FR2631964A1 - Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus - Google Patents
Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus Download PDFInfo
- Publication number
- FR2631964A1 FR2631964A1 FR8807252A FR8807252A FR2631964A1 FR 2631964 A1 FR2631964 A1 FR 2631964A1 FR 8807252 A FR8807252 A FR 8807252A FR 8807252 A FR8807252 A FR 8807252A FR 2631964 A1 FR2631964 A1 FR 2631964A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- derivative
- glucosyl
- formula
- derivatives
- thymidine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical class O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 title claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 18
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 claims abstract description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 13
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 12
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 claims description 11
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 claims description 8
- -1 6-glucosyl hexadecyl Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VFRROHXSMXFLSN-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose 6-phosphate Chemical class OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O VFRROHXSMXFLSN-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 abstract 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 abstract 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 239000000047 product Substances 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 17
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 108010086652 phytohemagglutinin-P Proteins 0.000 description 6
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 5
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- NJDPBWLDVFCXNP-UHFFFAOYSA-N 2-cyanoethyl dihydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OCCC#N NJDPBWLDVFCXNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DRUIESSIVFYOMK-UHFFFAOYSA-N Trichloroacetonitrile Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C#N DRUIESSIVFYOMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical class CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- HNBQBBSUFYSBJH-GDYHQRTNSA-N (18R,19S,20R)-20-[(1R)-1,2-dihydroxyethyl]-18,19-dihexadecyl-18,19,20-trihydroxyhexatriacontan-17-one Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)[C@@](O)(CCCCCCCCCCCCCCCC)[C@](O)(CCCCCCCCCCCCCCCC)[C@@](O)(CCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)CO HNBQBBSUFYSBJH-GDYHQRTNSA-N 0.000 description 1
- NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O NDVRKEKNSBMTAX-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trichloroethane Chemical compound CC(Cl)(Cl)Cl UOCLXMDMGBRAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 1,4-dithiothreitol Chemical compound SCC(O)C(O)CS VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVXRAFOPTSTNLL-NKWVEPMBSA-N 2',3'-dideoxyadenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1CC[C@@H](CO)O1 WVXRAFOPTSTNLL-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- UPQQXPKAYZYUKO-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trichloroacetamide Chemical compound OC(=N)C(Cl)(Cl)Cl UPQQXPKAYZYUKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JAPYIBBSTJFDAK-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tri(propan-2-yl)benzenesulfonyl chloride Chemical compound CC(C)C1=CC(C(C)C)=C(S(Cl)(=O)=O)C(C(C)C)=C1 JAPYIBBSTJFDAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCLZPNCLRLDXJC-NTSWFWBYSA-N 2-amino-9-[(2r,5s)-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purin-6-one Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@H]1CC[C@@H](CO)O1 OCLZPNCLRLDXJC-NTSWFWBYSA-N 0.000 description 1
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 1
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical group CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical class S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 159000000009 barium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001236 detergent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZJXZSIYSNXKHEA-UHFFFAOYSA-N ethyl dihydrogen phosphate Chemical compound CCOP(O)(O)=O ZJXZSIYSNXKHEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000004674 methylcarbonyl group Chemical group CC(=O)* 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940083251 peripheral vasodilators purine derivative Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N tetraethylammonium Chemical compound CC[N+](CC)(CC)CC CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000522 vaginal cream Substances 0.000 description 1
- 239000000259 vaginal foam Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H11/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by inorganic acids; Metal salts thereof
- C07H11/04—Phosphates; Phosphites; Polyphosphates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Les dérivés de l'invention répondent à la structure : (CF DESSIN DANS BOPI) dans laquelle : - R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe azido, - et R1 un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné de 5 à 30 atomes de carbone, saturé ou insaturé, le cas échéant substitué. Ces dérivés sont utilisables comme compositions antirétrovirales.
Description
GLUCOSYL PHOSPHOTRIESTERS DE DERIVES DE THYMIDINE
AYANT UNE ACTIVITE CONTRE LES RETROVIRUS
L'invention a pour objet des glucosyl phospho- triesters de dérivés de thymidine ayant une activité contre les rétrovirus, en particulier contre HIV-1 et
HIV-2.
De nombreux travaux sont consacrés & la re-
cherche et la mise au point de moyens de détection d'anticorps, de prévention et de traitement de ce type d'infections. Pour la prévention et le traitement des infections provoquées par HIV-1 et HIV-2, on a proposé de mettre en contact in vitro le virus avec des dérivés
de nucléosides.
Dans EP 0216510, on décrit l'utilisation de
dérivés de base puriques, tels que la 2',3'-didéoxyino-
sine (ddI), la 2',3'-didéoxyguanosine(ddG) ou la 2',3'-
didéoxyadénosine (ddA), et des mono- et triphosphates
correspondants.
D'autres nucléosides antiviraux, constitués par des dérivés de 3'-azido 3'-déoxythymidine (AZI)sont décrits
dans EP 0196175.
La mise au point par les inventeurs d'un procédé
de synthèse de dérivés de phosphotriesters de nucléo-
sides a permis de disposer de produits dont l'étude a
révélé une activité avantageuse contre les rétrovirus.
L'invention a donc pour but de fournir de
nouveaux glucosyl phosphotriesters de dérivés de thy-
midine et un procédé de synthèse de ces dérivés.
L'invention vise en outre à fournir des compo-
sitions à effet antirétroviral.
Les dérivés selon l'invention sont caractérisés en ce qu'ils répondent & la structure (I): o-alc O O HO vv OH dans laquelle: - R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe azido, - -al représente un radical hydrocarbon' saturé ou insaturé de 5 à 30 atomes de carbone, le cas échéant substitué. Les groupes de substitution du radical -al représentent avantageusement un groupe alcoyle de 1 & 4 atomes de carbone, un groupe alcoxy de 1 & 4 atomes de
carbone, un groupe amino.
Les phosphodiesters, précurseurs des glucosyl phosphotriesters ci-dessus, entrent également dans la
portée de l'invention.
Les glucosyl phosphodiesters répondent & la structure (II): 0 ow
09 0
- P. HN C;4>
O O $I
O OH
OH.
dans laquelle R est tel que défini ci-dessus.
Selon une variante de synthèse, ces dérivés sont obtenus en mettant en oeuvre les étapes suivantes: On fait réagir un dérivé de glucose-6phosphate de formule (III):
263 1964
OH
QH -
O-P-OH
a OO RO&oe OR dans laquelle les radicaux R, identiques ou différents les uns des autres, représentent des groupes protecteurs de fonction hydroxyle, ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de thymidine de formule (IV): HN fCH3
7
F' ce qui conduit au phosphodiester de formule (V): O
O P-OH
0 | 00
*OR )Oy/
- on élimine les groupements protecteurs et, pour obte-
nir les glucosyl phosphotriesters, on fait réagir le phosphodiester (V) avec un dérivé réactif renfermant le groupe -alc, ce qui conduit au dérivé de phosphotriester de formule (VI): O-alc
O-HN-A CH3
JOÄ OkN
(OH O
N
R' et alc présentant dans les formules ci-dessus les
significations données en rapport avec la structure (I).
Les dispositions qui précèdent permettent d'obtenir des dérivés liposolubles de nucléotides capables de traverser une membrane, par exemple l'en- veloppe d'une cellule ou la barrière méningée, dotés
d'un effet anti-viral & l'égard des rétrovirus.
La réaction de couplage entre les dérivés (III) et (IV) est réalisée & une température supérieure & l'ambiante, plus spécialement de 30 à 100C en milieu
solvant organique.
Des solvants appropriés comprennent la pyridine,
le trichloroéthane.
Lorsqu'on utilise la pyridine comme solvant réactionnel, on obtient le couplage désiré en opérant à
une température de 60 à 80C, notamment voisine de 70C.
La réaction est effectuée sous atmosphère de gaz inerte
tel que l'azote ou l'argon.
On utilise avantageusement un excès de dérivé (III). Un excès en moles de 1,5 à 2 permet de réaliser
le couplage dans des conditions satisfaisantes.
Pour catalyser la réaction de formation du' phosphodiester, on a recours à un composé tel que le
TPSCl, DCCI (Warren C.D. et Jeanloz R.W. (1973) Bioche-
mistry 12 '5038-5045 ou Warren C.D. et Jeanloz R.W.
(1972) Biochemistry 11 2565-2572) ou le trichloroacé-
tonitrile (Cramer F. et Weimann G. (1961) Chem. Ber. 94
996-1007).
Le dérivé de formule (III) utilisé dans la réaction de couplage est sous forme de sel dont la
réactivité favorise le couplage.
Il s'agit notamment de sel de pyridinium de
morpholine/de tétraéthylammonium.
Les groupes protecteurs sont éliminés préala-
blement à la fixation d'une chaine alcoyle.
Parmi les groupes convenant pour la mise en oeuvre de l'invention, on citera les groupes acyle, notamment acétyle, alcoyle substitué tel que benzyle, benzoyle. L'élimination de ces groupes. est réalisée selon les techniques classiques de chimie organique, en opérant dans des conditions n'altérant pas la structure
du phosphodiester (V) et ses substituants.
Les groupements acyle d'un mélange sont éliminés
parexempleàl'aide de solutions de soude ou d'un mélange NH3/MeOH.
Le dérivé réactif renfermant le groupe alc est avanta-
geusement un halogénure, en particulier un bromure ou un
iodure, ou encore un tosylate, ou un sel de sulfonium.
La réaction est réalisée avec avantage en milieu solvant organique, à une température supérieure &
l'ambiante, notamment de 50 à 100'C.
Parmi les solvants organiques utilisables, on
citera l'acétonitrile. Le phosphodiester est de préfé-
rence sous forme d'un sel de haute réactivité et utilisé en excès d'au moins environ 10 -fois Plus. en mole. Dar
rapport au dérivé réactif renfermant le groupe -alc.
Selon une autre variante de synthèse, on fait réagir un dérivé de 6glucose cyanoéthylphosphate de formule (VII): O -CR-4t Cy-L.CN oO-P-OH 00 OR
OR
dans laquelle R est tel que défini en rapport avec la formule (III), ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de thymidine de formule (IV) ci-dessus, puis on élimine les groupes de blocage
des fonctions hydroxyle.
La réaction de couplage est effectuée avanta-
geusement dans un solvant organique, & température
ambiante en présence de TPSNT.
Le dérivé de formule (VII) est avantageusement obtenu par réaction du dérivé de glucose correspondant
avec du cyanoéthylphosphate sous forme de sel réactif.
L'étude des dérivés de formules (I) et (II) ci-dessus a montré qu'à des doses non toxiques pour les
lymphocytes T humains, ces dérivés sont capables d'in-
hiber in vitro l'effet cytopathogène des rétrovirus.
Ces dérivés sont donc avantageusement utili-
sables pour élaborer des compositions antivirales. De telles compositions sont caractérisées en ce qu'elles comprennent une quantité efficace d'au moins un dérivé de formule (I) ou (II) en association avec un véhicule pharmacologique. Ces compositions sont particulièrement utiles
pour traiter le SIDA et les maladies apparentées.
Ces compositions se présentent sous des formes appropriées pour l'administration par voie orale, nasale, topique, rectale, vaginale, souscutanée,
intraveineuse, intramusculaire ou intradermique.
Les compositions administrables par voie orale
comprennent des tablettes, comprimés, granules, so-
lutions ou suspensions en milieu aqueux ou non aqueux.
Pour l'administration par voie rectale, on utilise des suppositoires et par voie vaginale des crèmes ou des mousses. Les formulations utilisées pour l'administration par voie parentérale sont avantageusement formées par des solutions ou des suspensions stériles, isotomiques,
aqueuses ou non-aqueuses.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront en se reportant aux exemples qui suivant et aux figures 1 et 2 qui représentent respectivement - la figure 1, la croissance cellulaire, en fonction du temps dans le cas de cellules témoins et de cellules traitées avec des dérivés selon l'invention; - la figure 2, l'effet des dérivés de nucléotide sur le pouvoir infectieux de HIV-1 pour des lymphocytes humains T.
EXEMPLE 1: Préparation de dérivés de l'azido-3'-
thymidine ou AZT.
1. Préparation du sel de pyridinium du 1,2,3,4-
tétra-O-acétyl 6-D-glucose phosphate, de formule: OH
OO-P--OH
R& OR
dans laquelle R = acétyle.
Le 1,2,3,4-tétra-O-acétyl 6-D-glucose phosphate est préparé selon Whistler R.L., Doner L.W. et Kosik M. (1972) Methods in Carbohyd. Chem. Vol. VI, 711-712 Academic Press NY ou Lardy H.A. et Fischer H.O.L. (1946)
J. Biol. Chea. 164 513-519.
On soumet à agitation pendant 16 h à température
ambiante 5 g (16,44 mmoles) de sel de sodium du 6-D-
glucose phosphate et 18 ml (190,4 mmoles) d'anhydride acétique distillée dans 20 ml de pyridine. On obtient une solution orangée avec un précipité blanc: la réaction est contrôlée par CCM (CH2Cl2/MeOH/H20: 60/35/5) Rf départ = O, Rf produit acétylé: 0,61. Le précipité est filtré et dans le filtrat on ajoute avec précaution environ 100 ml de glace -et 10 ml d'eau pour hydrolyser l'anhydride en excès. On laisse l'hydrolyse se poursuivre 30 minutes. Le mélange est évaporé & sec sous vide et coévaporé plusieurs fois ensuite avec du toluène. On reprend par de l'eau et on lave plusieurs fois la phase aqueuse avec du dichlorométhane. La phase aqueuse est ensuite réduite de volume avant d'être
passée sur une colonne de résine Dowex 50WX8 préala-
blement échangée sous forme pyridinium. La sortie de colonne est contrôlée par CCM et les bonnes fractions
sont lyophilisées. m = 6,54 g, Rdt = 68 %.
2. Préparation du 1,2,3,4-tétra-O-acétyl 6-glucosyl 5'-(azido-3') thymidinyl phosphate (Composé 1 dans la formule ci-dessous): O
O-;P-OH
1 R = CH3CO
OR 3OR
RO OR O O" 2 R - H
Ns On soumet à une co-évaporation & trois reprises, avec de la pyridine anhydre, 200 mg (0,75 mmoles) d'azido-3' thymidine (AZT) et 656 mg (0,75 mmoles x 1,5 excès) de 1,2,3,4-tétra O-acétyl 6-D-glucose phosphate sous forme pyridinium. On ajoute environ 15 ml de pyridine anhydre et 2,56 ml de trichloroacétonitrile (0,75 mmoles x 35 excès). On chauffe le mélange à 70'C en agitant bien et en maintenant sous atmosphère d'azote pendant 16 h. On évapore à sec sous vide puis on reprend le mélange par un minimum de dichlorométhane et on précipite par l'éther de pétrole. On décante l'éther de pétrole et le précipité est chromatographié sur colonne de silice Merck 7734 V éluée avec du dichlorométhane enrichi en méthanol. Le composé est élué vers un mélange
à 10 % de méthanol.
m = 540 mg Rdt: 95 %, Rf = 0,54 (CH2Cl2/MeOH/H20
13/5/1).
3. Préparation du 6-glucosyl 5'-(azido-3')-
thymidinyl phosphate (composé. 2 dans la formule ci-
dessus). Ce composé sera désigné ci-après par le code 6715. On utilise 540 mg de produit 1 obtenu précédem- ment. On élimine les groupes acétyle dans du méthylate de sodium à 1 % dans du méthanol pendant 10 minutes à température ambiante. Il apparait un léger trouble. On vérifie par CCM que la réaction est complète. On neutralise par addition de résine Dowex 50WX8 H+ I. A pH = 7, on filtre la résine et le précipité et on évapore la phase méthanolique à sec. On reprend par un minimum d'eau et passe sur colonne de Biogel P2 200/400
mesh a éluée à l'eau. La sortie de colonne est dé-
tectée par UV à 254 nm. Après vérification par CCM, les fractions contenant le composé cherché sont lyophilisées avant d'être repassées sur une colonne de silice C-18
éluée à l'eau afin d'achever la purification.
m = 283 mg Rdt = 67 %, Rf. = 0,65, isopropanol/NH4/OH/H20
7/1/2.
4. Préparation du sel de pyridinium du 1,2,3,4
tétra-O-acétyl 6-D-glucose P-cyanoéthyl phosphate.
On échange le sel de baryum du cyanoéthyl phosphate en sel de pyridinium en le passant sur colonne de Dowex H+ (3 et en recueillant le produit dans de la pyridine.
L'échange porte sur 2,5 g de cyanoéthyl phos-
phate. On évapore à sec après passage sur la colonne. On obtient 7,75 mM de sel de pyridinium que l'on co-évapore trois fois avec de la pyridine. On ajoute 2,58 aM de 1,2,3,4 tétracétyl glucose, soit 900 mg. On coévapore 2 fois avec de la pyridine. On reprend dans 20 ml de pyridine anhydre, puis on ajoute 7 ml (58 mM) de trichloroacétonitrile fraichement distillé. On dégaze avec de l'azote et on laisse à 75'C sous azote durant 14
26'31964
heures environ.
La solution est évaporée à sec, reprise dans un minimum de CH2C12 et précipitée avec de l'éther de pétrole. La purification est effectuée sur colonne de lice (9385 Merck a. On élue avec du CH2Cl2 enrichi en MeOH. On obtient 760 mg de produit (61 %). Rf: 0,51;
CH2Cl2/MeOH (8/1).
5. Préparation du 6-glucosyl 5'-(azido-3') thy-
midinyl phosphate 2 (6715) à partir du 6-glucosyl cyano-
éthyl phosphate.
mg (0,75 mmoles) d'AZT et 469 mg (0,97 mmoles) de 1,2,3,4 tétra acétyl-6glucose cyanoéthyl
phosphate sont coévaporés trois fois avec la pyridine.
On ajoute 4 ml de pyridine anhydre et 616 mg de TPSNT (2 éq.). On laisse 3 h & température ambiante. Après lavage avec une solution de NaHCO saturée puis H20, la
phase organique est séchée sur Na2SO4 et évaporée & sec.
La purification se fait: 1) sur une colonne de silice Merck 9385, 2) sur une colonne de Séphadex LH 20 ( éluée avec le mélange THF/MeOH 95/5. On obtient 312 mg (55 %) du phosphotriester dont on élimine les groupes acétyle avec du méthylate de sodium 1 % pendant 15 minutes, à température ambiante. Le même traitement que précédemment, après neutralisation avec une résine Dowex donne le composé 21 (165 mg) identique'à celui obtenu
sous 3.
6. Echange du sel de pyridinium en sel de tétrabutyl-ammonium. On prépare une colonne de résine Dowex 5OWX-que l'on a équilibrée sous forme tétrabutyl-ammonium en mettant à échanger de la résine Dowex 50WX8 H+ ( sous agitation pendant deux heures dans l'hydroxyde de tétrabutylammonium concentré puis en le lavant jusqu'&
pH neutre des eaux de lavage.
, Les 283 mg de 2 obtenus précédemment sont passés sur cette colonne. On recueille les fractions absorbant
& 254 nm qui sont lyophilisées.
308 mg, Rdt: 85 %, Rf: inchangé, Masse FAB 508 (M+1),
HPLC: 2 pics 5,00 et 5,33 mm.
7. Préparation du 6-glucosyl hexadecyl 5'- (azido-3')thymidinyl phosphate l désigné ci-après par le
code 6651.
O o
HO&
O
-O- N- -
I
UO C 3 (6651)
OH W
N3 On évapore sous vide avec de l'acétonitrile anhydre 2,80 mg de diester sous forme tétrabutylammonium 0,372 mmoles) et 2,11 ml de 1-idohexadecane (0,372
mmoles x 18 excès). Puis on ajoute environ 15 ml d'acé-
tonitrile anhydre et on chauffe & 80'C pendant 16 à 20
heures. On contrôle alors la réaction par CCM. On éva-
pore à sec le mélange, on reprend par un minimum de dichlorométhane et on dépose la solution sur colonne de
silice Merck 7734 a. L'élution se fait au dichloro-
méthane pur pour enlever la chaine en excès. Ensuite, on enrichit en méthanol. Les fractions contenant le phosphotriester sortent à une concentration de 10-15 % en méthanol. Après concentration, ces fractions sont repassées sur une colonne de Séphadex LH 20 a éluée avec un mélange THF/MeOH 80/20. On obtient 150 mg, 55 %, Rf = 0,695 isopropanol/NH4OH/H20 7/1/2, Masse FAB+ 734
(M+1), HPLC temps de rétention 13,77 min et 14,11.
EXEMPLE 2.
Préparation de dérivés de dérivés de 3'-désoxy-
thymidinyle. Les produits dont la synthèse est rapportée ci-après présentent les formules correspondantes données dans l'exemple 1, le nucléotide étant remplacé par le
3'-désoxy thymidinyl.
1. Préparation du 1,2,3,4 tétra-O-acétyl 6-glu-
cosyl 5',(3'-désoxy)thymidinyl phosphate.
On opère comme précédemment. 100 mg de 3'-déso-
xy-thymidine (ddT) (0,442 mmoles) et 388 mg de tétra-
acétyl 6-D-glucose phosphate (0,442 mmoles x 1,5 excès) traités avec 1,5 ml CCl3CN, (0,442 x 34 excès) ont donné
215 mg, Rdt: 68 %, Rf = 0,6 (CH2Cl2/MeOH/H20 13/5/1).
2. Préparation du 6-glucosyl 5'-(3'-désoxy)-
thymidinyl phosphate (désigné sous le code 6714).
On opérant comme précédemment en purifiant sur Biogel et silice C-18 (, on obtient les résultats suivants: m = 72 mg, Rdt = 44 %, Rf = 0,58 (isopropanol/NH4OH/H20
7/1/2).
Echange en sel N(Bu)+4, m = 90 mg, Rdt = 96 %,
Rf inchangé, masse FAB = 468 (M - 1), HPLC temps réten-
tion = 10,77 min.
3. Préparation du 6-glucosyl hexadecyl 5'-(3-
-désoxy)thymidinyl (désigné sous le code 6650).
Sur 137 mg de diester N(Bu+) (0,193 mmoles) et 1,091 ml d'iodo-1hexadecane (0,193 mmoles x 18 excès),
on obtient m = 28 mg, Rdt = 21 %, Rf = 0,63 (isopropa-
nol/NH4OH/H20 7/1/2).
masse FAB = 693 (M + 1), HPLC temps rétention 3 pics
(12,71 min, 13,04 min, 13,38 min).
Les mesures en HPLC rapportées dans les exemples sont effectuées en utilisant des colonnes en phase inverse Nucléosil C18 C (1/4" x 15 cm) analytique, (1/2" x 25 cm) préparative. Les conditions sont les suivantes, A représentant l'acétonitrile, et B l'acétate de triéthylammonium 10-2, pH 7: triester: 50 % A 20 mn4 95 % A dans A + B (en 20 mn) diester: 5 % A 20 25 % A dans A + B (en 20 mn) útude in vitro du transDort transmembranaire L'étude du comportement du phosphotriester de la thymidine comme modèle sur des vésicules unilamellaires de 200 nm de diamètre, en spectroscopie RMN du 31p et 3 C a montré que le phosphotriester traverse la couche lipidique et se retrouve intact & l'intérieur des vésicules, alors que les phosphodiesters correspondants soit ne traversent pas, soit font -éclater les vésicules
(effet détergent) aux concentrations utilisées.
EXEMPLE 3: Etude des produits à action rétro-
virus. Le virus utilisé est un rétrovirus recombinant d'origine murine (MoMLV) o un gène reporter (LacZ) a été introduit. Il est produit dans des lignées transcromplémentantes qui ne produisent pas de virus sauvages. Des quantités fixes de rétrovirus recombinants LacZ sont mises en présence de cellules testrices infectables de souris (3T3) avec ou sans le produit & tester. A chaque rétrovirus recombinant correspond un clone de cellules gal+. Le nombre de clones de cellules B gal+ est lu 48 heures après l'infection. Le % du virus résiduel (non inhibé par le produit) est indiqué dans le tableau 2 suivant (moyenne de plusieurs manipulations indépendantes):
Tableau 2
-4M 10-5M 10-6 10-7
AZT 0% 0% 0% 1%
6715 0% 0% 3%
6651 11% 65% 94%
ddt 78% 87% 101%
6714.4% 12%.. 66%
6650 79% 78% 96%
Les produits AZT, 6714 sont actifs par eux-
mêmes. EXEMPLE 4: Etude de l'effet des dérivés de phosphodiesters et de phosphodiesters sur le pouvoir
infectieux du virus HIV1, in vitro.
a) Produits testés On rapporte ci-après les résultats obtenus avec les produits des exemples appelés 6651 et 6714. Chaque produit a été dissous dans du DMSO & une concentration de 10- 3M (solution-mère), puis, dans le milieu de culture immédiatement avant l'emploi. La solution ainsi obtenue a été stérilisée par filtration sur Millipore O.22. puis des dilutions successives ont été réalisées
dans du milieu de culture.
b) Milieu de culture Les cultures de lymphocytes T humains sont maintenues dans du milieu RPMI 1640 contenant 10% de sérum de veau foetal (Seromed), 1% de glutamine (Gibco), 1% d'antibiotiques (PSN, Gibco), 10% d'interleukine Il (Biotest), 2 pg/ml de polybrène (Sigma) et une dilution 1/2500 de sérum-interféron a humain. Ce milieu est
appelé milieu complet.
La lignée de cellules MT4 est cultivée à raison de 3 x 105 cellules/ml dans un milieu RPMI 1640 contenant 10% de sérum de veau foetal, 1%
d'antibiotiques et 1% de glutamine.
c) Cellules La cytotoxicité des produits a été étudiée sur des lymphocytes T humains obtenus à partir du sang périphérique d'un donneur séro-négatif. Préalablement au traitement, ces lymphocytes sont stimulés par de la
phytohémagglutinine p (pHAp) (Difco) pendant 3 jours.
L'effet des produits sur la multiplication du virus HIV1 a été éudié sur des lymphocytes T humains obtenus à partir du sang périphérique d'un donneur séronégatif. les lymphocytes ont été isolés par gradient de Ficoll (Pharmacia) puis stimulés pendant 3 jours par de la phytohémagglutinine p (pHAp) (Difco) avant d'être utilisés pour le traitement et l'infection par le virus
HIV1.
L'action des produits sur l'effet cytopathogène du virus HIV1 a été étudiée à l'aide de la lignée de cellules MT4. Cette lignée est une lignée de cellules T humaines transformées par le virus HTLV1. Ces cellules sont particulièrement sensibles au virus HIV1 puisque 6 à 7 jours après surinfection par des quantités infimes de virus HIV1, elles montrent un effet cytopathogène important conduisant 10 à +80% des cellules vers la mort. L'effet cytopathogène est directement corrélé à l'infection des cellules par le virus, à sa réplication intracellulaire et à l'expression des antigènes viraux par les cellules. Une inhibition de cet effet correspond donc à une inhibition de la multiplication du virus HIV1. d) virus Il s'agit de surnageants de cellules T lymphoblastoides (lignée CEM) infectés par le virus HIV1 (souche LAV). l'activité de la préparation virale non diluée, utilisée pour les lymphocytes humains était de
200.00 cpm/ml.
2) Méthodes a) Etude de la cytotoxicité des produits pour des cellules T. 106 lymphocytes stimulés par de la pHAp ont été traités pendant 10 jours par des doses croissantes de i6 produit (10 5M; 5 X 10-6M; 10-6M). Le produit a été ajouté à chaque passage cellulaire effectué tous les 3 ou 4 jours. A chaque passage, les cellules ont été comptées après coloration au bleu trypan puis remises en suspension à 106 cellules par ml dans du milieu complet contenant ou non des doses croissantes de produit. Cette expérience a été réalisée dans une plaque à 24 puits (Nunc). b) Action des produits sur le pouvoir infectieux du virus HIV1 pour des lymphocytes T humains. - Action
d'un traitement après adsorption virale-.
Des lymphocytes humains préalablement stimulés par de la pHAp ont été infectés par du virus HIV1 (activité transcriptase inverse: 5000 cpm/106 cellules). Après 1 heure d'adsorption virale à 37'C, les lymphocytes ont été resuspendus & 106 cellules par ml dans du milieu de culture contenant ou non des doses
croissantes de chaque produit (10 5M; 5 x 10 6M; 10-6M).
Tous les 3 ou 4 jours (passages cellulaires), les cellules ont été centrifugées puis resuspendues à 10 cellules par ml dans du milieu de culture contenant le produit. La production virale a été suivie à chaque' passage (et cela pendant 13 jours) en mesurant l'activité trandcriptase inverse présente dans 1 ml de surnageant de culture. La production 'virale par les cellules traitées a pu être ainsi comparée à celle
observée pour les cultures témoins non traitées.
c) Mesure de l'activité transcriptase inverse La production du virus HIVI par des cellules T humaines traités ou non par chaque produit été régulièrement suivie en mesurant l'activité transcriptase inverse présente dans 1 ml de surnageant de culture. Cette méthode est décrite par Rey et al dans B.B.R.C. (1984), 124, 121-133. I ml de surnageant est concentré 100 fois par ultracentrifugation, puis l'activité enzymatique de cet échantillon est déterminée dans 50pl d'un mélange réactionnel contenant SOmM Tris pH 7,9, 2OmM KCl, 5mM MgC12, lmM dithiotreitol, 0,05 OD/ml Poly A, 0,05 OD/ml oligodtl2-18, 5pCi3HTTP et 0,1% triton X100. Après 1 heure d'incubation & 37*C, les produits acido-insolubles sont précipités par de l'acide trichloracétique 20%, filtrés sur Millipore 0, 45p puis la radioactivité P contenue dans ces produits de
réaction est mesurée à l'aide d'un compteur à scintilla-
*tion Kontron.
d) Action des produits sur l'effet cytopathogène du virus HIV1 pour les cellules MT4. - Etude du
traitement après adsorption virale-.
Les cellules MT4 ont été infectées par 100pl de virus HIV1 pour 3.105 cellules dans un volume de 1 al. Après 30 minutes d'adsorption virale à 37'C, les cellules ont été lavées puis remises en suspension à raison de 3.105 cellules/ml dans du milieu contenant chaque produit aux concentrations suivantes: 10 5M; 45 x
10-6M et 10-6M.
Au jour +3, les suspensions cellulaires ont été ramenées à 3.105 cellules/ml après dilution avec du milieu frais. le produit a été rajouté aux doses correspondantes. Au jour +7, l'effet cytopathogène a été évalué
au microscope après coloration au bleu trypan.
II - Résultats 1) Etude de la cytotoxicité des produits pour
des lymphocytes T humains.
Sur la figure 1, on a rapporté la variation de la croissance cellulaire (x106 cellules/ml) en fonction du temps, en jours. Les représentation utilisées ont les significations suivantes:_ témoin cellules; cellules traitées avec les produits obtenus dans l'invention à
des concentrations de 10 3MM 5X10-6M et 10-6MT.
Comme le montre cette figure 1, un traitement de jours par le produit 6651 est sans effet significatif sur la croissance de cellules T in vio aux doses utilisées. Lorsque les cellules sont traitées par le produit 6714 aux mêmes doses pendant 3 jours, aucun
effet n'est observé sur la multiplication cellulaire.
2) Effet des produits sur le pouvoir infectieux
du virus HIV1 pour des lymphocytes T humains.
La figure 2 montre que le produit 6651 à la dose de 10-5M entraîne une inhibition totale de la multiplication du virus. Un traitement par le produit 6714 provoque une inhibition partielle proportionnelle &
la dose de produit utilisée.
3) Action des produits sur l'effet cytopathogène
du virus HIV1 pour les cellules MT4.
Les résultats obtenus sont rapportés dans le tableau 1 ci-après: Effet cvtoDathogêne au jour +7 Produit Concentrations Expérience N'I Expérience N'2
6651 10-5M
x10-6M +
Â0-6M +
7 x10' M + +
6714 10-5M NT -
x10-6M NT +
-6M NT +
0 + +
+ = 100% de mort des cellules au jour +7 - = inhibition totale de l'effet cytopathogène NT = non testé Le produit 6651 inhibe cet effet cytopathogène à 10-6M dans une première expérience et à 10 5M dans une
seconde expérience.
Le produit 6714 à 10O 5 s'est révélé inhiber le
pouvoir cytopathogène du virus lors d'une expérience.
Sur la figure 2, on a rapporté l'activité RTx104 (cpm x 106cellules) la fonction du temps, en jours. La courbe _ ' représente les résultats avec le virus témoin; les résultats obtenus en utilisant les produits testés à des concentrations respectivement de 10 5M, x10 6M et 10 6M sont représentés par.---, -.- et *._
Claims (6)
1. Dérivés de thymidine, caractérisés en ce qu'il s'agit de glucosyl phosphotriesters de structure I: I O-alc f\OH \ OH VOj HOv( V-J OH nO-H dans laquelle: - R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe azido, alc représente un radical hydrocarboné saturé ou insaturé de 5 à 30 atomes de carbone, le cas échéant substitué.
2. Dérivés selon la revendication 1, caracté-
risés en ce que le groupe alc représente un groupe alcoyle de I à 4 atomes. carbone, un groupe alcoxy de
1 à 4 atomes de carbone oL un groupe amino.
3. Glucosyl phosphotriester caractérisé en ce qu'il s'agit du 6-glucosyl hexadécyl 5'-(azido-3')
thymidinyl phosphate ou du 6-glucosyl-hexadécyl-5'-
(3'-désoxy)thymidinylephosphate.
4. Glucosyl phosphodiesters de dérivés de thy-
midine, caractérisé en ce qu'ils répondent à la struc-
ture II:
OH 0
HN-
HO O'O
OH p"
dans laquelle E est tel que défini ci-dessus.
5. Procédé de synthèse des dérivés de thymidine
selon l'une quelconque des revendications précédentes,
caractérisé en ce qu'on fait réagir un dérivé de glucose-6-phosphate de formule (III): OH
O-P-OH
ROT.< O
OR dans laquelle les radicaux R, identiques ou différents les uns des autres, représentent des groupes protecteurs de fonction hydroxyle, ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de thymidine de formule (IV):
HO MN&CH3
HN6 o- oL.)
V
A' ce qui conduit au phosphodiester de formule (V): o
0 O
OR O, o
- on élimine les groupements protecteurs et, pour obte-
nir les glucosyl phosphotriesters, on fait réagir le phosphodiester (V) avec un dérivé réactif renfermant le groupe -alc, ce qui conduit au dérivé de phosphotriester de formule (VI):
22 2631964
O Alc R' R' et ale présentant dans les formules ci-dessus les significations données en rapport avec la structure (1), ou qu'en variante, on fait réagir un dérivé de 6-glucose cyanoéthyl phosphate de formule (VII): 0 - cm- zzcm t. C.a %00
OR
dans laquelle P est tel que défini en rapport avec la formule (III), ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de thymidine de formule
(IV) ci-dessus.
6. Compositions antivirales caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité efficace d'au moins un
dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 & 4,
en association avec un véhicule pharmaceutiquement
acceptable.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8807252A FR2631964B1 (fr) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus |
| PCT/FR1989/000269 WO1989012062A1 (fr) | 1988-05-31 | 1989-05-31 | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus |
| EP89907766A EP0369001A1 (fr) | 1988-05-31 | 1989-05-31 | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus |
| US07/460,959 US5393744A (en) | 1988-05-31 | 1990-01-29 | Glucosyl phosphotriesters of thymidine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8807252A FR2631964B1 (fr) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2631964A1 true FR2631964A1 (fr) | 1989-12-01 |
| FR2631964B1 FR2631964B1 (fr) | 1990-09-07 |
Family
ID=9366796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8807252A Expired - Lifetime FR2631964B1 (fr) | 1988-05-31 | 1988-05-31 | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5393744A (fr) |
| EP (1) | EP0369001A1 (fr) |
| FR (1) | FR2631964B1 (fr) |
| WO (1) | WO1989012062A1 (fr) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5159067A (en) * | 1987-01-28 | 1992-10-27 | University Of Georgia Research Foundation Inc. | 5'-Diphosphohexose nucleoside pharmaceutical compositions |
| FR2642428A1 (fr) * | 1989-01-30 | 1990-08-03 | Pasteur Institut | Derives glycosyl phospholipidiques de nucleosides et leur application en tant que medicaments |
| US5358937A (en) * | 1989-01-30 | 1994-10-25 | Institut Pasteur | Glycosyl phospholipid derivatives of nucleosides and their use as medicines |
| FR2699178B1 (fr) * | 1992-12-16 | 1995-02-10 | Pasteur Institut | Dérivés glycosyl phosphotriesters et leur utilisation au niveau du système nerveux central. |
| WO1994013686A1 (fr) * | 1992-12-16 | 1994-06-23 | Institut Pasteur | Derives glycosyl phosphotriesters et leur utilisation au niveau du systeme nerveux central |
| US5760013A (en) * | 1996-08-21 | 1998-06-02 | National Science Council | Thymidylate analogs and the use thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4837311A (en) * | 1987-06-22 | 1989-06-06 | Hoffman-La Roche Inc. | Anti-retroviral compounds |
-
1988
- 1988-05-31 FR FR8807252A patent/FR2631964B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-05-31 WO PCT/FR1989/000269 patent/WO1989012062A1/fr not_active Ceased
- 1989-05-31 EP EP89907766A patent/EP0369001A1/fr not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-01-29 US US07/460,959 patent/US5393744A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| TETRAHEDRON LETTERS, vol. 28, no. 31, 1987, pages 3581-3584, Pergamon Journals Ltd, Oxford, GB; F. IGLESIAS GUERRA et al.: "Synthetic 6-glucosyl phospholipid as a drug transport system" * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1989012062A1 (fr) | 1989-12-14 |
| EP0369001A1 (fr) | 1990-05-23 |
| FR2631964B1 (fr) | 1990-09-07 |
| US5393744A (en) | 1995-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0339842B1 (fr) | Dérivés d'oligoribonucléotides et leur utilisation comme agents antiviraux | |
| EP0117777B1 (fr) | Nouveaux composés comportant une séquence d'oligonucléotide liée à un agent d'intercalation, leur procédé de synthèse et leur application | |
| EP0169787B1 (fr) | Application d'oligonucléotides liés à un agent intercalant à titre de médicament | |
| US4681933A (en) | 2',3'-dideoxy-5-substituted uridines and related compounds as antiviral agents | |
| FR2580283A1 (fr) | Nouveau conjugue nucleoside-phospholipide | |
| PT707591E (pt) | Esteres de acido metilfosfonico, processo para a sua preparacao e sua utilizacao | |
| FR2607507A1 (fr) | Nouveaux derives a-d-oligonucleotides, leur preparation et leur emploi | |
| MC1846A1 (fr) | Derives de pyrimidine | |
| CZ545290A3 (en) | Process for preparing novel 2', 3'-dideoxy-2'-fluoronucleosides and 2', 3'-dideoxy-2', 3'-didehydro-2'-fluoronucleosides | |
| EP0531016B1 (fr) | Polysulphate d'un dérivé de bêta-cyclodextrine et son procédé de préparation | |
| FR2470774A1 (fr) | Derives de nucleosides, leur preparation et leurs utilisations therapeutiques | |
| FR2631964A1 (fr) | Glucosyl phosphotriesters de derives de thymidine ayant une activite contre les retrovirus | |
| EP0739901B1 (fr) | Dérivés d'oligoribonucléotides et leur application comme agents antiviraux | |
| FR2922551A1 (fr) | Prodrogues phosphoesters de la gemcitabine comme agents anticancereux | |
| JPS6260393B2 (fr) | ||
| FR2642428A1 (fr) | Derives glycosyl phospholipidiques de nucleosides et leur application en tant que medicaments | |
| EP0342599A2 (fr) | Dérivés d'oligosaccharides polyacétyls | |
| KR960015408B1 (ko) | 글루코피라노즈 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제학적 조성물 | |
| US5169842A (en) | Oligophosphates with an antiviral action | |
| US5358937A (en) | Glycosyl phospholipid derivatives of nucleosides and their use as medicines | |
| Camplo et al. | Synthesis and comparative anti-HIV activities of new acetylated 2′, 3′-dideoxy-3′-thiacytidine analogues | |
| JPS63150293A (ja) | エトポシド水溶性誘導体 | |
| FR2758562A1 (fr) | Nouveaux derives d'acides mixtes aminobenzyliques, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent | |
| FR2677026A1 (fr) | Nucleosides a base modifiee. | |
| McClard et al. | The phosphonate analog of 5-methylthioribose 1-α-phosphate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse | ||
| ST | Notification of lapse |