ES3060954T3 - The 5ht agonist clemizole for use in treating epilepsy disorders - Google Patents

Abstract

El agonista del receptor 5HT, Clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un método para tratar un trastorno epiléptico, en el que el trastorno epiléptico sea el síndrome de Ohtahara, la encefalopatía mioclónica temprana o la encefalopatía epiléptica infantil. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] El agonista de 5HT clemizol para uso en el tratamiento de trastornos de epilepsia

[0003] Referencia cruzada con solicitudes relacionadas

[0004] Esta solicitud reivindica prioridad para la solicitud de los Estados Unidos n.º 62/120,726 presentada el 25 de febrero de 2015.

[0005] Declaración sobre los derechos a las invenciones realizadas bajo la investigación y el desarrollo patrocinados por el gobierno federal

[0006] Esta invención se realizó con el apoyo del gobierno de los Estados Unidos bajo el número de subvención R01 NS07921403 otorgado por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno de los Estados Unidos tiene ciertos derechos en la invención.

[0007] Campo de la invención

[0008] La divulgación proporciona clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en métodos para tratar un trastorno de epilepsia.

[0009] Antecedentes de la invención

[0010] El síndrome de Dravet (SD) es una epilepsia pediátrica catastrófica con discapacidad intelectual severa, deterioro del desarrollo social y convulsiones persistentes resistentes a los medicamentos. Una de sus principales causas son las mutaciones en Nav1.1 (SCN1A), un canal de sodio dependiente del voltaje. Las convulsiones que experimentan las personas con SD y otros trastornos epilépticos no se controlan adecuadamente con los fármacos antiepilépticos (FAE) disponibles y los niños con SD no son buenos candidatos para la resección neuroquirúrgica. Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica de opciones de tratamiento de la epilepsia, especialmente aquellas para el SD y las epilepsias pediátricas catastróficas relacionadas. En el presente documento se proporcionan soluciones a estos problemas y otros problemas de la técnica.

[0011] Scott C. Baraban et al., "Drug screening in Scn1a zebrafish mutant identifies clemizole as a potential Dravet syndrome treatment", NATURE COMMUNICATIONS, 4, 2410 (2013) describen la caracterización de mutantes de scn1Lab a nivel molecular y conductual, y se demuestra que presentan convulsiones espontáneas resistentes a fármacos. Este documento también describe el uso de los mutantes en un novedoso programa de cribado de alto rendimiento para identificar compuestos que mejoran el fenotipo de la epilepsia.

[0012] J. M. Richter et al., "Clemizole Hydrochloride Is a Novel and Potent Inhibitor of Transient Receptor Potential Channel TRPC5", MOLECULAR PHARMACOLOGY, 86(5), 514 - 521 (2014) describen la identificación del clemizol como un inhibidor de los canales TRPC5.

[0013] Breve resumen de la invención

[0014] Se proporciona clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en un método para tratar un trastorno epiléptico, en el que dicho dicho trastorno epiléptico es el síndrome de Ohtahara; y

[0015] en el que dicho sujeto:

[0016] (i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina o

[0017] (ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, opcionalmente en el que dicho inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina.

[0018] También se proporciona clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en un método para tratar un trastorno epiléptico en un sujeto, en el que dicho trastorno epiléptico es el síndrome de Lennox-Gastaut, y

[0019] en el que dicho sujeto:

[0020] (i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina, o

[0021] (ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, opcionalmente en el que dicho inhibidor de la recaptación de serotonina fenfluramina.

[0022] También se proporciona clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un método de tratamiento de un trastorno epiléptico en un sujeto, en el que dicho trastorno epiléptico es encefalopatía mioclónica temprana o encefalopatía epiléptica infantil, y

[0023] en el que dicho sujeto:

[0024] (i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina, o

[0025] (ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, opcionalmente donde dicho inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina,

[0026] siempre que la encefalopatía epiléptica infantil no sea el síndrome de Dravet.

[0027] En los párrafos siguientes, el agonista de 5HT o el agonista del receptor de 5HT es clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según se define en las reivindicaciones.

[0028] En un ejemplo de realización, el agonista de 5HT puede ser un agonista del receptor de 5HT<2A>o un agonista del receptor de 5HT<2B>.

[0029] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT se une directamente a un receptor de 5HT. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT activa específicamente un receptor de 5HT.

[0030] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT proporciona una actividad aumentada mediada por el receptor de 5HT<2A>o el receptor de 5HT<2B>con actividad equivalente o reducida mediada a través del receptor de 5HT<2C>.

[0031] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT es un receptor de 5HT<2A>dual y un agonista del receptor de 5HT<2B>

[0032] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT no es un inhibidor de la recaptación de serotonina. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT no se une significativamente ni modula la actividad de al menos uno de 5HT<1A>, 5HT<1B>, 5HT<1D>, 5HT<2C>, 5HT<3>, 5HT<4>(p. ej., 5HT<4e>), 5HT<6>, 5HT<7>, receptor de NPY Y1, canal de Ca tipo L, canal de Ca tipo N, canal de SK-Ca, canal de Cl activado por GABA, transportador de GABA, receptor de GABA-A1, receptor de GABA-B1b, canal de Na, transportador de 5HT, receptor de CB1, receptor de CB2, BZD o estrógeno ER alfa.

[0033] El trastorno epiléptico es el síndrome de Lennox-Gastaut o síndrome de Ohtahara, según se define en las reivindicaciones. En un ejemplo de realización, el trastorno epiléptico es pediátrico.

[0034] En un ejemplo de realización, el sujeto tiene una enfermedad cardiovascular.

[0035] En un ejemplo de realización, el sujeto es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina.

[0036] En un ejemplo de realización, el sujeto es susceptible a los efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina. En un ejemplo de realización, el inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina.

[0037] En un ejemplo de realización, el sujeto tiene una dieta cetogénica.

[0038] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT inhibe los comportamientos compulsivos o las convulsiones electrográficas en un sujeto con epilepsia, un sujeto con la enfermedad de Alzheimer, un sujeto con autismo o un sujeto con la enfermedad de Parkinson.

[0039] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT reduce la incidencia de convulsiones no provocadas en dicho sujeto en comparación con la ausencia de dicho agonista del receptor de 5HT.

[0040] En un ejemplo de realización, la administración de dicho agonista del receptor de 5HT reduce o previene las convulsiones mioclónicas o el estado epiléptico en dicho sujeto en comparación con la ausencia del agonista del receptor de 5HT.

[0041] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT se administra a dicho sujeto en una cantidad de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 1000 mg por kg de peso corporal.

[0042] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT se administra a dicho sujeto en una dosis diaria de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 1000 mg por kg de peso corporal a dicho sujeto.

[0043] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE). En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT es una terapia complementaria con un fármaco antiepiléptico (FAE). En un ejemplo de realización, el FAE es acetazolamida, benzodiazepina, cannabadioles, carbamazepina, clobazam, clonazepam, acetato de eslicarbazepina, etosuximida, etotoína, felbamato, fenfluramina, fosfenitoína, gabapentina, ganaxolona, huperzina A, lacosamida, lamotrigina, levetiracetam, nitrazepam, oxcarbazepina. perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, retigabina, rufinamida, ácido valproico, valproato de sodio, estiripentol, tiagabina, topiramato, vigabatrin o zonisamida. En un ejemplo de realización, el FAE es ácido valproico, valproato de sodio, clonazepam, etosuximida, felbamato, gabapentina, carbamazepina, oxcarbazepina, lamotrigina, levetiracetam, benzodiazepina, fenobarbital, pregabalina, primidona, tiagabina, topiramato, bromuro de potasio, fenitoína, estiripentol, vigabatrin o zonisamida. En un ejemplo de realización, el FAE es ácido valproico, valproato de sodio, gabapentina, topiramato, carbamazepina, oxcarbazepina o vigabatrin.

[0044] En un ejemplo de realización, el FAE no es un topiramato.

[0045] En un ejemplo de realización, el FAE no es fenfluramina.

[0046] En un ejemplo de realización, el FAE se administra simultáneamente o secuencialmente con dicho agonista del receptor de 5HT.

[0047] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT es un agonista del receptor de 5HT<2A>o un agonista del receptor de 5HT<2B>. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT es clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En un ejemplo de realización, la sal farmacéuticamente aceptable es clemizol HCl.

[0048] En un ejemplo de realización, el clemizol o dicha sal farmacéuticamente aceptable del mismo forma parte de una composición farmacéutica. En un ejemplo de realización, la composición farmacéutica comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable. En un ejemplo de realización, la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de clemizol o dicha sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0049] En un ejemplo de realización, la composición farmacéutica se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE). En un ejemplo de realización, la composición farmacéutica comprende clemizol, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un FAE. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT no es fenfluramina. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT se une directamente a un receptor de 5HT.

[0050] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT activa específicamente un receptor de 5HT. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT proporciona una mayor actividad mediada por el receptor de 5HT<2A>o el receptor de 5HT<2B>, con una actividad equivalente o reducida mediada por el receptor de 5HT<2C>. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT es un agonista dual del receptor de 5HT<2A>y del receptor de 5HT<2B>.

[0051] En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT no es un inhibidor de la recaptación de serotonina. En un ejemplo de realización, el agonista del receptor de 5HT no se une significativamente a al menos un receptor de 5HT<1A>, 5HT1<B>, 5HT<1D>, 5HT<2C>, 5HT<3>, 5HT<4>(p. ej., 5HT<4e>), 5HT<6>, 5HT<7>, NPY Y1, canal de Ca tipo L, canal de Ca tipo N, canal de SK-Ca, canal de Cl activado por GABA, transportador de GABA, receptor de GABA-A1, receptor de GABA-B1b, canal de Na, transportador de 5HT, receptor de CB1, receptor de CB2, BZD o estrógeno ER alfa.

[0052] También se divulga, pero no dentro del alcance de las reivindicaciones, un método para modular la actividad de un receptor de 5HT que comprende poner en contacto un receptor de 5HT con clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0053] En un ejemplo de realización, la modulación es la activación.

[0054] En un ejemplo de realización, el receptor de 5HT es un receptor de 5HT<2A>o un receptor de 5HT<2B>.

[0055] En realizaciones de un aspecto anterior, el agonista del receptor de 5HT no se une significativamente ni modula (p. ej., inhibe) la actividad de al menos uno de 5HT1A, 5HT1B, 5HT1D, 5HT3, 5HT4e, GABAA1, GABAB<(1b)>, BZD, CB<1>, CB<2>, canal de Cl activado por GABA, canal de SK-Ca o transportador de GABA. En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no se une significativamente ni modula (p. ej., inhibe) la actividad de 5HT1A, 5HT1B, 5HT1D, 5HT3, 5HT4e, GABAA1, GABAB<(1b)>, BZD, CB<1>, CB<2>, canal de Cl activado por GABA, canal de SK-Ca y transportador de GABA.

[0056] En realizaciones de un aspecto anterior, el agonista del receptor de 5HT modula un objetivo en menos de aproximadamente un 50 % en relación con un modulador de referencia (p. ej., un modulador natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT modula un objetivo en menos de aproximadamente un 40 % en relación con un modulador de referencia (p. ej., un modulador natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT modula un objetivo en menos de aproximadamente un 30 % en relación con un modulador de referencia (p. ej., un modulador natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT modula un objetivo en menos de aproximadamente un 20 % en relación con un modulador de referencia (p. ej., un modulador natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT modula un objetivo en menos de aproximadamente un 10 % en relación con un modulador de referencia (p. ej., un modulador natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica).

[0057] En realizaciones de un aspecto anterior, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos del 50 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como comúnmente utilizado en el arte). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos de aproximadamente un 40 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos de aproximadamente un 30 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos de aproximadamente un 20 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos de aproximadamente un 10 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica). En realizaciones, el agonista del receptor de 5HT no modula significativamente la actividad cuando el agonista del receptor de 5HT no logra modular (p. ej., inhibir) un objetivo en menos de aproximadamente un 5 % con respecto a un inhibidor de referencia (p. ej., un inhibidor natural o conocido como se usa comúnmente en la técnica).

[0059] Breve descripción de los dibujos

[0061] Los compuestos fuera del alcance de las reivindicaciones son compuestos de referencia.

[0063] Fig. 1. Caracterización molecular de mutantes de pez cebrascn1Lab.(A)La secuenciación confirmó una mutación de T por G en el ADNc del mutantescn1Lab. (B) Verificación de la expresión reducida en mutantesscn1Laben comparación con los controles de hermanos a los 3, 5 y 7 dpf usando qPCR. Datos presentados como la media ± SEM; * significancia tomada como prueba t de Studentp< 0.05. Los datos se normalizaron al gen de referencia interna β-actina. Los valores representan promedios de cinco muestras biológicas independientes (1 muestra = 10 larvas agrupadas) para cada una de las 3 etapas de desarrollo. Datos presentados como la media ± SEM; * significancia tomada como prueba t de Studentp< 0.05. (C) Expresión relativa descn8aayscn8aben mutantes Na<v>1.1(n= 5) y controles de hermanos(n= 5) a los 5 dpf. Datos presentados como enB.(D) Hibridaciónin situde montaje completo parascn1Laben larvas de pez cebra a los 3, 5 y 7 dpf. Las larvas de tipo silvestre se muestran en vistas laterales; la expresión se muestra en color púrpura oscuro. La expresión descn1Laaa los 3 dpf se muestra para comparación. El corazón indicado por puntas de flecha en paneles de 5 y 7 dpf. (E) Vista dorsal de la expresión descb1Laaa los 3 dpf; téngase en cuenta la expresión prominente en las regiones correspondientes al SNC del pez cebra larvario. Abreviaturas: Tel, telencéfalo; TeO, techo óptico; Cb, cerebelo. Barras de escala = 0.35 mm en D, 0.2 mm en E.

[0065] Fig. 2. Análisis de microarreglos de mutantes de pez cebrascn1Lab.(A)Mapas de calor que representan la expresión de genes expresados diferencialmente entre el mutantescn1Laby las larvas de control de hermanos a los 5 dpf. Las filas representan genes individuales. Las columnas representan diferentes larvas. Genes que están altamente expresados en mutantesscn1Laben relación con los controles son como se muestran. (B) Gráfico de MA de datos de microarreglos normalizadas para los 44,000 genes. La relación logarítmica M y la intensidad de fluorescencia media A se calcularon como los promedios de todas las réplicas. (C) Una lista de los 30 genes principales que muestran las mayores diferencias en la expresión entre los mutantesscn1Laby controles de hermanos.

[0067] Fig.3. Análisis cuantitativo de TI-PCR de mutantes de pez cebrascn1Lab.(A)Comparación de las veces que cambia la expresión génica obtenida mediante análisis de microarreglos (arreglo) y análisis por qPCR en tiempo real. El eje y representa el promedio de las veces que cambia la expresión génica de cada gen del pez cebra en 5 dpf. El eje x representa diferentes genes. (B) Análisis por qPCR de tres genes implicados en la epileptogénesis. La expresión génica relativa se presenta como las relaciones log<2>con respecto a la transcripción menos abundante (log<2>ΔΔct). Los datos se normalizaron con respecto al gen de referencia interna de β-actina. Los valores representan promedios de cinco muestras biológicas independientes (1 muestra de 10 larvas agrupadas). Las barras indican SEM; prueba t<∗>p < 0.05. (C) Clasificación de ontología génica de genes expresados diferencialmente detectados en mutantesscn1Laba los 5 dpf (p < 0.05 ANOVA unidireccional y veces que cambia > 1.5). Se muestran los procesos biológicos que representan al menos 5 anotaciones de genes en al menos una categoría.

[0069] Fig. 4. Convulsiones espontáneas en mutantes de pez cebrascn1Lab.(A)Se muestran larvas de pez cebra inmovilizadas e incrustadas en agar. Las imágenes se obtuvieron utilizando un objetivo de 4x y un lente 2x en un microscopio vertical Olympus durante las registros electrofisiológicas del prosencéfalo en el control de hermano (A, izquierda) y larvas mutantesscn1Lab(A, mitad) a los 5 dpf. Téngase en cuenta la pigmentación oscura de los mutantes. Los electrodos de registro se pueden observar en los panelesA1-2y se muestra el sitio aproximado de la punta del electrodo de registro en el prosencéfalo (círculo rojo) usando una larva representativa etiquetada con HuC:GFP enA, derecha.Barra de escala: 100 µm. (B) Gráfico de seguimiento de locomoción de la muestra para el control de hermano (B, izquierda) y larvas mutantesscn1Lab(B, derecha) a los 5 dpf. (C) Épocas de registro representativas de 10 min obtenidas en el prosencéfalo de larvas mutantesscn1Labparalizadas, inmovilizadas e incrustadas en agar entre 3 y 7 dpf. Obsérvese la presencia de ráfagas repentinas espontáneas de pequeña y gran amplitud; expansiones temporales adicionales de la actividad convulsiva. También se muestra un registro representativo, en condiciones de registro idénticas, de una larva de control hermana a los 5 dpf. Barra de escala: 2 mV; 30 segundos.

[0071] Fig. 5. Validación farmacológica de mutantes de pez cebrascn1Lab.(A)Mapa de calor que muestra la respuesta a nueve FAE diferentes. Cada columna representa el cambio porcentual en la frecuencia de ráfagas (línea base - fármaco/línea base x 100) para un mutante de pez cebra individual. Los fármacos que inhiben los episodios de convulsiones se muestran en azul oscuro. Todos los fármacos se ensayaron a una concentración de 1 mM. Téngase en cuenta que en algunos ensayos, la carbamazepina y la vigabatrin aumentaron la frecuencia de las ráfagas por encima de los niveles iniciales de referencia. (B) Gráfico del cambio medio en la frecuencia de ráfagas y el error estándar de los datos que se muestran en el mapa de calor. La prueba t pareada o la prueba de suma de intervalos con signo de Wilcoxon para los datos que fallaron la prueba de normalidad mostraron significancia de la siguiente manera: diazepam (p = 0.002;n =7) (Compuesto de referencia), bromuro de potasio (p = 0.016;n =7) (Compuesto de referencia), estiripentol (p = 0.024;n =7) (Compuesto de referencia), y valproato (p = 0.004;n =7) (Compuesto de referencia). (C) Gráfico de la duración de la ráfagas para todos los ensayos que se muestran en A. Los datos se presentan como la media ± S.E.M. para eventos de convulsiones electrográficas en la línea base (barras negras) y después de la exposición al fármaco (barras blancas). El recuadro muestra un registro representativo de 2 minutos durante la prueba con estiripentol; barras de escala: traza grande 1 mV, 1 segundo; traza pequeña, 1 mV, 100 mseg (D) Gráfico de la fracción de tiempo utilizada en las convulsiones para todos los ensayos que se muestran en A. Los datos se presentan como la media ± S.E.M. para los eventos de convulsiones electrográficas en la línea base (barras negras) y después de la exposición al fármaco (barras blancas). La prueba t de Student o la prueba de la suma de intervalos de Mann-Whitney para los datos que fallaron la prueba de normalidad mostraron significancia de la siguiente manera: diazepam (p = 0.001;n= 7) (Compuesto de referencia); bromuro de potasio (p = 0.043;n= 7) (Compuesto de referencia); estiripentol (p = 0.007;n= 7) (Compuesto de referencia) y valproato (p = 0.007;n =7 (Compuesto de referencia). (E) Gráficos de seguimiento de locomoción para 10 larvas mutantes individuales criadas en medio embrionario (fila superior) o la dieta cetogénica durante 48 horas. Los gráficos muestran la velocidad de nado y las pistas de locomoción con colores más oscuros que indican velocidades más altas; se muestran ensayos de 10 min. (F) Épocas de registro extracelular representativas de 10 min del mismo pez que se muestra en E; los ejemplos representativos se indican mediante un<∗>en los gráficos de locomoción. Barra de escala: 1 mV, 30 seg. El recuadro muestra una ráfaga a una resolución temporal más alta (indicada por #); barra de escala: 1 mV, 100 mseg.

[0073] Fig. 6. Un detección para identificar fármacos que rescaten el fenotipo de epilepsia mutantescn1Lab. (A) Gráfico de caja de la velocidad media (en mm/seg) para dos registros consecutivos de larvas mutantes en medios embrionarios. Los experimentos se realizaron colocando primero las larvas mutantes en medios embrionarios y obteniendo una respuesta de locomoción de referencia, luego se reemplazó el medio embrionario con nuevo medio embrionario (para imitar el procedimiento utilizado para los compuestos de prueba) y se obtuvo una segunda respuesta de locomoción. Se muestra el cambio porcentual en la velocidad desde la línea base (registro # 1) frente a la experimental (registro # 2). En el gráfico de caja, la parte inferior y superior de la caja representan el percentil 25 y el percentil 75, respectivamente. La línea que cruza la caja representa el valor medio y las líneas verticales abarcan todo el intervalo de valores. Este gráfico representa los cambios normales en la actividad de rastreo en ausencia de un desafío con el fármaco. (B) Gráfico del efecto de once fármacos antiepilépticos conocidos sobre el comportamiento de las convulsiones locomotoras en mutantesscn1Laba los 5 dpf. El ensayo con base en el fenotipo se realizó en un formato de 96 pocillos (p. ej., véase el panel 5C1). Las barras representan el cambio porcentual en la velocidad media que compara un registro de referencia de la actividad convulsiva mutante con el mismo mutante después de la aplicación de un fármaco. Para todos los estudios de fármacos se usaron 6-12 peces por experimento. Los fármacos se ensayaron a una concentración de 1 mM; diazepam (Dzp; p < 0.001) (Compuesto de referencia), carbamazepina (Carb, p = 0.024) (Compuesto de referencia), ganaxolona (Gan; p = 0.003) (Compuesto de referencia), estiripentol (Stp; p = 0.001) (Compuesto de referencia), valproato (Vpa, p = 0.026) (Compuesto de referencia) y una exposición de 48 horas a la dieta cetogénica (DC; p = 0.003) redujo la actividad convulsiva, medida como un cambio en la velocidad, en más del 34 % (la línea punteada en B; representa un cambio mayor que la desviación estándar en los registros de control). La acetazolamida (Acet, p < 0.001) (Compuesto de referencia) y la etosuximida (Etx; p = 0.250) (Compuesto de referencia) aumentaron el comportamiento de las convulsiones; levetiracetam (Lev; p = 0.243) (Compuesto de referencia) y lamotrigina (Ltg; p = 0.058) (Compuesto de referencia) no tuvieron efecto. (C) Gráfico del comportamiento de las convulsiones locomotoras para mutantesscn1Laaba los 5 dpf para los 320 compuestos probados. Los círculos de colores representan aciertos positivos; los compuestos que redujeron la actividad en un 100% eran generalmente tóxicos; 6-12 peces por ensayo. La punta de flecha indica el primer ensayo con clemizol. Téngase en cuenta que algunos compuestos aumentaron la actividad convulsiva, como se esperaba. (D) Gráfico de nuevos ensayos de fármacos en nidadas separadas de mutantesscn1Laba los 5 dpf; 100 µM por fármaco; 10 peces por ensayo. Abreviaturas: Clem, clemizol; Clem PTZ, clemizol PTZ 15 mM; Clorg, clorgilina (Compuesto de referencia); Tolp, tolperisona (Compuesto de referencia); Zox, zoxazolamina (Compuesto de referencia). Se muestra el efecto del clemizol agudo sobre el comportamiento de las convulsiones inducidas por PTZ para las larvas de tipo silvestre. Las barras representan la media ± S.E.M. Para los paneles B y D: Prueba t de Student pareada o prueba de la suma de intervalos de Mann-Whitney con significancia establecida a p = 0.01 (<∗>) o p < 0.001 (<∗∗>). (E) Ejemplos de registros de electrofisiología de mutantesscn1Labexpuestos a clemizol primero en el ensayo de locomoción (panel D) y luego controlados usando un electrodo de registro extracelular del prosencéfalo (traza superior; ráfaga similar a ictal que se muestra en el recuadro). Se muestran trazas similares para un mutante Na<v>1.1 no tratado (traza medio) y un mutante tratado con zoxazolamina (traza inferior, Compuesto de referencia). Análisis de la ráfaga para mutantes no tratados (n = 3): frecuencia de ráfaga = 1.5 ± 0.3 ráfagas/min; duración de la ráfaga = 926 ± 414 mseg; fracción de tiempo gastado en las convulsiones = 0.73 ± 0.17 % frente a mutantes tratados con clemizol (n = 7): frecuencia de ráfaga = 0.2 ± 0.01 ráfagas/min; duración de la ráfaga = 154 ± 127 mseg; fracción de tiempo gastada en las convulsiones = 0.03 ± 0.02%; p = 0.001 para todas las comparaciones, ANOVA de Kruskal-Wallis con prueba de comparación múltiple por pares de Dunn). Barras de escala: traza grande 0.5 mV, 10 s; recuadro 0.5 mV, 100 mseg.

[0075] Fig. 7. Confirmación de la actividad de clemizol en mutantesscn1Laa (A)Épocas de registro representativas de 10 min obtenidas en el prosencéfalo de larvas mutantesscn1Laaparalizadas, inmovilizadas e incrustadas en agar a los 6 dpf. Obsérvese la presencia de descargas en ráfagas espontáneas de pequeña y gran amplitud. (B) Gráficos de seguimiento de locomoción para 10 larvas hermanas mutantes y de tipo silvestre individuales. Los gráficos muestran la velocidad de nado y las pistas de locomoción con colores más oscuros que indican velocidades más altas; se muestran ensayos de 10 min. Las convulsiones se puntuaron en un sistema de estadificación descrito en Barabán et al., (Neuroscience 2005). S0, poca o ninguna actividad de nado; S1, locomoción aumentada; S2 actividad de nado como remolino y; S3 convulsiones de cuerpo completo con eventos de nado rápido y pérdida de postura. (C) Gráfico de caja de velocidad media (en mm/seg) para 96 peces cebra con peces clasificados en grupos de control scn1Laa putativos y hermanos con base en las etapas de convulsiones descritas anteriormente. Los experimentos se realizaron colocando primero las larvas mutantes en medios embrionarios y obteniendo una respuesta de locomoción de referencia, luego se reemplazó el medio embrionario con nuevo medio embrionario y se obtuvo una segunda respuesta de locomoción. Se muestra el cambio porcentual en la velocidad desde la línea base (registro # 1) frente a la experimental (registro # 2). En el gráfico de cajas, la parte inferior y superior de la caja representan el percentil 25 y el percentil 75, respectivamente. La línea que cruza la caja representa el valor medio y las líneas verticales abarcan todo el intervalo de valores. Se muestran gráficos para los 96 peces (izquierda), pez cebra scn1Laa putativo (medio) y controles de hermanos (izquierda). Se realizó un análisis de PCR posterior para confirmar los grupos de mutantes y de control. (D) Gráfico del efecto de estiripentol (Stp, Compuesto de referencia), diazepam (Dzp, Compuesto de referencia), clemizol (Clem) y lamotrigina (Ltg, Compuesto de referencia) sobre el comportamiento de las convulsiones locomotoras en mutantesscn1Laaa los 5 dpf. La velocidad media se muestra antes y después de la aplicación de un fármaco. N = 7 peces por fármaco. Las barras representan la media ± S.E.M. Prueba t de Student pareada o prueba de la suma de intervalos de Mann-Whitney con significancia establecida a p = 0.01 (<∗>) o p < 0.001 (<∗∗>).

[0077] Fig.8. Los antihistamínicos no tienen propiedades antiepilépticas en los mutantes scn1Lab. Gráfico del efecto de una variedad de antihistamínicos en el ensayo de convulsiones locomotoras utilizando mutantesscn1Laba los 5 dpf. La velocidad media se muestra antes y después de la aplicación de un fármaco. N = 7 peces por fármaco. Los compuestos adicionales se enumeran a la derecha. Las barras representan la media ± S.E.M. Prueba t de Student pareada o prueba de la suma de intervalos de Mann-Whitney con significancia establecida a p = 0.01 (<∗>) o p < 0.001 (<∗∗>). Nota: algunos antihistamínicos aumentaron la actividad convulsiva en este ensayo.

[0078] Fig.9. Estudios de respuesta a la concentración de clemizol en scn1Lab. Gráficos de dos estudios diferentes de respuesta a la concentración que muestran el porcentaje de inhibición de la velocidad media a partir de un valor de referencia. N = 7 peces por concentración y los ensayos se realizaron en nidadas separadas de larvas mutantes.

[0080] Fig. 10. Se realizó un detección de estantería utilizando 34 compuestos diferentes con propiedades antihistamínicas. Todos los compuestos mostrados se probaron frente a convulsiones espontáneas en larvasscn1Laba los 5 dpf; 6-10 peces por fármaco. Los resultados se muestran como un cambio en la velocidad media de los gráficos de datos de seguimiento de locomoción. Los compuestos se ensayaron a concentraciones entre 0.1 y 1 mM. El umbral para un resultado positivo se indica mediante la línea discontinua. Tres compuestos alcanzaron este umbral, pero los 3 fueron identificados como tóxicos (flechas).

[0082] Fig. 11. Cribado de la biblioteca de 5HT. Gráfico del comportamiento de las convulsiones locomotoras para mutantesscn1Laba los 5 dpf para los 62 compuestos probados. El umbral para la inhibición de la actividad convulsiva (aciertos positivos) se estableció como una reducción en la velocidad media de nado ≥ 38 %; el umbral para un efecto proconvulsivo o hiperexcitable se estableció como un aumento en la velocidad media de nado ≥ 44 % (líneas discontinuas verdes). Los compuestos se ensayaron a una concentración de 250 µM y 6 peces por fármaco. La lista de compuestos se muestra a continuación con aciertos positivos indicados en gris (en el gráfico) o círculos negros (en el gráfico).

[0083] Figs.12A-12B: Fig.12A. Gráfico del cambio en la velocidad media para mutantes scn1Lab a los 5 dpf expuestos a diferentes concentraciones de trazodona (Compuesto de referencia) durante 30 min (barras negras) o 90 (barras grises) períodos de exposición al fármaco. El umbral para la inhibición de la actividad convulsiva (éxitos positivos) se estableció como una reducción en la velocidad media de nado ≥ 40 %. La trazodona (Compuesto de referencia) fue tóxica a 750 µM (líneas discontinuas). Los compuestos se ensayaron en 6 peces por fármaco. Fig.12B. Trazas de EEG en la muestra para larvas mutantes scn1Lab expuestas a trazodona (Compuesto de referencia) (supresión de eventos de convulsiones epilépticas) o un fármaco de control, MK-801 (sin supresión de eventos epilépticos).

[0084] Descripción detallada de la invención

[0085] La presente invención se define en las reivindicaciones. Cualquier asunto objeto que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines informativos. Las referencias a métodos de tratamiento en esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

[0086] Por "receptor de 5HT" o "receptor 5-hidroxitriptamina" se entiende un grupo de receptores acoplados a proteína G (GPCR) y canales iónicos activados por ligando (LGIC) que se encuentran en el sistema nervioso central (SNC) y periférico (SNP) y pertenecen generalmente al grupo de los receptores de serotonina. Los receptores de 5HT se pueden dividir en siete familias de receptores, que incluyen: 5HT<1>(p. ej., receptores acoplados a proteínas G<i>/G<0>), 5HT<2>(por ej., receptores acoplados a proteínas G<q>/G<11>), 5HT<3>(p. ej., canal de cationes Na<+>y K<+>activado por ligando), 5HT<4>(receptores acoplados a proteínas G<s>), 5HT<5>(p. ej., receptores acoplados a proteínas G<i>/G<0>), 5HT<6>(receptores acoplados a proteínas G<s>) y 5HT<7>(receptores acoplados a proteínas huevos G<s>). Además, las siete familias de receptores de 5HT pueden subdividirse en varias subfamilias. Por ejemplo, la familia de 5HT<1>también incluye las siguientes subfamilias: 5HT<1A>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos y el SNC y pueden estar involucrados en la adicción, la agresión, la ansiedad, el apetito, los autorreceptores, la presión arterial, la función cardiovascular, la emesis, la frecuencia cardíaca, la impulsividad, la memoria, el estado de ánimo, las náuseas, la nocicepción, erección del pene, dilatación de la pupila, respiración, comportamiento sexual, sueño, sociabilidad, termorregulación y vasoconstricción), 5HT<1B>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos y el SNC y pueden estar involucrados en la adicción, la agresión, la ansiedad, los receptores automáticos, el aprendizaje, la locomoción, la memoria, el estado de ánimo, la erección del pene, el comportamiento sexual y la vasoconstricción), 5HT<1D>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos y el SNC y pueden estar implicados en la ansiedad, los autorreceptores, la locomoción y la vasoconstricción), 5HT<1E>(p. ej., que se sabe que funcionan en el SNC y pueden estar involucrados en las migrañas). Como otro ejemplo, la familia de 5HT<2>se puede dividir en las siguientes subfamilias: 5HT<2A>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos, el SNC, el tracto gastrointestinal, las plaquetas, el SNP y el músculo liso, y pueden estar involucrados en la adicción, la ansiedad, el apetito, la cognición, la imaginación, el aprendizaje, la memoria, el estado de ánimo, la percepción, el comportamiento sexual, sueño, termorregulación y vasoconstricción), 5HT<2B>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos, el SNC, el tracto gastrointestinal, las plaquetas, el SNP y el músculo liso, y pueden estar involucrados en la ansiedad, el apetito, la función cardiovascular, la motilidad gastrointestinal, el sueño y la vasoconstricción) y 5HT<2C>(p. ej., que se sabe que funcionan en los vasos sanguíneos, el SNC, el tracto gastrointestinal, las plaquetas, el SNP y el músculo liso, y pueden estar involucrados en la adicción, la ansiedad, el apetito, la motilidad gastrointestinal, la locomoción, el estado de ánimo, la erección del pene, el comportamiento sexual, el sueño, termorregulación y vasoconstricción). Además, la familia de 5HT<5>se puede dividir en las siguientes subfamilias: 5HT<5A>(p. ej., que puede funcionar en el SNC y desempeñar un papel en la locomoción y el sueño, además de funcionar como autorreceptor) y 5HT<5B>(p. ej., que puede funcionar en roedores y parece ser un pseudogen en humanos).

[0087] Por "agonista del receptor de 5HT" se entiende cualquier agente que activa un receptor de 5HT en relación con la ausencia del agonista del receptor de 5HT o de una manera similar a la serotonina.

[0088] Por "agente" se entiende cualquier compuesto químico de molécula pequeña, anticuerpo, molécula de ácido nucleico o polipéptido, o fragmentos de los mismos.

[0089] Por "afección cardíaca" se entienden enfermedades relacionadas, que incluyen, entre otras: enfermedad cardíaca coronaria (ECC), miocardiopatía, enfermedad cardiovascular (ECV), enfermedad cardíaca isquémica, insuficiencia cardíaca, enfermedad cardíaca hipertensiva, enfermedad cardíaca inflamatoria, enfermedad cardíaca valvular, aterosclerosis e hipertrofia cardiaca. Una afección cardíaca puede ser una enfermedad sistémica que puede afectar el corazón, el cerebro, la mayoría de los órganos principales y las extremidades. Por “enfermedad cardiaca coronaria (ECC)” se entiende una enfermedad que provoca el fallo de la circulación coronaria para suministrar una circulación adecuada a los músculos cardiacos y tejidos circundantes. Por "enfermedad cardiovascular (ECV)" se entiende cualquiera de una serie de enfermedades específicas que afectan al propio corazón o al sistema de vasos sanguíneos, especialmente el tejido miocárdico, así como las venas y arterias que van y vienen del corazón. Por ejemplo, la ECV puede incluir, pero no se limita a, síndromes coronarios agudos, arritmia, aterosclerosis, insuficiencia cardiaca, infarto de miocardio, hiperplasia neointimal, hipertensión pulmonar, accidente cerebrovascular, enfermedad valvular o hipertrofia cardiaca. La enfermedad cardiaca puede diagnosticarse mediante cualquiera de una variedad de métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, dichos métodos pueden incluir la evaluación de un sujeto por disnea, ortopnea, disnea paroxística nocturna, claudicación, angina, dolor torácico, que puede presentarse como cualquiera de los síntomas conocidos en la técnica, como intolerancia al ejercicio, edema, palpitaciones, desmayo, pérdida del conocimiento o tos; la enfermedad cardíaca se puede diagnosticar mediante un análisis químico de la sangre. Tal como se divulga anteriormente y como se usa en el presente documento, "enfermedad cardíaca" se refiere a un trastorno que afecta al propio corazón o al sistema circulatorio.

[0091] "Analógico” o “análogo" se usa de acuerdo con su significado ordinario dentro de la Química y la Biología y se refiere a un compuesto químico que es estructuralmente similar a otro compuesto (es decir, uno llamado compuesto de "referencia") pero difiere en composición, p. ej., en el reemplazo de un átomo por un átomo de un elemento diferente, o en presencia de un grupo funcional particular, o el reemplazo de un grupo funcional por otro grupo funcional, o la estereoquímica absoluta de uno o más centros quirales del compuesto de referencia. En consecuencia, un análogo es un compuesto que es similar o comparable en función y apariencia pero no en estructura u origen a un compuesto de referencia.

[0093] "Clemizol" se refiere a un compuesto que tiene la fórmula:

[0096]

[0099] Clemizol incluye sales farmacéuticamente aceptables y formulaciones de clemizol como se divulga en este documento (p. ej., una "sal de clemizol"). Ejemplos de sales de clemizol incluyen, pero no se limitan a, clemizol-HCl, clemizolpenicilina, clemizol-sulfato o clemizol-undecilato.

[0101] Un "análogo de clemizol" como se establece en el presente documento se refiere a compuestos de estructura similar. Dichos compuestos incluyen, p. ej., aquellos compuestos establecidos en el documento PCT/US2008/076804, y la patente de los Estados Unidos n.º 4,011,322. Se exponen otros ejemplos de análogos de clemizol, por ejemplo en: la solicitud de patente de los Estados Unidos 2012/0232062; publicación de la PCT n.º 2009/038248; los documentos US 2010/107739; US 2010/107742, WO 2002/089731, WO 2005/032329, WO 2009/039248, WO 2010/039195, WO 2010/107739, y WO 2010/107742. Los análogos de clemizol divulgados en el presente documento (incluidos los compuestos descritos en las referencias anteriores) pueden estar sustituidos (es decir, modificados) en la posición 1 o 2 como se establece a continuación en la fórmula (I) (casillas Y y Z). Los análogos de clemizol pueden estar sustituidos (es decir, modificados) en las posiciones 4, 5, 6 o 7 como se indica en el recuadro X de la fórmula (I).

[0104]

[0107] El término "sales farmacéuticamente aceptables" pretende incluir sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en el presente documento. Cuando el agonista de 5-HT contiene funciones relativamente ácidas, las sales de adición de base pueden obtenerse poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, bien sea pura o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico o magnesio, o una sal similar. Cuando el agonista de 5-HT contiene funciones relativamente básicas, las sales de adición de ácido se pueden obtener poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, oxálico, metanosulfónico y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónicos o galactunóricos y similares(véase,p. ej., Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). El agonista de 5-HT puede contener funciones tanto básicas como ácidas que permiten la conversión en sales de adición de bases o de ácidos.

[0108] Por tanto, el agonista de 5-HT puede existir como una sal, como con ácidos farmacéuticamente aceptables. La presente invención incluye dichas sales. Los ejemplos no limitativos de dichas sales incluyen clorhidratos, bromhidratos, fosfatos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, propionatos, tartratos (p. ej., (+)-tartratos, (-)-tartratos o mezclas de los mismos que incluyen mezclas racémicas), succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos tales como ácido glutámico y sales de amonio cuaternario (p. ej., yoduro de metilo, yoduro de etilo y similares). Estas sales se pueden preparar por métodos conocidos por los expertos en la materia.

[0109] Las formas neutras del agonista de 5-HT se regeneran preferiblemente poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto puede diferir de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, como la solubilidad en disolventes polares.

[0110] También se divulga, además de las formas de sal, el agonista de 5-HT puede ser una forma de profármaco. Los profármacos son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Los profármacos del agonista de 5-HT pueden convertirsein vivodespués de la administración. Además, los profármacos del agonista de 5-HT pueden convertirse en compuestos activos por métodos químicos o bioquímicos en un medio ambienteex vivo, como, p. ej., cuando se pone en contacto con una enzima adecuada o un reactivo químico.

[0111] El agonista de 5-HT puede existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluidas las formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y están incluidas dentro del alcance de la presente invención. El agonista de 5-HT puede existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención.

[0112] Una "cantidad eficaz" es una cantidad suficiente para que el agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) logre un propósito establecido en relación con la ausencia de un agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) (p. ej., lograr el efecto para que se administra, tratar una enfermedad, reducir la actividad de una proteína/enzima, aumentar la actividad de una proteína/enzima, reducir una vía de señalización o reducir uno o más síntomas de una enfermedad o afección). Un ejemplo de una "cantidad eficaz" es una cantidad del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) que es suficiente para contribuir al tratamiento, la prevención o la reducción de un síntoma o síntomas de una enfermedad, que también podría ser denominada "cantidad terapéuticamente eficaz". Una "reducción" de un síntoma o síntomas (y los equivalentes gramaticales de esta frase) significa la disminución de la gravedad o la frecuencia de los síntomas, o la eliminación de los síntomas (p. ej., convulsiones). Una "cantidad profilácticamente eficaz" de un fármaco es una cantidad de un fármaco que, cuando se administra a un sujeto, tendrá el efecto profiláctico previsto, p. ej., prevenir o retrasar la aparición (o recurrencia) de una lesión, enfermedad, patología o afección., o reducir la probabilidad de aparición (o recurrencia) de una lesión, enfermedad, patología o condición, o sus síntomas (p. ej., convulsiones). El efecto profiláctico completo no ocurre necesariamente con la administración de una dosis y puede ocurrir solo después de la administración de una serie de dosis. Por lo tanto, se puede administrar una cantidad profilácticamente eficaz en una o más administraciones. Las cantidades exactas dependerán del propósito del tratamiento, y un experto en la materia podrá determinarlas utilizando técnicas conocidas (véase, p. ej.,Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, vigésima edición, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins).

[0113] La cantidad terapéuticamente eficaz del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede determinarse inicialmente a partir de ensayos de cultivos celulares. Las concentraciones objetivo serán aquellas concentraciones del compuesto o compuestos activos que son capaces de lograr los métodos descritos en este documento, medidos usando los métodos descritos en este documento o conocidos en la técnica.

[0114] Como es bien sabido en la técnica, las cantidades terapéuticamente eficaces para uso en seres humanos también pueden determinarse a partir de modelos animales. Por ejemplo, se puede formular una dosis para humanos para lograr una concentración que se haya encontrado que es efectiva en animales. La dosificación en seres humanos se puede ajustar controlando la eficacia de los compuestos y ajustando la dosificación hacia arriba o hacia abajo, como se describió anteriormente. Ajustar la dosis para lograr la máxima eficacia en seres humanos basándose en los métodos descritos anteriormente y otros métodos está dentro de las capacidades del experto en la materia.

[0115] Las dosis pueden variar dependiendo de los requisitos del paciente y del compuesto que se emplee. La dosis administrada a un paciente, en el contexto de la presente invención, debe ser suficiente para lograr una respuesta terapéutica beneficiosa en el paciente a lo largo del tiempo. El tamaño de la dosis también estará determinado por la existencia, naturaleza y extensión de cualquier efecto secundario adverso. La determinación de la dosis apropiada para una situación particular hace parte del conocimiento del médico. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas que son menores que la dosis óptima del compuesto. A partir de entonces, la dosis se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo de acuerdo con las circunstancias.

[0116] Las cantidades de dosificación y los intervalos se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles efectivos del compuesto administrado para la indicación clínica particular que se está tratando. Esto proporcionará un régimen terapéutico acorde con la gravedad del estado de enfermedad del individuo.

[0117] Utilizando las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, se puede planificar un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico eficaz que no provoque una toxicidad sustancial y, sin embargo, sea eficaz para tratar los síntomas clínicos demostrados por el paciente en particular. Esta planificación debe implicar la elección cuidadosa del compuesto activo considerando factores como la potencia del compuesto, la biodisponibilidad relativa, el peso corporal del paciente, la presencia y la gravedad de los efectos secundarios adversos, el modo de administración preferido y el perfil de toxicidad del agente seleccionado.

[0118] "Control" o "experimento de control" se utiliza de acuerdo con su significado normal y corriente y se refiere a un experimento en el que los sujetos o reactivos del experimento se tratan como en un experimento paralelo excepto por la omisión de un procedimiento, reactivo o variable del experimento. En algunos casos, el control se usa como estándar de comparación para evaluar los efectos experimentales. En algunas realizaciones, un control es la medición de la actividad de un agonista de 5-HT en ausencia de un agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables).

[0119] Un "compuesto de prueba", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un compuesto experimental usado en un proceso de selección para identificar la actividad, la falta de actividad u otra modulación de una vía u objetivo biológico concreto, p. ej., un receptor de 5-HT. Un compuesto de prueba puede ser un agonista de 5-HT descrito en el presente documento, incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables.

[0120] Los términos "modulación", "modular" o "modulador" se utilizan de acuerdo con su significado normal y corriente y se refieren al acto de cambiar o variar una o más propiedades. "Modulador" se refiere a una composición o compuesto que aumenta o disminuye el nivel de una molécula objetivo o la función de una molécula objetivo o el estado físico del objetivo de la molécula. "Modulación" se refiere al proceso de cambiar o variar una o más propiedades. Por ejemplo, aplicado a los efectos de un modulador en un objetivo biológico, modular significa cambiar aumentando o disminuyendo una propiedad o función del objetivo biológico o la cantidad del objetivo biológico (p. ej., un receptor de 5-HT).

[0121] Tal como se define en el presente documento, el término "inhibición", "inhibir", "que inhibe" y similares en referencia a una interacción proteína-inhibidor significa afectar negativamente (p. ej., disminuir) la actividad o función de la proteína en relación con la actividad o función de la proteína en ausencia del inhibidor. En algunas realizaciones, la inhibición se refiere a la reducción de una enfermedad o síntomas de enfermedad. En algunas realizaciones, la inhibición se refiere a una reducción en la actividad de una proteína o ácido nucleico objetivo particular. Por lo tanto, la inhibición incluye, al menos en parte, bloquear parcial o totalmente la estimulación, disminuir, prevenir o retrasar la activación, o inactivar, desensibilizar o subregular la transducción de señales o la actividad proteica/enzimática o la cantidad de una proteína.

[0122] El término "activación" o "que activa" y similares en referencia a interacciones proteína-compuesto que afectan positivamente (p. ej., aumentan) la actividad o función de la proteína en relación con la actividad o función de la proteína en ausencia del compuesto activador. La activación puede referirse a una actividad mejorada de una proteína objetivo particular. La activación puede referirse a la restauración de la pérdida de función de una proteína objetivo mutada. La activación tal como se usa en el presente documento puede referirse a la activación de uno o más receptores de 5-HT.

[0123] "Poner en contacto" se usa de acuerdo con su significado normal y corriente y se refiere al proceso de permitir que al menos dos especies distintas (p. ej., compuestos químicos que incluyen biomoléculas o células) se vuelvan lo suficientemente próximas para reaccionar, interactuar o tocarse físicamente. Debe apreciarse, sin embargo, que el producto de reacción resultante se puede producir directamente a partir de una reacción entre los reactivos añadidos o a partir de un compuesto intermedio de uno o más de los reactivos añadidos que se pueden producir en la mezcla de reacción.

[0124] El término "poner en contacto" puede incluir permitir que dos especies reaccionen, interactúen o se toquen físicamente, donde las dos especies pueden ser un compuesto como se divulga en este documento y una proteína o enzima. En algunas realizaciones, el contacto incluye permitir que un compuesto descrito en este documento interactúe con un receptor, p. ej., un receptor de 5-HT.

[0125] El término "asociado" o "asociado con" en el contexto de una sustancia o actividad o función de una sustancia asociada con una enfermedad significa que la enfermedad es causada por (total o parcialmente), o un síntoma de la enfermedad es causado por (total o parcialmente) la sustancia o la actividad o función de la sustancia. El término "paciente" o "sujeto que lo necesita" se refiere a un organismo vivo que padece o es propenso a padecer una enfermedad o afección que puede tratarse mediante la administración de una composición farmacéutica como se proporciona en el presente documento. Los ejemplos no limitantes incluyen seres humanos, otros mamíferos, bovinos, ratas, ratones, perros, monos, cabras, ovejas, vacas, ciervos y otros animales no mamíferos como el pez cebra. Un paciente puede ser un ser humano.

[0126] El término "enfermedad" o "condición" se refiere a un estado de ánimo o estado de salud de un paciente o sujeto que puede ser tratado con los compuestos o métodos proporcionados en el presente documento. Los términos "trastorno epiléptico", "trastorno de epilepsia", "trastorno de convulsiones" o "epilepsia" en el presente documento se refieren a un espectro de trastornos neurológicos crónicos caracterizados con mayor frecuencia por la presencia de convulsiones no provocadas. Véase, p. ej., Noebels et. al., Noebels et. al., Jasper’s Basic Mechanisms of the Epilepsies, 4.ª edición, Bethesda (MD): Centro Nacional de Información Biotecnológica (EE.UU.); 2012. La epilepsia, como se usa en el presente documento, puede referirse a una lesión en el cerebro (p. ej., por traumatismo, accidente cerebrovascular o cáncer) o mutación genética. Los síntomas de los trastornos epilépticos pueden resultar de una señalización electroquímica anormal entre las neuronas del cerebro. Se puede considerar que los pacientes que experimentan dos o más convulsiones no provocadas tienen epilepsia.

[0127] Los tipos de trastornos epilépticos incluyen, p. ej., epilepsia Rolándica benigna, epilepsia del lóbulo frontal, espasmos infantiles, epilepsia mioclónica juvenil (EMJ), epilepsia de ausencia juvenil, epilepsia de ausencia infantil (p. ej., picolepsia), convulsiones febriles, epilepsia mioclónica progresiva de Lafora, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Dravet (SD), epilepsia generalizada con convulsiones febriles (EGCF+), epilepsia mioclónica grave de la infancia (EMSI), convulsiones familiares neonatales benignas (CFNB), síndrome de West, síndrome de Ohtahara, encefalopatías mioclónicas tempranas, epilepsia parcial migratoria, encefalopatías epilépticas infantiles, complejo de esclerosis tuberosa (CET), displasia cortical focal, lisencefalia tipo I, síndrome de Miller-Dieker, síndrome de Angelman, síndrome de X frágil, epilepsia en trastornos del espectro autista, heterotopia de bandas subcorticales, síndrome de Walker-Warburg, enfermedad de Alzheimer, epilepsia postraumática, epilepsias mioclónicas progresivas, epilepsia refleja, síndrome de Rasmussen, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsia límbica, estado epiléptico, epilepsia abdominal, mioclono bilateral masivo, epilepsia catamenial, trastorno convulsivo jacksoniano, enfermedad de Unverricht-Lundborg o epilepsia fotosensible.

[0128] "Excipiente farmacéuticamente aceptable" y "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "fracción portadora" se refieren a una sustancia que ayuda a la administración del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) y a la absorción por parte de un sujeto y puede incluirse en las composiciones sin causar un efecto toxicológico adverso significativo en el paciente. Los ejemplos no limitantes de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen agua, NaCl, soluciones salinas normales, lactato de Ringer, sacarosa normal, glucosa normal, aglutinantes, rellenos, desintegrantes, lubricantes, recubrimientos, edulcorantes, sabores, soluciones salinas (como la solución de Ringer), alcoholes, aceites, gelatinas, carbohidratos tales como lactosa, amilosa o almidón, ésteres de ácidos grasos, hidroximetilcelulosa, polivinilpirrolidina y colorantes, y similares. Dichos preparados pueden esterilizarse y, si se desea, mezclarse con agentes auxiliares como lubricantes, conservantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, tampones, colorantes y/o sustancias aromáticas y similares que no reaccionan de forma nociva con los compuestos de la invención. Un experto en la técnica reconocerá que otros excipientes farmacéuticamente aceptables son útiles en la presente invención.

[0129] El término "preparación" pretende incluir la formulación del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) con material de encapsulación como vehículo que proporciona una cápsula en la que el componente activo con o sin otros vehículos está rodeado por un vehículo, que está por lo tanto en asociación con él. Del mismo modo, se incluyen sellos y pastillas. Las tabletas, los polvos, las cápsulas, las píldoras, los sellos y las pastillas para chupar se pueden usar como formas de dosificación sólidas adecuadas para la administración oral.

[0130] Como se usa en el presente documento, el término "administrar" significa administración oral, administración como supositorio, contacto tópico, administración intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intratecal, intranasal o subcutánea, o la implantación de un dispositivo de liberación lenta, p. ej.,una bomba miniosmótica, a un sujeto. La administración es por cualquier vía, incluidas parenteral y transmucosa (p. ej., bucal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal o transdérmica). La administración parenteral incluye, p. ej., intravenosa, intramuscular, intraarteriola, intradérmica, subcutánea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de administración incluyen, entre otros, el uso de formulaciones liposomales, infusión intravenosa, parches transdérmicos, etc.

[0132] El agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) y sus composiciones farmacéuticas pueden administrarse por vía transdérmica, por vía tópica, formulados como barras aplicadoras, soluciones, suspensiones, emulsiones, geles, cremas, ungüentos, pastas, jaleas, pinturas, polvos y aerosoles. Las preparaciones orales incluyen comprimidos, píldoras, polvos, grageas, cápsulas, líquidos, pastillas, sellos, geles, jarabes, pastas, suspensiones, etc., adecuados para la ingestión por parte del paciente. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, tabletas, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios y gránulos dispersables. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, p. ej., agua o soluciones de agua/propilenglicol. Los agonistas de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) pueden incluir adicionalmente componentes para proporcionar una liberación sostenida y/o comodidad. Dichos componentes incluyen polímeros mucomiméticos aniónicos de alto peso molecular, polisacáridos gelificantes y sustratos portadores de fármacos finamente divididos. Estos componentes se analizan con mayor detalle en las patentes de los Estados Unidos n.º 4.911.920; 5,403,841; 5,212,162; y 4,861,760. El agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) también se puede administrar como microesferas para una liberación lenta en el cuerpo. Por ejemplo, las microesferas se pueden administrar a través de una inyección intradérmica de microesferas que contienen fármaco, que se liberan lentamente por vía subcutánea (véase Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed.7: 623 - 645, 1995; como formulaciones de gel biodegradables e inyectables (véase, p. ej., Gao Pharm. Res.12:857 - 863, 1995); o, como microesferas para administración oral (véase, p. ej., Eyles, J. Pharm. Pharmacol.49: 669 - 674, 1997). Las formulaciones de las composiciones del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) pueden administrarse mediante el uso de liposomas que se fusionan con la membrana celular o se someten a endocitosis, es decir,mediante el empleo de ligandos de receptores unidos al liposoma, que se unen a los receptores de proteínas de la membrana de la superficie de la célula dando como resultado endocitosis. Mediante el uso de liposomas, en particular cuando la superficie del liposoma porta ligandos de receptores específicos para las células objetivo, o están preferentemente dirigidos a un órgano específico, se puede concentrar la administración de las composiciones del agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) en células objetivoin vivo. (Véase, p. ej., Al-Muhammed, J. Microencapsul.13: 293 - 306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6: 698 - 708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46: 1576 - 1587, 1989). Las composiciones también se pueden administrar como nanopartículas.

[0134] Por "coadministrar" se entiende que una composición descrita en el presente documento se administra al mismo tiempo, justo antes o justo después de la administración de una o más terapias adicionales. El agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) se puede administrar solo o se puede coadministrar al paciente. La coadministración pretende incluir la administración simultánea o secuencial de los compuestos individualmente o en combinación (más de un compuesto). Por lo tanto, las preparaciones también se pueden combinar, cuando se desee, con otras sustancias activas (p. ej., para reducir la degradación metabólica). El agonista de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse por vía transdérmica, por vía tópica o formularse como barras aplicadoras, soluciones, suspensiones, emulsiones, geles, cremas, ungüentos, pastas, jaleas, pinturas, polvos y aerosoles.

[0136] Los términos "terapia complementaria", y "terapia adjunta" se usan indistintamente en este documento y se refieren a la combinación del agonista de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con otro anticonvulsivo para tratar epilepsia.

[0138] Un "fármaco anticonvulsivo", "fármaco antiepiléptico", "FAE" o "anticonvulsivo" se usan indistintamente en la presente memoria y de acuerdo con su significado común y corriente e incluyen composiciones para reducir o eliminar las convulsiones. Los anticonvulsivos incluyen, entre otros, acetazolamida, benzodiazepina, cannabadioles, carbamazepina, clobazam, clonazepam, acetato de eslicarbazepina, etosuximida, etotoína, felbamato, fenfluramina, fosfenitoína, gabapentina, ganaxolona, huperzina A, lacosamida, lamotrigina, levetiracetam, nitrazepam, oxcarbazepina, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, retigabina, rufinamida, ácido valproico, valproato de sodio, estiripentol, tiagabina, topiramato, vigabatrin o zonisamida.

[0140] Como se usa en el presente documento, el término "resistente" se refiere a una reducción en la eficacia de un agente o fármaco. Por ejemplo, un sujeto que es "resistente" al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina (como, p. ej., fenfluramina) muestra una respuesta reducida en relación con la respuesta observada cuando el sujeto fue tratado por primera vez con el inhibidor de la recaptación de serotonina.

[0141] Tal como se usa en el presente documento, el término "no se une significativamente" significará que un agonista del receptor de 5HT de la divulgación muestra 10 veces, 20 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o 100 veces, menos unión a otra proteína transmembrana, como, p. ej., un receptor de 5HT, un receptor de NPY YP, un canal de Ca<+>, un canal de Cl, un transportador de GABA o un receptor de GABA-A1, un canal de Na, un transportador de 5HT y/o un receptor de CB1 o CB2. Este nivel reducido de unión puede medirse mediante ELISA o análisis de biosensor (p. ej., Biacore). En un ejemplo, un agonista del receptor de 5HT de la divulgación no se une de manera detectable a 5HT<1A>, 5HT<1B>, 5HT<1D>, 5HT<2C>, 5HT<3>, 5HT<4>, 5HT<6>, 5HT<7>, receptor de NPY Y1, canal de Ca tipo L, canal de Ca (tipo N), canal de SK-Ca, canal de Cl activado por GABA, transportador de GABA, receptor de GABA-A1, receptor de GABA-B1b, canal Na, transportador de 5HT, receptor de CB1, receptor de CB2, BZD o estrógeno ER alfa, medido por ELISA o Biacore o transferencia Western o FACS. A este respecto, se entenderá que "no se une de manera detectable" significa que el nivel de unión no es significativamente mayor que el fondo. En ejemplos de realizaciones, el agonista de 5-HT no modula significativamente la actividad de al menos uno de 5HT<1A>, 5HT<1B>, 5HT<1D>, 5HT<2C>, 5HT<3>, 5HT<4>, 5HT<6>, 5HT<7>, receptor de NPY Y1, canal de Ca tipo L, canal de Ca tipo N, canal de SK-Ca, canal de Cl activado por GABA, transportador de GABA, receptor de GABA-A1, receptor de GABA-B1b, canal de Na, transportador de 5HT, receptor de CB1, receptor de CB2, BZD o estrógeno ER alfa. Como se usa aquí, el término "no modula significativamente la actividad" significará que un agonista del receptor de 5HT de la divulgación provoca una respuesta biológica mediada por el receptor que es sustancialmente similar a su actividad en ausencia del ligando activador o inhibidor.

[0142] Métodos de tratamiento

[0143] Se proporciona en el presente documento clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en métodos de tratamiento de un trastorno de epilepsia, de acuerdo con las reivindicaciones. El sujeto puede tener (p. ej., puede comer alimentos de acuerdo con) una dieta cetogénica. El sujeto puede tener una enfermedad cardiovascular. El sujeto puede ser resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina. El sujeto puede ser susceptible a los efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina. El sujeto puede ser un niño (p. ej., un sujeto que tiene una condición de epilepsia pediátrica).

[0144] El trastorno epiléptico se define en las reivindicaciones. La epilepsia puede incluir convulsiones generalizadas o parciales (es decir, focales).

[0145] El trastorno epiléptico puede ser síndrome de Lennox-Gastaut, o síndrome de Ohtahara. El trastorno epiléptico puede ser síndrome de Lennox-Gastaut, o síndrome de Ohtahara, o un trastorno epiléptico pediátrico como se define en las reivindicaciones. El trastorno de epilepsia pediátrica puede ser el síndrome de Lennox-Gastaut, el síndrome de Ohtahara o la epilepsia mioclónica juvenil.

[0146] El trastorno epiléptico pediátrico puede ser el síndrome de Lennox-Gastaut. El trastorno epiléptico pediátrico puede ser el síndrome de Ohtahara. El trastorno epiléptico pediátrico puede ser la epilepsia mioclónica juvenil. En los párrafos siguientes, el agonista del receptor 5-HT es clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en las reivindicaciones.

[0147] El trastorno epiléptico puede ser el resultado de una enfermedad o lesión neurológica como, p. ej., encefalitis, cerebritis, absceso, accidente cerebrovascular, tumor, traumatismo, esclerosis tuberosa genética, disgenesia cerebral o encefalopatía hipóxico-isquémica. El trastorno epiléptico puede estar asociado con una enfermedad neurodegenerativa tal como, p. ej., la enfermedad de Alzheimer o la enfermedad de Parkinson. El trastorno epiléptico puede estar asociado con el autismo. El trastorno epiléptico puede estar asociado con una sola mutación genética. La enfermedad epiléptica puede estar asociada con conductas compulsivas o convulsiones electrográficas. La administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede inhibir comportamientos compulsivos o ataques electrográficos en un trastorno epiléptico, en un sujeto con enfermedad de Alzheimer (p. ej., un sujeto que padece la enfermedad de Alzheimer), en un sujeto con autismo (p. ej., un sujeto que tiene autismo), o en un sujeto con la enfermedad de Parkinson (p. ej., un sujeto que padece la enfermedad de Parkinson). Por lo tanto, el agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede inhibir comportamientos compulsivos o ataques electrográficos en un trastorno epiléptico. El agonista de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede inhibir conductas compulsivas o convulsiones electrográficas en un sujeto con enfermedad de Alzheimer. El agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede inhibir comportamientos compulsivos o convulsiones electrográficas en un sujeto con autismo. El agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede inhibir comportamientos compulsivos o ataques electrográficos en un sujeto con enfermedad de Parkinson.

[0148] La administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede reducir la incidencia (p. ej., el número de casos) de convulsiones no provocadas en el sujeto en comparación con la ausencia de un agonista del receptor de 5-HT o su sal farmacéuticamente aceptable. Por lo tanto, la respuesta de un paciente a la administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede controlarse progresivamente en comparación con un tiempo antes de la administración de los compuestos descritos en el presente documento (p. ej., un control o tiempo de control). La administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede reducir o prevenir las convulsiones mioclónicas o el estado epiléptico en el sujeto en comparación con la ausencia de un agonista del receptor de 5-HT o su sal farmacéuticamente aceptable. La administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede reducir o prevenir las convulsiones mioclónicas en el sujeto en comparación con la ausencia de un agonista del receptor de 5-HT o su sal farmacéuticamente aceptable. La administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede reducir o prevenir el estado epiléptico en el sujeto en comparación con la ausencia de un agonista del receptor de 5-HT o su sal farmacéuticamente aceptable. Por lo tanto, la respuesta de un paciente a la administración del agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede controlarse progresivamente en comparación con un tiempo antes de la administración de los compuestos descritos en el presente documento (p. ej., un control o tiempo de control).

[0149] El trastorno epiléptico puede ser un trastorno epiléptico que no responde al tratamiento con un fármaco antiepiléptico (FAE). El sujeto puede comer una dieta cetogénica. El trastorno epiléptico puede ser un trastorno epiléptico en un adulto (p. ej., mayor de 16 años).

[0150] El trastorno epiléptico puede ser un trastorno epiléptico en niños. Por lo tanto, el trastorno epiléptico puede ser un trastorno epiléptico pediátrico. El niño puede tener menos de 1 semana de edad. El niño puede tener menos de 1 mes de edad. El niño puede tener menos de 6 meses de edad. El niño puede tener menos de 12 meses de edad. El niño puede tener menos de 2 años. El niño puede tener menos de 3 años. El niño puede tener menos de 4 años. El niño puede tener menos de 5 años. El niño puede tener menos de 6 años. El niño puede tener menos de 7 años. El niño puede tener menos de 8 años. El niño puede tener menos de 9 años. El niño puede tener menos de 10 años. El niño puede tener menos de 12 años.

[0151] El niño puede tener más de 1 semana de edad. El niño puede tener más de 1 mes de edad. El niño puede tener más de 6 meses de edad. El niño puede tener más de 12 meses de edad. El niño puede tener más de 2 años. El niño puede tener más de 3 años. El niño puede tener más de 4 años. El niño puede tener más de 5 años. El niño puede tener más de 5 años. El niño puede tener más de 6 años. El niño puede tener más de 7 años. El niño puede tener más de 8 años. El niño puede tener más de 9 años. El niño puede tener más de 10 años. El niño puede tener más de 11 años. El niño puede tener más de 12 años.

[0152] El niño puede tener un trastorno epiléptico tratado mediante la administración de un FAE como se divulga en este documento. Por lo tanto, el agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse a dicho niño (p. ej., como terapia adicional).

[0153] En los métodos descritos en el presente documento, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse conjuntamente con un fármaco antiepiléptico (FAE). Los FAE pueden ser acetazolamida, benzodiazepina, cannabadioles, carbamazepina, clobazam, clonazepam, acetato de eslicarbazepina, etosuximida, etotoína, felbamato, fenfluramina, fosfenitoína, gabapentina, ganaxolona, huperzina A, lacosamida, lamotrigina, levetiracetam, nitrazepam, oxcarbazepina, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, retigabina, rufinamida, ácido valproico, valproato de sodio, estiripentol, tiagabina, topiramato, vigabatrin o zonisamida. El FAE puede ser ácido valproico, valproato de sodio, clonazepam, etosuximida, felbamato, gabapentina, carbamazepina, oxcarbazepina, lamotrigina, levetiracetam, benzodiazepina, fenobarbital, pregabalina, primidona, tiagabina, topiramato, bromuro de potasio, fenitoína, estiripentol, vigabatrin o zonisamida. El FAE puede ser ácido valproico, valproato de sodio, gabapentina, topiramato, carbamazepina, oxcarbazepina o vigabatrin.

[0154] El FAE puede ser acetazolamida. El FAE puede ser una benzodiazepina. El FAE puede ser cannabadioles. El FAE puede ser carbamazepina. El FAE puede ser clobazam. El FAE puede ser clonazepam. El FAE puede ser acetato de eslicarbazepina. El FAE puede ser etosuximida. El FAE puede ser etotoína. El FAE puede ser felbamato. El FAE puede ser fenfluramina. El FAE puede ser fosfenitoína. El FAE puede ser gabapentina. El FAE puede ser ganaxolona. El FAE puede ser huperzina A. El FAE puede ser lacosamida. El FAE puede ser lamotrigina. El FAE puede ser levetiracetam. El FAE puede ser nitrazepam. El FAE puede ser oxcarbazepina. El FAE puede ser perampanel. El FAE puede ser piracetam. El FAE puede ser fenobarbital. El FAE puede ser fenitoína. El FAE puede ser bromuro de potasio. El FAE puede ser pregabalina. El FAE puede ser primidona. El FAE puede ser retigabina. El FAE puede ser rufinamida. El FAE puede ser ácido valproico. El FAE puede ser valproato de sodio. El FAE puede ser estiripentol. El FAE puede ser tiagabina. El FAE puede ser topiramato. El FAE puede ser vigabatrin. El FAE puede ser zonisamida. El clemizol (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse como terapia complementaria a uno o más de los FAE descritos en el presente documento.

[0155] El agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse entonces como complemento (p. ej., en combinación con) medicamentos FAE para tratar las convulsiones, incluidas las convulsiones asociadas con los trastornos epilépticos descritos en el presente documento. El agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse como terapia complementaria (p. ej., en combinación con) medicamentos FAE para tratar las convulsiones, incluidas las convulsiones asociadas con los trastornos epilépticos descritos en el presente documento.

[0156] El trastorno epiléptico puede caracterizarse por convulsiones parciales o convulsiones generalizadas. El trastorno epiléptico puede caracterizarse por convulsiones parciales. El trastorno epiléptico puede caracterizarse por convulsiones generalizadas. La convulsión parcial puede ser una convulsión focal simple, una convulsión focal compleja o una convulsión focal parcial con generalización secundaria. La convulsión generalizada puede ser una convulsión tónico-clónica generalizada, una convulsión de ausencia (es decir, un pequeño mal), una convulsión mioclónica, una convulsión clónica, una convulsión tónica o una convulsión atónica.

[0158] Cuando se administra junto con los FAE descritos en el presente documento, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) y el FAE pueden administrarse simultáneamente. Cuando se administra simultáneamente, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) se puede formular junto con el FAE (es decir, en una única unidad de dosificación). El agonista del receptor de 5-HT (incluidas las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) puede formularse para administración separada del FAE pero administrado al mismo tiempo. Cuando se administra junto con los FAE descritos en el presente documento, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse secuencialmente (p. ej., antes o después) de la administración del FAE. Como se establece en el presente documento, un experto en la materia podría determinar fácilmente el orden secuencial de administración.

[0160] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse en una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 600 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 500 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 400 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 350 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 300 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 250 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 150 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 75 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg. Como se usa en el presente documento, "mg/kg" se refiere a mg por kg de peso corporal del sujeto. Las dosis descritas en el presente incluyen la administración del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) como agente activo terapéutico único o la administración del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) como agente activo terapéutico en combinación (como descrito en este documento) con un FAE descrito en este documento.

[0162] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 1 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 5 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 10 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 20 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 25 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 30 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 40 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 50 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 75 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 100 mg/kg.

[0164] El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 125 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 150 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 175 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 200 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 225 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 250 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 275 mg/kg.

[0165] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 300 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 325 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 350 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 375 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 400 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 425 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 450 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 475 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 500 mg/kg.

[0166] El análogo agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 600 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 700 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 800 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 900 mg/kg. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse a una dosis de aproximadamente 1000 mg/kg.

[0167] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse en las dosis descritas en el presente documento al menos una vez al día (p. ej., una vez cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 horas). El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse diariamente en las dosis descritas en el presente documento. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse al menos dos veces por semana en las dosis descritas en el presente documento. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse al menos tres veces por semana como se divulga en el presente documento. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) puede administrarse mensualmente como se divulga en el presente documento.

[0168] También se divulga un método para modular la actividad de un receptor de 5HT que comprende poner en contacto un receptor de 5HT con clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0169] El análogo de clemizol puede incluir compuestos de fórmula (I) descritos en este documento y puede incluir compuestos de estructura similar a la establecida, p. ej., en los documentos PCT/US2008/076804, WO10107739, WO2009039248, o la patente de los Estados Unidos n.º 4.011.322.

[0170] Composiciones farmacéuticas

[0171] En los párrafos siguientes, el agonista del receptor 5-HT es clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en las reivindicaciones.

[0172] También se divulgan en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden un agonista del receptor de 5-HT o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, útiles para tratar las enfermedades y trastornos antes mencionados. La composición farmacéutica se puede formular como una tableta, un polvo, una cápsula, una píldora, un sello o una pastilla como se divulga en este documento. La composición farmacéutica se puede formular como tableta, cápsula, píldora, sello o pastilla para administración oral. La composición farmacéutica se puede formular para disolución en una solución para administración mediante técnicas tales como, p. ej., administración intravenosa. La composición farmacéutica se puede formular para administración oral, administración en supositorios, administración tópica, administración intravenosa, administración intraperitoneal, administración intramuscular, administración intralesional, administración intratecal, administración intranasal, administración subcutánea, implantación, administración transdérmica o administración transmucosa como se divulga en este documento.

[0173] Cuando se administra como composición farmacéutica, las composiciones farmacéuticas pueden incluir isómeros ópticos, diastereómeros, enantiómeros, isoformas, polimorfos, hidratos, solvatos o productos, o sales farmacéuticamente aceptables del agonista del receptor de 5-HT. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) incluido en la composición farmacéutica se puede unir covalentemente a una fracción portadora, como se describe anteriormente. Alternativamente, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) incluido en la composición farmacéutica no está unido covalentemente a una fracción portadora.

[0174] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) se puede administrar solo o coadministrado a un sujeto que lo necesite con un FAE como se describe en el presente documento. La coadministración pretende incluir la administración simultánea o secuencial como se describe en el presente documento del agonista del receptor de 5-HT individualmente o en combinación (p. ej., más de un compuesto, p. ej., un FAE descrito en el presente documento). Los preparados también se pueden combinar, cuando se desee, con otros principios activos (p. ej., para prevenir las convulsiones).

[0175] Formulaciones

[0176] En los párrafos siguientes, el agonista del receptor 5-HT es clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en las reivindicaciones.

[0177] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica descrita en el presente documento se puede preparar y administrar en una amplia variedad de formas de dosificación oral, parenteral y tópica. Por lo tanto, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica descrita en el presente documento se puede administrar por inyección (p. ej., por vía intravenosa, intramuscular, intracutánea, subcutánea, intraduodenal o intraperitoneal). Además, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica descrita en el presente documento puede administrarse por inhalación, p. ej., por vía intranasal. Además, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica se pueden administrar por vía transdérmica. También se prevé que se puedan usar múltiples vías de administración (p. ej., intramuscular, oral, transdérmica) para administrar el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica que lo comprenda. Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden incluir un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y uno o más agonistas del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables). Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden incluir un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, uno o más de un agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) y uno o más FAE como se divulga en el presente documento.

[0178] La preparación puede incluir vehículos farmacéuticamente aceptables. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, tabletas, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios y gránulos dispersables. Un vehículo sólido puede ser una o más sustancias que también pueden actuar como diluyentes, agentes aromatizantes, aglutinantes, conservantes, agentes de desintegración de comprimidos o material de encapsulación.

[0179] En polvos, el vehículo puede ser un sólido finamente dividido en una mezcla con el componente activo finamente dividido. En tabletas, el componente activo se puede mezclar con el vehículo que tiene las propiedades aglutinantes necesarias en proporciones adecuadas y compactarse en la forma y tamaño deseados.

[0180] Los polvos y tabletas contienen preferiblemente de 5% a 70% del compuesto activo. Los vehículos adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao y similares. El término "preparación" pretende incluir la formulación del compuesto activo con material de encapsulación como vehículo que proporciona una cápsula en la que el componente activo con o sin otros vehículos está rodeado por un vehículo, que por lo tanto está asociado con él. Del mismo modo, se incluyen sellos y pastillas. Las tabletas, los polvos, las cápsulas, las píldoras, los sellos y las pastillas para chupar se pueden usar como formas de dosificación sólidas adecuadas para la administración oral.

[0181] Los excipientes sólidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, carbonato de magnesio; estearato de magnesio; talco; pectina; dextrina; almidón; tragacanto; una cera de bajo punto de fusión; mantequilla de cacao; carbohidratos; azúcares que incluyen, entre otros, lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, almidón de maíz, trigo, arroz, patata u otras plantas; celulosa tal como metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o carboximetilcelulosa sódica; y gomas incluyendo arábiga y tragacanto; así como proteínas que incluyen, pero no se limitan a, gelatina y colágeno. Si se desea, se pueden añadir agentes disgregantes o solubilizantes, como polivinilpirrolidona reticulada, agar, ácido algínico o una de sus sales, como alginato sódico.

[0182] Los núcleos de grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados tales como soluciones concentradas de azúcar, que también pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos o mezclas de disolventes adecuados. Se pueden agregar colorantes o pigmentos a las tabletas o recubrimientos de grageas para la identificación del producto o para caracterizar la cantidad del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica (es decir, la dosificación). Las preparaciones farmacéuticas descritas en el presente documento también se pueden usar por vía oral usando, p. ej., cápsulas de gelatina que encajan a presión, así como cápsulas blandas selladas hechas de gelatina y un recubrimiento como glicerol o sorbitol.

[0184] Para preparar supositorios, primero se funde una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao, y el componente activo se dispersa homogéneamente en ella, tal como por agitación. A continuación, la mezcla homogénea fundida se vierte en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y, por lo tanto, se solidifica.

[0186] Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, p. ej., agua o soluciones de agua/propilenglicol. Para inyección parenteral, las preparaciones líquidas se pueden formular en solución en solución acuosa de polietilenglicol.

[0188] Cuando se necesita o desea la aplicación parenteral, las mezclas particularmente adecuadas para el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica que comprende el mismo son soluciones estériles inyectables, preferiblemente soluciones oleosas o acuosas, así como suspensiones, emulsiones, o implantes, incluidos los supositorios. En particular, los vehículos para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de dextrosa, solución salina, agua pura, etanol, glicerol, propilenglicol, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, polímeros de bloques de polioxietileno y similares. Las ampollas son dosis unitarias convenientes. El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica que comprende el mismo también puede incorporarse en liposomas o administrarse mediante bombas o parches transdérmicos. Las mezclas farmacéuticas adecuadas para usar aquí incluyen las descritas, p. ej., en Pharmaceutical Sciences (decimoséptima Ed., Mack Pub. Condado, Easton, Pensilvania) y el documento WO 96/05309.

[0190] Las soluciones acuosas adecuadas para uso oral se pueden preparar disolviendo el componente activo en agua y agregando colorantes, sabores, estabilizantes y agentes espesantes adecuados según se desee. Las suspensiones acuosas adecuadas para uso oral se pueden preparar dispersando el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia, y agentes dispersantes o humectantes como un fosfátido natural (p. ej., lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (p. ej., estearato de polioxietileno), un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (p. ej., heptadecaetileno oxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol (p. ej., monooleato de polioxietilén sorbitol), o un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (p. ej., monooleato de sorbitán polioxietilenado). La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservantes como phidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más colorantes, uno o más saborizantes y uno o más edulcorantes, como sacarosa, aspartamo o sacarina. Las formulaciones se pueden ajustar por osmolaridad.

[0192] También se incluyen en este documento preparaciones en forma sólida que están destinadas a convertirse, poco antes de su uso, en preparaciones en forma líquida para administración oral. Tales formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, sabores, estabilizadores, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes y similares.

[0194] Las suspensiones de aceite pueden contener un agente espesante, como cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden agregar agentes edulcorantes para proporcionar una preparación oral apetecible, como glicerol, sorbitol o sacarosa. Estas formulaciones se pueden conservar mediante la adición de un antioxidante como el ácido ascórbico. Como ejemplo de un vehículo de aceite inyectable, véase Minto, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 93 - 102, 1997. Las formulaciones farmacéuticas descritas en este documento también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal o un aceite mineral, descritos anteriormente, o una mezcla de estos. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen gomas naturales, tales como goma arábiga y goma tragacanto, fosfátidos naturales, tal como lecitina de soja, ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tal como monooleato de sorbitán, y productos de condensación de estos ésteres parciales con óxido de etileno, tal como monooleato de sorbitán polioxietilenado. La emulsión también puede contener agentes edulcorantes y aromatizantes, como en la formulación de jarabes y elixires. Dichas formulaciones también pueden contener un agente emoliente, conservante o colorante.

[0195] La preparación farmacéutica está preferiblemente en forma de dosificación unitaria. En tal forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación empaquetada, conteniendo el paquete cantidades discretas de preparación, tales como tabletas, cápsulas y polvos empaquetados en viales o ampollas. Además, la forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula, una tableta, un sello o una pastilla, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estos en forma de paquete.

[0196] La cantidad de componente activo en una preparación de dosis unitaria se puede variar o ajustar de 0.1 mg a 10000 mg de acuerdo con la aplicación particular y la potencia del componente activo. La composición puede, si se desea, contener también otros agentes terapéuticos compatibles.

[0197] Las formulaciones pueden incluir un tensioactivo u otro codisolvente apropiado en la composición. Tales codisolventes incluyen: Polisorbato 20, 60 y 80; Pluronic F-68, F-84 y P-103; ciclodextrina; y aceite de ricino polioxil 35. Dichos codisolventes se emplean normalmente a un nivel entre aproximadamente el 0.01 % y aproximadamente el 2 % en peso. Puede ser deseable una viscosidad mayor que la de las soluciones acuosas simples para disminuir la variabilidad en la dosificación de las formulaciones, para disminuir la separación física de los componentes de una suspensión o emulsión de la formulación y/o para mejorar la formulación. Dichos agentes formadores de viscosidad incluyen, p. ej., alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, sulfato de condroitina y sus sales, ácido hialurónico y sus sales, y combinaciones de los anteriores. Dichos agentes se emplean típicamente a un nivel entre aproximadamente 0.01 % y aproximadamente 2 % en peso.

[0198] Puede ser deseable una viscosidad mayor que la de las soluciones acuosas simples para disminuir la variabilidad en la dosificación de las formulaciones, para disminuir la separación física de los componentes de una suspensión o emulsión de la formulación y/o para mejorar la formulación. Dichos agentes formadores de viscosidad incluyen, p. ej., alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, sulfato de condroitina y sus sales, ácido hialurónico y sus sales, combinaciones de los anteriores, y otros agentes conocidos por los expertos en la materia. Dichos agentes se emplean típicamente a un nivel entre aproximadamente 0.01 % y aproximadamente 2 % en peso. La determinación de las cantidades aceptables de cualquiera de los adyuvantes anteriores es fácilmente comprobable por un experto en la técnica.

[0199] Las composiciones farmacéuticas pueden incluir adicionalmente componentes para proporcionar liberación sostenida y/o comodidad. Dichos componentes incluyen polímeros mucomiméticos aniónicos de alto peso molecular, polisacáridos gelificantes y sustratos portadores de fármacos finamente divididos. Estos componentes se analizan con mayor detalle en las patentes de los Estados Unidos n.º 4,911,920; 5,403,841; 5,212,162; y 4,861,760.

[0200] La composición farmacéutica puede estar destinada a uso intravenoso. El excipiente farmacéuticamente aceptable puede incluir tampones para ajustar el pH a un intervalo deseable para uso intravenoso. Se conocen muchos tampones que incluyen sales de ácidos inorgánicos tales como fosfato, borato y sulfato.

[0201] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo puede administrarse por vía transdérmica, para el tratamiento de los trastornos epilépticos definidos en las reivindicaciones, por vía tópica, formulado como barras aplicadoras, soluciones, suspensiones, emulsiones, geles, cremas, ungüentos, pastas, jaleas, pinturas, polvos y aerosoles.

[0202] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) se puede proporcionar como una sal en las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento y se puede formar con muchos ácidos, incluidos, entre otros, clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos u otros protónicos que son las correspondientes formas de base libre.

[0203] El agonista del receptor de 5-HT (incluidas las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) o una composición farmacéutica del mismo administrada para tratar los trastornos epilépticos definidos en las reivindicaciones puede administrarse mediante administración parenteral, tal como administración intravenosa (IV) o administración en una cavidad corporal o lumen de un órgano. Las formulaciones para administración comprenderán comúnmente una solución de las composiciones de la presente invención disueltas en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear están el agua y la solución de Ringer, un cloruro de sodio isotónico. Además, los aceites fijos estériles se pueden emplear convencionalmente como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, se puede emplear cualquier aceite fijo blando, incluidos los monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos como el ácido oleico también se pueden utilizar en la preparación de inyectables. Estas soluciones son estériles y generalmente libres de materia indeseable. Estas formulaciones pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales bien conocidas. Las formulaciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables de acuerdo con se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas tales como agentes de tamponamiento y reguladores del pH, agentes reguladores de la toxicidad, p. ej., acetato sódico, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, lactato de sodio y similares. La concentración de las composiciones de la presente invención en estas formulaciones puede variar ampliamente y se seleccionará principalmente en función de los volúmenes de fluido, viscosidades, peso corporal y similares, de acuerdo con el modo particular de administración seleccionado y las necesidades del paciente. Para la administración IV, la formulación puede ser una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con la técnica conocida utilizando aquellos agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico aceptable por vía parenteral, tal como una solución de 1,3-butanodiol.

[0204] Las formulaciones farmacéuticas del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) para tratar un trastorno epiléptico pueden administrarse mediante el uso de liposomas que se fusionan con la membrana celular o se someten a endocitosis, es decir,mediante el empleo de ligandos unidos al liposoma, o unidos directamente al oligonucleótido, que se unen a los receptores de la proteína de la membrana superficial de la célula dando como resultado endocitosis. Mediante el uso de liposomas, en particular cuando la superficie del liposoma porta ligandos específicos para las células objetivo, o bien se dirige preferentemente a un órgano específico, se puede centrar la administración de las composiciones de la presente invención en las células objetivoin vivo(véase, p. ej., Al-Muhammed, J. Microencapsul.13: 293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol.6: 698 - 708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm 46: 1576 - 1587, 1989). La coadministración incluye la administración de un agente activo (p. ej., clemizol (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables)) dentro de las 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 o 24 horas de un segundo agente activo (p. ej., un anticonvulsivo). La coadministración puede incluir la administración de un agente activo dentro de las 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 o 24 horas de un segundo agente activo. La coadministración puede incluir la administración simultánea de dos agentes activos, aproximadamente simultáneamente (p. ej., dentro de aproximadamente 1, 5, 10, 15, 20 o 30 minutos entre uno y otro), o secuencialmente en cualquier orden. La coadministración se puede lograr mediante coformulación, es decir, preparando una única composición farmacéutica que incluya ambos agentes activos. En otras realizaciones, los agentes activos se pueden formular por separado. Los agentes activos y/o adyuvantes pueden unirse o conjugarse entre sí.

[0205] La coadministración también incluye la combinación con tratamientos para trastornos epilépticos, tal como requisitos dietéticos o cambios en la dieta. En consecuencia, el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo puede administrarse a sujetos con dietas especializadas, que incluyen, entre otras, una dieta cetogénica (p. ej., dieta baja en carbohidratos, proteína adecuada y alta en grasa).

[0206] Dosis eficaces

[0207] En los párrafos siguientes, el agonista del receptor 5-HT es clemizol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en las reivindicaciones.

[0208] La composición farmacéutica puede incluir el agonista del receptor de 5-HT (incluidas las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) contenido en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en una cantidad eficaz para lograr su propósito previsto. La cantidad real efectiva para una aplicación en particular dependerá, entre otros,sobre la condición que se está tratando. Por ejemplo, cuando se administran en métodos para tratar un trastorno epiléptico (p. ej., síndrome de Dravet), tales composiciones contendrán cantidades del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo eficaz para lograr el resultado deseado (p. ej., la inhibición de las convulsiones).

[0209] La dosificación y frecuencia (dosis únicas o múltiples) del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo administrada puede variar dependiendo de una variedad de factores, incluida la vía de administración; tamaño, edad, sexo, salud, peso corporal, índice de masa corporal y dieta del receptor; naturaleza y extensión de los síntomas de la enfermedad que se está tratando; presencia de otras enfermedades u otros problemas relacionados con la salud; tipo de tratamiento concurrente; y complicaciones de cualquier enfermedad o régimen de tratamiento. Se pueden usar otros regímenes o agentes terapéuticos junto con los métodos descritos en el presente documento.

[0210] Las cantidades terapéuticamente eficaces del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo para tratar enfermedades epilépticas descritas en el presente documento pueden determinarse inicialmente a partir de ensayos de cultivos celulares. Las concentraciones objetivo serán aquellas concentraciones del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo capaz de inhibir o disminuir de otro modo las convulsiones experimentadas por un paciente.

[0211] Las cantidades terapéuticamente eficaces del agonista del receptor de 5-HT (incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo para uso en seres humanos pueden determinarse a partir de modelos animales. Por ejemplo, se puede formular una dosis para humanos para lograr una concentración que se haya encontrado que es efectiva en animales. La dosificación en seres humanos puede ajustarse controlando la respuesta del paciente al tratamiento y ajustando la dosificación hacia arriba o hacia abajo, como se describió anteriormente.

[0212] Las dosis pueden variar dependiendo de los requisitos del sujeto y del compuesto que se emplee. La dosis administrada a un sujeto, en el contexto de las composiciones farmacéuticas presentadas en este documento, debería ser suficiente para lograr una respuesta terapéutica beneficiosa en el sujeto a lo largo del tiempo. El tamaño de la dosis también estará determinado por la existencia, la naturaleza y el alcance de cualquier efecto secundario adverso. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas, que son inferiores a la dosis óptima del compuesto. A partir de entonces, la dosis se aumenta en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo de acuerdo con las circunstancias.

[0213] Las cantidades de dosificación y los intervalos se pueden ajustar individualmente para proporcionar los niveles del agonista del receptor de 5-HT administrado (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo eficaz para el trastorno epiléptico particular que se está tratando. Esto proporcionará un régimen terapéutico acorde con la gravedad del estado de enfermedad del individuo.

[0214] Utilizando las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, se puede planificar un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico eficaz que no provoque una toxicidad sustancial y, sin embargo, sea completamente eficaz para tratar los síntomas clínicos demostrados por el paciente en particular. Esta planificación debe implicar la elección cuidadosa del agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) o una composición farmacéutica del mismo considerando factores como la potencia, la biodisponibilidad relativa, el peso corporal del paciente, la presencia y la gravedad de los efectos secundarios adversos, el modo preferido de administración y el perfil de toxicidad del agente seleccionado. Toxicidad

[0215] La relación entre toxicidad y efecto terapéutico de un compuesto particular es su índice terapéutico y puede expresarse como la relación entre DL<50>(la cantidad de compuesto letal en el 50% de la población) y DE<50>(la cantidad de compuesto eficaz en el 50% de la población). Se prefieren los compuestos que exhiben altos índices terapéuticos. Los datos del índice terapéutico obtenidos a partir de ensayos de cultivos celulares y/o estudios en animales se pueden usar para formular una variedad de dosis para uso en humanos. La dosificación de dichos compuestos se encuentra preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones en plasma que incluyen la DE<50>con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Véase, p. ej.,Fingl et al., en: THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, capítulo 1, página 1, 1975. El médico puede elegir la formulación exacta, la vía de administración y la dosificación en vista de la condición del paciente y el método particular en el que se usa el compuesto.

[0216] Cuando se necesita o se desea la aplicación parenteral, las mezclas particularmente adecuadas para el agonista del receptor de 5-HT (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) incluidas en la composición farmacéutica pueden ser soluciones estériles inyectables, soluciones oleosas o acuosas, así como suspensiones, emulsiones o implantes, incluidos los supositorios. En particular, los vehículos para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de dextrosa, solución salina, agua pura, etanol, glicerol, propilenglicol, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, polímeros de bloques de polioxietileno y similares. Las ampollas son dosis unitarias convenientes. Las mezclas farmacéuticas adecuadas para su uso en las composiciones farmacéuticas presentadas en este documento pueden incluir las descritas, p. ej., en Pharmaceutical Sciences (decimoséptima Ed., Mack Pub. Co., Easton, PA) y el documento WO 96/05309.Ejemplos

[0217] Los compuestos que quedan fuera del alcance de las reivindicaciones son compuestos de referencia.

[0218] Ejemplo 1

[0219] La epilepsia se puede adquirir como resultado de una lesión en el cerebro o una mutación genética. Entre las epilepsias genéticas se han identificado más de 650 variantes en el genSCN1A(Harkin, LA et al. The spectrum of SCN1A-related infantile epileptic encephalopathies. Brain 130, 843 - 852 (2007); Mulley JC, et al., SCN1A mutations and epilepsy. Hum. Mutat.25, 535 - 542 (2005)). Las mutaciones sin sentido o de cambio de marco en este gen están asociadas con la epilepsia generalizada con convulsiones febriles más (EGCF+) (Ceulemans, BP, et al., Clinical correlations of mutations in the SCN1A gene: from febrile seizures to severe myoclonic epilepsy in infancy. Pediatric Neurol. 30, 236-243 (2004)), así como un trastorno más grave conocido como síndrome de Dravet. Los niños con SD exhiben inicialmente un desarrollo normal, pero a menudo experimentan episodios de convulsiones febriles durante el primer año de vida con una progresión eventual a convulsiones recurrentes espontáneas graves, discapacidad intelectual, ataxia y disfunción psicomotora. Las convulsiones no se tratan adecuadamente con los fármacos antiepilépticos (FAE) disponibles y estos niños no son buenos candidatos para la resección neuroquirúrgica. Bender, AC, et al., SCN1A mutations in Dravet syndrome: Impact of interneuron dysfunction on neural networks and cognitive outcome. Epilepsy Beh.23, 177 - 186 (2012)).

[0220] En el cerebro de los mamíferos hay cuatro subtipos principales de subunidades alfa del canal de sodio dependientes de voltaje: Na<V>1.1, Na<V>1.2, Na<V>1.3 y Na<V>1.6, codificado por los genesSCN1A, SCN2A, SCN3A,ySCN8A,respectivamente. La apertura de estos canales produce una conductancia de sodio y una rápida despolarización de la membrana celular, p. ej., características integrales para la iniciación del potencial de acción (Catterall, WA, et al., Nav1.1 channels and epilepsy. J. Physiol.588, 1849 - 1859 (2010)). En ratones, Na<v>1.1 se expresa ampliamente en el sistema nervioso central, incluido el segmento inicial del axón de las interneuronas del hipocampo positivas para parvalbúmina y las células principales excitatorias (Kim, DY, et al., Reduced sodium channel Na(v)1.1 levels in BACE1-null mice. J. Biol. Chem.286, 8106 - 8116 (2011); Chen, C., et al., Mice lacking sodium channel beta1 subunits display defects in neuronal excitability, sodium channel expression, and nodal architecture. J. Neurosci.24, 4030 - 4042 (2004)). La eliminación heterocigota de Na<v>1.1 en ratones conduce a una reducción en la capacidad de activación de las interneuronas de pico rápido disociadas de forma aguda (Yu, FH, et al., Reduced sodium current in GABAergic interneurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Nat. Neurosci.9, 1142 - 1149 (2006)). Ratones con eliminación heterocigota global o específica de interneurona de Na<v>1.1 presentan convulsiones inducidas por la temperatura y espontáneas, ataxia leve, conductas similares al autismo y muerte prematura (Yu, F. H., et al., Reduced sodium current in GABAergic interneurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Nat. Neurosci.9, 1142-1149 (2006); Oakley, J. C., et al., Temperature- and age-dependent seizures in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106, 3994-3999 (2009); Cheah, C. S., et al., Specific deletion of Nav1.1 sodium channels in inhibitory interneurons causes seizures and premature death in a mouse model of Dravet syndrome. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109, 14646 - 14651 (2012)). Ratón con activación que porta un codón de terminación prematuro en el dominio III del canal de Na<v>1.1 también exhibe una disminución en la amplitud de los picos durante el disparo interneuronal prolongado y una mayor sensibilidad a las convulsiones inducidas por la temperatura (Ogiwara, I., et al., Nav1.1 localizes to axons of parvalbumin-positive inhibitory interneurons: a circuit basis for epileptic seizures in mice carrying an Scn1a gene mutation. J. Neurosci.27, 5903 - 5914 (2007)).

[0222] La generación y caracterización de modelos animales válidos es fundamental para los esfuerzos por comprender la fisiopatología del SD y para ayudar en la identificación de nuevas terapias. Si bien se ha prestado una atención considerable al modelado de mutaciones deSCN1Aen ratones, estos animales son difíciles de criar y los fenotipos de epilepsia están fuertemente influenciados por la genética de la cepa de fondo. Las células madre pluripotentes inducidas pueden generarse a partir de pacientes con SD, pero las neuronas individuales no recapitulan el entorno de red necesario para la generación de convulsionesin vivo.Danio rerio(pez cebra), una especie de vertebrado simple, proporciona un sistema modelo alternativo con ventajas significativas para la manipulación genética, la cría rentable y el descubrimiento de medicamentosin vivoLessman, C. A., The developing zebrafish (Danio rerio): a vertebrate model for high-throughput screening of chemical libraries. Birth Defects Res. C. Embryo Today 93, 268 - 280 (2011); Delvecchio, C., et al., The zebrafish: a powerful platform for in vivo, HTS drug discovery. Assay Drug Dev. Technol.9, 354 - 361 (2011); Rinkwitz, S., et al., Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences. Prog. Neurobiol.93, 231 - 243 (2011)). Idealmente, un modelo animal debería basarse en una causa genética conocida de la enfermedad (mutaciónSCN1A), recapitular con precisión las características clave de la enfermedad (epilepsia) y responder, o no, a las terapias comúnmente utilizadas en pacientes con la enfermedad (validación farmacológica). Si tiene éxito, dicho modelo podría informar la comprensión del proceso de la enfermedad y catalizar las exploraciones hacia nuevas terapias.

[0224] En el pez cebra, la familia de canales de sodio dependientes de voltaje consta de cuatro conjuntos de genes duplicados:scn1Laa & scn1Lab, scn4aa & scn4ab, scn5Laa & scn5Lab, and scn8aa & scn8ab(Novak, A. E., et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alpha-subunit genes. Dev. Dyn. 235, 1962-1973 (2006)).El genscn1Labdel pez cebra comparte un 77% de identidad con elSCN1Ahumano y se expresa en el sistema nervioso central. Un mutante de pez cebra homocigoto para este gen (originalmente denominadodidys552) se descubrió en una pantalla de mutagénesis química utilizando la respuesta optocinética como ensayo (Schoonheim, PJ, Arrenberg, AB, Del Bene, F. y Baier H., Optogenetic localization and genetic perturbation of saccade-generating neurons in zebrafish. J. Neurosci.30, 7111-7120 (2010)). Estos tipos de deteccións se basan en la inducción de mutaciones puntuales aleatorias utilizando el agente alquilanteN-etil-N-nitrosourea(ENU), las mutaciones resultantes suelen ser de pérdida de función y recesivas. Aunque se trata de una mutación homocigótica, mutantes de pez cebrascn1Labson relevantes para el síndrome de Dravet humano autosómico dominante dada la duplicación del genoma en el pez cebra y la presencia de un homólogo adicional de Na<v>1.1 (scn1Laa). Los mutantesscn1Labse caracterizaron a nivel molecular y de comportamiento, demostraron que los mutantes presentan convulsiones espontáneas resistentes a los medicamentos y luego los usaron en un nuevo programa de detección de alto rendimiento para identificar compuestos que mejoran el fenotipo de la epilepsia. Una pantalla basada en el fenotipo identificó al clemizol, un compuesto aprobado por la FDA, como un inhibidor eficaz de los comportamientos convulsivos espontáneos y las convulsiones electrográficas en estos mutantes.

[0225] Expresión y caracterización descn1Labdel pez cebra mutante. El Dr. Herwig Baier identificó al pez cebra con una mutación en el dominio III de un canal de sodio dependiente del voltaje durante una prueba de mutagénesis química (Schoonheim, PJ, Arrenberg, AB, Del Bene, F. y Baier H., Optogenetic localization and genetic perturbation of saccade-generating neurons in zebrafish. J. Neurosci. 30, 7111 - 7120 (2010)). Los mutantes originalscn1Labse cruzaron nuevamente con el fondo largo de Tupfel (TL) durante 7-10 generaciones y confirmaron una mutación de metionina (M) a arginina (R) en la colonia (Fig.1A). La transcriptasa inversa (TI) y la PCR cuantitativa (q) divulgaron una disminución en la expresión de ARNm parascn1Laben larvas mutantes a los 3, 5 y 7 días posteriores a la fecundación (dpf) (Fig.1B); no se dispone de anticuerpos que reconozcan esta proteína en el pez cebra. Como se esperaba (Novak, AE, et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alpha-subunit genes. Dev. Dyn.235, 1962-1973 (2006)),scn1Labse expresa de manera prominente durante las primeras etapas del desarrollo larvario (Fig.1B) y específicamente en el sistema nervioso central a los 3 dpf (Figs.1D, E). La hibridaciónin situdel montaje completo reveló una expresión difusa pero prominente en las regiones del cerebro correspondientes al prosencéfalo (telencéfalo), el techo óptico y el cerebelo. Se observó un patrón de expresión similar parascn1Laaa los 3 dpf. A los 5 y 7 dpf, la expresión del SNC permaneció prominente y la señal débil descn1Labtambién se observó en el corazón (Fig. 1D). La expresión relativa descn8aaoscn8ab(Na<v>1.6), por ej., una subunidad que se cree que actúa como un modificador genético del SD (Martin, MS, et al., Martin, M. S., et al., The voltage-gated sodium channel Scn8a is a genetic modifier of severe myoclonic epilepsy of infancy. Hum. Mol. Gen.16, 2892-2899 (2007)), no pudo revelar una diferencia significativa en la expresión entre mutantes y controles de hermanos a los 5 dpf (Fig. 1C). De manera similar, el análisis de microarreglos a los 5 dpf tampoco pudo detectar un cambio compensatorio en la expresión de ARNm de trece subunidades diferentes descnde pez cebra (Tabla I) incluyendo el otro homólogo (scn1Laa).Estos resultados demuestran un defecto selectivo en un gen Na<v>1.1de pez cebra expresado en el SNC durante el desarrollo temprano.

[0227] Análisis transcriptómico a gran escala de mutantesscn1Lab.Aunque los trastornos hereditarios de los canales iónicos dependientes de voltaje se reconocen como una etiología de la epilepsia, no se ha reportado una investigación de cambios transcripcionales para ninguna canalopatía relacionada con la epilepsia. Para detectar diferencias en la expresión génica de manera imparcial, se usó un chip Agilentdanio reriochip que cubre ~44,000 sondas (Figs.2A, B). Los análisis de agrupamiento jerárquico mostraron que ~2.5% (1099) de estas sondas se expresaron diferencialmente entre mutantes y controles de hermanos a los 5 dpf (p≤ 0.01, prueba t; 674 sobrerregulados y 425 subregulados); 405 fueron asignados a una categoría de "función desconocida". En la Fig.2C se muestra una lista de 30 genes subregulados y sobrerregulados que muestran las mayores diferencias en la expresión. Estas diferencias fueron modestas ya que el 90% (990/1099) de los genes identificados exhibieron cambios entre 0.8 y 2.0. Similar al análisis de microarreglos de ratones mutantes de un solo genmecp2(Cerebellar gene expression profiles of mouse models for Rett syndrome reveal novel MeCP2 targets. BMC Med. Genet.8, 36 (2007)), muchos de los genes identificados no tenían una función y/o expresión obvia relacionada con el SNC.

[0229] Los dos genes con cambios más grandes, la somatolactina β y una Na, K-ATPasa, tienen una expresión restringida principalmente a la pituitaria (smtlb) (Lopez, M., et al., Expression of the somatolactin β gene during zebrafish embryonic development. Gene Expr. Patterns 6, 156-161 (2006)) u oído, bulbo intestinal y conducto pronéfrico (atp1a1a.5) (Blasiole, B., et al., Cloning, mapping, and developmental expression of a sixth zebrafish Na, K-ATPase alpha1 subunit gene (atp1a1a.5). Mech. Dev.119, Suplemento 1: S211 - S214 (2002)). Sondas para varios genes relacionados con la apoptosis (casp8, casp8bycasp3b) no revelaron cambios estadísticamente significativos en los estudios de microarreglos. De los genes con expresión alterada en mutantesscn1Lab, seis estaban previamente implicados en trastornos neurológicos, p. ej.,pcdh19(encefalopatía epiléptica infantil),cyfip1yfxr2(síndrome de X frágil),ocrl(síndrome de Lowe),ubap2l(enfermedad de Parkinson) yoca2(síndrome de Angelman). Las mediciones de expresión génica basadas en microarreglos se verificaron para 14 genes seleccionados al azar mediante qPCR (Fig.3A).

[0231] Las funciones biológicas se asignaron a todos los genes utilizando anotaciones de ontología de genes (GO) y los 482 genes que mostraban un cambio de expresión de al menos 1.5 veces y un valor de p <0.01 se clasificaron aún más (Fig.3C). Los genes de unión a iones de calcio incluyen anexina A1c, A1b y 2a, espectrina α2, neurexina 2a, calsintenina 1 y parvalbúmina 3. Cambios significativos en un canal de unión gap (cx43),un gen implicado en la agrupación de canales de sodio dependientes de voltaje en el segmento inicial del axón (spna2) y el dominio de ubiquitina de un receptor de GABA (map1lc3b) también se observaron. Se eligieron tres genes adicionales que no se encontraron en la micromatriz para el análisis de qPCR (Fig.3B):hcn1,un gen que se ha demostrado que está relacionado conSCN1Ausando minería de datos y subregulado en varios modelos de convulsiones (Noam, Y., et al., Towards an integrated view of HCN channel role in epilepsy. Curr. Opin. Neurobiol.21, 873-879 (2011)) se redujo significativamente en mutantesscn1Laben comparación con el control de hermano (p <0.05, prueba t de Student de 2 colas). Sin embargo, los geneshomerybdnf,p. ej., genes involucrados en la sinaptogénesis relacionada con la formación de sinapsis excitatorias recurrentes y epilepsia (Avedissian, M., et al., Hippocampal gene expression analysis using the ORESTES methodology shows that homer 1a mRNA is upregulated in the acute period of the pilocarpine epilepsy model. Hippocampus 17, 130-136 (2007); Tongiorgi, E., et al., Brain-derived neurotrophic factor mRNA and protein are targeted to discrete dendritic laminas by events that trigger epileptogenesis. J. Neurosci. 24, 6842-6852 (2004)) no cambiaron.

[0233] Convulsiones espontáneas en pez cebra con mutantescn1Lab. Los mutantesscn1Labfueron controlados en busca de evidencia de convulsiones electrográficas espontáneas a partir del 3 dpf, p. ej., la primera etapa larvaria en la que se puede detectar la descarga epileptiforme (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Hortopan, G. A., et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci.30, 13718-13728 (2010); Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermia-induced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol.237, 199-206 (2012); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Chege, S. W., Hortopan, G. A., Dinday, M. T., & Baraban, S.C., Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol.72, 186-198 (2012)). Las larvas mutantes se identificaron por su apariencia "negra" (Fig.4A), lo que es indicativo de un defecto en la agregación del pigmento y mueren prematuramente entre 10 y 12 dpf, como se reportó anteriormente (Novak, A. E., et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alpha-subunit genes. Dev. Dyn.235, 1962-1973 (2006)). Registros de campo extracelular del prosencéfalo de mutantesscn1Labparalizados e inmovilizados en agar se marcaron por frecuentes breves ráfagas de tipo interictal y eventos de tipo ictal de gran amplitud y larga duración a partir del 3 dpf(n= 4) y progresivamente haciéndose más prominente entre 4 y 7 dpf (n= 132) (Fig. 2C). Estos eventos se confirmaron en el 100 % de los mutantes a los 3 dpf, el 100 % a los 4 dpf, el 97 % a los 5 dpf, el 98 % a los 6 dpf y el 100 % a los 7 dpf.

[0235] No se observaron eventos eléctricos anormales en los controles de hermanos de la misma edad en ninguna etapa de desarrollo (n = 36). Convulsiones inducidas por hipertermia (Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermia-induced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol. 237, 199-206 (2012)) podrían ser evocadas en mutantesscn1Labde 5 dpf y controles a umbrales de temperatura aparentemente similares (mutante: 26.9 ± 0.5 ºC;n= 14; control: 25.9 ± 0.5 °C;n= 14;p= 0.164 prueba t). Sin embargo, estas mediciones se complicaron, en mutantes, por la aparición simultánea de descargas epileptiformes espontáneas de alta frecuencia. Los mutantes tenían niveles elevados de actividad de nado y exhibieron un comportamiento similar a una convulsión no provocada que consistía en convulsiones de todo el cuerpo y movimientos rápidos no dirigidos a partir de 4 dpf (n= 36). Un gráfico de seguimiento de locomoción representativo de un mutantescn1Labque muestra hiperactividad y comportamiento convulsivo se muestra en la Fig. 4B. Este comportamiento es similar al clasificado como convulsión de Etapa III en larvas expuestas a pentilentetrazol. (Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). Nunca se observaron comportamientos convulsivos en los controles en ninguna etapa del desarrollo(n= 36). En grupos de larvas mutantes y control de hermanos, los mutantesscn1Labpermanecen cerca de los lados de la placa de Petri, lo que se considera una forma de tigmotaxis en los peces (Ellis, L. D., Seibert, J., & Soanes, K. H., Distinct modes of induced hyperactivity in zebrafishlarvae. Brain Res.1449, 46-59 (2012)). Estos resultados revelan un fenotipo de epilepsia llamativo en pez cebra mutantescn1Lab.

[0237] Evaluación farmacológica del mutante de pez cebrascn1Lab. Convulsiones asociadas con mutaciones deSCN1Aresponden mal a la mayoría de los FAE. Para evaluar la sensibilidad al fármaco, las convulsiones electrográficas espontáneas se registraron los mutantesscn1Labincrustados en agar (5-6 dpf) en condiciones de referencia, y nuevamente después de la aplicación de un FAE disponible comercialmente. Todos los fármacos se aplicaron en baño a una concentración de 1 mM; siete peces fueron probados para cada fármaco. La frecuencia de los eventos epileptiformes (incluidas las descargas interictales y similares a las ictales) y la fracción de tiempo gastada en las convulsiones en mutantesscn1Labse redujeron con valproato, diazepam, bromuro de potasio y estiripentol (Figs.5A, B, D) (Compuestos de referencia). Las duraciones de las ráfagas no cambiaron significativamente para ninguna de estas exposiciones a fármacos (Fig.5C).

[0239] Como era de esperar, la mayoría de los FAE no tuvieron efecto y la actividad epileptiforme se hizo más frecuente después de la exposición a carbamazepina (en 2 de 7 peces), etosuximida (4 de 7 peces) (Compuestos de referencia) o vigabatrin (6 de 7 peces). Dado que los niños con SD a menudo responden a la dieta cetogénica (DC) (Dravet, C., et al., Severe myoclonic epilepsy in infancy: Dravet syndrome. Adv. Neurol.

[0240] 95, 71-102 (2005)) se expuso un grupo separado de mutantesscn1Lab, hermanos y controles de tipo silvestre a una forma de la dieta durante 48 h a partir de 4 dpf. Los datos de seguimiento de locomoción en larvas expuestas a DC a los 6 dpf confirman una reducción en el comportamiento similar a una convulsión a niveles de control en 7 de 10 mutantes (Fig. E; velocidad media, mutantes tratados = 0.43 ± 0.09 mm/seg,n= 16; mutantes no tratados = 0.81 ± 0.05 mm/seg,n= 28;p< 0.05 ANOVA de Kruskal-Wallis en intervalos con una comparación múltiple por pares de Dunn). No se observaron diferencias significativas en el comportamiento de nado en los controles de hermanos tratados con DC (velocidad media = 0.63 ± 0.05 mm/seg, n = 20) en comparación con las larvas tipo silvestre no tratadas a los 6 dpf (velocidad media = 0.62 ± 0.07 mm/seg; n = 20). La exposición aguda (20 min) a la dieta no tuvo efecto sobre el comportamiento de las convulsiones de los mutantes en el ensayo de locomoción (n = 14; cambio en la velocidad media < 34%). Las registros de campo del prosencéfalo posteriores obtenidos del mismo pez cebra utilizado en el ensayo de locomoción (Fig. 5F, trazo superior) confirmaron la ocurrencia de descarga epileptiforme espontánea para los mutantesscn1Labexpuestos a los medios embrionarios y una supresión de la actividad de ráfaga en mutantes expuestos a la DC durante 48 horas (Fig.5F, trazo inferior). Estos resultados demuestran que el perfil farmacológico de mutantesscn1Labse asemeja a lo que se observa en los niños con SD.

[0242] Cribado de fármacos de alto rendimiento en mutantesscn1Lab. Debido a que la actividad de las convulsiones conductuales se controla fácil y rápidamente utilizando un formato de seguimiento de locomoción (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Hortopan, G. A., et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci.30, 13718-13728 (2010); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Chege, S. W., Hortopan, G. A., Dinday, M. T., & Baraban, S.C., Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol.72, 186-198 (2012); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anti-convulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech.5, 773-774 (2012); Cario, C. L., Farrell, T. C., Milanese, C., & Burton, E. A., Automated measurement of zebrafish larval movement. J. Physiol. 589, 3703-3708 (2011); Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of early-stage development drugs. J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008); Orellana-Paucar, A. M., et al., Anticonvulsant activity of bisabolene sesquiterpenoids of Curcuma longa in zebrafish and mouse seizure models. Epilepsy Beh.24, 14-22 (2012) (Figs.4B y 5B1).

[0243] Se diseñó una estrategia basada en fenotipos de alto rendimiento para examinar las bibliotecas químicas en busca de compuestos que reduzcan el comportamiento mutante a la etapa 0 (muy poca actividad de nado) o a la etapa I (actividad de nado aumentada, pero no convulsiva), p. ej., un comportamiento equivalente al observado en mutantes normales de tipo silvestre. La medición automatizada de la actividad de las larvas se logró utilizando el software de seguimiento EthoVision (Noldus Information Technology) y una cámara de alta velocidad. Estudios previos confirmaron que el movimiento de alta velocidad ≥ 20 mm/seg corresponde a convulsiones paroxísticas similares a convulsiones (Etapa III) (Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of early-stage developmentdrugs. J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008); Orellana-Paucar, A. M., et al., Anticonvulsant activity of bisabolene sesquiterpenoids of Curcuma longa in zebrafish and mouse seizure models. Epilepsy Beh.24, 14-22 (2012)).

[0244] Utilizando un formato de 96 pocillos, se realizó un seguimiento automático de la actividad de nado del mutante en la línea base, y luego nuevamente después de la adición de un compuesto de prueba (100 µL); cada compuesto se probó en 6 a 12 larvas individuales a los 5 dpf. El cambio en la actividad de nado del mutante entre dos épocas de registro consecutivas en medios embrionarios se tomó como referencia y se muestra en la Fig.6A(n= 28). Sobre la base de una desviación estándar de 17.3 para registros de referencia asociados simplemente con un intercambio de solución, se seleccionaron compuestos que inhibían el movimiento (medido como un cambio en la velocidad media) en ≥ 34 %. Para validar este enfoque, primero se seleccionaron once FAE y la DC utilizando este ensayo. Como se esperaba de los ensayos electrofisiológicos (Fig.5), el diazepam, el bromuro de potasio, el estiripentol, el valproato (Compuestos de referencia) y una exposición de 48 horas a la DC inhibieron efectivamente el comportamiento de las convulsiones en el ensayo basado en la locomoción (Fig. 6B); la ganaxolona (Compuestos de referencia), un esteroide neuroactivo relacionado con la alopregnalona, también fue eficaz. A continuación, los compuestos de prueba se examinaron a una concentración inicial de 667 µM de una biblioteca que incluía fármacos probados toxicológicamente y aprobados por la Administración de Fármacos y Alimentos de los Estados Unidos (FDA).

[0246] Entre los 320 compuestos examinadosin vivo,se encontró que 18 inhiben significativamente las convulsiones espontáneas en mutantesscn1Laba niveles comparables con el comportamiento en la Etapa 0 o la Etapa I y/o reducen la velocidad media de nado (círculos rojos en la Fig.6C). Estos 18 compuestos luego se volvieron a probar en un grupo separado de mutantesscn1Laba concentraciones de 667, 67 y 6.7 µM. En la detección inicial, 81 compuestos se identificaron como letales, es decir, sin latidos cardíacos visibles ni movimiento en respuesta al tacto después de una exposición de 30 minutos y se reevaluaron a una dilución de 1:100; ninguno de estos avanzó más. La biblioteca de fármacos incluía una serie de compuestos adicionales con supuestas propiedades anticonvulsivas (beclamida, ácido aminohidroxibutírico y tiletamina (Compuestos de referencia)) que también fueron ineficaces en el ensayo de locomoción de 96 pocillos a 667 µM. Catorce de los compuestos que se volvieron a probar no lograron inhibir con éxito el comportamiento de las convulsiones en un segundo grupo demutantes scn1Labo solo comportamiento suprimido a la concentración más alta de fármaco. Se seleccionaron los siguientes 4 (de 18) compuestos que fueron efectivos para reducir la actividad de nado inducida por convulsiones y la velocidad media en las tres concentraciones de fármaco para realizar más pruebas: zoxazolamina (Compuesto de referencia), clemizol HCl, clorgilina HCl (Compuesto de referencia) y tolperisona HCl (Compuesto de referencia) (Fig.6D). Cada uno de estos compuestos se evaluó por tercera vez en el ensayo de locomoción a una concentración de 100 µM, y posteriormente se controló la actividad electrográfica del prosencéfalo. La clorgilina (un inhibidor de la monoaminooxidasa A) (Compuesto de referencia) y los relajantes musculares zoxazolamina (Hadra, R. & Millichap J. G., Quantitative assessment of motor function in cerebral palsy: evaluation of zoxazolamine (flexina), a new muscular relaxant agent. Neurology 6, 843-852 (1956)) y tolperisona (Sakitama, K., The effects of centrally acting Muscle relaxants on the intrathecal noradrenaline-induced facilitation of the flexor reflex mediated by group II afferent fibers in rats. Jpn. J. Pharmacol.63, 369-736 (1993)) y tolperisona (Sakitama, K., Los efectos de los relajantes musculares de acción central sobre la facilitación inducida por noradrenalina intratecal del reflejo flexor mediado por fibras aferentes del grupo II en ratas. Jpn. J. Pharmacol.63, 369-736 (1993)) (Compuestos de referencia) se identificaron como "falsos positivos" porque redujeron la actividad de nado a esta concentración, pero cuando el mismo mutante se incrustó en agar, todavía se observaron eventos de convulsiones electrográficas (véase la Fig.6E).

[0248] Solo un compuesto, clemizol (antihistamina e inhibidor de unión de ARN a NS4B) (Finkelstein, M., Kromer, C. M., Sweeney, S. A., & Delahunt C. S., Some aspects of the pharmacology of clemizole hydrochloride. J. Am. Pharm. Assoc. Am. Pharm. Assoc.49, 18-22 (1960); Einav, S., Sobol, H. D., Gehrig, E., & Glenn J. S., Discovery of a hepatitis C target and its pharmacological inhibitors by microfluidic affinity analysis. Nat. Biotechnol. 26, 1019-1027 (2008)), fue eficaz para suprimir la actividad convulsiva espontánea en ambos ensayos (Fig.6D-E). El clemizol no tuvo un efecto significativo sobre el comportamiento de las convulsiones en el ensayo de locomoción en concentraciones entre 6.25 y 50 µM (n = 33). Como una evaluación adicional del potencial terapéutico para el tratamiento agudo con clemizol, se demostró que 100 µM de clemizol fue efectivo para reducir el comportamiento de las convulsiones en el pez cebra de tipo silvestre expuesto a 15 mM de pentilentetrazol (Fig.6D;n= 10), es decir, un modelo de convulsiones agudas basado en el antagonismo del receptor de GABA. Estos resultados sugieren que los mutantesscn1Labse pueden usar en un detección de alto rendimiento para identificar posibles compuestos principales para el síndrome de Dravet.

[0250] El mutantescn1Labde pez cebra descrito en el presente documento es el primer modelo vertebrado simple de una mutación del canal de sodio que recapitula las características del síndrome de Dravet, una forma catastrófica de epilepsia resistente a fármacos en los niños. Estos mutantes exhiben hiperactividad, incluido un comportamiento convulsivo, convulsiones electrográficas espontáneas, una vida útil más corta y un perfil farmacológico similar al de la condición humana. El análisis molecular adicional demutantes scn1Labsugiere la ausencia de grandes cambios en la expresión génica global y la falta de compensación, a nivel de ARN, por otras subunidades del canal de Na<+>dependientes del voltaje. Una estrategia de detección de fármacos basada en el fenotipo de dos etapas para identificar compuestos principales con el potencial de mejorar los fenotipos de epilepsia asociados con la mutaciónSCN1Aidentificó un fármaco aprobado por la FDA (clemizol).

[0252] La actividad electroencefalográfica (EEG) suele ser normal en el primer año de vida de los pacientes con SD, con una evolución a actividad paroxística y de múltiples picos anormal entre los 1 y 9 años de edad. Este patrón dependiente de la edad fue imitado en el desarrollo de larvas de pez cebra a edades en las que la expresión descn1aera significativa. Los registros extracelulares del prosencéfalo en larvas muy jóvenes (3 dpf) parecían en gran medida normales con la pequeña ráfaga ocasional de actividad de múltiples picos. La actividad breve y frecuente de tipo interictal con descargas explosivas de múltiples picos de gran amplitud se hizo más prominente a medida que las larvas envejecían. La arquitectura de estos eventos eléctricos se parecía a los descritos previamente en larvas de tipo silvestre expuestas a pentilentetrazol (Baraban, SC, Taylor, MR, Castro, PA y Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)), 4-aminopiridina (Baraban, SC, et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007)), linopirdina (Chege, SW, Hortopan, GA, Dinday, MT y Baraban, SC, Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol.72, 186-198 (2012)) o hipertermia (Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermia-induced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol.237, 199-206 (2012)).

[0254] La aparición de actividad convulsiva electrográfica se corresponde con hiperactividad, convulsiones de todo el cuerpo con actividad de nado a alta velocidad asociada y breve pérdida de postura en mutantes que se comportan libremente. Estos tipos de comportamientos espontáneos nunca se observan en las larvas de tipo silvestre y, nuevamente, se asemejan a los observados previamente solo durante la exposición a fármacos convulsivos. Estos comportamientos son un indicador indirecto de la actividad de las convulsiones y podrían usarse para evaluación rápidain vivode tratamientos farmacológicos y letalidad en un formato de múltiples pocillos utilizando software de seguimiento de locomoción automatizado (Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A. y Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anticonvulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech. 5, 773-774 (2012); Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of earlystage development drugs. J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008)). Las convulsiones en mutantesscn1Labde pez cebra respondieron a la dieta cetogénica y cuatro FAE (p. ej., valproato, benzodiazepina, bromuro de potasio y estiripentol (Compuestos de referencia)) prescritos clínicamente para pacientes con SD.

[0256] Curiosamente, los eventos de convulsiones electrográficas en mutantesscn1Labpermanecieron sin cambios (o quizás empeoraron) en respuesta a varios FAE disponibles en el mercado. Si bien es posible que se requieran concentraciones de fármaco superiores a 1 mM para eliminar los eventos eléctricos, estas se considerarían concentraciones altas y potencialmente no selectivas. En ensayos de fármacos utilizando un modelo de convulsiones agudas inducidas por PTZ en larvas de pez cebra (Baraban, SC, et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anti-convulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech.5, 773-774 (2012); Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PloS One 8, e54166 (2013)), las concentraciones de FAE de 1 mM e inferiores a menudo fueron suficientes para evaluar la actividad antiepiléptica. Dado que no responde a siete FAE diferentes, este modelo se ajusta a la definición clínica de epilepsia resistente a fármacos (de Toffol, B., et al., ESPERA study: Applicability of the new ILAE criteria for antiepileptic drug resistance of focal epilepsies in current clinical practice. Epilepsy Beh 25, 166-169 (2012)).

[0258] Durante casi 40 años, el descubrimiento y la identificación de nuevos FAE se ha basado casi por completo en modelos animales preclínicos de convulsiones adquiridas o agudas en roedores (Loscher, W. & Schmidt, D., Modern antiepileptic drug development has failed to deliver: Ways out of the current dilemma. Epilepsia 52, 657-658 (2011)). Este enfoque identificó con éxito fármacos que bloquean las convulsiones tónico-clónicas generalizadas en humanos. Bialer, M. & White HS, Key factors in the discovery and development of new antiepileptic drugs. Nat. Rev. Drug Discov. 9, 10-19 (2012)) pero sigue siendo lento, intensivo en recursos, costoso y laborioso. Si bien las pruebas contra PTZ u otros tipos de convulsiones adquiridas en larvas de pez cebra pueden ser más eficientes que ensayos similares en roedores (Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A. y Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anticonvulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech. 5, 773-774 (2012) Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PLoS One 8, e54166 (2013)), en última instancia, deberían identificar las mismas clases de compuestos.

[0260] Por el contrario, en este documento se describe una estrategia de detección alternativa que utiliza un formato de 96 pocillos para un control rápido del comportamiento automatizado seguido de un ensayo electrofisiológico sensible de la actividad convulsiva electrográfica espontánea en un pez mutante que imita un trastorno genético humano conocido. Esta estrategiain vivocontrola simultáneamente la letalidad y no se limita aSCN1A,sino que podría aplicarse a cualquier trastorno epiléptico. De hecho, este enfoque basado en el fenotipo podría formar la base de un enfoque genéticamente informado o "personalizado" para el descubrimiento de fármacos. Aunque se han desarrollado ratones genéticamente modificados que imitan mutaciones deSCN1Aconocidas y que exhiben epilepsia, la reproducción puede ser complicada, la cepa de fondo puede modificar los fenotipos de las convulsiones y los FAE rara vez se prueban en estos animales. Por ejemplo, en ratones mutantesScn1aRX/+

se evaluaron únicamente el estiripentol y el clobazam para determinar los efectos sobre los umbrales de convulsiones inducidas por hipertermia. Cao, D., et al., Efficacy of stiripentol in hyperthermia-induced seizures in a mouse model of Dravet syndrome. Epilepsia 53, 1140-1145 (2012)). El tratamiento de ratones mutantesScn1a+/-

con clonazepam, un modulador alostérico de los receptores de GABA-A, rescató algunos de los comportamientos de tipo autista pero no se evaluó como un antiepiléptico (de Toffol, B., et al., ESPERA study: Applicability of the new ILAE criteria for antiepileptic drug resistance of focal epilepsies in current clinical practice. Epilepsy Beh 25, 166-169 (2012)).

[0262] Donde se han descrito modelos de epilepsia de roedores resistentes a los fármacos, tal como el subgrupo de ratas de tipo silvestre seleccionadas de modelos epilépticos activados o estados posteriores (Han, S., et al., Autistic-like behaviour in Scn1a+/- mice and rescue by enhanced GABA- mediated neurotransmission. Nature 489, 385-390 (2012)), siguen estando mal caracterizados y no son adecuados para las etapas iniciales de alto rendimiento de detección de fármacos. Por el contrario, el uso de un mutantescn1Labde pez cebra con más del 75% de identidad de secuencia para una mutación del canal de sodio humano, se completó un perfil transcriptómico a gran escala de más de 44,000 sondas, demostró una progresión del desarrollo de la expresión de canales y fenotipos epilépticos descn1Lab, analizó los efectos de las terapias antiepilépticas disponibles y evaluó una biblioteca química de 320 compuestos contra convulsiones espontáneas no provocadas. Aunque esta primera detección de prueba del principio se logró con un pez por pocillo, de 6 a 12 peces por prueba y una prueba por semana, la facilidad con la que el pez cebra podría escalarse hacia arriba (especialmente en un entorno comercial) para estudiar de cientos a miles de larvas por semana hacen de este un sistema atractivo para una primera etapa rápida a gran escalain vivodel programa de descubrimiento de fármacos. La evaluación simultáneain vivode la toxicidad, una de las mayores fuentes de fallas en el traslado de compuestos de plomo del laboratorio a la clínica, es una ventaja crítica de este enfoque sobre el cultivo organotípico disponible del hipocampo, o estrategias de detecciónin silico.

[0264] Aunque los datos de descubrimiento de fármacos en modelos animales deben tratarse con cautela, el clemizol, un compuesto con antagonista H1 y propiedades inhibidoras del ARN de NS4B, es un fármaco aprobado por la FDA con un perfil toxicológico seguro que surgió de esta detección y ofrece un punto de partida interesante para futuras investigaciones. Por ejemplo, aunque recientemente se reconoció que los antihistamínicos inhiben las convulsiones inducidas en ratas recién nacidas (Yamada, K., Takizawa, F., Tamura, T. y Kanda T., The effect of antihistamines on seizures induced by increasing-current electroshocks: ketotifen, but not olopatadine, promotes the seizures in infant rats. Biol. Pharm. Bull.35, 693-697 (2012)), sin estar sujeto a ninguna teoría en particular, es probable que este no sea el mecanismo de acción aquí. Se demostró que otros cuatro antihistamínicos H1 (maleato de pimetixeno, cloropiramina HCl, naftalenosulfonato de mebhidrolina e iproheptina) no lograron suprimir el comportamiento convulsivo enmutantes scn1Lab.Además, la evidencia sugiere el potencial de los antihistamínicos H1 para modificar negativamente las convulsiones en los niños (Miyata, I., Saegusa, H. y Sakurai, M., Seizure-modifying potential of histamine H1 antagonists: a clinical observation. Pediatr. Int. 53, 706-708 (2011)) indicando que será necesario un análisis más detallado para identificar un mecanismo de acción. Dado que el clemizol también fue eficaz en una versión de pez cebra de la prueba con Metrazol, puede valer la pena realizar pruebas preclínicas adicionales en el Programa de desarrollo de fármacos anticonvulsivos patrocinado por los NIH en la Universidad de Utah. Lo más importante es que estos estudios sugieren que la detección de fármacosin vivoy el análisis experimental del pez cebra mutantescn1Labpodría resultar extremadamente valioso para comprender (y tratar) el síndrome de Dravet.

[0265] Animales. Los embriones de pez cebraScn1Lab (didy)s552)fueron un amable obsequio de Herwig Baier. El pez cebra adulto HuC:GFP fue un amable obsequio de Stephen Ekker. El pez cebra se generó y mantuvo de acuerdo con las pautas del Comité sobre el uso y cuidado de animales de la Universidad de California en San Francisco. Las larvas de pez cebra se mantuvieron en "medio embrionario" que constaba de Instant Ocean al 0.03 % (Aquarium Systems, Inc., Mentor, OH, EE. UU.) en agua desionizada que contenía azul de metileno al 0.002 % como fungicida. Las nidadas de larvas de pez cebra se criaron a partir de animales heterocigotosscn1Labque se habían cruzado nuevamente con pez cebra TL de tipo silvestre o HuC:GFP durante al menos 7 generaciones. Se usaron mutantes homocigóticos (clasificados de acuerdo con la pigmentación) y larvas hermanas de la misma edad. Aunque se desconoce el defecto genético preciso responsable del problema de la pigmentación de la piel, es interesante que se observara un gen que codifica una sobregulación de 1.5 veces de un gen que codifica al receptor 5a de melanocortina en los datos del microarreglo.

[0267] Monitorización de las convulsiones. Se describieron los procedimientos para el seguimiento de la locomoción y la electrofisiología (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activityand c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). En experimentos piloto, se utilizaron peces cebra HuC:GFP en experimentos de electrofisiología para obtener una estimación de la ubicación de los electrodos de registro. Se obtuvieron gráficos de locomoción para un pez por pocillo en un período de registro de 10 min utilizando un sistema DanioVision que ejecuta el software EthoVision XT (Noldus Information Technology; Leesburg, VA). La puntuación de convulsiones se realizó como se describe (Baraban, SC, Taylor, MR, Castro, PA y Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). Los gráficos de locomoción se analizaron para la distancia recorrida (en mm) y la velocidad media (en mm/seg). Los eventos epileptiformes se analizaron en pClamp (Molecular Devices; Sunnyvale, CA) y se definieron como desviaciones de la membrana hacia arriba o hacia abajo superiores a 2 veces el nivel de ruido de referencia y se clasificaron como interictales (100 a 300 ms de duración) o ictales (1000 a 5000 mseg de duración). La frecuencia de las ráfagas se determinó contando el número de eventos epileptiformes por minuto durante una época de registro de 10 minutos. La duración de la ráfaga se determinó midiendo el intervalo de inicio a fin para todos los eventos durante la misma época.

[0269] Los fármacos se obtuvieron de Sigma-Aldrich y se disolvieron en medio embrionario. Las soluciones madre se prepararon en medio embrionario a 1 mM y el pH se ajustó a ~7.5. Ganaxolone fue un amable obsequio de BioCrea GmbH (Radebeul, Alemania). Los compuestos para la detección de fármacos se adquirieron de MicroSource Discovery Systems, Inc. (International Drug Collection; Gaylordsville, CT) y se proporcionaron como soluciones de DMSO 10 mM. Los compuestos de prueba se disolvieron en medios embrionarios y se probaron a concentraciones entre 6.7 y 667 µM; concentración final de DMSO ~ 7%. Se eligió una concentración de detección inicial de 667 µM para estudios de comportamiento en peces que nadan libremente, ya que se encuentra en el intervalo más bajo de concentraciones de FAE reportadas previamente como efectivas contra convulsiones inducidas por PTZ (10-20 mM) en larvas de pez cebra (0.1 a 25 mM), Baraban, SC, Taylor, MR, Castro, PA y Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PLoS One 8, e54166 (2013)) y fue el uso más eficiente del pequeño volumen de solución madre (250 µL) proporcionado por MicroSource Discovery Systems, Inc. Se eligió una concentración ligeramente más alta (1 mM) para los ensayos iniciales de validación de FAE en las Figs.5 y 6 para tener en cuenta para cualquier posible complicación asociada con la difusión a través del agar. Se evaluó la toxicidad del DMSO en diluciones entre 0.01 y 100 % utilizando larvas de tipo silvestre (n = 12 peces por concentración); DMSO > 25% fue letal.

[0271] En todos los estudios de selección de fármacos, los compuestos fueron codificados y los experimentos fueron realizados por investigadores sin conocer la naturaleza del compuesto. Los registros de referencia de la actividad convulsiva se obtuvieron de mutantes bañados en medio embrionario; luego se obtuvo un segundo gráfico siguiendo un cambio de solución a un compuesto de prueba. Cada compuesto de prueba clasificado como un "golpe positivo" en el ensayo de locomoción se confirmó visualmente como vivo con base al movimiento en respuesta al tacto y al latido del corazón visible. Los peces de tipo silvestre exhiben poca o ninguna actividad de nado espontáneo durante estos períodos de registro de 10 minutos (véase la Fig.3B) y no se usaron en el ensayo de descubrimiento de fármacos.

[0272] Se describieron los procedimientos para microarreglos, PCR cuantitativa e hibridaciónin situde montaje completo (Hortopan, GA, et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci.30, 13718-13728 (2010)).

[0273] Los datos se presentan como la media y SEM, a menos que se indique lo contrario. La significancia estadística por pares se determinó con la prueba t no pareada de dos colas de Student, ANOVA o la prueba de suma de intervalos de Mann-Whitney, según corresponda, a menos que se indique lo contrario. Los resultados se consideraron significativos a P < 0.05, a menos que se indique lo contrario.

[0274] Ejemplo 2

[0275] Con base en la discusión previa y cierta actividad observada con las dosis de 100 y 300 mg/kg en la detección MES cualitativa en ratones, se procedió con pruebas cuantitativas en el modelo de ratón MES/scMET/Tox para determinar la DE50/DT50. Durante la determinación del TPE en el modelo MES, no se observó actividad a la dosis inicial de 300 mg/kg. Sin embargo, se observó actividad a la dosis de 500 mg/kg con 2/4 animales protegidos a los 0.25 min y 4/4 animales protegidos a los 30 minutos. No se observó actividad ni toxicidad (incapaz de sujetar la varilla giratoria) a ninguna otra dosis o punto de tiempo ensayado. No se observó actividad en el modelo scMET. Los datos del modelo MES muestran que existe una actividad/protección significativa con ASP469016 en este modelo de ratón con una DE50 < 400 mg/kg.

[0276] Resultados de detección de anticonvulsivantes - Cuantificación IP de ratones

[0277] ID de ASP: 469016 * ID de detección: 1. ID del patrocinador: 642 Clase de patrocinador: Patrocinador de ASP/CM Código de MC Preparación de solventes: M&P, TW

[0278] disolvente:

[0279] Peso del animal: - g

[0280] Fecha de inicio: 6 de mayo de 2014 Fecha de finalización: 9 de mayo de 2014

[0281] Referencia: 503:294,297.509:3,4.

[0283] Valor de DE50

[0285]

[0288] Respuesta biológica de DE50

[0290]

[0291]

[0293] Nota: La presencia de un asterisco (*) indica que hay múltiples códigos de comentarios.

[0295] Tiempo hasta el efecto máximo

[0297]

[0299] Nota N/F = número de animales activos o tóxicos sobre el número probado

[0300] C= Código de comentario. La presencia de un asterisco (*) indica que hay múltiples códigos de comentarios.

[0302] Comentarios a los NIH:

[0303] Las dosis de MES 350m/kg y 400m/kg y la dosis de Scmet 200m/kg se realizaron con el lote Ori y los comentarios al proveedor: todas las demás dosis se realizaron con el lote A. Material insuficiente para continuar con las pruebas.

[0305] Ejemplo 3

[0306] Se probó ASP469016 en la detección inicial T31 (MES/scMET/Tox) a 30, 100 y 300 mg/kg. Los datos para cada condición se presentan como N/F, donde N es igual al número de animales protegidos y F es igual al número de animales analizados. Para las pruebas de toxicidad (TOX), N es igual al número de animales que presentan efectos tóxicos y F es igual al número de animales sometidos a prueba. Los códigos en la columna C se refieren a los comentarios de los técnicos que realizan el experimento y se definen en la sección de comentarios si es necesario. Se anota cualquier muerte. Como se muestra en el modelo de 6 Hz (32 mA), solo 1/4 de animales se protegieron con 100 mg/kg a los 30 min. En el modelo de convulsiones inducidas por MES, solo 1/4 animales estaban protegidos con 100 y 300 mg/kg a los 30 min. No se detectó toxicidad (incapaz de agarrar la varilla giratoria) o actividad a ninguna otra dosis o punto de tiempo probado.

[0307] Resultados de detección de anticonvulsivos: identificación de ratones con MES y 6 Hz

[0308] ID de ASP: U ID de detección: 1 ID del patrocinador: 642 Clase de patrocinador: Patrocinador de 469016

[0309] ASP/CM Cód. del disolv.: MC Preparación del disolvente: M&P, TW Código de la ruta: IP Peso del - g 6 Hz 32 animal:

[0310] Fecha de inicio: 11 de febrero de 2014 Fecha de finalización: 11 de febrero de 2014 Corriente (mA): Referencia: 503:153.

[0312] Respuesta

[0313]

[0315] Ejemplo 4

[0316] El clemizol (149934-L6) se probó en CEREP BioPrint Profile, que es un panel de 139 ensayosin vitrodiferentes de unión a receptores y enzimas. Para la selección inicial de BioPrint, se utilizó una concentración de compuesto libre de 10 µM (1.0E-5 M). La unión del compuesto se calculó como un % de inhibición de la unión de un ligando marcado radiactivamente específico para cada objetivo. El efecto de inhibición de la enzima compuesta se calculó como un % de inhibición de la actividad de la enzima de control. En cada experimento, el compuesto de referencia respectivo se analizó simultáneamente con Clemizol (149934-L6), y los datos se compararon con los valores históricos determinados en CEREP. El experimento fue aceptado de acuerdo con el procedimiento operativo estándar de validación de CEREP. Se considera que los resultados que muestran una inhibición (o estimulación para ensayos realizados en condiciones basales) superior al 50% representan efectos significativos de los compuestos de prueba. Un resumen de estos resultados se muestra a continuación:

[0317] Ensayo 1.0E-05M

[0318] 5-HT<2A>(h)

(radioligando agonista) 86 %

[0319] 5-HT<2B>(h)

(radioligando agonista) 82.5 %

[0320] 5-HT<1A>(h)

(radioligando agonista) 19.5 %

[0321] 5-HT<1B>(h)

(radioligando agonista) 4.4 %

[0322] 5-HT<1D>(h)

(radioligando agonista) 22.7 %

[0323] 5-HT<3>(h)

(radioligando agonista) 9.8 %

[0324] 5-HT<4e>(h)

(radioligando agonista) -1.0 %

[0325] GABA<A1>(h)

(radioligando agonista) -9.6 %

[0326] GABA<B(1b)>(h)

(radioligando agonista) -5.9 %

[0327] BZD (central) (radioligando agonista) -19.6 %

[0328] Ensayo 1.0E-05M

[0329] CB<1>(h)

(radioligando agonista) 17.9 %

[0330] CB<2>(h)

(radioligando agonista) 28.4 %

[0331] Canal de Cl activado por GABA 24.9 %

[0332] canal de SK-Ca -0.2 %

[0333] transportador de GABA -5.9 %

[0335] Ejemplo 5

[0336] Clemizol no ejerce actividad antiepiléptica a través de un mecanismo de acción antihistamínico.32 compuestos antihistamínicos diferentes, Fig. 10, se prueban en el ensayo de pez cebrascn1Laby ninguno de los compuestos imitó la acción antiepiléptica de clemizol. Tres de los compuestos fueron tóxicos y, de acuerdo con los informes clínicos de que los antihistamínicos pueden exacerbar las convulsiones en pacientes pediátricos con epilepsia, cinco compuestos aumentaron el comportamiento de las convulsiones.

[0337] Ejemplo 6

[0338] Los solicitantes examinaron una biblioteca personalizada de Selleck que contenía 62 fármacos que actúan sobre las vías de señalización de la serotonina. Estos compuestos se seleccionaron inicialmente en el ensayo de locomoción del pez cebra y 15 compuestos se identificaron como aciertos positivos en el ensayo de locomoción de primer paso (los detalles del ensayo se pueden encontrar en Barabán et al. Nat. Com.2013 y Dinday y Barabán, eNeuro 2015) y se pueden observar en la Fig.11. Estos estudios sugieren que la modulación de la señalización de 5HT, especialmente la activación de los receptores de 5HT postsinápticos, tiene una actividad antiepiléptica potencial.

[0339] Estudios de repetición de pruebas de respuesta a la concentración en todos los compuestos 5HT identificados en el ensayo de locomoción de primer paso. Los resultados de trazodona (Compuesto de referencia) (Desryl, Oleptro) se muestran como un ejemplo representativo. Además de mostrar una fuerte inhibición del comportamiento de las convulsiones espontáneas en el ensayo de locomoción a concentraciones entre 100 y 750 µM (Fig.12A), la trazodona (Compuesto de referencia) también suprimió eficazmente la actividad del EEG en los mutantes scn1Lab (n = 15) a concentraciones entre 250 y 500 µM ( Fig.12B) y en ensayos separados con lavado del fármaco (n = 12). Los compuestos con resultados positivos incluyen sumatriptán, naratriptap, rizatriptán, zolmitriptán, urapidil, BRL-54443 (3-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-indol-5-ol), lorcaserina, buspirona, ziprasidona, TCB-2 ((bromhidrato de 4-bromo-3,6-dimetoxibenzociclobuten-1-il)metilamina), BRL-15572 (3-(4-(4-clorofenil)piperazin-1-il)-1,1-difenil-2-propanol), trazodona, BMY 7378 (8-(2-[4-(2-metoxifenil)-1-piperazinil]etil)-8-azaspiro[4.5]decano-7,9-diona), atomoxetina y venlafaxina (Compuestos de referencia).

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES

1. Clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un método de tratamiento de un trastorno epiléptico en un sujeto, en el que dicho trastorno epiléptico es el síndrome de Ohtahara, y en el que dicho sujeto:

(i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina, o

(ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, en el que opcionalmente dicho inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina.

2. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de la reivindicación 1, en el que el clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE).

3. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un método para tratar un trastorno epiléptico en un sujeto, en el que dicho trastorno epiléptico es el síndrome de Lennox-Gastaut, y

en el que dicho sujeto:

(i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina, o

(ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, opcionalmente en el que dicho inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina.

4. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo inhibe los comportamientos compulsivos en dicho sujeto; o

reduce la incidencia de convulsiones no provocadas en dicho sujeto en comparación con la ausencia de dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o reduce o previene las convulsiones mioclónicas o el estado epiléptico en dicho sujeto en comparación con la ausencia de dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE) de forma simultánea o secuencial, o es una terapia adyuvante con dicho FAE, en el que dicho FAE es acetazolamida, benzodiazepina, carbamazepina, clobazam, clonazepam, acetato de eslicarbazepina, etosuximida, etotoína, felbamato, fenfluramina, fosfenitoína, gabapentina, ganaxolona, huperzina A, lacosamida, lamotrigina, levetiracetam, nitrazepam, oxcarbazepina, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, retigabina, rufinamida, ácido valproico. ácido, valproato de sodio, estiripentol, tiagabina, topiramato, vigabatrina o zonisamida.

6. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a dicho sujeto en una dosis de 10 mg a 600 mg por kg de peso corporal como una dosis diaria.

7. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a dicho sujeto en una dosis de 0.1 mg a 1000 mg por kg de peso corporal como una dosis diaria.

8. Clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en un método de tratamiento de un trastorno epiléptico en un sujeto, en el que dicho trastorno epiléptico es encefalopatía mioclónica temprana o encefalopatía epiléptica infantil, y

en el que dicho sujeto:

(i) es resistente al tratamiento con un inhibidor de la recaptación de serotonina, o

(ii) es susceptible a efectos secundarios cuando se le administra un inhibidor de la recaptación de serotonina, opcionalmente en el que dicho inhibidor de la recaptación de serotonina es fenfluramina,

siempre que la encefalopatía epiléptica infantil no sea el síndrome de Dravet.

9. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de la reivindicación 8, en el que el clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE).

10. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de la reivindicación 8 o la reivindicación 9, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo inhibe los comportamientos compulsivos en dicho sujeto; o

reduce la incidencia de convulsiones no provocadas en dicho sujeto en comparación con la ausencia de dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o reduce o previene las convulsiones mioclónicas o el estado epiléptico en dicho sujeto en comparación con la ausencia de dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se coadministra con un fármaco antiepiléptico (FAE) de forma simultánea o secuencial, o es una terapia adyuvante con dicho FAE, en el que dicho FAE es acetazolamida, benzodiazepina, carbamazepina, clobazam, clonazepam, acetato de eslicarbazepina, etosuximida, etotoína, felbamato, fenfluramina, fosfenitoína, gabapentina, ganaxolona, huperzina A, lacosamida, lamotrigina, levetiracetam, nitrazepam, oxcarbazepina, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoína, bromuro de potasio, pregabalina, primidona, retigabina, rufinamida, ácido valproico, valproato de sodio, estiripentol, tiagabina, topiramato, vigabatrina o zonisamida.

12. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a dicho sujeto en una dosis de 10 mg a 600 mg por kg de peso corporal como una dosis diaria.

13. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que dicho clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a dicho sujeto en una dosis de 0.1 mg a 1000 mg por kg de peso corporal como una dosis diaria.

14. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, en el que dicho trastorno epiléptico es encefalopatía mioclónica temprana.

15. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, en el que dicho trastorno epiléptico es encefalopatía epiléptica infantil, siempre que dicha encefalopatía no sea el síndrome de Dravet.

16. El clemizol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que dicho sujeto tiene una enfermedad cardiovascular.