ES3049603T3 - Composition for muscle relaxation - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un péptido con actividad fisiológica y a una composición que lo comprende. El péptido de la presente invención presenta diversas actividades fisiológicas, como relajación muscular, reducción de arrugas cutáneas, inhibición de la producción de sebo, etc., y, por lo tanto, puede utilizarse como ingrediente activo en una composición farmacéutica para la relajación muscular o en un cosmético para el alivio de arrugas cutáneas, la inhibición de la producción de sebo o la reducción del acné. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Composición para la relajación muscular

[0005] [Campo técnico]

[0007] La presente invención se refiere a una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica o una composición cosmética) para la relajación muscular o para mejorar las arrugas de la piel, suprimir la producción de sebo o mejorar el acné, que incluye un péptido que tiene actividades fisiológicas.

[0009] [Técnica antecedente]

[0011] Las neuronas (es decir, las células nerviosas) que constituyen el sistema nervioso de un animal tienen axones con una estructura peculiar que no puede encontrarse en otras células. Un axón es una estructura esbelta y larga que se proyecta desde el cuerpo de la célula nerviosa de modo que el axón se conecta a una diana de una neurona, a través de la cual se transducen señales y se transmiten sustancias.

[0013] Una sinapsis neuromuscular tiene una estructura sináptica específicamente diferenciada en la que terminales de axones se conectan sinápticamente a células musculares esqueléticas para transducir impulsos de las neuronas a los músculos. Los axones dirigidos a los músculos esqueléticos son axones mielinizados rodeados por la mielina y ramificados en varias dendritas terminales a medida que los axones se acercan a los músculos. Los axones ramificados están rodeados por la mielina, pero ésta desaparece en los sitios de los axones que entran en los músculos. En este caso, los axones ramificados forman botones terminales como los terminales axónicos que constituyen otras sinapsis, y los botones terminales se sitúan en superficies de células musculares deprimidas. Esta estructura se denomina "placa terminal motora" o "sinapsis neuromuscular".

[0014] Al igual que en las otras sinapsis, hay cantidades de mitocondrias y vesículas sinápticas en los terminales axónicos de las sinapsis neuromusculares. Las vesículas sinápticas de las sinapsis neuromusculares contienen acetilcolina como neurotransmisor. Las moléculas SNARE son esenciales para la liberación de acetilcolina, y la supresión de una acción de liberación de acetilcolina provoca parálisis flácida. Existen hendiduras sinápticas entre los terminales axónicos y los músculos, y las membranas celulares de las células musculares esqueléticas que sirven de partes postsinápticas están deprimidas hacia el sarcoplasma para formar una serie de pliegues de unión. Dado que en las membranas celulares alrededor de los pliegues de unión hay un receptor de acetilcolina, se supone que esta estructura sirve para ampliar una zona en la que el receptor puede unirse a la acetilcolina.

[0016] Cuando los impulsos nerviosos se transmiten a una sinapsis neuromuscular, los canales de calcio sensibles al voltaje de la membrana celular terminal se abren para que los iones de calcio entren en los canales de calcio. Como resultado, las vesículas sinápticas se fusionan con la membrana celular para liberar acetilcolina en las vesículas hacia las hendiduras sinápticas. La acetilcolina liberada puede unirse a un receptor de acetilcolina presente en la membrana de la célula muscular, con lo que se abren los canales de sodio y se produce la despolarización de la membrana celular. Los impulsos que parten de la sinapsis neuromuscular se propagan por la superficie de las fibras musculares y se transmiten a las partes profundas de las células musculares. Los impulsos se transmiten a las tríadas para abrir los canales de calcio de membrana del retículo sarcoplásmico y liberar iones de calcio en el sarcoplasma. Los iones de calcio se unen a la troponina C y los músculos comienzan a contraerse. Cuando se interrumpen los impulsos, los iones de calcio regresan a las cisternas del retículo sarcoplásmico mediante el transporte activo, provocando así la relajación muscular. Por lo tanto, cuando se suprime la secreción de acetilcolina de la sinapsis neuromuscular, los impulsos generados en la sinapsis neuromuscular no se transmiten a los músculos. En este caso, al interrumpirse los impulsos, los músculos se relajan.

[0018] Mientras tanto, una causa de formación de las arrugas de expresión facial o un mecanismo de las mismas depende de la tensión de los músculos epidérmicos que tiran de la piel en una dirección interna. Esta tensión muscular es el resultado del debilitamiento de los músculos faciales y de una actividad neuronal excesiva. La actividad neuronal excesiva se caracteriza por la liberación descontrolada y excesiva de neurotransmisores que dan estímulo a las fibras musculares. Como resultado, las moléculas que sirven para controlar la liberación de los neurotransmisores relajan la tensión de los músculos para contribuir a la eliminación de las arrugas faciales. Por lo tanto, existe la necesidad de ingredientes activos novedosos que sean eficaces para controlar la liberación de los neurotransmisores para tratar un espasmo muscular y para reducir o eliminar la asimetría facial y/o las arrugas faciales (especialmente, las arrugas de expresión facial).

[0020] La toxina botulínicaes conocida por estar asociada a una acción de relajación muscular. La toxinabotulínicaes la más utilizada para ensayos clínicos y cosméticos con el fin de eliminar las arrugas faciales. La toxinabotulínicacausa un daño funcional a una proteína SNARE, y tiene un efecto de relajación muscular al interrumpir un complejo SNARE para inhibir la secreción de un neurotransmisor (es decir, acetilcolina).

[0022] La toxinabotulínicase ha utilizado como relajante muscular (Publicación de Patente Coreana No. 2010­ 0020972), o se ha utilizado para reducir las arrugas mediante el uso del efecto de relajación muscular de la toxinabotulínica.Sin embargo, debido a que un efecto paralizante de la toxinabotulínicaes reversible durante una media de 6 meses, dicho tratamiento requiere la inyección repetida de la toxinabotulínica.Además, debido a que la toxinabotulínicatiene un tamaño reconocible por el sistema inmunitario del paciente, la toxinabotulínicapuede inducir una respuesta inmunitaria a los fármacos. Dado que la formación de anticuerpos contra la toxinabotulínicaconlleva una pérdida significativa de la eficacia terapéutica, se trata de un problema grave. Por lo tanto, es necesario desarrollar moléculas que presenten un efecto paralizante similar al de la toxinabotulínica,que tengan estructuras moleculares más simples y estables, que no induzcan una respuesta inmunitaria y que sean eficaces en cuanto al coste de fabricación.

[0023] Mientras tanto, el sebo se produce en las glándulas sebáceas y se libera a través de los poros de la piel, y tiene acciones antibacterianas y citostáticas al formar películas en las superficies de la piel y el cabello para proteger nuestro cuerpo de los microbios invasores. Los poros se dilatan cuando aumenta la secreción de sebo de las glándulas sebáceas o se produce un problema al pasar el sebo por los poros. El sebo se acumula en estos poros dilatados, y este sebo se acumula aún más al enredarse con las células muertas de la piel, los residuos cosméticos del maquillaje o los polvos. Los residuos sebáceos enredados se oxidan al entrar en contacto con los radicales del aire, por lo que se vuelven marrones o negros, provocando así un punto negro. Además, dado que el sebo induce el acné, es necesario desarrollar materiales capaces de suprimir la producción excesiva de sebo.

[0024] [Divulgación]

[0025] [Problema técnicol

[0026] Por lo tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar un péptido que tenga diversas actividades fisiológicas para su uso en la relajación muscular, la mejora de las arrugas de la piel, la supresión de la producción de sebo o la mejora del acné, y una composición farmacéutica o cosmética que incluya el mismo.

[0027] [Solución Técnical

[0028] Para lograr los objetos, se proporciona pero no se reivindica como tal un péptido que incluye una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0029] La invención se expone en el juego de reivindicaciones adjunto.

[0030] Según un aspecto de la presente invención, se proporciona una composición para uso en relajación muscular que incluye como ingrediente activo un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0031] Según otra realización más de la presente invención, la composición puede estar en forma de una composición farmacéutica o una composición cosmética.

[0032] Según aún otra realización de la presente invención, el péptido puede incluirse en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición para la relajación muscular.

[0033] Según otra realización de la presente invención, la composición puede usarse para prevenir o tratar una enfermedad neuromuscular. En una realización preferida de la presente invención, la enfermedad neuromuscular comprende cualquiera seleccionada del grupo que consiste en fasciculaciones del párpado, tortícolis, distonía cervical, blefaroespasmo tónico, hiperhidrosis axilar, fisura anal, colpospasmo, acalasia, un trastorno de cefalea, hiperactividad del detrusor idiopática y neurogénica, distonía focal, dolor/trastorno de la articulación temporomandibular, neuropatía diabética, disfunción de las cuerdas vocales, estrabismo, neuropatía crónica, hipertrofia muscular facial, disinergia detrusor-esfínter o hiperplasia benigna de próstata, y el trastorno de cefalea puede ser migraña.

[0034] Según otra realización más de la presente invención, el péptido puede inhibir la secreción de acetilcolina. Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición cosmética que incluye como ingrediente activo el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en s Eq ID NO: 1 para mejorar el estado de la piel.

[0035] Según una realización de la presente invención, la composición cosmética puede utilizarse para mejorar las arrugas de la piel, suprimir la producción de sebo o mejorar el acné.

[0036] Según otra realización de la presente invención, el péptido puede incluirse en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición cosmética.

[0037] Según otra realización más de la presente invención, el péptido puede aumentar la expresión de colágeno.

[0038] La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del acné que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 como principio activo.

[0039] Según una realización, en esta composición farmacéutica el péptido se incluye en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición farmacéutica.

[0040] ÍEfectos Ventajosos!

[0041] Debido a que el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 tiene actividades fisiológicas como la relajación muscular, la mejora de las arrugas de la piel, la supresión de la producción de sebo y similares, el péptido puede utilizarse como ingrediente activo en una composición para la relajación muscular, una composición para mejorar las arrugas de la piel, una composición para suprimir la producción de sebo, una composición para suprimir la generación de puntos negros o una composición para mejorar el acné.

[0042] [Descripción de las Figuras]

[0043] La FIG. 1 muestra los resultados de la evaluación de la estabilidad a altas temperaturas de un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 cuando se almacena durante un largo periodo de tiempo.

[0044] La FIG. 2 muestra los resultados de la evaluación de la estabilidad a alta temperatura del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0045] La FIG. 3 muestra un grado de descomposición de la sintaxina 1A recombinante por el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0046] La FIG. 4 muestra un grado de descomposición de la sintaxina 1A endógena por el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0047] La FIG. 5 muestra un efecto inhibidor del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 en la formación de un complejo SNARE.

[0048] La FIG. 6 muestra un efecto inhibidor del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 en la formación del complejo S<n>A<r>E.

[0049] La FIG. 7 es un gráfico que muestra un efecto inhibidor del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 sobre la secreción de acetilcolina.

[0050] La FIG. 8 muestra un efecto de relajación muscular del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0051] Las FIGS. 9 y 10 muestran los resultados de comparar los efectos de relajación muscular del Botox y el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0052] La FIG. 11 muestra los resultados de determinar si el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 penetra en las células.

[0053] La FIG. 12 muestra los resultados de la verificación de un patrón de penetración tisular del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0054] La FIG. 13 muestra los resultados de verificar que el patrón de penetración tisular del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 están presentes alrededor del folículo piloso.

[0055] La FIG. 14 muestra los resultados de verificar que el patrón de penetración tisular del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 están presentes alrededor de las glándulas sebáceas.

[0056] Las FIGS. 15 y 16 muestran un efecto reductor de arrugas del péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0057] La FIG. 17 muestra un mayor nivel de colágeno al aplicar el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0058] La FIG. 18 muestra un mayor nivel de elastina al aplicar el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0059] La FIG. 19 muestra un mayor nivel de fibronectina al aplicar el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0060] La FIG. 20 muestra los resultados de una disminución en el número de glándulas sebáceas y una disminución en la expresión de un marcador asociado con la producción de sebo al aplicar el péptido que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0061] [Mejor Modo]

[0062] A continuación, se describirá en detalle la presente invención.

[0063] 1: Péptido utilizado en la presente invención

[0064] Se divulga en el presente documento pero no se reivindica un péptido que tiene actividades fisiológicas útiles, por ejemplo, diversas actividades fisiológicas tales como relajación muscular, mejora de las arrugas de la piel, supresión de la producción de sebo o mejora del acné.

[0065] Este péptido incluye una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 o consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0066] En esta especificación, el término "péptido" se refiere a una molécula lineal formada al permitir que los residuos de aminoácidos se unan entre sí mediante enlaces peptídicos. El péptido puede prepararse utilizando métodos convencionales de síntesis biológica o química conocidos en la técnica relacionada, en particular, técnicas de síntesis en fase sólida.

[0067] El péptido puede incluir variantes o fragmentos con aminoácidos, que tienen secuencias diferentes dentro de una extensión que no tiene efecto sobre las funcionalidades del mismo debido a la deleción, inserción o sustitución de un residuo(s) de aminoácido, o una combinación de los mismos. La sustitución de aminoácidos sin variar la actividad del péptido en su conjunto es conocida en la técnica relacionada. En ciertos casos, el péptido puede modificarse por fosforilación, sulfatación, acrilación, glicosilación, metilación, farnesilación y similares. El péptido aquí divulgado pero no reivindicado como tal tiene sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos que el péptido que incluye la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1, y variantes o fragmentos activos de los mismos. La expresión "proteína sustancialmente idéntica" se refiere a una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos con una homología de secuencia del 60 % o más, preferiblemente del 75 % o más, por ejemplo, del 80 % o más, del 90 % o más, del 95 % o más, del 98 % o más, o del 99 % o más con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. El péptido divulgado puede incluir además una secuencia dirigida, una etiqueta, un residuo marcado o una secuencia de aminoácidos preparada con el propósito especial de aumentar la semivida o la estabilidad del péptido.

[0068] Además, el péptido puede obtenerse utilizando diversos métodos bien conocidos en la técnica relacionada. Por ejemplo, puede prepararse usando recombinación de polinucleótidos y un sistema de expresión de proteínas, o puede prepararse usando un método de síntesis de un péptidoin vitromediante síntesis química tal como síntesis de péptidos, y un método de síntesis de proteínas sin células, y similares.

[0069] Además, puede unirse un grupo protector al extremo N- o C-terminal del péptido para conseguir una mayor estabilidad química, propiedades farmacológicas mejoradas (semivida, absortividad, valoración, eficacia y similares), especificidad modificada (por ejemplo, una amplia gama de espectros biológicamente activos) y antigenicidad reducida. Por ejemplo, el grupo protector puede ser un grupo acetilo, un grupo fluorenilmetoxicarbonilo, un grupo formilo, un grupo palmitoilo, un grupo miristilo, un grupo estearilo o polietilenglicol (PEG). Sin embargo, los grupos protectores pueden utilizarse sin limitación siempre que los grupos protectores puedan modificar el péptido, en particular puedan mejorar la estabilidad del péptido. El término "estabilidad" se utiliza con un significado que incluye la estabilidadin vivoen la que el péptido está protegido del ataque de las enzimas de corte de proteínasin vivo, así como la estabilidad de almacenamiento (por ejemplo, estabilidad de almacenamiento a temperatura ambiente).

[0070] 2: Composición farmacéutica que incluye el péptido divulgado anteriormente

[0071] Según un aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para la relajación muscular que incluye el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0072] Según una realización de la presente invención, el péptido divulgado anteriormente tiene una actividad de relajación muscular, y por lo tanto puede usarse como un ingrediente activo de una composición para la relajación muscular. En consecuencia, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para la relajación muscular, que incluye como principio activo el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0073] El péptido puede incluirse en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, por ejemplo, un contenido del 0,01 % en peso al 50 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición farmacéutica para la relajación muscular. Cuando el contenido del péptido en la composición farmacéutica para la relajación muscular es inferior al límite inferior, el efecto de relajación muscular del péptido puede no expresarse suficientemente. Por otra parte, cuando el contenido del péptido es superior al límite superior, puede obtenerse un efecto relativamente bajo del péptido con respecto a la concentración del péptido añadido.

[0074] La composición farmacéutica de la presente invención puede utilizarse para prevenir o tratar una enfermedad neuromuscular. En este caso, la composición farmacéutica de la presente invención puede aplicarse ilimitadamente a la enfermedad neuromuscular siempre que la enfermedad neuromuscular sea una enfermedad a tratar con fines de relajación muscular.

[0075] El término "protección" utilizado en la presente invención se refiere a todo tipo de acciones en las que la composición farmacéutica de la presente invención retrasa la aparición de la enfermedad neuromuscular. El término "inhibición" utilizado en la presente invención se refiere a todos los tipos de acciones en las que la composición farmacéutica de la presente invención reduce la aparición de la enfermedad neuromuscular. El término "tratamiento" utilizado en la presente invención se refiere a todo tipo de acciones en las que la composición farmacéutica de la presente invención mejora o aminora los síntomas de la enfermedad neuromuscular.

[0076] El término "administración" utilizado en la presente invención se refiere a la introducción de un determinado material en un sujeto utilizando cualquier método adecuado. En este caso, la composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse a través de cualquier vía de administración común a través de la cual la composición pueda alcanzar una dianain vivo.La vía de administración de la composición farmacéutica de la presente invención no está particularmente limitada, pero la composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse por vía oral o parenteral. En particular, la composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse por vía parenteral y, más concretamente, puede administrarse aplicando la composición sobre la piel (es decir, administración dérmica). En particular, la administración de la composición farmacéutica de la presente invención puede realizarse de una a cuatro veces al día, de dos a tres veces al día, o dos veces al día. Asimismo, la administración de la composición farmacéutica de la presente invención puede realizarse durante un periodo de 4 semanas o más, 8 semanas o más, de 4 semanas a 12 semanas, o de 8 semanas a 12 semanas.

[0077] El término "enfermedad neuromuscular" utilizado en la presente invención se refiere a un trastorno que se produce en los nervios periféricos y los músculos. Un nervio periférico es una red neuronal que parte del sistema nervioso central en el cráneo o la columna vertebral para conectar órganos terminales, como los músculos o la piel, con el sistema nervioso central, y sirve para transmitir órdenes del sistema nervioso central a órganos terminales, como los músculos, o para transmitir información sensorial, como la sensación de dolor, al sistema nervioso central. Un trastorno del sistema nervioso periférico incluye la disfunción de los nervios periféricos, enfermedades causadas en las sinapsis neuromusculares en las que los nervios periféricos están conectados a los músculos, o los propios músculos, y similares.

[0078] Ejemplos de la enfermedad neuromuscular incluyen enfermedades como tics de los párpados, tortícolis (una postura antinatural del cuello en la que el cuello se inclina hacia un lado debido a la contracción de los músculos), distonía cervical, blefaroespasmo tónico, hiperhidrosis axilar, fisura anal, colpospasmo, acalasia, un trastorno de cefalea, hiperactividad del detrusor idiopática y neurogénica, distonía focal (en extremidades, articulaciones temporomandibulares, cuerdas vocales y similares), dolor/trastorno de la articulación temporomandibular, neuropatía diabética, disfunción de las cuerdas vocales, estrabismo, neuropatía crónica, hipertrofia muscular facial (en músculos masticatorios y similares), disinergia detrusor-esfínter, hiperplasia prostática benigna y similares. El trastorno de cefalea puede ser migraña.

[0079] Según una realización de la presente invención, la composición farmacéutica de la presente invención puede incluir además un portador, excipiente o diluyente adecuado, que se utiliza comúnmente para preparar la composición farmacéutica.

[0080] El portador, excipiente o diluyente que puede usarse en la composición farmacéutica de la presente invención incluye lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma acacia, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa amorfa, polivinilpirrolidona, agua, hidroxibenzoato de metilo, hidroxibenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio, aceite mineral y similares. La composición farmacéutica de la presente invención puede utilizarse para su formulación en formas tales como polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, suspensiones, emulsiones, jarabe, formulaciones orales (tales como aerosol), preparaciones para uso externo, supositorios y soluciones inyectables estériles, dependiendo de los métodos convencionales utilizados.

[0081] Cuando se formula, la composición farmacéutica puede prepararse utilizando un diluyente o un excipiente generalmente utilizado en la técnica, tal como un relleno, un agente extensor, un agente aglutinante, un agente humectante, un agente desintegrador, un tensioactivo, y similares. Un preparado sólido para administración oral incluye un comprimido, una píldora, un polvo, un gránulo, una cápsula y similares. Dicho preparado sólido puede prepararse mezclando el compuesto con al menos un excipiente, por ejemplo, almidón, carbonato cálcico, sacarosa o lactosa, gelatina y similares.

[0083] También, además de los excipientes simples, pueden utilizarse en el presente documento lubricantes tales como estearato de magnesio, talco y similares. Una preparación en fase líquida para administración oral incluye una suspensión, una solución para uso interno, una emulsión, un jarabe y similares. Dicha preparación en fase líquida puede incluir varios excipientes, por ejemplo, un agente humectante, un agente edulcorante, un agente aromatizante, un conservante, y similares, además de los diluyentes inertes (por ejemplo, agua, parafina líquida) comúnmente utilizados en la técnica.

[0085] Una preparación para administración parenteral incluye una solución acuosa estéril, un disolvente no acuoso, una suspensión, una emulsión, una preparación liofilizada, un supositorio y similares. Un aceite vegetal como el propilenglicol, el polietilenglicol o el aceite de oliva, o un éster inyectable como el oleato de etilo, y similares, pueden utilizarse como disolvente no acuoso y la suspensión. Witepsol, Macrogol, Tween 61, manteca de cacao, manteca de laurina, gelatina de glicerol y similares pueden utilizarse como base del supositorio.

[0087] Una preparación sólida para administración oral incluye un comprimido, una píldora, un polvo, un gránulo, una cápsula y similares. Dicha preparación sólida puede prepararse mezclando la composición farmacéutica de la presente invención con al menos un excipiente, por ejemplo, almidón, carbonato cálcico, sacarosa, lactosa, gelatina y similares. Además de los excipientes simples, también pueden utilizarse lubricantes como estearato de magnesio, talco y similares.

[0089] Una preparación en fase líquida para administración oral incluye una suspensión, una solución para uso interno, una emulsión, un jarabe y similares. Dicha preparación en fase líquida puede incluir varios excipientes, por ejemplo, un agente humectante, un agente edulcorante, un agente aromatizante, un conservante, y similares, además de los diluyentes inertes (por ejemplo, agua, parafina líquida) comúnmente utilizados en la técnica.

[0090] Una preparación para la aplicación sobre la piel incluye un polvo para espolvorear, una emulsión, suspensión, un aceite, un aerosol, un ungüento, una pasta de crema, un gel, una espuma o una solución. La preparación farmacéutica de la presente invención puede ser una pomada anhidra, y puede contener parafina que sea adecuada para la aplicación local y esté en estado líquido a temperatura corporal, en particular, parafina de baja viscosidad, o puede contener grasas naturales o grasas parcialmente sintetizadas, por ejemplo, triglicérido de ácido graso de coco, aceite hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete hidrogenado o aceite Caster), éster parcial de ácido graso de glicerol (por ejemplo, monoestearato y diestearato de glicerol), silicona (por ejemplo, polimetilsiloxano como hexametildisiloxano u octametiltrisiloxano), y similares. Por ejemplo, el preparado farmacéutico puede contener un alcohol graso, que se asocia a una crema acuosa y sirve para aumentar la capacidad de absorción de humedad, y esteroles, cera de lana, otros agentes emulsionantes y/u otros aditivos.

[0092] La dosis del péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos, que está contenida en la composición farmacéutica de la presente invención puede variar dependiendo de la condición y el peso de un paciente, la gravedad de una enfermedad, la forma de un fármaco, una vía de administración y un tiempo de administración, pero puede elegirse adecuadamente, cuando sea necesario. Por ejemplo, el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos puede administrarse diariamente a una dosis de 0,0001 a 1.000 mg/kg, en particular a una dosis de 0,1 a 1.000 mg/kg. El péptido puede aplicarse una vez al día o en varias dosis divididas. La dosis del péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos puede fluctuar en función de una vía de administración, la gravedad de una enfermedad, el sexo, el peso y la edad de un paciente, y similares.

[0094] La composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse a mamíferos (por ejemplo, ratones, ratas, ganado, seres humanos y similares) a través de diversas vías de administración. Cabe esperar un modo de administración. En este caso, el péptido puede, por ejemplo, administrarse a través de todos los modos de administración, como la inyección oral, rectal o intravenosa, intramuscular, subcutánea, dural intrauterina o intracerebroventricular.

[0096] Además del péptido que incluye la secuencia de aminoácidos, la composición farmacéutica para prevenir, inhibir o tratar una enfermedad neuromuscular según la presente invención puede incluir además uno o más principios activos que tengan un efecto de mejora, atenuación o prevención de la enfermedad neuromuscular.

[0097] Para mejorar, aminorar o prevenir la enfermedad neuromuscular, la composición farmacéutica de la presente invención puede utilizarse sola o en combinación con cirugía, terapia hormonal, tratamiento farmacológico y otras terapias que utilizan un modificador de la respuesta biológica.

[0099] El péptido utilizado en la composición de la presente invención es estable a una temperatura elevada (véanse las FIGS. 1 y 2), descompone la sintaxina 1A que participa en la liberación de neurotransmisores, suprime la formación de un complejo SNARE (ver FIGS. 3 a 6), inhibe la secreción de acetilcolina (véase FIG. 7), tiene un efecto de relajación muscular (véanse las FIGS. 8 a 10), es penetrable en las células y penetra en la túnica muscular de un tejido para coexistir con un marcador neuronal, mostrando así un efecto de relajación muscular (véanse las FIGS. 11 a 14).

[0101] 3: Composición cosmética que incluye el péptido divulgado anteriormente

[0103] Otro aspecto más de la presente invención proporciona una composición cosmética que incluye como ingrediente activo el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0104] En la presente invención, el término "poros" se refiere a pequeños orificios a través de los cuales se segrega el sebo presente en una cara, una frente, una nariz, y similares, y el término "punto negro" se refiere al sebo de aspecto negro ya que en los poros se acumula una mezcla de sebo degenerado, células cutáneas muertas viejas, y similares, y alrededor de los poros se depositan contaminantes.

[0106] Según una realización de la presente invención, la composición cosmética de la presente invención puede ser una composición cosmética para mejorar las condiciones de la piel. El término "mejora de las afecciones cutáneas" puede referirse en general a un proceso de tratamiento, alivio o mitigación de daños cutáneos causados por factores intrínsecos o extrínsecos de la piel, o a un efecto de los mismos. Por ejemplo, la mejora puede significar que la composición cosmética se utiliza para mejorar las arrugas, aumentar la elasticidad de la piel, regenerar heridas, suprimir la producción de sebo, o mejorar el acné, y similares, pero la presente invención no se limita a ello.

[0108] El péptido utilizado en la composición cosmética de la presente invención es estable a una temperatura elevada (véanse las FIGS. 1 y 2), y tiene un efecto de mejora de las arrugas de la piel debido a la relajación muscular o a un aumento de los componentes dérmicos (véanse las FIGS. 15 a 19). Los componentes dérmicos pueden incluir colágeno

[0110] El péptido utilizado en la composición cosmética de la presente invención es estable a una temperatura elevada (véanse las FIGS. 1 y 2), se reduce el número de glándulas sebáceas y disminuye el nivel de expresión del marcador relacionado con la producción de sebo (véase FIG. 20).

[0112] La composición cosmética de la presente invención puede prepararse en forma líquida o sólida utilizando un material base, un adyuvante y un aditivo comúnmente utilizado en el campo de los cosméticos. Los cosméticos en forma líquida o sólida pueden incluir, por ejemplo, una loción facial, una crema, un preparado para el baño y similares, pero la presente invención no se limita a ellos. Por ejemplo, el material de base, el adyuvante y el aditivo comúnmente utilizados en el campo de los cosméticos incluyen agua, alcohol, propilenglicol, ácido esteárico, glicerol, alcohol cetílico, parafina líquida y similares, pero la presente invención no está particularmente limitada a ellos.

[0114] Además del péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos, la composición cosmética de la presente invención puede incluir componentes comúnmente utilizados en la composición cosmética. Por ejemplo, la composición cosmética puede incluir adyuvantes y portadores convencionales como un antioxidante, un agente estabilizante, un agente solubilizante, vitaminas, un pigmento y una fragancia.

[0116] La composición cosmética de la presente invención puede prepararse en cualquier formulación generalmente obtenida en la técnica relacionada. Por ejemplo, la composición cosmética puede formularse como una solución, una suspensión, una emulsión, una pasta, un gel, una crema, una loción, un polvo, un jabón, un limpiador que contenga tensioactivos, un aceite, una base de maquillaje en polvo, una base de maquillaje en emulsión, una base de maquillaje en cera, un pulverizador y similares. Más específicamente, la composición cosmética puede formularse para preparar un tónico, una loción, una crema nutritiva, una crema de masaje, una esencia, una crema para los ojos, una crema limpiadora, una espuma limpiadora, un agua limpiadora, un envase, un pulverizador o un polvo.

[0118] Cuando la formulación de la composición cosmética de la presente invención es una pasta, una crema o un gel, puede utilizarse como componente portador un aceite animal, un aceite vegetal, cera, parafina, almidón, tragacanto, derivado de celulosa, polietilenglicol, silicona, bentonita, sílice, talco, óxido de zinc o similares.

[0119] Cuando la formulación de la composición cosmética de la presente invención es un polvo o un aerosol, puede utilizarse lactosa, talco, sílice, hidróxido de aluminio, silicato de calcio o un polvo de poliamida como componente portador. En particular, cuando la formulación es un aerosol, la formulación puede incluir además un propelente como clorofluorohidrocarburo, propano/butano o dimetil éter.

[0121] Cuando la formulación de la composición cosmética de la presente invención es una emulsión, puede utilizarse un disolvente, un agente solubilizante o un agente emulsionante como componente portador. Por ejemplo, el componente portador incluye agua, etanol, isopropanol, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, aceite de 1,3-butilenglicol, éster alifático de glicerol, polietilenglicol o un éster de ácido graso de sorbitán.

[0122] Cuando la formulación de la composición cosmética de la presente invención es una suspensión, puede utilizarse como componente portador un diluyente líquido como agua, etanol o propilenglicol, un agente de suspensión como alcohol isostearílico etoxilado, éster de sorbitol polioxietilenado y éster de sorbitán polioxietilenado, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar, tragacanto o similares. Cuando la formulación de la composición cosmética de la presente invención es una limpieza que contiene tensioactivos, sulfato de alcohol alifático, éter sulfato de alcohol alifático, monoéster de sulfosuccinato, un derivado de imidazolinio, taurato de metilo, sarcosinato, éter sulfato de amida de ácido graso, alquil amido betaína, alcohol alifático, glicérido de ácido graso, dietanolamida de ácido graso, aceite vegetal, un derivado de lanolina, éster de ácido graso de glicerol etoxilado, o similares, pueden utilizarse como componente portador. La composición cosmética de la presente invención puede utilizarse sola, o puede utilizarse por aplicación doble, o puede utilizarse por aplicación doble con otra composición cosmética distinta de la composición cosmética de la presente invención. Además, la composición cosmética de la presente invención, que tiene un excelente efecto hidratante de la piel y un excelente efecto de mejora de la barrera cutánea, puede utilizarse según los métodos de uso convencionales, y su número de usos puede variar en función del estado de la piel del usuario o de sus preferencias.

[0123] Cuando la composición cosmética de la presente invención es jabón, una formulación limpiadora que contiene tensioactivos o una formulación limpiadora sin tensioactivos, la composición cosmética puede limpiarse, desprenderse o lavarse con agua después de aplicarse sobre la piel. Como ejemplo específico, el jabón es jabón líquido, jabón en polvo, jabón sólido y jabón de aceite, la formulación limpiadora que contiene tensioactivos es una espuma limpiadora, un agua limpiadora, una toalla limpiadora y un envase limpiador, y la formulación limpiadora sin tensioactivos es una crema limpiadora, una loción limpiadora, un agua limpiadora y un gel limpiador.

[0124] 4: Uso terapéutico de la composición farmacéutica o uso cosmético de composición que incluye el péptido divulgado anteriormente.

[0125] Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso terapéutico de la composición farmacéutica o el uso cosmético de la composición, que incluye el péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1.

[0126] Según un aspecto de la presente invención, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para uso para relajación muscular, que incluye aplicar el péptido o la composición farmacéutica a la piel, o la piel en la que los músculos están contraídos. La aplicación puede incluir la aplicación a la piel, pero la presente invención no se limita a ello.

[0127] Según otro aspecto de la presente invención, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir, inhibir o tratar una enfermedad neuromuscular, que incluye administrar el péptido o la composición farmacéutica a un sujeto, o a un sujeto que ha desarrollado la enfermedad neuromuscular. La composición farmacéutica es como se describe en la sección "2: Composición farmacéutica que incluye el péptido de la presente invención".

[0128] Una cantidad eficaz del péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, o la composición farmacéutica que incluye el péptido puede aplicarse/administrarse a un sujeto que lo necesite. Según otro aspecto más de la presente invención, la presente invención proporciona un uso cosmético de una composición para mejorar las arrugas de la piel, que incluye aplicar el péptido o la composición cosmética sobre la piel o la piel en la que aparecen las arrugas.

[0129] Según otro aspecto más de la presente invención, la presente invención proporciona un uso cosmético de una composición para suprimir la producción de sebo, que incluye aplicar el péptido o la composición cosmética sobre la piel.

[0130] Según otro aspecto más de la presente invención, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para tratar el acné, que incluye aplicar el péptido o la composición farmacéutica sobre la piel o la piel en la que aparece el acné.

[0131] La composición cosmética es como se describe en la sección "3: Composición cosmética que incluye el péptido de la presente invención".

[0132] Una cantidad eficaz del péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, o la composición cosmética que incluye el péptido puede aplicarse/administrarse a un sujeto que lo necesite. A continuación, la presente invención se describirá en detalle con referencia a Ejemplos de Preparación, Ejemplos y Ejemplos Experimentales de la misma.

[0133] Ejemplo de preparación 1: Preparación de un nuevo péptido con diversas actividades fisiológicas

[0134] Una nueva secuencia peptídica 'KFLIK' con una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 se preparó siguiendo un método conocido. El peso molecular del nuevo péptido era de 647,4 Da.

[0135] Ejemplo experimental 1: Evaluación de la estabilidad a alta temperatura del péptido

[0136] 1-1: Evaluación de la estabilidad a altas temperaturas tras un almacenamiento prolongado

[0137] El péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 se disolvió a una concentración de 1.000 ppm en agua destilada estéril, se almacenó a 45 °C durante 7 días, 14 días, 28 días, 60 días y 75 días, y después se sometió a un ensayo por HPLC.

[0138] Como resultado, como se muestra en la FIG. 1, puede observarse que la estabilidad del péptido se mantuvo durante el tiempo máximo de observación de 75 días en la condición de 45 °C.

[0139] 1- 2: Evaluación de la estabilidad a altas temperaturas

[0140] El péptido se disolvió a una concentración de 1.000 ppm en agua destilada estéril, se calentó a 121 °C durante 15 minutos y 30 minutos, y después se sometió a un ensayo de HPLC.

[0141] Como resultado, como se muestra en la FIG. 2, se observa que la estabilidad del péptido se mantuvo a 121 °C durante el tiempo máximo de calentamiento de 30 minutos.

[0142] Ejemplo experimental 2: Confirmación del grado de descomposición de la sintaxina 1A por el péptido Una proteína soluble N-etilmaleimida sensible al receptor de la proteína de unión al factor (SNARE) participa en una fusión de membrana que se produce en las células. El SNARE neuronal que participa en la neurotransmisión está asociado a la unión de vesículas sinápticas a una membrana presináptica. Las vesículas sinápticas que transportan los neurotransmisores a la vez que los liberan deben fusionarse con la membrana presináptica para formar un canal de liberación de neurotransmisores. En este caso, la fusión se produce por medio del SNARE presente como complejo proteico. En particular, en la fusión intervienen un complejo t-SNARE, que es un complejo de una proteína SNAP-25 y una proteína sintaxina 1A unidas a una membrana diana, y v-SNARE unidas a las vesículas. Cuando los procesos de conjugación y torsión SNARE no se completan totalmente, la fusión de membranas fracasa. Por lo tanto, los músculos están relajados porque no se liberan los neurotransmisores. Se confirmó si el péptido tenía capacidad para descomponer la sintaxina 1A que constituye el t-SNARE.

[0143] 2- 1: Confirmación del grado de descomposición de la sintaxina 1A recombinante

[0144] En un grupo experimental, se trató una solución tampón de reacción (50 mM HEPES, 40 mM 2-ME, 20 pM ZnCl2, pH 7,4) con 1 pg de una proteína sintaxina 1A recombinante (Novus biologicals, USA) y una concentración creciente (20 pM, 100 pM, y 200 pM) del péptido. En el control negativo (Control), la solución tampón de reacción se trató únicamente con una proteína sintaxina 1A recombinante. La mezcla resultante se hizo reaccionar durante 4 horas en condiciones de 37 °C, y luego se sometió a Western blotting utilizando un anticuerpo de sintaxina 1A (Synaptic Systems, Alemania).

[0145] Como resultado, se confirmó que, cuando la solución se trató con este péptido, una banda de la proteína sintaxina 1A recombinante se redujo por el péptido de una manera dependiente de la concentración, en comparación con el control negativo en el que la solución no se trató con este péptido (FIG. 3).

[0146] 2-2: Confirmación del grado de descomposición de la sintaxina 1A endógena expresada en células

[0147] Una solución tampón de reacción (50 mM HEPES, 40 mM 2-ME, 20 pM ZnCh, pH 7,4) se trató con 30 pg de un lisado de células SH-SY5Y y una concentración creciente (20 pM, 100 pM y 200 pM) del péptido mencionado anteriormente. En el control positivo (BoNT/C LC), se utilizó una cadena ligera (BoNT/C LC) de 0,2 pM debotulínicaneurotoxina tipo C en lugar del péptido, y la muestra se trató únicamente con 30 pg del lisado de células SH-SY5Y en el caso del control negativo (Control). Cada una de las mezclas se hizo reaccionar a 37 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se sometió a Western blot utilizando un anticuerpo de sintaxina 1A (Synaptic Systems, Alemania).

[0148] Como resultado, se confirmó que, cuando la solución se trató con este péptido, una banda de la proteína sintaxina 1A recombinante se redujo por el péptido de manera dependiente de la concentración, como el control positivo en el que la solución se trató con BoNt /C LC (FIG. 4).

[0149] Sumario del ejemplo experimental 2:El péptido mencionado anteriormente descompone la sintaxina 1A recombinante o la sintaxina 1A endógena, por lo que no se forma el complejo SNARE. Por lo tanto, se espera que este péptido tenga un efecto de relajación muscular porque no se produce la liberación de los neurotransmisores.

[0150] Ejemplo experimental 3: Análisis de la formación del complejo SNARE

[0152] 3-1: Análisis mediante Western blotting

[0154] Se confirmó si un complejo SNARE que se formaba en las células era inhibido por una acción de descomposición de sintaxina 1A por el péptido mencionado anteriormente. Concretamente, tras realizar el Western blot, se determinó la densidad de una banda del complejo SNARE que tuviera un tamaño esperado. Las células SH-SY5Y se sembraron a una densidad de 3 * 105 células/pocillo en una placa de 6 pocillos. Tras cultivar las células durante toda la noche, se sustituyó el medio por DMEM sin suero. La solución de cultivo resultante se trató con una concentración creciente (10<j>M, 50<j>M y 100<j>M) del péptido. En el caso del control positivo, la solución se trató con 0,2 j M BoNT/C LC. En el control negativo (Control), la muestra no se trató. Tras 24 horas de tratamiento de la muestra, se recogieron las células, se obtuvo un lisado y se sometió a Western blot utilizando un anticuerpo contra sintaxina 1A (Synaptic Systems, Alemania). El tamaño de la banda del complejo SNARE era de 75 kDa.

[0156] Basándose en los resultados de Western blotting, se observó que, cuando la solución se trató con dicho péptido, se inhibió la formación del complejo SNARE en las células SH-SY5Y, al igual que el control positivo en el que la solución se trató con el BoNT/C LC (FIG. 5). Considerando los resultados del ejemplo experimental 2, se esperaba que la formación del complejo SNARE se inhibiera debido a un efecto de este péptido sobre la descomposición de la sintaxina 1A.

[0158] 3-2: Análisis mediante coinmunoprecipitación (Co-IP)

[0160] La coinmunoprecipitación se utilizó con el fin de detectar una proteína que se une a otra proteína determinada en condiciones no desnaturalizantes. Las células SH-SY5Y se sembraron a una densidad de 3 * 105 células/pocillo en una placa de 6 pocillos. Cuando las células se cultivaron durante toda la noche, el medio se sustituyó por DMEM sin suero. La solución de cultivo resultante se trató con una concentración de 50 j M del péptido mencionado anteriormente durante 24 horas. En el caso del control positivo, la solución se trató con 0,2<j>M BoNT/C LC. En el control negativo (Control), la muestra no se trató. Se obtuvo un lisado celular y se sometió a inmunoprecipitación utilizando un anticuerpo SNAP-25 (Synaptic Systems, Alemania), seguido de Western blotting utilizando un anticuerpo SNAP-25 y un anticuerpo sintaxina 1A (Synaptic Systems, Alemania).

[0161] Como resultado, se confirmó que la interacción entre el SNAP-25 y la sintaxina 1A estaba inhibida ya que la formación del complejo SNARE en las células SH-SY5Y estaba suprimida por el tratamiento con dicho péptido (FIG. 6). En la FIG. 6, "IP de entrada" representa una cantidad de la proteína sintaxina 1A SNAP-25 encontrada en el lisado celular obtenido antes de la IP, e "Inmunoprecipitación: anti-SNAP-25" representa los resultados obtenidos tratando el producto resultante, que se obtuvo después de la inmunoprecipitación utilizando el anticuerpo SNAP-25, con el anticuerpo SNAP-25 o el anticuerpo sintaxina 1A. Es decir, en la "Inmunoprecipitación: anti-SNAP-25", un panel "SNAP-25" muestra los resultados obtenidos mediante la redetección de SNAP-5, que fue precipitado por el anticuerpo SNAP-25 en el lisado celular, y un panel "sintaxina 1A" muestra los resultados obtenidos mediante la detección del precipitado, que fue precipitado por el anticuerpo SNAP-25 en el lisado celular, utilizando el anticuerpo sintaxina 1A. Se puede observar que el complejo SNARE no se formó porque se mantuvo una cantidad de sintaxina 1A en el control negativo (Control) en el que la muestra no se trató en el panel "sintaxina 1A". Además, se puede observar que la formación del complejo SNARE se inhibió porque se redujo la cantidad de sintaxina 1A en el grupo tratado con el péptido inventivo y en el grupo tratado con BoNT/C L<c>.

[0163] Sumario del ejemplo experimental 3:

[0165] Puede observarse que la formación del complejo SNARE se inhibió durante el tratamiento con el péptido mencionado anteriormente. Teniendo en cuenta los resultados del ejemplo experimental 2, también puede observarse que la sintaxina 1A se descompuso por el tratamiento con dicho péptido, inhibiendo así la formación del complejo SNARE. Por lo tanto, se esperaba que este péptido de la presente invención tuviera un efecto de relajación muscular porque los neurotransmisores no se liberaban al inhibirse la formación del complejo SNARE.

[0167] Ejemplo experimental 4: Confirmación del efecto inhibidor del péptido sobre la secreción de acetilcolina

[0168] Se verificó si el péptido mencionado anteriormente que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 tenía un efecto inhibidor sobre la secreción de acetilcolina. Se sembraron células SH-SY5Y de neuroblastoma humano de médula ósea y se cultivaron durante 24 horas en un incubador de CO2. El medio se sustituyó por un medio sin suero y las células se cultivaron durante 48 horas. La solución de cultivo resultante se trató con una concentración creciente (1<j>M, 10<j>M y 50<j>M) de dicho péptido y, a continuación, se trató con 50 nM de tétanos como control positivo. Además, la solución de cultivo se trató con nicotina (NIC) más cloruro potásico (KCl) como factor inductor para promover la secreción de acetilcolina, y luego se cultivó durante 30 minutos. Se utilizó como control negativo un grupo en el que la solución de cultivo se trató con nicotina y cloruro potásico pero no se trató con dicho péptido ni con el tétanos. Una vez finalizado el cultivo, se separó el medio y se midió el nivel de secreción de acetilcolina incluido en el medio utilizando un kit de análisis de colina/acetilcolina.

[0169] Como se muestra en la FIG. 7, se confirmó que este péptido reducía el contenido de acetilcolina de forma dependiente de la concentración con respecto al nivel de acetilcolina secretado en el grupo normal (Control). Asimismo, se confirmó que el péptido tiene un excelente efecto inhibidor sobre la secreción de acetilcolina cuando la muestra se trató con una concentración de 50 pM del péptido, en comparación con el control positivo en el que la muestra se trató con tétanos.

[0170] Ejemplo experimental 5: Confirmación del efecto sobre la relajación del músculo del dedo del pie de ratón Se administraron 100 pg del péptido mencionado anteriormente al músculo de la pantorrilla de ratones hembra C57BL/6 de 7 semanas de edad, y después se observaron. Se determinó un efecto de relajación muscular mediante un ensayo de puntuación de la abducción de los dedos (DAS). La abducción se refiere a un movimiento de estiramiento de las extremidades, y la DAS se obtiene midiendo el grado de disminución de la capacidad de un animal para desencadenar una respuesta de sobresalto en el músculo de la pantorrilla. Las dAs se dividen en puntuaciones de 0 a 4. En este caso, cuanto mayor sea la puntuación, mayor será el efecto de relajación muscular (FIG. 8A). Es decir, la puntuación más alta significa que la respuesta de sobresalto está más inhibida mediante mecanismos como la supresión de la secreción de acetilcolina y similares. La puntuación 0 representa que los cinco dedos del pie están separados, la puntuación 1 representa que dos dedos del ratón están fijos durante la abducción, la puntuación 2 representa que un dedo gordo y dos dedos del pie no están separados, la puntuación 3 representa que un dedo gordo y tres dedos del pie estaban fijos, y la puntuación 4 representa que los cinco dedos del pie están fijos.

[0171] Como se muestra en la FIG. 8b, la respuesta de sobresalto se produjo antes del tratamiento con dicho péptido, se separaron los cinco dedos de los pies, que recibió una puntuación de 0. Por otra parte, la acción de relajación muscular del péptido aumenta las puntuaciones DAS después de 3 horas de inyección del péptido, y la puntuación 4 se registró después de 17 horas de inyección del péptido

[0172] Ejemplo experimental 6: Comparación entre los efectos de relajación muscular del péptido y el Botox Se inyectaron 100 pg del péptido mencionado anteriormente y 0,6 unidades de BTX tipo A (BoNT-A) en cada uno de los músculos de la pantorrilla de dos ratones hembra C57BL/6 de 7 semanas de edad, y después se sometieron a un ensayo DAS.

[0173] Como se muestra en la FIG. 9 y 10, el grupo administrado con el péptido mostró un efecto de relajación muscular superior tras 20 horas de administración, en comparación con el grupo no administrado, y tuvo un efecto similar al BoNT-A.

[0174] Sumario de los ejemplos experimentales 4 a 6:

[0175] El péptido puede usarse eficazmente para mejorar una enfermedad neuromuscular o mejorar las arrugas porque este péptido suprime la secreción de acetilcolinain vitro,y muestra un efecto de relajación muscularin vivosimilar al Botox.

[0176] Ejemplo experimental 7: Confirmación de la penetración del péptido en las células o patrón de penetración en el tejido

[0177] Se preparó un conjugado "rodamina-péptido" utilizado para confirmar la penetración del péptido mencionado anteriormente en células o un patrón de penetración en tejido, como sigue. Se prepararon 10 mg/ml de dicha solución peptídica utilizando bicarbonato sódico 100 mM (pH 9,0). Se preparó 1 mg/ml de una solución de NHS-rodamina (Thermo Scientific, 46406) utilizando dimetilformamida. Las soluciones se mezclaron de modo que la proporción molar del péptido y el conjugado NHS-rodamina fuera de 1:10. Tras apantallar la luz, la mezcla resultante se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante una hora mientras se invertía. La solución de reacción se dializó y, a continuación, se sometió a LC/MS para confirmar la conjugación entre la rodamina y dicho péptido.

[0178] 7-1: Confirmación de la penetración del péptido en las células

[0179] Las células SH-SY5Y se sembraron a una densidad de 3 * 105 células/pocillo en una placa de 6 pocillos. Tras cultivar las células durante toda la noche, se sustituyó el medio por DMEM sin suero. La solución de cultivo se trató con una concentración creciente del péptido mencionado anteriormente marcado con un material fluorescente (es decir, rodamina) durante 4 horas. Después de 4 horas, la solución de cultivo se trató con paraformaldehído al 4 % para fijar las células. A continuación, las células se sometieron a tinción nuclear con un kit de tinción DAPI (Invitrogen, Estados Unidos). La penetración del péptido en las células se observó con un microscopio de fluorescencia. El azul representa los núcleos de las células teñidos con DAPI, y el rojo representa un conjugado de "péptido inventivo de rodamina".

[0180] Como se muestra en la FIG. 11, se confirmó que el péptido penetraba en las células SH-SY5Y cuando se trataba con él la solución de cultivo.

[0181] 7- 2: Confirmación del patrón de penetración tisular del péptido

[0182] Se retiró pelo de la espalda de una rata SD de 7 semanas de edad, y se aplicaron rodamina y el péptido mencionado anteriormente sobre la espalda de la rata. Al cabo de una hora, la rata fue sacrificada para su análisis. Se recogió una parte aplicada del tejido cutáneo y se fijó en formol durante un día. Se preparó un bloque de parafina a partir del tejido fijado y se microtomó en rodajas, que luego se sometieron a tinción inmunohistoquímica utilizando un marcador neuronal TrkB Ab (Cell Signaling, Estados Unidos). A continuación, las células se sometieron a tinción nuclear con un kit de tinción DAPI (Invitrogen, Estados Unidos). La penetración del péptido en las células se observó con un microscopio de fluorescencia. El azul representa los núcleos de las células teñidas con DAPI, el rojo representa un conjugado "rodamina-péptido" y el verde representa TrkB (un marcador de fibras nerviosas).

[0183] A partir de los resultados obtenidos, se confirmó que dicho péptido penetró hasta la túnica muscular del tejido cutáneo cuando la piel se trató con el péptido, como se muestra en la FIG. 12. Además, se confirmó que el péptido estaba colocalizado con el marcador neuronal. Al observar la imagen ampliada de la FIG. 12, se confirmó que el péptido y las neuronas alrededor de los folículos pilosos o las glándulas sebáceas estaban colocalizados (FI<g>S. 13 y 14).

[0184] Sumario del ejemplo experimental 7:

[0185] Este péptido puede penetrar en las células, penetra hasta la túnica muscular del tejido cutáneo y se colocaliza con el marcador neuronal en la túnica muscular. Por lo tanto, se espera que el péptido participe en la formación del complejo SNARE que participa en la entrega de neurotransmisores de las neuronas, mostrando así un efecto de relajación muscular.

[0186] Ejemplo experimental 8: Confirmación del efecto de mejora de las arrugas del péptido (aumento de la expresión de los componentes dérmicos)

[0187] Se aplicó una solución liposomal que incluía 4.000 ppm del péptido mencionado anteriormente sobre el dorso de un ratón sin pelo de 7 semanas de edad dos veces al día durante un total de 12 semanas. Tras observar a simple vista la parte aplicada, se recogió el tejido cutáneo y se fijó en formol. Se preparó un bloque de parafina a partir del tejido fijado y se microtomó para preparar portaobjetos de tejido.

[0188] 8- 1: Confirmación del efecto reductor de las arrugas

[0189] En el grupo de ratones sobre el que se aplicó una solución liposomal que incluía el péptido durante 12 semanas, los ratones se observaron a simple vista y se observaron al microscopio. Como resultado, se observó que las arrugas se redujeron significativamente con el efecto de relajación muscular en todos los ratones, en comparación con el control en el que sólo se aplicó la solución de liposomas (FIGS. 15 y 16).

[0190] 8-2: Evaluación del nivel de expresión del colágeno

[0191] Los portaobjetos de tejido se tiñeron utilizando un kit de tinción Tricrómica de Masson (Abcam, Estados Unidos), y después se observaron utilizando un microscopio óptico.

[0192] Se confirmó que un nivel de expresión de colágeno aumentó en el grupo de ratones en los que se aplicó la solución liposomal que incluía el péptido durante 12 semanas, en comparación con el control en el que solo se aplicó la solución liposomal (FIG. 17).

[0193] 8-3: Evaluación de los niveles de expresión de elastina y fibronectina

[0194] Los portaobjetos de tejido se sometieron a tinción inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo de elastina y un anticuerpo de fibronectina (Cell signaling, Estados Unidos), seguido de tinción nuclear utilizando un kit de tinción DAPI (Invitrogen, Estados Unidos). Los portaobjetos de tejido teñidos se observaron con un microscopio de fluorescencia.

[0195] Se confirmó que los niveles de expresión de elastina y fibronectina aumentaron en el grupo de ratones sobre el que se aplicó la solución liposomal que incluía dicho péptido durante 12 semanas, en comparación con el control sobre el que sólo se aplicó la solución liposomal (FIGS. 18 y 19).

[0196] Ejemplo experimental 9: Confirmación del efecto inhibidor del péptido sobre la producción de sebo

[0197] Se aplicó una solución liposomal que incluía 4.000 ppm del péptido mencionado anteriormente sobre el dorso de un ratón sin pelo de 7 semanas de edad dos veces al día durante un total de 12 semanas. Tras observar a simple vista la parte aplicada, se recogió el tejido cutáneo y se fijó en formol. Se preparó un bloque de parafina a partir del tejido fijado y se microtomó para preparar portaobjetos de tejido. Los portaobjetos de tejido se sometieron a tinción inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo contra la sintasa de ácidos grasos (Cell Signaling, Estados Unidos) como marcador relacionado con la producción de sebo, y los portaobjetos de tejido teñidos se observaron con un microscopio óptico.

[0198] Se confirmó que el número de glándulas sebáceas se redujo, y un nivel de expresión del marcador relacionado con la producción de sebo se redujo en el grupo de ratones en el que se aplicó la solución de liposomas que incluía dicho péptido durante 12 semanas, en comparación con el control en el que solo se aplicó la solución de liposomas (FIG. 20). El panel izquierdo de la FIG. 20 muestra los resultados obtenidos aplicando el liposoma que no incluía el péptido durante 12 semanas, y el panel derecho muestra los resultados obtenidos aplicando el liposoma que incluía 4.000 ppm del péptido durante 12 semanas. A este respecto, puede observarse que las partes inmunotintadas de color marrón se desvanecían y el número de partes inmunotintadas se reducía a medida que se aplicaba el liposoma peptídico.

[0199] Ejemplo de preparación 2: Preparación de la formulación cosmética

[0200] 2-1: Preparación de la esencia

[0201] Se preparó una esencia utilizando el péptido mencionado anteriormente, basándose en los contenidos (parte(s) en peso) enumerados en la siguiente Tabla 1.

[0202] [Tabla 1]

[0205]

[0208] 2-2: Preparación del tóner

[0209] Se preparó un tóner que incluía dicho péptido como ingrediente activo como se indica en la siguiente Tabla 2.

[0210] [Tabla 2]

[0213]

[0214] (continuación)

[0216]

[0218] 2-3: Preparación de la crema nutritiva

[0219] Se preparó una crema nutritiva que incluía el péptido mencionado anteriormente como el ingrediente activo basándose en las composiciones como se indica en la siguiente Tabla 3.

[0220] [Tabla 3]

[0222]

[0223] (continuación)

[0225]

[0227] 2-4: Preparación de la loción

[0228] Se preparó una loción que incluía el péptido mencionado anteriormente como el ingrediente activo basándose en las composiciones como se indica en la siguiente Tabla 4.

[0229] [Tabla 4]

[0231]

[0232] (continuación)

[0235]

[0238] Ejemplo de preparación 3: Preparación de la composición farmacéutica

[0239] 3-1: Preparación del polvo

[0240] Péptido mencionado anteriormente 2 g

[0241] Lactosa 1 g

[0242] Los componentes se mezclaron, y luego se llenaron en un envase hermético para preparar un polvo.

[0243] 3-2: Preparación del comprimido

[0244] Péptido mencionado anteriormente 100 mg

[0245] Almidón de maíz 100 mg

[0246] Lactosa 100 mg

[0247] Estearato de magnesio 2 mg

[0248] Los componentes se mezclaron, y después se comprimieron para preparar un comprimido según un método convencional de preparación de un comprimido.

[0249] 3-3: Preparación de la cápsula

[0250] Péptido mencionado anteriormente 100 mg

[0251] Almidón de maíz 100 mg

[0252] Lactosa 100 mg

[0253] Estearato de magnesio 2 mg

[0254] Los componentes se mezclaron, y después se rellenaron en una cápsula de gelatina para preparar una cápsula según un método convencional de preparación de una cápsula.

[0255] 3-4: Preparación de la píldora

[0256] Péptido mencionado anteriormente<1 g>

[0257] Lactosa 1,5 g

[0258] Glicerina<1 g>

[0259] Xilitol 0,5 g

[0260] Los componentes se mezclaron, y después se procesaron de acuerdo con un método convencional para preparar una píldora de manera que los componentes se incluyeron en un contenido de un total de 4 g por píldora.

[0261] 3-5: Preparación del gránulo

[0262] Péptido mencionado anteriormente 150 mg

[0263] Extracto de soja 50 mg

[0264] Glucosa 200 mg

[0265] Almidón 600 mg

[0266] Los componentes se mezclaron, y a continuación se añadieron 100 mg de etanol al 30 %. La mezcla resultante se secó a un grado Celsius de 60 °C para formar un gránulo, que luego se envasó.

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para su uso en la relajación muscular que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 como principio activo.

2. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el péptido se incluye en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición farmacéutica.

3. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, para prevenir o tratar una enfermedad neuromuscular.

4. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 3, en la que la enfermedad neuromuscular comprende cualquiera seleccionada del grupo que consiste en tics de párpados, tortícolis, distonía cervical, blefarospasmo tónico, hiperhidrosis axilar, fisura anal, colpospasmo, acalasia, un trastorno de cefalea, hiperactividad del detrusor idiopática y neurogénica, distonía focal, dolor/trastorno de la articulación temporomandibular, neuropatía diabética, disfunción de las cuerdas vocales, estrabismo, neuropatía crónica, hipertrofia muscular facial, disinergia detrusor-esfínter e hiperplasia benigna de próstata.

5. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 4, en la que el trastorno de cefalea es migraña.

6. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el péptido suprime la secreción de acetilcolina.

7. Uso cosmético de una composición que comprende un péptido que consiste de una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 como principio activo para mejorar una afección cutánea.

8. El uso cosmético según la reivindicación 7, para mejorar las arrugas de la piel o suprimir la producción de sebo.

9. El uso cosmético según la reivindicación 7, en el que el péptido se incluye en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición cosmética.

10. El uso cosmético según la reivindicación 7, en el que el péptido aumenta la expresión de colágeno.

11. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del acné que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos establecida en SEQ ID NO: 1 como principio activo.

12. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 11, en la que el péptido se incluye en un contenido del 0,001 % en peso al 60 % en peso, basado en el 100 % en peso de la composición farmacéutica.