ES3053814T3 - Crystal of pde3/pde4 dual inhibitor and use thereof - Google Patents

Abstract

Se proporciona un cristal de un compuesto tricíclico como se muestra en la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un método de preparación para el mismo, y el uso del mismo en la preparación de un fármaco para tratar enfermedades relacionadas con PDE3 y/o PDE4. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Cristal de inhibidor doble de PDE3/PDE4 y uso del mismo

[0003] Referencia a solicitudes relacionadas

[0004] La presente solicitud reivindica el beneficio y la prioridad de la Solicitud de Patente China Nº 202010043882.5 presentada a la administración nacional china de la propiedad intelectual el 15 de enero de 2020.

[0005] Campo técnico

[0006] La presente solicitud se refiere a una forma cristalina de un inhibidor doble de PDE3/PDE4 y al uso del mismo en el tratamiento de una enfermedad asociada con PDE3/PDE4, particularmente enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

[0007] Antecedentes

[0008] Las fosfodiesterasas (PDE) son una superfamilia de sistemas enzimáticos que incluyen 11 miembros que participan en diferentes rutas de señalización y regulan diferentes procesos fisiológicos. Entre ellas, la PDE3 es una fosfodiesterasa principal en el músculo liso de las vías respiratorias (ASM) humano, y la inhibición de PDE3 aumenta la concentración de AMPc intracelular y así relaja el músculo liso bronquial. La PDE4 desempeña un papel regulador importante en la expresión de mediadores proinflamatorios y antiinflamatorios, y un inhibidor de PDE4 puede inhibir la liberación de mediadores nocivos procedentes de células inflamatorias. Por tanto, en teoría, un inhibidor que inhibe tanto PDE3 como PDE4 tendría tanto la broncodilatación de un agonista de adrenorreceptores ß como la acción antiinflamatoria de un glucocorticoide inhalado. La complementación funcional de la doble selección es teóricamente más eficaz que una única selección, proporcionando un efecto terapéutico que puede lograrse sólo mediante una combinación que en la actualidad se logra mediante una monoterapia y eliminando así el defecto de que las propiedades fisicoquímicas de los ingredientes de medicamentos usados en una combinación no puedan coincidir completamente. De esta manera, la administración se simplifica, y es conveniente para un régimen de dosis fija.

[0009] Victoria Boswell y cols.,J. Pharmaco. Experi. Therap., 2006, 318:840-848 y el documento WO200005830 presentaron que los compuestos RPL554 y RPL565 tienen un efecto broncodilatador y antiinflamatorio de acción prolongada, así como una escasa solubilidad, un alta depuración plasmática y otras propiedades fisicoquímicas, y son adecuados para la administración por inhalación. Pero los datos también mostraban que la actividad inhibidora de PDE4 es insatisfactoria, y el efecto antiinflamatorio es insuficiente. Así, todavía existe la necesidad de desarrollar un compuesto que tenga buena actividad inhibidora de PDE3/4. Generalmente, es deseable que los medicamentos tengan excelentes propiedades en: actividad farmacéutica, farmacocinética, biodisponibilidad, higroscopicidad, punto de fusión, estabilidad, solubilidad, pureza, facilidad de preparación, etc., para cumplir los requisitos de los medicamentos en cuanto a producción, almacenamiento, formulación, etc. Así, todavía existe la necesidad de desarrollar una forma cristalina de un compuesto que tenga actividad inhibidora de PDE3/4.

[0011]

[0013] Compendio

[0014] En un aspecto, la presente solicitud proporciona una forma cristalina de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0016]

[0017] En algunas realizaciones, la presente solicitud proporciona una forma cristalina del compuesto de fórmula (I). En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina A del compuesto de fórmula (I) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2° y 11,50 ± 0,2°.

[0018] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2° y 16,35 ± 0,2°.

[0019] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 9,35 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2°, 14,52 ± 0,2°, 16,35 ± 0,2°, 21,52 ± 0,2° y 24,57 ± 0,2°.

[0020] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 9,35 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2°, 14,52 ± 0,2°, 16,35 ± 0,2°, 21,52 ± 0,2° y 24,57 ± 0,2°.

[0021] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A comprende 4, 5, 6, 7 u 8 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2° y 16,35 ± 0,2°. En algunas realizaciones de la presente solicitud, las posiciones e intensidades relativas de los picos de difracción en el patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα de la forma cristalina A descrita anteriormente se muestran en la Tabla 1 a continuación:

[0022] Tabla 1

[0024]

[0027] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 1.

[0028] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos endotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 146,23 ± 2°C y/o 162,19 ± 2°C.

[0029] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos exotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 172,65 ± 2°C y/o 241,73 ± 2°C.

[0030] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene picos endotérmicos a 146,23 ± 2°C y 162,19 ± 2°C y picos exotérmicos a 172,65 ± 2°C y 241,73 ± 2°C en una curva de calorimetría diferencial de barrido. En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de calorimetría diferencial de barrido como el mostrado en la Figura 2.

[0031] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene una pérdida de peso de 0,4611% a 118,40 ± 2°C, una pérdida de peso de 0,8796% a 118,40 ± 2°C a 185,65 ± 2°C y una pérdida de peso de 7,177% a 185,65 ± 2°C a 260,07 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0032] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina A tiene un patrón de análisis termogravimétrico como el mostrado en la Figura 3.

[0033] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina A que comprende: precipitar un compuesto de fórmula (I) en un disolvente de metanol.

[0034] En algunas realizaciones, el procedimiento se lleva a cabo en condiciones de agitación a 40°C.

[0035] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina B del compuesto de fórmula (I) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2° y 24,73 ± 0,2°.

[0036] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0037] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0038] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 9,13 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 11,60 ± 0,2°, 12,82 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 18,91 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,36 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2°, 25,78 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0039] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B comprende 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o más picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 9,13 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 11,60 ± 0,2°, 12,82 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 18,91 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,36 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2°, 25,78 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0040] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B comprende 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 11 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0041] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B comprende 5, 6, 7, 8 o 9 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°.

[0042] En algunas realizaciones de la presente solicitud, las posiciones e intensidades relativas de los picos de difracción en el patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα de la forma cristalina B descrita anteriormente se muestran en la Tabla 2 a continuación:

[0043] Tabla 2

[0045]

[0046]

[0049] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 4.

[0050] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene picos exotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 247,70 ± 2°C.

[0051] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene un patrón de calorimetría diferencial de barrido como el mostrado en la Figura 5.

[0052] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene una pérdida de peso de 0,4870% a 155,75 ± 2°C y una pérdida de peso de 7,287% a 155,75 ± 2°C a 262,18 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0053] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina B tiene un patrón de análisis termogravimétrico como el mostrado en la Figura 6.

[0054] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina B que comprende: precipitar el compuesto de fórmula (I) en un disolvente mixto de etanol y agua.

[0055] En algunas realizaciones, el procedimiento se efectúa en condiciones de agitación a 40°C.

[0056] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina C del compuesto de fórmula (I) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2° y 14,34 ± 0,2°.

[0057] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°.

[0058] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 9,07 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2°, 18,15 ± 0,2°, 19,26 ± 0,2°, 20,85 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°.

[0059] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 9,07 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2°, 18,15 ± 0,2°, 19,26 ± 0,2°, 20,85 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°.

[0060] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C comprende 4, 5, 6, 7, 8 o 9 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°.

[0061] En algunas realizaciones de la presente solicitud, las posiciones e intensidades relativas de los picos de difracción en el patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα de la forma cristalina C descrita anteriormente se muestran en la Tabla 3 a continuación:

[0062] Tabla 3

[0063]

[0066] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 7.

[0067] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene picos exotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 152,26 ± 2°C y/o 247,92 ± 2°C.

[0068] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene un patrón de calorimetría diferencial de barrido como el mostrado en la Figura 8.

[0069] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene una pérdida de peso de 1,1460% a 152,80 ± 2°C y una pérdida de peso de 7,871% a 152,80 ± 2°C a 262,77 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0070] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina C tiene un patrón de análisis termogravimétrico como el mostrado en la Figura 9.

[0071] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina C que comprende: precipitar un compuesto de fórmula (I) en un disolvente de acetonitrilo.

[0072] En algunas realizaciones, el procedimiento se lleva a cabo en condiciones de agitación a 40°C.

[0073] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I), donde la sal farmacéuticamente aceptable es sulfato,p-toluenosulfonato, metanosulfonato o maleato.

[0074] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona una forma cristalina de la sal del compuesto de fórmula (I). En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además sulfato del compuesto de fórmula (I); en algunas realizaciones, el sulfato del compuesto de fórmula (I) se selecciona de un compuesto de fórmula (II),

[0076]

[0078] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina del compuesto de fórmula (II) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,84 ± 0,2°, 9,58 ± 0,2°, 11,97 ± 0,2° y 14,75 ± 0,2°.

[0079] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,84 ± 0,2°, 9,58 ± 0,2°, 10,93 ± 0,2°, 11,97 ± 0,2°, 14,31 ± 0,2°, 14,75 ± 0,2°, 16,49 ± 0,2° y 24,42 ± 0,2°.

[0080] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,84 ± 0,2°, 9,58 ± 0,2°, 10,93 ± 0,2°, 11,97 ± 0,2°, 12,72 ± 0,2°, 13,93 ± 0,2°, 14,31 ± 0,2°, 14,75 ± 0,2°, 16,49 ± 0,2°, 17,91 ± 0,2°, 19,25 ± 0,2°, 19,90 ± 0,2°, 20,57 ± 0,2°, 24,42 ± 0,2° y 25,70 ± 0,2°.

[0081] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o más picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,84 ± 0,2°, 9,58 ± 0,2°, 10,93 ± 0,2°, 11,97 ± 0,2°, 12,72 ± 0,2°, 13,93 ± 0,2°, 14,31 ± 0,2°, 14,75 ± 0,2°, 16,49 ± 0,2°, 17,91 ± 0,2°, 19,25 ± 0,2°, 19,90 ± 0,2°, 20,57 ± 0,2°, 24,42 ± 0,2° y 25,70 ± 0,2°.

[0082] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) comprende 4, 5, 6, 7 u 8 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,84 ± 0,2°, 9,58 ± 0,2°, 10,93 ± 0,2°, 11,97 ± 0,2°, 14,31 ± 0,2°, 14,75 ± 0,2°, 16,49 ± 0,2° y 24,42 ± 0,2°.

[0083] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) tiene picos de difracción en un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα con posiciones e intensidades relativas de los picos como las mostradas en la Tabla 4 a continuación:

[0084] Tabla 4

[0086]

[0089] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (II) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 10.

[0090] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además elp-toluenosulfonato del compuesto de fórmula (I); en algunas realizaciones, elp-toluenosulfonato del compuesto de fórmula (I) se selecciona de un compuesto de fórmula (III),

[0091]

[0094] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina del compuesto de fórmula (III) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 6,53 ± 0,2°, 12,48 ± 0,2° y 13,11 ± 0,2°.

[0095] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 6,53 ± 0,2°, 10,87 ± 0,2°, 12,48 ± 0,2°, 13,11 ± 0,2°, 16,58 ± 0,2° y 25,03 ± 0,2°.

[0096] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene picos de difracción en el patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 6,53 ± 0,2°, 10,87 ± 0,2° 12,48 ± 0,2°, 13,11 ± 0,2°, 14,04 ± 0,2°, 16,58 ± 0,2°, 25,03 ± 0,2°, 25,56 ± 0,2° y 26,66 ± 0,2°.

[0097] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) comprende 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 6,53 ± 0,2°, 10,87 ± 0,2°, 12,48 ± 0,2°, 13,11 ± 0,2°, 14,04 ± 0,2°, 16,58 ± 0,2°, 25,03 ± 0,2°, 25,56 ± 0,2° y 26,66 ± 0,2°.

[0098] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) comprende 3, 4, 5 o 6 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 6,53 ± 0,2°, 10,87 ± 0,2°, 12,48 ± 0,2°, 13,11 ± 0,2°, 16,58 ± 0,2° y 25,03 ± 0,2°. En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene picos de difracción en un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα con posiciones e intensidades relativas de los picos como las mostradas en la Tabla 5 a continuación:

[0099] Tabla 5

[0101]

[0103] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 11.

[0104] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene una pérdida de peso de 1,785% a 148,23 ± 2°C y una pérdida de peso de 5,790% a 148,23 ± 2°C a 240,99 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0105] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (III) tiene un patrón de TGA como el mostrado en la Figura 12.

[0106] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además el metanosulfonato del compuesto de fórmula (I); en algunas realizaciones, el metanosulfonato del compuesto de fórmula (I) se selecciona de un compuesto de fórmula (IV),

[0108]

[0110] La presente solicitud proporciona además una forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2° y 24,45 ± 0,2°.

[0111] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 24,45 ± 0,2° y 25,87 ± 0,2°. En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene picos de difracción en el patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,08 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 19,23 ± 0,2°, 19,72 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 23,27 ± 0,2° 24,45 ± 0,2° y 25,87 ± 0,2°.

[0112] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 13,88 ± 0,2°, 15,49 ± 0,2°, 16,04 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,08 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,54 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 19,23 ± 0,2°, 19,72 ± 0,2°, 20,02 ± 0,2°, 20,51 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 23,27 ± 0,2°, 24,45 ± 0,2°, 24,83 ± 0,2°, 25,42 ± 0,2°, 25,87 ± 0,2°, 26,09 ± 0,2° y 29,53 ± 0,2°.

[0113] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o más picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 13,88 ± 0,2°, 15,49 ± 0,2°, 16,04 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,08 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,54 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 19,23 ± 0,2°, 19,72 ± 0,2°, 20,02 ± 0,2°, 20,51 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 23,27 ± 0,2°, 24,45 ± 0,2°, 24,83 ± 0,2°, 25,42 ± 0,2°, 25,87 ± 0,2°, 26,09 ± 0,2° y 29,53 ± 0,2°.

[0114] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,08 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 19,23 ± 0,2°, 19,72 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 23,27 ± 0,2°, 24,45 ± 0,2° y 25,87 ± 0,2°.

[0115] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) comprende 4, 5, 6, 7 u 8 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 11,22 ± 0,2°, 12,58 ± 0,2°, 16,43 ± 0,2°, 17,90 ± 0,2°, 18,85 ± 0,2°, 22,62 ± 0,2°, 24,45 ± 0,2° y 25,87 ± 0,2°.

[0116] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene picos de difracción en un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα con posiciones e intensidades relativas de los picos como las mostradas en la Tabla 6 a continuación:

[0117] Tabla 6

[0119]

[0120]

[0122] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 13.

[0123] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene un pico endotérmico a 191,35 ± 2°C y/o un pico exotérmico a 222,21 ± 2°C en una curva de calorimetría diferencial de barrido.

[0124] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene un patrón de calorimetría diferencial de barrido como el mostrado en la Figura 14.

[0125] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene una pérdida de peso de 5,427% a 168,57 ± 2°C, una pérdida de peso de 4,678% a 168,57 ± 2°C a 192,84 ± 2°C, y una pérdida de peso de 4,621% a 192,84 ± 2°C a 238,22 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0126] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV) tiene un patrón de análisis termogravimétrico como el mostrado en la Figura 15.

[0127] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además el maleato del compuesto de fórmula (I); en algunas realizaciones, el maleato del compuesto de fórmula (I) se selecciona de un compuesto de fórmula (V),

[0129]

[0131] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además una forma cristalina del compuesto de fórmula (V) que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,83 ± 0,2°, 6,62 ± 0,2°, 9,50 ± 0,2° y 10,98 ± 0,2°.

[0132] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,83 ± 0,2°, 6,62 ± 0,2°, 9,50 ± 0,2°, 10,98 ± 0,2°, 17,16 ± 0,2°, 19,05 ± 0,2°, 24,71 ± 0,2° y 25,16 ± 0,2°.

[0133] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene picos de difracción en el patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,83 ± 0,2°, 6,62 ± 0,2°, 9,50 ± 0,2°, 10,98 ± 0,2°, 11,59 ± 0,2°, 13,23 ± 0,2°, 16,27 ± 0,2°, 17,16 ± 0,2°, 19,05 ± 0,2°, 21,63 ± 0,2°, 24,71 ± 0,2° y 25,16 ± 0,2°.

[0134] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) comprende 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,83 ± 0,2°, 6,62 ± 0,2°, 9,50 ± 0,2°, 10,98 ± 0,2°, 11,59 ± 0,2°, 13,23 ± 0,2°, 16,27 ± 0,2°, 17,16 ± 0,2°, 19,05 ± 0,2°, 21,63 ± 0,2°, 24,71 ± 0,2° y 25,16 ± 0,2°.

[0135] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) comprende 4, 5, 6, 7 u 8 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,83 ± 0,2°, 6,62 ± 0,2°, 9,50 ± 0,2°, 10,98 ± 0,2°, 17,16 ± 0,2°, 19,05 ± 0,2°, 24,71 ± 0,2° y 25,16 ± 0,2°.

[0136] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene picos de difracción en un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα con posiciones e intensidades relativas de los picos como las mostradas en la Tabla 7 a continuación:

[0137] Tabla 7

[0139]

[0141] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 16.

[0142] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene una pérdida de peso de 1,928% a 155,26 ± 2°C en una curva de análisis termogravimétrico.

[0143] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la forma cristalina del compuesto de fórmula (V) tiene un patrón de análisis termogravimétrico como el mostrado en la Figura 17.

[0144] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar una sal del compuesto de fórmula (I) que comprende: mezclar el compuesto de fórmula (I) con tetrahidrofurano; añadir una solución acuosa de un ácido (o una base); y separar la mezcla para dar la sal correspondiente.

[0145] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona una composición cristalina que comprende la forma cristalina, donde la forma cristalina representa el 50% o más, preferentemente el 80% o más, más preferentemente el 90% o más, y lo más preferentemente el 95% o más del peso de la composición cristalina.

[0146] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

[0148]

[0150] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0151] (1) hacer reaccionar el compuesto 1-2a para dar el compuesto BB-4; y

[0152] (2) hacer reaccionar el compuesto BB-4 con ácido 5-hidroxi-3-metil-1,2,3-triazol-4-carboxílico para dar el compuesto de fórmula (I).

[0153]

[0155] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), que comprende las etapas (1) y (2) anteriores.

[0156] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto 1-2a que comprende: hacer reaccionar el compuesto BB-1 con el compuesto 1-1a para dar el compuesto 1-2a

[0158]

[0160] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona el compuesto 1-2a o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0162]

[0164] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto BB-4 que comprende:

[0165] a) hacer reaccionar el compuesto BB-1 con el compuesto 1-1a para dar el compuesto 1-2a; y

[0166] (b) hacer reaccionar el compuesto 1-2a para dar el compuesto BB-4;

[0168]

[0170] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0172]

[0174] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0175] (1') hacer reaccionar el compuesto BB-1 con el compuesto 1-1a para dar el compuesto 1-2a;

[0176] (2') hacer reaccionar el compuesto 1-2a para dar el compuesto BB-4; y

[0177] (3') hacer reaccionar el compuesto BB-4 con ácido 5-hidroxi-3-metil-1,2,3-triazol-4-carboxílico para dar el compuesto de fórmula (I);

[0179]

[0181] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), que comprende las etapas (1'), (2') y (3') anteriores.

[0182] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-2a se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona del grupo que consiste en acetonitrilo y agua.

[0183] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-2a se efectúa en presencia de una base; en algunas realizaciones, la base se selecciona de carbonato de litio.

[0184] En algunas realizaciones, el compuesto 1-2a se prepara mediante los siguientes procedimientos: disolver el compuesto BB-1 y el compuesto 1-1a en acetonitrilo y añadir carbonato de litio y agua para la reacción.

[0185] En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto 1-2a es de 100°C. En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto 1-2a es 70 h.

[0186] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-2a, la relación molar del compuesto BB-1 al compuesto 1-1a es 1:6.

[0187] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 se efectúa en presencia de cloruro de hidrógeno. En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de metanol.

[0188] En algunas realizaciones, el compuesto BB-4 se prepara mediante los siguientes procedimientos: hacer reaccionar el compuesto 1-2a en una solución de cloruro de hidrógeno en metanol para dar el compuesto BB-4.

[0189] En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto BB-4 es de 60°C. En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto BB-4 es de 2 h.

[0190] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 comprende además tratar la mezcla resultante con éter de petróleo y acetato de etilo después de la reacción.

[0191] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4 se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de diclorometano.

[0192] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4 se efectúa en presencia de una base; en algunas realizaciones, la base se selecciona de trietilamina.

[0193] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4 se efectúa en presencia de un agente de condensación; en algunas realizaciones, el agente de condensación se selecciona de HATU.

[0194] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4, la relación molar de ácido 5-hidroxi-3-metil-1,2,3-triazol-4-carboxílico al compuesto BB-4 es 1:(1-1,2).

[0195] En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4 es de 20°C.

[0196] En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto BB-4 es de 16 h.

[0197] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0199]

[0201] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante el siguiente procedimiento: hacer reaccionar el compuesto 1-4b para dar el compuesto de fórmula (I)

[0203]

[0205] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), que comprende: hacer reaccionar el compuesto 1-4b para dar el compuesto de fórmula (I).

[0206] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto 1-4b, que comprende: hacer reaccionar el compuesto BB-4 con el compuesto 1-3b para dar el compuesto 1-4b

[0208]

[0210] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto BB-4, que comprende: hacer reaccionar el compuesto 1-1b para dar el compuesto BB-4

[0212]

[0214] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto 1-1b, que comprende: hacer reaccionar el compuesto BB-1 con el compuesto a para dar el compuesto 1-1b

[0215]

[0217] donde X se selecciona del grupo que consiste en halógenos.

[0218] En algunas realizaciones, X se selecciona del grupo que consiste en Cl y Br; en algunas realizaciones, X se selecciona de Br.

[0219] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0221]

[0223] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0224] (i) hacer reaccionar el compuesto BB-4 con el compuesto 1-3b para dar el compuesto 1-4b; y

[0225] (ii) hacer reaccionar el compuesto 1-4b para dar el compuesto de fórmula (I).

[0226] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), que comprende las etapas (i) y (ii) anteriores.

[0227] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0229]

[0231] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0232] (i') hacer reaccionar el compuesto 1-1b para dar el compuesto BB-4;

[0233] (ii') hacer reaccionar el compuesto BB-4 con el compuesto 1-3b para dar el compuesto 1-4b; y

[0234] (iii') hacer reaccionar el compuesto 1-4b para dar el compuesto de fórmula (I).

[0235] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), que comprende las etapas (i'), (ii') y (iii') anteriores.

[0236] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0237]

[0239] El compuesto de fórmula (I) se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0240] (i") hacer reaccionar el compuesto BB-1 con el compuesto a para dar el compuesto 1-1b;

[0241] (ii") hacer reaccionar el compuesto 1-1b para dar el compuesto BB-4;

[0242] (iii") hacer reaccionar el compuesto BB-4 con el compuesto 1-3b para dar el compuesto 1-4b; y

[0243] (iv") hacer reaccionar el compuesto 1-4b para dar el compuesto de fórmula (I);

[0245]

[0248] donde X se selecciona del grupo que consiste en halógenos.

[0249] En algunas realizaciones, X se selecciona del grupo que consiste en Cl y Br; en algunas realizaciones, X se selecciona de Br.

[0250] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona un método para preparar el compuesto de fórmula (I), y el método comprende las etapas (i"), (ii"), (iii") y (iv") anteriores.

[0251] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona el compuesto 1-1b o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0253]

[0255] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona el compuesto 1-4b o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

[0256]

[0258] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-1b se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de 2-butanona.

[0259] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-1b se efectúa en presencia de un catalizador; en algunas realizaciones, el catalizador se selecciona de fosfato potásico, por ejemplo, fosfato potásico anhidro.

[0260] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-1b se efectúa en presencia de un codisolvente; en algunas realizaciones, el codisolvente se selecciona de yoduro sódico.

[0261] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-1b se efectúa en presencia de fosfato potásico y yoduro sódico.

[0262] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-1b, la relación molar del compuesto BB-1 al compuesto a es 1:3.

[0263] En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto 1-1b es de 90°C.

[0264] En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto 1-1b es de 18 h.

[0265] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de tetrahidrofurano.

[0266] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 se efectúa en presencia de dimetilsulfuro de borano. En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto BB-4 es de 20-25°C. En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto BB-4 es de 18 h.

[0267] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 comprende: añadir el compuesto 1-1b a una mezcla de tetrahidrofurano y dimetilsulfuro de borano a 0°C; y calentar el sistema para la reacción. En algunas realizaciones, el sistema se calienta hasta 20-25°C para la reacción.

[0268] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto BB-4 comprende: enfriar el sistema (por ejemplo, hasta 0°C) después de un período de reacción (por ejemplo, 18 h); la preparación comprende, además: añadir metanol después de enfriar; la preparación comprende además: ajustar el pH después de añadir metanol; la preparación comprende además: concentrar después de ajustar el pH; la preparación comprende además: purificar.

[0269] En algunas realizaciones, ajustar el pH después de añadir metanol comprende ajustar el pH hasta 2-3.

[0270] En algunas realizaciones, ajustar el pH después de añadir metanol comprende ajustar el pH usando ácido clorhídrico.

[0271] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, la relación molar del compuesto BB-4 al compuesto 1-3b es 1:(1-1,5).

[0272] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-4b se efectúa en presencia de un agente de condensación; en algunas realizaciones, el agente de condensación esN,N-carbonildiimidazol.

[0273] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-4b comprende: hacer reaccionar el compuesto 1-3b con un agente de condensación (por ejemplo,N,N-carbonildiimidazol), y hacer reaccionar la mezcla resultante con el compuesto BB-4 para dar el compuesto 1-4b.

[0274] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, la reacción del compuesto 1-3b con un agente de activación se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de diclorometano.

[0275] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, la temperatura de reacción para hacer reaccionar el compuesto 1-3b con el agente de activación es de 25°C.

[0276] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, el tiempo de reacción para hacer reaccionar el compuesto 1-3b con el agente de activación es de 5 h.

[0277] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, la reacción del compuesto 1-3b con el agente de activación y la reacción de la mezcla resultante con el compuesto BB-4 se efectúan en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de DMF.

[0278] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, la temperatura de reacción para hacer reaccionar el compuesto 1-3b con el agente de activación y hacer reaccionar la mezcla resultante con el compuesto BB-4 es de 20-25°C.

[0279] En algunas realizaciones, en la preparación del compuesto 1-4b, el tiempo de reacción para hacer reaccionar el compuesto 1-3b con el agente de activación y hacer reaccionar la mezcla resultante con el compuesto BB-4 es de 18 h.

[0280] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto 1-4b comprende además: añadir metanol para el tratamiento después de la reacción.

[0281] En algunas realizaciones, la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto 1-4b se efectúa en presencia de un disolvente; en algunas realizaciones, el disolvente se selecciona de un disolvente mixto de ácido trifluoroacético y ácido acético.

[0282] En algunas realizaciones, la relación en volumen de ácido trifluoroacético a ácido acético es 5:1.

[0283] En algunas realizaciones, la temperatura de reacción para la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto 1-4b es de 90-100°C.

[0284] En algunas realizaciones, el tiempo de reacción para la preparación del compuesto de fórmula (I) mediante el compuesto 1-4b es de 48 h.

[0285] En algunas realizaciones, para el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el compuesto de fórmula (I) es una forma cristalina, y la forma cristalina es una forma cristalina A del compuesto de fórmula (I), una forma cristalina B del compuesto de fórmula (I) o una forma cristalina C del compuesto de fórmula (I).

[0286] En algunas realizaciones, para el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la sal farmacéuticamente aceptable es sulfato,p- toluenosulfonato, metanosulfonato o maleato.

[0287] El compuesto BB-1 de la presente solicitud se prepara mediante los siguientes procedimientos:

[0289]

[0291] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que comprende: preparar el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo mediante cualquiera de los métodos anteriormente mencionados para preparar el compuesto de fórmula (I) o la sal del mismo; y precipitar el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo en un disolvente seleccionado del grupo que consiste en: metanol, un disolvente mixto de etanol y agua, acetonitrilo y un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua. En algunas realizaciones específicas, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina de la sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I), que comprende: precipitar la sal del compuesto de fórmula (I) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua. En otras realizaciones específicas, la presente solicitud proporciona un método para preparar la forma cristalina de la sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I) que comprende: mezclar el compuesto de fórmula (I) con tetrahidrofurano, añadir una solución acuosa de ácido (y/o base) para la reacción, y precipitar la sal del compuesto de fórmula (I) en un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua en forma de la forma cristalina.

[0292] En otro aspecto más, la presente solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la forma cristalina o la composición cristalina del mismo divulgados en el presente documento. La composición farmacéutica divulgada en el presente documento puede contener o no un excipiente farmacéuticamente aceptable. Además, la composición farmacéutica divulgada en el presente documento puede comprender además uno o más agentes terapéuticos adicionales.

[0293] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además el uso del compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la forma cristalina del mismo, la composición cristalina del mismo o la composición farmacéutica del mismo en la preparación de un medicamento para prevenir o tratar una afección asociada con PDE3 y/o PDE4.

[0294] En otro aspecto, la presente solicitud proporciona además el compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, la forma cristalina del mismo, la composición cristalina del mismo o la composición farmacéutica del mismo para su uso en la prevención o el tratamiento de una afección asociada con PDE3 y/o PDE4.

[0295] En algunas realizaciones de la presente solicitud, la afección asociada con PDE3 y/o PDE4 se selecciona del grupo que consiste en asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).

[0296] Efectos técnicos

[0297] El compuesto de fórmula (I) divulgado en el presente documento tiene un efecto inhibidor doble notable sobre PDE3 y PDE4, tiene un efecto inhibidor significativo sobre TNF-α en células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMC), y también muestra un excelente efecto antiinflamatorio en un modelo de lesión pulmonar aguda en ratas inducido por lipopolisacárido (LPS). El compuesto tiene alta depuración plasmáticain vivo, baja exposición sistémica en plasma mediante administración oral y baja biodisponibilidad oral, y buena seguridad en la administración por vía local. Su efecto inhibidor es bajo en 5 isoenzimas (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4) del citocromo P450 microsómico hepático humano, y se evita el riesgo de interacción fármaco-fármaco. Además, el compuesto reduce los glóbulos blancos totales en BALF, tiene un efecto antiinflamatorio notable, tiene efecto a una dosis baja y reduce el índice de resistencia de las vías respiratorias Penh.

[0298] La forma cristalina del compuesto de fórmula (I) y la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente solicitud tienen ventajas en cuanto a actividad farmacéutica, farmacocinética, biodisponibilidad, higroscopicidad, punto de fusión, estabilidad, solubilidad, pureza, facilidad de preparación, etc., para cumplir los requisitos de farmacia en cuanto a producción, almacenamiento, transporte, formulación, etc.

[0299] En los métodos para preparar el compuesto de fórmula (I) divulgado en el presente documento, en el método 2, el compuesto sustituido con aminoetilo se puede obtener en una etapa, el sistema de reacción es limpio y no se necesita reducción adicional después de que se introduzca un grupo amida o ciano en el método convencional. El procedimiento 3 reemplaza al reactivo genotóxico bromoacetonitrilo por bromoacetamida agenotóxica, reduciendo de ese modo el riesgo de seguridad para la síntesis y el desarrollo del medicamento.

[0300] Definiciones y descripción

[0301] A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y expresiones usados en el presente documento pretenden tener los siguientes significados. Una expresión o término particular, a menos que se defina específicamente lo contrario, no debe considerarse incierto o confuso, sino que debe interpretarse según su significado común. Cuando se hace referencia a un nombre comercial, se pretende hacer referencia a su producto comercial o su principio activo correspondiente.

[0302] Debe observarse que en el patrón de difracción de rayos X en polvo, la posición y la intensidad relativa de un pico pueden variar debido a los instrumentos de medición, los métodos/las condiciones de medición y otros factores. Para cualquier forma cristalina específica, la posición de un pico puede tener un error, y la medición de 2θ puede tener un error de ± 0,2°. Por lo tanto, este error debe considerarse cuando se determine cada forma cristalina, y las formas cristalinas dentro de este margen de error están dentro del alcance de la presente solicitud.

[0303] Debe observarse que, para la misma forma cristalina, la posición de un pico endotérmico en el patrón de DSC (calorimetría diferencial de barrido) puede variar debido a los instrumentos de medición, los métodos/las condiciones de medición y otros factores. Para cualquier forma cristalina específica, la posición de un pico endotérmico puede tener un error de ±5°C o ±3°C. Por lo tanto, este error debe considerarse al determinar cada forma cristalina, y las formas cristalinas dentro de este margen de error están dentro del alcance de la presente solicitud.

[0304] La palabra "comprender", y variantes de la misma tales como "comprende" o "que comprende", o equivalentes se entenderán en un sentido abierto no exclusivo, es decir, "incluye pero no se limita a", indicando que además de los elementos, componentes y procedimientos enumerados, también pueden incluirse otros elementos, componentes y procedimientos no especificados.

[0305] El término "farmacéuticamente aceptable" se usa en el presente documento para aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, y de acuerdo con una relación beneficio/riesgo razonable.

[0306] El término "sal farmacéuticamente aceptable", como una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, puede referirse a una sal metálica, una sal amónica, una sal formada con una base orgánica, una sal formada con un ácido inorgánico, una sal formada con un ácido orgánico, una sal formada con un aminoácido básico o ácido, y similares.

[0307] El término "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sustancia inerte administrada con el principio activo para facilitar la administración del principio activo, incluyendo, pero sin limitarse a, cualquier deslizante, edulcorante, diluyente, conservante, tinte/agente colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, dispersante, disgregante, agente de suspensión, estabilizante, agente isotonizante, disolvente o emulsionante aceptable para su uso en seres humanos o animales (por ejemplo, animales domésticos) como los permitidos por the National Medical Products Administration, PRC. Ejemplos no limitativos de los excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azúcares y tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales y polietilenglicoles.

[0308] El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla que consiste en uno o más de los compuestos o las sales de los mismos divulgados en el presente documento y un excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica está destinada a facilitar la administración del compuesto a una entidad orgánica. La composición farmacéutica divulgada en el presente documento se puede preparar combinando el compuesto divulgado en el presente documento con un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado, y se puede formular, por ejemplo, en una formulación sólida, semisólida, líquida o gaseosa, tal como un comprimido, una píldora, una cápsula, un polvo, un gránulo, una pomada, una emulsión, una suspensión, un supositorio, una inyección, un inhalante, un gel, una microesfera y un aerosol.

[0309] Vías típicas de administración de la forma cristalina o la composición farmacéutica de la misma divulgadas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, administraciones oral, rectal, tópica, inhalatoria, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea e intravenosa.

[0310] La composición farmacéutica divulgada en el presente documento se puede fabricar usando métodos bien conocidos en la técnica, tales como mezcladura convencional, disolución, granulación, preparación de grageas, levigación, emulsificación y liofilización.

[0311] En algunas realizaciones, la composición farmacéutica está en una forma oral. Para la administración oral, la composición farmacéutica puede formularse mezclando los compuestos activos con excipientes farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Estos excipientes permiten que el compuesto divulgado en el presente documento se formule en comprimidos, píldoras, pastillas, grageas, cápsulas, líquidos, geles, lechadas, suspensiones, etc. para administración oral a un paciente.

[0312] Las dosificaciones terapéuticas de los compuestos divulgados en el presente documento pueden determinarse, por ejemplo, mediante el uso específico de un tratamiento, la vía de administración del compuesto, la salud y afección de un paciente, y el criterio de un médico prescriptor. La proporción o concentración del compuesto divulgado en el presente documento en una composición farmacéutica puede no ser constante y depende de una variedad de factores que incluyen las dosificaciones, las propiedades químicas (por ejemplo, hidrofobia) y las vías de administración. El término "tratar" o "tratamiento" significa administrar el compuesto o la formulación descritos en el presente documento para mejorar o eliminar una enfermedad o uno o más síntomas asociados con la enfermedad, e incluye:

[0313] i) inhibir una enfermedad o estado patológico, es decir, detener su desarrollo; y

[0314] (ii) aliviar una enfermedad o estado patológico, es decir, provocar su regresión.

[0315] El término "prevenir" o "prevención" significa administrar el compuesto o la formulación descritos en el presente documento para prevenir una enfermedad o uno o más síntomas asociados con la enfermedad, e incluye: prevenir la aparición de la enfermedad o el estado patológico en un mamífero, particularmente cuando este mamífero está predispuesto al estado patológico, pero aún no se le ha diagnosticado.

[0316] Para fármacos y agentes activos farmacológicos, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un fármaco o un medicamento que es suficiente para proporcionar el efecto deseado y es atóxica. La determinación de la cantidad eficaz varía de persona a persona. Depende de la edad y el estado general de un sujeto, así como de la sustancia activa particular usada. La cantidad efectiva apropiada en un caso puede ser determinada por los expertos en la técnica a la luz de pruebas convencionales.

[0317] La cantidad terapéuticamente eficaz de la forma cristalina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 0,0001 a 20 mg/kg de peso corporal (pc)/día, por ejemplo, de 0,001 a 10 mg/kg pc/día.

[0318] La frecuencia de dosificación de la forma cristalina divulgada en el presente documento depende de las necesidades de un paciente individual, por ejemplo, una o dos veces al día o más veces al día. La administración puede ser intermitente, por ejemplo, en un período de varios días, el paciente recibe una dosis diaria de las formas cristalinas, y en el siguiente período de varios días o más días, el paciente no recibe la dosis diaria de las formas cristalinas.

[0319] A menos que se especifique claramente lo contrario en el presente documento, los términos singulares abarcan términos plurales, y viceversa.

[0320] A menos que se indique lo contrario en el presente documento, debe considerarse que los valores de parámetros (incluyendo valores de 2θ, condiciones de reacción) están modificados por el término "aproximadamente" para reflejar el error de medición y similares existentes en los valores, por ejemplo, existe un error de ± 5% con respecto al valor dado.

[0321] La presente solicitud se describe en detalle a continuación a modo de ejemplos, que no pretenden limitar de ningún modo la presente solicitud.

[0322] Los compuestos intermedios divulgados en el presente documento pueden prepararse mediante una variedad de métodos sintéticos bien conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo las realizaciones específicas enumeradas a continuación, realizaciones formadas por combinaciones de las mismos con otros métodos sintéticos químicos, y equivalentes de las mismas conocidos por los expertos en la técnica. Las realizaciones preferidas incluyen, pero no se limitan a, los ejemplos divulgados en el presente documento.

[0323] Las reacciones químicas de las realizaciones divulgadas en el presente documento se llevan a cabo en un disolvente apropiado que debe ser adecuado para los cambios químicos en la presente solicitud y los reactivos y materiales requeridos. Con el fin de adquirir los compuestos divulgados en el presente documento, a veces es necesario para los expertos en la técnica modificar o seleccionar un procedimiento de síntesis o un esquema de reacción basado en las realizaciones existentes.

[0324] La presente solicitud se describe en detalle a continuación a modo de ejemplos, que no pretenden limitar de ningún modo la presente solicitud.

[0325] Todos los disolventes usados en la presente solicitud están disponibles comercialmente y pueden usarse sin purificación adicional.

[0326] Los disolventes usados en la presente solicitud están disponibles comercialmente. En la presente solicitud se usan las siguientes abreviaturas: DMSO indica dimetilsulfóxido; TsOH indica ácido p-toluenosulfónico; MsOH indica ácido metanosulfónico.

[0327] Difracción de rayos X en polvo (XRPD)

[0328] Modelo de instrumento: difractómetro de rayos X Bruker D8 advance; tubo de luz: Cu, Kα (λ = 1,54056 Å).

[0329] Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

[0330] Modelo de instrumento: calorímetro diferencial de barrido TA Q2000

[0331] Análisis termogravimétrico (TGA)

[0332] Modelo de instrumento: analizador termogravimétrico TA Q5000IR

[0333] Breve descripción de los dibujos

[0334] La Figura 1 es un patrón de XRPD de una forma cristalina A del compuesto de fórmula (I);

[0335] La Figura 2 es un patrón de DSC de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I);

[0336] La Figura 3 es un patrón de TGA de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I);

[0337] La Figura 4 es un patrón de XRPD de una forma cristalina B del compuesto de fórmula (I);

[0338] La Figura 5 es un patrón de DSC de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I);

[0339] La Figura 6 es un patrón TGA de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I);

[0340] La Figura 7 es un patrón de XRPD de una forma cristalina C del compuesto de fórmula (I);

[0341] La Figura 8 es un patrón de DSC de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I);

[0342] La Figura 9 es un patrón de TGA de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I);

[0343] La Figura 10 es un patrón de XRPD de una forma cristalina del compuesto de fórmula (II);

[0344] La Figura 11 es un patrón de XRPD de una forma cristalina del compuesto de fórmula (III);

[0345] La Figura 12 es un patrón de TGA de la forma cristalina del compuesto de fórmula (III);

[0346] La Figura 13 es un patrón de XRPD de una forma cristalina del compuesto de fórmula (IV);

[0347] La Figura 14 es un patrón de DSC de la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV);

[0348] La Figura 15 es un patrón de TGA de la forma cristalina del compuesto de fórmula (IV);

[0349] La Figura 16 es un patrón de XRPD de una forma cristalina del compuesto de fórmula (V);

[0350] La Figura 17 es un patrón de TGA de la forma cristalina del compuesto de fórmula (V);

[0351] La Figura 18 es un gráfico de DVS (sorción dinámica de vapor) de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I);

[0352] La Figura 19 muestra el número total de glóbulos blancos en BALF;

[0353] La Figura 20 muestra la prueba de la función pulmonar con estimulación con metacolina (Mch) (índice de resistencia de las vías respiratorias Penh).

[0354] Descripción detallada

[0355] Con el fin de comprender mejor el contenido de la presente solicitud, se proporciona una descripción adicional con referencia a ejemplos específicos, pero las realizaciones específicas no pretenden limitar el contenido de la presente solicitud.

[0356] Síntesis del producto intermedio BB-1

[0357]

[0359] Etapa1: síntesis del compuestoBB-1-2

[0360] Una mezcla de compuestoBB-1-1(21,10 g) y cianoacetato de etilo (11,00 g, 10,38 ml) se agitó a 100°C durante 16 h en atmósfera de nitrógeno. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se enfrió hasta 70°C, se añadió lentamente y gota a gota etanol (30 ml) y se precipitó una gran cantidad de sólido. La mezcla resultante se filtró, y la torta filtrante se secó a presión reducida para dar el productoBB-1-2.

[0361] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)δ = 8,26 (t,J =5,2 Hz, 1H), 6,86 (d,J =8,0 Hz, 1H), 6,79 (br s, 1H), 6,71 (d, 8,0 Hz, 1H), 4,00 (q,J =6,8 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 3,31 - 3,23 (m, 2H), 2,64 (t,J =7,2 Hz, 2H), 1,32 (t,J =6,8 Hz, 3H).MS-ESI m/z:263,1 [M+H]<+>.

[0362] Etapa2:síntesis del compuestoBB-1-3

[0363] En una atmósfera de nitrógeno, se calentó oxicloruro de fósforo (379,50 g, 230,00 ml) hasta 85°C, y el compuestoBB-1-2(26,00 g) se añadió en porciones. La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 2 h para la reacción. Después de que finalizara la reacción, la mayor parte del oxicloruro de fósforo se retiró mediante destilación a presión reducida. Se añadió diclorometano (200 ml) al residuo y la mezcla se lavó con agua (100 ml × 2). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró para retirar el desecante y a continuación se concentró a presión reducida. El producto en bruto resultante se purificó mediante suspensión con acetato de etilo (20 ml) para dar el compuestoBB-1-3.

[0364] RMN 1H (400 MHz, CD3DO)δ = 7, 16 (s, 1H), 6, 83 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 4, 12 (q,J =6,8 Hz, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,35 (d,J= 6,4 Hz, 2H), 2,84 (t,J =6,4 Hz, 2H), 1,44 (t,J =6,8 Hz, 3H).MS-ESI m/z:245,1 [M+H]<+>.

[0365] Etapa3:síntesis del compuestoBB-1-4

[0366] El compuestoBB-1-3(1,00 g) se añadió a ácido sulfúrico concentrado al 98% (12,88 g, 128,69 mmol, 7,00 ml) en porciones a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 27°C durante 3 h. Después de que finalizara la reacción, la mezcla se añadió a agua fría (15 ml) y a continuación se añadió gota a gota una solución acuosa de hidróxido sódico (4 mol/l, 32 ml) para ajustar hasta pH neutro, seguido de extracción con acetato de etilo (100 ml × 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron para retirar el desecante y se concentraron a presión reducida para dar el compuestoBB-1-4.

[0367] MS-ESI m/z:263,1 [M+H]<+>.

[0368] Etapa4:síntesis del compuestoBB-1-5

[0369] Se añadió sodio (2,42 g) en porciones a etanol (80 ml) a 0°C. Después de agitar la mezcla a 28°C durante 0,5 h, el compuestoBB-1-4(6,90 g) se añadió a la solución en porciones, y la mezcla se agitó a 80°C durante 0,5 h. A continuación, se añadió carbonato de dietilo (9,32 g, 9,51 ml) en una porción, y la mezcla se agitó durante 5 h a 80°C. Después de que finalizara la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió lentamente agua helada (30 ml), y a continuación se añadió ácido clorhídrico diluido (2 mol/l, 53 ml) para ajustar la mezcla hasta pH neutro. Se precipitó una gran cantidad de sólido. La mezcla se filtró, y la torta filtrante resultante se purificó mediante suspensión con etanol (10 ml) para dar el compuestoBB-1-5.

[0370] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)δ = 11,22 (s a, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 6, 22 (s, 1H), 4, 09 (c,J =6,8 Hz, 2H), 3,90 (br s, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,89 (br s, 2H), 1,35 (t,J =6,8 Hz, 3H).MS-ESI m/z:289.1 [M+H]<+>.

[0371] Etapa5:síntesis del compuestoBB-1-6

[0372] El compuestoBB-1-5(5,00 g) se disolvió en oxicloruro de fósforo (30 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 100°C durante 16 h en atmósfera de nitrógeno. Después de que finalizara la reacción, la mayor parte del disolvente se retiró mediante destilación a presión reducida. Se añadió agua (100 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (150 ml × 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron para retirar el desecante y se concentraron a presión reducida para dar el compuestoBB-1-6. MS-ESI m/z:306,9 [M+H]<+>.

[0373] Etapa6:síntesis del compuestoBB-1

[0374] El compuestoBB-1-6(925,67 mg) se disolvió en isopropanol (8 ml) a temperatura ambiente, y se añadió 2,4,6-trimetilanilina (2,10 g). La mezcla de reacción se agitó a 90°C durante 15 h en atmósfera de nitrógeno. Después de que finalizara la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, y el residuo resultante se purificó mediante suspensión con etanol (6 ml) para dar el compuestoBB-1.

[0375] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)δ = 8,85 (s a, 1H), 7,27 (s, 1H), 6, 97 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,45 (s, 1H), 4,10 (c,J =6,8 Hz, 2H), 3,90 (t,J =6,0 Hz, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,87 (t,J =6,0 Hz, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,11 (s, 6H), 1,37 (t,J= 6,8 Hz, 3H).MS-ESI m/z:406,2 [M+H]<+>.

[0376] Síntesis del compuestoBB-4

[0378]

[0380] Etapa1:síntesis del compuestoBB-4-1

[0381] El compuestoBB-1(1,00 g) se disolvió en 2-butanona (35 ml) a temperatura ambiente, y se añadieron sucesivamente 2-(2-bromoetil)isoindolin-1,3-diona (3,76 g), carbonato potásico (3,07 g) y yoduro sódico (2,22 g). La mezcla de reacción se agitó a 85°C durante 72 h en atmósfera de nitrógeno. Después de que finalizara la reacción, la mezcla se concentró para retirar la mayor parte del disolvente orgánico antes de que se añadieran agua (30 ml) y acetato de etilo (25 ml × 3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron para retirar el desecante y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 15:1-3:1) para dar el compuestoBB-4-1.

[0382] MS-ESI m/z:579,3 [M+H]<+>.

[0383] Etapa2:síntesis del compuestoBB-4

[0384] El compuestoBB-4-1(500,00 mg) se disolvió en triclorometano (3 ml) y etanol (3 ml) a temperatura ambiente, y se añadió hidrato de hidrazina (152,67 mg, 85% de pureza). La mezcla se agitó a 28°C durante 16 h en atmósfera de nitrógeno. Después de que finalizara la reacción, la mezcla se concentró para retirar la mayor parte del disolvente orgánico antes de que se añadieran agua (15 ml) y diclorometano (15 ml × 3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron para retirar el desecante y se concentraron a presión reducida para dar el compuestoBB-4.

[0385] RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6)δ = 6,95 (s, 1H), 6, 85 (s a, 2H), 6,66 (s, 1H), 5,31 (s, 1H), 4,14 (t,J =6,8 Hz, 2H), 4,05 (q,J =6,8 Hz, 2H), 3,91 (t,J= 6,4 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,90 - 2,86 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,95 (br s, 6H), 1,33 (t,J =6,8 Hz, 3H).MS-ESI m/z:449,2 [M+H]<+>.

[0386] Ejemplo 1: Preparación del compuesto de fórmula (I)

[0387] Método 1

[0390]

[0392] Se disolvió ácido 5-hidroxi-3-metil-1,2,3-triazol-4-carboxílico (18,50 mg) en DCM (1 ml) a 20°C. Se añadieron HATU (8,80 mg) y trietilamina (57,40 µl) y la mezcla se agitó durante 2 h. Se añadió el compuestoBB-4(50 mg) y el sistema se agitó a la temperatura durante 16 h. La mezcla se diluyó hasta 10 ml con DCM, se lavó con agua (30 ml × 3), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró para retirar el desecante, y el filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar un producto en bruto. El producto en bruto se separó y se purificó mediante HPLC preparativa para dar el compuesto buscado de fórmula (I) en forma de un sólido amarillo.

[0393] RMN 1H (400 MHz, CD3DO)δ = 6, 94 (s, 2H), 6, 87 (s, 1H), 6, 77 (s, 1H), 5, 52 (s, 1H), 4, 48 (t,J =6,0 Hz, 2H), 4,15 (s, 3H), 4,12-4,08 (m, 2H), 4,01 (t,J =6,0 Hz, 2H), 3,87 (t,J =6,0 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,94 (t,J =6,0 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,06 (s, 6H), 1,41 (t,J =6,8 Hz, 3H). MSm/z[M+H]<+>574,1.

[0394] Método 2

[0396]

[0398] Etapa uno: Preparación del compuesto 1-1a

[0399] Se disolvieron N-Boc-etanolamina (50 g, 48,08 ml) y cloruro dep-toluenosulfonilo (70,96 g) en metil-terc-butil-éter (500 ml), se añadió hidróxido potásico (52,21 g) y la mezcla se calentó hasta 80°C y se sometió a reflujo durante 4 h. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en una mezcla de hielo y agua (1000 ml) para separar las fases orgánicas. La fase acuosa se extrajo con metil-terc-butil-éter (100 ml × 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua fría (1000 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron para retirar el desecante. El filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar el producto 1-1a en bruto (28,5 g) en forma de un líquido oleoso amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.

[0400] RMN 1H(400 MHz, CLOROFORMO-d) δ (ppm) 2,15 (s, 4H), 1,47 (s, 9H).

[0401] Etapa dos: Preparación del compuesto 1-2a

[0402] El compuesto BB-1 (2 g) y el compuesto 1-1a (4,24 g) se disolvieron en acetonitrilo (17 ml) y se añadieron carbonato de litio (2,19 g) y agua (3 ml). El sistema se calentó hasta 100°C y se agitó durante 70 h. La mezcla se enfrió, se dejó reposar y se filtró para retirar el precipitado. El filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente y se mezcló con 50 ml de agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (20 ml × 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con solución de hidróxido sódico 0,5 M (100 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar un producto en bruto. El producto en bruto se separó y se purificó mediante cromatografía en columna para dar el compuesto 1-2a buscado (1,08 g) en forma de un sólido amarillo claro.

[0403] MS-ESI (m/z): 549,2 [M+1]<+>

[0404] RMN<1>H (400 MHz, METANOL-d<4>) δ (ppm) 6,91 (s, 2H), 6, 85 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,49 (s, 1H), 4,36 (t,J= 5,9 Hz, 2H), 4,09 (q,J =7,0 Hz, 2H), 4,00 (t,J =6,1 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,56-3,48 (m, 2H), 2,91 (t,J =6,3 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,06 (s, 6H), 1,39 (s, 12H).

[0405] Etapa tres: Preparación del compuesto BB-4

[0406] Se mezclaron uniformemente el compuesto 1-2a (1 g) y cloruro de hidrógeno 4 M en metanol (20 ml). El sistema se calentó hasta 60°C y se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar un producto en bruto en forma de un líquido oleoso amarillo claro. Se añadieron 20 ml de éter de petróleo y 5 ml de acetato de etilo al producto en bruto. La mezcla se agitó durante 30 min y a continuación se filtró. El sólido se recogió y se secó para dar el compuestoBB-4buscado (810 mg, rendimiento del 91,63%) en forma de un sólido amarillo claro.

[0407] RMN<1>H (400 MHz, METANOL-d<4>) δ (ppm) 7, 16 (s, 2H), 6, 98 (s, 1H), 6, 80 (s, 1H), 5, 68 (s, 1H), 4, 72 (s a, 2H), 4, 22 (s a, 2H), 4, 16 (c,J =7,0 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,48 (br s, 2H), 3,08 (br s, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,30 (s, 6H), 1,43 (t,J= 7,0 Hz, 3H).

[0408] Etapa cuatro: Preparación del compuesto (I)

[0409] Se disolvió ácido 5-hidroxi-3-metil-1,2,3-triazol-4-carboxílico (18,50 mg) en DCM (1 ml) a 20°C. Se añadieron HATU (8,80 mg) y trietilamina (57,40 µl) y la mezcla se agitó durante 2 h. Se añadió el compuesto BB-4 (50 mg) y el sistema se agitó a la temperatura durante 16 h. La mezcla se diluyó hasta 10 ml con DCM, a continuación se lavó con agua (30 ml × 3), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró para retirar el desecante, y el filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar un producto en bruto. El producto en bruto se separó y se purificó mediante HPLC preparativa para dar el compuesto de fórmula (I) buscado (22 mg, rendimiento del 37,2%) en forma de un sólido amarillo.

[0410] MS-ESI (m/z): 574,5 [M+1]<+>

[0411] RMN<1>H (400 MHz, METANOL-d<4>) δ (ppm) 6, 94 (s, 2H), 6, 87 (s, 1H), 6, 75 (s, 1H), 5, 51 (s, 1H), 4, 47 (t a,J =6,0 Hz, 2H), 4,14 (s, 3H), 4,10 (q,J= 7,0 Hz, 2H), 4,01 (t a,J =5,9 Hz, 2H), 3,85 (br t,J =5,9 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,92 (t a,J =6,0 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,05 (s, 6H), 1,41 (t,J =6,9 Hz, 3H).

[0412] Método 3

[0414]

[0416] Etapa uno: Preparación del compuesto 1-1b

[0417] Se añadió 2-butanona (12 l) a un hervidor con camisa calefactora de 50 l a 20°C. Se añadieron el compuesto BB-1 (615 g) y 2-bromoacetamida (612,4 g) con agitación. Se añadieron al sistema fosfato potásico anhidro (1,57 kg) y yoduro sódico (665,4 g). El sistema de reacción se calentó hasta 90°C y se agitó durante 18 h en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente antes de añadir agua (12 l). La mezcla se agitó durante 1 h y se filtró para dar un sólido. El sólido resultante se secó al vacío para dar el compuesto 1-1b buscado (575 g, rendimiento del 81,96%) en forma de un sólido amarillo.

[0418] MS-ESI (m/z): 463,23 [M+1]<+>

[0419] RMN<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) δ = 7,49 (s a, 1H), 7,06 (s a, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,82 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 5,33 (s, 1H), 4,66 (s, 2H), 4,07 (c,J =6,9 Hz, 2H), 3,91 (br t,J =6,0 Hz, 2H), 3,63 (s, 3H), 2,90 (t a,J =5,9 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,92 (s, 6H), 1,33 (t,J =7,0 Hz, 3H).

[0420] Etapa dos: Preparación del compuesto BB-4

[0421] Se añadió tetrahidrofurano (8,6 l) a un hervidor con camisa calefactora seco de 50 l a 20°C, y una solución de dimetilsulfuro de borano (10 M, 950 ml) se añadió gota a gota al hervidor con agitación. Después de la adición, el sistema se enfrió hasta 0°C antes de añadir el compuesto 1-1b (440 g). La unidad de enfriamiento se apagó. La mezcla se calentó naturalmente hasta 20-25°C y se agitó durante otras 18 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, se añadió metanol (~1,5 l) gota a gota para desactivar la reacción hasta que no se generaban burbujas, y se añadió gota a gota a la mezcla de reacción una solución de ácido clorhídrico 3 M (~800 ml) para ajustar hasta pH 2-3. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para retirar el disolvente. El residuo se disolvió en diclorometano, y se añadió una solución saturada de bicarbonato sódi

[0422] fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3000 ml × 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron para retirar el desecante y se concentraron a presión reducida. El producto resultante se separó y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna para dar el compuesto BB-4 buscado (125 g).

[0423] MS-ESI (m/z): 449,25 [M+1]<+>

[0424] RMN<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) δ = 7,91 (s a, 2H), 6,96 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 6, 69 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,41 (t a,J =5,8 Hz, 2H), 4,07 (q,J =6,8 Hz, 2H), 3,92 (t a,J =5,8 Hz, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,21 (br s, 2H), 2,90 (br t,J= 5,8 Hz, 2H), 2,22 (s, 3H), 1,98 (s, 6H), 1,33 (t,J =7,0 Hz, 3H).

[0425] Etapa tres: Preparación del compuesto 1-4b

[0426] El compuesto 1-3b (68,68 g) se disolvió en diclorometano (700 ml) a 20°C, se añadióN,N-carbonildiimidazol (61,56 g) y el sistema se agitó a 25°C durante 5 h. La mezcla se lavó con salmuera saturada (700 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en DMF (675 ml), se añadió el compuesto BB-4 (95 g) en porciones, y el sistema se agitó a 20-25°C durante 18 h. Se añadió metanol (675 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó durante 1 h y se filtró para dar el compuesto 1-4b buscado (120 g, rendimiento del 81,49%).

[0427] MS-ESI (m/z): 694,33 [M+1]<+>

[0428] RMN<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) δ = 8,36 (t,J =6,1 Hz, 1H), 7,26 (d,J =8,6 Hz, 2H), 6,96-6,87 (m, 3H), 6,82 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,31 (t a,J =6,3 Hz, 2H), 4,16 (s, 3H), 4,06 (q,J =6,8 Hz, 2H), 3,86 (br t,J =5,8 Hz, 2H), 3,75-3,66 (m, 5H), 3,62 (s, 3H), 2,86 (t a,J =5,9 Hz, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,91 (s, 6H), 1,33 (t,J =6,9 Hz, 3H).

[0429] Etapa cuatro: Preparación del compuesto (I)

[0430] El compuesto 1-4b (120 g) se disolvió en un disolvente mixto de ácido trifluoroacético (1000 ml) y ácido acético glacial (200 ml) a 20°C, y el sistema se calentó hasta 90-100°C y se agitó durante 48 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para retirar la mayor parte del disolvente. El residuo se disolvió en DCM (1000 ml) y se añadió una solución saturada de bicarbonato sódico para ajustar hasta pH 7-8. La fase orgánica y la fase acuosa se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (1000 ml × 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron para retirar el desecante. El filtrado se concentró a presión reducida para retirar el disolvente para dar el compuesto de fórmula buscado (I) (80 g, 80,60% de rendimiento).

[0431] MS-ESI (m/z): 574,27 [M+1]<+>

[0432] RMN 1H(400 MHz, DMSO-d<6>) δ = 7,73 -7,65 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,84 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 5,32 (s, 1H), 4,35 (t,J =6,1 Hz, 2H), 4,12-4,01 (m, 5H), 3,88 (t,J= 6,1 Hz, 2H), 3,70 (q,J =6,1 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,87 (t a,J =6,0 Hz, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,93 (s, 6H), 1,33 (t,J =6,9 Hz, 3H), 0,90 - 0,90 (m, 1H).

[0433] Ejemplo 2: Preparación de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I)

[0434] Se añadieron 50 mg del compuesto de fórmula (I) a un frasco de vidrio de 4 ml, se añadió 1 ml de metanol anhidro y la mezcla se calentó hasta 40°C y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió naturalmente hasta temperatura ambiente, se centrifugó para separar el sólido y se secó al vacío para dar 34 mg de sólido, a saber, la forma cristalina A. El patrón de XRPD se muestra en la figura 1, el patrón de DSC se muestra en la figura 2 y el patrón de TGA se muestra en la figura 3.

[0435] Ejemplo 3: Preparación de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I)

[0436] Se añadieron 50 mg del compuesto de fórmula (I) a un frasco de vidrio de 4 ml, se añadieron 1 ml de etanol anhidro y 0,2 ml de agua y la mezcla se calentó hasta 40°C y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió naturalmente hasta temperatura ambiente, se centrifugó para separar el sólido y se secó al vacío para dar 46 mg de sólido, a saber la forma cristalina B. El patrón de XRPD se muestra en la figura 4, el patrón de DSC se muestra en la figura 5 y el patrón de TGA se muestra en la figura 6.

[0437] Ejemplo 4: Preparación de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I)

[0438] Se añadieron 50 mg del compuesto de fórmula (I) a un frasco de vidrio de 4 ml, se añadió 1 ml de acetonitrilo y la mezcla se calentó hasta 40°C y se agitó durante 48 h. La mezcla se enfrió naturalmente hasta temperatura ambiente, se centrifugó para separar el sólido y se secó al vacío para dar 37 mg de sólido, es decir, la forma cristalina C. El patrón de XRPD se muestra en la Figura 7, el patrón de DSC se muestra en la Figura 8 y el patrón de TGA se muestra en la Figura 9.

[0439] Ejemplo 5: Preparación de sal del compuesto de fórmula (I)

[0440] Se añadieron 100 mg del compuesto de fórmula (I) a un frasco de vidrio de 4 ml, y se añadieron 2 ml de tetrahidrofurano anhidro. La mezcla se calentó hasta 70°C y se agitó durante 1 h para disolver completamente el compuesto, y a continuación se enfrió hasta 40°C. Una solución preparada a partir del ácido o la base correspondiente (los productos químicos y cantidades específicos se muestran en la Tabla 8) y se añadieron a la mezcla 0,1 ml de agua, y la mezcla se agitó a la temperatura durante 12 h. La mezcla se centrifugó para separar un precipitado sólido, y el precipitado se secó al vacío para dar un sólido, es decir, la sal correspondiente de la forma cristalina del compuesto de fórmula (I).

[0441] Tabla 8. Preparación de formas salinas

[0443]

[0445] Ejemplo 6: Estudio de estabilidad de la forma cristalina B sólida del compuesto de fórmula (I) Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)

[0446] Las condiciones cromatográficas del método de HPLC se observan en la tabla siguiente:

[0447] Columna cromatográfica: Zorbax SB C-18, 4,6 mm × 150 mm, 5 μm (PDS-HPLC-007)

[0448] Fase móvil A: TFA al 0,1% en agua

[0449] Fase móvil B: ACN al 100%

[0450] Preparación de la muestra: la muestra se disolvió en un disolvente mixto de acetonitrilo y agua (acetonitrilo:agua = 50:50 (v/v))

[0451] Ensayo de estabilidad de sólidos

[0452] Se examinó la estabilidad del compuesto en las siguientes condiciones, y se tomaron muestras en diferentes puntos temporales para detectar el contenido. Se pesaron con precisión por duplicado aproximadamente 5 mg de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I), se transfirieron a un frasco de vidrio seco y limpio, se extendieron en una capa fina como muestras de prueba y se pusieron en condiciones experimentales de factores influyentes ((60°C), (humedad relativa del 92,5%), iluminación (iluminación total de 1,2 × 10<6>Lux•h/energía UV cercana de 200 w•h/m<2>), (40°C, humedad relativa del 75%) o (60°C, humedad relativa del 75%)). Las muestras se cubrieron con papel de aluminio que tenía orificios y, así, estaban completamente expuestas a las condiciones. El análisis de muestreo se realizó a los 5 días, 10 días, 1 mes, 2 meses y 3 meses. Las muestras se expusieron completamente a iluminación (luz visible de 1200000 Lux, UV de 200 W) a temperatura ambiente. Los resultados se muestran en la Tabla 9.

[0453] Tabla 9. Resultados del ensayo de contenido de muestra de estabilidad de sólidos (5 d, 10 d, 1 M, 2 M y 3 M

[0455]

[0457] Como puede verse, la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) de la presente solicitud tiene buena estabilidad en las condiciones de alta temperatura, alta humedad o iluminación sin el aumento de impurezas durante la prueba.

[0458] Ejemplo 7: Estudio de higroscopicidad de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I)Modelo de instrumento: SMS DVS Advantage

[0459] Condiciones de prueba: la muestra (10-20 mg, la forma cristalina B preparada en el Ejemplo 3) se colocó en una bandeja de muestras de DVS para la prueba.

[0460] Los parámetros de DVS detallados eran los siguientes:

[0461] Temperatura: 25°C

[0462] Equilibrio: dm/dt = 0,01%/min (más corto: 10 min, más largo: 180 min)

[0463] Secado: secado a 0% de HR durante 120 minutos

[0464] Gradiente de prueba de HR (%): 10%

[0465] Intervalo de gradiente de prueba de HR (%): 0%-90%-0% El gráfico de absorción dinámica de vapor (DVS) resultante se muestra en la Figura 18.

[0466] Como puede verse en la Figura 18, la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) de la presente solicitud tiene una baja higroscopicidad.

[0467] Ejemplo experimental 1: Detección in vitro de la actividad inhibidora del compuesto contra la enzima PDE 3A

[0468] Objetivo:determinar la expresión de AMP/GMP basándose en la polarización de fluorescencia, es decir, seguir la unión de AMP/GMP al anticuerpo con el fin de indicar la actividad enzimática.

[0469] Reactivos:

[0470] Solución tamponadora:Tris-HCl 10 mM (pH 7,5), MgCl<2>5 mM, Brij 35 al 0,01%, ditiotreitol (DTT) 1 mM y DMSO al 1%.

[0471] Enzima:PDE3A humana recombinante (número de registro: NM_000921; extremo aminoácido 669) se expresó mediante baculovirus en células de insecto Sf9 usando una etiqueta de GST N-terminal, siendo el peso molecular 84 kDa.

[0472] Sustrato enzimático:AMPc 1 μM

[0473] Detección:Anticuerpo Transcreener<®>AMP2/GMP2 y marcador AMP2/GMP2 AlexaFluor633.

[0474] Procedimientos:

[0475] 1. La enzima PDE3A humana recombinante y el sustrato enzimático (AMPc 1 μM) se disolvieron cada uno en una solución tamponadora experimental recién preparada;

[0476] 2. La solución tamponadora de enzima PDE3A se transfirió a pocillos de reacción;

[0477] 3. El compuesto que se disolvía en DMSO al 100% se añadió a los pocillos de reacción que contenían solución tamponadora de enzima PDE3A mediante una técnica acústica (eco 550; intervalo de mililambda) y la mezcla se incubó durante 10 min a temperatura ambiente;

[0478] 4. La solución tamponadora de sustrato enzimático se añadió a los pocillos de reacción anteriores para iniciar la reacción;

[0479] 5. La mezcla resultante se incubó a temperatura ambiente durante 1 h;

[0480] 6. Se añadió la mezcla de detección (anticuerpo Transcreener<®>AMP2/GMP2 y marcador AMP2/GMP2 AlexaFluor633) para detener la reacción, y la mezcla resultante se incubó durante 90 min mientras se mezclaba lentamente. El intervalo de medición de polarización de fluorescencia era Ex/Em = 620/688.

[0481] Análisis de datos:La señal de polarización de fluorescencia se convirtió en nM basándose en la curva estándar de AMP/GMP y el porcentaje de actividad enzimática en relación con el control de DMSO se calculó mediante Excel. Se usó GraphPad Prism para el ajuste de la curva (dibujo del icono médico). Los resultados se muestran en la Tabla 10.

[0482] Ejemplo experimental 2: Detección in vitro de la actividad inhibidora del compuesto contra la enzima PDE4B

[0483] Objetivo:determinar la expresión de AMP/GMP basándose en la polarización de fluorescencia, es decir, seguir la unión de AMP/GMP al anticuerpo con el fin de indicar la actividad enzimática.

[0484] Reactivos:

[0485] Solución tamponadora:Tris-HCl 10 mM (pH 7,5), MgCl<2>5 mM, Brij 35 al 0,01%, DTT 1 mM y DMSO al 1%.Enzima:La PDE4B humana recombinante (número de registro génico: NM_002600; extremo aminoácido 305) se expresó mediante baculovirus en células de insecto Sf9 usando una etiqueta de GST N-terminal, siendo el peso molecular 78 kDa.

[0486] Sustrato enzimático:AMPc 1 μM

[0487] Detección:Anticuerpo Transcreener<®>AMP2/GMP2 y marcador AMP2/GMP2 AlexaFluor633.Procedimientos:

[0488] 1. La enzima PDE4B humana recombinante y el sustrato enzimático (AMPc 1 μM) se disolvieron cada uno en solución tamponadora recién preparada;

[0489] 2. La solución tamponadora de enzima PDE4B se transfirió a pocillos de reacción;

[0490] 3. El compuesto que se disolvía en DMSO al 100% mediante una técnica acústica (eco 550; intervalo de mililambda) se añadió a los pocillos de reacción que contenían solución tamponadora de enzima PDE4B y la mezcla se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente;

[0491] 4. La solución tamponadora de sustrato enzimático se añadió a los pocillos de reacción anteriores para iniciar la reacción;

[0492] 5. La mezcla resultante se incubó a temperatura ambiente durante 1 h;

[0493] 6. Se añadió la mezcla de detección (anticuerpo Transcreener<®>AMP2/GMP2 y marcador AMP2/GMP2 AlexaFluor633) para detener la reacción, y la mezcla resultante se incubó durante 90 min mientras se mezclaba lentamente. El intervalo de medición de polarización de fluorescencia era Ex/Em = 620/688.

[0494] Análisis de datos:la señal de polarización de fluorescencia se convirtió en nM basándose en la curva estándar de AMP/GMP y el porcentaje de actividad enzimática en relación con el control de DMSO se calculó mediante Excel. Se usó GraphPad Prism para el ajuste de la curva (dibujo del icono médico). Los resultados se muestran en la Tabla 10:

[0495] Tabla 10. Resultados de la prueba de cribadoin vitropara el compuesto

[0498]

[0500] El compuesto de la presente solicitud tiene un efecto inhibidor doble significativo sobre PDE3 y PDE4.

[0501] Ejemplo experimental 3: Estudio farmacocinético en perros beagle

[0502] En este estudio, se seleccionaron perrosbeaglemacho como animales de prueba, y se usó LC-MS/MS para medir cuantitativamente la concentración de fármaco en plasma de perrosbeagleen diferentes puntos temporales después de inyección intravenosa o administración intragástrica del compuesto de fórmula (I) con el fin de evaluar la farmacocinética del compuesto de fórmula (I) en perros beagle.

[0503] La solución transparente del compuesto de fórmula (I) se inyectó en dos perrosbeaglede 10-12 kg a través de la vena cefálica o la vena safena, y la solución transparente del compuesto de fórmula (I) se administró por vía intragástrica a dos perrosbeaglede 10-12 kg (en ayunas durante la noche). Todos los animales se sometieron a una extracción sanguínea de aproximadamente 500 µl cada vez desde venas periféricas a las 0,0333, 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 h después de la dosis, y la sangre se transfirió a tubos de centrífuga comerciales que contenían 0,85-1,15 mg de anticoagulante de EDTA K<2>·2H<2>O, y el plasma se separó mediante centrifugación a 3000 g durante 10 min a 4°C. La concentración plasmática se midió mediante LC-MS/MS y los parámetros farmacocinéticos pertinentes se calcularon usando el programa de ordenador farmacocinético WinNonlin<™>Versión 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA) usando un método trapezoidal logarítmico lineal de modelo no compartimental. Tabla 11. Parámetros farmacocinéticos del compuesto en perrosbea le

[0505]

[0506] El compuesto de la presente solicitud tiene una alta depuración plasmáticain vivo, baja exposición sistémica en plasma mediante administración oral y baja biodisponibilidad oral.

[0507] Ejemplo experimental 4: Efecto inhibidor sobre la actividad de isoenzimas (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4) del citocromo P450 microsómico hepático humano

[0508] Un total de 5 sustratos de sonda específicos de 5 isoenzimas de CYP, es decir, fenacetina (CYP1A2), diclofenaco (CYP2C9), (S)-mefenitoína (CYP2C19), dextrometorfano (CYP2D6) y midazolam (CYP3A4), se coincubaron cada uno con microsomas hepáticos humanos y el compuesto de fórmula (I), y a continuación se añadió fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADPH) reducido para iniciar la reacción. Después de que finalizara la reacción, las muestras se trataron y las concentraciones de 5 metabolitos (acetaminofeno, 4'-hidroxidiclofenaco, 4'-hidroximefenitoína, dextrorfano y 1'-hidroximidazolam) generados a partir de los sustratos específicos se detectaron cuantitativamente mediante LC-MS/MS para calcular las concentraciones inhibidoras semimáximas (CI<50>) correspondientes.

[0509] Tabla 12. Efecto inhibidor del compuesto de fórmula I sobre cinco enzimas CYP

[0511]

[0513] El compuesto de la presente solicitud tiene un efecto inhibidor bajo sobre las 5 isoenzimas (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4) del citocromo P450 microsómico hepático humano.

[0514] Ejemplo experimental 5: Estudio farmacodinámico en modelo de lesión pulmonar aguda en ratas inducida por humo de cigarrillo

[0515] Animales

[0516] Ratas Sprague-Dawley macho (suministradas por Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.), clase SPF, aproximadamente 200 g.

[0517] Procedimientos

[0518] 1. Los animales se dividieron aleatoriamente en 6 grupos según el peso corporal después de la llegada y una aclimatación de una semana;

[0519] 2. En los días 1-3 del experimento, el compuesto correspondiente de cada grupo se atomizó durante 30 minutos. Los animales del grupo del modelo y de los grupos de tratamiento se expusieron a humo de cigarrillos durante 1 h y, después de un intervalo de 4 h, los animales se expusieron de nuevo a humo de cigarrillos durante 1 h. Se administró humo de cigarrillos dos veces al día durante 3 días consecutivos. Los animales del grupo de control se expusieron al aire ambiental;

[0520] 3. El día 4 del experimento, el compuesto correspondiente de cada grupo se atomizó durante 30 min, y a continuación a los animales en el grupo del modelo y los grupos de tratamiento se les administraron 150 µg/ml de LPS atomizados durante 15 min mediante inhalación. Después de 3 h (desde el momento del comienzo de la atomización), los animales se expusieron a humo de cigarrillos durante 1 h, y a continuación se examinó la función pulmonar (Penh y F) de los animales; se recogió líquido de lavado broncoalveolar para el recuento celular después de que los animales se hubieran sacrificado con CO<2>.

[0521] 4. Administración

[0522] Modo de administración: el compuesto de prueba y el compuesto de referencia se administraron mediante atomización a la velocidad de atomización máxima (aproximadamente 12 ml) con el dispositivo de atomización con exposición de cuerpo entero durante 30 minutos.

[0523] Frecuencia de administración: el fármaco o el disolvente se administraron mediante atomización durante 30 min cada mañana antes de la exposición a humo del cigarrillos, y se administraron antes de la inhalación del LPS atomizado el día 4.

[0524] 5. Mediciones de criterios de valoración farmacodinámicos

[0525] (1) Glóbulos blancos totales en BALF (líquido de lavado broncoalveolar);

[0526] (2) Prueba de la función pulmonar con estimulación con Mch (índice de resistencia de las vías respiratorias Penh); Tabla 13. A rupamiento

[0528]

[0530] Los resultados se muestran en la Figura 19 y la Figura 20.

[0531] El compuesto de la presente solicitud puede reducir el número total de glóbulos blancos en BALF y el índice de resistencia de las vías respiratorias Penh en un modelo de lesión pulmonar aguda en ratas inducida por humo de cigarrillos.

[0532] Ejemplo experimental 6: Detección in vitro de la actividad inhibidora del compuesto contra TNF-αen células mononucleares de sangre periférica humana

[0533] Objetivo:medir la actividad antiinflamatoria a nivel celular del compuesto de prueba basándose en el nivel de TNF-α en células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMC).

[0534] Procedimientos:

[0535] 1. Se extrajo sangre entera humana normal en un tubo de anticoagulación con EDTA;

[0536] 2. Las PBMC se separaron mediante centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll, y a continuación se contaron, y la concentración de células se ajustó hasta 2 × 10<6>/ml;

[0537] 3. A cada pocillo de una placa de 96 pocillos con fondo en U se añadieron 2 × 10<5>células, 1 ng/ml de LPS y soluciones del compuesto de fórmula (I) en DMSO a concentraciones de 100 µM, 10 µM, 1 µM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, 100 pM y 10 pM, con un volumen del sistema de 200 µl por pocillo;

[0538] 4. La mezcla se incubó durante 24 h y a continuación se recogió el sobrenadante;

[0539] 5. El nivel de TNF-α en el sobrenadante se detectó mediante ELISA, se ajustó una curva de inhibición usando el programa informático Graphpad Prism y se calculó la CI<50>.

[0540] Los resultados se muestran en la Tabla 14:

[0541] Tabla 14. Resultados de la pruebain vitropara el compuesto

[0544]

[0546] El compuesto de la presente solicitud tiene un efecto inhibidor significativo sobre el TNF-α en células mononucleares de sangre periférica humana (hPBMC).

Claims (4)

1. REIVINDICACIONES

1. Una forma cristalina de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

2. Una forma cristalina del compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) comprende 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 11 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2° y 24,73 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 5,81 ± 0,2°, 8,38 ± 0,2°, 9,13 ± 0,2°, 11,16 ± 0,2°, 11,60 ± 0,2°, 12,82 ± 0,2°, 13,96 ± 0,2°, 14,47 ± 0,2°, 15,01 ± 0,2°, 16,76 ± 0,2°, 17,95 ± 0,2°, 18,91 ± 0,2°, 20,83 ± 0,2°, 24,36 ± 0,2°, 24,73 ± 0,2°, 25,78 ± 0,2° y 26,13 ± 0,2°; o

la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 4;

alternativamente, la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene un pico exotérmico en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 247,70 ± 2°C.

3. Una forma cristalina del compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) comprende 4, 5, 6, 7 u 8 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo (XRPD) que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2° y 16,35 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2° y 11,50 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2° y 16,35 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 4,14 ± 0,2°, 6,56 ± 0,2°, 6,98 ± 0,2°, 8,20 ± 0,2°, 9,35 ± 0,2°, 11,50 ± 0,2°, 12,66 ± 0,2°, 13,94 ± 0,2°, 14,52 ± 0,2°, 16,35 ± 0,2°, 21,52 ± 0,2° y 24,57 ± 0,2°; o

la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 1;

alternativamente, la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene picos endotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 146,23 ± 2°C y/o 162,19 ± 2°C; o que tiene picos exotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 172,65 ± 2°C y/o 241,73 ± 2°C.

4. Una forma cristalina del compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) comprende 4, 5, 6, 7, 8 o 9 picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα seleccionados de los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en un patrón de difracción de rayos X en polvo que usa radiación Cu Kα en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2° y 14,34 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°; o que tiene picos de difracción en los siguientes ángulos 2θ: 4,57 ± 0,2°, 6,41 ± 0,2°, 7,18 ± 0,2°, 9,07 ± 0,2°, 11,58 ± 0,2°, 12,84 ± 0,2°, 13,21 ± 0,2°, 14,34 ± 0,2°, 16,05 ± 0,2°, 18,15 ± 0,2°, 19,26 ± 0,2°, 20,85 ± 0,2° y 23,41 ± 0,2°; o

la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene un patrón de XRPD que usa radiación Cu Kα como el mostrado en la Figura 7;

alternativamente, la forma cristalina del compuesto de fórmula (I) tiene picos exotérmicos en una curva de calorimetría diferencial de barrido a 152,26 ± 2°C y/o 247,92 ± 2°C.