FR2859103A1 - Procede d'obtention d'un principe actif detoxifiant pour la peau, principe actif obtenu - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est un procédé d'obtention d'un principe actif à partir de tourteau de karité et le principe actif qui en est issu.Ce principe actif présente des activités anti-radicalaires, détoxifiantes vis-à-vis des agressions chimiques, plus particulière du chlore, de la nicotine, et des activités chélatrices du plomb et du fer.
Description
PROCEbE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF DETOXIFIANT POUR LA
PEAU, PRINCIPE ACTIF OBTENU La présente invention concerne un procédé d'obtention d'un principe actif détoxifiant de la peau, ainsi que le principe actif obtenu.
L'invention couvre aussi l'actif obtenu, à partir de karité, Butyrospermum parkii. L'organisme subit en permanence toutes sortes d'agressions gaz d'échappement, air climatisé, mais aussi de façon importante celle du tabac.
Ces causes, mieux connues sous le nom de pollution atmosphérique, sont liées à une modification de l'air pur par modification des proportions de ses composants et/ou par adjonction de molécules polluantes telles que le benzène, les hydrocarbures aromatiques ou les métaux lourds.
La peau, organe de contact avec l'environnement avec une fonction barrière, est la plus directement soumise à l'agression de ces toxiques de la pollution. C'est pourquoi, dans les environnements pollués, il est fréquemment constaté une recrudescence des cas d'irritation, de sensibilité sur des peaux saines, ou même l'aggravation de certaines dermatoses. C'est le phénomène dit vieillissement environnemental, qui met en jeu des espèces chimiques très réactives, susceptibles d'altérer les différents composants cellulaires. En effet, les éléments polluants se mélangent aux salissures naturelles et au sébum de la peau et génèrent, sous l'action des rayonnements ultra violets, des toxines et des radicaux libres.
Lorsque la peau est soumise quotidiennement à des stress environnementaux, les effets sont multiples: - acidification de la peau, 2859103 2 troubles de l'hydratation cutanée avec une augmentation de fa perte insensible en eau et une modification des lipides de surface, - augmentation de la desquamation cutanée et perte de souplesse de la cornée, et - processus inflammatoire et prédisposition aux réactions d'intolérance. Ces phénomènes de vieillissement environnemental s'ajoutent au vieillissement chronologique contre lequel il est difficile de lutter.
Le but de l'actif selon l'invention est de limiter les effets néfastes liés à l'environnement en utilisant un procédé particulier d'obtention à partir du 10 karité.
Ce même actif se comporte comme un puissant chélateur de métaux et présente un fort pouvoir anti-radicalaire qui lui confère des effets détoxifiants.
1/ PROCEDE D'OBTENTION DU PRINCIPE ACTIF solubilisation d'au moins 50 g/I de tourteau de karité, Butyrospermum parkii, dans une solution hydroglycolique d'au moins 107. d'un glycol, plus spécifiquement le butylène glycol, modification du pH vers la plage acide afin de solubiliser les molécules actives, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, centrifugation et/ou filtration, et filtration(s) successive (s) afin de clarifier le produit obtenu et de concentrer la composition en molécules actives.
2/ CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION 2-1/ Taux de matière sèche: Le taux de matière sèche est obtenue par passage à l'étuve à 105 C, d'un échantillon de 10g de produit jusqu'à obtention d'un poids constant.
Le taux de matière sèche est compris entre 5 et 70 g/l, et plus particulièrement entre 18 et 28 g/l.
2-2/ Mesure du pH: Le pH est mesuré à température ambiante par la méthode potentiométrique. Le pH est compris entre 4,0 et 7,0 et plus particulièrement entre 4,5 et 5,5. 10 2-3/ bosage des composés phénoliques: Le dosage est réalisé par lecture de l'intensité de coloration en présence de ferricyanure de potassium, intensité détectable à 715 nm et comparée à une gamme étalon d'acide gallique.
Le taux de composés phénoliques est compris entre 1 et 20 g/l, plus 15 particulièrement entre 4,5 à 7,5 g/l.
2-4/ Caractérisation des composés phénoliques du principe actif: La caractérisation et la quantification des composés phénoliques du principe actif selon la présente invention sont réalisées par HPLC, (High Performance Liquid Chromatography).
Le taux de chaque polyphénol est déterminé au moyen d'une gamme étalon des polyphénols synthétiques identifiés, de 10 à 500pg/ml.
Le chromatogramme du principe actif de la présente invention montre la présence de composés hydoxybenzoïques, de phénols simples et de flavanols, les proportions étant sensiblement de l'ordre des valeurs données dans le tableau suivant: 2859103 4 Composés phénoliques Concentration t identifiés Hydroxybenzoïques 30% à 52% dont l'acide gallique de 30% à 52 % Phénols simples De 3,2% à 5,3% Flavanols De 38% à 64% dont l'épigallocatéchine galiote de 15% à 26%, et l'épigallocatéchine de 4% à 8% 2-5/ Identification du principe actif dans une émulsion: Le but est d'identifier et de quantifier le principe actif formulé dans une émulsion.
Après un déphasage de l'émulsion, la phase aqueuse obtenue est analysée par HPLC pour déterminer grâce à un marqueur du principe actif le pourcentage de principe actif.
On obtient le résultat suivant: Principe actif dosé en HPLC Aires pics du traceur % Principe actif calculé Principe actif pur 4787 100 Formulation contenant 1% de 41 0,9 principe actif 3/ EFFETS DETOXIFIANTS DU PRINCIPE ACTIF 3-1/ Evaluation du potentiel anti-radicalaire après agression chimique Les facteurs polluants environnementaux agissent sur la peau en induisant un stress oxydatif et une formation de radicaux libres. Pour lutter contre ces agressions, l'organisme possède des systèmes de détoxification, mais si la pollution environnementale est trop importante, ces systèmes sont débordés et les radicaux libres détériorent les tissus, altèrent l'AbN et le système immunitaire.
3-1-1/ Etude de l'activité anti-radicalaire sur kératinocytes humains Les kératinocytes sont les cellules constitutives de la couche superficielle de la 5 peau, l'épiderme et les premiers agressés.
Les cultures cellulaires sont incubées en présence de 0,05%; 0,10%; 0,15% et 0,25% du principe actif et sont agressées chimiquement par une solution hypoxanthine (160 pg/ml) - xanthine oxydase (10 mU/ml).
On évalue la viabilité des kératinocytes.
Les résultats sont récapitulés dans le tableau suivant qui montrent le caractère anti-radicalaire du principe actif selon la présente invention, ceci avec une activité de 83%.
Efficacité (%) Témoin 100 Témoin agressé 0 Principe actif selon l'invention à 0,05% 20 5 Principe actif selon l'invention à 0,10% 65 1 Principe actif selon l' invention à 0,15% 82 8 Principe actif selon l'invention à 0,25% 83 6 3-1-2 Etude de l'activité anti-radicalaire sur fibroblastes humains Les fibroblastes sont des cellules du tissu conjonctif qui sécrètent les composés de la matrice extracellulaire et les protéines du tissu conjonctif. Les cultures cellulaires sont incubées en présence de 0,05%; 0,10%; 0,15% et 0,25% de principe actif et sont agressées chimiquement par une solution hypoxanthine (160 g/ml) xanthine oxydase (10 mU/ml).
6 La viabilité des fibroblastes est évaluée.
Les résultats suivants montrent que le principe actif selon la présente invention présente un fort potentiel anti-radicalaire de 100%, ceci avec seulement une concentration de 0,25%.
Efficacité (%) Témoin 100 Témoin agressé 0 Principe actif selon l'invention à 0,05% 43 7 Principe actif selon l'invention à 0,10% 74 10 Principe actif selon l'invention à 0,15% 76 8 Principe actif selon l'invention à 0,25% 100 13 3-2/ Etude du caractère détoxifiant du principe actif, réaction de Fenton: Au niveau de la peau, l'exposition au soleil augmente le niveau de fer libre qui est un polluant environnemental. Les ions ferreux sont impliqués dans la formation de radicaux libres et provoquent ainsi des dommages au niveau de l'ADN.
Pour évaluer le caractère détoxifiant et dépolluant du principe actif selon l'invention vis-à-vis des ions métalliques, on mesure la viabilité cellulaire de kératinocytes humains "intoxiqués" par le réactif de Fenton (FeCI 2 et eau oxygénée).
Après incubation, les surnageants cellulaires sont éliminés et la viabilité des culots cellulaires est évaluée.
Le principe actif selon l'invention montre une activité dépolluante importante 20 vis-à-vis du réactif de Fenton, de 40% avec une concentration de 0,30%.
Les autres résultats sont également présentés dans le tableau qui suit: Efficacité (%) Témoin 100 Témoin agressé 0 Principe actif selon l'invention à 0,15% 10 4 Principe actif selon l'invention à 0,25% 29 7 Principe actif selon l'invention à 0,30% 40 6 3-3/ Activité chélatrice du principe actif selon l'invention: Les métaux tels que le fer, le plomb sont des éléments toxiques connus qui peuvent induire des réactions d'irritation et des allergies cutanées. Ce sont les kératinocytes, localisés dans l'épiderme, qui stockent ces métaux, et conduisent alors à des réactions locales d'inflammation. Les métaux agissent en interférant avec le métabolisme enzymatique et en lysant l'ADN et les lipides cellulaires.
Pour évaluer le pouvoir chélateur du principe actif selon l'invention visà-vis des ions métalliques, on quantifie le taux de fer et de plomb libre, présent dans les kératinocytes par dosage spectrométrique.
3-3-1 Etude de la chélation du fer Le dosage est réalisé à l'aide d'un kit colorimétrique.
Vis-à-vis du fer, le tableau suivant montre que le principe actif à 1% selon 15 l'invention présente une activité chélatrice de 95% : Activité chélatrice du fer (%) Témoin EDTA (0,1g/I) 99% Principe actif selon l'invention à 0,25% 48% Principe actif selon l'invention à 0,5% 75% Principe actif selon l'invention à 1% 95% Principe actif selon l'invention à 2% 99% 3-3-2/ Etude de la chélation du plomb Le réactif utilisé pour le dosage est le 4-(2-pyridylazo)-résorcinol) qui se lie au plomb non complexé pour donner une coloration orangé.
Vis-à-vis du plomb, les résultats qui suivent, montrent que le principe actif à 1% 5 selon l'invention présente une activité chélatrice de 95% : Activité chélatrice du plomb (%) Témoin EbTA (0,1g/1) 27% Principe actif selon l'invention à 0,25% 58% Principe actif selon l'invention à 0,5% 85% Principe actif selon l'invention à 1% 95% Principe actif selon l'invention à 2% 97% 3-4/ Effet détoxifiant sur kératinocytes humains vis-à-vis de la libération d'interleukines-8 après exposition aux gaz d'échappement: Les polluants industriels provoquent des inflammations cutanées en stimulant la 10 production et le relargage de cytokines pro-inflammatoires (IL-la; IL-113; TNFa; et IL-8) par les kératinocytes.
Pour évaluer la capacité du principe actif selon l'invention à limiter l'inflammation générée par des gaz d'échappement, on mesure le taux d'interleukines-8 libérées par des kératinocytes humains placé s ou non en présence du principe actif selon l'invention.
Le principe actif de la présente invention est testé à 0,05%; 0,10% et 0, 25%.
On utilise un témoin positif, la dexaméthasone, qui est dilué dans le milieu de culture et testé à 10 M sans le principe actif de l'invention.
Les cellules sont pré-incubées en présence du principe actif ou du témoin positif et placées dans une atmosphère saturée en gaz d'échappement pendant plusieurs heures.
Le dosage des interleukines-8 est réalisé au moyen d'un kit EIA dans les 5 différents milieux d'incubation.
Les résultats qui suivent montrent une diminution significative de la libération des interleukines -8 en présence du principe actif, diminution de 98% : IL-8 Taux d'IL-8 relarguées (pg/puits) / Témoin avec gaz d'échappement (%) Témoin non exposé 24,3 1 '1 38 aux gaz d'échappement Témoin exposé 64,5 8,1 100 aux gaz d'échappement Témoin positif 38,2 4,3 59 (dexaméthasone) Principe actif selon l'invention à 0,05% 12,1 1,1 19 Principe actif selon l'invention à 0,10% 6,1 1,4 9 Principe actif selon l'invention à 0,25% 1,3 0,6 2 3-5/ Effet détoxifiant sur fibroblastes humains après exposition à la nicotine: Les composants toxiques multiples de la fumée de cigarette causent de nombreux dommages au tissu cutané et entraînent notamment une altération de la matrice extracellulaire avec apparition d'un déséquilibre des composants du tissu conjonctif, sécrétés par les fibroblastes.
On montre par la mise en oeuvre du protocole suivant que le principe actif selon la présente invention présente une action détoxifiante vis-à- vis de la nicotine.
A cet effet, on incube des fibroblastes humains avec le principe actif 0, 10%; 0,25%; 0,30% en présence d'une solution de nicotine à 10 nM.
On détermine la viabilité des fibroblastes afin d'évaluer l'effet protecteur du principe actif. Un effet détoxifiant important allant jusqu'à 88% pour une concentration seulement de 0,30% est constaté dans le tableau qui suit: Efficacité (%) Témoin non agressé à la nicotine 100 Témoin agressé à la nicotine 0 Principe actif selon l'invention à 0, 10% 22 9 Principe actif selon l'invention à 0,25% 72 11 Principe actif selon l'invention à 0,30% 88 12 3-6/ Effet détoxifiant sur kératinocytes humains après exposition au chlore: Le chlore est une substance très utilisée dans l'industrie notamment en tant qu'agent anti-microbien, mais c'est également une source de radicaux libres. Une trop grande quantité de chlore peut donc engendrer des dommages important comme notamment la lyse cellulaire.
Pour évaluer le potentiel détoxifiant du principe actif selon l'invention vis-à-vis du chlore, on mesure la viabilité cellulaire de kératinocytes humains.
Les cellules sont incubées avec le principe actif à 0,05%, 0,15%, 0,25% et 0,30% 15 en présence d'une solution de chlore à 0,025%.
La viabilité des kératinocytes est déterminée.
bans le tableau qui suit, on constate que le principe actif montre une activité détoxifiante élevée de 65% en présence de chlore: 2859103 11 Efficacité (%) Témoin non agressé au chlore 100 Témoin agressé au chlore 0 Principe actif selon l'invention à 0,05% 24 8 Principe actif selon l'invention à 0,15% 32 9 Principe actif selon l'invention à 0, 25% 56 9 Principe actif selon l'invention à 0,30% 65 13 Le principe actif peut être introduit dans toute forme galénique adaptée pour le domaine cosmétique et/ou dermatologique.
La forme peut être retenue parmi les formes suivantes: solution aqueuse, 5 éventuellement gélifiée, dispersion huile dans l'eau ou inversement, émulsion, crème, pommade, lait, lotion, sérum, pâte ou mousse, sous forme de stick solide.
Claims (12)
1. Procédé d'obtention d'un principe actif ayant des effets détoxifiants sur la peau, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: solubilisation d'au moins 50 g/I de tourteau de karité, Butyrospermum parkii, dans une solution hydroglycolique d'au moins 10% d'un glycol, modification du pH vers la plage acide afin de solubiliser les molécules actives, - séparation des phases solubles et insolubles par décantation, centrifugation et/ou filtration, et - filtration(s) successive (s) afin de clarifier le produit obtenu et de concentrer la composition en molécules actives.
2. Procédé d'obtention d'un principe actif ayant des effets détoxifiants sur la peau selon la revendication 1, caractérisé en ce que le glycol retenu est le butylène glycol.
3. Principe actif obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, 15 caractérisé en ce qu'il présente les paramètres d'analyse suivants: - taux de matière sèche compris entre 5 et 70 g/I, - pH mesuré à température ambiante compris entre 4,0 et 7,0.
- dosage des composés phénoliques compris entre 1 et 20 g/l, - composés phénoliques essentiels comprenant des hydrobenzoiques, des phénols simples et des flavanols.
4. Principe actif selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il présente les paramètres d'analyse suivants: - taux de matière sèche compris entre 18 et 28 g/I, - pH mesuré à température ambiante compris entre 4,5 et 5,5.
- dosage des composés phénoliques compris entre 4,5 et 7,5 g/I, 2859103 13 - composés phénoliques essentiels comprenant des hydrobenzoïques, des phénols simples et des flavanols.
5. Principe actif selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que les composés phénoliques essentiels sont à des taux compris entre 30% et 52% de composés hydrobenzo ques; de 3,2% à 5,3% de phénols simples et 38% à 64% de flavanols.
6. Principe actif selon la revendication 4, caractérisé en ce que les flavanols comprennent de 15% à 26% d'épigallocatéchine gallate et 4% à 8% d'épigallocatéchine.
7. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à 0,25% présente une activité asti-radicalaire de 83% après une agression chimique sur des kératinocytes et de 100% après une agression chimique sur des fibroblastes.
8. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à une concentration de 0,30% présente une activité détoxifiante vis-à-vis des ions métalliques, la viabilité cellulaire des kératinocytes humains vis-à-vis du réactif de Fenton étant de 40%.
9. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à une concentration de 1,00% présente une activité 20 chélatrice vis-à-vis du fer et du plomb de 95%.
10. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à une concentration de 0,25% provoque une diminution de 98% de la libération des interleukines -8 par des kératinocytes soumis à des polluants industriels.
11. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à une concentration de 0,30% provoque un effet détoxifiant de 88% pour des fibroblastes exposés à la nicotine.
12. Principe actif selon l'une des revendications 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que ce principe actif dosé à une concentration de 0,30% provoque un effet détoxifiant de 0,65% pour des kératinocytes exposés au chlore
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