ES3062896T3 - Method for manufacturing sn-2 palmitic triacylglycerols - Google Patents

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Método de fabricación de triacilgliceroles palmíticos sn-2

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere a un proceso enzimático para preparar un ingrediente que comprende triglicéridos que tienen un residuo de ácido palmítico en la posición sn-2 que están presentes en la leche materna de mamíferos, en particular, la leche materna humana.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] Los triacilgliceroles/triglicéridos (TAG) son los principales lípidos que se encuentran en la leche humana, en aproximadamente 39 g/l, y presentan una distribución regioespecífica específica de ácidos grasos. La distribución regioespecífica de los TAG contribuye a los beneficios nutricionales de la leche humana, tal como a la absorción de calcio y ácidos grasos y sus beneficios relacionados, tales como la comodidad intestinal.

[0007] El diseño de los ingredientes de la leche de fórmula para bebés (IF, del inglésinfant formula) suele tener como objetivo la homología estructural y funcional con respecto a la composición y los beneficios de la leche humana.

[0008] En los TAG, los ácidos grasos FA esterificados en las posiciones externas del resto de glicerol se denominan FAsn-1(3) o alfa, mientras que los FA esterificados en la posición interna se denominan FA sn-2 o beta. Los FA que se encuentran en la leche se sintetizan principalmente de novo en la glándula mamaria o se incorporan a partir de los FA suministrados por la dieta. La síntesis de FA saturados está influenciada por la calidad de la dieta y se ha demostrado que los niveles de FA 6:0-14:0 en la leche aumentan cuando las mujeres lactantes consumen dietas ricas en carbohidratos, mientras que el contenido de FA de 18 carbonos que se derivan de la dieta, p. ej., 18:1 n-9 y 18:2 n-6 se reducen. Entre los FA poliinsaturados, los ácidos linoleico (LA, 18:2 n-6) y alfa-linolénico (ALA, 18:3 n-3) son esenciales porque no se sintetizan en el cuerpo humano y, por lo tanto, se obtienen principalmente a través de la dieta. Son precursores de los ácidos araquidónico (20:4 n-6) y docosahexaenoico (22:6 n-3), que están asociados con el desarrollo normal del cerebro, especialmente en las primeras etapas de la vida. El ácido palmítico (PA, 16:0) es el FA saturado más abundante en la leche humana, su nivel es relativamente constante y representa aproximadamente el 20-25 % de los FA totales de la leche independientemente del país de origen y las dietas de las madres, excepto las vegetarianas. En la leche humana, más del 70 % del contenido de ácido palmítico está esterificado en la posición sn-2 de los TAG. Esta particularidad permite una mayor eficiencia en la absorción y uso del ácido palmítico en los bebés alimentados con leche materna en comparación con los bebés alimentados con fórmula en la que el PA está esterificado preferentemente en la posiciónsn-1(3) de los TAG. Durante la digestión, la lipasa pancreática libera, preferentemente, los FA en las posicionessn-1(3) de los TAG para producir FA y 2-monoacilgliceroles. El PA esterificado en la posición sn-2 del monoacilglicerol se absorbe mayoritariamente, mientras que el PA libre puede reaccionar con el calcio para formar jabones de calcio insolubles que se absorben mal y se encuentran en las heces. Algunos estudios han observado que la formación de jabones de calcio de los FA saturados podría dar lugar a la producción de heces más duras y estreñimiento en los bebés [Giuffrida et al, Molecules.2019 Jan; 24(1): 22)]. El perfil de triglicéridos de los lípidos de la leche materna humana ha sido, además, objeto de investigación [por ejemplo en Giuffrida et al, Molecules. 2019 Jan; 24(1): 22) o H. Kallioet al./ Food Chemistry 233 (2017) 351–360] y se ha demostrado que la leche materna contiene varios triglicéridos que tienen la posición sn-2 ocupada con un residuo de ácido palmítico, por ejemplo OPO (18:1-16:0-18:1), OPL (18:1-16:0-18:2), PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1) y LaPO (12:0-16:0-18:1). Además Kallio et al [H. Kallioet al./ Food Chemistry 233 (2017) 351–360] indica la abundancia en la leche materna de triglicéridos que tienen la posición sn-2 ocupada con un residuo de ácido palmítico, siendo los TAG más abundantes en una muestra de leche finlandesa 18:1/16:0/18:1 (9,4 % de todos los TAG), 18:2/16:0/18:1 (5,4 %), 18:1/16:0/12:0 (3,5) 18:1/16:0/18:0 (3,2) y 18:1/16:0/16:0 (3,0 %), mientras que los valores correspondientes de los compuestos más abundantes en una muestra china son 18:2/16:0/18:1 (10,3 %) 18:1/16:0/18:1 (7,1 %), 18:2/16:0/18:2 (4,5 %), 18:1/16:0/18:0 (2,4), 18:1/16:0/16:0 (2,4 %) y 18:1/16:0/12:0 (2,1 %). Wang Xiaosanet al.LWT- Food Science And Technology, Academic Press, United Kingdom, vol.118, 1 de noviembre de 2019 divulga una composición de triglicéridos que comprende triglicéridos que tienen un 71,07 % del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y que comprenden 39,2 % de OPO, 30,06 % de OPL y 20,79 % de PPO.

[0009] El documento US 2009/123982 A1 divulga un proceso para producir triglicéridos que comprende someter un primer triglicérido que comprende al menos 40 % en moles de residuos de ácido oleico, tales como trioleína, basado en el total de grupos acilo en el triglicérido, a una reacción de alcohólisis con un alcohol que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, en presencia de una lipasa específica de 1,3 inmovilizada. El alcohol es preferentemente etanol.

[0010] Zuyi Let al.Enzyme And Microbial Technology, Stoneham, MA, US, vol.15, no.7, 1 de julio de 1993, páginas 601-606, divulga la alcohólisis catalizada por lipasa para concentrar los ácidos grasos poliinsaturados n-3 del aceite de hígado de bacalao. El isopropanol y el etanol fueron alcoholes particularmente útiles en la reacción enzimática y la alcohólisis catalizada por lipasa del aceite de pescado en isoalcohol ocurrió más deprisa que en el alcohol normal.

[0011] En consecuencia, existe la necesidad de un ingrediente basado en triglicéridos adaptado para preparar la fracción lipídica de una leche de fórmula para bebés que refleje tanto como sea posible el perfil de la leche materna humana de los triglicéridos que tienen un residuo de ácido palmítico en la posición sn-2. Tal ingrediente debe, de forma similar a la leche materna humana, contener TAG que comprenden 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y una proporción entre los triglicéridos más abundantes que tienen ácido palmítico en la posición sn-2 similar a la que se encuentra en la leche materna humana.

[0012] Actualmente no existe un método económicamente viable para producir triglicéridos adaptados para la leche de fórmula para bebés, que idealmente contengan más del 75 % de ácido palmítico en la posición sn-2 (también conocido como lípidos estructurados). En la actualidad, estos lípidos para leches de fórmula para bebés se producen mediante reacciones de acidólisis enzimática de una sola etapa y sin disolvente, en las que una grasa rica en ácido palmítico reacciona con el ácido oleico para producir OPO. Esta reacción está controlada por el equilibrio y para obtener un alto rendimiento de conversión es necesario utilizar un alto exceso (equivalencia) de ácido oleico (Akoh, 2017).

[0013] Para modificar la composición de ácidos grasos de los triacilgliceroles (TAG), puede usarse una lipasa para intercambiar los ácidos grasos en los TAG con ácidos grasos libres agregados a la mezcla de reacción. Por ejemplo, usando una lipasa específica de sn-1(3) en un sustrato tal como tripalmitina y al agregar ácido oleico a la mezcla de reacción, es posible producir un ingrediente OPO. El inconveniente principal con este método es que el equilibrio de la reacción se controla termodinámicamente y es necesario un exceso de ácido graso libre para empujar el equilibrio hacia el lado del producto. La adición de un exceso de ácidos grasos libres aumenta el coste del proceso (por ejemplo, a la vista de las etapas adicionales de purificación) y/o limita los rendimientos de producto posibles. Betapol® e Infat® son dos grasas comerciales que imitan la grasa de la leche humana (Loders Croklaan, AAK) y se producen ambas por acidólisis con lipasas específicas de sn-1(3) (Akoh, 2017).

[0014] Como una alternativa para producir un lípido estructurado con un contenido de ácido palmítico sn-2 alto, la bibliografía describe el enfoque enzimático de dos etapas a través de la alcohólisis de triglicéridos en el intermedio 2-monoglicérido (Schmid et al, 1999) y su consiguiente esterificación con FFA (ácidos grasos libres), que ofrece un mayor control de la reacción, pureza y rendimiento. Sin embargo, este proceso de dos etapas requiere el uso de disolventes, así como un material de partida costoso (tripalmitina pura), y las etapas de purificación intermedia.

[0015] Los disolventes son necesarios por dos razones: i) para la solubilización del sustrato de triglicéridos, es decir, tripalmitina e ii) para la dilución para limitar la inhibición de la lipasa mediante el alcohol (metanol, etanol) en la etapa de alcohólisis. La purificación intermedia se realiza mediante recristalización en disolventes orgánicos o por destilación en vacío fuerte.

[0016] Además, el contenido de FA sn-2 del material de partida de TAG para la alcohólisis tiene un impacto significativo en el perfil del producto final de TAG para maximizar el palmitato sn-2 en el producto final. Esta es la razón por la cual se usa tripalmitina pura en el proceso.

[0017] Por lo tanto, para que un proceso enzimático de 2 etapas sea económicamente viable y aplicable industrialmente, debe tenerse en cuenta el coste y la composición del material de partida. Para eso, el uso del disolvente debe reducirse o eliminarse y la purificación intermedia debe ser simplificada, mientras se mantiene una alta pureza y alta selectividad del ingrediente OPO obtenido, por ejemplo, un mínimo de 50 % de pureza total de OPO y en general un mínimo de 70 % del total de PA en la posición sn-2.

[0018] En consecuencia, también existe la necesidad de proporcionar un proceso que sea económicamente viable e industrialmente aplicable, para la preparación de un ingrediente que contenga TAG que comprendan el 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y una proporción entre los triglicéridos más abundantes que tienen ácido palmítico en la posición sn-2 similar a la que se encuentra en la leche materna humana.

[0019] Sumario de la invención

[0020] La presente invención resuelve el problema mencionado proporcionando un método enzimático simplificado, sin disolvente y en dos etapas para producir un ingrediente de triglicérido con un contenido general de ácido palmítico en la posición sn-2 superior al 70 %, por ejemplo el 75 % y una proporción entre los triglicéridos más abundantes que tienen ácido palmítico en la posición sn-2 similar a la que se encuentra en la leche materna humana. Este concepto simplificado de proceso enzimático ofrece una vía económicamente viable hacia una producción de ingredientes de triglicéridos.

[0021] En un aspecto, la presente invención proporciona un ingrediente de triglicérido y un proceso para la preparación del ingrediente de triglicérido como se describe en las reivindicaciones adjuntas.

[0022] Breve descripción de los dibujos

[0023] Las características y ventajas adicionales de la presente invención serán evidentes a partir de la descripción de las realizaciones preferidas actualmente, las cuales se describen más adelante con referencia a los dibujos, en los cuales: La Fig. 1 muestra una representación esquemática del proceso general según una realización de la presente invención.

[0024] La Fig.2 muestra los resultados del Ejemplo 1 y describe la conversión de la 2-monopalmitina a lo largo del tiempo de reacción para la reacción de alcohólisis utilizando las lipasas Lipozyme 435 y TL IM con diferentes alcoholes. La conversión se calcula como mol de 2-monopalmitina/mol de tripalmitina inicial.

[0025] La Fig.3 muestra el perfil de conversión para la isopropanólisis de tripalmitina catalizada por Lipozyme TL IM como se describe en el Ejemplo 1.

[0026] La Fig.4 muestra cada especie cuantificada en la mezcla de reacción del Ejemplo 2 como un porcentaje del total de compuestos cuantificados que contienen ácido palmítico.

[0027] La Fig. 5 muestra el contenido de producto de alcohólisis en comparación con el precipitado a partir del fraccionamiento de la misma mezcla (Ejemplo 4)

[0028] Descripción detallada de la invención

[0029] Definiciones

[0030] En el contexto de la presente invención, la expresión “leche materna de mamífero” indica la leche producida durante la lactancia por mamíferos, por ejemplo, seres humanos, perros, gatos.

[0031] En el contexto de la presente invención, los términos “OPO” o “18:1-16:0-18:1” se refieren a la 1,3-Oleo-2-palmitina y/o al 2-(palmitoiloxi)propano-1,3-diil dioleato y/o al (2-(palmitoiloxi)-1,3-propanodiil (9Z,9'Z)bis(-9-octadecenoato) (número CAS: 1716-07-0)

[0032] En el contexto de la presente invención, el término “POO” se refiere tanto al 3-(palmitoiloxi)-1,2-propanodiilo (9Z,9'Z)bis(-9-octadecenoato), (OOP, número CAS: 14960-35-1) y/o 1-(palmitoiloxi)-2,3-propanodiil (9Z,9'Z)bis(-9-octadecenoato), (POO, número CAS: 14863-26-4). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “POO”, esto incluye, además, cantidades de OOP presentes en el ingrediente.

[0033] En el contexto de la presente invención, los términos “OPL”, “LPO” o “18:2-16:0-18:1” se refieren a la 1-Oleo-2-palmito-3-linoleína (número CAS: 2534-97-6) y/o 3-Oleo-2-palmito-1-linoleína. Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPL”, “LPO” o “18:2-16:0-18:1”, se incluyen cantidades de 1-Oleo-2-palmito-3-linoleína y/o 3-Oleo-2-palmito-1-linoleína.

[0034] En el contexto de la presente invención, los términos “OPP” o “PPO” o “16:0-16:0-18:1” se refieren tanto a la 1-Oleo-2,3-dipalmitina como a la 3-Oleo-1,2-dipalmitina (número CAS: 1867-91-0). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPP” o “PPO” o “16:0-16:0-18:1”, se incluyen cantidades de 1-Oleo-2,3-dipalmitina y/o 3-Oleo-1,2-dipalmitina.

[0035] En el contexto de la presente invención, los términos “OPS”, “SPO” o “18:0-16:0-18:1” se refieren tanto a la 2-palmito-3-estearo-1-oleína como a la 2-palmito-1-estearo-3-oleína (número CAS: 35984-52-2). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPS”, “SPO” o “18:0-16:0-18:1”, se incluyen cantidades de 2-palmito-3-estearo-1-oleína y/o 2-palmito-1-estearo-3-oleína.

[0036] En el contexto de la presente invención, los términos “OPLa”, “LaPO” o “12:0-16:0-18:1” se refieren tanto a la 1-oleo-2-palmito-3-laurina como a la 3-oleo-2-palmito-1-laurina (número CAS: 120932-38-9). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPLa”, “LaPO” o “12:0-16:0-18:1”, se incluyen cantidades de 1-oleo-2-palmito-3-laurina y/o 3-Oleo-2-palmito-1-laurina.

[0037] En el contexto de la presente invención, los términos “OPM”, “MPO” o “(18:1-16:0-14:0)” se refieren a la 1-oleo-2-palmito-3-miristina y/o a la 3-oleo-2-palmito-1-miristina (número CAS: 110585-93-8). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPM”, “MPO” o “(18:1-16:0-14:0)”, se incluyen cantidades de 1-oleo-2-palmito-3-miristina y/o 3-Oleo-2-palmito-1-miristina.

[0038] En el contexto de la presente invención, los términos “OPPa”, “PaPO” o “(16:1-16:0-18:1)” se refieren a la 1-oleo-2-palmito-3-palmitoleína y/o a la 3-oleo-2-palmito-1-palmitoleína (número CAS: 114356-98-8). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “OPPa”, “PaPO” o “(16:1-16:0-18:1)”, se incluyen cantidades de 1-oleo-2-palmito-3-palmitoleína y/o 3-Oleo-2-palmito-1-palmitoleína.

[0039] En el contexto de la presente invención, los términos “LLP”, “PPL” o “(16:0-16:0-18:2)” se refieren a la 1,2-Dipalmito-3-linoleína y/o 2,3-Dipalmito-1-linoleína (número CAS: 2535-35-5). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “LPP”, “PPL” o “(16:0-16:0-18:2)”, se incluyen cantidades de 1,2-Dipalmito-3-linoleína y/o 2,3-Dipalmito-1-linoleína.

[0040] En el contexto de la presente invención, el término “LPL” o “(18:2-16:0-18:2)” se refieren a la 2-Palmito-1,3-dilinoleína (número CAS: 2190-16-1).

[0041] En el contexto de la presente invención, los términos “LPPa”, “PaPL” o “(16:1-16:0-18:2)” se refieren a la 3-linoleo-2-palmito-1-palmitoleína y/o a la 1-linoleo-2-palmito-3-palmitoleína (número CAS: 907216-76-6). Cabe señalar que cuando se hace referencia a cantidades de “LPPa”, “PaPL” o “(16:1-16:0-18:2)”, se incluyen cantidades de 3-linoleo-2-palmito-1-palmitoleína y/o 1-linoleo-2-palmito-3-palmitoleína.

[0042] En el contexto de la presente invención, la expresión “ingrediente OPO” o “ingrediente enriquecido con OPO” o “ingrediente de 1,3-oleína-2-palmitina” o simplemente “OPO” identifica un ingrediente comestible que comprende 1,3-oleína-2-palmitina (OPO) con una pureza superior a 50 g/100 g del ingrediente. En una realización de la presente invención, el ingrediente OPO preparado de acuerdo con el proceso también tiene un contenido de ácido palmítico en la posición sn-2 que es igual o superior al 70 % del contenido palmítico total.

[0043] En el contexto de la presente invención, el término “TAG” significa triacilgliceroles o triglicéridos.

[0044] En el contexto de la presente invención, la expresión “ingrediente TAG” o “ingrediente TAG palmítico sn-2” o “ingrediente enriquecido con TAG” o “ingrediente de triglicérido” o “composición de triglicéridos sintéticos” identifica una composición comestible de origen sintético que comprende triglicéridos, teniendo tal ingrediente un contenido de ácido palmítico en la posición sn-2 que es igual o superior al 70 % del contenido palmítico total y que tiene un perfil personalizado de los triglicéridos que tienen un residuo de ácido palmítico en la posición sn-2.

[0045] En el contexto de la presente invención, la expresión “mezcla de grasas de triglicéridos” indica una mezcla de triglicéridos destinada a usar en leches de fórmula para bebés y que se obtiene al mezclar el ingrediente de triglicérido de la presente invención con una fracción de aceite vegetal que contiene cantidades limitadas de ácido palmítico. En el contexto de la presente invención, la expresión “triglicéridos enriquecidos en ácido palmítico en la posición sn-2” significa un ingrediente de triglicéridos y/o triglicérido, en donde una proporción superior al 70 % de las posiciones sn-2 en la cadena principal de los triglicéridos está ocupada por residuos de ácido palmítico. En una realización, los triglicéridos enriquecidos en ácido palmítico en la posición sn-2 tienen una proporción de posiciones sn-2 en la cadena principal de triglicérido ocupada por residuos de ácido palmítico que es superior al 80 %. En una realización, los triglicéridos enriquecidos en ácido palmítico en la posición sn-2 son una fracción de aceite de palma enriquecida en triglicéridos que contienen ácido palmítico, tal como por ejemplo CristalGreen® (Bunge Loders Croklaan) que tiene un contenido de 60 % p/p de tripalmitina y en donde la proporción de posiciones sn-2 en la cadena principal de los triglicéridos ocupada por residuos de ácido palmítico es superior al 80 %.

[0046] En el contexto de la presente invención, el término “alcohólisis” significa la reacción de transesterificación de ácidos grasos presentes en un triglicérido con un alcohol (metanol, etanol, butanol…) por la acción de una enzima selectiva. Esta reacción conduce a la formación de monoglicéridos y ésteres de ácidos grasos del alcohol respectivo.

[0047] En el contexto de la presente invención, el término “lipasa” o “lipasa sn-1,3” significa una enzima hidrolítica que actúa sobre enlaces éster (EC 3.1) y pertenece a la clase de hidrolasas de éster carboxílico (EC 3.1.1), y más específicamente posee una regioselectividad alta para hidrolizar el enlace éster sn-1 y sn-3 en una cadena principal de triglicéridos. Las lipasas con alta selectividad 1,3 pueden proceder, por ejemplo, deCandidata antarctica(lipasa B),Thermomyces lanuginosus,Rhizomucor miehei,R. oryza,Rhizopus delemar, etc.

[0048] En el contexto de la presente invención, el término “desodorización” se refiere a un proceso de destilación por vapor en el que se inyecta vapor en un aceite en condiciones de alta temperatura (normalmente >200 °C) y alto vacío (normalmente <20 mbar) para eliminar componentes volátiles como ácidos grasos libres (FFA), ésteres de ácidos grasos, mono y diglicéridos y obtener un aceite inodoro compuesto de TAG.

[0049] En el contexto de la presente invención, el término “fraccionamiento” significa un proceso de separación en el cual una cierta cantidad de una mezcla (sólido, líquido, suspensión) se separa en fracciones durante una transición de fase. Estas fracciones varían en composición, lo que generalmente permite el enriquecimiento de una especie en una de las fracciones y su posterior separación y/o purificación.

[0050] En el contexto de la presente invención, la expresión “precipitación selectiva” o “cristalización selectiva” indica una técnica de separación y/o purificación por medio de la cual la creación de uno o varios precipitados específicos (sólidos) se produce a partir de una solución que contiene otros precipitados potenciales por medio de la adaptación de la temperatura de la precipitación. Por ejemplo, las especies que tienen un punto de fusión por encima de la temperatura del proceso de precipitación no formarán un precipitado en esas condiciones. En una realización de la presente invención, la precipitación selectiva da como resultado la cristalización del producto deseado.

[0051] En el contexto de la presente invención, la expresión “forma inmovilizada” significa que la enzima (es decir, lipasa) está unida de manera covalente o no covalente (p. ej., adsorbida) a un material portador sólido. Ejemplos no limitantes de portadores adecuados son: soportes hidrófobos macroporosos para la unión covalente hechos de resinas de metacrilato con, por ejemplo, grupos epoxi, butilo o amino, junto con una molécula enlazadora adecuada (p. ej., glutaraldehído); para la inmovilización no covalente a través de interacciones hidrófobas mediante portadores macroporosos fabricados de, p. ej., adsorbente poliestirénico, metacrilato de octadecilo, polipropileno, gel de sílice no comprimible; para la adsorción no covalente mediante resinas de intercambio iónico de interacciones iónicas, p. ej., resina de intercambio iónico poliestirénico o sílice.

[0052] Ejemplos no limitantes de lipasa sn-1,3 en forma inmovilizada son: lipasa deThermomyces lanuginosisadsorbida en sílice (p. ej., Lipozyme TL IM, Novozymes), la lipasa B deCandida antarcticaadsorbida en un copolímero de metacrilato/divinilbenceno (p. ej., Lipozyme 435, Novozymes), la lipasa deRhizomucor mieheifijada mediante intercambio iónico en un polímero de estireno/DVB (p. ej., Novozym® 40086, Novozymes) o mediante interacción hidrófoba en polipropileno macroporoso (Accurel EP 100).

[0053] Composición de triglicéridos sintéticos (ingrediente de triglicérido)

[0054] Los inventores de la presente invención han investigado, además, el perfil de triglicéridos de los lípidos de la leche materna humana, analizaron muestras de leche materna humana de mujeres lactantes europeas y chinas y encontraron los siguientes resultados (ver, además, el Ejemplo A en la Sección experimental):

[0057]

[0059] Basándose en el perfil descubierto de los triglicéridos que tienen ácido palmítico en sn-2, los inventores de la presente solicitud identificaron la necesidad de un ingrediente de triglicérido que comprenda TAG que tenga el 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y que el triglicérido que tenga ácido palmítico en la posición sn-2 esté presente en una proporción lo más cercana posible a la proporción en la que se ha descubierto que está presente en la leche materna humana y que se ha descrito anteriormente.

[0060] Por lo tanto, en un aspecto, la presente invención proporciona un ingrediente de triglicérido que comprende TAG sintéticos que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en donde la relación entre los triglicéridos OPO y OPL varía de 1:0,3 a 1:1,5, que también comprende OPM (18:1-16:0-14:0) y también comprende adicionalmente al menos un triglicérido seleccionado del grupo que consiste en: PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1), LaPO (12:0-16:0-18:1), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando está presente varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

[0061] En una realización de la presente invención, se proporciona un ingrediente de triglicérido que comprende TAG sintéticos que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2, que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en una relación entre los triglicéridos OPO y OPL que varía de 1:0,3 a 1:1,5, que también comprende triglicéridos PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1) y LaPO (12:0-16:0-18:1), OPM (18:1-16:0-14:0), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2) en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

[0062] En otra realización, se proporciona un ingrediente de triglicérido que comprende TAG que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2, que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en una relación entre los triglicéridos OPO y OPL que varía de 1:0,3 a 1:1,5 y también comprende adicionalmente también triglicéridos PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1) y LaPO (12:0-16:0-18:1), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO y de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO.

[0063] En una realización de la presente invención, se proporciona un ingrediente de triglicérido que comprende TAG que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2, que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en una relación entre los triglicéridos OPO y OPL que varía de 1:0,3 a 1:1,5 y también comprende adicionalmente al menos un triglicérido seleccionado del grupo que consiste en: PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1), LaPO (12:0-16:0-18:1), OPM (18:1-16:0-14:0), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

[0064] En una realización de la presente invención, se proporciona un ingrediente de triglicérido que comprende TAG que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2, que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en una relación entre los triglicéridos OPO y OPL que varía de 1:0,3 a 1:1,5 y también comprende adicionalmente triglicéridos PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1) y LaPO (12:0-16:0-18:1) OPM (18:1-16:0-14:0), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

[0065] En una realización de la presente invención, el ingrediente de triglicérido comprende una cantidad de OPO que varía de 20 a 25 %, una cantidad de OPL que varía de 20 a 25 %, una cantidad de PPO que varía de 7 a 15 %, una cantidad de SPO que varía de 1 a 5 % y una cantidad de LaPO que varía de 1 a 5 %.

[0066] En una realización de la presente invención, el ingrediente de triglicérido comprende una cantidad de OPO que varía de 20 a 25 %, una cantidad de OPL que varía de 10 a 25 %, una cantidad de PPO que varía de 7 a 15 %, una cantidad de SPO que varía de 1 a 5 %, una cantidad de LaPO que varía de 1 a 5 %, una cantidad de OPM que varía de 1 % a 5 %, una cantidad de OPPa que varía de 1 a 5 %, y una cantidad de LPP que varía de 0,5 a 7 %, una cantidad de LPL que varía de 0 a 7 % y una cantidad de LPPa que varía de 0 a 5 %.

[0067] En una realización de la presente invención, el ingrediente de triglicérido comprende triglicéridos que tienen ácido palmítico en la posición sn2 en una relación similar a la observada en muestras de leche materna humana china. En tal realización, el ingrediente de triglicérido de acuerdo con la presente invención comprende una cantidad de OPO que varía del 20 al 25 %, una cantidad de OPL que varía del 10 al 25 %, una cantidad de PPO que varía del 7 al 15 %, una cantidad de SPO que varía del 1 al 5 %, una cantidad de OPLa que varía del 1 al 5 %, una cantidad de OPM que varía del 1 % al 5 %, una cantidad de OPPa que varía del 1 al 5 %, y una cantidad de LPP que varía del 0,5 al 7 %, una cantidad de LPL que varía del 2 al 7 % y una cantidad de LPPa que varía del 0 al 5 %.

[0068] En otra realización de la presente invención, el ingrediente de triglicérido de la presente invención comprende triglicéridos que tienen ácido palmítico en la posición sn-2 en una relación similar a la observada en muestras de leche materna humana europea.

[0069] Uso del ingrediente de triglicérido

[0070] En un aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de un ingrediente de triglicérido de acuerdo con la presente invención para preparar una mezcla de grasas que se incorporará en productos de leche de fórmula para bebés donde representaría al menos una parte de la fracción lipídica de la leche de fórmula para bebés.

[0071] El ingrediente de triglicérido de acuerdo con la presente invención comprende TAG que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y comprende TAG específicos que tienen ácido palmítico en la posición sn-2 en proporciones que se parecen a las que existen en las muestras de leche humana. En virtud de su naturaleza, el ingrediente de TAG sn-2 de la presente invención puede mezclarse convenientemente con cualquier aceite vegetal (que contiene un mínimo de residuos de ácido palmítico) y adecuado para usarse en la leche de fórmula para bebés para permitir la preparación de una mezcla de grasas para usar en leches de fórmula para bebés que se asemejarían al perfil de TAG que tiene ácido palmítico en la posición sn-2 presente en la leche materna humana. Mezcla de grasas de triglicéridos

[0072] En consecuencia, en un aspecto, la presente invención también proporciona una mezcla de grasas de triglicéridos que comprende TAG sintéticos que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2) en donde la relación entre los triglicéridos OPO y OPL varía de 1:0,3 a 1:1,5, que también comprende OPM (18:1-16:0-14:0) y también comprende adicionalmente al menos un triglicérido seleccionado del grupo que consiste en: PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1), LaPO (12:0-16:0-18:1), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de dichos triglicéridos cuando están presentes varían de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

[0073] En una realización de la presente invención, la mezcla de grasas de triglicéridos comprende una cantidad de OPO que varía de 10 a 15 %, una cantidad de OPL que varía de 10 a 15 %, una cantidad de OPP que varía de 4 a 9 %, una cantidad de OPS que varía de 0,5 a 3 % y una cantidad de OPLa que varía de 0,5 a 3 %.

[0074] En una realización de la presente invención, la mezcla de grasas de triglicéridos comprende una cantidad de OPO que varía de 10 a 15 %, una cantidad de OPL que varía de 5 a 15 %, una cantidad de OPP que varía de 4 a 9 %, una cantidad de OPS que varía de 0,5 a 3 % y una cantidad de OPLa que varía de 0,5 a 3 %, una cantidad de OPM que varía de 0,5 % a 3 %, una cantidad de OPPa que varía de 0,5 a 3 %, y una cantidad de LPP que varía de 0,5 a 5 %, una cantidad de LPL que varía de 0 a 5 % y una cantidad de LPPa que varía de 0 a 5 %.

[0075] En una realización de la presente invención, la mezcla de grasas de triglicéridos comprende triglicéridos que tienen ácido palmítico en la posición sn2 en una relación similar a la observada en muestras de leche materna humana china. En tal realización, la mezcla de grasas de triglicéridos de acuerdo con la presente invención comprende una cantidad de OPO que varía de 10 a 15 %, una cantidad de OPL que varía de 10 a 15 %, una cantidad de OPP que varía de 4 a 9 %, una cantidad de OPS que varía de 0,5 a 3 %, y una cantidad de OPLa que varía de 0,5 a 3 %, una cantidad de OPM que varía de 0,5 % a 3 %, una cantidad de OPPa que varía de 0,5 a 3 %, y cantidad de LPP que varía de 0,5 a 5 %, una cantidad de LPL que varía de 0 a 5 % y una cantidad de LPPa que varía de 0 a 5 %.

[0076] En otra realización de la presente invención, la mezcla de grasas de triglicéridos de la presente invención comprende triglicéridos que tienen ácido palmítico en la posición sn2 en una relación similar a la observada en muestras de leche materna humana europea.

[0077] Proceso para la preparación del ingrediente de triglicérido (ingrediente de TAG sn-2)

[0078] Alcohólisis [Etapa a)]

[0079] Un desafío con la alcohólisis selectiva de tripalmitina en 2-monopalmitina es el punto de fusión alto de la tripalmitina (65 °C). Dado que la alcohólisis química es no específica, esta no puede, por lo tanto, usarse para producir 2-monopalmitina. Por el contrario, la alcohólisis enzimática puede conducir a una alcohólisis altamente selectiva en las posiciones sn-1,3, lo que hace posible la síntesis de alta pureza de 2-monopalmitina. El problema de usar enzimas es la termoestabilidad relativamente baja de la mayoría de las enzimas comerciales y da como resultado la inactivación de la lipasa cuando las reacciones se realizan a más de 50 °C. Para minimizar la inactivación de la lipasa y lograr la totalidad de la solubilización del sustrato (p. ej., tripalmitina) a temperaturas más bajas (<50 °C), se usan normalmente disolventes orgánicos, más comúnmente acetona, n-hexano o MTBE. Sin embargo, el uso de disolventes para la aplicación industrial aumenta la complejidad y las operaciones del proceso (eliminación y manipulación del disolvente, seguridad) y, por lo tanto, aumentan los costes de proceso (coste del disolvente, volúmenes de reacción más grandes y, por lo tanto, equipos/reactores), además de representar una carga ambiental (reciclaje del disolvente).

[0080] En el contexto de la presente invención, el cambio de los alcoholes usados comúnmente, metanol y etanol, a n-butanol suministrado a alta relación molar (15 equivalentes) ha permitido, sorprendentemente, que el sustrato se solubilice a 50 °C sin desactivar la enzima, lo que produce 2-monopalmitina con 90 % de pureza.

[0081] En una realización de la presente invención, la alcohólisis de la etapa a) se realiza con n-butanol, n-pentanol, isopropanol o mezclas de estos.

[0082] En una realización de la presente invención, la alcohólisis de la etapa a) se realiza con un exceso de n-butanol. Usando n-butanol en la etapa a) (alcohólisis), la reacción continuó sin ningún disolvente a 50 °C. El butanol actúa como sustrato y agente de solubilización para los triglicéridos, lo que permite, de esta manera, una reacción sin disolvente, un rendimiento de conversión alto (exceso) y la actividad de la lipasa.

[0083] En una realización de la presente invención, el material de partida para la etapa a) es una mezcla de triglicéridos enriquecida en ácido palmítico en la posición sn-2, tal como, por ejemplo, CristalGreen® (que es un producto comercializado por Bunge Loders Croklaan).

[0084] En la realización de la presente invención, la etapa a) se realiza a una temperatura que varía de 40 a 70 grados C, por ejemplo, a una temperatura que varía de 45 a 55 grados C.

[0085] En una realización, la etapa a) se realiza en presencia de una lipasa sn-1,3 seleccionada en el grupo que consiste en: lipasa deThermomyces lanuginosisadsorbida en sílice (p. ej., Lipozyme TL IM, Novozymes), la lipasa B deCandida antarcticaadsorbida en un copolímero de metacrilato/divinilbenceno (p. ej., Lipozyme 435, Novozymes) y la lipasa deRhizomucor mieheifijada mediante intercambio iónico en un polímero de estireno/DVB (p. ej., Novozym® 40086, Novozymes) o mediante interacción hidrófoba en polipropileno macroporoso (Accurel EP 100).

[0086] En otra realización, la etapa a) se realiza en presencia de una lipasa sn-1,3, que es una lipasa deThermomyces lanuginosisque se adsorbe en sílice (p. ej., Lipozyme TL IM, Novozymes).

[0087] En la etapa a), la preparación de enzima inmovilizada permite dispersar adecuadamente la lipasa en medios no acuosos, tales como grasas y disolventes, y permite la recuperación y reutilización al hacer el proceso más rentable. Por consiguiente, la etapa de la alcohólisis como se describe en la presente invención proporciona varias ventajas al proceso de acuerdo con la presente invención, por ejemplo:

[0088] - la reacción sin disolvente permite volúmenes de reactor más pequeños (productividad volumétrica aumentada), costes de proceso reducidos y omite aspectos de manejo de la seguridad, eliminación y reciclado del disolvente (la eliminación de disolvente es especialmente importante para un ingrediente dirigido a la nutrición infantil por razones de calidad y seguridad);

[0089] - las lipasas inmovilizadas, tales como Lipozyme TL IM (Novozymes), son las lipasas comercializadas a escala industrial.

[0090] Purificación intermedia [etapa b)]

[0091] El proceso enzimático de dos etapas de acuerdo con la presente invención es más complejo que los métodos convencionales para producir OPO, p. ej., acidólisis de una sola etapa, sin embargo, el aumento moderado en la complejidad permite mejorar significativamente la calidad en el producto final, es decir, mayor contenido de palmitato sn-2, lo que hace que sea más atractivo para su uso en IF.

[0092] Un proceso de dos etapas requiere la purificación intermedia y es importante que el aumento de calidad no se vea contrarrestado por el aumento del coste derivado potencialmente de la purificación intermedia [etapa b)].

[0093] Las tecnologías actuales para la purificación intermedia incluyen destilación molecular, cristalización por disolvente y cromatografía, pero todos estos métodos son demasiado costosos para la aplicación selectiva y una mejora/simplificación los beneficiaría. Por ejemplo, los métodos de fraccionamiento por disolvente requieren, normalmente, el uso del disolvente y temperaturas bajas (<-10 °C).

[0094] De acuerdo con el proceso de la presente invención, la etapa b) de purificación intermedia puede realizarse mediante la cristalización selectiva de 2-monopalmitina. El producto secundario que se va a eliminar en esta etapa de purificación es el producto de la reacción del alcohol (metanol, etanol, butanol…) con los ácidos grasos presentes en la posición 1,3 (principalmente ácido palmítico). Los ésteres resultantes tienen diferentes puntos de fusión dependiendo del alcohol usado. En particular, el palmitato de butilo tiene un punto de fusión menor (17 °C) que el de los ésteres metílicos y etílicos del ácido palmítico (30 °C y 24 °C respectivamente), lo que proporciona una mayor diferencia en el punto de fusión entre 2-monopalmitina (60 °C) y los productos secundarios que se van a eliminar. Esta mayor diferencia es beneficiosa para el proceso de separación. Tales productos secundarios que incluyen el exceso de alcohol usado en la alcohólisis pueden eliminarse eficazmente después de la etapa de alcohólisis a) mediante el fraccionamiento del producto bruto a temperaturas que varían de 0 a 10 °C, en donde la 2-monopalmitina experimenta una cristalización selectiva y los productos secundarios permanecen en el estado líquido y pueden filtrarse, por ejemplo.

[0095] En consecuencia, las temperaturas de fraccionamiento superiores a 0 °C de los productos bruto y sin adición de disolventes permiten una etapa de purificación simple y barata de la 2-monopalmitina.

[0096] Usando el fraccionamiento sin disolvente, la cristalización selectiva del producto objetivo (2-monopalmitina) puede realizarse a una temperatura más alta y no hay necesidad de realizar una etapa para eliminar el disolvente por destilación.

[0097] En una realización de la presente invención, la etapa b) se realiza disminuyendo la temperatura de la mezcla de reacción a una temperatura que varía de 0 a 10 grados C para el fraccionamiento mediante precipitación selectiva de 2-monopalmitina y filtrando el sobrenadante.

[0098] Esterificación sin disolvente [etapa c)]

[0099] La esterificación enzimática sin disolvente de 2-monopalmitina para formar OPO se ha descrito en la bibliografía con anterioridad. En el estudioHighly selective synthesis of 1,3-Oleoyl-2-Palmitoylglycerol by Lipase Catalysis(Schmid et al, 1999) se sintetizó OPO, usando lipasas específicas de sn-1,3 a partir deRhizomucor mieheiyRhizopus delemar, inmovilizadas en diferentes materiales portadores. La reacción se realizó a 50 °C con 3 equivalentes de ácido oleico y 2-monopalmitina altamente purificada (mediante cristalización por disolvente a -25 °C). Se usó 10-25 % de lipasa inmovilizada basado en el peso de 2-monopalmitina y los autores señalan que se obtuvo 78 % de OPO con 96 % de ácido palmítico sn-2 usando lipasa deRhizopus delemar, inmovilizada en polipropileno macroporoso (EP 100) después de una reacción de 16 horas. Sin embargo, el mismo estudio reveló la estabilidad frente a temperatura limitada (a 52 °C) de tal lipasa deR. delemarinmovilizada y, además, se necesitó mucho tiempo de reacción para alcanzar concentraciones altas de OPO durante la esterificación de la 2-monopalmitina.

[0100] En pruebas de selección previa, se usó 2-monopalmitina pura como material de partida y se evaluaron tres lipasas inmovilizadas; Lipozyme 435, Lipozyme TL IM, Novozymes 40145 NS. Las lipasas más eficaces para formar TAG fueron Novozymes, 40145 y TL IM.

[0101] Se eligió Lipozyme TL IM, ya que se demostró ser la más eficaz en la reacción de butanólisis.

[0102] Adicionalmente, al usar la misma lipasa en ambas etapas de reacción el proceso es más rentable y permite la reutilización de la misma preparación de enzima inmovilizada para las etapas de proceso a) y c). El proceso completo de CristalGreen® a ingrediente de TAG sn-2 podría realizarse usando solamente una lipasa: Lipozyme TL IM.

[0103] En la etapa c), la preparación de enzima inmovilizada permite dispersar adecuadamente la lipasa en medios no acuosos, tales como grasas y disolventes, y permite la recuperación y reutilización al hacer el proceso más rentable. En una realización de la presente invención, la etapa c) se realiza a una temperatura que varía de 35 a 60 grados C, por ejemplo, a una temperatura que varía de 40 a 50 grados C.

[0104] En una realización, la lipasa inmovilizada de la etapa c) es una lipasa derivada deThermomyces lanuginosisadsorbida sobre sílice (p. ej., Lipozyme TL IM de Novozymes).

[0105] En una realización, la etapa c) se realiza en presencia de un total de 2 a 3 equivalentes (relación molar) de una mezcla de ácidos grasos.

[0106] En una realización, la mezcla de ácidos grasos usada en la etapa c) para realizar la esterificación comprende 50-70 % de ácido oleico, 25-30 % de ácido linoleico, 1-3 % de ácido mirístico, 1-3 % de ácido palmitoleico, 2-4 % de ácido láurico y 2-4 % de ácido esteárico, en donde tales cantidades son con respecto al contenido total de la mezcla de ácidos grasos.

[0107] Desodorización [etapa d)]

[0108] La desodorización de la mezcla final del producto TAG que se deriva de la etapa c) de acuerdo con el proceso de la presente invención puede realizarse como una etapa opcional de purificación para eliminar el exceso de ácidos grasos libres, los ésteres alquílicos de ácidos grasos restantes y los mono y diglicéridos. Normalmente, la desodorización de la mezcla y/o el producto que debe purificarse puede realizarse a una temperatura superior a >200 °C y en condiciones de vacío de presión menor de 20 mbar.

[0109] Sección experimental

[0110] Ejemplo A

[0111] Análisis de muestras de leche materna humana de mujeres lactantes europeas y chinas

[0112] Se analizó el perfil de TAG en las muestras de leche materna humana de mujeres europeas y chinas. El método Röse-Gottlieb (ISO 1211) se usó como el método de referencia para la cuantificación de lípidos totales. Para disminuir el tamaño de la muestra necesario para el análisis, el método se modificó ligeramente: el tamaño de la muestra se disminuye a 100 µl y los volúmenes de disolvente se reducen para mantener las mismas proporciones de muestra/disolvente del método de referencia. Como solución de patrón interno, se usó 0,4 µmol l<-1>de 1,3(d5)-dipalmitoil-2-estearoil-glicerol. El análisis se realizó como se describió anteriormente [Nagy et al 2012,J. Lipid Res.

[0113] 2013, 54, 290-305]. En resumen, se logró la separación por cromatografía con un cromatógrafo de líquidos equipado con una columna Agilent Poroshell 120 EC-C18 (150 x 2,1 (d.i.) mm, 2,7 µm: Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Estados Unidos). El disolvente A consistió enn-hexano e isopropanol (1:1, v:v). El disolvente B fue 10 mmol l<-1>de formiato de amonio, solubilizado en metanol. Se usó un espectrómetro de masas híbrido LTQ-Orbitrap Elite (ThermoFisher Scientific) para identificar los regioisómeros de TAG. Se hizo funcionar el Orbitrap a una resolución de 30000 en una relación de masa a carga (m/z) entre 200 y 1500. Los acontecimientos dependientes de los datos se produjeron de acuerdo con una lista de inclusión que incluía las masas exactas de los TAG amoniacados, con la aplicación de criterios de ancho de masa original de ± 5 ppm. La lista de inclusión para la adquisición dependiente de datos se creó mediante el cálculo de la masa exacta de los TAG obtenida por la combinación del FA más abundante en la leche humana. Se utilizó la marca de masa dem/z4,95540 entre los aductos amoniacados y sodados, pero solo se fragmentaron los aductos amoniacados. Los picos en el espectro de iones del producto TAG permitieron las determinaciones de residuos de FA y su intensidad permitió las determinaciones de posición regioisomérica de FA de acuerdo con el modelo matemático descrito anteriormente.

[0114] Los resultados del análisis se presentan en la Tabla A a continuación y muestran el perfil completo de TAG de las muestras.

[0117]

[0119] Ejemplo 1

[0120] Producción de 2-monopalmitina a través de alcohólisis sin disolvente en diferentes condiciones

[0121] Material y métodos

[0122] La alcohólisis se realizó en tripalmitina pura en condiciones sin disolvente usando isopropanol, n-butanol y/o n-pentanol como alcoholes.

[0123] El estudio se realizó para evaluar la viabilidad de la alcohólisis sin disolvente de tripalmitina para producir 2-monopalmitina, usando alcoholes de longitud de cadena C3-C5. Para que la etapa del proceso sea viable, se deben lograr altas conversiones para evitar la producción de productos secundarios (p. ej., diglicéridos) que afectarían el proceso de purificación y al rendimiento de la reacción.

[0124] Equipo:

[0125] ● 10 viales de vidrio de 1,5 ml Agilent GC, con tapón de rosca y membrana de goma

[0126] ● Termomezclador, con bloque calefactor modificado para adaptarse a los viales de 1,5 ml de Agilent GC y control de temperatura

[0127] Sustancias químicas:

[0128] ● Tripalmitina, Tripalmitato de glicerol, 98 %, Alfa Aesar, LOTE N.º 10184933

[0129] ● 2-propanol, Honeywell, Chromasolv LC-MS

[0130] ● 1-Butanol, Sigma-Aldrich, ≥ 99 %

[0131] ● 1-pentanol, Sigma-Aldrich, ≥ 99 %

[0132] Los alcoholes se secaron sobre tamices moleculares (3 Å) antes del experimento.

[0133] Enzimas:

[0134] ● Lipasa B de Lipozyme 435, Novozymes,Candida antarcticainmovilizada en portador hidrófobo (resina acrílica) ● Lipozyme TL IM, Novozymes, lipasa deThermomyces lanuginosusinmovilizada en portador de gel de sílice (no comprimible)

[0135] Procedimiento

[0136] ● Se calentó el termomezclador a 50 °C

[0137] ● Se pesaron 175 mg de tripalmitina en viales de vidrio de 1,5 ml con tapones de rosca herméticos que contenían una membrana de goma para la toma de muestras

[0138] ● Se añadió alcohol a los viales y después se cerraron los viales

[0139] ● Los viales cerrados se colocaron en el termomezclador, se agitaron a 650 rpm hasta que el sustrato se disolvió completamente

[0140] ● Antes del inicio de la reacción (0 min), se tomó una muestra (10 µl)

[0141] ● La reacción se inició añadiendo la lipasa

[0142] ● Las muestras se tomaron después de 0, 30, 60, 120, 180 y 240 minutos

[0143] La Tabla 1 a continuación presenta las lipasas y los alcoholes usados en el experimento y la masa y el volumen en cada vial de reacción. Se prepararon mezclas duplicadas, lo que hace un total de 10 viales preparados y evaluados. Tabla 1

[0146]

[0148] Resultados y discusión

[0149] Los resultados muestran que la alcohólisis enzimática de la mezcla de sustrato modelo se podría realizar sin disolvente con alcoholes de longitud de cadena C3-C5 usando cualquiera de las lipasas probadas. El rendimiento de conversión de tripalmitina en 2-monopalmitina para cada reacción se calculó para cada punto de muestra (y se describió en la Fig.2). El mejor rendimiento de conversión logrado en el ensayo fue de 97 %, usando Lipozyme TL IM con n-butanol. La tripalmitina se solubilizó completamente y fue miscible con los alcoholes evaluados a 50 °C.

[0150] Como prueba preliminar, la alcohólisis se había realizado en etanol, sin disolvente. Debido al alto punto de fusión de la tripalmitina, fue necesario aumentar la temperatura de reacción a 65 °C para obtener una tripalmitina solubilizada, pero en estas condiciones solo se pudo observar una baja conversión de tripalmitina en 2-monopalmitina (33 %, en presencia de Lipozyme 435, Novozymes). El intento de disolver la tripalmitina a 50 °C añadiendo mayores volúmenes de etanol no funcionó bien, ya que el lípido y el alcohol no eran totalmente miscibles, dando lugar a una suspensión turbia, y no se observó ninguna conversión enzimática.

[0151] Lipozyme TL IM

[0152] Se lograron rendimientos más altos usando Lipozyme TL IM con dos alcoholes: n-butanol y n-pentanol. La conversión de la reacción de n-butanol alcanzó su máximo después de 2 horas y la reacción de n-pentanol después de 3 horas. La conversión más alta lograda fue con Lipozyme TL IM en n-butanol, que alcanzó > 95 % después de 2 horas de reacción. Para Lipozyme TL IM, las tasas de reacción usando isopropanol fueron menores que para los otros dos alcoholes y la reacción no siguió hasta el final.

[0153] La Fig. 3 muestra la cantidad de tripalmitina, 1,2-dipalmitina y 2-monopalmitina expresada como fracciones molares del contenido de glicérido inicial. También se muestra la suma de las tres fracciones.

[0154] Lipozyme 435

[0155] La conversión más alta lograda usando Lipozyme 435 fue inferior al 50 % después de 3 horas de reacción con nbutanol. Con isopropanol, Lipozyme 435 logró velocidades de reacción más altas que Lipozyme TL IM. La conversión más alta lograda con isopropanol fue 40 %, alcanzada después de 2 horas de reacción con Lipozyme 435.

[0156] Ejemplo 2

[0157] Butanólisis sin disolvente en una grasa rica en palmitato sn-2 por Lipozyme TL IM

[0158] La alcohólisis de una grasa rica en palmitato sn-2 (CristalGreen®) se realizó para producir 2-monopalmitina en condiciones sin disolvente con un material de partida industrialmente relevante.

[0159] El experimento confirmó que CristalGreen® (de forma similar a la tripalmitina) puede ser una fuente viable de palmitato sn-2 para la producción enzimática de 2-monopalmitina en condiciones de reacción usando n-butanol y Lipozyme TL IM.

[0160] Equipo:

[0161] ● Matraz Schott de 500 ml equipado con tapón de rosca y tubo para el rociado de gas

[0162] ● Agitador magnético, placa agitadora

[0163] ● Baño de agua con calentador/control de temperatura

[0164] ● 2 matraces Schott de 100 ml con tapones de rosca revestidos de goma

[0165] ● Agitador de laboratorio Adolf Kühner Lab-Therm con control de temperatura

[0166] Sustancias químicas:

[0167] ● 1-Butanol, Sigma-Aldrich, ≥ 99 %, secado sobre tamices moleculares (3 Å)

[0168] ● CristalGreen®

[0169] Enzimas:

[0170] ● Lipozyme TL IM, Novozymes, lipasa deThermomyces lanuginosusinmovilizada en portador de gel de sílice (no comprimible)

[0171] Procedimiento:

[0172] Secar el CristalGreen®

[0173] ● Se pesaron 100 g de CristalGreen® en un matraz de Schott de 500 ml

[0174] ● El matraz se colocó en un baño de agua a 70 °C y se roció con gas nitrógeno durante 6 h.

[0175] Reacción (duplicados)

[0176] ● A un matraz Schott de 100 ml se añadió:

[0177] ○ 10 g de CristalGreen® secado

[0178] ○ 17 ml de n-butanol seco

[0179] ● El matraz se colocó en un baño de agua a 70 °C hasta que la grasa se disolvió por completo en el butanol (líquido amarillo claro y transparente)

[0180] ● El matraz se colocó en un agitador de laboratorio a 50 °C y 1400 rpm durante 1 hora

[0181] ● Se tomó una muestra de 0 minutos antes del inicio de la reacción (10 µl)

[0182] ● La reacción se inició añadiendo 1,5 g de Lipozyme TL IM

[0183] ● Las muestras se recogieron después de 30, 60, 90, 120 y 150 minutos

[0184] Reutilización de la lipasa

[0185] La alta estabilidad y reutilización de las enzimas es un factor importante para la economía y los costes de los procesos enzimáticos. La reciclabilidad de Lipozyme TL IM se comprobó durante la catálisis alcohólica retirando (filtrando) la lipasa después de alcanzar la conversión completa, transfiriéndola a una solución fresca de sustrato y comparando después el rendimiento de conversión y el perfil del producto para tres reacciones consecutivas.

[0186] Procedimiento:

[0187] Secar el CristalGreen®

[0188] ● Se pesaron 100 g de CristalGreen® en un matraz de Schott de 500 ml

[0189] ● El matraz se colocó en un baño de agua a 70 °C y se roció con gas nitrógeno durante 6 h.

[0190] La reacción de alcohólisis se llevó a cabo de la misma manera que la descrita en el ejemplo 2, es decir, 10 g de Cristal Green secado se hicieron reaccionar con 17 ml de n-butanol utilizando 1,5 g de Lipozyme TL IM como biocatalizador. La reacción se llevó a cabo durante 2,5 horas antes de detenerse. Después, la reacción se detuvo al filtrar la enzima. Después, la misma enzima se reusó en una reacción idéntica durante tres ciclos. Se demostró que fue posible realizar la reutilización de la lipasa TL inmovilizada en tres reacciones de alcohólisis sin perder su actividad como perfiles de producto similares para cada ciclo de reacción.

[0191] Resultados y discusión

[0192] El progreso de la reacción de la alcohólisis con CristalGreen® se muestra en la Fig. 4 e ilustra el agotamiento y la formación de todas las especies que contenían ácido palmítico (y eran cuantificables por GC). La conversión de la 2 monopalmitina de CristalGreen® en esta reacción de alcohólisis sin disolvente ascendió al 94 %, basándose en el contenido de ácido palmítico en la posición sn-2. El material de partida CristalGreen® contiene 32 % de PA en la posición sn-2 (los otros PA se ubican en sn-1 y/o 3) y el 30 % de estos 32 % de PA se recuperaron en el producto final de 2-monopalmitina, lo que conduce a una conversión de 94 %. El 6 % restante de PA no presente en la posición sn-2 se encontró en los pocos productos secundarios, es decir, el éster butílico del ácido palmítico y el 1,2-DAG. Los PA originalmente presentes en sn-1 y 3 del material de partida CristalGreen® también se convirtieron en éster butílico de ácido palmítico.

[0193] Ejemplo 3

[0194] Estudio de purificación de 2-monopalmitina por fraccionamiento sin disolvente (mediante precipitación selectiva) La 2-monopalmitina se produjo por n-butanólisis de CristalGreen® utilizando Lipozyme TL IM como se describe en el Ejemplo 2 y se purificó por fraccionamiento sin disolvente mediante cristalización selectiva. A la 2-monopalmitina se le añadieron 2 equivalentes de ésteres alquílicos de ácidos grasos y 13 equivalentes de alcohol para crear mezclas modelo para el estudio (como se describe a continuación en la Tabla 2). Después, estas mezclas se fraccionaron mediante la disminución gradual de la temperatura en un baño de agua.

[0195] Tabla 2:

[0198]

[0200] Parte I-Preparación de ésteres alquílicos de ácido palmítico

[0201] Se prepararon ésteres alquílicos de ácidos grasos a partir de ácido palmítico y alcoholes metanol, etanol, isopropanol, n-butanol y n-pentanol. La reacción se realizó en MTBE para las reacciones de metanol y etanol. Las otras reacciones se realizaron sin disolvente. El Lipozyme 435 cataliza las reacciones.

[0202] Equipamiento

[0203] ● 5 matraces Schott de 100 ml con tapones de rosca revestidos de goma

[0204] ● Agitador de laboratorio Adolf Kühner Lab-Therm con control de temperatura

[0205] ● Rotavapor Büchi - evaporador a escala de laboratorio

[0206] ● Ajuste de filtración al vacío

[0207] ● 5 matraces redondos de 50 ml

[0208] Se hizo reaccionar un gramo de ácido palmítico con 1 gramo de Lipozyme 435 en 10 ml de alcohol para isopropanol, butanol y pentanol. Se realizaron preparaciones de metanol y etanol con 1 ml de alcohol y 10 ml de MTBE. Se añadieron tamices moleculares (3 Å) a las mezclas para eliminar el agua.

[0209] La reacción se realizó a 50 °C con agitación de 1400 rpm. La reacción se inició agregando la lipasa y se ejecutó durante 12 horas. La reacción se detuvo al filtrar la lipasa. Después de que se detuvo la reacción, los alcoholes y los disolventes restantes se evaporaron en un rotavapor.

[0210] La fase retenida de la evaporación se transfirió a viales de vidrio de 2 ml transparentes y se pesaron. Se calcularon las cantidades correspondientes de 2-monopalmitina y alcohol y se añadieron a los tubos según la Tabla 2.

[0211] Parte II – Comportamiento de cristalización/fraccionamiento de mezclas de éster alquílico de ácido graso, 2-monopalmitina y diversos alcoholes

[0212] Las mezclas preparadas de acuerdo con la Parte I se colocaron en un baño de agua a 40 °C. A continuación, la temperatura se redujo gradualmente y se observaron las transiciones de fase de las mezclas y el comportamiento de precipitación para las siguientes 5 mezclas (según la Tabla 2):

[0213] palmitato de metilo 2-monopalmitato metanol

[0214] palmitato de etilo 2-monopalmitato etanol

[0215] palmitato de isopropilo 2-monopalmitato isopropanol

[0216] palmitato de n-butilo 2-monopalmitina n-butanol

[0217] palmitato de n-pentilo 2-monopalmitina n-pentanol

[0218] Condiciones de fusión:

[0219] 2-monopalmitina: 65 °C

[0220] Palmitato de metilo: 30 °C

[0221] Palmitato de etilo: 24 °C

[0222] Palmitato de n-propilo: 20,4 °C

[0223] Palmitato de n-butilo: 16,9 °C

[0224] Resultados y discusión

[0225] Como resultado del experimento, se pudieron fraccionar mezclas de isopropil-, n-butil- y n-pentil-, ya que precipitaron 2-monopalmitina y 1,2-dipalmitina mientras el alcohol y su correspondiente éster alquílico de ácido palmítico se mantuvieron en solución. Las mezclas de metil- y etil- no pudieron fraccionarse.

[0226] Las mezclas que se derivan de alcoholes de cadena larga formaron cristales blancos de 1,2-dipalmitina y 2-monopalmitina.

[0227] Las mezclas que se derivan de una cadena más corta no pudieron fraccionarse sino más bien se solidificó la mezcla completa.

[0228] A partir de estos resultados, puede inferirse que el uso de un alcohol de cadena más larga en la etapa de alcohólisis contribuye al fraccionamiento y hace posible el fraccionamiento sin disolvente.

[0229] Por consiguiente, tener un alcohol C3-C5 proporciona el beneficio inesperado adicional de una etapa simplificada de purificación intermedia para el producto deseado (2-monopalmitina).

[0230] Ejemplo 4

[0231] Purificación intermedia - fraccionamiento sin disolvente mediante la cristalización selectiva de la mezcla de productos obtenida mediante butanólisis sin disolvente de CristalGreen®

[0232] Este estudio se realizó para purificar 2-monopalmitina del producto de la etapa de alcohólisis como se describe en el Ejemplo 2 mediante fraccionamiento sin disolvente por medio de precipitación selectiva.

[0233] Equipo:

[0234] ● Matraz Erlenmeyer de 50 ml

[0235] ● Ajuste de filtración al vacío con filtro de vidrio xxx

[0236] Sustancias químicas:

[0237] ● A partir de la etapa de alcohólisis descrita en el Ejemplo 2, se obtiene una mezcla de reacción final después de 2,5 horas de reacción que consiste en aproximadamente 0,95 eq. de 2-monoglicéridos, 0,05 eq. de 1,2-diglicéridos, 2 eq. de ésteres de n-butilo de ácidos grasos, 13 eq. de n-butanol

[0238] ● n-heptano

[0239] Procedimiento:

[0240] ● La reacción de alcohólisis se detuvo mediante la filtración de la lipasa

[0241] ● El filtrado se transfirió a un matraz Erlenmeyer de 50 ml

[0242] ● El matraz se colocó a 4 °C durante la noche

[0243] ● Se vertió parte de la mezcla de fraccionamiento sobre el filtro de vidrio. La solución pasa, dejando una torta de filtración de cristales blancos. Los cristales se lavaron por goteo de heptano sobre estos mientras todavía se hacía el vacío. Después, se detuvo el vacío y los cristales se rasparon del filtro.

[0244] ● Los cristales se secaron en un desecador y se pesaron.

[0245] Lo recuperado del fraccionamiento y la filtración fue 1,62 g de fracción de cristal.

[0246] El rendimiento general del proceso logrado como se describe en los Ejemplos 2 y 4 fue de hasta el 50 %.

[0247] Resultado y discusión

[0248] La purificación intermedia por fraccionamiento mediante la cristalización selectiva de 2-monopalmitina se realizó exitosamente en la mezcla de reacción final a partir de la butanólisis de CristalGreen®. La cantidad de palmitato de butilo se redujo en 90 %. Esto muestra que el método es viable para separar 2-monopalmitina (cristales) del palmitato de butilo líquido y butanol, por ejemplo, mediante filtración.

[0249] Ejemplo 5

[0250] Esterificación sin disolvente de 2-monopalmitina derivada de la butanólisis para la producción de ingredientes de TAG sn2

[0251] Un producto de 2-monopalmitina obtenido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 4 se sometió a un proceso de esterificación con una mezcla de ácidos grasos para producir una mezcla de triglicéridos similar a la de la leche materna humana.

[0252] Equipo:

[0253] ● 2 tubos de vidrio Pyrex de 25 mm con tapones de goma equipados con tubos para el rociado de gas

[0254] ● Baño de agua con calentador/control de temperatura

[0255] Sustancias químicas:

[0256] ● Ácido oleico, ≥99 %, Sigma-Aldrich, N.º LOTE 0000051240

[0257] ● Ácido linoleico, ≥99 %, Sigma-Aldrich, N.º LOTE SLCC7896

[0258] ● Ácido palmitoleico, ≥99 %, Nu-Chek prep, N.º LOTE U-40A-A25-b

[0259] ● Ácido mirístico, ≥99 %, Nu-Chek prep, N.º LOTE N-14A-F14-J

[0260] ● Ácido láurico, ≥98 %, Sigma-Aldrich, N.º LOTE MKBX6772V

[0261] ● 2-monopalmitina, producida mediante butanólisis de Crystal Green, purificada por cristalización fraccionada sin disolvente

[0262] Enzimas:

[0263] ● Lipozyme TL IM, Novozymes, portador de gel de sílice (no comprimible), Lote LA331755

[0264] En duplicado:

[0265] ● El baño de agua se calentó hasta 45 °C

[0266] ● Se añade a cada tubo de vidrio Pyrex de 25 mm:

[0267] ○ 1 g 2-monopalmitina (preparada como se describe en el Ejemplo 4)

[0268] ○ Un total de 2,6 equivalencias de ácidos grasos que consisten en:

[0269] ▪ 1,43 ml de ácido oleico (60 %)

[0270] ▪ 706 µl de ácido linoleico (30 %)

[0271] ▪ 45 µl de ácido palmitoleico (2 %)

[0272] ▪ 35 mg de ácido mirístico (2 %)

[0273] ▪ 45 mg de ácido láurico (3 %)

[0274] ▪ 65 mg de ácido esteárico (3 %)

[0275] ● Los tubos de Pyrex se colocaron en el baño de agua rociando gas nitrógeno a través de la mezcla de aceite de 2-monopalmitina/ácidos grasos hasta que la mezcla se volvió clara, la 2-monopalmitina se disolvió por completo ● Se tomó una muestra de 0 minutos (10 µl)

[0276] ● La reacción se inició añadiendo 250 mg de Lipozyme TL IM

[0277] ● Se tomaron muestras después de 3 horas de reacción para el análisis de LC-MS

[0278] Se analizó el perfil de TAG en las muestras. El método Röse-Gottlieb (ISO 1211) se usó como el método de referencia para la cuantificación de lípidos totales. Para disminuir el tamaño de la muestra necesario para el análisis, el método se modificó ligeramente: el tamaño de la muestra se disminuyó a 100 µl y los volúmenes de disolvente se redujeron para mantener las mismas proporciones de muestra/disolvente del método de referencia. Como solución patrón interna, se usó 0,4 µmol l<-1>de 1,3(d5)-dipalmitoil-2-estearoil-glicerol. El análisis se realizó como se describió anteriormente [Nagy et al 2012,J. Lipid Res.2013, 54, 290-305]. En resumen, se logró la separación por cromatografía con un cromatógrafo de líquidos equipado con una columna Agilent Poroshell 120 EC-C18 (150 x 2,1 (d.i.) mm, 2,7 µm: Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Estados Unidos). El disolvente A consistió enn-hexano e isopropanol (1:1, v:v). El disolvente B fue 10 mmol l<-1>de formiato de amonio, solubilizado en metanol. Se usó un espectrómetro de masas LTQ-Orbitrap Elite (ThermoFisher Scientific) para identificar los regioisómeros de TAG. Se hizo funcionar el Orbitrap a una resolución de 30000 en una relación de masa a carga (m/z) entre 200 y 1500. Los acontecimientos dependientes de los datos se produjeron de acuerdo con una lista de inclusión que incluía las masas exactas de TAG amoniacados, con la aplicación de criterios de ancho de masa original de ± 5 ppm. La lista de inclusión para la adquisición dependiente de datos se creó mediante el cálculo de la masa exacta para TAG obtenida por la combinación del FA más abundante en la leche humana. Se utilizó la marca de masa dem/z4,95540 entre los aductos amoniacados y sodados, pero solo se fragmentaron los aductos amoniacados. Los picos en el espectro de iones del producto TAG permitieron las determinaciones de residuos de FA y su intensidad permitió las determinaciones de posición regioisomérica de FA de acuerdo con el modelo matemático descrito anteriormente.

[0279] Resultados

[0280] Se analizó la composición obtenida y los resultados de algunos de los TAG obtenidos se recogen en la Tabla 3. Los resultados se expresan en g de TAG/100 g de triglicéridos totales en la composición obtenida.

[0281] Tabla 3

[0284]

[0286] El experimento indicó que, sorprendentemente, todo el ácido graso agregado a la mezcla podría incorporarse en el producto obtenido en presencia de Lypozyme TL IM y que la relación de los TAG obtenidas con un residuo de ácido palmítico en la posición sn2 refleja la observada en muestras de leche humana de acuerdo con el hallazgo de los presentes inventores como se ha descrito en el Ejemplo A.

[0287] Ejemplo 6

[0288] Preparación de una mezcla de grasas de triglicéridos con un perfil de TAG sn2 similar a la leche materna humana china para usar en la leche de fórmula para bebés a partir de un ingrediente de triglicérido de acuerdo con la presente invención

[0289] Un ingrediente de triglicérido obtenido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 5 se mezcla con una mezcla de aceite vegetal que tiene bajo contenido de ácido palmítico que consiste en, p. ej., aceite de semilla de colza puro o mezclado, aceite de girasol rico en oleico, aceite de girasol. La mezcla de aceite vegetal se añade al 40 % del ingrediente de triglicérido logrando un efecto de dilución para los TAG que están presentes en el ingrediente de TAG, ya que el aceite vegetal no contiene TAG que tengan un residuo de ácido palmítico en la posición sn-2. La mezcla de grasas de triglicéridos resultante comprendía:

[0292]

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

1. Un ingrediente de triglicérido que comprende TAG sintéticos que tienen un 70 % o más del contenido de ácido palmítico esterificado en la posición sn-2 y que comprende triglicéridos OPO (18:1-16:0-18:1) y OPL (18:1-16:0-18:2), en donde la relación entre los triglicéridos OPO y OPL varía de 1:0,3 a 1:1,5, que también comprende OPM (18:1-16:0-14:0) y también comprende adicionalmente al menos un triglicérido seleccionado del grupo que consiste en: PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1), LaPO (12:0-16:0-18:1), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

2. Un ingrediente de triglicérido de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende triglicéridos PPO (16:0-16:0-18:1), SPO (18:0-16:0-18:1) y LaPO (12:0-16:0-18:1), OPM (18:1-16:0-14:0), OPPa (16:1-16:0-18:1), LPP (16:0-16:0-18:2), LPL (18:2-16:0-18:2) y LPPa (16:1-16:0-18:2), en donde la relación entre OPO y cada uno de tales triglicéridos cuando están presentes varía de 1:0,2 a 1:0,6 para PPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para LaPO, de 1:0,05 a 1:0,5 para SPO, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPM, de 1:0,05 a 1:0,3 para OPPa, de 1:0,05 a 1:0,4 para LPP, de 1:0 a 1:0,5 para LPL y de 1:0 a 1:0,5 para LPPa.

3. Un ingrediente de triglicérido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 que comprende una cantidad de OPO que varía del 20 al 25 % del total de triglicéridos en el ingrediente, una cantidad de OPL que varía del 10 al 25 %, una cantidad de OPP que varía del 7 al 15 %, una cantidad de OPS que varía del 1 al 5 %, una cantidad de OPLa que varía del 1 al 5 %, una cantidad de OPM que varía del 1 % al 5 %, una cantidad de OPPa que varía del 1 al 5 %, y una cantidad de LPP que varía del 0,5 al 7 %, una cantidad de LPL que varía del 2 al 7 % y una cantidad de LPPa que varía del 0 al 5 %.

4. Un proceso para la preparación de un ingrediente de triglicérido que comprende TAG sintéticos como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tienen un contenido de ácido palmítico en la posición sn-2 que es igual o superior al 70 % del contenido palmítico total y que tiene un perfil personalizado de los triglicéridos que tienen un residuo de ácido palmítico en la posición sn-2, comprendiendo el proceso las etapas de:

a) someter la tripalmitina y/o los triglicéridos enriquecidos en el ácido palmítico en la posición sn-2 a una etapa de alcohólisis realizada en presencia de una lipasa inmovilizada y de un alcohol primario o secundario de longitud de cadena C3-C5, por ejemplo, seleccionado en la lista que consiste en: n-butanol, n-pentanol, isopropanol y mezclas de estos, para dar una mezcla de producto que comprende 2-monopalmitina;

b) purificar la mezcla que comprende 2-monopalmitina obtenida en la etapa a) mediante un proceso de fraccionamiento a través de la cristalización selectiva de 2-monopalmitina y la eliminación posterior de la fracción líquida restante (sobrenadante);

c) someter la mezcla que se deriva de la etapa b) a una etapa de esterificación en presencia de una mezcla de ácidos grasos seleccionados para permitir la formación de un perfil personalizado de los triglicéridos y de una lipasa inmovilizada,

en donde las etapas a), b) y c) son sin disolventes.

5. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde la alcohólisis de la etapa a) se realiza con n-butanol en presencia de una lipasa específica de sn-1,3 a partir deThermomyces lanuginosisen forma inmovilizada, p. ej., adsorbida en sílice.

6. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 o 5, en donde el material de partida para la etapa a) son triglicéridos enriquecidos en ácido palmítico en la posición sn-2, tal como por ejemplo una fracción de aceite de palma enriquecido en ácido palmítico en la posición sn-2.

7. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en donde la etapa a) se realiza a una temperatura que varía de 40 a 70 grados C, por ejemplo a una temperatura que varía de 45 a 55 grados C.

8. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en donde la etapa b) se realiza disminuyendo la temperatura de la mezcla a una temperatura que varía de 0 a 15 °C, por ejemplo, de 5 a 10 °C o de 6 a 8 °C para permitir el fraccionamiento mediante cristalización selectiva de 2-monopalmitina y eliminando la fracción líquida restante, por ejemplo, mediante filtración.

9. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en donde la etapa c) se realiza a una temperatura que varía de 35 a 60 grados C, por ejemplo, a una temperatura que varía de 40 a 50 grados C en la presencia de una lipasa específica de sn-1,3 a partir deThermomyces lanuginosisen forma inmovilizada, p. ej., adsorbida en sílice y en la presencia de 2,5 equivalentes de una mezcla de ácidos grasos.

10. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9, en donde la etapa c) va seguida de una

etapa d) de desodorización.