FR2665363A1 - Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines. - Google Patents
Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines. Download PDFInfo
- Publication number
- FR2665363A1 FR2665363A1 FR9009753A FR9009753A FR2665363A1 FR 2665363 A1 FR2665363 A1 FR 2665363A1 FR 9009753 A FR9009753 A FR 9009753A FR 9009753 A FR9009753 A FR 9009753A FR 2665363 A1 FR2665363 A1 FR 2665363A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- bleomycin
- protein
- pharmaceutical composition
- composition according
- inactivating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 103
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 title claims abstract description 85
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 title claims abstract description 84
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 81
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 241001515886 Tolypocladium geodes Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 5
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 4
- 108010025544 Bleomycin hydrolase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027058 Bleomycin hydrolase Human genes 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 2
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims description 2
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 claims description 2
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 2
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 claims description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010083912 bleomycin N-acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 60
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2s,3r,4r,5s)-4-carbamoyl-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)- Chemical compound N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(C)=O)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(O[C@H]1[C@@]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)(C)O[C@H]1[C@@H]([C@](O)([C@@H](O)C(CO)O1)C(N)=O)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C QRBLKGHRWFGINE-UGWAGOLRSA-N 0.000 description 13
- LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N Phleomycin Natural products N=1C(C=2SC=C(N=2)C(N)=O)CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C LTQCLFMNABRKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108010035235 Phleomycins Proteins 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 5
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 241000203644 Streptoalloteichus hindustanus Species 0.000 description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 241001147844 Streptomyces verticillus Species 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 3
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010051779 Bone marrow toxicity Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTPGJEROJZHISI-DFGCRIRUSA-N Gaillardin Chemical compound C1=C(C)[C@H]2[C@@H](OC(=O)C)C[C@@](C)(O)[C@@H]2C[C@@H]2C(=C)C(=O)O[C@H]21 UTPGJEROJZHISI-DFGCRIRUSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- UTPGJEROJZHISI-UHFFFAOYSA-N Pleniradin-acetat Natural products C1=C(C)C2C(OC(=O)C)CC(C)(O)C2CC2C(=C)C(=O)OC21 UTPGJEROJZHISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 244000007853 Sarothamnus scoparius Species 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 description 2
- 241000201744 Streptosporangium violaceochromogenes Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 231100000366 bone marrow toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 108010021493 platomycin Proteins 0.000 description 2
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 108700003774 talisomycin Proteins 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 108700039493 victomycin Proteins 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710142009 Protein insensitive Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 101150010882 S gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000546283 Streptomyces toyocaensis Species 0.000 description 1
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 101150038738 ble gene Proteins 0.000 description 1
- 229940040609 bleomycin injection Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 108700016226 indium-bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 108700008119 phleomycin D1 Proteins 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/14—Peptides containing saccharide radicals; Derivatives thereof, e.g. bleomycin, phleomycin, muramylpeptides or vancomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4873—Cysteine endopeptidases (3.4.22), e.g. stem bromelain, papain, ficin, cathepsin H
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
La présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un antibiotique de la famille des bléomycines et au moins une protéine inactivant la dite ou lesdites bléomycines administrable avant, pendant et/ou après l'administration des bléomycines. Elle a pour objet de réduire les effets secondaires induits par les bléomycines au niveau de certains organes. Les protéines inactivant les bléomycines peuvent être produites par une souche de Tolypocladium geodes transformée.
Description
La présente invention concerne une composition pharmaceutique à base d'antibiotiques de la famille des bléomycines d'une part, et de protéines inactivant les bléomycines d'autre part, dans laquelle les effets secondaires induits par les bléomycines au niveau de certains organes seront considérablement réduits.
Les bléomycines sont des antibiotiques antitumoraux découverts en 1966 (Umezawa et coll., 1966) qui sont très largement utilisés, seuls ou en association avec d'autres molécules pour le traitement des cancers. L'intérêt des bléomycines réside dans leur activité élevée contre des tumeurs variées (lymphomes, carcinomes testiculaires, carcinomes des cellules squameuses ...) et leur faible toxicité hépatique, rénale et vis à vis de la moëlle osseuse qui les distinguent de la plupart des autres antitumoraux. Cependant une limitation importante à l'utilisation des bléomycines est leur toxicité pulmonaire, caractérisée par l'apparition fréquence de fibroses interstitielles irréversibles et souvent létales chez les patients traités à haute dose (J.M. Bennett et S.D. Reich, 1979).Cet effet est dose-dépendant et cumulatif ; il a pu être reproduit sur différents modèles animaux (pour revue. J.H. Harrison Jr et J.S. Lazo, 1987) les bléomycines constituent même un outil pour l'étude expérimentale des fibroses pulmonaires (I.H. Raisfeld, 1978).
Des gènes bactériens de résistance aux antibiotiques de la famille des bléomycines ont été décrits. Sous la dénomination générique phléor, ils ont été clonés et incorporés dans des cellules procaryotes et eucaryotes. Cela permet d'utiliser les antibiotiques de la famille des phléomycines à titre de marqueur de sélection dans le domaine du génie génétique (brevet FR 84 13502) (brevet EP 85 904261-6). Le gène phléor peut être porté par un vecteur de clonage ou d'expression, ou bien intégré dans un chromosome de la cellule qui exprimera ce caractère de résistance aux phléomycines. Les gènes peuvent s'exprimer chez des procaryotes ou des eucaryotes supérieures ou inférieures, c'est-à-dire notamment chez les bactéries, les levures, les champignons, les cellules animales ou végétales.
On a ainsi pu obtenir une souche recombinante de champignon filamenteux Tolyplocladium geodes, exprimant un gène de résistance aux phléomycines. L'adjonction en amont dudit gène d'une séquence signal fongique a permis l'excrétion de la protéine de résistance dans le milieu de culture (demande de brevet francais n" 89 08838).
La présente invention se rapporte à une composition pharmaceutique comprenant au moins un antibiotique de la famille des bléomycines et au moins une protéine inactivant ladite ou lesdites bléomycines administrables avant, pendant et/ou après l'administration des blé omycin es.
La terminologie bléomycine désignera ci-après aussi bien les bléomycines elles-mêmes que les glycopeptides antibiotiques de la même famille.
Il s'agit notamment des mélanges de bléomycines qui diffèrent essentiellement par la fonction amine terminale ou des produits isolés, bléomycine A ou bléomycine B et notamment bléomycine A2, mais également des produits tels que les phléomycines, tallysomycines, platomycines, victomycines et qui sont préparés notamment à partir des microorganismes suivants - Streptomyces verticillus ATCC 15003 (bléomycines) - Streptomyces verticillus ATCC 21678 (bléomycines) - Streptomyces verticillus ATCC 21890 (phléomycines) - Streptomyces flavoridis ATCC 21892 (phléomycines) - Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31158 (tallysomycines) - Streptosporangium
violaceochromogenes sub. sp. ATCC 21893 (platomycines)
globophilum - Streptosporangium
violaceochromogenes ATCC 21807 (victomycines) - Streptomyces toyocaensis ATCC 31248 (S.F. 1771)
Les antibiotiques de la famille des bléomycines, après administration par voie générale, présentent une activité élevée contre des tumeurs variées. Mais si leur toxicité hépatique, rénale, et vis à vis de la moëlle osseuse est faible, les bléomycines présentent une toxicité pulmonaire élevée chez l'homme et chez certaines espèces animales.
violaceochromogenes sub. sp. ATCC 21893 (platomycines)
globophilum - Streptosporangium
violaceochromogenes ATCC 21807 (victomycines) - Streptomyces toyocaensis ATCC 31248 (S.F. 1771)
Les antibiotiques de la famille des bléomycines, après administration par voie générale, présentent une activité élevée contre des tumeurs variées. Mais si leur toxicité hépatique, rénale, et vis à vis de la moëlle osseuse est faible, les bléomycines présentent une toxicité pulmonaire élevée chez l'homme et chez certaines espèces animales.
L'utilisation de protéines inactivant les bléomycines en cause permet de réduire les effets secondaires desdites bléomycines.
Il peut s'agir notamment - d'enzymes qui scindent les bléomycines en produits pas ou peu toxiques
tels que les hydrolases, - d'enzymes qui modifient les bléomycines en produits pas ou peu toxiques
tels que les transférases, - les protéines qui complexent les bléomycines, notamment les protéines de
fixation aux bléomycines.
tels que les hydrolases, - d'enzymes qui modifient les bléomycines en produits pas ou peu toxiques
tels que les transférases, - les protéines qui complexent les bléomycines, notamment les protéines de
fixation aux bléomycines.
Dans ce qui suit, on se réfère aux figures ci-anexées sur lesquelles
La FIGURE 1 représente le gène Ble du plasmide PUBîlO
La FIGURE 2 représente le gène Ble Tn5 du transposon Tn5
La FIGURE 3 représente le gène Ble Sh de Streptoalloteichus hindustanus
La FIGURE 4 représente le gène Ble 990 de Streptomyces sp CL990
La FIGURE 5 représente la comparaison des séquences protéiques de 4 protéines codées par les gènes Ble de Streptoalloteichus hindustanus (Sh), de Streptomyces sp CL990 (S990), du plasmide pUB110 (PUBîlO) et du transposon TN5 (TN5).
La FIGURE 1 représente le gène Ble du plasmide PUBîlO
La FIGURE 2 représente le gène Ble Tn5 du transposon Tn5
La FIGURE 3 représente le gène Ble Sh de Streptoalloteichus hindustanus
La FIGURE 4 représente le gène Ble 990 de Streptomyces sp CL990
La FIGURE 5 représente la comparaison des séquences protéiques de 4 protéines codées par les gènes Ble de Streptoalloteichus hindustanus (Sh), de Streptomyces sp CL990 (S990), du plasmide pUB110 (PUBîlO) et du transposon TN5 (TN5).
La FIGURE 6 représente le gène de la bléomycine acétyl tranférase de streptomyces sp CL990
La FIGURE 7 représente le plasmide PUT751
On a pu identifier des protéines inactivant les bléomycines de différents types, certaines étant isolées à partir de tissus animaux, d'autres étant codées par des gènes bactériens de résistance aux antibiotiques.
La FIGURE 7 représente le plasmide PUT751
On a pu identifier des protéines inactivant les bléomycines de différents types, certaines étant isolées à partir de tissus animaux, d'autres étant codées par des gènes bactériens de résistance aux antibiotiques.
- La bléomycine hydrolase a été purifiée à partir de poumons de lapin (Sebti et al. 1987). Sa présence a pu être correlée à la plus ou moins grande sensibilité de certains tissus à la toxicité des bléomycines.
Son activité est élevée dans les tissus sains et dans les tumeurs résistantes aux bléomycines, dans les poumons de lapin et d'espèces résistant à la toxicité des bléomycines. Cette activité est pratiquement nulle dans les poumons et dans les tumeurs sensibles. A l'intérieur d'une même espèce, la souris, des différences de sensibilité constatées entre différentes lignées pourraient être correlées à l'activité bléomycine hydrolase pulmonaire. Son mode d'action est connu : elle agit en hydrolysant la liaison carboxamide de la partie aminoamilamide de la molécule, qui est ainsi transformée en déaminogléomycine, pratiquement inactive.
- La bléomycine acétyltransférase est une enzyme de résistance bactérienne, mise en évidence récemment. Cette enzyme est capable de transférer le groupement acétyl de l'AcétylCoA sur les bléomycines, produisant une molécule acétylée, inactive. La séquence nucléotidique du gène de la bléomycine acétyltransférase a été déterminée chez Streptomyces Sp. CL990 et la séquence de la protéine en a été déduite. La séquence de ce gène est représentée sur la figure 6.
- Les protéines bactériennes de résistance aux antibiotiques de la famille des bléomycines, agissent en complexant l'antibiotique. Les gènes correspondant aux protéines de ce groupe ont été isolés et clones chez différentes espèces bactériennes.
Parmi les protéines de fixation aux bléomycines, il faut citer en particulier les protéines correspondant aux protéines de la figure 5 - Protéine Sh, - protéine S 990, - Protéine pUB 110, - Protéine Tn 5, ainsi que leurs dérivés actifs.
Les dérivés actifs peuvent être déduits de l'analyse des homologies . Parmi ces dérivés, il faut citer les dérivés glycosylés ou non, les dérivés de type Met-protéine lorsque le produit est d'origine bactérienne ou bien des dérives comportant une extension N-terminale notamment un radical glutaminyl qui améliore la stabilité de la protéine par cyclisation en pyroglutamyl.
Un des gènes codant pour ce type d'enzymes est porté par le plasmide naturel pUB110 de Staphylococcus aureus (Armau et coll., 1984, Mac Kenzie et coll., 1986), un autre par le transposon Tn5 d'Escherichia coli (Armau et coll., 1984, Genilloud et coll., 1984, Mazodier et coll., 1985).
D'autres gènes ont été clonés à partir du génome d'organismes producteurs d'antibiotiques de la famille des bléomycines, comme Streptoalloteichus hindustanus (Armau et coll., 1984) ou Streptomyces sp. CL990. Les figures 1 à 4 représentent les séquences nucléotidiques des 4 gènes de résistance mentionnés ci-dessus. Ces séquences nucléotidiques, provenant d'organismes très différents, présentent très peu d'homologie. En revanche, les protéines codées par ces gènes sont assez fortement homologues sur le plan de leur structure primaire (figure 5) et sur celui de leurs propriétés physicochimiques, poids moléculaires, point isoélectrique, profil d'hydropathie.
Le mode d'action de la protéine codée par le gène de S.
hindustanus dénommée protéine Sh a été élucidé (Gatignol et coll., 1988).
L'inactivation de l'antibiotique a lieu par formation d'un complexe équimoléculaire réversible mais très fort avec la protéine. I1 est probable que le mécanisme d'action des autres protéines mentionnées sur la figure 5 est identique. L'antibiotique ainsi complexé ne possède plus d'activité antimicrobienne et son action in vitro de cassure de 1'ADN catalysée par l'oxygène et le fer est inhibée.
La présente invention propose donc d'associer l'administration de bléomycines par voie générale, en particulier parentérale, et l'administration de protéines inactivant les bléomycines par un mécanisme quelconque, notamment l'un de ceux décris ci-dessous.
L'administration des protéines inactivant les bléomycines se fera de façon à se concentrer sur ou dans certains organes, notamment par une voie évitant le passage systémique, de façon à localiser cette activité à un organe déterminé sur lequel se concentre la toxicité. L'activité antitumorale des bléomycines sur les tissus cibles ne sera ainsi pas entravee. Par contre, les effets toxiques indésirables pourront être contre-carrés. La protection d'un organe déterminé contre la toxicité des bléomycines pourra donc être réalisée, dès l'instant qu'une voie est disponible pour l'administration des protéines inactivant les bléomycines.
L'administration de ces protéines inactivant les bléomycines devra être réalisée de telle sorte que leur action soit simultanée à celle des bléomycines. Les protéines inactivatrices pourront donc être administrées préalablement aux bléomycines, de façon à ce que la concentration en protéines inactivatrices s'équilibre et à réaliser une imprégnation de l'organe à protéger.
L'administration des protéines inactivatrices pourra être réalisée en même temps que celle des bléomycines.
Selon la biodisponibilité des bléomycines dans l'organe considéré, l'administration des protéines inactivatrices pourra se faire après celle des bléomycines. On pourra bien entendu combiner ces différentes cinétiques d'administration.
L'une des applications de cette invention est la protection contre les fibroses pulmonaires induites par les bléomycines. L'administration des protéines inactivant les bléomycines sera avantageusement réalisée par voie d'aérosol, qui assure une bonne diffusion pulmonaire du produit.
Une autre voie d'abord envisageable est l'injection intrapleurale, qui permet en outre d'atteindre les ganglions pulmonaires, inaccessibles par les autres voies.
L'un des aspects de cette invention concerne l'obtention des protéines inactivant les bléomycines en grande quantité, purifiées. Nous avons considéré plus particulièrement la composition pharmaceutique incluant des protéines complexant les bléomycines comme protéines inactivatrices.
Les gènes de résistance aux bléomycines, et particulièrement les gènes ble Sh et ble Tn5 ont été clonés et exprimés chez différents organismes : bactéries, levures (Gatignol et coll., 1989, Gaillardin et Ribet, 1988), champignons (Durand et coli., 1987, Kolar et colle., 1988, van
Engelenburg et coll., 1989), cellules animales (Mulsant et coll., 1988), cellules végétales (Hille et coll., 1986, Perez et coll., 1989) conférant aux clones ainsi obtenus une résistance élevée aux antibiotiques de la famille des bléomycines. La protéine de résistance est normalement intracellulaire mais après fusion avec un peptide signal approprié, on a pu obtenir l'excrétion de la protéine dans l'espace périplasmique d'E. coli (Gatignol et coll. 1988) et dans le milieu de culture par le champignon Tolypocladium geodes (H. Durand et T.Calmels, demande de brevet français n 89 08838) déficient en protéases et poussant dans un milieu relativement simple. Dans ce dernier cas, la sélection de clones fortement résistants a conduit à des productions de protéine Sh extracellulaire de l'ordre de 2 g/l en 6 jours de fermentation. Une telle productivité, alliée à la facilité de purification de la protéine Sh a permis d'envisager sa production à grande échelle à des fins thérapeutiques.
Engelenburg et coll., 1989), cellules animales (Mulsant et coll., 1988), cellules végétales (Hille et coll., 1986, Perez et coll., 1989) conférant aux clones ainsi obtenus une résistance élevée aux antibiotiques de la famille des bléomycines. La protéine de résistance est normalement intracellulaire mais après fusion avec un peptide signal approprié, on a pu obtenir l'excrétion de la protéine dans l'espace périplasmique d'E. coli (Gatignol et coll. 1988) et dans le milieu de culture par le champignon Tolypocladium geodes (H. Durand et T.Calmels, demande de brevet français n 89 08838) déficient en protéases et poussant dans un milieu relativement simple. Dans ce dernier cas, la sélection de clones fortement résistants a conduit à des productions de protéine Sh extracellulaire de l'ordre de 2 g/l en 6 jours de fermentation. Une telle productivité, alliée à la facilité de purification de la protéine Sh a permis d'envisager sa production à grande échelle à des fins thérapeutiques.
I1 convient d'ajouter que la construction utilisée a conduit à l'excrétion d'une protéine comportant 2 acides aminés supplémentaires : une glutamine et une alanine en N-terminal par rapport à la protéine d'origine. La présence d'un résidu glutamine en N-terminal rend, après cyclisation spontanée en pyroglutamyl, la protéine insensible à la réaction d'Edman (ce qui a été vérifié expérimentalement) ainsi qu'à l'attaque par les aminopeptidases, enzymes largement répandues dans les tissus animaux et particulièrement dans les tissus pulmonaires.
La protéine Sh peut être préparée à partir d'un surnageant de culture de Tolypocladium geodes transformé par le plasmide pUT720. On le purifie par chromatographie sur colonne échangeuse d'ions et sur phénylsepharose en présence de sulfate d'ammonium 1M. Après dessalage par passage sur une colonne de gel Sephadex G25 médium (Pharmacia) d'aliquots successifs, on obtient une solution titrant environ 2 g/l de protéine Sh. C'est cette solution qui sera utilisée pour l'expérimentation, après filtration sur une membrane de porosité 0,2 p.
Son efficacité à titre de traitement préventif des fibroses pulmonaires induits par les bléomycines a été vérifiée sur un lot de souris.
Ont été étudiés simultanément un lot de souris témoins ne recevant aucun traitement, un lot de souris recevant la bléomycine seule, un lot de souris recevant la protéine Sh seule, et un lot de souris traitées à la fois par la bléomycine et la solution de protéine Sh. La bléomycine était administrée par injections IV, la solution de protéine Sh par aérosol ; on a utilisé un dispositif de pulvérisation destiné à produire des aérosols pour le traitement de certaines affections ORL, la solution de protéine Sh étant administrée immédiatement après l'injection de bléomycine, pendant 4 heures. Les animaux sont exposés au traitement par cycles répétés, et sont placés dans une atmosphère normale entre chaque cycle. Six semaines après l'arrêt du traitement, les animaux sons sacrifiés et une étude histologique de leurs poumons est réalisée.
On constate une diminution significative de l'incidence des fibroses pulmonaires chez les animaux traités par la bléomycine et recevant la protéine Sh, par rapport aux animaux traités par la bléomycine seule.
L'activité protectrice de la protéine Sh a donc été démontrée.
I1 est logique de penser que des résultats similaires seront obtenus avec les protéines complexant les bléomycines telles que celles déjà identifiées, et plus généralement avec toute protéine capable d'inactiver les bléomycines, par voie enzymatique ou en les complexant.
Les exemples qui suivent concernent un mode de réalisation
Intéressant mais il est clair au vu de ce qui précéde que les protéines en cause peuvent être obtenues par des technologies qui sont connues notamment voir WO 86 01537.
Intéressant mais il est clair au vu de ce qui précéde que les protéines en cause peuvent être obtenues par des technologies qui sont connues notamment voir WO 86 01537.
Les exemples qui suivent sont destinés à illustrer de façon non limitative cette invention.
EXEMPLE I : Préparation de protéine Sh purifiée
La souche de Tolypocladium geodes a été déposée à la Collection
Nationale des Cultures de microorganismes, 28 rue du Docteur Roux 75015 PARIS, sous le n" I 880.
La souche de Tolypocladium geodes a été déposée à la Collection
Nationale des Cultures de microorganismes, 28 rue du Docteur Roux 75015 PARIS, sous le n" I 880.
L'obtention de clones transformants résistants à la phléomycine Indique que le gène codant pour la protéine Sh s'exprime dans la souche NC50 de Tolypocladium geodes. Cependant, la protéine n'a pas pu être mise en évidence dans les surnageants de culture des souches transformées et n'est donc vraisemblablement pas excrétée en quantité dé tectab le.
Dans l'exemple suivant, la souche NC50 a été transformée en utilisant le plasmide pUT751. Ce plasmide se caractérise par la présence, sous la dépendance du promoteur TR1 (T.Calmels, soumis à publication) du gène de la protéine Sh en amont duquel a été ajoutée une séquence signal synthétique d'excrétion (Fig.7).
Parmi les colonies résistantes, obtenues avec une fréquence de 3000 transformants par micro gramme d'ADN, une centaine ont été repiquées sur des boîtes de PDA contenant des concentrations croissantes de phléomycine, de 25 à 1000 ug/ml. 3 souches résistantes à plus de 1000 ug/ml de phléomycine ont ainsi été sélectionnées ; l'une d'elles a été cultivée en fermenteur de laboratoire dans les conditions suivantes : les spores provenant d'une boîte de PDA incubée 7 jours à 27"C ont servi à inoculer 500 ml de milieu selon Mandels contenant 20 g/l de glucose et
I g/l d'extrait de levure, réparti dans deux erlenmeyers de 1 1. Après incubation 48 h sur table agitée à 27"C, 200 rpm, cette culture a permis d'inoculer un fermenteur de 14 litres de volume total (Chemap) contenant 8 litres du même milieu. La fermentation a duré 6 jours à 27"C avec une agitation de 500 rpm et une aération de 0,5 v.v.m, le pH étant régulé supérieur à 5.0 avec de l'ammoniaque. A partir du 2ème jour, une solution stérile de glucose à 200 g/l a été introduite en continu à raison de 0,8 litres par 24 h, soit environ 20 grammes de glucose par litre et par jour.
I g/l d'extrait de levure, réparti dans deux erlenmeyers de 1 1. Après incubation 48 h sur table agitée à 27"C, 200 rpm, cette culture a permis d'inoculer un fermenteur de 14 litres de volume total (Chemap) contenant 8 litres du même milieu. La fermentation a duré 6 jours à 27"C avec une agitation de 500 rpm et une aération de 0,5 v.v.m, le pH étant régulé supérieur à 5.0 avec de l'ammoniaque. A partir du 2ème jour, une solution stérile de glucose à 200 g/l a été introduite en continu à raison de 0,8 litres par 24 h, soit environ 20 grammes de glucose par litre et par jour.
Après 6 jours, la culture a été récoltée et centrifugée. 7 litres d'un surnageant contenant 8,3 g/l de protéines totales, dont environ 20 '?G de protéine Sh ont ainsi été obtenues. Le surnageant a été appliqué sur une colonne de chromatographie de 2 1 de volume remplie avec un gel échangeur d'anions "Q Sepharose Fast Flow" (Pharmacia) équilibrée par un tampon acétate 50 mM pH 4,5. Après lavage par 4 1 de tampon, puis par 4 1 du même tampon contenant du chlorure de sodium à 0,2 M, la protéine Sh a été éluée par le même tampon contenant du chlorure de sodium à la concentration de 0,4 M. A cette fraction, du sulfate d'ammonium cristallisé a été ajouté jusqu'à obtenir une concentration de 1 M.La solution obtenue a été appliquée sur une colonne de 1 1 de Phenyl Sepharose Fast Flow (Pharmacia) équilibrée par du tampon acétate 50 m M pH 4,5 contenant du sulfate d'ammonium à la concentration 1 M. Après lavage par le même tampon, la protéine Sh a été éluée par 2,5 1 de tampon contenant du sulfate d'ammonium à 0,6 M. Cette fraction, contenant 7,2 g de protéine dosée par la méthode de Bradford, dont plus de 95 Ó de protéine Sh (estimée par électrophorèse en gel de polyacrylamide) a été dessalée par passage successif d'aliquots de 300 ml sur une colonne de 2 1 de gel
Sephadex G25 medium (Pharmacia) équilibrée avec une solution aqueuse de chlorure de sodium à 9 g/l. La préparation ainsi obtenue contenait 6,9 g de protéine pour un volume total de 3,55 1, soit environ 2 g/l.Cette solution a été utilisée telle quelle, après filtration sur membrane de O,2 um de porosité, pour l'expérimentation sur souris décrite dans l'exemple 2 ci -après.
Sephadex G25 medium (Pharmacia) équilibrée avec une solution aqueuse de chlorure de sodium à 9 g/l. La préparation ainsi obtenue contenait 6,9 g de protéine pour un volume total de 3,55 1, soit environ 2 g/l.Cette solution a été utilisée telle quelle, après filtration sur membrane de O,2 um de porosité, pour l'expérimentation sur souris décrite dans l'exemple 2 ci -après.
EXEMPLE 2 : Expérimentation sur souris
20 souris femelles C57B46 (Charles River, France) agées de 6 à 8 semaines et pesant de 17 à 20 g ont été réparties en 4 lots de 5 animaux, notés A, B, C et D. Chaque lot a été placé dans une enceinte en matière plastique et a été nourri et abreuvé ad libitum pendant toute la durée de l'expérimentation.
20 souris femelles C57B46 (Charles River, France) agées de 6 à 8 semaines et pesant de 17 à 20 g ont été réparties en 4 lots de 5 animaux, notés A, B, C et D. Chaque lot a été placé dans une enceinte en matière plastique et a été nourri et abreuvé ad libitum pendant toute la durée de l'expérimentation.
Le lot A n'a reçu aucun traitement et servait de témoin.
Le lot B a reçu un traitement consistant en 5 injections intraveineuses au niveau de la veine de la queue d'une solution de phléomycine D1 complexe cuivrique (Cayla). Chaque injection contenait 0,4 mg de phléomycine dissous dans 100 sul de soluté isotonique (chlorure de sodium à 9 g/l apyrogène). L'intervalle entre 2 injections était de 3 jours.
Le lot C a reçu le même traitement par la phléomycine que le lot B. De plus, immédiatement après chaque injection, les animaux étaient placés pendant 4 heures dans une enceinte en plastique de 25 x 25 x 15 cm dans laquelle était pulvérisé par un trou aménagé à cet effet, la solution de protéine Sh décrite dans l'exemple 1 ci-dessus. Le dispositif utilisé pour la pulvérisation était un appareil destiné à produire des aérosols pour le traitement de certaines affections ORL humaines (Atomizor, Saint Etienne,
France). Le réservoir de l'appareil était rempli par 50 ml de solution de protéine Sh au début du traitement et à nouveau rempli après 2 heures. La consommation totale de solution après un cycle de 4 heures de traitement était comprise entre 65 et 90 ml. A la fin de chaque cycle de traitement, les souris étaient replacées en atmosphère normale.
France). Le réservoir de l'appareil était rempli par 50 ml de solution de protéine Sh au début du traitement et à nouveau rempli après 2 heures. La consommation totale de solution après un cycle de 4 heures de traitement était comprise entre 65 et 90 ml. A la fin de chaque cycle de traitement, les souris étaient replacées en atmosphère normale.
Le lot D a reçu 5 injections de 100 ml de soluté isotonique seul, suivies d'un traitement par aérosol de protéine Sh identique à celui appliqué au lot C.
6 semaines après l'arrêt du traitement, soit 8 semaines après le début de l'expérimentation, les animaux ont été sacrifiés et une étude histologique de leurs poumons a été pratiquée selon le protocole décrit ci-après. L'un des animaux du lot B est décèdé 24 jours après 1' arrêt du traitement. L'un des animaux du lot D présentait des symptômes d'hyperthermie et d'anorexie et a dû être sacrifié 4 jours après la fin du traitement. L'étude histologique a également été pratiquée sur ces deux individus.
Etude histologique
Après sacrifice de l'animal par injection d'une solution de pentobarbital de sodium (2 mg), 1 ml d'une solution de formaline à 10 % dans un tampon phosphate 0,1 M pH 7,1 a été injecté dans la trachée. Puis les poumons ont été prélevés et immergés dans la même solution fixatrice pendant 24 heures ou plus. Après inclusion des organes ainsi fixés dans la parafine, des coupes de 5 pm d'épaisseur ont été pratiquées au microtome les sections ont été placées sur des lames pour observation microscopique et colorées par le réactif au trichome selon Mallory.L'observation de ces coupes au microscope optique (grossissement 10X et 50X) a permis, par comparaison avec des organes d'animaux sains d'attribuer une "note" correspondant à la gravité des lésions (les tissus atteints de fibrose étant plus fortement colorés et présentant des hétérogénéités de coloration).
Après sacrifice de l'animal par injection d'une solution de pentobarbital de sodium (2 mg), 1 ml d'une solution de formaline à 10 % dans un tampon phosphate 0,1 M pH 7,1 a été injecté dans la trachée. Puis les poumons ont été prélevés et immergés dans la même solution fixatrice pendant 24 heures ou plus. Après inclusion des organes ainsi fixés dans la parafine, des coupes de 5 pm d'épaisseur ont été pratiquées au microtome les sections ont été placées sur des lames pour observation microscopique et colorées par le réactif au trichome selon Mallory.L'observation de ces coupes au microscope optique (grossissement 10X et 50X) a permis, par comparaison avec des organes d'animaux sains d'attribuer une "note" correspondant à la gravité des lésions (les tissus atteints de fibrose étant plus fortement colorés et présentant des hétérogénéités de coloration).
Ces notes sont les suivantes
0 : pas de fibrose
1: légère atteinte fibrotique
2 : atteinte modérée
3 : forte atteinte
4 : très forte atteinte
Les résultats obtenus sur les 20 animaux observés sont résumés dans le tableau ci-après.
0 : pas de fibrose
1: légère atteinte fibrotique
2 : atteinte modérée
3 : forte atteinte
4 : très forte atteinte
Les résultats obtenus sur les 20 animaux observés sont résumés dans le tableau ci-après.
Il a donc été constaté une diminution significative de l'incidence des fibroses pulmonaires chez les animaux traités par la phléomycine et recevant la protéine Sh par voie aérosol, par rapport aux animaux traités par la phléomycine seule. Parmi ces derniers, l'un des individus (B3) est décédé 24 jours après l'arrêt du traitement, très probablement des suite d'une très forte atteinte fibrotique. La cause de la maladie ayant nécessité le sacrifice de l'individu 4 du lot D n'a pas pu être déterminée, mais l'examen histologique pulmonaire était normal.
<tb>
Lot <SEP> Individu <SEP> n <SEP> Atteinte <SEP> fibrotique
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2
<tb> A <SEP> 3
<tb> <SEP> 4
<tb> <SEP> 5 <SEP> 0
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2 <SEP> 3
<tb> B <SEP> 3 <SEP> 4
<tb> <SEP> 4 <SEP> 1
<tb> <SEP> 5 <SEP> 3
<tb> <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> C <SEP> 3
<tb> <SEP> 4 <SEP> 2
<tb> <SEP> 5
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2
<tb> D <SEP> 3
<tb> <SEP> 4
<tb> <SEP> 5
<tb> : : Individu décédé 24 jours après l'arrêt du traitement ** : Individu sacrifié 4 jours après l'arrêt du traitement
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Umezawa et coll. 1966. J. Antibiotics. 19 : 200-209
Bennett, J.M. et S.D. Reich. 1979. Ann. Int. med. 90 : 945-948
Harrison J.H. Jr et J.S. Lazo. 1987. J. Pharmacol. Exper. Ther. 243 1195-1194
Raisfeld, I.H. 1978. In Bleomycin. Biochemical and Biological Aspects. hecht
Eds.Springer Verlag. pp 325-335
Sebti, S.M. et J.S. Lazo. 1988. Pharmac. Ther. 38 : 321-329
Harrison J.H. Jr et coll. 1989. Mol. Pharmacol. 36 : 231-236
Armau, E., D. Drocourt, G. Etienne et G. Tiraby. 1984. Brevet français n 84 13502
Mac Kenzie et coll. 1986. Plasmid 15 : 93
Genilloud et coll. 1984. Gene 32 : 225 Niazodier et coll. 1985. Nucleic Acids Res. 13 : 195
Gatignol et coll. 1988. FEBS Letters. 230 : 171-175
Sebti S..M. et coll. 1987. Biochemistry. 26 : 4213-4219
Gatignol et coll. 1989. Gene. 91 : 35-41
Gaillardin et Ribet. 1987. Curr. Genet. 11 : 369-375
Durand et coll. 1988. In Biochemistry and Genetics of Cellulose Degrada tion. Academic. Press. 135-151
Kolar et coll. 1988. Gene. 62 : 127-134
Van Engelenburg. 1989. Appl. Microbiol. biotechnol. 364-370
Mulsant et coll. 1988. Somat. Cell. Mol. Genet. 14 : 243-252
Hille et coll. 1986. Plant. Mol. biol. 7 : 171-176
Perez et coll. 1989. Plant. Mol. Biol. 13 : 365-373.
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2
<tb> A <SEP> 3
<tb> <SEP> 4
<tb> <SEP> 5 <SEP> 0
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2 <SEP> 3
<tb> B <SEP> 3 <SEP> 4
<tb> <SEP> 4 <SEP> 1
<tb> <SEP> 5 <SEP> 3
<tb> <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> C <SEP> 3
<tb> <SEP> 4 <SEP> 2
<tb> <SEP> 5
<tb> <SEP> 1
<tb> <SEP> 2
<tb> D <SEP> 3
<tb> <SEP> 4
<tb> <SEP> 5
<tb> : : Individu décédé 24 jours après l'arrêt du traitement ** : Individu sacrifié 4 jours après l'arrêt du traitement
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Umezawa et coll. 1966. J. Antibiotics. 19 : 200-209
Bennett, J.M. et S.D. Reich. 1979. Ann. Int. med. 90 : 945-948
Harrison J.H. Jr et J.S. Lazo. 1987. J. Pharmacol. Exper. Ther. 243 1195-1194
Raisfeld, I.H. 1978. In Bleomycin. Biochemical and Biological Aspects. hecht
Eds.Springer Verlag. pp 325-335
Sebti, S.M. et J.S. Lazo. 1988. Pharmac. Ther. 38 : 321-329
Harrison J.H. Jr et coll. 1989. Mol. Pharmacol. 36 : 231-236
Armau, E., D. Drocourt, G. Etienne et G. Tiraby. 1984. Brevet français n 84 13502
Mac Kenzie et coll. 1986. Plasmid 15 : 93
Genilloud et coll. 1984. Gene 32 : 225 Niazodier et coll. 1985. Nucleic Acids Res. 13 : 195
Gatignol et coll. 1988. FEBS Letters. 230 : 171-175
Sebti S..M. et coll. 1987. Biochemistry. 26 : 4213-4219
Gatignol et coll. 1989. Gene. 91 : 35-41
Gaillardin et Ribet. 1987. Curr. Genet. 11 : 369-375
Durand et coll. 1988. In Biochemistry and Genetics of Cellulose Degrada tion. Academic. Press. 135-151
Kolar et coll. 1988. Gene. 62 : 127-134
Van Engelenburg. 1989. Appl. Microbiol. biotechnol. 364-370
Mulsant et coll. 1988. Somat. Cell. Mol. Genet. 14 : 243-252
Hille et coll. 1986. Plant. Mol. biol. 7 : 171-176
Perez et coll. 1989. Plant. Mol. Biol. 13 : 365-373.
Claims (15)
- REVENDICATIONSI) Composition pharmaceutique comprenant au moins un antibiotique de la famille des bléomycines et au moins une protéine inactivant la dite ou lesdites bléomycines administrable avant, pendant et/ou après l'administration des bléomycines.
- 2) Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est choisie parmi - les enzymes qui scindent les bléomycines en produits pas ou peu toxiques.toxiques.- les enzymes qui modifient les bléomycines en produits pas ou peu- les protéines qui complexent les bléomycines.
- 3) Composition pharmaceutique selon la revendication 2, caractérisée en ce que les protéines inactivant les bléomycines sont choisies parmi - les bléomycines hydrolases - les bléomycines transférases - les protéines de fixation aux bléomycines.
- 4) Composition pharmaceutique selon la revendication 3, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est une protéine de résistance aux bléomycines, d'origine bactérienne.
- 5) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est une bléomycine acétyl transférase.
- 6) Composition pharmaceutique selon la revendication 3, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est une bléomycine hydrolase.
- 7) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est une protéine recombinante.
- 8) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 4 et 7, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est choisie parmi les protéines suivantes décrites à la figure 5.- Protéine Sh - Protéine S 990 - Protéine PUB 110 - Protéine TN5 et leurs dérivés inactivant les bléomycines.
- 9) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est produite par une souche de Tolypocladium geodes transformée.
- 10) Composition pharmaceutique caractérisée selon la revendication 9, caractérisée en ce que la souche de Tolypocladium geodes est transformée par le plasmide pUT751 et produit la protéine Sh.
- 11) Composition pharmaceutique selon l'une des revendica tions 9 et 10, caractérisée en ce que la protéine Sh est purifiée à partir du milieu de culture de T. geodes.
- 12) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications I à Il, caractérisée en ce que la protéine inactivant les bléomycines est administrée de façon à se concentrer sur ou dans certains organes.
- 13) Composition pharmaceutique selon la revendication 12, caractérisée en ce que les protéines inactivant les bléomycines sont administrées par voie aérosol.
- 14) Composition pharmaceutique selon la revendication 12, caractérisée en ce que les protéines inactivant les bléomycines sont administrées par voie intrapleurale.
- 15) Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce que la bléomycine est administrée par voie systém ique.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9009753A FR2665363B1 (fr) | 1990-07-31 | 1990-07-31 | Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines. |
| PCT/FR1991/000623 WO1992002230A1 (fr) | 1990-07-31 | 1991-07-26 | Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9009753A FR2665363B1 (fr) | 1990-07-31 | 1990-07-31 | Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2665363A1 true FR2665363A1 (fr) | 1992-02-07 |
| FR2665363B1 FR2665363B1 (fr) | 1992-12-04 |
Family
ID=9399268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR9009753A Expired - Fee Related FR2665363B1 (fr) | 1990-07-31 | 1990-07-31 | Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2665363B1 (fr) |
| WO (1) | WO1992002230A1 (fr) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0667164B1 (fr) * | 1994-02-10 | 1999-12-29 | MUCOS EMULSIONSGESELLSCHAFT m.b.H. | Utilisation d'enzyme hydrolytique pour réduire ou empêcher les effets secondaires de la bléomycine |
| US20210244805A1 (en) * | 2020-02-11 | 2021-08-12 | University Of South Carolina | Pharmaceutical for prevention of bleomycin-induced pulmonary fibrosis |
-
1990
- 1990-07-31 FR FR9009753A patent/FR2665363B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-07-26 WO PCT/FR1991/000623 patent/WO1992002230A1/fr not_active Ceased
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 110, no. 1, 2 janvier 1989, page 4, résumé no. 92w, Columbus, Ohio, US; J.S. LAZO et al.: "Pulmonary metabolic inactivation of bleomycin and protection from drug-induced lung injury", & DEV. ONCOL. 1988, 53(ORGAN DIRECTED TOXIC. ANTICANCER DRUGS), 128-39 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2665363B1 (fr) | 1992-12-04 |
| WO1992002230A1 (fr) | 1992-02-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1124835B1 (fr) | Application de fuco-oligosaccharides sulfates a la protection des plantes | |
| WO1991000357A1 (fr) | Nouvelle souche et ses mutants de champignons filamenteux, procede de production de proteines recombinantes a l'aide de ladite souche et souches et proteines obtenues selon ce procede | |
| EP0193555B1 (fr) | Application des antibiotiques de la famille des phleomycines a titre d'agent de selection dans le domaine du genie genetique | |
| PT871718E (pt) | Produção de carboxipeptidase b recombinante, activa sob o ponto de vista enzimático. | |
| CA2145523C (fr) | Polypeptides impliques dans la biosynthese des streptogramines, sequences nucleotidiques codant pour ces polypeptides et leur utilisation | |
| FR2641285A1 (fr) | Gene de la glucose-6-phosphate deshydrogenase, plasmide et microorganisme le contenant et procede de preparation de la glucose-6-phosphate deshydrogenase | |
| EP0954567A2 (fr) | Genes de glycosyle hydrolases et leur utilisation pour la production d'enzymes de biodegradation des carraghenanes | |
| FR2841260A1 (fr) | Polynucleotides et polypeptides codes par lesdits polynucleotides impliques dans la synthese de derives des dicetopiperazines | |
| US5155041A (en) | Culture of Bacillus subtilis | |
| US5863788A (en) | Recombinant L-methionine Y-lyase | |
| WO1992002230A1 (fr) | Composition pharmaceutique comprenant une ou des bleomycines, et une ou des proteines inactivant les bleomycines | |
| JP2641742B2 (ja) | 新規ペプチド及び抗菌剤 | |
| JP3375834B2 (ja) | 組換えＬ−メチオニン γ−リアーゼ | |
| JP2850132B2 (ja) | 抗腫瘍性抗生物質ケダルシジン | |
| JP2000175698A (ja) | ピラノースオキシダーゼを含有するピラノース測定用試薬 | |
| JPWO2000052043A1 (ja) | 抗ヒト免疫不全ウイルス活性を有するポリペプチド、ポリペプチドをコード化する遺伝子、ポリペプチドの製造方法 | |
| JP2641744B2 (ja) | 新規ペプチド及び抗菌剤 | |
| JP3638341B2 (ja) | 新規生理活性物質ＡＨＰＡ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ、その製造法およびその用途 | |
| FR2530663A1 (fr) | Nouvel antibiotique a activite antitumorale, sa production et son obtention | |
| CA2166298A1 (fr) | Famille de peptides appeles xenoxines | |
| KR100468547B1 (ko) | 아시네토박토 종 ｓｙ－０１의 리파제 코딩 유전자 및이로부터 발현되는 리파제 | |
| FR2693199A1 (fr) | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, préparation et utilisation. | |
| JP4095815B2 (ja) | トリプシンの新規インヒビターｔｕ−５３５０物質とその製造法及び用途 | |
| FR2810993A1 (fr) | Peptides antimicrobiens de la famille des defensines, polynucleotides codant ces peptides, vecteurs et organismes transformes les contenant | |
| EP0706567B1 (fr) | Famille de peptides appeles xenoxines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20090331 |