ES3045883T3 - Mek inhibitors for the treatment of hantavirus infections - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a inhibidores de MEK capaces de mostrar uno o más efectos terapéuticos beneficiosos. Estos inhibidores pueden utilizarse en la prevención y/o el tratamiento de la infección por hantavirus. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Inhibidores de MEK para el tratamiento de infecciones por hantavirus

[0005] Antecedentes de la invención

[0007] Los hantavirus (u ortohantavirus) son virus de ARN monocatenarios, con envoltura y de sentido negativo de la familiaHantaviridaedel ordenBunyavirales.Hasta la fecha, se conocen 28 especies de hantavirus patógenos. Las especies de hantavirus difieren dependiendo de su ubicación geográfica. En Europa, el hantavirus prevalente es el virus Puumala, mientras que en América prevalecen el virus Andes y el virus Sin Nombre. En Asia, se encuentran el virus de Seúl y el virus Hantaan. Los huéspedes naturales de los hantavirus son los roedores, las musarañas y los murciélagos, sin embargo, no se encuentran síntomas clínicos en los huéspedes naturales. La transmisión de especies de hantavirus ocurre principalmente por los excrementos de roedores en aerosol (orina, saliva, heces), sin embargo, en 2005 y 2019, se reportó la transmisión de humano a humano del virus de los Andes en Sudamérica (Martinez VP, Bellomo C, San Juan J, Pinna D, Forlenza R, Elder M, Padula PJ (2005). “Person-to-person transmission of Andes virus”, (Transmisión de persona a persona del virus de los Andes). Emerging Infectious Diseases; 11 (12): 1848-1853). Para especies de hantavirus, el tiempo de incubación en humanos dura hasta varias semanas.

[0009] Las infecciones de hantavirus presentan una amenaza global ya que estas infecciones se asocian con una alta tasa de mortalidad y tratamiento muy limitado disponible. En humanos, las infecciones de hantavirus se presentan en dos cuadros clínicos. El primero es la fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS,hantavirus Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome),donde la tasa de mortalidad es del 12 % y el segundo es el síndrome pulmonar por hantavirus (HPS,hantavirus Pulmonary Syndrome)donde la tasa de mortalidad es del 40 %. La severidad de la enfermedad depende de la especie de hantavirus causante y la carga viral. Por ejemplo, se sabe que los cursos graves de la enfermedad son provocados por el virus Hantaan, el virus Dobrava-Belgrad, el virus Sin Nombre y el virus de los Andes, mientras que cursos más moderados de la enfermedad se dan más probablemente, por ejemplo, en el virus Puumala o el virus Saaremaa. Al menos 100.000 casos de HFRS se documentan por año. En 2004, se documentaron 40.000-60.000 casos tan solo en China por año (Zhanget al.2004, Leeet al.1996, Leeet al.

[0010] 1998) en comparación con aproximadamente 9.000 en Europa (Vapalahtiet al.2003, Heymanet al.2009, Heymanet al.2011).

[0012] Actualmente no hay vacunas o antivirales disponibles aprobados por la FDA o la OMS para el tratamiento o la prevención de las infecciones por hantavirus. Una vacuna conocida como Hantavax ha estado bajo estudio desde 1990 y se utiliza en Corea, pero no está aprobada en general y tiene una eficacia limitada. No se está buscando una vacuna de virus inactivado debido a los peligros asociados con la producción en masa bajo alta contención, así como las cuestiones no resueltas sobre la eficacia de la vacuna. Un número de laboratorios han estado trabajando con el objetivo de una vacuna que entregaría antígenos virales ya sea por medio de vectores de ADN o como proteínas recombinantes, pero hasta ahora ninguna de estas vacunas ha demostrado ser efectiva.

[0014] Adicionalmente, no hay ningún tratamiento aprobado para HPS o HFRS además del alivio de los síntomas de las enfermedades. El único fármaco posiblemente empleado es Ribavirin, pero su efectividad sigue siendo desconocida. Un problema de controlar en particular virus de ARN, tal como los hantavirus, es la adaptabilidad de los virus provocada por una alta tasa de fallos de las polimerasas virales, lo cual hace muy difícil la producción de vacunas adecuadas así como el desarrollo de sustancias antivirales. Por lo tanto, se sabe que los medicamentos antivirales más conocidos llevan a la resistencia en las especies de virus de ARN individuales.

[0016] Debido a que el genoma es muy pequeño y por lo tanto la capacidad de codificación limitada para las funciones que son necesarias para la replicación, todos los virus dependen en gran medida de las funciones de sus células huésped. Al ejercer influencia sobre tales funciones celulares necesarias para la replicación viral, es posible afectar negativamente la replicación del virus en la célula infectada. En este escenario, no hay posibilidad de que el virus reemplace la función celular faltante por adaptación, en particular por mutaciones, con el fin de escapar así de la presión de selección. Esto podría ya demostrarse para el virus de la influenza A con inhibidores relativamente inespecíficos contra las cinasas celulares y las metiltransferasas (Scholtissek y Müller, Arch Virol 119, 111-118, 1991).

[0017] Se sabe en la técnica que las células tienen una multitud de vías de transmisión de señal, por medio de las cuales se transmiten las señales que actúan en las células al núcleo de la célula. De esta manera, la célula es capaz de reaccionar a estímulos externos y reaccionar por proliferación celular, activación celular, diferenciación, o muerte celular controlada. Es común en estas vías de transmisión de señal que contengan al menos una cinasa que activa por fosforilación al menos una proteína que posteriormente transmite una señal. Cuando se observan los procesos celulares inducidos después de infecciones virales, se descubrió que una multitud de virus de ADN y ARN activan preferiblemente en la célula huésped infectada una vía de transmisión de señal definida, la denominada vía de transmisión de señal de cinasa de Raf/MEK/ERK (Bennet al.,J Virol 70, 4978-4985, 1996; Bruder y Kovesdi, J Virol 71, 398-404, 1997; Popik y Pitha, Virology 252, 210-217, 1998; Rodems y Spector, J Virol 72, 9173-9180, 1998). Esta vía de transmisión de señales es una de las vías de transmisión de señales más importantes en una célula y desempeña un papel importante en los procesos de proliferación y diferenciación. Las señales inducidas por el factor de crecimiento se transmiten por medio de fosforilación sucesiva desde la serina/treonina cinasa Raf a la cinasa de especificidad dual MEK (MAP cinasa cinasa/ERK cinasa) y finalmente a la cinasa ERK (cinasa regulada por señal extracelular). Mientras que como sustrato de cinasa para Raf, solamente se conoce MEK, y las isotermas de ERK se identificaron como los únicos sustratos para MEK, ERK puede fosforilar un gran número de sustratos. A estos pertenecen, por ejemplo, los factores de transcripción, por lo cual la expresión génica celular está directamente influenciada (Cohen, Trends in Cell Biol 7, 353-361, 1997; Robinson y Cobb, Curr. Opin. Cell Biol 9, 180-186, 1997; Treisman, Curr. Opin. Cell Biol 8, 205-215, 1996). El documento DE102014111892 A1 da a conocer inhibidores de la vía de señalización NF-KB para su uso en el tratamiento de infecciones por hantavirus.

[0019] En vista de la técnica anterior, es claro que existe la necesidad de compuestos y composiciones adicionales efectivos en la prevención y el tratamiento de enfermedades virales, en particular en enfermedades provocadas por las especies de hantavirus.

[0021] En este sentido, la investigación en marcha sobre la utilidad de los inhibidores de MEK en el tratamiento de otras enfermedades virales, en particular, influenza, ha revelado que esta clase de compuestos evita las desventajas de los tratamientos antivirales estándar, ya que se dirige a los componentes celulares de las células huésped en lugar de al virus en sí. Por esta razón, no se ha observado ninguna resistencia a los inhibidores de MEK. El documento WO 2001/076570 proporciona el concepto de tratar o prevenir infecciones provocadas por virus de (-)ARN, en particular por virus de la influenza por medio de inhibidores de MEK. El documento WO 2014/056894 proporciona inhibidores de MEK específicos, tales como AZD-6244, AZD-8330, RDEA-119, GSK-1120212 (Trametinib),<g D c - 0 9 7 3>(Cobimetinib), CI-1040, PD-0325901, RO-5126766, MSC1936369 (AS-703026) para su uso en el tratamiento o prevención de infecciones del virus de la influenza. En el documento WO 2015/173788 A1, se divulgan inhibidores de MEK para su uso en un método de tratamiento de infecciones conjuntas del virus de la influenza y bacterianas. Adicionalmente, el documento WO 2019/076947 divulga un nuevo inhibidor de MEK, PD-0184264 (también conocido como ATR-002) para su uso en un método para la profilaxis y/o tratamiento de una infección viral de la influenza.

[0022] Sin embargo, ninguno de estos documentos muestra que los inhibidores de MEK se podrían utilizar para infecciones de hantavirus, y sigue existiendo una fuerte necesidad de proporcionar composiciones y compuestos para el tratamiento y prevención de infecciones de hantavirus.

[0024] Sumario de la invención

[0026] En la presente invención, se descubrió que el uso de un inhibidor de MEK en el tratamiento o prevención de una infección por hantavirus condujo al tratamiento efectivo de la infección viral. Específicamente, se observó una fuerte reducción de carga viral cuando se administró el inhibidor de MEK CI-1040 o PD-0184264 en ratones infectados por hantavirus.

[0028] Por lo tanto, la presente invención se refiere a un inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por hantavirus en un mamífero, preferiblemente un humano o un roedor, en donde el inhibidor de MEK es CI-1040 o PD-0184264, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

[0030] Inhibidores de MEK adicionales que no son de acuerdo con la invención son GSK-1120212, GDC-0973, PLX-4032, AZD6244, AZD8330, AS-703026, RDEA-119, RO-5126766, RO-4987655, PD-0325901, TAK-733, AS703026, PD98059 y PD184352 o sal o metabolito farmacéuticamente aceptable de los mismos. El inhibidor de MEK de acuerdo con la invención reivindicada es CI-1040 o PD-0184264, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

[0031] En pacientes humanos, el inhibidor de MEK se puede administrar para el tratamiento de una infección por hantavirus, cuando el paciente muestra síntomas de fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS), o síndrome pulmonar por hantavirus (HPS). En estos casos, el inhibidor de MEK se puede administrar hasta 12 horas, hasta 24 horas, hasta 48 horas, hasta 72 horas o entre 4 y 10 días después de observar los primeros síntomas de HFRS o HPS.

[0033] El inhibidor de MEK también se puede administrar para la prevención de una infección por hantavirus a sujetos humanos que han estado en contacto con roedores o excrementos de roedor o están en una región donde es común un brote de hantavirus.

[0035] La administración de un inhibidor de MEK para el tratamiento o prevención de una infección por hantavirus se indica particularmente cuando el sujeto humano ha estado viviendo o visitando una región que se conoce que tiene infecciones por hantavirus que dan como resultado HFRS o HPS.

[0037] Una infección por hantavirus de este tipo puede ser una infección por virus Hantaan o Dobrava o una infección por hantavirus provocada por especies americanas tales como el virus Black Creek Canal (BCCV), el ortohantavirus de Nueva York (NYV), el virus Monongahela (MGLV), el ortohantavirus Sin Nombre (SNV), o el virus de los Andes.

[0038] El inhibidor de MEK para el uso de la invención se puede administrar preferiblemente oralmente o por medio de inhalación.

[0039] En un aspecto adicional, se contempla el tratamiento de una población de roedores con un inhibidor de MEK para prevenir la infección de humanos en contacto con los roedores. En tales usos, el inhibidor de MEK se podría administrar por medio de inhalación, por ejemplo por medio de un aerosol ambiental.

[0041] Figuras

[0043] La figura 1 muestra que en la presencia de CI-1040, se logró una reducción significativa del título del virus de >2 pasos de log-10 en comparación con el control de solvente. Esto es igual a una reducción del título del virus de > 99 %.

[0044] La figura 2 muestra que en la presencia de ATR-002, se logró una reducción del título del virus de >1,5 pasos de log-10 en comparación con el control de solvente. Esto es igual a una reducción del título del virus de > 90 %.

[0046] La figura 3 muestra que en el pulmón de los animales tratados con 75 mg/kg/día de ATR-002 no se pudo detectar ningún virus en los días 7 y 10 después de la infección.

[0048] La figura 4 muestra que en el riñón de los animales tratados con 75 mg/kg/día de ATR-002 no se pudo detectar ningún virus en los días 7 y 10 después de la infección.

[0050] Descripción detallada

[0052] La siguiente descripción incluye información que puede ser útil en el entendimiento de la presente invención. No es una admisión de que cualquiera de la información proporcionada en el presente documento sea técnica anterior o relevante para las invenciones reivindicadas en la presente, o que cualquier publicación a la que se haga referencia específica o implícitamente sea técnica anterior.

[0054] Los “inhibidores de MEK” como se utilizan en el presente documento inhiben la cascada de señalización mitogénica de Raf/MEK/ERK en células o en un sujeto inhibiendo la MEK (proteína cinasa cinasa activada por mitógeno). Esta cascada de señalización es secuestrada por muchos virus, en particular virus de la influenza, para impulsar la replicación viral. El bloqueo específico de la vía de Raf/MEK/ERK en el cuello de botella de MEK, por lo tanto, dificulta el crecimiento de los virus, en particular los virus de la influenza. Adicionalmente, los inhibidores de MEK muestran baja toxicidad y pocos efectos secundarios adversos en los humanos. Tampoco hay tendencia a inducir resistencia viral (Ludwig, 2009). Un inhibidor de MEK particularmente preferido es PD-0184264 también conocido como ATR-002.

[0055] Los inhibidores de MEK se seleccionan preferiblemente de CI-1040, PD-0184264, GSK-1120212, GDC-0973, PLX-4032, AZD6244, AZD8330, AS-703026, RDEA-119, RO-5126766, RO-4987655, PD-0325901, TAK-733, AS703026, PD98059 y PD184352 o una sal o metabolito farmacéuticamente aceptable de los mismos. El inhibidor de MEK de acuerdo con la invención reivindicada es CI-1040 o PD-0184264, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Estos inhibidores de MEK son conocidos en la técnica y, por ejemplo, se describen en la tabla 1 de Fremin y Meloche (2010), J. Hematol. Oncol. 11;3:8. A continuación, se muestran fórmulas estructurales de PD-0184264 y CI-1040:

[0058]

[0061] Fórmula estructural de PD-0184264

[0062]

[0065] 2-(2-doro-4-yodofenilamino)-N-(cidopropilmetoxi)-3,4-difluorobenzamida

[0067] Un “metabolito” como se utiliza en el presente documento se refiere a un producto final intermedio de metabolismo del inhibidor de MEK, que surge durante la degradación del inhibidor de MEK por el sujeto, por ejemplo, en el hígado. En una realización preferida, el inhibidor de MEK es un metabolito de CI-1040, concretamente, PD-0184264.

[0069] Para el propósito de la invención, el inhibidor de MEK como se definió anteriormente también incluye la(s) sal(es) farmacéuticamente aceptable(s) del mismo. La expresión “sal(es) farmacéutica o cosméticamente aceptable(s)”, como se utiliza en el presente documento, se refiere a aquellas sales de compuestos de la invención que son seguras y efectivas para la forma de administración deseada. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas formadas con aniones tales como aquellas derivadas de ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquellas formadas con cationes tales como aquellas derivadas de hidróxidos férricos, de sodio, potasio, amonio, calcio, isopropilamina, trietilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaína, etc.

[0071] Como ya se describió en el presente documento, las infecciones por hantavirus son una preocupación de salud pública a nivel mundial. Actualmente, no hay vacunas o fármacos antivirales aprobados por la OMS o la FDA que estén dirigidos a hantavirus. Sin embargo, en el contexto del tratamiento de la influenza, los inventores demostraron previamente el potencial antiviral de los inhibidores de MEK tales como CI-140 y PD0184264 (ATR002), el metabolito activo de CI-1040 contra los virus de la influenza sobre los nivelesin vitroein vivo.A partir de los resultados presentados a continuación, se demostró en experimentosin vitroque la propagación de hantavirus podría reducirse con éxito en células Vero tratadas con 40 |iM de CI-1040 o 40 |iM de ATR-002. En el ejemplo 1, se observó una reducción del > 90 % en el título del virus en comparación con el control de solvente, véanse las figuras 1 y 2. Adicionalmente, los experimentosin vivodemostraron que el tratamiento de ratones con 75 mg/kg/día de ATR-002 a lo largo de un periodo de 5 días llevó a una reducción completa del título del virus, en comparación con animales tratados solo con solvente, como se describe en el ejemplo 2 y las figuras 3 y 4.

[0073] Aunque los hantavirus se replican en el citoplasma y no son conocidos por tener una fase nuclear, la propagación de PUUV se vio afectada exitosamente mediante la inhibición de la vía de Raf/MEK/ERK con el inhibidor de MEK ATR-002 o CI-1040.

[0075] La infección viral que se va a prevenir o que se va a tratar por medio de la administración de un inhibidor de MEK de la invención es una infección provocada por un hantavirus. Los hantavirus conocidos incluyen el virus Puumala, el virus Sin Nombre, el virus de Seúl, el virus Hantaan, el virus Dobrava-Belgrad, el virus Saaremaa y el virus de los Andes.

[0077] Como ya se mencionó anteriormente, las infecciones de hantavirus se presentan en dos cuadros clínicos. El primero es la fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS,hantavirus Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome),donde la tasa de mortalidad es del 12 % y el segundo es el síndrome pulmonar por hantavirus (HPS,hantavirus Pulmonary Syndrome)donde la tasa de mortalidad es del 40 %. La severidad de la enfermedad depende de la especie de hantavirus causante y la carga viral. Por ejemplo, se sabe que los cursos graves de la enfermedad son provocados por el virus Hantaan, el virus Dobrava-Belgrad, el virus Sin Nombre y el virus de los Andes, mientras que cursos más moderados de la enfermedad son más probablemente, por ejemplo, en el virus Puumala o el virus Saaremaa.

[0079] La fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS) también se conoce como fiebre hemorrágica coreana, fiebre hemorrágica epidémica y nefropatía epidémica. Las especies que provocan HFRS incluyenortohantavirus Hantaan, ortohantavirus Dobrava-Belgrade, virus Saaremaa, ortohantavirus de Seúl, ortohantavirus Puumalay otros ortohantavirus euroasiáticos. Los síntomas de HFRS generalmente se desarrollan dentro de 1 a 2 semanas después de la exposición a material infeccioso, pero en casos raros, pueden tardar hasta 8 semanas en desarrollarse. Los síntomas iniciales comienzan súbitamente e incluyen dolores de cabeza intensos, dolor de espalda y abdominal, fiebre, escalofríos, náuseas, y visión borrosa. Los individuos pueden tener enrojecimiento de la cara, inflamación o enrojecimiento de los ojos, o un sarpullido. Síntomas posteriores pueden incluir presión arterial baja, conmociones agudas, fuga vascular e insuficiencia renal aguda, que pueden causar una sobrecarga grave de líquidos.

[0080] La severidad de la enfermedad varía dependiendo del virus que provoca la infección. Las infecciones por los virus Hantaan y Dobrava generalmente provocan síntomas severos, mientras que las infecciones por los virus de Seúl, Saaremaa, y Puumala generalmente son más moderadas.

[0082] Este síndrome también puede ser fatal. En algunos casos, se ha demostrado que provocan insuficiencia renal permanente. HFRS es difícil de diagnosticar basándose solamente en bases clínicas y a menudo se necesita evidencia serológica. Un aumento de cuatro veces en el título del anticuerpo IgG en un intervalo de 1 semana, y la presencia del tipo de anticuerpos IgM contra los hantavirus son buena evidencia de una infección aguda por hantavirus. HFRS debe sospecharse en pacientes con enfermedad febril aguda de tipo gripal, insuficiencia renal de origen desconocido y en ocasiones disfunción hepática.

[0084] El síndrome pulmonar por hantavirus (HPS) es generalmente provocado por especies americanas de hantavirus. Estas incluyen el virus Black Creek Canal (BCCV), el ortohantavirus de Nueva York (NYV), el virus Monongahela (MGLV), el ortohantavirus Sin Nombre (SNV), y otros miembros determinados de géneros de hantavirus que son nativos de los Estados Unidos y Canadá. Roedores específicos son los huéspedes principales de los hantavirus incluyendo la rata algodonera híspida(Sigmodon hispidus)en el sur de Florida, que es el principal huésped del virus Black Creek Canal, el ratón ciervo(Peromyscus maniculatus)en Canadá y el oeste de los Estados Unidos, que es el principal huésped del virus Sin Nombre y el ratón de patas blancas(Peromyscus leucopus)en el este de los Estados Unidos, que es el principal huésped del virus de Nueva York. En Sudamérica,Oligoryzomys longicaudatusy otras especies del géneroOligoryzomysse han documentado como el reservorio para el virus de los Andes.

[0086] Los síntomas del HPS son similares a los de la gripe, tales como fiebre, tos, mialgia, dolor de cabeza, letargo, y dificultad para respirar, que se deteriora rápidamente hasta convertirse en insuficiencia respiratoria aguda. Se caracteriza por el inicio súbito de dificultad para respirar evolucionando rápidamente a edema pulmonar; a menudo es fatal a pesar de la ventilación mecánica e intervención con diuréticos potentes. Tiene una tasa de letalidad del 36 %. El HPS puede pasarse por alto fácilmente porque sus primeros síntomas son muy similares a los de la gripe. Los pacientes infectados sufren fatiga, fiebre y dolores musculares, a menudo acompañados de dolores de cabeza, mareos y problemas gastrointestinales en las semanas posteriores a la exposición. Aproximadamente una semana después de que los síntomas iniciales disminuyeron, comienza la segunda fase de la enfermedad, y los pacientes experimentan tos severa y dificultad para respirar a medida que los pulmones se llenan de líquido. En etapas posteriores de HPS, los pulmones se dañan severamente, dando como resultado la alta tasa de letalidad.

[0088] En el uso en el tratamiento o prevención de la invención, el paciente es preferiblemente un mamífero, en una realización preferida un primate, más preferiblemente un paciente humano. En una administración alterna, el tratamiento de mamíferos conocidos como portadores del hantavirus, tales como roedores y murciélagos, específicamente, ratas, ratones y ratones ciervo se contempla para prevenir la infección de humanos por medio de estos huéspedes. En este contexto, se podría considerar una administración amplia por medio de inhalación (formulaciones en aerosol ambiental) en áreas con altas tasas de infección por hantavirus. Ya que la transmisión de humano a humano es rara en infecciones por hantavirus, dicha aplicación amplia a huéspedes no humanos mamíferos, tales como roedores, podría actuar como una medida preventiva.

[0090] Adicionalmente, podría ser útil la administración de un inhibidor de MEK para la prevención de una infección por hantavirus en sujetos humanos que han estado en contacto con roedores o excrementos de roedor o que viven o viajan a una región donde es común un brote de hantavirus, especialmente en casos donde el sujeto humano ha estado viviendo en o visitando una región que se sabe que tiene infecciones por hantavirus que resultan en HFRS o HPS.

[0092] Específicamente, cuando se sabe que el paciente humano ha estado viajando o viviendo en Corea, Serbia o en América en áreas donde una infección por virus Hantaan o Dobrava o una infección por hantavirus provocada por especies americanas como el virus Black Creek Canal (BCCV), el ortohantavirus de Nueva York ( NYV), el virus Monongahela (MGLV), el ortohantavirus Sin Nombre (SNV) o el virus de los Andes, sería útil dicho tratamiento preventivo o profiláctico. Ya que la transmisión de especies de hantavirus se produce principalmente por medio de excrementos de roedores en aerosol (orina, saliva, heces), se podría iniciar un tratamiento preventivo inmediatamente después del contacto con excreciones de roedor hasta 10 días después del contacto sin síntomas de infección.

[0093] El inhibidor de MEK se puede administrar oralmente, intravenosamente, intrapleuralmente, intramuscularmente, tópicamente o por medio de inhalación. Preferiblemente, el inhibidor de MEK se administra por medio de inhalación u oralmente.

[0095] Adicionalmente, el inhibidor de MEK se puede administrar hasta 12 horas, hasta 24 horas, hasta 48 horas, hasta 72 horas o entre 4 y 10 días después de observar los primeros síntomas de HFRS o HPS o el paciente humano ha estado en contacto con excreciones de roedor.

[0096] En una realización del uso en el tratamiento o prevención de la presente invención, el compuesto inhibidor de MEK se puede administrar oralmente o por medio de inhalación en una dosificación terapéutica efectiva. En una realización, la cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de MEK es, por ejemplo, de 0,1 mg a 2000 mg, de 0,1 mg a 1000 mg, de 0,1 mg a 500 mg, de 0,1 mg a 200 mg, de 30 mg a 300 mg, de 0,1 mg a 75 mg, de 0,1 mg a 30 mg.

[0097] Como se describió anteriormente, la presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de MEK de acuerdo con las reivindicaciones o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como un medicamento para la profilaxis y/o tratamiento de una infección provocada por un hantavirus.

[0098] La composición farmacéutica de la invención puede estar en la forma de suspensiones o comprimidos administrables oralmente; aerosoles nasales, preparaciones inyectables estériles (intravenosamente, intrapleuralmente, intramuscularmente), por ejemplo, como suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles o supositorios. Cuando se administran oralmente como una suspensión, estas composiciones se preparan de acuerdo con las técnicas disponibles en la técnica de formulación farmacéutica y pueden contener celulosa microcristalina para aportar volumen, ácido algínico o alginato de sodio como un agente de suspensión, metilcelulosa como un mejorador de viscosidad, y agentes edulcorantes/saborizantes conocidos en la técnica. Como comprimidos de liberación inmediata, estas composiciones pueden contener celulosa microcristalina, fosfato dicálcico, almidón, estearato de magnesio y lactosa y/u otros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluyentes, y lubricantes conocidos en la técnica. Las disoluciones o suspensiones inyectables se pueden formular de acuerdo con la técnica conocida, utilizando diluyentes o solventes no tóxicos, parenteralmente aceptables adecuados, tales como manitol, 1,3-butanodiol, agua, disolución de Ringer o disolución isotónica de cloruro de sodio, o agentes dispersantes o humectantes y de suspensión adecuados, tales como aceites fijos, insípidos, estériles, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos, incluyendo ácido oleico. Los compuestos farmacéuticos en el método de la presente invención se pueden administrar en cualquier forma de dosificación unitaria adecuada. Formulaciones orales adecuadas también en el contexto de la composición farmacéutica de la invención pueden estar en la forma de comprimidos, cápsulas, suspensión, jarabe, goma de mascar, oblea, elixir, y similares. Portadores farmacéuticamente aceptables tales como aglutinantes, excipientes, lubricantes, y agentes edulcorantes o saborizantes se pueden incluir en composiciones farmacéuticas orales. Si se desea, también se pueden incluir agentes convencionales para modificar sabores, colores y conformaciones de las formas especiales.

[0100] Para formulaciones inyectables, las composiciones farmacéuticas pueden estar en polvo liofilizado en mezcla con excipientes adecuados en un frasco o tubo adecuado. Antes de usarse en clínica, los fármacos se pueden reconstituir disolviendo el polvo liofilizado en un sistema de solvente adecuado para formar una composición adecuada para inyección intravenosa o intramuscular.

[0102] En una realización, la composición farmacéutica puede estar en una forma administrable oralmente (por ejemplo, comprimido o cápsula o jarabe, etc.) con una cantidad terapéuticamente efectiva (por ejemplo, de 0,1 mg a 2000 mg, de 0,1 mg a 1000 mg, de 0,1 mg a 500 mg, de 0,1 mg a 200 mg, de 30 mg a 300 mg, de 0,1 mg a 75 mg, de 0,1 mg a 30 mg) de inhibidor de MEK.

[0104] Definiciones

[0106] A lo largo de esta memoria descriptivas y las reivindicaciones de más adelante, a menos que el contexto lo requiera de otra manera, la palabra “comprender”, y variaciones tales como “comprende” y “que comprende”, se entenderán para implicar la inclusión de un número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas mencionados pero no la exclusión de cualquier otro número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas. Cuando se utiliza en el presente documento el término “que comprende” se puede sustituir con el término “que contiene” o en ocasiones cuando se utiliza en el presente documento con el término “que tiene”.

[0108] Cuando se utiliza en el presente documento “que consiste en” excluye cualquier elemento, etapa, o ingrediente no especificado en el elemento reivindicado. Cuando se utiliza en el presente documento, “que consiste esencialmente en” no excluye materiales o etapas que no afectan materialmente las características básicas y novedosas de la reivindicación. En cada caso en el presente documento, cualquiera de los términos “que comprende”, “que consiste esencialmente en” y “que consiste en” se puede reemplazar con cualquiera de los otros dos términos.

[0110] Como se utiliza en el presente documento, el término conjuntivo “y/o” entre múltiples elementos mencionados se entiende como que comprende opciones tanto individuales como combinadas. Por ejemplo, cuando dos elementos se unen por “y/o”, una primera opción se refiere a la aplicabilidad del primer elemento sin el segundo. Una segunda opción se refiere a la aplicabilidad del segundo elemento sin el primero. Una tercera opción se refiere a la aplicabilidad del primer y segundo elementos juntos. Cualquiera de estas opciones se entiende que cae dentro del significado, y por lo tanto satisfacen el requisito del término “y/o” como se utiliza en el presente documento. La aplicabilidad simultánea de más de una de las opciones también se entiende que cae dentro del significado, y por lo tanto satisfacen el requisito del término “y/o” como se utiliza en el presente documento.

[0112] Ejemplos

[0113] Materiales

[0114] Virus Puumala (PUUV), cepa Sotkamo

[0115] - Especies de hantavirus principales en Europa

[0116] - Se pueden manejar en un laboratorio S2

[0117] Línea de células Vero

[0118] - La línea celular derivada de células de riñón de mono verde africano

[0119] - Rutinariamente utilizado para el cultivo de virus

[0120] - Deficiencia de interferón tipo I

[0121] Medio de cultivo celular:

[0122] • Medio base: IMDM, P/S al 1 %, L-Gln al 1 %, FCS al 10 %

[0123] • Medio de tratamiento de ATR-002/CI-1040: Medio base sin FCS

[0124] • Medio de infección viral: Medio base sin FCS

[0125] El inhibidor de MEK ATR-002 (PD0184264) ácido [2-(2-cloro-4-yodofenilamino)-N-3,4-difluorobenzoico, el metabolito activo de CI-1040, se sintetizó en ChemCon GmbH (Freiburg, Alemania).

[0126] El inhibidor de MEK CI-1040 [2-(2-cloro-4-yodofenilamino)-N-(ciclopropilmetoxi)-3,4-difluorobenzamida] se sintetizó en ChemCon GmbH (Freiburg, Alemania).

[0127] Ejemplo 1: Ensayo de reducción de producción de virus

[0128] Métodos

[0129] Las células Vero se sembraron en placas de 24 pocillos (1x106 células/pocillo), incubación a 37°C, CO2 al 5 %. Un día después de la siembra, las células se infectaron con partículas del virus PUU (MOI 0,3).

[0130] 1 h después de la infección, las células se trataron con cualquiera de 40 |iM de Cl-1040, 40|iM de ATR-002 o DMSO (control de solvente).

[0131] Los sobrenadantes se recogieron 72 h después de la infección y se determinó el título del virus por medio del ensayo de TCID50 siguiente.

[0132] Ensayo de TCID50(SOP-ATR-0119)

[0133] La titulación del virus se llevó a cabo utilizando el procedimiento normalizado de trabajo SOP-ATR-0119. Brevemente, se diluyeron homogeneizados al 10 % de pulmones y riñones/sobrenadantes del ensayo VYR en una dilución en serie de 1:10. Las células Vero se infectaron con las diferentes diluciones de virus de 10 veces y se incubaron durante 60 min a 37°C en una atmósfera de CO2 al 5 %. Después de la incubación, las células se enjuagaron con PBS y se complementan con 200 |il de IMDM (Medio de Dulbecco modificado de Iscove)/BA (albúmina bovina) - medio (BA al 0,2 %, MgCl21 mM, CaCh0,9 mM, 100 U/ml de penicilina, 0,1 mg/ml de estreptomicina) y se incubó durante 7 días a 37°C en CO2 al 5 %. Posteriormente, se lavaron las células Vero y se fijaron con Roti®-Histofix durante 30 min a 4°C. Después de lavar con PBS, las células se permeabilizaron con Triton-X-100 y FCS. La incubación del anticuerpo primario (Anti-PUUV-NP-AB) se mantuvo durante una hora. Después de lavar, se proporcionó el anticuerpo secundario a las células durante 30 min. Posteriormente, se lavaron las células y se tiñeron con el sustrato TrueBlue durante 10 min. El análisis se hizo por medio de microscopía óptica.

[0134] Resultados

[0135] Como se puede observar a partir de la figura 1, en la presencia de CI-1040, se logró una reducción significativa del título del virus de >2 pasos de log-10 en comparación con el control de solvente. Esto es igual a una reducción del título del virus de > 99 %.

[0136] Resultados similares se observan en la figura 2, en la presencia de ATR-002, donde se logró una reducción del título del virus de >1,5 pasos de log-iQ en comparación con el control de solvente. Esto es igual a una reducción del título del virus de > 90 %.

[0137] Conclusión

[0138] El tratamiento con células Vero infectadas con PUUV (MOI 0,3) con cualquiera de 40|iM de CI-1040 o 40|iM de ATR-002 condujo a una fuerte reducción del título del virus en comparación con un control de solvente.

[0139] La inhibición de la vía de Raf/MEK/ERK impidió la propagación del virus Puumalain vitro.

[0140] Ejemplo 2: Efecto antiviral de ATR-002 contra el hantavirus in vivo

[0141] Material y métodos

[0142] Ratones

[0143] No hubo disponible ningún modelo animal establecido robusto para estudiar las infecciones por hantavirus. Las células Vero deficientes en interferón tipo I demostraron ser un buen modeloin vitro,pero no había disponibles ratones deficientes en interferón tipo I. Por lo tanto, se escogieron ratones con inactivación del receptor de interferón (ratones (AG129) IFNa/pfyR-/-) para los estudiosin vivo.Los ratones AG129 se utilizaron para los siguientes experimentos. Métodos

[0144] Se infectaron ratones AG129 con PUUV intranasalmente (5x105/ufp en 50 |il de PBS, inoculación con 25 |il en cada fosa nasal).

[0145] Tratamiento con 75 mg/kg/día de ATR-002 (en DMSO/Cremophor EL/ PBS), comenzando 5 h después de la infección durante 5 días consecutivos. Vía de administración: oral por medio de sonda, 37,5 mg/kg dos veces al día (9 a. m. y 6 p. m.). En consecuencia, el tratamiento del grupo de control fue solo con solvente.

[0146] Los ratones se sacrificaron en el día 7 y el día 10 después de la infección para determinar el título del virus en los pulmones y riñones (ensayo de TCID50).

[0147] Resultados

[0148] Ninguno de los animales perdió peso, desarrolló síntomas clínicos o murió después de la infección con PUUV. PUUV fue detectable en los animales de control de solvente en el pulmón y en el riñón en el día 7 y el día 10 después de la infección. El título del virus fue mayor en el día 10.

[0149] En el pulmón y el riñón de los animales tratados con 75 mg/kg/día de ATR-002 no se pudo detectar ningún virus en los días 7 y l0 después de la infección (límite de detección: Pulmón: 3,4 logi0 (TCID50/g deórgano) Riñón: 3,2 logi0 (TCID50/g de órgano)) como se puede observar en las figuras 3 y 4, respectivamente.

[0150] La reducción en la cantidad de virus (comparación entre los homogeneizados tratados con control de solvente y tratados con ATR-002) fue altamente significativa (ANOVA de 2 vías,P< 0,0001).

[0151] Conclusión

[0152] El estudio demostró que el tratamiento de cinco días de ratones con 75 mg/kg/día de ATR-002 (en DMSO/Cremophor EL/PBS), iniciando 5 horas después de infección con PUUV, redujo significativamente la cantidad de virus en el pulmón y los riñones.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

i. Inhibidor de MEK para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por hantavirus en un mamífero, en donde el inhibidor de MEK es CI-1040 o PD-0184264, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

2. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el mamífero es un roedor o un humano.

3. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el mamífero es un humano y el humano muestra síntomas de fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS), o síndrome pulmonar por hantavirus (HPS).

4. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el inhibidor de MEK se administra hasta 12 horas, hasta 24 horas, hasta 48 horas, hasta 72 horas o entre 4 y 10 días después de observar los primeros síntomas de HFRS o HPS.

5. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el inhibidor de MEK se administra para la prevención de una infección por hantavirus a sujetos humanos que han estado en contacto con roedores o excrementos de roedor o están en una región donde es común un brote de hantavirus.

6. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el sujeto humano ha estado viviendo o visitando una región que se conoce que tiene infecciones por hantavirus que dan como resultado HFRS o HPS.

7. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el hantavirus es una infección por virus Hantaan o Dobrava o una infección por hantavirus provocada por especies americanas tales como el virus Black Creek Canal (BCCV), el ortohantavirus de Nueva York (Ny V), el virus Monongahela (MGLV), el ortohantavirus Sin Nombre (SNV), o el virus de los Andes.

8. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el inhibidor de MEK se administra oralmente o por medio de inhalación.

9. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el mamífero es un roedor y el inhibidor de MEK se administra a poblaciones de roedores para prevenir la infección de humanos en contacto con los roedores.

10. Inhibidor de MEK para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el inhibidor de MEK se administra por medio de inhalación.