ES3066332T3 - Lactase enzymes with improved properties - Google Patents

Lactase enzymes with improved properties

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ES3066332T3
ES3066332T3 ES18716624T ES18716624T ES3066332T3 ES 3066332 T3 ES3066332 T3 ES 3066332T3 ES 18716624 T ES18716624 T ES 18716624T ES 18716624 T ES18716624 T ES 18716624T ES 3066332 T3 ES3066332 T3 ES 3066332T3
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galactosidase
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Hans Raj
Pernille Smith
Thomas Eckhardt
Vojislav Vojinovic
Charlotte Elisabeth Grüner Schöller
Den Brink Johannes Maarten Van
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Abstract

La presente invención se refiere a nuevos péptidos o péptidos diméricos mejorados que exhiben actividad enzimática de betagalactosidasa, así como a métodos mejorados para reducir el contenido de lactosa en composiciones, tales como productos lácteos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0003] Enzimas lactasas con propiedades mejoradas
[0005] Campo de la invención
[0007] La presente invención se refiere a un nuevo péptido mejorado que exhibe actividad enzimática de betagalactosidasa, así como a procedimientos mejorados para reducir el contenido de lactosa en composiciones, tales como productos lácteos.
[0009] Antecedentes de la invención
[0011] Para crecer en la leche, la hidrólisis de la lactosa es una buena forma de que las bacterias del ácido láctico obtengan glucosa y galactosa como fuente de carbono. La lactasa (beta-galactosidasa; EC 3.2.1.23) es la enzima que realiza la etapa de hidrólisis de la lactosa de azúcar de la leche en monosacáridos. El uso comercial de la lactasa es descomponer la lactosa en los productos lácteos. Las personas intolerantes a la lactosa tienen dificultades para digerir los productos lácteos con altos niveles de lactosa. Se estima que alrededor del 70 % de la población mundial tiene una capacidad limitada para digerir la lactosa. Por consiguiente, existe una demanda creciente de productos lácteos que no contengan lactosa o que tengan niveles bajos de la misma.
[0013] Las lactasas han sido aisladas a partir de una gran variedad de organismos, incluidos microorganismos tales comoKluyveromycesyBacillus.Kluyveromyces, especialmenteK. fragilisyK. lactis, y otros hongos como los de los génerosCandida,TorulayTorulopsis, son una fuente común de lactasas fúngicas, mientras queB. coagulansy B. circulansson fuentes bien conocidas de lactasas bacterianas. Existen varios preparados comerciales de lactasa derivados de estos organismos, como Lactozym® (disponible de Novozymes, Dinamarca), HA-Lactase (disponible de Chr. Hansen, Dinamarca) y Maxilact® (disponible de DSM, Países Bajos), todos ellos procedentes deK. lactis. Todas estas lactasas son las denominadas lactasas neutras, con un pH óptimo entre 6 y 8, así como una temperatura óptima en torno a los 37 °C. Cuando estas lactasas se utilizan en la producción de, por ejemplo, yogur bajo en lactosa, el tratamiento enzimático debe ser realizado en una etapa separada antes de la fermentación o bien deben utilizarse dosis bastante elevadas de enzimas, ya que su actividad disminuye a medida que el pH desciende durante la fermentación. Además, estas lactasas no son adecuadas para la hidrólisis de la lactosa en la leche realizada a alta temperatura, lo que en algunos casos sería beneficioso para mantener bajo el recuento microbiano y garantizar así una alta calidad de la leche. Además, las lactasas conocidas no serían adecuadas para su uso en un proceso deseado para la producción de leche tratada a ultra alta temperatura (UHT), en el que se añaden enzimas antes del tratamiento UHT.
[0015] Los documentos de patente WO2010092057 y WO0104276 se refieren a beta-galactosidasas activas en frío. El documento de patente WO07110619 se refiere a la beta-galactosidasa con alta actividad transgalactosilante, mientras que el documento de patente WO2009071539 se refiere a la beta-galactosidasa con menor actividad transgalactosilante. El documento de patente EP2530148 se refiere a las beta-galactosidasas para la producción de productos lácteos sin lactosa.
[0017] Pawlak-Szulaska A. et al., 2014 y Horner T.W. et al., 2011 divulgan enzimas beta-galactosidasas deKluyveromyces lactisyAspergillus oryzae, pero no mencionan las secuencias de dichas enzimas.
[0019] Objeto de la invención
[0021] Un objeto de las realizaciones de la invención es proporcionar beta-galactosidasas con propiedades que permitan la producción de productos libres de lactosa o con bajo contenido de lactosa mejorados.
[0023] Un objeto adicional de las realizaciones de la invención es proporcionar beta-galactosidasas con propiedades que permitan procedimientos de producción mejorados, como más fáciles, más rápidos, más fiables o menos costosos, para reducir la lactosa en un producto, tal como productos libres de lactosa o con bajo contenido de lactosa.
[0025] Resumen de la invención
[0027] Los presentes inventores han identificado beta-galactosidasas con propiedades no descritas anteriormente que permiten la producción de productos libres de lactosa o con bajo contenido de lactosa mejorados, así como procedimientos de producción mejorados para dichos productos libres de lactosa o con bajo contenido de lactosa. En particular, se ha demostrado que estas beta-galactosidasas son muy estables y tienen una actividad relativamente alta en un intervalo muy amplio de temperaturas y valores de pH. También se pueden utilizar a temperaturas específicas, como a altas temperaturas y valores de pH que no se observan normalmente con estas enzimas. En primer lugar, esto permite el uso de beta-galactosidasas a valores de pH y temperaturas específicos que antes no se creían posibles. También permite el uso de la misma enzima específica en varias aplicaciones diferentes, lo que es muy solicitado en la industria.
[0028] La invención se define en las reivindicaciones.
[0029] Leyendas de las figuras
[0030] Figura 1. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 6,7 a 37 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-1, discutida en el ejemplo 6. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 6 %.
[0031] Figura 2. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 6,7 a 37 °C en presencia de galactosa, descrita como SUAG, discutida en el ejemplo 7. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 15 %.
[0032] Figura 3. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 6,7 a 4 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-2, discutida en el ejemplo 8. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0033] Figura 4. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 6,7 a 43 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-3, discutida en el ejemplo 9. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0034] Figura 5. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 5,5 a 4 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-4, discutida en el ejemplo 10. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0035] Figura 6. Actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 5,5 a 37 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-5, discutida en el ejemplo 11. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0036] Figura 7. Actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 5,5 a 43 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-6, discutida en el ejemplo 12. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0037] Figura 8. Actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 4,5 a 4 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-7, discutida en el ejemplo 13. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0038] Figura 9. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 4,5 a 37 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-8, discutida en el ejemplo 14. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0039] Figura 10. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 4,5 a 43 °C con lactosa como sustrato, descrita como SUAL-9, discutida en el ejemplo 15. La desviación estándar medida en las condiciones proporcionadas fue inferior al 5 %.
[0040] Figura 11. El porcentaje de lactosa residual en la leche pasteurizada, después del tratamiento con una cantidad fija de la enzima, después de 24 horas a 5 °C, determinado mediante HPLC.
[0041] Figura 12. El porcentaje de lactosa residual en la leche UHT, después del tratamiento con una cantidad fija de la enzima, tras 24 horas a 25 °C, determinado mediante HPLC.
[0042] Figura 13. El porcentaje de actividad residual de las enzimas purificadas a temperaturas elevadas, determinado utilizando lactosa como sustrato. La actividad a pH 6,7 a 37 °C se consideró como 100 %. Figura 14. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 6,7 a 4 °C, 37 °C y 43 °C. La actividad específica medida se describe como µmol de glucosa formada por minuto por mg de enzima. El procedimiento de inhibición de galactosa se describe en el ejemplo 7 y se calcula basándose en µmol de glucosa formada por minuto por mg de enzima.
[0043] Figura 15. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 5,5 a 4 °C, 37 °C y 43 °C. La actividad específica medida se describe como µmol de glucosa formada por minuto por mg de enzima. Figura 16. La actividad específica de las enzimas purificadas determinada a pH 4,5 a 4 °C, 37 °C y 43 °C. La actividad específica medida se describe como µmol de glucosa formada por minuto por mg de enzima.
[0044] Divulgación detallada de la invención
[0046] Los presentes inventores han descubierto que ciertos péptidos que exhiben actividad enzimática de betagalactosidasa son sorprendentemente estables en muchas condiciones físicas diferentes, lo que les confiere una actividad relativamente alta fuera de los intervalos que normalmente se consideran óptimos para esta clase de enzimas.
[0048] Por consiguiente, estas enzimas identificadas por los presentes inventores tienen una actividad relativamente alta alrededor de 4 °C o 5 °C y, por lo tanto, pueden ser utilizadas para la hidrólisis de la lactosa en la producción de, por ejemplo, leche fresca. Además, las enzimas también tienen una actividad relativamente alta en el intervalo de 10 °C a 25 °C y, por lo tanto, las mismas enzimas pueden ser utilizadas para la hidrólisis de la lactosa en la leche UHT. Esta viabilidad de las enzimas incluso en amplios intervalos de temperatura es muy relevante, ya que la leche puede ser almacenada a temperatura ambiente, que puede variar en diferentes partes del mundo, dependiendo también de las estaciones. Para el tratamiento UHT, la temperatura suele ser de alrededor de 135 °C o 140 °C. Es muy deseable que las enzimas puedan tener actividad en un intervalo de temperatura de hasta 140 °C, de modo que la enzima pueda ser añadida a la leche cruda antes de la etapa UHT. En las prácticas actuales, la enzima se añade después de la etapa UHT porque las enzimas conocidas en la técnica tienen una disminución significativa de la actividad funcional, hasta un valor inferior a la actividad medible tras la etapa de tratamiento térmico a alta temperatura. Además, la leche se almacena a temperatura ambiente, que puede variar significativamente en diferentes partes del mundo.
[0050] También se ha descubierto que estos novedosos péptidos mejorados que exhiben actividad enzimática de betagalactosidasa tienen actividad en el intervalo de temperatura que se utiliza normalmente para la pasteurización. Por consiguiente, estas enzimas pueden ser añadidas a la leche cruda antes de la pasteurización. Debe entenderse que las enzimas conocidas en la técnica presentan una disminución significativa de la actividad funcional, hasta un valor inferior a la actividad medible tras una etapa de pasteurización.
[0052] Otra ventaja de estos nuevos péptidos mejorados que presentan actividad enzimática de beta-galactosidasa es que tienen un grado relativamente bajo de inhibición de la galactosa. La menor inhibición de la galactosa de estas nuevas enzimas es muy relevante para aplicaciones en las que se desean concentraciones muy bajas de lactosa.
[0054] En términos de aplicabilidad para productos fermentados, es muy ventajoso que las enzimas descritas en la presente memoria descriptiva tengan una alta actividad enzimática de beta-galactosidasa en un intervalo de temperatura relativamente amplio, entre 4 °C y 43 °C, como alrededor de 37 °C, donde la fermentación sería normalmente óptima, pero también que esta actividad de la enzima beta-galactosidasa está presente a un pH bajo, como hasta 4,5, o hasta 4,0, o hasta 3,5, o incluso hasta pH 3.
[0056] En resumen, los presentes inventores han descubierto que algunos péptidos que exhiben actividad enzimática de beta-galactosidasa son activos en un amplio intervalo de temperaturas, activos en un amplio intervalo de pH, tienen una actividad hidrolítica general alta sin actividades secundarias, que estos péptidos no tienen o tienen poca inhibición de la galactosa, como menos del 60 %, y que son estables durante el almacenamiento a largo plazo.
[0058] La actividad de beta-galactosidasa puede ser determinada midiendo la cantidad de glucosa liberada tras la incubación con lactosa en condiciones establecidas. La glucosa liberada puede ser detectada por medio de una reacción de coloración.
[0060] Definiciones
[0062] El término “leche”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva y en el contexto de la presente invención, debe entenderse como la secreción láctea obtenida al ordeñar cualquier mamífero, como vacas, ovejas, cabras, búfalas o camellos.
[0064] El término “composición que contiene lactosa”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a cualquier composición, como cualquier líquido que contenga lactosa en un grado significativo medible, como un contenido de lactosa superior al 0,002 % (0,002 g/100 ml). Este término abarca la leche y los sustratos a base de leche.
[0066] El término “sustrato a base de leche”, en el contexto de la presente invención, puede ser cualquier material lácteo crudo y/o procesado. Los sustratos a base de leche útiles incluyen, entre otros, soluciones/suspensiones de cualquier leche o productos similares a la leche que contengan lactosa, como leche entera o desnatada, leche descremada, suero de leche, leche baja en lactosa, leche en polvo reconstituida, leche condensada, soluciones de leche en polvo, leche UHT, suero de leche, permeado de suero, suero ácido, nata, productos lácteos fermentados, como yogur, queso, suplementos dietéticos y productos dietéticos probióticos. Normalmente, el término “sustrato a base de leche” se refiere a un material lácteo crudo o procesado que se procesa posteriormente para producir un producto lácteo.
[0068] El término “pasteurización”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere al proceso de reducir o eliminar la presencia de organismos vivos, como microorganismos, en un sustrato a base de leche. Preferiblemente, la pasteurización se consigue manteniendo una temperatura específica durante un período de tiempo determinado. La temperatura especificada se alcanza normalmente mediante calentamiento. La temperatura y la duración pueden seleccionarse con el fin de matar o inactivar ciertas bacterias, como las bacterias nocivas, y/o inactivar las enzimas de la leche. A continuación, se puede llevar a cabo una etapa de enfriamiento rápido.
[0070] El término “producto lácteo”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, puede referirse a cualquier producto alimenticio en el que uno de los componentes principales sea a base de leche. Por lo general, el componente principal es a base de leche y, en algunas realizaciones, el componente principal es un sustrato a base de leche que ha sido tratado con una enzima con actividad beta-galactosidasa de acuerdo con un procedimiento de la presente invención.
[0072] Un producto lácteo de acuerdo con la invención puede ser, por ejemplo, leche desnatada, leche descremada, leche entera, nata, leche UHT, leche con una vida útil prolongada, un producto lácteo fermentado, queso, yogur, mantequilla, crema para untar, suero de leche, bebida láctea acidificada, crema agria, bebida a base de suero de leche, helado, leche condensada, dulce de leche o una bebida láctea aromatizada.
[0074] Un producto lácteo puede comprender adicionalmente componentes no lácteos, por ejemplo, componentes vegetales tales como, por ejemplo, aceite vegetal, proteína vegetal y/o carbohidratos vegetales. Los productos lácteos también pueden contener otros aditivos, como enzimas, agentes aromatizantes, cultivos microbianos como cultivos probióticos, sales, edulcorantes, azúcares, ácidos, frutas, preparados de frutas, zumos de frutas o cualquier otro componente conocido en la técnica como componente o aditivo de un producto lácteo.
[0076] Los términos “producto lácteo fermentado” o “producto lácteo fermentado” tal y como se utilizan en la presente memoria descriptiva deben entenderse como cualquier producto lácteo en el que cualquier tipo de fermentación forme parte del proceso de producción. Ejemplos de productos lácteos fermentados son productos como el yogur, el suero de leche, lacrème fraîche, el quark y elfromage frais. Un producto lácteo fermentado puede ser producido por medio de cualquier procedimiento conocido en la técnica o incluir etapas de dicho procedimiento.
[0077] El término “fermentación”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a la conversión de carbohidratos en alcoholes o ácidos mediante la acción de un microorganismo. En algunas realizaciones, la fermentación de acuerdo con la presente invención comprende la conversión de lactosa en ácido láctico. En el contexto de la presente invención, “microorganismo” puede incluir cualquier bacteria u hongo capaz de fermentar el sustrato lácteo.
[0079] El término “aumento de la actividad enzimática de beta-galactosidasa”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a una actividad específica relativamente mayor de una enzima beta-galactosidasa en comparación con una secuencia de referencia.
[0081] El término “péptido que exhibe actividad enzimática de beta-galactosidasa”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a cualquier péptido que tenga actividad enzimática para catalizar la hidrólisis del disacárido lactosa en sus monosacáridos componentes, glucosa y galactosa. Este péptido también puede ser denominado como lactasa o simplemente beta-galactosidasa (EC: 3.2.1.23).
[0083] Los términos “péptido” y “oligopéptido”, tal y como se utilizan en el contexto de la presente solicitud, se consideran sinónimos (como se reconoce comúnmente) y cada término puede ser utilizado indistintamente, según lo requiera el contexto, para indicar una cadena de al menos dos aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. La palabra “polipéptido” se utiliza en la presente memoria descriptiva para cadenas que contienen más de diez residuos de aminoácidos. Todas las fórmulas o secuencias de péptidos y polipéptidos descritas en la presente memoria descriptiva se escriben de izquierda a derecha y en la dirección del extremo amino al extremo carboxilo. El término “proteínas”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a secuencias de péptidos tal y como son producidas por algún organismo huésped y puede incluir modificaciones postraduccionales, como la adición de glicanos.
[0085] Los términos “aminoácido” o “secuencia de aminoácidos”, tal y como se utilizan en la presente memoria descriptiva, se refieren a una secuencia de oligopéptidos, péptidos, polipéptidos o proteínas, o a un fragmento de cualquiera de ellos, y a moléculas naturales o sintéticas. En este contexto, “fragmento” se refiere a fragmentos de un péptido que exhiben actividad enzimática de beta-galactosidasa, que conservan cierta actividad enzimática. Cuando en la presente memoria descriptiva se menciona “secuencia de aminoácidos” para referirse a una secuencia de aminoácidos de una molécula de proteína natural, “secuencia de aminoácidos” y términos similares no pretenden limitar la secuencia de aminoácidos a la secuencia completa de aminoácidos nativos asociada con la molécula de péptido mencionada.
[0086] Los péptidos ejemplares, que no se ajustan a las reivindicaciones y se incluyen únicamente con fines ilustrativos, también incluyen fragmentos de al menos aproximadamente 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800 o más residuos de longitud, o más de la longitud completa de una enzima. Por consiguiente, un “fragmento peptídico” o “fragmento enzimáticamente activo” son fragmentos que conservan al menos alguna actividad enzimática funcional. Normalmente, un fragmento peptídico, que no se ajusta a las reivindicaciones y que se utiliza únicamente con fines ilustrativos, seguirá conteniendo el dominio catalítico funcional u otros sitios activos esenciales del péptido que exhibe actividad enzimática de beta-galactosidasa. Se pueden delecionar otros dominios.
[0088] Habitualmente, la actividad enzimática de beta-galactosidasa específica se medirá y se indicará como µmol de glucosa formada/min/mg de enzima utilizada. Sin embargo, este valor específico variará en función de las condiciones aplicadas, como la temperatura y el pH. Por consiguiente, los valores de la actividad enzimática de beta-galactosidasa también pueden referirse como relativos a una enzima de referencia conocida, como la enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35.
[0090] Alternativamente, la actividad enzimática de beta-galactosidasa específica puede ser medida e indicada como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima utilizada. Sin embargo, este valor específico variará en función de las condiciones aplicadas, como la temperatura y el pH.
[0092] A menos que se indique lo contrario, el término “identidad de secuencia” para los aminoácidos tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva se refiere a la identidad de secuencia calculada como (nref-ndif) · 100/nref, dondendifes el número total de residuos no idénticos en las dos secuencias cuando se alinean y dondenrefes el número de residuos en una de las secuencias.
[0094] En algunas realizaciones, la identidad de secuencia se determina por medio de procedimientos convencionales, por ejemplo, Smith y Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, por medio del procedimiento de búsqueda de similitud de Pearson y Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, utilizando el algoritmo CLUSTAL W de Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Res 22:467380, por medio de implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el paquete de software Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group). También se puede utilizar el algoritmo BLAST (Altschul et al., 1990, Mol. Biol. 215:403-10), cuyo software se puede obtener a través del Centro Nacional de Información Biotecnológica en la página www.ncbi.nlm.nih.gov/). Cuando se utiliza cualquiera de los algoritmos mencionados, se utilizan los parámetros predeterminados para la longitud de la “ventana”, la penalización por huecos, etc.
[0096] Un péptido con una secuencia de aminoácidos específica, tal y como se describe en la presente memoria descriptiva, puede variar con respecto a una secuencia de péptido de referencia por cualquier sustitución, adición/inserción o deleción de aminoácidos.
[0098] Algunas realizaciones de acuerdo con la presente invención se refieren al uso de un péptido con la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1 o 32. Los fragmentos biológicamente activos de un péptido, que no se ajustan a las reivindicaciones y se incluyen únicamente con fines ilustrativos, incluyen péptidos que comprenden secuencias de aminoácidos suficientemente idénticas o derivadas de la secuencia de aminoácidos del péptido de la invención, que incluyen menos aminoácidos que la proteína de longitud completa, pero que exhiben una parte sustancial de la actividad biológica del péptido de longitud completa correspondiente. Típicamente, los fragmentos biológicamente activos comprenden un dominio o motivo con al menos una actividad de una proteína variante de la invención. Un fragmento biológicamente activo de un péptido, que no se incluye en las reivindicaciones y que se menciona únicamente con fines ilustrativos, puede ser un péptido que tenga, por ejemplo, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 o más aminoácidos de longitud.
[0100] El término “célula huésped”, tal y como se utiliza en la presente memoria descriptiva, incluye cualquier tipo de célula que sea susceptible de transformación, transfección, transducción y similares con un constructo de ácido nucleico o vector de expresión que comprenda un polinucleótido que codifique los péptidos de la presente invención. Una célula huésped puede ser el tipo de célula de la que se deriva una enzima específica o puede ser un tipo de célula alternativo susceptible de producir una enzima específica. El término incluye tanto cepas de tipo salvaje como cepas atenuadas.
[0102] Las células huéspedes adecuadas pueden ser cualquier bacteria que contenga ácido láctico dentro del orden de los “Lactobacillales”, que incluyeLactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Pseudoleuconostoc spp., Pediococcus spp., Brevibacterium spp., Enterococcus spp.yPropionibacterium spp. También se incluyen las bacterias productoras de ácido láctico pertenecientes al grupo de bacterias anaeróbicas, bifidobacterias, es decir,Bifidobacterium spp., que se utilizan con frecuencia como cultivos alimentarios solos o en combinación con bacterias del ácido láctico. También se incluyen en esta definiciónLactococcus lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Pseudoleuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis, Lactobacillus casei subsp. caseiyLactobacillus paracasei subsp. Paracaseiy las especies de bacterias lácticas termófilas incluyen como ejemplosStreptococcus thermophilus, Enterococcus faecium, Lactobacillus delbrueckiisubsp. lactis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus
yLactobacillus acidophilus. Otras bacterias específicas incluidas en esta definición son las bacterias de la familiaBifidobacteriaceae, como las del géneroBifidobacterium, por ejemplo, las cepasbifidobacterium animalisobifidobacterium longum, bifidobacterium adolescentis, bifidobacterium bifodum, bifidobacterium breve, bifidobacterium catenulatum, bifidobacterium infantuso del géneroLactobacillus, tal comoL. sakei, L. amylovorus, L. delbrueckii subsp. LactisyL. helveticus.
[0104] También se incluyen en esta definición de células huéspedes las cepas deAgaricus, por ejemplo,A. bisporus; Ascovaginospora; Aspergillus,p. ej.A. niger, A. awamori, A. foetidus, A. japonicus, A. oryzae; Candida; Chaetomium; Chaetotomastia; Dictyostelium,p. ej.D. discoideum; Kluveromyces,p. ej.K. fragilis, K. lactis; Mucor,p. ej.M. javanicus, M. mucedo, M. subtilissimus; Neurospora,p. ej.N. crassa; Rhizomucor,p. ej.R. pusillus; Rhizopus,p. ej.R. arrhizus, R. japonicus, R. stolonifer; Sclerotinia,p. ej.S. libertiana; Torula; Torulopsis; Trichophyton,p. ej.T. rubrum; Whetzelinia,p. ej.W. sclerotiorum; Bacillus,p. ej.B. coagulans, B. circulans, B. megaterium, B. novalis, B. subtilis, B. pumilus, B. stearothermophilus, B. thuringiensis; Bifidobacterium,p. ej.B. Iongum, B. bifidum, B. animalis; Chryseobacterium; Citrobacter,p. ej.C. freundii; Clostridium,p. ej.C. perfringens; Diplodia,p. ej.D. gossypina; Enterobacter,p. ej.E. aerogenes, E. cloacae Edwardsiella, E. tarda; Erwinia,p. ej.E. herbicola; Escherichia,p. ej.E. coli; Klebsiella,p. ej.K. pneumoniae; Miriococcum; Myrothesium; Mucor; Neurospora,p. ej.N. crassa; Proteus,p. ej.P. vulgaris; Providencia,p. ej.P. stuartii; Pycnoporus,p. ej.Pycnoporus cinnabarinus, Pycnoporus sanguineus; Ruminococcus,p. ej.R. torques; Salmonella,p. ej.S. typhimurium; Serratia,p. ej.S. liquefasciens, S. marcescens; Shigella,p. ej.S. flexneri; Streptomyces,p. ej.S. antibioticus, S. castaneoglobisporus, S. violeceoruber; Trametes; Trichoderma,p. ej.T. reesei, T. viride; Yersinia,p. ej.Y. enterocolitica.
[0106] Realizaciones específicas de la invención
[0108] Como se ha descrito anteriormente, la presente invención se refiere a un péptido que exhibe actividad enzimática de beta-galactosidasa, que tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1 o 32.
[0110] Por consiguiente, en una realización, la presente invención se refiere a un péptido que exhibe actividad enzimática de beta-galactosidasa, que tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1. En una realización, la presente invención se refiere a un péptido que exhibe actividad enzimática de betagalactosidasa, que tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 32.
[0112] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 8 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0114] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 6,7, cuya actividad es superior a aproximadamente 2, como superior a aproximadamente 4, como superior a aproximadamente 6, como superior a aproximadamente 8, como superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 12, como superior a aproximadamente 14, como superior a aproximadamente 16 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0116] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 10 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0118] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 5,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 1, como superior a aproximadamente 2, como superior a aproximadamente 3, como superior a aproximadamente 4, como superior a aproximadamente 5, como superior a aproximadamente 6, como superior a aproximadamente 7, como superior a aproximadamente 8 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0120] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 13 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0122] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 4 °C y un pH de 4,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 0,5, como superior a aproximadamente 1,0, como superior a aproximadamente 1,5, como superior a aproximadamente 2,0, como superior a aproximadamente 2,5, como superior a aproximadamente 3,0, como superior a aproximadamente 3,5, como superior a aproximadamente 4,0 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0124] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 9 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0125] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 6,7, cuya actividad es superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 20, como superior a aproximadamente 40, como superior a aproximadamente 60, como superior a aproximadamente 80, como superior a aproximadamente 100, como superior a aproximadamente 120, como superior a aproximadamente 140, como superior a aproximadamente 160 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0127] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 12 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0129] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 5,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 5, como superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 15, como superior a aproximadamente 20, como superior a aproximadamente 25, como superior a aproximadamente 30, como superior a aproximadamente 35, como superior a aproximadamente 40, como superior a aproximadamente 45, como superior a aproximadamente 50, como superior a aproximadamente 55, como superior a aproximadamente 60 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0131] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 15 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0133] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 43 °C y un pH de 4,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 1, como superior a aproximadamente 2, como superior a aproximadamente 3, como superior a aproximadamente 4, como superior a aproximadamente 5, como superior a aproximadamente 6, como superior a aproximadamente 7, como superior a aproximadamente 8, como superior a aproximadamente 9, como superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 11, como superior a aproximadamente 12 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0135] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 6 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0137] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 6,7, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 6,7, cuya actividad es superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 20, como superior a aproximadamente 30, como superior a aproximadamente 40, como superior a aproximadamente 50, como superior a aproximadamente 60, como superior a aproximadamente 70, como superior a aproximadamente 80, como superior a aproximadamente 90, como superior a aproximadamente 100, como superior a aproximadamente 110, como superior a aproximadamente 120, como superior a aproximadamente 130 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0139] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 11 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0141] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 5,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 5,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 5, como por ejemplo superior a aproximadamente 10, como por ejemplo superior a aproximadamente 15, como superior a aproximadamente 20, como superior a aproximadamente 25, como superior a aproximadamente 30, como superior a aproximadamente 35, como superior a aproximadamente 40, como superior a aproximadamente 45, como superior a aproximadamente 50, como superior a aproximadamente 55, como superior a aproximadamente 60 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0143] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima en las condiciones indicadas en el ejemplo 14 descrito en la presente memoria descriptiva, a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %.
[0145] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 4,5, cuya actividad supera la actividad de una enzima beta-galactosidasa definida por la SEQ ID NO: 34 O SEQ ID NO: 35 en al menos aproximadamente el 20 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 30 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 40 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 50 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 60 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 70 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 80 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 90 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 100 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 200 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 300 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 400 %, como por ejemplo al menos aproximadamente el 500 %. En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención tiene una actividad beta-galactosidasa medida como µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima a una temperatura de aproximadamente 37 °C y un pH de 4,5, cuya actividad es superior a aproximadamente 1, como superior a aproximadamente 2, como superior a aproximadamente 3, como superior a aproximadamente 4, como superior a aproximadamente 5, como superior a aproximadamente 6, como superior a aproximadamente 7, como superior a aproximadamente 8, como superior a aproximadamente 9, como superior a aproximadamente 10, como superior a aproximadamente 11, como superior a aproximadamente 12, como superior a aproximadamente 13, como superior a aproximadamente 14, como superior a aproximadamente 15, como superior a aproximadamente 16, como superior a aproximadamente 17, como superior a aproximadamente 18 µM de glucosa formada por segundo por µM de enzima.
[0147] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención se deriva de una bacteria del géneroBifidobacterium, comoBifidobacterium adolescentis.
[0149] En algunas realizaciones, el péptido de acuerdo con la invención muestra una inhibición de la galactosa inferior al 60 %, como inferior al 55 %, como inferior al 50 %, como inferior a aproximadamente el 45 %, como inferior a aproximadamente el 40 %.
[0151] Como se ha descrito anteriormente, parte de la presente invención se refiere a un procedimiento para la producción de un producto lácteo, el procedimiento comprende las etapas de
[0153] a) proporcionar un sustrato a base de leche que comprende lactosa;
[0154] b) añadir un péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa y tiene la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 o 32 al sustrato a base de leche que comprende lactosa; y
[0155] c) tratar el sustrato a base de leche con el péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa;
[0157] en el que la etapa c) tiene lugar a un pH dentro de un intervalo de 5-8;
[0158] en el que la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 30 °C.
[0160] En algunas realizaciones de acuerdo con la presente invención, la etapa c) tiene lugar a un pH de 5-7, tal como dentro de un intervalo de 5-6, tal como dentro de un intervalo de 6-7.
[0162] En algunas realizaciones de acuerdo con la presente invención, la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 35 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 40 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 45 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 50 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 55 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 60 °C, tal como por ejemplo al menos aproximadamente 65 °C.
[0164] En algunas realizaciones de acuerdo con la presente invención, el producto lácteo se selecciona del grupo que

Claims (13)

1. REIVINDICACIONES
1. Un péptido que exhibe actividad enzimática de beta-galactosidasa, que tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1 o 32.
2. Un procedimiento para la producción de un producto lácteo, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un sustrato a base de leche que comprende lactosa;
b) añadir un péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa, cuyo péptido tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1 o 32, a dicho sustrato a base de leche que comprende lactosa; y
c) tratar dicho sustrato a base de leche con el péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa; en el que la etapa c) tiene lugar a un pH dentro de un intervalo de 5-8;
en el que la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 30 °C.
3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la etapa c) tiene lugar a un pH dentro de un intervalo de 5-7, tal como dentro de un intervalo de 5-6, tal como dentro de un intervalo de 6-7.
4. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 3, en el que la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 35 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 40 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 45 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 50 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 55 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 60 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 65 °C.
5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que la inhibición de galactosa de dicho péptido es inferior al 60 %, como inferior al 55 %, como inferior al 50 %, como inferior a aproximadamente el 45 %, como inferior a aproximadamente el 40 %.
6. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que dicho producto lácteo es un producto lácteo fermentado y dicha etapa b) se lleva a cabo durante o antes de la fermentación, cuyo procedimiento no requiere la adición de más enzimas después de la fermentación.
7. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en el que la etapa c) se inicia a una temperatura de entre 40 °C y 60 °C, como a una temperatura de entre 40 °C y 50 °C.
8. Uso de un péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa en un procedimiento para la producción de un producto lácteo, comprendiendo el procedimiento las etapas de:
a) proporcionar un sustrato a base de leche que comprende lactosa;
b) añadir el péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa, cuyo péptido tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 1 o 32, al sustrato a base de leche que comprende lactosa; y
c) tratar el sustrato a base de leche con el péptido que exhibe actividad beta-galactosidasa;
en el que la etapa c) tiene lugar a un pH dentro de un intervalo de 5-8;
en el que la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 30 °C.
9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la etapa c) tiene lugar a un pH dentro de un intervalo de 5-7, tal como dentro de un intervalo de 5-6, tal como dentro de un intervalo de 6-7.
10. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a9, en el que la etapa c) o una parte de la etapa c) tiene lugar a una temperatura de al menos aproximadamente 35 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 40 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 45 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 50 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 55 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 60 °C, como por ejemplo al menos aproximadamente 65 °C.
11. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a10, en el que la inhibición de galactosa de dicho péptido es inferior al 60 %, como inferior al 55 %, como inferior al 50 %, como inferior a aproximadamente el 45 %, como inferior a aproximadamente el 40 %.
12. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a11, en el que dicho producto lácteo es un producto lácteo fermentado y dicha etapa b) se lleva a cabo durante o antes de la fermentación, cuyo procedimiento no requiere la adición de más enzimas después de la fermentación.
13. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a12, en el que la etapa c) se inicia a una temperatura de entre 40 °C y 60 °C, como a una temperatura de entre 40 °C y 50 °C.
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