ES3058840T3 - Salmonid oil compositions for use in the treatment of eosinophilic related inflammatory and respiratory conditions - Google Patents

Salmonid oil compositions for use in the treatment of eosinophilic related inflammatory and respiratory conditions

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Abstract

Se describen aquí métodos para el tratamiento de ciertas afecciones, trastornos y enfermedades inflamatorias y/o respiratorias en humanos mediante composiciones de aceite de salmónido. Estas composiciones se administran por vía oral y pueden obtenerse mediante hidrólisis enzimática suave de recortes de salmónidos. Entre los humanos aptos para estos tratamientos se incluyen aquellos con alta resistencia a intervenciones médicas y quirúrgicas, como los tratamientos con esteroides. También se ha observado que las composiciones de aceite de salmónido descritas aquí reducen la función efectora de los eosinófilos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Composiciones de aceite de salmónidos para su uso en el tratamiento de estados inflamatorios y respiratorios relacionados con eosinofilia
[0003] Esta solicitud reivindica la prioridad y el beneficio de las solicitudes provisionales estadounidenses n.<os>63/006.327, presentada el 7 de abril de 2020, y 63/114.960, presentada el 17 de noviembre de 2020.
[0004] Campo
[0005] La presente divulgación se refiere de manera general a tratamientos respiratorios, y más específicamente al uso de productos de aceite de salmónidos para tratar estados, enfermedades o trastornos respiratorios, tales como asma, en un subgrupo de pacientes que muestran resistencia a terapias con esteroides.
[0006] Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano mediante terapia.
[0007] Antecedentes
[0008] La inflamación es un problema inmunológico. Por un lado, los cambios fisiológicos que acompañan a la inflamación permiten montar una respuesta aguda frente a amenazas externas que de lo contrario habrían acabado con la especie humana. Por otro lado, la inflamación crónica, en la que la edad o factores de estrés externos mantienen el sistema inmunitario excesivamente activado, puede contribuir a muchas enfermedades debilitantes que van desde Alzheimer hasta diabetes y asma bronquial.
[0009] Un eosinófilo es un tipo de glóbulo blanco almacenado en tejidos a través de todo el organismo y se reponen continuamente a partir de la médula ósea. Los eosinófilos tienen normalmente una vida útil de dos días en la sangre, pero estados inflamatorios tales como infecciones y enfermedades alérgicas prolongarán la vida útil hasta dos semanas mediante citocinas de activación de eosinófilos. Véase Park YM & Bochner BS, Allergy Asthma Immunol Res. 2010, 2:87-101. Un recuento de eosinófilos es un análisis de sangre que mide la cantidad de eosinófilos en el cuerpo humano. Los niveles elevados, habitualmente medidos durante análisis de hemogramas completos de rutina, indican una infección o alergia.
[0010] Los eosinófilos activados, que se fomentan por citocinas de activación de eosinófilos en estados inflamatorios, son una fuente principal de especies reactivas de oxígeno, proteínas citotóxicas y citocinas proinflamatorias. Señalizan la activación de células tisulares residentes tales como células epiteliales, endoteliales y fibroblastos, conduciendo a la progresión de la inflamación y secreción de mucosa. Por tanto, los eosinófilos son potentes activadores y moduladores de enfermedades tales como asma bronquial, dermatitis atómica y colitis ulcerosa. Véase Hogan SP. Int Arch Allergy Immunol.2007, 143 (sup.1): 3-14; Simon Det al., Allergy.2004, 59:561-570; Wedemeyer J & Vosskuhle K., Best Pract Res Clin Gastroenterol.2008, 22:537-549; y Mickkleborough T. D.et al., Chest.2006, 129(1):39-40.
[0011] Además, en personas asmáticas, los niveles de proteínas granulares de eosinófilos tales como proteína catiónica de eosinófilos (ECP) y peroxidasa de eosinófilos (EPO) se correlacionan en gran medida con la intensidad del asma. Véase Parra A,et al., J Investig Allergol Clin Immunol. 1999; 9:27-34. También puede producirse inflamación eosinofílica de las vías respiratorias superiores de manera independiente de alergia, tal como se observa en sujetos con rinosinusitis crónica (CRS). Véase Hutcheson PS,et al., J Rhinol Allergy. 2010, 24:405-408. Tales individuos representan un subgrupo único que son en gran medida resistentes a intervenciones médicas y quirúrgicas y que pueden mostrar un beneficio inmediato mediante terapia que selecciona como diana funciones efectoras y de expansión eosinofílica.
[0012] Breve sumario
[0013] En algunos aspectos, en el presente documento se proporcionan tratamientos respiratorios, tales como tratamientos para el asma, que usan aceite de salmónidos. En algunas realizaciones, el asma es asma bronquial. En determinadas realizaciones, los tratamientos proporcionados van dirigidos a un subgrupo de pacientes que son en gran medida resistentes a intervenciones médicas y quirúrgicas, incluyendo terapias con esteroides.
[0014] En determinados aspectos, se proporciona un método para tratar un estado, trastorno o enfermedad inflamatorio en un ser humano que lo necesita, que comprende: administrar al ser humano una dosis eficaz de una composición que comprende aceite de salmónidos o al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de aceite de salmónidos para tratar el estado, trastorno o enfermedad inflamatorio.
[0015] En determinados aspectos, se proporciona un método para tratar un estado, trastorno o enfermedad respiratorio en un ser humano que lo necesita, que comprende: administrar al ser humano una dosis eficaz de una composición que comprende aceite de salmónidos o al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de aceite de salmónidos para tratar el estado, trastorno o enfermedad inflamatorio.
[0016] En algunas variaciones de los métodos proporcionados en el presente documento, el estado, trastorno o enfermedad tratado es un estado, trastorno o enfermedad eosinofílico. En algunas realizaciones, un estado, trastorno o enfermedad inflamatorio es un estado, trastorno o enfermedad inflamatorio eosinofílico. En algunas realizaciones, un estado, trastorno o enfermedad respiratorio es un estado, trastorno o enfermedad respiratorio eosinofílico.
[0017] En determinados aspectos, se proporciona un método para reducir la función efectora de eosinófilos en un ser humano que lo necesita, que comprende administrar al ser humano una composición que comprende aceite de salmónidos o al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de aceite de salmónidos para reducir la función efectora de eosinófilos.
[0018] En algunas realizaciones de los aspectos anteriores, el aceite de salmónidos es aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática. En determinadas variaciones, el aceite de salmónidos se obtiene a partir de hidrólisis enzimática leve de restos de peces salmónidos.
[0019] En algunas realizaciones de los métodos proporcionados en el presente documento, la composición se administra por vía oral. En algunas variaciones, la composición se inhala. En algunas variaciones, la composición se administra por vía nasal. En algunas variaciones, la composición se inyecta. En algunas variaciones, la composición se administra por vía tópica.
[0020] En determinados aspectos, también se proporcionan composiciones de aceite de salmónidos que comprenden al menos un compuesto activo biológico descrito en el presente documento. En determinados aspectos, se proporcionan composiciones que comprenden al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de aceite de salmónidos. En otro aspecto, se proporciona el uso de tales composiciones para tratar los diversos estados, trastornos o enfermedades descritos en el presente documento.
[0021] En otros aspectos, se proporciona un artículo de fabricación, que comprende: un recipiente que comprende una composición que comprende aceite de salmónidos o al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de aceite de salmónidos; y una etiqueta que contiene instrucciones de uso de tal composición.
[0022] En aún otros aspectos, se proporciona un kit, que comprende: una forma de dosificación de una composición de aceite de salmónidos o una composición que comprende al menos un compuesto activo biológico aislado a partir de una composición de aceite de salmónidos: y un prospecto que contiene instrucciones de uso de tal composición.
[0023] En algunas variaciones de los aspectos anteriores, la forma de dosificación es un jarabe, producto masticable, cápsula o gel blando.
[0024] Descripción de las figuras
[0025] La presente solicitud puede entenderse haciendo referencia a la siguiente descripción tomada junto con las figuras adjuntas.
[0026] Las figuras 1 y 3 representan el cambio de forma (100% como nivel inicial) de PMNL en función de la concentración de CCL11, con diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0027] Las figuras 2 y 4 representan el cambio de CB11b (100% como nivel inicial) en la superficie de PMNL en función de la concentración de CCL11, en diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0028] Descripción detallada
[0029] La siguiente descripción establece métodos, parámetros y similares a modo de ejemplo. Sin embargo, debe reconocerse que no se pretende que tal descripción suponga una limitación sobre el alcance de la presente divulgación, sino que en vez de eso se proporciona como descripción de realizaciones a modo de ejemplo.
[0030] En algunos aspectos, en el presente documento se proporcionan métodos para tratar estados, trastornos o enfermedades inflamatorios en seres humanos que lo necesitan mediante administración oral de composiciones de aceite de salmónidos.
[0031] Composiciones de aceite de salmónidos, y métodos de producción de las mismas
[0032] En algunas realizaciones, las composiciones administradas en los métodos proporcionados en el presente documento son composiciones de aceite de salmónidos. Los salmónidos son una familia de peces del ordenSalmoniformes, e incluye, por ejemplo, salmón, trucha, salvelino, corégonos y tímalos.
[0033] En algunos aspectos, las composiciones de aceite de salmónidos comprenden aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática. En algunas variaciones, el aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática se obtiene a partir de hidrólisis enzimática leve de restos de peces salmónidos. En algunas variaciones, las composiciones de aceite de salmónidos son naturales, sin refinar y se liberan suavemente a partir de salmónidos. En algunas variaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos no usa, o no requiere usar, productos químicos, disolventes, alta presión o calor. En el documento WO 2019/245380 A1 se dan a conocer métodos para obtener aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática.
[0034] Las composiciones de aceite de salmónidos usadas en los métodos descritos en el presente documento se preparan mediante hidrólisis enzimática leve, que no requiere productos químicos duros, destilación fraccionada, reesterificación, fraccionamiento por enfriamiento (del inglés,winterization), alta presión y/o calor. Por ejemplo, en algunas variaciones, las composiciones de aceite de salmónidos usadas en los métodos descritos en el presente documento se preparan mediante hidrólisis enzimática que no requiere el uso de ácidos o bases fuertes (por ejemplo, incluyendo ácido o base 3 N o superior), destilación fraccionada, reesterificación, fraccionamiento por enfriamiento, presiones de al menos 30 psi, o calor a temperaturas de al menos 130°C. El uso de las condiciones de hidrólisis enzimática leve descritas en el presente documento son generalmente más leves que técnicas usadas con frecuencia en la técnica para producir aceite de salmónidos. Por ejemplo, destilación fraccionada o procesamiento “prensado en frío”, que incluye el uso de ácido o base fuerte, destilación fraccionada, reesterificación, fraccionamiento por enfriamiento, alta presión y/o calor. Cuando se usa hidrólisis enzimática leve tal como se describe en el presente documento, la composición resultante tiene componentes biológicamente activos que son sorprendentemente beneficiosos para tratar estados relacionados con eosinófilos o disfunción de eosinófilos.
[0035] En algunas realizaciones, el procedimiento de hidrólisis enzimática para producir las composiciones de aceite de salmónidos usa ácido a menos de 3 N, menos de 2,5 N, menos de 2 N, menos de 1,5 N, menos de 1 N, menos de 0,5 N, menos de 0,1 N, menos de 0,01 N, o menos de 0,001 N. En algunas realizaciones, el procedimiento de hidrólisis enzimática no usa o no requiere usar ningún ácido adicional. En algunas variaciones de lo anterior, el ácido es un ácido fuerte. En algunas variaciones de lo anterior, el ácido es HCl o HNO<3>, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos usa base a menos de 3 N, menos de 2,5 N, menos de 2 N, menos de 1,5 N, menos de 1 N, menos de 0,5 N, menos de 0,1 N, menos de 0,01 N, o menos de 0,001 N. En algunas realizaciones, el procedimiento no usa o no requiere usar ninguna base adicional. En algunas variaciones de lo anterior, la base es una base fuerte (tal como NaOH y/o KCl).
[0036] En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos obtenido a partir de hidrólisis enzimática leve no se mezcla o no requiere mezclarse con un ácido con una concentración de 3 N o superior, 2,5 N o superior, 2 N o superior, 1,5 N o superior, 1 N o superior, 0,5 N o superior, 0,1 N o superior, 0,01 N o superior, o 0,001 N o superior. En algunas variaciones de lo anterior, el ácido es un ácido fuerte (tal como HCl y/o HNO<3>).
[0037] En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos obtenido a partir de hidrólisis enzimática leve no se mezcla o no requiere mezclarse con una base con una concentración de 3 N o superior, 2,5 N o superior, 2 N o superior, 1,5 N o superior, 1 N o superior, 0,5 N o superior, 0,1 N o superior, 0,01 N o superior, o 0,001 N o superior. En algunas variaciones de lo anterior, la base es una base fuerte (tal como NaOH y/o KOH).
[0038] En algunas realizaciones, se añaden menos de 3 mmol, menos de 2,5 mmol, menos de 2 mmol, menos de 1,5 mmol, menos de 1 mmol, menos de 0,5 mmol, menos de 0,1 mmol, menos de 0,01 mmol, o menos de 0,01 mmol de ácido o H<+>por gramo de aceite de salmón sometido a extracción enzimática. En algunas realizaciones, no se añade o se requiere añadir ácido o H<+>al aceite de salmón sometido a extracción enzimática.
[0039] En algunas realizaciones, se añaden menos de 3 mmol, menos de 2,5 mmol, menos de 2 mmol, menos de 1,5 mmol, menos de 1 mmol, menos de 0,5 mmol, menos de 0,1 mmol, menos de 0,01 mmol, o menos de 0,01 mmol de base o OH<->por gramo de aceite de salmón sometido a extracción enzimática, menos de 6 mmol. En algunas realizaciones, no se añade o se requiere añadir base o OH<->al aceite de salmón sometido a extracción enzimática.
[0040] En algunas realizaciones, no se añade o se requiere añadir ácido durante o después de la hidrólisis enzimática para producir el aceite de salmónidos usado en los métodos en el presente documento. En algunas realizaciones, se añade ácido a menos de 3 N, menos de 2,5 N, menos de 2 N. menos de 1,5 N. menos de 1 N, menos de 0,5 N, menos de 0,1 N, menos de 0,01 N, o menos de 0,001 N durante o después de la hidrólisis enzimática. En algunas variaciones de lo anterior, el ácido es un ácido fuerte (tal como HCl y/o HNO<3>).
[0041] En algunas realizaciones, no se añade o se requiere añadir base durante o después de la hidrólisis enzimática para producir el aceite de salmónidos usado en los métodos en el presente documento. En algunas realizaciones, se añade base a menos de 3 N, menos de 2,5 N, menos de 2 N, menos de 1,5 N, menos de 1 N, menos de 0,5 N, menos de 0,1 N, menos de 0,01 N, o menos de 0,001 N durante o después de la hidrólisis enzimática. En algunas realizaciones, la base es una base fuerte (tal como NaOH y/o KOH).
[0042] En algunas realizaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos se realiza a una temperatura por debajo de 130°C, por debajo de 120°C, por debajo de 110°C, por debajo de 100°C, por debajo de 90°C, por debajo de 80°C, por debajo de 70°C, por debajo de 60°C, por debajo de 55°C, por debajo de 50°C, por debajo de 45°C, por debajo de 40°C, por debajo de 35°C, por debajo de 30°C o por debajo de 25°C. En algunas realizaciones, la temperatura durante o después de la hidrólisis enzimática se mantiene por debajo de 130°C, por debajo de 120°C, por debajo de 110°C, por debajo de 100°C, por debajo de 90°C, por debajo de 80°C, por debajo de 70°C, por debajo de 60°C, por debajo de 55°C, por debajo de 50°C, por debajo de 45°C, por debajo de 40°C, por debajo de 35°C, por debajo de 30°C, o por debajo de 25°C.
[0043] En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos obtenido a partir de hidrólisis enzimática leve no se expone o se requiere exponerlo a una temperatura de 150°C o superior, 140°C o superior, 130°C o superior, 120°C o superior, 110°C o superior, 100°C o superior, 90°C o superior, 80°C o superior, 70°C o superior, 60°C o superior, 55°C o superior, 50°C o superior, 45°C o superior, 40°C o superior, 35°C o superior, 30°C o superior, o 25°C o superior. En algunas realizaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos se realiza a una presión por debajo de 2 atm, por debajo de 1,5 atm, por debajo de 1,4 atm, por debajo de 1,3 atm, por debajo de 1,2 atm, por debajo de 1,1 atm, o a o aproximadamente a 1,0 atm. En algunas realizaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos se realiza a una presión por debajo de 30 psi, por debajo de 25 psi, por debajo de 20 psi, por debajo de 15 psi, o a o aproximadamente a 14,7 psi.
[0044] En algunas realizaciones, la presión durante o después de la hidrólisis enzimática se mantiene por debajo de 2 atm, por debajo de 1,5 atm, por debajo de 1,4 atm, por debajo de 1,3 atm, por debajo de 1,2 atm, por debajo de 1,1 atm, o a o aproximadamente a 1,0 atm. En algunas realizaciones, la presión durante o después de la hidrólisis enzimática se mantiene por debajo de 30 psi, por debajo de 25 psi, por debajo de 20 psi, por debajo de 15 psi, o a o aproximadamente a 14,7 psi.
[0045] En algunas realizaciones, el aceite de salmón sometido a extracción enzimática no se expone o se requiere exponerlo a más de 2 atm, más de 1,5 atm, más de 1,4 atm, más de 1,3 atm, más de 1,2 atm, más de 1,1 atm, o más de 1,0 atm. En algunas realizaciones, el aceite de salmón sometido a extracción enzimática no se expone o se requiere exponerlo a más de 30 psi, más de 25 psi, más de 20 psi, más de 15 psi, o más de 14,7 psi.
[0046] En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos proporcionado en el presente documento se produce sin usar uno o más de los siguientes procedimientos o condiciones: (i) mezclar con una concentración de 3 N o superior de ácido; (ii) mezclar con una concentración de 3 N o superior de base; (iii) destilación fraccionada: (iv) reesterificación; (v) fraccionamiento por enfriamiento; (vi) temperatura de 130°C o superior, o (vi) presión de 2 atm o superior. En algunas variaciones, el aceite de salmónidos proporcionado en el presente documento se produce sin usar ninguno de los procedimientos o condiciones anteriormente indicados.
[0047] En determinadas variaciones, el procedimiento para obtener las composiciones de aceite de salmónidos comprende el uso de enzimas de proteasa que contienen menos de un determinado porcentaje (por ejemplo, menos del 1% o menos del 0,5%) de actividad lipasa relativa, materias primas de restos que tienen menos de unas determinadas horas de antigüedad desde el matadero (por ejemplo, menos de 24 horas de antigüedad desde el matadero), y/o mezclado en turbina durante la hidrólisis enzimática. Esto permite la extracción cuantitativa de todos los componentes lipídicos encontrados en el pez entero, con pérdida mínima a ninguna pérdida de constituyentes biológicamente activos minoritarios, distintos de ácidos grasos.
[0048] Además, usar enzimas con baja actividad lipasa minimiza la cantidad de moléculas de ácidos grasos libres en la mezcla, en la que estas moléculas de ácidos grasos pueden degradar constituyentes biológicamente activos y/o acortar la vida útil de almacenamiento del aceite de salmónidos con sus propiedades prooxidantes. Por tanto, usar enzimas con baja actividad lipasa, materias primas de restos que son relativamente frescas, y mezclado con turbina para acortar el periodo de tiempo para la hidrólisis enzimática, contribuye todo ello a producir aceite de salmónidos con un efecto máximo sobre las funciones eosinofílicas.
[0049] En algunas realizaciones, el procedimiento para producir las composiciones de aceite de salmónidos comprende el uso de enzimas que contienen menos del 3%, menos del 2%, menos del 1%, menos del 0,9%, menos del 0,8%, menos del 0,7%, menos del 0,6%, menos del 0,5%, menos del 0,4%, menos del 0,3%, menos del 0,2%, menos del 0,15%, menos del 0,1%, menos del 0,05%, o menos del 0,01% de actividad lipasa. En algunas realizaciones, la hidrólisis enzimática leve de restos de peces salmónidos comprende el uso de enzimas con menos del 3%, menos del 2%, menos del 1%, menos del 0,9%, menos del 0,8%, menos del 0,7%, menos del 0,6%, menos del 0,5%, menos del 0,4%, menos del 0,3%, menos del 0,2%, menos del 0,15%, menos del 0,1%, menos del 0,05%, o menos del 0,01% de actividad lipasa.
[0050] En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática comprende menos del 3%, menos del 2,5%, menos del 2%, menos del 1,5%, menos del 1%, menos del 0,9%, menos del 0,8%, menos del 0,7%, menos del 0,6%, menos del 0,5%, menos del 0,4%, menos del 0,3%, menos del 0,2%, menos del 0,1%, menos del 0,05%, o menos del 0,01% de ácido graso libre. En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática comprende menos del 3%, menos del 2,5%, menos del 2%, menos del 1,5%, menos del 1%, menos del 0,9%, menos del 0,8%, menos del 0,7%, menos del 0,6%, menos del 0,5%, menos del 0,4%, menos del 0,3%, menos del 0,2%, menos del 0,1%, menos del 0,05%, o menos del 0,01% de ácido graso libre sin someterse a fraccionamiento por enfriamiento o reesterificación. En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática comprende menos del 0,5% de ácido graso libre sin someterse a fraccionamiento por enfriamiento o reesterificación. En algunas realizaciones, el aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática descrito en el presente documento se prepara a partir de salmón que tiene menos de 1 hora, menos de 2 horas, menos de 3 horas, menos de 4 horas, menos de 5 horas, menos de 6 horas, menos de 7 horas, menos de 8 horas, menos de 9 horas, menos de 10 horas, menos de 11 horas, menos de 12 horas, menos de 24 horas, menos de 36 horas, menos de 48 horas, entre 2-6 horas, entre 4-8 horas, entre 6-10 horas, o entre 2-10 horas desde la matanza del salmón.
[0051] En una realización, la composición de aceite de salmónidos es aceite de salmón OmeGo®, aceite de salmón Cardio® o aceite de salmón Brilliant®, cada uno de los cuales son variaciones de aceite de salmón sometido a extracción enzimática comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA.
[0052] Se observó inesperadamente que ácidos grasos comunes encontrados en aceites de pescado en formas de triglicéridos o fosfólidos no eran responsables de reducir la función efectora de eosinófilos. En vez de eso, es la presencia de determinados constituyentes biológicamente activos, minoritarios, presentes en las composiciones de aceite de salmónidos descritas en el presente documento que tienen tal efecto.
[0053] En determinadas realizaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) componentes de triglicéridos de ácidos grasos minoritarios. En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) ácidos saturados. En determinadas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) ácido caproico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido behénico, o ácido lignocérico, o cualquier combinación de los mismos.
[0054] En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) ácidos monoinsaturados. En determinadas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) ácido miristoleico, ácido heptadecenoico, ácido elaídico, ácido gadoleico, ácido erúcico, ácido brasídico, y/o ácido nervónico.
[0055] El/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) ácido gamma-linolénico, ácido columbínico, ácido estearidónico, ácido de Mead y/o ácido dihomo-gamma-linolénico.
[0056] En otras variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) molécula(s) orgánica(s) pequeña(s). En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) terpenos (por ejemplo, ligustilida), sesquiterpenos (por ejemplo, germacreno), fenoles (por ejemplo, timol, eugenol, carvacrol), alcoholes (por ejemplo, linalol, citronelol, terpineol), alcoholes sesquiterpénicos (por ejemplo, bisbalol, santalol), cetonas (por ejemplo, tujona, pinacanfona, italidona), ésteres (por ejemplo, acetato de linalilo, acetato de geranilo, formiato de citronelilo), lactonas y cumarinas (por ejemplo, helenalina, elecampano, furocumarina), éteres (por ejemplo, chavicol), derivados de esteroides (por ejemplo, sitosterol, estigmasterol), y/o derivados de ftalida (por ejemplo, 3-butiliden-4,5-dihidroftalida).
[0057] En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) lipopéptido(s). En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) lipopéptidos lineales y/o cíclicos. En determinadas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) incluye(n) iturina A, hoiamidas, heronamidas, laxaficina, apramidas, dragonamidas, gageotetrinas, lingkiabellinas, ciclodicidinas, parguerina, pumilacidina, lipopéptidos de sulforeido, fengicinas, mebamamidas, microcolinas, penicimutamidas, sulfoglicolípidos, halovir, kahalalida y/o tuftsina.
[0058] En algunas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) lipopéptidos lineales. En determinadas variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) microcolina A. En una variación, las composiciones de aceite de salmónidos comprenden microcolina A a una concentración de al menos 5 μg/ml, al menos 10 μg/ml, al menos 20 μg/ml, o al menos 25 μg/ml, o entre 5 μg/ml y 100 μg/ml, entre 10 μg/ml y 100 μg/ml, o entre 20 μg/ml y 75 μg/ml. En otras variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) protectina(s).
[0059] En aún otras variaciones, el/los constituyente(s) biológicamente activo(s) en las composiciones de aceite de salmónidos incluye(n) lipoxina(s).
[0060] En algunas variaciones del/de los constituyente(s) biológicamente activo(s) anterior(es) descrito(s), el/los compuesto(s) puede(n) estar presente(s) en forma de sal. En determinadas variaciones, el/los compuesto(s) puede(n) estar presente(s) en cualquier combinación de los mismos.
[0061] Estados, enfermedades o trastornos
[0062] Las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento son para su uso en el tratamiento de un estado, trastorno o enfermedad inflamatorio eosinofílico o un estado, trastorno o enfermedad respiratorio eosinofílico, tal como se da a conocer en las reivindicaciones adjuntas.
[0063] En algunas variaciones, “tratamiento” o “tratar” es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados incluyendo resultados clínicos. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados pueden incluir uno o más de lo siguiente:
[0064] (i) reducir uno o más síntomas resultantes del estado, enfermedad o trastorno:
[0065] (ii) reducir el alcance de la enfermedad y/o estabilizar el estado, enfermedad o trastorno (por ejemplo, retardar el empeoramiento del estado, enfermedad o trastorno):
[0066] (iii) retardar la dispersión del estado, enfermedad o trastorno,
[0067] (iv) retardar o ralentizar la recidiva del estado, enfermedad o trastorno y/o la progresión del estado, enfermedad o trastorno;
[0068] (v) mejorar el estado patológico y/o proporcionar una remisión (ya sea parcial o total) del estado, enfermedad o trastorno y/o reducir la dosis de uno o más de otros medicamentos requeridos para tratar el estado, enfermedad o trastorno,
[0069] (vi) aumentar la calidad de vida; y/o
[0070] (vii) prolongar la supervivencia.
[0071] Las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento pueden usarse para tratar asma, neumonía, bronquiectasia, enfisema, tuberculosis, atelectasia pulmonar, fibrosis pulmonar, alveolitis fibrosante, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), rinitis alérgica, rinosinusitis crónica (CRS) y/o síndrome de síndrome de enfermedad respiratoria aguda.
[0072] El estado, enfermedad o trastorno es un trastorno inflamatorio crónico. En determinadas realizaciones, el trastorno inflamatorio crónico es un trastorno inflamatorio crónico de las vías respiratorias. En determinadas variaciones, el estado, enfermedad o trastorno es una enfermedad pulmonar inflamatoria. En algunas variaciones, el estado, enfermedad o trastorno implica estrechamiento y/o inflamación de las vías respiratorias, haciendo de ese modo que resulte difícil respirar y desencadenando tos, respiración sibilante y/o dificultad para respirar. En determinadas variaciones, el estado, enfermedad o trastorno es asma. En determinadas variaciones, el asma es asma bronquial. En una variación, el estado, enfermedad o trastorno implica asma resistente al tratamiento con esteroides y constricciones de las vías respiratorias.
[0073] El estado, enfermedad o trastorno es una alergia o una inflamación alérgica.
[0074] El estado, enfermedad o trastorno es una enfermedad respiratoria viral. En algunas variaciones, el estado, enfermedad o trastorno es síndrome respiratorio agudo grave. En determinadas variaciones, el síndrome respiratorio agudo grave está provocado por un coronavirus.
[0075] En algunas variaciones, el ser humano que lo necesita es un individuo con deterioro pulmonar. En determinadas variaciones, el individuo con deterioro pulmonar tiene acumulación de líquido en los alveolos en los pulmones. Este líquido puede escapar de los vasos sanguíneos más pequeños en los pulmones al interior de los alveolos debido a la destrucción de la membrana protectora en los alveolos. La membrana que normalmente mantiene este líquido en los vasos puede destruirse debido a una perturbación en la respuesta inmunitaria debido a lesión o enfermedad grave. El líquido entra en los alveolos y evita que los pulmones se llenen con suficiente aire, lo cual significa que cada vez llega menos oxígeno al torrente sanguíneo. Esto priva a los órganos del oxígeno que necesitan para funcionar, lo cual puede provocar insuficiencia multiorgánica que da como resultado la muerte.
[0076] En el mismo se da a conocer un método para tratar seres humanos con deterioro pulmonar hospitalizados que lo necesitan, que comprende administrar las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, tal como se da a conocer en las reivindicaciones adjuntas, al ser humano para reducir o retardar la necesidad de proporcionar respiración asistida al ser humano.
[0077] En algunas variaciones, “retardar” el desarrollo de un estado, enfermedad o trastorno significa aplazar, dificultar, ralentizar, retrasar, estabilizar y/o posponer el desarrollo del estado, enfermedad o trastorno. Este retardo puede ser de diversas duraciones de tiempo, dependiendo del historial del estado, enfermedad o trastorno y/o individuo que está tratándose.
[0078] El estado, trastorno o enfermedad tratado es un estado, trastorno o enfermedad respiratorio o inflamatorio eosinofílico. Las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento mejoran la eficacia antiinflamatoria mediante una reducción de la función efectora de eosinófilos. Por tanto, en el mismo se proporciona un método para reducir la función efectora de eosinófilos en un ser humano que lo necesita, que comprende administrar las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, al ser humano para reducir la función efectora de eosinófilos.
[0079] Subpoblación de pacientes
[0080] Los métodos proporcionados en el presente documento implican tratar a un ser humano que lo necesita. En determinadas realizaciones, el ser humano es en gran medida resistente a intervenciones médicas y quirúrgicas para tratar estados, trastornos o enfermedades inflamatorios eosinofílicos descritos en el presente documento. En una realización, el ser humano muestra o tiene resistencia a terapia con esteroides. Por ejemplo, en una variación, el ser humano tiene asma resistente al tratamiento con esteroides.
[0081] En algunas variaciones de lo anterior, el ser humano es un niño. En determinadas variaciones, el ser humano tiene menos de 18 años de edad, menos de 12 años de edad, menos de 10 años de edad, menos de 5 años de edad, menos de 2 años de edad, o menos de 1 año; o entre 2 años de edad y 12 años de edad.
[0082] Formulaciones
[0083] En algunas realizaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se formulan para su administración oral. Las formas adecuadas para la administración oral pueden incluir, por ejemplo, comprimidos, pastillas, cápsulas, obleas, grageas, pastillas para chupar, líquidos, geles, jarabes, suspensiones espesas, elixires, suspensiones, aerosoles o polvos. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento están en forma de jarabes, cápsulas y geles blandos (incluyendo, por ejemplo, gominolas para masticar).
[0084] Pueden encontrarse técnicas para la formulación y administración de las composiciones en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18ª ed. Mack Publishing Co, Easton, Pa., 1990. Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden fabricarse usando cualquier método convencional, por ejemplo, procedimientos de mezclado, disolución, granulación, elaboración de grageas, levigación, emulsionamiento, encapsulación, atrapamiento, hilatura por fusión, secado por pulverización, o liofilización. Una formulación farmacéutica óptima puede determinarse por un experto en la técnica dependiendo de la vía de administración y la dosificación deseada. Tales formulaciones pueden influir en el estado físico, estabilidad, tasa de liberaciónin vivoy tasa de aclaramientoin vivodel agente administrado.
[0085] En algunas variaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se administran al ser humano como una dosificación unitaria, por ejemplo, en forma de jarabes, cápsulas y geles blandos (incluyendo, por ejemplo, gominolas para masticar) tal como se describe en el presente documento. En una variación, “forma de dosificación unitaria” se refiere a unidades físicamente diferenciadas, adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, que pueden estar en un portador farmacéuticamente aceptable.
[0086] Tal como se usa en el presente documento, por “farmacéuticamente aceptable” quiere decirse un material que no es indeseable desde el punto de vista biológico o de otro modo. Por ejemplo, el material puede incorporarse en una composición farmacéutica administrada a un individuo sin provocar efectos biológicos no deseados significativos o interaccionar de una manera perjudicial con ninguno de los otros componentes de la composición en la que está contenido. Por tanto, en algunas realizaciones, los portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables cumplen las normas requeridas de pruebas toxicológicas y de fabricación y/o están incluidos en la Inactive Ingredient Guide (Guía de compuestos inactivos) preparada por la Food and Drug Administration (Administración de Medicamentos y Fármacos) de los Estados Unidos.
[0087] En algunas realizaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se formulan para inhalación. Las formas adecuadas para inhalación pueden incluir, por ejemplo, polvo seco, formulación líquida no acuosa o formulación líquida (por ejemplo, para nebulización).
[0088] En algunas realizaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se formulan para inyección. En algunas realizaciones, las formulaciones adecuadas para inyección pueden comprenden uno o más vehículos acuosos o no acuosos, uno o más agentes antimicrobianos, uno o más antioxidantes, uno o más tampones, uno o más agentes de carga, uno o más agentes quelantes, uno o más agentes solubilizantes, uno o más tensioactivos, y/o uno o más agentes de tonicidad. En algunas realizaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se formulan para administración tópica. Las formas adecuadas para administración tópica pueden incluir, por ejemplo, disolución, loción, crema, pomada, gel, pasta, espuma de aerosol o pulverización, polvo, sólido o parche transdérmico. En algunas realizaciones, las formulaciones adecuadas para administración tópica pueden comprender agua, aceite, alcohol, propilenglicol, uno o más conservantes, uno o más emulsionantes, uno o más promotores de la absorción y/o una o más fragancias.
[0089] En algunas realizaciones, las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, o composiciones que comprenden compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se administran por vía oral, se inhalan, se inyectan o se administran por vía tópica.
[0090] Dosificaciones
[0091] En algunas realizaciones, los métodos proporcionados comprenden administrar al ser humano que lo necesita una cantidad eficaz de la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento. En algunas variaciones, una “cantidad eficaz” se refiere a tal cantidad de una composición o compuesto activo biológico de la invención que será eficaz en una forma terapéutica dada. En determinadas variaciones, una cantidad eficaz de la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, es una cantidad suficiente para reducir la función efectora de eosinófilos en el ser humano, y de ese modo tratar al ser humano que padece los estados, enfermedades o trastornos descritos en el presente documento, o aliviar los síntomas existentes de tales estados, enfermedades o trastornos.
[0092] En algunas variaciones, los niveles de dosificación a modo de ejemplo de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento para un ser humano pueden ser de entre 4 g y 10 g al día, o entre 4 g y 6 g al día.
[0093] En algunas variaciones, los niveles de dosificación a modo de ejemplo del/de los compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento para un ser humano pueden ser de entre 10 mg y 1000 mg.
[0094] La pauta posológica final se determina por el médico encargado en vista de la buena práctica médica, teniendo en cuenta diversos factores que modifican la acción de la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, la identidad y gravedad del estado patológico, la capacidad de respuesta del sujeto, la edad, estado, peso corporal, sexo y dieta del sujeto, y la gravedad de cualquier infección. Los factores adicionales que pueden tenerse en cuenta incluyen tiempo y frecuencia de administración, combinaciones de fármacos, sensibilidades de reacción y tolerancia/respuesta a la terapia. Un refinamiento adicional de la dosificación apropiada para el tratamiento que implica cualquiera de las formulaciones mencionadas en el presente documento se realiza de manera rutinaria por el experto sin excesiva experimentación, especialmente a la luz de la información sobre dosificación y los ensayos dados a conocer, así como los datos farmacocinéticos observados en ensayos clínicos con seres humanos.
[0095] Una cantidad eficaz puede estar en una o más dosis. Es decir, puede requerirse una única dosis o múltiples dosis para lograr el criterio de valoración del tratamiento deseado. En determinadas realizaciones, la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se administra una vez, dos veces o tres veces al día. En determinadas realizaciones, la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se administra una o dos veces al día. En determinadas realizaciones, la composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, se administra una vez al día.
[0096] Artículos de fabricación y kits
[0097] La composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, que puede formularse en uno o más portadores, excipientes u otros componentes farmacéuticamente aceptables puede prepararse, colocarse en un recipiente apropiado, y etiquetarse para el tratamiento de un estado, enfermedad o trastorno indicado. Por consiguiente, en determinados aspectos, también se proporciona un artículo de fabricación, tal como un recipiente que comprende una forma de dosificación de composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, y una etiqueta que contiene instrucciones de uso de tales composiciones o compuesto(s) activo(s).
[0098] En algunas realizaciones, el artículo de fabricación es un recipiente que comprende una forma de dosificación de composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, y uno o más portadores, excipientes u otros componentes farmacéuticamente aceptables, tal como se da a conocer en las reivindicaciones adjuntas. En una realización de los artículos de fabricación descritos en el presente documento, la forma de dosificación es un jarabe, cápsula y gel blando (incluyendo, por ejemplo, gominolas para masticar).
[0099] En determinados aspectos, también se proporcionan kits, tal como se da a conocer en las reivindicaciones adjuntas. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un kit puede comprender una forma de dosificación de composición de aceite de salmónidos, o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos proporcionadas en el presente documento, y un prospecto que contiene instrucciones de uso de la composición/compuesto(s) activo(s) en el tratamiento de un estado, enfermedad o trastorno. Las instrucciones de uso en el kit pueden ser para tratar una inflamación respiratoria eosinofílica o inflamación del tracto respiratorio, incluyendo, por ejemplo, asma, asma bronquial o síndrome respiratorio agudo.
[0100] Las etiquetas y prospectos de los artículos de fabricación y kits, respectivamente, contienen instrucciones para tratar cualquiera de los estados, enfermedades o trastornos descritos en el presente documento, tal como se da a conocer en las reivindicaciones adjuntas. En algunas realizaciones, la etiqueta contiene instrucciones para el tratamiento de estados, trastornos o enfermedades inflamatorios eosinofílicos, incluyendo estados, trastornos o enfermedades respiratorios. En algunas variaciones, la etiqueta contiene instrucciones para el tratamiento de un trastorno inflamatorio crónico de las vías respiratorias. En una variación, la etiqueta contiene instrucciones para el tratamiento de asma, tal como asma bronquial y/o asma resistente al tratamiento con esteroides. En otras realizaciones, la etiqueta contiene instrucciones para el tratamiento de una enfermedad respiratoria viral, tal como síndrome respiratorio agudo grave (incluyendo, por ejemplo, síndrome respiratorio agudo grave provocado por un coronavirus).
[0101] Debe entenderse que cualquiera de las composiciones de aceite de salmónidos o composición que comprende compuesto(s) activo(s) biológico(s) aislado(s) a partir de las composiciones de aceite de salmónidos descritas en el presente documento, y cualquiera de los estados, enfermedades o trastornos descritos en el presente documento, puede usarse con las diversas realizaciones de los artículos de fabricación y kits descritos en el presente documento, y se encuentra dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
[0102] Ejemplos
[0103] El objeto dado a conocer en el presente documento se entenderá mejor mediante referencia a los siguientes ejemplos, que se proporcionan como ejemplo de la invención, y no a modo de limitación.
[0104] Ejemplo 1
[0105] Efectos antiinflamatorios de aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática
[0106] Este ejemplo explora los efectos antiinflamatorios mediante una reducción de la función efectora de eosinófilos en aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática. El aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática usado en este ejemplo es Aceite de salmón Brilliant (comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA), también denominado en el presente documento “SO”. Se usaron tres ensayosin vitroque midieron (i) cambio de forma de eosinófilos en leucocitos polimorfonucleares (PMNL) normales, (ii) regulación por incremento de integrina en PMNL normales, y (iii) un ensayo de apoptosis en eosinófilos de sangre periférica purificada de ser humano alérgico, para explorar esta hipótesis.
[0107] Ensayo de cambio de forma
[0108] Se trataron previamente muestras de PMNL con ApoA-IV 3 μg/ml (control positivo), SO 100 μg/ml y vehículo de formulación (control negativo) durante 30 minutos y se estimularon con diluciones en serie de CCL11 durante 20 minutos a 37°C. Se monitorizó el cambio de forma mediante citometría de flujo como el aumento de la dispersión directa (FSC) y se expresó como porcentaje de la respuesta del vehículo. Obsérvese que los eosinófilos pueden distinguirse de los neutrófilos mediante sus propiedades de SSC y autofluorescencia.
[0109] Se usó el factor quimiotáctico, CCL11, para sensibilizar eosinófilos para prepararlos inmediatamente para diapédesis a través del endotelio mediante reordenamiento de su citoesqueleto. Este cambio morfológico se detectó mediante citometría de flujo como un aumento de las propiedades de dispersión directa de estas células. Se estudiaron los efectos de SO a 100 μg/ml y se compararon con el efecto conocido de ApoA-IV 3 μg/ml sobre el cambio de forma de eosinófilos en muestras de PMNL de donante sano. Se estimularon las muestras previamente tratadas con diluciones en serie de CCL11, y se monitorizó el cambio de forma mediante citometría de flujo. Tal como puede observarse en la tabla 1 a continuación y en la figura 1, 100 μg/ml de SO condujeron a una reducción visible del cambio de forma de eosinófilos en comparación con vehículo.
[0110] Tabla 1. Cambio de forma (100% como nivel inicial) de PMNL estimulados mediante diversas concentraciones de CCL11, con diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0113]
[0115] Ensayo de regulación por incremento de CD11b (integrina)
[0116] Se trataron previamente muestras de PMNL con ApoA-IV 3 μg/ml (control positivo), SO 100 μg/ml y vehículo de formulación (control negativo) durante 30 minutos y se incubaron con diluciones en serie de CCL11 durante 30 minutos a 37°C. Se tiñeron las muestras con anticuerpos anti-CD16-PE-Cy5 y anti-CD11b-PE (ICRF44). Se identificaron los eosinófilos como células negativas para CD16. Se analizó la regulación por incremento de CD11b mediante citometría de flujo.
[0117] Una condición previa para la migración de eosinófilos es la regulación por incremento de moléculas de adhesión tales como las integrinas αmβ2 (CD11b/CD18). De manera similar al efecto observado sobre el cambio de forma anterior, SO y ApoA-IV redujeron claramente la presencia de moléculas de CD11b en las superficies celulares en un 20-30% (a concentraciones de CCL11 óptimas de aproximadamente 2-4 nM) tal como se muestra en la tabla 2 a continuación y en la figura 2.
[0118] Tabla 2. Cambio de CB11b (100% como nivel inicial) en la superficie de PMNL estimulados mediante diversas concentraciones de CCL11, en diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0121]
[0123] Ensayo de apoptosis
[0124] Se colocaron los eosinófilos de ser humano alérgico en medio RPMI 1640 complementado con IL-5 (50 pM), el 1% de FBS y PenStrep en presencia de ApoA-IV 3 μg/ml (control positivo), SO 100 μg/ml y vehículo de formulación (control negativo). Se retiraron alícuotas después de 18 h de incubación, se lavaron dos veces en PBS, y volvieron a suspenderse en tampón de unión. Se tiñeron las células de eosinófilos usando el kit I de detección de apoptosis de anexina V-FITC (Sigma Aldrich) y se analizaron inmediatamente mediante citometría de flujo. Cada muestra se adquirió durante 1 min y se seleccionó el número total de eosinófilos en un gráfico de dispersión directa/dispersión lateral y se registró el porcentaje de células vivas (negativas para anexina V) y células apoptóticas (positivas para anexina V).
[0125] Tanto ApoA-IV como SO aceleraron la apoptosis de eosinófilos en estas células de donante alérgico. El porcentaje de células vivas (negativas para anexina V) disminuyó desde el 57,6% ± 4,5 en el tratamiento con vehículo hasta el 31,5 ± 2,3% en eosinófilos tratados con ApoA-IV 3 μg/ml (control positivo) y el 41,6 ± 3,0% en eosinófilos tratados con SO 100 μg/ml. Tanto ApoA-IV como SO también aumentaron el porcentaje de células apoptóticas (positivas para anexina V) desde el 44,1 ± 2,9% (tratamiento con vehículo) hasta el 60 ± 3,8% con ApoA-IV 3 μg/ml y el 54,4 ± 2,5% con SO 100 μg/ml.
[0126] Conclusión
[0127] Los resultados de este ejemplo demostraron que SO tenía un posible potencial terapéutico para el tratamiento de estados alérgicos e inflamatorios, particularmente los que implican funciones efectoras de eosinófilos. Específicamente, se observó que SO a 100 μg/ml inhibía la respuesta de eosinófilos frente al quimioatrayente CCL11 en un ensayo de cambio de forma. Además, se observó que SO a 100 μg/ml inhibía la respuesta de eosinófilos frente al quimioatrayente CCL11 en un ensayo de regulación por incremento en superficie de integrina (CD11b). Finalmente, se observó que SO potenciaba la apoptosis en eosinófilos obtenidos de individuos alérgicos.
[0128] Ejemplo 2
[0129] Efectos de diversas condiciones de procesamiento sobre la eficacia antiinflamatoria de aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática
[0130] Este ejemplo comparó los efectos de diversas condiciones de procesamiento (por ejemplo, calentamiento, tratamiento con ácido y base) sobre la eficacia antiinflamatoria de aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática mediante una reducción de la función efectora de eosinófilos. El aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática usado en este ejemplo es aceite de salmón Brilliant (comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA), también denominado en el presente documento “SO”. Se usaron los mismos tres ensayosin vitrodescritos en el ejemplo 1 anterior para explorar el efecto de tratamientos de procesamiento sobre SO, así como para comparar el efecto con los de aceite de kril y aceite de pescado 18/12 convencional (que hace referencia al contenido del 18% de DHA y el 12% de EPA en el aceite de pescado). El aceite de kril y el aceite de pescado 18/12 convencional eran aceite de kril de Kirkland Signature y aceite de pescado salvaje de Alaska de Kirkland Signature, ambos obtenidos de Costco, EE. UU. Ensayo de cambio de forma
[0131] Se trataron previamente muestras de PMNL con SO 100 μg/ml, SO, aceite de kril, aceite de pescado 18/12 convencional tratados con calor, ácido y base, y vehículo de formulación (control negativo) durante 30 minutos y se estimularon con diluciones en serie de CCL11 durante 20 minutos a 37°C. Se monitorizó el cambio de forma mediante citometría de flujo como el aumento de la dispersión directa (FSC) y se expresó como porcentaje de la respuesta del vehículo. Los eosinófilos podían distinguirse de los neutrófilos mediante sus propiedades de SSC y autofluorescencia. Se usó el factor quimiotáctico, CCL11, para sensibilizar eosinófilos para prepararlos inmediatamente para diapédesis a través del endotelio mediante reordenamiento de su citoesqueleto. Este cambio morfológico se detectó mediante citometría de flujo como un aumento de las propiedades de dispersión directa de estas células. Se estudiaron los efectos de SO a 100 μg/ml y se compararon con los diversos tratamientos de procesamiento sobre SO, aceite de kril y aceite de pescado 18/12 convencional sobre el cambio de forma de eosinófilos en muestras de PMNL de donante sano. Se estimularon las muestras previamente tratadas con diluciones en serie de CCL11, y se monitorizó el cambio de forma mediante citometría de flujo. Tal como puede observarse en la tabla 3 a continuación y en la figura 3, los diversos tratamientos de procesamiento con calor, ácido o base redujeron significativamente la eficacia del SO en este ensayo. Además, el aceite de kril no mostró ningún cambio con respecto al vehículo. La muestra de aceite de pescado 18/12 convencional mostró cierta eficacia (~33% de la respuesta de SO) en comparación con el vehículo de formulación en este ensayo.
[0132] Tabla 3. Cambio de forma (100% como nivel inicial) de PMNL estimulados mediante diversas concentraciones de CCL11, con diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0135]
[0137] Ensayo de regulación por incremento de CD11b (integrina)
[0138] Se trataron previamente muestras de PMNL con SO 100 μg/ml, SO, aceite de kril, aceite de pescado 18/12 convencional tratados con calor, ácido y base, y vehículo de formulación (control negativo) durante 30 minutos y se incubaron con diluciones en serie de CCL11 durante 30 minutos a 37°C. Se tiñeron las muestras con anticuerpos anti-CD16-PE-Cy5 y anti-CD11b-PE (ICRF44). Se identificaron los eosinófilos como células negativas para CD16. Se analizó la regulación por incremento de CD11b mediante citometría de flujo.
[0139] Una condición previa para la migración de eosinófilos es la regulación por incremento de moléculas de adhesión tales como las integrinas αmβ2 (CD11b/CD18). De manera similar al efecto observado en el ejemplo 1 anterior, SO redujo claramente la presencia de moléculas de CD11b en las superficies celulares en aproximadamente un 30% (a una concentración de CCL11 óptima de aproximadamente 2-4 nM) mientras que ninguna de las otras muestras mostró ninguna diferencia con respecto al vehículo de formulación, tal como se muestra en la tabla 4 a continuación y en la figura 4.
[0140] Tabla 4. Cambio de CB11b (100% como nivel inicial) en la superficie de PMNL estimulados mediante diversas concentraciones de CCL11, en diferentes condiciones de tratamiento previo.
[0143]
[0145] Ensayo de apoptosis
[0146] Se colocaron los eosinófilos de ser humano alérgico en medio RPMI 1640 complementado con IL-5 (50 pM), el 1% de FBS y PenStrep en presencia de SO 100 μg/ml, SO, aceite de kril, aceite de pescado 18/12 convencional tratados con calor, ácido y base, y vehículo de formulación (control negativo). Se retiraron alícuotas después de 18 h de incubación, se lavaron dos veces en PBS, y volvieron a suspenderse en tampón de unión. Se tiñeron las células de eosinófilos usando el kit I de detección de apoptosis de anexina V-FITC (Sigma Aldrich) y se analizaron inmediatamente mediante citometría de flujo. Cada muestra se adquirió durante 1 min y se seleccionó el número total de eosinófilos en un gráfico de dispersión directa/dispersión lateral y se registró el porcentaje de células vivas (negativas para anexina V) y células apoptóticas (positivas para anexina V).
[0147] Una vez más, SO aceleró la apoptosis de eosinófilos en estas células de donante alérgico tal como se mostró en el ejemplo 1 anterior. El porcentaje de células vivas (negativas para anexina V) disminuyó desde el 59,3% ± 4,1 en el tratamiento con vehículo hasta el 40,2% ± 3,8 en eosinófilos tratados con SO 100 μg/ml. SO también aumentó el porcentaje de células apoptóticas (positivas para anexina V) desde el 46,5% ± 2,7 (tratamiento con vehículo) hasta el 52,6% ± 3,8. Ninguno de los otros tratamientos mostró ningún cambio significativo en el porcentaje de células vivas (negativas para anexina V) con respecto al tratamiento con vehículo (calor - 57,0% ± 3,8; ácido - 60,9% ± 3,3; base -59,5% ± 2,7; kril - 53,2% ± 3,6; aceite de pescado - 52,1% ± 4,3).
[0148] Conclusión
[0149] Los resultados de este ejemplo demostraron que calentar SO o ponerlo en contacto con un ácido o base débil reduce/elimina su posible aplicación terapéutica para el tratamiento de estados alérgicos e inflamatorios, particularmente tal como se muestra en estos resultadosin vitrode la función efectora de eosinófilos. Estos resultados muestran que el calentamiento o el tratamiento con ácido o base degrada/elimina significativamente los componentes activos presentes en SO lo cual explica los resultados positivos de la función efectora de eosinófilos observados. Además, el aceite de kril no parece contener estos componentes, y el aceite de pescado 18/12 convencional puede contener una cantidad muy pequeña de estos componentes tal como se muestra mediante un resultado positivo ligero en el ensayo de cambio de forma individual pero una ausencia de respuesta en la apoptosis o regulación por incremento de Cd11b. Finalmente, sin desear limitarse a ninguna teoría, los ácidos grasos presentes en los aceites no pueden desempeñar una función en esta eficacia dado que (a) no se observó ningún cambio en la composición de ácidos grasos en SO tras el calentamiento o tratamiento con ácido/base y (b) el aceite de pescado y SO muestran un perfil de ácidos grasos muy similar y ambos están en forma de éster de triglicéridos natural.
[0150] Ejemplo 3
[0151] Estudio in vivo comparativo que evalúa los efectos antiinflamatorios de aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática
[0152] Este ejemplo compara los efectos de aceite de salmón OmeGo® (aceite de salmón sometido a extracción enzimática comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA) con los efectos de aceite de hígado de bacalao, fevipiprant (como control positivo) y ácido linoleico (como control negativo) sobre la quimiotaxia y la quimiocinética frente a leucotrieno B4 y viabilidad de eosinófilos en eosinófilos peritoneales de cobaya.
[0153] Los artículos de prueba en este ejemplo incluyen:
[0154] - Aceite de salmón OmeGo® (aceite de salmón sometido a extracción enzimática comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA, también denominado en el presente documento “OmeGo”)
[0155] - Aceite de hígado de bacalao SEACOD (también denominado en el presente documento “SEACOD”)
[0156] - Fevipiprant; y
[0157] - Ácido linoleico
[0158] Los animales usados en este ejemplo eran de la especieCavia porcellus(cobaya). Se seleccionaron un total de 21 cobayas macho que pesaban entre 200-250 g. Se aleatorizaron manualmente estos animales en 7 grupos, es decir G1 y G2 (aceite de salmón OmeGo 30 y 300 mg/kg), G3 y G4 (SEACOD 30 y 300 mg/ kg), G5 y G6 fueron control positivo (fevipiprant 5 y 20 mg/kg) y G7 fue control negativo (ácido linoleico 300 mg/kg) en los que cada grupo consistía en 3 animales.
[0159] Preparación de formulación de artículos de prueba
[0160] OmeGo y SEACOD estaban encapsulados en cápsulas. Se recogió el aceite dentro de la cápsula usando una jeringa. Se pesó una cantidad apropiada del artículo de prueba y se suspendió en solución salina normal. En el momento de la dosificación, se mantuvo la formulación de artículo de prueba en un agitador magnético para mantener la homogeneidad.
[0161] Método general
[0162] Se sensibilizaron las cobayas para crear eosinofilia leve mediante inyección intraperitoneal de polimixina B (1 mg/animal) una vez por semana durante 6 semanas. Se administró polimixina B disolviéndola en solución salina al 0,9%. A cada animal se le inyectaron 0,5 ml de solución salina al 0,9% que contenía 1 mg de polimixina B. En la semana 6, además de la polimixina B, a los animales se les inyectaron artículos de prueba pertenecientes a su grupo específico, tal como se muestra en la tabla 5 a continuación.
[0163] Tabla 5. Grupos y tamaño de grupo
[0166]
[0168] Leyenda: N.º = número, NC= control negativo, PC = control positivo.
[0169] Método de dosificación y extracción de líquido intraperitoneal
[0170] Se trataron los animales con polimixina B mediante una inyección intraperitoneal. Junto con polimixina B, se administraron los artículos de prueba por vía intraperitoneal. En la 6ª semana, se anestesió a los animales usando isoflurano y se extrajo el líquido intraperitoneal inyectando 50 ml de solución salina en la cavidad del peritoneo. Tras masajear el abdomen durante 15 segundos, se drenó el líquido y se recogió en los tubos de centrífuga. Se extrajeron aproximadamente 30-35 ml de líquido de cada animal. Se centrifugó este líquido durante 10 min (400 x g, 4°C) y volvió a suspenderse en medio de FBS (suero bovino fetal). Después de esta etapa, volvió a centrifugarse el líquido durante 10 min (400 x g, 4°C) y se analizó el sedimento celular para determinar respuestas quimiotácticas y quimiocinéticas de eosinófilos frente a leucotrieno B4 y recuentos celulares usando una cámara de prueba de microquimiotaxia de 96 pocillos.
[0171] Se recuperaron eosinófilos a una pureza de más del 90% usando un procedimiento modificado notificado por Fukusaet al. (Increased numbers of hypodense eosinophils in the blood of patients with bronchial asthma. Am. Rev. Respir. Dis.1985, 132:981-985).
[0172] Frecuencia de la dosificación
[0173] Se trataron los animales con solución salina con polimixina B una vez por semana durante 5 semanas continuas y en la 6ª semana, junto con la polimixina B, se administró el artículo de prueba según los grupos. Cada animal recibió 1 mg de polimixina B.
[0174] Extracción de sangre
[0175] Se extrajo sangre el día antes de la primera dosificación y en el último día del estudio. A través del plexo retroorbital, se extrajeron aproximadamente 1,5 ml de sangre para cada animal y a partir de esto se separó el plasma y se almacenó a -20°C para ensayos de biomarcadores antiinflamatorios adicionales.
[0176] Observaciones
[0177] Actividades quimiotáctica y quimiocinética frente a leucotrieno B4: se midieron las actividades quimiotáctica y quimiocinética mediante el método de la cámara de Boyden usando una microcámara de 96 pocillos y se expresaron como el número de eosinófilos contados en el filtro de membrana con un aumento de 400X (células/cinco campos). Se examinó la actividad quimiocinética frente a leucotrieno B4 colocando la misma concentración de leucotrieno B4 (0,1 μM) en ambos compartimentos de la cámara. Se determinó la viabilidad de los eosinófilos mediante la prueba de exclusión de colorante azul de tripano tras una incubación durante 90 min. Se sometieron todas las muestras a ensayo por duplicado. También se extrajo sangre en el mismo día y se separó el plasma y se almacenó a -20°C para ensayos de biomarcadors antiinflamatorios complementarios.
[0178] Morbimortalidad: se observaron todos los animales al menos dos veces al día (por la mañana y por la noche) para determinar la morbimortalidad, a lo largo de todo el periodo de aclimatación y de estudio.
[0179] Signos clínicos de toxicidad: se observaron los signos clínicos tras la administración de artículo de prueba y todos los demás días a lo largo de todo el periodo de estudio para todos los animales. Las observaciones junto a la jaula incluyeron (pero no se limitaron a) cambios en la piel y el pelaje, ojos y membranas mucosas, así como sistema respiratorio, circulatorio, nervioso autónomo y central, actividad somatomotora y patrón de comportamiento.
[0180] Peso corporal: se pesaron los animales durante la aleatorización, al inicio del tratamiento y cada semana después de eso, hasta el final del periodo experimental.
[0181] Evaluación de resultados de análisis estadístico: se procesaron datos sin procesar usando el software estadístico Sigma Plot 14. Se calcularon la media y la desviación estándar usando el software y se resumieron todos los datos en forma de tabla. Se comprobaron todos los datos continuos tales como el peso corporal para determinar su normalidad y, para obtener datos homogéneos, se usó ANOVA.
[0182] Resultados y discusiones
[0183] Actividades quimiotáctica y quimiocinética frente a leucotrieno B4: se presentan datos para animales individuales en cada grupo en la tabla 6.
[0184] Tabla 6. Resumen de tratamiento previo con artículo de prueba sobre actividades quimiotáctica (A) y quimiocinética (B) frente a leucotrieno B4 (0,1 uM) en eosinófilos obtenidos a partir de peritoneo de cobaya.
[0187]
[0189] Morbimortalidad: no se observó ninguna morbimortalidad relacionada con el tratamiento en ninguno de los animales a partir de los 7 grupos a lo largo de todo el periodo de estudio.
[0190] Signos clínicos de toxicidad: no se observó ningún signo clínico relacionado con el tratamiento en ninguno de los grupos.
[0191] Peso corporal y aumento de peso corporal: los pesos corporales medios en el estudio no mostraron ninguna diferencia estadísticamente significativa en ninguno de los grupos a lo largo de todo el periodo de estudio (véase la tabla 7). El cambio en porcentaje en el peso corporal con respecto al día 1 tampoco mostró ninguna diferencia estadísticamente significativa en ninguno de los grupos a lo largo de todo el periodo de estudio (véase la tabla 8).
[0192] Tabla 7. Resumen del cambio en porcentaje en el peso corporal con respecto al día 1.
[0195]
[0197] Tabla 8. Resumen de morbimortalidad.
[0200]
[0202] Conclusión
[0203] Se creó un estado de eosinofilia leve en todos los animales usando polimixina B. Después de administrar el artículo de prueba, se extrajo satisfactoriamente el líquido intraperitoneal de todos los animales en la 6ª semana del estudio. Los resultados de este ejemplo demostraron que el tratamiento previo con aceite CARDIO (30 mg/kg i.p., n= 3; 300 mg/kg i.p., n = 3) inhibió significativamente las actividades quimiotáctica y quimiocinética de eosinófilos de una manera dependiente de la dosis. La inhibición máxima (300 mg) fue del 50,7% para la quimiotaxia y del 55,6% para la quimiocinesis, en comparación con el control negativo de ácido linoleico. El tratamiento previo con SEACOD (30 mg/kg i.p., n = 3; 300 mg/kg i.p., n = 3) y ácido linoleico (100 mg/kg i.p., n=3) no inhibió las actividades quimiotáctica y quimiocinética de eosinófilos. El tratamiento previo con control positivo fevipiprant (5 mg/kg i.p., n=3; 20 mg/kg i.p., n=3) también inhibió significativamente las actividades quimiotáctica y quimiocinética de eosinófilos de una manera dependiente de la dosis. La inhibición máxima (20 mg) fue del 68,0% para la quimiotaxia y del 51,7% para la quimiocinesis, en comparación con el control. La viabilidad de eosinófilos tras una incubación de 90 min con leucotrieno B4 fue mayor del 96% en todos los grupos de tratamiento.
[0204] Ejemplo 4
[0205] Propiedades de modulación de eosinófilos de aceite de salmón OmeGo® en modelo de asma murino inducido por extracto de ácaros del polvo domésticos (HOM)
[0206] Este ejemplo demuestra las propiedades de modulación de eosinófilos de aceite de salmón OmeGo® (aceite de salmón sometido a extracción enzimática comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA) en un modelo de asma murino inducido por extracto de ácaros del polvo domésticos (HDM). Con este fin, se usó solución salina normal (NS) como control de vehículo y se usó apolipoproteína A-IV (ApoA-IV) como control positivo, respectivamente. El estudio implicó la inducción de estado asmático en ratones usando extracto de HDM y evaluación simultánea de los efectos de aceite de salmón OmeGo (geles blandos CARDIO; 20 o 60 μg/animal) y ApoA-IV (5 μg/animal; como control positivo) sobre la modulación de eosinófilos en ratones.
[0207] No se observó morbimortalidad durante el transcurso del tratamiento. No se observaron síntomas o signos clínicos en ninguno de los animales de ninguno de los grupos. Los animales de todos los grupos no mostraron ninguna variación estadística en el peso corporal así como en el cambio en % de peso corporal a lo largo de todo el periodo de estudio. En el día 1, se anestesió a los 20 ratones y se sensibilizaron por vía intranasal con 1 μg de proteína de HDM en 40 μl de PBS. Desde el día 7 hasta el día 11, se expusieron los 20 ratones mediante aplicación intranasal diaria de 10 μg de proteína de HDM en 40 μl de PBS. Se dividieron aleatoriamente los ratones en cuatro grupos con cinco ratones en cada grupo para un tratamiento diferencial desde el día 7 hasta el día 14. Desde el día 7 hasta el día 14, cada animal en el primer grupo (G1) recibió 100 μl de NS; cada animal en el segundo grupo (G2) recibió 20 μg de CARDIO en 100 μl de NS; cada animal en el tercer grupo (G3) recibió 60 μg de CARDIO en 100 μl de NS; y cada animal en el cuarto grupo (G4) recibió 5 μg de ApoA-IV en 100 μl de NS.
[0208] Se recogieron el líquido lavado broncoalveolar (BAL) y el bazo de los 20 ratones en el día 15, y se analizó la celularidad de las muestras recogidas mediante citometría de flujo. Tal como se resume en la tabla 9 a continuación, el recuento celular total (eosinófilos, macrófagos alveolares, linfocitos, monocitos y neutrófilos) en líquido de BAL se redujo significativamente en G3 (60 μg de CARDIO/animal; P ≤ 0,01) y G4 (5 μg de APOA-IV/animal: P ≤ 0,05) en comparación con G1. Sin embargo, sólo se observó una reducción significativa de los eosinófilos en el líquido de BAL en G3 (60 μg de CARDIO/animal; P ≤ 0,01) en comparación con G1. Además, el porcentaje de eosinófilos en tejido de bazo disminuyó significativamente en G3 (60 μg de CARDIO/animal; P ≤ 0,001) y G4 (5 μg de ApoA-IV/animal: P ≤ 0,01) en comparación con G1. El análisis de muestras de líquido de BAL y de bazo mostró que el tratamiento de 60 μg de CARDIO/animal ayuda a mejorar la eosinofilia de las vías respiratorias en ratones.
[0209] Tabla 9. Resumen de análisis de eosinofilia
[0212]
[0214] Conclusión
[0215] Se creó un estado de asma en todos los animales usando un extracto de HDM. Tras administrar los artículos de prueba, se recogió satisfactoriamente el líquido de BAL a partir de todos los animales en el 15º día del estudio. La administración de 60 μg de CARDIO/animal pudo reducir el estado de eosinofilia en el modelo de asma murino, tal como se refleja a partir de los resultados de celularidad del líquido de BAL y el bazo.
[0216] Ejemplo 5
[0217] Fraccionamiento por enfriamiento de aceite de salmón sometido a extracción enzimática y su efecto sobre la apoptosis de eosinófilos
[0218] Este ejemplo comparó los efectos de fraccionamiento por enfriamiento sobre la eficacia antiinflamatoria de aceite de salmónidos sometido a extracción enzimática mediante una reducción de la función efectora de eosinófilos. En un vaso de precipitados de vidrio de 100 ml, se colocaron 80 ml de aceite de salmón OmeGo® (aceite de salmón sometido a extracción enzimática comercialmente disponible de Hofseth BioCare ASA) (también denominado en el presente documento “OmeGo”), se enfriaron hasta 8°C y se conservaron entre 4-8°C (nevera) durante 24 h. Una capa delgada de sólido ceroso (de aproximadamente 10 ml de volumen) precipitó en el fondo del vaso de precipitados. Se decantaron 10 ml del aceite líquido superior y se recogieron para el ensayo de apoptosis de eosinófilos tal como se describe a continuación.
[0219] Se colocaron eosinófilos de ser humano alérgico en medio RPMI 1640 complementado con IL-5 (50 pM), el 1% de FBS y PenStrep junto con el vehículo de formulación, OmeGo 100 μg/ml, y OmeGo sometido a fraccionamiento por enfriamiento 100 μg/ml a partir de lo anterior. Se retiraron alícuotas después de una incubación de 18 horas, se lavaron dos veces en PBS y volvieron a suspenderse en el tampón de unión. Se tiñeron las células de eosinófilos usando el kit I de detección de apoptosis de anexina V-FITC (Sigma Aldrich) y se analizaron inmediatamente mediante citometría de flujo. Cada muestra se adquirió durante 1 min y se registraron los porcentajes de células vivas (negativas para anexina V) y células apoptóticas (positivas para anexina V), tal como se resume en la tabla 10 a continuación.
[0220] Tabla 10. Resumen de ensayo de apoptosis
[0221]
[0223] Conclusión
[0224] El fraccionamiento por enfriamiento de OmeGO elimina prácticamente la modulación de eosinófilos tal como se mide mediante un aumento de la apoptosis de células de eosinófilos.
[0225] A menos que se indique claramente lo contrario, los términos “un”, “una” y similares se refieren a uno o más.
[0226] En algunas variaciones, “aproximadamente” se refiere al intervalo de error habitual para el valor respectivo fácilmente conocido por el experto en este campo técnico. La referencia a “aproximadamente” un valor o parámetro en el presente documento incluye (y describe) realizaciones que se refieren a ese valor o parámetro en sí mismo. Por ejemplo, “aproximadamente x” incluye y describe “x” en sí mismo. En algunas realizaciones, el término “aproximadamente”, cuando se usa en asociación con una medida, o se usa para modificar un valor, una unidad, una constante o un intervalo de valores, se refiere a variaciones de /-2%.
[0227] En algunas variaciones, “entre” dos valores o parámetros en el presente documento incluye (y describe) realizaciones que incluyen esos dos valores o parámetros en sí mismos. Por ejemplo, una descripción que se refiere a “entre x e y” incluye la descripción de “x” y “y’” sí mismos.

Claims (13)

1. REIVINDICACIONES
1. Composición que comprende aceite de salmónidos, en la que el aceite de salmónidos se obtiene a partir de la hidrólisis enzimática leve de restos de peces salmónidos, para su uso en el tratamiento de un estado, trastorno, o enfermedad inflamatorio eosinofílico o respiratorio eosinofílico en un ser humano que lo necesita, en la que el aceite de salmónidos comprende ácido gamma-linolénico, ácido columbínico, ácido estearidónico, ácido de Mead, y ácido dihomo-gamma-linolénico.
2. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el estado, trastorno o enfermedad inflamatorio eosinofílico es un trastorno inflamatorio crónico de las vías respiratorias.
3. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el estado, trastorno o enfermedad inflamatorio eosinofílico es asma.
4. Composición para su uso según la reivindicación 2, en la que el estado, trastorno o enfermedad inflamatorio eosinofílico es asma bronquial.
5. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el estado, trastorno o enfermedad respiratorio eosinofílico es una enfermedad respiratoria viral.
6. Composición para su uso según la reivindicación 1, en la que el estado, trastorno o enfermedad respiratorio eosinofílico es síndrome respiratorio agudo grave.
7. Composición para su uso según la reivindicación 6, en la que el síndrome respiratorio agudo grave está provocado por un coronavirus.
8. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el ser humano es en gran medida resistente a intervenciones médicas y quirúrgicas para tratar el estado, trastorno o enfermedad.
9. Artículo de fabricación, que comprende:
un recipiente que comprende una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 8, y una etiqueta que contiene instrucciones de uso dirigidas al tratamiento de un estado, trastorno, o enfermedad inflamatorio eosinofílico en un ser humano que lo necesita.
10. Artículo de fabricación según la reivindicación 9, en el que la composición se proporciona en una forma de dosificación.
11. Artículo de fabricación según la reivindicación 10, en el que la forma de dosificación es un jarabe, producto masticable, cápsula o gel blando.
12. Kit, que comprende:
una forma de dosificación de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 8, y un prospecto que contiene instrucciones de uso dirigidas al tratamiento de un estado, trastorno, o enfermedad inflamatorio eosinofílico en un ser humano que lo necesita.
13. Kit según la reivindicación 12, en el que la forma de dosificación es un jarabe, producto masticable, cápsula o gel blando.
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