FR2988563A1 - Activite antimicrobienne de ludwigia grandiflora - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne des extraits antibactériens de Ludwigia grandiflora, une espèce de plantes invasives dans plusieurs régions d'Europe, et leur utilisation dans divers domaines allant de la pharmacologie à l'aquariologie.

Description

Activité antimicrobienne de Ludwigia grandiflora Domaine de l'Invention La présente invention porte sur l'activité antimicrobienne de Ludwigia grandiflora. L'invention concerne en particulier des extraits de cette plante, et leur utilisation dans différents secteurs tels que, par exemple, la pharmacie, la médecine, la cosmétologie, l'aquariologie, le domaine des conservateurs alimentaires ou industriels, et le domaine des produits d'entretien et d'hygiène. Contexte de l'Invention Les Ludwigia, plus communément appelées Jussies, sont des hydrophytes invasives de la famille des Onagraceae originaires d'Amérique du Sud ou du Sud des Etats-Unis. Il existe environ 82 espèces différentes de Ludwigia. Certaines de ces espèces sont ubiquistes dans les écosystèmes d'eau douce, voire les zones humides adjacentes, de plusieurs régions d'Amérique, d'Australie et d'Europe (notamment en France, en Espagne, en Italie, aux Pays-Bas, en Suisse et dans les Balkans). En France, on retrouve deux espèces fortement invasives : Ludwigia grandiflora subsp. hexapetala (plante à grandes fleurs et dont le système aérien peut atteindre 1 mètre de haut) et Ludwigia peploides subsp. montevidensi (plante rampante à petites fleurs). Introduites en France au XIXe siècle comme plantes d'ornement des aquariums ou des bassins des jardins botaniques, les Ludwigia sont devenues de redoutables envahisseuses des milieux naturels et aquatiques calmes. Ces plantes se multiplient rapidement et colonisent totalement la zone aquatique disponible. L'envahissement par les Ludwigia est responsable de modifications écologiques importantes liées, entre autres, à la pénétration réduite de la lumière dans la masse d'eau et à la décantation de matières organiques au niveau de l'enchevêtrement racinaire. Ces substances organiques subissent, dès que la température devient favorable, une dégradation qui provoque la création d'un milieu anoxique peu favorable à la vie de la faune et de la flore, perturbant ainsi l'équilibre de l'écosystème. De plus, les Ludwigia forment des herbiers très denses qui ralentissent l'écoulement de l'eau, obstruent les canaux, entraînant des nuisances importantes pour les activités humaines telles que le tourisme, la chasse, la pêche et l'agriculture. L'éradication des Ludwigia est impossible. L'arrachage de ces plantes, moyen de lutte le plus utilisé contre l'envahissement, n'est efficace qu'à court terme. Il est délicat, onéreux, et génère des tonnes de biomasse polluante qui doivent être totalement éliminées, par incinération pour éviter les risques de prolifération par bouturage. De nombreux travaux de recherche ont concerné les Ludwigia. Ils sont essentiellement centrés sur les conditions de développement et les modes de reproduction de la plante, le recensement des herbiers et les répercussions des phénomènes d'invasion et de colmatage des voies d'eau contaminées (Dandelot et al., Hydrobiologica, 2005, 551: 131-136; Dandelot et al., Comptes Rendus Biologies, 2005, 328: 991-999; Ruaux et al., Aquatic Botany, 2009, 90: 143-148). De nombreuses études ont également fait état de propriétés médicinales des Ludwigia, en particulier de propriétés diurétiques, anti-dysentériques, antiseptiques, anti-inflammatoires, anti-tumorales, anthelminthiques et antidiarrhéiques (Perry, "Medicinal Plantes of East and South East Asia: Attributed Properties and Uses", 1980, The MIT Press, USA; Yusuf et al., "Medicinal Plants of Bangladesh", 1994, BCSIR Laboratories, Bangladesh; Kirtikar et al., "Indian Medicinal Plants", 1999, Second Ed., International Book Distributors, India, pp. 1088-1089; Ghani, "Medicinal Plants of Bangladesh", 2003, Second Ed. Asiatic Society of Bangladesh, Dhaka Bangladesh ; Murugesan et al., Phytotherapy Research, 2000, 14: 381-383). Des propriétés antibactériennes ont également été mises en évidence chez Ludwigia octovalvis (Chen et al., J. Ethnopharmacol., 1989, 27: 285-295), Ludwigia adscendens (Ahmed et al., Fitoterapia, 2005, 76: 473-475), Ludwigia hyssopifolia Linn. (Das et al., Pak. J. Pharm. Sci., 2007, 20: 128-131), et Ludwigia repens (Castillo-Juarez et al., J. Ethnopharmacol., 2009, 122: 402-405). Par ailleurs, Dandelot et al. (Aquatic Botany, 2008, 88: 311-316) font mention de propriétés allélopathiques de Ludwigia grandiflora, c'est-à-dire de 2 capacités à synthétiser des molécules ayant une influence positive ou négative sur la biologie des organismes qui vivent au sein de son écosystème. Une voie de valorisation de Ludwigia grandiflora, et plus particulièrement de Ludwigia grandiflora subsp. hexapetala, l'une des espèces invasives présentes en Europe, consisterait à exploiter ces propriétés. Dans une étude préliminaire, les présents inventeurs ont démontré que les extraits de Ludwigia grandiflora ont des effets antibactériens sur des bactéries Gram positif (Gram+) (Smida et al., "Etude de l'impact de Ludwigia grandiflora sur les micro-organismes en vue de la restauration d'écosystèmes et de la valorisation de la biomasse végétale", 7th European Conference on Ecological Restoration, 23 au 27 août 2010, Avignon, France). Résumé de l'Invention D'une façon générale, la présente invention repose sur la mise en évidence de propriétés antibactériennes de Ludwigia grandiflora contre les bactéries Gram négatif (Gram-), sur l'observation que les extraits de Ludwigia grandiflora qui présentent l'activité antibactérienne la plus élevée sont ceux obtenus à partir de plantes prélevées durant leur période de floraison présentaient des effets antibactériens particulièrement intéressantes, et sur la mise en évidence de propriétés antifongiques de Ludwigia grandiflora. En conséquence, un premier aspect de la présente invention concerne un extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora pour son utilisation comme agent antibactérien contre les bactéries Gram négatif. L'invention concerne également un extrait d'une plante de l'espèce 25 Ludwigia grandiflora pour son utilisation comme agent antifongique. L'invention concerne aussi un extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora, caractérisé en ce que la plante est prélevée pendant la période de floraison de Ludwigia grandiflora, préférablement en juin, juillet et/ou août. Dans certains modes de réalisation, un extrait selon l'invention est un extrait 30 de plante entière. 3 Dans d'autres modes de réalisation, un extrait selon l'invention est un extrait d'une partie de plante choisie parmi les racines, les tiges, les feuilles, les fleurs et toute combinaison desdites parties, préférablement un extrait des feuilles et/ou des fleurs, plus préférablement encore un extrait de fleurs.

Dans certains modes de réalisation, un extrait selon l'invention est obtenu par : - lavage à l'eau de la plante prélevée, - séchage de la plante prélevée ou d'une partie de la plante lavée, - broyage de la plante ou d'une partie de la plante pour la réduire en poudre, - extraction de la poudre par un solvant, préférablement l'eau ou le diméthylsulfoxyde. Un autre aspect de l'invention concerne un extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora, caractérisé en ce que la plante est prélevée pendant la période de floraison de Ludwigia grandiflora, préférablement en juin, juillet et/ou août pour son utilisation comme médicament, et en particulier comme agent antibactérien en antibiothérapie, l'antibiothérapie pouvant être dirigée contre une bactérie Gram positif ou une bactérie Gram négatif. Un autre aspect de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un extrait selon l'invention et au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable. L'invention concerne aussi une composition cosmétique comprenant au moins un extrait selon l'invention et au moins un véhicule ou excipient cosmétologiquement acceptable. Un autre aspect de la présente invention concerne l'utilisation d'un extrait selon l'invention. En particulier, l'invention porte sur l'utilisation d'un extrait selon l'invention en tant qu'agent antimicrobien pour le nettoyage, la décontamination ou la désinfection de surfaces. 4 L'invention concerne aussi l'utilisation d'un extrait selon l'invention en tant qu'agent pour la conservation d'un produit cosmétique, d'un produit alimentaire ou d'un produit pharmaceutique. L'invention concerne également sur l'utilisation d'un extrait selon l'invention pour clarifier et/ou purifier une eau stagnante. Un autre aspect de la présente invention concerne des produits comprenant un extrait selon l'invention. En particulier, l'invention porte sur un produit de nettoyage, de décontamination ou de désinfection contenant un extrait selon l'invention. Ce produit peut être destiné à clarifier et/ou à purifier une eau stagnante. L'invention concerne également un produit alimentaire comprenant un extrait selon l'invention. L'invention concerne aussi un produit d'agriculture comprenant un extrait selon l'invention. Une description plus détaillée de certains modes de réalisation préférés de l'invention est donnée ci-dessous.

Description Détaillée de l'Invention D'une manière générale, la présente invention concerne des extraits de Ludwigia grandiflora, leurs propriétés antibactériennes, et leur utilisation dans divers domaines allant de la pharmacologie à l'aquariologie. I - Extraits de Ludwigia Grandiflora Tel qu'utilisé ici, le terme "Ludwigia grandiflora" désigne en particulier la sous-espèce Ludwigia grandiflora subsp. hexapetala que l'on trouve, entre autres dans plusieurs régions d'Europe. Un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être obtenu à partir de plantes prélevées d'un herbier sauvage (c'est-à-dire d'un plan d'eau envahi par des plantes de l'espèce Ludwigia grandiflora). En particulier, les plantes utilisées dans la préparation d'un tel extrait peuvent résulter d'une procédure d'éradication par arrachage, permettant ainsi de valoriser la biomasse polluante des herbiers. Cependant, il n'est pas exclu qu'un extrait de Ludwigia 5 grandiflora selon l'invention puisse être obtenu à partir de plantes spécialement cultivées à cet effet. Dans le contexte de la présente invention, on entend par "extrait de Ludwigia grandiflora" toute substance obtenue par au moins une opération physique, chimique, et/ou biochimique effectuée sur une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora. Dans certains modes de réalisation, les plantes utilisées dans la préparation d'un extrait selon l'invention sont prélevées à n'importe quel stade de leur développement, c'est-à-dire depuis l'état de plantule à celui de floraison achevée. Cependant, préférablement, les plantes sont prélevées pendant la période de floraison de Ludwigia grandiflora qui s'étend de juin à septembre. Plus préférablement encore, les plantes sont prélevées en juin, juillet et/ou août. Il est entendu que ces mois correspondent à la période habituelle de floraison de Ludwigia grandiflora dans le Sud de la France. L'homme du métier reconnaîtra qu'en raison des conditions climatiques, la période de floraison de Ludwigia grandiflora peut varier d'une année à l'autre et, par exemple, commencer plus tôt (dès avril) et/ou se terminer plus tard (en septembre ou octobre). Il est également évident que la période de floraison de Ludwigia grandiflora dans une autre région géographique que le Sud de la France ou dans un autre pays aura lieu à un moment différent et/ou pendant une durée différente.

Dans certains modes de réalisation, l'extrait est obtenu à partir de plantes entières. Dans d'autres modes de réalisation, l'extrait est obtenu à partir d'un ou de plusieurs organes ou parties spécifiques de la plante (par exemple, les racines, les tiges, les feuilles, les fleurs ou une combinaison particulière de ces organes ou parties). Préférablement, un extrait de Ludwigia grandiflora est préparé à partir de feuilles et/ou de fleurs, en particulier à partir de feuilles et/ou de fleurs de plantes prélevées pendant la période de floraison. Plus préférablement encore, un extrait de Ludwigia grandiflora est préparé à partir de feuilles et/ou de fleurs de plantes prélevées en juin, juillet et/ou août. 6 Préparation d'un extrait de Ludwigia grandiflora Les plantes peuvent être prélevées par n'importe quelle méthode appropriée, par exemple par arrachage et/ou coupe manuels ou mécaniques. Immédiatement après prélèvement, les plantes sont mises dans des glaciaires étanches. Les plantes recueillies sont ensuite lavées à l'eau courante. Dans certains modes de réalisation, une fois la plante lavée, elle est mise à sécher telle que prélevée, c'est-à-dire dans son ensemble (racine, tige, feuilles et fleurs). Le séchage peut être effectué par n'importe quelle méthode appropriée. Les plantes peuvent, par exemple, être séchées à l'air, à l'abri de la lumière, à l'abri de la poussière, et à température ambiante (c'est-à-dire entre 18°C et 25°C). Il est cependant envisageable d'effectuer le séchage à une température plus élevée que la température ambiante, par exemple entre 25°C et 30°C, ou entre 30°C et 35°C. Il est également envisageable de sécher les plantes par lyophilisation. Dans d'autres modes de réalisation, une fois la plante lavée, les différents organes ou parties de la plante (racines, tiges, feuilles et fleurs) sont séparés et puis séchés séparément comme décrit ci-dessus. Après séchage, les plantes entières ou tous les organes séparés ou bien seulement certains d'entre eux (ex. les fleurs et/ou les feuilles) sont broyés et réduits en poudre fine. Le broyage peut être effectué par n'importe quelle technique appropriée, y compris par broyage mécanique (en utilisant, par exemple, un système mortier et pilon, un broyeur de type Potter-Elvelijhem, ou un broyeur de type Dounce), ou par déchiquetage mécanique (utilisant, par exemple, un Waring BlenderTM, ou un broyeur Virtis). Toute combinaison appropriée de ces méthodes peut également être utilisée dans la préparation d'un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention. La poudre obtenue par broyage sert de produit de départ à l'extraction. L'extraction peut être effectuée immédiatement après séchage. Alternativement, avant extraction, la poudre séchée peut être conservée à basse température (par exemple à 4°C) à l'abri de la lumière et de l'humidité ou bien encore être congelée (par exemple à -20°C). Il est également envisageable de congeler les plantes ou 7 les organes séchés pour les conserver et de ne les réduire en poudre par la suite qu'avant extraction. L'extraction de la poudre végétale est effectuée à l'aide d'un solvant. Le solvant peut être choisi parmi les solvants organiques de différentes polarités depuis l'eau jusqu'au cyclohexane, ou toute combinaison de ces solvants. Dans certains modes de réalisation, le solvant est choisi parmi l'eau, le méthanol, l'éthanol, le diméthylsulfoxyde (DMSO), l'acétone, le dichlorométhane, et l'acétate d'éthyle. Dans certains modes de réalisation préférés, le solvant d'extraction est l'eau ou le DMSO. L'ajout du solvant à la poudre végétale est suivi d'une agitation vigoureuse puis d'une centrifugation. Le surnageant, qui est généré par centrifugation, est récupéré et constitue un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention. Dans certains modes de réalisation, le solvant du surnageant est évaporé. Dans les préparations de l'ordre de quelques grammes d'extrait de Ludwigia grandiflora, le solvant est préférablement ajouté dans un rapport allant de 1 à 50 mL de solvant par gramme de poudre végétale, par exemple de 2 à 30 mL ou de 2 à 20 mL, préférablement de 3 à 10 mL de solvant par gramme de poudre végétale, et plus préférablement encore environ 5 mL de solvant par gramme de poudre végétale. Un homme du métier saura déterminer les rapports optimaux dans le cas de préparations à plus grande échelle. L'agitation vigoureuse peut être effectuée par n'importe quelle technique appropriée (par exemple par agitation vigoureuse au vortex ou agitation magnétique vigoureuse ou encore par sonication). L'homme du métier saura déterminer les conditions optimales de l'agitation (durée, température, etc). En particulier, la durée d'agitation variera en fonction de la quantité de poudre végétale de départ, de la nature du solvant, et du rapport poudre/solvant. De même, les conditions optimales de centrifugation (températures, vitesse de rotation, et durée) seront déterminées en fonction du solvant d'extraction utilisé et de la quantité de poudre végétale de départ. Dans certains modes de réalisation, 8 la centrifugation est effectuée à 15000 rotations par minute (rpm). Dans certains modes de réalisation, des centrifugations successives peuvent être effectuées. L'extrait de Ludwigia grandiflora obtenu (sous forme liquide dans le solvant d'extraction) peut être conservé à basse température (par exemple à 4°C) et à l'abri de la lumière ou bien encore être congelé. Alternativement, l'extrait peut être mis sous forme de poudre après séchage par atomisation, évaporation et/ou lyophilisation, et conservé à température ambiante ou à basse température (par exemple à 4°C) et à l'abri de la lumière ou bien encore être congelé (par exemple à -20°C).

II - Utilisations des Extraits de Ludwigia grandiflora Du fait de leurs propriétés antimicrobiennes, les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention peuvent trouver application dans de nombreux domaines où l'absence de contamination bactérienne et/ou fongique est recherchée. Tel qu'utilisé ici, le terme "antibactérien" fait référence à une substance qui tue et/ou prévient la croissance de bactéries. Le terme "bactéricide" a ici sa signification usuelle et désigne une substance ayant la capacité de tuer des bactéries. Tel qu'utilisé ici, le terme "antifongique" fait référence à une substance qui tue et/ou prévient la croissance de champignons (également appelés mycètes), et le terme "antimycosique" fait plus particulièrement référence à une substance qui tue et/ou prévient la croissance de champignons dans le cas du traitement de mycoses, c'est-à-dire d'infections provoquées par des champignons chez les mammifères. Ainsi, les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention, et plus particulièrement les extraits obtenus à partir de plantes prélevées pendant la période de floraison comme décrits ci-dessus, peuvent être utilisés dans tout domaine où l'absence de contamination par des bactéries Gram+ est recherchée. Une "bactérie Gram+" est une bactérie qui a une structure unimembranée et qui apparaît mauve par la technique de coloration de Gram. Les bactéries Gram+ contre lesquelles un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être 9 utilisé incluent, sans limitation, les bactéries appartenant aux genres Staphylococcus, Micrococcus, Lactococcus, Lactobacillus, Clostridium, Bacillus, Streptococcus, Enterococcus, et Listeria. En particulier, un extrait de Ludwigia grandiflora peut être utilisé contre les bactéries Gram+ pathogènes ou 5 potentiellement pathogènes pour l'homme ou un autre mammifère, comme par exemple, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus intermedius, Clostridium tetani, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium difficile, Bacillus cereus, Bacillus anthracis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus 10 agalactiae, Streptococcus pneumoniae, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Listeria monocytogenes, et Listeria ivanovii. Les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention peuvent également être utilisés dans tout domaine où l'absence de contamination par des bactéries Gram- est recherchée. Une "bactérie Gram-" est une bactérie qui a, sauf 15 exception, une structure bimembranée et qui apparaît rose par la technique de coloration de Gram. Les bactéries Gram- contre lesquelles un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être utilisé incluent, sans limitation, les bactéries appartenant aux genres Bordetella, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Escherichia coli, Vibrio, Pseudomonas, Neisseria, 20 Haemophilus, et Agrobacterium. En particulier, un extrait de Ludwigia grandiflora peut être utilisé contre les bactéries Gram- pathogènes ou potentiellement pathogènes pour l'homme ou un autre mammifère, comme par exemple, Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Shigella boydii, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella 25 sonnei, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter sakazakii, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pestis, Yersina enterocolitica, Yersina pseudotuberculosis, Salmonella enterica, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio fluvialis, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Haemophilus aegypticus, et 30 Haemophilus ducreyi. 10 Les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention trouvent donc application en médecine (humaine ou vétérinaire), en particulier en antibiothérapie. L'antibiothérapie se heurte actuellement à la nécessité d'un renouvellement des antibiotiques présents sur le marché par suite de l'apparition d'une résistance importante des principales bactéries pathogènes en milieu hospitalier. Ce phénomène est à l'origine des nombreuses maladies nosocomiales observées. La recherche de nouvelles molécules synthétisées par des organismes vivants, en particulier, les végétaux, apparaît comme une stratégie particulièrement intéressante.

La présente invention concerne donc un extrait de Ludwigia grandiflora, comme défini ici, pour son utilisation comme médicament, en particulier comme agent antibactérien (antibiotique ou antiseptique). Le terme "antibiotique" fait référence ici à une substance qui tue et/ou prévient la croissance de bactéries à l'intérieur du corps humain ou animal alors que le terme "antiseptique" fait référence ici à une substance qui agit de même sur les surfaces externes du corps humain ou animal. Selon le même aspect, la présente invention concerne également une méthode de traitement comprenant une étape dans laquelle une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora ou d'une composition pharmaceutique comprenant un tel extrait (voir plus bas) est administrée à un patient ou à un sujet. Cette méthode peut, en particulier, être utilisée pour le traitement d'une infection bactérienne, telle qu'une infection causée par une bactérie pathogène Gram+ ou une bactérie pathogène Gram-. Dans le contexte de la présente invention, on entend par "traitement" une méthode qui a pour but (1) de retarder ou prévenir le début d'une maladie ou d'une condition clinique ; (2) de ralentir ou d'arrêter la progression, l'aggravation ou la détérioration des symptômes de la maladie ; (3) d'apporter des améliorations des symptômes de la maladie ; et/ou (4) de guérir la maladie. Un traitement peut être administré avant le début de la maladie pour une action préventive, ou il peut être administré après initiation de la maladie, pour une action thérapeutique. Le terme "sujet" désigne ici un mammifère, en particulier un mammifère domestique, comme par exemple les ovins, les bovins, les caprins, les chevaux, les chats, les chiens, etc, alors que 11 le terme "patient" est préférablement utilisé lorsque le sujet est un être humain. Un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention (ou une composition pharmaceutique comprenant un tel extrait) peut être administré par n'importe quelle voie d'administration appropriée (orale, parentérale, rectale, pulmonaire, nasale, cutanée, transdermique, mucosale, etc) et peut être locale ou systémique. La voie optimale d'administration peut être déterminée en fonction de la nature et/ou de la localisation de l'infection bactérienne. Les infections bactériennes qui peuvent être traitées par administration d'un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention incluent, sans limitation, les infections urinaires bactériennes, les infections cutanées bactériennes, les infections intestinales bactériennes, les infections pulmonaires bactériennes, les infections ostéo-articulaires bactériennes, les infections génitales bactériennes, les infections dentaires bactériennes, la septicémie, les infections nosocomiales, les méningites bactériennes, les gastro-entérites bactériennes, les endocardites, les pneumonies endocardites, la lèpre, la typhoïde, le tétanos, les angines bactériennes, les otites bactériennes, les salmonelloses, etc. Les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention peuvent également être utilisés dans tout domaine où l'absence de contamination par des champignons est recherchée. Tel qu'utilisé ici, le terme "champignon" regroupe les microorganismes du règne des Fungi y compris les levures. Les champignons contre lesquels un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être utilisé incluent, sans limitation, les champignons appartenant aux genres Candida, Cryptococcus, Aspergillus. Trichophyton, Microsporum, et Epidermophyton. En particulier, un extrait de Ludwigia grandiflora peut être utilisé contre les champignons pathogènes ou potentiellement pathogènes pour l'homme ou un autre mammifère, comme par exemple, Candida albicans, Candida pseudotropicalis, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guillermondii, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus albidus, Cryptococcus gattii, Aspergillus fumigatus, Aspergillus piger, Aspergillus nidulans, Aspergillus ochraceus, Aspergillus versicolor, Microsporum audouinii, 12 Trichophyton rubrum, Tricophyton interdigitale, Trichophyton violaceum, Triphophyton schoenleini, Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, Trychophyton mentagrophytes, et Trichophyton ochraceum. La présente invention concerne donc également un extrait de Ludwigia grandiflora, comme défini ici, pour son utilisation comme agent antifongique, en particulier antimycosique. Selon le même aspect, la présente invention concerne également une méthode de traitement d'une infection causée par un champignon comprenant une étape dans laquelle une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora ou d'une composition pharmaceutique comprenant un tel extrait (voir plus bas) est administrée à un patient ou à un sujet. Comme déjà mentionné, l'administration d'un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention (ou une composition pharmaceutique comprenant un tel extrait) peut être effectuée par n'importe quelle voie d'administration appropriée (orale, parentérale, rectale, pulmonaire, nasale, cutanée, transdermique, mucosale, etc) et peut être locale ou systémique. La voie optimale d'administration peut être déterminée en fonction de la nature et/ou de la localisation de l'infection fongique. Les infections fongiques qui peuvent être traitées par administration d'un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention incluent, sans limitation, les candidoses telles que les candidoses cutanées, buccales, et vaginales, et la mycose profonde ou systémique qui concerne l'ensemble de l'organisme ; les cryptococcoses qui touchent dans la grande majorité des cas des sujets immunodéprimés et dont la forme clinique la plus fréquente et la plus grave consiste en une méningo-encéphalite ; les aspergilloses, en particulier l'aspergillose bronchopulmonaire, les dermatophytoses comme les teignes, les trichophyties, les microsporoses, et les epidermophytoses. Les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention trouvent également application dans le domaine des produits d'entretien et d'hygiène en tant qu'agent désinfectant. Le terme "désinfectant" tel qu'utilisé ici désigne une substance qui tue et/ou prévient la croissance de bactéries et/ou des champignons sur la surface d'objets inanimés. De tels objets peuvent par exemple être des instruments 13 médicaux ; des sols, des surfaces, des mobiliers ou des dispositifs de laboratoires ou de sites opératoires ; des sols, des surfaces, des mobiliers ou des dispositifs chez des particuliers ou dans des installations publiques ou industrielles. La présente invention concerne donc ainsi l'utilisation d'un extrait de 5 Ludwigia grandiflora, tel que défini ici, comme agent désinfectant. Selon ce même aspect, la présente invention concerne également une méthode de nettoyage, de décontamination ou de désinfection d'une surface d'un objet comprenant une étape de mise en contact de la surface de l'objet avec une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora ou d'une composition comprenant 10 un tel extrait. Un extrait de Ludwigia grandiflora peut être inclus dans une composition ou un produit de nettoyage, ou peut imprégner un tampon ou une lingette destiné au nettoyage, à la décontamination et/ou à la désinfection. L'invention englobe de tels compositions, produits, tampons et lingettes. Les extraits de Ludwigia grandiflora selon l'invention trouvent également 15 application en tant que conservateurs. Le terme "conservateur" tel qu'utilisé ici désigne en particulier une substance qui empêche le développement de bactéries et/ou de champignons dans un produit et assure la conservation de ce produit. La présente invention concerne donc aussi l'utilisation d'un extrait de Ludwigia grandiflora, tel que défini ici, comme agent conservateur. Un extrait de Ludwigia 20 grandiflora peut être inclus dans un produit cosmétique, un aliment, une boisson, un produit pharmaceutique afin d'éviter la contamination du produit par des bactéries et/ou des champignons. L'invention englobe de tels produits. Selon ce même aspect, la présente invention concerne également une méthode de conservation d'un produit cosmétique, alimentaire, ou pharmaceutique 25 comprenant une étape d'incorporation d'une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora au produit cosmétique, alimentaire ou pharmaceutique. En ce qui concerne la cosmétologie et l'agroalimentaire, le remplacement de conservateurs chimiques par des produits biologiques dans des crèmes ou des lotions va dans le sens des impératifs de la législation. 14 Un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention, en raison de ses propriétés antibactériennes, peut également être utilisé pour maintenir la clarté et la pureté des eaux stagnantes d'aquariums, de vases de fleurs, de bassins, etc. Un extrait de Ludwigia grandiflora peut être inclus dans un produit d'entretien des eaux stagnantes. L'invention englobe de tels produits. L'invention concerne également une méthode pour maintenir la clarté et/ou la pureté d'une eau stagnante comprenant une étape consistant à ajouter une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora à l'eau stagnante. Enfin, un extrait de Ludwigia grandiflora peut également être utilisé contre les bactéries, les champignons et/ou les oomycètes pathogènes ou potentiellement pathogènes pour les végétaux, comme par exemple, Phytophthora infestans, Phytophthora destructor, Phytophthora cactorum, Fusarium spp., Botrycis cinerea, Pythium spp., Armillariella mellea, et Plasmodiophora brassicae . Un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention trouve donc application en tant qu'agent antifongique dans le domaine de l'agriculture, la fruticulture, la légumiculture, l'horticulture et/ou l'arboriculture. L'invention concerne donc l'utilisation d'un extrait selon l'invention pour prévenir et/ou inhiber la croissance de bactéries, de champignons et/ou d'oomycètes sur ou dans les végétaux comestibles (légumes, fruits), les arbres, les végétaux d'ornement (plantes, fleurs) et/ou les sols sur lesquels ces végétaux ou arbres se développent et/ou les produits agricoles emballés. Selon ce même aspect, la présente invention concerne une méthode pour prévenir ou inhiber une infection bactérienne, fongique ou parasitaire d'un végétal et/ou du substrat sur lequel il se développe, la méthode comprenant une étape de mise en contact de la surface du végétal et/ou du substrat avec une quantité efficace d'un extrait de Ludwigia grandiflora ou d'une composition comprenant un tel extrait. La mise en contact peut se faire par n'importe quelle méthode appropriée, par exemple par saupoudrage ou aspersion liquide. Un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être inclus dans une composition ou 15 un produit destiné à favoriser et/ou permettre le développement du végétal, par exemple eau d'arrosage ou engrais. III - Compositions Pharmaceutiques, Para-pharmaceutiques, et Cosmétiques L'invention concerne également des préparations ou compositions 5 pharmaceutiques, para-pharmaceutiques ou cosmétiques comprenant au moins un extrait de Ludwigia grandiflora tel que défini ci-dessus, et en particulier un extrait préparé à partir de plantes prélevées durant la période de floraison. En raison de leurs propriétés antimicrobiennes mentionnées plus haut, les extraits de Ludwigia grandiflora peuvent être utilisés comme agents de 10 conservation dans les cosmétiques pour empêcher leur contamination par des bactéries et/ou les champignons. Une composition cosmétique selon l'invention comprend au moins un extrait de Ludwigia grandiflora tel que défini ci-dessus et au moins un excipient cosmétologiquement acceptable ou approprié. Une composition selon la présente invention peut être utilisée comme telle, 15 ou alternativement peut être incorporée dans un produit cosmétique, ou dans un produit d'hygiène ou de soin corporel. Ainsi une composition cosmétique de l'invention peut être ajoutée à des crèmes ou des lotions pour le visage, les mains, les pieds ou le corps (par exemple, crèmes de jour, crèmes de nuit, laits corporels, détergents et savons, lotions, laits, gels ou mousses de soin de la peau, déodorants 20 ou anti-transpirants) ; des produits de maquillage ; des crèmes, gels, huiles ou lotions d'autobronzants ; des écrans solaires ; des produits capillaires (par exemple, shampooings, après-shampooings, produits de coloration, crèmes, gels ou mousses de coiffage) ; produits de rasage et après-rasage, baumes pour les lèvres, etc. 25 Une composition cosmétique selon la présente invention peut être formulée sous forme solide, semi-solide, ou liquide. Le choix de la formulation se fera généralement en fonction de l'application à laquelle la composition est destinée. Des formulations appropriées à une utilisation cosmétique sont connues dans l'art et incluent, par exemple, les émulsions simples (par exemple, émulsions huile- 16 dans-eau ou eau-dans-huile), émulsions multiples, microémulsions, gels aqueux ou hydroalcooliques, huiles, solutions aqueuses ou solutions hydroalcooliques, mousses, crèmes, laits, huiles, lotions, pâtes, bâtonnets, poudres, crayons, etc. Pour la préparation de telles formulations, un extrait de Ludwigia grandiflora peut être mélangé à au moins un excipient cosmétologiquement approprié (par exemple, huiles végétales ou minérales, cires végétales ou minérales, silicones, alcools, acides gras, lanoline, eau, etc) ou être incorporé dans des vecteurs de types liposomes, macrosphères, microsphères, nanosphères, macroparticules, microparticules, nanoparticules, macrocapsules, microcapsules, nanocapsules, ou encore être absorbé sur des polymères organiques poudreux, des talcs, bentonites et autres supports minéraux. Une composition cosmétique selon l'invention peut également contenir des additifs tels que d'autres adjuvants antibactériens, des parfums, des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio- actifs, des émulsifiants, etc. De façon générale, une composition cosmétique de l'invention comprend une quantité efficace d'extrait de Ludwigia grandiflora, c'est-à-dire une quantité d'extrait qui est suffisante pour remplir le rôle ou l'action désiré(e) (par exemple, procurer, au produit cosmétique qui contient l'extrait, une protection contre la contamination par des bactéries et/ou des champignons). Par exemple, dans certains modes de réalisation, une composition cosmétique de l'invention peut comprendre entre environ 0,01% et environ 50% en poids d'extrait sous forme de poudre, ou entre environ 0,01% et environ 90% en poids d'extrait sous forme encapsulée.

Les compositions à usage cosmétique de la présente invention peuvent, en outre, contenir au moins un principe actif cosmétique supplémentaire (c'est-à-dire, en plus de l'extrait de Ludwigia grandiflora). On entend par "principe actif cosmétique", tout composé ou substance qui peut être utilisé(e) dans le soin pour le corps, la peau, les cheveux, etc..., et qui est généralement appliqué localement.

Les principes actifs cosmétiques qui peuvent être utilisés dans le contexte de la 17 présente invention peuvent appartenir à diverses familles de composés et substances, y compris les extraits végétaux, extraits marins, extraits tissulaires, molécules de synthèse, etc. De tels principes actifs sont connus dans l'art. Par exemple, un principe actif cosmétique approprié peut être avantageusement sélectionné parmi les substances qui augmentent la protection cutanée (par exemple, les vitamines, céramides, substances anti-radicalaires, filtres UV, etc), les substances qui ont un effet cicatrisant (par exemple, les protéines, l'acide hyaluronique, les acides aminés) ou un effet anti-inflammatoire sur la peau, les substances qui limitent les effets nocifs du soleil (filtres UVA et/ou UVB), les produits bronzants et auto-bronzants, les substances qui facilitent le bon état du cuir chevelu et celui des cheveux (par exemple, minéraux, vitamines, céramides, extraits protéiques, mucopolysaccharides, acides de fleurs et/ou de fruits), les substances anti-âge et/ou anti-rides, les toniques, les détergents, les substances qui ont une activité sur la sensibilité cutanée, etc. Dans de telles compositions cosmétiques de l'invention, chaque principe actif supplémentaire est généralement présent en quantité suffisante pour exercer son activité. En raison de ses propriétés antimicrobiennes, un extrait de Ludwigia grandiflora selon l'invention peut être utilisé comme agent thérapeutique. Un tel extrait peut être administré comme tel ou sous la forme d'une préparation ou composition pharmaceutique en présence d'au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable. Dans le contexte de la présente invention, on entend par "véhicule ou excipient physiologiquement acceptable" tout milieu ou additif qui n'interfère pas avec l'efficacité de l'activité biologique du principe actif (ici, l'extrait de Ludwigia grandiflora), et qui n'est pas excessivement toxique pour le patient ou sujet, aux concentrations auxquelles il est administré. Un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable peut être un véhicule ou excipient approprié à l'administration aux humains et/ou aux animaux (en particulier aux mammifères domestiques). Les compositions pharmaceutiques selon la présente invention peuvent être administrées en utilisant toute combinaison de dosage et de voie d'administration 18 efficace pour obtenir l'effet thérapeutique désiré. La quantité exacte à administrer peut varier d'un patient à un autre, en fonction de l'âge, du poids, de la condition générale du patient, de la nature et de la gravité de l'infection bactérienne ou fongique, etc. La voie d'administration (orale, parentérale, rectale, pulmonaire, nasale, cutanée, transdermique, mucosale, etc.) peut être choisie en fonction de la nature et/ou de la localisation de l'infection bactérienne ou fongique. L'administration peut être locale ou systémique. La formulation d'une composition pharmaceutique de la présente invention peut varier en fonction de la voie d'administration et du dosage pour lesquels la composition est destinée à être utilisée. Après formulation avec au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable, une composition pharmaceutique de l'invention peut être sous toute forme appropriée pour l'administration à un mammifère, y compris l'homme, par exemple sous la forme de tablettes, comprimés, dragées, capsules, sirops, onguents, solutions injectables, suppositoires, etc. L'homme de l'art sait sélectionner les véhicules et excipients les plus appropriés à la préparation d'un type donné de formulation. Ainsi, par exemple, les excipients tels que l'eau, le 2,3-butanediol, la solution de Ringer, les solutions isotoniques de chlorure de sodium, les mono ou diglycérides synthétiques, et l'acide oléique sont souvent utilisés pour la formulation de préparations injectables. Les compositions liquides, y compris les émulsions, microémulsions, solutions, suspensions, sirops, élixirs, etc., peuvent être formulés en présence de solvants, d'agents solubilisants, d'émulsifiants, d'huiles, d'acides gras, et d'autres additifs comme des agents de suspension, des conservateurs, des édulcorants, des aromes, des agents viscosants, des colorants, etc. Les compositions solides pour l'administration par voie orale peuvent être formulées en présence d'un excipient inerte comme le citrate de sodium, et éventuellement d'additifs tels que des agents liants, des agents humectants, des agents de désintégration, des accélérateurs d'absorption, des agents lubrifiants, etc. Dans certains modes de réalisation, une composition pharmaceutique de la présente invention est formulée pour une libération immédiate du ou des principes 19 actifs de l'extrait. Alternativement, une composition pharmaceutique peut être formulée pour une libération prolongée du ou des principes actifs de l'extrait. De nombreuses stratégies sont connues dans l'art pour provoquer une libération prolongée d'un principe actif, comme par exemple une augmentation du temps de séjour dans l'estomac, en utilisant des enrobages sensibles au pH et/ou à des actions enzymatiques, ou des enrobages bioadhésifs qui s'accrochent aux parois de l'estomac ou de l'intestin, ou encore en utilisant des systèmes d'encapsulation comme mentionné ci-dessus. Les compositions pharmaceutiques selon la présente invention peuvent, en outre, contenir au moins un principe actif pharmaceutique supplémentaire (c'est- à-dire, en plus de l'extrait de Ludwigia grandiflora). On entend par "principe actif pharmaceutique", tout composé ou substance dont l'administration a un effet thérapeutique ou un effet bénéfique à la santé ou condition générale d'un patient ou d'un sujet auquel il est administré. Ainsi, un principe actif pharmaceutique peut être actif contre l'infection bactérienne ou fongique que l'on veut soigner par administration de la composition pharmaceutique ; peut être actif contre une condition ou un symptôme associé à l'infection bactérienne ou fongique (par exemple, réaction inflammatoire) ; ou peut accroître la disponibilité et/ou l'activité du ou des principes actifs de la composition pharmaceutique.

Des exemples de principes actifs pharmaceutiques qui peuvent être présents dans une composition de la présente invention incluent, sans limitation, des anti-inflammatoires, des antibiotiques, des agents antipyrétiques, des agents antipruritiques et/ou antihistaminiques, des vitamines, etc. A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les publications, demandes de brevet, tous les brevets et toutes autres références mentionnés ici sont incorporés par référence. 20 Les exemples suivants et les figures sont présentés pour illustrer certains modes de réalisation des procédures décrites ci-dessus et ne doivent en aucun cas être considérés comme une limite à la portée de l'invention. Exemples Les exemples suivants décrivent certains modes de réalisation de la présente invention. Cependant, il est entendu que les exemples ne sont présentés qu'à titre illustratif seulement et ne limitent en aucun cas la portée de l'invention. Matériel et Méthodes 1. Obtention des plantes de Ludwigia grandiflora Les plantes ont été prélevées d'un herbier de Ludwigia grandiflora se trouvant dans la Siagne, au lieu-dit l'Ecluset à Pégomas (Alpes Maritimes, France). Cet herbier est volumineux ; il colonise les bords de la rivière et un encaissement de la berge au sein duquel l'écoulement des eaux est lénique (écoulement lent).

Six campagnes de prélèvements ont été effectuées, en avril, mai, juin, juillet, août et septembre, par arrachage manuel ou section au niveau de la tige de la plante, sans dispersion dans l'écosystème de morceaux de plante. Les plantes ont ensuite immédiatement été placées dans des glaciaires étanches. Les différentes parties des plantes (tiges, feuilles et fleurs) ont été séparées et mises à sécher à l'obscurité, à l'abri de la poussière, et à température ambiante. Une fois sèche, la biomasse a été broyée et réduite en poudre fine, à l'aide d'un broyeur de laboratoire (Labortechnik IKA®). Les poudres des différentes parties de la plante ont été stockées dans des récipients en verre, à l'abri de la lumière et de l'humidité. 2. Préparation d'extraits de Ludwigia grandiflora Pour chaque type d'organe (tige, feuille et fleur), 10 mL de DMSO ont été ajoutés à 2 g de poudre végétale, le tout étant pilé dans un mortier en verre ou en céramique et le mélange obtenu agité vigoureusement au Vortex® pendant 10 minutes. Une centrifugation à 15000 rpm a ensuite été effectuée pendant 30 21 minutes à 20°C. Le surnageant (c'est-à-dire l'extrait) a été recueilli et conservé à 4°C à l'abri de la lumière. 3. Souches bactériennes Les 14 souches bactériennes utilisées ont été fournies par le laboratoire d'Ecologie microbienne de l'IMEP et sont présentées dans le Tableau 1. 4. Tests d'activité antibactérienne L'activité antibactérienne de chaque extrait a été testée sur milieu gélosé selon la méthode de diffusion des disques, la méthode des antibiogrammes (Janssen et al., Pharmaceutische Weekblad (Scientific Edition), 1987, 9: 193-197; Bayero et al., J. Pure Appl. Sci., 2008, 2: 149-153; Loubaki et al., Science et Médecine, Revue, CAME-Série A, 1999, 01:67). Le milieu utilisé est celui de Mueller Hinton Agar, qui est non-sélectif et adéquat pour tester la sensibilité aux antibiotiques. Ensemencement par inondation. Les suspensions bactériennes ont été obtenues par mise en suspension de colonies isolées des souches, dans de l'eau distillée stérile. L'absorbance de chaque suspension bactérienne a été ajustée à une densité optique (DO) égale à 0,5 à 450 nm. Des dilutions ont ensuite été réalisées pour chaque souche bactérienne afin d'obtenir un tapis microbien adéquat pour l'étude : les suspensions des souches S. typhymurium, S. aureus, K .oxytoca, L. grayi, L. lactis, E. aerogenes, et E. faecalis ont été diluées au 1/100, les suspensions des 3 souches E. coh, et les souches P. rettgeri, P. aeruginosa, P. putida, et B. megaterium ont été diluées au 1/1000. Les boîtes ont été ensemencées par inondation. 2 mL de suspension bactérienne ont été nécessaires pour recouvrir la surface de chacune des boîtes. Le surplus a été récupéré par aspiration. Après ensemencement, les boîtes ont été incubées pendant 15 minutes à 37°C pour une fixation rapide des bactéries sur le milieu gélosé. 22 Tableau 1. Souches bactériennes utilisées. Bactérie Nom de la Gram+ Notes souche ou Gram- Escherichia coli IP 105242 Gram - bactérie du tube digestif des mammifères IP 6221 IP 6224 Enterobacter aerogenes CIP 60.86 Gram- bactérie commensale du tube digestif et responsable d'infection urinaire et d'infections nosocomiales Enterococcus faecalis IUP U1 Gram+ bactérie commensale du tube digestif, responsable d'infections nosocomiales, multirésistante aux antibiotiques communément utilisés notamment, les pénicillines semi-synthétiques Klebsiella oxytoca LMD7265 col Gram- bactérie responsable d'infections urinaires, pulmonaires et de septicémie, résistante aux pénicillines bl Lactobacillus lactis IUT Gram+ bactérie utilisée dans les productions de produits laitiers Providencia rettgeri CIP 69.24 Gram- bactérie responsable des gastro-entérites humaines et du choléra des poulets Pseudomonas aeruginosa IP100720 Gram- pathogène opportuniste nosocomial, responsable d'infections pulmonaires, urinaires, des brûlures et plaies, sensible aux carboxipénicillines mais résistant à toutes les autres pénicillines Pseudomonas putida IP521917 Gram- bactérie utilisée pour la biorestauration des sols contaminés par des hydrocarbures comme les composés issus du naphtalène Listeria grayi Gram+ bactérie responsable d'infection d'origine alimentaire, peut atteindre le système nerveux central et foetoplacentaire Salmonella typhymurium Gram- agent infectieux du tube digestif Staphylococcus aureus Gram+ Fait partie de la flore cutanée, responsable d'infections nosocomiales, d'infections cutanées et de maladies mortelles telles que l'endocardite, la pneumonie et la méningite, résistant à de nombreux antibiotiques Bacillus megaterium Gram+ bactérie du sol, produit la pénicillineamydase pour la production de la pénicilline Application des disques. Les disques utilisés sont des disques stériles de papier filtre Whatman, de 6 mm de diamètre. Dans chaque boîte (deux boîtes par extrait), deux disques imprégnés de 15 g, d'extrait et un disque témoin imprégné de 30 g, de DMSO ont été soigneusement déposés sur la gélose, à l'aide d'une 23 pince stérile. Les boîtes ont été incubées à 30°C pendant 24 heures. L'apparition d'un halo autour des disques traduit l'inhibition de la croissance bactérienne. Le diamètre (mesurés en millimètres) des halos est proportionnel à l'activité antimicrobienne.

Légendes des Figures Figure 1 est une photo montrant les halos d'inhibition obtenus avec un extrait brut de feuilles de Ludwigia grandiflora récoltées au moins d'août sur Candida albicans. Résultats 1. Activité antibactérienne des extraits de Ludwigia grandiflora Les activités antibactériennes sont exprimées en moyenne de diamètre, en mm, des zones d'inhibition, calculées à partir de 3 diamètres déterminés pour chaque halo, soit 6 diamètres au total. Propriétés antibactériennes des extraits de feuilles de Ludwigia grandiflora. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 2. Tableau 2. Effets des extraits de feuilles de Ludwigia grandiflora sur le développement de souches bactériennes. Les résultats présentés sont les diamètres exprimés en mm (n=6). Mois Avril Mai Juin Juillet Août Septembre Bacillus megaterium 0 17,08±1,16 13,17±0,83 0 15,28±1,33 13,28±1,76 Enterobacter aerogenes 0 9,33±0,89 15,50±1,78 10,00±1,04 0 9,00±0;00 Enterococcus faecalis 0 9,00±0,00 21,42±1,24 10,50±0,52 11,00±0.00 10,43±0,75 Escherichia coli 1052 12,08±1,08 11,83±2.72 17,08±2.11 21,75±1.54 15,33±0,89 12,00±0,00 Escherichia coli 6221 12,50±2,43 12,00±2,76 15,75±4,22 12,50±1,17 16,42±1,73 0 Escherichia coli 6224 0 0 17,89±1,17 15,22±1,20 22,33±1,58 16,11±1,05 Klebsiella oxytoca 9,17±0,37 10,17±0,37 15,00±0,00 18,33±1,70 21,39±1,42 15,11±5,26 Lactobacillus lactis 0 0 0 13,00±0,00 12,83±0,37 13,44±0,90 Listeria grayi 0 0 0 12,00±0,00 17,28±1,52 14,67±0,47 Providencia rettgeri 10,67±1,49 10,00±0,00 19,83±1,67 16,50±1,50 17,67±1,11 14,25±0,43 Pseudomonas aeruginosa 0 0 14,00±2,53 19,93±0,25 14,27±0,44 14,93±1,34 24 Pseudomonas putida 0 0 16,75±2,12 16,17±6,36 19,93±0,25 18,33±2,12 Salmonella typhymurium 0 7,50±0,52 24,75±0,87 23,00±0,00 27,00±0,00 24,00±0,00 Staphylococcus aureus 0 11,00±0,00 21,92±1.24 18,83±0,39 22,58±0,51 19,00±0,00 Propriétés antibactériennes des extraits de fleurs de Ludwigia grandiflora. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 3. Tableau 3. Effets des extraits de fleurs de Ludwigia grandiflora sur le développement de souches bactériennes. Les résultats présentés sont les diamètres exprimés en mm (n=6). Mois Juin Juillet Août Bacillus megaterium 0 0 10,33±0,75 Enterobacter aerogenes 12,58±2,23 22,75±0,62 10,00±0,00 Enterococcus faecalis 10±0 10,08±1,16 11,33±0,49 Escherichia coli 1052 17,83±2,25 18,17±2,08 0 Escherichia coli 6221 25,5±3,55 17,25±4,69 15,5±0,80 Escherichia coli 6224 16,17±0,98 16,89±1,62 18,89±0,60 Klebsiella oxytoca 18,67±1,60 15,83±069 18,39±1,38 Lactobacillus lactis 0 11,00±0,00 17,83±3,32 Listeria grayi 10,00±0,00 11,00±0,00 20,00±0,00 Providencia rettgeri 19,17±0,37 15,92±0,95 17,42±1,19 Pseudomonas aeruginosa 16,73±1,24 0 14,00±0,00 Pseudomonas putida 17,67±0,00 13,67±1,41 16,50±2,12 Salmonella typhymurium 26,00±0,00 25,00±0,00 25,50±0,52 Staphylococcus aureus 23,17±0,94 21,00±0,00 23,92±1,38 Propriétés antibactériennes des extraits de tiges de Ludwigia grandiflora. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 4. Tableau 4. Effets des extraits de tiges de Ludwigia grandiflora sur le développement de souches bactériennes. Les résultats présentés sont les diamètres exprimés en mm (n=6). Mois Avril Mai Juin Juillet Août Septembre Bacillus megaterium 0 11,46±0,50 0 0 0 0 Enterobacter aerogenes 0 12,92±1,24 14,00±4,49 10,67±0,49 0 0 Enterococcus faecalis 10,17±0,41 11,17±0,39 10,00±1,04 10,00±1,04 9,33±0,77 9,17±0,77 Escherichia coli 1052 14,08±1,73 17,92±4,23 15,92±3.34 15,67±2,06 9,00±0,00 9,25±0,45 Escherichia coli 6221 0 18,83±3,04 14,00±5,01 14,42±1,16 0 0 25 Escherichia coli 6224 0 0 16,22±1,17 0 18,00±0,87 0 Klebsiella oxytoca 0 9,17±0,37 10,00±0,00 14,00±0,00 9,17±0,37 9,50±0,50 Lactobacillus lactis 0 0 0 10,00±0,00 11,00±0,00 11,00±0,00 Listeria grayi 0 0 0 0 10,33±0,47 10,00±0,00 Providencia rettgeri 0 11,75±1,30 16,33±1,55 16,50±0,50 10,50±0,50 12,50±0,87 Pseudomonas aeruginosa 0 0 16,80±2,29 14,33±2,09 9,00±0,00 0 Pseudomonas putida 0 0 13,17±2,83 17,00±3,54 0 0 Salmonella typhymurium 0 0 18,00±0,00 21,00±0,00 10,00±0,00 10,00±0,00 Staphylococcus aureus 0 0 15,92±0,90 17,50±0,52 10,50±2,15 8,75±0,45 Les résultats obtenus (voir Tableaux 2, 3 et 4) montrent que l'activité antibactérienne des extraits varie en fonction de plusieurs paramètres : - la période de développement de la plante : les propriétés antibactériennes apparaissent à partir du mois de juin, et leur effet augmente jusqu'au mois d'août. Les jeunes plantes qui se développent au mois de mai ne présentent, elles, aucune activité. - l'organe de la plante (tiges, feuilles ou fleurs) : l'activité antibactérienne la plus élevée est observée pour les extraits de feuilles et les extraits de fleurs. - les souches bactériennes auxquelles l'extrait est appliqué : l'activité se manifeste, de façon plus ou moins intense selon la nature de la souche bactérienne. Mais les activités mesurées ne dépendent pas du caractère Gram+ ou Gram- de la souche, ce qui tend à suggérer que l'action des extraits ne se situe pas spécifiquement au niveau de la synthèse du peptidoglycane, composant essentiel de la paroi des bactéries Gram+. Sur l'ensemble des résultats obtenus, les souches les plus sensibles aux extraits de Ludwigia grandiflora se sont révélées être la souche de Salmonella typhimurium et la souche de Staphylococcus aureus.

Pour la plus grande majorité des extraits étudiés, un effet bactéricide, voire bactériolytique, mais rarement bactériostatique a été observé. 26 . Activité antifongique des extraits de Ludwigia grandiflora Une activité sur une souche de Candida albicans, levure pathogène, à l'origine d'infections intestinales, buccales ou encore gynécologiques, a été observée avec un extrait de feuilles de Ludwigia grandiflora récoltées au mois d'août (Figure 1). Le diamètre moyen des halos d'inhibition est de 30,00 mm ±0,00 mm. 3. Fractionnement d'un extrait de Ludwigia grandiflora Des fractionnements sur colonne de silice ont été réalisés sur un extrait de feuilles de Ludwigia grandiflora récoltées au mois d'août. Un premier fractionnement effectué avec un gradient éther de pétrole / éther éthylique (pas de 10) a permis d'éliminer des fractions apolaires non actives sur la souche de Staphylococcus aureus, bactérie prise pour témoin d'une activité antibactérienne. Sur la partie active de l'extrait, un gradient de polarité éther éthylique / dichlorométhane / méthanol, pour un volume total de 400 mL, a conduit à l'obtention de 29 échantillons qui ont été nommés sous-fractions (Tableau 5). En fonction des caractéristiques des spots observés en chromatographie sur couche mince, ces sous-fractions ont été réunies en 7 fractions (F1 à F7) selon la distribution précisée dans le tableau 6. Un antiobiogramme a été réalisé sur la souche Staphylococcus aureus avec des disques imprégnés de 15 !IL de chacune de ces fractions (comme décrit ci-dessus). Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 6. Tableau 5. Fractionnement de la partie active de l'extrait de feuilles de Ludwigia grandiflora dans un gradient éther éthylique - dichlorométhane - méthanol N° sous-fractions Ether éthylique (%) Dichlorométhane (%) Méthanol (%) 0 100 0 0 1 0 99 1 2 0 98 2 3 0 97 3 4 0 96 4 5 0 95 5 6 0 94 6 27 0 93 7 8 0 92 8 9 0 91 9 10 0 90 10 11 0 89 11 12 0 88 12 13 0 87 13 14 0 86 14 15 0 85 15 16 0 84 16 17 0 83 17 18 0 82 18 19 0 81 19 20 0 80 20 21 0 79 21 22 0 78 22 23 0 75 25 24 0 70 30 25 0 60 40 26 0 50 50 27 0 25 75 28 0 0 100 29 0 0 100 Tableau 6. Diamètres des halos d'inhibition de la souche de St. aureus, exprimés en millimètre, obtenus par la méthode des antibiogrammes avec les fractions Fl à F7, et avec l'extrait non-fractionné. Fractions d'extrait Staphylococcus aureus et sous-fractions du tableau 5 (Diamètres des halos d'inhibition exprimés en entre parenthèses mm) F1 (1-6) 17,00 ± 0,00 F2 (7-11) 27,17 ± 1,17 F3 (12-15) 25,00 ± 0,00 F4 (16-19) 36,00 ± 0,00 F5 (20-25) 34,00 ± 0,00 F6 (30-75) 23,50 ± 0,55 F7 (100 - 100) 0,00 ± 0,00 Extrait non fractionné 22,58 ± 0,51 La purification de l'extrait semble démontrer que l'action de toutes les molécules antibactériennes qu'il contient n'agissent pas toutes en synergie. Les activités bactériennes des fractions F4 et F5 (diamètre des halos d'inhibition 28 respectivement égaux à 36,00 mm ± 0,00 et 34,00 mm ± 0,00) sont 1,5 fois supérieures à celles de l'extrait brut (diamètre de halo d'inhibition = 22,58 mm ± 0,51) et contiendraient donc les molécules qui soit seraient plus actives, et/ou seraient en concentration plus élevée. 29

Claims (6)

1. REVENDICATIONS1. Extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora pour son utilisation comme agent antibactérien contre les bactéries Gram négatif.
2. 2. Extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora pour son utilisation comme agent antifongique.
3. 3. Extrait d'une plante de l'espèce Ludwigia grandiflora, caractérisé en ce que la plante est prélevée pendant la période de floraison de Ludwigia grandiflora, préférablement en juin, juillet et/ou août.
4. 4. Extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que l'extrait est un extrait de plante entière ou d'une partie de plante choisie parmi les racines, les tiges, les feuilles, les fleurs et toute combinaison desdites parties, préférablement un extrait des feuilles et/ou des fleurs, plus préférablement encore un extrait de fleurs.
5. 5. Extrait selon l'une quelconque des revendications 1, 2 et 4, caractérisé en ce que la plante est prélevée pendant la période de floraison de Ludwigia grandiflora, en juin, juillet, août ou septembre, préférablement en juin, juillet et/ou août.
6. 6. Extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'extrait est obtenu par : - lavage à l'eau de la plante prélevée, - séchage de la plante ou d'une partie de la plante lavée, - broyage de la plante ou d'une partie de la plante pour la réduire en poudre, - extraction de la poudre par un solvant, préférablement l'eau ou le diméthylsulfoxyde.30. Extrait selon l'une quelconque des revendications 3 à 6 pour son utilisation comme médicament. 8. Extrait selon l'une quelconque des revendications 3 à 6 pour son utilisation comme agent antibactérien en antibiothérapie. 9. Extrait selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'antibiothérapie est dirigée contre une bactérie Gram positif ou une bactérie Gram négatif 10. Composition pharmaceutique comprenant au moins un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et au moins un véhicule ou excipient physiologiquement acceptable. 11. Composition cosmétique comprenant au moins un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et au moins un véhicule ou excipient cosmétologiquement acceptable. 12. Utilisation d'un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en tant qu'agent antimicrobien pour le nettoyage, la décontamination ou la désinfection de surfaces. 13. Utilisation d'un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en tant qu'agent pour la conservation d'un produit cosmétique, d'un produit alimentaire ou d'un produit pharmaceutique. 14. Utilisation d'un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour clarifier et/ou purifier une eau stagnante. 15. Produit de nettoyage, de décontamination ou de désinfection contenant un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 16. Produit selon la revendication 15, caractérisé en ce que le produit est destiné à clarifier et/ou purifier une eau stagnante. 31. Produit alimentaire contenant un extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 18. Produit d'agriculture contenant un extrait selon l'une quelconque des revendicatios 1 à 6. 32