FR2948563A1 - Utilisation de n-acyl aminoacides comme principes actifs cosmetiques et pharmaceutiques, capables de restaurer les forces isometriques des fibroblastes du derme humain adulte - Google Patents

Abstract

Utilisation d'un composé de formule (I) : dans laquelle R représente un radical hydrocarboné aliphatique, saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, comportant de 9 à 15 atomes de carbone, R représente la chaîne caractérisante d'un acide aminé, ou d'un mélange desdits composés de formule (I), comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Procédé de traitement cosmétique du corps humain destiné à restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain, caractérisé en ce que l'on administre au sujet une composition contenant une quantité efficace d'au moins un composé de formule (I). Utilisation d'au moins un composé de formule (I) pour préparer un médicament, destiné à restaurer les forces isométriques des fibroblastes du derme humain.

Description

La présente invention se rapporte au domaine des principes actifs cosmétiques et pharmaceutiques ainsi qu'aux compositions en comportant. L'augmentation de l'espérance de vie dans les pays développés s'est constamment accompagnée par un désir de "rajeunissement" qui s'est accentué depuis une trentaine d'années. Cette volonté se traduit par des tentatives pour retarder sinon voir disparaître, l'apparition de signes de vieillissement de la peau comme les rides, ou par des tentatives pour retarder le phénomène de relâchement de la peau des adultes vieillissant, qui se traduit notamment au niveau du visage par une modification des traits et des expressions des individus.

Cette évolution comportementale s'est accompagnée par un développement de la recherche scientifique dédiée à la peau ainsi que depuis une dizaine d'années par une croissance rapide du marché des produits cosmétiques destinés à lutter contre le vieillissement de la peau et à permettre son embellissement chez les consommateurs adultes. .

La présente invention s'inscrit dans ce cadre de la recherche de nouvelles molécules ou compositions qui, appliqués sur la peau produisent par leur activité propre, des effets permettant de corriger la détérioration de l'aspect de la peau due à son vieillissement. La peau est composée de trois tissus majoritaires avec, par ordre depuis la surface : l'hypoderme, le derme et l'épiderme ; la jonction épidermique (JDE) s'intercalant entre le derme et l'épiderme. - L'hypoderme constitue la couche profonde de la peau. Il est composé du tissu adipeux et du tissu conjonctif, et il est richement vascularisé et innervé. A l'interface du derme et des structures mobiles sous-jacentes (muscles, tendons, organes), l'hypoderme joue un rôle d'amortisseur et protège ces structures mobiles sous-jacentes vis-à-vis des pressions mécaniques extérieures. L'hypoderme, du fait de la nature du tissu adipeux, possède également un rôle énergétique, métabolique et thermique important. Il stocke notamment les apports énergétiques alimentaires en excès, sous forme de triglycérides (TG), phénomène connu sous le nom de lipogenèse, pour pouvoir ensuite les redistribuer en fonction des besoins du corps humain, phénomène connu sous le nom de lipolyse. Les principaux acteurs de ce tissu adipeux sont les adipocytes et leurs précurseurs, les préadipocytes. - L'épiderme humain naturel est composé de trois types de cellules qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Les kératinocytes prolifèrent essentiellement dans l'assise basale puis se différencient progressivement pour donner les différentes couches de l'épiderme en migrant depuis la profondeur vers la surface, où elles desquament. - Le derme est un tissu conjonctif dense et fibro-élastique, dont la production et le remodelage éventuel sont essentiellement assurés par les fibroblastes et qui est constitué de la matrice extracellulaire (MEC) composée de molécules fibreuses (collagéniques et élastiques), responsables des qualités esthétiques de la peau, ainsi que de la substance fondamentale. Les collagènes représentent 98% du poids sec du derme. Les collagènes fibrillaires (tels que les collagènes de types I, II, III, V, XI, etc....) procurent l'organisation structurale des tissus. Tous ces collagènes fibrillaires s'auto-assemblent en fibres striées qui supportent les charges de tensions mécaniques appliquées à la peau. Les collagènes fibrillaires avec des séquences triples hélices interrompues (collagènes FACIT, tels que les collagènes de type IX, XI, XII, etc....) sont retrouvés à la surface des fibres de collagènes et peuvent ainsi connecter les collagènes fibrillaires aux autres composants de la MEC. La substance fondamentale, est composée, de macromolécules qui comblent les espaces entre les cellules et les fibres ; de glycoprotéines de structure, qui permettent la connexion des cellules à la MEC et qui sont essentiellement localisées sous la jonction dermoépidermique ; et de protéoglycanes, constitués de glycosaminoglycanes (GAG), qui se présentent sous une forme liée à une protéine (liaison covalente). - La jonction dermo-épidermique (JDE) est la zone de jonction entre les kératinocytes basaux de l'épiderme et le derme. Elle se caractérise par la présence d'une membrane basale, dans laquelle la MEC forme un treillis mince et solide. Elle est constituée de cinq composants majeurs, i.e. le collagène de type IV, les laminines, l'héparan sulfate, le nidogène (ou entactine) et la fibronectine. Les fibroblastes interagissent avec de nombreuses macromolécules de la MEC, ce 25 qui va conduire à autant de phénomènes biologiques. L'intégrité de la MEC et de la JDE, ainsi que la différenciation épidermique, dépendent notamment de la présence d'enzymes responsables de la dégradation de nombreux composants de la MEC, les MMP (matrix metalloproteinases en langue anglaise). 30 Les tensions mécaniques appliquées à la peau sont importantes pour le développement et le maintien des tissus. La MEC, sous l'effet de ces stimulations, est capable de s'adapter à ces demandes mécaniques en augmentant la taille des composés des tissus nécessaires à la génération des forces et au stockage de l'énergie requise pour les mouvements. La MEC est soumise à des tensions constantes, présentes à l'interface cellules-fibres du collagène, conduisant à des effets variés tels que les forces électromécaniques, osmotiques, hydrostatiques et hydrodynamiques. La transduction du signal mécano-chimique, dû à des stimulations et/ou des pressions mécaniques, depuis les fibres de collagène jusqu'aux cellules passe par les adhésions focales qui constituent de grands complexes protéiques dynamiques par lesquels le cytosquelette cellulaire entre en contact avec la (MEC). Différents médiateurs entrent en jeu afin d'activer in fine la voie des Mitogen Activated Protein kinases (MAPKs). En bref, l'énergie transmise par la fibre de collagène aux sous-unités d'intégrine provoque des changements au niveau du cytosquelette du fibroblaste, via les adhésions focales, qui affectent à leur tour l'activation de la kinase des adhésions focales (FAK) et stimule la production de messagers secondaires afin d'activer la voie des MAPKs (Silver et al. 2003). Au cours du vieillissement, de nombreux changements interviennent au niveau du derme. Les collagènes sont notamment affectés, ce qui conduit à une désorganisation et à une fragilisation du réseau de collagène. Les points d'attache cellules-MEC se raréfient contribuant ainsi à diminuer les interactions entre les fibroblastes et la matrice. La réponse induite par les fibres de collagène est ainsi diminuée sous la tension appliquée à la (MEC). Une diminution globale de la réponse aux stimuli mécano-chimiques est donc observée. De plus, le taux de protéoglycanes diminue également et les fibres élastiques se fragmentent (Silver et al. 2003).

Les conséquences visuelles de tous ces phénomènes sont la ptose des tissus cutanés, notamment au niveau de l'ovale du visage, des pommettes des joues, etc.... Dans le contexte de la recherche cosmétique, il existe de nombreux principes actifs "anti-âge" ou "antirides". Plusieurs d'entre eux sont capables de réguler le phénotype et/ou les propriétés de fibroblastes humains normaux et de stimuler la production fibroblastique de collagène. Ainsi, parmi les dérivés N-acylés d'acides aminés utilisés dans des applications cosmétiques, certains présentent des propriétés biologiques anti-âge, comme le dipalmitoyl hydroxyproline, commercialisé par la société SEPPIC sous l'appellation SEPILIFTTM DPHP.

Différents modèles expérimentaux ont été décrits afin de modéliser les effets du vieillissement dermique pour pouvoir par la suite les corriger. Parmi ceux-ci, on peut citer des modèles d'étude sur fibroblastes en monocouche qui ont été développés pour permettre de travailler sur cellules âgées ou artificiellement vieillies. Ces modèles de première approche présentent l'inconvénient de n'être qu'en une seule dimension et ainsi de ne pas prendre en compte la matrice retrouvée au niveau physiologique qui influe sur le comportement des fibroblastes. Dans l'optique de palier ces inconvénients, des modèles tridimensionnels ont alors été développés, de façon à mimer un derme reconstruit, également dénommé "derme équivalent". Les modèles d'études les plus répandus sont des modèles en treillis (lattices en langue anglaise) de collagène contenant des fibroblastes. Deux types distincts de modèles de treillis ont été principalement décrits : - Les treillis à rétraction libre, dérivant de la technique décrite par Bell (Bell et al. 1979). Dans ces treillis, le gel flotte dans le milieu de culture et la diminution de volume de l'ensemble cellules/collagène se fait librement. La rétraction s'effectue de façon concentrique et aboutit à un tissu mécaniquement relâché. Le mécanisme de rétraction consiste en un rassemblement et réarrangement du collagène par les fibroblastes. Le collagène se polymérise en fibrilles sur lesquelles s'attachent les cellules grâce aux récepteurs intégrine. Ces dernières tirent sur les fibrilles aboutissant à la diminution du diamètre du gel. Dans ces treillis, les fibroblastes ne prolifèrent pas. - Les treillis sous contraintes, où les fibroblastes présentent un phénotype synthétique et continuent de proliférer. Les fibroblastes présents dans ces treillis sous contraintes présentent un grand intérêt d'étude car ils répondent différemment à la charge mécanique qui leur est appliquée. En effet, les fibroblastes vont modifier leur comportement pour remodeler la matrice en fonction de la tension qui est appliquée à leur environnement (Grinnell, 2003). Dans ces treillis sous contraintes, il est possible de mesurer les forces isométriques développées par les fibroblastes, et par conséquent d'évaluer la capacité d'un principe actif cosmétique à corriger un défaut d'une fonction biologique induit par le vieillissement cutané, comme par exemple la capacité d'un principe actif cosmétique à restaurer les forces isométriques d'un derme reconstruit ou derme équivalent . La technologie G1aSboxTM (ou Growing Lattice Study Box), est par exemple utilisée pour réaliser ce genre d'étude. L'inhibition mécanique de la rétraction du gel de collagène dans lequel les fibroblastes sont inclus, se traduit par la génération de forces, appelées forces contractiles ou forces de contraction ou forces isométriques .

Les modèles d'étude tridimensionnels tels que décrits précédemment constituent des outils performants car ils sont très représentatifs de la physiologie cutanée, en permettant d'isoler en partie des phénomènes présents au niveau du derme.

Un autre modèle d'évaluation alternatif, et également très précis pour l'étude du vieillissement au niveau du derme, consiste à utiliser de la peau reconstruite complète ou des expiants de peau. A notre connaissance, aucun N-acyl aminoacide n'a été décrit comme capable de restaurer les forces isométriques de fibroblastes issus du derme humain de donneurs âgés, c'est à dire capable d'augmenter les forces développées par des fibroblastes issus de donneurs âgés cultivés en G1aSboxTM de façon à ce qu'elles soient comparables à celles développées par des fibroblastes dermiques issus de donneurs jeunes. Selon un premier aspect, l'invention a pour objet l'utilisation cosmétique d'un 10 composé de formule (I) :

RI-C(=O)-NH-CH(R2)-C(=O)-OH (I) L--J dans laquelle RI représente un radical hydrocarboné aliphatique, saturé ou insaturé, linéaire 15 ou ramifié, comportant de 9 à 15 atomes de carbone, R2 représente la chaîne caractérisante d'un acide aminé, ou d'un mélange desdits composés de formule (I), comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Selon un deuxième aspect, l'invention a aussi pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) : 20 RI-C(=O)-NH-CH(R2)-C(=O)-OH (I) L--J dans laquelle RI représente un radical hydrocarboné aliphatique, saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, comportant de 9 à 15 atomes de carbone, R2 représente la chaîne caractérisante 25 d'un acide aminé, ou d'un mélange desdits composés de formule (I), pour la mise en oeuvre d'une méthode thérapeutique destinée à restaurer les forces isométriques des fibroblastes du derme humain Par restauration des forces isométriques de fibroblastes du derme humain, on désigne l'effet consistant à augmenter la valeur des forces isométriques développées par 30 des fibroblastes de sujets âgés auxquels a été administré un ingrédient actif cosmétique, de façon à ce que la valeur des dites forces isométriques soient comparables à la valeur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain issus de sujets jeunes évaluées selon les mêmes conditions opératoires, par la mise en oeuvre de la technologie G1aSboxTM On considérera comme significatif un effet induit par l'action d'un ingrédient actif cosmétique qui augmente de façon statistiquement significative la valeur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain de sujets âgés, par rapport à la valeur des forces isométriques du derme humain de sujets âgés qui n'auraient pas subi l'action dudit ingrédient actif cosmétique, aux différents temps de l'étude, sur une durée de 48 heures, par la mise en oeuvre de la technologie G1aSbox . Les effets statistiquement significatifs ont été déterminés à partir des valeurs brutes par l'utilisation d'un test statistique par analyse de variance (ANOVA), suivi d'un test de Fisher si nécessaire, comparant les valeurs des forces isométriques du derme humain de sujets âgés aux différentes conditions expérimentales étudiées. La valeur p, seuil de probabilité a été fixée à 0,05 ; ainsi toute valeur de p <0,05 est considérée comme statistiquement significative et ainsi les valeurs des forces isométriques mesurées dans les conditions expérimentales étudiées correspondantes à cette valeur de p sont considérées comme traduisant un effet significatif sur les forces isométriques du derme humain de sujets âgés.

D'autre part, on considérera comme significatif un effet restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain de sujets âgés induit par l'action d'un ingrédient actif cosmétique dont la valeur p est inférieure ou égale à 0,05 et qui est associé à un taux de restauration supérieur ou égal à 30 % par la mise en oeuvre de la technologie G1aSboxTM, ledit taux de restauration se calculant par la formule suivante à tout instant du traitement : Taux de restauration (%) = 100 x [(Forces isométriques du sujet traité) û Forces isométriques du témoin âgé non traité)] / [(forces isométriques témoin jeune non traité) û (Forces isométriques du témoin âgé non traité)]. Le composé de formule (I) telle que définie ci-dessus, peut être sous forme d'acide libre ou sous forme partiellement ou totalement salifiée. Lorsque le composé de formule (I) se présente sous forme salifiée, il s'agit notamment de sels alcalins tels que les sels de sodium, de potassium ou de lithium, de sels alcalino-terreux tels que les sels de calcium, de magnésium ou de strontium ; de sel d'ammonium ou de sel d'un amino-alcool comme le sel de (2-hydroxy éthyl) ammonium. Il peut aussi s'agir de sels métalliques tels que les sels divalents de zinc ou de manganèse, les sels trivalents de fer, de lanthane, de cérium ou d'aluminium. De façon générale, le taux de salification du composé de formule (I) telle que définie ci dessus, dépendra en outre de son pKA et de la concentration en sels de la composition dans laquelle il est incorporé.

Dans l'exposé suivant, par composé de formule (I), on entend un composé de formule (I) sous forme libre ou sous forme partiellement ou totalement salifiée. L'expression "chaîne caractérisante" utilisée pour définir le radical R2, désigne la chaîne principale non fonctionnelle de l'acide aminé considéré.

Ainsi, pour un acide aminé représenté par la formule générale (IIIa) : H2N-CH(R2)-C(=O)-OH (IIIa), comme pour un acide aminé cyclique représenté par la formule (IIIb) : HN-CH[C(=O)-OH]-R2 (IIIb) la chaîne caractérisante sera la chaîne représentée par R2. R2 représente notamment la chaîne caractérisante d'un acide aminé choisi parmi la glycine, l'alanine, la sérine, l'acide aspartique, l'acide glutamique, la valine, la thréonine, l'arginine, la lysine, la proline, la leucine, la phénylalanine, l'isoleucine, l'histidine, la tyrosine, le tryptophane, l'asparagine, la glutamine, la cystéine, la cystine, la méthionine, l'hydroxy lysine, l'hydroxy proline, la sarcosine ou l'ornithine. Selon un aspect particulier de la présente invention, celle-ci a pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) telle que définie précédemment, dans laquelle, dans le reste -HN-CH(R2)-C(=O)- (IVa), R2 représente la chaîne caractérisante de la glycine, de l'alanine, de la leucine ou de l'isoleucine. Selon un autre aspect particulier de la présente invention, celle-ci a pour objet l'utilisation d'un composé de formule (I) telle que définie précédemment, dans laquelle, le radical RI-(C=0)- représente un radical choisi parmi les radicaux décanoyle, docécanoyle, tétradécanoyle ou hexadécanoyle.

Selon une variante particulière de la présente invention, on utilise un seul composé de formule (I), telle que définie précédemment, comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Selon une autre variante particulière de la présente invention, on utilise un mélange de composés de formule (I) telle que définie précédemment, comme actif restaurateur des 30 forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Selon un aspect tout particulier de la présente invention celle-ci a pour objet l'utilisation du N-palmitoyl alanine comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain.

Selon un autre aspect tout particulier de la présente invention celle-ci a pour objet l'utilisation du N-palmitoyl glycine, comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Selon un autre aspect tout particulier de la présente invention celle-ci a pour objet 5 l'utilisation du N-palmitoyl isoleucine, comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. Selon un autre aspect tout particulier de la présente invention celle-ci a pour objet l'utilisation du N-cocoyl alanine, comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain. 10 Par N-cocoyl alanine, on désigne un mélange de composés de formule (I) obtenu par acylation de l'alanine avec les dérivés activés d'acides gras issus de l'huile de coprah. Les composés de formules (I) sont généralement obtenus par N-acylation des acides aminés correspondants ou de leurs sels. Lorsqu'il s'agit d'un mélange de composés de formules (I), il est par exemple obtenu 15 par N-acylation du mélange d'acides aminés résultant de l'hydrolyse totale de protéines de toutes origines. Ces protéines peuvent être d'origine animale, telles que, par exemple, le collagène, l'élastine, la protéine de chair de poisson, la gélatine de poissons, la kératine ou la caséine, d'origine végétale, comme les protéines de céréales, de fleurs ou de fruits, telles que par 20 exemple, les protéines issues du soja, du tournesol, de l'avoine, du blé, du maïs, de l'orge, de la pomme de terre, du lupin, de la féverole, de l'amande douce, du kiwi, de la mangue ou de la pomme ; il peut s'agir aussi de protéines obtenues à partir de chorelles (algues unicellulaires), d'algues roses, de levures ou de la soie. Cette hydrolyse est réalisée par exemple, par chauffage à des températures 25 comprises entre 60 et 130°C d'une protéine placée dans un milieu acide ou alcalin. Cette hydrolyse peut également être réalisée par voie enzymatique avec une protéase, couplée éventuellement à une post-hydrolyse alcaline ou acide. Les aminogrammes de quelques protéines d'origine végétales sont consignés dans les tableaux 1 et 2 suivants : Origine de la protéine (proportions en acides aminés exprimées en % pondéraux) Avoine Soja Blé Tournesol Glycine 6,9 4,2 3,2 6,2 Alanine 5,9 4,2 2,6 4,8 Serine 5,6 5,1 1,7 5,1 Acide aspartique 16,2 11,7 3,4 10,6 Acide glutamique 28,3 19,1 37,9 23,6 Valine 2,9 5,0 4,2 4,8 Thréonine 3,1 3,9 2,7 4,4 Arginine 6,6 7,8 3,7 8,4 Lysine 3,6 6,2 1,9 3,2 Proline 4,7 5,4 11,7 3,0 Avoine Soja Blé Tournesol Leucine 6,4 8,1 7,1 6,4 Phénylalanine 1,4 5,0 5,4 4,3 Isoleucine 2,2 4,8 3,7 4,1 Histidine 1,7 2,6 2,4 2,0 Tyrosine 1,5 3,5 3,1 2,7 Méthionine 1,2 1,2 1,6 1,8 Cystéine / Cystine 1,9 1,5 1,9 1,9 Tryptophane - 1,0 1,0 1,3 Tableau 1 : aminogrammes de protéines issues de l'avoine, du soja, du blé, du tournesol.5 Origine de la protéine (proportions en acides aminés exprimées en % pondéraux) Lupin Pomme de terre Féverole Maïs Glycine 0,9 4,8 4,0 2,4 Alanine 2,4 5,0 4,0 7,95 Serine 6,1 5,8 4,9 5,1 Acide aspartique 15,8 12,5 10,5 10,6 Acide glutamique 8,0 11,5 16,8 23,6 Valine 7,9 7,1 4,5 4,8 Thréonine 8,1 6,1 3,6 4,4 Arginine 16,1 5,0 9,21 8,4 Lysine 7,1 7,8 6,5 6,2 Proline - 5,1 4,4 3,0 Leucine 7,45 10,4 7,4 8,1 Phénylalanine 8,6 6,4 4,4 4,3 Isoleucine 8,7 6,1 3,9 4,1 Histidine - 2,2 2,6 2,0 Tyrosine - 5,7 3,6 2,7 Méthionine 0,6 2,4 0,8 1,8 Cystéine / Cystine - 1,6 1,7 1,9 Tryptophane 1,2 1,4 1,2 1,3 Ornithine 0,4 - - - Tableau 2 : aminogrammes de protéines issues du lupin, de la pomme de terre, de la féverole, du maïs.

La réaction d'acylation est connue de l'homme du métier. Elle est décrite par exemple dans la demande internationale publiée sous le numéro WO 98/09611. Elle est mise en oeuvre indifféremment sur un acide aminé ou sur un mélange d'acides aminés. L'agent d'acylation consiste généralement en un dérivé activé d'un acide carboxylique de formule : RI-C(=O)-OH, dans laquelle R1 est tel que défini précédemment, tel qu'un anhydride symétrique de cet acide, l'ester méthylique de cet acide, ou un halogénure d'acide comme le chlorure d'acide ou le bromure d'acide. Il peut aussi consister en un mélange de dérivés activés d'acides carboxyliques issus d'huiles ou graisses naturelles d'origine animales ou végétales telles que les huiles de coprah, de palmiste, de palme, de soja, de colza, de maïs, le suif de boeuf, l'huile spermaceti ou l'huile de hareng. Dans, le cadre de la présente invention on peut utiliser les mélanges d'acides gras issus de l'huile de coprah, de l'huile de palmiste ou de l'huile de spermaceti qui contiennent une fraction majoritaire en acide dodécanoïque, et dont les compositions en acides gras sont indiquées dans le tableau 3 ci-dessous : Huile de coprah huile de palmiste huile de spermaceti Hu (% en poids) (% en poids) (% en poids) acide octanoïque ou 6 % à 9 % 3 % à l0 % - caprylique (C8H16O2) acide décanoïque ou 6 % à l0 % 3 % à 14 % 1 % à 3 % caprique (C10H2OO2) acide dodécanoïque ou 44 % à 51 % 37 % à 52 % 14 % à 38 % laurique (C12H2402) acide tétradécanoïque ou 13 % à 18 % 7 % à 17 % 12 % à 14 % myristique (C14H2802) acide hexadécanoïque ou 8 % à l0 % 2 % à 9 % 8 % à l0 % palmitique (C16H3202) acide octadécanoïque ou 1% à 3% 1% à 3% 1% à 3% stéarique (C18H36O2) acide octadécénoïque ou 5,5 % à 7,5 % 11 % à 23 % 15 % à 18 % oléique (C18H3402) acide eicosénoïque ou - - 5 % à 8 % gadolique (C20H3802) acide octadécadiénoïque < 2,5 % 1 % à 3 % - ou linoléique (C18H3202) autres acides <0,4% <0,6% 26%à34% Tableau 3 : répartition des différents acides gras présents dans les huiles de coprah, les huiles de palmiste et l'huile de spermaceti.

L'invention a aussi pour objet, un procédé de traitement cosmétique du corps humain destiné à restaurer les forces isométriques des fibroblastes du derme humain, caractérisé en ce que l'on administre au sujet une composition contenant une quantité efficace d'au moins un composé de formule (I) telle que définie précédemment.

Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet, un procédé tel que défini précédemment pour laquelle le N-acyl amino acide est le N-palmitoyl alanine. Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet, un procédé tel que défini précédemment pour laquelle le N-acyl amino acide est le N-palmitoyl glycine. Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet, un procédé tel que défini précédemment pour laquelle le N-acyl amino acide est le N-palmitoyl isoleucine. Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet, un procédé tel que défini précédemment pour laquelle le N-acyl amino acide est le N-cocoyl alanine. Dans les utilisations et dans le procédé tels que définis ci-dessus, le N-acyl amino acide est généralement mis en oeuvre dans une composition destinée à une application topique sur la peau et les muqueuses. Ladite composition destinée à une application topique en comprend entre 0,01 % et 10 % massique, plus particulièrement entre 0,1 % à 5 massique, et tout particulièrement entre 1 % et 5 % massique dudit ou desdits N-acyl amino acides. Ledit traitement ou les dites utilisations sont mises en oeuvre par application de ladite composition destinée à une application topique, sur la surface de la peau ou de la muqueuse à traiter. Selon un autre aspect, la présente invention a pour objet une composition cosmétique "anti-âge" caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,01 % à 10 % massique, plus particulièrement de 0,1 % à 5 % massique et tout particulièrement de 1 % à 5 % massique d'un N-acyl amino acide choisi parmi le N-palmitoyl glycine, le N-palmitoyl alanine, le N-palmitoyl isoleucine et le N-cocoyl alanine. Par quantité efficace d'au moins un composé de formule (I) compris dans la composition mise en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention, on entend la quantité comprise entre 0,01 % et 10 % massique pour 100% de la masse de ladite composition, plus particulièrement entre 0,1 % à 5 % massique pour 100% de la masse de ladite composition et encore plus particulièrement entre 1 % et 5 % massique pour 100% de la masse de ladite composition. Les compositions mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention, sont administrées au sujet sous les formes classiques utilisées en cosmétique ; il s'agit plus particulièrement des administrations par voie topique. Les compositions mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention peuvent donc être formulées sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique. Les différentes préparations adaptées à une administration par voie topique contenant les composés de formule (I) sont des crèmes, des émulsions simples ou multiples, telles que les émulsions eau dans huile (E/H), huile dans eau (H/E) ou eau dans huile dans eau (E/H/E), ou huile dans eau dans huile, dans lesquelles l'huile est de nature végétale ou minérale, des laits, des pommades, des lotions, des solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou hydro-glycoliques, dans des poudres. Elles peuvent être aussi dispersées ou imprégnées sur du textile ou sur des matériaux non tissés, qu'il s'agisse de lingettes, de serviettes en papier ou de vêtements. Selon un aspect plus particulier, les compositions mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention qui sont administrées par voie topiques contiennent en outre un milieu cosmétiquement acceptable. L'expression cosmétiquement acceptable utilisée dans la définition de la composition contenant au moins un composé de formule (I) mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention, signifie selon la directive du Conseil de la Communauté Economique Européenne N°76/768/CEE du 27 juillet 1976 modifiée par la directive N°93/35/CEE du 14 juin 1993, que ladite composition comprend toute substance ou préparation destinée à être mise en contact avec les diverses parties du corps humain (épiderme, système pileux et capillaire, ongles, lèvres et organes génitaux) ou avec les dents et les muqueuses buccales en vue, exclusivement et principalement, de les nettoyer, de les parfumer, d'en modifier l'aspect et/ou d'en corriger les odeurs corporelles et/ou de les protéger ou de les maintenir en bon état. De façon générale, les composés de formule (I) sont associés à de nombreux types d'adjuvants ou de principes actifs utilisés dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, qu'il s'agisse, de corps gras, de solvants organiques, d'épaississants, de gélifiants, d'adoucissants, d'agents tensioactifs détergents, d'agents surgraissants, de tensioactifs épaississants et/ou gélifiants, d'antioxydants, d'opacifiants, de stabilisants, de moussants, de parfums, de tensioactifs émulsionnants, d'agents hydrotropes, d'agents plastifiants, d'agents surgraissants, d'agents de texture, de pigments, de séquestrants, de chélateurs, de conservateurs, de filtres chimiques ou de filtres minéraux, d'huiles essentielles, de matières colorantes, de pigments, d'actifs hydrophiles ou lipophiles, d'humectants, par exemple la glycérine, de conservateurs, de colorants, de parfums, d'actifs cosmétiques, de filtres solaires minéraux ou organiques, de charges minérales comme les oxydes de fer, oxydes de titane et le talc, de charges synthétiques comme les nylons et les poly(méthacrylate de méthyle) réticulés ou non, d'élastomères silicone, de séricites ou d'extraits de plantes ou encore de vésicules lipidiques ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétique. Comme exemples d'huiles que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer, les huiles minérales telles que l'huile de paraffine, l'huile de vaseline, les isoparaffines ou les huiles blanches minérales, les huiles d'origine animale, telles que le squalane ou le squalane, les huiles végétales, telles que l'huile d'amandes douces, l'huile de coprah, l'huile de ricin, l'huile de jojoba, l'huile d'olive, l'huile de colza, l'huile d'arachide, l'huile de tournesol, l'huile de germes de blé, l'huile de germes de maïs, l'huile de soja, l'huile de coton, l'huile de luzerne, l'huile de pavot, l'huile de potiron, l'huile d'onagre, l'huile de millet, l'huile d'orge, l'huile de seigle, l'huile de carthame, l'huile de bancoulier, l'huile de passiflore, l'huile de noisette, l'huile de palme, le beurre de karité, l'huile de noyau d'abricot, l'huile de calophyllum, l'huile de sysymbrium, l'huile d'avocat, l'huile de calendula ; les huiles végétales éthoxylées ; les huiles synthétiques comme les esters d'acides gras tels que le myristate de butyle, le myristate de propyle, le myristate de cétyle, le palmitate d'isopropyle, le stéarate de butyle, le stéarate d'hexadécyle, le stéarate d'isopropyle, le stéarate d'octyle, le stéarate d'isocétyle, l'oléate dodécyle, le laurate d'hexyle, le dicaprylate de propylèneglycol, les esters dérivés d'acide lanolique, tels que le lanolate d'isopropyle, le lanolate d'isocétyle, les monoglycérides, diglycérides et triglycérides d'acides gras comme le triheptanoate de glycérol, les alkylbenzoates, les polyalphaoléfines, les polyoléfines comme le polyisobutène, les isoalcanes de synthèse comme l'isohexadecane, l'isododécane, les huiles perfluorées et les huiles de silicone.

Parmi ces dernières, on peut plus particulièrement citer les diméthylpolysiloxanes, méthylphénylpolysiloxanes, les silicones modifiées par des amines, les silicones modifiés par des acides gras, les silicones modifiés par des alcools, les silicones modifiés par des alcools et des acides gras, des silicones modifiés par des groupements polyéther, des silicones époxy modifiés, des silicones modifiées par des groupements fluorés, des silicones cycliques et des silicones modifiées par des groupements alkyles. Comme autre matière grasse que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer les alcools gras ou les acides gras. Comme exemple de cires que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer par exemple la cire d'abeille ; la cire de carnauba ; la cire de candelilla ; la cire d'ouricoury ; la cire du Japon ; la cire de fibre de liège ou de canne à sucre ; les cires de paraffines ; les cires de lignite ; les cires microcristallines ; la cire de lanoline ; l'ozokérite ; la cire de polyéthylène ; les huiles hydrogénées ; les cires de silicone ; les cires végétales ; les alcools gras et les acides gras solides à température ambiante ; les glycérides solides à température ambiante. Comme exemple de polymères épaississants et/ou émulsionnant que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer par exemple les homopolymères ou copolymères de l'acide acrylique ou de dérivés de l'acide acrylique, les homopolymères ou copolymères de l'acrylamide, les homopolymères ou copolymères de dérivés de l'acrylamide, les homopolymères ou copolymères de l'acide acrylamidométhyl propanesulfonique, de monomère vinylique, de chlorure de triméthylaminoéthylacrylate, les hydrocolloïdes d'origine végétale ou biosynthétique, par exemple la gomme de xanthane, la gomme de karaya, les carraghénates, les alginates ; les silicates ; la cellulose et ses dérivés ; l'amidon et ses dérivés hydrophiles ; les polyuréthanes. Parmi les polymères de type polyélectrolytes que l'on peut associer aux composés de formule (I), il y a par exemple, les copolymères de l'acide acrylique et de l'acideù2ù méthylù[(l-oxo-2-propényl)amino] 1ùpropane sulfonique (AMPS), les copolymères de l'acrylamide et de l'acideù2ùméthylù[(1-oxo-2-propényl)amino] 1ùpropane sulfonique, les copolymères de l'acideù2ùméthylù[(l-oxo-2-propényl)amino] 1ùpropane sulfonique et de l'acrylate de (2-hydroxyéthyle), l'homopolymère de l'acideù2ùméthylù[(1-oxo-2- propényl)amino] 1ùpropane sulfonique, l'homopolymère de l'acide acrylique, les copolymères du chlorure d' acryloyl éthyl triméthyl ammonium et de l'acrylamide, les copolymères de l'AMPS et de la vinylpyrolidone, les copolymères de l'acide acrylique et d'acrylates d'alkyle dont la chaîne carbonée comprend entre dix et trente atomes de carbone, les copolymères de 1'AMPS et d'acrylates d'alkyle dont la chaîne carbonée comprend entre dix et trente atomes de carbone. De tels polymères sont commercialisés respectivement sous les appellations SIMULGELTM EG, SEPIGELTM 305, SIMULGELTM 600, SIMULGELTM NS, SIMULGELTM INS 100, SIMULGELTM FL, SIMULGELTM SMS 88, SIMULGELTM 800, SIMULGELTMA, SEPIPLUSTM400, SEPIPLUSTMS, SEPIPLUSTM250, SEPIPLUSTM265, SEPINOVTMEMT10 par la demanderesse. Comme exemples d'émulsionnants que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention, on peut citer par exemple les acides gras, les acides gras éthoxylés, les esters d'acide gras et de sorbitol, les esters d'acides gras éthoxylés, les polysorbates, les esters de polyglycérol, les alcools gras éthoxylés, les esters de sucrose, les alkylpolyglycosides, les alcools gras sulfatés et phosphatés ou les mélanges d'alkylpolyglycosides et d'alcools gras décrits dans les demandes de brevet français 2 668 080, 2 734 496, 2 756 195, 2 762 317, 2 784 680, 2 784 904, 2 791 565, 2 790 977, 2 807 435 et 2 804 432. Comme exemples de principe actif que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer les composés ayant une action éclaircissante ou dépigmentante tels que par exemple l'arbutine, l'acide kojique, l'hydroquinone, l'acide ellagique, la vitamine C, le magnésium ascorbyl phosphate, les extraits de polyphénols, les dérivés de polyphénols glycosylés comme le Rosmarinyl glucoside, les extraits de raisin, les extraits de pin, les extraits de vin, les extraits d'olives, les extraits de mare, les protéines N-acylées, les peptides N-acylés, les acides aminés N-acylés, les hydrolysâts partiels de protéines N-acylés, les acides aminés, les peptides, les hydrolysâts totaux de protéines, les hydrolysâts partiels de protéines, les polyols (par exemple, la glycérine ou le butylène glycol) , l'urée, l'acide pyrrolidonecarboxylique ou les dérivés de cet acide, l'acide glycyrrhétinique, l'alpha-bisabolol, les sucres ou les dérivés des sucres, les polysaccharides ou leurs dérivés, les hydroxyacides par exemple l'acide lactique, les vitamines, les dérivés de vitamines comme le Rétinol, la vitamine E et ses dérivés, les minéraux, les enzymes, les co-enzymes, comme, le Coenzyme Q10, les hormones ou "hormone like", les extraits de soja par exemple, la RaffermineTM, les extraits de blé par exemple la TensineTM ou la GliadineTM les extraits végétaux, tels que les extraits riches en tanins, les extraits riches en isoflavones ou les extraits riches en terpènes, les extraits d'algues d'eau douce ou marines, les cires essentielles, les extraits bactériens, les minéraux, les lipides en général, les lipides tels que les céramides ou les phospholipides, les actifs ayant une action amincissante comme la caféine ou ses dérivés, comme l'extrait de quinoa commercialisé sous l'appellation ADIPOLESSTM, comme l'extrait de pruche canadienne commercialisé sous l'appellation SERENIKSTM 207, comme la composition comprenant du Lauroyl Proline commercialisée sous l'appellation ADIPOSLIMTM, les actifs ayant une activité antimicrobienne ou une action purifiante vis à vis des peaux grasses tels que le LIPACIDETM PVB, les actifs ayant une propriété énergisante ou stimulante comme le SEPITONICTM M3 ou le PhysiogénylTM le panthénol et ses dérivés comme le SEPICAPTM MP, les actifs anti-âge comme le SEPILIFTTM DPHP, le LIPACIDETM PVB, le SEPIVINOLTM, le SEPIVITALTM, les actifs hydratants comme le SEPICALMTM S, le SEPICALMTM VG et le SEPILIFTTM DPHP, les actifs anti-âge " anti-photo vieillissement ", les actifs protecteurs de l'intégrité de la jonction dermo-épidermique, les actifs augmentant la synthèse des composants de la matrice extracellulaire, les actifs ayant une activité amincissante, raffermissante ou drainante comme la caféine, la théophylline, l'AMPc, le thé vert, la sauge, le ginko biloba, le lierre, le marron d'inde, le bambou, le ruscus, le petit houx, la centella asiatica, la bruyère, l'ulmaine, le fucus, le romarin, la saule , des actifs créant une sensation de chauffe sur la peau comme les activateurs de la microcirculation cutanée (exemple des nicotinates) ou des produits créant une sensation de fraîcheur sur la peau (exemple du menthol et des dérivés). Comme exemples d'agents de texture que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer des dérivés N-acylés d'acides aminés, comme par exemple la lauroyl lysine commercialisée sous l'appellation AMINOHOPETMLL par la société AJINOMOTO, l'octenyl starch succinate commercialisé sous l'appellation DRYFLOTM par la société NATIONAL STARCH, le myristyl polyglucoside commercialisé par SEPPIC sous l'appellation MONTANOV 14, les fibres de cellulose, les fibres de coton, les fibres de chitosane, le talc, la séricite, le mica. Comme exemples d'agents opacifiants et/ou nacrants que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer le palmitate de sodium, le stéarate de sodium, l'hydroxystéarate de sodium, le palmitate de magnésium, le stéarate de magnésium, l'hydroxystéarate de magnésium, le monostéarate d'éthylène glycol, le distéarate d'éthylène glycol, le monostéarate de polyéthylène glycol, le distéarate de polyéthylène glycol, les alcools gras. Comme exemples de tensioactifs épaississants et/ou gélifiants que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer : - les esters gras d'alkylpolyglycosides éventuellement alkoxylés, et tout particulièrement les esters de méthylpolyglucoside éthoxylés tels que le PEG 120 méthyl glucose trioléate et le PEG 120 méthyl glucose dioléate commercialisés respectivement sous les appellations GLUCAMATETM LT et GLUMATETM DOE120 ; - les esters gras alkoxylés tels que le PEG 150 pentaérythrytyl tétrastéarate 15 commercialisé sous l'appellation CROTHIXTM DS53, le PEG 55 propylene glycol oléate commercialisé sous l'appellation ANTILTM 141 ; - les carbamates de polyalkylène glycols à chaînes grasses tels que le PPG 14 laureth isophoryl dicarbamate commercialisé sous l'appellation ELFACOSTM T211, le PPG 14 palmeth 60 hexyl dicarbamate commercialisé sous l'appellation ELFACOSTM 20 GT2125. Comme exemples de filtres solaires que l'on peut associer aux composés de formule (I) dans les compositions cosmétiques mises en oeuvre dans le procédé de traitement cosmétique du corps humain objet de la présente invention et administrées par voie topique, on peut citer tous ceux figurant dans la directive cosmétique 76/768/CEE modifiée 25 annexe VII. L'étude expérimentale suivante illustre l'invention sans toutefois la limiter. Elle met en évidence la capacité des composés de formule (I) telle que définie précédemment, à restaurer les forces isométriques développées par des fibroblastes humains normaux âgés.

30 Mise en évidence de l'effet restaurateur in vitro des composés de formule (I) sur les forces isométriques développées par des fibroblastes humains normaux âgés dans des matrices tridimensionnelles GlaSboxTM

a) - Principe Le modèle in vitro utilisé consiste en une culture de fibroblastes dans un treillis de collagène tendu en forme de diabolo (modèle GlaSboxTM), qui permet de mesurer de façon quantitative les forces générées par les fibroblastes en culture pour le réarrangement de la matrice.

b) - Présentation du Modèle GlaSboxTM

La GlaSboxTM (pour Growing Lattice Study Box) est une technologie permettant la mesure des forces isométriques développées par les treillis de collagène peuplées de fibroblastes. La GlaSboxTM est un système particulier composé de 8 chambres de culture rectangulaires où sont coulés les treillis. Dans chacune d'elles plongent deux lames flexibles en silicium (d'épaisseur de 200 micromètres) qui constituent les capteurs. Les parties inférieures de chaque lame sont constituées de grilles sur lesquelles s'accroche le treillis lors de sa polymérisation. Le treillis se développe entre deux lames pour aboutir à une forme rectangulaire légèrement rétrécie au centre, dite en diabolo . Ces lames sont équipées, au niveau de leur partie supérieure, d'un système de jauge de contrainte en or déposé à leur surface. Sous l'influence de la force de rétraction développée par les fibroblastes, les lames de silicium se déforment, ce qui se traduit par des variations de la valeur de la résistance électrique de la jauge de contrainte, mesurée par l'intermédiaire d'un pont de Wheatstone. Cette variation indique la force développée au sein du treillis, mesurée en temps réel par le biais d'une carte d'acquisition d'un ordinateur et d'un logiciel adapté. c) - Protocole de préparation des dermes équivalents sous tension et de mesure des forces isométriques

Des fibroblastes humains normaux issus d'un donneur jeune âgé de 30 ans (Témoin J-30 ans ) et d'un donneur âgé de 65 ans (Témoin A-65 ans ) ont été récoltés à partir de déchets chirurgicaux opératoires. cl) - Les fibroblastes récoltés sont ensuite remis en suspension juste avant confluence à l'aide d'une solution comprenant de laTrypsine et de 1'EDTA à une concentration de (1X), soit 0,5 g/L. La suspension obtenue est ensuite centrifugée et une numération finale est réalisée avant d'amener les fibroblastes à une concentration de 8.1o' cellules/ml. c2) - On réalise ensuite par mélange un milieu de fabrication des treillis comprenant 6 volumes d'un milieu de culture (comprenant du Dulbecco's Modified Eagle's Medium complété ou DMEMc, de l'hydrogénocarbonate de calcium, de la soude, des antibiotiques (mélange de pénicilline et de streptomycine) à une concentration de (1,76X), 3 volumes de collagène I de queue de rat (2mg/ml) et un volume de la suspension cellulaire à 8.105 cellules/ml précédemment préparée. c3) Le mélange précédemment obtenu est ensuite coulé dans les cuves 10 rectangulaires de la G1aSboxTM et polymérisé en moins de 30 minutes à une température de 37°C pour obtenir un gel. Des gels de fibroblastes sont ainsi préparés par la mise en oeuvre des étapes cl) à c3) précédemment décrites, de façon à mesurer par la suite les forces isométriques pour : - des fibroblastes de sujets A-65 sans ajout d'aucun autre ingrédient ( Témoin 15 A-65 ), - des fibroblastes de sujets J-30 sans ajout d'aucun autre ingrédient ( Témoin J-30 ), - des fibroblastes de sujets A-65 auxquels sont ajoutés du TGF131 à une concentration de 2,5 nanogrammes/ml ( Témoin comparatif A-65 + TGF131 ) à l'issue de 20 l'étape c3) du protocole précédemment décrit, - des fibroblastes de sujets A-65 auxquels sont ajoutés du Palmitoyl Isoleucine à une concentration de 10 microgrammes/ml (noté par la suite LCA07014 10 g/ml ) à l'issue de l'étape c3) du protocole précédemment décrit, - des fibroblastes de sujets A-65 auxquels sont ajoutés du Palmitoyl Isoleucine à 25 une concentration de 50 microgrammes/ml (noté par la suite LCA07014 50 g/ml ) à l'issue de l'étape c3) du protocole précédemment décrit, - des fibroblastes de sujets A-65 auxquels sont ajoutés du Cocoyl Alanine à une concentration de 10 microgrammes/ml (noté par la suite LCA07016 10 g/ml ) à l'issue de l'étape c3) du protocole précédemment décrit, 30 - des fibroblastes de sujets A-65 auxquels sont ajoutés du Cocoyl Alanine à une concentration de 50 microgrammes/ml (noté par la suite LCA07016 50 g/ml ) à l'issue de l'étape c3) du protocole précédemment décrit. Après addition des différents ingrédients chimiques dont les effets sont testés dans le cadre de la présente expérimentation, la G1aSboxTM comprenant les gels des mélanges résultants et les gels des Témoin A-65 et Témoin J-30 est placée dans un incubateur humidifié dont la température est régulée à 37°C et dont la teneur en gaz carbonique est régulée à 5%, et les mesures des forces isométriques sont enregistrées pendant une durée de 48 heures, à des intervalles de 15 minutes pendant les 6 premières heures, puis à des intervalles de 1 heure jusqu'à la 12ème heure, puis à des intervalles de 4 heures jusqu'à la 48ème heure. A la fin de l'expérimentation, les treillis de collagène sont détachées et digérées dans une solution de collagénase de type I (issue de Clostridium histolyticum, 152 UI/mg, Gibco) afin de compter le nombre de cellules par treillis.

Le TGF131 (pour Transforming Growth Factor Béta 1) est une molécule connue comme facteur de croissance impliquée dans de nombreux processus biologiques comme la croissance cellulaire, la prolifération, la différenciation, la cicatrisation, et aussi bien connue pour jouer un rôle de restauration des forces isométriques des fibroblastes. Les forces isométriques mesurées dans le cadre de la présente expérimentation sont exprimées en fonction du nombre de cellules après 48 heures de manipulation. Chaque essai est réalisé condition expérimentale a été testée au sextuple.

d) - Expression et analyse des résultats Les valeurs de forces isométriques obtenues à chaque mesure ont été rapportées au nombre de cellules par treillis et sont exprimées par la moyenne l'erreur type de la distribution des moyennes (sem). Des graphiques ont ensuite été construits de façon à permettre de comparer les effets obtenus sur les 6 premières heures de culture (graphique lA, graphique 2A et graphique 3A) et sur la durée totale de l'étude de 48 heures (graphique lB, graphique 2B et graphique 3B). Le graphique 1A reporte les résultats obtenus de l'évolution des forces isométriques mesurées pendant 6 heures pour le Témoin A-65 , le Témoin J-30 , et Témoin comparatif A-65 + TGF131 .

Le graphique lB reporte les résultats obtenus de l'évolution des forces isométriques mesurées pendant 48 heures pour le Témoin A-65 , le Témoin J-30 , et Témoin comparatif A-65 + TGF131 . Les graphiques lA et lB montrent l'existence de 3 phases successives : Une première phase de 2 heures, pendant laquelle les forces isométriques restent faibles ; une deuxième phase pendant laquelle les forces isométriques augmentent rapidement, de façon quasi-linéaire, se situant en moyenne entre les deuxièmes et sixièmes heures de mesure ; une troisième phase pendant laquelle la valeur des forces isométriques reste à un niveau quasi-constant. De façon générale, les graphiques lA et lB montrent que les valeurs enregistrées des forces isométriques développées par les fibroblastes du Témoin A-65 sont significativement inférieures aux valeurs des forces isométriques développées par les fibroblastes du Témoin J-30 et aux valeurs des forces isométriques développées par les fibroblastes du Témoin comparatif A-65 + TGF131 . De même, il apparait par l'examen de des graphiques lA et lB que l'utilisation de TGF-131 à une dose de 2,5 nanogrammes/ml permet de restaurer les forces isométriques développées par les fibroblastes du Témoin A-65 pendant la durée de la mesure. Ces résultats attendus valident la réactivité du modèle expérimental et la pertinence de son utilisation dans le but d'évaluer des ingrédients pouvant présenter un effet restaurateur sur les forces isométriques des fibroblastes. Les graphiques 2A et 2B montrent l'évolution des valeurs enregistrées des forces isométriques développées par les fibroblastes de sujets A-65 auxquels ont été ajoutés du Palmitoyl Isoleucine à une concentration de 10 g/ml ( LCA07014 10 g/ml ) et à une concentration de 50 g/ml ( LCA07014 50 g/ml ). De façon générale, les graphiques 2A et 2B montrent que l'utilisation du Palmitoyl Isoleucine, à une dose de 10 g/ml ( LCA07014 10 g/ml ) et à une dose de 50 g/ml ( LCA07014 50 g/ml ), en mélange avec des fibroblastes de sujets A-65 permet aux dits fibroblastes de sujets A-65 de développer des forces isométriques dont la valeur est significativement plus importante que les forces isométriques développées par les seuls fibroblastes de sujets A-65 . De même, les graphiques 2A et 2B montrent également que l'utilisation du Palmitoyl Isoleucine, à une dose de 10 g/ml ( LCA07014 10 g/ml ) et de 50 g/ml ( LCA07014 50 g/ml ), en mélange avec des fibroblastes de sujets A-65 permet aux dits fibroblastes de sujets A-65 de développer des forces isométriques dont les valeurs sont proches de celles enregistrées pour les fibroblastes de sujets A-65 associés au TGF-131 à une dose de 2,5 nanogrammes/ml. Les graphiques 3A et 3B montrent l'évolution des valeurs enregistrées des forces isométriques développées par les fibroblastes de sujets A-65 auxquels ont été ajoutés du Cocoyl Alanine à une concentration de 10 g/ml ( LCA07014 10 g/ml ) et à une concentration de 50 g/ml ( LCA07014 50 g/ml ). De façon générale, les graphiques 3A et 3B montrent que l'utilisation du Cocoyl Alanine , à une dose de 10 g/ml ( LCA07016 10 g/ml ) et de 50 g/ml ( LCA07016 50 g/ml ), en mélange avec des fibroblastes de sujets A-65 permet aux dits fibroblastes de sujets A-65 de développer des forces isométriques dont la valeur est significativement plus importante que les forces isométriques développées par les seuls fibroblastes de sujets A-65 . De même, les graphiques 3A et 3B montrent également que l'utilisation du Cocoyl Alanine, à une dose de 10 g/ml ( LCA07016 10 g/ml ) et de 50 g/ml ( LCA07016 50 g/ml ), en mélange avec des fibroblastes de sujets A-65 permet aux dits fibroblastes de sujets A-65 de développer des forces isométriques dont les valeurs sont proches de celles enregistrées pour les fibroblastes de sujets A-65 associés au TGF-131 à une dose de 2,5 nanogrammes/ml. Les valeurs brutes des forces isométriques développées par les fibroblastes du Témoin A-65 , du Témoin J-30 , du Témoin comparatif A-65 + TGF131 , de l'essai LCA07014 50 g/ml et de l'essai LCA07016 50 g/ml , mesurées après 3 heures, 5 heures, 7 heures, 24 heures et 48 heures de maintien de la G1aSboxTM comprenant les gels précédemment préparés dans l'incubateur humidifié dont la température est régulée à 37°C, sont consignées dans le tableau 4 ci- dessous. A chaque temps de mesure t , on évalue : - p : le seuil de probabilité p par rapport au témoin A-65 par le test statistique d'analyse de variance (ANOVA) - Ft : les forces isométriques (en unités arbitraires/ millions de cellules) - Tt : Taux de restauration (en %) calculé selon la formule suivante : Tt = 100 x [(Ft du sujet traité) ù(Ft Témoin A-65 )] / [(Ft Témoin J-30 ) ù (Ft Témoin A-65 )]. Le taux de restauration ne sera pas calculé lorsque p > 0,05 et sera donc indiqué non déterminé (n.d ).

Témoin Essai "J-30" "A-65" "A-65 + "LCA070 "LCA070 TGFp1" 14 16 50 g/m1" 50 g/m1" Durée p < 0,001 - < 0,001 < 0,001 < 0,001 observation : t Ft 112 919 80 144 105 703 103 366 92 243 = 3h00 Tt ( %) - - 78,1% 70,9% 36,9% Durée p < 0,001 - < 0,01 < 0,01 < 0,01 observation : t Ft 129 684 107 332 125 771 128 039 125 926 = 5h00 Tt ( %) - - 82,5% 92,6% 83,2% Durée p < 0,001 - < 0,01 < 0,05 < 0,05 observation : t Ft 131 291 107 761 128 549 126 993 124 822 = 7h00 Tt ( %) - - 88,3% 81,7% 72,5% Durée p < 0,01 - < 0,01 < 0,05 > 0,05 observation : t Ft 123 331 101 895 120 952 120 465 108 674 = 24h00 Tt ( %) - - 88,9% 86,7% n.d. Durée p < 0,001 - < 0,001 < 0,01 > 0,05 observation : t Ft 122 198 98 050 120 754 120 818 103 150 = 48h00 Tt ( %) - - 94,0% 94,3% n.d. Tableau 4 : seuils de probabilité et valeurs brutes des forces isométriques développées, mesurés pour les fibroblastes du Témoin A-65 , du Témoin J-30 , du Témoin comparatif A-65 + TGF131 , de l'essai LCA07014 50 g/ml , et de l'essai LCA07016 50 g/ml , ainsi que les taux de restauration associés au Témoin comparatif A-65 + TGF131 , à l'essai LCA07014 50 g/ml , et à l'essai LCA07016 50 g/ml pour des durées de 3 heures, 5 heures, 7 heures, 24 heures et 48 heures.

Associé aux fibroblastes du sujet A-65, le palmitoyl isoleucine, utilisé à une dose de 50 g/ml, permet d'atteindre un taux de restauration de 70,9% après 3 heures de mesure, de 81,7% pour 7 heures de mesure, de 86,7% pour 24 heures de mesure et de 94,3% pour 48 heures de mesure. Par conséquent, on peut déduire de ces essais expérimentaux, que lorsque le palmitoyl isoleucine est utilisé à une dose de 50 g/ml avec les fibroblastes du Témoin comparatif A-65 , il montre une efficacité de restauration des forces isométriques des fibroblastes du derme humain pendant au moins une durée de 48 heures. Associé aux fibroblastes du sujet A-65, le cocoyl alanine, utilisé à une dose de 50 g/ml, permet d'atteindre un taux de restauration de 83,2 % après 5h00 de mesure et de 72,5% après 7h00 de mesure ; cependant, après une durée de 8 heures de mesure, les résultats obtenus ne se sont pas montré statistiquement significatifs et les taux de restauration associés aux valeurs brutes mesurées n'ont pas été calculés. Par conséquent, on peut déduire de ces essais expérimentaux. Par conséquent, on peut déduire de ces essais expérimentaux, que lorsque le cocoyl alanine est utilisé à une dose de 50 g/ml avec les fibroblastes du Témoin comparatif A-65 , il montre une efficacité de restauration des forces isométriques des fibroblastes du derme humain pendant les 7 premières heures. L'étude expérimentale montre donc que l'utilisation des dérivés N-acylés de formule (I) permet de restaurer de façon significative les forces isométriques générées par 15 les fibroblastes de sujets âgés dans un modèle de treillis sous contraintes.

Exemple de formulation cosmétique

Ingrédients % 20 Eau Qsp. Glycérine 5 Chlorphénesine 0,3 MONTANOVTM 202 2 MONTANOVTM 82 1 25 LANOLTM P 1,5 Squalane végétal 7 Polyisobutène 13 KETROLTM T 0,15 N-palmitoyl glycine 1 30 MONTANOXTM 60 DF 0,5 SEPIPLUSTM 400 0,8 SEPICIDETM LD 0,7 Parfum 0,1 Tri éthanolamine à 50% dans l'eau 0,15 Les définitions des produits commerciaux utilisés comme ingrédients sont indiquées ci- dessous : KETROLTM T est de la gomme de xanthane commercialisée par la société KELCO.

LANOLTM P est un additif à effet stabilisant commercialisé par la société SEPPIC. MONTANOXTM 60 DF : Stéarate de sorbitan polyéthoxylé avec 20 moles d'oxyde d'éthylène, commercialisé par la société SEPPIC; MONTANOVTM 82 est un agent émulsionnant à base d'alcool cétéarylique et de cocoylglucoside; MONTANOVTM 202 (arachidyl glucoside, alcool arachidylique + alcool béhènylique), est une composition auto-émulsionnable telle que celles décrites dans WO 98/17610, commercialisée par la société SEPPIC ; SEPICIDETM LD : conservateur commercialisé par la société SEPPIC ; SEPIPLUSTM 400 : Nom INCI: polyacrylate 13 / polyisobutene / polysorbate 20 15 Références bibliographiques citées dans la description

- Bell et al.: Production of a tissue-like structure by contraction of collagen treillis by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci.

20 USA. March 1979 ;76(3) :1274-1278. - Grinnell: Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. TRENDS in Cell Biology. May 2003;13(5):264-69. - Silver et al.: Role of mechanophysiology in aging of ECM: effects of changes in mechanochemical transduction. J Appl Physiol. Nov. 2003;95:2134-41.

Claims (8)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un composé de formule (I) : RI-C(=O)-NH-CH(R2)-C(=O)-OH (I) L__J dans laquelle RI représente un radical hydrocarboné aliphatique, saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, comportant de 9 à 15 atomes de carbone, R2 représente la chaîne caractérisante d'un acide aminé, ou d'un mélange desdits composés de formule (I), comme actif restaurateur des forces isométriques de fibroblastes du derme humain.
2. 2. Utilisation d'un composé de formule (I) : RI-C(=O)-NH-CH(R2)-C(=O)-OH (I) L__J dans laquelle RI représente un radical hydrocarboné aliphatique, saturé ou insaturé, linéaire ou ramifié, comportant de 9 à 15 atomes de carbone, R2 représente la chaîne caractérisante d'un acide aminé, ou d'un mélange desdits composés de formule (I), pour la mise en oeuvre d'une méthode thérapeutique destinée à restaurer les forces isométriques des fibroblastes du derme humain.
3. 3. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle dans la formule (I), R2 représente la chaîne caractérisante de la glycine, de l'alanine, de la leucine ou de l'isoleucine.
4. 4. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle dans la formule (I), le radical RI-(C=0)- représente un radical choisi parmi les radicaux décanoyle, docécanoyle, tétradécanoyle ou hexadécanoyle. 30
5. 5. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle le composé de formule (I) est le N-palmitoyl alanine.
6. 6. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle le composé de formule (I) est le N-palmitoyl glycine.25
7. 7. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle le composé de formule (I) est le N-palmitoyl isoleucine.
8. 8. Utilisation telle que définie à l'une des revendications 1 ou 2, pour laquelle le composé de formule (I) est le N-cocoyl alanine.