ES3060481T3

ES3060481T3 - Method for determination of the window of implantation

Info

Publication number: ES3060481T3
Application number: ES22821317T
Authority: ES
Inventors: De La Vega Otazo Monica Rodriguez; Agut Roger Gallart; Socias Melchor Carbonell; Garcia Julio Herrero; Martinez Luis Manuel Artiles; Troyano Anna Teixido
Original assignee: Manina Medtech S L; Fundacio Institut de Recerca Hospital Universitari Vall dHebron
Current assignee: Manina Medtech S L; Fundacio Institut de Recerca Hospital Universitari Vall dHebron
Priority date: 2021-11-12
Filing date: 2022-11-11
Publication date: 2026-03-26
Anticipated expiration: 2042-11-11
Also published as: WO2023084030A1; JP2024545587A; IL312766A; MX2024005784A; CA3237752A1; US20250000548A1; CN118695811A; EP4429543C0; EP4429543B1; AU2022385426A1; EP4429543A1

Abstract

La presente invención se refiere a métodos para determinar la receptividad endometrial en una mujer y a métodos para seleccionar a una mujer como candidata para recibir un embrión basándose en el análisis de gases disueltos en el líquido endometrial. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Método para la determinación de la ventana de implantación

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere al campo de tecnologías de reproducción asistida y, más en particular, a métodos basados en el análisis de gases disueltos para determinar la receptividad endometrial en un sujeto femenino y a métodos para seleccionar un sujeto femenino como candidato para recibir un embrión.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] La infecundidad es un problema de salud mundial que afecta a alrededor de 190 millones de personas en todo el mundo. Entre las técnicas de reproducción asistida (ART), la fecundaciónin vitro(IVF) es uno de los tratamientos preferidos, donde se cultiva el embrión en el laboratorio y luego se transfiere al útero de la futura madre. En promedio, una mujer necesita tres ciclos de IVF completos para quedarse embarazada. En Europa se realizan más de 900.000 ciclos al año, pero sólo el 35 % da como resultado un embarazo. Una de las principales causas de fracaso es la transferencia de embriones, con una tasa de nacidos vivos por transferencia de embriones por debajo del 30 %.

[0007] Se espera que el mercado mundial de IVF alcance 37.700 mil millones de dólares en 2027, expandiéndose a una tasa de crecimiento anual compuesta (CAGR) del 9,5 %. Europa dominó el mercado de procedimientos e instrumentos para IVF en 2019. Japón, EE. UU. y España son los países más activos mundialmente y se prevé un auge de la demanda en Asia-Pacífico. Los posibles clientes son clínicas de IVF privadas y públicas, ya que el producto tiene como objetivo usarse por profesionales sanitarios. Hay 1200 clínicas en Europa (250 en España) y 480 clínicas en los EE. UU.

[0008] La calidad de los embriones, la receptividad uterina, y la sincronía uterina con el embrión son críticas para una implantación exitosa. Actualmente, es posible evaluar la maturación y calidad de los embriones, pero la estimación del desarrollo y la sincronía endometriales es muy imprecisa porque se basa en el recuento de días después de la ovulación o los días de tratamiento con progesterona. El periodo de tiempo durante el cual el endometrio es receptivo se denomina ventana de implantación (WOI), y se produce habitualmente durante la fase luteínica, entre los días 19 y 21 del ciclo menstrual. Su duración y posición en el ciclo dependen de diversos factores y pueden variar de una mujer a otra y de un mes a otro en la misma mujer, por lo que es difícil determinarlos empíricamente. La precisión en la detección de la receptividad endometrial es esencial para cada mujer, pero crítica para mujeres que tienen una WOI desplazada o acortada, que representa el 30 % de todas las pacientes de IVF. Este porcentaje es incluso mayor en mujeres con fallos de implantación repetidos. Las técnicas de ecografía/ecografía Doppler para comprobar el grosor y la vascularidad del endometrio no han podido medir con precisión la sincronía y la receptividad endometriales, y no se han hallado marcadores útiles para la receptividad endometrial usando enfoques de histología. La llegada de tecnologías de “ómica” han permitido el análisis a gran escala de la expresión de genes, proteínas, microARN, metabolismo de lípidos, y patrón secretor del endometrio receptivo. Están disponibles pruebas comerciales enfocadas en detectar el perfil de expresión génica que caracteriza el endometrio receptivo, por ejemplo, ERA, ERPeak, Le Win-Test, ER Map. Estos métodos son invasivos, requieren una biopsia endometrial y varios días para obtener los resultados, imposibilitando que la prueba y la transferencia se realicen en el mismo ciclo.

[0009] Se conocen métodos adicionales para la determinación de la receptividad endometrial de TRANQUILLI A LET AL.: “The origin of pre-eclampsia: From decidual “hyperoxia” to late hypoxia”, MEDICAL HYPOTHESES, EDEN PRESS, PENRITH, EE. UU., vol. 75, n.º 1, julio de 2010, páginas 38-46, ISSN: 0306-9877, DOI: 10.1016/J.MEHY.2010.01.024, KEAET AL.: “Effect of reduced oxygen concentrations on the outcome ofin vitrofertilization”, FERTILITY AND STERILITY, ELSEVIER, ÁMSTERDAM, PAÍSES BAJOS, vol. 87, n.º 1, diciembre de 2006, páginas 213-216, ISSN: 0015-0282, DOI: 10.1016/J.FERTNSTERT.2006.05.066, BAVISTERET AL.: “Oxygen concentration and preimplantation development”, REPRODUCTIVE BIOMEDICINE ONLINE, ELSERVIER, ÁMSTERDAM, PAÍSES BAJOS, vol.9, n.º 5, enero de 2004, páginas 484-486, ISSN: 1472-6483, HARVEYET AL.: “The role of oxygen in ruminant preimplantation embryo development and metabolism”, ANIMAL REPRODUCTION SCIENCE, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, ÁMSTERDAM, PAÍSES BAJOS, vol. 98, n.º 1-2, febrero de 2007, páginas 113-128, ISSN: 0378-4320, DOI: 10.1016/J.ANIREPROSCI.2006.10.008, y el documento WO-2021/028562-A1.

[0010] Existe la necesidad de mejorar la detección a tiempo de la receptividad endometrial, coordinar la transferencia de embriones con el desarrollo uterino y hacer coincidir la sincronía uterina con el embrión para aumentar las tasas de éxito de las técnicas de reproducción asistida. También existe la necesidad de facilitar la identificación de mujeres que son idóneas para recibir un embrión para aumentar las tasas de nacidos vivos por transferencia de embriones y el éxito del procedimiento de reproducción asistida, haciéndolo más corto, menos estresante y más asequible.

[0011] Compendio de la invención

[0012] Los autores de la presente invención han hallado un método novedoso para la determinación del estado de la receptividad uterina, en particular, la ventana de implantación (WOI) para la transferencia de embriones en un sujeto femenino. La WOI se manifiesta por la aparición de un endometrio receptivo en dicho sujeto femenino y, según la presente invención, puede determinarse midiendo la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino. Se estima que más del 30 % de las mujeres tienen una ventana de implantación desplazada o acortada, que dura habitualmente menos de 48 horas, y este porcentaje es incluso mayor en mujeres con fallos de implantación repetidos. No existen indicadores anatómicos ni biomarcadores validados para la detección de la ventana de implantación. Los métodos para el análisis de expresión génica se usan ampliamente para la determinación de la receptividad endometrial, pero requieren el uso de equipos sofisticados y la recogida de biopsias de tejidos. Los autores han identificado que seleccionar O<2>y/o CO<2>como el gas disuelto que va a medirse en el fluido endometrial de un sujeto femenino permite una determinación técnicamente simple pero altamente fiable de la receptividad endometrial a pesar de las dificultades asociadas con las variaciones de un ciclo a otro y con respecto a las diferencias fisiológicas entre mujeres.

[0013] Por tanto, en un primer aspecto, la invención se refiere a un método para la determinación de la receptividad endometrial en un sujeto femenino, comprendiendo el método las etapas de:

[0014] i) medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto, en el que el gas disuelto se selecciona del grupo que consiste en O<2>y CO<2>,

[0015] ii) comparar dicho valor de concentración de gas disuelto con un valor de referencia, en el que un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>disuelto con respecto al valor de referencia es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo.

[0016] Los autores también han hallado que medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de un sujeto femenino permite la selección de un sujeto femenino que se somete a una técnica de reproducción asistida (ART) como candidato para recibir un embrión.

[0017] Por tanto, en un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un método para seleccionar un sujeto femenino que se somete a un procedimiento de reproducción asistida como candidato para recibir un embrión, comprendiendo el método las etapas de:

[0018] i) determinar si el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo siguiendo las etapas del método según la invención, y si dicho endometrio es receptivo,

[0019] ii) seleccionar dicho sujeto femenino como candidato para recibir un embrión en un procedimiento de transferencia de embriones que va a realizarse en el mismo día que la etapa i).

[0020] Breve descripción de las figuras

[0021] Figura 1. Representación esquemática del principio de la sincronía embrión/endometrio según la invención que muestra la correlación cronológica de las fases de desarrollo del embrión con respecto a la ventana de implantación y en relación con la concentración de oxígeno intrauterino.

[0022] Figura 2. Representación esquemática del principio de la invención que muestra la difusión de oxígeno desde el útero al interior de la luz uterina y el incremento de la concentración de oxígeno intrauterino disuelto en el fluido uterino al comienzo de la ventana de implantación. Imagen de Bartelmez GW. The form and the functions of the uterine blood vessels in the rhesus monkey. Contrib Embryol 1957;36:154–83, por cortesía de Carnegie Institution for Science, propiedad intelectual del Carnegie Institution for Science.

[0023] Figura 3. Representación esquemática del principio de la invención que muestra la correlación de la variación de pO2 y la aparición de la ventana de implantación que incluye pruebas adicionales programadas a lo largo de todo el ciclo menstrual.

[0024] Figura 4. Patrones de oxígeno disuelto intrauterino observados durante la fase luteínica de las mujeres en el estudio. Se midió la concentración de oxígeno disuelto con un sensor óptico IMP-7 esterilizado montado en un catéter de transferencia. Se llevaron a cabo mediciones cada segundo durante cinco minutos, y se filtraron los primeros 120 segundos debido al tiempo de latencia. Se usaron gráficos de cajas y bigotes. Los bigotes representan el 5-95 % de los datos; la mediana se representa mediante una línea y la media con un símbolo . Los datos fuera de los bigotes se representan como puntos. La concentración de oxígeno se expresa en Torr, y 1 Torr = 133,22 Pa. A: Se combinaron los datos de tres pacientes diferentes. El nivel de oxígeno aumenta significativamente desde LH4 hasta LH5 y desde LH5 hasta LH6 (p<0,0001, prueba de comparaciones múltiples de Tukey). No existen diferencias entre LH6 y LH7, y pO<2>disminuye significativamente en LH8 (p<0,0001). Véanse las tablas 1-3. La ventana de implantación (WOI) se produce en LH6-LH7 de los ciclos naturales (o P5-P6 de los ciclos artificiales). El patrón de pO<2>en A representa el patrón de aparición de la WOI y describe la apertura (LH5) y el cierre (LH8) de la WOI. B: Los datos representan el patrón de pO<2>intrauterino disuelto de una voluntaria que tenía una WOI avanzada y acortada: el máximo de pO<2>en LH5 y un mínimo en LH7 (véanse las tablas 1-3). C: Los datos representan un perfil de pO<2>intrauterino de una voluntaria sana sin aumento del nivel de oxígeno durante la fase luteínica.

[0025] Descripción detallada de la invención

[0026] En condiciones ideales, el estado de receptividad endometrial, denominado ventana de implantación (WOI), se produce habitualmente durante la fase luteínica, entre los días 19 y 21 del ciclo menstrual (Navot D.et al., Fertil Steril 1991, 55:114–118; Harper MJK. Baillieres Clin Obstet Gynaecol 1992, 6: 351–371). En ciclos artificiales (ciclos de tratamiento de reposición hormonal), la ventana de implantación se produce después de cinco días de tratamiento con progesterona (P<4>+5) (Enciso, M.et al.,Sci Rep11, 13420 (2021)). Su duración y posición en el ciclo dependen de varios factores y pueden variar de un mes a otro en la misma mujer, dificultando su estimación empírica. De hecho, más del 30 % de las mujeres tienen una WOI desplazada o acortada, siendo este porcentaje incluso mayor en mujeres con fallos de implantación repetidos. A pesar de los esfuerzos de muchos grupos de investigación, no se han establecido métodos de detección de la WOI a través de patrones anatómicos o biomarcadores moleculares. La llegada de las tecnologías de “ómica” en las últimas décadas ha permitido el desarrollo de nuevas pruebas de diagnóstico enfocadas en detectar el perfil de expresión génica que caracteriza la WOI. Sin embargo, estos métodos requieren una biopsia de tejido endometrial y al menos una semana para obtener los resultados, imposibilitando que la prueba se realice durante el ciclo de ART activo. Además, las tecnologías de “ómica” se basan en el uso de tecnología sofisticada y/o los servicios de proveedores de análisis de “ómica”. Dicho de otro modo, en la mayoría de los casos la tecnología de “ómica” no puede realizarse por el propio médico. Además, los resultados son una predicción de la posición de la WOI en un futuro ciclo, y para aumentar la precisión de este pronóstico, se recomienda la preparación artificial del endometrio usando hormonas exógenas. Es importante destacar que los ciclos preparados artificialmente tienen más complicaciones obstétricas y perinatales que los ciclos naturales, lo que constituye no sólo un riesgo para la salud de la madre y del feto, sino también un mayor gasto para el sistema sanitario, de modo que es una prioridad para los servicios de ART facilitar el uso de métodos lo más parecidos posible al ciclo natural, si la fisiología de la paciente lo permite. La presente invención supera los problemas anteriores.

[0027] La homeostasis de oxígeno es crítica para la supervivencia de eucariotas. Un aumento de los niveles de oxígeno celular da como resultado la generación de especies de oxígeno tóxicas, y la ausencia de oxígeno provoca la inhibición de respiración mitocondrial. En particular, el embrión se expone al oxígeno disuelto en el fluido uterino o endometrial regulado por el sistema uterino a través del engrosamiento y la angiogénesis endometriales y tiene que estar estrechamente coordinado con los requisitos metabólicos del embrión. De hecho, el metabolismo del embrión cambia de anaerobio a aerobio en sólo cinco días.

[0028] Los autores de la presente invención han desarrollado un método mediante el cual la identificación de la ventana de implantación, manifestada por la aparición de un endometrio receptivo, se asocia con la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial. Los autores aportan pruebas de que el cambio de tendencia de la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial a lo largo de todo el ciclo menstrual permite dilucidar el momento adecuado (sincronía embrión/endometrio) para la implantación de embriones en un sujeto femenino dado. Los autores también han hallado que el entorno uterino es hipóxico durante las fases anaerobias del embrión, y cuando el endometrio se vuelve receptivo, aumenta la presión de oxígeno intrauterino, coincidiendo con el desarrollo y la implantación del blastocisto, durante los cuales aumenta de manera drástica el consumo de oxígeno del embrión.

[0029] Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para la determinación de la receptividad endometrial en un sujeto femenino y, por tanto, un método para identificar la ventana de implantación, así como para evaluar el resultado clínico de implantación de embriones y el embarazo. El método de la presente invención proporciona una determinación fiable de la receptividad endometrial con la ventaja de que ya no es necesario obtener una biopsia endometrial. En particular, el presente método permite a los médicos tanto identificar la ventana de implantación como realizar la transferencia de embriones en el plazo de horas, es decir, en el mismo día. El método de la invención no requiere equipos costosos ni voluminosos, sino dispositivos de medición de gases médicos convencionales portátiles, de modo que puede aplicarse en una amplia gama de clínicas, incluso aquellas con presupuestos más bajos. Además, la identificación simple y rápida de la ventana de implantación reduce la necesidad de administrar tratamientos hormonales innecesarios para realizar la predicción de la WOI en los próximos ciclos de manera más precisa, que se asocia con complicaciones en el embarazo más frecuentes con respecto a los ciclos naturales. Por consiguiente, este método encuentra aplicación en centros de reproducción asistida y unidades de fecundaciónin vitropara mejorar las tasas de implantación de embriones y embarazo, acelerando el procedimiento de decisiones clínicas, así como reduciendo los costes y las complicaciones derivados de la administración de tratamientos hormonales en mujeres que pueden beneficiarse de los ciclos naturales.

[0030] 1. Método para la determinación de la receptividad endometrial en un sujeto femenino

[0031] Los autores de la presente invención han hallado que determinar la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial en un sujeto femenino hace posible la identificación fiable de la ventana de implantación en dicho sujeto femenino. Por tanto, en un primer aspecto de la invención, la invención se refiere a un método para la determinación de la receptividad endometrial en un sujeto femenino (primer método de la invención), comprendiendo el método las etapas de

[0032] i) medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto, en el que el gas disuelto se selecciona del grupo que consiste en O<2>y CO<2>,

[0033] ii) comparar dicho valor de concentración de gas disuelto con un valor de referencia, en el que un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>disuelto con respecto al valor de referencia es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo.

[0034] En una primera etapa, se mide la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto.

[0035] La expresión “determinar la receptividad endometrial”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la evaluación o predicción de un estado fisiológico o clínico del endometrio, en particular, con respecto al resultado clínico del embarazo (por ejemplo, probabilidad de embarazo o supervivencia del embrión capaz de implantarse). El término “receptividad endometrial”, tal como se usa en el presente documento, se refiere al estado en el que el endometrio de un sujeto femenino se prepara para la implantación de embriones. El término “receptividad endometrial” puede referirse al estado durante un periodo de tiempo en el que el endometrio adquiere un estado funcional que permite la implantación del blastocisto y conduce al embarazo. La implantación consiste en tres etapas: (1) aposición, cuando el blastocisto entra en contacto con el sitio de implantación; (2) adhesión, cuando el blastocisto se une al epitelio endometrial receptivo; y (3) invasión, cuando las células trofoblásticas invasivas del blastocisto atraviesan el epitelio endometrial e invaden el estroma endometrial. El término “ventana de implantación” puede referirse al periodo de tiempo durante el cual el útero de dicho sujeto femenino es receptivo para la implantación de embriones. El término “endometrio receptivo” también puede referirse al estado del endometrio que es característico del periodo de tiempo conocido como “ventana de implantación” en un sujeto femenino. El término “receptividad endometrial” también puede referirse a la fase de un endometrio en la que tiene lugar la ventana de implantación de modo que una transferencia de embriones conduce a una alta probabilidad de embarazo.

[0036] El término “sujeto” o “individuo” o “animal” o “paciente” o “mamífero” se entiende como cualquier sujeto, particularmente un sujeto mamífero, para el cual se desea determinación o diagnóstico o pronóstico. Los sujetos mamíferos incluyen seres humanos, animales domésticos, animales de granja y animales de zoológico, deportivos o mascotas tales como perros, gatos, cobayas, conejos, ratas, ratones, caballos, ganado bovino, vacas, etc. En una realización preferida de la invención, el sujeto es un mamífero. En una realización más preferida de la invención, el sujeto es un ser humano.

[0037] Tal como se usa en el presente documento, el término “sujeto femenino” se refiere a una hembra mamífera cuya receptividad endometrial va a determinarse. Normalmente, dicho mamífero es un ser humano (es decir, una mujer), pero puede referirse a otros mamíferos tales como primates, perros, gatos, cerdos, ovejas, vacas.

[0038] El endometrio es la capa epitelial interior, junto con su membrana mucosa, del útero de los mamíferos, que forma una cavidad. Tal como se usa en el presente documento, el término “fluido endometrial” (EF) o “fluido de cavidad endometrial” (ECF) o “fluido uterino” o “fluido de cavidad uterina” es una acumulación de fluido dentro de la cavidad endometrial.

[0039] Tal como se usa en el presente documento, el término “gas disuelto” puede referirse a la tensión del gas en un fluido. El término “tensión del gas” puede referirse a la presión parcial de los gases en dicho fluido. En una mezcla de gases, cada gas constituyente tiene una “presión parcial” que es la presión teórica de ese gas constituyente si él solo ocupara todo el volumen de la mezcla original a la misma temperatura. En el contexto de la invención, la cantidad de un gas dado disuelto en un líquido dado, en particular fluido endometrial, es directamente proporcional a la presión parcial del gas en contacto con el líquido. Tal como se usa en el presente documento, la presión parcial de un gas en un disolvente también es proporcional a la concentración del gas disuelto en un líquido dado, en particular fluido endometrial. En el contexto de la presente invención, el término “concentración de gas disuelto”, “tensión del gas”, “presión parcial” o “tensión parcial” se usan indistintamente. En la técnica se conocen métodos para medir la “concentración de gas disuelto”.

[0040] Según la presente invención, el método comprende medir la tensión del oxígeno (O<2>) (PxO<2>) y/o la tensión del dióxido de carbono (CO<2>) (PxCO<2>). Convencionalmente, el subíndice “x” en cada símbolo representa el tejido u órgano que comprende el fluido en el que se mide el gas disuelto: por ejemplo, “a” significa arterial (sangre), “v” significa venoso (sangre), “c” significa capilar (sangre). En algunas realizaciones, PuO<2>, significando “u” fluido uterino, o PeO<2>, significando “e” fluido endometrial, se usan indistintamente y pueden referirse a la tensión del oxígeno en el fluido comprendido en la cavidad endometrial. En algunas realizaciones, PuCO<2>, significando “u” fluido uterino, o PeCO<2>, significando “e” fluido endometrial, se usan indistintamente y pueden referirse a la tensión del dióxido de carbono en el fluido comprendido en la cavidad endometrial.

[0041] Según la presente invención, la presión parcial del oxígeno en el fluido endometrial puede expresarse en unidades de mmHg. En algunas realizaciones, la presión parcial del oxígeno se expresa indistintamente como valor de concentración en porcentaje (%) de oxígeno disuelto. En algunas realizaciones, la presión parcial del oxígeno en el fluido endometrial puede expresarse en unidades de kPa o Torr. En la técnica se conocen métodos para la conversión de unidades. Por ejemplo, se sabe bien que un Torr son 1001325/760 pascales, por tanto, aproximadamente 133,22 Pa.

[0042] Según la presente invención, la presión parcial del dióxido de carbono en el fluido endometrial puede expresarse en unidades de mmHg. En algunas realizaciones, la presión parcial del dióxido de carbono se expresa indistintamente como valor de concentración en porcentaje (%) de dióxido de carbono disuelto. En algunas realizaciones, la presión parcial del dióxido de carbono en el fluido endometrial puede expresarse en unidades de kPa.

[0043] Según la presente invención, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se refiere a la determinación absoluta o relativa de la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial por medio de cualquier dispositivo de medición convencional adecuado para detectar y cuantificar la presencia de un gas disuelto en un fluido. Ejemplos no limitativos de técnicas adecuadas para medir la concentración de gas disuelto son dispositivos convencionales usados en medicina en el análisis de sangre arterial/venosa y el análisis de aire respiratorio, microelectrodos polarográficos, electrodos electroquímicos, sensores ópticos, sensores de fibra óptica, sensores a base de extinción de fluoróforos. Ejemplos no limitativos adicionales de técnicas adecuadas para medir la concentración de gas disuelto incluyen obtención de imágenes por resonancia magnética realzada con contraste dinámico, obtención de imágenes dependiente del nivel de oxígeno en la sangre y obtención de imágenes por resonancia paramagnética electrónica. Tales sensores son bien conocidos en la técnica y pueden aplicarse fácilmente por los expertos en la técnica para llevar a cabo las funciones de medición asociadas con la presente invención.

[0044] En algunas realizaciones, la concentración de gas disuelto se mide ópticamente, preferiblemente mediante fluorometría de fase. El término “método óptico”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier método en el que se usa luz para la detección, caracterización y/o cuantificación de un gas. Los métodos ópticos pueden basarse en la medición de absorbancia, intensidad de fluorescencia o tiempo de vida de fluorescencia. Ejemplos no limitativos ilustrativos de métodos ópticos que pueden usarse para medir la concentración de O<2>y CO<2>disueltos se basan habitualmente en la extinción de fluorescencia en presencia de oxígeno. Incluyen detección de extinción de intensidad o detección de extinción de tiempo de vida, tanto en los dominios del tiempo como de la frecuencia. Los métodos para medir y analizar trazas de fluorescencia resuelta en el tiempo incluyen fluorometría de modulación fase o fluorometría de pulso (mediciones de desintegración por emisión directa, análisis temporal de fotones individuales, mediciones mediante cámara de barrido, conversión ascendente de fluorescencia y compuerta Kerr óptica). En la técnica se conocen métodos ópticos y fluoróforos para medir la concentración de gas disuelto. El término “fluorometría de fase”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un método en el que la muestra se excita mediante luz modulada sinusoidalmente a alta frecuencia. La respuesta de fluorescencia del colorante también se modula sinusoidalmente a la misma frecuencia, pero está retrasa en el tiempo o desplazada de fase en relación con la señal de excitación, que a su vez depende de que el pO<2>esté en contacto con el colorante en la superficie de la sonda del sensor.

[0045] Tal como se usa en el presente documento, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial puede referirse a la determinación de la tensión del oxígeno en el fluido endometrial. Tal como se usa en el presente documento, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial puede referirse a la determinación de la tensión del dióxido de carbono en el fluido endometrial. Tal como se usa en el presente documento, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial puede referirse a la determinación de la tensión del oxígeno y la tensión del dióxido de carbono en el fluido endometrial.

[0046] En una segunda etapa del primer método de la invención para determinar la receptividad endometrial en un sujeto femenino, se compara el valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial con un valor de referencia. El término “valor de referencia” o “nivel de referencia”, tal como se usa en el presente documento en el contexto de los métodos de la invención, se refiere a un valor usado como referencia para los valores obtenidos a partir de la medición de la concentración de gas disuelto que va a clasificarse dentro de un determinado estado fisiológico o clínico, o que va a clasificarse como que tiene alta o baja probabilidad de entrar en un estado fisiológico o clínico, o que va a clasificarse como que tiene un pronóstico bueno o malo para entrar en un estado fisiológico o clínico. El valor de referencia o nivel de referencia según cualquiera de los métodos de la invención puede ser un valor absoluto; un valor relativo; un valor que tiene un límite superior y/o inferior; un intervalo de valores; un valor promedio; un valor mediano, un valor medio, o un valor en comparación con un valor de nivel inicial o de control particular. Un valor de referencia puede basarse en un valor de muestra individual, por ejemplo, un valor obtenido del sujeto femenino que va a someterse a prueba, sin embargo, en un punto anterior en el tiempo a la medición considerada, que va a compararse con dicho valor de referencia. El valor de referencia puede basarse en un gran número de muestras, por ejemplo, de una población de sujetos del grupo de edad cronológica coincidente, o basarse en un conjunto de muestras que incluye o excluye la muestra que va a someterse a prueba. Se tienen en cuenta diversas consideraciones cuando se determina el valor de referencia del marcador. Entre tales consideraciones están el punto de tiempo del ciclo menstrual, la edad, el peso, el sexo, el estado físico general de la paciente y similares. Por ejemplo, como grupo de referencia se toman cantidades iguales de un grupo de al menos 2, al menos 10, de al menos 100 a preferiblemente más de 1000 sujetos, preferiblemente clasificados según las consideraciones anteriores, por ejemplo, según diversas categorías de edad.

[0047] El término “valor de referencia”, tal como se usa en el presente documento, puede referirse al valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial teniendo en cuenta un sujeto dado en un punto de tiempo dado. En una realización preferida, el valor de referencia corresponde al valor de concentración de O<2>en el fluido endometrial en un punto de tiempo dado. En otras realizaciones, el valor de referencia corresponde al valor de concentración de CO<2>en el fluido endometrial en un punto de tiempo dado. En otras realizaciones, el valor de referencia corresponde a los valores de concentración individuales de O<2>y CO<2>en el fluido endometrial en un punto de tiempo dado.

[0048] En una realización preferida, el valor de referencia individual es el valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial para un sujeto femenino dado en un punto de tiempo dado antes del comienzo de la ventana de implantación en dicho sujeto femenino.

[0049] En algunas realizaciones, el valor de referencia se refiere al valor que resulta de agrupar valores de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial obtenidos de sujetos femeninos normales o sanos antes del comienzo de la ventana de implantación. En algunas realizaciones, el valor de referencia se refiere al valor que resulta de agrupar valores de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial en sujetos femeninos que se someten a procedimientos de reproducción asistida y/o IVF antes del comienzo de la ventana de implantación.

[0050] El término “valor de referencia” puede referirse a una serie de valores de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial obtenidos en puntos de tiempo consecutivos diferentes. Un “valor de referencia”, tal como se usa en el presente documento, puede referirse a un valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial obtenido de un sujeto diferente que el sujeto que se somete a determinación de la receptividad endometrial o un grupo de sujetos, preferiblemente dos o más sujetos, que se sabe que tienen un estado fisiológico o clínico conocido. El valor de concentración de referencia adecuado de gas disuelto en el fluido endometrial puede determinarse midiendo la concentración de gases disueltos en varios sujetos adecuados en un punto de tiempo dado, y tales niveles de referencia pueden ajustarse a poblaciones de sujetos o entornos clínicos específicos.

[0051] Normalmente, el valor de referencia puede ser un valor umbral. Normalmente, un “valor umbral” puede determinarse de manera experimental, empírica o teórica. Un valor umbral también puede seleccionarse de manera arbitraria basándose en las condiciones experimentales y/o clínicas existentes, tal como reconocería un experto habitual en la técnica. El valor umbral debe determinarse para obtener la sensibilidad y la especificidad óptimas según la función de la prueba y el equilibrio beneficio/riesgo (consecuencias clínicas de falso positivo y falso negativo). Normalmente, la sensibilidad y la especificidad óptimas (y, por tanto, el valor umbral) pueden determinarse usando una curva de rendimiento diagnóstico (ROC) basándose en los datos experimentales. En una realización de la presente invención, el valor umbral se deriva del valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial (o razón, o puntuación) determinado en uno o más sujetos femeninos en un punto de tiempo dado con un alto potencial para el resultado clínico del embarazo. En una realización particular, el valor de referencia o valor umbral se selecciona del grupo que consiste en 30 Torr (4,00 KPa), 35 Torr (4,67 KPa) y 40 Torr (5,33 KPa).

[0052] En una realización preferida, el valor de referencia es el valor de concentración de O<2>y/o CO<2>disuelto en el fluido endometrial en dicho sujeto femenino medido al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 2 ó 3 de la fase luteínica en los ciclos naturales, o entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 1-2 después de la administración de progesterona en los ciclos artificiales.

[0053] El término “al menos una vez” incluye una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces o más veces.

[0054] El término “ovulación” es la fase del ciclo menstrual en la que se libera un óvulo del ovario, óvulo que puede ser fecundado o no por un espermatozoide. Si se fecunda, el óvulo puede desplazarse a través del útero e implantarse para derivar en un embarazo. Si no se fecunda, el óvulo se disgrega y el endometrio se desprende durante el periodo. La ovulación se produce normalmente alrededor del día 14 de un ciclo menstrual normal de 28 días. Sin embargo, la presente invención contempla las condiciones fisiológicas y no fisiológicas y los sujetos femeninos en los que el momento exacto de la fase de ovulación puede variar mucho. El proceso de ovulación comienza con la liberación por parte del cuerpo de hormona estimulante de los folículos (FSH), normalmente entre los días 6 y 14 del ciclo menstrual, que contribuye a la maduración del óvulo dentro del ovario y desencadena la producción de estrógeno en el folículo. Una vez que el óvulo está maduro, el cuerpo libera un pico de hormona luteinizante (LH), desencadenando la liberación del óvulo. En condiciones normales, la ovulación puede suceder de 28 a 36 horas después del pico de LH. Un “pico de hormona luteinizante (LH)” puede determinarse en pruebas de orina y/o sangre usando métodos conocidos en la técnica. En una realización particular, un pico de LH se define como la concentración de LH en suero de al menos 15 mUI/ml (miliunidades internacionales por mililitro), en una realización más particular, al menos 20 mUI/ml.

[0055] El término “ciclo natural”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un ciclo en ausencia de tratamiento de reposición hormonal. La fase luteínica es la última fase del ciclo menstrual. Comienza con la formación del cuerpo lúteo y finaliza o bien con el embarazo o bien con la luteólisis (también regresión luteínica) que es la degradación estructural y funcional del cuerpo lúteo (CL), que se produce al final de la fase luteínica del ciclo menstrual en ausencia de embarazo. La hormona principal asociada con esta fase es la progesterona, que es significativamente mayor durante la fase luteínica que en las otras fases del ciclo. La fase luteínica comienza con la ovulación. Por tanto, tal como se usa en el presente documento, el día 1 de la fase luteínica (LH+1) corresponde al día después de la ovulación, el día 2 de la fase luteínica (LH+2) corresponde al día 2 después de la ovulación, el día 3 de la fase luteínica (LH+3) corresponde al día 3 después de la ovulación, etc. Normalmente, la ventana de implantación de un ciclo natural sucede entre LH+6 y LH+9.

[0056] El término “ciclo artificial”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un ciclo bajo estimulación con tratamiento de reposición hormonal. En un ciclo artificial, la progesterona se administra durante la fase luteínica y, tal como se usa en el presente documento, P+1 corresponde al primer día después de la administración de progesterona, P+2 corresponde al segundo día después de la administración de progesterona, etc. Normalmente, la ventana de implantación de un ciclo artificial sucede entre P+4 y P+6. Además, hay ciclos naturales donde se administra progesterona como complemento. En cada ciclo donde se administra progesterona para desarrollar o soportar la fase luteínica, la ventana de implantación sucede normalmente entre P+4 y P+6.

[0057] En algunas realizaciones, el valor de referencia es el valor de concentración de O<2>y/o CO<2>disuelto en el fluido endometrial en otro sujeto femenino o grupo de sujetos femeninos medido al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 2 ó 3 de la fase luteínica en los ciclos naturales, o entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 4-6 después de la administración de progesterona en los ciclos artificiales. Dicho otro sujeto femenino o grupo de sujetos femeninos pueden ser sujetos femeninos sanos o normales o sujetos femeninos que se someten a procedimientos de reproducción asistida y/o IVF.

[0058] Según la presente invención, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial no implica entrar en contacto directamente o interactuar físicamente con el endometrio de dicho sujeto femenino. El presente método contempla la medición de la concentración de gas disuelto interactuando exclusivamente con el fluido endometrial, pero evitando cualquier contacto directo con el tejido endometrial en la etapa de medición.

[0059] Tal como se usa en el presente documento, una desviación del valor de concentración de gas disuelto con respecto al valor de referencia puede referirse a un “aumento” del valor de concentración con respecto al valor de referencia. El término “valor de concentración aumentado” o “valor de concentración de gas disuelto aumentado”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de un gas disuelto en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de dicho gas disuelto se aumenta al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0060] En una realización preferida, un valor de concentración aumentado puede obtenerse en un sujeto femenino dado con respecto al valor de referencia obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo. Tal como se usa en el presente documento, un valor de concentración aumentado puede ser indicativo de un endometrio sincrónico con la implantación en relación con un embrión capaz de implantarse que entra en metabolismo aerobio y, por tanto, requiere una mayor concentración de oxígeno. El término “endometrio sincrónico con la implantación” se refiere al estado de un endometrio adecuado para permitir la implantación de un embrión de manera fisiológica y temporal tan desarrollado que puede interactuar con el endometrio receptivo para proceder con el embarazo.

[0061] En una realización, el valor de concentración de gas disuelto puede no cambiar con respecto al valor de referencia. Tal como se usa en el presente documento, un valor de concentración de gas disuelto “sin cambios” con respecto al valor de referencia puede ser indicativo de que el endometrio no es receptivo.

[0062] Tal como se usa en el presente documento, una desviación del valor de concentración de gas disuelto con respecto al valor de referencia puede referirse a una “reducción” del valor de concentración con respecto al valor de referencia.

[0063] El término “valor de concentración reducido” o “valor de concentración de gas disuelto reducido”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de un gas disuelto en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de dicho gas disuelto se reduce al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0064] En algunas realizaciones, un valor de concentración reducido puede obtenerse en un sujeto femenino dado con respecto al valor de referencia obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo. Tal como se usa en el presente documento, un valor de concentración reducido puede ser indicativo de un endometrio no sincrónico con la implantación en relación con un embrión capaz de implantarse. El término “endometrio no sincrónico con la implantación” se refiere al estado de un endometrio que no es adecuado para permitir la implantación de un embrión, de modo que no tiene lugar un embarazo.

[0065] En una realización preferida, el término “el endometrio es receptivo” o “endometrio sincrónico con la implantación” usado indistintamente en el presente documento en relación con el valor de concentración de O<2>disuelto en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de O<2>disuelto se aumenta al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0066] En algunas realizaciones, el término “el endometrio es receptivo”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de CO<2>disuelto, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de CO<2>disuelto se reduce al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0067] En algunas realizaciones, el término “el endometrio es receptivo”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de O<2>y CO<2>disueltos en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de O<2>disuelto se aumenta al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo y el valor de concentración de CO<2>disuelto se reduce al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0068] En algunas realizaciones, el término “el endometrio no es receptivo” o “endometrio no sincrónico con la implantación” usado en el presente documento en relación con el valor de concentración de O<2>disuelto en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de O<2>se reduce al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0069] En algunas realizaciones, el término “el endometrio no es receptivo”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de CO<2>disuelto en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el valor de concentración de CO<2>disuelto se aumenta al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0070] En algunas realizaciones, el término “el endometrio no es receptivo”, tal como se usa en el presente documento en relación con el valor de concentración de O<2>y CO<2>disueltos en el fluido endometrial, se refiere a una situación en la que el nivel de CO<2>se aumenta al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo y el nivel de O<2>se reduce al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 % cuando se compara con el valor de referencia correspondiente obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo.

[0071] El término “el endometrio es receptivo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la situación en la que el endometrio del sujeto femenino muestra al menos el 1 %, al menos el 2 %, al menos el 3 %, al menos el 4 %, al menos el 5 %, al menos el 6 %, al menos el 7 %, al menos el 8 %, al menos el 9 %, al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 %, al menos 100 % de probabilidades de adquirir un estado funcional que, tras la transferencia de un embrión capaz de implantarse, permite la adhesión del blastocisto y que conducirá al embarazo.

[0072] El término “el endometrio no es receptivo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la situación en la que el endometrio del sujeto femenino muestra al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 %, al menos el 100 % de probabilidades de no adquirir un estado funcional que, tras la transferencia de un embrión capaz de implantarse, permite la adhesión del blastocisto y que conducirá al embarazo. El término “embarazo” se entiende como la visualización de un saco gestacional 4 semanas después de la transferencia de embriones.

[0073] En algunas realizaciones, una vez se establece el valor de referencia, el valor de concentración de gas disuelto en el fluido endometrial en un sujeto femenino en el que va a determinarse la receptividad del endometrio puede compararse con este valor de referencia y, por tanto, puede asignarse como “aumentado”, “disminuido” o “igual” en cambio en veces con respecto al valor de referencia obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo. Por ejemplo, un aumento de los niveles por encima del valor de referencia de al menos 1,1 veces, al menos 1,2 veces, al menos 1,3 veces, al menos 1,4 veces, al menos 1,5 veces, 1,6 veces, al menos 1,6 veces, al menos 1,7 veces, al menos 1,8 veces, al menos 1,9 veces al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces al menos 5 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces, 100 veces o incluso más en comparación con el valor de referencia obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo se considera como valor de concentración “aumentado”. Por otro lado, una disminución de los niveles por debajo del valor de referencia de al menos 0,9 veces, 0,75 veces, 0,2 veces, 0,1 veces, 0,05 veces, 0,025 veces, 0,02 veces, 0,01 veces, 0,005 veces o incluso menos en comparación con el valor de referencia se considera como valor de concentración “disminuido” obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo. Un valor de concentración puede verse como “igual” al valor de referencia si el valor de concentración difiere con respecto al valor de referencia obtenido en dicho sujeto femenino en un punto de tiempo previo en menos del 1 %, menos del 0,5 %, menos del 0,4 %, menos del 0,3 %, menos del 0,1 %, menos del 0,05 %, o menos.

[0074] Tal como entenderá el experto en la técnica, tal determinación no busca habitualmente ser correcta para la totalidad (es decir, el 100 %) de los sujetos que van a identificarse. Sin embargo, el término requiere que pueda identificarse una parte estadísticamente significativa de los sujetos (por ejemplo, una cohorte en un estudio de cohortes). El experto en la técnica puede determinar fácilmente si una parte es estadísticamente significativa usando varias herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación de valores de p, prueba de la t de Student, prueba de Mann-Whitney, etc. Los detalles se encuentran Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley and Sons, Nueva York 1983. Los intervalos de confianza preferidos son de al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 97 %, al menos el 98 % o al menos el 99 %. Los valores de p son preferiblemente de 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 ó 0,0001. Más preferiblemente, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 % o al menos el 90 % de los sujetos de una población pueden identificarse de manera adecuada mediante el método de la presente invención.

[0075] En algunas realizaciones, la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide de manera continua durante un periodo de desde 1 minuto hasta 10 minutos, preferible desde 2 minutos hasta 7 minutos, más preferiblemente de desde 3 minutos hasta 5 minutos.

[0076] En algunas realizaciones, la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide al menos una vez, incluyendo al menos dos veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, o más veces, en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes de la ovulación y el día 12 de la fase luteínica, preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día de la ovulación y el día 10 de la fase luteínica, más preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día 2 y el día 8 de la fase luteínica, aún más preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día 4 y el día 7 de la fase luteínica.

[0077] En algunas realizaciones, la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide al menos una vez 2 días antes del comienzo de la ovulación, al menos una vez en la ovulación y/o al menos una vez en el día 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10 ó 12 de la fase luteínica.

[0078] En una realización particular, las mediciones realizadas desde dos días antes del comienzo de la ovulación hasta dos días después de la ovulación pueden usarse como valores de referencia. En esta realización particular, detectar una desviación, en particular un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>, en una o más de las mediciones realizadas después de la ovulación en comparación con las mediciones realizadas antes de la ovulación es indicativo de que el endometrio es receptivo.

[0079] En algunas realizaciones, las mediciones realizadas 2 días antes del día de la ovulación y el día de la ovulación pueden usarse como valores de referencia.

[0080] En algunas realizaciones, las mediciones realizadas en el día de la ovulación y el día después de la ovulación pueden usarse como valores de referencia.

[0081] En algunas realizaciones, las mediciones realizadas en el día de la ovulación y 2 días después de la ovulación pueden usarse como valores de referencia.

[0082] Sin querer limitarse a ninguna teoría particular, se considera que, durante la fase proliferativa del ciclo menstrual, la difusión de oxígeno desde las arterias espirales hasta la luz uterina disminuye como resultado del engrosamiento del endometrio. Esta hipoxia intrauterina fisiológica protege al embrión de especies de oxígeno tóxicas. Sin embargo, cuando la mórula alcanza el útero y el blastocisto comienza su desarrollo, la concentración de oxígeno en el fluido endometrial debe aumentar para cumplir las demandas metabólicas del embrión. Por tanto, en algunas realizaciones, el valor de referencia es el valor de O<2>disuelto a una concentración de hipoxia fisiológica en el fluido endometrial y el aumento del valor de concentración de O<2>disuelto con respecto a la hipoxia fisiológica es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo. Tal como se usa en el presente documento, “hipoxia fisiológica” se refiere a una situación en la que la concentración de oxígeno en el fluido endometrial es significativamente menor que la concentración de oxígeno en la atmósfera. Alternativamente, tal como se usa en el presente documento, “hipoxia fisiológica” se refiere a la situación en la que la concentración de oxígeno dentro de un tejido es menor de 40 mmHg (5 % de pO<2>) y se logra fisiológicamente, más particularmente menor del 2 % de pO<2>. En algunas realizaciones, dicho sujeto femenino se somete a un procedimiento de reproducción asistida con una etapa de transferencia de embriones. Tal como se usa en el presente documento, la expresión “técnica de reproducción asistida” o “tecnología de reproducción asistida” o “procedimiento de reproducción asistida” (ART) se refiere a una pluralidad de tratamientos destinados a aumentar la fecundidad. Los ejemplos no limitativos de ART incluyen inseminación intrauterina (IUI), inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), fecundaciónin vitro(IVF), transferencia de embriones en un sujeto femenino, pruebas genéticas previas a la implantación, ciclos de tratamiento de reposición hormonal (HRT) (por ejemplo, administración exógena de progesterona y estrógeno), maduraciónin vitrode ovocitos, transferencia intratubárica de gametos (GIFT), transferencia intratubárica de cigotos (ZIFT), gestación subrogada. La fecundaciónin vitro(IVF) es la unión del óvulo de una mujer y el espermatozoide de un hombrein vitro. Un ciclo de IVF implica varias etapas; etapa 1: estimulación, también denominada superovulación; etapa 2: extracción de óvulos; etapa 3: fecundación (tal como IVF o ICSI); etapa 4: cultivo de embriones; etapa 5: transferencia de embriones. El término “transferencia de embriones”, tal como se usa en el presente documento, se refiere al procedimiento en el que un embrión producido mediante cualquier método de fecundación se transfiere al útero de un receptor femenino.

[0083] En algunas realizaciones, el método de la invención comprende además, antes de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, una etapa de detectar la ovulación en dicho sujeto femenino mediante cualquier método adecuado, incluyendo métodos basados en los niveles de hormona luteinizante en la sangre u orina, ecografía, método de temperatura basal corporal (BBT) y cuantificación en la sangre de otras hormonas tales como progesterona y estrógeno. En una realización particular, la ovulación se detecta midiendo el nivel de hormona luteinizante (LH) y/o mediante monitorización por ecografía. En la técnica se conocen métodos para medir el nivel de hormona luteinizante (LH) y/o la monitorización por ecografía. El nivel de hormona luteinizante puede referirse al nivel de LH en la sangre o al nivel de LH en la orina. En ambos casos, la ovulación se produce en el plazo de 12-36 horas después de que se haya producido el pico de LH. El nivel de LH en la sangre y la orina puede determinarse mediante métodos rutinarios para la cuantificación de proteínas, preferiblemente métodos que comprenden el uso de anticuerpos con la capacidad de unirse específicamente a la proteína sometida a ensayo, en este caso LH, tales como transferencia o inmunotransferencia de tipo Western, ELISA (ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas), RIA (radioinmunoensayo), EIA competitivo (inmunoensayo enzimático), DAS-ELISA (ELISA tipo sándwich con doble anticuerpo), electroforesis en gel bidimensional, electroforesis capilar, técnicas inmunocitoquímicas e inmunohistoquímicas, inmunoturbidimetría, inmunofluorescencia, técnicas basadas en el uso de biochips o micromatrices de proteínas que incluyen anticuerpos específicos o ensayos basados en la precipitación coloidal en formatos tales como tiras de reactivo y ensayos basados en puntos cuánticos unidos a anticuerpos. Otras formas de detectar y cuantificar proteínas incluyen, por ejemplo, técnicas de cromatografía de afinidad o ensayos de unión a ligandos. En una realización particular, el nivel de LH en la orina puede determinarse por medio de un dispositivo de flujo lateral.

[0084] La ovulación puede detectarse mediante ecografía, que puede ser abdominal o transvaginal. Este método se basa en la monitorización del crecimiento folicular midiendo las dimensiones del folículo. La ovulación se produce generalmente cuando el folículo mide aproximadamente de 1,8 a 2,5 cm de diámetro.

[0085] En algunas realizaciones, el método de la invención comprende además medir un parámetro seleccionado del grupo que consiste en: la concentración de hormona luteinizante (LH) en la orina, la concentración de progesterona, estrógeno y/o factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en la sangre, la presencia de folículos y/o cuerpo lúteo en los ovarios, el grosor y el aspecto del endometrio y los índices de resistencia y pulsatilidad de las arterias espirales uterinas. En la técnica se conocen métodos para medir los parámetros mencionados anteriormente.

[0086] En particular, la concentración de progesterona, estrógeno y VEGF en la sangre puede determinarse mediante cualquier método adecuado para la cuantificación de proteínas en una muestra de sangre, tal como se explicó anteriormente para la cuantificación de LH.

[0087] La presencia de folículos y/o cuerpo lúteo en los ovarios puede determinarse mediante ecografía transvaginal o abdominal. El término “folículo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una estructura en el ovario que contiene y nutre el ovocito u óvulo. El término “cuerpo lúteo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una masa de células que se forma en un ovario después de que el folículo haya liberado el óvulo y es responsable de la producción de progesterona durante los primeros meses del embarazo. La ovulación puede detectarse monitorizando el crecimiento del folículo y la formación del cuerpo lúteo.

[0088] El grosor y el aspecto del endometrio pueden analizarse mediante ecografía.

[0089] El índice de resistencia (RI) y el índice de pulsatilidad (PI) de las arterias uterinas y espirales pueden determinarse mediante ecografía Doppler transvaginal. El término “índice de pulsatilidad”, también conocido como índice de Gosling,es un parámetro de flujo calculado en ecografía, derivado de los desplazamientos de frecuencia Doppler máximo, mínimo y medio durante un ciclo cardiaco definido. El índice de pulsatilidad se calcula mediante una de las siguientes ecuaciones:

[0090] PI=(V<máx>-V<mín>)/(V<medio>)

[0091] PI=(velocidad sistólica máxima – velocidad diastólica mínima)/(velocidad media)

[0092] El término “índice de resistencia”, también conocido como “índice de Pourcelot”, se refiere a un parámetro de flujo calculado en ecografía, derivado de los desplazamientos de frecuencia Doppler máximo, mínimo y medio durante un ciclo cardiaco definido. El índice de resistencia se calcula con la fórmula: RI=(PSV-EDV)/PSV, donde PSV significa velocidad sistólica máxima y EDV significa velocidad telediastólica.

[0093] En algunas realizaciones, la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide en el fondo uterino y/o en el conducto endocervical de dicho sujeto femenino, preferiblemente en el conducto endocervical del útero.

[0094] El término “fondo uterino”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la zona superior curvada amplia del útero en la que las trompas de Falopio se conectan al útero. En algunas realizaciones, las mediciones de concentración de gas disuelto se realizan al menos 1 cm de distancia del fondo uterino.

[0095] El término “conducto endocervical”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la parte inferior del útero que se extiende hacia abajo desde el istmo hasta que se abre en la vagina. En algunas realizaciones, la etapa de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se realiza mediante un sensor capaz de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial, sensor que no entra en contacto con el endometrio de dicho sujeto femenino. Ejemplos no limitativos de sensores capaces de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial son sensores disponibles comercialmente tales como microsensores de oxígeno de PreSens, Neotrend, Paratrend, Neurotrend, NEUROVENT-PTO y Licox.

[0096] En algunas realizaciones, la etapa de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se realizain vitroen una muestra de fluido endometrial. El término “in vitro”, tal como se usa en el presente documento, se refiere al hecho de que el método no se lleva a cabo en el cuerpo de un sujeto humano o animal, sino más bien en células o fluidos aislados de dicho sujeto o en un tubo de ensayo. Los expertos en la técnica conocen bien métodos para obtener muestras de fluido endometrial, por ejemplo, mediante aspiración del fluido comprendido en la cavidad uterina. Para llevar a cabo esta realización particular del método de la invención, debe evitarse el contacto entre la muestra de fluido endometrial y la atmósfera de modo que no se altere el contenido de gas disuelto en la muestra de fluido endometrial.

[0097] En otra realización particular, el sensor para medir la concentración de O<2>o CO<2>disuelto está ubicado dentro del catéter y se aspira una muestra de fluido endometrial en el interior del catéter, de modo que la medición se realiza en el interior del catéter mientras que está en el útero, preferiblemente en el conducto endocervical.

[0098] 2. Método para seleccionar un sujeto femenino que se somete a un procedimiento de ART como candidato para recibir un embrión

[0099] Los autores han hallado que la medición de la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de un sujeto femenino permite la selección de un sujeto femenino que se somete a un procedimiento deARTcomo candidato para recibir un embrión que va a realizarse en el mismo día que la medición de gas disuelto. La identificación de un sujeto femenino cuyo endometrio es receptivo o no receptivo es la base para una decisión clínica en determinadas etapas de enfoques de reproducción asistida. Tal decisión clínica puede implicar seleccionar un embrión capaz de implantarse y transferir dicho embrión al útero de un sujeto femenino, si el endometrio es receptivo. Por el contrario, si el endometrio no es (aún) receptivo, se pide al sujeto que vuelva al día siguiente para otra medición. Finalmente, si es posreceptivo, se prescinde de la selección de un embrión capaz de implantarse y ya no se programa la transferencia de embriones. El presente método proporciona la base para una decisión clínica fiable en poco tiempo, incluso en el plazo de minutos. La programación de las etapas posteriores en los procedimientos de reproducción asistida puede evaluarse mucho más rápido que con los métodos convencionales. Además, medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de un sujeto femenino para evaluar la receptividad endometrial en un punto de tiempo dado no requiere la extracción de biopsias endometriales. Las mediciones pueden realizarse con los equipos convencionales usados para los procedimientos de fecundaciónin vitro, más específicamente, para la etapa de transferencia de embriones al útero de un sujeto femenino. El enfoque de medición según la invención representa un procedimiento muy ligero que generalmente no está asociado con dolor o daño tisular en el sujeto femenino. Por consiguiente, la etapa de medir la concentración de gas disuelto es compatible con realizar posteriormente, tan pronto como en el plazo de unas pocas horas desde la etapa de medición, la transferencia de embriones en el mismo sujeto femenino si se determina que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo con el primer método de la invención.

[0100] Por tanto, en un aspecto adicional, la invención se refiere a un método para seleccionar un sujeto femenino que se somete a un procedimiento de reproducción asistida como candidato para recibir un embrión (segundo método de la invención), comprendiendo el método las etapas de:

[0101] i) determinar si el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo siguiendo las etapas del método según el primer método de la invención, y si dicho endometrio es receptivo,

[0102] ii) seleccionar dicho sujeto femenino como candidato para recibir un embrión en un procedimiento de transferencia de embriones que va a realizarse tan pronto como el mismo día que la etapa i).

[0103] Tal como se usa en el presente documento, el término “procedimiento que va a realizarse tan pronto como” se refiere al posible punto de tiempo más temprano en el que puede realizarse un procedimiento dado sin limitación que va a realizarse en un punto de tiempo posterior con respecto a dicho punto de tiempo más temprano. El término “tan pronto como el mismo día que la etapa i)” se entiende de manera que, según la invención, el punto de tiempo más temprano para un procedimiento de transferencia de embriones puede ser el día en el que se lleva a cabo la determinación de la receptividad endometrial, sin embargo, sin limitación, va a realizarse en un punto de tiempo posterior, por ejemplo, 1 día después de la determinación de la receptividad endometrial, 2 días después de la determinación de la receptividad endometrial, etc.

[0104] En una primera etapa del segundo método de la invención, se mide la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial y se determina la receptividad del endometrio de un sujeto femenino tal como se describió anteriormente en el contexto del primer método de la invención. Los métodos para medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial descritos anteriormente en el contexto del primer método de la invención son aplicables al segundo método de la invención.

[0105] Las realizaciones dadas a conocer en el contexto del primer método de la invención también se contemplan para el segundo método de la invención.

[0106] 3. Método para lograr un embarazo en un sujeto femenino

[0107] Los autores han hallado que medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de un sujeto femenino hace posible lograr un embarazo en un sujeto femenino, en particular, un sujeto femenino que se somete a procedimientos de reproducción asistida. La expresión “determinar la receptividad endometrial”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la evaluación de un estado fisiológico o clínico del endometrio con respecto al resultado clínico del embarazo (por ejemplo, probabilidad de embarazo o supervivencia del embrión capaz de implantarse). Tal como se usa en el presente documento, el término “embarazo” se entiende como la visualización de un saco gestacional 4 semanas después de la transferencia de embriones. El término embarazo también puede entenderse como el resultado del resultado final de un acontecimiento de fecundación.

[0108] El término “método para lograr un embarazo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier clase de medida o bien profiláctica o bien terapéutica, incluyendo medios de cualquier clase, tales como medios higiénicos, medios farmacológicos, medios quirúrgicos o medios físicos, con el propósito de promover el embarazo en un sujeto femenino.

[0109] Por tanto, en un aspecto adicional, la invención se refiere a un método para lograr un embarazo en un sujeto femenino (tercer método de la invención), comprendiendo el método las etapas de:

[0110] i) medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto, en el que el gas disuelto se selecciona del grupo que consiste en O<2>y CO<2>,

[0111] ii) comparar dicho valor de concentración de gas disuelto con un valor de referencia, en el que un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>disuelto con respecto al valor de referencia es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo, y

[0112] si el valor de concentración de gas disuelto se desvía de dicho valor de referencia,

[0113] iii) transferir un embrión al endometrio receptivo de dicho sujeto femenino, y

[0114] iv) permitir la progresión del embarazo.

[0115] Alternativamente, la invención se refiere a un método para tratar la infecundidad en un sujeto femenino, que comprende:

[0116] i) medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto, en el que el gas disuelto se selecciona del grupo que consiste en O<2>y CO<2>,

[0117] ii) comparar dicho valor de concentración de gas disuelto con un valor de referencia,

[0118] y si existe un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>en comparación con un valor de referencia,

[0119] iii) tratar la infecundidad transfiriendo un embrión al endometrio receptivo de dicho sujeto femenino y permitiendo la implantación del embrión.

[0120] En una primera etapa del tercer método de la invención, se mide la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial y se determina la receptividad del endometrio de un sujeto femenino tal como se describió anteriormente en el contexto del primer método de la invención. Los métodos para medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial descritos anteriormente en el contexto del primer método de la invención son aplicables al tercer método de la invención.

[0121] Las realizaciones dadas a conocer en el contexto del primer método de la invención también se contemplan para el tercer método de la invención.

[0122] La invención se detalla a continuación por medio de los siguientes ejemplos que son simplemente ilustrativos y en modo alguno limitativos del alcance de la invención.

[0123] Ejemplos

[0124] En ausencia de un método fiable de detección de la WOI, la complejidad multifactorial de la receptividad endometrial y la falta de biomarcadores conocidos, los parámetros biofísicos tales como la tensión del oxígeno y la tensión del dióxido de carbono se investigan como indicadores de un endometrio sano y que funciona de manera apropiada. Estos parámetros tienen un comportamiento dinámico en el interior del útero y, de manera importante, deben sincronizarse con las necesidades del embrión en diferentes fases de su desarrollo. En este sentido, aunque el requisito de oxígeno es bajo cuando el embrión reside en la trompa de Falopio, hasta la fase de mórula, el requisito de oxígeno aumenta de manera drástica cuando se convierte en blastocisto, y aumenta el uso de glucosa como fuente de energía para asegurar su actividad de biosíntesis. La disponibilidad de nutrientes, la concentración de oxígeno y el estado redox del blastocisto regulan su metabolismo y potencial de implantación. Teniendo en cuenta que la oxigenación del embrión depende del oxígeno disuelto dentro de la trompa de Falopio y en el fluido endometrial, los cambios en la concentración de oxígeno dentro del útero deben sincronizarse con el desarrollo metabólico del embrión. Por tanto, durante la fase proliferativa del ciclo menstrual, se engrosa el endometrio y se dificulta la difusión de oxígeno desde las arterias espirales a la luz uterina. Esta hipoxia intrauterina fisiológica protege al embrión de especies de oxígeno tóxicas, y si no se establece, como en el caso de un endometrio delgado, se obstaculiza lograr el embarazo. Sin embargo, cuando la mórula alcanza el interior del útero y el blastocisto comienza su desarrollo, debe aumentarse la concentración de oxígeno en el fluido endometrial, puesto que concentraciones de oxígeno bajas inhibirían la actividad mitocondrial y el metabolismo de la glucosa, que tienen un impacto perjudicial en el desarrollo y la implantación del blastocisto. Dicho de otro modo, la presión de oxígeno intrauterino debe sincronizarse con los requisitos metabólicos del embrión según su fase de desarrollo: hipoxia durante las fases celulares y mayor concentración de oxígeno desde la fase de blastocisto y durante la implantación. Estudios previos mostraron que, desde la ovulación y durante la fase luteínica, existe un enrollamiento y crecimiento significativos de las arterias espirales, una maduración del plexo capilar subepitelial y un aumento de la densidad de puntos de ramas de vasos sanguíneos, coincidiendo con la producción de progesterona y un aumento significativo en el factor proangiógeno VEGF y sus receptores. Este proceso facilitaría la difusión de oxígeno desde los vasos sanguíneos al fluido endometrial y podría dar como resultado un aumento de la concentración de oxígeno intrauterino. Los estudios en seres humanos sugieren que aumenta el oxígeno y disminuye el dióxido de carbono en la fase luteínica con respecto a la fase proliferativa, mientras que no observó ninguna diferencia entre las mediciones realizadas en el fondo uterino o el conducto endocervical. Además, el equilibrio de estos gases parece cambiar en algunas patologías uterinas tales como mioma, carcinoma cervicouterino o carcinoma endometrial. La homeostasis del oxígeno es un proceso complejo que refleja el funcionamiento apropiado de un sistema biológico como un todo. Puede verse alterado por infección, inflamación, cáncer o por un defecto en la angiogénesis o la regulación hormonal. También se sabe que i) el embrión consumein vivoel oxígeno disuelto en el fluido endometrial, ii) la concentración de oxígeno en este fluido depende de la difusión del gas desde los vasos sanguíneos a la luz del útero, iii) esta difusión depende de la distancia entre los vasos sanguíneos y la luz y, por tanto, del grosor del endometrio y el desarrollo de estos vasos sanguíneos.

[0125] Sin embargo, no existe ningún estudio que relacione el cambio de tendencia de la concentración de oxígeno disuelto en el fluido endometrial como una indicación del comienzo de la receptividad endometrial. Por consiguiente, la presente invención proporciona un método para detectar la ventana de implantación en un sujeto femenino basándose en un cambio de tendencia de la concentración de oxígeno disuelto en el fluido endometrial, mientas que una tendencia creciente con respecto a un valor de referencia obtenido previamente en el mismo sujeto se asocia con la aparición de la receptividad endometrial. Dicho de otro modo, los inventores han hallado que las mediciones de oxígeno en el fluido endometrial representan un enfoque fiable para evaluar si se ha desarrollado de manera apropiada el endometrio y si se sincroniza y es receptivo con el blastocisto en el momento de la transferencia de embriones en procedimientos de ART, con el objetivo de lograr tasas de implantación mejoradas.

[0126] De manera importante, el método de la invención es ventajoso con respecto a la técnica anterior porque no se basa en el análisis de muestras de biopsia y, por tanto, no afecta a la integridad del tejido endometrial, conservando un entorno adecuado para una posterior implantación de embriones. El método de la invención es ventajoso porque representa un método para detector la WOI, que puede realizarse en el mismo ciclo en el que se transfiere el embrión y que es compatible con los ciclos naturales, permitiendo a su vez la personalización de los protocolos de ART enfocados en aumentar el éxito del tratamiento, facilitar los ciclos naturales, reducir el número de transferencias necesarias para lograr un embarazo y reducir de ese modo el impacto sobre la salud mental y física de las familias y el coste económico para el sistema sanitario.

[0127] El método de la invención tiene como objetivo detectar la receptividad y la sincronía endometriales a través de la medición no invasiva de la presión de oxígeno intrauterino en el fluido endometrial, por ejemplo, mediante medios ópticos. Los sensores ópticos de oxígeno son seguros, precisos y se han usado en diferentes aplicaciones clínicas tales como la monitorización continua de gases en la sangre de pacientes sedados y neonatos en estado crítico y la monitorización de oxígeno en el cerebro en pacientes con lesión cerebral aguda. La medición de la concentración de oxígeno disuelto por medio de sensores ópticos de oxígeno puede llevarse a cabo de manera exitosa en el día de la transferencia de embriones usando un catéter de transferencia (catéteres tales como los usados para la transferencia de embriones en IVF) para colocar el microsensor óptico en el fondo uterino en contacto con el fluido endometrial, sin embargo, sin entrar en contacto con el endometrio.

[0128] Materiales y métodos

[0129] Población de sujetos

[0130] 5 voluntarias sanas jóvenes (18-35 años) con un IMC < 30, ciclos regulares, no fumadoras y morfología uterina normal. Criterios de exclusión:

[0131] -Patología médica: diabetes mellitus de tipo 1, síndrome de Cushing, disfunción tiroidea, insuficiencia hepática y/o renal, una patología que contraindique la estimulación ovárica y/o la gestación y síndrome antifosfolipídico.

[0132] -Patología uterina (endometriosis, cáncer, malformaciones, pólipos, miomas).

[0133] -Fumadora o consumo de drogas

[0134] -Tratamiento con anticonceptivos orales o DIU en los últimos 3 meses.

[0135] Diseño experimental

[0136] Se usa un sensor óptico de oxígeno estéril usado previamente en la detección de la concentración de oxígeno intrauterino (Ottosenet al.“Observations on intrauterine oxygen tension measured by fiber-optic microsensors” Reproductive biomedicine online vol.13.3 (2006): 380-5). El método en Ottosenet al.para la detección de oxígeno intrauterino en mujeres usa un microsensor de fibra óptica y un catéter de transferencia para su introducción en el útero. La clase del sensor de oxígeno usado también es parte de varios dispositivos médicos aprobados para la detección de oxígeno en la sangre y el cerebro: Neurotrend, Neotrend, Paratrend, NEUROVENT-PTO, Raumedic neuro-icu (https://www.raumedic.com/neuromonitoring/neuro-icu).

[0137] Las características de medición se determinan por el fabricante. El intervalo de medición del sensor es del 0–500 % de saturación de aire (sat. de aire). Debido al principio de medición del sensor, la resolución varía con la presión parcial. La resolución al 1, al 30, al 100, al 250 % de sat. de aire era del 0,05, el 0,1, el 0,5 y el 1,7 % de sat. de aire, respectivamente. Por tanto, la resolución en la cavidad uterina es mejor que el 0,1 % de sat. de aire. La precisión está dentro del ± 1 % de sat. de aire. El 0–90 % de tiempo de respuesta es <5–10 s. El sensor no muestra sensibilidad cruzada para el dióxido de carbono ni ninguna especie iónica (www.presense.de).

[0138] La tensión del oxígeno intrauterino se mide con un tipo de microsensor de fibra óptica especialmente ideado, fabricado de fibras ópticas aisladas flexibles delgadas con un diámetro exterior de 0,9 mm. Estas sondas implantables miniaturizadas son adecuadas para diversas aplicaciones, por ejemplo, la inserción en el torrente sanguíneo o el tejido, y producen mediciones de oxígeno en tiempo real en línea. El principio de detección se basa en la extinción por oxígeno del colorante fluorescente (un fluróforo) inmovilizado en la punta de la fibra y recubierto posteriormente con un aislamiento ópti

[0139] Ratisbona, Alemania, www.presens.de). La disminución del rendimiento cuántico fluorescente del fluoróforo [tris-(4,7-difenil-1,10-fenantrolina de rutenio(II)], así como el tiempo de desintegración fluorescente es proporcional a la concentración de oxígeno unido a la matriz en la que se inmoviliza el colorante. El tiempo de desintegración fluorescente se registra con un medidor de oxígeno OXY-1-ST (www.presense.de), que está conectado a un ordenador portátil. Con detalle, un dispositivo que se acopla a un catéter que contiene un extremo con conexión de Luer macho rotativo está fijado al sensor, en una posición que permite una exposición de la punta del sensor de menos de 1 mm en el fluido endometrial cuando se gira la conexión de Luer. La cánula de guiado del conjunto de cáteter de transferencia de embriones de Labotect, que contiene una conexión de Luer en el extremo proximal, se usa para acceder a la cavidad uterina con ayuda ecográfica. Cuando el extremo de la cánula está 1 cm de distancia del fondo uterino, el microsensor se introduce a través del mismo y se gira la conexión de Luer, dejando la punta del microsensor “nadando” en el fluido endometrial, pero nunca en contacto directo con el tejido endometrial. Se halló que la punta distal redondeada de la cánula de guiado de Labotect era particularmente útil en este sentido. Se extiende menos de 1 mm de la punta del sensor poco antes del comienzo de las mediciones y se retrae antes de retirar el sensor de la cavidad uterina.

[0140] Esta extensión precisa de la punta del sensor, lograda mediante la fijación del dispositivo de acoplamiento de catéter al sensor, evita exponer el sensor a mano a la luz uterina. En particular, la extensión controlada del sensor en menos de 1 mm en el fluido endometrial es ventajosa porque aumenta sustancialmente la precisión de las mediciones con respecto a los métodos conocidos. Este procedimiento garantiza la seguridad y la reproducibilidad de los resultados: asegura que no se rompe ni se daña la punta del sensor, no entra en contacto con el tejido endometrial exponiéndose sólo al fluido uterino y que las mediciones se llevan a cabo siempre en la misma posición en el fondo uterino.

[0141] Cuando se llevan a cabo las mediciones, se retrae el catéter desde el útero hasta el conducto endocervical para medir la concentración de oxígeno en el cuello uterino.

[0142] Estas determinaciones se realizan una vez en la fase folicular temprana (entre los días 3-5 del ciclo menstrual) y una vez cada 48 h entre los días 14 y 26 del mismo ciclo. La concentración de oxígeno disuelto en el fluido endometrial se mide en el fondo uterino y el conducto endocervical. Los valores obtenidos se comparan con los siguientes parámetros: presencia de folículos y cuerpo lúteo, grosor y aspecto endometriales, índices de resistencia y pulsatilidad, concentración de LH en la orina y progesterona y estrógeno en la sangre.

[0143] Programación experimental

[0144] En el domicilio:

[0145] - Detección de LH en la orina cada día desde el día 10 al 17 del ciclo usando tiras de flujo lateral (tiras de flujo lateral de LH).

[0146] En la clínica de IVF:

[0147] - Monitorización por ecografía de aspecto de folículos y cuerpo lúteo, así como grosor y aspecto endometriales. Además, los índices de resistencia y pulsatilidad se determinan mediante ecografía Doppler. Esta monitorización se realiza un día entre los días 3 y 5 del ciclo y en días alternos entre los días 14 y 26 del ciclo menstrual en la clínica de IVF.

[0148] - Se realiza la medición de oxígeno en el fluido endometrial según el método de la invención usando fibras ópticas micrométricas que se insertan en la cavidad intrauterina usando un catéter de transferencia. La inserción se monitoriza mediante ecografía abdominal. La medición se realiza durante 5-10 minutos en el fondo uterino y otros 5-10 minutos en el conducto endocervical. Estas mediciones se llevan a cabo un día entre los días 3 y 5 del ciclo y en días alternos entre los días 14 y 26 del ciclo menstrual usando la consulta de IVF.

[0149] En la consulta de la enfermera:

[0150] - Se realizan extracciones de sangre después de ayunar durante 8 horas un día entre los días 3 y 5 del ciclo y en días alternos entre el día 14 y el día 26 del ciclo menstrual A.

[0151] - Se realiza la determinación de la saturación de oxígeno en la sangre un día entre los días 3 y 5 del ciclo y en días alternos entre los días 14 y 26 del ciclo menstrual usando un pulsoxímetro.

[0152] Resultados

[0153] Se realizó un ANOVA unilateral seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Turkey usando GraphPad Prism versión 9.3.1 para macOS, GraphPad Software, San Diego, California, EE. UU., www.graphpad.com”.

[0154] Este estudio se realizó en la Unidad de Reproducción Asistida del Hospital Vall d’Hebron en Barcelona. Como resultado, se han obtenido los primeros datos en seres humanos que describen el patrón de oxígeno intrauterino a lo largo de toda la fase luteínica del ciclo menstrual de mujeres fértiles. Los patrones de pO<2>indican la aparición de la WOI en el 80 % de las participantes (figura 4: A, B), descritos por un máximo de la concentración de oxígeno disuelto. El análisis descriptivo de los datos representados en la figura 4 se incluye en las tablas 1, 2 y 3.

[0155]

[0158] 

[0161] 

[0162]

[0165] Cerca del día de la ovulación o poco después de que se produzca la ovulación, se logra la hipoxia fisiológica y la presión de oxígeno disuelto alcanza valores por debajo de 10 Torr (el 1,4 % o 1333 Pa) en el fondo de la cavidad uterina. Las mujeres que siguen un patrón convencional (figura 4A) tienen valores de pO<2>alrededor de 20 Torr hasta el día LH+4 y aumentan hasta 30 Torr el día LH+5. El día LH+6, pO<2>alcanza el máximo (40-45 Torr) y permanece estable el día LH+7. Luego, los niveles de oxígeno comienzan a disminuir el día LH+8, alcanzando valores de alrededor de 30 Torr de nuevo. Este patrón se correlaciona con los datos históricos recogidos mediante anatomía patológica y expresión génica, indicando que la ventana de implantación se produce entre LH+6 y LH+9 en los ciclos naturales o entre P+4 y P+7 en los ciclos de tratamiento de reposición hormonal (HRT). Se ha hallado que el entorno uterino está preparado para el embrión el día LH+6, y la WOI comienza a cerrarse el día LH+8 (figura 4A).

[0166] Para una implantación de embriones y un embarazo en curso exitosos, la interferencia entre el endometrio receptivo y el embrión es crítica. Por un lado, el endometrio secreta múltiples factores, proteínas, o vesículas al fluido uterino necesarios para el desarrollo del blastocisto y la invasión de trofoblastos. Por otro lado, el embrión modula el endometrio para una implantación exitosa. Varias citocinas (tales como el factor de crecimiento placentario) se regulan por incremento en el trofectodermo humano el día 5 del blastocisto. El epitelio receptivo monta una respuesta transcripcional al estímulo de trofoblastos y, cuando se une al epitelio endometrial, induce una regulación por incremento transcripcional temprana y transitoria en el epitelio receptivo.

[0167] Por tanto, el nivel de pO<2>que disminuye en LH+8 debe ser en respuesta a la ausencia de un embrión en la cavidad uterina, provocando la señalización del cierre de la WOI. Se sabe que la placentación invasiva y el embarazo se producen en presencia de un embrión viable. Sin embargo, en su ausencia, el endometrio experimenta descomposición, remodelación y regeneración.

[0168] La figura 4B muestra un perfil de pO<2>de una mujer que tenía una WOI acortada y avanzada. Cabe señalar que se logró hipoxia fisiológica al comienzo de la fase luteínica. Sin embargo, el día LH+5, el nivel de oxígeno disuelto está ya en el intervalo de 40-45 Torr, correspondiente a los valores de pO<2>de los días LH+6 y LH+7 en un perfil convencional (figura 4A). Además, disminuyó rápidamente la concentración de oxígeno, alcanzado valores de pO<2>por debajo de 10 Torr el día LH+7. Por tanto, la WOI ya estaría cerrada si se realizó la transferencia de embriones en LH+7 a esta mujer. Además, el 20 % de las participantes no mostraron ningún aumento de pO<2>, de modo que se sospecha de una WOI alterada. Las mujeres que presentaban este perfil de pO<2>deben someterse a una evaluación exhaustiva de la función endometrial.

[0169] Además, al menos otros dos parámetros pueden combinarse con la detección de pO<2>-WOI para tratar infecundidad y recomendar la transferencia de embriones: nivel de progesterona en la sangre y grosor endometrial.

[0170] Los bajos niveles de progesterona en la sangre el día de la transferencia de embriones se asocian con peores resultados clínicos después de la transferencia de embriones recién obtenidos o congelados, y se ha demostrado que niveles de progesterona entre 10 y 20 ng/ml el día de la transferencia de embriones son óptimos. Por tanto, el soporte de progesterona individualizado después de la transferencia de embriones podría beneficiar a estas pacientes. Además, un endometrio delgado (≤ 7mm) en la fase folicular tardía puede asociarse con una implantación fallida y menores tasas de nacidos vivos.

[0171] La medición de oxígeno intrauterino usada sola o combinada con el nivel de progesterona y/o el grosor endometrial antes de la transferencia de embriones permitirá realizar recomendaciones para el tratamiento de la infecundidad. Las opciones podrían ser proceder con la transferencia de embriones, complementar progesterona de manera individualizada, tratar el endometrio delgado, obtener un análisis exhaustivo de la función endometrial, o suspender la transferencia para los próximos ciclos de IVF naturales o artificiales.

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Método para la determinación de la receptividad endometrial en un sujeto femenino, comprendiendo el método las etapas de:

i) medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial de dicho sujeto femenino, obteniendo de ese modo un valor de concentración de gas disuelto, en el que el gas disuelto se selecciona del grupo que consiste en O<2>y CO<2>,

ii) comparar dicho valor de concentración de gas disuelto con un valor de referencia, en el que un aumento del valor de concentración de O<2>disuelto y/o una disminución del valor de concentración de CO<2>disuelto con respecto al valor de referencia es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo.

2. Método según la reivindicación 1, en el que la etapa de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial no implica entrar en contacto con el endometrio de dicho sujeto femenino.

3. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que una desviación del valor de concentración de gas disuelto con respecto al valor de referencia es indicativa de un endometrio sincrónico con la implantación en relación con un embrión capaz de implantarse.

4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el valor de referencia es el valor de concentración de O<2>o CO<2>disuelto en el fluido endometrial en dicho sujeto femenino medido al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 2 ó 3 de la fase luteínica.

5. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el valor de referencia es el valor de concentración de O<2>o CO<2>disuelto en el fluido endometrial en otro sujeto femenino o grupo de sujetos femeninos medido al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes del comienzo de la ovulación y el día 2 ó 3 de la fase luteínica.

6. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre 2 días antes de la ovulación y el día 12 de la fase luteínica, preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día de la ovulación y el día 10 de la fase luteínica, más preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día 2 y el día 8 de la fase luteínica, aún más preferiblemente al menos una vez en el periodo de tiempo comprendido entre el día 3 y el día 6 de la fase luteínica.

7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide al menos una vez 2 días antes del comienzo de la ovulación, al menos una vez en la ovulación y/o al menos una vez en el día 2, 4, 6, 8, 10 ó 12 de la fase luteínica.

8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el valor de referencia es el valor de O<2>disuelto a una concentración de hipoxia fisiológica en el fluido endometrial y el aumento del valor de concentración de O<2>disuelto con respecto a la hipoxia fisiológica es indicativo de que el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo.

9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho sujeto femenino se somete a un procedimiento de reproducción asistida con una etapa de transferencia de embriones.

10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, comprendiendo el método además, antes de la etapa i), una etapa de detectar la ovulación en dicho sujeto femenino midiendo el nivel de hormona luteinizante (LH) y/o mediante monitorización por ecografía.

11. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, comprendiendo el método además medir un parámetro seleccionado del grupo que consiste en: la concentración de LH en la orina, la concentración de progesterona, estrógeno y/o VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) en la sangre, la presencia de folículos y/o cuerpo lúteo en los ovarios, el grosor y el aspecto del endometrio y los índices de resistencia y pulsatilidad de las arterias espirales uterinas.

12. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se mide en el fondo uterino y/o en el conducto endocervical de dicho sujeto femenino.

13. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la etapa de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se realiza mediante un sensor capaz de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial, sensor que no entra en contacto con el endometrio de dicho sujeto femenino.

14. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que la etapa de medir la concentración de gas disuelto en el fluido endometrial se realizain vitroen una muestra de fluido endometrial.

15. Método para seleccionar un sujeto femenino que se somete a técnicas de reproducción asistida (ART) como candidato para recibir un embrión, comprendiendo el método las etapas de:

i) determinar si el endometrio de dicho sujeto femenino es receptivo siguiendo las etapas del método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, y si dicho endometrio es receptivo,

ii) seleccionar dicho sujeto femenino como candidato para recibir un embrión en un procedimiento de transferencia de embriones que va a realizarse tan pronto como el mismo día que la etapa i).