ES3058577T3 - Conjugated hepcidin mimetics for use in treating of polycythemia vera - Google Patents

Conjugated hepcidin mimetics for use in treating of polycythemia vera

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ES3058577T3
ES3058577T3 ES20860676T ES20860676T ES3058577T3 ES 3058577 T3 ES3058577 T3 ES 3058577T3 ES 20860676 T ES20860676 T ES 20860676T ES 20860676 T ES20860676 T ES 20860676T ES 3058577 T3 ES3058577 T3 ES 3058577T3
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hepcidin
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Gregory Thomas Bourne
Roopa Taranath
Suneel Kumar Gupta
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Protagonist Therapeutics Inc
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Abstract

La presente invención proporciona análogos de hepcidina y composiciones farmacéuticas relacionadas y su uso en el tratamiento de la policitemia vera. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Miméticos de hepcidina conjugados para su uso en el tratamiento de la policitemia vera
[0003] Campo de la invención
[0004] La presente invención se refiere, entre otras cosas, a ciertos análogos de péptidos de hepcidina, incluidos tanto monómeros de péptidos como dímeros de péptidos, y conjugados y derivados de los mismos, y al uso de los análogos de péptidos en el tratamiento y/o prevención de la policitemia vera (PV).
[0005] Antecedentes
[0006] La hepcidina (también conocida como LEAP-1), una hormona peptídica producida por el hígado, es un regulador de la homeostasis del hierro en humanos y otros mamíferos. La hepcidina actúa uniéndose a su receptor, el canal de exportación de hierro ferroportina, provocando su internalización y degradación. La hepcidina humana es un péptido de 25 aminoácidos (Hep25). Véase Krause et al. (2000) FEBS Lett 480:147-150, y Park et al. (2001) J Biol Chem 276:7806-7810. La estructura de la forma bioactiva de 25 aminoácidos de la hepcidina es una horquilla simple con 8 cisteínas que forman 4 enlaces disulfuro como lo describió Jordan et al. J Biol Chem 284:24155-67. La región N-terminal es necesaria para la función reguladora del hierro, y la eliminación de 5 residuos de aminoácidos N-terminales produce una pérdida de la función reguladora del hierro. Véase Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33.
[0007] La actividad anormal de la hepcidina está asociada con enfermedades por sobrecarga de hierro, incluida la hemocromatosis hereditaria (HH) y las anemias por sobrecarga de hierro. La hemocromatosis hereditaria es una enfermedad genética por sobrecarga de hierro causada principalmente por deficiencia de hepcidina o, en algunos casos, por resistencia a la hepcidina. Esto permite una absorción excesiva de hierro de la dieta y el desarrollo de una sobrecarga de hierro. Las manifestaciones clínicas de la HH pueden incluir enfermedad hepática (por ejemplo, cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular), diabetes e insuficiencia cardíaca. Actualmente, el único tratamiento para la HH es la flebotomía regular, lo cual resulta muy engorroso para los pacientes. Las anemias por sobrecarga de hierro son anemias hereditarias con eritropoyesis ineficaz, como la β-talasemia, que se acompañan de una sobrecarga grave de hierro. Las complicaciones derivadas de la sobrecarga de hierro son la principal causa de morbilidad y mortalidad en estos pacientes. La deficiencia de hepcidina es la principal causa de sobrecarga de hierro en pacientes no transfundidos y contribuye a la sobrecarga de hierro en pacientes transfundidos. El tratamiento actual para la sobrecarga de hierro en estos pacientes es la quelación de hierro, que es muy engorrosa, a veces ineficaz y se acompaña de efectos secundarios frecuentes. La hepcidina tiene una serie de limitaciones que restringen su uso como fármaco, incluido un proceso de síntesis difícil debido en parte a la agregación y precipitación de la proteína durante el plegamiento, lo que a su vez conduce a un alto costo de producción.
[0008] Las patentes de EE. UU. US 9,822,157 y US 10,030,061, describen nuevos análogos de hepcidina y su uso para tratar enfermedades por sobrecarga de hierro, que incluyen la hemocromatosis hereditaria y las anemias por sobrecarga de hierro.
[0009] La publicación de la solicitud PCT, WO15200916, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina y su uso para tratar enfermedades por sobrecarga de hierro.
[0010] La publicación de la solicitud PCT, WO17117411, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina con vidas mediasin vivomejoradas y su uso para tratar enfermedades por sobrecarga de hierro.
[0011] La publicación de solicitud PCT, WO18048944, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina y su uso para tratamiento y/o prevención de la sobrecarga de hierro en un sujeto y/o reducir los niveles de hierro sérico en un sujeto.
[0012] La publicación de la solicitud PCT, WO18128828, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina y su uso para tratar trastornos asociados con la hepcidina, incluida la profilaxis y el tratamiento de enfermedades por sobrecarga de hierro como la hemocromatosis, anemias por sobrecarga de hierro como la talasemia y enfermedades asociadas con eritropoyesis ineficaz o aumentada.
[0013] La publicación de solicitud PCT, WO17068089, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina (inhibidores de la ferroportina) y su uso para tratar la talasemia y la hemocromatosis.
[0014] La patente de EE. UU., US9315545, describe análogos novedosos adicionales de la hepcidina y su uso para tratar enfermedades del metabolismo del hierro, beta talasemia, hemocromatosis, anemias por sobrecarga de hierro, enfermedad hepática alcohólica o hepatitis C crónica.
[0015] La policitemia vera (PV) es un trastorno clonal trilineal crónico y progresivo que se caracteriza por una mayor proliferación/acumulación de células mieloides, eritroides y megacariocíticas y está caracterizada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como una neoplasia mieloproliferativa (Arber et al., 2016,127(20):2391-405). El diagnóstico se define por dos criterios; el primero es el aumento de la masa de glóbulos rojos, la biopsia de médula ósea que muestra hipercelularidad trilineal y la presencia de mutaciones JAK2V617F o JAK2 exón 12 y el segundo criterio incorpora policitemia, confirmación por biopsia de médula ósea y niveles por debajo de los normal de eritropoyetina sérica (Arber et al., 2016,127(20):2391-405).
[0016] Se estima que 148.000 personas en los Estados Unidos viven con PV con una edad mediana al momento del diagnóstico de 61 años (Stein et al., J Clin Oncol.2015 Nov 20;33(33):3953-60). Los síntomas de la policitemia, relacionados con la hiperviscosidad sanguínea, incluyen fatiga, dolor óseo, dolores de cabeza, mareos, trastornos visuales, dolor torácico atípico, prurito, eritromelalgia y parestesia (Tefferi et al., Blood Cancer J.
[0017] 2018, 8(1):3). Las características clínicas incluyen esplenomegalia, complicaciones trombóticas y hemorrágicas, y riesgo de transformación leucémica.
[0018] Dado que la PV es una enfermedad caracterizada por un aumento de la eritropoyesis, se ha demostrado en modelos animales que altas dosis de miméticos de hepcidina pueden mejorar esta enfermedad al disminuir la eritropoyesis (Casu et al., Blood.2016;128(2):265-276). En ratones con PV que expresan la mutación ortóloga JAK2 causante de la PV humana, la administración de minihepcidina reduce significativamente la esplenomegalia y normaliza el hematocrito. Estos estudios indican que las minihepcidinas similares a fármacos tienen potencial como futuras terapias para la β-talasemia y la PV no transfundidas (Casu et al., Blood.
[0019] 2016;128(2):265-276).
[0020] Es evidente la necesidad de nuevos agentes terapéuticos y métodos para tratar y prevenir la PV, incluida la PV en pacientes de alto riesgo o aquellos que no pueden tolerar la flebotomía. La presente invención aborda dichas necesidades de tratamiento de la PV.
[0021] Breve compendio de la invención
[0022] La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas.
[0023] La presente invención proporciona un análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la policitemia vera en un sujeto humano que lo necesite, en donde el análogo de hepcidina es:
[0026]
[0028] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(isoGlu-Palm))FEPRSKGCK-NH2 (SEQ ID NO:45);en donde los aminoácidos son L-aminoácidos; y en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra mediante inyección subcutánea; al sujeto se le administra entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas.
[0029] En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina se administra al sujeto en una composición farmacéutica que comprende uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
[0030] En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 50 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 40 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 25 mg o aproximadamente 20 mg. En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg. En otras realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 40 mg.
[0031] En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto aproximadamente una vez por semana. En otras realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana.
[0032] En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg o aproximadamente 40 mg aproximadamente una vez por semana. En otras realizaciones, el análogo de hepcidina se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg o aproximadamente 40 mg aproximadamente dos veces por semana.
[0033] En algunas realizaciones, la policitemia vera es una policitemia vera que requiere flebotomía.
[0034] En algunas realizaciones, el sujeto es diagnosticado con policitemia vera y ha recibido al menos tres flebotomías para alcanzar un hematocrito objetivo <45% en las 24 semanas previas a la administración del análogo de hepcidina o sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo al sujeto.
[0035] En algunas realizaciones, el método comprende además determinar el hematocrito del sujeto en uno o más puntos temporales posteriores a la administración del análogo de hepcidina o de la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y mantener o ajustar la cantidad del análogo de hepcidina o de la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo administrada al sujeto, en donde la cantidad se incrementa si el hematocrito determinado del sujeto es mayor que 45 %, en cuyo caso la cantidad se disminuye si el hematocrito determinado del sujeto es menor que 37,5 % o 40 %, y se mantiene la cantidad si el hematocrito determinado del sujeto está entre 37,5 % y 45 % o entre 40 % y 44 %. En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo se administra inicialmente en una dosis de aproximadamente 20 mg del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y en donde la cantidad de ajuste es de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para lograr o mantener un hematocrito <45 %.
[0036] En algunas realizaciones, el sujeto es tratado con terapia citorreductora, opcionalmente en la que la terapia citorreductora comprende hidroxiurea.
[0037] En algunas realizaciones, el método comprende administraciones múltiples de una cantidad eficaz del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo durante un período de tiempo, en donde el método comprende además determinar el hematocrito del sujeto después de una o más de las administraciones múltiples del análogo de hepcidina o de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y mantener o ajustar la cantidad del análogo de hepcidina o de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo que se administra a continuación al sujeto, en donde la siguiente cantidad administrada se aumenta si el hematocrito determinado del sujeto está por encima de un rango aceptable basado en el sexo y el estado de embarazo del sujeto, en donde la siguiente cantidad administrada se disminuye si el hematocrito determinado del sujeto está por debajo del rango aceptable, y en donde la siguiente cantidad administrada es la misma que la cantidad administrada anteriormente si el hematocrito determinado del sujeto está dentro del rango aceptable. También se describen métodos para tratar la policitemia vera en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición farmacéutica que comprende un análogo de hepcidina y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde el análogo de hepcidina comprende un péptido que comprende la Fórmula (I):
[0038] R1-X-Y-R2 (I) (SEQ ID NO: 1)
[0039] o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,
[0040] en donde
[0041] R1 es hidrógeno, un alquilo C1-C6, un arilo C6-C12, un alcanoilo C1-C20 o pGlu; R2 es NH<2>u OH;
[0042] X es una secuencia peptídica que tiene la fórmula II
[0043] X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (II) (SEQ ID NO: 2)
[0044] en donde
[0045] X1 es Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp o está ausente;
[0046] X2 es Thr, Ala o D-Thr;
[0047] X3 es His, Lys, o D-His;
[0048] X4 es Phe, Ala, Dpa o D-Phe;
[0049] X5 es Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro o bhPro;
[0050] X6 es Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile o D-Cys;
[0051] X7 es Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile o D-Cys;
[0052] X8 es Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu o D-Ile;
[0053] X9 es Phe o bhPhe; y
[0054] X10 es Lys, Phe o está ausente;
[0055] en donde si Y está ausente, X7 es Ile; e
[0056] Y es una secuencia peptídica que tiene la fórmula III
[0057] Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (III) (SEQ ID NO:3) en donde
[0058] Y1 es Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser o está ausente;
[0059] Y2 es Pro, Ala, Cys, Gly o está ausente;
[0060] Y3 es Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp o está ausente;
[0061] Y4 es Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr o está ausente;
[0062] Y5 es Lys, Met, Arg, Ala o está ausente;
[0063] Y6 es Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val o está ausente;
[0064] Y7 es Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val o está ausente;
[0065] Y8 es Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg o está ausente;
[0066] Y9 es Cys, Tyr o está ausente;
[0067] Y10 es Met, Lys, Arg, Tyr o está ausente;
[0068] Y11 es Arg, Met, Cys, Lys o está ausente;
[0069] Y12 es Arg, Lys, Ala o está ausente;
[0070] Y13 es Arg, Cys, Lys, Val o está ausente;
[0071] Y14 es Arg, Lys, Pro, Cys, Thr o está ausente; y
[0072] Y15 es Thr, Arg o está ausente;
[0073] en donde dicho péptido de fórmula I está opcionalmente PEGilado en R1, X o Y, y en donde una cadena lateral de un aminoácido del péptido está opcionalmente conjugada a un sustituyente lipófilo o una fracción polimérica. Alternativamente, la fórmula II se muestra como se indica arriba, pero X3 es D-Lys.
[0074] R1 puede ser hidrógeno, ácido isovalérico, ácido isobutírico o acetilo.
[0075] La fracción de extensión de vida media se puede seleccionar entre C12 (ácido láurico), C14 (ácido mirístico), C16 (ácido palmítico), C18 (ácido esteárico), C20, diácido C12, diácido C14, diácido C16, diácido C18, diácido C20, biotina y ácido isovalérico. La fracción de extensión de vida media puede unirse a una fracción enlazadora que está unida al péptido. La fracción de extensión de vida media puede aumentar el peso molecular del análogo de hepcidina en aproximadamente 50 D hasta aproximadamente 2 KD. La fracción de extensión de vida media puede aumentar la vida media en suero, mejorar la solubilidad y/o aumentar la biodisponibilidad del análogo de hepcidina.
[0076] El análogo de péptido puede comprender una fracción de ácido isovalérico conjugada a un residuo de Asp N-terminal.
[0077] El análogo de péptido puede comprender un residuo C-terminal amidado.
[0078] El análogo de péptido puede comprender la secuencia: Asp-Thr-His-Phe-Pro-Cys-Ile-Lys-Phe-Glu-Pro-Arg-Ser-Lys-Gly-Cys-Lys (SEQ ID NO: 19), o comprender una secuencia que tenga al menos un 80 %, al menos un 90 % o al menos un 94 % de identidad con esta secuencia.
[0079] El análogo peptídico puede comprender la secuencia: Asp-Thr-His-Phe-Pro-Cys-Ile-Lys-Phe-Pro-Arg-Ser-Lys-Gly-Cys-Lys (SEQ ID NO: 19), o comprender una secuencia que tenga al menos un 80 %, al menos un 90 % o al menos un 94 % de identidad con esta secuencia.
[0080] También se describe aquí un polinucleótido que codifica un péptido de un análogo o dímero de hepcidina (o subunidad monomérica de un dímero).
[0081] También se describe aquí un vector que comprende el polinucleótido.
[0082] También se describe aquí una composición farmacéutica que comprende un análogo, dímero, polinucleótido o vector de hepcidina y un portador, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
[0083] También se describe aquí un método para unir una ferroportina o inducir la internalización y degradación de la ferroportina, que comprende poner en contacto la ferroportina con al menos un análogo, dímero o composición de hepcidina como se describió anteriormente.
[0084] En ciertas realizaciones, el método comprende además determinar el nivel de hematocrito del sujeto en uno o más puntos temporales posteriores a la administración del análogo de hepcidina, y mantener o ajustar la cantidad del análogo de hepcidina o de la sal farmacéuticamente aceptable del mismo administrada al sujeto, en donde la cantidad se incrementa si el hematocrito determinado del sujeto es mayor que 44 % o 45 %, en donde la cantidad se disminuye si el hematocrito determinado del sujeto es menor que 37,5 % o 40 %, y se mantiene la cantidad si el hematocrito determinado del sujeto está entre 37,5 % y 45 % o entre 37,5 % y 44 %, entre 40 % y 45 %, o entre 40 % y 44 %.
[0085] También se describe aquí un dispositivo que comprende una composición farmacéutica de la presente invención, para la administración de un análogo de hepcidina de la invención a un sujeto.
[0086] También se describe aquí un kit que comprende una composición farmacéutica de la invención, empaquetado con un reactivo, un dispositivo o un material instructivo, o una combinación de los mismos.
[0087] En realizaciones particulares, la policitemia vera es policitemia vera que requiere flebotomía, o policitemia vera que requiere flebotomía en un paciente de bajo riesgo.
[0088] En realizaciones particulares, el sujeto es un paciente con policitemia vera de bajo riesgo, un paciente con policitemia vera de alto riesgo, un paciente con policitemia vera sintomático que requiere flebotomía, un paciente de alto riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía o un paciente de bajo riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía.
[0089] En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica se administra aproximadamente semanalmente durante un período de tiempo.
[0090] En ciertas realizaciones, la cantidad de análogo o péptido de hepcidina administrado se incrementa durante un período de tiempo.
[0091] En ciertas realizaciones, el método da como resultado una disminución del nivel de hematocrito del sujeto a ≤45 %, una disminución del hematocrito del sujeto de al menos un 3 % y/o un aumento de la ferritina sérica del sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto permanece libre de flebotomías durante un ciclo de tratamiento, por ejemplo, un tratamiento aproximadamente una vez por semana durante un período de tiempo.
[0092] Breve descripción de las figuras
[0093] Las figuras 1A y 1B describen los datos obtenidos del experimento de análisis Cobas Iron2 para el compuesto A y el compuesto B. La figura 1A es una gráfica que muestra los niveles de hierro sérico y la concentración sérica del compuesto A en los tiempos indicados tras el tratamiento con el compuesto A. La figura 1B es una gráfica que muestra los niveles de hierro sérico y la concentración sérica del compuesto B en los tiempos indicados tras el tratamiento con el compuesto B.
[0094] La figura 2 muestra el perfil temporal del hematocrito y los índices RBC en monos Cynomolgus machos después de la administración subcutánea de vehículo (∘) o compuesto A a dosis de 1 (•), 3 (□) y 10 (■) mg/kg/dosis una vez por semana durante 4 administraciones con un período de recuperación de 28 días. El compuesto A indujo cambios en los índices hematológicos secundarios (concentración media de hemoglobina corpuscular, MCHC, y hemoglobina corpuscular media, MCH) indicativos de eritropoyesis con restricción de hierro. Cada punto representa la media ± SD de hasta 6 animales en el tratamiento principal (todos los grupos) y hasta 2 animales en la fase de recuperación (vehículo y 10 mg/kg de compuesto A). Las flechas indican cuándo se administró el compuesto A.
[0095] La figura 3 demuestra que el compuesto A induce cambios significativos en el hematocrito (Hct) y en los índices hematológicos secundarios. Se evaluaron las alteraciones en el Hct, el volumen corpuscular medio (MCV), la hemoglobina corpuscular media (MCH), concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC) después de la administración subcutánea del vehículo (∘) o del compuesto A a dosis de 0,6 (•), 2 (□) y 6 (■) mg/kg una vez por semana durante 13 semanas consecutivas, seguido de un período de recuperación de 35 días. Las flechas representan los días de administración a partir del Día 1. Cada punto representa la media ± SD de hasta 6 animales/sexo en la fase principal y hasta 2 animales/sexo en la fase de recuperación.
[0096] La figura 4 muestra que los perfiles de bilirrubina son consistentes con la eritropoyesis restringida por hierro en monos Cynomolgus con niveles adecuados de hierro. Niveles de bilirrubina total en monos Cynomolgus machos (izquierda) y hembras (derecha) después de la administración subcutánea de vehículo (∘) o compuesto A a dosis de 0,6 (•), 2 (□) y 6 (■) mg/kg una vez por semana durante 13 semanas consecutivas, seguido de un período de recuperación de 35 días. Las flechas representan los días de administración a partir del día 1. Cada punto representa la media ± SD de hasta 6 animales/sexo en la fase principal y hasta 2 animales/sexo en la fase de recuperación.
[0097] La figura 5 muestra perfiles de plaquetas en monos Cynomolgus machos (izquierda) y hembras (derecha) después de la administración subcutánea de vehículo (∘) o compuesto A a dosis de 0,6 (•), 2 (□) y 6 (■) mg/kg una vez por semana durante 13 semanas consecutivas, seguido de un período de recuperación de 35 días. Las flechas representan los días de administración a partir del día 1. Cada punto representa la media ± SD de hasta 6 animales/sexo en la fase principal y hasta 2 animales/sexo en la fase de recuperación.
[0098] La figura 6 proporciona un diagrama del diseño del ensayo clínico de fase II.
[0099] La figura 7 es una línea de tiempo que muestra el momento de la flebotomía terapéutica y el tratamiento con las dosis indicadas del compuesto A para trece pacientes humanos con PV.
[0100] La figura 8 es un gráfico que muestra los niveles de ferritina (ng/mL) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9.
[0101] La figura 9 es un gráfico que muestra el TSAT (%) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9. La figura 10 es un gráfico que muestra el MCV (fL) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9. La figura 11 es un gráfico que muestra la MCH (pg) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9. La figura 12 es un gráfico que muestra el hematocrito (%) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9.
[0102] La figura 13 es un gráfico que muestra los eritrocitos (10<6>/uL) en pacientes con PV tratados con el compuesto A en los puntos temporales indicados. Los números de sujetos se correlacionan con los que se muestran en la Tabla 9.
[0103] La figura 14 es un gráfico que muestra las plaquetas (10<3>/uL) en pacientes con PV antes y después del tratamiento con las dosis indicadas del compuesto A en los puntos temporales indicados. Para las Figuras 14-16, el número de sujeto indicado se correlaciona con el número de sujeto proporcionado en la Tabla 9 de la siguiente manera: 1501-01 = 3; 1501-02 = 5; 1502-1 = 1; 1502-02 = 2; 1502-04 = 4; 1505-01 = 6; 1505-02 = 7; y 1509-01 = 8.
[0104] La figura 15 es un gráfico que muestra los reticulocitos (%) en pacientes con PV antes y después del tratamiento con las dosis indicadas del compuesto A en los puntos temporales indicados.
[0105] La figura 16 es un gráfico que muestra los leucocitos (/uL) en pacientes con PV antes y después del tratamiento con las dosis indicadas del compuesto A en los puntos temporales indicados.
[0106] Las figuras 17A y 17B muestran las concentraciones plasmáticas del compuesto A en pacientes con PV en diferentes tiempos después de la administración de las cantidades indicadas del compuesto A. La figura 17A muestra datos para puntos temporales individuales y la figura 17B muestra promedios en intervalos de tiempo específicos.
[0107] Descripción detallada de la invención
[0108] La presente divulgación se dirige generalmente al uso de péptidos análogos de hepcidina para tratar y prevenir la policitemia vera (PV).
[0109] La hepcidina (también conocida como LEAP-1), una hormona peptídica producida por el hígado, es un regulador de la homeostasis del hierro en humanos y otros mamíferos. La hepcidina actúa uniéndose a su receptor, el canal de exportación de hierro ferroportina, provocando su internalización y degradación. La hepcidina humana es un péptido de 25 aminoácidos (Hep25). Véase Krause et al. (2000) FEBS Lett 480:147-150, y Park et al. (2001) J Biol Chem 276:7806-7810. La estructura de la forma bioactiva de 25 aminoácidos de la hepcidina es una horquilla simple con 8 cisteínas que forman 4 enlaces disulfuro como lo describió Jordan et al. J Biol Chem 284:24155-67. La región N-terminal es necesaria para la función reguladora del hierro, y la eliminación de 5 residuos de aminoácidos N-terminales produce una pérdida de la función reguladora del hierro. Véase Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33.
[0110] La actividad anormal de la hepcidina está asociada con enfermedades por sobrecarga de hierro, incluida la hemocromatosis hereditaria (HH) y las anemias por sobrecarga de hierro. La hemocromatosis hereditaria es una enfermedad genética por sobrecarga de hierro causada principalmente por deficiencia de hepcidina o, en algunos casos, por resistencia a la hepcidina. Esto permite una absorción excesiva de hierro de la dieta y el desarrollo de una sobrecarga de hierro. Las manifestaciones clínicas de la HH pueden incluir enfermedad hepática (por ejemplo, cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular), diabetes e insuficiencia cardíaca. Las anemias por sobrecarga de hierro son anemias hereditarias con eritropoyesis ineficaz, como la β-talasemia, que se acompañan de una sobrecarga grave de hierro.
[0111] La hepcidina tiene una serie de limitaciones que restringen su uso como fármaco, incluido un proceso de síntesis difícil debido en parte a la agregación y precipitación de la proteína durante el plegamiento, lo que a su vez conduce a un alto coste de los productos. La presente divulgación proporciona péptidos análogos de la hepcidina que poseen actividad de hepcidina y que además poseen otras propiedades físicas beneficiosas, como una mayor solubilidad, estabilidad y/o potencia, de modo que se puedan producir productos biológicos similares a la hepcidina de forma asequible y utilizarlos para tratar y prevenir la policitemia vera.
[0112] La presente invención también se refiere en general a péptidos análogos de hepcidina y métodos para fabricarlos y utilizarlos. En ciertas realizaciones, los análogos de hepcidina exhiben una o más actividades de hepcidina. En ciertas realizaciones, la presente invención se refiere a análogos de péptidos de hepcidina que comprenden una o más subunidades peptídicas que forman estructuras cíclicas a través de un enlace intramolecular, por ejemplo, un enlace disulfuro intramolecular. En realizaciones particulares, la estructura ciclada presenta mayor potencia y selectividad en comparación con los péptidos de hepcidina no ciclados y sus análogos. En realizaciones particulares, los péptidos análogos de la hepcidina de la presente invención presentan vidas medias aumentadas, por ejemplo, cuando se administran por vía oral, en comparación con la hepcidina o análogos de hepcidina anteriores.
[0113] Definiciones y nomenclatura
[0114] Salvo que se defina lo contrario en el presente documento, los términos científicos y técnicos empleados en esta solicitud tendrán el significado comúnmente entendido por los expertos en la materia. En general, la nomenclatura y las técnicas empleadas en relación con la química, la biología molecular, la biología celular y del cáncer, la inmunología, la microbiología, la farmacología y la química de proteínas y ácidos nucleicos, descritas en el presente documento, son las que se conocen y utilizan habitualmente en la técnica.
[0115] En el presente documento, los siguientes términos tendrán los significados que se les atribuyen a menos que se especifique lo contrario.
[0116] A lo largo de esta memoria descriptiva, se entenderá que la palabra "comprender" o variaciones como "comprende" o "que comprende" implican la inclusión de un número entero (o componentes) o grupo de números enteros (o componentes), pero no la exclusión de cualquier otro número entero (o componentes) o grupo de números enteros (o componentes).
[0117] Las formas en singular “un”, “una” y “el/la” incluyen las formas en plural a menos que el contexto claramente indique lo contrario.
[0118] La expresión "que incluye" se usa para decir "que incluye pero no está limitado a ello". "Que incluye" y "que incluye pero no está limitado a ello" se utilizan de manera intercambiable.
[0119] Los términos "paciente", "sujeto" e "individuo" pueden usarse indistintamente y se refieren tanto a un ser humano como a un animal no humano. Estos términos incluyen mamíferos como los humanos, primates, animales de granja (por ejemplo, bovinos, porcinos), animales de compañía (por ejemplo, caninos, felinos) y roedores (por ejemplo, ratones y ratas). El término “mamífero” se refiere a cualquier especie de mamífero tal como ser humano, ratón, rata, perro, gato, hámster, conejillo de indias, conejo, ganado y similares.
[0120] El término "péptido", tal como se usa en el presente documento, hace referencia de manera general a una secuencia de dos o más aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. Se debería comprender que este término no connota una longitud específica de un polímero de aminoácidos, ni tampoco se pretende que impliquen o distingan si la proteína se produce mediante el uso de técnicas recombinantes, síntesis enzimática o química, o si es de origen natural.
[0121] El término "análogo de péptido", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere en términos generales a monómeros de péptido y dímeros de péptido que comprenden una o más características estructurales y/o actividades funcionales en común con la hepcidina, o una región funcional de la misma. En ciertas realizaciones, un análogo de péptido incluye péptidos que comparten una identidad sustancial de secuencia de aminoácidos con la hepcidina, por ejemplo, péptidos que comprenden una o más inserciones, deleciones o sustituciones de aminoácidos en comparación con una hepcidina de tipo salvaje, por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de la hepcidina humana. En ciertas realizaciones, un análogo de péptido comprende una o más modificaciones adicionales, como por ejemplo, la conjugación a otro compuesto. El término "análogo de péptido" abarca cualquier monómero de péptido o dímero de péptido de la presente invención. En ciertos casos, un "análogo de péptido" también puede denominarse, o alternativamente, en el presente documento como "análogo de hepcidina", "análogo de péptido de hepcidina" o "péptido análogo de hepcidina".
[0122] Las expresiones "identidad de secuencia", "porcentaje de identidad", "porcentaje de homología" o, por ejemplo, que comprende una "secuencia 50 % idéntica a", tal como se utilizan en el presente documento, se refieren al grado en que las secuencias son idénticas nucleótido por nucleótido o aminoácido por aminoácido en una ventana de comparación. Por tanto, el "porcentaje de identidad de secuencia" se puede calcular comparando dos secuencias alineadas óptimamente sobre la ventana de comparación, determinando la cantidad de posiciones en las que la base de ácido nucleico (por ejemplo, A, T, C, G, I) o el residuo de aminoácidos idéntico (por ejemplo, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys y Met)aparece en ambas secuencias para proporcionar la cantidad de posiciones emparejadas, dividiendo la cantidad de posiciones emparejadas entre la cantidad total de posiciones en la ventana de comparación (es decir, el tamaño de ventana) y multiplicando el resultado por 100 para proporcionar el porcentaje de identidad de secuencia.
[0123] Los cálculos de similitud de secuencia o identidad de secuencia entre secuencias (los términos se utilizan indistintamente en el presente documento) se pueden realizar de la siguiente manera. Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácido o dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean a los efectos de realizar una comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir espacios en uno o ambos de una primera y una segunda secuencia de aminoácido o ácido nucleico para su alineamiento óptimo y a los efectos de la comparación, se pueden obviar las secuencias no homólogas). En ciertas realizaciones, la longitud de una secuencia de referencia alineada con fines de comparación es al menos 30 %, preferiblemente al menos 40 %, más preferiblemente al menos 50 %, 60 % e incluso más comúnmente al menos 70 %, 80 %, 90 %, 100 % de la longitud de la secuencia de referencia. Luego, se comparan los residuos aminoácidos o los nucleótidos en posiciones de aminoácido o de nucleótidos correspondientes. Cuando una posición en la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente en la segunda secuencia, las moléculas son idénticas en dicha posición.
[0125] El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas que comparten las secuencias, teniendo en cuenta el número de espacios, y la longitud de cada espacio, que necesita introducirse para el alineamiento óptimo de las dos secuencias.
[0127] La comparación de secuencias y determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias puede lograrse mediante el uso de un algoritmo matemático. En algunas realizaciones, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se determina mediante el algoritmo de Needleman y Wunsch, (1970, J. Mol. Biol. 48: 444-453) , incorporado al programa GAP del paquete de software GCG, utilizando una matriz Blossum 62 o una matriz PAM250, con un peso del espacio de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. En otra realización preferida, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de nucleótidos se determina mediante el programa GAP del paquete de software GCG, utilizando una matriz NWSgapdna.CMP, con un peso de espacio de 40, 50, 60, 70 u 80 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Otro conjunto ejemplar de parámetros incluyen una matriz de puntuación Blossum 62 con una penalización por espacio de 12, una penalización por extensión de espacio de 4 y una penalización por desplazamiento de marco de lectura de 5. El porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos también se puede determinar utilizando el algoritmo de E. Meyers y W. Miller (1989, Cabios, 4: 11-17) que se ha incorporado al programa ALIGN (versión 2.0), utilizando una tabla de residuos de peso PAM120, una penalización por longitud de espacio de 12 y una penalización por espacio de 4.
[0129] Las secuencias peptídicas descritas aquí pueden usarse como una "secuencia de consulta" para realizar una búsqueda en bases de datos públicas para, por ejemplo, identificar otros miembros de la familia o secuencias relacionadas. Estas búsquedas se pueden realizar utilizando los programas NBLAST y XBLAST (versión 2.0) de Altschul, et al., (1990, J. Mol. Biol, 215: 403-10). Se pueden realizar búsquedas de nucleótidos BLAST con el programa NBLAST, puntuación = 100, longitud de palabra = 12 para obtener secuencias de nucleótidos homólogas a las moléculas de ácido nucleico de la invención. Las búsquedas de proteínas BLAST se pueden realizar con el programa XBLAST, puntuación=50, longitud de palabra=3 para obtener secuencias de aminoácidos homólogas a las moléculas de proteína de la invención. Para obtener alineamientos con espacios para fines de comparación, se puede utilizar Gapped BLAST como se describe en Altschul et al. (Nucleic Acids Res.25:3389-3402, 1997). Al utilizar los programas BLAST y Gapped BLAST, se pueden utilizar los parámetros predeterminados de los respectivos programas (por ejemplo, XBLAST y NBLAST).
[0131] El término "sustitución conservadora" tal como se utiliza en el presente documento denota que uno o más aminoácidos son reemplazados por otro residuo biológicamente similar. Entre los ejemplos se incluye la sustitución de residuos de aminoácidos con características similares, por ejemplo, aminoácidos pequeños, aminoácidos ácidos, aminoácidos polares, aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos y aminoácidos aromáticos. Véase, por ejemplo, la tabla siguiente. En algunas realizaciones de la invención, uno o más residuos de Met se sustituyen por norleucina (Nle), que es un bioisóstero de Met, pero que, a diferencia de Met, no se oxida fácilmente. En algunas realizaciones, uno o más residuos de Trp se sustituyen por Phe, o uno o más residuos de Phe se sustituyen por Trp, mientras que en algunas realizaciones, uno o más residuos de Pro se sustituyen por Npc, o uno o más residuos de Npc se sustituyen por Pro. Otro ejemplo de sustitución conservadora con un residuo que normalmente no se encuentra en péptidos y proteínas endógenas de mamíferos es la sustitución conservadora de Arg o Lys por, por ejemplo, ornitina, canavanina, aminoetilcisteína u otro aminoácido básico. En algunas realizaciones, otra sustitución conservadora es la sustitución de uno o más residuos de Pro por bhPro o Leu o D-Npc (ácido isonipecótico). Para obtener más información sobre sustituciones fenotípicamente silenciosas en péptidos y proteínas, consulte, por ejemplo, Bowie et. al. Science 247, 1306-1310, 1990. En el esquema siguiente, las sustituciones conservadoras de aminoácidos se agrupan según sus propiedades fisicoquímicas. I: neutros, hidrófilos, II: ácidos y amidas, III: básicos, IV: hidrófobos, V: aromáticos, aminoácidos voluminosos.
[0134]
[0137] En el esquema siguiente, las sustituciones conservadoras de aminoácidos se agrupan según sus propiedades fisicoquímicas. VI: neutro o hidrófobo, VII: ácido, VIII: básico, IX: polar, X: aromático.
[0138]
[0141] El término "aminoácido" o "cualquier aminoácido" tal como se utiliza aquí se refiere a todos y cada uno de los aminoácidos, incluidos los aminoácidos que se producen de forma natural (por ejemplo, los α-aminoácidos), los aminoácidos no naturales, los aminoácidos modificados y los aminoácidos no naturales. Incluye tanto aminoácidos D como L. Los aminoácidos naturales incluyen aquellos que se encuentran en la naturaleza, como por ejemplo, los 23 aminoácidos que se combinan en cadenas peptídicas para formar los componentes básicos de una amplia gama de proteínas. Se trata principalmente de estereoisómeros L, aunque algunos aminoácidos D aparecen en las envolturas bacterianas y en algunos antibióticos. Los 20 aminoácidos naturales "estándar" se enumeran en las tablas anteriores. Los aminoácidos naturales "no estándar" son la pirrolisina (presente en organismos metanogénicos y otros eucariotas), la selenocisteína (presente en muchos no eucariotas, así como en la mayoría de los eucariotas) y la N-formilmetionina (codificada por el codón de inicio AUG en bacterias, mitocondrias y cloroplastos). Los aminoácidos "innaturales" o "no naturales" son aminoácidos no proteinogénicos (es decir, aquellos que no están codificados de forma natural ni se encuentran en el código genético) que se producen de forma natural o se sintetizan químicamente. Se conocen más de 140 aminoácidos naturales y son posibles miles de combinaciones más. Ejemplos de aminoácidos "no naturales" incluyen βaminoácidos (β<3>y β<2>), homo-aminoácidos, derivados de prolina y ácido pirúvico, derivados de alanina 3-sustituidos, derivados de glicina, derivados de tirosina y fenilalaninasustituidos en el anillo, aminoácidos centrales lineales, diaminoácidos, D-aminoácidos y N-metilaminoácidos. Los aminoácidos innaturales o no naturales también incluyen los aminoácidos modificados. Los aminoácidos "modificados" incluyen aminoácidos (por ejemplo, aminoácidos naturales) que han sido modificados químicamente para incluir un grupo, grupos o una fracción química que no está presente de forma natural en el aminoácido.
[0143] Como es claro para el experto en la técnica, las secuencias de péptidos aquí reveladas se muestran procediendo de izquierda a derecha, siendo el extremo izquierdo de la secuencia el extremo N del péptido y el extremo derecho de la secuencia el extremo C del péptido. Entre las secuencias aquí divulgadas se encuentran secuencias que incorporan una fracción "Hy-" en el extremo amino (extremo N) de la secuencia, y una fracción "-OH" o una fracción "-NH<2>" en el extremo carboxilo (extremo C) de la secuencia. En tales casos, y a menos que se indique lo contrario, una fracción "Hy-" en el extremo N de la secuencia en cuestión indica un átomo de hidrógeno, correspondiente a la presencia de un grupo amino primario o secundario libre en el extremo N, mientras que una fracción "-OH" o "-NH<2>" en el extremo C de la secuencia indica un grupo hidroxilo o un grupo amino, correspondiente a la presencia de un grupo amido (CONH<2>) en el extremo C, respectivamente. En cada secuencia de la invención, una fracción "-OH" C-terminal puede sustituirse por una fracción "-NH<2>" C-terminal, y viceversa. Se entiende además que la fracción en el extremo amino o carboxilo puede ser un enlace, por ejemplo, un enlace covalente, particularmente en situaciones donde el extremo amino o carboxilo está unido a un enlazador o a otra fracción química, por ejemplo, una fracción PEG.
[0145] El término "NH<2>", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere al grupo amino libre presente en el extremo amino de un polipéptido. El término "OH" tal como se utiliza en el presente documento, se refiere al grupo carboxi libre presente en el extremo carboxi de un péptido. Además, el término "Ac", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a la protección con acetilo mediante la acilación del extremo C o N de un polipéptido.
[0147] El término "carboxi", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a -CO<2>H.
[0149] En su mayor parte, los nombres de los residuos de aminoacilo naturales y no naturales utilizados en el presente documento siguen las convenciones de nomenclatura sugeridas por la Comisión de Nomenclatura de Química Orgánica de la IUPAC y la Comisión de Nomenclatura Bioquímica de la IUPAC-IUB, tal como se establece en "Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974)" Biochemistry, 14(2), (1975). En la medida en que los nombres y abreviaturas de aminoácidos y residuos de aminoacilo empleados en esta memoria descriptiva y reivindicaciones adjuntas difieran de dichas sugerencias, se aclararán al lector. Algunas abreviaturas útiles para describir la invención se definen a continuación en la siguiente tabla 1.
[0151] Tabla 1. Abreviaturas de aminoácidos no naturales y fracciones químicas
[0153]
[0154]
[0155]
[0157] A lo largo de la presente memoria descriptiva, a menos que los aminoácidos que ocurren naturalmente se mencionen por su nombre completo (por ejemplo, alanina, arginina, etc.), se designan por sus abreviaturas convencionales de tres letras o de una sola letra (por ejemplo, Ala o A para alanina, Arg o R para arginina, etc.). En el caso de aminoácidos menos comunes o no presentes de forma natural, a menos que se les mencione por su nombre completo (por ejemplo, sarcosina, ornitina, etc.), se emplean con frecuencia códigos de tres o cuatro caracteres para sus residuos, incluidos Sar o Sarc (sarcosina, es decir, N-metilglicina), Aib (ácido αaminoisobutírico), Daba (ácido 2,4-diaminobutanoico), Dapa (ácido 2,3-diaminopropanoico), γ-Glu (ácido γglutámico), pGlu (ácido piroglutámico), Gaba (ácido γ-aminobutanoico), β-Pro (ácido pirrolidina-3-carboxílico), 8Ado (ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico), Abu (ácido 4-aminobutírico), bhPro (β-homo-prolina), bhPhe (βhomo-L-fenilalanina), bhAsp (ácido β-homo-aspártico). Dpa (β,β difenilalanina), Ida (ácido iminodiacético), hCys (homocisteína), bhDpa (β-homo-β,β-difenilalanina).
[0158] Además, R<1>puede sustituirse en todas las secuencias por ácidos isovaléricos o equivalentes. En algunas realizaciones, en las que un péptido de la presente invención está conjugado a un compuesto ácido como, por ejemplo, ácido isovalérico, ácido isobutírico, ácido valérico y similares, la presencia de dicha conjugación se indica en forma ácida. Así, por ejemplo, pero sin limitarse de ninguna manera, en lugar de indicar una conjugación de ácido isovalérico a un péptido haciendo referencia a isovaleroilo, en algunas realizaciones, la presente solicitud puede hacer referencia a dicha conjugación como ácido isovalérico.
[0159] El término "L-aminoácido", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a la forma isomérica "L" de un péptido y, a la inversa, el término "D-aminoácido" se refiere a la forma isomérica "D" de un péptido. En ciertas realizaciones, los residuos de aminoácidos descritos en el presente documento están en la forma isomérica "L", sin embargo, los residuos en la forma isomérica "D" pueden sustituir a cualquier residuo de aminoácido L, siempre que el péptido conserve la función deseada.
[0160] A menos que se indique lo contrario, se hace referencia a las formas isoméricas L de los aminoácidos naturales y no naturales en cuestión que poseen un centro quiral. Cuando corresponda, la forma isomérica D de un aminoácido se indica de la manera convencional mediante el prefijo "D" antes del código convencional de tres letras (por ejemplo, Dasp, (D)Asp o D-Asp; Dphe, (D)Phe o D-Phe).
[0161] Tal como se utiliza en el presente documento, un "homólogo inferior de Lys" se refiere a un aminoácido que tiene la estructura de la lisina pero con uno o más carbonos menos en su cadena lateral en comparación con la lisina.
[0162] Tal como se utiliza en el presente documento, un "homólogo superior de Lys" se refiere a un aminoácido que tiene la estructura de la lisina pero con uno o más carbonos adicionales en su cadena lateral en comparación con la lisina.
[0163] El término "DRP", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a péptidos ricos en disulfuro.
[0164] El término "dímero", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere ampliamente a un péptido que comprende dos o más subunidades monoméricas. Ciertos dímeros comprenden dos DRP. Los dímeros de la presente invención incluyen homodímeros y heterodímeros. Una subunidad monomérica de un dímero puede estar unida por su extremo N-terminal Cor, o puede estar unida a través de residuos de aminoácidos internos. Cada subunidad monomérica de un dímero puede estar unida a través del mismo sitio, o cada una puede estar unida a través de un sitio diferente (por ejemplo, el extremo C, el extremo N o un sitio interno).
[0166] Tal como se utiliza en el presente documento, en el contexto de ciertas secuencias peptídicas divulgadas en el presente documento, los paréntesis, por ejemplo, (_), representan conjugaciones de cadenas laterales y los corchetes, por ejemplo, [__], representan sustituciones de aminoácidos no naturales o aminoácidos y cadenas laterales conjugadas. Generalmente, cuando se muestra un conector en el extremo N de una secuencia peptídica, indica que el péptido está dimerizado con otro péptido, en donde el conector está unido al extremo N de los dos péptidos. Generalmente, cuando se muestra un conector en el extremo C de una secuencia o estructura peptídica, indica que el péptido está dimerizado con otro péptido, en donde el conector está unido al extremo C de los dos péptidos.
[0168] Los términos "reemplazo isostérico" o "sustitución isostérica" se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a cualquier aminoácido u otra fracción análoga que tenga propiedades químicas y/o estructurales similares a un aminoácido específico. En ciertas realizaciones, una sustitución isostérica es una sustitución conservadora con un aminoácido natural o no natural.
[0170] El término "ciclado", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una reacción en la que una parte de una molécula de polipéptido se une a otra parte de la molécula de polipéptido para formar un anillo cerrado, como por ejemplo mediante la formación de un puente disulfuro u otro enlace similar.
[0172] El término "subunidad", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a uno de un par de monómeros de polipéptido que se unen para formar una composición de péptido dímero.
[0174] El término "fracción enlazadora", tal como se utiliza aquí, se refiere ampliamente a una estructura química que es capaz de unir o conectar dos subunidades de monómeros de péptidos para formar un dímero.
[0176] El término "solvato" en el contexto de la presente invención se refiere a un complejo de estequiometría definida formado entre un soluto (por ejemplo, un análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la invención) y un disolvente. El disolvente en este contexto puede ser, por ejemplo, agua, etanol u otra especie orgánica farmacéuticamente aceptable, generalmente de molécula pequeña, tal como, pero sin limitarse a ellos, ácido acético o ácido láctico. Cuando el disolvente en cuestión es agua, dicho solvato se denomina normalmente hidrato.
[0178] El término "sal farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en el presente documento, representa sales o formas zwitteriónicas de los péptidos o compuestos de la presente invención que son solubles o dispersables en agua o aceite, que son adecuadas para el tratamiento de enfermedades sin toxicidad, irritación y respuesta alérgica indebidas; que son proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable y que son eficaces para su uso previsto. Las sales se pueden preparar durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos, o se pueden preparar por separado haciendo reaccionar un grupo amino con un ácido adecuado. Sales de adición ácidas representativas incluyen, acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenesulfonato, bisulfato, butirato, camforato, camforsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroioduro, 2-hidroxietansulfonato (isetionato), lactato, maleato, mesitilenosulfonato, mietano sulfonato, nafthilenosulfonato, nicotinato, 2-nafthalenosulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluenosulfonato, undecanoato. Además, los grupos amino en los compuestos de la presente invención pueden cuaternizarse con cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y esterilo; y bromuros de bencilo y fenetilo. Ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición terapéuticamente aceptables se incluyen ácidos inorgánicos como el clorhídrico, el bromhídrico, el sulfúrico y el fosfórico, y ácidos orgánicos como el oxálico, el maleico, el succínico y el cítrico. Una sal farmacéuticamente aceptable puede ser una sal elegida adecuadamente, por ejemplo, entre sales de adición ácidas y sales básicas. Ejemplos de sales de adición ácidas se incluyen las sales de cloruro, las sales de citrato y las sales de acetato. Ejemplos de sales básicas incluyen sales donde el catión se selecciona entre cationes de metales alcalinos, como iones de sodio o potasio, cationes de metales alcalinotérreos, como iones de calcio o magnesio, así como iones de amonio sustituidos, como iones del tipo N(R1)(R2)(R3)(R4)+, donde R1, R2, R3 y R4 designan independientemente hidrógeno, opcionalmente C1-6-alquilo sustituido u opcionalmente alquenilo C2-6 sustituido. Ejemplos de grupos alquilo C1-6 relevantes incluyen grupos metilo, etilo, 1-propilo y 2-propilo. Ejemplos de grupos alquenilo C2-6 de posible relevancia incluyen etenilo, 1-propenilo y 2-propenilo. Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17.ª edición, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, EE. UU., 1985 (y ediciones más recientes de la misma), en la "Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology", 3.ª edición, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare EE. UU. (Inc.), NY, EE. UU., 2007, y en J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977). Además, para una revisión sobre las sales adecuadas, consulte Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, 2002). Otras sales básicas adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Entre los ejemplos representativos se incluyen las sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y zinc. También pueden formarse hemisales de ácidos y bases, por ejemplo, sales de hemisulfato y hemicálcico. El término "N(alfa)metilación", tal como se utiliza en el presente documento, describe la metilación de la alfa amina de un aminoácido, también denominada generalmente como N-metilación.
[0179] El término "metilación sim" o "Arg-Me-sim", tal como se usa aquí, describe la metilación simétrica de los dos nitrógenos del grupo guanidina de la arginina. Además, el término "metilación asim" o "Arg-Me-asim", describe la metilación de un solo nitrógeno del grupo guanidina de la arginina.
[0180] La expresión "compuestos orgánicos acilantes", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a varios compuestos con funcionalidad de ácido carboxílico que se utilizan para acilar el extremo N de una subunidad de aminoácido antes de formar un dímero C-terminal. Entre los ejemplos no limitantes de compuestos orgánicos acilantes se incluyen el ácido ciclopropilacético, el ácido 4-fluorobenzoico, el ácido 4-fluorofenilacético, el ácido 3-fenilpropiónico, el ácido succínico, el ácido glutárico, el ácido ciclopentanocarboxílico, el ácido 3,3,3-trifluoropropeónico, el ácido 3-fluorometilbutírico y el ácido tetraedro-2H-piran-4-carboxílico.
[0181] El término “alquilo” incluye un hidrocarburo alifático saturado, cíclico o no cíclico, de cadena lineal o ramificada, que contiene de 1 a 24 átomos de carbono. Los alquilos representativos de cadena lineal saturados incluyen, pero no se limitan a ellos, metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo y similares, mientras que los alquilos ramificados saturados incluyen sin limitarse a ellos, isopropilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, isopentilo y similares. Los alquilos cíclicos saturados representativos incluyen, pero sin limitarse a ellos, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares, mientras que los alquilos cíclicos insaturados incluyen, pero sin limitarse a ellos, ciclopentenilo y ciclohexenilo, y similares.
[0182] Tal como se utiliza en el presente documento, una "cantidad terapéuticamente eficaz" de los agonistas peptídicos de la invención tiene por objeto describir una cantidad suficiente del agonista peptídico para tratar una enfermedad relacionada con la hepcidina, incluidas, pero sin limitarse a ellas, cualquiera de las enfermedades y trastornos descritos en el presente documento (por ejemplo, una enfermedad del metabolismo del hierro). En determinadas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz logrará una relación beneficio/riesgo deseada aplicable a cualquier tratamiento médico.
[0183] El hematocrito es la relación entre el volumen de glóbulos rojos y el volumen de sangre total. El rango normal de hematocrito es diferente entre los sexos y es aproximadamente del 45 % al 52 % para los hombres y del 37 % al 48 % para las mujeres. Un objetivo clínico para el tratamiento de la PV es lograr un hematocrito inferior al 45 %. En el presente documento, el hematocrito también puede denominarse niveles de hematocrito, y se entiende que un valor numérico para un nivel de hematocrito, por ejemplo, 45, significa un hematocrito del 45 %. Análogos de péptidos de hepcidina
[0184] La presente invención proporciona análogos de péptidos de hepcidina, que pueden ser monómeros o dímeros (colectivamente "análogos de la hepcidina").
[0185] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede unirse a la ferroportina, por ejemplo, a la ferroportina humana. Los análogos de la hepcidina pueden unirse específicamente a la ferroportina humana. Tal como se utiliza en el presente documento, "se une específicamente" se refiere a la interacción preferencial de un agente de unión específico con un ligando determinado sobre otros agentes en una muestra. Por ejemplo, un agente de unión específico que se une específicamente a un ligando determinado, se une al ligando determinado, en condiciones adecuadas, en una cantidad o grado que es observable por encima de cualquier interacción no específica con otros componentes de la muestra. Las condiciones adecuadas son aquellas que permiten la interacción entre un agente de unión específico dado y un ligando dado. Estas condiciones incluyen el pH, la temperatura, la concentración, el disolvente, el tiempo de incubación, y similares, y pueden variar entre pares específicos de agente de unión y ligando, pero pueden ser fácilmente determinadas por expertos en la materia. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede unirse a la ferroportina con mayor especificidad que un compuesto de referencia de hepcidina (por ejemplo, cualquiera de los compuestos de referencia de hepcidina proporcionados en el presente documento). Un análogo de hepcidina de la presente invención puede exhibir una especificidad de ferroportina que es al menos aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 %, 700 %, 1000 % o 10.000 % mayor que un compuesto de referencia de hepcidina (por ejemplo, cualquiera de los compuestos de referencia de hepcidina proporcionados en el presente documento). Un análogo de hepcidina de la presente invención puede exhibir una especificidad de ferroportina que es al menos aproximadamente 5 veces, o al menos aproximadamente 10, 20, 50 o 100 veces mayor que un compuesto de referencia de hepcidina (por ejemplo, cualquiera de los compuestos de referencia de hepcidina proporcionados en el presente documento).
[0186] El análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir una actividad de hepcidina, la cual puede ser una actividadin vitrooin vivo, por ejemplo, una actividadin vivooin vitrodescrita en este documento. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir al menos aproximadamente el 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o más del 99 % de la actividad exhibida por un compuesto de referencia de hepcidina (por ejemplo, cualquiera de los compuestos de referencia de hepcidina proporcionados en el presente documento).
[0187] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir al menos aproximadamente el 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o más del 99 % de la actividad de unión a ferroportina que es exhibida por una hepcidina de referencia. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una IC<50>más baja (es decir, una mayor afinidad de unión) para unirse a la ferroportina (por ejemplo, la ferroportina humana) en comparación con una hepcidina de referencia. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una IC<50>en un ensayo de unión competitiva de ferroportina que es al menos aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 %, 700 % o 1000 % menor que una hepcidina de referencia.
[0188] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir una mayor actividad de hepcidina en comparación con un péptido de referencia de hepcidina. La actividad puede ser una actividadin vitrooin vivo, por ejemplo, una actividadin vivooin vitrodescrita en el presente documento. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir una actividad de hepcidina 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, o 200 veces mayor que una hepcidina de referencia. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una actividad al menos aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o mayor que 99 %, 100 %, 200 % 300 %, 400 %, 500 %, 700 %, o 1000 % mayor que una hepcidina de referencia.
[0189] Un análogo de péptidos descrito en el presente documento puede exhibir una actividad invitrode al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 %, o superior a 99 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 %, 700 % o 1000 % mayor para inducir la degradación de la proteína ferroportina humana que la de una hepcidina de referencia, donde la actividad se mide de acuerdo con un método descrito en el presente documento.
[0190] Un péptido o un dímero de péptido descrito en el presente documento puede exhibir una actividadin vitrode al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 %, o superior a 99 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 %, 700 % o 1000 % mayor para inducir la reducción del hierro plasmático libre en un individuo como lo hace una hepcidina de referencia, en donde la actividad se mide de acuerdo con un método descrito en el presente documento.
[0191] La actividad puede ser una actividadin vitrooin vivo, por ejemplo, una actividadin vivooin vitrodescrita en el presente documento. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede presentar una actividad 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, o 200 veces mayor, o al menos aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 %, 700 % o 1000 % mayor que la de una hepcidina de referencia, en donde la actividad es una actividadin vitropara inducir la degradación de la ferroportina, por ejemplo, medida según los ejemplos descritos en el presente documento; o en donde la actividad es una actividadin vivopara reducir el hierro plasmático libre, por ejemplo, medida según los ejemplos descritos en el presente documento.
[0192] Un análogo de hepcidina descrito en este documento puede imitar la actividad de la hepcidina de Hep25, la forma bioactiva humana de 25 aminoácidos, y aquí se les denomina "mini-hepcidinas". Según se utiliza en el presente documento, en ciertas realizaciones, un compuesto (por ejemplo, un análogo de hepcidina) que posee "actividad hepcidina" significa que dicho compuesto tiene la capacidad de reducir las concentraciones de hierro plasmático en sujetos (por ejemplo, ratones o humanos), cuando se les administra (por ejemplo, mediante inyección parenteral o administración oral), de manera dependiente de la dosis y del tiempo. Véase, por ejemplo, como se demuestra en Rivera et al. (2005), Blood 106:2196-9. Los péptidos descritos en el presente documento pueden reducir la concentración de hierro plasmático en un sujeto al menos aproximadamente 1,2, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces, o al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % o aproximadamente 99 %.
[0193] Los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden tener actividadin vitro, evaluada mediante su capacidad para causar la internalización y degradación de la ferroportina en una línea celular que expresa ferroportina, como se describe en Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33. La actividadin vitropuede medirse mediante la pérdida de fluorescencia dependiente de la dosis en células modificadas genéticamente para mostrar ferroportina fusionada a proteína fluorescente verde, como en Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33. Se incuban alícuotas de células durante 24 horas con concentraciones crecientes de una preparación de referencia de Hep25 o una mini-hepcidina. Como se indica en el presente documento, los valores de EC<50>se proporcionan como la concentración de un compuesto determinado (por ejemplo, un péptido análogo de hepcidina o un dímero de péptido de la presente invención) que provoca el 50 % de la pérdida máxima de fluorescencia generada por un compuesto de referencia. La EC<50>de las preparaciones de Hep25 en este ensayo oscila entre 5 y 15 nM y, en ciertas realizaciones, los análogos de hepcidina preferidos de la presente invención tienen valores de EC<50>en ensayos de actividadin vitrode aproximadamente 1000 nM o menos. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una EC<50>en un ensayo de actividadin vitro(por ejemplo, como se describe en Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33 o en el ejemplo en el presente documento) inferior a aproximadamente cualquiera de: 0,01, 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 o 500 nM. Un análogo de hepcidina o una composición bioterapéutica (por ejemplo, cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento) tiene un valor EC<50>de aproximadamente 1 nM o menos.
[0195] Se pueden utilizar otros métodos conocidos en la técnica para calcular la actividad de la hepcidina y la actividadin vitrode los análogos de la hepcidina según la presente invención. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, la actividadin vitrode los análogos de hepcidina o de los péptidos de referencia se mide por su capacidad para internalizar la ferroportina celular, que se determina mediante inmunohistoquímica o citometría de flujo utilizando anticuerpos que reconocen epítopos extracelulares de la ferroportina. Alternativamente, en ciertas realizaciones, la actividadin vitrode los análogos de hepcidina o los péptidos de referencia se mide por su capacidad dependiente de la dosis para inhibir el eflujo de hierro de las células que expresan ferroportina que están precargadas con radioisótopos o isótopos estables de hierro, como en Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33.
[0197] Los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden exhibir una mayor estabilidad (por ejemplo, medida por la vida media, la tasa de degradación de proteínas) en comparación con una hepcidina de referencia. La estabilidad de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede incrementarse al menos aproximadamente 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 o 200 veces más o al menos aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 % o 500 % más que una hepcidina de referencia. La estabilidad puede ser la que se describe en el presente documento. La estabilidad puede ser una estabilidad plasmática, por ejemplo, medida opcionalmente según el método descrito en el presente documento. La estabilidad puede ser estable cuando se administra por vía oral.
[0199] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede exhibir una vida media más larga que una hepcidina de referencia. Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una vida media, bajo ciertas condiciones (por ejemplo, temperatura, pH), de al menos aproximadamente 5 minutos, al menos aproximadamente 10 minutos, al menos aproximadamente 20 minutos, al menos aproximadamente 30 minutos, al menos aproximadamente 45 minutos, al menos aproximadamente 1 hora, al menos aproximadamente 2 horas, al menos aproximadamente 3 horas, al menos aproximadamente 4 horas, al menos aproximadamente 5 horas, al menos aproximadamente 6 horas, al menos aproximadamente 12 horas, al menos aproximadamente 18 horas, al menos aproximadamente 1 día, al menos aproximadamente 2 días, al menos aproximadamente 4 días, al menos aproximadamente 7 días, al menos aproximadamente 10 días, al menos aproximadamente dos semanas, al menos aproximadamente tres semanas, al menos aproximadamente 1 mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses o más, o cualquier vida media intermedia o rango entre ellas, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 45 minutos, aproximadamente 1 una hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 1 día, aproximadamente 2 días, aproximadamente 4 días, aproximadamente 7 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente dos semanas, aproximadamente tres semanas, aproximadamente 1 mes, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 3 meses o más, o cualquier vida media intermedia o rango entre medias. La vida media de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede prolongarse debido a su conjugación con uno o más sustituyentes lipófilos o fracciones de extensión de vida media, por ejemplo, cualquiera de los sustituyentes lipófilos o fracciones de extensión de vida media que se divulgan en el presente documento. La vida media de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede prolongarse debido a su conjugación con una o más fracciones poliméricas, por ejemplo, cualquiera de las fracciones poliméricas o fracciones de extensión de vida media que se divulgan en el presente documento. El análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede tener una vida media como se describió anteriormente bajo el conjunto de condiciones dado en donde la temperatura es de aproximadamente 25 °C, aproximadamente 4 °C o aproximadamente 37 °C, y el pH es un pH fisiológico o un pH de aproximadamente 7,4.
[0200] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento, que comprende una fracción de extensión de vida media conjugada, puede tener una vida media sérica aumentada después de la administración oral, intravenosa o subcutánea en comparación con el mismo análogo pero que carece de la fracción de extensión de vida media conjugada. La vida media sérica de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento después de cualquier administración oral, intravenosa o subcutánea puede ser de al menos 12 horas, al menos 24 horas, al menos 30 horas, al menos 36 horas, al menos 48 horas, al menos 72 horas o al menos 168 horas. En realizaciones particulares, es entre 12 y 168 horas, entre 24 y 168 horas, entre 36 y 168 horas, o entre 48 y 168 horas.
[0202] Un análogo de hepcidina descrito en el presente documento, que comprende una fracción de extensión de vida media conjugada, puede resultar en una disminución de la concentración de hierro sérico después de la administración oral, intravenosa o subcutánea a un sujeto. La concentración de hierro sérico del sujeto puede disminuir a menos del 10 %, menos del 20 %, menos del 25 %, menos del 30 %, menos del 40 %, menos del 50 %, menos del 60 %, menos del 70 %, menos del 80 % o menos del 90 % de la concentración de hierro sérico en ausencia de la administración del análogo de hepcidina al sujeto. La disminución de la concentración de hierro sérico puede permanecer durante al menos 1 hora, al menos 4 horas, al menos 10 horas, al menos 12 horas, al menos 24 horas, al menos 36 horas, al menos 48 horas o al menos 72 horas después de la administración al sujeto. Puede permanecer entre 12 y 168 horas, entre 24 y 168 horas, entre 36 y 168 horas, o entre 48 y 168 horas. La concentración de hierro sérico del sujeto puede reducirse a menos del 20 % aproximadamente 4 horas o aproximadamente 10 horas después de la administración al sujeto, por ejemplo, por vía intravenosa, oral o subcutánea. La concentración de hierro sérico del sujeto puede reducirse a menos del 50 % o menos del 60 %, durante aproximadamente 24 horas a aproximadamente 30 horas después de la administración, por ejemplo, por vía intravenosa, oral o subcutánea.
[0204] La vida media se puede medirin vitroutilizando cualquier método adecuado conocido en la técnica, por ejemplo, la estabilidad de un análogo de hepcidina se puede determinar incubando el análogo de hepcidina con suero humano precalentado (Sigma) a 37 °C. Se toman muestras en varios puntos temporales, normalmente hasta 24 horas, y se analiza la estabilidad de la muestra separando el análogo de hepcidina de las proteínas del suero y luego analizando la presencia del análogo de hepcidina de interés mediante LC-MS.
[0206] La estabilidad del análogo de hepcidina se puede medirin vivoutilizando cualquier método adecuado conocido en la técnica, por ejemplo, la estabilidad del análogo de hepcidina se puede determinar in vivo administrando el péptido o dímero de péptido a un sujeto como un humano o cualquier mamífero (por ejemplo, ratón) y luego se toman muestras del sujeto mediante extracción de sangre en varios puntos temporales, normalmente hasta 24 horas. Posteriormente, las muestras se analizan como se describió anteriormente con respecto al métodoin vitrode medición de la vida media. La estabilidad in vivo de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede determinarse mediante el método divulgado en los ejemplos presentados en el presente documento.
[0208] El análogo de hepcidina puede presentar una solubilidad mejorada o características de agregación mejoradas en comparación con una hepcidina de referencia. La solubilidad puede determinarse mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Entre los métodos adecuados conocidos en la técnica para determinar la solubilidad se incluyen la incubación de péptidos (por ejemplo, un análogo de hepcidina de la presente invención) en diversos tampones (acetato pH 4,0, acetato pH 5,0, fosfato/citrato pH 5,0, fosfato citrato pH 6,0, fosfato pH 6,0, fosfato pH 7,0, fosfato pH 7,5, PBS fuerte pH 7,5, Tris pH 7,5, Tris pH 8,0, glicina pH 9,0, agua, ácido acético (pH 5,0) y otros conocidos en la técnica) y la comprobación de la agregación o la solubilidad mediante técnicas estándar. Estas técnicas incluyen, pero no se limitan a ellas, la precipitación visual, la dispersión dinámica de la luz, el dicroísmo circular y los colorantes fluorescentes para medir la hidrofobicidad de la superficie y detectar la agregación o la fibrilación, por ejemplo. Una mayor solubilidad puede significar que el péptido (por ejemplo, el análogo de hepcidina de la presente invención) es más soluble en un líquido determinado que una hepcidina de referencia.
[0210] El análogo de hepcidina puede presentar una solubilidad que se incrementa al menos aproximadamente 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 o 200 veces más o al menos aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 % o 500 % más que una hepcidina de referencia en una solución o tampón particular, por ejemplo, en agua o en tampón conocido en la técnica o divulgado en el presente documento.
[0212] El análogo de hepcidina puede presentar una agregación disminuida, en donde la agregación del péptido en una solución es al menos aproximadamente 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 o 200 veces menos o al menos aproximadamente 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 %, 300 %, 400 % o 500 % menos que una hepcidina de referencia en una solución o tampón particular, por ejemplo, en agua o en tampón conocido en la técnica o divulgado en el presente documento..
[0214] El análogo de hepcidina puede presentar menor degradación (es decir, mayor estabilidad a la degradación), por ejemplo, mayor o aproximadamente 10 % menos, mayor o aproximadamente 20 % menos, mayor o aproximadamente 30 % menos, mayor o aproximadamente 40 % menos, o mayor o aproximadamente 50 % menos que una hepcidina de referencia. En algunas realizaciones, la estabilidad a la degradación se determina mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. Entre los métodos adecuados conocidos en la técnica para determinar la estabilidad a la degradación se incluye el método descrito en Hawe et al J Pharm Sci, VOL.101, NO.3, 2012, p 895-913. En algunas realizaciones, estos métodos se utilizan para seleccionar secuencias potentes con mayor vida útil.
[0216] El análogo de hepcidina de la presente invención puede fabricarse sintéticamente. En otras realizaciones, el análogo de hepcidina de la presente invención se fabrica mediante recombinación.
[0218] Los diversos péptidos monoméricos y dímeros análogos de la hepcidina descritos en el presente documento pueden construirse únicamente con aminoácidos naturales. Alternativamente, estos análogos de la hepcidina pueden incluir aminoácidos innaturales o no naturales, incluidos, pero sin limitarse a ellos, aminoácidos modificados. Los aminoácidos modificados pueden incluir aminoácidos naturales que han sido modificados químicamente para incluir un grupo, grupos o una fracción química que no está presente de forma natural en el aminoácido. Los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden incluir adicionalmente D-aminoácidos. Además, los monómeros y dímeros de péptidos análogos de la hepcidina pueden incluir análogos de aminoácidos. Un análogo de péptido descrito en el presente documento puede comprender cualquiera de los descritos en el presente documento, en donde uno o más residuos de aminoácidos naturales del análogo de péptido se sustituyen por un aminoácido innatural o no natural, o un D-aminoácido.
[0220] Los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden incluir uno o más aminoácidos modificados o no naturales. Por ejemplo, un análogo de hepcidina puede incluir uno o más de Daba, Dapa, Pen, Sar, Cit, Cav, HLeu, 2-Nal, 1-Nal, d-1-Nal, d-2-Nal, Bip, Phe(4-OMe), Tyr(4-OMe), βhTrp, βhPhe, Phe(4-CF<3>), 2-2-Indano, 1-1-Indano, Ciclobutilo, βhPhe, hLeu, Gla, Phe(4-NH<2>), hPhe, 1-Nal, Nle, 3-3-diPhe, ciclobutil-Ala, Cha, Bip, β-Glu, Phe(4-Guan), aminoácidos homo, D-aminoácidos y varios aminoácidos N-metilados. Quien tenga conocimientos en la técnica comprenderá que se pueden realizar otros aminoácidos modificados o no naturales, y diversas otras sustituciones de aminoácidos naturales por aminoácidos modificados o no naturales, para lograr resultados similares deseados, y que dichas sustituciones están comprendidas dentro del alcance de la presente invención.
[0222] Los compuestos descritos en el presente documentos incluyen los compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los que se indican en las varias fórmulas y estructuras presentadas en el presente documento, salvo por el hecho de que se reemplazan uno o más átomos por un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente a la masa atómica o el número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los presentes compuestos incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor y cloro, como<2>H,<3>H,<1>3C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<35>S,<18>F,<36>Cl, respectivamente. Determinados compuestos marcados isotópicamente descritos en el presente documento, por ejemplo aquellos donde se incorporan isótopos radioactivos tales como<3>H y<14>C, son útiles en ensayos de distribución de fármaco y/o tejido de sustrato. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir,<2>H, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la vida media in vivo o disminución de los requisitos de dosificación.
[0224] También se divulgan en el presente documento cualquiera de los monómeros o dímeros de péptidos descritos en el presente documento unidos a una fracción enlazadora, incluyendo cualquiera de las fracciones enlazadoras específicas descritas en el presente documento.
[0226] Los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden incluir péptidos, por ejemplo, monómeros o dímeros, que comprenden una subunidad monomérica peptídica que tiene al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 92 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de péptido análogo de hepcidina descrita en el presente documento (por ejemplo, cualquiera de los péptidos divulgados en el presente documento), incluidas, pero no limitadas a ellas, cualquiera de las secuencias de aminoácidos que se muestran en las tablas 2 y 3.
[0228] Un análogo de péptido descrito en el presente documento, o una subunidad monomérica de un análogo de péptido dímero descrito en el presente documento, puede comprender o consistir en 7 a 35 residuos de aminoácidos, 8 a 35 residuos de aminoácidos, 9 a 35 residuos de aminoácidos, 10 a 35 residuos de aminoácidos, 7 a 25 residuos de aminoácidos, 8 a 25 residuos de aminoácidos, 9 a 25 residuos de aminoácidos, 10 a 25 residuos de aminoácidos, 7 a 18 residuos de aminoácidos, 8 a 18 residuos de aminoácidos, 9 a 18 residuos de aminoácidos o 10 a 18 residuos de aminoácidos, y, opcionalmente, una o más fracciones adicionales no aminoacídicas, como una fracción química conjugada, por ejemplo, una fracción de extensión de vida media, una fracción PEG o enlazadora. Una subunidad monomérica de un análogo de hepcidina puede comprender o consistir en 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o 35 residuos de aminoácidos. Una subunidad monomérica de un análogo de hepcidina descrito en el presente documento puede comprender o consistir en 10 a 18 residuos de aminoácidos y, opcionalmente, una o más fracciones adicionales no aminoacídicas, como una fracción química conjugada, por ejemplo, una fracción de PEG o enlazadora. La subunidad monomérica puede comprender o consistir en 7 a 35 residuos de aminoácidos, 8 a 35 residuos de aminoácidos, 9 a 35 residuos de aminoácidos, 10 a 35 residuos de aminoácidos, 7 a 25 residuos de aminoácidos, 8 a 25 residuos de aminoácidos, 9 a 25 residuos de aminoácidos, 10 a 25 residuos de aminoácidos, 7 a 18 residuos de aminoácidos, 8 a 18 residuos de aminoácidos, 9 a 18 residuos de aminoácidos o 10 a 18 residuos de aminoácidos.
[0229] También se describen en el presente documento análogos de hepcidina divulgados en las publicaciones de solicitudes de patente PCT N.ºWO2014/145561, WO2015 /200916 o WO2017 /117411.
[0230] Análogos de hepcidina monomérica peptídica
[0231] La presente invención proporciona un análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la policitemia vera en un sujeto humano que lo necesite, en donde el análogo de hepcidina es:
[0234]
[0236] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(isoGlu-Palm))FEPRSKGCK-NH2 (SEQ ID NO:45);en donde los aminoácidos son L-aminoácidos; y en donde el análogo de hepcidina o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra mediante inyección subcutánea; al sujeto se le administra entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas.
[0237] También se describe en este documento un método para tratar la policitemia vera en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de un análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde el análogo de hepcidina comprende un péptido que comprende la Fórmula (I):
[0239] R1-X-Y-R2 (I) (SEQ ID NO: 1)
[0240] o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo,
[0241] en donde
[0242] R1 es hidrógeno, un alquilo C1-C6, un arilo C6-C12, un alcanoilo C1-C20 o pGlu;
[0243] R2 es NH<2>u OH;
[0244] X es una secuencia peptídica que tiene la fórmula II
[0246] X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (II) (SEQ ID NO: 2)
[0247] en donde
[0248] X1 es Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp o está ausente;
[0249] X2 es Thr, Ala o D-Thr;
[0250] X3 es His, Lys, o D-His;
[0251] X4 es Phe, Ala, Dpa o D-Phe;
[0252] X5 es Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro o bhPro;
[0253] X6 es Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile o D-Cys;
[0254] X7 es Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile o D-Cys;
[0255] X8 es Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu o D-Ile;
[0256] X9 es Phe o bhPhe; y
[0257] X10 es Lys, Phe o está ausente;
[0258] en donde si Y está ausente, X7 es Ile; e
[0259] Y es una secuencia peptídica que tiene la fórmula III
[0261] Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (III) (SEQ ID NO:3)
[0262] en donde
[0263] Y1 es Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser o está ausente;
[0264] Y2 es Pro, Ala, Cys, Gly o está ausente;
[0265] Y3 es Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp o está ausente;
[0266] Y4 es Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr o está ausente;
[0267] Y5 es Lys, Met, Arg, Ala o está ausente;
[0268] Y6 es Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val o está ausente;
[0269] Y7 es Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val o está ausente;
[0270] Y8 es Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg o está ausente;
[0271] Y9 es Cys, Tyr o está ausente;
[0272] Y10 es Met, Lys, Arg, Tyr o está ausente;
[0273] Y11 es Arg, Met, Cys, Lys o está ausente;
[0274] Y12 es Arg, Lys, Ala o está ausente;
[0275] Y13 es Arg, Cys, Lys, Val o está ausente;
[0276] Y14 es Arg, Lys, Pro, Cys, Thr o está ausente; y
[0277] Y15 es Thr, Arg o está ausente;
[0278] en donde dicho péptido de fórmula I está opcionalmente PEGilado en R1, X o Y, y en donde una cadena lateral de un aminoácido del péptido está opcionalmente conjugada a un sustituyente lipófilo o una fracción polimérica. Alternativamente, la fórmula II se muestra como arriba para X1, X2, X4, X5, X6, X7, X8, X9 y X1, pero X3 es His, Lys, D-His o D-Lys.
[0279] R1 puede ser hidrógeno, ácido isovalérico, ácido isobutírico o acetilo. Por ejemplo, R1 puede ser ácido isovalérico o ácido isobutírico. Alternativamente, R1 es ácido isovalérico.
[0280] X puede ser una secuencia peptídica que tiene la fórmula IV:
[0281] X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (IV) (SEQ ID NO:4) en donde
[0282] X1 es Asp, Ida, pGlu, bhAsp o está ausente;
[0283] X4 es Phe o Dpa;
[0284] X5 es Pro o bhPro;
[0285] X6 es Ile, Cys o Arg;
[0286] X7 es Cys, Ile, Leu o Val;
[0287] X8 es Ile, Lys, Glu, Phe, Gln o Arg; y
[0288] X10 es Lys o está ausente.
[0289] X puede ser una secuencia peptídica que tiene la fórmula V:
[0290] X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (V) (SEQ ID NO:5)
[0291] X1 es Asp, Ida, pGlu, bhAsp o está ausente;
[0292] X4 es Phe o Dpa;
[0293] X5 es Pro o bhPro;
[0294] X8 es Ile, Lys, Glu, Phe, Gln o Arg; y
[0295] X10 es Lys o está ausente.
[0296] El péptido puede ser, según la fórmula VI:
[0298] R<1>-X-Y-R<2>(VI) (SEQ ID NO:6)
[0299] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
[0300] en donde:
[0301] R<1>es hidrógeno, ácido isovalérico, ácido isobutírico o acetilo;
[0302] R<2>es -NH<2>u -OH;
[0303] X es una secuencia peptídica que tiene la fórmula VII:
[0304] X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (VII) (SEQ ID NO:7) en donde
[0305] X1 es Asp, Ida, pGlu, bhAsp o está ausente;
[0306] X4 es Phe o Dpa;
[0307] X5 es Pro o bhPro;
[0308] X8 es Ile, Lys, Glu, Phe, Gln o Arg; y
[0309] X10 es Lys o está ausente;
[0310] en donde Y es una secuencia peptídica que tiene la fórmula VIII:
[0311] Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (VIII) (SEQ ID NO:8) en donde
[0312] Y1 es Gly, Glu, Val o Lys;
[0313] Y3 es Arg o Lys;
[0314] Y5 es Arg o Lys;
[0315] Y6 es Gly, Ser, Lys, Ile o Arg;
[0316] Y7 es Trp o está ausente;
[0317] Y8 es Val, Thr, Asp, Glu o está ausente; y
[0318] Y10 es Lys o está ausente;
[0319] en donde el péptido comprende un enlace disulfuro entre las dos Cys;
[0320] en donde dicho péptido de fórmula I está opcionalmente PEGilado en R<1>, X o Y;
[0321] en donde una cadena lateral de un aminoácido del péptido está opcionalmente conjugada a un sustituyente lipófilo o una fracción polimérica; y
[0322] en donde Ida es ácido iminodiacético; pGlu es ácido piroglutámico; bhAsp es ácido β-homoaspártico; y bhPro es β-homoprolina.
[0323] El péptido puede comprender una de las siguientes secuencias:
[0324] DTHFPICIFGPRSKGWVC (SEQ ID NO:9);
[0325] DTHFPCIIFGPRSKGWVCK (SEQ ID NO:10);
[0326] DTHFPCIIFEPRSKGWVCK (SEQ ID NO:11);
[0327] DTHFPCIIFGPRSKGWACK (SEQ ID NO:12);
[0328] DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK (SEQ ID NO:13);
[0329] DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR (SEQ ID NO:14);
[0330] DTHFPCIKFGPRSKGWVCK (SEQ ID NO:15);
[0331] DTHFPCIKFKPRSKGWVCK (SEQ ID NO:16);
[0332] DTHFPCIIFGPRSRGWVCK (SEQ ID NO:17);
[0333] DTHFPCIKFGPKSKGWVCK (SEQ ID NO:18);
[0334] DTHFPCIKFEPRSKGCK (SEQ ID NO:19);
[0335] DTHFPCIKFEPKSKGWECK (SEQ ID NO:20);
[0336] DTHFPCIKFEPRSKKCK (SEQ ID NO:21);
[0337] DTHFPCIKFEPRSKGCKK (SEQ ID NO:22);
[0338] DTHFPCIKFKPRSKGCK (SEQ ID NO:23);
[0339] DTHFPCIKFEPKSKGCK (SEQ ID NO:24);
[0340] DTHFPCIKF (SEQ ID NO:25);
[0341] DTHFPCIIF (SEQ ID NO:26); o
[0342] DTKFPCIIF (SEQ ID NO:27),
[0343] en donde dicho péptido está opcionalmente PEGilado en R1, X o Y, y en donde una cadena lateral de un aminoácido del péptido está opcionalmente conjugada a un sustituyente lipófilo o una fracción polimérica. El análogo o péptido de hepcidina puede comprender una de las siguientes secuencias:
[0344] Ácido isovalérico-DTHFPICIFGPRSKGWVC-NH<2>(SEQ ID NO:9);
[0345] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:10)<;>
[0346] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:11)<;>
[0347] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSKGWACK-NH<2>(SEQ ID NO:12)<;>
[0348] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK-NH<2>(SEQ ID NO:13)<;>
[0349] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR-NH<2>(SEQ ID NO:14)<;>
[0350] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:28);
[0351] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:16)<;>
[0352] Ácido isovalérico-DTHFPICIFGPRS(K(PEG8))GWVC-NH<2>(SEQ ID NO:29);
[0353] Ácido isovalérico-DTHFPICIFGPRS(K(PEG4))GWVC-NH<2>(SEQ ID NO:30);
[0354] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH<2>(SEQ ID NO:31);
[0355] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG4))-NH<2>(SEQ ID NO:32);
[0356] Ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG2))-NH<2>(SEQ ID NO:33);
[0357] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:34);
[0358] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF)K(Palm))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:35);
[0359] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:36);
[0360] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRS(K(Palm))GWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:37);
[0361] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))NH<2>(SEQ ID NO:38);
[0362] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:39);
[0363] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:40)<;>
[0364] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:41)<;>
[0365] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:42)<;>
[0366] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH<2>(SEQ ID NO:43)<;>
[0367] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH<2>(SEQ ID NO:44)<;>
[0368] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF-K(isoGlu-Palm)-PRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:46)<;>
[0369] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(isoGlu-Palm))SKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:47)<;>
[0370] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(isoGlu-Palm))SKGWECK-NH<2>(SEQ ID NO:20)<;>
[0371] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRS(K(isoGlu-Palm))GCK-NH<2>(SEQ ID NO:48)<;>
[0372] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRSK(K(isoGlu-Palm))CK-NH<2>(SEQ ID NO:21);
[0373] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRSKGCK(K(isoGlu-Palm))-NH<2>(SEQ ID NO:49);
[0374] Ácido isovalérico-DTHFPCI-K(Dapa-Palm)-FEPRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:50)<;>
[0375] Ácido isovalérico-DTHFPCIK(F(Dapa-Palm))PRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:23);
[0376] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:24);
[0377] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRS(K(Dapa-Palm))GCK-NH<2>(SEQ ID NO:51);
[0378] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRSK(K(Dapa-Palm))CK-NH<2>(SEQ ID NO:52);
[0379] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))K-NH<2>(SEQ ID NO:53);
[0380] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))-NH<2>(SEQ ID NO:54);
[0381] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG11-Palm))PRSK[Sar]CK-NH<2>(SEQ ID NO:55);
[0382] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF-NH<2>(SEQ ID NO:25);
[0383] Hy-DTHFPCIKF-NH<2>(SEQ ID NO:25);
[0384] Ácido isovalérico-DTHFPCIIF-NH<2>(SEQ ID NO:26);
[0385] Hy-DTHFPCIIKF-NH<2>(SEQ ID NO:26);
[0386] Ácido isovalérico-DTKFPCIIF-NH<2>(SEQ ID NO:27); o
[0387] Hy-DTKFPCIIF-NH<2>(SEQ ID NO:27).
[0388] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:10).
[0389] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:11).
[0390] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:28).
[0391] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:16).
[0392] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH<2>(SEQ ID NO:31).
[0393] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:34).
[0394] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(Palm))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:35).
[0395] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:36).
[0396] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))-NH<2>(SEQ ID NO:38).
[0397] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:39).
[0398] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:40).
[0399] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:41).
[0400] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:42).
[0401] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH<2>(SEQ ID NO:43).
[0402] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH<2>(SEQ ID NO:44).
[0403] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(isoGlu-Palm))PRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:46).
[0404] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(isoGlu-Palm))SKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:47).
[0405] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRS(K(isoGlu-Palm))GCK-NH<2>(SEQ ID NO:48).
[0406] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCI(K(Dapa-Palm))FEPRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:50).
[0407] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina es: ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:24).
[0408] En un ejemplo, el análogo o péptido de hepcidina se selecciona del grupo que consiste en:
[0409] (a)
[0412]
[0414] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH<2>(SEQ ID NO:40);
[0415] (b)
[0416]
[0418] Ácido isovalérico-DTHFPCIKF(K(isoGlu-Palm))PRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:46);
[0419] (c)
[0422]
[0424] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEP(K(isoGlu-Palm))SKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:47); y
[0425] (d)
[0426]
[0428] Ácido isovalérico-DTHFPCIKFEPRS(K(isoGlu-Palm))GCK-NH<2>(SEQ ID NO:48), y
[0429] sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los mencionados anteriormente, en donde los aminoácidos son L-aminoácidos.
[0430] En algunas realizaciones, los análogos de hepcidina de la presente invención y como se describen en el presente documento más adelante son activos en una conformación de dímero, en particular cuando hay residuos de cisteína libres presentes en el péptido. En ciertas realizaciones, esto ocurre bien como un dímero sintetizado o, en particular, cuando está presente un péptido monomérico de cisteína libre y, en condiciones oxidantes, se dimeriza. En algunas realizaciones, el dímero es un homodímero. En otras realizaciones, el dímero es un heterodímero.
[0431] En ciertas realizaciones, un dímero análogo de hepcidina de la presente invención es un dímero peptídico que comprende dos monómeros de péptido análogo de hepcidina de la invención.
[0432] También se divulga en el presente documento un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos establecida en el presente documento, o que tiene cualquier secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 92 %, al menos un 94 % o al menos un 95 % de identidad con cualquiera de estas secuencias de aminoácidos. También se divulga en este documento un dímero que comprende dos polipéptidos, comprendiendo cada uno una secuencia de aminoácidos establecida en el presente documento, o que tiene cualquier secuencia de aminoácidos con al menos un 85 %, al menos un 90 %, al menos un 92 %, al menos un 94 % o al menos un 95 % de identidad con cualquiera de estas secuencias de aminoácidos. En realizaciones particulares, las subunidades monoméricas pueden dimerizarse mediante un puente disulfuro entre dos residuos de cisteína, uno en cada subunidad monomérica peptídica, o pueden dimerizarse mediante otra fracción enlazadora adecuada, incluidas las descritas en el presente documento. Se muestra que algunas de las subunidades monoméricas tienen extremos C y/o N que comprenden ambos grupos amina libre. Así, para producir un inhibidor de dímero peptídico, la subunidad monomérica puede modificarse para eliminar la amina libre C-terminal o N-terminal, permitiendo así la dimerización en la amina libre restante. Además, en algunos casos, un extremo terminal de una o más subunidades monoméricas se acila con un compuesto orgánico acilante seleccionado del grupo que consiste en 2-metil-trifluorobutilo, trifluoropentilo, acetilo, octonilo, butilo, pentilo, hexilo, palmitilo, ácido trifluorometilbutírico, ácido ciclopentanocarboxílico, ácido ciclopropilacético, ácido 4-fluorobenzoico, ácido 4-fluorofenilacético, ácido 3-fenilpropiónico, ácido tetraedro-2H-pirano-4-carboxílico, ácido succínico y ácido glutárico. En algunos casos, las subunidades monoméricas comprenden tanto un extremo carboxilo libre como un extremo amino libre, por lo que un usuario puede modificar selectivamente la subunidad para lograr la dimerización en el extremo deseado. Por lo tanto, un experto en la materia comprenderá que las subunidades monoméricas de la presente invención pueden modificarse selectivamente para obtener una amina única y específica para la dimerización deseada.
[0433] Se entiende además que los residuos C-terminales de las subunidades monoméricas divulgadas en el presente documento pueden ser amidas, a menos que se indique lo contrario. Además, se entiende que, en ciertas realizaciones, la dimerización en el extremo C-terminal se facilita mediante el uso de un aminoácido adecuado con una cadena lateral que tiene funcionalidad amina, como es generalmente conocido en la técnica. En cuanto a los residuos N-terminales, se entiende generalmente que la dimerización puede lograrse a través del grupo amino libre del residuo terminal, o bien mediante el uso de una cadena lateral de aminoácido adecuada que posea una amina libre, como es generalmente conocido en la técnica.
[0434] Además, se entiende que las cadenas laterales de uno o más residuos internos comprendidos en los monómeros de péptidos análogos de hepcidina de la presente invención pueden utilizarse con el propósito de dimerización. En tales realizaciones, la cadena lateral es en algunas realizaciones un aminoácido natural adecuado (por ejemplo, Lys), o alternativamente es un aminoácido no natural que comprende una cadena lateral adecuada para la conjugación, por ejemplo, a una fracción enlazadora adecuada, como se define en el presente documento.
[0435] Las fracciones enlazadoras que conectan las subunidades monoméricas pueden incluir cualquier estructura, longitud y/o tamaño que sea compatible con las enseñanzas contenidas en el presente documento. Por ejemplo, se puede seleccionar una fracción enlazadora del grupo no limitante que consiste en: cisteína, lisina, DIG, PEG4, PEG4-biotin, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, ADA, Boc-IDA, ácido glutárico, ácido isoftálico, ácido 1,3-fenilenodiacético, ácido 1,4-fenilenodiacético, ácido 1,2-fenilenodiacético, triazina, Boc-triazina, IDA-biotina, PEG4-biotina, AADA, alifáticos, aromáticos, heteroaromáticos y enlazadores basados en polietilenglicol adecuados con un peso molecular de aproximadamente 400 Da a aproximadamente 40.000 Da. En la Tabla 2 se proporcionan ejemplos no limitantes de fracciones enlazadoras adecuadas. Cualquiera de estas fracciones enlazadoras puede, alternativamente, enlazar una fracción de extensión de vida media a un análogo de hepcidina.
[0436] Tabla 2. Fracciones enlazadoras ilustrativas
[0438]
[0439]
[0440]
[0442] Quien tenga conocimientos en la técnica apreciará que las fracciones enlazadoras C- y N-terminales e internas divulgadas en el presente documento son ejemplos no limitantes de fracciones enlazadoras adecuadas, y que se puede incluir cualquier fracción enlazadora adecuada.
[0443] En ciertos ejemplos de dímeros de péptidos análogos de hepcidina, el extremo N de cada subunidad monomérica del péptido está conectado por una fracción enlazadora.
[0444] En ciertos ejemplos de dímeros de péptidos análogos de hepcidina, el extremo C de cada subunidad monomérica del péptido está conectado por una fracción enlazadora.
[0445] En ciertos ejemplos, las cadenas laterales de uno o más residuos de aminoácidos internos (por ejemplo, residuos de Lys) que comprenden cada subunidad monomérica peptídica de un dímero de péptido análogo de hepcidina están conectadas por una fracción enlazadora.
[0446] En ciertos ejemplos de dímeros de péptidos análogos de hepcidina, el extremo C, el extremo N o un aminoácido interno (por ejemplo, una cadena lateral de lisina) de cada subunidad monomérica del péptido está conectado por una fracción enlazadora y al menos dos residuos de cisteína o Pen de los dímeros de péptidos análogos de hepcidina están unidos por un puente disulfuro. Por ejemplo, un dímero peptídico puede tener una estructura general como la que se muestra a continuación. En la siguiente ilustración se muestran ejemplos esquemáticos no limitantes de dichos análogos de hepcidina:
[0449]
[0451] DIG (Dietilenglicol) IDA (ácido inminodiacético)
[0452]
[0455] Conjugados análogos de péptidos
[0457] Los análogos de hepcidina, incluidos los monómeros y los dímeros, pueden comprender uno o más sustituyentes químicos conjugados, como sustituyentes lipófilos y fracciones poliméricas, denominados colectivamente en el presente documento como fracciones de extensión de vida media. Sin querer limitarse a ninguna teoría en particular, se cree que el sustituyente lipófilo se une a la albúmina en el torrente sanguíneo, protegiendo así al análogo de hepcidina de la degradación enzimática y, por lo tanto, aumentando su vida media. Además, se cree que las fracciones poliméricas aumentan la vida media y reducen la eliminación en el torrente sanguíneo, y en algunos casos aumentan la permeabilidad a través del epitelio y la retención en la lámina propia. Además, también se supone que estos sustituyentes en algunos casos pueden mejorar la permeabilidad a través del epitelio y la retención en la lámina propia. El experto en la materia conocerá bien las técnicas adecuadas para preparar los compuestos empleados en el contexto de la invención. Para ejemplos de química adecuada no limitante, véase, por ejemplo, WO98/08871, WO00/55184, WO00/55119, Madsen et al (J. Med. Chem.2007, 50, 6126-32), y Knudsen et al.2000 (J. Med Chem.43, 1664-1669).
[0459] Las cadenas laterales de uno o más residuos de aminoácidos (por ejemplo, residuos de Lys) en un análogo de hepcidina como se describe en el presente documento pueden conjugarse además (por ejemplo, unirse covalentemente) a un sustituyente lipófilo u otra fracción de extensión de vida media. El sustituyente lipófilo puede estar unido covalentemente a un átomo de la cadena lateral del aminoácido, o alternativamente puede estar conjugado a la cadena lateral del aminoácido a través de uno o más espaciadores o fracciones enlazadoras. El espaciador o la fracción enlazadora, cuando esté presente, puede proporcionar espacio entre el análogo de hepcidina y el sustituyente lipófilo. Por ejemplo, la fracción de extensión de vida media puede conjugarse al análogo de hepcidina a través de una fracción enlazadora, que en ciertas realizaciones es una fracción enlazadora que se muestra en la Tabla 2 o se divulga o representa en cualquiera de las Tablas 2-7.
[0460] El sustituyente lipófilo o la fracción de extensión de vida media puede comprender una cadena de hidrocarburos que tenga de 4 a 30 átomos de C, por ejemplo, al menos 8 o 12 átomos de C, y preferiblemente 24 átomos de C o menos, o 20 átomos de C o menos. La cadena de hidrocarburos puede ser lineal o ramificada y puede ser saturada o insaturada. La cadena de hidrocarburos puede sustituirse por una fracción que forma parte de la unión a la cadena lateral del aminoácido o al espaciador, por ejemplo, un grupo acilo, un grupo sulfonilo, un átomo de N, un átomo de O o un átomo de S. En algunos ejemplos, la cadena de hidrocarburos se sustituye por un grupo acilo y, en consecuencia, la cadena de hidrocarburos puede formar parte de un grupo alcanoilo, por ejemplo palmitoilo, caproilo, lauroilo, miristoilo o estearoilo.
[0462] Un sustituyente lipófilo puede conjugarse a cualquier cadena lateral de aminoácido en un análogo de hepcidina como se describe en este documento. Por ejemplo, la cadena lateral del aminoácido puede incluir un grupo carboxilo, hidroxilo, tiol, amida o amina, para formar un éster, un éster sulfonilo, un tioéster, una amida o una sulfonamida con el espaciador o sustituyente lipófilo. Por ejemplo, el sustituyente lipófilo puede conjugarse con Asn, Asp, Glu, Gln, His, Lys, Arg, Ser, Thr, Tyr, Trp, Cys o Dbu, Dpr u Orn. El sustituyente lipófilo puede conjugarse con Lys. Un aminoácido que se muestra como Lys en cualquiera de las fórmulas proporcionadas en este documento puede ser reemplazado por, por ejemplo, Dbu, Dpr u Orn cuando se agrega un sustituyente lipófilo.
[0464] De forma alternativa o adicional, las cadenas laterales de uno o más residuos de aminoácidos en un análogo de hepcidina de la invención pueden conjugarse con una fracción polimérica u otra fracción de extensión de vida media, por ejemplo, para aumentar la solubilidad y/o la vida mediain vivo(por ejemplo, en plasma) y/o la biodisponibilidad. También se sabe que dichas modificaciones reducen la eliminación (por ejemplo, la eliminación renal) de proteínas y péptidos terapéuticos.
[0466] En el presente documento, el término "polietilenglicol" o "PEG" se refiere a un compuesto poliéter de fórmula general H-(O-CH2-CH2)n-OH. Los PEG también se conocen como óxidos de polietileno (PEO) o polioxietilenos (POE), según su peso molecular. PEO, PEE o POG según se usa en el presente documento, se refieren a un oligómero o polímero de óxido de etileno. Los tres nombres son químicamente sinónimos, pero PEG tiende a referirse a oligómeros y polímeros con una masa molecular inferior a 20.000 g/mol, PEO a polímeros con una masa molecular superior a 20.000 g/mol y POE a un polímero de cualquier masa molecular. El PEG y el PEO son líquidos o sólidos de bajo punto de fusión, dependiendo de sus pesos moleculares. A lo largo de esta divulgación, los tres nombres se utilizan indistintamente. Los PEG se preparan mediante la polimerización de óxido de etileno y están disponibles comercialmente en un amplio rango de pesos moleculares, desde 300 g/mol hasta 10.000.000 g/mol. Aunque el PEG y el PEO con diferentes pesos moleculares se utilizan en distintas aplicaciones y presentan diferentes propiedades físicas (por ejemplo, viscosidad) debido a los efectos de longitud de la cadena, sus propiedades químicas son prácticamente idénticas. La fracción polimérica es preferiblemente soluble en agua (anfifílica o hidrófila), no tóxica e inerte desde el punto de vista farmacéutico. Las fracciones poliméricas adecuadas incluyen los polietilenglicoles (PEG), los homopolímeros o copolímeros de PEG, un polímero de PEG monometil-sustituido (mPEG) o el polioxietilenglicerol (POG). Véase, por ejemplo, Int. J. Hematology 68:1 (1998); Bioconjugate Chem. 6:150 (1995); y Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys.9:249 (1992). También se incluyen los PEG que se preparan con el propósito de extender su vida media, por ejemplo, los óxidos de polialquileno (POA) monoactivados con terminación alcoxi, como los polietilenglicoles (mPEG) con terminación monometoxi; también se contemplan los óxidos de polietileno (glicoles) bisactivados u otros derivados de PEG. Los polímeros adecuados varían sustancialmente en peso, generalmente se seleccionan para los fines de la presente invención aquellos que van desde aproximadamente 200 hasta aproximadamente 40.000. En ciertas realizaciones, se utilizan PEG con pesos moleculares de 200 a 2000 daltons o de 200 a 500 daltons. También se pueden utilizar diferentes formas de PEG, dependiendo del iniciador utilizado para el proceso de polimerización; por ejemplo, un iniciador común es un éter metílico monofuncional de PEG, o metoxipoli(etilenglicol), abreviado mPEG. En la técnica se conocen otros iniciadores y son adecuados para utilizarse en la presente invención.
[0467] Los PEG de menor peso molecular también están disponibles como oligómeros puros, denominados monodispersos, uniformes o discretos. Estos se utilizan en ciertas realizaciones de la presente invención. Los PEG también están disponibles con diferentes geometrías: los PEG ramificados tienen de tres a diez cadenas de PEG que emanan de un grupo central; los PEG en estrella tienen de 10 a 100 cadenas de PEG que emanan de un grupo central; y los PEG en peine tienen múltiples cadenas de PEG normalmente injertadas en una cadena principal de polímero. Los PEG también pueden ser lineales. Los números que a menudo se incluyen en los nombres de los PEG indican sus pesos moleculares promedio (por ejemplo, un PEG con n = 9 tendría un peso molecular promedio de aproximadamente 400 daltons y se marcaría como PEG 400).
[0468] Tal como se utiliza en el presente documento, "PEGilación" es el acto de acoplar (por ejemplo, covalentemente) una estructura de PEG al análogo de hepcidina de la invención, que en ciertas realizaciones se denomina "análogo de hepcidina PEGilado". En ciertas realizaciones, el PEG de la cadena lateral PEGilada es un PEG con un peso molecular de aproximadamente 200 a aproximadamente 40.000. En ciertas realizaciones, la porción PEG de la fracción de extensión de vida media conjugada es PEG3, PEG4, PEGS, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10 o PEG11. En realizaciones particulares, es PEG11. En ciertas realizaciones, el PEG de un espaciador PEGilado es PEG3 o PEG8. En algunas realizaciones, un espaciador está PEGilado. En ciertas realizaciones, el PEG de lun espaciador PEGilado es PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10 o PEG11. En ciertas realizaciones, el PEG de un espaciador PEGilado es PEG3 o PEG8.
[0469] Un péptido análogo de hepcidina (o un dímero del mismo) puede conjugarse con un PEG que está unido covalentemente, por ejemplo, mediante una amida, un tiol, química de clic o cualquier otro método adecuado conocido en la técnica. En ciertas realizaciones, el PEG se une mediante un enlace amida y, por lo tanto, algunos derivados de PEG utilizados estarán funcionalizados adecuadamente. Por ejemplo, el PEG11, que es O-(2-aminoetil)-O'-(2-carboxietil)-undecaetilenglicol, tiene tanto una amina como un ácido carboxílico para la unión a un péptido. El PEG25 contiene un diácido y 25 fracciones glicol.
[0470] Otras fracciones poliméricas adecuadas incluyen poliaminoácidos como la poli-lisina, el ácido poli-aspártico y el ácido poli-glutámico (véase, por ejemplo, Gombotz, et al. (1995), Bioconjugate Chem., vol. 6: 332-351; Hudecz, et al. (1992), Bioconjugate Chem., vol.3, 49-57 y Tsukada, et al. (1984), J. Natl. Cancer Inst., vol.
[0471] 73, : 721-729) . La fracción polimérica puede ser de cadena lineal o ramificada, y puede tener un peso molecular de 500-40.000 Da, por ejemplo 500-10.000 Da, 1000-5000 Da, 10.000-20.000 Da o 20.000-40.000 Da.
[0472] Un análogo de hepcidina puede comprender dos o más de dichas fracciones poliméricas, en cuyo caso el peso molecular total de todas esas fracciones generalmente estará dentro de los rangos proporcionados anteriormente.
[0473] La fracción polimérica puede estar acoplada (mediante enlace covalente) a un grupo amino, carboxilo o tiol de una cadena lateral de aminoácido. Algunos ejemplos son el grupo tiol de los residuos de Cys y el grupo amino épsilon de los residuos de Lys, y también pueden estar implicados los grupos carboxilo de los residuos de Asp y Glu.
[0474] El trabajador cualificado conocerá bien las técnicas adecuadas que se pueden utilizar para realizar la reacción de acoplamiento. Por ejemplo, una fracción de PEG que contiene un grupo metoxi se puede acoplar a un grupo tiol de Cys mediante un enlace maleimido utilizando reactivos disponibles comercialmente de Nektar Therapeutics AL. Véase también el documento WO 2008/101017 y las referencias citadas anteriormente, para obtener detalles sobre la química adecuada. También se puede conjugar un PEG funcionalizado con maleimida al grupo sulfhidrilo de la cadena lateral de un residuo de Cys.
[0475] Tal como se utiliza en el presente documento, la oxidación del enlace disulfuro puede ocurrir en un solo paso o es un proceso de dos pasos. Tal como se utiliza en el presente documento, para un solo paso de oxidación, el grupo protector tritilo se emplea a menudo durante el ensamblaje, lo que permite la desprotección durante la escisión, seguida de la oxidación en solución. Cuando se requiere un segundo enlace disulfuro, se tiene la opción de oxidación nativa o selectiva. Para la oxidación selectiva que requiere grupos protectores ortogonales, se utilizan Acm y Tritilo como grupos protectores para la cisteína. La escisión produce la eliminación de un par protector de cisteínas, lo que permite la oxidación de este par. A continuación se realiza el segundo paso de desprotección oxidativa del grupo Acm protegido por cisteína. Para la oxidación nativa, se utiliza el grupo protector tritilo para todas las cisteínas, lo que permite el plegamiento natural del péptido.
[0476] Un trabajador cualificado conocerá bien las técnicas adecuadas que se pueden utilizar para realizar la reacción de oxidación.
[0477] En algunos ejemplos, un análogo de hepcidina puede comprender una fracción de extensión de vida media, que puede seleccionarse entre, pero no se limita a ellos, los siguientes: Ahx-Palm, PEG2-Palm, PEG11-Palm, isoGlu-Palm, dapa-Palm, isoGlu-ácido láurico, isoGlu-ácido mirístico e isoGlu-ácido isovalérico.
[0478] Por ejemplo, la fracción de extensión de vida media puede tener la estructura que se muestra a continuación, en donde n=0 a 24 o n=14 a 24:
[0481]
[0483] Un análogo de hepcidina como se describe en el presente documento puede comprender una fracción de extensión de vida media conjugada que se muestra en la Tabla 3.
[0484] Tabla 3. Fracciones de extensión de vida media ilustrativas
[0487]
[0488]
[0491] Una fracción de extensión de vida media puede conjugarse directamente a un análogo de hepcidina, o puede conjugarse a un péptido análogo de hepcidina a través de una fracción enlazadora, por ejemplo, cualquiera de las representadas en las Tablas 2 o 4.
[0493] Tabla 4. Fracciones enlazadoras ilustrativas
[0496]
[0497]
[0498]
[0500] Con referencia a las estructuras enlazadoras que se muestran en la Tabla 4, la referencia a n=1 a 24 o n= 1 a 25, o similares, (por ejemplo, en L4, L8 o L13) indica que n puede ser cualquier número entero dentro del rango citado. Por ejemplo, para L4 que se muestra en la Tabla 4, n podría ser 1, 2, 3, etc., en donde cuando n=5, L4 tiene la estructura que se muestra en L3 (Ahx).
[0501] Un análogo de hepcidina como el descrito en el presente documento puede comprender cualquiera de las fracciones enlazadoras que se muestran en la Tabla 4 y cualquiera de las fracciones de extensión de vida media que se muestran en la Tabla 3, incluidas cualquiera de las siguientes combinaciones que se muestran en la Tabla 5.
[0502] Tabla 5. Combinaciones ilustrativas de enlazadores y fracciones de extensión de vida media en análogos de hepcidina
[0504]
[0505]
[0507] Un análogo de hepcidina puede comprender dos o más enlazadores. Los dos o más enlazadores pueden estar concatenados, es decir, unidos entre sí. También se describen en el presente documento polinucleótidos que codifican un polipéptido que tiene una secuencia peptídica presente en cualquiera de los análogos de hepcidina descritos en el presente documento.
[0508] También se describen en el presente documentos vectores, por ejemplo, vectores de expresión, que comprenden un polinucleótido como se discutió anteriormente.
[0509] Métodos de tratamiento
[0510] La policitemia vera (PV) es un trastorno clonal trilineal crónico y progresivo que se caracteriza por una mayor proliferación/acumulación de células mieloides, eritroides y megacariocíticas y está caracterizada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como una neoplasia mieloproliferativa (Arber et al., 2016,127(20):2391-405). El diagnóstico se define por dos criterios; el primero es el aumento de la masa de glóbulos rojos, la biopsia de médula ósea que muestra hipercelularidad trilineal y la presencia de mutaciones JAK2V617F o JAK2 en el exón 12 y el segundo criterio incorpora policitemia, confirmación por biopsia de médula ósea y niveles por debajo de los normal de eritropoyetina sérica (Arber et al., 2016,127(20):2391-405). Durante la producción de glóbulos rojos en individuos normocitémicos, la eritropoyesis está regulada por la eritropoyetina, que depende de JAK2; sin embargo, cuando JAK2 se activa constitutivamente, la producción de glóbulos rojos independiente de la eritropoyetina conduce a la policitemia. Aproximadamente el 95 % de los pacientes con PV poseen la mutación JAK2V617F (Rampal et a., Blood.2014, 123(22):e123-33,). La PV puede progresar a mielofibrosis o sufrir una transformación leucémica. La policitemia en hombres con PV se caracteriza por Hgb >16,5 g/dL o Hct >49 % y por Hgb >16,0 g/dL o Hct >48 % en mujeres. Un hematocrito superior al 44 % en pacientes con PV se asocia con un fuerte aumento en el número de complicaciones tromboembólicas sufridas (Pearson et al., Lancet.1978;2:1219-1221). Se realiza una biopsia de médula ósea para confirmar la PV, derivada de la trombocitemia esencial, y debe mostrar hipercelularidad para la edad con crecimiento trilineal.
[0511] Se estima que 148.000 personas en los Estados Unidos viven con PV con una edad mediana al momento del diagnóstico de 61 años (Stein et al., J Clin Oncol.2015 Nov 20;33(33):3953-60). Los síntomas de la policitemia, relacionados con la hiperviscosidad sanguínea, incluyen fatiga, dolor óseo, dolores de cabeza, mareos, trastornos visuales, dolor torácico atípico, prurito, eritromelalgia y parestesia (Tefferi et al., Blood Cancer J.
[0512] 2018, 8(1):3). Las características clínicas incluyen esplenomegalia, complicaciones trombóticas y hemorrágicas, y riesgo de transformación leucémica.
[0513] La PV se clasifica en dos categorías de riesgo que definen el régimen de tratamiento posterior: alto riesgo (edad >60 años y antecedentes de trombosis) y bajo riesgo (edad < 60 años y ausencia de antecedentes de trombosis) (Tefferi & Barbui, Am J Hematol. 2017 Jan;92(1):94-108). En EE. UU. se puede utilizar una clasificación alternativa: alto riesgo (edad >60 años) y bajo riesgo (edad < 60 años). Todos los pacientes con PV se someten a flebotomía terapéutica para reducir el hematocrito y a aspirina una vez al día (81 mg) para prevenir complicaciones trombohemorrágicas. Antes de la incorporación de la flebotomía terapéutica, la mediana de supervivencia para la PV no tratada era inferior a 2 años, y la muerte se atribuía a complicaciones trombóticas (Tefferi et al., 2018). Con los tratamientos actuales, la mediana de supervivencia, desde el momento del diagnóstico, en pacientes menores de 60 años es de 24 años en comparación con los 14 años en aquellos mayores de 60 años. El objetivo de hematocrito para la flebotomía terapéutica es <45 % para los hombres y <42 % para las mujeres y <36 % durante el embarazo (Streiff et al., Blood. 2002, 99 (4): 1144-9), lo que corresponde a niveles de Hgb de 15, 14 y 12 g/dL, respectivamente. El objetivo de la flebotomía terapéutica es crear un estado crónico de deficiencia de hierro, disminuyendo así la producción de glóbulos rojos. Además, los glóbulos rojos con deficiencia de hierro son menos viscosos que la sangre normocitémica debido a su menor tamaño. Afortunadamente, la evaluación posterior al ejercicio confirmó que los pacientes con PV con deficiencia crónica de hierro no experimentan los déficits aeróbicos asociados con la deficiencia de hierro que se anticipan en sus contrapartes normocitémicas (Rector et al., Medicine (Baltimore).1982 Nov;61(6):382-9).
[0515] La terapia citorreductora se utiliza para pacientes de alto riesgo y aquellos pacientes de bajo riesgo que no pueden tolerar la flebotomía, presentan esplenomegalia progresiva o tienen recuentos de plaquetas >1500x10<9>/L o leucocitosis progresiva. Los agentes citorreductores incluyen, pero no están limitados a ellos, hidroxiurea, interferón alfa, ruxolitinib (Jakafi<®>) y busulfán. En EE. UU., la hidroxiurea es el tratamiento de primera línea para los pacientes con PV mayores de 40 años, ya que mejora eficazmente la mielosupresión y reduce el riesgo de trombosis en comparación con el uso de la flebotomía sola. Sin embargo, están justificadas las preocupaciones sobre el riesgo a largo plazo de leucemia secundaria asociado a la hidroxiurea. Después de un seguimiento mediano de más de 8 años, el Grupo de Estudio de la Policitemia Vera informó que el 5,4 % de los pacientes evaluados con PV desarrollaron leucemia después de recibir hidroxiurea, en comparación con el 1,5 % de los tratados solo con flebotomía (Fruchtman et al., Semin Hematol.1997, 34:17-23). Los pacientes que son intolerantes o resistentes a la hidroxiurea pueden ser tratados con IFN-α pegilado o busulfán. Se prefiere el IFN-α en pacientes menores de 65 años y el busulfán en personas mayores.
[0517] Aproximadamente uno de cada cuatro pacientes con PV se consideran no controlados ya que tienen una respuesta inadecuada o son intolerantes a la hidroxiurea. Jakafi<®>(ruxolitinib) es un inhibidor de JAK1/JAK2 aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE. UU. para pacientes con PV que son resistentes o intolerantes a la hidroxiurea. La aprobación se basó en el estudio de fase 3, denominado RESPONSE: estudio aleatorizado, de etiqueta abierta y multicéntrico de fase 3 sobre la eficacia y seguridad en pacientes con policitemia vera resistentes o intolerantes a la hidroxiurea: comprimidos del inhibidor de JAK INC424 frente al mejor tratamiento disponible (BAT). El ensayo evaluó a pacientes con PV dependiente de flebotomía y esplenomegalia que eran intolerantes o resistentes a la hidroxiurea y fueron asignados aleatoriamente a ruxolitinib (n=110) o al mejor disponible (n=112). El criterio de valoración principal compuesto incluyó el control del hematocrito (<45 %) y la reducción del bazo (reducción ≥ 35 %) en la semana 32. Después de la semana 32, los pacientes que fueron asignados aleatoriamente a la mejor terapia disponible podían cambiar a ruxolitinib. A las 32 semanas, el 77 % de los pacientes asignados aleatoriamente a ruxolitinib cumplieron al menos 1 componente del criterio de valoración principal, pero solo el 1 % de los pacientes que recibieron BAT alcanzaron el criterio de valoración principal. La mayoría (91 %) de los pacientes tratados con ruxolitinib que alcanzaron el criterio de valoración principal tuvieron una respuesta confirmada en la semana 48, y la probabilidad de mantener una respuesta primaria durante 1 año fue del 94 %. La tasa de eventos tromboembólicos fue menor en el grupo de ruxolitinib, con solo 1 evento (trombosis de la vena porta) reportado hasta la semana 32, en comparación con 6 eventos entre los pacientes que recibieron BAT. Los investigadores del ensayo RESPONSE concluyeron que en pacientes con PV que tuvieron una respuesta inadecuada o intolerancia a la hidroxiurea, el ruxolitinib fue superior al BAT para controlar el hematocrito sin flebotomía, normalizar los recuentos de células sanguíneas, reducir el volumen del bazo y mejorar los síntomas asociados con la PV, incluidos el prurito, la fatiga y los sudores nocturnos.
[0519] Los pacientes en los EE. UU. reciben aproximadamente 8 flebotomías por año, y el procedimiento causa angustia, molestias e inconvenientes (Boccia et al., Blood, 2017, 130 (Suppl 1), 5271). Se dedica una cantidad considerable de tiempo a las flebotomías, abarcando aproximadamente media jornada laboral por procedimiento. Además, se produce una gran cantidad de ciclos redox/metabólicos (se necesita más información al respecto), por lo que si el objetivo final de la terapia de flebotomía en la policitemia vera es lograr un estado de deficiencia crónica de hierro que limite la eritropoyesis, entonces esto se puede obtener teóricamente con hepcidina/miméticos de hepcidina.
[0521] La hepcidina, un péptido de 25 aminoácidos, regula la homeostasis sistémica del hierro y es generada por el hígado en respuesta a la concentración de hierro plasmático y a las reservas de hierro. La hepcidina inhibe la ferroportina (FPN-1), el exportador celular de hierro, que se expresa en las superficies de las células involucradas en la absorción, el reciclaje y el almacenamiento de hierro. La hepcidina modula la restricción sistémica de hierro y la administración exógena de un mimético de hepcidina exógeno disminuyó las concentraciones de Hgb y la esplenomegalia en un modelo murino de PV (Casu et al, Blood.2016;128(2):265-276).
[0523] Cuando JAK2 se activa constitutivamente, se desencadena la producción de glóbulos rojos independiente de la eritropoyetina, lo que conduce a la policitemia. Una estrategia para prevenir el efecto de la Jak2 mutada consiste en inducir la restricción de hierro con hepcidina o péptidos miméticos de hepcidina. El nivel bajo de hierro inhibe la señalización de la eritropoyetina en un punto aguas abajo de Jak2, proporcionando así una señal de inhibición. Cuando se administran péptidos miméticos de la hepcidina a ratones transgénicos que expresan un gen Jak2 humano con la mutación causante de la policitemia, el aumento de la producción de glóbulos rojos y del hematocrito, característico de la policitemia vera, se revierte a valores normales. Referencia (Casu et al Blood.2016; 128(2):265-276).
[0525] La presente invención proporciona un análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la policitemia vera en un sujeto humano que lo necesite, en donde el análogo de hepcidina es:
[0528]
[0531] Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(isoGlu-Palm))FEPRSKGCK-NH2 (SEQ ID NO:45);en donde los aminoácidos son L-aminoácidos; y en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra mediante inyección subcutánea; al sujeto se le administra entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas. En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina que se administra al sujeto está presente en una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica). Se entiende que, a lo largo del presente documento, la referencia a un análogo de hepcidina incluye las sales farmacéuticamente aceptables de dichos análogos de hepcidina.
[0533] También se divulga en el presente documento un método para tratar a un sujeto afectado por una enfermedad o trastorno caracterizado por una mayor actividad o expresión de ferroportina, en donde el método comprende administrar al individuo un análogo de hepcidina o una composición de la presente invención en una cantidad suficiente para unirse (parcial o totalmente) a la ferroportina y agonizarla en el sujeto. También se divulga en el presente documento un método para tratar a un sujeto que padece una enfermedad o trastorno caracterizado por un metabolismo del hierro desregulado, en donde el método comprende administrar al sujeto un análogo de hepcidina o una composición de la presente invención.
[0535] En ciertas realizaciones, la policitemia vera es policitemia vera que requiere flebotomía. En algunas realizaciones, la policitemia vera es policitemia vera que requiere flebotomía en un paciente de bajo riesgo. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente con policitemia vera de alto riesgo. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente con policitemia vera de bajo riesgo. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente con policitemia vera que requiere flebotomía sintomático. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente de bajo riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente de alto riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía. En algunas realizaciones, el sujeto es diagnosticado con policitemia vera y ha recibido al menos tres flebotomías para alcanzar un hematocrito objetivo <45 % en las 24 semanas previas a la administración de la composición farmacéuticamente aceptable al sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero, por ejemplo, un ser humano.
[0537] De acuerdo con la presente invención, al sujeto se le administra desde aproximadamente 20 mg hasta aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En realizaciones particulares, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 50 mg o aproximadamente 20 mg a aproximadamente 40 mg, por ejemplo, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg.
[0539] También se divulga en el presente documento un método para tratar la policitemia vera en un sujeto humano que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, péptido o composición divulgada en el presente documento, por ejemplo, un péptido que tiene la estructura de SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:46; SEQ ID NO:47 o SEQ ID NO:48. La policitemia vera puede ser policitemia vera que requiere flebotomía, por ejemplo policitemia vera que requiere flebotomía en un paciente de bajo riesgo. El sujeto puede ser un paciente con policitemia vera que requiere flebotomía sintomático. El sujeto puede ser un paciente de bajo riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía. Alternativamente, el sujeto es un paciente de alto riesgo con policitemia vera que requiere flebotomía. El sujeto puede ser diagnosticado con policitemia vera y ha recibido al menos tres flebotomías para alcanzar un hematocrito objetivo <45 % en las 24 semanas previas a la administración de la composición farmacéuticamente aceptable al sujeto.
[0541] La cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 200 mg o de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg, por ejemplo, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 100 mg o aproximadamente 120 mg.
[0543] También se divulga en el presente documento un método para tratar a un sujeto humano que tiene policitemia vera que requiere flebotomia, que comprende administrar subcutáneamente al sujeto una cantidad eficaz de un análogo de hepcidina divulgado en el presente documento, por ejemplo, un péptido que tiene la estructura de SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:46; SEQ ID NO:47 o SEQ ID NO:48. La cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg, por ejemplo, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 80 mg o aproximadamente 100 mg, y el análogo de hepcidina se administra al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana, aproximadamente una vez semanas alternas o aproximadamente una vez al mes. En realizaciones particulares, al sujeto se le administra aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo aproximadamente una vez cada semana. Cuando se administra el análogo de hepcidina a una mujer, se puede administrar una cantidad reducida del análogo de hepcidina, por ejemplo, de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 60 mg, por ejemplo, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg o aproximadamente 60 mg. El análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse aproximadamente una vez cada dos semanas o aproximadamente una vez al mes. El análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse varias veces durante un período de tiempo, por ejemplo, un período de tiempo de al menos seis meses, al menos o aproximadamente un año, al menos o aproximadamente dos años, al menos o aproximadamente cinco años, o durante toda la vida del sujeto.
[0545] En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el péptido se administra en una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica). De acuerdo con la presente invención, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (o composición) se administra mediante inyección subcutánea. En algunas realizaciones, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (o composición) se administra aproximadamente semanalmente durante un período de tiempo, por ejemplo, durante el tiempo que sea necesario. Se administra un análogo o péptido (o composición) de hepcidina aproximadamente cada tres días, aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente cada cuatro días, aproximadamente cada cinco días, aproximadamente semanalmente, aproximadamente una vez cada dos semanas, aproximadamente una vez al mes, aproximadamente una vez cada seis semanas, aproximadamente una vez cada ocho semanas, aproximadamente una vez cada dos meses o aproximadamente una vez cada tres meses. En algunos ejemplos, se administra aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas. En algunos casos, se administra aproximadamente una vez por semana. Alternativamente, se administra aproximadamente una vez cada dos semanas, aproximadamente una vez al mes o aproximadamente una vez cada dos meses. De acuerdo con la presente invención, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas.
[0547] La cantidad eficaz del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede ser una cantidad suficiente para lograr una concentración plasmática o sérica del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en el sujeto de aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 3500 ng/mL, de aproximadamente 100 ng/mL a aproximadamente 3000 ng/mL, de aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 900 ng/mL, o de aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 250 ng/mL, o de aproximadamente 20 ng/mL a 150 ng/mL. La cantidad eficaz mantiene de manera óptima a los pacientes dentro del rango deseable de valores de hematocrito definido en el presente documento.
[0549] También se describe en este documento un método para tratar la PV en un sujeto, que comprende proporcionar una cantidad eficaz de un análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo al sujeto, en donde al sujeto se le proporciona una cantidad de análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que logra una concentración plasmática o sérica del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de aproximadamente 2 ng/mL a aproximadamente 3500 ng/mL, aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 3500 ng/mL de aproximadamente 100 ng/mL a aproximadamente 3000 ng/mL, de aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 900 ng/mL, o de aproximadamente 5 ng/mL a aproximadamente 250 ng/mL, o de aproximadamente 20 ng/mL a 150 ng/mL. Por ejemplo, la concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar es de al menos aproximadamente 25 ng/mL, al menos aproximadamente 50 ng/mL, al menos aproximadamente 100 ng/mL, al menos aproximadamente 200 ng/mL, al menos aproximadamente 500 ng/mL, al menos aproximadamente 1000 ng/mL, al menos aproximadamente 1500 ng/mL, al menos aproximadamente 2000 ng/mL, al menos aproximadamente 2500 ng/mL o al menos aproximadamente 3000 ng/mL. La concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de aproximadamente 200 ng/mL a aproximadamente 3200 ng/mL, o de aproximadamente 1000 ng/mL a aproximadamente 3200 ng/mL, o de aproximadamente 1000 ng/mL a aproximadamente 2000 ng/mL, o de aproximadamente 2000 ng/mL a aproximadamente 3000 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto A. Por ejemplo, la concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de al menos 4 ng/mL, al menos 5 ng/mL, al menos 8 ng/mL, al menos 10 ng/mL, al menos 12 ng/mL, al menos 15 ng/mL, al menos 17 ng/mL o al menos 20 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto A. La concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de al menos aproximadamente 4 ng/mL. o al menos aproximadamente 17 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto A. Por ejemplo, este nivel plasmático o sérico se alcanza tras una administración y se mantiene hasta la siguiente administración del análogo de hepcidina, por ejemplo, el compuesto A o el compuesto B. Este nivel plasmático o sérico puede alcanzarse y mantenerse durante al menos cuatro días, al menos cinco días, al menos seis días o al menos una semana después de la administración del análogo de hepcidina, por ejemplo, el compuesto A o el compuesto B. La concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de al menos aproximadamente 20 ng/mL, al menos aproximadamente 30 ng/mL, al menos aproximadamente 50 ng/mL, al menos aproximadamente 100 ng/mL, al menos aproximadamente 150 ng/mL, al menos aproximadamente 200 ng/mL, al menos aproximadamente 500 ng/mL, al menos aproximadamente 1000 ng/mL, al menos aproximadamente 1500 ng/mL o al menos aproximadamente 2000 ng/mL, al menos aproximadamente 2500 ng/mL, o al menos aproximadamente 3000 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto A. La concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de al menos aproximadamente 50 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, al menos aproximadamente 100 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, al menos aproximadamente 250 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, al menos aproximadamente 400 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, al menos aproximadamente 500 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, al menos aproximadamente 800 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, o al menos aproximadamente 1000 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, por ejemplo, para el compuesto A. La concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de aproximadamente 25 ng/mL a aproximadamente 1000 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, aproximadamente 100 ng/mL a aproximadamente 1000 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, aproximadamente 200 ng/mL a aproximadamente 1000 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, aproximadamente 400 ng/mL a aproximadamente 850 ng/mL dentro de las 20-48 horas posteriores a la administración, por ejemplo, para el Compuesto A. Por ejemplo, la concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar puede ser de aproximadamente 25 ng/mL a aproximadamente 125 ng/mL, o de aproximadamente 50 ng/mL a aproximadamente 125 ng/mL, por ejemplo, para el Compuesto B. En ciertas realizaciones, la concentración plasmática o sérica que se debe alcanzar es de al menos aproximadamente 25 ng/mL, al menos aproximadamente 50 ng/mL, o al menos aproximadamente 100 ng/mL, por ejemplo, para el Compuesto B. Esta concentración plasmática o La concentración sérica puede ser la concentración plasmática o sérica máxima tras la administración del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Esta concentración plasmática o sérica puede mantenerse durante un período de tiempo posterior a la administración del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, un período de tiempo de al menos dos días, al menos tres días, al menos cuatro días, al menos cinco días, al menos seis días, al menos una semana, al menos 9 días, al menos 12 días o al menos dos semanas. Por ejemplo, la concentración plasmática o sérica alcanzada puede ser de aproximadamente 200 ng/mL a aproximadamente 3200 ng/mL o de aproximadamente 1000 ng/mL a aproximadamente 3200 ng/mL, o de aproximadamente 1000 ng/mL a aproximadamente 2000 ng/mL, o de aproximadamente 2000 ng/mL a aproximadamente 3000 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto A, por ejemplo, durante aproximadamente 4 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas o aproximadamente 48 horas. La concentración plasmática o sérica alcanzada puede ser al menos aproximadamente 200 ng/mL, al menos aproximadamente 500 ng/mL, al menos aproximadamente 1000 ng/mL, al menos aproximadamente 1500 ng/mL, al menos aproximadamente 2000 ng/mL, al menos aproximadamente 2500 ng/mL, o al menos aproximadamente 3000 ng/mL, por ejemplo, para el Compuesto A, durante al menos aproximadamente 4 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 48 horas, o aproximadamente 72 horas. La concentración plasmática o sérica alcanzada puede ser al menos aproximadamente 25 ng/mL a aproximadamente 125 ng/mL, o de aproximadamente 50 ng/mL a aproximadamente 125 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto B, por ejemplo, durante aproximadamente 4 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, o aproximadamente 48 horas. La concentración plasmática o sérica alcanzada puede ser al menos aproximadamente 25 ng/mL, al menos aproximadamente 50 ng/ mL, o al menos aproximadamente 100 ng/mL, por ejemplo, para el compuesto B, por ejemplo, durante aproximadamente 4 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, o aproximadamente 48 horas.
[0551] En ciertas realizaciones, el sujeto también se trata con terapia citorreductora, por ejemplo, hidroxiurea, interferón o ruxolitinib. Cuando el análogo de hepcidina se utiliza en combinación con terapia citorreductora, se puede administrar una cantidad reducida del análogo de hepcidina.
[0553] Cualquiera de los métodos divulgados en el presente documento puede comprender además un paso de determinación del hematocrito del sujeto después de la administración del análogo de hepcidina. Como se muestra en la Figura 7, los niveles de hematocrito se pueden mantener en un nivel deseado ajustando la cantidad de análogo de hepcidina administrado a un paciente. De este modo, los métodos pueden utilizarse para identificar y administrar una concentración/dosis de análogo de hepcidina que sea óptima para mantener el hematocrito por debajo de un nivel objetivo. El nivel objetivo para los seres humanos puede ser del 45 % o inferior, por ejemplo, como se mide en el presente documento. El nivel objetivo para los hombres puede ser del 45 % o inferior (por ejemplo, de aproximadamente el 37 % a aproximadamente 45 %); en algunos casos, el nivel umbral objetivo para las mujeres (por ejemplo, no embarazadas) es del 43 % o inferior, o del 42 % o inferior (por ejemplo, de aproximadamente 35 % a aproximadamente 42 % o 43 %); y en algunos casos, el nivel objetivo para las mujeres embarazadas es 36 % o inferior (por ejemplo, aproximadamente el 30 % a aproximadamente 36 %). El método puede lograr un hematocrito inferior al 45 % (o a un nivel definido, por ejemplo, 42 %) para un paciente en función de la comprensión de la relación entre la dosis del análogo de hepcidina y la respuesta del hematocrito (es decir, la reducción del hematocrito). De este modo, la información divulgada proporciona regímenes de dosificación que pueden maximizar el tiempo durante el cual el hematocrito de los pacientes se encuentra por debajo de un nivel objetivo deseado y minimizar las fluctuaciones por encima de este nivel objetivo.
[0555] El hematocrito del sujeto puede determinarse durante un período de tiempo comprendido entre aproximadamente un día y aproximadamente 7 días después de la administración del análogo de hepcidina. Si se determina que el hematocrito del sujeto es superior al 45 %, entonces se le puede administrar una dosis más alta del análogo de hepcidina en el siguiente tratamiento programado, en comparación con la dosis administrada inmediatamente antes de que se determinara el hematocrito. Si se determina que el hematocrito del sujeto es superior al nivel objetivo deseado para el sexo y el estado de embarazo del sujeto, entonces se le puede administrar al sujeto una dosis más alta del análogo de hepcidina en el siguiente tratamiento programado, en comparación con la dosis administrada inmediatamente antes de que se determinara el hematocrito. Si se determina que el hematocrito del sujeto es inferior de un nivel umbral, por ejemplo, por debajo de 42 %, por debajo de 40 %, por debajo de 37,5 %, por debajo de 36 % o por debajo de 35 %, entonces se le puede administrar al sujeto una dosis más baja del análogo de hepcidina en el siguiente tratamiento programado, en comparación con la dosis administrada inmediatamente antes de que se determinara el hematocrito. Si se determina que el hematocrito del sujeto está dentro de un rango aceptable, por ejemplo, entre 35 % y 42 %, entre 35 % y 45 %, ente 37,5 % y 45 %, entre 40 % y 45 %, o ente 40 % y 44 %, entonces se le puede administrar al sujeto la misma dosis del análogo de hepcidina en el siguiente tratamiento programado, en comparación con la dosis administrada inmediatamente antes de que se determinara el hematocrito. El rango aceptable puede variar dependiendo del sexo y el estado de embarazo del sujeto. Por ejemplo, el rango aceptable para un hombre puede ser de aproximadamente 37 % a aproximadamente 45 %, el rango aceptable para una mujer no embarazada puede ser de aproximadamente 35 % a aproximadamente 42 % o 43 %, y el rango aceptable para una mujer embarazada puede ser de aproximadamente 30 % a aproximadamente 36 %.
[0557] El nivel de hematocrito del sujeto puede determinarse varias veces durante el curso del tratamiento para controlar la eficacia de la dosis administrada y la dosis se puede modificar según sea necesario para mantener el hematocrito del sujeto dentro de un rango objetivo, por ejemplo, del 30 % al 35 %, del 35 % al 41 %, del 35 % al 45 %, del 37,5 % al 45 %, del 40 % al 45 % o del 40 % al 43 %. Por ejemplo, el nivel de hematocrito del sujeto puede determinarse aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada tres semanas, aproximadamente cada cuatro semanas o aproximadamente cada ocho semanas durante el transcurso del tratamiento. En ciertas realizaciones, puede determinarse aproximadamente cada cuatro semanas durante el transcurso del tratamiento. En determinadas realizaciones, el rango objetivo es el rango aceptable para el sexo y el estado de embarazo del sujeto. En ciertas realizaciones, la cantidad del análogo de hepcidina o de la sal farmacéuticamente aceptable del mismo administrada al sujeto, se puede obtener o ajustar, en donde la cantidad se incrementa si el hematocrito determinado del sujeto es mayor que 45 %, en donde la cantidad se disminuye si el hematocrito determinado del sujeto es menor que 37,5 % o 40 %, y se mantiene la cantidad si el hematocrito determinado del sujeto está entre 37,5 % y 45 % o entre 40 % y 44 %.
[0559] También se describe en el presente documento un método para tratar la PV, que comprende administrar por vía subcutánea a un paciente diagnosticado con PV un análogo de hepcidina, por ejemplo, el compuesto A, en una dosis de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 80 mg, aproximadamente una vez por semana durante un período de tiempo de al menos siete semanas, en donde el método da como resultado que el sujeto no necesite o no se someta a una flebotomía terapéutica durante las siete semanas. La dosis puede ser, por ejemplo, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg. Es posible que el sujeto haya recibido una o más flebotomías terapéuticas antes del tratamiento con el análogo de hepcidina, por ejemplo, dentro de las ocho semanas previas al tratamiento con el análogo de hepcidina. El sujeto puede ser un hombre y su nivel de hematocrito se mantiene en <45 % durante al menos siete semanas. Alternativamente, el sujeto puede ser una mujer no embarazada y su nivel de hematocrito se mantiene en <42 % o <43 % durante al menos siete semanas. Alternativamente, el sujeto puede ser una mujer embarazada y su nivel de hematocrito se mantiene en <36 % durante al menos siete semanas. El nivel de hematocrito puede mantenerse durante al menos ocho semanas, al menos 12 semanas, al menos 16 semanas, al menos 6 meses, al menos un año o al menos dos años después de la primera administración del análogo de hepcidina y durante el tratamiento.
[0561] El nivel de hematocrito del sujeto puede medirse una o más veces durante las siete semanas, y la siguiente dosis semanal se aumenta si el nivel de hematocrito del sujeto está por encima de un rango aceptable, o se disminuye si el nivel de hematocrito del sujeto está por debajo de un rango aceptable. Por ejemplo, en un sujeto masculino el rango aceptable puede ser de aproximadamente 37 % a aproximadamente 45 %. La dosis, ya sea aumentada o reducida, también puede estar entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 80 mg. La dosis puede aumentarse o reducirse en aproximadamente 5 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg o aproximadamente 20 mg. La dosis puede ser, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg. En una mujer no embarazada, el rango aceptable puede ser de aproximadamente 35 % a 43 %. En una mujer embarazada, el rango aceptable puede ser de aproximadamente 30 % a 36 %. El sujeto puede no necesitar o tener una flebotomía durante al menos ocho semanas, al menos 12 semanas, al menos 16 semanas, al menos 6 meses, al menos un año o al menos dos años después de la primera administración del análogo de hepcidina y durante el tratamiento. El tratamiento puede continuar durante al menos ocho semanas, al menos 12 semanas, al menos 16 semanas, al menos 6 meses, al menos un año o al menos dos años.
[0563] El método puede comprender múltiples administraciones de una cantidad eficaz del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo durante un período de tiempo, por ejemplo, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra al sujeto aproximadamente una vez por semana o aproximadamente dos veces por semana durante el período de tiempo. La cantidad eficaz puede variar de una administración a otra administración, o puede permanecer igual. El período de tiempo puede variar y ser, por ejemplo, de una semana a 10 años, de un mes a 10 años, de un mes a cinco años, de un mes a dos años o de cuatro meses a un año. De acuerdo con la presente invención, el análogo de hepcidina es:
[0565] (Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(isoGlu-Palm))FEPRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:45), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
[0567] , opcionalmente en donde el análogo de hepcidina comprende un enlace disulfuro entre dos aminoácidos Cys. La dosis puede variar de una administración a otra administración, o puede permanecer igual. En ciertas realizaciones, la dosis se ajusta en función de los niveles de hematocrito del sujeto durante el período de tiempo. Así, en ciertas realizaciones, el método comprende además determinar el hematocrito del sujeto después de una o más administraciones múltiples del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la cantidad de dosis administrada al sujeto durante la siguiente administración se mantiene o se ajusta en función del valor del hematocrito. Por ejemplo, la siguiente cantidad administrada puede aumentarse en comparación con la cantidad administrada anteriormente si el hematocrito determinado del sujeto está por encima de un rango aceptable según su sexo y estado de embarazo; la siguiente cantidad administrada puede disminuirse en comparación con la cantidad administrada anteriormente si el hematocrito determinado del sujeto está por debajo del rango aceptable; o la siguiente cantidad administrada puede ser la misma que la cantidad administrada anteriormente si el hematocrito determinado del sujeto está dentro del rango aceptable. En ciertas realizaciones, el hematocrito del sujeto se mide aproximadamente tres días, aproximadamente cuatro días, aproximadamente cinco días, aproximadamente seis días o aproximadamente siete días después de la administración del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El nivel de hematocrito del sujeto puede determinarse después de cada administración del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o puede determinarse solo después de ciertas administraciones del análogo de hepcidina o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, una vez cada dos semanas, una vez al mes, una vez cada dos meses, una vez cada cuatro meses o una vez cada seis meses.
[0568] El método puede dar como resultado que el nivel de hematocrito del sujeto sea <45 %. En ciertas realizaciones, el hematocrito del sujeto se mantiene dentro de un rango de aproximadamente 37,5 % a aproximadamente 45 % (o dentro del rango aceptable para el sexo y el estado de embarazo del sujeto) durante un período de tiempo, por ejemplo, durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos seis meses o más. En realizaciones particulares, el método o régimen terapéutico da como resultado una disminución del hematocrito (Hct %) de al menos un 3 %, al menos un 5 %, al menos un 10 % y/o una reducción de las flebotomías de al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 40 % o al menos un 50 % (por ejemplo, en pacientes que requieren flebotomía). Tal como se utiliza en el presente documento, una reducción del hematocrito del 3 % significa una reducción absoluta, por ejemplo, una reducción del 46 % al 43 %.
[0569] El método puede provocar un aumento en los niveles de ferritina sérica del sujeto. En determinadas realizaciones, los niveles de ferritina sérica aumentan al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 50 %, al menos un 100 % o al menos un 200 % durante un régimen terapéutico, o durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos seis meses o más. En determinadas realizaciones, el nivel de ferritina sérica del sujeto se mantiene dentro de un rango de aproximadamente 25 ng/mL a aproximadamente 150 ng/mL durante un período de tiempo, por ejemplo, durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos seis meses o más. El método puede dar como resultado o causar una disminución en el nivel de saturación de transferrina (TSAT) y/o nivel de hierro sérico del sujeto de al menos 60 % o al menos 80 %. En algunas realizaciones, el nivel de TSAT del sujeto se reduce a menos del 40 %. En algunas realizaciones de los métodos descritos en el presente documento, el método produce un ligero aumento o ningún cambio en los niveles de TSAT y/o hierro sérico, y en ciertas realizaciones, los niveles de TSAT y/o hierro sérico permanecen por debajo de los niveles normales. El método puede provocar un incremento en la MCV y/o MCH del sujeto. En realizaciones particulares, la MCV y/o MCH aumentan al menos 10%, al menos 20 %, al menos 30 %, al menos 50 %, al menos 100 % o al menos 200 % durante un régimen terapéutico, o durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos seis meses o más.
[0570] El método puede provocar una disminución del hematocrito y/o del recuento de eritrocitos del sujeto de al menos 10 %, al menos 20 %, al menos 30 %, al menos 40 %, al menos 50 %, al menos 60 % o al menos 80 %. En algunas realizaciones, el nivel de TSAT del sujeto se reduce a menos del 40 %. En algunas realizaciones de los métodos descritos en el presente documento, el método produce un ligero aumento o ningún cambio en los niveles de TSAT y/o hierro sérico, y en ciertas realizaciones, los niveles de TSAT y/o hierro sérico permanecen por debajo de los niveles normales.
[0571] El método puede dar como resultado que el sujeto no necesite o no se someta a una flebotomía terapéutica, por ejemplo, durante al menos 7 semanas, al menos 8 semanas, al menos 9 semanas, al menos 10 semanas, al menos 11 semanas o al menos 12 semanas.
[0572] El sujeto puede ser un paciente con PV de bajo o alto riesgo. En realizaciones particulares, un paciente con PV de bajo riesgo es un paciente con PV menor de 60 años. En realizaciones particulares, un paciente con PV de alto riesgo es un paciente con PV mayor de o con 60 años.
[0573] En realizaciones particulares, un régimen terapéutico comprende dos o más, tres o más, cuatro o más, o administraciones seriadas de un análogo de hepcidina durante un período de tiempo, por ejemplo, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas durante el período de tiempo, durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos seis meses o más.
[0574] En algunos ejemplos, el método no produce un cambio sustancial en el recuento de plaquetas del sujeto, por ejemplo, un aumento o una disminución mayor del 50 %. Por ejemplo, el recuento de plaquetas del sujeto no aumenta ni disminuye en más del 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 %.
[0575] En algunos ejemplos, el método no produce un cambio sustancial en el recuento de glóbulos rojos del sujeto, por ejemplo, un aumento o una disminución mayor del 50 %. Por ejemplo, el recuento de glóbulos rojos del sujeto no aumenta ni disminuye en más del 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 %.
[0576] En algunos ejemplos, el método no produce un cambio sustancial en el recuento de leucocitos o glóbulos rojos del sujeto, por ejemplo, un aumento o una disminución mayor del 50 %. Por ejemplo, el recuento de leucocitos o glóbulos rojos del sujeto no aumenta ni disminuye en más del 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o 50 %.
[0577] En algunos ejemplos, el método produce un beneficio terapéutico para el sujeto, que puede incluir la disminución o el alivio de uno o más síntomas de la PV. Dichos síntomas incluyen, pero no se limitan a ellos, picazón, caída del cabello, fatiga, dolor de cabeza, trastornos visuales, sudoración nocturna y episodios trombóticos.
[0578] El análogo de hepcidina de la presente invención (es decir, un primer agente terapéutico) puede proporcionarse al sujeto en combinación con un segundo agente terapéutico. En ciertas realizaciones, el segundo agente terapéutico se proporciona al sujeto antes y/o simultáneamente y/o después de que se le administre el análogo de hepcidina al sujeto. Por ejemplo, el segundo agente terapéutico es un quelante de hierro, por ejemplo, seleccionado entre Deferoxamina y Deferasirox (Exjade<™>). Al sujeto también se le puede administrar un tercer agente terapéutico.
[0579] La presente invención proporciona composiciones (por ejemplo composiciones farmacéuticas) que comprenden uno o más análogos de hepcidina de la presente invención y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable Un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a una carga, diluyente, material encapsulante o auxiliar de formulación no tóxico, sólido, semisólido o líquido, de cualquier tipo.
[0580] El término "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera de los portadores farmacéuticos estándar. Los portadores farmacéuticamente aceptables para uso terapéutico son conocidos en la técnica farmacéutica y se describen, por ejemplo, en "Remingtons Pharmaceutical Sciences, Edición 17, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mack Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985. Por ejemplo, se pueden utilizar solución salina estéril y solución salina tamponada con fosfato a pH fisiológico o ligeramente ácido. Los agentes tamponadores de pH adecuados pueden ser, por ejemplo, fosfato, citrato, acetato, tris(hidroximetil)aminometano (TRIS), ácido N-tris(hidroximetil)metil-3-aminopropanosulfónico (TAPS), bicarbonato de amonio, dietanolamina, histidina, arginina, lisina o acetato (por ejemplo, como acetato de sodio), o mezclas de los mismos. El término abarca además cualquier agente portador que figure en la Farmacopea de los EE. UU. para su uso en animales, incluidos los humanos.
[0581] También se divulgan en el presente documento composiciones que comprenden dos o más análogos de hepcidina divulgados en el presente documento. Por ejemplo, la combinación puede seleccionarse de entre uno de las siguientes: (i) cualesquiera dos o más de los monómeros de péptido análogo de hepcidina que se muestran en el presente documento; (ii) cualesquiera dos o más de los dímeros de péptido análogo de hepcidina que se divulgan en el presente documento; (iii) cualesquiera uno o más de los monómeros de péptido análogo de hepcidina que se divulgan en el presente documento, y cualesquiera uno o más de los dímeros de péptido análogo de hepcidina que se divulgan en el presente documento.
[0582] Se debe entender que la inclusión de un análogo de hepcidina de la invención en una composición farmacéutica también abarca la inclusión de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de un análogo de hepcidina de la invención. En realizaciones particulares, las composiciones farmacéuticas comprenden además un portador, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
[0583] Los compuestos descritos en el presente documento incluyen compuestos marcados isotópicamente, son idénticos a los que se indican en las varias fórmulas y estructuras presentadas en el presente documento salvo por el hecho de que se reemplazan uno o más átomos por un átomo que tiene una masa atómica o un número másico diferente a la masa atómica o el número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los presentes compuestos incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor y cloro, como<2>H,<3>H,<1>3C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<35>S,<18>F,<36>Cl, respectivamente. Determinados compuestos marcados isotópicamente descritos en el presente documento, por ejemplo aquellos donde se incorporan isótopos radioactivos tales como<3>H y<14>C, son útiles en ensayos de distribución de fármaco y/o tejido de sustrato. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir,<2>H, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la vida media o requisitos de dosificación reducidos.
[0584] Los análogos de hepcidina de la presente invención pueden formularse como composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración con o sin almacenamiento, y que normalmente comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un análogo de hepcidina de la invención, junto con un portador, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
[0586] En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de análogos de hepcidina de la invención están en forma de dosis unitaria. En esta forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades adecuadas del componente o componentes activos. La forma de dosificación unitaria se puede presentar como una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de la preparación, tales como comprimidos, cápsulas y polvos envasados en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria también puede ser, por ejemplo, una cápsula, sobre o comprimido en si mismo, o puede ser una cantidad adecuada de cualquiera de estas formas envasadas. También se puede suministrar una forma de dosificación unitaria en forma inyectable de dosis única, por ejemplo, en forma de un dispositivo tipo bolígrafo que contiene una composición en fase líquida (normalmente acuosa). Se pueden formular composiciones para cualquier vía y medio de administración adecuados, por ejemplo, cualquiera de las vías y medios de administración descritos en el presente documento.
[0588] En realizaciones particulares, el análogo de hepcidina, o la composición farmacéutica que comprende un análogo de hepcidina, se suspende en una matriz de liberación sostenida. Una matriz de liberación sostenida, tal como se utiliza en el presente documento, es una matriz compuesta de materiales, generalmente polímeros, que son degradables por hidrólisis enzimática o ácido-base o por disolución. Una vez introducida en el cuerpo, la matriz es procesada por enzimas y fluidos corporales. Deseablemente, se elige una matriz de liberación sostenida entre materiales biocompatibles como liposomas, polilactidas (ácido poliláctico), poliglicólido (polímero de ácido glicólico), polilactida co-glicólido (copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico), polianhídridos, poli(orto)ésteres, polipéptidos, ácido hialurónico, colágeno, sulfato de condroitina, ácidos carboxílicos, ácidos grasos, fosfolípidos, polisacáridos, ácidos nucleicos, poliaminoácidos, aminoácidos como fenilalanina, tirosina, isoleucina, polinucleótidos, polivinilpropileno, polivinilpirrolidona y silicona. Una realización de una matriz biodegradable es una matriz de uno de polilactida, poliglicólida o polilactida co-glicólido (copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico).
[0590] De acuerdo con la presente invención, el análogo de hepcidina de la presente invención se administra mediante inyección subcutánea. Otros métodos de administración de composiciones que contienen análogos de hepcidina incluyen oral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intrarrectal, tópica (en forma de polvos, ungüentos, gotas, supositorios o parches transdérmicos, incluyendo la administración intravítrea, intranasal y por inhalación) o bucal. El término "parenteral", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a los modos de administración que incluyen el intravenoso, intramuscular, intraperitoneal, intraesternal, subcutáneo, intradérmica e inyección e infusión intraarticular. En consecuencia, las composiciones pueden formularse para su administración por cualquiera de estas vías de administración.
[0592] En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para inyección parenteral comprende soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles para la reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles antes de usar. Ejemplos de portadores, diluyentes, disolventes o vehículos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares), carboximetilcelulosa y mezclas adecuadas de los mismos, betaciclopdextrina, aceites vegetales (tal como aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables, tal como oleato de etilo. Puede mantenerse una fluidez adecuada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, manteniendo el tamaño de partícula necesario en caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos. Estas composiciones pueden también contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La absorción prolongada de una forma farmacéutica inyectable puede provocarse mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
[0594] Las formas de depósito incluyen aquellas hechas mediante formación de matrices de microcápsulas del análogo de hepcidina en uno o más polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicólido, poli(ortoésteres), poli(anhídridos) y poli(glicoles), tales como PEG. Según la relación de péptido a polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del análogo de hepcidina. Las formulaciones de depósito inyectables también se preparan atrapando el análogo de hepcidina en liposomas o microemulsiones que son compatibles con los tejidos corporales.
[0596] Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias o mediante incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se puedan disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso.
[0597] Los análogos de hepcidina de la presente invención también pueden administrarse en liposomas u otros portadores basados en lípidos. Como es sabido en la técnica, los liposomas generalmente se derivan de fosfolípidos u otras sustancias lipídicas. Los liposomas están formados por cristales líquidos hidratados monolaminares o multilaminares que se dispersan en un medio acuoso. Se puede utilizar cualquier lípido no tóxico, fisiológicamente aceptable y metabolizable capaz de formar liposomas. Las presentes composiciones en forma de liposomas pueden contener, además de un análogo de hepcidina de la presente invención, estabilizantes, conservantes, excipientes y similares. En ciertas realizaciones, los lípidos comprenden fosfolípidos, incluidas las fosfatidilcolinas (lecitinas) y serinas, tanto naturales como sintéticas. En la técnica se conocen métodos para formar liposomas.
[0598] Las composiciones farmacéuticas que se utilizarán en la invención adecuadas para la administración parenteral pueden comprender soluciones acuosas estériles y/o suspensiones de los inhibidores peptídicos hechas isotónicas con la sangre del receptor, generalmente utilizando cloruro de sodio, glicerina, glucosa, manitol, sorbitol y similares.
[0599] También se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas para administración oral. Las composiciones y análogos de hepcidina pueden prepararse para administración oral según cualquiera de los métodos, técnicas y/o vehículos de administración descritos en el presente documento. Además, un experto en la materia comprenderá que los análogos de hepcidina descritos en el presente documento pueden modificarse o integrarse en un sistema o vehículo de administración que no se divulga en el presente documento, pero que es bien conocido en la técnica y compatible para su uso en la administración oral de péptidos.
[0600] Las formulaciones para administración oral pueden incluir adyuvantes (por ejemplo, resorcinoles y/o tensioactivos no iónicos como el éter oleílico de polioxietileno y el éter n-hexadecilpolietileno) para aumentar artificialmente la permeabilidad de las paredes intestinales y/o inhibidores enzimáticos (por ejemplo, inhibidores de la tripsina pancreática, diisopropilfluorofosfato (DFF) o trasilol) para inhibir la degradación enzimática. El análogo de hepcidina de una forma de dosificación sólida para administración oral se puede mezclar con al menos un aditivo, como sacarosa, lactosa, celulosa, manitol, trehalosa, rafinosa, maltitol, dextrano, almidones, agar, alginatos, quitinas, quitosanos, pectinas, goma tragacanto, goma arábiga, gelatina, colágeno, caseína, albúmina, polímero sintético o semisintético, o glicérido. Estas formas de dosificación también pueden contener otro(s) tipo(s) de aditivos, por ejemplo, agentes diluyentes inactivos, lubricantes como el estearato de magnesio, parabenos, agente conservante como el ácido sórbico, el ácido ascórbico, el alfa-tocoferol, antioxidantes como la cisteína, desintegrantes, aglutinantes, espesantes, agentes tamponadores, agentes de ajuste del pH, edulcorantes, aromatizantes o perfumes.
[0601] Las formas de dosificación oral o las dosis unitarias compatibles para su uso con análogos de hepcidina como se describe en el presente documento pueden incluir una mezcla de análogo de hepcidina y componentes no farmacológicos o excipientes, así como otros materiales no reutilizables que pueden considerarse como un ingrediente o un envase. Las composiciones orales pueden incluir al menos una de las siguientes formas de dosificación: líquida, sólida y semisólida. Una forma de dosificación oral puede comprender una cantidad eficaz de análogo de hepcidina, en donde la forma de dosificación comprende al menos uno de una píldora, un comprimido, una cápsula, un gel, una pasta, una bebida, un jarabe, ungüento y supositorio. La forma de dosificación oral puede diseñarse y configurarse para lograr la liberación retardada del análogo de hepcidina en el intestino delgado y/o el colon del sujeto.
[0602] Una composición farmacéutica oral que comprende un análogo de hepcidina puede comprender un recubrimiento entérico diseñado para retrasar la liberación del análogo de hepcidina en el intestino delgado. Una composición farmacéutica puede comprender un análogo de hepcidina y un inhibidor de la proteasa, como la aprotinina, en una formulación farmacéutica de liberación retardada. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender un recubrimiento entérico soluble en jugo gástrico a un pH de aproximadamente 5,0 o superior. Dicho recubrimiento entérico puede comprender un polímero con grupos carboxílicos disociables, como derivados de la celulosa, incluidos el ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, el ftalato de acetato de celulosa y el trimelitato de acetato de celulosa y derivados similares de la celulosa y otros polímeros de carbohidratos.
[0603] El recubrimiento entérico puede diseñarse para proteger y liberar la composición farmacéutica de manera controlada dentro del sistema gastrointestinal inferior del sujeto y para evitar efectos secundarios sistémicos. Además de los recubrimientos entéricos, los análogos de hepcidina pueden encapsularse, recubrirse, incorporarse o asociarse de otra manera dentro de cualquier sistema o componente compatible de administración oral de fármacos. Por ejemplo, un análogo de hepcidina puede suministrarse en un sistema portador de lípidos que comprenda al menos uno de hidrogeles poliméricos, nanopartículas, microesferas, micelas y otros sistemas lipídicos.
[0604] Para superar la degradación del péptido en el intestino delgado, un análogo de hepcidina puede estar contenido en un sistema portador de polímero de hidrogel, por el cual el polímero de hidrogel protege al análogo de hepcidina de la proteólisis en el intestino delgado y/o el colon. Los análogos de hepcidina también pueden formularse para su uso compatible con un sistema portador diseñado para aumentar la cinética de disolución y mejorar la absorción intestinal del péptido. Estos métodos incluyen el uso de liposomas, micelas y nanopartículas para aumentar la permeación de péptidos en el tracto gastrointestinal.
[0605] Varios sistemas biorresponsivos también pueden combinarse con uno o más análogos de hepcidina para proporcionar un agente farmacéutico para administración oral. Un análogo de hepcidina puede utilizarse en combinación con un sistema biorresponsivo, como hidrogeles y polímeros mucoadhesivos con grupos de enlace de hidrógeno (por ejemplo, PEG, ácido poli(metacrílico) [PMAA], celulosa, Eudragit<®>, quitosano y alginato) para proporcionar un agente terapéutico para administración oral. También se describe un método para optimizar o prolongar el tiempo de residencia del fármaco para un análogo de hepcidina divulgado en el presente documento, en donde la superficie del análogo de hepcidina se modifica para que posea propiedades mucoadhesivas a través de enlaces de hidrógeno, polímeros con mucinas unidas o/y interacciones hidrofóbicas. Estas moléculas peptídicas modificadas pueden demostrar un mayor tiempo de permanencia del fármaco en el sujeto. Además, los sistemas mucoadhesivos dirigidos pueden unirse específicamente a receptores en las superficies de los enterocitos y las células M, aumentando así aún más la absorción de partículas que contienen el análogo de hepcidina.
[0607] También se divulga en el presente documento un método para la administración oral de un análogo de hepcidina, en donde el análogo de hepcidina se proporciona a un sujeto en combinación con potenciadores de permeación que promueven el transporte de los péptidos a través de la mucosa intestinal al aumentar la permeación paracelular o transcelular. Por ejemplo, un potenciador de la permeación se combina con un análogo de hepcidina, donde el potenciador de la permeación comprende al menos uno de un ácido graso de cadena larga, una sal biliar, un tensioactivo anfipático y un agente quelante. Se puede utilizar un potenciador de permeación que comprende N-[hidroxibenzoil)amino]caprilato de sodio para formar una asociación no covalente débil con el análogo de hepcidina, en donde el potenciador de permeación favorece el transporte a través de la membrana y la posterior disociación una vez que llega a la circulación sanguínea. Un análogo de hepcidina puede conjugarse con oligoarginina, aumentando así la penetración celular del péptido en diversos tipos de células. Se puede establecer un enlace no covalente entre un inhibidor peptídico y un potenciador de permeación seleccionado del grupo que consiste en una ciclodextrina (CD) y un dendrímero, en donde el potenciador de permeación reduce la agregación del péptido y aumenta la estabilidad y la solubilidad de la molécula análoga de hepcidina.
[0609] El análogo de hepcidina puede tener una vida media de al menos varias horas a un díain vitrooin vivo(por ejemplo, cuando se administra a un sujeto humano) suficiente para la dosificación diaria (q.d.) o dos veces al día (b.i.d) de una cantidad terapéuticamente eficaz. Por ejemplo, el análogo de hepcidina puede tener una vida media de tres días o más, suficiente para la dosificación semanal (q.w.) de una cantidad terapéuticamente eficaz; o una vida media de ocho días o más, suficiente para la dosificación quincenal (b.i.w.) o mensual de una cantidad terapéuticamente eficaz. El análogo de hepcidina puede ser derivatizado o modificado de tal manera que tenga una vida media más larga en comparación con el análogo de hepcidina no derivatizado o no modificado. El análogo de hepcidina puede contener una o más modificaciones químicas para aumentar su vida media en suero.
[0611] Cuando se utilice en al menos uno de los tratamientos o sistemas de administración descritos en el presente documento, un análogo de hepcidina de la presente invención podrá emplearse en forma pura o, cuando existan tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
[0613] Dosificaciones
[0615] El uso total diario de los análogos de hepcidina y las composiciones de la presente invención puede ser decidido por el médico tratante dentro del alcance del buen juicio médico. El nivel de dosis terapéuticamente eficaz específico para cualquier paciente particular dependerá de diversos factores que incluyen: a) el trastorno que se está tratando y la gravedad del trastorno; b) la actividad del compuesto específico empleado; c) la composición específica empleada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; d) el tiempo de administración; la vía de administración y la velocidad de excreción del análogo de hepcidina específico empleado; e) la duración del tratamiento; f) fármacos usados en combinación o coincidentes con el análogo de hepcidina específico empleado y factores similares bien conocidos en la técnica médica.
[0617] En realizaciones particulares, la dosis diaria total de los análogos de hepcidina de la invención que se administrará a un huésped humano u otro mamífero en dosis únicas o divididas puede ser de cantidades, por ejemplo, de 0,0001 a 300 mg/kg de peso corporal al día o de 1 a 300 mg/kg de peso corporal al día. En ciertas realizaciones, una dosis de un análogo de hepcidina de la presente invención está en el rango de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, como por ejemplo de aproximadamente 0,0005 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día, como por ejemplo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día, por ejemplo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal por día, administrada en una o más dosis, como por ejemplo de una a tres dosis.
[0619] En realizaciones particulares, una dosificación total es aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg, or aproximadamente 10 mg a aproximadamente 70 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 60 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 50 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 40 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 15 mg, o aproximadamente 10 mg, por ejemplo, para un paciente humano. En realizaciones particulares, el análogo de hepcidina se proporciona al sujeto una vez por semana. En otras realizaciones particulares, el análogo de hepcidina se proporciona al sujeto dos veces por semana, por ejemplo, para un paciente humano.
[0620] En más realizaciones particulares, una dosificación total es aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg. En más realizaciones particulares, una dosificación total es aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg o aproximadamente 80 mg aproximadamente semanas alternas o aproximadamente una vez al mes para un paciente humano.
[0621] De acuerdo con la presente invención, el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención se proporciona al sujeto aproximadamente dos veces por semana, aproximadamente una vez por semana o aproximadamente una vez cada dos semanas.
[0622] Estos regímenes regulares de administración de análogo de hepcidina de la invención pueden, en ciertas circunstancias, como por ejemplo, durante la administración crónica a largo plazo, interrumpirse ventajosamente durante un período de tiempo para que el sujeto medicado reduzca el nivel o deje de tomar el medicamento, a menudo denominado "descanso farmacológico". Los periodos de descanso farmacológico son útiles, por ejemplo, para mantener o recuperar la sensibilidad a un fármaco, especialmente durante un tratamiento crónico a largo plazo, o para reducir los efectos secundarios no deseados de un tratamiento crónico a largo plazo del sujeto con el fármaco. El momento de descanso farmacológico depende del momento del régimen de dosificación regular y del propósito del descanso farmacológico (por ejemplo, para recuperar la sensibilidad al medicamento y/o para reducir los efectos secundarios no deseados de la administración continua a largo plazo). En algunas realizaciones, el descanso farmacológico puede ser una reducción en la dosificación del fármaco (por ejemplo, a una cantidad inferior a la terapéuticamente eficaz durante un cierto intervalo de tiempo). En otras realizaciones, la administración del fármaco se interrumpe durante un cierto intervalo de tiempo antes de que se reanude utilizando el mismo régimen de dosificación o uno diferente (por ejemplo, a una dosis y/o frecuencia de administración menor o mayor). De este modo, se puede seleccionar un descanso farmacológico de la invención entre una amplia gama de períodos de tiempo y regímenes de dosificación. Un ejemplo típico de descanso farmacológico es dos o más días, una o más semanas, o uno o más meses, hasta aproximadamente 24 meses de descanso farmacológico. Así, por ejemplo, un régimen de dosificación diaria regular con un péptido, un análogo de péptido o un dímero de la invención puede, por ejemplo, interrumpirse con un período de descanso farmacológico de una semana, o dos semanas, o cuatro semanas, después del cual se reanuda el régimen de dosificación regular anterior (por ejemplo, un régimen de dosificación diaria o semanal). Se prevé que otros regímenes de descanso farmacológico resulten útiles para administrar los análogos de hepcidina de la invención.
[0623] Por lo tanto, los análogos de hepcidina pueden administrarse mediante un régimen de administración que comprende dos o más fases de administración separadas por fases de descanso farmacológico respectivas. Durante cada fase de administración, el análogo de hepcidina se administra al sujeto receptor en una cantidad terapéuticamente eficaz de acuerdo con un patrón de administración predeterminado. El patrón de administración puede comprender la administración continua del fármaco al sujeto receptor durante la duración de la fase de administración. Alternativamente, el patrón de administración puede comprender la administración de una pluralidad de dosis del análogo de hepcidina al sujeto receptor, en donde dichas dosis se espacian por intervalos de dosificación.
[0624] Un patrón de dosificación puede comprender al menos dos dosis por fase de administración, al menos cinco dosis por fase de administración, al menos 10 dosis por fase de administración, al menos 20 dosis por fase de administración, al menos 30 dosis por fase de administración o más.
[0625] Dichos intervalos de dosificación pueden ser intervalos de dosificación regulares, que pueden ser como se indica anteriormente, incluyendo una vez al día, dos veces al día, una vez cada dos, tres, cuatro, cinco o seis días, una o dos veces por semana, una o dos veces al mes, o un intervalo de dosificación regular e incluso menos frecuente, dependiendo de la formulación de dosificación particular, la biodisponibilidad y el perfil farmacocinético del análogo de hepcidina de la presente invención.
[0626] Una fase de administración puede tener una duración de al menos dos días, al menos una semana, al menos 2 semanas, al menos 4 semanas, al menos un mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 6 meses o más.
[0627] Cuando un patrón de administración comprende una pluralidad de dosis, la duración de la siguiente fase de descanso farmacológico es más larga que el intervalo de dosificación utilizado en ese patrón de administración. Cuando el intervalo de dosificación es irregular, la duración de la fase de descanso farmacológico puede ser mayor que el intervalo medio entre dosis durante el transcurso de la fase de administración. Alternativamente, la duración del descanso farmacológico puede ser mayor que el intervalo más largo entre dosis consecutivas durante la fase de administración.
[0628] La duración de la fase de descanso farmacológico puede ser al menos el doble del intervalo de dosificación pertinente (o su promedio), al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 10 veces o al menos 20 veces el intervalo de dosificación pertinente o su promedio.
[0629] Dentro de estas restricciones, una fase de descanso farmacológico puede tener una duración de al menos dos días, al menos una semana, al menos 2 semanas, al menos 4 semanas, al menos un mes, al menos 2 meses, al menos 3 meses, al menos 6 meses o más, dependiendo del patrón de administración durante la fase de administración previa.
[0630] Un régimen de administración comprende al menos 2 fases de administración. Las fases de administración consecutivas están separadas por las respectivas fases de descanso farmacológico. Así, el régimen de administración puede comprender al menos 3, al menos 4, al menos 5, al menos 10, al menos 15, al menos 20, al menos 25 o al menos 30 fases de administración, o más, cada una separada por fases de descanso farmacológico respectivas.
[0631] Las fases de administración consecutivas pueden utilizar el mismo patrón de administración, aunque esto no siempre sea deseable o necesario. Sin embargo, si se administran otros fármacos o agentes activos en combinación con un análogo de hepcidina de la invención, normalmente se administra la misma combinación de fármacos o agentes activos en fases de administración consecutivas. En ciertas realizaciones, el sujeto es un ser humano.
[0632] También se describen en el presente documento métodos para tratar una enfermedad del metabolismo del hierro en un sujeto, como un sujeto mamífero, y preferiblemente un sujeto humano, que comprenden administrar al menos un análogo de hepcidina, o composición como se divulga en este documento, al sujeto. El análogo de hepcidina o la composición se pueden administrar en una cantidad terapéuticamente eficaz. También se describen en el presente documento métodos para tratar la diabetes (Tipo I o Tipo II), la resistencia a la insulina o la intolerancia a la glucosa en un sujeto, como un sujeto mamífero, y preferiblemente un sujeto humano, que comprenden administrar al menos un análogo de hepcidina, o composición como se divulga en este documento, al sujeto. El análogo de hepcidina o composición se pueden administrar en una cantidad terapéuticamente eficaz.
[0633] También se describe un proceso para fabricar un análogo de hepcidina o una composición de análogo de hepcidina (por ejemplo, una composición farmacéutica), como se divulga en el presente documento.
[0634] También se describe un dispositivo que comprende al menos un análogo de hepcidina de la presente invención, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la administración del análogo de hepcidina a un sujeto.
[0635] También se describen métodos para unir una ferroportina o inducir la internalización y degradación de la ferroportina, que comprende poner en contacto la ferroportina con al menos un análogo de hepcidina o composición de análogo de hepcidina como se describió en el presente documento.
[0636] También se describen kits que comprenden al menos un análogo de hepcidina o una composición de análogo de hepcidina (por ejemplo, una composición farmacéutica) como se divulga en el presente documento, empaquetados junto con un reactivo, un dispositivo, material instructivo o una combinación de los mismos. También se describe un método para administrar un análogo de hepcidina o una composición de análogo de hepcidina (por ejemplo, una composición farmacéutica) a un sujetovíaimplante o una bomba osmótica, mediante un cartucho o una microbomba, o por otros medios conocidos por el experto en la materia, como bien se sabe en la técnica.
[0637] También se describen complejos que comprenden al menos un análogo de hepcidina como se divulga en el presente documento unido a una ferroportina, preferiblemente una ferroportina humana, o un anticuerpo, como un anticuerpo que se une específicamente a un análogo de hepcidina como se divulga en el presente documento, Hep25, o una combinación de los mismos.
[0638] El análogo de hepcidina de la presente invención puede tener una medición (por ejemplo, una EC50) de menos de 500 nM dentro del ensayo de internalización de Fpn. Como comprenderá cualquier persona experta, la función del análogo de hepcidina depende de la estructura terciaria del análogo de hepcidina y de la superficie de unión que presenta. Por lo tanto, es posible realizar cambios menores en la secuencia que codifica el análogo de hepcidina que no afecten el plegamiento ni se encuentren en la superficie de unión y que mantengan la función. También se describe aquí un análogo de hepcidina que tiene una identidad u homología del 85 % o superior (por ejemplo, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 99,5 %) con una secuencia de aminoácidos de cualquier análogo de hepcidina descrito en el presente documento que exhiba una actividad (por ejemplo, actividad de hepcidina) o disminuya un síntoma de una enfermedad o indicación en la que esté involucrada la hepcidina.
[0639] También se divulgan en este documento análogos de hepcidina que tienen una identidad u homología del 85 % o superior (por ejemplo, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 99,5 %) con una secuencia de aminoácidos de cualquier análogo de hepcidina presentado en el presente documento, o un péptido según cualquiera de las fórmulas o análogos de hepcidina descritos en el presente documento. Un análogo de hepcidina puede comprender fragmentos funcionales o variantes de los mismos que tienen como máximo 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 sustituciones de aminoácidos en comparación con una o más de las secuencias de análogos de péptidos específicos citadas en el presente documento.
[0640] Además de los métodos descritos en los ejemplos del presente documento, los análogos de hepcidina de la presente invención pueden producirse utilizando métodos conocidos en la técnica, incluyendo síntesis química, biosíntesis o síntesis in vitro utilizando métodos de ADN recombinante y síntesis en fase sólida. Véase, por ejemplo, Kelly y Winkler (1990) Genetic Engineering Principles and Methods, vol.12, J.K. Setlow ed., Plenum Press, NY, pp.1-19; Merrifield (1964) J Amer Chem Soc 85:2149; Houghten (1985) PNAS USA 82:5131-5135; y Stewart y Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2.ª ed. Pierce, Rockford, IL. Los análogos de hepcidina de la presente invención pueden purificarse utilizando técnicas de purificación de proteínas conocidas en la técnica, tales como cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (HPLC), cromatografía de intercambio iónico o de inmunoafinidad, filtración o exclusión por tamaño, o electroforesis. Véase Olsnes, S. y A. Pihl (1973) Biochem. 12(16):3121-3126; y Scopes (1982) Protein Purification, Springer- Verlag, NY. Alternativamente, los análogos de hepcidina de la presente invención pueden obtenerse mediante técnicas de ADN recombinante conocidas en la técnica. Por lo tanto, se contemplan en el presente documento polinucleótidos que codifican los polipéptidos de la presente invención. Los polinucleótidos pueden aislarse. Tal como se utiliza en el presente documento, "polinucleótidos aislados" se refiere a polinucleótidos que se encuentran en un entorno diferente de aquel en donde el polinucleótido se produce de forma natural.
[0641] Ejemplos
[0642] Los siguientes ejemplos demuestran varias realizaciones específicas de la presente invención. Los siguientes ejemplos se llevaron a cabo utilizando técnicas estándar que son bien conocidas y rutinarias para los expertos en la técnica, salvo que se indique lo contrario en detalle. Debe entenderse que estos ejemplos tienen únicamente fines ilustrativos y no pretenden ser totalmente definitivos en cuanto a las condiciones o el alcance de la invención. Como tal, no debería considerarse que limiten el alcance de la presente invención de ningún modo.
[0643] Abreviaturas:
[0644] DCM: diclorometano
[0645] DMF: N,N-dimetilformamida
[0646] NMP: N-metilpirrolidona
[0647] HBTU: hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-trametiluronio
[0648] HATU: hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
[0649] DCC: Diciclohexilcarbodiimida
[0650] NHS: N-hidroxisuccinimida
[0651] DIPEA: diisopropiletilamina
[0652] EtOH: etanol
[0653] Et2O: éter dietílico
[0654] Hy: hidrógeno
[0655] TFA: ácido trifluoroacético
[0656] TIS: triisopropilsilano
[0657] ACN: acetonitrilo
[0658] HPLC: cromatografía líquida de alto rendimiento
[0659] ESI-MS: espectrometría de masas de ionización por pulverización
[0660] PBS: Solución salina tamponada con fosfato
[0661] Boc: t-butoxicarbonilo
[0662] Fmoc: Fluorenilmetiloxicarbonilo
[0663] Acm: acetamidometilo
[0664] IVA: Ácido isovalérico (o isovalerilo)
[0665] K( ): En las secuencias peptídicas proporcionadas en el presente documento, en donde se presenta un compuesto o grupo químico entre paréntesis inmediatamente después de un residuo de lisina, debe entenderse que el compuesto o grupo químico entre paréntesis es una cadena lateral conjugada al residuo de lisina. Así, por ejemplo, pero sin limitarse de ninguna manera, K-[(PEG8)]- indica que una fracción de PEG8 está conjugada a una cadena lateral de esta lisina.
[0666] Palm: Indica la conjugación de un ácido palmítico (palmitoil).
[0667] Tal como se utiliza en el presente documento, "C( )" se refiere a un residuo de cisteína involucrado en un puente disulfuro particular. Por ejemplo, en la hepcidina hay cuatro puentes disulfuro: el primero entre los dos residuos C(1); el segundo entre los dos residuos C(2); el tercero entre los dos residuos C(3); y el cuarto entre los dos residuos C(4). En consecuencia, en algunas realizaciones, la secuencia para Hepcidina se escribe de la siguiente manera:Hy-DTHFPIC(1)IFC(2)C(3)GC(2)C(4)HRSKC(3)GMC(4)C(1)KT-OH; y la secuencia para otros péptidos también puede escribirse opcionalmente de la misma manera.
[0668] Ejemplo 1
[0669] Síntesis de análogos de péptidos
[0670] A menos que se especifique lo contrario, los reactivos y disolventes empleados a continuación estaban disponibles comercialmente en grado de reactivo de laboratorio estándar o grado analítico y se utilizaron sin purificación adicional.
[0671] Procedimiento para la síntesis en fase sólida de péptidos
[0672] Los análogos de péptidos de la invención se sintetizaron químicamente utilizando protocolos optimizados de síntesis de péptidos en fase sólida de 9-fluorenilmetoxi carbonilo (Fmoc). Para las amidas C-terminales se utilizó resina de rink-amida, aunque también se utilizaron resinas de wang y tritilo para producir ácidos C-terminales. Los grupos protectores de la cadena lateral fueron los siguientes: Glu, Thr y Tyr: O-tbutilo; Trp y Lys: t-Boc (t-butoxicarbonilo); Arg: N-gamma-2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofurano-5-sulfonilo; His, Gln, Asn, Cys: Tritilo. Para la formación selectiva de puentes disulfuro, también se utilizó Acm (acetamidometilo) como grupo protector de Cys. Para el acoplamiento, se agregó un exceso de cuatro a diez veces de una solución que contenía aminoácido Fmoc, HBTU y DIPEA (1:1:1,1) en DMF a la resina hinchada [HBTU: O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato; DIPEA: diisopropiletilamina; DMF: dimetilformamida]. Se utilizó HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) en lugar de HBTU para mejorar la eficiencia de acoplamiento en regiones difíciles. La eliminación del grupo protector Fmoc se logró mediante tratamiento con una solución de DMF, piperidina (2:1).
[0673] Procedimiento para la escisión de péptidos de la resina
[0674] La desprotección de la cadena lateral y la escisión de los análogos de péptidos de la invención (por ejemplo, el compuesto n.° 2) se logró agitando resina seca en una solución que contenía ácido trifluoroacético, agua, etanoditiol y triisopropilsilano (90:5:2,5:2,5) durante 2 a 4 horas. Tras la eliminación del TFA, el péptido se precipitó utilizando éter dietílico helado. La solución se centrifugó y se decantó el éter, seguido de un segundo lavado con éter dietílico. El péptido se disolvió en una solución de acetonitrilo y agua (1:1) que contenía 0,1 % de TFA (ácido trifluoroacético) y la solución resultante se filtró. La calidad del péptido lineal se evaluó mediante espectrometría de masas con ionización por electropulverización (ESI-MS).
[0675] Procedimiento para la purificación de péptidos
[0676] La purificación de los péptidos de la invención (por ejemplo, el compuesto n.° 2) se logró utilizando cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (RP-HPLC). El análisis se realizó utilizando una columna C18 (3 µm, 50 × 2 mm) con un caudal de 1 mL/min. La purificación de los péptidos lineales se llevó a cabo mediante RP-HPLC preparativa con una columna C18 (5 µm, 250 × 21,2 mm) con un caudal de 20 mL/min. La separación se logró mediante gradientes lineales de tampón B en A (Tampón A: TFA acuoso al 0,05 %; Tampón B: TFA al 0,043 %, acetonitrilo al 90 % en agua).
[0677] Procedimiento para la oxidación de péptidos
[0678] Método A (Oxidación de disulfuro individual). La oxidación de los péptidos no protegidos de la invención se logró agregando gota a gota yodo en MeOH (1 mg por 1 mL) al péptido en una solución (ACN: H<2>O, 7: 3, 0,5 % TFA). Después de agitar durante 2 minutos, se añadió ácido ascórbico en porciones hasta que la solución quedó transparente y la muestra se cargó inmediatamente en el HPLC para su purificación.
[0679] Método B (Oxidación selectiva de dos disulfuros). Cuando había más de un disulfuro presente, a menudo se realizaba una oxidación selectiva. La oxidación de las cisteínas libres se logró en una solución d NH<4>CO<3>a pH 7,6 a 1 mg/10 mL de péptido. Después de 24 h de agitación y antes de la purificación, la solución se acidificó a pH 3 con TFA y posteriormente se liofilizó. Los péptidos oxidados individuales resultantes (con cisteínas protegidas con ACM) se oxidaron/desprotegieron selectivamente después utilizando una solución de yodo. El péptido (1 mg por 2 mL) se disolvió en MeOH/H<2>0, 80:20 yodo disuelto en el disolvente de reacción se agregó a la reacción (concentración final: 5 mg/mL) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 7 minutos antes de añadir el ácido ascórbico poco a poco hasta que la solución quedó transparente. Posteriormente, la solución se cargó directamente en el HPLC.
[0680] Método C (Oxidación nativa). Cuando había más de un disulfuro presente, y cuando no se realizaban oxidaciones selecticas, se realizaba una oxidación nativa. La oxidación nativa se logró con una solución de NH4CO3100 mM (pH 7,4) en presencia de glutatión oxidado y reducido (péptido/GSH/GSSG, relación molar 1:100:10) de (péptido: GSSG: GSH, 1:10, 100). Después de 24 h de agitación y antes de la purificación RP-HPLC, la solución se acidificó a pH 3 con TFA y posteriormente se liofilizó.
[0681] Procedimiento de oxidación de cisteína para producir dímeros. La oxidación de los péptidos no protegidos de la invención se logró agregando gota a gota yodo en MeOH (1 mg por 1 mL) al péptido en una solución (ACN: H2O, 7: 3, 0,5 % TFA). Después de agitar durante 2 minutos, se añadió ácido ascórbico en porciones hasta que la solución quedó transparente y la muestra se cargó inmediatamente en el HPLC para su purificación. Procedimiento para la dimerización.
[0682] El ácido glioxílico (DIG), IDA o Fmoc-β-Ala-IDA se preactivó como éster de N-hidroxisuccinimida tratando 1 equivalente (abreviado "eq") del ácido con 2,2 eq de N-hidroxisuccinimida (NHS) y diciclohexil carbodiimida (DCC) en NMP (N-metilpirrolidona) a una concentración final de 0,1 M. Para los enlazadores PEG13 y PEG25, estas entidades químicas se compraron preformadas como éster de succinimida activado. El éster activado ~0,4 eq se añadió lentamente al péptido en NMP (1 mg/mL) en porciones. La solución se dejó en agitación durante 10 minutos antes de agregar lentamente 2-3 alícuotas adicionales del enlazador ~0,05 eq. La solución se dejó en agitación durante otras 3 h antes de eliminar el disolvente alvacíoy el residuo se purificó mediante HPLC de fase reversa. Se realizó un paso adicional de agitación del péptido en piperidina al 20 % en DMF (2 x 10 min) antes de una purificación adicional por HPLC de fase reversa.
[0683] Un experto en la técnica comprenderá que se pueden utilizar métodos estándar de síntesis de péptidos para generar los compuestos de la invención.
[0684] Activación del enlazador y dimerización
[0685] Las subunidades de monómeros peptídicos se unieron para formar dímeros peptídicos análogos de hepcidina como se describe a continuación.
[0686] Procedimiento de activación del enlazador DIG a pequeña escala: se agregaron 5 ml de NMP a un vial de vidrio que contenía diácido IDA (304,2 mg, 1 mmol), N-hidroxisuccinimida (NHS, 253,2 mg, 2,2 eq.2,2 mmol) y una barra de agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente para disolver completamente los materiales sólidos de partida. Luego se añadió N, N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC, 453,9 mg, 2,2 eq., 2,2 mmol) a la mezcla. La precipitación apareció a los 10 minutos y la mezcla de reacción se agitó posteriormente a temperatura ambiente durante toda la noche. Luego, la mezcla de reacción se filtró para eliminar la diciclohexilurea (DCU) precipitada. El enlazador activado se mantuvo en un vial cerrado antes de su uso para la dimerización. La concentración nominal del enlazador activado fue aproximadamente 0,20 M.
[0687] Para la dimerización usando enlazadores PEG, no hubo un paso de preactivación involucrado. Se utilizaron enlazadores PEG bifuncionales preactivados disponibles comercialmente.
[0688] Procedimiento de dimerización: Se agregaron 2 ml de DMF anhidro a un vial que contenía monómero de péptido (0,1 mmol). El pH del péptido se ajustó a 8~9 con DIEA. Luego se agregó a la solución de monómero un enlazador activado (IDA o PEG13, PEG 25) (0,48 eq en relación con el monómero, 0,048 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora. La finalización de la reacción de dimerización se controló mediante HPLC analítica. El tiempo necesario para completar la reacción de dimerización varió dependiendo del enlazador. Una vez completada la reacción, el péptido se precipitó en éter frío y se centrifugó. Se descartó la capa de éter sobrenadante. El paso de precipitación se repitió dos veces. El dímero crudo se purificó luego mediante HPLC de fase inversa (soporte Luna C18, 10u, 100A, fase móvil A: agua que contiene 0,1 % de TFA, fase móvil B: acetonitrilo (ACN) que contiene 0,1 % de TFA, gradiente de 15 % B y cambio a 45 % B durante 60 min, caudal 15 ml/min). Las fracciones que contenían producto puro se liofilizaron posteriormente en un liofilizador.
[0689] Conjugación de fracciones de extensión de vida media
[0690] La conjugación de péptidos se realizó en resina. Se utilizó Lys(ivDde) como aminoácido clave. Tras el ensamblaje del péptido en la resina, se llevó a cabo la desprotección selectiva del grupo ivDde mediante 3 x 5 min con hidrazina al 2 % en DMF durante 5 min. La activación y acilación del enlazador con HBTU, DIEA 1-2 equivalentes durante 3 h, y la eliminación del grupo Fmoc, seguida de una segunda acilación con el ácido lipídico, dieron como resultado el péptido conjugado.
[0691] Ejemplo 2
[0692] Actividad de análogos de péptidos
[0693] Se probaron análogos de péptidosin vitropara la inducción de la internalización de la proteína ferroportina humana. Tras su internalización, los péptidos se degradan. El ensayo mide una disminución de la fluorescencia del receptor.
[0694] El ADNc que codifica la ferroportina humana (SLC40A1) se clonó a partir de un clon de ADNc de Origene (NM_014585). El ADN que codifica la ferroportina se amplificó mediante PCR utilizando cebadores que también codifican sitios de restricción terminales para la subclonación, pero sin el codón de terminación. El receptor de ferroportina se subclonó en un vector de expresión de GFP de mamífero que contenía un marcador de resistencia a la neomicina (G418) de tal manera que el marco de lectura de la ferroportina se fusionó en marco con la proteína GFP. La fidelidad del ADN que codifica la proteína se confirmó mediante secuenciación de ADN. Se utilizaron células HEK293 para la transfección del plásmido de expresión del receptor ferroportina-GFP. Las células se cultivaron según el protocolo estándar en medio de cultivo y se transfectaron con los plásmidos utilizando Lipofectamine (protocolo del fabricante, Invitrogen). Las células que expresaban de forma estable ferroportina-GFP se seleccionaron utilizando G418 en el medio de cultivo (de manera que solo sobreviven las células que han absorbido e incorporado el plásmido de expresión de ADNc) y se clasificaron varias veces en un clasificador de células Cytomation MoFlo<™>para obtener las células GFP-positivas (488nm/530nm). Las células se cultivaron y se congelaron en alícuotas.
[0695] Para determinar la actividad de los análogos de hepcidina (compuestos) sobre la ferroportina humana, las células se incubaron en placas de 96 pocillos en medios estándar, sin rojo fenol. El compuesto se añadió hasta alcanzar la concentración final deseada durante al menos 18 horas en el incubador. Tras la incubación, la fluorescencia GFP restante se determinó mediante fluorescencia GFP de células completas (lector de placas Envision, par de filtros 485/535) o mediante citometría de flujo Beckman Coulter Quanta<™>(expresada como media geométrica de la intensidad de fluorescencia a 485 nm/525 nm). El compuesto se añadió hasta alcanzar la concentración final deseada durante al menos 18 horas en el incubador pero no más de 24 horas en el incubador.
[0696] En ciertos experimentos, los compuestos de referencia incluyeron Hepcidina nativa, Mini-Hepcidina y R1-Mini-Hepcidina, que es un análogo de la mini-hepcidina. Las siglas "RI" en RI-Mini-Hepcidina se refieren a Retro Inverso. Un péptido retroinverso es un péptido con una secuencia invertida en todos los aminoácidos D. Un ejemplo es que Hy-Glu-Thr-His-NH2 se convierte en Hy-DHis-DThr-DGlu-NH2. La EC<50>de estos compuestos de referencia para la degradación de la ferroportina se determinó según el ensayo de actividad descrito anteriormente. Estos péptidos sirvieron como estándares de control.
[0697] Tabla 6. Compuestos de referencia
[0699]
[0700]
[0702] Los valores de potencia EC<50>(nM) determinados para varios análogos de péptidos de la presente invención y otros datos de actividad se proporcionan en las patentes concedidas de EE. UU. 9,822,157 y EE. UU.
[0703] 10,030,061.
[0704] Ejemplo 3
[0705] Inhibición de la hepcidina en la policitemia vera
[0706] Los análogos de hepcidina de la presente invención se prueban para su actividad en la policitemia vera como lo describen Casu et al., Blood.2016; 128(2):265-276.
[0707] La hepcidina, un péptido de 25 aminoácidos, regula la homeostasis sistémica del hierro y es generada por el hígado en respuesta a la concentración de hierro plasmático y a las reservas de hierro. La hepcidina inhibe la ferroportina (FPN-1), el exportador celular de hierro, que se expresa en las superficies de las células involucradas en la absorción, el reciclaje y el almacenamiento de hierro. La hepcidina modula la restricción sistémica de hierro y la administración exógena de un mimético de hepcidina exógeno disminuyó las concentraciones de Hgb y la esplenomegalia en un modelo murino de Policitemia Vera (Casu et al, Blood.
[0708] 2016;128(2):265-276).
[0709] Cuando JAK2 se activa constitutivamente, se desencadena la producción de glóbulos rojos independiente de la eritropoyetina, lo que conduce a la policitemia. Una estrategia para prevenir el efecto de la Jak2 mutada consiste en inducir la restricción de hierro con hepcidina o péptidos miméticos de la hepcidina. El nivel bajo de hierro inhibe la señalización de la eritropoyetina en un punto aguas abajo de Jak2, proporcionando así una señal de inhibición. Cuando se administran péptidos miméticos de la hepcidina a ratones transgénicos que expresan un gen Jak2 humano con la mutación causante de la policitemia, el aumento de la producción de glóbulos rojos y del hematocrito, característico de la policitemia vera, se revierte a valores normales. (Casu et al, Blood.2016; 128(2):265-276).
[0710] Ejemplo 4
[0711] Validaciónin vivode análogos de péptidos de hepcidina
[0712] Los análogos de hepcidina de la presente invención se probaron para determinar su actividadin vivo, para determinar su capacidad de disminuir el Fe2+ libre en suero.
[0713] En un experimento PK-PD, el análogo de hepcidina de la presente invención, el compuesto A (SEQ ID NO:45), o el análogo de hepcidina, el compuesto B (SEQ ID NO:55), o el control de vehículo se administraron a monos Cynomolgus (n=3/grupo) a 2,44 mg/kg del compuesto A o 2,93 mg/kg del compuesto B por vía subcutánea. Se tomaron muestras de suero de grupos de monos a los que se les administraron análogos de hepcidina a las 0,5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h, 24 h, 30 h, 36 h, 48 h, 60 h, 72 h y 144 h después de la administración de la dosis. El contenido de hierro en plasma/suero se midió utilizando un ensayo colorimétrico en el Cobas c 111 de acuerdo con las instrucciones del fabricante del ensayo (ensayo: IRON2: ACN 661). Los datos obtenidos del análisis Cobas Iron2 se presentan en la Figura 1A para el Compuesto A y en la Figura 1B para el Compuesto B (como valores medios con desviación estándar). El compuesto A provocó una reducción de aproximadamente 5 veces en el hierro sérico 8 horas después de la administración del compuesto. La reducción del hierro sérico para el compuesto B fue máxima aproximadamente 12 horas después de la administración del compuesto, y fue 12 veces menor que los niveles previos a la dosis.
[0714] Estos estudios demuestran que los análogos de hepcidina de la presente invención reducen los niveles de hierro sérico durante al menos 60 horas cuando se administran en monos Cynomolgus. Existe un efecto dependiente de la concentración en la reducción del hierro sérico tanto para el compuesto A como para el compuesto B. También existe un retraso en el efecto entre la concentración sérica del análogo de hepcidina y su efecto correspondiente; es decir, el nadir del efecto se produjo en un momento posterior a la concentración sérica máxima del compuesto. Para el compuesto A, las concentraciones séricas en el rango de 200 a 3200 ng/mL fueron eficaces, siendo 1000 a 3200 ng/mL las que tuvieron el efecto máximo. Para el compuesto B, las concentraciones séricas de 25 a 125 ng/mL mostraron un efecto, y las de 50 a 125 ng/mL tuvieron un efecto máximo.
[0715] Ejemplo 5
[0716] Eficacia de los péptidos para limitar la eritropoyesis
[0717] Los análogos de hepcidina de la presente invención se probaron para determinar su eficacia en la limitación de la actividad eritropoyética cuando se administraron en monos Cynomolgus sanos. En un estudio de dosis repetidas, se administraron 4 dosis semanales del compuesto A o del control del vehículo por vía subcutánea (SC) a monos Cynomolgus, en tres dosis diferentes de 0,6 mg/kg/dosis, 2 mg/kg/dosis o 6 mg/kg/dosis (n=6/sexo/grupos de dosis alta o control y n=3/sexo/grupos de dosis baja o media).
[0718] El compuesto A, a ≥ 3 mg/kg/dosis, causó anemia mediada farmacológicamente, específicamente disminuciones dependientes de la dosis y del tiempo en el hematocrito (Hct) y la hemoglobina (Hgb) (tabla 7 y figura 2). En el día 29, los niveles de Hgb para los machos tratados con 1, 3 y 10 mg/kg del compuesto A se redujeron en 0,1, 2,7 y 7,2 g/dL en comparación con los controles simultáneos, respectivamente. Los niveles de Hct, en términos absolutos, disminuyeron un 6 % y un 22 % en los grupos de hombres de 3 y 10 mg/kg/dosis, respectivamente. Los animales machos mostraron respuestas farmacológicas similares a las de las hembras. La reticulocitosis se produjo tras una reducción prolongada de glóbulos rojos (RBC), observándose aumentos estadísticamente significativos el día 29. Tras la interrupción de la dosificación del fármaco, los parámetros de los RBC volvieron a los valores de control simultáneos.
[0719] Tabla 7: Cambios en el hematocrito y la hemoglobina, respecto a los controles simultáneos, en NHP a los que se administró el compuesto A por vía subcutánea una vez por semana durante un total de 4 dosis, seguido de un período de recuperación de 28 días.
[0721]
[0723] Los niveles de hematocrito y los índices hematológicos secundarios, incluido el volumen corpuscular medio (MCV), la concentración media de hemoglobina corpuscular (MCHC) y la hemoglobina corpuscular media por célula (MCH), que reflejan el tamaño y el contenido de Hgb de los RBC, se muestran en la figura 2. Los RBC generados tras la eritropoyesis con restricción de hierro inducida por el compuesto A son de tamaño similar (MCV) a los controles simultáneos, pero presentan una disminución dependiente de la dosis en la concentración de Hgb por célula (MCHC y MCH) en comparación con sus controles simultáneos. En la recuperación, los grupos de control con vehículo y los grupos de dosificación de 10 mg/kg del compuesto A fueron similares, lo que demuestra la reversibilidad de los cambios hematológicos. Los hallazgos hematológicos observados serían los esperados tras una anemia por restricción de hierro exagerada y sostenida en animales originalmente con niveles adecuados de hierro.
[0724] Ejemplo 6
[0725] Eficacia de los péptidos para limitar la eritropoyesis
[0726] En otro estudio de dosis repetidas, se administraron subcutáneamente 13 dosis semanales del compuesto A o del control del vehículo a monos Cynomolgus, en tres dosis diferentes, seguidas de un período de recuperación de 5 semanas.
[0727] A monos Cynomolgus (6/sexo/grupo) se les administraron dosis subcutáneas de 0 (solución salina al 0,9 %), 0,6, 2 o 6 mg/kg/dosis del compuesto A, QW durante 3 meses para un total de 13 dosis (días 1, 8, 15, 22, 29, 36, 43, 50, 57, 64, 71, 78 y 85). Un cohorte de animales (4/sexo/grupo) fue sacrificado el día 92 (Principal), y los animales restantes (2/sexo/grupo) fueron sacrificados el día 120 después de un período de recuperación de 35 días (Recuperación). Se obtuvieron muestras hematológicas dos veces antes del inicio del tratamiento (días -7 y -3), y en los días 27, 55 y 90 para los animales Principal y de Recuperación, correspondientes a 5 días después de las dosis 4, 8 y 13, y el día 119 para los animales de Recuperación.
[0729] Los cambios hematológicos fueron consistentes con la farmacología esperada de un mimético de hepcidina administrado a un NHP con niveles adecuados de hierro, e incluyeron disminuciones dependientes de la dosis en los parámetros de los RBC (recuento de RBC, Hgb y Hct) y aumentos en los reticulocitos, así como alteraciones en los índices de RBC (disminución de MCHC y MCH) y la morfología de los RBC (por ejemplo, microcitosis e hipocromía) (datos no mostrados). En consonancia con la anemia inducida por el compuesto A, se produjo hipercelularidad hematopoyética en la médula ósea (fémur, esternón) y hematopoyesis extramedular y depósito de hemosiderina en el hígado y el bazo (correlacionado con un aumento del peso del órgano a 6 mg/kg/dosis) a ≥ 2 mg/kg/dosis (datos no mostrados).
[0731] Se observaron cambios hematológicos compatibles con la acción farmacológica eritropoyética conocida de un mimético de hepcidina en la inducción de anemia por deficiencia de hierro (tabla 8). En el día 90, los niveles de Hgb para las hembras tratadas con 0,6, 2 y 6 mg/kg del compuesto A se redujeron en 1,3, 3,0 y 5,6 g/dL en comparación con los controles simultáneos, respectivamente. Los animales macho mostraron respuestas farmacológicas similares a las de las hembras. Los reticulocitos aumentaron en todos los puntos temporales de la fase de dosificación de manera dependiente de la dosis en respuesta a la anemia. Tras la interrupción de la dosificación, los parámetros de los RBC volvieron a los valores de control simultáneos.
[0733] Tabla 8: Cambios en el hematocrito y la hemoglobina, respecto a los controles simultáneos, en NHP a los que se administró el compuesto A por inyección SC una vez por semana durante 13 semanas, seguido de un período de recuperación de 35 días.
[0735]
[0738] En el mismo estudio, el compuesto A indujo cambios significativos en los índices hematológicos secundarios como se muestra en la figura 3. Las disminuciones dependientes de la dosis en MCHC y MCH son consistentes con los cambios reológicos esperados de los RBC asociados con la eritropoyesis restringida por hierro. Los efectos hematológicos fueron similares a los controles simultáneos 35 días después de la interrupción de la dosificación.
[0740] También se observó un aumento de la bilirrubina total (tBili) ≥ 2 mg/kg/día durante el período de tratamiento asociado con la destrucción de RBC asociada con la anemia por deficiencia de hierro (figura 4) y se consideró asociado con la destrucción preferencial de las células eritroides más jóvenes, los reticulocitos (Robinson y Koeppel, 1971). En consonancia con la inducción esperada de anemia por deficiencia de hierro debido al compuesto A, se observaron niveles significativamente elevados de plaquetas en la dosis más alta evaluada de 6 mg/kg/dosis tanto en animales machos como hembras (figura 5). Tras la interrupción de la dosificación del fármaco en el punto temporal de recuperación, los niveles de bilirrubina habían vuelto a la normalidad, mientras que los niveles de plaquetas estaban volviendo a situarse dentro de los límites normales (en comparación con los controles simultáneos).
[0741] Ejemplo 7
[0742] Estudio de fase 2 del compuesto A en pacientes con policitemia vera que requieren flebotomía Antecedentes: Los pacientes con policitemia vera (PV) normalmente son tratados con flebotomía terapéutica periódica (con o sin terapia citorreductora simultánea) para mantener el hematocrito <45 %. En consecuencia, es probable que los pacientes con PV que requieren altas flebotomías tengan un hematocrito >45 % entre citas. Por otro lado, la mayoría de los pacientes con PV presentan deficiencia de hierro en el momento del diagnóstico, la cual empeora después de repetidas flebotomías. Los pacientes con PV pueden presentar síntomas de deficiencia de hierro (con deterioro cognitivo y fatiga incluso en ausencia de anemia), y la suplementación con hierro generalmente resulta en un aumento de las tasas de flebotomía. Estudios recientes demuestran que las terapias disponibles mejoran los síntomas relacionados con la PV en parte revirtiendo la deficiencia de hierro. Por lo tanto, los pacientes con PV sintomáticos que requieren flebotomía presentan una necesidad terapéutica no cubierta. Nuestra hipótesis es que los miméticos de la hepcidina promueven el secuestro de hierro en los macrófagos esplénicos, disminuyendo la disponibilidad de hierro para la eritropoyesis maligna para reducir las necesidades de flebotomía, al tiempo que revierten los síntomas asociados a la deficiencia de hierro.
[0743] El compuesto A es un agente mimético de la hepcidina en estudios clínicos para múltiples trastornos sanguíneos. En ratones de tipo salvaje, la inyección subcutánea repetida del compuesto A disminuyó transitoriamente el hierro sérico y provocó una disminución del hematocrito relacionada con la dosis. Un estudio de fase I del compuesto A en dosis única en 62 sujetos sanos demostró una reducción del 65 % en la concentración de hierro sérico y una reducción del 70 % en la saturación de transferrina con respecto al valor basal, sin eventos adversos significativos.
[0744] Objetivos: Los objetivos principales de este ensayo clínico de fase 2 de 3 partes (descrito en la figura 6) fueron demostrar la eficacia (disminución de la necesidad de flebotomía) y la seguridad del compuesto A en pacientes con PV que requieren flebotomía. Los objetivos secundarios fueron determinar el efecto del compuesto A sobre los resultados comunicados por los pacientes y los marcadores del metabolismo del hierro.
[0745] Métodos: Los criterios de elegibilidad incluyeron diagnóstico de PV (según los criterios de la OMS de 2016) y ≥3 flebotomías hasta alcanzar un hematocrito objetivo <45 % en los 6 meses previos a la inscripción, con o sin una dosis estable de terapia citorreductora. Los pacientes elegibles fueron incluidos en la parte de búsqueda de dosis de 28 semanas del ensayo de fase 2. A los pacientes se les administraron dosis del compuesto A de 10, 20, 40, 60 y 80 mg por vía subcutánea semanalmente, con ajuste individualizado para mantener un hematocrito <45 %, como se muestra en la figura 7. El estado del hierro corporal se cuantificó mediante el seguimiento de la ferritina sérica, el hierro sérico, la saturación de transferrina (TSAT), el volumen corpuscular medio (MCV) y la hemoglobina corpuscular media (MCH).
[0746] Resultados: Se dispuso de datos de eficacia para 13 sujetos inscritos en el ensayo: 7/13 con PV de bajo riesgo y 6/13 con PV de alto riesgo; edad media 57,4 años (rango 31-74); seis recibieron TP solo, 6 con hidroxiurea simultánea y 1 con interferón simultáneo; TP en las 24 semanas previas a la inscripción = 3-9; y tiempo medio entre TP = 42 días. Se proporcionan características del paciente en la Tabla 9.
[0747]
[0748]
[0749]
[0750] Todos los sujetos mantuvieron un hematocrito <45 % después del ajuste de dosis apropiado. Los valores basales medios fueron ferritina sérica = 14,2 ng/mL (5, 37); hierro sérico = 33,0 ug/dL (16,8, 107,8); y TSAT = 7,6 % (4, 30). Durante el tratamiento con el compuesto A, los niveles de ferritina sérica aumentaron progresivamente hacia lo normal (figura 8), lo que refleja un aumento en las reservas de hierro. Los valores de TSAT (figura 9) y de hierro sérico variaron transitoriamente pero se mantuvieron por debajo de los rangos normales, lo que refleja el efecto farmacodinámico del compuesto A de inhibir la liberación de hierro de los depósitos intracelulares. Esto se asoció con un aumento del MCV (figura 10) y de la MCH (figura 11) y una disminución del hematocrito y del recuento de eritrocitos, lo que en conjunto sugiere una normalización de la distribución del hierro.
[0752] Ocho de los sujetos fueron tratados durante ≥3 meses con el compuesto A (figura 7). Tres sujetos fueron asignados aleatoriamente. Durante la fase de búsqueda de dosis abierta del estudio, todos los sujetos estuvieron libres de flebotomías, con la excepción de un sujeto que no cumplió con el tratamiento y omitió un tratamiento planificado entre las semanas 4 y 9 y se sometió a una flebotomía alrededor de la semana 13. Tres sujetos completaron la parte 1 (28 semanas) sin TP en comparación con 3-5 TP requeridos en un período similar antes del inicio del estudio. Durante el período de búsqueda de dosis de 28 semanas, el hematocrito se controló continuamente por debajo del 45 % en todos los sujetos excepto en dos (figura 12). Dos sujetos presentaron hematocritos transitoriamente >45 %, pero permanecieron por debajo del 45 % después de la flebotomía en uno y del aumento de dosis en ambos. Además, el número de eritrocitos disminuyó (figura 13) y el MCV aumentó en todos los sujetos excepto en dos. Estos hallazgos sugieren una redistribución del hierro dentro de la eritropoyesis. Por último, antes del tratamiento, los parámetros medios relacionados con el hierro eran compatibles con una deficiencia sistémica de hierro, mientras que la ferritina sérica aumentaba progresivamente hacia el rango normal. Los eventos adversos más frecuentes fueron reacciones en el sitio de inyección (ISR), reportadas por tres pacientes. La mayoría de las reacciones fueron de grado 1-2 y de carácter transitorio, y ningún paciente interrumpió el fármaco.
[0754] Estos estudios demuestran que el compuesto A fue bien tolerado. Los sujetos que cumplieron con el tratamiento mostraron una disminución significativa del hematocrito y niveles absolutos inferiores al 45 % y un aumento de la ferritina al final del período de tratamiento evaluable en comparación con los valores previos a la inscripción, lo que sugiere que los síntomas de deficiencia de hierro deberían estar mejorando. Los recuentos de plaquetas de los sujetos se mantuvieron generalmente estables durante el curso del tratamiento (figura 14). El porcentaje de reticulocitos de los sujetos mostró una tendencia ascendente durante el curso del tratamiento (figura 15), aunque no se observó un aumento similar en los glóbulos rojos maduros (datos no mostrados). El recuento de leucocitos de los sujetos se mantuvo generalmente estable durante el curso del tratamiento, lo que sugiere que el tratamiento no causó una reacción inflamatoria (figura 16). No parecía haber progresión de la enfermedad de PV, como lo demuestra la ausencia de aumentos en las plaquetas y los glóbulos blancos.
[0756] Se midieron las concentraciones plasmáticas del compuesto A en varios momentos después de la administración de dosis subcutáneas de 10 mg a 80 mg en pacientes con PV. Las concentraciones aumentaron de forma dependiente de la dosis y variaron según la dosis y el momento del muestreo. Las concentraciones del compuesto A variaron desde por debajo del límite de detección (< 2 ng/mL) hasta 866 ng/mL (figuras 17A y 17B).
[0758] Conclusiones: Los resultados actuales respaldan el uso de miméticos de hepcidina, como el compuesto A, en el tratamiento de pacientes con PV, incluidos los pacientes con PV de bajo riesgo con altas necesidades de flebotomía terapéutica. Se hace la hipótesis de que el compuesto A y otros análogos de hepcidina promueven el secuestro de hierro en los macrófagos esplénicos, disminuyendo la disponibilidad de hierro para la eritropoyesis maligna para reducir las necesidades de flebotomía, al tiempo que revierten los síntomas asociados a la deficiencia de hierro. Estos estudios indican que el compuesto A es un agente eficaz para el tratamiento de la PV, revirtiendo la deficiencia de hierro y eliminando la necesidad de TP en pacientes con PV. La eliminación de los requisitos de TP durante 7 meses en pacientes con PV dependientes de TP es significativa e inesperada. Los resultados actuales indican que el compuesto A es un agente eficaz para controlar el hematocrito, revertir la deficiencia de hierro y eliminar las flebotomías terapéuticas tanto en pacientes de bajo como de alto riesgo. Estos resultados también establecen pautas de dosificación, vías de administración y métodos para controlar y ajustar las dosis durante todo el tratamiento.

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES
1. Un análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la policitemia vera en un sujeto humano que lo necesite,
en donde el análogo de hepcidina es:
Ácido isovalérico-DTHFPCI(K(isoGlu-Palm))FEPRSKGCK-NH<2>(SEQ ID NO:45),
en donde los aminoácidos son L-aminoácidos; y
en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra mediante inyección subcutánea; al sujeto se le administran entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 100 mg del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto dos veces por semana, una vez por semana o una vez cada dos semanas.
2. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según la reivindicación 1, en donde el análogo de hepcidina se administra al sujeto en una composición farmacéutica que comprende uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
3. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg a aproximadamente 50 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 40 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 25 mg o aproximadamente 20 mg.
4. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg.
5. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 40 mg.
6. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según
cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto una vez por semana.
7. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se le proporciona al sujeto dos veces por semana.
8. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el análogo de hepcidina se le proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg o aproximadamente 40 mg una vez por semana.
9. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el análogo de hepcidina se le proporciona al sujeto en una dosis de aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg o aproximadamente 40 mg dos veces por semana.
10. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la policitemia vera es policitemia vera que requiere flebotomía.
11. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el sujeto es diagnosticado con policitemia vera y ha recibido al menos tres flebotomías para alcanzar un hematocrito objetivo <45 % en las 24 semanas previas a la administración del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo al sujeto.
12. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde, el método comprende además determinar el hematocrito del sujeto en uno o más puntos temporales posteriores a la administración del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y mantener o ajustar la cantidad del análogo de hepcidina o de la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo administrada al sujeto, en donde la cantidad se incrementa si el hematocrito determinado del sujeto es mayor que 45 %, en donde la cantidad se disminuye si el hematocrito determinado del sujeto es menor que 37,5 % o 40 %, y se mantiene la cantidad si el hematocrito determinado del sujeto está entre 37,5 % y 45 % o entre 40 % y 44 %.
13. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde el sujeto es tratado con terapia citorreductora, opcionalmente en donde la terapia citorreductora comprende hidroxiurea.
14. El análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde el método comprende administraciones múltiples de una cantidad eficaz del análogo de hepcidina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo durante un período de tiempo, en donde el método comprende además la determinación del hematocrito del sujeto después de una o más de las administraciones múltiples del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y el mantenimiento o ajuste de la cantidad del análogo de hepcidina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo que se administra a continuación al sujeto, en donde la siguiente cantidad administrada es:
(i) aumentada si el hematocrito determinado del sujeto está por encima de un rango aceptable basado en el sexo y el estado de embarazo del sujeto,
(ii) disminuida si el hematocrito determinado del sujeto está por debajo del rango aceptable, o
(iii) la misma cantidad que la administrada previamente si el hematocrito determinado del sujeto está dentro del rango aceptable.
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