ES3058584T3 - Arginase inhibitors and methods of use thereof - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos de fórmula (Ia) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (Ia) y métodos para utilizarlos para tratar el cáncer o una enfermedad inflamatoria respiratoria e inhibir la arginasa, en donde R1 es -NHR1a; R1a es -H o -C(O)CH(R1b)NHR1c; y R1b se selecciona entre -H, -alquilo (C1-C4) y CH2OR1d y R1cis -H; o R1b y R1c, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y R1d es H o -CH3. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Inhibidores de arginasa y métodos de uso de los mismos

[0004] Antecedentes

[0005] La arginasa es una metaloenzima de manganeso que cataliza la conversión de L-arginina en urea y L-ornitina. Existen dos isoformas: La arginasa 1 es una enzima citosólica que se encuentra predominantemente en los hepatocitos, donde desempeña un papel fundamental en la eliminación de amoniaco a través de la síntesis de urea; y la arginasa 2, una enzima mitocondrial altamente expresada en el riñón, implicada en la producción de ornitina, un precursor de poliaminas y prolinas importantes para la proliferación celular y la producción de colágeno, respectivamente.

[0006] Aunque la L-arginina no es un aminoácido esencial, ya que puede obtenerse mediante el recambio proteico en adultos sanos, el aumento de la expresión y secreción de arginasas da como resultado una reducción de los niveles de L-arginina en diversas afecciones fisiológicas y patológicas (por ejemplo, embarazo, enfermedades autoinmunitarias, cáncer). Las células inmunitarias, en particular, son sensibles a la reducción de los niveles de L-arginina. Los linfocitos T, al enfrentarse a un microambiente con niveles bajos de L-arginina, reducen su tasa de proliferación y disminuyen la expresión de la cadena CD3ζ, IFNγ y enzimas líticas, dando como resultado una menor capacidad de respuesta de los linfocitos T. Las células dendríticas responden a condiciones de bajos niveles de L-arginina reduciendo su capacidad de presentar antígenos, y los linfocitos citolíticos naturales reducen tanto la proliferación como la expresión de enzimas líticas.

[0007] Los tumores utilizan múltiples mecanismos inmunosupresores para evadir el sistema inmunitario. Uno de ellos es la reducción de L-arginina mediante el aumento de los niveles de arginasa circulante, el aumento de la expresión y la secreción de arginasa por las células tumorales y el reclutamiento de células supresoras procedentes de mieloide que expresan y secretan arginasa. En conjunto, estos conducen a una reducción de L-arginina en el microambiente tumoral y a un fenotipo inmunosupresor. Se ha demostrado que la inhibición farmacológica de la actividad de la arginasa revierte la inmunosupresión inducida por niveles bajos de L-arginina en modelos animales. Como tal, existe la necesidad de inhibidores de la arginasa potentes y selectivos para revertir la supresión inmunitaria y reactivar la inmunidad anticancerosa en los pacientes, ya sea como agente único o junto con terapias que reviertan mecanismos inmunosupresores adicionales.

[0008] El documento WO 2011/133653 describe inhibidores de la arginasa y sus aplicaciones terapéuticas, mientras que el documento WO 2016/210106 describe composiciones y métodos para inhibir la actividad de la arginasa.

[0009] Resumen

[0010] La presente invención es como se define en las reivindicaciones adjuntas.

[0011] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0014]

[0016] en donde

[0017] R<1>es -NHR<1a>;

[0018] R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NH<2>; y

[0019] R<1b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0020] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Ib), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0021]

[0023] en donde

[0024] R<1>es -NHR<1a>;

[0025] R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; y

[0026] R<1b>es metilo o isopropilo; y R<1c>es -H.

[0027] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0030]

[0032] en donde

[0033] R<2>es -OH o -NHR<2a>;

[0034] R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NH<2>; y

[0035] R<2b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0036] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0039]

[0041] en donde

[0042] R<2>es -OH o -NHR<2a>;

[0043] R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>;

[0044] R<2b>es metilo o isopropilo; y R<2c>es -H.

[0045] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (III), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0048]

[0049] en donde R<3>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0050] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0053]

[0055] en donde R<3>es metilo o isopropilo.

[0056] En algunas realizaciones, se describe un compuesto seleccionado de:

[0058] y

[0060] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0061] En algunas realizaciones, se describe un compuesto que tiene la siguiente estructura:

[0062]

[0064] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0065] En algunas realizaciones, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ib), (II), (IIb), (III), (IIIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0066] En algunas realizaciones, se describen compuestos de fórmula (I), (Ib), (II), (IIb), (III), (IIIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para su uso en el tratamiento del cáncer.

[0067] En algunas realizaciones, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ib), (II), (IIb), (III), (IIIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.

[0068] En algunas realizaciones, se describen compuestos de fórmula (I), (Ib), (II), (IIb), (III), (IIIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.

[0069] En algunas realizaciones, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ib), (II), (IIb), (III), (IIIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.

[0070] En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria mencionada anteriormente es enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) o asma.

[0071] Breve descripción de los dibujos

[0072] La figura 1 muestra espectros de RMN que representan la conversión del compuesto B en el compuesto A, donde el compuesto B se prepara en d6-DMSO al 100 % (marcado A), D<2>O al 75 % en d6-DMSO (marcado B), D<2>O al 50 % en d6-DMSO (marcado C), D<2>O al 25 % en d6-DMSO (marcado E) y D<2>O al 100 % (marcado F).

[0073] La figura 2 muestra el espectro de RMN (en DCl 0,1 M en D<2>O) del compuesto B, que representa cómo la acidificación produce una conversión casi completa en el compuesto A.

[0074] La figura 3 compara los espectros de RMN del material amorfo en d6-DMSO (marcado B) con el compuesto cristalino B en d6-DMSO (marcado A), mostrando que ambos materiales tienen la misma estructura cíclica que el compuesto cristalino B.

[0075] Descripción detallada

[0076] La información técnica que se expone a continuación puede exceder en algunos aspectos el alcance de la presente invención, que se define por las reivindicaciones adjuntas. La información técnica adicional se proporciona para situar la presente invención en un contexto técnico más amplio y para ilustrar posibles desarrollos técnicos relacionados. Las referencias a métodos de tratamiento en la presente memoria deben interpretarse como referencias a los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente descripción para su uso en dichos métodos de tratamiento. Compuestos

[0077] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0078]

[0080] en donde

[0081] R<1>es -NHR<1a>;

[0082] R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NH<2>; y

[0083] R<1b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0084] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (I). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I).

[0085] En algunas realizaciones de fórmula (I), R<1>es -NHR<1a>y R<1a>es -H.

[0086] En algunas realizaciones de fórmula (I), R<1>es -NHR<1a>, R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NH<2>y R<1b>es -CH<3>.

[0087] En algunas realizaciones de fórmula (I), R<1>es -NHR<1a>, R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NH<2>y R<1b>es -CH(CH<3>)<2>.

[0088] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Ia), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0091]

[0093] en donde

[0094] R<1>es -NHR<1a>;

[0095] R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; y

[0096] R<1b>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y CH<2>OR<1d>; y R<1c>es -H; o

[0097] R<1b>y R<1c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo de 5 miembros; y

[0098] R<1d>es H o -CH<3>.

[0099] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Ia). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (Ia).

[0100] En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (Ia) se representa por la fórmula (Ia1) o (Ia2):

[0103]

[0105] o

[0106] en donde R<1>es el mismo que se ha definido anteriormente.

[0107] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -H.

[0108] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es -H y R<1c>es -H.

[0109] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es CH<2>OR<1d>; R<1c>es -H y R<1d>es -H.

[0110] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es CH<2>OR<1d>; R<1c>es -H y R<1d>es -CH<3>. En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es -alquilo (C<1>-C<4>) y R<1c>es -H. En algunas realizaciones, el alquilo C<1>-C<4>se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo,terc-butilo e isobutilo.

[0111] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es metilo; y R<1c>es -H.

[0112] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es etilo; y R<1c>es -H.

[0113] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es isopropilo; y R<1c>es -H.

[0114] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>essec-butilo; y R<1c>es -H.

[0115] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es isobutilo; y R<1c>es -H.

[0116] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>esterc-butilo; y R<1c>es -H.

[0117] En algunas realizaciones de fórmula (Ia), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>y R<1b>y R<1c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo de 5 miembros.

[0118] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Ib), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0121]

[0123] en donde

[0124] R<1>es -NHR<1a>;

[0125] R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; y

[0126] R<1b>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y CH<2>OR<1d>; y R<1c>es -H; o

[0127] R<1b>y R<1c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y

[0128] R<1d>es H o -CH<3>.

[0129] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Ib). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (Ib).

[0130] En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (Ib) se representa por la fórmula (Ib1) o (Ib2):

[0131]

[0133] en donde R<1>es el mismo que se ha definido anteriormente.

[0134] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -H.

[0135] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es -H y R<1c>es -H.

[0136] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es CH<2>OR<1d>; R<1c>es -H y R<1d>es -H.

[0137] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es CH<2>OR<1d>; R<1c>es -H y R<1d>es -CH<3>. En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es -alquilo (C<1>-C<4>) y R<1c>es -H. En algunas realizaciones, el alquilo C<1>-C<4>se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo,terc-butilo e isobutilo.

[0138] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es metilo; y R<1c>es -H.

[0139] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es etilo; y R<1c>es -H.

[0140] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es isopropilo; y R<1c>es -H.

[0141] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>essec-butilo; y R<1c>es -H.

[0142] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>es isobutilo; y R<1c>es -H.

[0143] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; R<1b>esterc-butilo; y R<1c>es -H.

[0144] En algunas realizaciones de fórmula (Ib), R<1a>es -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>y R<1b>y R<1c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo de 5 miembros.

[0145] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0148]

[0150] en donde

[0151] R<2>es -OH o -NHR<2a>;

[0152] R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NH<2>; y

[0153] R<2b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0154] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (II). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (II).

[0155] En algunas realizaciones de fórmula (II), R<2>es -OH.

[0156] En algunas realizaciones de fórmula (II), R<2>es -NHR<2a>y R<2a>es -H.

[0157] En algunas realizaciones de fórmula (II), R<2>es -NHR<2a>, R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NH<2>y R<2b>es -CH<3>.

[0158] En algunas realizaciones de fórmula (II), R<2>es -NHR<2a>, R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NH<2>y R<2b>es -CH(CH<3>)<2>.

[0159] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIa), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0162]

[0164] en donde

[0165] R<2>es -OH o -NHR<2a>;

[0166] R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>;

[0167] R<2b>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y CH<2>OR<2d>; y R<2c>es -H; o

[0168] R<2b>y R<2c>, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y

[0169] R<2d>es H o -CH<3>.

[0170] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIa). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IIa).

[0171] En una realización de fórmula (IIa), R<2>es -OH.

[0172] En una realización de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -H.

[0173] En una realización de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es H y R<2c>es H.

[0174] En una realización de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -CH<2>OR<2d>; R<2c>es H y R<2d>es H.

[0175] En una realización de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -CH<2>OR<2d>; R<2c>es H y R<2d>es -CH<3>.

[0176] En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -alquilo (C<1>-C<4>) y R<2c>es -H. En algunas realizaciones, el alquilo C<1>-C<4>se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo,terc-butilo e isobutilo. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es metilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es etilo; y R<2c>es -H.

[0177] En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es isopropilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es sec-butilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es isobutilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>esterc-butilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIa), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>y R<2b>y R<2c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo de 5 miembros.

[0178] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0179]

[0181] en donde

[0182] R<2>es -OH o -NHR<2a>;

[0183] R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>;

[0184] R<2b>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y CH<2>OR<2d>; y R<2c>es -H; o

[0185] R<2b>y R<2c>, junto con los átomos a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y

[0186] R<2d>es -H o -CH<3>.

[0187] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIb). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IIb).

[0188] En una realización de fórmula (IIb), R<2>es -OH.

[0189] En una realización de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -H.

[0190] En una realización de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es H y R<2c>es H.

[0191] En una realización de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -CH<2>OR<2d>; R<2c>es H y R<2d>es H.

[0192] En una realización de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; y R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -CH<2>OR<2d>; R<2c>es H y R<2d>es -CH<3>.

[0193] En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es -alquilo (C<1>-C<4>) y R<2c>es -H. En algunas realizaciones, el alquilo C<1>-C<4>se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo,terc-butilo e isobutilo. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es metilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es etilo; y R<2c>es -H.

[0194] En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es isopropilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>essec-butilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>es isobutilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>; R<2b>esterc-butilo; y R<2c>es -H. En algunas realizaciones de fórmula (IIb), R<2>es -NHR<2a>; R<2a>es -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>y R<2b>y R<2c>, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo de 5 miembros.

[0195] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (III), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0198]

[0199] en donde R<3>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

[0200] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (III). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (III).

[0201] En algunas realizaciones de fórmula (III), R<3>es -CH<3>.

[0202] En algunas realizaciones de fórmula (III), R<3>es -CH(CH<3>)<2>.

[0203] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (IIIa), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0206]

[0208] en donde

[0209] R<3>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y CH<2>OR<3a>; y

[0210] R<3a>es -H o -CH<3>.

[0211] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIIa). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IIIa).

[0212] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es -H.

[0213] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es -CH<2>OR<3a>y R<3a>es -H.

[0214] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es -CH<2>OR<3a>y R<3a>es -CH<3>.

[0215] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es -alquilo (C<1>-C<4>). En algunas realizaciones, el -alquilo (C<1>-C<4>) se selecciona de metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo e isobutilo.

[0216] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es metilo.

[0217] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es etilo.

[0218] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es isopropilo.

[0219] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>essec-butilo.

[0220] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>es isobutilo.

[0221] En una realización de fórmula (IIIa), R<3>esterc-butilo.

[0222] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (IIIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0225]

[0226] en donde

[0227] R<3>se selecciona de -H, -alquilo (C<1>-C<4>) y -CH<2>OR<3a>; y

[0228] R<3a>es -H o -CH<3>.

[0229] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IIIb). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IIIb).

[0230] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es -H.

[0231] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es -CH<2>OR<3a>y R<3a>es -H.

[0232] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es -CH<2>OR<3a>y R<3a>es -CH<3>.

[0233] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es -alquilo (C<1>-C<4>). En algunas realizaciones, el -alquilo (C<1>-C<4>) se selecciona de metilo, etilo, isopropilo,sec-butilo e isobutilo.

[0234] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es metilo.

[0235] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es etilo.

[0236] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es isopropilo.

[0237] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>essec-butilo.

[0238] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>es isobutilo.

[0239] En una realización de fórmula (IIIb), R<3>esterc-butilo.

[0240] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0243]

[0245] en donde R<4>es -OH o -NH<2>.

[0246] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IV). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IV).

[0247] En algunas realizaciones de fórmula (IV), R<4>es -OH.

[0248] En algunas realizaciones de fórmula (IV), R<4>es -NH<2>.

[0249] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (IVb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0252]

[0254] en donde R<4>es -OH o -NH<2>.

[0255] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (IVb). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (IVb).

[0256] En algunas realizaciones de fórmula (IVb), R<4>es -OH.

[0257] En algunas realizaciones de fórmula (IVb), R<4>es -NH<2>.

[0258] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (V), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0261]

[0263] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (V). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (V).

[0264] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (Vb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0267]

[0269] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (Vb). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (Vb).

[0270] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (VI), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0273]

[0275] en donde

[0276] R<6a>es -H o -CH<3>;

[0277] R<6b>es -C(O)C(R<6c>R<6d>)NH<2>; o -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OR<6e>; y

[0278] R<6c>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OR<6f>;

[0279] R<6d>es H o -CH<3>; y

[0280] R<6e>y R<6f>son independientemente -H o -CH<3>.

[0281] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (VI). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (VI).

[0282] En algunas realizaciones de fórmula (VI), R<6a>es -H o -CH<3>; y R<6b>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino.

[0283] En algunas realizaciones de fórmula (VI), R<6a>es -H o -CH<3>; R<6b>es -C(O)C(R<6c>R<6d>)NH<2>; R<6c>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OH; y R<6d>es H o -CH<3>.

[0284] En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (VI) se representa por la fórmula (VIa1) o (VIa2):

[0287]

[0289] en donde R<6a>y R<6b>son los mismos que se han definido anteriormente.

[0290] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (VIa1). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (VIa1).

[0291] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (VIa2). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (VIa2).

[0292] En una realización de fórmula (VI), R<6b>es -CH<3>o -CH<2>CH<2>NH<2>.

[0293] En algunas realizaciones, se describe un compuesto de fórmula (VIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0296]

[0298] en donde

[0299] R<6a>es -H o -CH<3>;

[0300] R<6b>es -C(O)C(R<6c>R<6d>)NH<2>; o -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OR<6e>; y

[0301] R<6c>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OR<6f>;

[0302] R<6d>es H o -CH<3>; y

[0303] R<6e>y R<6f>son independientemente -H o -CH<3>.

[0304] En una realización, se describe un compuesto de fórmula (VIb). En otra realización, se describe una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (VIb).

[0305] En una realización de fórmula (VIb), R<6b>es -CH<3>o -CH<2>CH<2>NH<2>.

[0306] En algunas realizaciones de fórmula (VIb), R<6a>es -H o -CH<3>; y R<6b>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino.

[0307] En algunas realizaciones de fórmula (VIb), R<6a>es -H o -CH<3>; R<6b>es -C(O)C(R<6c>R<6d>)NH<2>; R<6c>es -alquilo (C<1>-C<3>) que está sustituido por 0 o 1 amino u -OH; y R<6d>es H o -CH<3>.

[0308] En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (VIb) se representa por la fórmula (VIb1) o (VIb2):

[0309]

[0311] en donde R<6a>y R<6b>son los mismos que se han definido anteriormente.

[0312] En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (II), (IIa), (III), (IIIa), (IV), (V) y (VI), incluyendo especies de los mismos, se convierten en los compuestos de fórmula (Ib), (IIb), (IIIb), (IVb), (Vb) y (VIb), incluyendo especies de los mismos, a través de ciclación intramolecular, y viceversa. Es decir, es un proceso de interconversión. Los compuestos de fórmula (I), (Ia), (II), (IIa), (III), (IIIa), (IV), (V) y (VI) incluyendo especies de los mismos, y los compuestos de fórmula (Ib), (IIb), (IIIb), (IVb), (Vb) y (VIb) incluyendo especies de los mismos, se convierten cada uno en el otro parcial o completamente, dependiendo de las condiciones, tales como temperatura, presión, humedad, el pH y/o la composición del medio (por ejemplo, disolventes), y etc. Eso se ilustra en el esquema a continuación:

[0315]

[0317] en donde R<1>es el mismo que se ha definido en las fórmulas (Ia) e (Ib) anteriores.

[0318] En algunas realizaciones, se describen compuestos de la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente de los mismos, y los ejemplos 2, 4, 5, 11-18, 20-30 son ejemplos comparativos:

[0319] Tabla 1

[0322]

[0323]

[0324]

[0325]

[0326]

[0329] La expresión “alquilo C<1>-C<4>” incluye restos alquilo acíclicos que tienen 1-4 átomos de carbono. Los ejemplos de restos alquilo C<1>-C<4>incluyen metilo, etilo,n-propilo, isopropilo,n-butilo,sec-butilo, isobutilo yterc-butilo.

[0331] La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” incluye sales de adición de ácidos o de adición de bases que conservan la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 y, que típicamente no son biológicamente o de otro modo no deseables. En muchos casos, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 son capaces de formar sales de ácidos y/o bases en virtud de la presencia de grupos básicos y/o carboxilo o grupos similares a los mismos.

[0333] Se pueden formar sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos y ácido orgánicos, por ejemplo, sales acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etanodisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, subsalicilato, sulfato/hidrogenosulfato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Los ácidos inorgánicos de los que pueden obtenerse sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares. Los ácidos orgánicos de los que se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido trifluoroacético, ácido sulfosalicílico y similares.

[0335] Se pueden formar sales de adición de base farmacéuticamente aceptables con bases inorgánicas y orgánicas. Las bases inorgánicas de las que se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, amoniaco y sales de amonio y metales de las columnas I a XII de la tabla periódica. En determinadas realizaciones, las sales se obtienen de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, cinc y cobre; las sales particularmente adecuadas incluyen sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las bases orgánicas de las que se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas, incluyendo aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas, resinas de intercambio iónico básicas y similares. Determinadas aminas orgánicas incluyen isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina y trometamina.

[0337] Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, se pueden sintetizar a partir de un resto básico o ácido, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales se pueden preparar haciendo reaccionar formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato o similares de Na<+>, Ca<2+>, Mg<2+>o K<+>), o haciendo reaccionar formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Dichas reacciones se llevan a cabo típicamente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, es deseable el uso de medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, siempre que sea posible. Se pueden encontrar listas de sales adecuadas adicionales en, por ejemplo, “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20.ª ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge y col., “J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 y en “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).

[0338] Cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria también pretende representar formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente para los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en la presente memoria, excepto que uno o más átomos son reemplazados por un átomo del mismo elemento pero con diferente número másico. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, cloro y yodo, tales como<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<35>S,<36>Cl e<125>I. Los compuestos marcados isotópicamente de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 se pueden preparar generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos adjuntos utilizando reactivos marcados isotópicamente adecuados en lugar de los reactivos no marcados empleados previamente. Los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, pueden tener diferentes formas isoméricas. La expresión “isómero óptico”, “estereoisómero” o “diastereoisómero” se refiere a cualquiera de las diversas configuraciones estereoisoméricas que pueden existir para un compuesto determinado de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, y la Tabla 1. Se entiende que un sustituyente puede estar unido a un centro quiral de un átomo de carbono y, por lo tanto, los compuestos descritos incluyen enantiómeros, diastereómeros y racematos. El término “enantiómero” incluye pares de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla racémica. El término se utiliza para designar una mezcla racémica cuando sea apropiado. Los términos “diastereómeros” o “diastereoisómeros” incluyen estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí. La estereoquímica absoluta se especifica según el sistema Cahn-Ingold-Prelog R-S. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada centro quiral puede especificarse medianteRoS. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta se desconoce se pueden designar (+) o (-), dependiendo de la dirección (dextro- o levógira) en la que rotan el plano de luz polarizada en la longitud de onda de la línea D de sodio. Algunos de los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, contienen uno o más centros o ejes asimétricos y, por lo tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros u otras formas estereoisómeras que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R) o (S). La presente descripción incluye todos estos isómeros posibles, incluyendo mezclas racémicas, formas ópticamente puras y mezclas intermedias. Los isómeros (R) y (S) ópticamente activos pueden prepararse utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o resolverse mediante técnicas convencionales ya conocidas en la técnica, tales como HPLC quiral. También se describen en la presente memoria los Intermedios 1-48 de los Ejemplos y sales de los mismos.

[0339] Composiciones farmacéuticas

[0340] En algunas realizaciones, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0341] La expresión “portador farmacéuticamente aceptable” incluye compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que, dentro del alcance del buen criterio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin demasiada toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, según lo determine un experto en la técnica.

[0342] Las composiciones descritas pueden estar en una forma adecuada para su uso oral (por ejemplo, como comprimidos, pastillas, cápsulas duras o blandas, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para su uso tópico (por ejemplo, como cremas, ungüentos, geles o soluciones o suspensiones acuosas u oleosas), para administración por inhalación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para administración por insuflación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido) o para administración parenteral (por ejemplo, como una solución acuosa u oleosa estéril para dosificación intravenosa, subcutánea, intramuscular o intramuscular o como un supositorio para dosificación rectal).

[0343] La cantidad de principio activo que se combina con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables para producir una única forma farmacéutica variará necesariamente dependiendo del hospedador tratado y la vía particular de administración. Para obtener más información sobre las vías de administración y las pautas de dosificación, se refiere al lector al Capítulo 25.3 en el Volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

[0344] Utilidades terapéuticas

[0345] Los presentes compuestos son útiles como inhibidores de la arginasa en terapias.

[0346] En un aspecto, se describen métodos para tratar el cáncer en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0347] En un aspecto, se describen métodos para tratar una enfermedad inflamatoria respiratoria en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0348] En un aspecto, se describe un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.

[0349] En un aspecto, se describe un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.

[0350] En un aspecto, se describe el uso de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer.

[0351] En un aspecto, se describe el uso de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad inflamatoria respiratoria.

[0352] En un aspecto, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.

[0353] En un aspecto, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.

[0354] El término “cáncer” incluye, por ejemplo, carcinoma de células renales, carcinoma escamocelular de cabeza y cuello, cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón microcítico (CPM), cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), mesotelioma), cáncer de páncreas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, leucemia mieloide aguda (LMA), cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer de vejiga, melanoma, cáncer renal y cáncer de ovario. En algunas realizaciones, el cáncer ha metastatizado. En algunas realizaciones, el cáncer está asociado con la modulación de la arginasa 1 y/o la arginasa 2.

[0355] En algunas realizaciones, el cáncer está asociado con un aumento de los niveles plasmáticos de arginasa 1. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con una disminución de los niveles plasmáticos de arginina. En algunas realizaciones, el cáncer está asociado tanto con un aumento de los niveles plasmáticos de arginasa 1 como con una disminución de los niveles plasmáticos de arginina. En algunas realizaciones, el cáncer asociado con un aumento de los niveles plasmáticos de arginasa 1 y/o una disminución de los niveles plasmáticos de arginina incluye carcinoma de células renales, carcinoma escamocelular de cabeza y cuello, cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón microcítico (CPM), cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), mesotelioma), cáncer de páncreas, cáncer colorrectal y cáncer de mama.

[0356] En algunas realizaciones, el cáncer secreta arginasa 2, por ejemplo, leucemia mieloide aguda y cáncer de próstata. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con células inmunitarias infiltrantes de tumor con arginasa 1 positiva, por ejemplo, cáncer de pulmón (cáncer de pulmón microcítico (CPM), cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), cáncer gástrico, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma escamocelular de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas y cáncer renal.

[0357] La expresión “una enfermedad inflamatoria respiratoria” se refiere a afecciones o trastornos inflamatorios que afectan a los espacios aéreos, la vasculatura pulmonar, el intersticio pulmonar o una combinación de los mismos. Pueden limitarse al pulmón o afectar a múltiples órganos. En una realización, la enfermedad inflamatoria respiratoria es una enfermedad pulmonar inflamatoria. En otra realización, la enfermedad pulmonar inflamatoria no es infecciosa.

[0358] En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria es asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis pulmonar inducida químicamente, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis quística o una combinación de las mismas. En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria es enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) o asma.

[0359] En un aspecto, se describen métodos para inhibir la arginasa en un sujeto que lo necesite, que comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0360] En un aspecto, se describe un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la arginasa.

[0361] En un aspecto, se describe el uso de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para inhibir la arginasa.

[0362] En un aspecto, se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la arginasa.

[0363] El término “arginasa” incluye enzimas que contienen manganeso pertenecientes a la familia de las fluorohidrolasas, que catalizan la quinta y última etapa del ciclo de la urea, convirtiendo la L-arginina en L-ornitina y urea. El término “arginasa” incluye las dos isoenzimas de la enzima, por ejemplo, la arginasa 1, que funciona en el ciclo de la urea y se encuentra principalmente en el citoplasma del hígado, y la arginasa 2, que se encuentra en las mitocondrias de varios tejidos del cuerpo y participa en la regulación de las concentraciones de arginina/ornitina en la célula. En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, son selectivos para la arginasa 1. En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, son selectivos para la arginasa 2. En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, inhiben tanto la arginasa 1 como la arginasa 2.

[0364] La expresión “cantidad eficaz” incluye una cantidad de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, que desencadene una respuesta biológica o médica en un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con la arginasa o el cáncer, la mejora de los síntomas del cáncer o la ralentización o retraso de la progresión del cáncer. En algunas realizaciones, la expresión “cantidad eficaz” incluye la cantidad de un compuesto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, que cuando se administra a un sujeto, es eficaz para aliviar, inhibir y/o mejorar, al menos parcialmente, el cáncer o inhibir la arginasa, y/o reducir o inhibir el crecimiento de un tumor o la proliferación de células cancerosas en un sujeto.

[0365] El término “sujeto” incluye mamíferos de sangre caliente, por ejemplo, primates, perros, gatos, conejos, ratas y ratones. En algunas realizaciones, el sujeto es un primate, por ejemplo, un ser humano. En algunas realizaciones, el sujeto padece cáncer. En algunas realizaciones, el sujeto necesita tratamiento (por ejemplo, el sujeto se beneficiaría biológica o médicamente del tratamiento). En algunas realizaciones, el paciente padece cáncer. En algunas realizaciones, el sujeto presenta niveles plasmáticos elevados de arginasa 1. En algunas realizaciones, el sujeto presenta niveles reducidos de arginina. En algunas realizaciones, el paciente presenta tanto niveles plasmáticos elevados de arginasa 1 como niveles reducidos de arginina. En algunas realizaciones, el sujeto padece un cáncer que secreta arginasa 2 (por ejemplo, leucemia mieloide aguda o cáncer de próstata). En algunas realizaciones, el sujeto presenta células inmunitarias infiltrantes de tumor con arginasa 1 positiva.

[0366] El término “inhibir”, “inhibición” o “que inhibe/n” incluye una disminución de la actividad inicial de una actividad o proceso biológico. En algunas realizaciones, los compuestos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, inhiben la arginasa.

[0367] Los términos “tratar”, “que trata/n” y “tratamiento” incluyen la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con la arginasa en un sujeto, la mejora de uno o más síntomas de un cáncer o la ralentización o retraso de la progresión del cáncer en un sujeto. Los términos “tratar”, “que trata/n” y “tratamiento” también incluyen la reducción o inhibición del crecimiento de un tumor o la proliferación de células cancerosas en un sujeto.

[0368] Ejemplos

[0369] La presente invención es como se define en las reivindicaciones adjuntas. En los siguientes Ejemplos, los compuestos y composiciones que se encuentran fuera del alcance de las reivindicaciones adjuntas se proporcionan únicamente con fines comparativos.

[0370] Los aspectos de la presente descripción se pueden definir con más detalle mediante los siguientes ejemplos no limitativos, que describen en detalle la preparación de determinados compuestos e intermedios de la presente descripción y los métodos para utilizar los compuestos de la presente descripción. Para los expertos en la técnica resultará evidente que se pueden poner en práctica numerosas modificaciones, tanto en los materiales como en los métodos, sin apartarse del alcance de la presente descripción.

[0371] A menos que se indique lo contrario:

[0372] (i) Todas las síntesis se realizan a temperatura ambiente, es decir, en un intervalo de 17 a 25 °C y en una atmósfera de un gas inerte, tal como nitrógeno, a menos que se indique lo contrario;

[0373] (ii) las evaporaciones se realizaron mediante evaporación rotatoria o utilizando un equipo Genevac o un evaporador Biotage v10 al vacío, y los procedimientos de tratamiento se realizar después de la eliminación de los sólidos residuales por filtración;

[0374] (iii) las purificaciones por cromatografía ultrarrápida se realizaron en un Teledyne Isco CombiFlash<®>Rf automatizado o Teledyne Isco CombiFlash<®>Companion<®>utilizando columnas de sílice rellanadas previamente RediSep Rf Gold<™>(20-40 µm, partículas esféricas), cartuchos GraceResolv<™>(sílice Davisil<®>) o cartuchos Silicycle (40-63 µm). (iv) la cromatografía preparativa se realizó en un instrumento de HPLC prep. Gilson con recogida por UV; como alternativa, se realizó una cromatografía preparativa en un instrumento de HPLC-MS Waters AutoPurification con recogida activada por MS y UV;

[0375] (v) la cromatografía preparativa quiral se realizó en un instrumento Gilson con recogida por UV (inyector/colector de fracciones 233, bombas 333 y 334, detector UV 155) o en un instrumento Varian Prep Star (2 bombas SD1, detector UV 325, colector de fracciones 701), una bomba que funcionaba con inyección Gilson 305; como alternativa, la cromatografía preparativa quiral se realizó en un instrumento de SFC-MS Waters Prep 100 con recogida activada por MS y UV, o en un instrumento de SFC Thar MultiGramIIIcon recogida por UV.

[0376] (vi) los rendimientos, cuando se presentan, no son necesariamente los máximos alcanzables;

[0377] (vii) en general, las estructuras de los productos finales de fórmula I se confirmaron mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN); los valores de desplazamiento químico por RMN se midieron en la escala delta [los espectros de resonancia magnética de protones se determinaron utilizando un instrumento Bruker Avance III 600 (600 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) o Bruker DRX 500 (500 MHz)]; las mediciones se realizaron a temperatura ambiente, a menos que se especifique lo contrario; se han utilizado las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; c, cuadruplete; m, multiplete; dd, doblete de dobletes; ddd, doblete de doblete de doblete; dt, doblete de tripletes; s a, señal ancha.

[0378] (viii) en general, los productos finales de fórmula I también se caracterizaron mediante espectroscopia de masas tras cromatografía líquida (LCMS o UPLC); el análisis por UPLC se realizó utilizando un equipo de UPLC Waters equipado con un espectrómetro de masas Waters SQ (temperatura de columna: 40 °C, UV = 220-300 nm o 190-400 nm, espec. de masas = ESI con conmutación positiva/negativa) a un caudal de 1 ml/min utilizando un sistema de disolventes del 97 % de A 3 % de B al 3 % de A 97 % de B durante 1,50 min (tiempo total de ejecución con equilibrio a las condiciones iniciales, etc., 1,70 min), donde A = ácido fórmico al 0,1 % o ácido trifluoroacético al 0,05 % en agua (para trabajo ácido) o hidróxido de amonio al 0,1 % en agua (para trabajo básico) y B = acetonitrilo. Para el análisis ácido, se usó una columna Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm), para el análisis básico, se usó una columna Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm 2,1 x 50 mm). Como alternativa, el análisis por UPLC se realizó utilizando un equipo de UPLC Waters equipado con un espectrómetro de masas Waters SQ (temp. de la columna: 30 °C, UV = 210-400 nm, espec. de masas = ESI con conmutación positiva/negativa) a un caudal de 1 ml/min utilizando un gradiente de disolventes del 2 al 98 % de B durante 1,5 min (tiempo total de ejecución con equilibrio a las condiciones iniciales: 2 min), donde A = ácido fórmico al 0,1 % en agua y B = ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo (para trabajo ácido) o A = hidróxido de amonio al 0,1 % en agua y B = acetonitrilo (para trabajo básico). Para el análisis ácido, se usó la columna Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 30 mm), para el análisis básico, se usó la columna Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 30 mm); el análisis por LCMS se realizó utilizando un equipo Waters Alliance HT (2795) equipado con un espectrómetro de masas Waters ZQ ESCi y una columna Phenomenex Gemini-NX C18 (5 µm, 110A, 2,1 x 50 mm) a un caudal de 1,1 ml/min del 95 % de A al 95 % de B durante 4 min con una retención de 0,5 min, donde A = ácido fórmico al 0,1 % y B = ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo (para trabajo ácido) o A = hidróxido de amonio al 0,1 % en agua y B = acetonitrilo (para trabajo básico). Además, el análisis por LCMS se realizó utilizando un equipo de UFLC Shimadzu equipado con un espectrómetro de masas Shimadzu LCMS-2020 y una columna Waters HSS C18 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm) o Shim-pack XR-ODS (2,2 µm, 3,0 x 50 mm) o Phenomenex Gemini-NX C18 (3 µm, 3,0 x 50 mm) a un caudal de 0,7 ml/min (para la columna Waters HSS C18), 1,0 ml/min (para la columna Shim-pack XR ODS) o 1,2 ml/min (para la columna Phenomenex Gemini-NX C18), del 95 % de A al 95 % de B durante 2,2 min con una retención de 0,6 min, donde A = ácido fórmico al 0,1 % o ácido trifluoroacético al 0,05 % en agua (para trabajo ácido) o hidróxido de amonio al 0,1 % o carbonato de amonio 6,5 mM en agua (para trabajo básico) y B = acetonitrilo. El ion molecular indicado corresponde a [M+H]+, a menos que se especifique lo contrario; para moléculas con múltiples patrones isotópicos (Br, Cl, etc.), el valor indicado es el obtenido para la masa isotópica más baja, a menos que se especifique lo contrario.

[0379] (ix) La purificación por intercambio iónico se realizó generalmente con un cartucho SCX-2 (Biotage).

[0380] (x) La pureza intermedia se evaluó mediante cromatografía de capa fina, espectroscopia de masas, LCMS, UPLC/MS, HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento) y/o análisis de RMN;

[0381] (xi) se han utilizado las siguientes abreviaturas:-EtOH: etanol

[0382] EtOAc: acetato de etilo

[0383] LDA: diisopropilamida de litio

[0384] MeOH: metanol

[0385] TFA: ácido trifluoroacético

[0386] MeCN: acetonitrilo

[0387] LCMS: cromatografía líquida-espectrometría de masas

[0388] ta o TA: temperatura ambiente

[0389] ac.: acuoso/a

[0390] THF: tetrahidrofurano

[0391] KHMDS: bis(trimetilsilil)amida de potasio

[0392] DCM: diclorometano

[0393] DMF: dimetilformamida

[0394] HATU: (hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio)

[0395] BOC:terc-butoxicarbonilo

[0396] DTNB: ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico

[0397] TNB: ácido 2-nitro-5-tiobenzoico

[0398] HEPES: (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazin-etanosulfónico)

[0399] Ejemplo 1: ácido (R)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0400]

[0403] Intermedio 1: (3S,7aR)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona

[0404] Se añadió 2,2,2-tricloroetano-1,1-diol (2,155 g, 13,03 mmol) a una solución de D-prolina (1,00 g, 8,69 mmol) en CHCl<3>(100 ml) en una atmósfera de nitrógeno. El matraz de reacción se equipó con una trampa Dean-Stark inversa y la mezcla de reacción se calentó a reflujo con agitación durante 48 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó secuencialmente con agua (2 x 200 ml) y salmuera saturada (2 x 200 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se evaporó para proporcionar un compuesto en bruto. El material en bruto se purificó por cristalización en EtOH para dar el producto(Intermedio1, 1,13 g, 53,2 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (300 MHz, CDCl<3>) δ 1,66 - 2,41 (4H, m), 3,05 - 3,20 (1H, m), 3,40 - 3,50 (1H, m), 4,10 - 4,20 (1H, m), 5,18 (1H, s).

[0405] Intermedio 2: (3S,7aS)-7a-((E)-4-bromobut-2-enil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona

[0406] Una solución de LDA (2,0 M en THF/heptano/etilbenceno, 2,05 ml, 4,09 mmol) se añadió gota a gota a una solución de (3S,7aR)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona(Intermedio1, 1,00 g, 4,09 mmol) en THF (500 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a -78 °C durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota (E)-1,4-dibromobut-2-eno (875 mg, 4,09 mmol) en forma de una solución en THF (2 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 30 minutos y a continuación se calentó a temperatura ambiente con agitación durante 2 h más. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y el residuo resultante se diluyó en EtOAc (20 ml) y se lavó secuencialmente con agua (2 x 20 ml) y salmuera saturada (2 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 2, 760mg, 49 % de rendimiento).<1>H RMN (300 MHz, CDCl<3>) δ 1,55 - 1,75 (1H, m), 1,85 - 2,25 (3H, m), 2,52 - 2,73 (2H, m), 3,14 - 3,32 (2H, m), 3,89 - 4,10 (2H, m), 5,01 (1H, s), 5,79 - 5,99 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 378.

[0407] Intermedio 3: (3S,7aS)-7a-((E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-2-enil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona

[0408] Se añadió Pd<2>(dba)<3>(85,0 mg, 0,0928 mmol) a una solución de (3S,7aS)-7a-((E)-4-bromobut-2-enil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona(Intermedio 2,700 mg, 1,85 mmol) y bis(pinacolato)diboro (942 mg, 3,71 mmol) en THF (30 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se calentó a 60 °C y se agitó durante 5 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a sequedad. El residuo resultante se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó secuencialmente con agua y salmuera saturada. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice para proporcionar el producto(Intermedio 3, 510 mg, 65 % de rendimiento).<1>H RMN (300 MHz, CDCl<3>) δ 1,28 (12H, s), 1,58 - 1,80 (2H, m), 1,83 - 2,12 (3H, m) 2,42 - 2,65 (1H, m), 3,20 (1H, dd), 3,47 (1H, c), 3,71 (1H, t), 3,90 (1H, t), 4,98 (1H, s), 5,38 - 5,53 (1H, m), 5,64 - 5,83 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 424.

[0409] Intermedio 4: (3S,7aR)-7a-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona

[0410] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 125 mg, 0,12 mmol) a una solución de (3S,7aS)-7a-((E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-2-enil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona(Intermedio3, 500 mg, 1,18 mmol) en MeOH (5 ml). El matraz de reacción se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se lavó con MeOH. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar un compuesto en bruto(Intermedio 4, 390mg, 78 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional. m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 426.

[0411] Ejemplo 1: ácido (R)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0412] Se añadió HCl acuoso concentrado (1,00 ml, 12,0 mmol) a una solución de (3S,7aR)-7a-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona(Intermedio 4,300 mg, 0,703 mmol) y ácido fenilborónico (172 mg, 1,41 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml). La solución resultante se calentó a 80 °C durante 15 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por LCMS preparativa (columna XBridge Prep C18 OBD, 5 µ de sílice, 19 x 150 mm, H<2>O (con TFA al 0,05 %/MeCN). Las fracciones puras se recogieron y se concentraron a sequedad para proporcionar ácido (R)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 1, 85mg, 37 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (400 MHz, D<2>O) δ 0,63 - 0,74 (2H, m), 1,09 - 1,27 (2H, m), 1,27 - 1,37 (2H, m), 1,65 - 1,75 (1H, m), 1,77 - 2,08 (4H, m), 2,25 - 2,37 (1H, m), 3,21 - 3,37 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 216.

[0413] Ejemplo 2: ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico

[0416]

[0419] Intermedio 5: 1-terc-butil 4-(benciloxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo

[0420] Se disolvió ácido (2S,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (5,00 g, 21,6 mmol) en DMF (73 ml) y la solución se enfrió a 0 °C. Se añadió en porciones hidruro de sodio (dispersión al 60 % en aceite mineral) (1,81 g, 45,3 mmol) y la suspensión se agitó a 0 °C durante 1 h. Se añadió bromuro de bencilo (12,9 ml, 108 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche mientras se calentaba lentamente a TA. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo (250 ml) y se lavó secuencialmente con ácido cítrico (ac. al 10 %) y agua. Los productos orgánicos se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto en forma de una mezcla de rotámeros(Intermedio 5, 5,5g, 62 % de rendimiento).<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,28 -1,40 (9H, s x2) rotámeros, 2,20 (1H, dd), 2,36 - 2,45 (1H, m), 3,37 (1H, dd), 3,51 - 3,58 (1H, m), 4,14 (1H, s a), 4,33 - 4,50 (3H, m), 4,94 - 5,17 (2H, m), 7,25 - 7,32 (10H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 412.

[0421] Intermedio 6: 1-terc-butil 4-(benciloxi)-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo

[0422] Se disolvieron1-terc-butil 4-(benciloxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo(Intermedio 5,2,75 g, 6,68 mmol) y bromuro de crotilo (1,03 ml, 10,0 mmol) en THF (45 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. La solución se trató con la adición gota a gota de una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 20,1 ml, 10,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron al vacío. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto en forma de una mezcla de rotámeros y olefinasE/Z(Intermedio 6, 2,54

g, 82 % de rendimiento).<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,20 - 1,41 (9H, s x2) rotámeros, 1,54 - 1,62 (3H, m), 2,10 - 2,59 (3H, m), 2,67 - 2,97 (1H, m), 3,10 - 3,43 (1H, m), 3,50 - 3,78 (1H, m), 3,98 - 4,15 (1H, m), 4,34 - 4,49 (2H, m), 4,94 - 5,13 (2H, m), 5,18 - 5,30 (1H, m), 5,38 - 5,63 (1H, m), 7,25 - 7,36 (10H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 466.

[0424] Intermedio 8: ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0426] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (0,366 g, 0,550 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (0,419 g, 1,09 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (31 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,74 ml, 12,0 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió1-terc-butil4-(benciloxi)-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo(Intermedio 6,2,54 g, 5,46 mmol) en forma de una solución en DCM (21 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se inactivó con agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-(benciloxi)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo(Intermedio 7,2,0 g, 61 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros. El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 23 °C, fase móvil = MeOH al 0-15 %:CO2, detección UV a 220 nm, carga = 33 mg/iny., conc. = 220 ng/ml en MeOH, caudal = 75 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica para el isómero principal se asignó como el producto de adiciónantiy el isómero secundario se asignó como el producto de adiciónsyn. El isómero secundario (368 mg, 0,620 mmol) se disolvió en acetato de etilo (6,2 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 132 mg, 0,124 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 8,228 mg, 98 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,57 - 0,74 (2H, m), 1,17 (12 H, s), 1,24 - 1,47 (13H, m), 1,59 -1,78 (1H, m), 1,78 - 1,96 (1H, m), 2,01 - 2,20 (2H, m), 2,84 - 3,09 (1H, m), 3,58 - 3,73 (1H, m), 4,14 - 4,31 (1H, m), 4,98 - 5,09 (1H, m), 12,20 - 12,60 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 414.

[0428] Ejemplo 2: ácido (2R,4S5)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico

[0430] Se añadió ácido trifluoroacético (0,65 ml, 8,4 mmol) a una solución de ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 8,175 mg, 0,423 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (3 ml) y HCl ac. 1 M (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (103 mg, 0,847 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % al 100 % en agua) para obtener ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 2, 33mg, 33 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (400 MHz, D<2>O) δ 0,67 - 0,78 (2H, m), 1,08 - 1,41 (4H, m), 1,81 - 2,12 (3H, m), 2,51 (1H, dd), 3,22 - 3,37 (2H, m), 4,46 - 4,56 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 232.

[0432] Ejemplo 3: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico

[0433]

[0436] Intermedio 9: 1-terc-butil 4-(benciloxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo

[0437] Se disolvió ácido (2S,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (5,00 g, 21,6 mmol) en DMF (73 ml) y la solución se enfrió a 0 °C. Se añadió en porciones hidruro de sodio (60 % en peso en aceite mineral, 1,81 g, 45,4 mmol) y la suspensión se agitó a 0 °C durante 1 h. Se añadió bromuro de bencilo (12,86 ml, 108,1 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche mientras se calentaba lentamente a TA. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo (250 ml) y se lavó secuencialmente con ácido cítrico (ac. al 10 %) y agua. Los productos orgánicos se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 9,5,9 g, 66 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,27 - 1,39 (9H, s x2) rotámeros, 1,95 - 2,08 (1H, m), 2,34 - 2,47 (1H, m), 3,41 - 3,53 (2H, m), 4,17 (1H, s a), 4,28 (1H, c), 4,43 - 4,55 (2H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 7,25 - 7,41 (10H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 412.

[0438] Intermedio 10: 1-terc-butil 4-(benciloxi)-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo

[0439] Se disolvieron 1-terc-butil 4-(benciloxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo(Intermedio 9,2,75 g, 6,68 mmol) y bromuro de crotilo (1,03 ml, 10,0 mmol) en THF (45 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. La solución se trató con la adición gota a gota de una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 20,1 ml, 10,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron al vacío. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 10,1,23 g, 40 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros y olefinasE/Z.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,25 - 1,34 (9H, s x2) rotámeros, 1,45 - 1,63 (3H, m), 2,12 - 2,64 (2H, m), 2,64 - 3,04 (1H, m), 3,06 - 3,19 (1H, m), 3,31 - 3,45 (1H, m), 3,46 - 3,81 (1H, m), 4,03 - 4,21 (1H, m), 4,30 - 4,55 (2H, m), 4,90 - 5,16 (2H, m), 5,16 - 5,34 (1H, m), 5,38 - 5,68 (1H, m), 7,25 - 7,41 (10H, m). m/z (ES<+>) [M+H]+ = 466.

[0440] Intermedio 12: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0441] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (177 mg, 0,264 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (203 mg, 0,527 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (15 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,84 ml, 5,8 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió 1-terc-butil 4-(benciloxi)-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo(Intermedio 10, 1,23g, 2,64 mmol) en forma de una solución en DCM (10 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se inactivó con agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-(benciloxi)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo(Intermedio 11,950 mg, 60 % de rendimiento). El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 23 °C, fase móvil = MeOH al 0-15 %:CO2, detección UV a 220 nm, carga = 33 mg/iny., conc. = 220 ng/ml en MeOH, caudal = 75 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica para el isómero principal se asignó como el producto de adiciónantiy el isómero secundario se asignó como el producto de adiciónsyn. El isómero principal (385 mg, 0,649 mmol) se disolvió en acetato de etilo (6,4 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 138 mg, 0,130 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto(Intermedio 12,249 mg, 93 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,61 - 0,73 (2H, m), 0,97 - 1,11 (1H, m), 1,12 - 1,23 (12H, m), 1,25 - 1,44 (12H, m), 1,51 - 1,71 (1H, m), 1,84 - 2,04 (2H, m), 2,05 - 2,19 (2H, m), 3,12 - 3,29 (1H, m), 3,37 - 3,59 (1H, m), 4,09 - 4,23 (<1>H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 414.

[0442] Ejemplo 3:ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico

[0443] Se añadió ácido trifluoroacético (0,65 ml, 8,5 mmol) a una solución de ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 12,197 mg, 0,179 mmol) en DCM (3 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (3 ml) y HCl ac. 1 M (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (102 mg, 0,837 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % en agua) para proporcionar ácido(2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidin-2-carboxílico (Ejemplo 3, 25mg, 25 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (300 MHz, D<2>O) δ 0,68 - 0,78 (2H, m), 1,13 - 1,43 (4H, m), 1,64 - 1,79 (1H, m), 1,94 - 2,14 (2H, m), 2,47 (1H, d), 3,39 (2H, m), 4,46 - 4,53 (1H, m). m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 232.

[0444] Ejemplo 4: ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0447]

[0450] Intermedio 13: 1-terc-butil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo

[0451] Se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (0,71 ml, 9,2 mmol) a una solución de 1-(terc-butil) (2S,4R)-4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (2,45 g, 7,26 mmol) y trietilamina (1,27 ml, 9,15 mmol) en DCM (9,6 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 h antes del calentamiento a temperatura ambiente con agitación durante 1 h más. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar 1-(terc-butil) (2S,4R)-4((metilsulfonil)oxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (2,9 g, 95 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional. m/z (ES<+>) [M+H]+ = 400. Se añadió azida de sodio (1,65 g, 25,4 mmol) a una solución de 1-(terc-butil) (2S,4R)-4-((metilsulfonil)oxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (2,90 g, 7,26 mmol) en DMF (7,2 ml). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. El residuo resultante se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 13,2,00 g, 80 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,27 y 1,40 (9H, s x2) rotámeros, 1,96 - 2,02 (1H, m), 2,53 - 2,63 (1H, m), 3,24 - 3,29 (1H, m), 3,58 - 3,66 (1H, m), 4,32 - 4,41 (2H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 7,33-7,39 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 347.

[0452] Intermedio 14: 1-terc-butil 4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo

[0453] Se disolvieron 1-terc-butil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo(Intermedio 13,1,00 g, 2,89 mmol) y bromuro de crotilo (0,44 ml, 4,3 mmol) en THF (20 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. La solución se trató con la adición gota a gota de una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 8,66 ml, 4,33 mmol). La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron al vacío. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 14,750 mg, 65 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros y olefinasE/Z.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,25 - 1,34 (9H, s x2) rotámeros, 1,55 - 1,64 (3H, m), 1,99 - 2,15 (1H, m), 2,33 - 2,62 (2H, m), 2,73 - 3,10 (1H, m), 3,26 - 3,39 (1H, m), 3,52 - 3,84 (1H, m), 4,24 - 4,33 (1H, m), 5,03 - 5,21 (2H, m), 5,28 - 5,35 (1H, m), 5,49 - 5,65 (1H, m), 7,31 - 7,36 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 401.

[0454] Intermedio 16: 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo e Intermedio 17: 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-bencilo

[0455] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (126 mg, 0,188 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (144 mg, 0,375 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (10 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,60 ml, 4,1 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió1-terc-butil4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo(Intermedio 14,750 mg, 1,87 mmol) en forma de una solución en DCM (8 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se inactivó con agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-bencilo(Intermedio 15, 678mg, 68 % de rendimiento). El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 23 °C, fase móvil = MeOH al 0-15 %:CO2, detección UV a 220 nm, carga = 33 mg/iny., conc. = 220 ng/ml en MeOH, caudal = 75 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica para el isómero principal se asignó como el producto de adiciónantiIntermedio 16

y el isómero secundario el producto de adiciónsynIntermedio 17.

[0456] Intermedio 16(Isómero 1, 608 mg): 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,64 - 0,72 (2H, m), 1,04 - 1,12 (1H, m), 1,13 - 1,20 (12H, m), 1,22 - 1,39 (12H, m), 1,69 - 1,80 (1H, m), 2,01 - 2,23 (2H, m), 2,36 - 2,48 (1H, m), 3,35 - 3,42 (1H, m), 3,58 - 3,69 (1H, m), 4,33 (1H, quin), 5,05 - 5,17 (2H, m), 7,31 - 7,40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 529.

[0457] Intermedio 17(Isómero 2, 220 mg): 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-bencilo.

[0458] Intermedio 18: ácido (2S,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0459] Se disolvió1-terc-butil4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-bencilo(Intermedio 16,255 mg, 0,483 mmol) en acetato de etilo (5 ml) y metanol (5 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 128 mg, 0,120 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto(Intermedio 18, 190mg, 95 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,66 (2H, t), 0,88-1,03 (1H, m), 1,16 (12H, s), 1,24-1,38 (13H, m), 1,40 - 1,56 (1H, m), 1,80 - 1,91 (1H, m), 2,00-2,15 (2H, m), 3,17-3,28 (1H, m), 3,58 - 3,61 (1H, m), 3,80 (1H, dd), 9,01 (2H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 413.

[0460] Ejemplo 4: ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0461] Se añadió ácido trifluoroacético (0,71 ml, 9,2 mmol) a una solución de ácido (2S,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 18,190 mg, 0,461 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (3 ml) y HCl ac. 1 M (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (112 mg, 0,919 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % en agua) para proporcionar ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 4, 40mg, 37 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (300 MHz, D<2>O) δ 0,73 (2H, t), 1,10 -1,42 (4H, m), 1,69 (1H, ddd), 1,86 - 1,99 (1H, m), 2,10 - 2,30 (2H, m), 3,05 (1H, dd), 3,44 (1H, dd), 3,69 (1H, quin); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 231.

[0463] Ejemplo 5: ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0466]

[0469] Intermedio 19: ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0471] Se disolvió 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-bencilo(Intermedio 17,220 mg, 0,416 mmol) en acetato de etilo (5 ml) y metanol (5 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 111 mg, 0,104 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto(Intermedio 19, 150mg, 87 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,64-0,71 (2H, m), 1,17 (12H, s), 1,31-1,40 (15H, m), 1,49 - 1,93 (3H, m), 2,02 - 2,26 (3H, m), 3,38-3,47 (1H, m), 3,72 - 3,81 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 413.

[0473] Ejemplo 5: ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0475] Se añadió ácido trifluoroacético (0,56 ml, 7,3 mmol) a una solución de ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 19,150 mg, 0,364 mmol) en DCM (3 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (99 mg, 0,81 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 %-del 0 al 100 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 5, 33 mg, 39 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (400 MHz, D<2>O) δ 0,72 (1H, m), 1,11 - 1,39 (3H, m), 1,46 - 1,55 (1H, m), 1,63 - 1,79 (2H, m), 1,95 - 2,05 (1H, m), 2,58 - 2,65 (1H, m), 2,87 - 2,95 (1H, m), 3,48 - 3,58 (3H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 231.

[0477] Ejemplo 6: ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0478]

[0481] Intermedio 20: 2-metil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butilo

[0482] Se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (2,86 ml, 36,7 mmol) a una solución de 2-metil 4-hidroxipirrolidin-1,2-dicarboxilato de(2S,4S)-1-terc-butilo(7,50 g, 30,6 mmol) y trietilamina (5,11 ml, 36,7 mmol) en DCM (38 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 h antes del calentamiento a temperatura ambiente con agitación durante 1 h más. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar 2-metil (2S,4S)-4-((metilsulfonil)oxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butilo) (9,9 g, 100 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional. m/z (ES<+>) [M+NH<4>]<+>= 341.

[0483] Se añadió azida de sodio (5,96 g, 91,7 mmol) a una solución de 2-metil (2S,4S)-4-((metilsulfonil)oxi)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butilo) (9,89 g, 30,6 mmol) en DMF (30 ml). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. El residuo resultante se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 20,5,95 g, 72 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,33 y 1,40 (9H, s x2) rotámeros, 2,08 - 2,22 (1H, m), 2,26- 2,41 (1H, m), 3,41 (1H, dt), 3,48 - 3,61 (1H, m), 3,65 y 3,68 (3H, s x2) rotámeros, 4,22 (1H, dd), 4,30 - 4,43 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 271.

[0484] Intermedio 21: 1-terc-butil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo

[0485] Una solución de hidróxido de sodio (5,28 g, 132 mmol) en agua (22 ml) se añadió gota a gota a una solución de 2-metil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butilo(Intermedio 20,5,95 g, 22,0 mmol) en THF (44 ml) y MeOH (22 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante una noche mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron al vacío y la capa acuosa se acidificó a pH ~3 con HCl 5 M y se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad para proporcionar ácido (2S,4R)-4-azido-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxílico (5,64 g, 100 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,35 y 1,40 (9H, s x2) rotámeros, 2,07 - 2,18 (1H, m), 2,26- 2,38 (1H, m), 3,34 - 3,44 (1H, m), 3,48 - 3,63 (1H, m), 4,09-4,17 (1H, m), 4,30 - 4,37 (1H, m); m/z (ES) [M+HCOO]<->= 301.

[0486] Se añadió gota a gota bromuro de bencilo (2,83 ml, 23,8 mmol) a una solución de ácido (2S,4R)-4-azido-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxílico (5,19 g, 19,9 mmol) y trietilamina (3,46 ml, 24,8 mmol) en DMF (60 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo resultante se disolvió en EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 21, 5,09g, 74 % de rendimiento).<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,26 y 1,39 (9H, s x2) rotámeros, 2,11 - 2,23 (1H, m), 2,31 - 2,43 (1H, m), 3,43 (1H, ddd), 3,50 - 3,59 (1H, m), 4,25 - 4,40 (2H, m), 5,07 - 5,22 (2H, m), 7,31 - 7,40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 347.

[0487] Intermedio 22: 1-terc-butil 4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo

[0488] Se disolvieron 1-terc-butil 4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo(Intermedio 21,5,09 g, 14,7 mmol) y bromuro de crotilo (2,27 ml, 22,0 mmol) en THF (100 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. La solución se trató con la adición gota a gota de una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 44,1 ml, 22,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron al vacío. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 22,4,6 g, 78 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros y olefinasE/Z.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,26 - 1,43 (9H, m), 1,59 - 1,66 (3H, m), 2,07 - 2,17 (1H, m), 2,32 - 2,48 (2H, m), 2,57 - 3,12 (2H, m), 3,35 - 3,82 (1H, m), 4,20 - 4,38 (1H, m), 5,02 - 5,22 (2H, m), 5,24 - 5,41 (1H, m), 5,46 - 5,68 (1H, m), 7,28 - 7,42 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 401.

[0489] Intermedio 24: 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo e Intermedio 25: 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0490] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (772 mg, 1,15 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (883 mg, 2,30 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (66 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (3,67 ml, 25,3 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió 1-terc-butil 4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo(Intermedio 22,4,60 g, 11,5 mmol) en forma de una solución en DCM (44 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se inactivó con agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-bencilo(Intermedio 23,2,7 g, 44 % de rendimiento). El material purificado se sometió a SFC quiral (columna Chiralpak IG, 21,2 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 23 °C, fase móvil = MeOH al 0-7 % (con NH<4>OH al 0,2 %):CO<2>, detección UV a 220 nm, carga = 16,8 mg/iny., conc. = 112,5 ng/ml en MeOH, caudal = 70 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica para el diastereómero principalIntermedio 25se asignó como el producto de adiciónantiy el diastereómero secundarioIntermedio 24el producto de adiciónsyn.

[0491] Intermedio 24(436 mg): 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,58 - 0,70 (2H, m), 1,17 (12H, s), 1,25 -1,40 (13 H, m), 1,74-1,83 (1H, s), 2,00 - 2,11 (2H, m), 2,38-2,47 (1H, m), 3,07 - 3,16 (1H, m), 3,81 (1H, m), 4,29 - 4,34 (1H, m), 5,04 - 5,17 (2H, m), 7,34 - 7,39 (m, 5H); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 529.

[0492] Intermedio 25(1,60 g): 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,56 - 0,73 (2H, m), 0,98 - 1,13 (1H, m), 1,17 (12H, s), 1,26 - 1,37 (13H, m), 1,66 - 1,79 (1H, m), 2,01 - 2,22 (2H, m), 2,34 - 2,47 (1H, m), 3,60 (1H, dd a), 4,29 - 4,35 (1H, m), 5,04 - 5,18 (2H, m), 7,31 - 7,40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+= 529.

[0493] Intermedio 26: ácido (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0494] Se disolvió 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-bencilo(Intermedio 24,236 mg, 0,447 mmol) en acetato de etilo (4,5 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 119 mg, 0,112 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto(Intermedio 26,275 mg, 100 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,64 - 0,71 (2H, M), 1,17 (12H, s), 1,27 -1,40 (15H, m), 1,57 - 1,82 (4H, m), 1,98-2,08 (3H, m), 3,70 - 3,78 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 413.

[0495] Ejemplo 6: ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0496] Se añadió ácido trifluoroacético (0,69 ml, 8,9 mmol) a una solución de ácido (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 26,184 mg, 0,446 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (109 mg, 0,894 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 100 % en agua) para proporcionar ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 6, 38mg, 37 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (400 MHz, D<2>O) δ 0,72 (2H, td), 1,09 -1,19 (1H, m), 1,22 - 1,39 (3H, m), 1,65 - 1,76 (2H, m), 1,95 - 2,04 (1H, m), 2,58 - 2,64 (1H, m), 2,87 - 2,94 (1H, m), 3,48 - 3,57 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 231.

[0497] Ejemplo 7: ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0500]

[0503] Intermedio 27: ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0504] Se disolvió1-terc-butil4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 25,688 mg, 1,30 mmol) en acetato de etilo (13 ml) y metanol (4 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 346 mg, 0,325 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto(Intermedio 27,500 mg, 93 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,67 (2H, t), 0,94-1,00 (1H, m), 1,17 (12H, s), 1,22 -1,38 (11H, m), 1,43 - 1,53 (1H, m), 1,85 (1H, d), 2,00 - 2,15 (2H, m), 3,23 (2H, dd), 3,58 - 3,61 (1H, m), 3,80 - 3,88 (1H, m), 8,96 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 413.

[0505] Ejemplo 7: ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0506] Se añadió ácido trifluoroacético (1,02 ml, 13,3 mmol) a una solución de ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 27, 275mg, 0,667 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (163 mg, 1,34 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % al 100 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 7, 53 mg, 34 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (400 MHz, D<2>O) δ 0,76 (2H, dt), 1,10 - 1,46 (4H, m), 1,62 - 1,71 (1H, m), 1,84 - 1,96 (1H, m), 2,10 - 2,21 (1H, m), 2,22 - 2,32 (1H, m), 3,07 (1H, dd), 3,46 (1H, dd), 3,71 (1H, quin); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 231.

[0507] Ejemplo 8: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0510]

[0513] Intermedio 28: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0514] Se añadieron secuencialmente trietilamina (0,18 ml, 1,3 mmol) y HATU (213 mg, 0,560 mmol) a una solución de Boc-Ala-OH (106 mg, 0,560 mmol) en DMF (2,4 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A la mezcla de reacción se le añadió ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 27,210 mg, 0,509 mmol) en forma de una solución en DMF (2,4 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción en bruto se concentró y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto(Intermedio 28, 236mg, 79 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,65-0,72 (2H, m), 1,11 - 1,18 (18H, m), 1,26-1,37 (20H, m), 1,63 - 1,73 (1H, m), 2,02 - 2,25 (2H, m), 3,09 - 3,20 (1H, m), 3,59 - 3,72 (1H, m), 3,83 - 3,94 (1H, m), 4,18 - 4,29 (1H, m), 6,80 (1H, s a), 7,96 (1H, s), 13,78 (1H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 584.

[0515] Ejemplo 8: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0516] Se añadió ácido trifluoroacético (0,62 ml, 8,1 mmol) a una solución de ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 28,236 mg, 0,404 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (99 mg, 0,81 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 8,18 mg, 15 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,69 (2H, dt), 1,05 - 1,14 (1H, m), 1,21 (3H, d), 1,23-1,35 (3H, m), 1,65 (1H, dt), 1,91-1,96 (1H, m), 2,17 (1H, dd), 2,35 (1H, dd), 3,26 (1H, dd), 3,46 - 3,57 (2H, m), 4,29 - 4,34 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 302.

[0517] Ejemplo 9: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0520]

[0523] Intermedio 29: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0524] Se añadieron secuencialmente trietilamina (0,21 ml, 1,5 mmol) y HATU (254 mg, 0,668 mmol) a una solución de Boc-Val-OH (145 mg, 0,668 mmol) en DMF (2,9 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A la mezcla de reacción se le añadió ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 27, 250mg, 0,606 mmol) en forma de una solución en DMF (2,9 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción en bruto se concentró y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar el producto (Intermedio 29, 250mg, 67 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,64 - 0,73 (2H, m), 0,73 - 0,85 (6H, m), 1,13 - 1,14 (1H, m), 1,17 (12H, s), 1,22 - 1,42 (22H, m), 1,56 - 1,75 (1H, m), 1,79 - 1,97 (1H, m), 2,00 - 2,26 (2H, m), 3,08 - 3,24 (1H, m), 3,54 - 3,77 (2H, m), 4,12 - 4,36 (1H, m), 6,58 (1H, t), 7,96 - 8,03 (2H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 584.

[0525] Ejemplo 9: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0526] Se añadió ácido trifluoroacético (0,63 ml, 8,2 mmol) a una solución de ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 29,250 mg, 0,409 mmol) en DCM (4 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (99 mg, 0,81 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco 2 M/metanol. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 10 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 9, 28mg, 20 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (300 MHz, D<2>O) δ 0,66 - 0,76 (2H, m), 0,85 (6H, dd), 1,07 - 1,43 (4H, m), 1,55 - 1,68 (1H, m), 1,77 - 1,97 (2H, m), 2,13 - 2,33 (2H, m), 3,07 (1H, d), 3,08 - 3,16 (1H, m), 3,37 - 3,48 (1H, m), 4,27 - 4,40 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 330.

[0527] Ejemplo 10: ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0530]

[0533] Intermedio 30: 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0534] Se añadió catalizador Lindlar (5 % en peso, 0,275 g, 2,58 mmol) a una solución de 1-terc-butil 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 25,1,56 g, 2,95 mmol) en THF (25 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (globo, el matraz se evacuó y se cargó de nuevo 3 veces con hidrógeno) a temperatura ambiente durante 8,5 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (MeOH del 1 al 15 % en DCM) para proporcionar 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,1,01 g, 68 % de rendimiento) en forma de una goma y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,74 (2H, c), 1,20 - 1,22 (14H, m), 1,23 - 1,29 (2H, m), 1,32 (6H, s), 1,37 - 1,42 (5H, m), 1,74 - 1,83 (1H, m), 1,83 - 1,93 (1H, m), 2,11 - 2,19 (0,6H, m), 2,21 - 2,32 (1,4H, m), 3,19 (0,4H, dd), 3,28 (0,6H, dd), 3,44 - 3,51 (1H, m), 3,63 (1H, dd), 5,07 - 5,20 (2H, m), 7,28 - 7,34 (1H, m), 7,34 - 7,41 (4H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 503.

[0535] Intermedio 31: 1-terc-butil 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2 dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0536] Se añadió lentamenteN,N-diisopropiletilamina (0,235 ml, 1,34 mmol) a una solución agitada de HATU (245 mg, 0,64 mmol) y Boc-D-Val-OH (117 mg, 0,54 mmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 20 min y a continuación se añadió una solución de1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30, 270mg, 0,54 mmol) en DMF (2 ml). La reacción se agitó durante 2,5 h, se diluyó con DCM (30 ml) y se lavó secuencialmente con agua (3 x 25 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 5 al 65 % en hexanos) para proporcionar 1-terc-butil 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 31,239 mg, 63 % de rendimiento) en forma de una espuma incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,74 - 0,81 (2H, m), 0,84 (3H, d), 0,87 - 0,94 (3H, m), 1,24 (12H, s), 1,26 - 1,34 (2H, m), 1,37 (5H, s), 1,40 - 1,43 (2H, m), 1,45 (4H, s), 1,46 (9H, s), 1,78 - 1,89 (1H, m), 1,95 - 2,07 (2H, m), 2,21 - 2,29 (0,6H, m), 2,31 - 2,46 (1,4H, m), 3,51 - 3,60 (1,5H, m), 3,65 (0,5H, d a), 3,72 (1H, dd a), 4,49 - 4,58 (1H, m), 5,01 (1H, d a), 5,19 - 5,29 (2H, m), 6,93 - 7,09 (1H, m), 7,36 - 7,40 (1H, m), 7,43 (4H, d ap.); m/z (ES<+>) [M+H]+= 702.

[0537] Intermedio 32: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0538] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 25 mg, 0,23 mmol) a una solución de1-terc-butil 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 31,239 mg, 0,34 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (globo, el matraz se evacuó y se cargó de nuevo 3 veces con hidrógeno) a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (MeOH del 2 al 15 % en DCM) para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 32,196 mg, 94 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,63 - 0,71 (2H, m), 0,75 - 0,82 (6H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,30 (2H, m), 1,32 (6H, s), 1,36 (13H, s a), 1,61 - 1,72 (1H, m), 1,81 - 1,90 (1H, m), 1,92 - 2,05 (2H, m), 2,05 - 2,13 (0,6H, m), 2,13 - 2,28 (1,4H, m), 3,03 - 3,14 (1H, m), 3,62 (0,6H, t), 3,66 (1,4H, t), 4,18 - 4,29 (1H, m), 6,59 (1H, d), 7,99 (1H, s a), 12,48 (0,4H, s a), 12,65 (0,6H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 612.

[0539] Ejemplo 10: ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0541] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,37 ml, 4,8 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 32,195 mg, 0,32 mmol) en DCM (2 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 22 h y a continuación se concentró a presión reducida. El aminoácido en bruto se disolvió en HCl ac. 1 M (2 ml) y Et<2>O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (117 mg, 0,96 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 80 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 10,46 mg, 44 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,73 - 0,80 (2H, m), 0,90 (6H, t ap.), 1,13 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,35 (1H, m), 1,40 (2H, quin), 1,68 - 1,80 (1H, m), 1,85 - 1,96 (1H, m), 2,00 (1H, td), 2,29 (1H, dd), 2,37 - 2,45 (1H, m), 3,18 (1H, d), 3,28 (1H, dd), 3,59 (1H, dd), 4,36 - 4,49 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 330.

[0543] Ejemplo 11: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0546]

[0549] Intermedio 33: 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0551] Se añadió lentamenteN,N-diisopropiletilamina (0,165 ml, 0,95 mmol) a una solución agitada de HATU (158 mg, 0,42 mmol) y Boc-Tle-OH (92 mg, 0,40 mmol) en DMF (1,5 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 15 min y a continuación se añadió una solución de 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,190 mg, 0,38 mmol) en DMF (1,5 ml). La reacción se agitó durante 3 h, se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó secuencialmente con agua (3 x 25 ml), NaHCO<3>acuoso saturado (30 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 5 al 65 % en hexanos) para proporcionar 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 33,261 mg, 96 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,69 (2H, c), 0,87 (9H, s), 1,17 (12H, s), 1,26 (5H, s), 1,29 - 1,32 (1H, m), 1,34 (5H, s), 1,38 (9H, s), 1,72 - 1,85 (1H, m), 1,90 - 2,08 (2H, m), 2,06 - 2,18 (1H, m), 2,22 - 2,35 (2H, m), 3,11 - 3,22 (1H, m), 3,68 - 3,81 (2H, m), 4,23 - 4,37 (1H, m), 5,06 - 5,19 (2H, m), 6,40 (1H, t), 7,31 - 7,40 (5H, m), 8,11 (1H, d); m/z (ES<+>) [M+Na]<+>= 738.

[0552] Intermedio 34: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0554] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 25 mg, 0,23 mmol) a una solución de 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 33,260 mg, 0,36 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (globo, el matraz se evacuó y se cargó de nuevo 3 veces con hidrógeno) a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (MeOH del 2 al 10 % en DCM) para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 34,207 mg, 91 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,63 - 0,72 (2H, m), 0,86 (9H, s), 1,09 - 1,20 (14H, m), 1,21 - 1,30 (2H, m), 1,33 (5H, s), 1,35 - 1,38 (13H, m), 1,61 - 1,73 (1H, m), 1,89 - 2,11 (2H, m), 2,14 - 2,27 (1H, m), 3,06 - 3,14 (1H, m), 3,59 - 3,72 (1H, m), 3,72 - 3,80 (1H, m), 4,20 - 4,30 (1H, m), 6,35 (1H, d), 8,08 (1H, s a), 12,47 (0,4H, s a), 12,63 (0,6H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 626.

[0556] Ejemplo 11: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0558] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,38 ml, 4,9 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 34,206 mg, 0,33 mmol) en DCM (2 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 h y a continuación se concentró a presión reducida. El aminoácido en bruto se disolvió en HCl ac. 1 M (4 ml) y Et<2>O (4 ml). Se añadió ácido fenilborónico (120 mg, 0,99 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 2 al 50 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 11, 40mg, 35 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,72 (2H, td), 0,89 (9H, s), 1,10 - 1,21 (1H, m), 1,22 - 1,30 (1H, m), 1,35 (2H, quin), 1,64 - 1,75 (1H, m), 1,90 - 2,02 (1H, m), 2,22 - 2,34 (2H, m), 3,04 (1H, s), 3,22 (1H, dd), 3,56 (1H, dd), 4,41 (1H, quin); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 344.

[0560] Ejemplo 12: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidin-2-carboxamido)pirrolidin-2-carboxílico

[0563]

[0566] Intermedio 35: 1-terc-butil 4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0568] Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,182 ml, 1,04 mmol) a una solución agitada de HATU (175 mg, 0,46 mmol) y Boc-Pro-OH (94 mg, 0,44 mmol) en DMF (1,5 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 20 min y a continuación se añadió una solución de1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30,210 mg, 0,42 mmol) en DMF (1,5 ml). La reacción se agitó durante 2 h, se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó secuencialmente con agua (3 x 25 ml), NaHCO<3>acuoso saturado y cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 5 al 100 % en hexanos) para proporcionar1-terc-butil 4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio35, 249 mg, 85 % de rendimiento) en forma de una película incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,68 - 0,79 (2H, m), 1,20 (12H, s), 1,31 (5H, s), 1,36 - 1,48 (16H, m), 1,74 - 1,87 (3H, m), 1,89 - 2,10 (3H, m), 2,13 -2,46 (2H, m), 3,27 - 3,40 (1H, m), 3,44 (2H, s a), 3,50 - 3,64 (2H, m), 3,78 - 4,05 (1H, m), 4,49 (1H, s a), 5,10 - 5,27 (2H, m), 7,10 (1H, s a), 7,30 - 7,42 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+= 700.

[0569] Intermedio 36: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0570] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 25 mg, 0,23 mmol) a una solución de1-terc-butil 4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 35,249 mg, 0,36 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (globo, el matraz se evacuó y se cargó de nuevo 3 veces con hidrógeno) a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 36,207 mg, 87 % de rendimiento) en forma de una película incolora y en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,66 - 0,83 (2H, m), 1,21 (12H, s), 1,34 - 1,51 (21H, m), 1,63 -1,97 (4H, m), 2,06 (1H, m), 2,11 - 2,29 (2H, m), 2,33 - 2,67 (1H, m), 3,24 - 3,52 (3H, m), 3,53 - 3,67 (1H, m), 4,15 -4,34 (1H, m), 4,47 - 4,74 (1H, m), 6,76 - 7,23 (1H, m), 7,17 - 7,69 (1H, m), 9,74 (1H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 610. Ejemplo 12: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidin-2-carboxamido)pirrolidin-2-carboxílico

[0571] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,518 ml, 6,73 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio36, 205 mg, 0,34 mmol) en DCM (2 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y a continuación se concentró a presión reducida. El aminoácido en bruto se disolvió en HCl ac.

[0572] 1 M (4 ml) y Et<2>O (4 ml). Se añadió ácido fenilborónico (123 mg, 1,01 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 50 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidin-2-carboxamido)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 12, 89mg, 81 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,70 - 0,79 (2H, m), 1,11 - 1,23 (1H, m), 1,24 - 1,33 (1H, m), 1,34 - 1,42 (2H, m), 1,60 - 1,71 (1H, m), 1,81 - 1,91 (3H, m), 1,91 - 1,99 (1H, m), 2,18 (1H, dd), 2,22 - 2,29 (1H, m), 2,40 (1H, dd), 3,08 - 3,16 (1H, m), 3,16 - 3,22 (1H, m), 3,25 (1H, dd), 3,48 (1H, dd), 3,99 (1H, dd), 4,29 - 4,38 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 328.

[0573] Ejemplo 13: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0576]

[0579] Intermedio 37: 1-terc-butil 4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0580] Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,182 ml, 1,04 mmol) a una solución agitada de HATU (175 mg, 0,46 mmol) y Boc-Gly-OH (77 mg, 0,44 mmol) en DMF (1,5 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó durante 20 min y a continuación se añadió una solución de 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30,210 mg, 0,42 mmol) en DMF (1,5 ml). La solución de reacción se agitó durante 2 h, se diluyó con EtOAc (30 ml) y se lavó secuencialmente con agua (3 x 25 ml), NaHCO<3>acuoso saturado y cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 10 al 100 % en hexanos) para proporcionar 1-terc-butil 4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 37,235 mg, 85 % de rendimiento) en forma de una película incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,70 - 0,78 (2H, m), 1,12 - 1,18 (1H, m), 1,20 (12H, s), 1,25 - 1,30 (1H, m), 1,33 (5H, s), 1,43 (15H, s), 1,74 - 1,86 (1H, m), 1,95 (0,5H, d a), 2,03 (0,5H, d a), 2,15 - 2,26 (1H, m), 2,26 - 2,37 (1H, m), 2,40 (1H, dd), 3,43 - 3,57 (3H, m), 3,57 - 3,64 (1H, m), 4,50 (1H, s a), 5,03 (0,5H, s a), 5,10 (0,5H, s a), 5,13 - 5,25 (1H, m), 7,01 (1H, dd), 7,32 - 7,37 (1H, m), 7,36 - 7,41 (4H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 660.

[0582] Intermedio 38: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0584] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 25 mg, 0,23 mmol) a una solución de1-terc-butil 4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 37, 233mg, 0,35 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (globo, el matraz se evacuó y se cargó de nuevo 3 veces con hidrógeno) a temperatura ambiente durante 6 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 38,176 mg, 87 % de rendimiento) en forma de una película incolora y en forma de una mezcla de rotámeros que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,65 - 0,80 (2H, m), 1,11 - 1,18 (1H, m), 1,18 - 1,23 (12H, m), 1,25 - 1,32 (1H, m), 1,36 -1,45 (13H, m), 1,47 (7H, s), 1,70 - 1,83 (0,4H, m), 1,84 - 1,95 (0,6H, m), 2,06 - 2,27 (2H, m), 2,33 - 2,47 (0,4H, m), 2,63 (0,6H, d a), 3,44 - 3,62 (2H, m), 3,63 - 3,82 (2H, m), 4,28 (0,6H, s a), 4,36 - 4,60 (0,4H, m), 5,26 (0,6H, s a), 5,58 - 5,90 (0,3H, m), 6,83 (0,6H, s a), 6,97 - 7,44 (0,4H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 570.

[0586] Ejemplo 13: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0588] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,476 ml, 6,18 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 38,176 mg, 0,31 mmol) en DCM (2 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y a continuación se concentró a presión reducida. El aminoácido en bruto se disolvió en HCl ac. 1 M (4 ml) y Et<2>O (4 ml). Se añadió ácido fenilborónico (113 mg, 0,93 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 40 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 13,62 mg, 70 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,76 (2H, td), 1,15 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,34 (1H, m), 1,36 - 1,46 (2H, m), 1,69 - 1,79 (1H, m), 2,00 (1H, ddd), 2,27 (1H, dd), 2,44 (1H, dd), 3,33 (1H, dd), 3,42 (2H, s), 3,59 (1H, dd), 4,36 - 4,45 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 288.

[0590] Ejemplo 14: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminobutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0591]

[0594] Intermedio 39: 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0596] Se añadió HATU (804 mg, 2,11 mmol) a una solución de Boc-Abu-OH (430 mg, 2,11 mmol) en DMF (4 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la mezcla de reacción se le añadió 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,885 mg, 1,76 mmol) en forma de una solución en DMF (3 ml). Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,75 ml, 4,3 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A continuación, la reacción se diluyó con agua (15 ml) y Et<2>O (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con Et<2>O (2 x 10 ml). Los productos orgánicos combinados se lavaron con cloruro de litio acuoso al 5 % (10 ml), se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 39,766 mg, 63 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,70 - 0,84 (5H, m), 1,09 - 1,19 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,36 - 1,46 (18H, m), 1,46 - 1,97 (7H, m), 2,12 - 2,45 (2H, m), 3,45 - 3,60 (1H, m), 3,68 (1H, d a), 3,78 - 3,94 (1H, m), 4,42 - 4,64 (1H, m), 4,73 - 5,03 (1H, m), 5,07 - 5,33 (2H, m), 7,09 (1H, d a), 7,28 - 7,40 (5H, m). m/z (ES<+>) [M+H]+ = 688.

[0598] Intermedio 40: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0600] Se disolvió1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 39,766 mg, 1,11 mmol) en EtOAc (11 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 119 mg, 0,11 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con EtOAc y metanol. El filtrado se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 40,470 mg, 70 % de rendimiento) en forma de una espuma de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,67 - 0,82 (2H, m), 0,89 (3H, t a), 1,11 - 1,28 (14H, m), 1,37 - 1,51 (20H, m), 1,53 - 1,65 (1H, m), 1,65 - 1,94 (2H, m), 2,02 - 2,12 (1H, m), 2,13 - 2,31 (1H, m), 2,70 (1H, d a), 3,40 - 3,62 (2H, m), 3,88 - 4,04 (1H, m), 4,26 (1H, s a), 5,01 (1H, s a), 6,73 (1H, d a); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 598.

[0602] Ejemplo 14: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminobutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0604] Se añadió ácido fenilborónico (192 mg, 1,57 mmol) a una solución de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 40,470 mg, 0,79 mmol) en HCl ac. 2 M (5 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se diluyó con agua (10 ml) y Et<2>O (10 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O (3 x 5 ml) y a continuación se liofilizó para dar una espuma. La capa orgánica se concentró al vacío. El residuo resultante se diluyó en HCl 4 M en dioxano (4 ml, 16 mmol) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. La reacción se diluyó con agua (10 ml) y Et<2>O (10 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O (3 x 5 ml) y a continuación se liofilizó para dar una espuma. Las espumas de estas dos operaciones se combinaron y el aminoácido en bruto resultante se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna Silicycle SiliaSep SPE-R51230B-20X de 5 g). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 25 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminobutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 14,96 mg, 39 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,55 - 0,82 (2H, m), 0,88 (3H, t), 1,12 - 1,48 (4H, m), 1,56 - 1,81 (3H, m), 1,86 - 2,10 (1H, m), 2,12 - 2,53 (2H, m), 3,15 - 3,37 (1H, m), 3,41 - 3,53 (1H, m), 3,62 (1H, dd), 4,35 - 4,52 (1H, m); m/z (ES<+>) [M-H<2>O+H]<+>= 298.

[0605] Ejemplo 15: ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0608]

[0611] Intermedio 41: 1-terc-butil 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0612] Se añadió HATU (804 mg, 2,11 mmol) a una solución de Boc-Ile-OH (489 mg, 2,11 mmol) en DMF (4 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la mezcla de reacción se le añadió 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,885 mg, 1,76 mmol) en forma de una solución en DMF (3 ml). Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,75 ml, 4,3 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A continuación, la reacción se diluyó con agua (15 ml) y Et<2>O (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con Et<2>O (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de litio acuoso al 5 % (10 ml), se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar1-terc-butil 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 41,707 mg, 56 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,79 (2H, t a), 0,83 - 1,05 (8H, m), 1,12 - 1,21 (1H, m), 1,24 (12H, s), 1,32 - 1,61 (20H, m), 1,62 - 2,02 (4H, m), 2,18 - 2,55 (2H, m), 3,49 - 3,65 (1H, m), 3,65 - 3,78 (1H, m), 3,90 (1H, s a), 4,53 - 4,72 (1H, m), 4,95 (1H, s a), 5,07 - 5,43 (2H, m), 7,16 (1H, d a), 7,30 - 7,44 (5H, m). m/z (ES<+>) [M+H]+ = 716.

[0613] Intermedio 42: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0614] Se disolvió 1-terc-butil 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 41, 707mg, 0,99 mmol) en EtOAc (10 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 105 mg, 0,10 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con EtOAc y metanol. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 42,603 mg, 98 % de rendimiento) que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,68 - 0,80 (2H, m), 0,83 - 0,93 (6H, m), 1,05 - 1,14 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,28 - 1,36 (1H, m), 1,37 - 1,55 (22H, m), 1,71 - 1,96 (2H, m), 2,18 - 2,31 (1H, m), 2,72 (1H, d a), 3,42 - 3,51 (2H, m), 3,52 - 3,63 (1H, m), 3,86 - 4,04 (1H, m), 4,16 - 4,34 (1H, m), 4,98 (1H, d a), 6,69 (1H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 626.

[0615] Ejemplo 15: ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico Se añadió ácido trifluoroacético (1,10 ml, 14,3 mmol) a una solución de ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 42,603 mg, 0,96 mmol) en DCM (6 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y a continuación se concentró al vacío. El aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (10 ml) y se concentró de nuevo al vacío. Este proceso de redisolución y reconcentración se repitió dos veces más. A continuación, el aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (6 ml) y HCl ac. 1 M (6 ml). Se añadió ácido fenilborónico (235 mg, 1,93 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna Silicycle SiliaSep SPE-R51230B-20X de 5 g). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH. El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18Aq, acetonitrilo del 0 al 25 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 15, 136mg, 41 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,55 - 0,81 (2H, m), 0,89 (6H, dd), 1,07 - 1,52 (6H, m), 1,63 - 1,83 (2H, m), 1,86 - 2,09 (1H, m), 2,13 - 2,51 (2H, m), 3,11 - 3,40 (2H, m), 3,45 - 3,67 (1H, m), 4,39 - 4,54 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 344.

[0617] Ejemplo 16: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0620]

[0623] Intermedio 43: 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0625] Se añadió HATU (247 mg, 0,65 mmol) a una solución de Boc-Leu-OH (125 mg, 0,54 mmol) en DCM (2 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la mezcla de reacción se le añadió 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30,272 mg, 0,54 mmol) en forma de una solución en DCM (2 ml). Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,19 ml, 1,1 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A continuación, la reacción se diluyó con DCM (20 ml) y se lavó secuencialmente con agua (25 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 43,210 mg, 54 % de rendimiento) en forma de una espuma incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,77 (2H, t), 0,91 (6H, d), 1,06 - 1,19 (1H, m), 1,19 - 1,24 (12H, m), 1,31 - 1,51 (20H, m), 1,50 -1,63 (2H, m), 1,73 - 2,02 (2H, m), 2,17 - 2,55 (2H, m), 3,35 - 3,75 (2H, m), 3,84 - 4,06 (1H, m), 4,35 - 4,75 (2H, m), 5,00 - 5,46 (2H, m), 7,08 - 7,22 (1H, m), 7,28 - 7,42 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 716.

[0627] Producto intermedio 44: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0629] Se disolvió 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 43, 201mg, 0,28 mmol) en EtOAc (4 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 100 mg, 0,094 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se filtró a través de tierra de diatomeas y se aclaró con EtOAc y metanol. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio44, 170 mg, 97 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,78 (2H, t), 0,93 (6H, d), 1,15 - 1,25 (12H, m), 1,25 - 1,31 (2H, m), 1,39 - 1,51 (19H, m), 1,55 - 1,72 (2H, m), 1,73 - 1,89 (1H, m), 2,01 - 2,11 (1H, m), 2,18 - 2,36 (1H, m), 2,47 - 2,83 (1H, m), 3,37 - 3,74 (2H, m), 3,96 - 4,10 (1H, m), 4,17 - 4,32 (1H, m), 4,82 - 5,31 (1H, m), 6,62 - 7,12 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 626.

[0630] Ejemplo 16: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0631] Se añadió ácido trifluoroacético (1,00 ml, 13,0 mmol) a una solución de ácido(2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio44, 170 mg, 0,27 mmol) en DCM (2 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y a continuación se concentró al vacío. A continuación, el aminoácido en bruto se disolvió en Et<2>O (5 ml) y agua (4 ml). Se añadió ácido fenilborónico (66 mg, 0,54 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 ml) y Et<2>O (20 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 2 g) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 16, 88mg, 94 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,46 - 0,68 (2H, m), 0,73 - 0,82 (6H, m), 1,03 - 1,13 (1H, m), 1,13 - 1,23 (1H, m), 1,23 - 1,42 (4H, m), 1,42 - 1,52 (1H, m), 1,54 - 1,66 (1H, m), 1,76 - 1,93 (1H, m), 2,07 - 2,19 (1H, m), 2,29 (1H, dd), 3,13 (1H, c), 3,34 (1H, t), 3,48 (1H, c), 4,23 - 4,40 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 344.

[0632] Ejemplo 17: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-hidroxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0635]

[0638] Intermedio 45: 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0639] Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,108 ml, 0,62 mmol) a una solución agitada de COMU (292 mg, 0,68 mmol), 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30,311 mg, 0,62 mmol) y Boc-Ser-OH (133 mg, 0,65 mmol) en DMF (5 ml) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 3 h y se diluyó con agua (80 ml) y EtOAc (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se diluyó además con NaHCO<3>acuoso saturado y a continuación se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Los productos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado (2 x 10 ml), se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 45,358 mg, 84 % de rendimiento) en forma de una película seca incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,76 (2H, t), 1,16 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,31 (6H, s), 1,35 - 1,42 (5H, m), 1,43 (11H, s), 1,73 - 1,87 (1H, m), 1,87 - 2,02 (2H, m), 2,14 - 2,24 (1H, m), 2,29 - 2,41 (1H, m), 3,43 - 3,52 (0,4H, m), 3,52 - 3,61 (2H, m), 3,66 (0,6H, d), 3,79 - 3,92 (1H, m), 3,92 - 4,04 (1H, m), 4,51 (1H, s a), 5,06 - 5,26 (2H, m), 5,36 (1H, s a), 7,30 - 7,40 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 690.

[0640] Intermedio 46: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0641] Se disolvió 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 45, 358mg, 0,52 mmol) en EtOAc (4 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 50 mg, 0,047 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 3,5 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 46,303 mg, 97 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros, que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,67 - 0,91 (2H, m), 1,25 (14H, s), 1,41 - 1,47 (3H, m), 1,48 (9H, s), 1,53 (10H, s), 1,82 - 1,90 (2H, m), 2,06 - 2,14 (1H, m), 2,24 - 2,33 (1H, m), 2,76 - 2,91 (1H, m), 3,48 - 3,54 (1H, m), 3,59 (1H, dd), 3,70 (1H, dd), 3,93 (1H, d), 4,03 - 4,17 (1H, m), 4,29 (1H, d), 6,79 - 6,98 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 600.

[0643] Ejemplo 17: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-hidroxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0645] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,771 ml, 10,01 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico (Intermedio 46,300 mg, 0,50 mmol) en DCM (4 ml) a temperatura ambiente. Después de 1,5 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.1 M (4 ml, 4,00 mmol) y Et<2>O (4 ml). Se añadió ácido fenilborónico (183 mg, 1,50 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O, las capas se separaron y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se sometió a cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 30 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-hidroxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 17,94 mg, 59 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,77 (2H, td), 1,16 - 1,26 (1H, m), 1,26 - 1,35 (1H, m), 1,35 - 1,45 (2H, m), 1,76 (1H, ddd), 2,02 (1H, ddd), 2,29 (1H, dd), 2,46 (1H, dd), 3,35 (1H, dd), 3,48 (1H, t), 3,62 (1H, dd), 3,66 - 3,77 (2H, m), 4,40 - 4,50 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]+ = 318.

[0647] Ejemplo 18: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metoxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0650]

[0653] Intermedio 47: 1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo

[0655] Se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,082 ml, 0,47 mmol) a una solución agitada de COMU (220 mg, 0,51 mmol),1-terc-butil4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo (Intermedio 30,235 mg, 0,47 mmol) y N-Boc-O-metil-L-serina (108 mg, 0,49 mmol) en DMF (3 ml) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 2 h y a continuación se diluyó con agua (60 ml) y DCM (15 ml). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml). Los productos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO<3>acuoso saturado (30 ml), NaCl acuoso saturado (2 x 10 ml), se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar1-terc-butil4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 47,145 mg, 44 % de rendimiento) en forma de una película seca incolora y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, CDCl<3>) δ 0,78 (2H, t), 1,18 (1H, dd a), 1,22 - 1,26 (13H, m), 1,33 (6H, s), 1,44 (5H, s a), 1,46 (9H, s), 1,57 - 1,74 (1H, m), 1,74 - 1,85 (1H, m), 1,94 (0,4H, d), 2,01 (0,6H, d), 2,18 - 2,27 (0,6H, m), 2,32 - 2,47 (1,4H, m), 3,32 (3H, s), 3,39 - 3,46 (1H, m), 3,49 - 3,55 (0,4H, m), 3,60 (1H, dd), 3,65 - 3,76 (1,6H, m), 4,15 (1H, d a), 4,51 - 4,64 (1H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 5,23 - 5,34 (1H, m), 7,32 - 7,39 (5H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 704.

[0656] Intermedio 48: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico

[0658] Se disolvió1-terc-butil 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 47,145 mg, 0,21 mmol) en EtOAc (2 ml) y se trató con Pd/C (10 % en peso, 22 mg, 0,021 mmol). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 48,126 mg, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros, que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, CD<2>Cl<2>) δ 0,65 - 0,80 (2H, m), 1,14 -1,29 (14H, m), 1,35 - 1,43 (5H, m), 1,44 (7H, s), 1,46 - 1,60 (8H, m), 1,77 - 1,95 (1H, m), 2,03 - 2,14 (1H, m), 2,14 -2,26 (1H, m), 2,68 (1H, d a), 3,33 (3H, s), 3,38 - 3,47 (1H, m), 3,47 - 3,60 (2H, m), 3,65 - 3,76 (1H, m), 4,02 - 4,15 (1H, m), 4,24 (1H, s a), 5,38 (1H, s a), 7,06 (1H, s a); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 614.

[0660] Ejemplo 18: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metoxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0662] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,25 ml, 3,26 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 48,100 mg, 0,16 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.1 M (2 ml, 2,00 mmol) y Et<2>O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (60 mg, 0,49 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O (20 ml) y agua (5 ml), y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O, las capas se separaron y la capa acuosa se liofilizó. El sólido resultante se disolvió en MeOH (3 ml) y se sometió a cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando una solución al 5 % de amoniaco en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó además por cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 20 % en agua). Las fracciones de producto se liofilizaron y el material resultante se sometió de nuevo a cromatografía ultrarrápida de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 2 % en agua). Las fracciones de producto se liofilizaron y el material resultante se purificó de nuevo por cromatografía ultrarrápida de fase inversa (RediSep Rf Gold<®>C18, acetonitrilo del 0 al 5 % en agua) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metoxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 18,18 mg, 35 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,77 (2H, td), 1,14 - 1,27 (1H, m), 1,27 - 1,35 (1H, m), 1,35 - 1,45 (2H, m), 1,72 -1,81 (1H, m), 2,02 (1H, ddd), 2,30 (1H, dd), 2,41 (1H, dd), 3,31 - 3,38 (4H, m), 3,55 - 3,60 (3H, m), 3,63 (1H, dd), 4,42 - 4,51 (1H, m); m/z (ES<+>) [M+H]<+>= 332.

[0664] Ejemplo 19: (S)-2-Amino-N-((3R,5R)-8-hidroxi-6-oxo-7-oxa-1-aza-8-boraespiro[4.7]dodecan-3-il)-3-metilbutanamida -Compuesto B

[0667]

[0670] El Compuesto B (Ejemplo 19) se obtuvo mediante la ciclación intramolecular del Ejemplo 9 (Compuesto A) a través de un proceso de interconversión. Además, las interconversiones entre el Compuesto A (Ejemplo 9) y el Compuesto B se observaron en diversas condiciones. Por ejemplo, el Compuesto B se convirtió en el Compuesto A en presencia de agua, y tal conversión fue proporcional a la concentración de agua en el disolvente. Esto se demuestra en la figura 1, donde se muestran los espectros de RMN del compuesto B preparado en d6-DMSO al 100 % (marcado A), D<2>O al 75 % en d6-DMSO (marcado B), D<2>O al 50 % en d6-DMSO (marcado C), D<2>O al 25 % en d6-DMSO (marcado E) y D<2>O al 100 % (marcado F). En d6-DMSO, predomina el Compuesto B, mientras que hay un aumento proporcional en el Compuesto A con el aumento de la concentración de D<2>O. La proporción del Compuesto A con respecto al Compuesto B en D<2>O al 100 % alcanza aproximadamente el 90 %. Además, el Compuesto B se convirtió en el Compuesto A en condiciones ácidas. En la figura 2, el espectro de RMN del compuesto B en DCl 0,1 M (en D<2>O) demuestra que la acidificación produce una conversión casi completa en el compuesto A. Además, se determina que el Compuesto B cristalino y el Compuesto B amorfo tienen la misma forma estructural. En la figura 3, los espectros de RMN (obtenidos en d6-DMSO) demuestran que tanto el Compuesto B cristalino como el Compuesto B amorfo tienen la misma estructura cíclica.

[0671] Ejemplo 20: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0674]

[0677] Intermedio 52: 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0678] Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,13 ml, 0,76 mmol) a una solución de (S)-N-alfa-t-butiloxicarbonil-3,3-dimetilserina (106 mg, 0,454 mmol) y HATU (0,173 g, 0,454 mmol) en DMF (2,6 ml) a 0 °C y la reacción se agitó durante 15 min. Se añadió una solución de1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30, 190 mg, 0,38 mmol) en DMF (1 ml) y la reacción se agitó durante 2 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (40 ml) y se lavó con NH<4>Cl acuoso saturado (2 x 20 ml), NaHCO<3>acuoso saturado (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en hexanos) para proporcionar 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 52, 223 mg, 82 % de rendimiento) en forma de una espuma de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, MeOH-d4

) δ 0,70 - 0,83 (m, 2 H) 1,14 - 1,27 (m, 19 H) 1,31 (s, 6 H) 1,36 - 1,42 (m, 5 H) 1,44 (s, 10 H) 1,81 - 1,93 (m, 1 H) 2,02 - 2,14 (m, 1 H) 2,14 - 2,30 (m, 1 H) 2,36 - 2,49 (m, 1 H) 3,39 - 3,48 (m, 1 H) 3,73 - 3,83 (m, 1 H) 3,87 - 3,97 (m, 1 H) 4,43 - 4,53 (m, 1 H) 5,09 - 5,25 (m, 2 H) 7,28 - 7,45 (m, 5 H);m/z(ES<+>) [M+H]<+>= 718.

[0679] Ejemplo 20: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico Se añadió Pd/C (10 % en peso, 100 mg, 0,09 mmol) a una solución de1-(terc-butil) (2R,4R)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidroxi-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 52,220 mg, 0,31 mmol) en EtOAc (3 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró a sequedad. El sólido de color blanco se disolvió en DCM (1 ml) y ácido trifuoroacético (0,50 ml, 6,5 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La solución se concentró, y el residuo resultante se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (100 mg, 0,82 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidroxi-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 20,92 mg, 87 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,70 (2H, t), 1,20 (4H, s), 1,28 (4H, s), 1,31 - 1,40 (2H, m), 1,77 - 1,88 (1H, m), 2,04 - 2,14 (1H, m), 2,40 - 2,47 (1H, m), 2,48 - 2,54 (1H, m), 3,40 (1H, dd), 3,74 (1H, s), 3,75 - 3,80 (1H, m), 4,47 - 4,55 (1H,m); m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 346.

[0680] Ejemplo 21: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0681]

[0684] Intermedio 53: 1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0685] Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,14 ml, 0,82 mmol) a una solución de ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2,3-dimetilbutanoico (0,113 g, 0,489 mmol) y HATU (0,186 g, 0,489 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C y la reacción se agitó durante 15 min. Se añadió una solución de 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,205 mg, 0,408 mmol) en DMF (1 ml) y la reacción se agitó durante 3 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con NH<4>Cl acuoso saturado (2 x 25 ml), NaHCO<3>acuoso saturado (2 x 25 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en hexanos) para proporcionar1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 53, 211 mg, 72 % de rendimiento) en forma de una espuma de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, MeOH-d4

) δ 0,72 - 0,79 (2H, m), 0,80 -0,93 (6H, m), 1,17 - 1,25 (13H, m), 1,31 (9H, d), 1,36 - 1,47 (16H, m), 1,82 - 1,92 (2H, m), 1,97 - 2,09 (1H, m), 2,15 -2,30 (1H, m), 2,34 - 2,51 (1H, m), 3,61 - 3,75 (1H, m), 4,42 - 4,56 (1H, m), 5,08 - 5,31 (2H, m), 7,29 - 7,46 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 716.

[0686] Ejemplo 21: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico Se añadió Pd/C (10 % en peso, 90 mg, 0,08 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 53,210 mg, 0,29 mmol) en EtOAc (4 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró a sequedad. El sólido de color blanco se disolvió en DCM (1 ml) y ácido trifuoroacético (0,50 ml, 6,5 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La solución se concentró, y el residuo resultante se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (100 mg, 0,82 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 21,90 mg, 89 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,74 - 0,78 (2H, m), 0,79 (3H, d), 0,89 (3H, d), 1,17 - 1,27 (4H, m), 1,28 - 1,35 (1H, m), 1,36 - 1,47 (2H, m), 1,70 - 1,81 (1H, m), 1,93 - 2,07 (2H, m), 2,27 (1H, dd), 2,43 (1H, dd), 3,27 - 3,39 (1H, m), 3,60 (1H, dd), 4,39 - 4,48 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 344.

[0687] Ejemplo 22: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)-2,3-diaminopropanoil]amino]pirrolidin-2-carboxílico

[0690]

[0691] Intermedio 54: 1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0692] Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,14 ml, 0,82 mmol) a una solución de Boc-Dap(Boc)-OH-DCHA (0,238 g, 0,489 mmol) y HATU (0,186 g, 0,489 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C y la reacción se agitó durante 15 min. Se añadió una solución de 1-terc-butil 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-bencilo(Intermedio 30,205 mg, 0,408 mmol) en DMF (1 ml), y la reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con NH<4>Cl acuoso saturado (2 x 25 ml), NaHCO<3>acuoso saturado (2 x 25 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en hexanos) para proporcionar 1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 54,214 mg, 66 % de rendimiento) en forma de una espuma de color blanco y en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, MeOH-d4

) δ 0,76 (2H, c), 1,19 - 1,26 (14H, m), 1,27 - 1,34 (6H, m), 1,37 - 1,52 (24H, m), 1,76 - 1,93 (1H, m), 2,06 - 2,31 (2H, m), 2,50 (1H, s), 3,19 - 3,27 (2H, m), 3,66 - 3,84 (1H, m), 4,00 -4,13 (1H, m), 4,35 - 4,50 (1H, m), 5,04 - 5,25 (2H, m), 7,26 - 7,50 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 789.

[0693] Ejemplo 22: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)-2,3-diaminopropanoil]amino]pirrolidin-2-carboxílico

[0694] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 57 mg, 0,053 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 54,210 mg, 0,27 mmol) en EtOAc (4 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH, se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró a sequedad. El sólido de color blanco se disolvió en DCM (1 ml) y ácido trifuoroacético (0,50 ml, 6,5 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La solución se concentró, y el residuo resultante se disolvió en Et<2>O (2 ml) y HCl ac. 1 M (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (100 mg, 0,82 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)-2,3-diaminopropanoil]amino]pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 22,74 mg, 88 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,71 (2H, t), 1,11 - 1,24 (1H, m), 1,26 - 1,41 (3H, m), 1,75 - 1,89 (1H, m), 2,00 - 2,13 (1H, m), 2,31 - 2,48 (1H, m), 2,51 - 2,67 (1H, m), 3,39 - 3,53 (3H, m), 3,68 - 3,80 (1H, m), 4,27 (1H, t), 4,41 - 4,52 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 317. Ejemplo 23: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0695]

[0698] Intermedio 55: 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo

[0699] Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (4,41 g, 20,2 mmol) a una solución de sal del ácido oxálico de 2-metil (2S,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de1-(terc-butilo) (4,50 g, 13,5 mmol) y trietilamina (5,63 ml, 40,4 mmol) en DCM (57 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche en una atmósfera de N<2>. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con DCM (200 ml) y se lavó secuencialmente con HCl 0,5 M (ac.) y bicarbonato de sodio saturado y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 55, 3,66 g, 79 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,29 - 1,42 (18H, m), 1,96 - 2,17 (2H, m), 3,12 - 3,17 (1H, m), 3,45 - 3,56 (1H, m), 3,62 - 3,69 (3H, m), 3,96 - 4,06 (1H, m), 4,24 - 4,34 (1H, m), 7,17 - 7,26 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 345.

[0700] Intermedio 56: 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo

[0701] Se añadió en porciones hidruro de sodio (dispersión al 60 % en aceite mineral) (0,491 g, 12,3 mmol) a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 55, 3,66 g, 10,7 mmol) en DMF (35 ml). Después de la adición, la reacción se agitó durante 10 min, a continuación se añadió yoduro de metilo (0,715 ml, 11,4 mmol), y la reacción se agitó durante 3 h más. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó con agua. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml) y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó secuencialmente con agua y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 56, 3,13 g, 82 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,28 - 1,41 (18H, m), 1,87 - 2,02 (1H, m), 2,29 - 2,44 (1H, m), 2,69 (3H, s), 3,13 - 3,25 (1H, m), 3,44 - 3,57 (1H, m), 3,60 - 3,68 (3H, m), 4,23 - 4,32 (1H, m), 4,62 (1H, s a);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 359.

[0703] Intermedio 57: 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0704] Una solución de hidróxido de sodio (2,10 g, 52,4 mmol) en agua (11 ml) se añadió a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 56,3,13 g, 8,73 mmol) en THF (22 ml) y MeOH (11 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y la capa acuosa se acidificó a pH ~3 con HCl 5 M (ac.) y se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad para proporcionar el ácido carboxílico en bruto en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.

[0706] Se añadió bromuro de bencilo (1,24 ml, 10,5 mmol) a una solución del ácido carboxílico en bruto, yoduro de sodio (1,737 g, 11,59 mmol) y K<2>CO<3>(3,01 g, 21,8 mmol) en DMF (28 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se filtró, y los sólidos se aclararon con EtOAc. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 57, 3,05g, 81 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,20 - 1,42 (18H, m), 1,91 - 2,07 (1H, m), 2,33 - 2,46 (1H, m), 2,69 (3H, s), 3,12 - 3,26 (1H, m), 3,44 - 3,57 (1H, m), 4,20 - 4,38 (1H, m), 4,66 (1H, s a), 5,07 - 5,20 (2H, m), 7,25 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 435.

[0708] Intermedio 58: 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0709] Se disolvieron 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 57,3,05 g, 7,02 mmol) y bromuro de crotilo (1,08 ml, 10,5 mmol) en THF (25 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 21,0 ml, 10,5 mmol), y la reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron a presión reducida. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por purificación sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 58,1,26 g, 37 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros, isómeros de olefinaE/Zy rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,23 -1,44 (18H, m), 1,51 - 1,70 (3H, m), 2,00 - 2,26 (2H, m), 2,38 - 2,47 (1H, m), 2,57 - 2,68 (3H, m), 2,71 - 3,00 (1H, m), 3,00 - 3,25 (1H, m), 3,40 - 3,74 (1H, m), 4,54 - 4,80 (1H, m), 5,01 - 5,27 (2H, m), 5,28 - 5,47 (1H, m), 5,49 - 5,72 (1H, m), 7,25 - 7,42 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 489.

[0711] Intermedio 59: 1-terc-butil (4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0713] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (269 mg, 0,400 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (308 mg, 0,801 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (11 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,28 ml, 8,82 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 58,1,96 g, 4,01 mmol) en forma de una solución en DCM (7,5 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH y agua. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 59,2,5 g, 100 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros y rotámeros. El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 30 mm x 250 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, fase móvil = MeOH al 0-30 %:CO<2>, detección UV a 220 nm, carga = 31 mg/iny., conc. = 125 mg/ml en MeOH, caudal = 75 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica de cada diastereoisómero se asignó retrospectivamente en función de la potencia enzimática delEjemplo 23y elEjemplo 24para que fuera congruente con otros compuestos ilustrados.

[0714] Intermedio 60(Isómero 2, 637 mg):1-terc-butil (2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,58 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, d), 1,21 - 1,47 (22H, m), 1,69 - 1,82 (1H, m), 1,94 - 2,23 (3H, m), 2,56 - 2,62 (3H, m), 3,19 - 3,28 (1H, m), 3,45 - 3,57 (1H, m), 4,58 - 4,79 (1H, m), 5,01 - 5,26 (2H, m), 7,26 - 7,41 (5H, m).

[0715] Intermedio 61(Isómero 1, 860 mg):1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,62 - 0,71 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,20 - 1,42 (22H, m), 1,67 - 1,84 (1H, m), 1,92 - 2,32 (3H, m), 2,69 (3H, s), 3,04 - 3,15 (1H, m), 3,57 - 3,71 (1H, m), 4,52 - 4,73 (1H, m), 4,98 - 5,25 (2H, m), 7,24 - 7,40 (5H, m).

[0716] Intermedio 62: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0717] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 165 mg, 0,155 mmol) a una solución de1-terc-butil(2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 60,637 mg, 1,03 mmol) en EtOAc (7 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 62,350 mg, 64 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,63 - 0,73 (2H, m), 1,14 - 1,19 (12H, m), 1,22 - 1,42 (21H, m), 1,63 - 1,77 (1H, m), 1,99 - 2,18 (3H, m), 2,63 - 2,67 (3H, m), 3,21 - 3,27 (2H, m), 3,41 - 3,55 (1H, m), 4,57 - 4,80 (1H, m), 12,32 - 12,75 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 527.

[0718] Ejemplo 23: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0719] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,51 ml, 6,7 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 62,350 mg, 0,66 mmol) en DCM (4 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (162 mg, 1,33 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (60 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 23,140 mg, 86 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,72 - 0,82 (2H, m), 1,09 - 1,43 (4H, m), 1,62 - 1,77 (1H, m), 1,83 - 1,95 (1H, m), 2,23 (2H, d), 2,46 (3H, s), 3,02 - 3,11 (1H, m), 3,37 - 3,49 (1H, m), 3,49 - 3,61 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 245.

[0720] Ejemplo 24: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0723]

[0726] Intermedio 63: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0727] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 223 mg, 0,209 mmol) a una solución de1-terc-butil(2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 61,860 mg, 1,39 mmol) en EtOAc (9,3 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 63,520 mg, 71 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,60 - 0,75 (2H, m), 1,16 (12H, s), 1,28 - 1,45 (22H, m), 1,56 - 1,74 (1H, m), 1,84 - 1,95 (1H, m), 2,01 - 2,22 (2H, m), 2,69 (3H, s), 3,01 - 3,17 (1H, m), 3,56 - 3,70 (1H, m), 4,52 - 4,73 (1H, m), 12,35 - 12,77 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 527.

[0728] Ejemplo 24: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0729] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (1,23 ml, 16,0 mmol) a una solución agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 63,520 mg, 0,80 mmol) en DCM (8,5 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (196 mg, 1,60 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (60 ml) para proporcionar ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 24,163 mg, 83 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,70 - 0,90 (2H, m), 1,10 - 1,46 (4H, m), 1,65 - 1,77 (2H, m), 1,96 - 2,07 (1H, m), 2,43 (3H, s), 2,68 - 2,77 (1H, m), 2,96 - 3,10 (1H, m), 3,37 - 3,50 (1H, m), 3,50 - 3,60 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 245. Ejemplo 25: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0732]

[0735] Intermedio 64: 1-terc-butil (2R,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0736] Se añadieron trifenilfosfina (7,87 g, 30,0 mmol) y agua (0,54 ml, 30,0 mmol) a una solución de 1-(terc-butil) (2R,4R)-4-azidopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (5,20 g, 15,0 mmol) en THF (68 ml) a temperatura ambiente. La reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 6 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc y se lavó secuencialmente con agua (2 x 100 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH) para proporcionar 1-terc-butil (2R,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2bencilo(Intermedio 64, 3,2 g, 67 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,20 - 1,49 (9H, m), 1,53 - 1,64 (1H, m), 1,65 - 1,79 (2H, m), 2,26 - 2,40 (1H, m), 2,85 - 3,01 (1H, m), 3,31 - 3,42 (1H, m), 3,45 - 3,56 (1H, m), 4,13 - 4,24 (1H, m), 4,99 - 5,25 (2H, m), 7,36 (5H, s);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 321.

[0737] Intermedio 65: 1-terc-butil (2R,4R)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0738] Se añadió en porciones triacetoxiborohidruro de sodio (6,35 g, 29,9 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2R,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 64,3,20 g, 9,99 mmol) y formaldehído (37 % en peso en H<2>O, 4,46 ml, 59,9 mmol) en MeOH (79 ml). Después de la adición, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con DCM. Los sólidos se eliminaron por filtración y el filtrado se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc con NH<4>OH) para proporcionar 1-terc-butil (2R,4R)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 65,3,00 g, 86 % de rendimiento).<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,24 (9H, s), 1,53 - 1,67 (1H, m), 2,10 (6H, s), 2,40 - 2,48 (1H, m), 2,53 - 2,73 (1H, m), 2,83 - 3,06 (1H, m), 3,59 - 3,69 (1H, m), 4,15 - 4,29 (1H, m), 5,02 - 5,21 (2H, m), 7,26 - 7,42 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 350.

[0739] Intermedio 66: 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0740] Se disolvieron 1-terc-butil (2R,4R)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 65,3,00 g, 8,61 mmol) y bromuro de crotilo (1,33 ml, 12,9 mmol) en THF (18 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 25,8 ml, 12,9 mmol), y la reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron a presión reducida. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por purificación sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 66,1,55 g, 45 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros, isómeros de olefinaE/Zy rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,21 - 1,44 (9H, m), 1,51 - 1,70 (3H, m), 1,79 - 1,96 (1H, m), 2,05 (6H, s), 2,08 - 2,24 (1H, m), 2,31 - 2,43 (1H, m), 2,54 - 2,74 (1H, m), 2,75 - 3,08 (2H, m), 3,56 - 3,86 (1H, m), 5,00 - 5,23 (2H, m), 5,23 - 5,42 (1H, m), 5,43 - 5,73 (1H, m), 7,23 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 403.

[0741] Intermedio 67: 1-terc-butil (4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0742] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio(I)(240 mg, 0,36 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (275 mg, 0,715 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (10 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,14 ml, 7,87 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 66,1,44 g, 3,58 mmol) en forma de una solución en DCM (6,7 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH y agua. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 67,1,5 g, 79 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros y rotámeros. El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 30 mm x 250 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, fase móvil = MeOH al 0-15 %:CO<2>, detección UV a 220 nm, carga = 32 mg/iny., conc. = 80 mg/ml en MeOH, caudal = 120 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica de cada diastereoisómero se asignó retrospectivamente en función de la potencia enzimática delEjemplo 25y elEjemplo 26para que fuera congruente con otros compuestos ilustrados.Intermedio 68(Isómero 2, 190 mg): 1-terc-butil (2R,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,64 - 0,71 (2H, m), 0,97 - 1,12 (1H, m), 1,13 - 1,17 (12H, m), 1,24 (13H, s), 1,57 - 1,81 (1H, m), 1,81 - 1,99 (1H, m), 2,06 (6H, s), 2,09 - 2,21 (1H, m), 2,55 - 2,74 (1H, m), 3,02 - 3,12 (1H, m), 3,59 - 3,70 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 7,27 - 7,41 (5H, m).

[0743] Intermedio 69(Isómero 1, 491 mg): 1-terc-butil (2S,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,52 - 0,72 (2H, m), 0,93 - 1,12 (1H, m), 1,12 - 1,20 (12H, m), 1,20 - 1,39 (13H, m), 1,59 - 1,74 (1H, m), 1,77 - 1,93 (1H, m), 2,06 (6H, s), 2,08 - 2,15 (1H, m), 2,53 - 2,65 (1H, m), 2,78 - 2,96 (1H, m), 3,67 - 3,82 (1H, m), 5,00 - 5,21 (2H, m), 7,27 - 7,42 (5H, m).

[0744] Intermedio 70: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0745] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 57 mg, 0,054 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2R,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 68,189 mg, 0,356 mmol) en EtOAc (2,4 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 70, 150mg, 96 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,53 - 0,70 (2H, m), 1,11 - 1,20 (12H, m), 1,21 - 1,41 (14H, m), 1,56 - 1,71 (1H, m), 1,92 - 2,06 (2H, m), 2,20 (7H, s), 2,69 - 2,78 (1H, m), 3,37 - 3,51 (1H, m), 3,67 - 4,21 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 441.

[0746] Ejemplo 25: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0747] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,26 ml, 3,4 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 70,150 mg, 0,34 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (83 mg, 0,68 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 25,73 mg, 83 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,62 - 0,73 (2H, m), 1,14 - 1,36 (4H, m), 1,79 - 1,90 (1H, m), 1,99 - 2,10 (1H, m), 2,57 - 2,73 (2H, m), 2,82 - 2,90 (6H, m), 3,48 - 3,56 (1H, m), 3,89 - 3,98 (1H, m), 4,12 - 4,20 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 259.

[0748] Ejemplo 26: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0751]

[0754] Intermedio 71: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0755] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 148 mg, 0,139 mmol) a una solución de1-terc-butil(2S,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 69, 490mg, 0,93 mmol) en EtOAc (6,7 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 71,405 mg, 99 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,52 - 0,71 (2H, m), 0,83 - 1,06 (1H, m), 1,16 (12H, s), 1,32 (12H, s), 1,53 - 1,67 (1H, m), 1,75 - 1,88 (1H, m), 2,01 - 2,13 (7H, m), 2,54 -2,69 (1H, m), 2,79 - 2,95 (1H, m), 3,66 - 3,83 (1H, m), 7,24 - 7,46 (1H, m), 11,86 - 12,88 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 441.

[0756] Ejemplo 26: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico

[0757] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (1,0 ml, 13 mmol) a una solución agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 71,405 mg, 0,919 mmol) en DCM (5,1 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac. 1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (224 mg, 1,84 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (60 ml) para proporcionar ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 26,206 mg, 87 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,71 - 0,89 (2H, m), 1,12 - 1,44 (4H, m), 1,70 - 1,82 (2H, m), 1,97 - 2,11 (1H, m), 2,29 (6H, s), 2,62 - 2,71 (1H, m), 2,95 - 3,10 (2H, m), 3,61 - 3,68 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 259.

[0759] Ejemplo 27: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0762]

[0765] Intermedio 72: 2-metil (2S,4R)-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo

[0766] Se añadió ácido acético (42 µl, 0,73 mmol) a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butilo) (7,48 g, 30,6 mmol) y (2-oxoetil)carbamato deterc-butilo (4,64 g, 29,2 mmol) en MeOH (194 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La solución se enfrió a 0 °C y se añadió en porciones triacetoxiborohidruro de sodio (9,27 g, 43,7 mmol). La reacción se agitó durante una noche mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se diluyó con DCM y se lavó secuencialmente con bicarbonato de sodio saturado, agua y cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/EtOAc/MeOH) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 72,4,77 g, 42 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,25 - 1,48 (20H, m), 1,84 - 2,07 (3H, m), 2,88 - 2,98 (2H, m), 3,02 - 3,17 (1H, m), 3,17 - 3,27 (1H, m), 3,40 - 3,51 (1H, m), 3,64 (3H, s), 4,14 - 4,24 (1H, m), 6,63 - 6,74 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 388.

[0767] Intermedio 73: 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo

[0768] Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (4,29 ml, 18,5 mmol) a una solución de2-metil (2S,4R)-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 72,4,77 g, 12,3 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (4,30 ml, 24,6 mmol) en DCM (53 ml) a temperatura ambiente y la reacción se agitó durante 17 h. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó secuencialmente con agua y cloruro de sodio acuoso saturado. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-12-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 73,4,25 mg, 71 % de rendimiento).<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,21 - 1,27 (1H, m), 1,27 - 1,42 (27H, m), 1,99 - 2,07 (1H, m), 2,33 -2,46 (1H, m), 2,93 - 3,14 (3H, m), 3,17 - 3,24 (1H, m), 3,48 - 3,61 (1H, m), 3,61 - 3,69 (3H, m), 4,20 - 4,44 (2H, m), 6,79 - 6,94 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 488.

[0769] Intermedio 74: 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0770] Se añadió una solución de hidróxido de sodio (2,09 g, 52,3 mmol) en agua (11 ml) a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo(Intermedio 73,4,25 g, 8,72 mmol) en THF (22 ml) y MeOH (11 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 6 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y la capa acuosa se acidificó a pH ~3 con HCl 5 M (ac.) y se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad para proporcionar el ácido carboxílico en bruto en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.

[0771] Se añadió bromuro de bencilo (1,24 ml, 10,5 mmol) a una solución del ácido carboxílico en bruto, yoduro de sodio (1,96 g, 13,1 mmol) y K<2>CO<3>(3,62 g, 26,2 mmol) en DMF (28 ml), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se filtró, y los sólidos se aclararon con EtOAc. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio74, 3,91 g, 80 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,20 - 1,47 (27H, m), 2,00 - 2,13 (1H, m), 2,36 - 2,45 (1H, m), 2,93 - 3,01 (2H, m), 3,02 - 3,26 (3H, m), 3,48 - 3,64 (1H, m), 4,26 - 4,43 (2H, m), 5,05 -5,22 (2H, m), 6,78 - 6,93 (1H, m), 7,25 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 564.

[0772] Intermedio 75: 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0773] Se disolvieron 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 74, 3,91 g, 6,94 mmol) y bromuro de crotilo (0,93 ml, 9,0 mmol) en THF (10,6 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 34,7 ml, 17,3 mmol), y la reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron a presión reducida. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por purificación sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 75, 1,34g, 31 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros, isómeros de olefinaE/Zy rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,21 - 1,45 (27H, m), 1,53 - 1,71 (3H, m), 1,91 - 2,32 (2H, m), 2,37 - 2,47 (1H, m), 2,69 - 2,86 (1H, m), 2,86 - 3,11 (4H, m), 3,46 - 3,58 (1H, m), 3,58 - 3,77 (1H, m), 4,29 - 4,57 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 5,28 - 5,46 (1H, m), 5,46 - 5,71 (1H, m), 6,83 - 7,00 (1H, m), 7,19 - 7,43 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 618.

[0774] Intermedio 76: 1-terc-butil (4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo

[0775] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio(I)(222 mg, 0,331 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (254 mg, 0,661 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (9 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,05 ml, 7,26 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió 1-terc-butil (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidin-1,2dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 75,2,04 g, 3,30 mmol) en forma de una solución en DCM (6,1 ml), y la mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH y agua. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (hexanos/EtOAc) para proporcionar 1-terc-butil (4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 76,1,14 g, 46 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros y rotámeros. El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 30 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, fase móvil = IPA al 0-20 % con NH<4>OH al 0,2 %:CO<2>, detección UV a 220 nm, carga = 18 mg/iny., conc. = 46 mg/ml en MeOH, caudal = 120 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica de cada diastereoisómero se asignó retrospectivamente en función de la potencia enzimática delEjemplo 27y elEjemplo 28para que fuera congruente con otros compuestos ilustrados.

[0776] Intermedio 77(Isómero 2, 347 mg): 1-terc-butil (2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,60 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,52 (31H, m), 1,66 - 1,82 (1H, m), 1,96 - 2,19 (2H, m), 2,19 - 2,33 (1H, m), 2,83 - 3,10 (4H, m), 3,48 - 3,66 (1H, m), 4,34 - 4,53 (1H, m), 5,00 - 5,23 (2H, m), 6,83 - 6,93 (1H, m), 7,25 - 7,43 (5H, m).

[0777] Intermedio 78(Isómero 1, 540 mg): 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,61 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,47 (31H, m), 1,61 - 1,80 (1H, m), 1,93 - 2,24 (2H, m), 2,26 - 2,43 (1H, m), 2,89 - 3,13 (5H, m), 3,60 - 3,81 (1H, m), 4,33 - 4,49 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 6,86 - 6,94 (1H, m), 7,27 - 7,39 (5H, m).

[0778] Intermedio 79: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0779] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 99 mg, 0,093 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 77,347 mg, 0,465 mmol) en EtOAc (2,3 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 79,287 mg, 94 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,65 - 0,74 (2H, m), 1,14 - 1,21 (12H, m), 1,31 - 1,43 (31H, m), 1,66 - 1,76 (1H, m), 2,00 - 2,27 (3H, m), 2,96 - 3,12 (5H, m), 3,37 - 3,42 (1H, m), 3,49 - 3,61 (1H, m), 4,34 - 4,49 (1H, m), 6,84 - 6,93 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 656.

[0780] Ejemplo 27: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0781] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,67 ml, 8,8 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 79,287 mg, 0,438 mmol) en DCM (3,7 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.

[0782] 1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (107 mg, 0,878 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 27,106 mg, 89 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,63 - 0,77 (2H, m), 1,13 -1,23 (1H, m), 1,37 (3H, d a), 1,63 - 1,76 (1H, m), 1,92 - 2,02 (1H, m), 2,06 - 2,14 (1H, m), 2,24 - 2,33 (1H, m), 2,78 (2H, s), 2,96 (2H, s), 3,08 - 3,19 (1H, m), 3,28 - 3,43 (1H, m), 3,43 - 3,51 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 274.

[0783] Ejemplo 28: ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0784]

[0787] Intermedio 80: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0788] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 137 mg, 0,129 mmol) a una solución de 1-terc-butil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo(Intermedio 78,480 mg, 0,64 mmol) en EtOAc (7,2 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 80,170 mg, 40 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,58 - 0,73 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,37 (31H, d a), 1,58 - 1,74 (2H, m), 2,18 - 2,33 (2H, m), 2,92 - 3,16 (6H, m), 3,59 - 3,73 (1H, m), 4,31 - 4,50 (1H, m), 6,84 - 6,95 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 656.

[0789] Ejemplo 28: ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0790] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (1,00 ml, 13,0 mmol) a una solución agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 80,170 mg, 0,26 mmol) en DCM (5 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac.

[0791] 1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (63 mg, 0,52 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 28,67 mg, 95 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,65 - 0,77 (2H, m), 1,11 - 1,24 (1H, m), 1,25 - 1,34 (1H, m), 1,34 - 1,42 (2H, m), 1,62 - 1,79 (2H, m), 1,97 - 2,06 (1H, m), 2,61 - 2,70 (1H, m), 2,72 - 2,84 (2H, m), 2,93 (3H, s), 3,30 - 3,41 (1H, m), 3,47 - 3,55 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 274.

[0792] Ejemplo 29: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0793]

[0796] Intermedio 81: 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo

[0797] Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (6,27 g, 28,8 mmol) a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-aminopirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo (5,00 g, 18,0 mmol) y trietilamina (5,00 ml, 35,9 mmol) en DCM (78 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se lavó secuencialmente con HCl 0,5 M (ac.), bicarbonato de sodio saturado y cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM/MeOH) para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo(Intermedio 81,5,4 g, 79 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,31 - 1,42 (9H, m), 1,99 - 2,23 (2H, m), 3,22 - 3,28 (1H, m), 3,52 - 3,65 (4H, m), 3,96 - 4,10 (1H, m), 4,30 - 4,48 (1H, m), 4,92 -5,13 (2H, m), 7,18 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 379.

[0798] Intermedio 82: 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo

[0799] Se añadió en porciones hidruro de sodio (dispersión al 60 % en aceite mineral) (0,423 g, 12,3 mmol) a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo (Intermedio 81, 3,20 g, 8,46 mmol) en DMF (33 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 h antes del calentamiento a temperatura ambiente con agitación durante 1 h más. Se añadió yoduro de metilo (0,63 ml, 10,2 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó con agua. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y la suspensión se diluyó con DCM (200 ml). Las capas se separaron, y la capa orgánica se lavó secuencialmente con agua (4 x 50 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad para proporcionar 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo(Intermedio 82,2,33 g, 70 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,25 - 1,47 (9H, m), 1,89 - 2,08 (1H, m), 2,31 - 2,46 (1H, m), 2,69 (3H, d), 3,22 - 3,39 (2H, m), 3,65 (4H, s), 4,22 - 4,49 (1H, m), 4,87 - 5,17 (2H, m), 7,18 - 7,46 (5H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 393.

[0800] Intermedio 83: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo

[0801] Una solución de hidróxido de sodio (1,425 g, 35,62 mmol) en agua (7,5 ml) se añadió a una solución de 2-metil (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de 1-bencilo(Intermedio 82,2,33 g, 5,94 mmol) en THF (15 ml) y MeOH (7,5 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 6 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y la capa acuosa se acidificó a pH ~3 con HCl 5 M (ac.) y se extrajo con DCM (4 x 50 ml). Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad para proporcionar el ácido carboxílico en bruto en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.

[0802] Se añadió bromuro de bencilo (0,66 ml, 5,6 mmol) a una solución del ácido carboxílico en bruto, yoduro de sodio (1,11 g, 7,38 mmol) y K<2>CO<3>(1,92 g, 13,9 mmol) en DMF (28 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se filtró, y los sólidos se aclararon con EtOAc. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 83,2,45 g, 94 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo pálido.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,28 - 1,45 (9H, m), 1,98 (1H, s), 2,30 -2,46 (1H, m), 2,64 - 2,71 (3H, m), 3,30 (1H, s), 3,51 - 3,76 (1H, m), 4,48 (1H, d), 4,53 - 4,75 (1H, m), 4,88 - 5,21 (4H, m), 7,18 - 7,42 (10H,m); m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 469.

[0803] Intermedio 84: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo

[0804] Se disolvieron (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 83,2,45 g, 5,23 mmol) y bromuro de crotilo (0,81 ml, 7,8 mmol) en THF (18 ml) y la solución se enfrió a -78 °C en una atmósfera de N<2>. A la mezcla de reacción se le añadió gota a gota una solución de KHMDS (0,5 M en tolueno, 15,7 ml, 7,85 mmol), y la reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción en bruto se inactivó con agua y los volátiles se eliminaron a presión reducida. La mezcla en bruto se diluyó en DCM y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a sequedad. El material en bruto se purificó por purificación sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 84,2,10 g, 86 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros, isómeros de olefinaE/Zy rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,31 - 1,40 (9H, m), 1,46 - 1,68 (3H, m), 1,99 - 2,31 (2H, m), 2,40 - 2,47 (1H, m), 2,55 - 2,68 (3H, m), 2,69 - 3,00 (1H, m), 3,30 (1H, s), 3,51 - 3,77 (1H, m), 4,55 - 4,74 (1H, m), 4,79 - 5,21 (4H, m), 5,26 - 5,41 (1H, m), 5,42 - 5,71 (1H, m), 7,16 - 7,42 (10H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 523.

[0805] Intermedio 85: (4R)-2-(but-2-enil)-4-(metilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo

[0806] Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (3,84 ml, 50,2 mmol) a una solución de (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 84,2,10 g, 4,02 mmol) en DCM (32 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a sequedad para proporcionar la sal TFA de (4R)-2-(but-2-enil)-4-(metilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 85,2,55 g, 100 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro que se usó sin purificación.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 1,45 - 1,74 (3H, m), 2,14 - 2,33 (1H, m), 2,34 - 2,46 (1H, m), 2,57 - 2,65 (3H, m), 2,66 - 3,07 (1H, m), 3,15 - 3,56 (1H, m), 3,66 - 3,77 (1H, m), 3,81 - 4,13 (1H, m), 4,79 - 5,22 (4H, m), 5,26 - 5,73 (2H, m), 7,20 - 7,41 (10H, m), 8,62 - 8,87 (2H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 423.

[0807] Intermedio 86: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo

[0808] Se añadióN,N-diisopropiletilamina (0,70 ml, 4,0 mmol) a una solución de HATU (1,52, 4,02 mmol) y Boc-Val-OH (873 mg, 4,02 mmol) en DMF (15 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadieron una solución de sal TFA de (4R)-2-(but-2-enil)-4-(metilamino)pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 85,2,16 g, 4,02 mmol) en DMF (15 ml) yN,N-diisopropiletilamina (0,70 ml, 4,0 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 h más. La mezcla de reacción se concentró y se purificó directamente por cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc) para proporcionar (4R)-2-(but-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 86,1,97 g, 79 % de rendimiento) en forma de una mezcla de rotámeros.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) 0,61 - 0,92 (6H, m), 1,35 (9H, s a), 1,62 (3H, d a), 1,79 - 1,92 (1H, m), 2,03 - 2,33 (2H, m), 2,57 - 2,76 (2H, m), 2,76 - 3,00 (3H, m), 3,30 (1H, s), 3,49 - 3,77 (1H, m), 4,04 - 4,16 (1H, m), 4,78 - 5,20 (5H, m), 5,26 - 5,72 (2H, m), 6,72 - 7,03 (1H, m), 7,17 - 7,38 (10H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 622.

[0809] Intermedio 87: (4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo

[0810] Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio (I) (213 mg, 0,317 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (244 mg, 0,635 mmol) en un matraz de fondo redondo secado a la estufa. El matraz se cerró herméticamente y se purgó con N<2>. Los sólidos se disolvieron en DCM (8,9 ml) y a la solución se le añadió lentamente 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,01 ml, 6,97 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A la reacción se le añadió (4R)-2-(but-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 86,1,97 g, 3,17 mmol) en forma de una solución en DCM (5,9 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH y agua. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Los productos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a sequedad. El residuo resultante se purificó por cromatografía sobre sílice ultrarrápida (hexanos/EtOAc) para proporcionar (4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 87,1,5 g, 63 % de rendimiento) en forma de un aceite de color amarillo y en forma de una mezcla de diastereómeros y rotámeros. El material purificado se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1, 30 x 250 mm, 5 µm, temperatura = 20 °C, fase móvil = MeOH al 0-30 %:CO<2>, detección UV a 220 nm, carga = 31 mg/iny., conc. = 125 mg/ml en MeOH, caudal = 75 ml/min, presión de salida = 100 bar] para dar dos diastereómeros. La estereoquímica de cada diastereoisómero se asignó retrospectivamente en función de la potencia enzimática delEjemplo 29y elEjemplo 30para que fuera congruente con otros compuestos ilustrados.

[0811] Intermedio 88(Isómero 2, 280 mg): (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,51 - 0,70 (2H, m), 0,72 - 0,93 (6H, m), 1,14 (12H, s), 1,20 - 1,52 (13H, m), 1,67 - 2,31 (5H, m), 2,54 - 2,90 (3H, m), 3,33 - 3,48 (1H, m), 3,49 - 3,85 (1H, m), 4,01 - 4,18 (1H, m), 4,71 - 5,23 (5H, m), 6,71 - 7,07 (1H, m), 7,19 - 7,33 (10H, m).

[0812] Intermedio 89(Isómero 1, 590 mg): (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,49 - 0,72 (2H, m), 0,73 - 0,90 (6H, m), 1,15 (12H, s), 1,34 (13H, s a), 1,59 - 2,34 (5H, m), 2,94 (3H, s a), 3,30 (1H, s), 3,63 - 3,76 (1H, m), 3,96 - 4,17 (1H, m), 4,75 - 5,18 (5H, m), 6,71 - 7,05 (1H, m), 7,17 - 7,41 (10H, m).

[0813] Intermedio 90: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0814] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 99 mg, 0,093 mmol) a una solución de (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-13,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 88,280 mg, 0,37 mmol) en EtOAc (1,8 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 90,180 mg, 92 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,59 - 0,69 (2H, m), 0,74 - 0,87 (6H, m), 1,16 (12H, s), 1,22 -1,30 (3H, m), 1,35 (9H, s), 1,49 - 1,65 (1H, m), 1,65 - 1,82 (1H, m), 1,82 - 1,95 (2H, m), 2,15 - 2,26 (1H, m), 2,63 - 2,91 (3H, m), 2,92 - 3,21 (3H, m), 4,05 - 4,22 (1H, m), 4,80 - 5,16 (1H, m), 6,76 (1H, s), 7,56 - 8,05 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 526.

[0815] Ejemplo 29: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,53 ml, 6,9 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 90,180 mg, 0,34 mmol) en DCM (10 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac. 1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (84 mg, 0,69 mmol), y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (60 ml) para proporcionar ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 29, 98 mg, 86 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,72 - 0,83 (2H, m), 0,85 -1,01 (6H, m), 1,10 - 1,45 (4H, m), 1,61 - 1,84 (1H, m), 1,85 - 2,03 (2H, m), 2,19 - 2,34 (1H, m), 2,34 - 2,49 (1H, m), 3,00 (3H, s), 3,16 - 3,51 (2H, m), 3,76 - 3,96 (1H, m), 4,95 - 5,10 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 344.

[0816] Ejemplo 30: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico

[0817]

[0820] Intermedio 91: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico

[0821] Se añadió Pd/C (10 % en peso, 209 mg, 0,196 mmol) a una solución de (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-1,2-dicarboxilato de dibencilo(Intermedio 89, 590 mg, 0,79 mmol) en EtOAc (4 ml). El matraz se equipó con un globo de H<2>y la suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH y se filtró a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 91, 397 mg, 96 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco que se usó sin purificación adicional.<1>H RMN (500 MHz, DMSO-d6

) δ 0,58 - 0,67 (2H, m), 0,73 - 0,87 (6H, m), 1,16 (12H, s), 1,22 -1,31 (3H, m), 1,35 (9H, s), 1,51 - 1,67 (1H, m), 1,68 - 1,95 (3H, m), 2,28 - 2,37 (2H, m), 2,95 (4H, s), 4,05 - 4,20 (1H, m), 4,66 - 4,79 (1H, m), 6,65 - 6,90 (1H, m), 7,85 - 8,15 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 526.

[0822] Ejemplo 30: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (1,17 ml, 15,2 mmol) a una solución agitada de ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidin-2-carboxílico(Intermedio 91,397 mg, 0,755 mmol) en DCM (10 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl ac. 1 M (5 ml) y Et<2>O (5 ml). Se añadió ácido fenilborónico (186 mg, 1,52 mmol), y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con Et<2>O y agua, y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con Et<2>O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 60 cc). El producto deseado se eluyó de la columna utilizando amoniaco al 5 % en MeOH (60 ml) para proporcionar ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidin-2-carboxílico(Ejemplo 30, 163 mg, 92 % de rendimiento) en forma de un sólido de color blanco.<1>H RMN (500 MHz, D<2>O) δ 0,68 - 0,78 (2H, m), 0,83 -0,94 (6H, m), 1,10 - 1,41 (4H, m), 1,66 - 2,13 (4H, m), 2,49 - 2,68 (1H, m), 3,02 (3H, s), 3,22 - 3,30 (1H, m), 3,43 - 3,60 (1H, m), 3,70 - 3,88 (1H, m), 4,53 - 4,66 (1H, m);m/z:(ES<+>) [M+H]<+>= 344.

[0823] Ejemplo 31: Actividad biológica de los Ejemplos 1 a 30

[0824] Los efectos inhibidores de los Ejemplos 1 a 30 sobre la actividad de la arginasa 1 y la arginasa 2 humanas se cuantificaron midiendo la formación del grupo tiol a partir de tioarginina utilizando arginasa 1 o arginasa 2 recombinante producida a partir deE. coli. El grupo tiol se detectó con el reactivo de Ellman, ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico) (DTNB). El DTNB reacciona con el tiol para producir la mezcla de disulfuro y ácido 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB), que se cuantifica mediante la absorbancia del anión (TNB<2->) a 412 nm.

[0825] Los ensayos se realizaron en placas transparentes de 384 pocillos (n.º de cat. Greiner: 781101). Se dispensaron diversas concentraciones de los Ejemplos 1 a 30 en 300 nl de DMSO en las placas de ensayo utilizando un dispensador acústico Echo, seguido inmediatamente del sellado y la centrifugación de las placas. Se prepararon dos premezclas con reactivos descongelados inmediatamente antes de su adición a las placas de ensayo. La premezcla uno comprendía arginasa humana 1 o arginasa humana 2, a una concentración final de 5 nM y 0,5 mM de DTNB en tampón de ensayo, HEPES 45 mM a pH 7,5, Brij 35, al 0,045 % (p/v) y 100 µM de MnCl<2>. La premezcla dos contenía tioarginina 0,5 mM recién descongelada en tampón de ensayo. Se dispensaron quince microlitros de la premezcla uno en placas de ensayo que contenían los Ejemplos 1 a 30, se centrifugaron y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de añadir quince microlitros de la premezcla dos.

[0826] Las placas de ensayo se centrifugaron antes de leer la absorbancia a 412 nm en un lector de placas multimodo Pherastar para recopilar datos en el punto temporal 0 (T0). Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 60 minutos antes de volverse a leer para recopilar datos en el punto temporal 1 (T1). Los datos se obtienen restando la señal A412 medida en T0 (punto temporal 0) de la medida en T1 (punto temporal 1). Los datos se transformaron en el % de efecto mediante la ecuación:

[0827] para el compuesto en función del control de inhibición mín. (vehículo) y máx. (compuesto de referencia).

[0828] La concentración de los Ejemplos 1 a 30 que inhibió la actividad en un 50 % (es decir, la CI<50>) se calculó representando gráficamente el % de efecto frente a la concentración del compuesto de prueba y ajustando los datos mediante el algoritmo de ajuste Genedata Screener Smart. Los resultados de estos ensayos se encuentran en la Tabla 2:

[0829] Tabla 2

[0832]

[0834] Ejemplo 32: Estudios de biodisponibilidad

[0835] Los Ejemplos 8, 9 y 13 a 20 son formas profármaco del Ejemplo 7. El siguiente estudio farmacocinético se realizó para demostrar la biodisponibilidad del Ejemplo 7 a partir del Ejemplo 8. El Ejemplo 8 se formuló en solución salina al 0,9 % p/v a pH 4 (ajustada con HCl 1 M) para dosificación IV. La formulación se administró a razón de 2 mg/kg mediante catéter femoral a cada una de dos ratas macho (170-250 g). Se tomaron muestras de sangre en serie mediante catéter venoso yugular a las 0,033, 0,083, 0,167, 0,5, 1, 2, 4, 8 y 24 h después de la dosis. Para la dosificación PO, el Ejemplo 8 se formuló en agua desionizada a pH 4 (ajustada con HCl 1 M) y se dosificó a razón de 5 mg/kg por sonda nasogástrica a cada una de dos ratas macho (170-250 g). Se tomaron muestras de sangre en serie mediante catéter venoso yugular a las 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 8 y 24 h después de la dosis. Las muestras de plasma se generaron a partir de sangre mediante centrifugación a baja velocidad. Se preparó un único conjunto de patrones de calibración que contenía los Ejemplos 7 y 8, añadiendo plasma en blanco. Las muestras y los patrones se extrajeron mediante precipitación con dos volúmenes de acetonitrilo, seguida de centrifugación. Los resultados obtenidos se utilizaron para determinar el Cl (ml/min/kg), Vdss (l/kg), Cmáx (µM), AUC (µM h), tmáx (h) y % de F tanto para el Ejemplo 7 como para el Ejemplo 8. La biodisponibilidad absoluta se determinó comparando el AUC normalizado con respecto a la dosis PO del Ejemplo 7 cuando se dosificó como en el Ejemplo 8, con el AUC normalizado con respecto a la dosis IV del Ejemplo 7, cuando se dosificó como en el Ejemplo 7. Cuando correspondió, se utilizaron dosis medidas, no dosis nominales, para calcular la biodisponibilidad. De manera análoga, se repitió el mismo procedimiento para los Ejemplos 9 y 13 a 20. Los resultados se muestran en las Tablas 3 a 12. Estos resultados indican que la biodisponibilidad puede aumentarse incorporando determinados restos de aminoácidos como profármacos.

[0836] Tabla 3

[0839]

[0841] Tabla 4

[0844]

[0846] Tabla 5

[0849]

[0851] Tabla 6

[0852]

[0854] Tabla 7

[0857]

[0859] Tabla 8

[0862]

[0864] Tabla 9

[0867]

[0869] Tabla 10

[0870]

[0872] Tabla 11

[0874]

[0876] Tabla 12

[0878]

Claims (13)

1. REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde

R<1>es -NHR<1a>;

R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NH<2>; y

R<1b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

2. Un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde

R<2>es -OH o -NHR<2a>;

R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NH<2>;

R<2b>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un compuesto de fórmula (III), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde R<3>es -CH<3>o -CH(CH<3>)<2>.

4. Un compuesto de fórmula (Ib), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde

R<1>es -NHR<1a>;

R<1a>es -H o -C(O)CH(R<1b>)NHR<1c>; y

R<1b>es metilo o isopropilo; y R<1c>es -H.

5. Un compuesto de fórmula (IIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde

R<2>es -OH o -NHR<2a>;

R<2a>es -H o -C(O)CH(R<2b>)NHR<2c>;

R<2b>es metilo o isopropilo; y R<2c>es -H.

6. El compuesto de la reivindicación 4 o 5,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un compuesto de fórmula (IIIb), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en donde R<3>es metilo o isopropilo.

7. Un compuesto seleccionado de:

,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. El compuesto de la reivindicación 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene la siguiente estructura:

,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento.

11. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.

12. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.

13. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, para su uso de la reivindicación 12, en donde la enfermedad inflamatoria respiratoria se selecciona de fibrosis pulmonar idiopática, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y fibrosis pulmonar inducida químicamente.