ES3057136T3 - Compositions comprising peptide wkdeagkplvk - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una cantidad cosmética, farmacéutica o terapéuticamente eficaz de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos con ID DE SECUENCIA N.º 1. También se describen péptidos modificados y sus usos terapéuticos y cosméticos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Composiciones que comprenden el péptido WKDEAGKPLVK

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere a composiciones tópicas cosméticas y farmacéuticas.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] Se han descrito muchas composiciones. La mejora siempre es deseable.

[0007] Actualmente, existen diferentes enfoques para mejorar la salud muscular o la absorción de glucosa muscular. Sin embargo, es deseable encontrar una alternativa que ayude a la recuperación muscular, al mantenimiento y/o al crecimiento muscular.

[0008] De hecho, la creciente voluntad de mantener una apariencia juvenil está conduciendo a más y más investigaciones de nuevos procedimientos cosméticos y dermatológicos para el tratamiento del envejecimiento de la piel, particularmente porque ahora las personas viven vidas más largas y saludables. Recientemente, ha habido un entusiasmo creciente por los tratamientos y técnicas mínimamente invasivos diseñados para tratar problemas como las arrugas, la pérdida de volumen y otros daños en la piel. Las soluciones antienvejecimiento tópicas más comunes son las cremas y los sueros.

[0009] El documento US2004/0132667 describe composiciones que comprenden péptidos, opcionalmente en combinación con uno o más principios adicionales. Las composiciones descritas proporcionan alivio de una o más afecciones de la piel, incluidas las causadas por diversas fuentes de estrés, contaminación y envejecimiento general.

[0010] El documento US2014/0120141 describe composiciones cosméticas y farmacéuticas que contienen péptidos para el uso en el tratamiento y/o el cuidado de afecciones, trastornos y/o enfermedades de la piel y/o las membranas mucosas.

[0011] Es un objetivo de la invención superar al menos uno de los problemas mencionados anteriormente y proporcionar una composición.

[0012] Sumario de la invención

[0013] La invención es como se establece en las reivindicaciones adjuntas.

[0014] Se describe un que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO.1 (en adelante "péptido de la invención"),.

[0015] Un aspecto de la invención proporciona una composición tópica (en adelante, "composición de la invención") que comprende un péptido antienvejecimiento con hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1, o una variante antienvejecimiento de la SECUENCIA ID NO. 1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO. 1, en el que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de una inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido.

[0016] Normalmente, la composición puede ser una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO.

[0017] 1 o una variante del mismo.

[0018] Adecuadamente, la composición puede ser una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO.1, o una variante.

[0019] Preferiblemente, dicho péptido es un péptido bioactivo.

[0020] Adecuadamente, la composición comprende una pluralidad de péptidos.

[0021] Normalmente, la composición comprende además al menos un excipiente o aditivo cosméticamente o farmacéuticamente aceptable.

[0022] Normalmente, la composición comprende además al menos un agente activo cosméticamente o farmacéuticamente aceptable.

[0023] Adecuadamente, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en la SECUENCIA ID NO.1. Normalmente, dicho péptido comprende de aproximadamente 3 a 50 aminoácidos de longitud. Preferiblemente de aproximadamente 5 a 20 aminoácidos de longitud, preferiblemente de aproximadamente de 11 aminoácidos de longitud.

[0024] Adecuadamente, el péptido tiene actividad promotora del crecimiento celular.

[0025] El péptido posee actividad anabólica. Típicamente, esta actividad anabólica se relaciona con el crecimiento muscular. El péptido estimula el metabolismo anabólico en mamíferos.

[0026] Preferiblemente, dicho péptido presenta actividad promotora de la translocación de GLUT4. Preferiblemente, dicho péptido presenta un aumento de la síntesis proteica (estimulación del metabolismo anabólico).

[0027] Aún preferido, el péptido comprende (o consiste en) una secuencia de aminoácidos de cualquiera de SECUENCIA ID NO.1 a 85, en el que el péptido normalmente tiene actividad antienvejecimiento.

[0028] Aún preferido, el péptido que comprende (o consiste en) una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SECUENCIA ID NO.1 a 85, en el que el péptido normalmente tiene actividad promotora del crecimiento celular. Aún preferido, el péptido comprende (o consiste esencialmente en) una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SECUENCIAS ID N.° 1 a 85, en donde el péptido típicamente exhibe una mayor síntesis de proteínas (estimulación de la actividad del metabolismo anabólico).

[0029] Aún preferido, el péptido que comprende (o consiste esencialmente en) una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SECUENCIA ID NO. 1 a 85, donde el péptido exhibe típicamente actividad promotora del crecimiento celular.

[0030] Un aspecto adicional de la presente invención proporciona un uso no terapéutico de la composición de la invención como cosmético.

[0031] Los siguientes aspectos pueden ser cosméticos, es decir, no terapéuticos, o terapéuticos.

[0032] Un aspecto de la presente invención proporciona una composición para uso en un método antienvejecimiento. La invención también proporciona un péptido o composición de la invención para uso en un método para para retardar, inhibir o prevenir el envejecimiento de la piel humana. Normalmente, la administración puede realizarse mediante un apósito o parche, o mediante una formulación adecuada para aplicación tópica.

[0033] Un aspecto adicional de la invención proporciona un péptido o una composición de la invención para el uso en un método para promover el crecimiento de tejidos.

[0034] La invención también proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en el tratamiento de un método para promover el crecimiento del tejido epitelial.

[0035] La invención también proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para promover el crecimiento de la piel.

[0036] La invención también proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para promover el crecimiento de un órgano.

[0037] La invención también proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para promover el crecimiento de un organismo.

[0038] Preferiblemente, la célula, el tejido o el organismo presentan una patología normal (por ejemplo, piel envejecida). Típicamente, la célula, el tejido o la piel presentan una patología anormal (por ejemplo, tejido dañado debido a un traumatismo, consumo de fármacos o tejido epitelial del tracto gastrointestinal dañado debido a un trastorno inflamatorio).

[0039] Los usos para promover el crecimiento pueden ser in vivo o in vitro. Los usos para promover el crecimiento pueden implicar la administración a mamíferos externamente (es decir, a la piel) o internamente (es decir, al tracto gastrointestinal).

[0040] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para mejorar el estado muscular en un mamífero.

[0041] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para promover la recuperación muscular, típicamente después del ejercicio.

[0042] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para mantener o restaurar la salud muscular (por ejemplo, masa muscular magra) en un mamífero. Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para mejorar el rendimiento físico mediante administración tópica.

[0043] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para el crecimiento o desarrollo muscular. La composición de la invención puede usarse en un método para aumentar la masa muscular magra en ganado vacuno y otros animales de granja.

[0044] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para aumentar la síntesis de proteínas.

[0045] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o composición de la invención para su uso en un método para el tratamiento de la pérdida muscular.

[0046] Otro aspecto de la invención proporciona el péptido o composición de la invención para su uso en un método para el tratamiento de una herida en un mamífero.

[0047] Se describe en el presente documento el péptido o la composición descritos para su uso en un método para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección caracterizada por daño en las células o tejido epitelial, y/o daño en las células o tejido dérmico o epitelial. Preferiblemente, la enfermedad o afección se caracteriza por daño en las células o tejido dérmico o epitelial y se selecciona entre cáncer y trauma.

[0048] Otro aspecto de la invención se refiere a un método para el tratamiento, la prevención o el cuidado de cualquiera de las enfermedades, afecciones y/o trastornos mencionados anteriormente y descritos en el presente documento, que comprende la administración del péptido o la composición de la invención. La composición puede administrarse por vía tópica.

[0049] Los usos de la invención pueden ser terapéuticos o cosméticos, es decir, no terapéuticos.

[0050] Se describe en el presente documento un péptido o una composición descritos para su uso en un método para el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por atrofia muscular, pérdida de masa muscular magra, reducción del metabolismo anabólico, atrofia catabólica o reducción de la síntesis de proteínas. En una realización, la enfermedad o afección se selecciona entre sarcopenia o caquexia. En una realización, el paciente en tratamiento es de edad avanzada (es decir, mayor de 60 años) y la enfermedad es sarcopenia o caquexia relacionada con la edad. En una realización, el paciente padece cáncer. En una realización, el paciente presenta letargo.

[0051] Se describe en el presente documento un péptido o una composición, tal como se describe, para su uso en un método para tratar o prevenir una enfermedad o afección caracterizada por células o tejido epitelial dañado, y/o células o tejido dérmico o epitelial dañado. Preferiblemente, la enfermedad o afección caracterizada por células o tejido epitelial dañado se selecciona entre cáncer, tejido dañado por traumatismo, consumo de fármacos o tejido epitelial del tracto gastrointestinal dañado debido a un trastorno inflamatorio.

[0052] Otro aspecto de la presente invención proporciona un péptido o una composición de la invención para su uso en un método para mantener o restaurar la salud muscular (por ejemplo, masa muscular magra) en un mamífero.

[0053] Otro aspecto de la invención proporciona el péptido o la composición de la invención para su uso en un método de tratamiento de una herida en un mamífero.

[0054] En una realización, los usos de la invención incluyen una etapa de administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido de la invención.

[0055] En una realización, la composición de la invención se administra sistémicamente.

[0056] En una realización, la composición de la invención (especialmente una composición farmacéutica) se formula para administración oral o parenteral. En la presente memoria se describen otros métodos de administración. Un aspecto adicional de la invención se refiere a una composición tópica que comprende uno o más de los péptidos seleccionados de las SECUENCIA ID NO.1 a 85.

[0057] En una realización, la composición de la invención comprende sustancialmente todos los péptidos de las SECUENCIA ID NO.1 a 85.

[0058] Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a una composición de tratamiento artificial que comprende la composición de la invención. Preferiblemente, la composición de tratamiento es una composición antienvejecimiento. Preferiblemente, el tratamiento es una composición de tratamiento muscular. En una realización, la composición es tópica. En una realización, la composición comprende una crema, gel, loción, ungüento, polvo. Preferiblemente, el tratamiento es una composición para el tratamiento de heridas.

[0059] La invención también se refiere a un yeso, vendaje o apósito adecuado para su aplicación sobre el tejido queratinoso o una herida y que comprende el péptido o la composición de la invención.

[0060] Preferiblemente, la composición o el producto es artificial.

[0061] Definiciones

[0062] Cuando se usen en la presente memoria y a menos que se indique específicamente lo contrario, los siguientes términos tienen los siguientes significados además de cualquier significado más amplio (o más restringido) que los términos puedan tener en la técnica:

[0063] A menos que el contexto requiera lo contrario, el uso del singular en la presente memoria debe interpretarse para incluir el plural y viceversa. El término "un(a)" o "uno", utilizado en relación con una entidad, debe interpretarse para referirse a uno o más de esa entidad. Como tales, los términos "un(a)" (o "uno"), "uno o más" y "al menos uno" se usan indistintamente en la presente memoria.

[0064] Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "comprender", o las variaciones del mismo, como "comprende" o "que comprende", deben interpretarse para indicar la inclusión de cualquier número entero enumerado (por ejemplo, una característica, elemento, propiedad, etapa de método/proceso o limitación) o grupo de números enteros (por ejemplo, características, elementos, propiedades, etapas de método/proceso o limitaciones), pero no la exclusión de ningún otro número entero o grupo de números enteros. Por lo tanto, tal como se usa en la presente memoria, el término "que comprende" es inclusivo o abierto y no excluye números enteros adicionales no enumerados o etapas de método/proceso.

[0065] Como se usa en la presente memoria, el término "enfermedad" se usa para definir cualquier estado anormal que perjudique la función fisiológica y esté asociado a síntomas específicos. El término se usa ampliamente para abarcar cualquier trastorno, enfermedad, anormalidad, patología, dolencia, afección o síndrome en el que la función fisiológica se ve afectada independientemente de la naturaleza de la etiología (o, de hecho, si se ha establecido la base etiológica de la enfermedad). Por lo tanto, engloba las afecciones derivadas de infecciones, traumatismos, lesiones, cirugías, ablaciones radiológicas, intoxicaciones o deficiencias nutricionales.

[0066] Como se usa en la presente memoria, el término "tratamiento" o "tratar" se refiere a una intervención (por ejemplo, la administración de un agente a un sujeto) que cura, mejora o disminuye los síntomas de una enfermedad o elimina (o disminuye el impacto de) su(s) causa(s) (por ejemplo, la reducción en la acumulación de niveles patológicos de enzimas lisosomales). En este caso, el término se utiliza como sinónimo del término "terapia".

[0067] Además, los términos "tratamiento" o "tratar" se refieren a una intervención (p. ej., la administración de un agente a un sujeto) que previene o retrasa el inicio o la progresión de una enfermedad o reduce (o erradica) su incidencia dentro de una población tratada. En este caso, el término tratamiento se usa como sinónimo del término "profilaxis".

[0068] Como se usa en la presente memoria, una cantidad eficaz o una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente define una cantidad que se puede administrar a un sujeto sin una excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable, pero una que sea suficiente para proporcionar el efecto deseado, p. ej. el tratamiento o profilaxis manifestado por una mejora permanente o temporal en el estado del sujeto. La cantidad variará de un sujeto a otro, según la edad y el estado general del individuo, el modo de administración y otros factores. Por lo tanto, aunque no es posible especificar una cantidad eficaz exacta, los expertos en la técnica podrán determinar una cantidad "eficaz" adecuada en cualquier caso individual utilizando la experimentación de rutina y el conocimiento general de fondo. Un resultado terapéutico en este contexto incluye la erradicación o disminución de los síntomas, la reducción del dolor o la incomodidad, la supervivencia prolongada, la mejora de la movilidad y otros marcadores de mejora clínica. Un resultado terapéutico no tiene por qué ser una cura completa.

[0069] En esta memoria descriptiva, el término "composición" debe entenderse como algo hecho por la mano del hombre, y que no incluye las composiciones que se dan de manera natural.

[0070] El término "bioactivo", cuando se usa en la presente memoria, se refiere a un péptido o fragmento que tiene actividad biológica. Por ejemplo, la actividad biológica puede ser una o más de una actividad promotora del transporte de glucosa, actividad promotora del crecimiento, actividad antienvejecimiento, actividad anabólica, actividad promotora del metabolismo anabólico, actividad promotora de la translocación de GLUT4 y actividad promotora de la síntesis de proteínas. La actividad puede ser una actividad antiinflamatoria o actividad antibacteriana. La actividad puede ser antioxidante.

[0071] "Promotor del transporte de glucosa" o "actividad promotora del transporte de glucosa", aplicado a un péptido o fragmento, significa un péptido, variante o fragmento que es capaz de aumentar la captación de glucosa celular en el ensayo de captación de glucosa descrito más adelante.

[0072] "Promoción de la translocación de GLUT4" o "actividad de promoción de la translocación de GLUT4", aplicada a un péptido o fragmento, significa un fragmento de péptido que es capaz de aumentar la translocación de GLUT4 en el músculo esquelético en comparación con un control sin tratar en el ensayoin vitrodescrito más adelante.

[0073] "Anti-envejecimiento" significa inhibir o retrasar la apariencia del envejecimiento de la piel humana y/o revertir la apariencia del envejecimiento. "Ralentizar o inhibir el envejecimiento de la piel" significa ralentizar o inhibir el proceso de envejecimiento de la piel y/o revertir la apariencia del envejecimiento. En una realización, "antienvejecimiento" o "actividad antienvejecimiento", aplicada a un péptido o fragmento, significa una que es capaz de aumentar la producción de colágeno o la producción de elastina en los fibroblastos dérmicos humanos en comparación con un control sin tratar cuando se prueba en un ensayoin vitrocomo se describe más adelante, y/o capaz de aumentar la proliferación celular en el ensayo de proliferación celular descrito más adelante.

[0074] "Promotor del crecimiento celular", tal como se aplica a un péptido o fragmento, significa un péptido, variante o fragmento que es capaz de aumentar la producción de elastina o la producción de colágeno o la proliferación celular en un ensayo como se describe a continuación. Los péptidos que aumentan la proliferación celular o tienen "actividad promotora del crecimiento celular" son péptidos o variantes antienvejecimiento.

[0075] "Aumento de la síntesis de proteínas", tal como se aplica a un péptido de la invención, significa un péptido que es capaz de aumentar significativamente el grado de fosforilación de MTOR en el ensayo Fosfo-MTOR descrito más adelante o aumentar significativamente el grado de síntesis de proteínas en el ensayo de puromicina descrito más adelante. Pueden emplearse péptidos y composiciones que aumentan la síntesis de proteínas para estimular el metabolismo anabólico en un mamífero y/o tratar enfermedades o afecciones caracterizadas por la consunción catabólica.

[0076] "Antiinflamatorio", tal como se aplica a un péptido o fragmento, significa un péptido o fragmento que es capaz de reducir significativamente la secreción de TNFα por macrófagos J774.2 estimulados con LPS (en comparación con macrófagos J774.2 estimulados con LPS sin tratar) cuando los macrófagos se tratan con 100 µM del péptido, variante o fragmento. Los macrófagos J774.2 se trataron con 100 µM de péptido sintético durante 24 horas y luego se estimularon con (A) LPS (10 ng/ml) durante cinco horas o (B) LPS (10 ng/ml) durante 5 horas, seguido de ATP (5 mM) durante una hora. Se recogió el sobrenadante y se determinaron los niveles de TNFα mediante ELISA.

[0077] "Antibacteriano" o "actividad antibacteriana", aplicado a un péptido o fragmento, significa un péptido, variante o fragmento que es capaz de inhibir visiblemente el crecimiento de una bacteria en el siguiente ensayo de inhibición del crecimiento basado en placas de agar: Reserva de péptido = 5 mg/mL disuelto en DMSO. Los inóculos bacterianos se ajustaron al estándar de McFarland 0,5 y se tomaron muestras de las placas de MHA. Se colocaron discos vacíos en las placas y se añadieron 10 µL de cada compuesto (a 64 µg/mL - concentración máxima ensayada). Las placas se incubaron a 37 °C durante 16-18 horas. También se realizaron controles apropiados (DMSO; medio de Mueller-Hinton solo; y dos discos con antibióticos: ciprofloxacina y tetraciclina). "Actividad antioxidante", tal como se aplica a un péptido de la invención, significa un péptido que muestra actividad antioxidante según lo determinado mediante el ensayo de captación de radicales DPPH descrito a continuación. La invención se refiere al uso de péptidos o composiciones de la invención como un antioxidante, y en el tratamiento o la prevención o ralentización de la progresión de enfermedades o afecciones caracterizadas por el estrés oxidativo (o desequilibrios entre factores pro-oxidantes y antioxidantes). Los ejemplos incluyen enfermedades cardiovasculares (especialmente aterosclerosis), cáncer, enfermedades neurodegenerativas (es decir, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y ELA), formación de cataratas, diabetes, artritis reumatoide. La oxidación, la misma reacción química que hace que el hierro se oxide, desempeña un papel corrosivo similar en nuestros cuerpos. El proceso se llama estrés oxidativo. Hay numerosos estudios que prueban que, dado que estas enfermedades están mediadas por el estrés oxidativo y el desequilibrio entre los factores prooxidantes y antioxidantes, los antioxidantes pueden desempeñar un papel fundamental en la prevención o la desaceleración de la progresión de estas afecciones. Varios estudios muestran una asociación entre la baja ingesta de antioxidantes en la dieta y una mayor frecuencia de cardiopatías. Por otro lado, aquellos con altos niveles de antioxidantes en la sangre tienen un menor riesgo de cardiopatías. Por ejemplo, los seres humanos que tomaron más vitamina E de forma regular tuvieron una incidencia de enfermedades cardíacas un 41 % menor que los que tomaron menos cantidades, como se observó en un estudio con enfermeras. Los aumentos en la dieta de vitaminas antioxidantes pueden reducir el riesgo de cardiopatía en un 20-30 %.

[0078] El cáncer mata a millones de personas en todo el mundo. La dieta puede ser la causa del cáncer hasta en un 35 % de todos los cánceres humanos. La baja ingesta de antioxidantes en la dieta también puede ser responsable.

[0079] Los pro-oxidantes, o aquellos que generan radicales libres, estimulan la división celular y estos constituyen el inicio de la mutagénesis y la formación de tumores. Cuando una célula con una cadena de ADN dañada se divide, da lugar a grupos de células alteradas y deformadas que forman el cáncer. Los antioxidantes ejercen su efecto protector al:

[0080] • disminuir el daño oxidativo al ADN y

[0081] • disminuir los aumentos anormales en la división celular

[0082] Además, el tabaquismo y la inflamación crónica conducen a una fuerte generación de radicales libres que parece ser la causa de muchos tipos de cáncer. Algunas investigaciones han indicado que las personas que fuman tienden a tener niveles más bajos de antioxidantes que los no fumadores y esto aumenta el riesgo de cáncer en los fumadores.

[0083] El sistema respiratorio es un objetivo bien conocido para el ataque de los radicales libres. Esto proviene de factores endógenos, así como de la exposición a contaminantes y toxinas del aire, humo de cigarrillos, etc. Estudios recientes sugieren que los radicales libres pueden estar involucrados en el desarrollo de trastornos pulmonares como el asma. Se ha visto que los antioxidantes reducen el desarrollo de síntomas asmáticos. La suplementación con vitamina C, vitamina E y betacaroteno se ha asociado con una función pulmonar mejorada. Los radicales libres también pueden dañar los nervios y el cerebro. El tejido neural puede ser particularmente susceptible al daño oxidativo. Esto se debe a que el cerebro recibe un porcentaje desproporcionadamente grande de oxígeno y tiene grandes cantidades de ácidos grasos poliinsaturados que son muy propensos a la oxidación y al daño oxidativo.

[0084] Las enfermedades implicadas en el estrés oxidativo incluyen:

[0085] • enfermedad de Alzheimer

[0086] • enfermedad de Parkinson

[0087] • demencia, etc.

[0088] Se cree que la formación de cataratas implica el daño a la proteína del cristalino por los radicales libres. Esto conduce a la opacidad de la lente. La formación de cataratas puede retrasarse con el consumo regular de antioxidantes suplementarios como la vitamina E, la vitamina C y los carotenoides. Otras enfermedades como la diabetes, la artritis reumatoide, etc. también están asociadas con niveles bajos de antioxidantes en la sangre. La expresión "composición tópica" se refiere a una composición que es una formulación para administración tópica. "Administración tópica" se refiere a la aplicación al tejido queratinoso, como la piel, el cabello y las uñas. La administración tópica generalmente significa administración a la piel, pero también puede significar la administración a una luz del cuerpo revestida de células epiteliales, por ejemplo, los pulmones o las vías respiratorias, el tracto gastrointestinal, la cavidad bucal. En particular, las formulaciones para administración tópica se describen en "Topical drug delivery formulations", editado por David Osborne y Antonio Aman, Taylor & Francis. Las composiciones o formulaciones para la administración a las vías respiratorias se describen en O'Riordan et al. (Respir Care, 2002, noviembre de 2002, 47), documentos EP2050437, WO2005023290, US2010098660, y US20070053845. Las composiciones y formulaciones para administrar agentes activos al íleon, especialmente al íleon proximal, incluyen micropartículas y microencapsulados donde el agente activo está encapsulado dentro de una matriz protectora formada por polímero o proteína láctea que es resistente a los ácidos, pero propensa a disolverse en el ambiente más alcalino del íleon. Los ejemplos de tales sistemas de administración se describen en los documentos EP1072600.2 y EP13171757.1. Un medio alternativo de administración transdérmica es mediante el uso de un parche para la piel. Por ejemplo, el principio activo se puede incorporar a una crema que consiste en una emulsión acuosa de polietilenglicoles o parafina líquida. El principio activo también puede incorporarse, a una concentración de entre el 1 y el 10 % en peso, en una pomada que consiste en una base de cera blanca o de parafina blanda blanca junto con los estabilizantes y conservantes que sean necesarios. Las formas inyectables pueden contener entre 10 y 1000 mg, preferiblemente entre 10 y 250 mg, de principio activo por dosis.

[0090] Las composiciones se pueden formular en una forma farmacéutica unitaria, es decir, en forma de porciones discretas que contienen una dosis unitaria, o una dosis múltiple o subunidad de una dosis unitaria.

[0092] La expresión "composición cosmética", cuando se usa en la presente memoria, se refiere a una composición que se puede usar con fines cosméticos, de cuidado personal y/o de higiene. Se apreciará que la composición puede tener más de un propósito cosmético y puede usarse para más de uno de estos propósitos al mismo tiempo. Un "cosmético", cuando se usa en la presente memoria, puede incluir, entre otros, lápiz labial, rímel, colorete, base, delineador de ojos, polvos faciales y corporales, protector solar, bloqueador solar, esmalte de uñas, polveras, sólidos, lápices.

[0094] "Composiciones farmacéuticas": Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un péptido de la invención o una composición de péptidos de la invención, mezclado con uno o más diluyentes, excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Aunque los péptidos y las composiciones de la presente invención se pueden administrar solos, generalmente se administrarán mezclados con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéutico, particularmente para la terapia humana. Las composiciones farmacéuticas pueden ser para uso humano o animal en medicina humana y veterinaria. Los ejemplos de dichos excipientes adecuados para las diversas formas diferentes de composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria se pueden encontrar en el "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2ª edición, (1994), editado por A Wade y PJ Weller. En particular, las formulaciones para administración tópica se describen en "Topical drug delivery formulation", editado por David Osborne y Antonio Aman, Taylor y Francis. Los vehículos o diluyentes aceptables para el uso terapéutico son muy conocidos en la técnica farmacéutica y se describen, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). Los ejemplos de vehículos adecuados incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y similares. Los ejemplos de diluyentes adecuados incluyen etanol, glicerol y agua. La elección del vehículo, excipiente o diluyente farmacéutico se puede seleccionar con respecto a la vía de administración prevista y la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como vehículo, excipiente o diluyente, o además de los mismos, cualquier aglutinante, lubricante, agente de suspensión, agente de recubrimiento, o agente solubilización adecuados. Los ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales como glucosa, lactosa anhidra, lactosa de flujo libre, beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, como goma arábiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol. Los ejemplos de lubricantes adecuados incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. En la composición farmacéutica se pueden proporcionar conservantes, estabilizantes, colorantes e incluso agentes aromatizantes. Los ejemplos de conservantes incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácidop-hidroxibenzoico. También se pueden usar antioxidantes y agentes de suspensión.

[0095] El término "mamífero" debe entenderse como un mamífero superior, especialmente un ser humano. Sin embargo, el término también incluye animales no mamíferos como los peces. El ser humano puede ser un bebé, un niño pequeño, un niño, un adolescente, un adulto o un anciano. En una realización de la invención, el ser humano es una persona mayor, por ejemplo, de 55 años o más. En una realización, el ser humano es una persona mayor que experimenta una atrofia de la masa de tejido magro. En una realización, el ser humano es un deportista. En una realización, el ser humano es una mujer embarazada. En una realización, el ser humano sufre de letargo o de falta de energía percibida.

[0097] La expresión "dermatológicamente aceptable", como se usa en la presente memoria, significa que la(s) composición(es) tópica(s) o componente(s) de la(s) composición(es) son adecuados para el uso en contacto con la piel humana o el tejido queratinoso sin riesgo de toxicidad, incompatibilidad, inestabilidad y/o respuesta alérgica, y similares.

[0099] La expresión "liberación sostenida" se usa en un sentido convencional relacionado con un sistema de administración de un compuesto o agente activo, que proporciona la liberación gradual de este compuesto o agente activo durante un período de tiempo y preferiblemente, aunque no necesariamente, con niveles relativamente constantes de liberación del compuesto durante un período de tiempo.

[0101] El término "péptido" utilizado en la presente memoria se refiere a un polímero compuesto de hasta 50 aminoácidos, por ejemplo, monómeros de 5 a 50 aminoácidos, típicamente unidos a través de enlaces peptídicos. Los péptidos (incluyendo los fragmentos y variantes de los mismos) de y para uso en la invención pueden generarse total o parcialmente mediante síntesis química o mediante expresión a partir de ácido nucleico. Por ejemplo, los péptidos de y para uso en la presente invención se pueden preparar fácilmente de acuerdo con métodos de síntesis de péptidos en fase líquida estándar bien establecidos o, preferiblemente, en fase sólida conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, J. M. Stewart y J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2.ª edición, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois (1984).), en M. Bodanzsky y A. Bodanzsky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, Nueva York (1984)). Cuando sea necesario, cualquiera de los péptidos empleados en la invención puede modificarse químicamente para aumentar su estabilidad. Un péptido modificado químicamente o un análogo de péptido incluye cualquier equivalente químico funcional del péptido caracterizado por su mayor estabilidad y/o eficaciain vivooin vitrocon respecto a la práctica de la invención. El término análogo de péptido también se refiere a cualquier derivado de aminoácido de un péptido como se describe en la presente memoria. Un análogo de péptido se puede producir mediante procedimientos que incluyen, pero no se limitan a, modificaciones en las cadenas laterales, incorporación de aminoácidos no naturales y/o sus derivados durante la síntesis de péptidos y el uso de reticuladores y otros métodos que imponen restricciones conformacionales en los péptidos o sus análogos. Los ejemplos de modificaciones de la cadena lateral incluyen la modificación de los grupos amino, como mediante alquilación reductora por reacción con un aldehído seguida de reducción con NaBH<4>; amidación con metilacetimidato; acetilación con anhídrido acético; carbamilación de grupos amino con cianato; trinitrobencilación de grupos amino con ácido 2,4,6-trinitrobenceno sulfónico (TNBS); alquilación de grupos amino con anhídrido succínico y anhídrido tetrahidroftálico; y piridoxilación de lisina con piridoxa-5'-fosfato seguida de reducción con NABH<4>. El grupo guanidino de los residuos de arginina puede modificarse mediante la formación de productos de condensación heterocíclicos con reactivos como 2,3-butanodiona, fenilglioxal y glioxal. El grupo carboxilo puede modificarse mediante la activación de carbodiimida a través de la formación de o-acilisourea seguida de la subsiguiente derivatización, por ejemplo, hasta una amida correspondiente. Los grupos sulfhidrilo pueden modificarse mediante métodos tales como carboximetilación con ácido yodoacético o yodoacetamida; oxidación del ácido perfórmico hasta ácido cisteico; formación de disulfuros mixtos con otros compuestos de tiol; reacción con maleimida; anhídrido maleico u otra maleimida sustituida; formación de derivados de mercurio usando 4-cloromercuribenzoato, ácido 4-cloromercurifenilsulfónico, cloruro de fenilmercurio, 2-cloromercurio-4-nitrofenol y otros mercuriales; carbamilación con cianato a pH alcalino. Los residuos de triptófano pueden modificarse, por ejemplo, mediante oxidación con N-bromosuccinimida o alquilación del anillo de indol con bromuro de 2-hidroxi-5-nitrobencilo o haluros de sulfonilo. Los residuos de tirosina pueden alterarse mediante nitración con tetranitrometano para formar un derivado de 3-nitrotirosina. La modificación del anillo de imidazol de un residuo de histidina puede lograrse mediante alquilación con derivados del ácido yodoacético o N-carbetoxilación con pirocarbonato de dietilo. Los ejemplos de incorporación de aminoácidos y derivados no naturales durante la síntesis de péptidos incluyen, pero no se limitan a, el uso de norleucina, ácido 4-aminobutírico, ácido 4-amino-3-hidroxi-5-fenilpentanoico, ácido 6-aminohexanoico, t-butilglicina, norvalina, fenilglicina, ornitina, sarcosina, ácido 4-amino-3-hidroxi-6-metilheptanoico, 2-tienilalanina y/o isómeros D de aminoácidos. La modificación de la estructura peptídica incluye la generación de péptidos retroinversos que comprenden la secuencia inversa codificada por D-aminoácidos. Los cambios pueden ser aquellos que reducen la susceptibilidad a la proteólisis, reducen la susceptibilidad a la oxidación, alteran la afinidad de unión de la secuencia variante (típicamente, de manera deseable una afinidad creciente) y/o confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas o funcionales en el péptido variante/análogo asociado.

[0103] La expresión "péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 1" que se usa en la presente memoria se refiere a un polímero compuesto de hasta 50 aminoácidos, por ejemplo 5 a 50 monómeros de aminoácidos normalmente unidos a través de enlaces peptídicos, que incluye la SEQ ID NO.: 1 o secuencias de aminoácidos que consisten esencialmente en la SEQ ID NO.: 1, que son sustancialmente idénticas a la SEQ ID NO.: 1, pero alteradas con respecto a uno o más residuos de aminoácidos, por ejemplo alteración de 1, 2 o 3 residuos (en lo sucesivo "variantes" o "variantes peptídicas"). Preferiblemente tales alteraciones implican la inserción, adición, deleción y/o sustitución de 11 o menos aminoácidos, más preferiblemente de 10 o menos, 9 o menos, 8 o menos, 7 o menos, 6 o menos, preferiblemente 5 o menos, 4 o menos, incluso más preferiblemente de 3 o menos, más preferiblemente de 1 o 2 aminoácidos solamente. Se contempla la inserción, adición y sustitución de aminoácidos naturales y modificados. El péptido puede tener cambios conservativos de aminoácidos, en los que el aminoácido que se introduce es similar estructuralmente, químicamente o funcionalmente al que se sustituye. Generalmente, el péptido tendrá al menos un 70 % de identidad de secuencia de aminoácidos, preferiblemente al menos un 80 % de identidad de secuencia, más preferiblemente al menos un 90 % de identidad de secuencia e idealmente al menos un 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad de secuencia con la secuencia original.

[0105] El término "fragmento" debe entenderse como un segmento de aminoácidos de la SECUENCIA ID NO. 1. Normalmente, el fragmento tiene una longitud de entre 3 y 10 aminoácidos contiguos. Generalmente, el fragmento tiene una carga de -5 a 3. La carga de un péptido, fragmento o región se determina utilizando el método de Cameselle, J.C., Ribeiro, J.M. y Sillero, A. (1986). Derivation and use of a formula to calculate the net charge of acid-base compounds. Its application to amino acids, proteins and nucleotides. Biochem. Educ.

[0106] 14, 131-136.

[0108] En esta memoria descriptiva, debe entenderse que la expresión "identidad de secuencia" comprende tanto la identidad como la similitud de secuencia, es decir, una variante (u homólogo) que comparte el 70 % de identidad de secuencia con una secuencia de referencia es aquella en la que el 70 % de los residuos alineados de la variante (u homólogo) son idénticos a, o sustituciones conservativas de, los residuos correspondientes en la secuencia de referencia a lo largo de toda la secuencia. La identidad de secuencia es la cantidad de caracteres que coinciden exactamente entre dos secuencias diferentes. En la presente memoria, los espacios no se cuentan y la medición es relativa a la más corta de las dos secuencias.

[0109] Desde el punto de vista de la "homología de secuencia", debe entenderse que la expresión significa que una variante (u homólogo) comparte un porcentaje definido de similitud o identidad con una secuencia de referencia cuando el porcentaje de residuos alineados de la variante (u homólogo) son idénticos a, o sustituciones conservativas de, los residuos correspondientes en la secuencia de referencia y donde la variante (u homólogo) comparte la misma función que la secuencia de referencia.

[0110] Este alineamiento y el porcentaje de homología o identidad de secuencia pueden determinarse usando programas informáticos conocidos en la técnica, por ejemplo, un programa de alineamiento es BLAST, usando los parámetros predeterminados. Los detalles de estos programas se pueden encontrar en la siguiente dirección de Internet: http://www.nebi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cgi.

[0111] "Trastorno inflamatorio" significa una afección inflamatoria inmunomediada que afecta a los seres humanos y generalmente se caracteriza por una expresión desregulada de una o más citoquinas. Los ejemplos de trastornos inflamatorios incluyen trastornos inflamatorios de la piel y trastornos inflamatorios de las articulaciones, trastornos inflamatorios del sistema cardiovascular, ciertas enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios de los pulmones y las vías respiratorias, trastornos inflamatorios intestinales. Los ejemplos de trastornos inflamatorios de la piel incluyen dermatitis, por ejemplo, dermatitis atópica y dermatitis de contacto, acné vulgar y psoriasis. Los ejemplos de trastornos inflamatorios de las articulaciones incluyen la artritis reumatoide. Los ejemplos de trastornos inflamatorios del sistema cardiovascular son la enfermedad cardiovascular y la aterosclerosis. Los ejemplos de enfermedades autoinmunes incluyen diabetes tipo 1, enfermedad de Graves, enfermedad de Guillain-Barré, lupus, artritis psoriásica y colitis ulcerosa. Los ejemplos de trastornos inflamatorios de los pulmones y las vías respiratorias incluyen asma, fibrosis quística, EPOC, enfisema y síndrome de dificultad respiratoria aguda. Los ejemplos de trastornos inflamatorios intestinales incluyen colitis y enfermedad inflamatoria intestinal. Otros trastornos inflamatorios incluyen cáncer, rinitis alérgica estacional, periodontitis, alergias, hipersensibilidad, isquemia, depresión, enfermedades sistémicas, inflamación posterior a la infección y bronquitis. Los péptidos y las composiciones de la invención también se pueden emplear en el tratamiento no terapéutico de la inflamación. Los ejemplos de tratamiento no terapéutico de la inflamación incluyen el uso para aliviar la inflamación normal, no patológica, por ejemplo, la inflamación en los músculos y las articulaciones después del ejercicio.

[0112] "Enfermedad o afección caracterizada por células o tejidos dérmicos o epiteliales dañados" significa cualquier afección o enfermedad que da como resultado órganos o células o tejidos dérmicos o epiteliales dañados. Un ejemplo es el traumatismo que a menudo da como resultado piel dañada. Otro ejemplo es una afección inflamatoria de la piel, como la psoriasis o el eccema, que a menudo da como resultado una piel dañada. Otro ejemplo es un trastorno inflamatorio del intestino grueso que puede dar como resultado células/tejidos epiteliales dañados que recubren el intestino grueso. Otro ejemplo son las células/tejidos epiteliales dañados que recubren el intestino grueso causados por la ingestión de una sustancia tóxica o dañina, por ejemplo, sustancias químicas o fármacos tóxicos. Otro ejemplo es el cáncer, por ejemplo el cáncer de intestino, que puede dar como resultado un tejido epitelial dañado en el intestino. Otra afección es un trastorno inflamatorio periférico tal como dermatitis atópica que puede dar como resultado un daño en la piel en humanos.

[0113] En esta memoria descriptiva, debe entenderse que la expresión "trastorno metabólico" incluye prediabetes, diabetes; diabetes tipo 1; diabetes tipo 2; síndrome metabólico; obesidad; dislipidemia diabética; hiperlipidemia; hipertensión; hipertrigliceridemia; hiperacidemia grasa; hipercolesterolemia; hiperinsulinemia y MODY.

[0114] "Enfermedad o afección caracterizada por infección bacteriana" significa cualquier afección o enfermedad caracterizada por tener una patología causada por el crecimiento de bacterias o por una infección bacteriana, que incluye, por ejemplo, SARM, salmonela, neumonía bacteriana por listeria, intoxicación alimentaria por estafilococos, meningitis bacteriana. Se proporcionan ejemplos específicos en https://en.wikipedia.org/wiki/List_of_infectious_diseases.

[0115] Debe entenderse que "artificial", aplicado a los productos comestibles, significa hecho por un ser humano y que no existe en la naturaleza.

[0116] "Mejorar el estado muscular" significa mejorar la salud muscular, por ejemplo, promover la síntesis de proteínas del músculo esquelético, la absorción de glucosa esquelética, mejorar la masa de tejido magro en un contexto terapéutico o no terapéutico, promover la recuperación muscular generalmente después del ejercicio o mejorar el rendimiento muscular. Los métodos o usos pueden ser terapéuticos o no terapéuticos. La expresión "mejorar el estado de la masa de tejido magro" debería entenderse que significa aumentar la masa de tejido magro, o inhibir o prevenir la velocidad de degradación de la masa de tejido magro.

[0117] "Promover la recuperación muscular" significa provocar un aumento de la absorción de glucosa en el músculo esquelético en comparación con el músculo esquelético sin tratar.

[0118] "Enfermedad o afección caracterizada por letargo o bajos niveles de energía" significa cualquier afección o enfermedad caracterizada por una sensación de cansancio o baja energía. Los ejemplos incluyen alergias, asma, anemia, cáncer y sus tratamientos, dolor crónico, cardiopatía, infección, depresión, trastornos alimentarios, duelo, trastornos del sueño, problemas de tiroides, efectos secundarios de medicamentos, consumo de alcohol o consumo de drogas.

[0119] La expresión "consunción catabólica" abarca tanto la sarcopenia como la caquexia. ("Catabólico" se refiere a la descomposición del tejido; es lo opuesto a "anabólico", que significa formación de tejido).

[0120] La pérdida de tejido muscular y graso debida a una enfermedad crónica se denomina caquexia. La pérdida general de peso y masa muscular que ocurre con el avance de la edad se denomina sarcopenia. Tanto en la caquexia como en la sarcopenia, la pérdida de masa muscular puede provocar fragilidad y afectar negativamente a una variedad de resultados clínicos (Rolland 2011; Fearon 2013; Muscaritoli 2013). Las personas con caquexia y/o sarcopenia tienen un mayor riesgo de muerte, infección y caídas; cicatrización de heridas más lenta; capacidad de ejercicio y respiración significativamente menor; y disminución general de la calidad de vida.

[0121] La caquexia por lo general causa una reducción de peso más rápida y pronunciada que la sarcopenia y generalmente se caracteriza por una pérdida de tejido muscular y graso que totaliza más del 5 % del peso corporal, pero son comunes las pérdidas de más del 20 % del peso corporal. En muchos casos, una persona con caquexia continúa perdiendo peso incluso si está recibiendo suficientes calorías. Las enfermedades crónicas graves como el cáncer, el SIDA y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) son causas conocidas de caquexia. Entre el 50 % y el 80 % de los pacientes con cáncer experimentan caquexia, y se estima que la caquexia es la causa principal de más del 20 % de las muertes relacionadas con el cáncer. La caquexia en pacientes con VIH/SIDA es común y ocurría casi universalmente antes de la llegada de los medicamentos antivirales para el VIH. La sarcopenia (que en griego significa "pobreza de carne") generalmente se refiere a la pérdida de masa y función muscular relacionada con la edad. Aproximadamente el 50 % de las personas mayores de 80 años experimentan sarcopenia. La sarcopenia también puede ocurrir como resultado de la inactividad física, la mala nutrición o una enfermedad. Algunos investigadores se refieren a la pérdida de masa muscular relacionada con la edad no asociada a una causa subyacente como "sarcopenia primaria", y la que ocurre como consecuencia de una o más causas como "sarcopenia secundaria". La sarcopenia se asocia con un mayor riesgo de resistencia a la insulina y diabetes tipo 2 en adultos no obesos mayores de 60 años. El establecimiento médico convencional a menudo no brinda una intervención temprana y agresiva para la caquexia, lo que proporciona resultados clínicos deficientes, que incluyen muerte prematura y discapacidad. Los tratamientos médicos estándar para la caquexia incluyen fomentar el consumo de líquidos y alimentos y el uso de ciertos medicamentos. Sin embargo, muchas terapias médicas estándar para tratar la sarcopenia y la caquexia presentan el riesgo de efectos adversos como náuseas, edema y fatiga, y algunas de ellas no se han probado adecuadamente en ensayos clínicos. Varias intervenciones nutricionales, de estilo de vida y farmacológicas innovadoras pueden ser útiles para prevenir y tratar la consunción catabólica. La proteína de suero, la creatina y los aminoácidos glutamina, arginina, leucina e hidroximetilbutirato o HMB (un derivado de la leucina) son especialmente importantes para desarrollar y mantener la masa muscular magra. Los ácidos grasos omega-3, el ácido linoleico conjugado y la vitamina D también combaten la pérdida de tejido magro. La investigación sobre estrategias novedosas y emergentes para la prevención de la atrofia muscular es realmente muy necesaria.

[0122] (Ribeiro S, Keheyias, J. Sarcopenia and the analysis of body composition. Adv Nutr 2014: 5: 260-267.

[0123] Muscaritoli A, Lucia S, Molfino A, Cederholm MT, Rossi Fanelli F, Muscle atrophy in aging and chronic diseases: is it sarcopenia or cachexia? Intern Emerg Med 2013;8: 553-560.

[0124] Rolland Y, VanKan GA, Gillette-Guyonnet S, Vellas B. Cachexia versus sarcopenia. Curr Opin Clin Nutr Metab Care.2010;14(1):15-21.

[0125] Evans WJ, Morley JE, Argiles JM, et al. Cachexia: a new definition. Clin Nutr 2008; 27:793-799.

[0126] Fearon K, Arends J, Baracos V. Understanding the mechanisms and treatment options in cancer cachexia. Nat Rev Clin Oncol 2013;10(2):90-99

[0127] "Mantener o restaurar la salud muscular" significa ayudar a retener o restaurar la salud muscular de los mamíferos como resultado del daño sufrido durante el ejercicio. Al promover el transporte de glucosa en el músculo esquelético, los péptidos promueven la recuperación del ejercicio y alivian el dolor muscular y las lesiones relacionadas con el ejercicio. También se pueden usar para disminuir y prevenir los calambres musculares y permitir una recuperación más rápida de los calambres musculares. Los calambres pueden ser el resultado del estrés físico, estrés mental o estrés por lesiones por esfuerzo repetitivo. Al promover el transporte de glucosa, los péptidos ayudan a reducir la miopatía del músculo y ayudan a prevenir la sarcopenia en los mamíferos, promueven la recuperación de lesiones durante el ejercicio y alivian el dolor muscular y las lesiones relacionadas con el ejercicio. La invención también se refiere a un péptido o composición de la invención para el uso en el mantenimiento o la restauración de la salud muscular en un mamífero.

[0128] En esta memoria descriptiva, la expresión "producto para el cuidado personal" debe entenderse como una composición formulada para uso humano en la limpieza o el tratamiento del cuerpo humano, particularmente la piel, los dientes, las uñas, los pies y el cabello. Los ejemplos incluyen champú, acondicionador, cremas y lociones para la piel, polvos, dentífricos, gel o cremas de ducha, gel de baño o ducha, tinte para el cabello, jabón, exfoliante corporal, exfoliante, disoluciones anticaspa, loción corporal, disoluciones para afeitar, humectantes, limpiadores, mascarillas, aceites, sueros y enjuagues, desodorante y antitranspirante.

[0129] La expresión “envejecimiento de la piel” se usa en el sentido en que se usa general y ampliamente en la técnica de los productos cosméticos y de cuidado personal. Los signos de envejecimiento de la piel incluyen arrugas, líneas, hendiduras, bultos, manchas rojas, poros dilatados, aspereza, falta de brillo, pérdida de elasticidad, flacidez, pérdida de tirantez, decoloración, manchas, hiperpigmentación, pecas, queratosis, inflamación, descomposición del colágeno y otros cambios histológicos en las capas de la piel, incluido el tejido subyacente. La expresión "sales cosméticamente o farmacéuticamente aceptables" significa una sal reconocida para su uso en animales y más específicamente en seres humanos, e incluye las sales utilizadas para formar sales de adición de bases, ya sean inorgánicas, tales como y sin limitación, litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, manganeso, cobre, zinc o aluminio, entre otros, ya sean orgánicas, tales como y sin limitación, etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, arginina, lisina, histidina o piperazina, entre otros, o sales de adición de ácido, ya sean orgánicas, tales como y sin limitación, acetato, citrato, lactato, malonato, maleato, tartrato, fumarato, benzoato, aspartato, glutamato, succinato, oleato, trifluoroacetato, oxalato, pamoato o gluconato entre otros, o inorgánicas, tales como y sin limitación, cloruro, sulfato, borato o carbonato, entre otros. La naturaleza de la sal no es crítica, siempre que sea cosméticamente o farmacéuticamente aceptable. Las sales cosméticamente o farmacéuticamente aceptables de los péptidos de la invención se pueden obtener mediante los métodos convencionales, bien conocidos en el estado de la técnica [Berge S. M. et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1-19].

[0130] “Dominio C-terminal”, tal como se aplica a un fragmento, significa los tres primeros aminoácidos del extremo C-terminal del fragmento.

[0131] “Dominio N-terminal”, tal como se aplica a un fragmento, significa los tres últimos aminoácidos del extremo N-terminal del fragmento.

[0132] Por "homólogo" de una proteína de referencia debe entenderse una proteína de una especie vegetal diferente que tiene al menos un 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % de homología de secuencia con la proteína de referencia.

[0133] En la memoria descriptiva, los términos "comprender, comprende, comprendido y comprendiendo" o cualquier variación de los mismos y los términos "incluir, incluye, incluido e incluyendo" o cualquier variación de los mismos se consideran totalmente intercambiables y se les debe dar la mayor interpretación más amplia posible, y viceversa.

[0134] Breve descripción de los dibujos

[0135] La invención se entenderá más claramente a partir de la siguiente descripción de una realización de la misma, dada a modo de ejemplo únicamente, con referencia a los dibujos adjuntos, en los que:

[0136] La Figura 1 ilustra los resultados de un ensayo de proliferación celular utilizando fibroblastos dérmicos humanos (HDF) sin tratar y tratados con péptido.

[0137] La Figura 2 ilustra los resultados de un ensayo de proliferación celular utilizando células HACAT sin tratar y tratadas con péptido.

[0138] La Figura 3 ilustra los resultados de un ensayo de expresión de colágeno utilizando fibroblastos dérmicos humanos (HDF) sin tratar y tratados con péptidos.

[0139] La Figura 4 ilustra los resultados de un ensayo de expresión de elastina utilizando fibroblastos dérmicos humanos (HDF) sin tratar y tratados con péptido.

[0140] La Figura 5 ilustra los resultados de un ensayo de captación de glucosa usando mioblastos esqueléticos humanos sin tratar y tratados con péptido.

[0141] La Figura 6 ilustra los resultados de un ensayo de captación de glucosa usando mioblastos esqueléticos humanos sin tratar y tratados con péptido.

[0142] La Figura 7 ilustra los resultados de un ensayo de captación de glucosa usando mioblastos esqueléticos humanos sin tratar y tratados con péptido.

[0143] La Figura 8 ilustra los resultados de un ensayo de translocación de GLUT4 utilizando mioblastos esqueléticos humanos sin tratar y tratados con péptido.

[0144] La Figura 9 ilustra los resultados de un ensayo de síntesis de proteína muscular (mTOR).

[0145] La Figura 10 ilustra los resultados de un ensayo de síntesis de proteína muscular (puromicina).

[0146] La Figura 11 ilustra los resultados del estudio de toxicidad celular en células HSKMC usando un péptido de SECUENCIA ID NO.1.

[0147] La Figura 12 ilustra los resultados del ELISA de fosfo-acetil-CoA carboxilato (Ser 79) (péptido de SECUENCIA ID NO.1).

[0148] La Figura 13 ilustra los resultados del ELISA fosfo-Akt1 (péptido de SECUENCIA ID NO.1).

[0149] La Figura 14 ilustra los resultados del ELISA fosfo-AMPK alfa (péptido de SECUENCIA ID NO.1). La Figura 15 ilustra los niveles de glucosa en sangre después de 5 días de tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO.1 en ratones KKAY.

[0150] La Figura 16 ilustra los niveles de glucosa en sangre después de 7 días de tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO.1 en ratones KKAY.

[0151] La Figura 17 ilustra el peso corporal de ratones KKAY después de 13 días de tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO.1.

[0152] Descripción detallada de los dibujos

[0153] La invención se describirá ahora con referencia a ejemplos específicos. Estos son meramente ejemplares y con fines ilustrativos solamente: no pretenden limitar de ninguna manera el alcance del monopolio reivindicado o la invención descrita. Estos ejemplos constituyen el mejor modo actualmente contemplado para poner en práctica la invención.

[0154] En el sentido más amplio, la invención se describe en las reivindicaciones adjuntas. En un primer aspecto de la invención proporciona una composición tópica que comprende un péptido antienvejecimiento que tiene hasta 50 aminoácidos, y que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO. 1 (en lo sucesivo, "péptido de la invención").

[0155] La composición puede ser una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO. 1 o una variante del mismo que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO.1, en el que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de la inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido.

[0156] La composición puede ser una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SECUENCIA ID NO.1 o una variante que promueve el transporte de glucosa del mismo que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO. 1, en el que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de la inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido.

[0157] Se entenderá que la composición puede tener un efecto cosmético, es decir, no terapéutico, o un efecto terapéutico. La composición puede tener un efecto cosmético y terapéutico.

[0158] Los ejemplos de aplicaciones cosméticas incluyen, pero sin limitación, anti-envejecimiento, ralentizar o inhibir, o prevenir el envejecimiento de la piel humana, promover el crecimiento de tejido, promover el crecimiento de tejido epitelial, promover el crecimiento de la piel, promover el crecimiento de un órgano, promover el crecimiento de un organismo, mejorar el estado muscular en un mamífero, promover la recuperación del músculo, normalmente después del ejercicio, mantener o restaurar la salud muscular en un mamífero, mejorar el rendimiento físico, el crecimiento muscular o la construcción muscular y el tratamiento de la pérdida muscular. La invención también proporciona usos/aplicaciones terapéuticas, especialmente aplicaciones terapéuticas no tópicas, de la composición o péptido de la invención.

[0159] Los ejemplos de aplicaciones terapéuticas incluyen, pero sin limitación, promover el crecimiento de tejido, promover el crecimiento de tejido epitelial, promover el crecimiento de la piel, promover el crecimiento de un órgano, promover el crecimiento de un organismo, mejorar el estado muscular en un mamífero, promover la recuperación de músculo, mantenimiento o restauración de la salud muscular en un mamífero, crecimiento muscular o desarrollo muscular, tratamiento de la pérdida muscular, tratamiento o prevención de una enfermedad o afección caracterizada por atrofia muscular o una actividad anabólica reducida o síntesis de proteínas reducida (consunción catabólica), tratamiento o prevención de una enfermedad o afección caracterizada o mediada por el estrés oxidativo, tratamiento o prevención de una enfermedad metabólica, especialmente diabetes o prediabetes, tratamiento o prevención de una enfermedad o afección caracterizada por letargo o bajos niveles de energía, tratamiento de una herida en un mamífero, tratamiento o prevención del dolor en un mamífero, tratamiento o prevención de una enfermedad o afección caracterizada por células o tejido epitelial dañado, y/o células o tejido dérmico o epitelial dañado, y tratamiento o prevención de un trastorno metabólico en un mamífero, tal como diabetes.

[0160] La SECUENCIA ID NO.1 tiene la siguiente secuencia:

[0161] WKDEAGKPLVK

[0162] En una realización de la invención, el péptido es bioactivo.

[0163] En una realización, el péptido tiene actividad promotora del transporte de glucosa. En una realización, el péptido tiene actividad promotora del crecimiento celular. En una realización, el péptido tiene actividad antienvejecimiento. En una realización, el péptido tiene actividad anabólica. Se apreciará que el péptido puede tener dos o tres de actividad promotora del transporte de glucosa, actividad promotora del crecimiento celular, actividad antienvejecimiento y actividad anabólica. El péptido puede tener actividad promotora del transporte de glucosa, actividad promotora del crecimiento celular, actividad antienvejecimiento y actividad anabólica. En una realización de la invención, el péptido comprende de aproximadamente 3 a 50 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 14 a aproximadamente de 50 aminoácidos de longitud, preferiblemente aproximadamente de 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 49 aminoácidos de longitud, preferiblemente aproximadamente de 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 aminoácidos de longitud.

[0164] En una realización de la invención, el péptido comprende de aproximadamente 3 a aproximadamente 11 aminoácidos de longitud, preferiblemente aproximadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 aminoácidos de longitud. En una realización, el péptido tiene de 1 a 5 cambios de aminoácidos en comparación con el SECUENCIA ID NO. 1. En una realización, el péptido tiene de 1 a 4 cambios de aminoácidos en comparación con el SECUENCIA ID NO.1. En una realización, el péptido tiene de 1 a 3 cambios de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO.: 1. En una realización, el péptido tiene de 1 a 2 cambios de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO.: 1. En una realización, el cambio de aminoácido es un cambio conservativo de aminoácido. En una realización, el cambio de aminoácido es una sustitución de aminoácido. En una realización, la sustitución de aminoácido es una sustitución conservativa. En una realización, el cambio de aminoácido es una adición de aminoácido. En una realización, el cambio de aminoácido es una deleción de aminoácido.

[0165] El péptido de la invención incluye las siguientes variantes de péptidos:

[0166] Variantes de SEQ ID NO.: 1

[0167] A continuación, se proporcionan variantes de SEQ ID NO.: 1 (WKDEAGKPLVK) que incluyen variantes que tienen 1, 2 o 3 sustituciones conservativas de aminoácidos, 1, 2 a 3 sustituciones no conservativas de aminoácidos, 1, 2 o 3 adiciones de aminoácidos, 1, 2 o 3 deleciones de aminoácidos:

[0168] Una sustitución conservativa de aminoácido:

[0169] WKEEAGKPLVK (SEQ ID NO. 2); FKDEAGKPLVK (SEQ ID NO. 3); WKDEAGKPMVK (SEQ ID NO. 4); WKDEAGRPLVK (SEQ ID NO. 5); WRDEAGKPLVK (SEQ ID NO. 6); WKDEAGKPLMK (SEQ ID NO. 7); WKDQAGKPLVK (SEQ ID NO.8); WKDEATKPLVK (SEQ ID NO.9)

[0170] Dos sustituciones conservativas de aminoácidos:

[0171] YKNEAGKPLVK (SECUENCIA ID NO. 10); WKNESGKPLVK (SECUENCIA ID NO. 11); WKDEAGKTLVR (SECUENCIA ID NO. 12); FKDEATKPLVK (SECUENCIA ID NO. 13); FKDEAGKPLIK (SECUENCIA ID NO.

[0172] 14); WKDEAGKTLLK (SECUENCIA ID NO.15); WKNEAGKPVVK (SECUENCIA ID NO.16); WKDEAGRTLVK (SECUENCIA ID NO.17)

[0173] Tres sustituciones conservativas de aminoácidos:

[0174] WEDESGKPLLK (SECUENCIA ID NO.18); WKEEAGKPIVQ (SECUENCIA ID NO.19); YKNEAGKPLVR (SEQ ID NO.20); WKDQATRPLVK (SEQ ID NO.21); WKDESGKPVLK (SEQ ID NO.22); WQDDSGKPLVK (SEQ ID NO.23); WKNEAGKTLLK (SEQ ID NO.24); WKDKAGEPLVR (SEQ ID NO.25)

[0175] Una sustitución no conservativa de aminoácido:

[0176] WKDEAGNPLVK (SEQ ID NO. 26); CKDEAGKPLVK (SEQ ID NO. 27); WKDEAGKPLGK (SEQ ID NO. 28); WKDENGKPLVK (SEQ ID NO. 29); WKDEARKPLVK (SEQ ID NO. 30); WKDEAGKPLVT (SEQ ID NO. 31); WKDEAGKRLVK (SEQ ID NO.32); WKWEAGKPLVK (SEQ ID NO.33)

[0177] Dos sustituciones no conservativas de aminoácidos:

[0178] WKDEAGFPTVK (SEQ ID NO. 34); WYDMAGKPLVK (SEQ ID NO. 35); WKDYEGKPLVK (SEQ ID NO. 36); WKREAGKPGVK (SEQ ID NO. 37); WKLEKGKPLVK (SEQ ID NO. 38); WKDEAGKPCVK (SEQ ID NO. 39); WKKEAPKPLVK (SEQ ID NO.40); SKDEAGPPLVK (SEQ ID NO.41)

[0179] Tres sustituciones no conservativas de aminoácidos:

[0180] WKHEPGKPLAK (SEQ ID NO. 42); WKDEREKPFVK (SEQ ID NO. 43); WKQEAGKPWRK (SEQ ID NO. 44); VKDEAKKPLVH (SEQ ID NO. 45); NWDEAGKMLVK (SEQ ID NO. 46); IKDEDGPPLVK (SEQ ID NO. 47); LKDEYGKPLVN (SEQ ID NO.48); WKDRAGKELTK (SEQ ID NO.49)

[0181] Adiciones de aminoácidos

[0182] WKDEAGKPLPVK (SEQ ID NO. 50); WKGDENYAGKPLVK (SEQ ID NO. 51); LWKDEAGRKYPLVK (SEQ ID NO. 52); WKDCEGAGKPLVK (SEQ ID NO. 53); WKDEPAGKPLVVK (SEQ ID NO. 54); WKDEAGPKPLVK (SEQ ID NO.55); WKDEAGWADKPLVK (SEQ ID NO.56); WKNDEAGKPLVK (SEQ ID NO.57) Deleciones de aminoácidos

[0183] WKDAKPLVK (SEQ ID NO. 58); WKEAGKPVK (SEQ ID NO. 59); WKDEAKPLVK (SEQ ID NO. 60); WDEAGKPV (SEQ ID NO. 61); WKDEAGKPVK (SEQ ID NO. 62); WDAGKPLVK (SEQ ID NO. 63); WKDEAGKPLV (SEQ ID NO.64); WEAGKPLV (SEQ ID NO.65)

[0184] El péptido variante puede ser una variante bioactiva.

[0185] La invención también proporciona fragmentos de SECUENCIA ID NO.1 y péptidos que comprenden uno o más de estos fragmentos.

[0186] El fragmento puede ser un fragmento bioactivo.

[0187] En una realización, el fragmento es un fragmento antienvejecimiento. En una realización, el fragmento es un fragmento promotor del crecimiento celular. En una realización, el fragmento es un fragmento promotor del transporte de glucosa. En una realización, el fragmento es un fragmento anabólico. Se apreciará que en una realización el fragmento bioactivo es dos o más de un fragmento antienvejecimiento, un fragmento promotor del transporte de glucosa, un fragmento promotor del crecimiento celular y un fragmento anabólico. En una realización, el fragmento bioactivo es un fragmento antienvejecimiento, un fragmento promotor del transporte de glucosa, un fragmento promotor del crecimiento celular y un fragmento anabólico.

[0188] El fragmento puede ser un fragmento bioactivo. En una realización, el fragmento es un fragmento promotor del crecimiento celular. En una realización, el fragmento es un fragmento que promueve la translocación de GLUT4. En una realización, el fragmento exhibe actividad estimulante del metabolismo anabólico. En una realización, el fragmento exhibe actividad antioxidante o antiinflamatoria.

[0189] A continuación se proporcionan ejemplos de fragmentos de SEQ ID NO.: 1:

[0190] WKDEAG (SEQ ID NO. 66); WKDEA (SEQ ID NO. 67); KDEAGKPL (SEQ ID NO. 68); KDEAG (SEQ ID NO.

[0191] 69); DEAGKPL (SEQ ID NO.70); GKPLV (SEQ ID NO.71); DEAGK (SEQ ID NO.72); WKDEAGKPL (SEQ ID NO. 73); WKD (SEQ ID NO. 74); KDE (SEQ ID NO. 75); KPLVK (SEQ ID NO. 76); WKDE (SEQ ID NO. 77); AGKPL (SEQ ID NO.78); EAG (SEQ ID NO.79); AGK (SEQ ID NO.80); KPL (SEQ ID NO.81); LVK (SEQ ID NO.82); GKP (SEQ ID NO.83); DEA (SEQ ID NO.84); PLV (SEQ ID NO.85)

[0192] Se apreciará que la composición puede comprender una pluralidad de péptidos o fragmentos. Preferiblemente, la composición comprende al menos dos péptidos de la invención.

[0193] Preferiblemente, la composición comprende al menos tres péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos cuatro péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos cinco péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos seis péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos siete péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos ocho péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos nueve péptidos de la invención. Preferiblemente, la composición comprende al menos diez péptidos de la invención. En una realización, la composición comprende sustancialmente todos los péptidos. En una realización, la composición comprende sustancialmente todas las variantes. En una realización, la composición está sustancialmente libre de otros péptidos.

[0194] En una realización, el péptido o la composición de la invención tiene una actividad seleccionada de una o más de actividad antibacteriana, actividad antiinflamatoria y actividad antioxidante. La actividad puede ser cosmética, es decir, no terapéutica, terapéutica o ambas. La invención también proporciona una composición de la invención para el uso en un método para mantener o restaurar la salud intestinal en un mamífero. La invención también proporciona una composición de la invención para el uso en un método para el tratamiento de una infección bacteriana. Otro aspecto de la invención proporciona una composición de la invención para el uso en un método para el tratamiento o la prevención de un trastorno inflamatorio y/o inflamación en un mamífero. Preferiblemente, la inflamación es una inflamación sintomática. Este uso puede ser además de los usos de la invención discutidos anteriormente o como una alternativa.

[0195] En una realización, el péptido o fragmento o composición de la invención tiene una actividad seleccionada de una o más de actividad antibacteriana, actividad antiinflamatoria y actividad antioxidante.

[0196] La composición puede ser una composición tópica. La composición tópica puede presentarse en una formulación seleccionada del grupo que comprende cremas, emulsiones múltiples, composiciones anhidras, dispersiones acuosas, aceites, leches, bálsamos, espumas, lociones, geles, geles en crema, disoluciones hidroalcohólicas, disoluciones hidroglicólicas, cosméticos, productos de cuidado personal, hidrogeles, linimentos, sueros, jabones, polvos, pastas, formulaciones semisólidas, linimentos, sueros, champú, acondicionador, ungüentos, cualquier formulación de enjuague, talco, espumas, polvos, esprays, aerosoles, disoluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires, películas de polisacáridos, parches, parches de gel, vendas, un sistema adhesivo, emulsiones de agua en aceite, emulsiones de aceite en agua y emulsiones de silicona. En una realización de la presente invención, la emulsión contiene un lípido o un aceite. La emulsión puede ser, pero sin limitación, emulsiones de aceite en agua, agua en aceite, agua en aceite en agua y aceite en agua en silicona. La emulsión puede contener un humectante. La emulsión puede contener un agente antiespumante, como silicona. La emulsión puede tener cualquier viscosidad adecuada. Las emulsiones pueden contener además un emulsionante y/o un agente antiespumante. Un experto en la técnica conoce los métodos para preparar una emulsión.

[0197] La composición de la invención se puede presentar, preparar y/o administrar en una variedad de formas adecuadas. Tales formas incluyen, por ejemplo, pero sin limitación, formas farmacéuticas líquidas, semisólidas y sólidas, tales como disoluciones líquidas (por ejemplo, disoluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, emulsiones, microemulsiones, comprimidos, píldoras, polvos, liposomas, dendrímeros y otras nanopartículas, micropartículas y supositorios. Se apreciará que la forma puede depender del modo de administración previsto, la naturaleza de la composición o combinación y la aplicación terapéutica u otro uso previsto. Las formulaciones también pueden incluir, por ejemplo, polvos, pastas, ungüentos, jaleas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos), conjugados de ADN, pastas de absorción anhidras, emulsiones de aceite en agua y agua en aceite, emulsiones, carbowax (polietilenglicoles de diversos pesos moleculares), geles semisólidos y mezclas semisólidas que contienen carbowax.

[0198] Debe entenderse que un principio que se considera un principio "activo" en un producto puede ser un principio "funcional" o "excipiente" en otro y viceversa. También se apreciará que algunos principios juegan un papel doble como principio activo y como principio funcional o excipiente.

[0199] En una realización particularmente preferida, los métodos y usos de la invención implican la administración de un péptido o composición de la invención en combinación con uno o más agentes activos, por ejemplo, fármacos promotores del crecimiento existentes o potenciadores farmacológicos disponibles en el mercado. En tales casos, los compuestos de la invención se pueden administrar de forma consecutiva, simultánea o secuencial con uno o más de los otros agentes activos.

[0200] En las realizaciones preferidas, se proporciona el uso repetido de la composición.

[0201] La composición de la invención se puede incorporar a un dispositivo médico para su administración. Dicho dispositivo puede incluir, entre otros, un tejido, parche, vendaje, gasa, calcetín, malla, ropa interior, apósito, guante, mascarilla, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos y parches microeléctricos o un sistema adhesivo adecuado. En tal realización, el dispositivo está en contacto directo con la capa queratínica tal como la piel, liberando así los péptidos de la invención. Se entenderá que la composición tópica se puede incorporar en cualquier forma adecuada como se detalla en la presente memoria. Por ejemplo, la composición tópica o los péptidos de la invención pueden incorporarse en el dispositivo o estar presentes en la superficie del dispositivo, o pueden estar en una formulación de crema, gel o cera o cualquier formulación adecuada definida en la presente memoria e incorporada en el dispositivo o en la superficie del dispositivo.

[0202] El dispositivo puede adaptarse para adherirse o unirse a la piel. En una realización, el dispositivo está adaptado para liberar una cantidad constante de la composición o los péptidos de la invención. Se entenderá que la cantidad de la composición contenida en el sistema de liberación sostenida dependerá, por ejemplo, del lugar donde se vaya a administrar la composición, la cinética y la duración de la liberación de la composición de la invención, así como de la naturaleza de la afección, el trastorno y/o la enfermedad a tratar y/o cuidar. El dispositivo puede ser tal que la composición se libere mediante la biodegradación del dispositivo o mediante fricción entre el dispositivo y el cuerpo, debido a la humedad corporal, el pH de la piel o la temperatura corporal. En una realización, la composición puede comprender además al menos un excipiente cosméticamente o farmacéuticamente aceptable. El excipiente se puede usar indistintamente con un principio funcional o un aditivo. Se entenderá que, aunque las composiciones tópicas de la presente invención pueden administrarse solas, generalmente se administrarán mezcladas con un excipiente cosmético o farmacéutico. Los excipientes cosméticamente o farmacéuticamente aceptables son muy conocidos en la técnica, y se puede usar cualquier excipiente conocido siempre que sea adecuado para la administración tópica y sea dermatológicamente aceptable sin una toxicidad, incompatibilidad y/o reacción alérgica indebidas.

[0203] Preferiblemente, cualquier excipiente incluido está presente en cantidades mínimas. La cantidad de excipiente incluida dependerá de numerosos factores, incluido el tipo de excipiente utilizado, la naturaleza del excipiente, los componentes de la composición tópica, la cantidad de agente activo o péptido en la composición tópica y/o el uso previsto de la composición tópica. La naturaleza y cantidad de cualquier excipiente no debería alterar inaceptablemente los beneficios de los péptidos de esta invención.

[0204] En una realización de la invención, el excipiente puede ser un diluyente, vehículo, aglutinante, lubricante, agente de suspensión, agente de recubrimiento, conservante, estabilizadores, colorantes, vehículo, agente solubilizante, base, emoliente, agente emulsionante, fragancia, humectante y/o tensioactivos adecuados. Los ejemplos de diluyentes adecuados incluyen, pero sin limitación, cualquier diluyente descrito en los documentos US2014120131 o US2004132667. Los ejemplos incluyen etanol, glicerol y agua. Los ejemplos de vehículos adecuados incluyen, pero no se limitan a, lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y cualquier vehículo adecuado descrito en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0205] Los ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, almidón, gelatina, azúcares naturales como glucosa, lactosa anhidra, lactosa de flujo libre, beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, como goma arábiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol y cualquier aglutinante adecuado descrito en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0206] Los ejemplos de lubricantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio y cloruro de sodio y cualquier lubricante adecuado descrito en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0207] El vehículo puede ser cualquier vehículo adecuado conocido en la técnica o descrito en los documentos US2014120131 o US2004132667. En algunas realizaciones, el vehículo puede incluir, entre otros, un líquido, como agua, aceites o tensioactivos, incluidos los de origen animal, vegetal o sintético, polímero, aceite, como aceite de cacahuete, aceite mineral, aceite de ricino, aceite de soja, alcohol, polisorbatos, ésteres de sorbitán, éter sulfatos, sulfatos, betaínas, glucósidos, maltósidos, alcoholes grasos, nonoxinoles, poloxámeros, polioxietilenos, polietilenglicoles, dextrosa, glicerol o digitonina. Se entenderá que el vehículo será dermatológicamente aceptable. Los vehículos preferidos contienen una emulsión tal como emulsiones de aceite en agua, agua en aceite, agua en aceite en agua y aceite en agua en silicona. Las emulsiones pueden contener además un emulsionante y/o un agente antiespumante.

[0208] En una realización de la invención, la composición puede comprender además uno o más principios adicionales. La composición de la invención se puede administrar de forma consecutiva, simultánea o secuencial con uno o más agentes adicionales. Dichos principios adicionales pueden ser beneficiosos para incluirlos en una composición tópica, o beneficiosos dependiendo del uso previsto de la composición tópica. El principio adicional puede ser activo o funcional o ambos.

[0209] Los ejemplos de tales principios adicionales incluyen, pero no se limitan a, uno o más agentes de limpieza, agentes acondicionadores, protector solar, pigmento, humectante, agentes espesantes, agentes gelificantes, aceite esencial, astringentes, pigmentos, agente antiaglomerante, agente antiespumante, aglutinantes, aditivos, tampones, agentes quelantes, analgésicos externos, materiales o formadores de películas, agentes de carga, polímeros, agentes opacificantes, ajustadores del pH, propulsores, agentes reductores, secuestrantes, agentes blanqueadores y aclarantes de la piel, agentes acondicionadores de la piel, aloe vera, cicatrizantes, calmantes, suavizantes, ácido pantoténico, agentes de tratamiento, espesantes, vitaminas, colorantes, productos farmacéuticos, agentes antisépticos, agentes antiespumantes, agentes tamponadores, astringentes, polímeros, ajustadores del pH, desodorantes o cualquier otro vehículo o tensioactivo dermatológicamente aceptable.

[0210] Debe entenderse que los principios adicionales enumerados pueden proporcionar más de un beneficio. La clasificación dada en la presente memoria es solo para mayor claridad y conveniencia y no pretende limitar el principio adicional a esa aplicación o categoría en particular enumerada.

[0211] Cualquier principio adicional debe ser adecuado para su aplicación en la piel sin una toxicidad, incompatibilidad y/o reacción alérgica indebidas.

[0212] En algunas realizaciones, el principio adicional tiene actividad de transporte de glucosa o ayuda a la actividad de transporte de glucosa. En algunas realizaciones, el principio adicional tiene actividad anabólica. En algunas realizaciones, el principio adicional tiene actividad antiinflamatoria o ayuda a la actividad antiinflamatoria. En algunas realizaciones, el principio adicional tiene actividad antienvejecimiento o ayuda a la actividad antienvejecimiento. En algunas realizaciones, el principio adicional es para la salud y/o el desarrollo de la capa queratínica, la salud y/o el desarrollo de la piel y/o la salud, la recuperación y/o el desarrollo de los músculos. El agente activo puede ser un potenciador farmacológico. Dichos agentes activos se conocen y están disponibles en el mercado. En tales casos, la composición tópica de la invención se puede administrar de forma consecutiva, simultánea o secuencial con uno o más de los otros agentes activos.

[0213] En algunas realizaciones, el principio adicional puede ser farnesol ([2E, 6E]-3,7,11-trimetil-2,6,10-dodecatrien-1-ol), fitantriol (3,7,11,15-tetrametilhexadecano-1,2,3-triol), agentes activos de descamación, enzimas, inhibidores de enzimas, activadores de enzimas, extractos botánicos y extractos marinos, agentes activos antiacné, antiarrugas o antiatrofia, antioxidantes/captadores de radicales, quelantes, flavonoides, agentes antiinflamatorios, agentes anticelulíticos, anestésicos tópicos, agentes activos de bronceado, agentes aclarantes de la piel, agentes cicatrizantes de la piel, bisabolol, agente activo antimicrobiano o antifúngico, agentes activos de protección solar, material particulado, agentes acondicionadores, agentes estructurantes, agente espesante. El agente activo de descamación puede ser cualquier agente adecuado que mejore la apariencia de la piel o la textura de la piel y es como se describe en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0214] Los ejemplos de agentes activos anti-acné son los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667, e incluyen resorcinol, ácido salicílico, eritromicina, zinc, azufre, peróxidos de benzoílo.

[0215] Los ejemplos de agentes espesantes son los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667, e incluyen polímeros de ácido carboxílico, polímeros de poliacrilato reticulados, polímeros de poliacrilamida, polisacáridos.

[0216] Los ejemplos de agentes acondicionadores son los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667, e incluyen humectantes o acondicionadores para la piel.

[0217] Los ejemplos de agentes estructurantes son los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667, e incluir cualquier agente que proporcione características reológicas a la composición y contribuya a la estabilidad de la composición.

[0218] Se puede usar cualquier agente activo antimicrobiano o antifúngico adecuado y los ejemplos se describen en los documentos US2014120131 o US2004132667. Dichos agentes activos son capaces de destruir microbios, evitando el crecimiento o la acción de los microbios. Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, fármacos βlactámicos, fármacos de quinolona, tetraciclina, eritromicina, sulfato de estreptomicina, ácido salicílico, peróxido de benzoílo.

[0219] Los ejemplos de un material en partículas incluyen un óxido metálico.

[0220] Los ejemplos de agentes anticelulíticos incluyen los agentes de xantina.

[0221] Los ejemplos de agentes activos de bronceado incluyen 1,3-dihidroxi-2-propanona y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0222] Los ejemplos de anestésicos tópicos incluyen benzocaína, lidocaína y bupivacaína y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0223] Los ejemplos de agentes para aclarar la piel incluyen cualquier agente conocido en la técnica, como ácido kójico, ácido ascórbico y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0224] Los ejemplos de sustancias activas de protección solar incluyen cualquier sustancia activa de protección solar orgánica o inorgánica adecuada. Los ejemplos incluyen los óxidos metálicos, 2-etilhexil-p-metoxicinamato y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0225] Los ejemplos de agentes cicatrizantes de la piel incluyen ácido pantenoico como se describe en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0226] Los ejemplos de agentes antiinflamatorios incluyen cualquier agente que mejore la apariencia, el tono o el color de la piel e incluyen, pero no se limitan a, corticosteroides, hidrocortisona, agentes no esteroideos como ibuprofeno y aspirina y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0227] Los ejemplos de flavonoides incluyen flavanonas, metoxiflavonas, chalcona sin sustituir y mezclas de los mismos y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667.

[0228] Los ejemplos de enzimas incluyen lipasas, proteasas, catalasa, superóxido dismutasa, amilasa, peroxidasa, glucuronidasa, ceramidasas, hialuronidasas. Los ejemplos de inhibidores de enzimas incluyen inhibidores de tripsina, inhibidores de Bowmann Birk, inhibidores de quimotripsina, extractos botánicos, flavonoides, quercetina, chalcona y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667 y las mezclas de los mismos. Los ejemplos de activadores de enzimas incluyen coenzima A, Q10 (ubiquinona), glicirricina, berberina, crisina y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667 y las mezclas de los mismos.

[0229] Los ejemplos de agentes activos antiarrugas o antiatrofia incluyen aminoácidos D y L que contienen azufre, en particular, derivados de N-acilo tales como N-acetil-L-cisteína, hidroxiácidos, ácido fítico, ácido lipoico, ácido lisofosfatídico, agentes exfoliantes para la piel, vitamina B<3>, retinoides y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667 y las mezclas de los mismos.

[0230] El agente antioxidante/eliminador de radicales puede ser cualquier agente que sea útil para proporcionar protección contra la radiación UV u otros agentes ambientales que puedan causar daños en la piel, como los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667. Los ejemplos de antioxidantes/captadores de radicales incluyen ácido ascórbico, sus sales y derivados (vitamina C), tocoferol, sus sales y derivados (vitamina E), ácidos hidroxibenzoicos butilados y sus sales, peróxidos, ácidos gálicos y ésteres alquílicos, ácido sórbico, ácido lipoico, aminas, pidolato de lisina, pidolato de arginina, ácido nordihidroguaiarético, bioflavonoides, curcumina, lisina, metionina, prolina, superóxido dismutasa, silimarina, extractos de té y las mezclas de los mismos.

[0231] Los ejemplos de quelantes incluyen EDTA, NTA, ácidos hidroxámicos, ácido fítico, lactoferrina y los descritos en los documentos US2014120131 o US2004132667 y las mezclas de los mismos. Un quelante significa un agente capaz de eliminar un ion metálico formando un complejo de modo que el ion metálico no pueda participar en reacciones químicas ni catalizarlas. Un quelante es útil para la protección contra la radiación UV u otros agentes ambientales que pueden dañar la piel.

[0232] Se apreciará que se puede añadir una pluralidad de principios adicionales. La cantidad del principio adicional puede ser de aproximadamente un 0,001 % a aproximadamente un 50 % en peso de la composición, preferiblemente de aproximadamente un 0,01 % a aproximadamente un 20 %, preferiblemente de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 5 %, preferiblemente un 2 % en peso de la composición. La cantidad de principio adicional incluido dependerá de numerosos factores, incluido el tipo de principio adicional utilizado, la naturaleza del principio adicional, los componentes de la composición tópica, la cantidad de agente activo o péptido en la composición tópica y/o el uso previsto de la composición tópica. La naturaleza y cantidad de cualquier principio adicional no debería alterar inaceptablemente los beneficios de los péptidos de esta invención.

[0233] La composición tópica puede estar libre de alcohol.

[0234] En algunas realizaciones, la composición comprende además uno o más agentes activos adicionales, además del péptido de la invención (también conocido como el agente activo de la composición). Además, o alternativamente, la composición se puede administrar con uno o más agentes activos adicionales. Típicamente, dicho agente activo adicional está presente solo en cantidades mínimas. En algunas realizaciones, puede que no haya un agente activo adicional presente en la composición. La cantidad de agente activo adicional incluida dependerá de numerosos factores, incluido el tipo de agente activo adicional utilizado, la naturaleza del agente activo adicional, los componentes de la composición tópica, la cantidad de agente activo o péptido en la composición tópica. y/o el uso previsto de la composición tópica. La naturaleza y cantidad de cualquier agente activo adicional no debería alterar inaceptablemente los beneficios de los péptidos de esta invención.

[0235] Debe entenderse que un principio que se considera un principio "activo" en un producto puede ser un principio "funcional" o "excipiente" en otro y viceversa. También se apreciará que algunos principios juegan un papel doble como principio activo y como principio funcional o excipiente.

[0237] Los ejemplos de agentes activos adicionales incluyen fármacos promotores del transporte de glucosa, suplementos para la piel, agentes para el tratamiento y/o el cuidado de la piel, agentes antiinflamatorios, agentes antienvejecimiento, agentes anabólicos, agentes promotores del crecimiento celular y potenciadores farmacológicos. Dichos agentes son muy conocidos en la técnica y se apreciará que se puede utilizar cualquier agente activo adicional adecuado. Los agentes activos adicionales para el tratamiento y/o el cuidado de la piel pueden incluir agentes de síntesis de colágeno, retinoides, agentes exfoliantes, agentes anticelulíticos, agentes inhibidores de elastasa, agentes estimulantes o inhibidores de la síntesis de melanina, agentes autobronceadores, agentes antienvejecimiento, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas y agentes cicatrizantes. Los agentes activos también incluyen agentes antiinflamatorios.

[0239] Cualquier agente activo adicional debe ser adecuado para su aplicación en la piel sin una toxicidad, incompatibilidad y/o reacción alérgica indebidas. Se entenderá que la clasificación que se proporciona en la presente memoria es solo por claridad y conveniencia y no pretende limitar el principio, excipiente o agente activo adicional a esa aplicación o categoría particular enumerada.

[0241] En una realización particularmente preferida, los métodos y usos descritos en la presente memoria implican la administración de un péptido o composición de la invención en combinación con uno o más agentes activos, por ejemplo, fármacos promotores del crecimiento existentes o potenciadores farmacológicos disponibles en el mercado. En tales casos, los compuestos de la invención se pueden administrar de forma consecutiva, simultánea o secuencial con uno o más de los otros agentes activos.

[0243] En una realización, el efecto de la presente invención se logra mediante la aplicación o administración tópica de la composición tópica de la invención descrita en la presente memoria a una persona, animal o paciente que necesite tratamiento o atención. La administración tópica significa preferiblemente la administración a una capa queratínica como la piel, el cabello y/o las uñas, pero también puede significar la administración a un lumen corporal revestido con células epiteliales, por ejemplo, los pulmones o las vías respiratorias, el tracto gastrointestinal, la cavidad bucal. El efecto puede limitarse a la superficie de la piel o puede estar dentro de la piel o una combinación de ambos.

[0245] La composición tópica de la invención se administra en una cantidad cosméticamente o farmacéuticamente eficaz. En otras palabras, en una cantidad que no sea tóxica pero que sea suficiente para proporcionar el efecto deseado. Se apreciará que un experto en la técnica sería capaz de determinar una dosis apropiada de las composiciones tópicas de la invención para administrarlas sin experimentación excesiva. Alternativamente, un médico determinará la dosis real que es más adecuada para un paciente dependiendo de la afección, enfermedad o trastorno particular a tratar o cuidar y la edad, el peso corporal y/o la salud de la persona. Dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el modo y el momento de la administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad de la afección particular y el individuo que se somete a la terapia. Por supuesto, puede haber casos individuales que merezcan intervalos de dosificación más altos o más bajos, y están dentro del alcance de esta invención. Por ejemplo, la composición se puede administrar a una dosis de 0,01 a 50 mg/kg de peso corporal, como de 0,1 a 30 mg/kg, más preferiblemente de 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal, preferiblemente de 0,1 a 5 mg/kg de peso corporal. En una realización ejemplar, se administrarán al paciente una o más dosis de 10 a 300 mg/día o, más preferentemente, de 10 a 150 mg/día. La cantidad y la frecuencia es la que mejor se adapta al propósito. La frecuencia de aplicación o administración puede variar mucho, dependiendo de las necesidades de cada sujeto, siendo recomendable una aplicación o administración que va desde una vez al mes hasta diez veces al día, preferiblemente de una vez a la semana a cuatro veces al día, más preferiblemente de tres veces a la semana a tres veces al día, incluso más preferentemente una o dos veces al día.

[0247] En realizaciones preferidas, se proporciona el uso repetido de la composición.

[0249] La composición tópica se puede aplicar, pero sin limitación, frotando o masajeando el tejido queratinoso, la piel o el área del cuerpo a tratar o cuidar. En algunas realizaciones, la composición se deja o no se elimina del área del cuerpo. En otras realizaciones, la composición se elimina después de un período de tiempo, tal como, entre otros, de aproximadamente 2 minutos a 60 minutos, de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 30 minutos, preferiblemente de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 20 minutos. La composición puede eliminarse inmediatamente después de la aplicación. En algunas realizaciones de la presente invención, la composición de la invención se puede aplicar a un área a tratar con medios para lograr una mayor penetración de la composición y/o péptido de la invención, tales como, pero sin limitación, iontoforesis, sonoforesis, electroporación, parches microeléctricos, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, curación oclusiva, microinyecciones o inyecciones sin aguja mediante presión, tales como inyecciones por presión de oxígeno, o cualquier combinación de las mismas.

[0251] Los péptidos o fragmentos de la invención se usan en la composición cosmética o farmacéutica tópica de esta invención a concentraciones cosméticamente, farmacéuticamente o terapéuticamente eficaces para lograr el efecto deseado; de forma preferida respecto al peso total de la composición, entre un 0,00000001 % (en peso) y un 20 % (en peso); preferentemente entre un 0,000001 % (en peso) y un 15 % (en peso), más preferentemente entre un 0,0001 % (en peso) y un 10 % (en peso) y aún más preferentemente entre un 0,0001 % (en peso) y un 5 % (en peso). Idealmente, los péptidos de la presente invención se usan preferiblemente de aproximadamente un 0,00001 % p/p a aproximadamente un 0,5 % p/p, y más preferiblemente de un 0,00005 % p/p a aproximadamente un 0,05 % p/p, y lo más preferiblemente de aproximadamente un 0,0001 % p/p. a aproximadamente un 0,01 % p/p de la composición. Idealmente, los péptidos de la presente invención se usan preferiblemente de aproximadamente un 0,0001 % p/p a aproximadamente un 0,004 % p/p de la composición.

[0252] La composición de la invención se puede administrar individualmente o en combinación con otros agentes farmacológicamente activos. Se entenderá que tal terapia de combinación abarca diferentes regímenes terapéuticos, incluyendo, sin limitación, la administración de múltiples agentes juntos en una sola forma de dosificación o en distintas formas farmacéuticas individuales. Si los agentes están presentes en diferentes formas farmacéuticas, la administración puede ser simultánea o casi simultánea o puede seguir cualquier régimen predeterminado que abarque la administración de los diferentes agentes. Los agentes activos adecuados pueden ser como se describe en la presente memoria.

[0254] En algunas realizaciones de la presente invención, la composición puede administrarse a través de liposomas, liposomas mixtos, oleosomas, niosomas, etosomas, milicápsulas, cápsulas, macrocápsulas, nanocápsulas, transportadores de lípidos nanoestructurados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas mixtas de tensioactivos, micelas mixtas de tensioactivos-fosfolípidos, miliesferas, esferas, lipoesferas, partículas, nanoesferas, nanopartículas, milipartículas, nanopartículas sólidas así como microemulsiones que incluyen microemulsiones de agua en aceite con una estructura interna de micelas inversas y microesferas con nanoemulsiones, micropartículas.

[0256] Hay una variedad de métodos disponibles para preparar liposomas. Véase, por ejemplo, Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioing. 9:467 (1980)), patentes de EE. UU. n.º 4,186,183, 4,217,344, 4,235,871, 4,261,975, 4,485,054, 4,501,728, 4,774,085, 4,837,028, 4,235,871, 4,261,975, 4,485,054, 4,501,728, 4,774,085, 4,837,028, 4,946,787, publicación PCT n.º WO 91/17424, Deamer y Bangham, Biochim. Biophys. Acta 443:629-634 (1976); Fraley, et al., PNAS 76:3348-3352 (1979); Hope et al., Biochim. Biophys. Acta 812:55-65 (1985); Mayer et al., Biochim. Biophys. Acta 858:161-168 (1986); Williams et al., PNAS 85:242-246 (1988); Liposomes (Ostro (ed.), 1983, Capítulo 1); Hope et al., Chem. Phys. Lip.40:89 (1986)); Gregoriadis, Liposome Technology (1984) y Lasic, Liposomes: from Physics to Applications (1993))). Los métodos adecuados incluyen, por ejemplo, sonicación, extrusión, alta presión/homogeneización, microfluidización, diálisis con detergente, fusión inducida por calcio de vehículos de liposomas pequeños y métodos de fusión con éter, todos los cuales son muy conocidos en la técnica.

[0258] Estos sistemas de administración pueden adaptarse para lograr una mayor penetración del compuesto y/o los péptidos de la invención. Esto puede mejorar las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas. El sistema de administración puede ser un sistema de liberación sostenida en el que el compuesto o péptido de la invención se libera gradualmente durante un período de tiempo y preferiblemente con una tasa de liberación constante durante un período de tiempo. Los sistemas de administración se preparan mediante métodos conocidos en la técnica. La cantidad de péptido contenido en el sistema de liberación sostenida dependerá de dónde se va a administrar la composición y la duración de la liberación, así como del tipo de afección, enfermedad y/o trastorno que se va a tratar o cuidar.

[0260] El compuesto de la invención puede administrarse mediante administración oral. El compuesto (y otros principios, si se desea) también puede encerrarse en una cápsula de gelatina de cubierta dura o blanda, comprimirse en comprimidos o incorporarse directamente a la dieta del sujeto. Para la administración terapéutica oral, los compuestos pueden incorporarse con excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. El compuesto se puede recubrir, o coadministrar el compuesto con un material para evitar su inactivación.

[0261] La composición de la invención puede ser un producto alimenticio o una bebida. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de nutrición deportiva, por ejemplo, una bebida, un refrigerio o un suplemento. En una realización, el producto comestible artificial es una bebida. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de panadería. En una realización, el producto comestible artificial es un producto lácteo. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de refrigerio. En una realización, el producto comestible artificial es un producto alimenticio extruido horneado. En una realización, el producto comestible artificial es leche en polvo. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de fórmula infantil. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de confitería. En una realización, el producto comestible artificial es un yogur. En una realización, el producto comestible artificial es una bebida de yogur. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de helado. En una realización, el producto comestible artificial es un producto alimenticio congelado. En una realización, el producto comestible artificial es un cereal para el desayuno. En una realización, el producto comestible artificial es un pan. En una realización, el producto comestible artificial es una bebida láctea aromatizada. En una realización, el producto comestible artificial es una barra de confitería. En una realización, el producto comestible artificial es un té o un producto de té. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de refrigerio extruido. En una realización, el producto comestible artificial es un producto de refrigerio frito. En una realización, el producto comestible artificial es un suplemento nutricional. En una realización, el producto comestible artificial es un producto nutricional deportivo. En una realización, el producto comestible artificial es un producto alimenticio para bebés. En una realización, el producto comestible artificial es un producto alimenticio especial para personas inmunocomprometidas. En una realización, el producto comestible artificial es un alimento para pacientes geriátricos.

[0262] En una realización, la composición es un producto alimenticio vegetal. En una realización, la composición es un medio de cultivo celular. En una realización, la composición es un alimento para animales. En una realización, la composición es un complemento alimenticio para animales. En una realización, la composición es un alimento médico.

[0263] En una realización, la composición de la invención se puede administrar mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, subcutánea, intraperitoneal y/o intramuscular). Por ejemplo, puede administrarse mediante infusión o inyección intravenosa o mediante inyección intramuscular o subcutánea. La composición de la invención puede ser para uso humano o animal en medicina humana y veterinaria. La composición de la invención se puede usar para usos farmacéuticos, de cuidado personal y/o cosméticos. La composición se puede usar para tratar o cuidar cualquier enfermedad, trastorno o afección de la piel, incluidos, entre otros, psoriasis, dermatitis, dermatitis alérgica, eczema, espongiosis, edema, cáncer de piel, úlceras, acné, cicatrices, celulitis, elastosis, queratosis, rosácea, varices, trastornos inflamatorios.

[0264] La composición se puede utilizar para el tratamiento no tópico de cualquier enfermedad, trastorno o afección de la piel, incluidos, entre otros, psoriasis, dermatitis, dermatitis alérgica, eczema, espongiosis, edema, cáncer de piel, úlceras, acné, cicatrices, celulitis, elastosis, queratosis, rosácea, varices, trastornos inflamatorios. La composición se puede usar para el tratamiento no tópico de una herida en un mamífero. En otra realización, la composición es para el uso en el tratamiento no tópico o la prevención de una enfermedad o afección caracterizada por células o tejidos epiteliales dañados y/o células o tejidos dérmicos o epiteliales dañados. La enfermedad puede ser, pero sin limitación, cáncer y traumatismo.

[0265] La composición se puede usar para tratar o cuidar los signos visibles del envejecimiento, incluidos, entre otros, arrugas, estrías y ojeras, sequedad, líneas finas, manchas de la edad, manchas rojas, flacidez de la piel y afecciones causadas por la exposición al sol, incluidas las quemaduras solares, estrés, contaminación y/o la alimentación. La composición tópica también se puede usar para retrasar, ralentizar o inhibir las pieles o el inicio del envejecimiento. La composición se puede administrar mediante un dispositivo médico, como un emplasto o un parche, como se describe en la presente memoria.

[0266] La composición puede usarse para tratar o cuidar una herida en un mamífero. En otra realización, la composición tópica es para el uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección caracterizada por células o tejidos epiteliales dañados y/o células o tejidos epiteliales o dérmicos dañados. La enfermedad puede ser, pero sin limitación, cáncer y traumatismo.

[0267] La composición se puede usar para tratar o cuidar cualquier afección muscular, para mejorar el estado muscular en un mamífero, para promover la recuperación del músculo, típicamente después del ejercicio, para mantener o restaurar la salud muscular (por ejemplo, la masa de tejido magro) en un mamífero, para mejorar el rendimiento físico, en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección caracterizada por letargo o bajos niveles de energía.

[0268] La composición se puede usar para aumentar o estimular el crecimiento muscular.

[0269] La composición se puede usar para promover el crecimiento de un tejido, promover el crecimiento del tejido epitelial, promover el crecimiento de la piel, promover el crecimiento de un órgano, promover el crecimiento de un organismo. La piel puede tener una patología normal y/o una patología anormal.

[0270] La composición también se puede usar para tratar o cuidar cualquier trastorno inflamatorio. En una realización, el trastorno inflamatorio es un trastorno inflamatorio de las articulaciones. En una realización, el trastorno inflamatorio es un trastorno inflamatorio del sistema cardiovascular. En una realización, el trastorno inflamatorio es una enfermedad autoinmune. En una realización, el trastorno inflamatorio es un trastorno inflamatorio de los pulmones y las vías respiratorias. En una realización, el trastorno inflamatorio es un trastorno inflamatorio intestinal. En una realización, el trastorno inflamatorio es dermatitis. En una realización, el trastorno inflamatorio es acné vulgar. En una realización, el trastorno inflamatorio es psoriasis. En una realización, el trastorno inflamatorio es artritis reumatoide. En una realización, el trastorno inflamatorio es una enfermedad cardiovascular. En una realización, el trastorno inflamatorio es aterosclerosis. En una realización, el trastorno inflamatorio es diabetes tipo I.

[0271] En una realización, el trastorno inflamatorio es la enfermedad de Graves. En una realización, el trastorno inflamatorio es la enfermedad de Guillain-Barré. En una realización, el trastorno inflamatorio es lupus. En una realización, el trastorno inflamatorio es artritis psoriásica. En una realización, el trastorno inflamatorio es colitis ulcerosa. En una realización, el trastorno inflamatorio es asma. En una realización, el trastorno inflamatorio es fibrosis quística. En una realización, el trastorno inflamatorio es EPOC. En una realización, el trastorno inflamatorio es enfisema. En una realización, el trastorno inflamatorio es el síndrome de dificultad respiratoria aguda. En una realización, el trastorno inflamatorio es colitis. En una realización, el trastorno inflamatorio es enfermedad inflamatoria intestinal.

[0272] La composición también se puede usar para tratar o cuidar un trastorno metabólico. En una realización, el trastorno metabólico es prediabetes. En una realización, el trastorno metabólico es diabetes. En una realización, el trastorno metabólico es diabetes tipo 1. En una realización, el trastorno metabólico es diabetes tipo 2. En una realización, el trastorno metabólico es síndrome metabólico. En una realización, el trastorno metabólico es obesidad. En una realización, el trastorno metabólico es dislipidemia diabética. En una realización, el trastorno metabólico es hiperlipidemia. En una realización, el trastorno metabólico es hipertensión. En una realización, el trastorno metabólico es hipertrigliceridemia. En una realización, el trastorno metabólico es hiperacidemia grasa. En una realización, el trastorno metabólico es hipercolesterolemia. En una realización, el trastorno metabólico es hiperinsulinemia. En una realización, el trastorno metabólico es MODY. La composición de la invención también se puede usar en un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad asociada o causada por hiperinsulinemia, hipoglucemia, hipopotasemia y/o hipofosfatemia. La presente invención se refiere además a un método para tratar enfermedades o trastornos relacionados con la glucemia, que comprende la administración de derivados de insulina o conjugados de insulina. Las enfermedades o trastornos relacionados con la glucemia incluyen diabetes tipo I y II y diabetes gestacional. Además, también se pueden tratar la fibrosis quística, el síndrome de ovario poliquístico, la pancreatitis y otras enfermedades relacionadas con el páncreas.

[0273] En una realización de la invención, la composición se utiliza para mantener o restaurar la salud intestinal.

[0274] En una realización de la invención, la composición se utiliza en un método para el tratamiento o la prevención del dolor local.

[0275] La composición tiene un uso como producto de cuidado personal, suplemento, cosmético, producto farmacéutico.

[0276] También se proporciona un método para tratar, prevenir o cuidar cualquiera de las enfermedades, trastornos o afecciones descritas en la presente memoria, y dicho método comprende una etapa de administración de la composición o composición tópica de la invención. La composición puede administrarse sobre la piel, el cabello, las uñas. La composición se puede administrar a cualquier dosis o frecuencia como se describe en la presente memoria mediante cualquier método de administración o de cualquier método de aplicación tópica. En una realización, la composición es una composición cosmética. En una realización, la composición es una composición farmacéutica. Se apreciará que la composición puede tener una doble función y ser tanto una composición cosmética como farmacéutica.

[0277] Se apreciará que la composición puede ser una composición terapéutica o puede ser una composición no terapéutica. La composición puede tener un papel doble.

[0278] Las composiciones se pueden formular en forma de dosificación unitaria, es decir, en forma de porciones discretas que contienen una dosis unitaria, o un múltiplo o subunidad de una dosis unitaria.

[0279] En una realización particularmente preferida, los métodos y usos de la invención implican la administración de un péptido o composición de la invención en combinación con uno o más agentes activos disponibles en el mercado. En tales casos, los compuestos de la invención se pueden administrar de forma consecutiva, simultánea o secuencial con uno o más de los otros agentes activos.

[0280] Péptidos modificados

[0281] En una realización, el péptido de la invención (incluidos los fragmentos peptídicos y las variantes) puede ser un péptido modificado. La expresión "péptido modificado" se usa indistintamente con la expresión derivado del péptido. En una realización, la expresión "péptido modificado" significa un péptido que se modifica para exhibir una o más de las siguientes propiedades en comparación con el péptido no modificado: aumentar la semivida en el plasma; aumentar la lipofilia del péptido; aumentar el aclaramiento renal del péptido modificado; aumentar la actividad del péptido modificado, y aumentar la resistencia del péptido modificado a la degradación proteolítica (es decir, por proteasas gastrointestinales de mamíferos y especialmente humanas). En la presente memoria se describen varios métodos para modificar un péptido de la invención para que muestre estas propiedades, incluida la conjugación del péptido con una molécula de unión (por ejemplo, una molécula pequeña que se une a la albúmina, un polímero grande, una proteína plasmática de vida larga o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo), ciclación, adición de grupos protectores en posición N- o C-terminal, o en la cadena lateral, reemplazo de uno o más L-aminoácidos por los isómeros D, modificación de aminoácidos, aumento de la unión a proteínas plasmáticas, aumento de la unión a albúmina. El péptido modificado incluye, pero sin limitación, un péptido que ha sido sustituido con uno o más grupos como se define en la presente memoria, o conjugado con una molécula de unión, o que se ha ciclado. Generalmente, el péptido se modifica para aumentar su semividain vivoen un animal. A continuación se proporcionan varios métodos de modificación.

[0282] En una realización, la modificación puede ser cualquier modificación que proporcione a los péptidos y/o la composición de la invención una mayor capacidad de penetrar en una célula. En una realización, la modificación puede ser cualquier modificación que aumente la semivida de la composición o los péptidos de la invención. En una realización, la modificación puede ser cualquier modificación que aumente la actividad de la composición o los péptidos de la invención. En una realización, la modificación puede ser cualquier modificación que aumente la selectividad de la composición o los péptidos de la invención.

[0283] En una realización, el grupo es un grupo protector. El grupo protector puede ser un grupo protector N-terminal, un grupo protector C-terminal o un grupo protector de la cadena lateral. El péptido puede tener uno o más de estos grupos protectores.

[0284] El experto en la técnica conoce métodos adecuados para hacer reaccionar aminoácidos con estos grupos protectores. Estos grupos pueden añadirse mediante métodos de preparación conocidos en la técnica, por ejemplo, los métodos descritos en los párrafos [0104] a [0107] del documento US2014120141. Los grupos pueden permanecer en el péptido o pueden eliminarse. El grupo protector se puede añadir durante la síntesis. En una realización de la invención, los péptidos pueden estar sustituidos con un grupo seleccionado de una o más cadena lineal o cadena ramificada, de cadena larga o corta, saturada o insaturada, sustituida con un grupo hidroxilo, amino, aminoacilo, sulfato o sulfuro o sin sustituir, que tiene de 1 a 29 átomos de carbono. Los derivados de N-acilo incluyen grupos acilo derivados del ácido acético, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido octanoico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido behénico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido lipoico, ácido oleico, ácido isostérico, ácido elaidoico, ácido 2-etilhexanoico, ácido graso de aceite de coco, ácido graso de sebo, ácido graso de sebo endurecido, ácido graso de semilla de palma, ácido graso de lanolina o ácidos similares. Estos pueden estar sustituidos o sin sustituir. Cuando están sustituidos, preferiblemente están sustituidos con hidroxilo o grupos que contienen azufre, como, entre otros, SO<3>H, SH o S-S.

[0285] En una realización, el péptido es R<1>-X-R<2>.

[0286] Los grupos R<1>y/o R<2>están unidos respectivamente al extremo amino-terminal (N-terminal) y al extremo carboxiterminal (C-terminal) de la secuencia peptídica.

[0287] En una realización, el péptido es R<1>-X. Alternativamente, el péptido es X-R<2>.

[0288] Preferiblemente, R<1>es H, alquilo C<1-4>, acetilo, benzoilo o trifluoroacetilo;

[0289] X es el péptido de la invención;

[0290] R<2>es OH o NH<2>.

[0291] En una realización, R<1>se selecciona del grupo formado por H, un grupo alifático acíclico sustituido o sin sustituir, alicíclilo sustituido o sin sustituir, heterociclilo sustituido o sin sustituir, heteroarilalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, terc-butiloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) y R<5>-CO-, donde R<5>se selecciona del grupo formado por H, un grupo alifático acíclico sustituido o sin sustituir, alicíclilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, heterociclilo sustituido o sin sustituir y heteroarilalquilo sustituido o sin sustituir; R<2>se selecciona del grupo formado por -NR<3>R<4>, -OR<3>y -SR<3>, donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente del grupo formado por H, un grupo alifático acíclico sustituido o sin sustituir, alicíclilo sustituido o sin sustituir, heterociclilo sustituido o sin sustituir, heteroarilalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir y aralquilo sustituido o sin sustituir; y con la condición de que R<1>y R<2>no son α-aminoácidos.

[0292] De acuerdo con otra realización preferida, R<2>es -NR<3>R<4>, -OR<3>o -SR<3>donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente del grupo formado por H, alquilo C<1>-C<24>sustituido o sin sustituir, alquenilo C<2>-C<24>sustituido o sin sustituir, terc-butiloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), alquinilo C<2>-C<24>sustituido o sin sustituir, cicloalquilo C<3>-C<24>sustituido o sin sustituir, cicloalquenilo C<5>-C<24>sustituido o sin sustituir, cicloalquinilo C<8>-C<24>sustituido o sin sustituir, arilo C<6>-C<30>sustituido o sin sustituir, aralquilo C<7>-C<24>sustituido o sin sustituir, anillo heterociclilo sustituido o sin sustituir de 3 a 10 miembros, y heteroarilalquilo sustituido o sin sustituir de 2 a 24 átomos de carbono y de 1 a 3 átomos distintos del carbono donde la cadena alquilo es de 1 a 6 átomos de carbono. Opcionalmente, R<3>y R<4>pueden estar unidos por un enlace carbono-carbono saturado o insaturado, formando un ciclo con el átomo de nitrógeno. Más preferiblemente R<2>es -NR<3>R<4>o -OR<3>, donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente del grupo formado por H, alquilo C<1>-C<24>sustituido o sin sustituir, alquenilo C<2>-C<24>sustituido o sin sustituir, alquinilo C<2>-C<24>sustituido o sin sustituir, cicloalquilo C<3>-C<10>sustituido o sin sustituir, arilo C<6>-C<15>sustituido o sin sustituir y heterociclilo sustituido o sin sustituir de 3-10 miembros, heteroarilalquilo sustituido o sin sustituir con un anillo de 3 a 10 miembros y una cadena alquílica de 1 a 6 átomos de carbono. Más preferiblemente, R<3>y R<4>se seleccionan del grupo formado por H, metilo, etilo, hexilo, dodecilo o hexadecilo. Aún más preferiblemente, R<3>es H y R<4>se selecciona del grupo formado por H, metilo, etilo, hexilo, dodecilo o hexadecilo. De acuerdo con una realización aún más preferida, R<2>se selecciona de -OH y -NH<2>.

[0294] De acuerdo con otra realización de esta invención, R<1>se selecciona del grupo formado por H, acetilo, lauroilo, miristoilo o palmitoilo, y R<2>es -NR<3>R<4>o -OR<3>donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente de H, metilo, etilo, hexilo, dodecilo y hexadecilo, preferiblemente R<2>es -OH o -NH<2>. Más preferiblemente, R<1>es acetilo o palmitoilo y R<2>es -NH<2>.

[0296] En una realización preferida, el grupo acilo (o acetilo) se une al extremo N-terminal de al menos un aminoácido del péptido.

[0298] En una realización de la invención, el péptido se modifica para comprender un grupo protector de la cadena lateral. El grupo protector de la cadena lateral puede ser uno o más del grupo que comprende bencilo o grupos basados en bencilo, grupos basados en t-butilo, grupo benciloxicarbonilo (Z) y grupo protector aliloxicarbonilo (alloc). El grupo protector de la cadena lateral puede derivar de un aminoácido aquiral tal como glicina aquiral. El uso de un aminoácido aquiral ayuda a estabilizar el péptido resultante y también facilita la ruta de síntesis fácil de la presente invención. Preferiblemente, el péptido comprende además un extremo C-terminal modificado, preferiblemente un extremo C-terminal amidado. El resto aquiral puede ser ácido alfaaminoisobutírico (metilalanina). Se apreciará que los grupos protectores de la cadena lateral específicos usados dependerán de la secuencia del péptido y del tipo de grupo protector N-terminal usado. En una realización de la invención, el péptido está conjugado, unido o fusionado con uno o más polímeros de polietilenglicol u otros compuestos, como compuestos que aumentan el peso molecular. El compuesto que aumenta el peso molecular es cualquier compuesto que aumente el peso molecular, normalmente entre un 10 % y un 90 %, o entre un 20 % y un 50 % del conjugado resultante, y puede tener un peso molecular de entre 200 y 20000, preferiblemente entre 500 y 10000. El compuesto que aumenta el peso molecular puede ser PEG, cualquier fracción polimérica soluble en agua (anfifílica o hidrófila), homo o copolímeros de PEG, un polímero de PEG sustituido con monometilo (mPEG) y polioxietilenglicerol (POG), poliaminoácidos tales como polilisina, poli(ácido glutámico), poli(ácido aspártico), en particular los de conformación L, proteínas farmacológicamente inactivas tales como albúmina, gelatina, un ácido graso, polisacárido, un aminoácido lipídico y dextrano. El resto polimérico puede ser de cadena lineal o ramificada y puede tener un peso molecular de 500 a 40000 Da, 5000 a 10000 Da, 10000 a 5000 Da. El compuesto puede ser cualquier compuesto de penetración celular adecuado, tal como el péptido tat, penetratina, pep-1. El compuesto puede ser una molécula de anticuerpo. El compuesto puede ser un resto lipófilo o un resto polimérico.

[0300] El sustituyente lipófilo y los sustituyentes poliméricos se conocen en la técnica. El sustituyente lipófilo incluye un grupo acilo, un grupo sulfonilo, un átomo de N, un átomo de O o un átomo de S que forma parte del éster, sulfonil éster, tioéster, amida o sulfonamida. El resto lipófilo puede incluir una cadena de hidrocarburo que tenga de 4 a 30 átomos de C, preferiblemente entre 8 y 12 átomos de C. Puede ser lineal o ramificado, saturado o insaturado. La cadena de hidrocarburo puede estar sustituida adicionalmente. Puede ser cicloalcano o heterocicloalcano. El péptido puede estar modificado en el extremo N-terminal, C-terminal o ambos. El polímero o compuesto está preferiblemente unido a un grupo amino, carboxilo o tio y puede estar unido por los extremos N-terminal o C-terminal de las cadenas laterales de cualquier residuo de aminoácido. El polímero o compuesto puede conjugarse con la cadena lateral de cualquier resto adecuado.

[0302] El polímero o compuesto puede conjugarse a través de un espaciador. El espaciador puede ser un aminoácido natural o no natural, ácido succínico, lisilo, glutamilo, asparagilo, glicilo, beta-alanilo, gamma-amino butanoilo.

[0303] El polímero o compuesto puede conjugarse a través de un éster, un éster de sulfonilo, un tioéster, una amida, un carbamato, una urea, una sulfonamida.

[0305] Un experto en la técnica conoce los medios adecuados para preparar el conjugado descrito.

[0306] Los péptidos pueden modificarse químicamente mediante conjugación covalente a un polímero para aumentar su semivida circulante, por ejemplo. Los ejemplos de polímeros y métodos para unir dichos polímeros a péptidos se ilustran, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. n.º.4,766,106; 4,179,337; 4,495,285; y 4,609,546. Los polímeros ilustrativos adicionales incluyen polioles polioxietilados y fracciones de polietilenglicol (PEG).

[0307] Los péptidos de la invención pueden someterse a una o más modificaciones para manipular la estabilidad de almacenamiento, la farmacocinética y/o cualquier aspecto de la bioactividad del péptido, como, por ejemplo, la potencia, la selectividad y la interacción farmacológica. La modificación química a la que se pueden someter los péptidos incluye, sin limitación, la conjugación a un péptido de uno o más de polietilenglicol (PEG), monometoxipolietilenglicol, dextrano, poli-(N-vinilpirrolidona) polietilenglicol, homopolímeros de propilenglicol, un copolímero de poli(óxido de propileno/óxido de etileno), polipropilenglicol, polioles polioxietilados (p. ej., glicerol) y poli(alcohol vinílico), ácidos colomínicos u otros polímeros basados en carbohidratos, polímeros de aminoácidos y derivados de biotina. La conjugación con PEG de proteínas en residuos de Cys se describe, por ejemplo, en Goodson, R. J. y Katre, N. V. (1990) Bio/Technology 8, 343 y Kogan, TP (1992) Sinthetic Comm.22, 2417.

[0309] Los péptidos modificados también pueden incluir secuencias en las que están modificados uno o más residuos (es decir, mediante fosforilación, sulfatación, acilación, amidación, PEGilación, etc.) y mutantes que comprenden uno o más residuos modificados con respecto a una secuencia original. Las secuencias de aminoácidos también pueden modificarse con un marcador capaz de proporcionar una señal detectable, ya sea directa o indirectamente, incluidos, entre otros, marcadores de radioisótopos, fluorescentes y enzimáticos. Las etiquetas fluorescentes incluyen, por ejemplo, Cy3, Cy5, Alexa, BODIPY, fluoresceína (por ejemplo, FluorX, DTAF y FITC), rodamina (por ejemplo, TRITC), auramina, rojo de Texas, AMCA azul y amarillo Lucifer. Las etiquetas de isótopos preferidas incluyen<3>H,<14>C,<32>P,<35>S,<36>Cl,<51>Cr,<57>Co,<58>Co,<59>Fe,<90>Y,<125>I,<131>I y<286>Re. Los marcadores enzimáticos preferidos incluyen peroxidasa, β-glucuronidasa, β-D-glucosidasa, β-D-galactosidasa, ureasa, glucosa oxidasa más peroxidasa y fosfatasa alcalina (véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. n.º 3,654,090; 3,850,752 y 4,016,043). Las enzimas se pueden conjugar mediante reacción con moléculas puente tales como carbodiimidas, diisocianatos, glutaraldehído y similares. Los marcadores enzimáticos pueden detectarse visualmente o medirse mediante técnicas colorimétricas, espectrofotométricas, fluoroespectrofotométricas, amperométricas o gasométricas. En la técnica se conocen otros sistemas de marcaje, como avidina/biotina, amplificación de señales de tiramida (TSA<™>), y están disponibles comercialmente (véase, por ejemplo, el kit ABC, Vector Laboratories, Inc., Burlingame, Calif.; NEN<®>Life Science Products, Inc., Boston, Massachusetts).

[0311] En una realización, el péptido, la variante y/o la composición se modifican para aumentar la capacidad de rendimiento del fármaco. En una realización, el péptido, la variante y/o la composición se modifican para aumentar la estabilidad, la permeabilidad, mantener la potencia, evitar la toxicidad y/o aumentar la semivida. La modificación puede ser como se ha descrito anteriormente. Por ejemplo, la modificación puede ser para proteger el extremo N- y C-terminal, puede ser un aminoácido modificado, ciclación, reemplazo de un aminoácido y/o conjugación con macromoléculas o polímeros grandes o proteínas plasmáticas de vida larga. Las estrategias para prolongar la semivida pueden ser las descritas por Strohl, et al. (BioDrugs, 2015), Schlapschy, et al. (Protein Eng Des Sel. 2013), Podust, VN et al. (Protein Eng Des Sel. 2013), Zhang, L et al. (Curr Med Chem.2012), Gaberc-Porekar, V, et al. (Curr Opin Drug Discov Devel.2008). Los ejemplos incluyen el uso de PEGilación, lipidación (unión covalente de ácidos grasos a cadenas laterales peptídicas), fusión a dominios Fc y albúmina sérica humana, fusión con un polímero de aminoácido hidrofílico, p. ej. XTEN o PAS, y/o fusión con proteínas de prolongación de la semivida.

[0313] Los péptidos o proteínas pueden comprender sitios débiles en su secuencia que son propensos a sufrir roturas proteolíticas cuando se encuentran en un entorno enriquecido proteolítico, p. ej. en la sangre o el tracto gastrointestinal. En una realización, el péptido, la variante y/o la composición comprenden una modificación de uno o más sitios débiles de manera que el péptido, la variante y/o la composición no experimentan ruptura/escisión proteolítica o experimentan una cantidad reducida de ruptura/escisión proteolítica en comparación con un péptido o proteína sin modificar. Por lo tanto, el péptido puede modificarse para aumentar la resistencia del péptido modificado a la degradación proteolítica por las proteasas gastrointestinales de mamíferos. Las modificaciones adecuadas se describen en Diao et al (Clinical pharmacokinetics 52.10 (2013): 855-868).

[0315] La modificación de péptidos para prolongar la semividain vivodel péptido se describe en la bibliografía, por ejemplo:

[0317] Strategies to improve plasma half life time of peptide and protein drugs. Werle M, Bernkop-Schnürch A. Amino acids, junio de 2006;30(4):351-67.

[0319] Debido a las ventajas obvias de los fármacos peptídicos y proteicos de acción prolongada, las estrategias para prolongar la semivida plasmática de tales compuestos son muy demandadas. La semivida plasmática corta se debe comúnmente a la eliminación renal rápida, así como a la degradación enzimática que ocurre durante la circulación sistémica. Las modificaciones del péptido/proteína pueden conducir a tiempos de semivida plasmáticos prolongados. Al acortar la cantidad total de aminoácidos de somatostatina y reemplazar los L aminoácidos análogos con D-aminoácidos, el tiempo de semivida en plasma del octreótido derivado fue de 1,5 horas en comparación con solo unos minutos de somatostatina. Un conjugado de PEG (2,40 K) de INF-alfa-2b exhibió una semivida en plasma prolongada 330 veces en comparación con la proteína nativa. El objetivo de esta revisión fue proporcionar una descripción general de las posibles estrategias para prolongar la semivida en el plasma, como la modificación del extremo N- y C-terminal o la PEGilación, así como los métodos para evaluar la efectividad de las modificaciones del fármaco. Además, se proporcionan datos fundamentales sobre las enzimas proteolíticas más importantes de la sangre, el hígado y el riñón humanos, así como su especificidad de escisión y sus inhibidores, con el fin de predecir la escisión enzimática de fármacos peptídicos y proteicos durante la circulación sistémica.

[0320] Strategic Approaches to Optimizing Peptide ADME Properties. Li Di AAPS J., enero de 2015; 17(1): 134-143.Estrategias para estabilizar péptidos contra la proteólisis

[0321] Hay muchos enfoques disponibles para mejorar la estabilidad de los péptidos a través de la modificación de la estructura. Algunos enfoques no solo mejoran la estabilidad, sino que también mejoran otras propiedades ADME, por ejemplo, la ciclación puede aumentar la estabilidad y la permeabilidad; la conjugación con macromoléculas puede mejorar la estabilidad y reducir el aclaramiento renal. Es importante mantener la potencia y evitar la toxicidad mientras se mejoran la estabilidad y las propiedades ADME de los péptidos. •Protección de los extremos N- y C-terminales

[0322] Varias enzimas proteolíticas en sangre/plasma, hígado o riñón son exopeptidasas, aminopeptidasas y carboxipeptidasas y descomponen secuencias peptídicas desde los extremos N- y C-terminales. La modificación de los extremos N- y/o C-terminales a menudo puede mejorar la estabilidad del péptido. Muchos ejemplos han informado que la N-acetilación y la C-amidación aumentan la resistencia a la proteólisis.

[0323] •Sustitución de L-aminoácidos por D-aminoácidos

[0324] La sustitución de L-aminoácidos naturales por D-aminoácidos no naturales disminuye el reconocimiento del sustrato y la afinidad de unión de las enzimas proteolíticas y aumenta la estabilidad. Un ejemplo es la vasopresina, que contiene un L-Arg y tiene una semivida de 10 a 35 min en humanos. El análogo de D-Arg, la desmopresina, tiene una semivida de 3,7 h en voluntarios humanos sanos. En el estudio de un inhibidor peptídico bicíclico del activador del plasminógeno de tipo uroquinasa proteasa relacionada con el cáncer (uPA), el reemplazo de una glicina específica con una D-serina no solo mejora la potencia en 1,8 veces, sino que también aumenta la estabilidad en 4 veces en plasma de ratón.

[0325] •Modificación de aminoácidos

[0326] La modificación de los aminoácidos naturales puede mejorar la estabilidad de los péptidos mediante la introducción de impedimentos estéricos o la alteración del reconocimiento enzimático. Por ejemplo, la hormona liberadora de gonadotropina tiene una semivida muy corta (minutos), mientras que la buserelina, en la que una Gly se reemplaza con una t-butil-D-Ser y otra Gly se sustituye por etilamida, tiene una semivida mucho más prolongada en los humanos.

[0327] •ciclación

[0328] La ciclación introduce restricciones de conformación, reduce la flexibilidad de los péptidos y aumenta la estabilidad y la permeabilidad. Dependiendo de los grupos funcionales, los péptidos pueden ciclarse de cabeza a cola, de cabeza/cola a cadena lateral o de cadena lateral a cadena lateral. La ciclación se logra comúnmente mediante lactamización, lactonización y puentes basados en sulfuro. Los puentes disulfuro crean restricciones de plegamiento y conformación que pueden mejorar la potencia, la selectividad y la estabilidad. Varios péptidos ricos en enlaces disulfuro están en el mercado o en desarrollo preclínico o clínico, por ejemplo, linaclotida, lepirudina y ziconotida.

[0329] •Conjugación con macromoléculas

[0330] La conjugación con macromoléculas (p. ej., polietilenglicol (PEG), albúmina) es una estrategia eficaz para mejorar la estabilidad de los péptidos y reducir la depuración renal.

[0331] Aclaramiento renal

[0332] Muchos péptidos exhiben una actividad farmacológicain vitroprometedora pero no logran demostrar eficaciain vivodebido a una semividain vivomuy corta (minutos). El aclaramiento rápido y la semivida corta de los péptidos dificultan el desarrollo hasta fármacos eficaces. Las principales causas del aclaramiento rápido de péptidos de la circulación sistémica son la proteólisis enzimática y/o el aclaramiento renal. Los glomérulos tienen un tamaño de poro de ~8 nm y los péptidos hidrofílicos con PM <2-25 kDa son susceptibles de filtración rápida a través de los glomérulos del riñón. Dado que los péptidos no se reabsorben fácilmente a través del túbulo renal, con frecuencia tienen un aclaramiento renal alto y una semivida corta. Otras vías menores de aclaramiento de péptidos son la endocitosis y la degradación en el proteasoma y el hígado. La comparación entre el aclaramiento sistémico y renal en modelos animales proporciona información útil sobre si es probable que el aclaramiento renal sea una vía de eliminación importante.

[0333] Para los pacientes con insuficiencia renal, puede ser necesario ajustar la dosis de los fármacos peptídicos para evitar la acumulación y una mayor exposición al fármaco, ya que una dosificación inapropiada en pacientes con disfunción renal puede causar toxicidad o un tratamiento ineficaz. Se han desarrollado varias estrategias para reducir el aclaramiento renal del péptido y prolongar la semivida. Estas se revisarán a continuación. •Aumento de la unión a proteínas plasmáticas

[0334] El aclaramiento renal de péptidos se reduce cuando se unen a proteínas de membrana o proteínas séricas. Un ejemplo es el fármaco peptídico cíclico octreótido, un tratamiento para los tumores endocrinos, que tiene una semivida de unos 100 min en los seres humanos debido a la unión a las lipoproteínas (fracción no unida 0,65) •Enlace covalente a moléculas pequeñas de unión a albúmina

[0335] La unión covalente a los péptidos de moléculas pequeñas que se unen a la albúmina puede reducir la filtración glomerular, mejorar la estabilidad proteolítica y prolongar la semivida al interactuar indirectamente con la albúmina a través de las moléculas pequeñas muy unidas.

[0336] •Conjugación a grandes polímeros

[0337] La conjugación de los péptidos con grandes polímeros o carbohidratos sintéticos o naturales puede aumentar su peso molecular y volumen hidrodinámico, reduciendo así su eliminación renal. Los polímeros comunes utilizados para la conjugación de péptidos son PEG, poli(ácido siálico) (PSA) e hidroxietilalmidón (HES). •Fusión a proteínas plasmáticas de vida prolongada

[0338] Las proteínas plasmáticas, como la albúmina y los fragmentos de inmunoglobulina (IgG), tienen semividas prolongadas de 19 a 21 días en humanos. Debido al alto PM (67-150 kDa), estas proteínas tienen un bajo aclaramiento renal, y su unión al receptor de Fc neonatal (FcRn) reduce la eliminación mediante pinocitosis por el epitelio vascular. El enlace covalente de péptidos a albúmina o fragmentos de IgG puede reducir el aclaramiento renal y prolongar la semivida.

[0339] Fusion Proteins for Half-Life Extension of Biologics as a Strategy to Make Biobetters. William R. Strohl BioDrugs.

[0340] 2015; 29(4): 215-239.

[0341] Schlapschy, M, Binder, U, Borger, C et al.PASYlation: a biological alternative to PEGylation for extending the plasma half-life of pharmaceutically active proteins. Protein Eng Des Sel.2013;26(8):489-501.

[0342] Podust, VN, Sim, BC, Kothari, D et al.Extension of in vivo half-life of biologically active peptides via chemical conjugation to XTEN protein polymer. Protein Eng Des Sel.2013;26(11):743-53.

[0343] Zhang, L, Bulaj, G.Converting Peptides into Drug Leads by Lipidation. Curr Med Chem.2012;19(11):1602-18. Gaberc-Porekar, V, Zore, I, Podobnik, B et al.Obstacles and pitfalls in the PEGylation of therapeutic proteins. Curr Opin Drug Discov Devel.2008;11(2):242-50.

[0344] Dr. Ronald V. Swanson:Long live peptides evolution of peptide half-life extension technologies and emerging hybrid approaches. De Drug Discovery World en línea. Primavera de 2014

[0345] PEGilación

[0346] La unión de cadenas largas del polímero hidrofílico polietilenglicol a moléculas de interés, la PEGilación, se concibió originalmente como una modificación para evitar el reconocimiento de proteínas extrañas por parte del sistema inmunitario y, por lo tanto, permitir su utilidad como agentes terapéuticos. Una vez formados, los anticuerpos contra los fármacos sin modificar pueden neutralizar y eliminar rápidamente los fármacos proteicos. Inesperadamente, la PEGilación mejoró la farmacocinética de las proteínas incluso en ausencia de anticuerpos anti-fármaco<1>. Simplemente haciendo que las moléculas del fármaco sean más grandes, la PEGilación condujo a que los riñones filtraran el fármaco más lentamente. La observación empírica de que el aumento del tamaño o del radio hidrodinámico condujo a una reducción del aclaramiento renal y al aumento de la semivida se convirtió entonces en la justificación dominante para la PEGilación de proteínas y fármacos peptídicos. La PEGilación puede tener una variedad de efectos en la molécula, incluyendo hacer que las proteínas o los péptidos sean más solubles en agua y protegerlos de la degradación por las enzimas proteolíticas. La PEGilación también puede afectar a la unión de proteínas terapéuticas a sus receptores celulares afines, lo que generalmente reduce la afinidad. Los cambios en el tamaño, la estructura y el modo de unión de los polímeros de PEG pueden afectar a la actividad biológica del fármaco unido.

[0348] Los métodos de PEGilación de primera generación estaban llenos de desafíos. Sin embargo, la química de la PEGilación es bastante simple. El proceso implica la unión covalente de cadenas de polietilenglicol a cadenas laterales reactivas de una proteína o péptido. Por ejemplo, el PEG se une fácilmente a los grupos amino de la lisina en la superficie de proteínas o péptidos<2>. La reacción depende del pH. A pH alto (8,0 o superior), los grupos amino de la cadena lateral de lisina se unen covalentemente a PEG a través de N-hidroxisuccinimidas. Este método generalmente da como resultado una familia de productos que contienen diferentes números de cadenas de PEG unidas en diferentes sitios en una proteína en lugar de un solo producto discreto3. Los primeros productos farmacéuticos PEGilados aprobados fueron Pegademasa bovina (adenosina desamidasa bovina PEGilada) como terapia de sustitución enzimática para la inmunodeficiencia combinada grave y Pegaspargasa (asparaginasa PEGilada) para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda1. Estos fármacos eran mezclas complejas de varias especies PEGiladas, pero con propiedades mejoradas para la terapia sobre las enzimas nativas, incluido el aumento de la semivida en suero y la disminución de la inmunogenicidad de las proteínas. Debido a la polidispersidad inherente del PEG, la calidad y la reproducibilidad entre lotes fueron difíciles. A pesar de esta limitación, dos interferones PEGilados (peginterferón alfa-2b y peginterferón alfa-2a), que son poblaciones heterogéneas de numerosos isómeros posicionales monopegilados, han sido aprobados por la FDA para el tratamiento de la hepatitis C. Estos medicamentos se comercializaron en 2001 y 2002, respectivamente.

[0350] Se han realizado una variedad de mejoras y variaciones a la tecnología fundamental de PEGilación. Los procesos de PEGilación de segunda generación introdujeron el uso de estructuras ramificadas, así como químicas alternativas para la unión de PEG. En particular, los PEG con grupos reactivos de cisteína, como la maleimida o la yodoacetamida, permiten dirigir la PEGilación a un solo residuo dentro de un péptido o proteína, lo que reduce la heterogeneidad del producto final pero no la elimina debido a la polidispersidad del propio PEG.

[0352] Si bien el fundamento original de la PEGilación era reducir la inmunogenicidad, sin embargo, ha habido algunos ejemplos de proteínas PEGiladas inmunogénicas. Un ejemplo es la urato oxidasa PEGilada, una enzima que reduce el nivel de urato en plasma en pacientes con gota. En los ensayos clínicos, un porcentaje relativamente alto de pacientes con gota no respondieron a la terapia y desarrollaron anticuerpos que fueron específicos para PEG, pero no para la proteína uricasa<2>. Se ha descubierto que los liposomas PEGilados, que generalmente también se consideran no inmunogénicos, son inmunogénicos en algunos estudios. Los liposomas pegilados provocan una fuerte respuesta de inmunoglobulina M (IgM) anti-PEG. Además, se demostró que múltiples inyecciones de PEG-glucuronidasa provocan la generación de anticuerpos IgM anti-PEG específicos, lo que acelera la eliminación de proteínas modificadas con PEG del cuerpo.

[0354] Un inconveniente potencial importante del uso de PEG como modificador es que no es biodegradable. La Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (FDA) aprobó el uso de PEG como vehículo en productos farmacéuticos, incluidas formulaciones inyectables, tópicas, rectales y nasales. El PEG muestra poca toxicidad y se elimina intacto del cuerpo por vía renal (para PEG < 30 kDa) o en las heces (para PEG > 20 kDa)<1>. La administración repetida de algunas proteínas PEGiladas a animales ha dado como resultado observaciones de vacuolización celular tubular renal. Recientemente, también se ha observado la vacuolización de las células epiteliales del plexo coroideo en estudios de toxicidad con proteínas conjugadas con PEG grandes (≥40 kDa). Las células epiteliales del plexo coroideo producen líquido cefalorraquídeo y forman la barrera sanguínea del LCR. Las consecuencias negativas a largo plazo de la vacuolización celular no están claras, pero representa una consecuencia indeseable para algunas terapias potenciales. Una posible alternativa sería la sustitución de un polímero biodegradable en lugar de PEG. Los polímeros, como el hidroxietilalmidón (HES), son una posible alternativa. HES no es tóxico y es biodegradable y se usa como expansor sanguíneo. Un proceso de HESilación funcionaría de manera similar a la PEGilación en la reducción del aclaramiento renal mediante el aumento del radio hidrodinámico de un péptido, pero puede conferir una menor propensión a la acumulación debido a la biodegradabilidad. Sin embargo, HES y otras alternativas a PEG poliméricas biodegradables propuestas son, como PEG, polidispersas, lo que dificulta la caracterización del producto final y los metabolitos. Una solución emergente que mitiga ambas preocupaciones es usar polipéptidos definidos como componente polimérico; este enfoque se discutirá más adelante en el artículo.

[0355] Lipidación

[0357] Un segundo método importante de modificación química para aumentar la semivida de los péptidos es la lipidación, que implica la unión covalente de ácidos grasos a las cadenas laterales de los péptidos<4>. Originalmente concebida y desarrollada como un método para prolongar la semivida de la insulina, la lipidación comparte el mismo mecanismo básico de prolongación de la semivida que la PEGilación, a saber, aumentar el radio hidrodinámico para reducir la filtración renal. Sin embargo, el resto lipídico en sí mismo es relativamente pequeño y el efecto está mediado indirectamente a través de la unión no covalente del resto lipídico a la albúmina circulante.

[0358] Al ser una proteína grande (67 KDa) y muy abundante en el suero humano (35-50 g/L), la albúmina funciona naturalmente para transportar moléculas, incluidos los lípidos, por todo el cuerpo. La unión a las proteínas plasmáticas también puede proteger al péptido de los ataques de las peptidasas a través del impedimento estérico, de nuevo similar a lo que se observa con la PEGilación. Una consecuencia de la lipidación es que reduce la solubilidad en agua del péptido, pero la modificación del enlazador entre el péptido y el ácido graso puede modular esto, por ejemplo, mediante el uso de glutamato o mini PEG dentro del enlazador. La modificación del enlazador y la variación de la fracción lipídica pueden afectar a la autoagregación, lo que puede contribuir a aumentar la semivida al ralentizar la biodistribución, independientemente de la albúmina<5>.

[0360] Tras el trabajo pionero con la insulina<6>, se ha explorado la lipidación de una variedad de péptidos, particularmente péptidos dentro del espacio de la diabetes, incluidos los análogos del péptido-1 similar al glucagón humano (GLP-1), el polipéptido insulinotrópico dependiente de la glucosa y coagonistas de GLP-1R/receptor de glucagón entre otros. Dos fármacos peptídicos lipidados están actualmente aprobados por la FDA para su uso en humanos. Ambos son antidiabéticos de acción prolongada, el análogo de GLP-1 liraglutida y la insulina detemir.

[0362] Una diferencia potencialmente relevante desde el punto de vista farmacológico entre la PEGilación y la lipidación es que el péptido terapéuticamente activo se une covalentemente al PEG mucho más grande, mientras que el conjugado más pequeño acilo graso-péptido no se asocia covalentemente con la albúmina, más grande, y en el equilibrio existen formas unidas y sin unir. Esto puede dar lugar a diferencias en la biodistribución que pueden dar lugar a una farmacología diferente, ya que el acceso a los receptores localizados en los diferentes tejidos puede provocar efectos diferenciales. En algunos casos, puede ser deseable una biodistribución más restringida, mientras que en otros puede ser importante una mayor penetración en los tejidos. Santi et al. han desarrollado una variación interesante del enfoque de PEG que aborda este problema, en la que se utilizan conjugados de PEG liberables con tasas de escisión predecibles<7>.

[0364] Tanto la pegilación como la lipidación confieren protección frente a proteasas y peptidasas mediante la protección por medio del impedimento estérico y prolongan la semivida circulante mediante un mayor radio hidrodinámico, directa o indirectamente. Ambos métodos utilizan la conjugación química y son flexibles porque son independientes de los medios utilizados para generar el péptido que están modificando, ya sea producido biológica o sintéticamente. Una ventaja de usar péptidos sintéticos es que pueden incorporar aminoácidos no naturales diseñados para abordar una serie de problemas específicos, incluida la inestabilidad debida a la propensión conocida a la escisión proteolítica. También pueden ser más flexibles en cuanto a la elección del sitio de unión, lo cual es fundamental si la actividad o la potencia dependen en gran medida de los extremos libres o de un residuo modificado, como una amida C-terminal.

[0366] Fusiones genéticas clásicas: Fc y HSA

[0368] Las fusiones genéticas clásicas con proteínas séricas de vida prolongada ofrecen un método alternativo de prolongación de la semivida distinto de la conjugación química con PEG o lípidos. Se han utilizado tradicionalmente dos proteínas principales como compañeros de fusión: dominios Fc de anticuerpos y albúmina sérica humana (HAS) (Figura 2). Las fusiones de Fc implican la fusión de péptidos, proteínas o exodominios de receptores a la porción Fc de un anticuerpo. Tanto las fusiones de Fc como las de albúmina logran semividas prolongadas no solo aumentando el tamaño del fármaco peptídico, sino también aprovechando el mecanismo de reciclaje natural del cuerpo: el receptor neonatal de Fc, FcRn. La unión dependiente del pH de estas proteínas a FcRn evita la degradación de la proteína de fusión en el endosoma. Las fusiones basadas en estas proteínas pueden tener semividas en el rango de 3 a 16 días, mucho más largas que los péptidos pegilados o lipidados típicos. La fusión con el anticuerpo Fc puede mejorar la solubilidad y la estabilidad del fármaco peptídico o proteico. Un ejemplo de una fusión péptido-Fc es la dulaglutida, un agonista del receptor de GLP-1 que actualmente se encuentra en ensayos clínicos de fase final. La albúmina sérica humana, la misma proteína aprovechada para los péptidos con acilos grasos, es el otro compañero de fusión popular. La albiglutida es un agonista del receptor de GLP-1 basado en esta plataforma. Una diferencia importante entre Fc y la albúmina es la naturaleza dimérica de Fc frente a la estructura monomérica de HAS, que conduce a la presentación de un péptido fusionado como un dímero o un monómero dependiendo de la elección del compañero de fusión. La naturaleza dimérica de una fusión péptido-Fc puede producir un efecto de avidez si los receptores seleccionados como objetivo están lo suficientemente cerca entre sí o son dímeros. Esto puede ser deseable o no dependiendo del objetivo.

[0370] Fusiones polipeptídicas diseñadas: XTEN y PAS

[0372] Una variación intrigante del concepto de fusión recombinante ha sido el desarrollo de secuencias diseñadas de baja complejidad como compañeros de fusión, básicamente polímeros de aminoácidos hidrofílicos no estructurados que son análogos funcionales de PEG (Figura 1). La biodegradabilidad inherente de la plataforma polipeptídica la hace atractiva como alternativa al PEG potencialmente más benigna. Otra ventaja es la estructura molecular precisa de la molécula recombinante en contraste con la polidispersidad de PEG. A diferencia de las fusiones de péptidos con HSA y Fc, en las que se debe mantener el plegamiento tridimensional del compañero de fusión, las fusiones recombinantes con compañeros no estructurados pueden, en muchos casos, someterse a temperaturas más altas o condiciones duras, como la purificación por HPLC.

[0374] El más avanzado de esta clase de polipéptidos se denomina XTEN (Amunix) y tiene 864 aminoácidos de longitud y está compuesto por seis aminoácidos (A, E, G, P, S y T) (Figura 1)<8>. Habilitado por la naturaleza biodegradable del polímero, este es mucho más grande que los PEG de 40 KDa que se usan típicamente y confiere una prolongación de la semivida concomitantemente mayor. La fusión de XTEN con fármacos peptídicos da como resultado una prolongación de la semivida de 60 a 130 veces más que las moléculas nativas. Dos productos XTENilados producidos completamente de forma recombinante se han incorporado a la clínica, concretamente, VRS-859 (Exenatida-XTEN) y VRS-317 (hormona de crecimiento humana-XTEN). En estudios de fase Ia, se descubrió que VRS-859 se tolera bien y es eficaz en pacientes con diabetes tipo 2. Se informó que VRS-317 tiene propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas superiores en comparación con los productos de rhGH estudiados previamente y se podría dosificar una vez al mes.

[0376] Un segundo polímero basado en consideraciones conceptuales similares es PAS (XL-Protein GmbH)<9>. Un polímero de ordenamiento aleatorio compuesto por un conjunto aún más restringido de solo tres pequeños aminoácidos sin carga, prolina, alanina y serina (Figura 1). Aún se desconoce si las diferencias en las propiedades biofísicas de PAS y XTEN altamente cargado negativamente pueden contribuir a las diferencias en la biodistribución y/o la actividadin vivo, pero se revelará a medida que estos polipéptidos se incorporen a más tratamientos y se caracterice el comportamiento de las fusiones.

[0378] Todas las fusiones péptido-proteína, sea el compañero Fc, HSA, XTEN o PAS, están codificadas genéticamente y, en consecuencia, sufren restricciones similares. Una limitación es que solo se incorporan aminoácidos naturales, a diferencia de los métodos que emplean conjugación química que permiten el uso de péptidos sintéticos que incorporan aminoácidos no naturales. Aunque compañías como Ambrx o Sutro están desarrollando métodos para superar esto mediante la expansión del código genético, aún no se utilizan ampliamente. Una segunda limitación es que el extremo N- o C-terminal del péptido debe fusionarse con el compañero. A menudo, los extremos peptídicos están involucrados en las interacciones con el receptor y la fusión genética a uno o ambos extremos puede afectar en gran medida a la actividad. Dado que el sitio de conjugación de PEG o lípido puede estar en cualquier parte del péptido, puede optimizarse para maximizar la actividad biológica del producto terapéutico resultante.

[0380] Métodos híbridos que fusionan péptidos sintéticos con proteínas de prolongación de la semivida

[0382] Si bien las fusiones genéticas históricamente han ofrecido la posibilidad de una mayor prolongación de la semivida, carecen de las ventajas que brindan los métodos que utilizan la conjugación química, la PEGilación y la lipidación, en términos de flexibilidad de los sitios de unión e incorporación de aminoácidos no naturales o modificaciones a la estructura peptídica. Uno de los primeros esfuerzos para combinar las ventajas de las fusiones genéticas con la conjugación química para la prolongación de la semivida lo realizaron investigadores del Instituto de Investigación Scripps en La Jolla con la tecnología que más tarde formó la base de la empresa de biotecnología CovX10,11. Usando un anticuerpo con una aldolasa catalítica, estos investigadores desarrollaron una plataforma a través de la cual la lisina del sitio activo del anticuerpo forma un enlace enamina covalente reversible con una beta-dicetona incorporada en un péptido o molécula pequeña. El complejo resultante se denomina CovX-Body<™>. Este enfoque combina las cualidades funcionales de un fármaco peptídico o una molécula pequeña con la larga semivida en suero de un anticuerpo, no a través de una fusión genética sino a través de un enlace químico. Tras la demostración inicial de la tecnología, los investigadores ampliaron el uso del prototipo de CovX-Body<™>que se basa en un farmacóforo peptidomimético dirigido a integrinas. Al menos tres moléculas basadas en esta arquitectura se han incorporado al desarrollo clínico: CVX-096, un agonista de Glp-1R; CVX-060, un péptido de unión a angiopoyetina-2; y CVX-045, una molécula mimética de trombospondina.

[0384] Recientemente, el polipéptido XTEN también se ha utilizado en un modo de conjugación química<12>, lo que lo hace aún más directamente análogo a PEG. El primer ejemplo de un péptido XTENilado que se creó con este método es GLP2-2G-XTEN, en el que el péptido se conjuga químicamente con el polímero proteico XTEN mediante la química de maleimida-tiol. Las moléculas de GLP2-2GXTEN conjugadas químicamente mostraron una actividadin vitro, una estabilidad plasmáticain vitroy una farmacocinética en ratas comparables a las de GLP2-2G-XTEN fusionado de forma recombinante.

[0386] El número y el espaciado de los grupos reactivos como las cadenas laterales de lisina o cisteína en las secuencias completamente diseñadas de los polipéptidos XTEN o PAS se pueden controlar con precisión mediante cambios dirigidos al sitio debido a los conjuntos de aminoácidos restringidos de los que están compuestos. Esto proporciona un grado adicional de flexibilidad sobre los métodos que podrían utilizar Fc o albúmina, cuyas secuencias contienen naturalmente muchos grupos reactivos y contrasta con la tecnología CovX que se basa en un residuo reactivo en un sitio activo altamente especializado. Además, la falta de estructura terciaria de XTEN o PAS debería proporcionar más flexibilidad sobre las condiciones y químicas utilizadas en el acoplamiento y la purificación de los conjugados.

[0387] En resumen, están surgiendo métodos de prolongación de la semivida de péptidos híbridos que combinan las ventajas y superan las limitaciones individuales de los métodos de conjugación química y fusión genética. Estos métodos permiten la creación de moléculas basadas en compañeros basados en polipéptidos recombinantes que imparten una semivida más larga, pero liberan los restos peptídicos terapéuticos de las limitaciones de estar compuestos únicamente de L-aminoácidos naturales o configurados únicamente como polipéptidos unidireccionales lineales fusionados en cualquiera de los extremos N- o C-terminales, abriendo así la puerta a una amplia gama de fármacos basados en péptidos de acción más prolongada.

[0389] Composiciones farmacéuticas

[0391] Un péptido de la invención (que incluye las variantes y los péptidos modificados) se puede combinar con uno o más vehículos (diluyentes, excipientes y similares) apropiados para una o más vías de administración previstas para proporcionar composiciones que sean farmacéuticamente aceptables en el contexto de la preparación de una composición farmacéuticamente aceptable que comprende uno o más péptidos de la invención.

[0393] Un péptido de la invención puede mezclarse, por ejemplo, con lactosa, sacarosa, polvos (p. ej., polvo de almidón), ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácido fosfórico y sulfúrico, goma arábiga, gelatina, alginato de sodio, polivinilpirrolidina y/o poli(alcohol vinílico), y opcionalmente en comprimidos o encapsulados adicionales para la administración convencional. Alternativamente, un péptido de la invención puede disolverse en disolución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, disoluciones coloidales de carboximetilcelulosa, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, goma de tragacanto y/o diversos tampones. Otros vehículos, adyuvantes y modos de administración son muy conocidos en las técnicas farmacéuticas. Un vehículo o diluyente puede incluir un material retardador de tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, u otros materiales funcionalmente similares.

[0395] Los vehículos farmacéuticamente aceptables generalmente también incluyen todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares que sean fisiológicamente compatibles con un análogo de insulina. Los ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen agua, disolución salina, disolución salina tamponada con fosfato (PBS), dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de cualquiera de los mismos. En muchos casos, puede ser deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en tal composición. Sustancias farmacéuticamente aceptables como agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares como agentes humectantes o agentes emulsionantes, conservantes o tampones, que deseablemente pueden mejorar la vida útil o la eficacia del análogo de insulina, la composición relacionada o la combinación. La idoneidad de los vehículos y otros componentes de las composiciones farmacéuticas se puede determinar en función de la falta de un impacto negativo significativo en las propiedades biológicas deseadas del análogo de insulina, la composición relacionada o la combinación (p. ej., menos de un 20 %, 15 %, 10 %, 5 % o 1 % de reducción en la unión y/o activación del IR; o la capacidad de reducir la glucosa en sangre en un huésped objetivo).

[0397] Las composiciones, las composiciones relacionadas y las combinaciones según la invención se pueden presentar, preparar y/o administrar en una variedad de formas adecuadas. Dichas formas incluyen, por ejemplo, formas farmacéuticas líquidas, semisólidas y sólidas, como disoluciones líquidas (por ejemplo, disoluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, emulsiones, microemulsiones, comprimidos, píldoras, polvos, liposomas, dendrímeros y otras nanopartículas (véase, por ejemplo, Baek et al., Methods Enzymol.

[0398] 2003; 362:240-9; Nigavekar et al., Pharm Res. marzo de 2004; 21(3):476-83), micropartículas y supositorios. La forma óptima para cualquier péptido de la composición asociada con la invención depende del modo de administración previsto, la naturaleza de la composición o combinación y la aplicación terapéutica u otro uso previsto. Las formulaciones también pueden incluir, por ejemplo, polvos, pastas, ungüentos, jaleas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos), conjugados de ADN, pastas de absorción anhidra, emulsiones de aceite en agua y agua en aceite, emulsiones, carbowax (polietilenglicoles de diversos pesos moleculares), geles semisólidos y mezclas semisólidas que contienen carbowax. Cualquiera de las mezclas anteriores puede ser apropiada en los tratamientos y las terapias de acuerdo con la presente invención, siempre que la unión del péptido a los IR afines no se inhiba significativamente por la formulación y la formulación sea fisiológicamente compatible y tolerable con la vía de administración. Véase también, por ejemplo, Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations", PDA J Pharm Sci Technol.

[0399] 52:238-311 (1998) y las citas que contiene para obtener información adicional relacionada con excipientes y vehículos bien conocidos por los químicos farmacéuticos.

[0401] En un aspecto particular, un péptido de la invención se administra en liposomas. En otro aspecto, un péptido de la invención se administra en liposomas con uno o más agentes secundarios, como uno o más fármacos antidiabéticos.

[0403] Las composiciones de la invención también incluyen composiciones que comprenden cualquier combinación adecuada de un péptido de la invención y una sal adecuada del mismo. Cualquier sal adecuada, como una sal de metal alcalinotérreo en cualquier forma adecuada (p. ej., una sal tampón), puede usarse en la estabilización del péptido de la invención (preferiblemente la cantidad de sal es tal que se evita la oxidación y/o la precipitación del péptido). Las sales adecuadas típicamente incluyen cloruro de sodio, succinato de sodio, sulfato de sodio, cloruro de potasio, cloruro de magnesio, sulfato de magnesio y cloruro de calcio. También se proporcionan composiciones que comprenden una base y uno o más péptidos de la invención.

[0405] Un modo típico de administración de las composiciones de la invención es mediante administración parenteral (por ejemplo, administración intravenosa, subcutánea, intraperitoneal y/o intramuscular). En un aspecto, una composición o péptido de la invención se administra a un paciente humano mediante infusión o inyección intravenosa. En otro aspecto, una composición o péptido de la invención se administra mediante inyección intramuscular o subcutánea. Como se indicó anteriormente, la administración intratumoral también puede ser útil en ciertos regímenes terapéuticos.

[0407] Por lo tanto, los péptidos de la invención pueden formularse, por ejemplo, en formulaciones sólidas (que incluyen, por ejemplo, gránulos, polvos, partículas de proyectil o supositorios), formas semisólidas (geles, cremas, etc.) o en formas líquidas (por ejemplo, disoluciones, suspensiones o emulsiones). Una composición o péptido de la invención se puede aplicar en una variedad de disoluciones. Las disoluciones adecuadas para su uso de acuerdo con la invención típicamente son estériles, disuelven cantidades suficientes del péptido de la invención y otros componentes de la composición, estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y no perjudiciales para el sujeto para la aplicación propuesta. Un péptido de la invención puede someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o puede contener adyuvantes convencionales, tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones, etc. Una composición también puede formularse como una disolución, microemulsión, dispersión, polvo, macroemulsión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. Las propiedades de fluidez deseables de una disolución se pueden mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede lograrse incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina. Estos y otros componentes de una composición farmacéuticamente aceptable de la invención pueden impartir propiedades ventajosas tales como transferencia, entrega, tolerancia y similares mejoradas.

[0408] Una composición para uso farmacéutico puede incluir varios diluyentes, rellenos, sales, tampones, detergentes (p. ej., un detergente no iónico, como Tween-80), estabilizantes (p. ej., azúcares o aminoácidos sin proteínas), conservantes, fijadores de tejidos, solubilizantes y/u otros materiales adecuados para su inclusión en una composición para uso farmacéutico. También se describen ejemplos de componentes adecuados, por ejemplo, en Berge et al., J. Pharm. Sci., 6661), 1-19 (1977); Wang y Hanson, J. Parenteral. Sci. Tech: 42, S4-S6 (1988); las patentes de EE. UU. n.º 6,165,779 y 6,225,289; y otros documentos citados en la presente memoria. Dicha composición farmacéutica también puede incluir conservantes, antioxidantes u otros aditivos conocidos por los expertos en la técnica. Se conocen en la técnica vehículos farmacéuticamente aceptables adicionales y se describen, por ejemplo, en Urquhart et al., Lancet, 16, 367 (1980), Lieberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms-Disperse Systems (2ª ed., vol. 3, 1998); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms & Drug Delivery Systems (7ª ed. 2000); Martindale, The Extra Pharmacopeia (31ª edición), Remington's Pharmaceutical Sciences (ediciones 16ª a 20ª); The Pharmacological Basis Of Therapeutics, Goodman y Gilman, Eds. (9ª ed., 1996); Libro de texto de química orgánica medicinal y farmacéutica de Wilson y Gisvolds, Delgado y Remers, Eds. (10ª ed., 1998), y las patentes de EE. UU. n.º 5,708,025 y 5,994,106. Los principios de formulación de composiciones farmacéuticamente aceptables también se describen, por ejemplo, en Platt, Clin. Lab Med., 7:289-99 (1987), Aulton, Pharmaceutics: The Science Of Dosage Form Design, Churchill Livingstone (Nueva York) (1988), Extemporaneous Oral Liquid Dosage Preparations, CSHP (1998), y "Drug Dosage", J. Kans. Med. Soc., 70 (I), 30-32 (1969). Los vehículos farmacéuticamente aceptables adicionales particularmente adecuados para la administración de los péptidos o las composiciones de la invención y las composiciones relacionadas (p. ej., composiciones que comprenden ácidos nucleicos que codifican los péptidos de la invención o vectores que comprenden ácidos nucleicos que codifican los péptidos de la invención) se describen, por ejemplo, en la solicitud de patente internacional WO 98/32859.

[0410] Los péptidos o las composiciones de la invención se pueden preparar con un vehículo que protegerá al compuesto contra la liberación rápida, como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden usar polímeros biocompatibles y biodegradables, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, poli(ácido glicólico), colágeno, poliortoésteres y poli(ácido láctico), y combinaciones de cualquiera de los mismos, para proporcionar dicha composición. Se conocen métodos para la preparación de dichas composiciones. Véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978.

[0412] En otro aspecto, las composiciones de la invención se administran por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable (las formulaciones y los métodos de administración oral específicos también se describen por separado en otra parte de la presente memoria). El compuesto (y otros principios, si se desea) también puede encerrarse en una cápsula de gelatina de cubierta dura o blanda, comprimirse en comprimidos o incorporarse directamente a la dieta del sujeto. Para la administración terapéutica oral, los compuestos pueden incorporarse con excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Para administrar un compuesto de la invención mediante una administración distinta a la parenteral, puede ser necesario recubrir el compuesto, o coadministrar el compuesto, con un material para evitar su inactivación.

[0414] La preparación de composiciones farmacéuticas que contienen péptidos como principios activos es muy conocida en la técnica. Típicamente, dichas composiciones se preparan como inyectables, ya sea como disoluciones líquidas o suspensiones, sin embargo, también se pueden preparar formas sólidas adecuadas para disolución o suspensión en líquido antes de la inyección. La preparación también se puede emulsionar. El principio terapéutico activo a menudo se mezcla con excipientes que son farmacéuticamente (es decir, fisiológicamente) aceptables y compatibles con el principio activo. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, disolución salina, dextrosa, glicerol, etanol o similares y combinaciones de los mismos. Además, si se desea, la composición puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes tamponadores del pH, que mejoran la eficacia del principio activo.

[0415] Un péptido de la invención se puede formular en una composición farmacéutica como formas salinas fisiológicamente aceptables neutralizadas. Las sales adecuadas incluyen las sales de adición de ácido (es decir, formadas con los grupos amino libres de la molécula peptídica) y que se forman con ácidos inorgánicos como, por ejemplo, ácido clorhídrico o fosfórico, o ácidos orgánicos como acético, oxálico, tartárico, mandélico, y similares. Las sales formadas a partir de los grupos carboxilo libres también pueden derivarse de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, y similares.

[0417] En el caso de las composiciones combinadas (discutidas más adelante en la presente memoria), un péptido de la invención se puede coformular y/o coadministrar con uno o más agentes terapéuticos adicionales (p. ej., un agente antidiabético como una insulina, un análogo de insulina, metformina u otra biguanida antidiabética, un antagonista del receptor de glucagón, una sulfonilurea, una tiazolidindiona, un inhibidor de alfa-glucosidasa, una meglitinida, un péptido-1 similar al glucagón (GLP-1), un análogo de GLP-1, etc.). Tales terapias de combinación pueden requerir dosis más bajas del péptido de la invención y/o los agentes coadministrados, para evitar posibles toxicidades o complicaciones asociadas con las diversas monoterapias.

[0419] Aplicaciones Terapéuticas

[0421] Como se indicó anteriormente, un péptido o composición de la invención puede administrarse individualmente o en combinación con otros agentes farmacológicamente activos. Se entenderá que tal terapia de combinación abarca diferentes regímenes terapéuticos, que incluyen, sin limitación, la administración de múltiples agentes juntos en una sola forma de dosificación o en distintas formas farmacéuticas individuales. Si los agentes están presentes en diferentes formas farmacéuticas, la administración puede ser simultánea o casi simultánea o puede seguir cualquier régimen predeterminado que abarque la administración de los diferentes agentes.

[0422] Por ejemplo, cuando se usan para tratar la diabetes u otras enfermedades o síndromes asociados con una disminución de la respuesta o producción de insulina, hiperlipidemia, obesidad, síndromes relacionados con el apetito y similares, los péptidos de la invención pueden administrarse ventajosamente en un régimen de tratamiento combinado con uno o más agentes, incluidos, entre otros, insulina, análogos de insulina, derivados de insulina, péptido similar al glucagón-1 o -2 (GLP-1, GLP-2), derivados o análogos de GLP-1 o GLP-2 (como se divulgan, por ejemplo, en el documento WO 00/55119). Se entenderá que un "análogo" de insulina, GLP-1 o GLP-2, como se usa en la presente memoria, se refiere a un péptido que contiene una o más sustituciones de aminoácidos respecto de la secuencia nativa de insulina, GLP-1 o GLP-2, según corresponda; y "derivado" de insulina, GLP-1 o GLP-2, como se usa en la presente memoria, se refiere a un péptido nativo o análogo de insulina, GLP-1 o GLP-2 que ha sufrido una o más modificaciones químicas adicionales de la secuencia de aminoácidos, en particular respecto de la secuencia natural. Los derivados y análogos de la insulina se describen, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. n.º 5,656,722, 5,750,497, 6,251,856, y 6,268,335. En algunas realizaciones, el agente de combinación es uno de insulina humana LysB29(ε-miristoil)des(B30), insulina humana LysB29(ε-tetradecanoil)des(B30) e insulina humana B29-Nε-(N-litocolil-γ-glutamil)-des(B30). También son adecuados para la terapia de combinación los agentes antihiperglucémicos no peptídicos, los agentes antihiperlipidémicos y similares, tales como los muy conocidos en la técnica.

[0424] En una realización, la descripción abarca métodos para tratar la diabetes o síndromes relacionados o afecciones asociadas (por ejemplo, reducir la tasa de accidentes cerebrovasculares, enfermedades cardíacas, enfermedades renales, ceguera y/o pérdida de sensibilidad en las extremidades relacionados con el nivel de glucosa y/o la diabetes), que comprende administrar una cantidad eficaz de al menos un péptido de la invención (mediante expresión génica, mediante la administración de un péptido homogéneo o, típicamente, mediante la administración de una composición farmacéuticamente aceptable que comprende uno o más péptidos y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables como se ha descrito anteriormente. En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un péptido o composición de la invención (tal como una composición de combinación) en la fabricación de un medicamento utilizado en el tratamiento de la diabetes tipo 1 o tipo 2.

[0425] Un péptido de la invención puede usarse generalmente en el tratamiento de la diabetes mellitus tanto de tipo 1 como de tipo 2, es decir, diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM) y diabetes mellitus no insulinodependiente (NIDDM).

[0426] En un aspecto de terapia de combinación ejemplar, la invención proporciona un método para tratar la diabetes (p. ej., reducir uno o más síntomas asociados a la misma en un huésped y/o proporcionar a un huésped una cantidad de una composición que ha demostrado ser terapéuticamente eficaz en al menos una proporción sustancial de una población de huéspedes similares) que comprende administrar una primera cantidad de un péptido o composición de la invención y una segunda cantidad de un análogo de insulina de acción prolongada, como, por ejemplo, insulina humana LysB29(ε-miristoil)des(B30), insulina humana LysB29(εtetradecanoil)des(B30) o insulina humana B29-Nε-(N-litocolil-γ-glutamil)-des(B30), en la que la primera y la segunda cantidades juntas son eficaces para tratar el síndrome. Como se usa en la presente memoria, un análogo de insulina de acción prolongada es aquel que muestra un perfil de acción prolongada respecto de la insulina humana nativa, como se describe, por ejemplo, en la patente de EE. UU. n.º 6,451,970. En otro aspecto, la invención proporciona el uso de una composición de combinación que comprende una combinación terapéuticamente eficaz de al menos un péptido o composición de la invención y al menos una insulina o un análogo de insulina en la fabricación de un medicamento utilizado en el tratamiento de una enfermedad, tal como como en el tratamiento de la diabetes tipo 1 o tipo 2. Las composiciones similares que comprenden combinaciones de uno o más péptidos o composiciones de la invención y uno o más análogos de insulina de acción prolongada y/o corta también pueden ser adecuadas para los métodos terapéuticos, tales como el tratamiento de la diabetes.

[0427] En un aspecto, la invención proporciona un método para tratar los síntomas y/o las afecciones subyacentes asociadas con la diabetes tipo 2 en un paciente que lo necesita (debido al diagnóstico de la enfermedad y/o al riesgo sustancial de desarrollarla) que comprende administrar al paciente una cantidad terapéutica y/o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención para tratar tales síntomas y/o afecciones. En un aspecto particular, la invención proporciona un método para tratar a un paciente que tiene diabetes tipo 2 y niveles elevados de insulina en sangre (hiperinsulinemia). En uno de tales aspectos, el paciente es obeso. En otro aspecto, el paciente también o alternativamente comprende un genotipo/mutación resistente a la insulina.

[0428] En otro aspecto, la invención proporciona un método para reducir la tensión arterial en un paciente que tiene tensión arterial alta asociada con insulina/IR que comprende administrar o suministrar de otro modo una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido o composición de la invención para reducir la tensión arterial en el paciente.

[0429] En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar los síntomas y/o las afecciones subyacentes del Síndrome X o un aspecto del mismo en un paciente (p. ej., hiperlipidemia, hipertensión y/u obesidad) que comprende la administración o el suministro de otro modo de una cantidad profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para tratar el Síndrome X o una afección del Síndrome X. En otro aspecto más, la invención proporciona un método para tratar una afección, trastorno o enfermedad mediada por IR no diabética en un paciente, tal como una enfermedad neurodegenerativa asociada a IR; una enfermedad autoinmune no diabética asociada a IR; etc., que comprende administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para tratar dichas afecciones/síntomas.

[0430] En otro aspecto, la invención proporciona un método para prevenir el aumento de peso en un paciente que lo necesite, que comprende administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para evitar el aumento de peso asociado con la RI.

[0431] En un aspecto relacionado, la invención proporciona un método para tratar la obesidad que comprende administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para tratar la obesidad (estabilizando y/o reduciendo el peso del paciente) o una afección relacionada con la misma.

[0432] En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad asociada o causada por hiperinsulinemia, hipoglucemia, hipopotasemia y/o hipofosfatemia que comprende administrar (o suministrar de otro modo, como es el caso) una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para tratar dichas afecciones/síntomas. La presente invención se refiere además a un método para tratar enfermedades o trastornos relacionados con la glucemia, que comprende la administración de derivados de insulina o conjugados de insulina. Las enfermedades o trastornos relacionados con la glucemia incluyen diabetes tipo I y II y diabetes gestacional.

[0433] Además, la fibrosis quística, el síndrome de ovario poliquístico, la pancreatitis y otras enfermedades relacionadas con el páncreas también pueden tratarse mediante la administración de derivados de insulina o conjugados de insulina de la presente invención. La insulina también se conoce como factor de crecimiento y, por lo tanto, los derivados de insulina o los conjugados de insulina de la presente invención pueden ser útiles en la administración tópica para la cicatrización de heridas y otras indicaciones relacionadas.

[0434] En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un péptido o composición de la invención (como una composición de combinación) en la fabricación de un medicamento usado en el tratamiento de cualquiera de las afecciones anteriores.

[0435] En un aspecto general, la invención proporciona un método para modular los niveles de glucosa en un individuo que comprende administrar una cantidad fisiológicamente eficaz de un péptido o composición de la invención para modular de forma detectable los niveles de glucosa en el paciente. En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un péptido o composición de la invención (como una composición de combinación) en la fabricación de un medicamento utilizado para reducir los niveles de glucosa en sangre.

[0436] En otro aspecto general, la invención proporciona un método para mediar en la actividad de IR que comprende administrar una cantidad fisiológicamente eficaz de un péptido o composición de la invención de tal manera que la respuesta del IR en las células presentadoras de IR se une en una cantidad y en condiciones suficientes para inducir, promover, mejorar y/o modular de otro modo una actividad o respuesta mediada por IR. Por ejemplo, un péptido de la invención se puede administrar a un huésped para que se una al Sitio 1 o al Sitio 2, para dirigir las moléculas de insulina o análogos de insulina al otro sitio para modificar el perfil de un tratamiento con insulina o análogos de insulina.

[0437] En otra faceta más, la invención proporciona un método para modular los niveles de producción de óxido nítrico en un paciente, tal como en las células endoteliales de un paciente; la mediación de las rutas de proteínas quinasas activadas por mitógeno (MAP) y/o RAS, RAF, MEK; modular el crecimiento del tejido vascular y/o el crecimiento y/o la migración de células del músculo liso, monocitos, macrófagos y/o células endoteliales; estimular la producción del inhibidor del activador del plasminógeno tipo 1 (PAI-1); modular la producción de endotelina; modular los eventos biológicos de la vía proaterosclerótica asociados con IR; modular la inflamación asociada a IR; tratar y/o reducir el riesgo de lesión arterial; tratar y/o prevenir la aterosclerosis; y/o reducir las moléculas de inflamación asociadas con IR, como el colesterol LDL en las paredes de los vasos sanguíneos de un paciente mediante el suministro o la administración de otra forma de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un péptido o composición de la invención al paciente para inducir, promover y/o o mejorar tales respuestas fisiológicas.

[0438] Los péptidos y las composiciones de la invención también se pueden emplear para tratar la consunción catabólica (por ejemplo, caquexia y sarcopenia) y para el uso no terapéuti

[0439] por ejemplo, en un atleta, deportista o culturista. Los péptidos también se utilizan por su efecto anabólico sobre la masa muscular de un atleta. (GHRP significa hexapéptido liberador de hormona del crecimiento, un tipo de hormona liberadora de hormona del crecimiento).

[0440] Esto puede ser útil de dos formas. Obviamente, un atleta necesitará recuperarse rápidamente y ser productivo poco después de una lesión. Los péptidos ayudarán al músculo o tejido blando en este proceso de curación de reconstrucción. Los suplementos que brindan un efecto anabólico también podrían usarse durante la pretemporada y otros períodos en los que es importante desarrollar masa muscular. La masa muscular se puede construir rápidamente porque el atleta puede hacer pequeños desgarros en un músculo y hacer que sane en un programa rápido para repetir continuamente el proceso; el efecto final es un aumento de la masa muscular y una reducción de la grasa corporal en un período de tiempo más corto. La comunidad de culturismo usa péptidos que son más efectivos de esta segunda manera, ya que los péptidos más nuevos no conllevan los efectos secundarios de los esteroides anabólicos.

[0441] Dosis ejemplares y estrategias de administración

[0442] Como se describió anteriormente, las composiciones de la invención pueden incluir una "cantidad terapéuticamente eficaz" o una "cantidad profilácticamente eficaz" de un péptido de la invención (o primera y segunda cantidades en el caso de una composición de combinación que comprende un péptido de la invención y un segundo componente; primera, segunda y tercera cantidades en el caso de una composición de combinación que comprende dos péptidos de la invención y un agente secundario o un péptido de la invención y dos agentes secundarios, etc.). Para ilustrar mejor los aspectos particulares, en la presente memoria se proporciona una discusión detallada de los principios de dosificación.

[0443] En la práctica de la invención, la cantidad o el intervalo de dosificación del péptido de la invención empleado normalmente es uno que induce, promueve o potencia de forma eficaz una respuesta fisiológica asociada con el péptido de la invención que se une a un IR afín. En un aspecto, el rango de dosificación se selecciona de manera que el péptido de la invención empleado induzca, promueva o mejore un efecto medianamente significativo en un paciente que sufre o tiene un riesgo sustancial de desarrollar una afección asociada que está al menos en parte modulada por la actividad del IR, tal como, por ejemplo, una forma de diabetes, cuyo efecto está asociado con la activación, señalización y/o modificación biológica (por ejemplo, fosforilación) del IR afín.

[0444] En otro aspecto más, se proporciona a un paciente una dosis diaria de principio activo (p. ej., péptido de la invención) de aproximadamente 0,01 a 100 miligramos por kilogramo de peso corporal. Normalmente, aproximadamente 1 a aproximadamente 5 o aproximadamente 1 a aproximadamente 10 miligramos por kilogramo por día administrados en dosis divididas de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 veces al día o en forma de liberación sostenida pueden ser efectivos para obtener los resultados deseados.

[0445] Como ejemplo no limitante, el tratamiento de patologías asociadas con IR en seres humanos o animales se puede proporcionar mediante la administración de una dosis diaria de péptido de la invención en una cantidad de aproximadamente 0,1-100 mg/kg, como 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 mg/kg, por día, en al menos uno de los días 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40, o alternativamente, al menos una de las semanas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20, o cualquier combinación de los mismos, usando dosis únicas o divididas cada aproximadamente 24, 12, 8, 6, 4 o 2 horas, o cualquier combinación de los mismos. En un aspecto, los métodos inventivos comprenden administrar o suministrar de otro modo dos péptidos diferentes de la invención durante un período de un mes, y el comienzo de la terapia involucra el segundo péptido de la invención o en cualquier momento cuando se desarrolle una respuesta inmune significativa al primer péptido de la invención en el huésped, de modo que el uso continuado del primer péptido de la invención se ha vuelto perjudicial para el paciente.

[0446] Ejemplos

[0447] El péptido al que se hace referencia en los Ejemplos es un péptido que tiene una secuencia de SEQ ID NO.1. Ejemplo 1

[0448] Ensayo de proliferación celular

[0449] Descripción del estudio

[0450] BrDu se incorpora a las cadenas de ADN recién sintetizadas de células en proliferación activa. Tras la desnaturalización parcial del ADN de doble cadena, se detecta inmunoquímicamente BrDu, lo que permite evaluar la población de células que sintetizan ADN.

[0451] Metodología

[0452] Se sembraron fibroblastos dérmicos humanos (HDF - Sigma 10605a) en una placa de 96 pocillos a 10000 células por pocillo en DMEM que contenía un 10 % de suero de ternera fetal (FCS), 1 % de Pen/strep, 1 % de L-glutamina y se permitió que se adhirieran durante 24 h.

[0453] Después de la incubación inicial durante 24 h, las células se incubaron con 5 µg/ml, 0,5 µg/ml o 0,05 µg/ml del péptido sintético durante 24 h, respectivamente.

[0454] Después de 18 h de incubación con los péptidos sintéticos, se añadieron 20 µl de reactivo BrDu a cada pocillo. A las 24 h de incubación, las células se fijaron y se midió la cantidad de 2-DG6P usando el ensayo de proliferación celular de BrdU, todas las etapas se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

[0455] Luego se repitió este experimento usando células HACAT.

[0456] Resultados

[0457] Los resultados se calcularon como un porcentaje del control sin tratar. Un aumento en la lectura de la densidad óptica indica una mayor incorporación de BrDu y un aumento de la proliferación celular, como se ilustra en las Figuras 1 (células HDF) y 2 (células HACAT). Como se ilustra en las Figuras 1 y 2, las muestras estimuladas con el péptido de la invención mostraron un aumento en la proliferación celular en comparación con el control sin tratar.

[0458] Conclusión

[0459] Estos resultados demuestran la eficacia del péptido para facilitar la proliferación celular.

[0460] Ejemplo 2

[0461] Ensayo de producción de colágeno

[0462] Descripción del estudio

[0463] La hidroxiprolina en las preparaciones de tejido es una medida directa de la cantidad de colágeno presente. El kit ELISA de hidroxiprolina humana FIRELISA está diseñado para medir la hidroxiprolina en tejidos o composiciones peptídicas.

[0464] Metodología

[0465] Se sembraron fibroblastos dérmicos humanos (HDF Sigma 10605a) en placas de 24 pocillos a 50000 células por pocillo en DMEM que contenía un 10 % de suero de ternera fetal (FCS), 1 % de Pen/strep, 1 % de L-glutamina y se dejó adherir durante 24 h.

[0466] Después de la incubación inicial de 24 h, las células se incubaron con 5 µg/ml, 1 µg/ml o 0,1 µg/ml de péptido sintético durante 96 h, respectivamente.

[0467] Después del tratamiento, se eliminó el sobrenadante celular y se centrifugó. Se analizaron 50 µl de cada sobrenadante utilizando el kit ELISA de hidroxiprolina humana FIRELISA. Todas las etapas se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

[0468] Resultados

[0469] Los resultados se calcularon como un porcentaje del control sin tratar. Un aumento en la lectura de la densidad óptica indica un aumento en el contenido de colágeno. Se observó un aumento en la producción de colágeno en comparación con el control sin tratar, como se ilustra en la Figura 3.

[0470] Conclusión

[0471] Estos resultados demuestran la eficacia del péptido para facilitar la producción de colágeno.

[0472] Ejemplo 3

[0473] Ensayo de producción de elastina

[0474] Descripción del estudio

[0475] La elastina es una proteína altamente elástica del tejido conectivo y permite que muchos tejidos del cuerpo recuperen su forma después de estirarse o contraerse. El kit ELISA de elastina humana FIRELISA está diseñado para medir la elastina en tejidos o composiciones de proteínas/péptidos.

[0476] Metodología

[0477] Se sembraron fibroblastos dérmicos humanos (HDF) en placas de 24 pocillos a 50000 células por pocillo en DMEM que contenía un 10 % de suero de ternera fetal (FCS), 1 % de Pen/strep, 1 % de L-glutamina y se dejó adherir durante 24 h.

[0478] Después de la incubación inicial de 24 h, las células se incubaron con 5 µg/ml, 1 µg/ml o 0,1 µg/ml de péptido sintético durante 96 h, respectivamente.

[0479] Después del tratamiento, las células se lisaron utilizando tampón de lisis celular y se sonicaron durante 10 segundos. Las células lisadas se centrifugaron y se eliminó el sobrenadante de cada muestra. La concentración de proteína total se determinó utilizando un ensayo BCA. Cada muestra se diluyó en tampón de ensayo para contener 10 µg de proteína total. A continuación, se analizaron 50 µl de cada muestra utilizando el kit ELISA de elastina humana FIRELISA. Todas las etapas se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.Resultados

[0480] Los resultados se calcularon como porcentaje del control sin tratar. Un aumento en la lectura de densidad óptica indica un aumento en el contenido de elastina. Como se ilustra en la Figura 4, las muestras estimuladas con el péptido de la invención mostraron un aumento en la producción de elastina en comparación con el control sin tratar.

[0481] Conclusión

[0482] Estos resultados demuestran la eficacia del péptido para facilitar la producción de elastina.

[0483] Ejemplo 4

[0484] Captación de glucosa

[0485] Descripción del estudio

[0486] La captación de glucosa en las células del músculo esquelético se midió usando 2-desoxiglucosa (2-DG). Los transportadores de glucosa captan la 2-DG y la metabolizan hasta 2-DG-6-fosfato (2-DG6P). La cantidad de 2-DG6P no metabolizada acumulada es proporcional a la captación de glucosa por las células.

[0487] Metodología

[0488] Se sembraron mioblastos esqueléticos humanos (Sigma 150-05a) en una placa de 96 pocillos a razón de 10 000 células por pocillo en medio de diferenciación del músculo esquelético y se dejaron diferenciar durante 72 h antes de la experimentación.

[0489] Las células diferenciadas se privaron de suero durante 24 h antes de la estimulación con insulina o péptidos sintéticos. Después de la privación, se eliminó el medio libre de suero, se lavaron las células con disolución salina tamponada con fosfato (PBS) y se reemplazó el medio con 100 µl de Krebs-Ringer-Fosfato-HEPES (KRPH) y se incubó durante 1 h.

[0490] A continuación, las células se estimularon con insulina 100 nM durante 30 minutos o 5 µg/ml, 0,5 µg/ml o 0,05 µg/ml de péptido sintético durante 3 h, respectivamente.

[0491] Después de la estimulación, las células se incubaron con 10 µl/pocillo de disolución de 2-DG durante 40 min y se midió la absorción de glucosa con el "Kit de ensayo de absorción de glucosa PrismColor" (Molecutools); todas las etapas se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El experimento se repitió usando células HACAT.

[0492] Resultados

[0493] Los resultados se calcularon como el porcentaje del control sin tratar. Un aumento en la lectura de la densidad óptica indica una mayor incorporación de 2-DG6P y un aumento en la captación de glucosa. Todos los experimentos se llevaron a cabo por duplicado en tres placas (6 pocillos/condición). La significancia se determinó utilizando la prueba t de Student (<∗>p<0,05 en comparación con el control,<∗∗>p<0,01 en comparación con el control,<∗∗∗>p<0,001 en comparación con el control). La Figura 6 ilustra los resultados para 0,5 µg/ml de péptido sintético y la Figura 7 ilustra los resultados para 5 µg/ml de péptido sintético. La Figura 5 muestra los resultados de las celdas HACAT. Como ilustran estas Figuras, las muestras estimuladas con el péptido de la invención mostraron un aumento en la captación de glucosa en comparación con el control sin tratar.

[0494] Conclusión

[0495] Estos resultados demuestran la eficacia del péptido para facilitar la captación de glucosa en el músculo esquelético.

[0496] Ejemplo 5

[0497] Translocación de GLUT-4

[0498] Metodología

[0499] Se cultivaron células HSKMC en placas de 6 pocillos y luego se trataron con péptidos/hidrolizados durante 2 horas, a concentraciones de 0,5 μg/ml y 5 μg/ml. Al finalizar el tratamiento, se recogieron las proteínas de la membrana celular. Brevemente, las células se recolectaron de los pocillos con un raspador de células y se centrifugaron a 300 × g durante 5 min. El sedimento celular se lavó con 300 μl de disolución de lavado celular y luego se volvió a centrifugar a 300 × g durante 5 min. Se descartó el sobrenadante y las células se resuspendieron en 1,5 ml de disolución de lavado de células y se transfirieron a un tubo de centrífuga de 2 ml. Luego, las células se centrifugaron a 300 × g durante 5 min y se descartó el sobrenadante. Se añadieron 150 μl de tampón de permeabilización al sedimento celular y se agitó brevemente para obtener una suspensión celular homogénea. A continuación, la suspensión se incubó a 4 °C durante 10 min con agitación constante. Luego, las células permeabilizadas se centrifugaron a 16000 × g durante 15 min y el sobrenadante que contenía las proteínas citosólicas se transfirió a un tubo nuevo. Se añadieron 100 μl de tampón de solubilización al sedimento y se resuspendió pipeteando suavemente. A continuación, las muestras se incubaron a 4 °C durante 10 min con agitación constante. A continuación, las muestras se centrifugaron a 16000 × g durante 15 min a 4 °C durante 10 min. El sobrenadante que contenía la membrana solubilizada y las fracciones de proteínas asociadas a la membrana se transfirió a un tubo nuevo y se almacenó a -80 °C hasta que estuvo listo para el análisis.

[0500] Se analizó GLUT-4 en las fracciones de membrana celular utilizando un ELISA de tipo sándwich de LSBio. Se cargaron 10 μg de proteína de cada muestra en un pocillo individual en una placa de 96 pocillos hasta un volumen final de 100 μl. También se añadieron estándares de GLUT-4 (0,3 ng/ml-20 ng/ml) a las placas en un volumen idéntico. A continuación, las placas se sellaron y se incubaron a 37 °C durante 1 hora. Se aspiró el líquido de cada pocillo y luego se añadieron 100 μl del reactivo de detección a cada pocillo, momento en el que se sellaron las placas, se agitaron suavemente para asegurar la mezcla y luego se incubaron durante 1 hora a 37 °C. El líquido se aspiró de cada pocillo y los pocillos se lavaron 3 veces usando 350 μl de tampón de lavado. Se añadieron 100 μl del reactivo de detección B a cada pocillo, momento en el que las placas se sellaron y se incubaron a 37 °C durante 30 min. Los pocillos se lavaron 5 veces, como se indicó anteriormente, y se añadieron 90 μl de sustrato TMB a cada pocillo. Las placas se sellaron, se protegieron de la luz y se incubaron a 37 °C durante 10 minutos para asegurar un desarrollo óptimo del color. Se añadieron 50 μl de disolución de parada a cada pocillo y se determinó la densidad óptica de la muestra utilizando un lector de microplacas ajustado a 450 nm. La concentración de GLUT-4 en las muestras se calculó a partir de la curva estándar después de generar un ajuste de curva logística de cuatro parámetros (4-PL). Luego se ajustó la lectura de la concentración de la muestra de la curva multiplicando los resultados por el factor de dilución.

[0501] Resultados

[0502] Como se ilustra en la Figura 8, hubo un aumento en la translocación de GLUT4 en las muestras estimuladas con 0,05 μg/ml y 5 μg/ml de péptido.

[0503] Conclusión

[0504] El péptido mostró una tendencia al efecto estimulador sobre la translocación de GLUT4 en el músculo esquelético y su capacidad de facilitar el transporte de glucosa en el músculo esquelético.

[0505] Ejemplo 6

[0506] Síntesis de proteínas musculares (ensayo Fosfo-mTOR)

[0507] Descripción del estudio

[0508] El objetivo de la rapamicina en los mamíferos (mTOR) es una proteína quinasa Ser/Thr que funciona como un sensor de ATP y aminoácidos para equilibrar la disponibilidad de nutrientes y el crecimiento celular. La actividad de mTOR está regulada por insulina, aminoácidos, ejercicio, estrés oxidativo y factores de crecimiento que a lo largo de su fosforilación promueven vías de síntesis de proteínas. Sin embargo, la mTOR desregulada provoca un envejecimiento acelerado entre muchas otras patologías. En el músculo, cuando mTOR se activa (fosforila) provoca una hipertrofia del músculo esquelético. Este hecho ha sido ampliamente informado, tanto en roedores como en humanos, en la bibliografía. Los aminoácidos como la leucina mejoran la fosforilación de mTOR, y su activación regula al alza la traducción de proteínas a través de la fosforilación de la proteína 1 de unión al factor de iniciación eucariota 4E (4E-BP1) y la proteína ribosomal S6 quinasa (S6K), lo que lleva al crecimiento y proliferación celular.

[0509] El ELISA de tipo sándwich Fosfo-mTOR detecta los niveles endógenos de mTOR fosforilado en Ser2448.Metodología

[0510] Día 1: Sembrar células HSkMC en 500 μl/pocillo de medio de crecimiento de HSkMC y dejar que se adhieran a los pocillos durante 16-24 h.

[0511] Dia 2: Retirar el medio de cultivo y añadir 500 μl/pocillo de medio de diferenciación de HSkMC para que se diferencien durante 5 a 7 días.

[0512] Día 7: Tratar las células durante 2 horas. Recoger los lisados celulares en tampón de lisis.

[0513] Día 8: Realizar un BCA (determinación de proteínas) y ejecutar el ensayo. En una primera etapa de incubación, se utiliza un anticuerpo hacia mTOR que recubre los micropocillos de ELISA para capturar mTOR (fosfo y no fosfo) de los lisados celulares. Luego, después de un lavado extenso, se agrega un anticuerpo de detección de fosfo-mTOR específico para detectar solo la proteína fosfo-mTOR capturada antes. Finalmente, se utiliza un anticuerpo ligado a HRP para reconocer el anticuerpo de detección y mediante la adición de TMB (sustrato de HRP) se desarrolla un color proporcional a la cantidad de mTOR fosforilada en Ser2448.

[0514] Resultados

[0515] Los resultados se ilustran en la Figura 9. Las muestras estimuladas con 0,5 µg/ml y 5 µg/ml mostraron un aumento de mTOR.

[0516] Conclusión

[0517] Estos resultados demuestran la eficacia del péptido para facilitar la síntesis de proteínas musculares y el crecimiento muscular.

[0518] Ejemplo 7 a 15: Formulaciones

[0519] En una realización, la composición se formula como una composición tópica. En una realización, puede ser una emulsión o crema o un ungüento, como un ungüento muscular.

[0520] En una realización, la crema comprende un excipiente o diluyente, un agente de suspensión, un conservante y una cantidad de al menos un péptido de la invención.

[0521] En una realización, la crema comprende un alcohol, un carbómero, un sorbato, agua y al menos un péptido de la invención.

[0522] Preferiblemente, el alcohol es butilenglicol (1,3-butanodiol). El alcohol puede estar presente en una cantidad de entre el 1 y el 10 % de la composición, preferentemente entre el 2 y el 6 %, preferentemente el 4 %. El sorbato puede ser polisorbato-20. El sorbato puede estar presente en una cantidad del 0,01 al 1 % de la composición, preferentemente entre el 0,05 y el 0,5 %, preferentemente el 0,10 %. El agua está presente en una cantidad de entre el 10 % y el 90 %, preferiblemente del 30 % al 75 %. El carbómero puede estar presente en una cantidad del 0,05 % al 1 %, preferiblemente del 0,1 % al 0,5 %, preferiblemente del 0,15 %. El carbómero puede ser Ultrez 10.

[0523] El péptido de la invención puede estar presente en una cantidad del 0,5 % al 10 %, preferiblemente del 1 % al 5 %, preferiblemente del 3 %.

[0524] La composición puede comprender además uno o más alcoholes de azúcar como glicerina, parabenos, silicio, como ciclohexasiloxano, un alcohol graso o ácido fosfórico o una mezcla de alcohol graso y ácido fosfórico, como alcohol cetearílico, fosfato de dicetilo y fosfato de Cereth 10 o combinaciones de los mismos, un polioxietilen estearil éter, tal como Steareth 2 y 10, y una fragancia.

[0525] Un ungüento o emulsión ejemplar es el siguiente en el Ejemplo 7.

[0528]

[0529] La emulsión resultante es adecuada como ungüento. Además, el ungüento es adecuado para pieles frágiles envejecidas. La emulsión es adecuada para mejorar las líneas finas, las arrugas, la sequedad, reducir el enrojecimiento y la irritación.

[0530] Los porcentajes son solo ejemplos y se apreciará que se puede usar cualquier porcentaje adecuado dependiendo del uso.

[0531] La emulsión se prepara de la siguiente manera: Fase A: dispersar Ultrez 10 (carbómero) en agua y dejar hinchar durante 20 minutos, luego añadir la fase B; calentar a 75 °C. Calentar la Fase C por separado a 75 °C. Mezclar las dos fases con agitación, homogeneizar, añadir la Fase D, neutralizar con la Fase E, enfriar hasta alcanzar 30 °C, luego añadir la Fase F y la Fase G; ajustar el pH a ~6 con NaOH. Se entenderá que este es solo un ejemplo y que se puede usar cualquier método adecuado conocido en la técnica.

[0532] En una realización adicional, la composición puede comprender uno o más de agua, un carbómero, un sorbato como sorbato de potasio, un alcohol de azúcar, como glicerina, un alcohol como 2-(2-etoxietoxi)etanol, un polioxietilenesteariléter, como Steareth 2, un alcohol graso o ácido fosfórico o una mezcla de alcohol graso y ácido fosfórico, como alcohol cetearílico, fosfato de dicetilo y fosfato de Cereth 10 o combinaciones de los mismos, un siloxano, como ciclometicona, triglicéridos caprílicos/cápricos, estearato de sorbitán, parabenos, hidróxido de sodio, un agente activo como agente para aclarar la piel, como una mezcla de glicerina (y) butilenglicol (y) extracto de hoja de Arctostaphylos Uva Ursi (y) extracto de Mitracarpus Scaber (ETIOLINE<®>), o un agente para la salud muscular y un péptido de la invención.

[0533] La siguiente composición del Ejemplo 8 es un ejemplo de emulsión o crema o ungüento.

[0536]

[0538] El agente activo puede ser ETIOLINE<®>[glicerina (y) etilenglicol (y) extracto de hoja de Arctostaphylos Uva Ursi y extracto de Mitracarpus Scaber]. ETIOLINE<®>es un principio para aclarar la piel vendido por SEDERMA (documento WO 98/05299 del 19 de nov. de 1996).

[0539] Se entenderá que ETIOLINE se puede reemplazar por cualquier agente activo, como un agente que ayuda a la salud, el desarrollo o la recuperación muscular.

[0540] Esta formulación se puede preparar de acuerdo con los procedimientos descritos generalmente en el Ejemplo 7. La composición puede ser una emulsión o crema o ungüento que comprende uno o más de agua, un carbómero, como Ultrez 10, un alcohol de azúcar, como glicerina, un alcohol como fenova (fenoxietanol y parabenos mixtos), un éster de ácido graso como palmitato de etilhexilo, un alcohol graso como alcohol cetearílico, un éster de ácido láctico como lactato de miristilo, un sorbato como polisorbato 20 y/o sorbato de potasio, un emulsionante polimérico como acrilato (acrilato de alquilo C10-30) y un polímero cruzado, un siloxano, como ciclometicona, hidróxido de sodio, al menos un agente activo, como un agente de salud muscular o un agente para el tratamiento de estrías, como extracto de Siegesbeckia Orientalis (Darutosida) y un péptido.

[0541] La siguiente composición del Ejemplo 9 es un ejemplo de emulsión o crema. En una realización, la emulsión o crema es una crema antiestrías.

[0542]

[0544] El agente activo puede ser Darutosida (extracto de Siegesbeckia Orientalis). Darutosida es una molécula comercializada por SEDERMA para el tratamiento de las estrías. Se entenderá que la Darutosida se puede reemplazar por cualquier agente activo, tal como cualquier agente que ayude a la salud, el desarrollo o la recuperación de los músculos.

[0545] Esta emulsión o ungüento se prepara de la siguiente manera: Fase A dispersar Ultrez 10 (carbómero) en agua y dejar que se hinche durante 20 minutos, luego añadir la fase B; calentar a 75 °C. Calentar la Fase C por separado a 75 °C. Mezclar las dos fases con agitación, homogeneizar, añadir la Fase D, neutralizar con la Fase E, enfriar hasta alcanzar 30 °C, añadir la Fase F y la Fase G, ajustar el pH a ~6 con NaOH.

[0546] En una realización de la invención, la composición puede ser una emulsión, crema o gel, preferiblemente un gel, que comprende uno o más de agua, un carbómero, como Ultrez 10, un alcohol de azúcar, como glicerina, un alcohol como fenova (fenoxietanol y parabenos mixtos), un sorbato como el polisorbato 20 y/o el sorbato de potasio, un emulsionante polimérico como el acrilato (acrilato de alquilo C10-30), un siloxano, como la ciclometicona, hidróxido de sodio, un péptido y al menos un agente tal como un agente para la salud, recuperación o desarrollo muscular, o un agente humectante adecuado, tal como un agente que comprende extracto de Imperata Cylindrica (raíz), agua, glicerina, PEG-8 y carbómero (MOIST 24). En una realización, el gel es un gel humectante.

[0547] La siguiente composición del Ejemplo 10 es un ejemplo de gel. En una realización, el gel es un gel humectante.

[0550]

[0551]

[0553] Esta formulación se puede hacer de acuerdo con los procedimientos descritos en general en el Ejemplo 11. El agente activo puede ser MOIST-24® [extracto de Imperata Cylindrica (raíz) (y) agua (y) glicerina (y) PEG-8 (y) Carbómero]. Se entenderá que se puede usar cualquier agente para reemplazar MOIST-24. Por ejemplo, cualquier agente que ayude a la salud, el desarrollo o la recuperación de los músculos.

[0554] En una realización de la invención, la composición puede ser una emulsión, crema o ungüento que comprende uno o más de agua, un carbómero, como Ultrez 10, un sorbato como polisorbato 20, polisorbato 60 y/o sorbato de potasio, un alcohol como fenova (fenoxietanol y parabenos mixtos), butilenglicol (1,3-butanodiol), alcohol de lanolina y/o alcohol cetearílico, estearato de sorbitán, polidimetilsiloxano como dimeticona, un isononanoato de isotridetilo, un triglicérido caprílico/cáprico, un éster cetílico, hidróxido de sodio, agua, un agente para la salud, recuperación y/o desarrollo muscular, o un agente antienvejecimiento, como un agente que comprende butilenglicol, agua, laureth-3, hidroxietilcelulosa y acetil-dipéptido-1-cetiléster (CALMOSENSINE<®>).

[0555] La siguiente composición del Ejemplo 11 es un ejemplo de una crema o un ungüento.

[0558]

[0560] Esta formulación se puede preparar de acuerdo con los procedimientos descritos en general en el Ejemplo 9. El agente activo puede ser CALMOSENSINE® [Butilenglicol (y) agua (y) Laureth-3 (e) hidroxietilcelulosa (y) acetil-dipéptido-1-cetiléster]. Calmosensine® es un péptido analgésico ofrecido por SEDERMA (documento WO 98/07744 del 26 de febrero de 1998). Se entenderá que puede utilizarse cualquier agente en sustitución de CALMOSENSINE. Por ejemplo, cualquier agente que ayude a la salud, el desarrollo o la recuperación de los músculos.

[0561] En una realización de la invención, la composición puede ser una emulsión, crema o ungüento que comprende uno o más de agua, un carbómero, como Ultrez 10, un alcohol de azúcar, como glicerina, un sorbato como sorbato de potasio, un estearato como Steareth 10, un alcohol graso o ácido fosfórico o una mezcla de alcohol graso y ácido fosfórico, como alcohol cetearílico, fosfato de dicetilo y fosfato de Cereth 10 o combinaciones de los mismos, succinato de diethexilo, parabenos mixtos, estearato de sorbitán, hidróxido de sodio, agua, un péptido, y un agente activo, como un agente para la salud, recuperación y/o desarrollo muscular o un agente para la piel madura, como uno que comprende Trifolium Pratense (trébol) extracto de flor (y) glicerina (y) butilenglicol (y) lecitina (TEROCARE<®>).

[0562] La siguiente composición del Ejemplo 12 es un ejemplo de una crema o ungüento.

[0565]

[0567] Esta formulación se puede hacer de acuerdo con los procedimientos descritos generalmente en el Ejemplo 9. El agente activo puede ser STEROCARE™ [Extracto de flor de Trifolium Pratense (trébol) (y) glicerina (y) butilenglicol (y) lecitina. Sterocare® lo ofrece SEDERMA como principio activo para pieles maduras (documento FR 2769502 del 14 de abril de 2000, documento WO 99/18927 del 22 de abril de 1999). Se entenderá que puede utilizarse cualquier agente en sustitución de STEROCARE<®>. Por ejemplo, cualquier agente que ayude a la salud, el desarrollo o la recuperación de los músculos.

[0568] La siguiente composición del Ejemplo 13 es un ejemplo de un ungüento o un tónico.

[0571]

[0572]

[0574] La siguiente composición del Ejemplo 14 es un ejemplo de una crema o un ungüento.

[0577]

[0579] El agente puede ser deferoxamina y/o berberina. Estos se utilizan como espesantes de la piel. La deferoxamina y la berberina se pueden reemplazar con otro agente activo, como un agente para la salud, la recuperación y el desarrollo muscular.

[0580] La siguiente composición del Ejemplo 15 es un ejemplo de gel o ungüento.

[0583]

[0584]

[0586] Este gel se puede preparar de la siguiente manera: Homogenizar la Parte B y verterla en la Parte A. Calentar la Parte (A+B) a 75 °C. Calentar la Parte C y la Parte D a 75 °C. Vierta la Parte C en la Parte (A+B) con agitación helicoidal; luego, verter la Parte D en la Parte (A+B+C). Añadir la Parte F y la Parte E. Verter la Parte G a unos 35 °C.

[0587] El agente activo puede ser Rutina y/o inhibidor de Bowman Birk. Estos agentes se utilizan para la regeneración de tejidos. La Rutina y el inhibidor de Bowman Birk se pueden reemplazar por otro agente activo, como un agente para la salud, la recuperación y el desarrollo muscular.

[0588] Ejemplo 16

[0589] ELISA de puromicina

[0590] Descripción del estudio

[0591] La puromicina es un antibiótico aminonucleósido producido por la bacteriaStreptomyces alboniger.Es un análogo estructural del ARN de transferencia de aminoacilos y, como tal, puede incorporarse en cadenas peptídicas alargadas mediante la formación de un enlace peptídico. Sin embargo, mientras que los aminoaciltRNA contienen un enlace éster hidrolizable, la puromicina no lo tiene en la posición equivalente. Por lo tanto, la unión de la puromicina a una cadena peptídica en crecimiento evita que se forme un nuevo enlace peptídico con el siguiente aminoacil-tRNA. Como consecuencia, la unión de puromicina da como resultado la terminación de la elongación del péptido y conduce a la liberación del péptido truncado unido a puromicina del ribosoma. En concentraciones muy altas, la puromicina detiene de manera eficaz la fase de elongación de la traducción y, por lo tanto, inhibe la síntesis de proteínas; sin embargo, a concentraciones muy bajas, que no inhiben la tasa general de traducción, la tasa a la que se forman los péptidos marcados con puromicina refleja la tasa general de síntesis de proteínas. Esta última propiedad convierte a la puromicina en una herramienta potencial para medir los cambios en las tasas de síntesis de proteínas.

[0592] Metodología

[0593] 1. Dispensar 100 µl de tampón de recubrimiento por pocillo en el número necesario de pocillos en una placa de ELISA de 96 pocillos. Diluir y mezclar el extracto de proteína (en el mismo tampón en el que se encuentra la muestra) a 5 μg/µl. Dispensar inmediatamente 1 µl/pocillo en la placa.

[0594] 2. Incubar la placa a 4 °C durante 16-24 horas.

[0595] 3. Agitar vigorosamente el contenido. Lavar 1x con 200 μl de PBS.

[0596] 4. Añadir 200 µl de disolución de bloqueo (BSA al 5 % en PBS). Incubar durante el día 4-6 h a temperatura ambiente.

[0597] 5. Diluir el anticuerpo hacia Puromicina en disolución de bloqueo e incubar durante la noche a 4 °C.

[0598] 8. Lavar 2× con 200 μl de PBS

[0599] 9. Añadir 100 µl del anticuerpo secundario diluido 1:1000 en disol. de bloqueo. Incubar 1 hora a temperatura ambiente.

[0600] 10. Lavar 4 × con 200 µl de PBS. Agitar vigorosamente el contenido.

[0601] 11. Añadir 100 µl de sustrato TMB e incubar durante 15-20 min.

[0602] 12. Añadir la disolución de parada y leer la placa a 450 nm.

[0603] Resultados

[0604] La Figura 10 ilustra un aumento en la síntesis de proteínas.

[0605] Ejemplo 17

[0606] Toxicidad

[0607] Metodología

[0608] Se sembraron 100 µl de células HSkMC en una placa de 96 pocillos, recubierta previamente con colágeno, a una concentración de 1x10<4>células/pocillo. Se permitió que las células se adhirieran durante la noche a 37 °C y un 5 % de CO<2>y al día siguiente el medio de crecimiento se reemplazó con 100 µl de medio de diferenciación celular y se devolvió a la incubadora a 37 °C y un 5 % de CO<2>. El medio de diferenciación celular se cambió cada 2 días durante un período de 6 días, hasta que las células HSkMC se diferenciaron completamente hasta miotubos. El día 7, el medio de diferenciación celular se reemplazó con 100 µl de medio basal y se mantuvo sin nutrientes durante la noche a 37 °C con un 5 % de CO<2>.

[0609] En el día del ensayo de MTT, se eliminó el medio de privación de nutrientes y se reemplazó con 100 µl de medio basal que contenía el péptido de SECUENCIA ID NO. 1. Las células se incubaron en este tratamiento durante un período de 20 minutos a 37 °C, 5 % de CO<2>, momento en el que se retiró el medio de tratamiento y se reemplazó con 110 µl de disolución de MTT, y se incubaron durante 2 horas a 37 °C, 5 % de CO<2>. Después de esta etapa de incubación, la disolución de MTT se eliminó y se reemplazó con 110 µl de DMSO. La placa se cubrió con papel de aluminio y se colocó en un agitador a TA durante 5 min. La placa se leyó usando un espectrofotómetro (SpectraMax M3, Molecular Devices, Sunnyvale, CA 94089, EE. UU.) ajustado a 570 nm y la citotoxicidad del péptido de SECUENCIA ID NO. 1 se evaluó en función de la densidad óptica de las muestras. Los resultados se ilustran en la Figura 11.

[0610] Ejemplo 18

[0611] Este conjunto de experimentos se llevó a cabo para comprender el mecanismo de acción de un péptido de SECUENCIA ID NO.1.

[0612] Fosfo-acetil CoA

[0613] Metodología

[0614] El kit ELISA de tipo sándwich de fosfo-acetil-CoA carboxilasa (Ser79) es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de tipo sándwich en fase sólida que detecta los niveles endógenos de acetil-CoA carboxilasa (ACC) cuando se fosforila en Ser79. Se recubrieron los micropocillos con un anticuerpo de conejo fosfo-ACC (Ser79). Después de la incubación con los lisados celulares, el anticuerpo recubierto capturó la proteína fosfo-ACC. Después de un lavado extenso, se añadió un mAb de detección de ratón de ACC para detectar la proteína ACC capturada. A continuación, se usó el anticuerpo ligado a HRP anti-IgG de ratón para reconocer el anticuerpo de detección unido. Se añadió sustrato de HRP, TMB, para desarrollar el color. La magnitud de la absorbancia del color revelado fue proporcional a la cantidad de ACC fosforilada en Ser79. Estos resultados se ilustran en la Figura 12.

[0615] La acetil-CoA carboxilasa (ACC) cataliza la carboxilación de acetil-CoA hasta malonil-CoA. Es la enzima clave en la biosíntesis y oxidación de los ácidos grasos. En roedores, la forma ACC1 (ACCα) de 265 kDa se expresa principalmente en los tejidos lipogénicos, mientras que ACC2 (ACCβ) de 280 kDa es la principal isoforma en los tejidos oxidativos. Sin embargo, en humanos, ACC2 es la isoforma predominante tanto en los tejidos lipogénicos como en los oxidativos. La fosforilación mediante AMPK en Ser79 o mediante PKA en Ser1200 inhibe la actividad enzimática de ACC. ACC es un objetivo potencial de los medicamentos contra la obesidad. Fosfo-Akt1

[0616] Metodología

[0617] El kit de ELISA de tipo sándwich Fosfo-Akt1 (Ser473) es un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) de tipo sándwich en fase sólida que detecta los niveles endógenos de la proteína fosfo-Akt1 (Ser473). Se recubrieron los micropocillos con mAb de conejo hacia Fosfo-Akt (Ser473). Después de la incubación con lisados celulares, el anticuerpo recubierto capturó la proteína fosfo-Akt (Ser473). Después de un lavado extenso, se añadió anticuerpo de ratón hacia Akt1 para detectar la proteína fosfo-Akt1 (Ser473) capturada. A continuación, se usó un anticuerpo unido a HRP, IgG anti-ratón, para reconocer el anticuerpo de detección unido. Se añadió el sustrato de HRP, TMB, para desarrollar el color. La magnitud de la absorbancia de este color desarrollado es proporcional a la cantidad de proteína fosfo-Akta (Ser473).

[0618] Los resultados se ilustran en la Figura 13.

[0619] Akt, también conocida como PKB o Rac, desempeña un papel fundamental en el control de la supervivencia y la apoptosis. Esta proteína quinasa es activada por la insulina y varios factores de crecimiento y de supervivencia para funcionar en una ruta sensible a la wortmanina que involucra a la quinasa PI3. Akt se activa mediante la unión de fosfolípidos y la fosforilación del bucle de activación en Thr308 mediante PDK1 y mediante la fosforilación dentro del extremo carboxilo en Ser473. La PDK2, previamente difícil de descubrir, responsable de la fosforilación de Akt en Ser473 ha sido identificada como el objetivo de la rapamicina en mamíferos (mTOR) en un complejo insensible a la rapamicina con rictor y Sin1. Akt promueve la supervivencia celular al inhibir la apoptosis a través de la fosforilación e inactivación de varios objetivos, incluidos Bad, factores de transcripción Forkhead, c-Raf y caspasa-9. La PTEN fosfatasa es un importante regulador negativo de la ruta de señalización de PI3 quinasa/Akt. LY294002 es un inhibidor específico de la PI3 quinasa. Otra función esencial de Akt es la regulación de la síntesis de glucógeno a través de la fosforilación e inactivación de GSK-3α y β. Akt también puede desempeñar un papel en la estimulación por insulina del transporte de glucosa. Además de su papel en la supervivencia y la síntesis de glucógeno, Akt participa en la regulación del ciclo celular al prevenir la fosforilación y la degradación de la ciclina D1 mediada por GSK-3β y al regular negativamente los inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina p27 Kipl y p21 Wafl/Cip1. Akt también desempeña un papel fundamental en el crecimiento celular al fosforilar directamente mTOR en un complejo sensible a la rapamicina que contiene Raptor. Más importante aún, Akt fosforila e inactiva la tuberina (TSC2), un inhibidor de mTOR dentro del complejo mTOR-Raptor.

[0620] Fosfo-AMPK alfa

[0621] Metodología

[0622] El kit de ELISA de tipo sándwich Fosfo-AMPKα (Thr172) es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de tipo sándwich en fase sólida que detecta los niveles endógenos de AMPKα cuando se fosforila en Thr172. Los micropocillos se han revestido con un anticuerpo de conejo hacia AMPKα. Después de la incubación con los lisados celulares, el anticuerpo recubierto capturó AMPKα (fosforilada y sin fosforilar). Después de un lavado extenso, se añadió un anticuerpo de detección de ratón hacia fosfo-AMPKα (Thr172) para detectar la fosforilación de Thr172 en la proteína AMPKα capturada. A continuación, se usó el anticuerpo ligado a HRP anti-IgG de ratón para reconocer el anticuerpo de detección unido. Se añadió el sustrato de HRP, TMB, para desarrollar el color. La magnitud de la absorbancia para este color desarrollado fue proporcional a la cantidad de AMPKα fosforilada en Thr172. Los resultados se ilustran en la Figura 14.

[0623] La proteína quinasa activada mediante AMP (AMPK) está altamente conservada desde la levadura hasta las plantas y los animales y desempeña un papel clave en la regulación de la homeostasis energética. AMPK es un complejo heterotrimérico compuesto por una subunidad α catalítica y subunidades β y γ reguladoras, cada una de las cuales está codificada por dos o tres genes distintos (α1, 2; β1, 2; γ1, 2, 3). La quinasa se activa por una proporción elevada de AMP/ATP debido al estrés celular y ambiental, como el choque térmico, la hipoxia y la isquemia. El supresor de tumores LKB1, en asociación con las proteínas accesorias STRAD y MO25, fosforila AMPKα en Thr172 en el bucle de activación, y esta fosforilación es necesaria para la activación de AMPK. AMPKα también se fosforila en Thr258 y Ser485 (para α1; Ser491 para α2). La quinasa anterior y la importancia biológica de estos eventos de fosforilación aún no se han dilucidado. La subunidad β1 se modifica después de la traducción mediante miristoilación y fosforilación en múltiples sitios, incluidos Ser24/25, Ser96, Ser101, Ser108 y Ser182. La fosforilación en Ser108 de la subunidad β1 parece ser necesaria para la activación de la enzima AMPK, mientras que la fosforilación en Ser24/25 y Ser182 afecta a la localización de AMPK. Se han identificado varias mutaciones en las subunidades AMPKγ, la mayoría de las cuales están ubicadas en los sitios de unión putativos de AMP/ATP (dominios CBS o de Bateman). Las mutaciones en estos sitios conducen a la reducción de la actividad de AMPK y provocan la acumulación de glucógeno en el corazón o el músculo esquelético. La evidencia acumulada indica que AMPK no solo regula el metabolismo de los ácidos grasos y el glucógeno, sino que también modula la síntesis de proteínas y el crecimiento celular a través de las rutas EF2 y TSC2/mTOR, así como el flujo sanguíneo a través de eNOS/nNOS.

[0624] Conclusión

[0625] El péptido con una secuencia de SECUENCIA ID NO.1 está actuando a través de la vía AMPK. En el músculo esquelético, la activación (fosforilación) de AMPK conduce a fosforilar ACC, lo que promueve la oxidación de ácidos grasos. Esta es una vía muy diferente a la de la insulina, como se muestra en el perfil de expresión génica en las células del músculo esquelético que se describe a continuación.

[0626] Ejemplo 19

[0627] Estudio de expresión génica

[0628] Metodología

[0629] Se investigó la expresión génica superior e inferior al control negativo de los 50 genes principales para la insulina y el péptido de SECUENCIA ID NO.1.

[0630] Se sembró un volumen de 2 ml de células HSkMC en una placa de 6 cm, pre-recubierta con colágeno, a una concentración de 2x10<5>células. Se permitió que las células se adhirieran durante la noche a 37 °C, 5 % de CO<2>y, al día siguiente, el medio de crecimiento se reemplazó con 2 ml de medio de diferenciación celular y se devolvió a la incubadora a 37 °C, 5 % de CO<2>. El medio de diferenciación celular se cambió cada 2 días durante un período de 6 días, hasta que las células HSkMC se diferenciaron completamente hasta miotubos. El día 7, el medio de diferenciación celular se reemplazó con 2 ml de medio basal y se privó de nutrientes durante la noche a 37 °C con un 5 % de CO<2>.

[0632] El día del experimento, se eliminó el medio de privación de nutrientes y se reemplazó con 2 ml de medio basal que contenía 0,5 μg/ml de SEQ ID NO.: 1. Las células sin tratar se analizaron en paralelo. Las células se incubaron en este tratamiento durante un período de 20 min a 37 °C, 5 % de CO<2>, momento en el que se eliminó el medio de tratamiento y las células se rasparon en 1 ml de PBS. La suspensión celular se sedimentó en una microcentrífuga a 1500 rpm durante 5 min y se eliminó el sobrenadante. Las células se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido y se transfirieron a un congelador a -80 °C para su almacenamiento hasta su envío a las CRO.

[0634] Para determinar la expresión génica, Elda Biotech realizó el experimento Agilent Single Color utilizando un sistema de escáner de micromatrices Agilent G2565CA. El ARN se extrajo de las células y luego se hibridó con micromatrices de expresión génica humana de Agilent. Se utilizaron los siguientes kits: Qiagen Rneasy, Agilent RNA 6000 Nano, marcaje con LowInput QuickAmp, RNA Spike In (un color), Hi RPM GE Hybridisation Kit Large, Gene Expression Wash Pack. El experimento utilizó una micromatriz SurePrint G3 Human Gene Expression v3 8x60K. Cada muestra tuvo tres repeticiones. Las muestras pasaron controles de calidad y cantidad de ARN. El análisis de datos posterior se realizó utilizando el paquete Bioconductor Limma.

[0636] Los datos de intensidad en bruto se corrigieron en segundo plano con el método normexp y se normalizaron con un desplazamiento de 50 y un cuantil, lo que dio como resultado medidas de la expresión en log 2. Usando ComBat, se aplicó la corrección por el efecto del lote para ajustar la separación por número de réplicas revelada por el análisis de los componentes principales. Luego, se aplicó el análisis bayesiano empírico. La expresión diferencial se calculó basándose en la comparación con muestras sin tratar y se evaluó usando una estadística t moderada. Para corregir las pruebas múltiples, el valor p resultante se ajustó utilizando el método de Benjamini y Hochberg. No se detectó expresión diferencial bajo un umbral de valor p ajustado de 0,05. En su lugar, se utilizó un umbral de valor p bruto de 0,001. Los genes que tienen un valor de cambio proporcional absoluto superior a 1,3 se muestran en las siguientes listas.

[0638] Lista de genes significativamente estimulados e inhibidos y sus cambios proporcionales (expresión génica en micromatrices)

[0639] Genes estimulados para el tratamiento con insulina:

[0641]

[0643] Genes inhibidos para el tratamiento con insulina:

[0644]

[0645]

[0646] Genes estimulados para el tratamiento con SECUENCIA ID NO.1

[0647]

[0648] Genes inhibidos para el tratamiento con SECUENCIA ID NO.1

[0650]

[0651] Ejemplo 20

[0652] Proteómica

[0653] Metodología

[0654] Los niveles de proteína se obtuvieron utilizando LC/MS/MS. El análisis estadístico de los recuentos de proteínas arrojó proteínas insuficientes y sobreabundantes. Solo se retuvieron los valores de cambio proporcional del nivel absoluto de proteína por encima de 0,379. Para todas estas proteínas, se presentan los cambios proporcionales de transcripción asociados del análisis de micromatrices.

[0655] La espectrometría de masas fue realizada por MSBioworks. Los sedimentos celulares se lisaron en 100 µl de tampón RIPA modificado mediante sonicación. La cuantificación se realizó mediante fluorimetría Qubit. Se separaron 20 µg de cada muestra en un gel con gradiente de Bis-Tris al 4-12 % utilizando el tampón MOPS. El gel se tiñó con Coomassie y cada carril se cortó en 20 segmentos de igual tamaño.

[0656] los fragmentos de gel se procesaron utilizando un robot (ProGest, DigiLab) con el siguiente protocolo:

[0657] • Se lavó con bicarbonato de amonio 25 mM seguido de acetonitrilo.

[0658] • Se redujo con ditiotreitol 10 mM a 60 °C seguido de alquilación con yodoacetamida 50 mM a temperatura ambiente.

[0659] • Se digirió con tripsina (Promega) a 37 °C durante 4 h.

[0660] • Se inactivó con ácido fórmico y el sobrenadante se analizó directamente sin más procesamiento.

[0661] Los productos de digestión se analizaron mediante nano LC/MS/MS con un sistema de HPLC Waters NanoAcquity conectado a un ThermoFisher Q Exactive. Los péptidos se cargaron en una columna de captura y se eluyeron en una columna analítica de 75 µm a 350 nl/min; ambas columnas estaban rellenas de resina Luna C18 (Phenomenex). Se empleó un gradiente de 30 min (10 h en total por muestra). El espectrómetro de masas se hizo funcionar en modo dependiente de datos, con MS y MS/MS realizados en el Orbitrap a una resolución de 70 000 FWHM y 17 500 FWHM, respectivamente. Se seleccionaron los quince iones más abundantes para MS/MS. Los datos se buscaron utilizando una copia local de Mascot con los siguientes parámetros:

[0662] Enzima: Tripsina; Base de datos: Swissprot Human (adjuntos adelante y atrás los contaminantes comunes); Modificación fija: Carbamidometilo (C); Modificaciones variables: Oxidación (M), Acetilo (Proteína N-term), Pyro-Glu (N-term Q), Desamidación (NQ); Valores de masas: Monoisotópicos

[0663] Tolerancia de masas de péptidos: 10 ppm; Tolerancia de masas de fragmentos: 0,02 Da; Máximo de escisiones perdidas: 2

[0664] Los archivos Mascot DAT se analizaron en el software Scaffold para validarlos, filtrarlos y crear una lista no redundante por muestra. Los datos se filtraron con una tasa de descubrimiento falso (FDR) del nivel de proteína y péptido del 1 % y requirieron al menos dos péptidos únicos por proteína. A continuación, se estimaron las listas de proteínas estimuladas e inhibidas.

[0665] Espectrometría de masas

[0666] Los productos de digestión se analizaron mediante nano LC/MS/MS con un sistema de HPLC Waters NanoAcquity conectado a un ThermoFisher Q Exactive. Los péptidos se cargaron en una columna de captura y se eluyeron en una columna analítica de 75 µm a 350 nl/min; ambas columnas estaban rellenas de resina Luna C18 (Phenomenex). Se empleó un gradiente de 30 min (10 h en total por muestra). El espectrómetro de masas se hizo funcionar en modo dependiente de datos, con MS y MS/MS realizados en el Orbitrap a una resolución de 70 000 FWHM y 17 500 FWHM, respectivamente. Se seleccionaron los quince iones más abundantes para MS/MS.

[0667] Ejemplo 21

[0668] QPCR en genes específicos de interés y su cambio proporcional.

[0669] Procedimiento experimental

[0670] La PCR cuantitativa se realizó utilizando un método basado en una sonda TaqMan, donde la expresión del ARNm objetivo se cuantificó respecto de la expresión del gen constitutivo B2M. Se añadió una mezcla maestra que contenía cebador/sonda y Taqman<®>Gene Expression Master Mix (ABI Biosystems, CA, EE. UU.) a 1 µl de molde de ADNc. Se pipeteó un volumen final de 10 µl en un pocillo de una placa Lightcycler de 96 pocillos (Sarstedt, Nümbrecht, Alemania) por duplicado y se realizó una PCR en tiempo real en un termociclador en tiempo real Roche Lightcycler 96 (Roche Diagnostics, Basilea, Suiza). El ciclo umbral (Ct) para cada pocillo se calculó utilizando el software del instrumento. El análisis de datos se basó en el método ΔΔCt con datos sin procesar normalizados con el gen constitutivo B2M incluido en la placa. Los resultados se expresan como el cambio proporcional respecto del control.

[0671] Resultados de QPCR (los métodos de tratamiento siguen siendo los mismos; la concentración de SECUENCIA ID NO.1 sigue siendo de 0,5 μg/ml)

[0672] Glut 4, LEPR, Adiponectina, Leptina están relacionados con el metabolismo de la glucosa. Otros se relacionan con la síntesis y degradación muscular.

[0675]

[0676]

[0679] Ejemplo 22

[0681] Investigación del efecto de un péptido sintético (SECUENCIA ID NO.1) sobre el control de la glucosa en sangre en un modelo de ratón con obesidad y diabetes

[0683] Procedimiento experimental

[0685] Descripción de los animales:

[0686] • Especie - KK.Cg-Ay/J (ratón KKAY)

[0687] • Fuente - Jackson Laboratories

[0688] • Edad - 12 semanas de edad

[0689] • Sexo - Macho

[0690] • Aleatorización - Basada en la glucosa basal en ayunas

[0692] Alojamiento y alimentación:

[0693] • Aclimatación - No menos de cinco días

[0694] • Alojamiento - Los ratones se alojarán en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas

[0695] - No más de 4 ratones por jaula dependiendo del tamaño

[0696] - Sistema de bastidor de jaulas ventilado

[0697] • Dieta - Comida estándar para roedores y aguaad libitum

[0699] Diseño:

[0700] • Vía de administración: - Inyección subcutánea

[0701] • Volumen(es) de dosis - 10 ml/kg

[0702] • Niveles de dosis - Artículos de prueba: 100 µM/kg, Metformina: 250 mg/kg

[0703] • Número por grupo - 10

[0704] • Número total de animales - 30

[0706] Tabla 1: diseño del estudio

[0708]

[0709]

[0711] Prueba de tolerancia oral a la glucosa en ratones KKAY

[0712] Durante la OGTT, se extrajo sangre de los ratones para determinar la glucosa e insulina basales a -30 min (basal). Esto fue seguido inmediatamente por la administración de los artículos de prueba.30 min más tarde, es decir, a los 0 min, a todos los ratones se les administró una disolución de glucosa (2 g/kg) mediante administración por sonda oral. Después de la exposición a glucosa, se midieron los niveles de glucosa en sangre de acuerdo con el siguiente programa.

[0713] Tabla 2: Paradigma de tratamiento de OGTT

[0716]

[0718] Los resultados se ilustran en las Figuras 18 a 20. La Figura 18 ilustra la glucosa en sangre en ayunas después de 5 días de tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO. 1 en ratones KKAY. La Figura 19 ilustra la glucosa en sangre en ayunas después de 7 días de tratamiento con un péptido SECUENCIA ID NO. 1 en ratones KKAY. La Figura 20 ilustra el peso corporal de ratones KKAY después de 13 días de tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO.1.

[0719] Conclusión

[0720] El tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO.1 redujo significativamente la glucosa en sangre después de 7 días de tratamiento. El tratamiento con un péptido de SECUENCIA ID NO. 1 no provocó un aumento en el peso corporal como lo hacen muchos tratamientos antidiabéticos. SECUENCIA ID NO. 1 redujo el peso corporal en el grupo de tratamiento respecto del grupo sin tratar.

[0721] Ejemplo 23

[0722] Ensayo de antioxidación (ensayo de actividad de eliminación de radicales DPPH)

[0723] La prueba de DPPH se realizó utilizando el método descrito en Lin et al. (Lin SY, Wang J, Zhao P, Pang Y, Ye HQ, Yuan Y, Liu JB y Jones G, Optimized antioxidant peptides fractions preparation and secondary structure analysis by MIR. Int J Biol Macromol 59:151-157 (2013)).

[0724] Los radicales DPPH se disolvieron en etanol a una concentración final de 0,1 mM. Los péptidos y el ácido ascórbico (control positivo) se disolvieron en agua desionizada para obtener la concentración ensayada. En una placa de 96 pocillos, las muestras se prepararon de la siguiente manera: se mezclaron por pocillo 100 µL de disolución de DPPH 0,1 mM, 100 µL de disolución de péptido y 100 µL de etanol.

[0725] El ácido ascórbico se preparó de la siguiente manera: se mezclaron por pocillo 100 µL de disolución de DPPH 0,1 mM, 100 µL de disolución de ácido ascórbico y 100 µL de etanol.

[0726] El blanco se preparó de la siguiente manera: se mezclaron 100 µL de disolución de DPPH 0,1 mM, 200 µL de etanol por pocillo.

[0727] Se usaron tres pocillos para las condiciones probadas.

[0728] La placa se incubó en la oscuridad a 25 °C durante 30 min. Luego se midió la absorbancia a 517 nm utilizando un lector de placas.

[0729] La actividad eliminadora de radicales DPPH ( %) se calculó de la siguiente manera:

[0730] Actividad eliminadora de radicales DPPH ( %) = [1-(Absorbancia de la muestra / Absorbancia del blanco)]x100 Los datos se presentaron como la media del porcentaje de actividad eliminadora de radicales DPPH /-desviación estándar.

[0731] Ejemplo 24

[0732] Ensayo de respuesta inflamatoria

[0733] El TNF-alfa es secretado por los macrófagos en respuesta a la estimulación mediante endotoxinas como los lipopolisacáridos (LPS). Se cree que el TNF-alfa está implicado en la inflamación sistémica y que la desregulación de la producción de TNF-alfa está implicada en muchas enfermedades. El ensayo de Biolegend es un kit de ELISA de tipo sándwich diseñado para la cuantificación precisa de TNF-alfa humano a partir de sobrenadante de cultivo celular, suero o plasma.

[0734] Los monocitos THP-1 se sembraron en una placa de 96 pocillos a 10000 células por pocillo en RPMI que contenía un 10 % de suero de ternera fetal (FCS), 1 % de Pen/strep, 1 % de L-glutamina, 100 nM de PMA y se dejaron diferenciar durante 72 h antes de la experimentación. Después de la diferenciación, las células se incubaron con 100 ng/ml, 10 ng/ml o 1 ng/ml de péptido sintético durante 24 horas, respectivamente. Después del tratamiento, las células se estimularon con 10 ng/ml de LPS durante 5 horas y se determinó la cantidad de TNF-alfa en el sobrenadante usando el kit de ELISA de ensayo de Biolegend.

[0735] Los resultados se calcularon como un porcentaje del control sin tratar. Un aumento en la lectura de la densidad óptica indica una mayor cantidad de liberación de TNF-alfa en el sobrenadante del cultivo celular. Todos los experimentos se prepararon por duplicado en tres placas (6 pocillos/condiciones). La significación se calculó utilizando la prueba t de Student (*p<0,05 en comparación con el control, **p<0,01 en comparación con el control, ***p<0,001 en comparación con el control).

[0736] Equivalentes

[0737] La descripción anterior detalla las realizaciones actualmente preferidas de la presente invención. Se espera que a los expertos en la técnica se les ocurran numerosas modificaciones y variaciones en la práctica de las mismas al considerar estas descripciones. Esas modificaciones y variaciones pretenden estar comprendidas dentro de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

1. Una composición tópica que comprende un péptido antienvejecimiento que tiene hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1 o una variante antienvejecimiento de SECUENCIA ID NO. 1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO.1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido.

2. La composición tópica de la reivindicación 1, en una formulación tópica seleccionada del grupo que comprende cremas, emulsiones múltiples, composiciones anhidras, dispersiones acuosas, aceites, leches, bálsamos, espumas, lociones, geles, geles en crema, soluciones hidroalcohólicas, soluciones hidroglicólicas, cosméticos, productos de cuidado personal, hidrogeles, linimentos, sueros, jabones, polvo espolvoreable, pastel, formulaciones semisólidas, sueros, champú, acondicionador, pomadas, cualquier formulación de aclarado, talco, espumas, polvos, pulverizaciones, aerosoles, soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires, películas de polisacáridos, un sistema adhesivo, emulsiones de agua en aceite, emulsiones de aceite en agua y emulsiones de silicona.

3. La composición tópica de la reivindicación 1 o 2, en donde la composición tópica comprende además al menos un excipiente y/o activo cosméticamente aceptable.

4. Un dispositivo médico que comprende la composición tópica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. El dispositivo médico de la reivindicación 4, que es una tirita, un parche o un vendaje.

6. Un método no terapéutico para retrasar o inhibir el envejecimiento de la piel de un sujeto, que comprende una etapa de administración tópica de una composición que comprende un péptido antienvejecimiento que tiene hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO.1 o una variante antienvejecimiento de la SECUENCIA ID NO.1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO.1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido, en la piel del sujeto.

7. Un método no terapéutico para tratar o cuidar signos visibles de envejecimiento de la piel de un sujeto, que incluye una o más arrugas, marcas de estiramiento y círculos oscuros, sequedad, líneas finas, manchas de edades, manchas rojas, flacidez de la piel y afecciones causadas por exposición al sol, que incluyen quemaduras solares, estrés, contaminación y dieta, que comprende la aplicación tópica de una composición que comprende un péptido antienvejecimiento que tiene hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1o una variante antienvejecimiento de la SECUENCIA ID NO. 1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO. 1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido, en la piel del sujeto.

8. Una composición tópica que comprende un péptido antienvejecimiento que tiene hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1 o una variante antienvejecimiento de la SECUENCIA ID NO. 1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO.1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido, para su uso en el tratamiento de una herida en un mamífero en el que la composición se aplica por vía tópica a la herida en el mamífero.

9. Un método no terapéutico para promover la recuperación muscular después del ejercicio en un sujeto, comprendiendo el método la administración de una composición que comprende un péptido que tiene actividad promotora de la síntesis de proteínas del músculo esquelético y hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1 o una variante promotora de la síntesis de proteínas del músculo esquelético de la SECUENCIA ID NO.1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO.1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido, al sujeto.

10. Un método no terapéutico para mejorar el rendimiento muscular, comprendiendo el método la administración de una composición que comprende un péptido que tiene actividad promotora de la síntesis de proteínas del músculo esquelético y hasta 50 aminoácidos y que comprende la SECUENCIA ID NO. 1 o una variante promotora de la síntesis de proteínas del músculo esquelético de la SECUENCIA ID NO.1, que tiene de 1 a 3 alteraciones de aminoácidos en comparación con la SECUENCIA ID NO. 1, en la que la o cada alteración de aminoácido se selecciona de inserción, adición, deleción y sustitución de un aminoácido, al sujeto.