ES3057149T3 - Peptides and compositions for use in cosmetics, food and medicine - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a péptidos que proporcionan protección a los telómeros, actividades antioxidantes y antiinflamatorias y, por lo tanto, son útiles en cosmética para la prevención, reducción y/o tratamiento del envejecimiento inflamatorio y cutáneo, así como en medicina para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad, enfermedades inflamatorias y enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo; y en la industria alimentaria como nutracéuticos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Péptidos y composiciones para usarse en cosméticos, alimentación y medicina

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere al campo de biología molecular, más precisamente a biología molecular aplicada a cosméticos, nutracéuticos y medicina, incluso más precisamente a péptidos y composiciones que comprenden estos péptidos, capaces, entre otros, de proteger a telómeros y de protegerlos de la inflamación y oxidación, por lo tanto, los péptidos proporcionan la prevención y/o tratamiento del envejecimiento (preferentemente, el envejecimiento de la piel), incluida la inflamación.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] En las últimas décadas, la esperanza de vida de la población ha aumentado significativamente. Además, también hay una mayor preocupación en la población con respecto a la estética personal y al tratar de retrasar o minimizar la aparición de signos relacionados con el envejecimiento.

[0007] La piel es el órgano más grande en los seres humanos y debido a su ubicación, en la interfaz del cuerpo, está sujeta al envejecimiento intrínseco (cronológico) y al envejecimiento extrínseco (principalmente, fotoenvejecimiento). El envejecimiento intrínseco se acompaña de pérdida de células, adelgazamiento de la epidermis, aplanamiento de la DEJ (unión dérmico-epidérmica) y líneas finas de arrugas. Por otro lado, la piel fotoenvejecida está gruesamente arrugada y asociada con la despigmentación. Ahora se cree que la inflamación y la acumulación de ROS (especies reactivas del oxígeno) son los factores causantes de ambos tipos de envejecimiento de la piel.

[0008] Una de las principales funciones de la piel es proteger el cuerpo de factores externos y lo hace mediante el empleo de barreras físicas, biomoléculas y una intrincada red de células y estructuras cutáneas inmunes y no inmunitarias residentes. Concretamente, la capa más externa de la piel, llamada epidermis, proporciona una barrera que confiere la protección contra factores ambientales, patógenos, calor, ultravioleta y pérdida de humedad. Además, los queratinocitos son células epidérmicas productoras de queratina y representan aproximadamente el 90% de las células epidérmicas (Nguyen AV, Soulika AM (2019).The Dynamics of the Skin's Immune System. International journal of molecular sciences, 20(8), 1811; Lee HS, et al. (2019).Anti-inflammatory effects of ethanol extract from the leaves and shoots of Cedrela odorata L. in cytokine-stimulated keratinocytes. Experimental and therapeutic medicine, 18(1), 833-840).

[0009] El envejecimiento cutáneo es un proceso biológico complejo influenciado por la combinación de factores endógenos y exógenos (endógenos: genética, metabolismo celular, procesos hormonales y metabólicos; exógenos: exposición crónica a la luz, contaminación, radiación ionizante, productos químicos, toxinas) y, por lo tanto, como se señaló anteriormente, conducen a cambios en la piel y a la aparición de imperfecciones en la misma (por ejemplo, pérdida de firmeza, arrugas, aspereza y/o flacidez).

[0010] Estos factores inducen alteraciones estructurales y fisiológicas acumulativas en las diferentes capas de la piel, así como cambios en la apariencia general de la piel (Ganceviciene, R, et al. (2012).Skin Anti-Aging Strategies. Dermato-Endocrinology, 4, 308-319).

[0011] A medida que se produce el proceso de envejecimiento, la capacidad del cuerpo humano para resolver la inflamación se reduce significativamente, lo que resulta en un desequilibrio entre la proinflamación y la antiinflamación. "Inflamación" se refiere a una inflamación continua de bajo grado asociada con el envejecimiento. Esta respuesta inflamatoria crónica podría acumularse con el tiempo y provocar gradualmente daño tisular (Zhuang Y y Lyga J (2014)Inflammaging in skin and other tissue - the roles of complement system and macrophage. Inflamm Allergy Drug Targets.13, 153-61). La inflamación está impulsada por un aumento sistémico de múltiples citocinas proinflamatorias y está significativamente influenciada por varios factores extrínsecos, incluida la radiación UV (UVR), las partículas en el aire (PM) y el microbioma (Xia S, et al. (2016)An Update on Inflamm-Aging: Mechanisms, Prevention, and Treatment. J Immunol Res.2016, 8426874).

[0012] Además, o en paralelo, la irradiación UV, los xenobióticos y el estrés térmico alteran el metabolismo de las células de la piel y conducen a un aumento en la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y al desequilibrio redox que contribuye al estrés oxidativo que expone a las células de la piel a la formación y acumulación de proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y carbohidratos irreversiblemente dañados y, por lo tanto, al envejecimiento de la piel. Los elementos o mecanismos clave de las células de la piel contra el estrés oxidativo son Nrf2 (capaz de modular la respuesta antiinflamatoria y antioxidante a través de múltiples mecanismos, tal como la regulación de la homeostasis redox y la supresión de genes proinflamatorios, ya sea directamente o a través de la interacción con NF-B) y catalasa (enzimas antioxidantes cruciales que mitigan el estrés oxidativo en gran medida al destruir el peróxido de hidrógeno celular para producir agua y oxígeno).

[0013] La senescencia se presenta habitualmente en respuesta a estímulos dañinos, tal como el acortamiento o la disfunción de los telómeros (senescencia replicativa) o la activación persistente de la respuesta al daño del ADN (DDR). La adopción de un fenotipo proinflamatorio conocido como fenotipo secretor asociado a la senescencia (SASP) puede promover la inflamación y el deterioro de los tejidos. La creciente evidencia sugiere que las células senescentes se acumulan en los tejidos y órganos con la edad avanzada, perjudicando de esta manera los procesos de regeneración fisiológica y contribuye al envejecimiento del organismo (Rube, CE, et al. (2021).Human skin aging is associated with increased expression of the histone variant H2A.J in the epidermis. Aging Meeh Dis 7, 7). Además, como se señaló anteriormente, la producción de ROS aumenta con la edad, provocando también roturas de doble cadena (DSB) en el ADN, mientras que la capacidad de las células de la piel para reparar este daño disminuye con el paso de los años, lo que contribuye al envejecimiento cronológico. Se ha demostrado que durante la RS (senescencia replicativa), los fibroblastos acumulan proteínas involucradas en la DDR en regiones teloméricas, incluidas yH2A.X, 53BP1, MDC1 y NBS1 (d'Adda di Fagagna et al., (2003).A DNA damage checkpoint response in telomere-initiated senescence, Nature 426, 194-198). La activación de DDR puede dar como resultado la activación del factor de transcripción p53, que está involucrado en una variedad de procesos que incluyen la reparación del ADN y la apoptosis, pero más notablemente da como resultado la expresión del inhibidor de cinasa dependiente de ciclina p21, que conjuntamente con la activación de p16, se cree que son las principales vías en la inducción de la senescencia (de Magalhaes JP y Passos JF (2018).Stress, cell senescence and organismal ageing;Mechanisms of Ageing and Development, Volume 170, 2-9). Las sustancias antioxidantes tienen la capacidad de unirse a los radicales libres, que son provocados por el estrés oxidativo, reduciendo las DSB de ADN y, por lo tanto, la aparición de focos de 53BP1, previniendo y ralentizando el proceso de envejecimiento de la piel.

[0014] Por su parte, la interleucina-8 (IL-8) es una potente citocina quimiotáctica y proinflamatoria, producida en la piel por una variedad de células en respuesta a estímulos inflamatorios. Estudios recientes sugieren que, además de sus potentes acciones sobre los leucocitos, la IL-8 ejerce una influencia directa sobre varias funciones de las células epidérmicas humanas, tal como la quimiotaxis, la actividad o la proliferación de Candida albicans (Kemeny L et al. (1994).Role of interleukin-8 receptor in skin. International archives of allergy and immunology, 104(4), 317-322).

[0016] Además, uno de los principales actores en la respuesta inmunitaria innata es el receptor tipo toll 2 (TLR2). Esta proteína es un receptor de membrana involucrado en el reconocimiento de patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) o ligandos exógenos, y también reconoce patrones moleculares asociados al peligro (DAMP), también conocidos como alarminas o ligandos endógenos. Este reconocimiento conduce a la activación de la respuesta proinflamatoria para proteger a los organismos contra las agresiones externas (Chen L y DiPietro LA (2017).Toll-Like Receptor Function in Acute Wounds. Adv Wound Care(New Rochelle) 6, 344-355). Centrándose en la piel, cuya función principal es proteger el cuerpo de factores externos, TLR2 se expresa en muchos de los tipos de células que componen este órgano, incluidos los queratinocitos (Nguyen AV y Soulika AM (2019). The Dynamics of the Skin's Immune System. International journal of molecular sciences, 20(8), 1811; Pivarcsi A et al. (2003).Expression and function of Toll-like receptors 2 and 4 in human keratinocytes. Int Immunol.15, 721-30). El mal funcionamiento o la sobreactivación de TLR2 en la piel, puede conducir a una respuesta proinflamatoria excesiva, provocando enfermedades relacionadas con la inflamación como el acné y contribuyendo a mantener un estado inflamatorio sostenido, que puede conducir a la inflamación (Bailey KL et al. (2019).Aging leads to dysfunctional innate immune responses to TLR2 and TLR4 agonists.Aging Clin Exp Res. 31, 1185-1193.; Zhang B, et al. (2019)Toll-like receptor 2 plays a critical role in pathogenesis of acne vulgaris.Biomed Dermatol 3, 4).

[0017] Además, es importante destacar que los telómeros forman los extremos de los cromosomas humanos. Estas estructuras consisten en simples repeticiones de ADN en tándem (TTAGGG), que no codifican ningún producto génico y su función principal es tapar los extremos de los cromosomas. La protección de los telómeros es necesaria para distinguir los extremos de los cromosomas, que no deben repararse, de las roturas del ADN dentro del genoma, que conducen a la detención del ciclo celular y la reparación del ADN o a la inducción de la apoptosis cuando el daño es demasiado grave o no reparable. Los telómeros impiden la inducción de estas respuestas en los extremos de los cromosomas y esta caperuza es un requisito previo para mantener la estabilidad cromosómica, siendo necesaria una longitud mínima de los telómeros para cumplir esta función de caperuza (Buckingham EM y Klingelhutz AJ (2011).The role of telomeres in the ageing of human skin. Exp Dermatol.20, 297-302; Jiang H et al. (2007).Telomere shortening and ageing. Z Gerontol Geriatr.40, 314-24).

[0019] Los telómeros se acortan con cada ronda de división celular, debido al "problema de replicación final" de la ADN-polimerasa, siendo una de las características más pertinentes del envejecimiento. Factores adicionales (procesamiento de los telómeros durante el ciclo celular, especies reactivas del oxígeno) pueden contribuir al acortamiento de los telómeros y diferentes mecanismos celulares están involucrados en la preservación de los telómeros. Entre estos mecanismos, el complejo de refugio es esencial para la función de los telómeros, el mantenimiento de los telómeros y las conexiones con las vías de señalización intracelular. El complejo protector es una estructura multiproteica que protege las terminaciones de los telómeros, y está formado por diferentes proteínas, incluyendo TRF1, TRF2, POT1, RAP1, TIN2 y TPP1 (Imbert I et al. (2012).Modulation of telomere binding proteins: a future area of research for skin protection and anti-aging target. J Cosmet Dermatol.11, 162-6).

[0020] Cuando los telómeros alcanzan una longitud críticamente corta, pierden la función de protección en los extremos del cromosoma. Estos telómeros disfuncionales se reconocen luego como daños en el ADN e inducen puntos de control de daños en el ADN, lo que conduce a la senescencia o incluso a la muerte celular (Imbert I et al. (2012).Modulation of telomere binding proteins: a future area of research for skin protection and anti-aging target. J Cosmet Dermatol. 11, 162-6; Maleki M et al. (2020)Stabilization of telomere by the antioxidant property of polyphenols: Anti-aging potential. Life Sci. 259, 118341). Centrarse en el envejecimiento de la piel, la acumulación de células senescentes con telómeros cortos en los tejidos de la piel es un sello distintivo del proceso de envejecimiento (Buckingham EM y Klingelhutz AJ (2011).The role of telomeres in the ageing of human skin. Exp Dermatol. 20, 297-302; Jiang H et al. (2007).Telomere shortening and ageing. Z Gerontol Geriatr.40, 314-24).

[0022] La telomerasa es una enzima que alarga los telómeros y compensa el desgaste de los telómeros mediante la adición de novo de repeticiones de TTAGGG en los extremos de los cromosomas en aquellas células donde se expresa normalmente, tal como las células madre pluripotentes y los compartimentos de células madre adultas (Blackbum EH (1991).Structure and function of telomeres. Nature 350, 569-573; Liu L, et al. (2007).Telomere lengthening early in development. Nat. Cell Biol. 9:1436- 1441; Flores I et al. (2005).Effects of telomerase and telomere length on epidermal stem cell behavior. Science. 309: 1253-1256; Marion RM et al. (2009).Telomeres acquire embryonic stem cell characteristics in induced pluripotent stem cells. Cell Stem Cell 4:141-54). Aunque la telomerasa se expresa en compartimentos de células madre adultas, esto no es suficiente para contrarrestar el desgaste de los telómeros asociado con la división celular a lo largo de la vida y, por lo tanto, como se señaló anteriormente, los telómeros se acortan con la edadin vitroein vivo. Este acortamiento progresivo de los telómeros puede afectar la capacidad regenerativa de los tejidos y se ha propuesto como una de las características moleculares del envejecimiento (Lopez-Otin et al. (2013).The hallmarks of aging. Cell.153:1194-1217; Martinez P, Blasco MA (2017).Telomere-driven diseases and telomere-targeting therapies. J Cell Biol. 216(4):875-887). El desgaste de los telómeros en los compartimentos de las células madre afecta su capacidad tisular y de autorrenovación y se considera una de las principales causas moleculares del envejecimiento y la aparición de enfermedades asociadas al envejecimiento (Flores I et al. (2005).Effects of telomerase and telomere length on epidermal stem cell behavior. Science 309: 1253-1256; Sharpless NE and DePinho RA (2007).How stem cells age and why this makes us grow old. Nat. Rev. Mol. Cell Biol.8:703-713). Específicamente, para el envejecimiento de la piel, la telomerasa, se ha implicado en tener un papel clave en el mantenimiento de la función y proliferación celular de la piel (Buckingham EM, Klingelhutz AJ (2011)The role of telomeres in the ageing of human skin. Exp Dermatol.20, 297-302).

[0024] En los últimos años, el número de ingredientes activos para mejorar los signos del envejecimiento de la piel, tal como la pérdida de firmeza, la textura de la piel y las arrugas ha aumentado considerablemente. Ejemplos de estos ingredientes activos son retinoides, vitaminas o extractos botánicos (Bradley EJ et al. (2015).Over-the-counter anti-ageing topical agents and their ability to protect and repair photoaged skin. Maturitas, 80, 265-272).

[0026] Los antioxidantes se usan para reducir la concentración de radicales libres en la piel y, por lo tanto, contrarrestar la degradación del colágeno. Un ejemplo de los antioxidantes es el ácido ascórbico (también conocido como vitamina C). El ácido ascórbico, además de su efecto antioxidante, induce la síntesis de proteínas a partir de la ECM (colágeno I y III y elastina) a la vez que promueve la diferenciación epidérmica e inhibe la Metaloproteinasa de Matriz-1 (MMP1), entre otras. Desafortunadamente, el ácido ascórbico es extremadamente inestable y padece oxidación especialmente a altas temperaturas, condiciones aeróbicas, pH alto y/o cuando se expone a la luz (Manela-Azulay M et al. (2017).Vitamins and other Antioxidants. Daily Routine in Cosmetic Dermatology, 1-13).

[0027] Además, se encuentra en el mercado una amplia gama de extractos botánicos y compuestos derivados de plantas con múltiples aplicaciones, tal como, por ejemplo, extractos de uva que comprenden resveratrol (un antioxidante); té verde que comprende polifenoles; o soja que comprende isoflavonas. Otro ejemplo es la cúrcuma (Curcuma longa), que se usó en la medicina china y ayurvédica (como tratamiento para condiciones inflamatorias) y se anunció para su uso en rituales de cocina y belleza en todo el mundo. La cúrcuma contiene turmerina, que ha demostrado actividades antioxidantes y antiinflamatorias.

[0029] Sin embargo, la eficaciain vivoy la composición de estos ingredientes no están suficientemente validadas científicamente.

[0031] Por otro lado, los péptidos también se pueden incorporar en fórmulas cosméticas para mejorar los signos del envejecimiento cutáneo. Los péptidos bioactivos pueden imitar las propias moléculas del cuerpo e influir en procesos tal como la síntesis de colágeno, con la ventaja de que tienen una tolerabilidad y estabilidad mucho mejores. Además, se puede desarrollar una amplia gama de actividades, químicas e indicaciones para ellos (Zhang L y Falla TJ (2009).Cosmeceuticals and peptides. Clinics in dermatology, 27, 485-494). US 2021/040152 A1 divulga un péptido para inhibir el daño de los telómeros y su uso en el tratamiento de enfermedades asociadas al daño de los telómeros.

[0033] A pesar de la amplia variedad de compuestos y/o extractos en el campo, todavía existe la necesidad de encontrar nuevas moléculas (preferentemente, péptidos) que puedan proporcionar la prevención y/o tratamiento del envejecimiento (preferentemente, envejecimiento de la piel) y que muestren un amplio espectro de actividades contra el envejecimiento, así como enfermedades relacionadas con el envejecimiento, la inflamación y el estrés oxidativo.

[0034] Descripción de la invención

[0035] Breve descripción de la invención

[0036] El alcance de la invención se define en el conjunto adjunto de reivindicaciones.

[0037] Los inventores de la presente invención, después de una investigación extensa y exhaustiva, han encontrado sorprendentemente péptidos con un amplio espectro de actividades que, entre otras, incluyen la protección de los telómeros y actividades antioxidantes y antiinflamatorias. Estos péptidos de la presente invención son, por lo tanto, útiles para el tratamiento del envejecimiento de la piel y los signos relacionados con el envejecimiento de la piel, así como las enfermedades inflamatorias y las enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo y, por lo tanto, resuelven el problema presente en el estado de la técnica mencionado anteriormente. Las referencias a los métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para usarse en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

[0038] Breve descripción de las figuras

[0039] Para permitir una mejor comprensión, la presente invención se describe con más detalle a continuación con referencia a los dibujos adjuntos, que se presentan a modo de ejemplo, y con referencia a ejemplos ilustrativos y no limitativos. En las figuras: * significa p<0,05; ** significa p< 0,01; *** significa p<0,001.

[0040] La Figura 1 muestra los resultados de expresión de gen obtenidos en el ejemplo 2 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>a las 6 h con 0,01 mg/mL del péptido. Cada una de las barras se refiere a un gen, de arriba a abajo: TOLLIP, IRAK3, TNFAIP3 y HMOX1. Las barras que crecen hacia la derecha (es decir, con un valor positivo) muestran una regulación positiva del gen.

[0041] La Figura 2 muestra los resultados de expresión de gen obtenidos en el ejemplo 2 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>a las 24 h con 0,01 mg/mL del péptido. Cada una de las barras se refiere a un gen, de arriba a abajo: NQO1, NFKB1, IL1 B, TNF, CXCL8, IL6, MMP3 y TLR2. Las barras que crecen hacia la izquierda (es decir, con un valor negativo) muestran una regulación negativa del gen. Las barras que crecen hacia la derecha (es decir, con un valor positivo) muestran una regulación positiva del gen.

[0042] La Figura 3 muestra los resultados de expresión de miARN obtenidos en el ejemplo 3 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>a las 24 h con 0,01 mg/mL del péptido. Cada una de las barras se refiere a un miARN, de arriba a abajo: miR-146a-5p y miR-21-5p. Las barras que crecen hacia la derecha (es decir, con un valor positivo) muestran una regulación positiva del gen.

[0043] La Figura 4 muestra los resultados obtenidos para la secreción o liberación de IL-8 bajo condiciones inflamatorias (excepto la muestra no tratada o basal) en el ejemplo 4 para el tratamiento de queratinocitos HaCaT con el péptido SEQ ID: 2-NH<2>. Los resultados en esta figura se muestran con respecto a la muestra de control positivo (células tratadas con IFN a 10 ng/mL), para la cual la secreción de muestra de IL-8 se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (basal), control positivo, células tratadas con 10 ng/mL de IFN y 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. El eje y se refiere al porcentaje de IL-8 secretada con respecto al control positivo (establecido como 100%).

[0044] La Figura 5 muestra los resultados obtenidos para la secreción o liberación de IL-8 bajo condiciones inflamatorias (excepto la muestra no tratada o basal) en el ejemplo 4 para el tratamiento de queratinocitos HaCaT con el péptido SEQ ID: 3-NH<2>. Los resultados en esta figura se muestran con respecto a la muestra de control positivo (células tratadas con IFN a 10 ng/mL), para la cual la secreción de muestra de IL-8 se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (basal), control positivo, células tratadas con 10 ng/mL de IFN y 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 3-NH<2>. El eje y se refiere al porcentaje de IL-8 secretada con respecto al control positivo (establecido como 100%).

[0045] La Figura 6 muestra los resultados obtenidos para la secreción o liberación de IL-8 bajo condiciones no inflamatorias en el ejemplo 4 para el tratamiento de queratinocitos HaCaT con el péptido SEQ ID: 2-NH<2>. Los resultados en esta figura se muestran con respecto al estado basal (células no tratadas), para las cuales la secreción de muestra de IL-8 se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (basal), células tratadas con 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. El eje y se refiere al porcentaje de IL-8 secretada con respecto al estado basal (establecido como 100%).

[0046] La Figura 7 muestra los resultados obtenidos para la secreción o liberación de IL-8 bajo condiciones no inflamatorias en el ejemplo 4 para el tratamiento de queratinocitos HaCaT con el péptido SEQ ID: 3-NH<2>. Los resultados en esta figura se muestran con respecto al estado basal (células no tratadas), para las cuales la secreción de muestra de IL-8 se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (basal), células tratadas con 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 3-NH<2>. El eje y se refiere al porcentaje de IL-8 secretada con respecto al estado basal (establecido como 100%).

[0048] La Figura 8 muestra los resultados obtenidos para la longitud de los telómeros en el ejemplo 5 para el tratamiento de células HDFa con el péptido SEQ ID: 2-NH<2>. Los resultados se expresan como % de la longitud de los telómeros con respecto a la longitud de los telómeros de HDFa de un sujeto de 25 años (HDFa<25>), que se establece como 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: Células HDFa<25>no tratadas, células HDFa<73>no tratadas y células HDFa<73>(HDFa de un sujeto de 73 años) tratadas con 0,005 mg/mL o 0,01 mg/mL, respectivamente. El eje y se refiere al porcentaje de longitud de los telómeros con respecto a las células HDFa<25>no tratadas (establecido como 100%).

[0050] La Figura 9 muestra los resultados obtenidos para la translocación de Nrf2 en los núcleos en el ejemplo 6 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. Los resultados se expresan como % de los niveles de Nrf2 nucleolar en comparación con los niveles de Nrf2 nucleolar de las células no tratadas (control negativo -estado basal), que se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: células no tratadas y células tratadas con 0,01 y 0,05 mg/mL del péptido de la presente invención. El eje y se refiere a los niveles nucleolares de Nrf2 expresados como un % con respecto a los de las células no tratadas que se establecen como 100%.

[0052] La Figura 10 muestra los resultados obtenidos para los niveles de TLR2 en el ejemplo 7 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. Los resultados se expresan como % de los niveles de TLR2 en comparación con las células no tratadas (control negativo - estado basal), que se establece en 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: células no tratadas; células tratadas con 10 ng/mL de IFN; y células tratadas con 10 ng/mL de IFN y 0,01 o 0,05 mg/mL del péptido de la presente invención, respectivamente. El eje y se refiere a los niveles de TLR2 expresados como un % con respecto a los de las células no tratadas que se establecen como 100%.

[0054] La Figura 11 muestra los resultados obtenidos para los niveles de catalasa o síntesis en el ejemplo 8 para el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. Los resultados se expresan como niveles de catalasa con respecto a la proporción total de proteína de una muestra y como un porcentaje con respecto al valor obtenido para el estado basal (células no tratadas) que se establece como 100%. Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: células no tratadas (estado basal); y células tratadas con 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL del péptido mencionado anteriormente. El eje y se refiere al porcentaje de los niveles de catalasa/proteína total con respecto al estado basal que se establece como 100%.

[0056] La Figura 12 muestra los resultados obtenidos para la producción de TRF1 (niveles de TRF1 medidos por medio de la intensidad medida) en el ejemplo 9 con el tratamiento de células CHA9.3 con péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>. Los resultados se normalizan con respecto al control negativo (células solo tratadas con el vehículo, es decir, DMSO). Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (células tratadas con DMSO), células tratadas con 0,063 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 3-NH<2>, células tratadas con 0,125 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. El eje y se refiere a la intensidad de TRF1 obtenida con respecto al control negativo (la intensidad de TRF1 se establece como 100% para el grupo de control negativo y el valor para el resto de los grupos de tratamiento se establece en comparación con el control negativo).

[0058] La Figura 13 muestra los resultados obtenidos para focos de TRF1 por célula en el ejemplo 10 con el tratamiento de células HEKa con péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. Los resultados se normalizan con respecto al control negativo (estado basal, células no tratadas con el péptido de la presente invención). Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (estado basal) y células tratadas con 0,005 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. El eje y se refiere a los focos de TRF1 por célula con respecto al control negativo (el número de focos de TRF1 por célula se establece como 100% para el grupo de control negativo y el valor para el resto de los grupos de tratamiento se establece en comparación con el control negativo).

[0060] La Figura 14 muestra los resultados obtenidos para la protección del ADN (medidos en función de los focos de 53BP1 por célula) obtenidos en el ejemplo 10 con el tratamiento de células HEKa con el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>. Los resultados se normalizan con respecto al control positivo (células tratadas solo con H<2>O<2>). Las columnas o barras en el eje x se refieren a los diferentes grupos de tratamiento experimental, de izquierda a derecha: control negativo (estado basal, células no tratadas), control positivo (células tratadas solo con H<2>O<2>), células tratadas con H<2>O<2>y 0,01 mg/mL o 0,05 mg/mL del péptido de la presente invención. El eje y se refiere a los focos de 53BP1 por célula con respecto al control positivo (el número de focos de 53BP1 por célula se establece como 100% para el grupo de control positivo y el valor para el resto de los grupos de tratamiento se establece en comparación con el control negativo).

[0061] Descripción detallada de la invención

[0062] En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un péptido con un amplio espectro de actividades contra el envejecimiento de la piel que incluyen, protección de los telómeros y actividades antiinflamatorias y antioxidantes.

[0063] En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una composición que comprende un péptido de la presente invención.

[0064] En un aspecto adicional, la presente invención se refiere al uso como cosmético de un péptido de la presente invención o de una composición de la presente invención, en un sujeto que necesita el tratamiento.

[0065] En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere al uso cosmético de un péptido de la presente invención o una composición de la presente invención en un sujeto que necesita el tratamiento.

[0066] En un quinto aspecto, la presente invención se refiere a un método para la prevención y/o tratamiento del envejecimiento de la piel en un sujeto que comprende la administración de un péptido de la presente invención o una composición de la presente invención al sujeto.

[0067] En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición o un péptido de la presente invención para usarse como un medicamento.

[0068] En un séptimo aspecto, la presente invención se refiere al uso de la composición o un péptido de la presente invención para la fabricación de un medicamento para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo. En un octavo aspecto, la presente invención se refiere a un método para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo, que comprende administrar un péptido o una composición de la presente invención a un sujeto en necesidad del mismo.

[0069] En un noveno aspecto, la presente invención se refiere a una composición nutracéutica que comprende un péptido de la presente invención.

[0070] En un aspecto final, la presente invención se refiere al uso como nutracéutico de un péptido de la presente invención o de una composición de la presente invención.

[0071] El término "grupo alifático no cíclico" y su plural, como se usa en la presente, tienen el significado común dado en el estado de la técnica a los términos. Por lo tanto, estos términos se refieren, por ejemplo y sin limitación, a grupos alquilo, alquenilo y alquinilo lineales o ramificados.

[0072] El término "grupo alquilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo saturado, lineal o ramificado, que tiene entre 1 y 24, preferentemente entre 1 y 16, más preferentemente entre 1 y 14, incluso más preferentemente entre 1 y 12, e incluso más preferentemente aún entre 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula por un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, metilo, etilo, isopropilo, n-propilo, i-propilo, isobutilo, terc-butilo, n-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, heptilo, octilo, decilo, dodecilo, laurilo, hexadecilo, octadecilo, amilo, 2-etilhexilo, 2-metilbutilo, 5-metilhexilo y similares. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0073] El término "grupo alquenilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo lineal o ramificado que tiene entre 2 y 24, preferentemente entre 2 y 16, más preferentemente entre 2 y 14, incluso más preferentemente entre 2 y 12, incluso más preferentemente aún 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono, con uno o más enlaces dobles carbono-carbono, preferentemente con 1, 2 o 3 enlaces dobles carbono-carbono, conjugados o no conjugados, que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, los grupos vinilo, oleilo, linoleilo y similares. Los grupos alquenilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0074] El término "grupo alquinilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo lineal o ramificado que tiene entre 2 y 24, preferentemente entre 2 y 16, más preferentemente entre 2 y 14, incluso más preferentemente entre 2 y 12, incluso más preferentemente aún 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono, con uno o más triples enlaces carbono-carbono, preferentemente con 1, 2 o 3 triples enlaces carbono-carbono, conjugados o no conjugados, que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, el grupo etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo, pentinilo, tal como 1-pentinilo y grupos similares. Los grupos alquinilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0075] El término "grupo alicíclico" y su plural, como se usa en la presente, tienen el significado común dado en el estado de la técnica a los términos. Por lo tanto, estos términos se usan para hacer referencia a, por ejemplo y sin limitarse a, grupos cicloalquilo o cicloalquenilo o cicloalquinilo.

[0076] El término "cicloalquilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo alifático mono o policíclico saturado que tiene entre 3 y 24, preferentemente entre 3 y 16, más preferentemente entre 3 y 14, incluso más preferentemente entre 3 y 12, incluso más preferentemente todavía 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metil ciclohexilo, dimetil ciclohexilo, octahidroindeno, decahidronaftaleno, dodecahidro-fenaleno, adamantilo y similares, y que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos, tal como, alquilo, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxi-carbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0077] El término "cicloalquenilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo alifático mono o policíclico no aromático que tiene entre 5 y 24, preferentemente entre 5 y 16, más preferentemente entre 5 y 14, incluso más preferentemente entre 5 y 12, incluso más preferentemente aún 5 o 6 átomos de carbono, con uno o más enlaces dobles carbono-carbono, preferentemente con 1, 2 o 3 enlaces dobles carbono-carbono, conjugados o no conjugados, que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, el grupo ciclopent-1-en-1-ilo y grupos similares, y que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos, tal como, alquilo, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxi-carbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0078] El término "cicloalquinilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo alifático mono o policíclico no aromático que tiene entre 8 y 24, preferentemente entre 8 y 16, más preferentemente entre 8 y 14, incluso más preferentemente entre 8 y 12, incluso más preferentemente aún 8 o 9 átomos de carbono, con uno o más triples enlaces carbono-carbono, preferentemente con 1, 2 o 3 triples enlaces carbono-carbono, conjugados o no conjugados, que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, el grupo ciclooct-2-in-1-ilo y similares, y que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos, tal como, alquilo, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0079] El término "grupo arilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo aromático que tiene entre 6 y 30, preferentemente entre 6 y 18, más preferentemente entre 6 y 10, incluso más preferentemente 6 o 10 átomos de carbono, que comprende 1, 2, 3 o 4 anillos aromáticos, unidos por un enlace carbono-carbono o fusionado, y que está unido al resto de la molécula a través de un enlace individual, que incluye, por ejemplo y no se limita a, fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antranilo entre otros. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0080] El término "grupo aralquilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo sustituido por un grupo aromático, con entre 7 y 24 átomos de carbono y que incluye, por ejemplo y no se limita a, -(CH<2>)1-6-fenilo, -(CH<2>)1-6-(1-naftilo), -(CH<2>)1-6-(2-naftilo), -(CH<2>)1-6-CH (fenil)<2>y similares. Los grupos aralquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0081] El término "grupo heterocíclico" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un anillo de heterociclilo o hidrocarburo de 3-10 miembros, en el que uno o más de los átomos del anillo, preferentemente 1, 2 o 3 de los átomos del anillo, es un elemento diferente al carbono, tal como nitrógeno, oxígeno o azufre y puede estar saturado o insaturado. Para los fines de esta invención, el heterociclilo puede ser un sistema cíclico, monocíclico, bicíclico o tricíclico que puede incluir sistemas de anillos fusionados; y los átomos de nitrógeno, carbono o azufre pueden estar opcionalmente oxidados en el radical heterociclilo; el átomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado; y el radical heterociclilo puede estar parcial o completamente saturado o puede ser aromático. Con preferencia creciente, el término heterocíclico se refiere a un anillo de 5 o 6 miembros. Los grupos heterocíclicos pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0082] El término "grupo heteroarilalquilo" y su plural, como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo heterociclilo aromático sustituido o insustituido, el grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y el grupo heterociclilo aromático entre 2 y 24 átomos de carbono y de 1 a 3 átomos distintos de carbono y que incluye, por ejemplo y no se limita a, -(CH<2>) 1-6-imidazolilo, -(CH<2>) 1-6-triazolilo, -(CH<2>) 1-6-tienilo, -(CH<2>) 1-6-furilo, -(CH<2>) 1-6-pirrolidinilo y similares. Los grupos heteroarilalquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, tal como, halo, hidroxi, alcoxi, carboxi, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alcoxitio.

[0083] Los términos "halo" o "halógeno", como se usan en el presente documento, se refieren a flúor, cloro, bromo o yodo, y sus aniones se denominan haluros.

[0084] Como se usa en la presente, el término "derivado" y su plural, se refieren a compuestos cosmética, farmacéutica y/o alimentariamente aceptables, esto es, derivados del compuesto de interés que se puede usar en la preparación de una composición cosmética, farmacéutica y/o alimentaria, y a derivados cosmética, farmacéutica y/o alimentariamente inaceptables ya que estos pueden ser útiles en la preparación de derivados cosmética, farmacéutica y/o alimentariamente aceptables.

[0085] Como se usa en el presente documento, el término "sal" y sus plurales se refieren a cualquier tipo de sal de entre las conocidas en el estado de la técnica, por ejemplo, sales de haluro, sales de hidroxiácido (tal como sales de oxiácido, sales de ácido, sales básicas y sales dobles), sales de hidroxi, sales mixtas, sales de oxi u otras sales hidratadas. Este término comprende sales cosméticamente, farmacéuticamente y/o aceptables para alimentos; y sales cosméticamente, farmacéuticamente y/o inaceptables para alimentos, ya que estas últimas pueden ser útiles en la preparación de sales cosméticamente, farmacéuticamente y/o aceptables para alimentos.

[0086] Como se usa en el presente documento, el término "isómero" y su plural se refieren a isómeros ópticos, enantiómeros, estereoisómeros o diastereoisómeros. Los enantiómeros o diastereoisómeros individuales, así como sus mezclas, se pueden separar mediante técnicas convencionales conocidas en el estado de la técnica. Como se usa en la presente, el término "solvato" y su plural se refieren a cualquier solvato conocido en el estado de la técnica, tal como solvatos polares, apolares o anfifílos, e incluyen cualquier solvato cosméticamente, farmacéuticamente y/o aceptable para alimentos que, cuando se administra o aplica al sujeto interesado (directa o indirectamente) proporciona el compuesto de interés (el péptido o péptidos de la presente invención). Preferentemente, el solvato es un hidrato, un solvato con un alcohol tal como metanol, etanol, propanol o isopropanol, un solvato con un éster tal como acetato de etilo, un solvato con un éter tal como éter metílico, éter etílico o THF (tetrahidrofurano) o un solvato con DMF (dimetilformamida), y más preferentemente un hidrato o un solvato con un alcohol tal como etanol.

[0087] Además, como se usa en la presente, el término "aminoácido" y su plural incluyen los aminoácidos codificados por el código genético, así como los aminoácidos no codificados, ya sean naturales o no y ya sean aminoácidos D y L. Los ejemplos de aminoácidos no codificados son, sin restricción, citrulina, ornitina, sarcosina, desmosina, norvalina, ácido 4-aminobutírico, ácido 2-aminobutírico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido 6-aminohexanoico, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, ácido 2-aminobenzoico, ácido 4 aminobenzoico, 4-clorofenilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2,4 diaminobutírico, cicloserina, carnitina, cisteína, penicilamina, ácido piroglutámico, tienilalanina, hidroxiprolina, aloisoleucina, alo-treonina, ácido isonipecótico, isoserina, fenilglicina, estatina, βalanina, norleucina, N-metilaminoácidos,-aminoácidos y β-aminoácidos, entre otros, así como sus derivados. Sin embargo, se conocen otros aminoácidos no naturales en el estado de la técnica (ver, por ejemplo,"Unusual amino acids in peptide synthesis"por Roberts DC y Vellaccio F (1983) The Peptides, Vol. 5, Chapter VI. Gross E y Meienhofer J, Eds., Academic Press, Nueva York, EE. UU.). Las abreviaturas usadas en el presente texto para los aminoácidos siguen las recomendaciones de la Comisión Conjunta IUPAC-IUB de 1983 sobre Nomenclatura Bioquímica descritas en Eur. J. Biochem. (1984) 138:937.

[0088] El "porcentaje de identidad" con respecto a los péptidos, polipéptidos y proteínas, como se usa en la presente, tiene el significado comúnmente atribuido en el estado de la técnica y, por lo tanto, se refiere al porcentaje de aminoácidos que son idénticos entre dos secuencias de aminoácidos que se comparan después de un alineamiento óptimo de estas secuencias, donde el porcentaje es meramente estadístico y las diferencias entre las dos secuencias de aminoácidos se distribuyen aleatoriamente a lo largo de la secuencia. "Alineamiento óptimo" se entiende como aquel alineamiento de secuencias de aminoácidos que da lugar a un mayor porcentaje de identidad. El porcentaje de identidad se calcula determinando el número de posiciones idénticas en las que un aminoácido es idéntico en las dos secuencias comparadas, dividiendo el número de posiciones idénticas por el número de posiciones comparadas y multiplicando el resultado obtenido por 100 para obtener el porcentaje de identidad entre las dos secuencias. Las comparaciones de secuencias entre dos secuencias de aminoácidos se pueden llevar a cabo manualmente o mediante programas informáticos conocidos en el estado de la técnica, tal como el algoritmo BLAST (Basic Local Alignment Search Tool).

[0089] Los términos "inflamatorio" e "envejecimiento inflamatorio" se usan indistintamente en la presente y adquieren el significado que comúnmente tienen en el estado de la técnica, es decir, se refieren a la inflamación crónica de bajo grado que caracteriza el envejecimiento.

[0090] Por lo tanto, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a un péptido de la fórmula (I):

[0091] R<1>-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-R<2>

[0093] (I)

[0095] (R<1>-SEQ ID NO: 1-R<2>)

[0096] sus isómeros, sales, solvatos y/o mezclas aceptables de los mismos, en donde el péptido se selecciona de R<1>-SEQ ID NO: 2-R<3>; o R<1>-SEQ ID NO: 3-R<2>, y en donde

[0097] R<1>se selecciona de H, alifático no cíclico sustituido o insustituido, aliciclilo sustituido o insustituido, heterociclilo sustituido o insustituido, heteroarilalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido, aralquilo sustituido o insustituido y R<5>-CO-, en donde R<5>se selecciona del grupo formado por radical alquilo de C<1>-C<24>sustituido o insustituido, alquenilo de C<2>-C<24>sustituido o insustituido, alquinilo de C<2>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquilo de C<3>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquenilo de C<5>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquinilo de C<8>-C<24>sustituido o insustituido, arilo de C<6>-C<30>sustituido o insustituido, aralquilo de C<7>-C<24>sustituido o insustituido, anillo de heterociclilo sustituido o insustituido de 3 a 10 miembros, y heteroarilalquilo sustituido o insustituido de 2 a 24 átomos de carbono y 1 a 3 átomos distintos de carbono y una cadena de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; y R<2>se selecciona de H, -NR<3>R<4>-, -OR<3>y -SR<3>, en donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente de H, grupo alifático no cíclico sustituido o insustituido, aliciclilo sustituido o insustituido, heterociclilo sustituido o insustituido, heteroarilalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido y aralquilo sustituido o insustituido; alternativamente, R<1>y R<2>están ausentes y AA1 se une directamente al aminoácido C-terminal del péptido, formando de esta manera un péptido cíclico.

[0098] R<1>está unido al N-terminal del péptido, es decir, al grupo amino de AA1 (sustituye o reemplaza una H del grupo amino de AA1).

[0099] R<2>está unido al C-terminal del péptido, es decir, al grupo carboxi de AA8 o en caso de que AA8 esté ausente del grupo carboxi de AA7 (sustituye o reemplaza el OH del grupo carboxi).

[0100] Se contempla que los aminoácidos usados o presentes en los péptidos de la presente invención son L-aminoácidos, D-aminoácidos o combinaciones de los mismos. En una realización preferida, los aminoácidos usados o presentes en los péptidos de la presente invención son L-aminoácidos.

[0101] Preferentemente, los isómeros mencionados anteriormente son estereoisómeros. Se contempla que los estereoisómeros son enantiómeros o diastereoisómeros. Por lo tanto, en una realización preferida de la presente invención, el péptido es una mezcla racémica, una mezcla diastereomérica, un enantiómero puro o un diastereoisómero puro.

[0102] Además, los isómeros, sales, solvatos y/o mezclas de los mismos son, preferentemente, isómeros, sales, solvatos y/o mezclas de los mismos cosmética, farmacéutica y/o alimentariamente aceptables.

[0103] El péptido de la presente invención es:

[0104] - R<1>-Gly-Tyr-Tyr-Glu-Leu-Asn-Asp-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 2-R<2>); o

[0105] - R<1>-Gly-Asn-Glu-Leu-Leu-Asp-Tyr-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 3-R<2>)

[0106] R<1>y R<2>que son como se divulgó anteriormente.

[0107] Más preferentemente, el péptido de la presente invención es:

[0108] - R<1>-L-Gly-L-Tyr-L-Tyr-L-Glu-L-Leu-L-Asn-L-Asp-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 2-R<2>); o

[0109] - R<1>-L-Gly-L-Asn-L-Glu-L-Leu-L-Leu-L-Asp-L-Tyr-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 3-R<2>)

[0110] En cualquiera de las realizaciones anteriores, preferentemente, R<1>es H o acetilo, más preferentemente R<1>es H. Además, en cualquiera de las realizaciones anteriores, R<2>es NH<2>u OH, más preferentemente R<2>es NH<2>.

[0111] Por lo tanto, en una realización más preferida, R<1>es H y R<2>es NH<2>.

[0112] En la realización más preferida, el péptido de la presente invención es:

[0113] - Gly-Tyr-Tyr-Glu-Leu-Asn-Asp-NH<2>(SEQ ID NO: 2-NH<2>); o

[0114] - Gly-Asn-Glu-Leu-Leu-Asp-Tyr-NH<2>(SEQ ID NO: 3-NH<2>)

[0115] incluso más preferentemente, el péptido de la presente invención es:

[0116] - L-Gly-L-Tyr-L-Tyr-L-Glu-L-Leu-L-Asn-L-Asp-NH<2>(SEQ ID NO: 2-NH<2>); o

[0117] - L-Gly-L-Asn-L-Glu-L-Leu-L-Leu-L-Asp-L-Tyr-NH<2>(SEQ ID NO: 3-NH<2>)

[0118] Péptido SEQ ID NO: 2 es un péptido biomimético derivado o generado a partir de la proteína Turmerina (Curcuma tonga) - UniProt ref P85278 (TURM_CURLO).

[0119] Péptido SEQ ID NO: 3 es un péptido biomimético derivado o generado a partir de la proteína de ricino (Ricinus communis(Ricino)) - UniProt ref P02879 (RICI_RICCO).

[0120] En una realización preferida, combinable con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido de la presente invención proporciona una protección de los telómeros, preferentemente al aumentar la expresión y/o los niveles de TRF1.

[0121] En una realización preferida adicional, combinable con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido de la presente invención proporciona un aumento o una recuperación en la longitud en los telómeros.

[0122] En una realización preferida adicional, combinable con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido de la presente invención proporciona actividad antioxidante, preferentemente por medio de: aumento de los niveles de catalasa, translocación de Nfr2 en los núcleos de las células o combinaciones de los mismos, más preferentemente, por medio del aumento de los niveles de catalasa y la translocación de Nfr2 en los núcleos de las células.

[0123] En una realización preferida adicional, combinable con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido de la presente invención proporciona actividad antiinflamatoria, preferentemente por medio de la modulación de genes relacionados con la inflamación y/o miARN, disminuyendo los niveles de IL-8 y/o reduciendo los niveles de TLR2 o combinaciones de los mismos, más preferentemente al menos disminuyendo los niveles de IL-8.

[0124] La modulación de los genes relacionados con la inflamación es preferentemente la regulación positiva de los genes TNFAIP3, TOLLP, HMOX1, IRAK3, NQO1 y la regulación negativa de los genes NFKB1, IL1 B, TNF, CXCL8, IL6, MMP3 y TLR2.

[0125] La modulación de los miARN relacionados con la inflamación es preferentemente la regulación positiva de miR-146a-5p y miR-21-5p.

[0126] Como se puede derivar directamente de lo anterior, se contempla que el péptido de la presente invención es un péptido lineal o un péptido cíclico.

[0127] En una realización, que se puede combinar con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido es cíclico. En este caso, el primer y el último aminoácido del péptido de la presente invención (de acuerdo con las explicaciones anteriores) están unidos. Por lo tanto, se debe realizar la modificación adecuada a cualquiera de las realizaciones anteriores (por ejemplo, R<1>y R<2>pueden estar ausentes ya que los aminoácidos a los que se unen las porciones, ahora están unidos entre sí).

[0128] En una realización preferida, que se puede combinar con cualquiera de las realizaciones anteriores, el péptido es lineal.

[0129] Los péptidos de la presente invención se pueden sintetizar y producir por cualquier medio conocido en el estado de la técnica. Por ejemplo, se pueden sintetizar y producir por síntesis química (preferentemente, por medio de síntesis peptídica en fase sólida), expresando los péptidos en cultivos celulares o por medio de producción transgénica del péptido en plantas o animales. Además, los péptidos de la presente invención se pueden purificar por cualquier medio conocido en el estado de la técnica.

[0130] En una realización preferida, que se puede combinar con cualquiera de las realizaciones divulgadas anteriormente, el péptido de la presente invención es adecuado o está adaptado para aplicarse por medio de iontoforesis, más preferentemente, en la cara de un sujeto (preferentemente, un ser humano).

[0131] En una realización preferida adicional, que se puede combinar con cualquiera de las realizaciones divulgadas anteriormente, el péptido de la presente invención es adecuado o está adaptado para aplicarse por vía subcutánea, más preferentemente, en la cara de un sujeto (preferentemente, un ser humano).

[0132] En otra realización preferida, que puede combinarse con cualquiera de las realizaciones divulgadas anteriormente, el péptido de la presente invención es adecuado o está adaptado para aplicarse por vía tópica (preferentemente, en forma de una crema), más preferentemente, en la cara de un sujeto (preferentemente, un ser humano).

[0133] Como se puede derivar directamente de los ejemplos incluidos a continuación, los péptidos de la presente invención proporcionan un amplio espectro de actividades que los hacen útiles en cosméticos para la prevención y/o tratamiento del envejecimiento y la inflamación de la piel:

[0134] - Protección de los telómeros.

[0135] - Alargamiento de los telómeros.

[0136] - Protección contra la inflamación o actividad antiinflamatoria.

[0137] - Actividad antioxidante.

[0138] - Protección contra el calor.

[0139] Por lo tanto, los péptidos de la presente invención proporcionan una actividad de amplio espectro para la prevención y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel y resuelven los problemas presentes en el estado de la técnica y mencionados anteriormente.

[0140] Además, los péptidos de la presente invención también son útiles en medicina debido a las actividades mencionadas anteriormente (especialmente actividades antiinflamatorias y antioxidantes). Las actividades demuestran que los péptidos de la presente invención son útiles, por ejemplo, para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad, enfermedades inflamatorias y/o enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo. Además, debido a las actividades anteriores (especialmente actividades antiinflamatorias y antioxidantes), que aparecen demostradas en los ejemplos incluidos a continuación, los péptidos de la presente invención también son útiles en la industria alimentaria, preferentemente como nutracéuticos.

[0141] En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una composición que comprende un péptido de la presente invención.

[0142] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es preferentemente una composición cosmética. Por lo tanto, en esta realización, la composición cosmética de la presente invención comprende una cantidad cosméticamente efectiva del al menos un péptido de la presente invención, más preferentemente la composición cosmética de la presente invención comprende de 0,0001% (peso/volumen en g/100 mL, en lo sucesivo, p/v) a 0,05% (p/v) de un péptido de la presente invención. En una realización más preferida, la composición cosmética de la presente invención comprende de 0,0001% (p/v) a 0,005% (p/v) de un péptido de la presente invención, más preferentemente, de 0,0005% (p/v) y 0,0015% (p/v).

[0143] Se contempla que la composición cosmética de la presente invención también comprende al menos un ingrediente cosmético adicional. El ingrediente cosmético adicional puede ser al menos un excipiente y/o al menos un ingrediente activo cosmético adicional. El ingrediente cosmético adicional puede ser cualquier ingrediente cosmético conocido en el estado de la técnica siempre que no afecte, o no afecte de manera inaceptable la actividad de los péptidos de la presente invención.

[0144] En otra realización, la composición de la presente invención es una composición farmacéutica.

[0145] Se contempla que la composición farmacéutica de la presente invención también comprende al menos un ingrediente farmacéutico adicional. El ingrediente farmacéutico adicional puede ser al menos un excipiente y/o al menos un ingrediente activo farmacéutico adicional. El ingrediente farmacéutico adicional puede ser cualquier ingrediente cosmético conocido en el estado de la técnica siempre que no afecte, o no afecte de manera inaceptable la actividad de los péptidos de la presente invención.

[0146] En una realización adicional, la composición de la presente invención es una composición alimenticia.

[0147] Se contempla que la composición alimenticia de la presente invención también comprende al menos un ingrediente alimenticio. El ingrediente alimentario adicional puede ser cualquier ingrediente alimentario conocido en el estado de la técnica siempre que no afecte, o no afecte de manera inaceptable la actividad de los péptidos de la presente invención.

[0148] Preferentemente, la composición alimenticia de la presente invención es un nutracéutico. En una realización, la composición de la presente invención consiste esencialmente en péptidos de la presente invención.

[0149] En otra realización, la composición de la presente invención consiste en péptidos de la presente invención. En un tercer aspecto, la presente invención se refiere al uso como cosmético de un péptido de la presente invención o de una composición de la presente invención, en un sujeto que necesita el tratamiento.

[0150] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención.

[0151] La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0152] El péptido o la composición de la presente invención se usan en una cantidad o proporción cosméticamente efectiva.

[0153] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición cosmética como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0154] En una realización preferida, el uso como cosmético es para prevenir, tratar y/o reducir el envejecimiento de la piel, más preferentemente, reducir, prevenir y/o eliminar los signos del envejecimiento de la piel.

[0155] Preferentemente, los signos del envejecimiento de la piel son arrugas, aspereza de la piel (preferentemente, aspereza de las arrugas), piel más suelta o piel flácida, más preferentemente, arrugas, aspereza de la piel, piel más suelta no inflamatoria o piel flácida no inflamatoria, más preferentemente, arrugas, incluso más preferentemente arrugas faciales. Las arrugas pueden ser arrugas cronológicas o arrugas de expresión (derivadas del músculo).

[0156] La piel más suelta no inflamatoria es equivalente a la piel más suelta cosmética, es decir, no patológica (condición no médica).

[0157] La piel flácida no inflamatoria es equivalente a la piel flácida cosmética, es decir, no patológica (condición no médica).

[0158] En otra realización preferida, el uso como cosmético es para prevenir, tratar y/o reducir la inflamación, más preferentemente la inflamación de la piel.

[0159] En este tercer aspecto de la presente invención, el sujeto que necesita el tratamiento es preferentemente un mamífero, más preferentemente, un ser humano.

[0160] En este tercer aspecto de la presente invención, también se contempla que el uso como cosmético es para la mejora de la firmeza y/o elasticidad de la piel.

[0161] En un cuarto aspecto, como se señaló anteriormente, la presente invención se refiere al uso cosmético de un péptido de la presente invención o una composición de la presente invención en un sujeto que necesita el tratamiento.

[0162] Preferentemente, en este cuarto aspecto de la presente invención, el uso cosmético es para prevenir, tratar y/o reducir el envejecimiento de la piel, más preferentemente, reducir, prevenir y/o eliminar los signos del envejecimiento de la piel.

[0163] En otra realización preferida, el uso cosmético es para prevenir, tratar y/o reducir la inflamación, más preferentemente la inflamación de la piel. La inflamación es una inflamación cosmética, preferentemente una inflamación cosmética de la piel.

[0164] En este cuarto aspecto de la presente invención, también se contempla que el uso cosmético es para la mejora de la firmeza y/o elasticidad de la piel.

[0165] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0166] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición cosmética como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0167] Los signos de envejecimiento de la piel y el sujeto que necesita el tratamiento son como se explicó anteriormente en el tercer aspecto de la presente invención.

[0168] Además, todas las realizaciones explicadas anteriormente en el tercer aspecto de la presente invención son directamente aplicables a este cuarto aspecto de la presente invención, con las adaptaciones apropiadas.

[0169] En un quinto aspecto, la presente invención se refiere a un método para la prevención y/o tratamiento del envejecimiento de la piel o de la inflamación en un sujeto que comprende la administración de un péptido de la presente invención o una composición de la presente invención al sujeto.

[0170] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0171] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición cosmética como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0172] Los signos de envejecimiento de la piel, inflamación y el sujeto son como se explicó anteriormente en el tercer aspecto de la presente invención.

[0173] Además, todas las realizaciones explicadas anteriormente en el tercer y cuarto aspectos de la presente invención son directamente aplicables a este quinto aspecto de la presente invención, con las adaptaciones apropiadas. En un sexto aspecto, la presente invención se refiere a una composición o un péptido de la presente invención para usarse como un medicamento.

[0174] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0175] El péptido o la composición de la presente invención se usan en una cantidad o proporción farmacéuticamente efectiva.

[0176] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición farmacéutica como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0177] En este sexto aspecto de la presente invención, la composición o péptido de la presente invención se administra a un sujeto que necesita el tratamiento. Preferentemente, el sujeto que necesita el tratamiento es un mamífero, más preferentemente, un humano.

[0178] En una realización preferida, el uso como un medicamento es para usarse en la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria y/o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo.

[0179] En una realización preferida, el uso como medicamento es para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

[0180] Preferentemente, la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria crónica, más preferentemente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis o pustulosis palmoplantar.

[0181] También preferentemente, la enfermedad inflamatoria es rosácea, piel atópica, psoriasis o acné.

[0182] También se contempla que la enfermedad inflamatoria sea inflamatoria, más preferentemente, inflamatoria no cosmética, es decir, inflamatoria patológica.

[0183] También se contempla que la enfermedad inflamatoria sea una piel inflamatoria más suelta o una piel inflamatoria flácida (es decir, una piel patológica más suelta o una piel patológica flácida).

[0184] En una realización preferida adicional, el uso como medicamento es para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo.

[0185] Preferentemente, la enfermedad relacionada con el estrés oxidativo se selecciona de enfermedades cardiovasculares (CVD) (preferentemente, aterosclerosis), enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad renal aguda o crónica, fragilidad clínica, enfermedades neurodegenerativas (preferentemente, AD, enfermedad de Parkinson (PD), Sarcopenia, enfermedad de Huntington (HD), esclerosis lateral amiotrófica (ALS) y demencia vascular), degeneración macular (MD), cáncer de enfermedades biliares, cirrosis biliar, colangitis, osteoartritis y diabetes.

[0186] En un séptimo aspecto, la presente invención se refiere al uso de la composición o un péptido de la presente invención para la fabricación de un medicamento para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo. El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención.

[0187] La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0188] El péptido o la composición de la presente invención se usan en una cantidad o proporción farmacéuticamente efectiva.

[0189] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición farmacéutica como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0190] La enfermedad relacionada con la edad, la enfermedad inflamatoria y la enfermedad relacionada con el estrés oxidativo son como se divulgó anteriormente en el sexto aspecto de la presente invención.

[0191] En este séptimo aspecto de la presente invención, la composición o péptido de la presente invención se administra a un sujeto que necesita el tratamiento. Preferentemente, el sujeto que necesita el tratamiento es un mamífero, más preferentemente, un humano.

[0192] En un octavo aspecto, la presente invención se refiere a un método para la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo, que comprende administrar un péptido o una composición de la presente invención a un sujeto en necesidad del mismo.

[0193] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0194] El péptido o la composición de la presente invención se usan en una cantidad o proporción farmacéuticamente efectiva.

[0195] La composición de la presente invención es, preferentemente, una composición farmacéutica como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención.

[0196] La enfermedad relacionada con la edad, la enfermedad inflamatoria y la enfermedad relacionada con el estrés oxidativo son como se divulgó anteriormente en el sexto aspecto de la presente invención.

[0197] Preferentemente, el sujeto que necesita el tratamiento es un mamífero, más preferentemente, un humano.

[0198] En un noveno aspecto, la presente invención se refiere a una composición nutracéutica que comprende un péptido de la presente invención.

[0199] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. En un aspecto final, la presente invención se refiere al uso como nutracéutico de un péptido de la presente invención o de una composición de la presente invención.

[0200] El péptido de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el primer aspecto de la presente invención. La composición de la presente invención es como se divulgó anteriormente en el segundo aspecto de la presente invención. Más preferentemente, la composición de la presente invención es una composición alimenticia como se explica en el segundo aspecto de la presente invención.

[0201] Las actividades mencionadas anteriormente y demostradas en los experimentos incluidos a continuación, especialmente las actividades antiinflamatorias y antioxidantes, demuestran la utilidad de los péptidos y composiciones de la presente invención como nutracéuticos.

[0202] Texto libre de listado de secuencias

[0203] SEQ ID NO: 1

[0204] Secuencia sintetizada artificialmente

[0205] Xaa es un aminoácido pequeño

[0206] Xaa se selecciona de aminoácidos polares sin carga o aromáticos

[0207] Xaa está ausente o se selecciona de aminoácidos aromáticos

[0208] Xaa se selecciona de aminoácidos cargados negativamente

[0209] Xaa se selecciona de aminoácidos apolares

[0210] Xaa se selecciona de Asn o Leu

[0211] Xaa se selecciona de aminoácidos cargados negativamente

[0212] Xaa está ausente o se selecciona de aminoácidos aromáticos

[0213] SEQ ID NO: 2

[0214] Secuencia sintetizada artificialmente

[0215] SEQ ID NO: 3

[0216] Secuencia sintetizada artificialmente

[0217] Ejemplos

[0218] Abreviaturas:

[0219] Las abreviaturas usadas en el presente texto para los aminoácidos siguen las recomendaciones de la Comisión Conjunta IUPAC-IUB de 1983 sobre Nomenclatura Bioquímica descritas en Eur. J. Biochem. (1984) 138:937. Para los ejemplos:

[0220] Asn, Asparagina; Asp, ácido aspártico; BSA, Albúmina de Suero Bovino; ADNc, ADN Complementario; C-terminal, carboxi-terminal; DAPI, 4',6-diamidino-2-fenilindol; DCM, diclorometano; DIPCDI, N,N'-diisopropilcarbodiimida; DMEM, Medio de Eagle Modificado por Dulbecco; DMF, N,N-dimetilformamida; DMSO, Dimetilsulfóxido; ADN, ácido Desoxirribonucleico; equiv, equivalente; ESI-MS, espectrometría de masas de ionización por electrospray; FBS, Suero Bovino Fetal; Fmoc, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo; Glu, ácido Glutámico; Gly, Glycine; HOBt, 1-hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatografía líquida de alto rendimiento; IFN-, Interferón gamma; Leu, Leucina; LSGS, Suplemento de Crecimiento de Suero Bajo; MBHA, p-metilbenzhidrilamina; Me, metilo; MeCN, acetonitrilo; MeOH, metanol; N-terminal, amino-terminal; PBS, Solución Salina de Fosfato Borato; qPCR, reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real; RH, Humedad Relativa; RIPA, amortiguador para ensayo de Radioinmunoprecipitación; ARN, Ácido ribonucleico; TA, temperatura ambiente; RT-qPCR, Reacción en Cadena de la Polimerasa Cuantitativa con transcripción inversa; tBu, terc-butilo; TFA, ácido trifluoroacético; TIS, triisopropilsilano; Trt, trifenilmetilo o tritilo; Tyr, tirosina.

[0221] Con respecto a los procedimientos de síntesis química incluidos en los ejemplos, se observa que todos los procesos sintéticos se llevaron a cabo en jeringas de polipropileno equipadas con discos de polietileno poroso o reactores Pyrex® equipados con placas porosas. Todos los reactivos y disolventes eran de calidad de síntesis y se usaron sin ningún tratamiento adicional. Los disolventes y reactivos solubles se removieron por succión. El grupo Fmoc se removió con piperidina-DMF (2:8, volumen/volumen, v/v) (al menos 1 x 1 min, 2 x 10 min, 5 mL/g de resina) (Lloyd Williams P. et al.,Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC, 1997, Boca Raton (Fla., EE. UU.)). Los lavados entre las etapas de desprotección, acoplamiento y, nuevamente, desprotección, se llevaron a cabo con DMF (3x1 min) y DCM (3x1 min) cada vez usando 10 mL de disolvente/g de resina. Las reacciones de acoplamiento se realizaron con 3 mL de disolvente/g de resina. El control de los acoplamientos se realizó mediante la realización de la prueba de ninhidrina (Kaiser E. et al., Anal. Biochem., 1970, 34: 595598). Todas las reacciones sintéticas y lavados se llevaron a cabo a TA.

[0222] Ejemplo 1.Síntesis y preparación de los péptidos.

[0223] a) Obtención de Fmoc-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-Rink-MBHA-resina, en donde AA1 es L-Gly; AA2 es L-Tyr; AA3 es L-Tyr; AA4 es L-Glu; AA5 es L-Leu; AA6 es L-Asn y AA7 es L-Asp

[0224] Los pesos se normalizaron. Se trataron 4,8 g (2,5 mmol) de la resina Fmoc-Rink-MBHA con una funcionalización de 0,52 mmol/g con piperidina-DMF de acuerdo con el protocolo general descrito conocido en el estado de la técnica para remover el grupo Fmoc. Se incorporaron 3,08 g de Fmoc-L-Asp (tBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), en la resina desprotegida en presencia de DIPCDI (1,17 mL; 7,5 mmol; 3 equiv.), y HOBt (1,01 g; 7,5 mmol; 3 equiv.), usando DMF como disolvente durante una hora.

[0225] Luego, la resina se lavó como se describe en los métodos generales conocidos en el estado de la técnica y se repitió el tratamiento de desprotección del grupo Fmoc para acoplar el siguiente aminoácido. Siguiendo los protocolos descritos anteriormente, se acoplaron 4,45 g de Fmoc-L-Asn(Trt)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 2,65 g de Fmoc-L-Leu-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 3,19 g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 3,44 g de Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), posteriormente 3,44 g de Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), y posteriormente 2,23 g de Fmoc-L-Gly-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), secuencialmente, cada acoplamiento en presencia de 1,01 g de HOBt (7,5 mmol; 3 equiv.), y 1,17 mL de DIPCDI (7,5 mmol; 3 equiv.). Como ya se señaló anteriormente, entre cada paso de adición de aminoácidos, se realizó un tratamiento de desprotección del grupo Fmoc.

[0226] Después de la síntesis, las resinas peptídicas se lavaron con DCM (5 veces durante 3 minutos cada una) y se secaron bajo vacío.

[0227] b) Obtención de Fmoc-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-Rink-MBHA-resina, en donde AA1 es L-Gly; AA2 es L-Asn; AA3 es L-Glu; AA4 es L-Leu; AA5 es L-Leu; AA6 es L-Asp y AA7 es L-Tyr

[0228] Los pesos se normalizaron. Se trataron 4,8 g (2,5 mmol) de la resina Fmoc-Rink-MBHA con una funcionalización de 0,52 mmol/g con piperidina-DMF de acuerdo con el protocolo general descrito conocido en el estado de la técnica para remover el grupo Fmoc. Se incorporaron 3,44 g de Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), en la resina desprotegida en presencia de DIPCDI (1,17 mL; 7,5 mmol; 3 equiv.), y HOBt (1,01 g; 7,5 mmol; 3 equiv.), usando DMF como disolvente durante una hora.

[0229] Luego, la resina se lavó como se describe en los métodos generales conocidos en el estado de la técnica y se repitió el tratamiento de desprotección del grupo Fmoc para acoplar el siguiente aminoácido. Siguiendo los protocolos descritos anteriormente, se acoplaron 3,08 g de Fmoc-L-Asp (tBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 2,65 g de Fmoc-L-Leu-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 2,65 g de Fmoc-L-Leu-OH (7,5 mmol; 3 equiv.): posteriormente 3,19 g de Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.); posteriormente 4,45 g de Fmoc-L-Asn(Trt)-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), y posteriormente 2,23 g de Fmoc-L-Gly-OH (7,5 mmol; 3 equiv.), secuencialmente, cada acoplamiento en presencia de 1,01 g de HOBt (7,5 mmol; 3 equiv.), y 1,17 mL de DIPCDI (7,5 mmol; 3 equiv.). Como ya se señaló anteriormente, entre cada paso de adición de aminoácidos, se realizó un tratamiento de desprotección del grupo Fmoc.

[0230] Después de la síntesis, las resinas peptídicas se lavaron con DCM (5 veces durante 3 minutos cada una) y se secaron bajo vacío.

[0231] Usando los procedimientos de síntesis mencionados anteriormente, con la selección requerida de aminoácidos, se sintetizaron las siguientes secuencias:

[0232] - R<1>-Gly-Tyr-Tyr-Glu-Leu-Asn-Asp-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 2-R<2>); o

[0233] - R<1>-Gly-Asn-Glu-Leu-Leu.Asp-Tyr-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 3-R<2>)

[0234] c) Remoción del grupo protector N-Terminal Fmoc de los péptidos sintetizados de acuerdo con a) o b)

[0235] El grupo Fmoc N-terminal de las resinas de peptidilo obtenidas en a) o b) anteriormente, se desprotegió con piperidina al 20% (volumen/volumen, en lo sucesivo v/v) en DMF (1x1 min+2x10 min) (Lloyd Williams P. et al. (1997)Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC, Boca Raton (Fla., EE. UU.)). Las resinas de peptidilo se lavaron con DMF (5x1 min), DCM (4x1 min) y se secaron bajo vacío.

[0236] d) Proceso de escisión del soporte polimérico de las resinas de peptidilo obtenidas de acuerdo con c)

[0237] Los pesos se normalizaron. 200 mg de la resina de peptidilo seca obtenida en c) se trataron con 5 mL de TFA/TIS/H<2>O (90:5:5, en volumen) durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación. Los filtrados se recolectaron y precipitaron usando 50 mL (8 a 10 veces) de éter dietílico frío. Las soluciones etéreas se evaporaron hasta sequedad a presión reducida y temperatura ambiente, los precipitados se redisolvieron en 50% (v/v) de MeCN en H<2>O y se liofilizaron.

[0238] e) Caracterización de los péptidos sintetizados y preparados de acuerdo con d)

[0239] El análisis por HPLC de los péptidos obtenidos de acuerdo con d) se llevó a cabo con un equipo Shimadzu (Kyoto, Japón) usando una columna de fase inversa (150x4,6 mm, péptido XBridge BEH C18, 3,5 µm, Waters, EUA) en gradientes de MeCN (+0,036% (v/v) TFA) en H<2>O (+0,045% (v/v) TFA) a una velocidad de flujo de 1,25 mL/min y la detección se llevó a cabo a 220 nm. Todos los péptidos mostraron una pureza superior al 80%. La identidad de los péptidos obtenidos se confirmó mediante ESI-MS en un detector Water ZQ 4000 usando MeOH como fase móvil y una velocidad de flujo de 0,2 mL/min. Los resultados obtenidos demostraron que los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>, se sintetizaron correctamente y de forma efectiva.

[0240] Ejemplo 2.Análisis de los genes de expresión relacionados a la inflamación

[0241] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH2 se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0242] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,01 mg/mL en medio completo (Medio Basal de Células Dérmicas (DCBM) complementado con el Kit de Crecimiento de Queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina). Se usaron células no tratadas como muestra de control negativo (muestra basal).

[0243] Los genes pertinentes para los que se midió la expresión fueron: TOLLIP (proteína que interactúa con toll), IRAK3 (cinasa 3 asociada al receptor de interleucina 1), TNFAIP3 (proteína 3 inducida por TNF alfa), HMOX1 (hemo oxigenasa 1), NQO1 (NAD(P)H quinona deshidrogenasa 1), NFKB1 (subunidad 1 del factor nuclear kappa B), TNF (Factor de necrosis tumoral), IL1 B (interleucina 1 beta), IL6 (interleucina 6), CXCL8 (ligando 8 de quimiocina con motivo C-X-C), MMP3 (metalopeptidasa de matriz 3), TLR2 (receptor tipo toll 2). Los cebadores usados para cada uno de los genes fueron sondas de Ensayo de Expresión del gen TaqMan disponibles comercialmente. El experimento se realizóin vitroen células HEKa, se probó una concentración del péptido (0,01 mg/mL) a las 6h y 24h.

[0244] De forma breve, los queratinocitos epidérmicos humanos de adultos (HEKa) se sembraron en placas de 6 pocillos a una densidad de 300.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones de cultivo estándar (medio DCBM complementado con el kit de crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina; 37°C, 95% de Humedad Relativa, 5% de CO<2>) durante 24 horas. A continuación, se incubaron HEKa en presencia de 0,01 mg/mL del péptido durante 6 o 24 h.

[0245] Las células finalmente se lisaron y se realizó la extracción de ARN usando el kit Qiagen RNeasy Mini siguiendo las instrucciones del fabricante. Se usaron ARN purificados para generar los ADNc correspondientes mediante transcripción inversa que sirvieron como moldes para la amplificación. RT-qPCR se realizó con el panel de sondas de ensayo TaqMan especificado anteriormente y 2x Mezcla Maestra de expresión de gen usando el instrumento StepOne plus Real-Time PCR. La amplificación incluyó 40 ciclos de: 15 segundos a 95°C (desnaturalización) y 1 minuto a 60°C (Recocido y propagación).

[0246] Los datos obtenidos se analizaron mediante el método ΔΔCt, que proporciona los valores de expresión del gen diana como veces los cambios en la muestra tratada en comparación con una muestra basal no tratada. Todas las muestras se normalizaron con la expresión relativa de un gen de mantenimiento GAPDH (Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa).

[0247] Los pasos para el análisis incluyeron:

[0248] 1. Calcular el Ct promedio para cada condición

[0249] 2. Calcular la muestra de prueba de ΔCT y la muestra de calibrador de ΔCT

[0250] 3. Calcular el ΔΔCT: ΔΔCT = muestra de prueba de ΔCT - muestra de calibrador de ΔCT

[0251] 4. Obtener relación por 2<-ΔΔCT>

[0252] Las modulaciones génicas con una relación (veces de cambio frente a muestras basales) >1,15 o <(-1,15) se consideran de importancia biológica potencial.

[0253] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en las Figuras 1 y 2, que muestran que el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como ejemplo de los péptidos de la presente invención) fue capaz de modular la expresión de genes relacionados con la inflamación, regulando a la alta los antiinflamatorios y regulando a la baja los proinflamatorios. Más precisamente, después de 6 h, las células HEKa tratadas con el péptido de la presente invención mostraron una regulación positiva de los genes TNFAIP3, TOLLP, HMOX1 e IRAK3, mientras que después de 24 h el tratamiento con el péptido de la presente invención NQO1 estaba regulado a la alta y los genes NFKB1, IL1 B, TNF, CXCL8, IL6, MMP3 y TLR2 estaban regulados a la baja. Todos estos resultados validan o demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención contra la inflamación y, por lo tanto, para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Además, todos estos resultados también demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad y enfermedades inflamatorias, como se explicó anteriormente. Además, esta actividad antiinflamatoria demuestra la utilidad de los péptidos de la presente invención como nutracéuticos.

[0254] Ejemplo 3.Análisis de la expresión de miARN relacionados con la inflamación.

[0255] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0256] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,01 mg/mL en medio completo (Medio Basal de Células Dérmicas (DCBM) complementado con el Kit de Crecimiento de Queratinocitos y 0,1 % de Penicilina/Estreptomicina). Se usaron células no tratadas como muestra de control negativo (muestra basal). Los miARN pertinentes para los cuales se midió la expresión fueron: miR-21-5p y miR-146a-5p. Durante los últimos años, los microARN (miARN) se han identificado como otro elemento clave en el envejecimiento y la inflamación. MiR-21-5p y miR-146a-5p están involucrados en la modulación de las vías inflamatorias NF-B y NLRP, sus niveles cambian significativamente tanto en los tejidos como en el torrente sanguíneo durante el envejecimiento y están asociados con una variedad de condiciones inflamatorias. La disminución en la expresión de este miARN se ha asociado con el envejecimiento y se han propuesto como biomarcadores de enfermedades relacionadas con el envejecimiento.

[0257] Los cebadores usados para cada uno de los genes fueron sondas de Ensayo de miARN Avanzadas TaqMan disponibles comercialmente. El experimento se realizó en células HEKain vitro, se probó una concentración del péptido (0,01 mg/mL) a las 24 h.

[0258] De forma breve, los queratinocitos epidérmicos humanos de adultos (HEKa) se sembraron en placas de 6 pocillos a una densidad de 300.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones de cultivo estándar (medio DCBM complementado con el kit de crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina; 37°C, 95% de Humedad Relativa, 5% de CO<2>) durante 24 horas. A continuación, se incubaron HEKa en presencia de 0,01 mg/mL del péptido durante 24 h.

[0259] Las células finalmente se lisaron y se realizó la extracción de ARN usando el kit de aislamiento de miARN miRVana siguiendo las instrucciones del fabricante. Se usaron miARN purificados para generar los ADNc correspondientes mediante transcripción inversa que sirvieron como moldes para la amplificación. La RT-qPCR se realizó con el panel de sondas de Ensayo de miARN Avanzadas TaqMan especificadas anteriormente y la Mezcla Maestra Taqman Fast Advance usando el instrumento StepOne Plus Real-Time PCR. La amplificación incluyó 40 ciclos de: 1 segundo a 95°C (desnaturalización) y 20 segundos a 60°C (Recocido y propagación).

[0260] Los datos obtenidos se analizaron mediante el método AACt, que proporciona los valores de expresión del gen diana como veces los cambios en la muestra tratada en comparación con una muestra basal no tratada. Todas las muestras se normalizaron con la expresión relativa de un miARN de mantenimiento: miR-16-5p.

[0261] Los pasos para el análisis incluyeron:

[0262] 1. Calcular el Ct promedio para cada condición

[0263] 2. Calcular la muestra de prueba de ΔCT y la muestra de calibrador de ΔCT

[0264] 3. Calcular el ΔΔCT: ΔΔCT = muestra de prueba de ΔCT – muestra de calibrador de ΔCT

[0265] 4. Obtener relación por 2<-ΔΔCT>

[0266] Se realizaron tres experimentos independientes (N=3).

[0267] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en la Figura 3, que muestra que el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) fue capaz de modular la expresión de miARN con propiedades antiinflamatorias. Más precisamente, el péptido de la presente invención fue capaz de regular positivamente la expresión de miR-146a-5p y miR-21-5p. Todos estos resultados validan o demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención contra la inflamación y, por lo tanto, para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Además, todos estos resultados también demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad y enfermedades inflamatorias, como se explicó anteriormente. Además, esta actividad antiinflamatoria demuestra la utilidad de los péptidos de la presente invención como nutracéuticos

[0268] Ejemplo 4.Análisis de los niveles de IL-8

[0269] Para este ejemplo, los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>se prepararon de acuerdo con el ejemplo 1.

[0270] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,005, 0,01 y 0,05 mg/mL en medio completo (DMEM complementado con 1% de FBS y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina). Las células tratadas con 10 ng/ml de IFN solo se usaron como control positivo para la inducción de inflamación. Se usaron células no tratadas como condición basal.

[0271] Para este ejemplo, los queratinocitos HaCaT se sembraron en una placa de 96 pocillos a una densidad de 75.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones de cultivo estándar (DMEM con 10% de FBS y 1% de Penicilina/Estreptomicina; 37°C, 95% de HR, 5% de CO<2>) durante 24 horas. Luego, los queratinocitos se trataron durante 48 horas con el péptido de la presente invención a las concentraciones indicadas anteriormente en presencia de 10 ng/mL de IFN en DMEM 1% de FBS. Después del tratamiento, los sobrenadantes se recolectaron y centrifugaron para eliminar los desechos celulares y se mantuvieron a -80°C hasta que se usaron para la cuantificación de IL-8 con el kit de ELISA DuoSet de IL-8/CXCL8 humana de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

[0272] Con el fin de determinar la viabilidad celular, al final del experimento, las células se cultivaron en 0,5 mg/mL de MTT en medio completo durante 1 hora antes de retirar la solución de MTT y disolver los cristales de formazán formados con 150 µL de DMSO/pocillo. Finalmente, se determinó OD a 570 nm con el espectrofotómetro Multiskan.

[0273] Cada condición se realizó por triplicado (n=3) en tres experimentos independientes (N=3). Todos los datos obtenidos se normalizaron de acuerdo con las fórmulas (II) y (III):

[0276]

[0278] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en las Figuras 4 y 5, que muestran que los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) fueron capaces de disminuir, de una manera dependiente de la dosis, la secreción de IL-8 en todas las condiciones probadas (tratamiento de 48 horas, a 0,005, 0,01 o 0,05 mg/mL juntamente con IFN a 10 ng/mL), en comparación con el control positivo (inflamación inducida con IFN a 10 ng/mL).

[0279] Se llevó a cabo un experimento similar bajo condiciones basales (esto es, sin los estímulos inflamatorios de IFN), tanto para los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>(concentraciones de 0,005, 0,01 y 0,05 mg/mL) y SEQ ID NO: 3-NH<2>(concentraciones de 0,01 y 0,05 mg/mL). En este caso, las células basales o no tratadas se establecieron como 100% (IL-8 secretada por las células basales o no tratadas). Los resultados obtenidos aparecen resumidos en las Figuras 6 y 7. Como en el caso anterior, todas las concentraciones probadas de SEQ ID NO: 2-NH<2>disminuyó la secreción de IL-8 de una manera dependiente de la dosis, pero en un grado menor que bajo condiciones inflamatorias. Además, y sorprendentemente, todas las concentraciones probadas de SEQ ID NO: 3-NH<2>también disminuyó la secreción de IL-8, pero en mayor grado que la SEQ ID NO: 2-NH<2>.

[0280] Todos los resultados obtenidos en este ejemplo demuestran un efecto protector de los péptidos de la presente invención ya que la IL-8 es una citocina proinflamatoria y, por lo tanto, los péptidos de la presente invención son útiles para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Además, todos estos resultados también demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad y enfermedades inflamatorias, como se explicó anteriormente. Además, esta actividad antiinflamatoria demuestra la utilidad de los péptidos de la presente invención como nutracéuticosEjemplo 5.Análisis de la longitud de los telómeros

[0281] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0282] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,005 o 0,01 mg/mL en medio completo (Medio 106 complementado con 2% de LSGS). Se usaron HDFa<73>(HDFa de adulto de 73 años) sin tratar como control negativo y HDFa<25>(HDFa de adulto de 25 años sin tratar se consideraron para fines comparativos.

[0283] De forma breve, los fibroblastos Dérmicos Humanos de adultos (HDFa) se sembraron en placas de 12 pocillos a una concentración de 150.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones de cultivo estándar (Medio 106 complementado con 2% de LSGS, 37°C, 95% de HR, 5% de CO<2>) durante 24 horas.

[0284] A continuación, las células HDFa se trataron con el péptido mencionado anteriormente a las concentraciones indicadas anteriormente, durante 48 horas. Luego, se extrajo el ADN usando el kit Qiagen DNeasy Mini siguiendo las instrucciones del fabricante. Finalmente, la relación de ADN de telómeros frente a ADN nuclear se estableció usando el kit de Ensayo de qPCR de Cuantificación de Longitud de Telómeros Humanos Absolutos, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los datos obtenidos se analizaron usando el método ΔΔCt, que proporciona la longitud relativa de los telómeros de la muestra diana como veces los cambios de la secuencia de telómeros (ADN tel) en comparación con una secuencia de ADN de referencia nuclear (SCR) de una sola individual.

[0285] Los pasos para el análisis incluyeron:

[0286] 1. Calcular el Ct de cada condición para ADN tel y SCR

[0287] 2. Calcular el ΔCT de ADN tel (muestra diana de ADN tel de Ct - muestra de referencia de ADN tel de Ct) y el ΔCT ADN SCR (muestra diana de SCR de Ct - muestra de referencia de SCR de Ct)

[0288] 3. Calcular el ΔΔCT: ΔΔCT = ΔCT ADN tel - ΔCT ADN SCR

[0289] 4. Obtener la longitud relativa de los telómeros por 2<-ΔΔCT>

[0290] 5. Calcular la longitud de los telómeros (%) = (longitud relativa de los telómeros de la muestra diana I longitud relativa de los telómeros de la muestra de HDFa<25>) x 100

[0291] Se realizaron tres experimentos independientes (N=3).

[0292] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en la Figura 8. HDFa<73>presentó telómeros 20% en cortocircuito que HDFa<25>. Sin embargo, HDFa<73>incubado con 0,005 o 0,01 mg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) durante 48 horas mostró telómeros un 17% y 30% más largos que el HDFa<73>no tratado, respectivamente. Por lo tanto, los péptidos de la presente invención fueron capaces de inducir la recuperación de la longitud de los telómeros y restaurar la longitud de los telómeros de HDFa<73>a un nivel similar al observado en HDFa<25>, validando su utilidad para prevenir, reducir y/o tratar la inflamación y el envejecimiento de la piel, así como las enfermedades relacionadas con la edad, las enfermedades inflamatorias y las enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo.

[0293] Ejemplo 6.Análisis de la localización subcelular de Nrf2

[0294] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0295] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,01 o 0,05 mg/mL en medio completo (Medio Basal Dérmico complementado con kit de crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina). Se usaron células no tratadas como muestras de control negativo (condición basal).

[0296] Para este estudio, se cultivaron células HEKa en medio basal de células dérmicas (DCBM) a una densidad de 50.000 células/pocillo y se incubaron a 37°C en una atmósfera humidificada con 5% de CO<2>. Cuando la confluencia celular fue de alrededor del 80%, las células se trataron con el péptido a la diferente concentración indicada anteriormente durante 24 horas. Después del tratamiento, las muestras se lavaron dos veces con PBS, se fijaron con 4% de formaldehído y se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,2%. A continuación, las muestras se bloquearon durante 1 hora con PBS/BSA al 5% para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos.

[0297] Para la tinción con Nrf2, las muestras se incubaron durante la noche con 1:100 de anticuerpo anti-NRF2 Alexa Fluor® 488 recombinante en PBS/BSA 1% a 4°C. Después de un lavado adecuado con PBS, las células se incubaron con 50 µg/mL de Faloidina-TRITC (para teñir filamentos de actina) durante 1 hora a temperatura ambiente y condiciones de oscuridad. Finalmente, las muestras se lavaron tres veces con PBS y los cubreobjetos se montaron usando Prolong-Gold con DAPI, que se une fuertemente al ADN (tinción nucleica), y las muestras se mantuvieron protegidas de la luz a 4°C hasta que se adquirieron imágenes microscópicas. Las imágenes microscópicas se adquirieron usando un objetivo 10x. Se realizó inmunofluorescencia en las réplicas para cada condición y se adquirieron imágenes de al menos cinco campos diferentes de cada cubreobjetos usando los mismos ajustes.

[0298] Las imágenes obtenidas se analizaron con el software Image J para determinar su intensidad de fluorescencia en los núcleos (tinción DAPI) y en el citoplasma (tinción Nrf2).

[0299] El porcentaje de Nrf2 nuclear localizado se obtuvo normalizando la señal de fluorescencia nuclear obtenida para Nrf2 en las muestras tratadas con respecto a la comparada para la muestra no tratada.

[0300] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en la Figura 9, en donde se puede observar que el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) es capaz de proporcionar la translocación de Nrf2 del citoplasma a los núcleos de una manera dependiente de la concentración. Como es ampliamente conocido, en los núcleos, Nrf2 en los núcleos induce la expresión de diferentes genes antioxidantes. Por lo tanto, los péptidos de la presente invención son capaces de proporcionar actividades antiinflamatorias y antioxidantes que los hacen útiles para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Además, todos estos resultados también demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad, enfermedades inflamatorias y enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo, como se explicó anteriormente. Además, estas actividades antiinflamatorias y antioxidantes demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención como nutracéuticos

[0301] Ejemplo 7.Análisis de los niveles de TLR2 en queratinocitos epidérmicos humanos

[0302] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0303] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,01 o 0,05 mg/mL en medio completo (Medio Basal Dérmico complementado con kit de crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina). Las células tratadas con 10 ng/ml de IFN solo se usaron como muestras de control positivo para la inducción de inflamación. Se usaron células no tratadas como muestras de control negativo (condición basal).

[0304] Para este estudio, las células HEKa se sembraron en una placa de 24 pocillos a una densidad de 50.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones estándar (DCBM complementado con el kit de crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina; 37°C, 95% de HR, 5% de CO<2>) durante 24 horas. Luego, los queratinocitos se trataron durante 24 horas con 10 ng/mL de IFN. A continuación, se removió el IFN y las células se incubaron con diferentes concentraciones del péptido de la presente invención, como se señaló anteriormente, durante 24 horas. Las muestras de control positivo (IFN solo) se incubaron con medio completo sin péptido durante este tiempo. Después del tratamiento, las células se lavaron con Dubelcco PBS (PBS también incluye cloruro de potasio) y se lisaron con RIPA y un raspador. Los lisados se recolectaron y centrifugaron para eliminar los desechos celulares y los concentrados de proteínas se mantuvieron a -80°C hasta que se usaron para la cuantificación de TLR2 con el kit ELISA DuoSet TLR2 Humano de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

[0305] Cada condición se realizó por triplicado (n=3) en tres experimentos independientes (N=3).

[0306] Los resultados aparecen resumidos en la Figura 10, en donde se puede ver que el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) es capaz de disminuir los niveles de TLR2 después de la exposición a IFN de una manera dependiente de la dosis, mostrando una disminución de hasta el 19% después del tratamiento con la concentración de péptido más alta. Por lo tanto, los péptidos de la presente invención tienen un papel protector contra la inflamación de la piel y son útiles para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Además, todos estos resultados también demuestran la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad y enfermedades inflamatorias, como se explicó anteriormente. Además, esta actividad antiinflamatoria demuestra la utilidad de los péptidos de la presente invención como nutracéuticos.

[0307] Ejemplo 8.Análisis de los niveles o síntesis de la enzima catalasa

[0308] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0309] Se preparó una solución madre del péptido en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,005, 0,01 o 0,05 mg/mL en medio completo (Medio Basal Dérmico complementado con Kit de Crecimiento de queratinocitos y 0,1% de Penicilina/Estreptomicina). Se usaron células no tratadas como muestras de control negativo (condición basal).

[0310] Para este estudio, las células HEKa se sembraron en una placa de 24 pocillos a una densidad de 50.000 células/pocillo y se mantuvieron en condiciones de cultivo estándar (DCBM; 37°C, 95% de HR, 5% de CO<2>) durante 24 horas. Luego, los queratinocitos se trataron durante 24 horas con el péptido de la presente invención a las concentraciones indicadas anteriormente. Después del tratamiento, las células se lavaron con Dubelcco PBS y se lisaron con RIPA y un raspador. Los lisados se recolectaron y centrifugaron para eliminar los desechos celulares y los concentrados de proteínas se mantuvieron a -80°C hasta que se usaron para la cuantificación de catalasa con el kit ELISA de catalasa humana, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Finalmente, para normalizar los datos, se cuantificó el contenido total de proteínas de cada muestra a través del kit Micro BCA Protein Assay, siguiendo las instrucciones del fabricante.

[0311] Cada condición se realizó al menos por triplicado (n=3) en tres experimentos independientes (N=3).

[0312] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en la Figura 11, en donde se puede observar que el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>(como un ejemplo de los péptidos de la presente invención) es capaz de aumentar los niveles de catalasa de una manera dependiente de la dosis llegando a un aumento del 47% a la concentración más alta. Estos resultados muestran que la capacidad de los péptidos de la presente invención proporciona una respuesta antioxidante y, por lo tanto, demuestra su utilidad para la prevención, reducción y/o tratamiento de la inflamación y el envejecimiento de la piel. Esta actividad antioxidante también demuestra la utilidad de los péptidos de la presente invención para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo (como se explicó anteriormente) y como nutracéuticos.

[0313] Ejemplo 9.Análisis de los niveles de TRF1

[0314] Para este ejemplo, los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>se prepararon de acuerdo con el ejemplo 1.

[0315] Como es ampliamente conocido en el estado de la técnica, en los vertebrados, los telómeros están compuestos por una repetición en tándem de la secuencia TTAGGG, unida por un complejo de seis proteínas conocido como shelterina que abarca TRF1, TRF2, TIN2, POT1, RAP1 y TPP1. El factor de unión repetida de telómeros 1 (TRF1) fue la primera shelterina descubierta (Zhong, Z., et al. (1992) Un factor de mamífero que se une a TTAGGG telomérico se repitein vitro. Mol Cell Biol 12, 4834-4843.), y es uno de los mejor caracterizados. TRF1 se une a las repeticiones TTAGGG de doble hebra y su abundancia en los telómeros es proporcional a la longitud de las repeticiones (de Lange, T. (2005) Shelterin: the protein complex that shapes and safeguards human telomeres. Genes. Dev. 19, 2100-2110 y Liu, L., et al. (2007) Telomere lengthening early in development. Nat. Cell Biol. 9: 1436-1441) siendo un buen reportero de la longitud de los telómerosin vivo.

[0316] Se sembraron 10.000 células CHA9.3 por pocillo en una placa de cultivo tisular de fondo negro transparente de 96 pocillos estéril usando 150 µL de medio DMEM complementado con 10 % de suero bovino fetal. Las células se incubaron a 37°C, 5% de CO<2>/aire humidificado durante 24 h.

[0317] En paralelo, los péptidos que se usarán en este ejemplo se pesaron y se diluyeron en dimetilsulfóxido (DMSO) o agua para generar una placa "madre". A partir de aquí, se preparó una placa de dilución intermedia.1,5 µL de cada solución de compuesto se dispensó automáticamente usando un robot de manejo de líquidos automatizado Biomek FX Dual Pod de la placa intermedia al medio de células sembradas para obtener la concentración final de 0,125 mg/mL para el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>y 0,063 mg/mL para el péptido SEQ ID NO: 3-NH<2>. Cada compuesto se analizó por duplicado. Esta concentración final para el cribado se decidió en función de los ensayos de viabilidad. También se incluyeron controles de agua o DMSO en cada placa como condición basal.

[0318] Después de una incubación de 24 horas a 37°C, aire humidificado con 5% de CO<2>, las células se procesaron para inmunofluorescencia. De forma breve, las células se fijaron con 4% de formaldehído durante 13 minutos en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y se lavaron dos veces nuevamente con PBS a temperatura ambiente. A continuación, las células se permeabilizaron con 0,2% de detergente Triton X-100 durante 10 minutos, se lavaron nuevamente con PBS y se permeabilizaron con 0,1% de citrato de sodio más 0,1% de Triton X-100 durante 5 minutos, el amortiguador restante se removió y se realizó un lavado final. Las células se bloquearon con 50 µM de PBS-Tween-20 al 0,05% más 3% de albúmina de suero bovino durante 60 minutos a temperatura ambiente. La inmunotinción se realizó mediante incubación con anticuerpo primario anti-TRF1 durante la noche a 4°C. Después de eso, las muestras se lavaron 3 veces con 0,05% de PBS-Tween-20, y el anticuerpo secundario anti-rata-555 se dispensó a 1:500 en PBS-Tween más 3% de BSA durante 60 minutos. Luego, las muestras se lavaron 3 veces con 0,05% de PBS-Tween-20 más otro lavado con PBS. Finalmente, se realizó una incubación con tinción de Hoechst de 1 µg/mL para generar máscaras que coincidieran con los núcleos celulares. Se usó el software SPSS para el análisis estadístico. La adquisición de imágenes se realizó en una plataforma automatizada confocal de disco giratorio Opera™ LX (PerkinElmer). Se adquirieron cuarenta imágenes con una lente de aumento de 40x bajo condiciones insaturantes y se analizó un promedio de 1 x 10<3>células de cada pocillo. La cuantificación de la fluorescencia a nivel de células individuales se realizó con la plataforma Acapella™ usando algoritmos de análisis incorporados para la identificación del área y la intensidad de los focos y los núcleos.

[0319] La viabilidad celular para cada condición también se evaluó comparando el número de núcleos con respecto a los controles.

[0320] Cada condición se realizó al menos por duplicado (n=2) en tres experimentos independientes (N=3). Para todos los datos se calcularon los valores medios de intensidad de TRF1 de los diferentes experimentos.

[0321] Los resultados obtenidos aparecen resumidos en las Figuras 12. Como se puede derivar directamente de la Figura, los péptidos de la presente invención (como se ejemplifica por los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>y SEQ ID NO: 3-NH<2>) proporcionan un aumento en TRF1, que, como se señaló anteriormente, está directamente relacionado con la longitud de los telómeros (aumento de la longitud de los telómeros), validando su utilidad de los péptidos de la presente invención para prevenir, reducir y/o tratar la inflamación y el envejecimiento de la piel, así como enfermedades relacionadas con la edad, enfermedades inflamatorias y enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo.

[0322] Ejemplo 10.Análisis de TRF1 y daño del ADN bajo condiciones de estrés oxidativo

[0323] Para este ejemplo, el péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>se preparó de acuerdo con el ejemplo 1.

[0324] Una solución madre del péptido preparado en DMSO a 50 mg/mL. Esta solución madre se diluyó adicionalmente para obtener las concentraciones de trabajo finales de 0,005 mg/mL, 0,01 mg/mL y 0,05 mg/mL de activo puro. Las células HEKa se sembraron en cubreobjetos en placas de 24 pocillos que contienen medio basal de células dérmicas. Luego, los cultivos se mantuvieron en la incubadora a 37°C para unirse y expandirse. Cuando la confluencia celular fue de alrededor del 50%, el medio se reemplazó por medio que comprendía el péptido a diferentes concentraciones de trabajo probadas (5, 10 o 50 µg/mL de péptido SEQ ID NO: 2-NH<2>) durante 24h. Posteriormente, el medio se reemplazó por un nuevo medio con el compuesto (para los pocillos en el experimento de condición basal) o medio con H<2>O<2>100 µM y el compuesto (para los pocillos en la condición de estrés oxidativo), durante otras 24 h.

[0325] Después del tratamiento, las células se cosecharon, se lavaron una vez con PBS y se trataron durante 30 segundos con amortiguador Triton X-100 para extracción nuclear y luego se lavaron nuevamente en PBS, se fijaron durante 10 min en 4% de formaldehído amortiguado, se lavaron en PBS y se mantuvieron a 4°C hasta que se procesaron. Para la inmunofluorescencia (IF), las células se permeabilizaron con 0,2% de PBS-Triton durante 10 min, se lavaron y bloquearon con suero bovino fetal durante una hora y 5% de BSA en PBS durante otra 1 h para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

[0326] Para la tinción de TRF1 y 53BP1, las muestras se incubaron durante la noche a 4°C con el anticuerpo primario correspondiente. Después de un lavado adecuado con PBS, las células se incubaron con 488-Alexa secundario durante 1 h a TA en una cámara húmeda. Las muestras en los portaobjetos se montaron en Prolong Gold con DAPI que se une fuertemente al ADN (tinción de núcleos), y las muestras se mantuvieron protegidas de la luz a 4°C hasta que se adquirieron imágenes microscópicas. Las señales fluorescentes en los portaobjetos se visualizaron en un microscopio ultraespectral confocal SP5-MP (Leica). Las imágenes microscópicas se adquirieron usando un objetivo 40x. La inmunofluorescencia se realizó en tres réplicas para cada condición y se adquirieron imágenes de al menos cuatro campos diferentes de cada cubreobjetos usando los mismos ajustes.

[0327] La señal se cuantificó usando el Software Definiens Developer XD.2. El análisis de imágenes se realizó a ciegas. Se usó el canal azul (tinción DAPI) para contar el número de núcleos por imagen. Se usaron color rojo y verde para determinar la intensidad de TRF1 y 53BP1, respectivamente. Luego, el número de focos de TRF1 o 53BP1 se dividió por el número de núcleos para obtener el número total de focos/núcleos de TRF1 o 53BP1 de cada imagen. Finalmente, todos los datos se normalizaron con respecto al control negativo: muestra basal para TRF1 y muestra tratada con H<2>O<2>para 53BP1, para obtener el % de focos de TRF1 o 53BP1 por núcleo.

[0328] Los resultados obtenidos para TRF1 aparecen resumidos en la Figura 13. Como se puede determinar fácilmente a partir de la figura, los péptidos de la presente invención (como se ejemplifica por los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>) proporcionan un aumento en TRF1, que, como se señaló anteriormente, está directamente relacionado con la longitud de los telómeros (aumento de la longitud de los telómeros), validando su utilidad de los péptidos de la presente invención para prevenir, reducir y/o tratar la inflamación y el envejecimiento de la piel.

[0329] Los resultados obtenidos para 53BP1 aparecen resumidos en la Figura 14. Como se puede determinar fácilmente a partir de la figura, los péptidos de la presente invención (como se ejemplifica por los péptidos SEQ ID NO: 2-NH<2>) proporcionan una disminución en los focos de 53BP1, es decir, una disminución en 53BP1, que, a su vez, indica una reducción en el número de roturas de doble cadena. Esto demuestra la capacidad de los péptidos para proteger las células del daño al ADN inducido por el estrés oxidativo. Por lo tanto, estos resultados validan la utilidad de los péptidos de la presente invención para prevenir, reducir y/o tratar la inflamación y el envejecimiento de la piel. Estos resultados también demuestran la capacidad antioxidante de los péptidos de los péptidos de la presente invención y, por lo tanto, su utilidad en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la edad y enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo, así como nutracéutico.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

1. Péptido de la fórmula (1):

R<1>-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-R<2>

(I)

sus isómeros, sales, solvatos y/o mezclas aceptables de los mismos, en donde el péptido se selecciona a partir de:

- R<1>-Gly-Tyr-Tyr-Glu-Leu-Asn-Asp-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 2-R<2>); o

- R<1>-Gly-Asn-Glu-Leu-Leu-Asp-Tyr-R<2>(R<1>-SEQ ID NO: 3-R<2>), y en donde

R<1>se selecciona de H, alifático no cíclico sustituido o insustituido, aliciclilo sustituido o insustituido, heterociclilo sustituido o insustituido, heteroarilalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido, aralquilo sustituido o insustituido y R<5>-CO-, en donde R<5>se selecciona del grupo formado por radical alquilo de C<1>-C<24>sustituido o insustituido, alquenilo de C<2>-C<24>sustituido o insustituido, alquinilo de C<2>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquilo de C<3>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquenilo de C<5>-C<24>sustituido o insustituido, cicloalquinilo de C<8>-C<24>sustituido o insustituido, arilo de C<6>-C<30>sustituido o insustituido, aralquilo de C<7>-C<24>sustituido o insustituido, anillo de heterociclilo sustituido o insustituido de 3 a 10 miembros, y heteroarilalquilo sustituido o insustituido de 2 a 24 átomos de carbono y 1 a 3 átomos distintos de carbono y una cadena de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; y

R<2>se selecciona de H, -NR<3>R<4>-, -OR<3>y -SR<3>, en donde R<3>y R<4>se seleccionan independientemente de H, grupo alifático no cíclico sustituido o insustituido, aliciclilo sustituido o insustituido, heterociclilo sustituido o insustituido, heteroarilalquilo sustituido o insustituido, arilo sustituido o insustituido y aralquilo sustituido o insustituido;

alternativamente, R<1>y R<2>están ausentes y AA1 está unido directamente al aminoácido C-terminal del péptido, formando de esta manera un péptido cíclico.

2. Péptido de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque R<1>es H.

3. Péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque R<2>es NH<2>.

4. Composición que comprende un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Uso como un cosmético de un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o de una composición de acuerdo con la reivindicación 4 en un sujeto en necesidad del mismo.

6. Uso como un cosmético de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado porque el uso como cosmético es: para prevenir, reducir y/o tratar el envejecimiento de la piel; y/o para la mejora de la firmeza y/o elasticidad de la piel.

7. Uso como un cosmético de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque los signos del envejecimiento de la piel son arrugas, aspereza de la piel, piel más suelta o piel flácida.

8. Composición de acuerdo con la reivindicación 4 o péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para usarse como un medicamento.

9. Composición de acuerdo con la reivindicación 4 o péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para usarse en la prevención, mejora y/o tratamiento de una enfermedad relacionada con la edad, una enfermedad inflamatoria tal como inflamación o una enfermedad relacionada con el estrés oxidativo.

10. Uso como un nutracéutico de un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o de una composición de acuerdo con la reivindicación 4.

11. Nutracéutico que comprende un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.