró que la aplicación diaria de 2 mg/L de cisteamina durante 5 días confería protección contra la infección con hCoV 229E en las líneas celulares A549 y MRC-5 en todas las concentraciones de virus utilizadas en el estudio. La figura 1 proporciona los resultados del examen microscópico en el día 4 de este estudio cuando se aplicó a células MRC-5. Se puede observar que, en dos de las tres repeticiones de la prueba mostradas, las líneas celulares no tratadas a diluciones 10<-4>y 10<-5>del virus mostraron una destrucción completa de la monocapa de células pulmonares (aunque no se muestra, se encontró lo mismo para las diluciones 10<-6>y 10<-7>). Esto puede contrastarse con la monocapa intacta visible exhibida en todas las líneas celulares MRC-5 tratadas con 2 mg/l de cisteamina en todas las concentraciones del virus del estudio (aunque solo las concentraciones10<-1>hasta 10<-5>se muestran en la Figura 1). Los mismos resultados que se muestran en la figura 1 se encontraron para las líneas celulares A549 analizadas.;[0079] El alto nivel de pfu/ml del inóculo demuestra que las concentraciones probadas contenían una cantidad muy elevada de viriones 229E infecciosos que representan una carga viral de infección fisiológicamente muy pesada.;[0080] pfu/ml;[0081] Células A549 Células MRC-5;[0082] 0 mg/L de cisteamina 2.21 x 1014/ml 1x10125/ml;[0083] 1 mg/L de cisteamina 3.94 x 1015/ml 1x10125/ml;[0084] 2 mg/L de cisteamina 7 x 109/ml 1x1011-71/ml;[0086] Tabla 1: valores de pfu/ml establecidos en aquellos pozos que recibieron tratamiento con cisteamina e infectados con hCoV 229E.;[0087] Un valor de pfu/ml más bajo, en relación con el del control en el que no se aplicó cisteamina, demuestra que la cisteamina puede reducir la carga viral en ambos tipos de células a 2 mg/L (lo cual es fisiológicamente alcanzablein vivo).;[0088] Estos resultados demuestran claramente la capacidad de la cisteamina para reducir la carga viral en una infección por coronavirus y para proporcionar una función protectora de las células contra la muerte celular inducida por el virus.;[0089] Ejemplo 2:La reducción de la carga viral se produce mediante la acción de la cisteamina sobre la vía de escisión de la glicina.;[0090] Para investigar cómo la cisteamina reduce la carga viral, el siguiente experimento analizó las citoquinas que están moduladas por el sistema de escisión de la glicina.;[0091] La Figura 8 muestra las respuestas de las citoquinas interleucina-6 (IL-6) e interferón beta (IFNp) producidas por las células epiteliales de las vías respiratorias A549 en respuesta a la infección por el coronavirus humano 229E, con y sin tratamientos individuales de cisteamina a las concentraciones mostradas tras una incubación de 20 horas a 37 °C. Las monocapas celulares se trataron por triplicado con o sin dilución 10-3 del virus HCoV 229E de solución madre como se indica y con o sin dosis únicas de cisteamina como se muestra en concentraciones terapéuticamente alcanzables de 2 o 10 mg/L. Después de 20 horas se cosecharon los sobrenadantes de células y se midieron las concentraciones de citoquinas utilizando el kit de inmunoensayos IFN Beta Quantikine de R and D Systems o el kit IL-6 Duoset. Los resultados confirman que el HCoV 229E, al igual que todos los coronavirus, produce poco IFNp por sí solo, ya que no se detecta ninguno en respuesta a la exposición viral. Sin embargo, en presencia de 10 mg/L de cisteamina se detecta IFNp, lo que demuestra un aumento en la señalización del interferón tipo I mediada por cisteamina. La exposición viral provoca la secreción de IL-6, pero el tratamiento con dosis únicas de cisteamina redujo significativamente la secreción de IL-6 en comparación con la infección viral sola, como se determinó mediante ANOVA unidireccional y análisis post hoc de Tukey. La señalización del interferón beta puede reducir las respuestas proinflamatorias de IL-6.;[0092] Resumen de resultados: Estos resultados muestran que el tratamiento con cisteamina modula las citoquinas corriente abajo de la vía de escisión de la glicina. La vía de escisión de la glicina alimenta las vías biosintéticas de las purinas y pirimidinas, los componentes básicos para la síntesis de nucleótidos. Cuando una célula es infectada por un virus, los niveles de purina y pirimidina se reducen ya que éstas se utilizan para la replicación viral. Estas citoquinas moduladas se inducen en respuesta a esta reducción de pirimidinas/purinas, como respuesta del huésped. Los inventores plantean la hipótesis de que la cisteamina actúa sobre la enzima glicina descarboxilasa en la vía de escisión de la glicina para provocar esta modulación de las citoquinas. Al actuar sobre la glicina descarboxilasa, las acciones de la cisteamina son dobles: 1) reduce la carga viral al inhibir la producción de pirimidinas y purinas que de otro modo podrían usarse para la replicación viral; y 2) como resultado de esta reducción en estos bloques de construcción de nucleótidos, aumenta la respuesta natural de la célula al ataque viral al inducir citoquinas que ayudan a la eliminación viral. Esta acción multifacética de la cisteamina se resume en la Figura 11. La cisteamina inhibe potentemente la enzima glicina descarboxilasa en las mitocondrias del huésped. La inhibiciónde novode la síntesis de purina y pirimidina reduce la cantidad de componentes básicos necesarios para la replicación de los virus durante la infección. También potencia la respuesta del interferón beta (IFN-p) a la infección viral, favoreciendo así la fase de resolución de la respuesta inmune antiviral. Al mismo tiempo, la cisteamina puede reducir el recuento de glóbulos blancos (WBC) y la proteína C reactiva (CRP) durante la infección, reduciendo la inflamación.;[0093] Ejemplo 3:Efecto de la cisteamina sobre la utilización de glicina por los fibroblastos MRC-5 Exposición celular;[0094] Las células de fibroblastos de las vías respiratorias MRC-5 se cultivaron hasta el 90 % de confluencia en placas de 2 x 12 pozos en EMEM FBS al 10 %. Los medios de cultivo celular fueron reemplazados por:;[0095] Placa 1;[0096] 1. 3 x 1 ml de medio solo (EMEM FBS al 10%);[0097] 2. 3 x 1 ml de medio insulina (10 mg/L);[0098] 3. 3 x 1 ml de medio glicina añadida (300 ^M);[0099] 4. 3 x 1 ml de medio glicina insulina;[0101] Placa 2;[0102] Igual que el anterior, pero con la adición de cisteamina hasta una concentración final de 10 mg/L Luego, las células se incubaron a 37 °C y CO<2>al 5 % durante 4 horas. Tras la incubación, se cosecharon los sobrenadantes celulares, se transfirieron a criotubos marcados y se almacenaron a -80 °C antes de evaluar el contenido de glicina. La insulina estimula fuertemente la utilización de glicina a través de la glicina descarboxilasa.;[0103] Evaluación de glicina;[0104] Los sobrenadantes se descongelaron antes de determinar la concentración de glicina utilizando el kit de ensayo de glicina fluorométrico de Abcam (Ab211100).;[0105] Se siguieron las instrucciones del fabricante y se realizó una evaluación fluorométrica de la concentración de glicina en los sobrenadantes y estándares en el lector de placas Biotek Synergy utilizando placas de paredes negras de 96 pozos a 535/587 nm (ex/em).;[0106] Resumen de resultados: Los resultados se muestran en la Figura 9. Estos proporcionan una confirmación adicional de que la cisteamina inhibe potentemente la enzima glicina descarboxilasa en las células huésped. Aquí la insulina impulsa la descarboxilación de la glicina exógena en el medio de los fibroblastos MRC-5. Cuya utilización se bloquea mediante la adición de 10 mg/L de cisteamina.;[0107] Ejemplo 4:Formación de cisteamina PLP tiazolidina: Reacción de la cisteamina al cofactor piridoxal-5' fosfato (PLP);[0108] La actividad de la glicina descarboxilasa (GLDC) depende del cofactor PLP. El piridoxal-5-fosfato (PLP) es de color verde amarillento en solución acuosa con una absorción máxima a 388 nm. Una reacción con cisteamina formará un compuesto de tiazolidina con una absorbancia máxima desplazada al azul a 320 nm.;[0109] Soluciones equimolares de 10 ml de piridoxal 5'-fosfato monohidrato 20 mM (Sigma: 82870), base libre de cisteamina 20 mM (CFB), bitartrato de cisteamina 20 mM (CBT) y diclorhidrato de cistamina 20 mM (CTM) se prepararon en un regulador de carbonato-bicarbonato a pH 7.4.;[0110] En una placa de microtitulación de 96 pozos se prepararon 6 réplicas de 100 ^l de volumen total que contenían cada una de las siguientes mezclas de reacción:;[0111] 1. Solo búfer;[0112] 2. Solo PLP (concentración final de 2 mM);[0113] 3. Solo CFB (2 mM);[0114] 4. Solo CBT (2 mM);[0115] 5. Solo CTM (2 mM);[0116] 6. CFB (2 mM) PLP (2 mM);[0117] 7. CBT (2 mM) PLP (2 mM);[0118] 8. CTM (2 mM) PLP (2 mM);[0120] Las placas se mezclaron suavemente golpeándolas y se incubaron durante 1 hora en la oscuridad a temperatura ambiente antes de realizar un escaneo espectral completo (300-700 nm) en Biotek Powerwave y registrar las absorbancias. Absorbancias a 390 y 320 nm comparadas para componentes y productos de reacción.;[0121] La figura 10 muestra una reacción entre cisteamina y PLP. Los paneles A y B confirman la reacción en regulador fisiológico con concentraciones equimolares de PLP, base libre de cisteamina, bitartrato de cisteamina y el disulfuro, diclorhidrato de cistamina. Hay una reducción significativa (* p=<0.0001) en la absorbancia a 390 nm causada por la base libre de cisteamina y el bitartrato (ANOVA de Brown-Forsythe y Welch), reducción no significativa causada por la adición de cistamina (n=6). A 320 nm hay una reducción en la absorbancia en PLP solo que a 390 nm y hay una diferencia significativa entre PLP solo y los productos de reacción causados por la adición de base libre de cisteamina, bitartrato de cisteamina y diclorhidrato de cistamina.

[0122] Resumen de resultados: Se ha demostrado que la cisteamina reacciona con el cofactor PLP de GLDC. Los inventores plantean la hipótesis de que la cisteamina puede inhibir la GLDC a través del acceso a y la reacción con el cofactor PLP en lugar de directamente con la enzima GLDC. La cisteamina forma un anillo de tiazolidina con PLP y, como se muestra en la Figura 10, esto provoca un desplazamiento hacia el azul en los máximos de absorbancia de 390 nm a 320 nm (como se muestra en el panel 10c). Tanto la base libre de cisteamina como el bitartrato de cisteamina y, en menor medida, el diclorhidrato de cistamina, reaccionan con PLP.

[0123] Ejemplo 5:La cisteamina reduce el título del virus

[0124] Siguiendo el Ejemplo 1, para investigar más a fondo la eficacia de la cisteamina para reducir el título viral, se aplicó cisteamina a células epiteliales pulmonares A549 infectadas y se midió la carga viral mediante PCR.

[0125] Se estudió el efecto del tratamiento con cisteamina en células pulmonares infectadas por coronavirus utilizando A549 (muestra obtenida del depósito, depositado bajo ATCC CCL-185), que es una línea de células epiteliales pulmonares humana. Antes de la exposición viral, las células A549 se cultivaron a 37 °C en atmósfera de CO<2>al 5 % en medio de crecimiento F-12 con modificación de Kaighn FBS al 10 % pen-strep [F-12K]) hasta 70-80 % de confluencia en F12-K en placas de 96 pozos tratadas con cultivo de tejidos. Inmediatamente antes de la exposición viral, las células se lavaron en solución salina balanceada de Hanks y el medio se reemplazó con 100 ^l de medio de exposición por pozo (F-12K) que contenía suero al 1 %. Se utilizó una placa de células separada para cada concentración de tratamiento con cisteamina, así como una para ningún tratamiento. Las células se incubaron a 33 °C en una atmósfera de CO<2>al 5 % y se trataron diariamente con la misma concentración de cisteamina (0, 1 o 2 mg/L) hasta el 5to día, cuando se eliminaron los sobrenadantes y se extrajo el ARN viral utilizando el mini kit de ARN viral de Qiagen y el ARN se congeló a -85 °C hasta que fue necesario. El ARN viral se transcribió de forma inversa utilizando la transcriptasa inversa Superscript IV (Thermo-Fisher).

[0126] Se llevó a cabo una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (en tiempo real) (qPCR) utilizando PrecisionPLUS qPCR Master Mix (PrimerDesign) y oligonucleótidos directos e inversos (229E Sense & 229E Antisense) específicos del gen de la proteína hCoV 229E M. La amplificación se llevó a cabo utilizando un sistema de PCR en tiempo real MiniOpticon (Bio-Rad) y los datos se analizaron utilizando el software Opticon Monitor (Bio-Rad). Las muestras analizadas habían estado expuestas a 10-3 (1.12 x 1012 pfu/ml), 10-4 (1.12x1011 pfu/ml) y 10-5(1.12x1010 pfu/ml) de hCoV 229E y se realizó a partir de réplicas técnicas cuadruplicadas. El número de copias del gen de la proteína 229E M se determinó a partir de una curva estándar que contenía un número conocido de copias del gen de la proteína 229E M.

[0127] Resumen de resultados: Los resultados se muestran en la Figura 12. Estos resultados demuestran que la cisteamina en concentraciones bajas reduce la carga viral medida por el número de copias de la proteína 229E.

[0128] Ejemplo 6:La actividad de la cisteamina en el SARS CoV-2

[0129] Materiales:

[0130] a) Los ensayos se realizaron en la línea celular Vero E6 MESO, que es un subclón de la línea celular Vero E6 con base en la susceptibilidad al SARS-CoV-2.

[0131] b) La cepa SARS-CoV-2-CVR-Gla-1 utilizada en este estudio se aisló originalmente de una muestra de esputo de un paciente y contiene la mutación D614G en el gen Spike (número de acceso GISAID: EPI_ISL_461705).

[0132] c) La cisteamina se disolvió en agua, se dividió en alícuotas y se almacenó a -80 °C.

[0133] Método:

[0134] Las células Vero E6 MESO se sembraron en placas de 96 pozos y se cultivaron durante la noche. Al día siguiente, se prepararon diluciones seriadas dobles de cisteamina a partir de 256 mg/L (después de la adición del virus, las concentraciones finales del compuesto son 128 mg/L, 64 mg/L, 32 mg/L, 16 mg/L, 8 mg/L, 4 mg/L, 2 mg/L, 1 mg/L, 0.5 mg/L, 0.25 mg/L, 0 ^M). Se agregaron diluciones seriadas de los compuestos a las células como se muestra en el diseño de la placa a continuación y se infectaron con una dosis de SARS-CoV-2.

[0135] Las placas se incubaron a 37 °C. Cada 24 horas se fijó y tiñó una placa. Antes de fijar el sobrenadante de las células se cosechó en Trizol. Se añadió una dosis diaria de cisteamina de 2 mg/L final a los pozos 1 a 11 en las filas E a H en las placas restantes. La mitad restante de la placa (es decir, las filas A a D) se dejó intacta. El régimen de dosificación diaria para cada placa y punto de tiempo se presenta en la Figura 13. Las placas se escanearon en un lector de placas para cuantificar los niveles de CPE.

[0136] Resumen de resultados: Los resultados se muestran en Figura 13. Estos resultados demuestran que la cisteamina redujo la CPE (citopatología) inducida por SARS-CoV-2. A las 72 horas posinfección, es evidente que la cisteamina puede proteger a las células Vero de la infección. En dosis terapéuticamente alcanzables, este efecto es modesto, pero aumenta hasta una protección casi completa de la monocapa celular a 128 mg/L, que persiste en momentos posteriores. La cisteamina tuvo un IC<50>de 21.36 a las 72 horas posinfección.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES

1. Cisteamina o cistamina, o una sal farmacéuticamente de esta, para uso en un método de tratamiento de una infección viral en un sujeto, en donde el método comprende inhibir la actividad de la glicina descarboxilasa.

2. Cisteamina o cistamina para uso según se reivindica en la reivindicación 1, para uso en el tratamiento simultáneo de una infección viral y bacteriana.

3. Una composición que comprende cisteamina o cistamina o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y un inhibidor adicional de la escisión de glicina para uso en un método de tratamiento de una infección viral en un sujeto, en donde el método comprende cisteamina o cistamina que inhibe la actividad de la glicina descarboxilasa.

4. Composición para uso de la reivindicación 3, en donde el inhibidor es bicarbonato.

5. Composición para uso de las reivindicaciones 3-4, en donde la composición es una composición farmacéutica que comprende adicionalmente uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

6. Cisteamina o cistamina para uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, o una composición para uso en cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5 que comprende además un agente antiviral adicional.

7. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2 o la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-6, en donde la infección viral es una infección por coronavirus, opcionalmente en donde el coronavirus es SARS-CoV-2.

8. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, 6 o 7 o la composición para uso de acuerdo con la reivindicación 3-7, en donde el tratamiento es un tratamiento profiláctico.

9. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, 6, 7 u 8 o la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-8, en donde el sujeto tiene una actividad de glicina descarboxilasa mayor de lo normal.

10. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2 o 6-9 o la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-9, en donde el sujeto tiene una concentración plasmática de glicina que es menor o igual a 300 ^mol/L.

11. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, o 6-10; o la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-10, en donde el sujeto es diabético, obeso, sufre demencia, es anciano, o una combinación de estos.

12. La composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-11, en donde la cisteamina o cistamina se administra por separado, secuencialmente o simultáneamente con el inhibidor de la escisión de glicina.

13. Cisteamina o cistamina para uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-2 o 6-12 o la composición para uso de acuerdo con las reivindicaciones 3-12 en donde la composición se administra a los pulmones.

14. Cisteamina para uso en un método de tratamiento de la hiperinflamación en un sujeto con neumonía causada por una infección viral o bacteriana.

15. Cisteamina para uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el método es profiláctico.