UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT D'HARUNGANA MADAGASCARIENSIS La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d' un extrait d' Harungana madagascariensis dans une composition cosmétique hydratante. Elle concerne également l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant un extrait d'Harungana madagascariensis comme agent actif hydratant. L'invention concerne enfin l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant un extrait d'Harungana madagascariensis pour stimuler l'expression de la filaggrine. La peau est un organe particulier du corps humain. De fine épaisseur, elle est très étendue puisqu'elle recouvre toute la surface du corps et totalise chez l'adulte une surface d'environ 1,6 m2. Son rôle capital est d'être la barrière qui protège l'organisme vis à vis de l'environnement. Toute altération de cette barrière entraîne de graves conséquences. Tout se joue dans l'épiderme et plus particulièrement dans sa partie superficielle : le Stratum Corneum (ou couche cornée). Dans le Stratum Corneum, il existe de nombreux processus chimiques au niveau des cornéocytes et des espaces intercellulaires. L'hydratation joue un rôle majeur dans la régulation des transformations de cette couche cornéocytaire grâce à des enzymes spécifiques (protéases, lipases). L'eau et les lipides cutanés, associés à des substances hydrosolubles confèrent à la peau une cohésion indispensable à sa fonction. Ces trois éléments jouent un rôle essentiel. Tout déficit en eau provoque des dysfonctionnements visibles : sécheresse cutanée ou xérose, troubles de la desquamation. Cela se traduit par une augmentation de la couche squameuse.
Dans le corps, l'eau représente 60 à 65% du poids corporel (soit 42 litres en moyenne) . Les 2/3 se trouvent à l'intérieur des cellules, et 1/3 est extracellulaire (plasma, lymphe, liquide interstitiel) .
Dans la peau, la majorité de l'eau est contenue dans le derme (6 litres sur les protéoglycanes et .les glycoprotéines de structure) . On trouve 120m1 d'eau dans l'épiderme de Malpighi et 20m1 dans la couche cornée. L'eau diffuse passivement de la couche de Malpighi vers la couche cornée, puis à travers la couche cornée vers l'extérieur. Cette diffusion est inapparente, c'est la perspiration insensible ou perte insensible en eau (P. I.E. ) . Dans des conditions normales, avec une barrière cutanée intègre, la P. I.E. est de 5gr/m2/heure.
Les facteurs retenant l'eau dans la couche cornée sont des substances intracellulaires appelées « Facteurs Naturels d'Hydratation » (ou FNH) . Ils se forment lors de la transformation, dans la couche granuleuse, des kératinocytes en cornéocytes et de la transformation de la pro-filaggrine en filaggrine. La filaggrine est une protéine au métabolisme complexe. Elle est d'abord synthétisée sous forme d'un précurseur basique de haut poids moléculaire (400 kDa) , la pro-filaggrine sous forme phosphorylée et stockée dans les granules de kératohyaline des kératinocytes granuleux. A la transition couche granuleuse/couche cornée la pro-filaggrine est déphosphorylée avant d'être clivée par protéolyse en sous-unités fonctionnelles de monomères basiques de filaggrine de 37 kDa chez l'Homme. Les monomères ainsi libérés s' associent aux filaments intermédiaires de kératines par des interactions ioniques afin de participer à l' agrégation et la stabilisation du réseau de kératines. Cette association pourrait également permettre d'empêcher une protéolyse trop rapide de la filaggrine. La région N-terminale est également libérée et transloquée dans le noyau. Dans le stratumcompactum, les sous-unités de filaggrine sont désiminées (transformation de résidus arginyl en résidus citrully1) par une ou plusieurs peptidyl-arginine désiminases (PADs). Cette modification entraîne un changement de charge, la filaggrine devient alors acide et perd son affinité pour la kératine. Les sous-unités de filaggrine se détachent de la matrice et sont complètement protéolysées, dans les cornéocytes superficiels; en acides aminés libres entrant dans la composition du FNH. Le FNH est retrouvé exclusivement dans le stratum corneum, il est composé majoritairement d'un pool d'acides aminés, d'acide lactique, d'urée, de citrate et de sucres. Les composants du FNH sont présents en grande quantité .dans la couche cornée, pouvant représenter jusqu'à 30% du poids du cornéocyte. Les acides aminés issus du FNH, comme l'acide pyrrolidone carboxylique, sont hygroscopiques. Ils peuvent capter l'eau présente dans l'atmosphère et agir comme humectant, ce qui permet à la couche cornée de rester perpétuellement hydratée malgré l'action asséchante de l'environnement extérieur De plus, la présence d'acides aminés va participer à la diminution du pH de la couche cornée. Cette acidité permet de réguler la flore bactérienne présente à la surface de la peau mais aussi de contrôler l'action de nombreuses enzymes cornéocytaires, comme les protéases impliquées dans le processus de desquamation ou les lipases essentielles à la maturation des lipides. Enfin, la photo-isomérisation de l'acide trans-urocanique (trans-UCA), issu de la transformation de l'histidine présente dans le FNH en acide cis-urocanique (cis-UCA), permet l'absorption d'une partie du rayonnement UV. Tous les acides aminés présents dans le FNH sont issus de la protéolyse de la filaggrine. Les autres composants extracellulaires qui ne proviennent pas du cornéocyte, comme l'urée, les sucres et le lactate pourraient provenir en partie des glandes sudoripares. La demanderesse amis en évidence de manière surprenante l'effet d'un extrait d'Harungana madagascariensis sur l'expression de la filaggrine. On peut donc utiliser un extrait d'Harungana madagascariensis comme agent actif hydratant, comme agent actif stimulant l'expression de la filaggrine.
Harungana madagascariensis est un arbre de la famille des hypericaceae largement présent à Madagascar. Cette plante est utilisée traditionnellement comme colorant jaune et à des fins thérapeutiques notamment comme antibactérien et anti-inflammatoire. La composition cosmétique, objet de la présente invention contient un extrait d'Harungana madagascariensis. Il s'agit préférentiellement d'un extrait de feuilles d'Harungana madagascariensis. De façon avantageuse, cet extrait est un extrait aqueux et de préférence il est stabilisé par de la glycérine. De préférence il s'agit d'un extrait aqueux obtenu selon un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - séchage des feuilles - extraction à l'eau des feuilles maturation puis filtration -évaporation du solvant d'extraction - ajustement de la concentration (ajout de glycérine) L' extrait d' Harungana madagascariensis utilisé dans la composition selon 1' invention, est un liquide visqueux marron-rouge et d' odeur caractéristique. Il présente les caractéristiques analytiques suivantes : pH (à 1% dans l'eau): 4 - 6 Densité à 20 °C : 1,2 - 1,4 Indice de réfraction : 1,4 -1,6 Rapport plante/extrait = 10/4 De préférence la composition cosmétique selon l'invention comprend de 0,01 à 10 % d'extrait d'Harungana madagascariensis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition comprend de 0,01 à 5 % d'extrait d'Harungana madagascariensis en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Les compositions selon l'invention peuvent encore comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans leb compositions cosmétiques et dermatologiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la vitamine E, des filtres UV, etc... Grâce à ses connaissances en matière de cosmétique, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'une huile, d'un lait, d'un spray, etc... La présente invention concerne l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant un extrait d' Harungana madagascariensis pour stimuler l'expression de la filaggrine. La présente invention concerne aussi l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant un extrait d'Harungana madagascariensis pour renforcer la barrière cutanée et/ou traiter les altérations de la barrière cutanée. La présente invention concerne également l' utilisation cosmétique d' un extrait d' Harungana madagascariensis dans une composition cosmétique hydratante. La présente invention concerne aussi l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant un extrait d'Harungana madagascariensis comme agent actif hydratant. De même, la présente invention concerne aussi l' utilisation cosmétique d' un extrait d' Harungana madagascariensis pour traiter les peaux sèches et/ou déshydratées. La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Harungana madagascariensis pour lutter contre les réactions cutanées consécutives des variations climatiques. Enfin, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique des peaux sèches et/ou déshydratées, comprenant l' application d'une composition cosmétique comprenant un extrait d'Harungana madagascariensis. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'effet d'un extrait d'Harungana madagascariensis sur l'expression de la filaggrine et d'autre part des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : 10 - la figure 1 représente les clichés de kératinocytes humains préparés dans les conditions décrites dans l'exemple I où la filaggrine est marquée par immunofluorescence (TRITC en rouge) l'observation est faite en microscopie optique fluorescence, grossissement x 200. Le 15 cliché 1 correspond au contrôle, Le cliché 2 correspond au témoin calcium 1.5 mM, le cliché 3 correspond à un extrait d' Harungana madagascariensis à 0.001%, le cliché 4 correspond à un extrait d'Harungana madagascariensis à 0.005%, et le cliché 5 correspond à un extrait d'Harungana madagascariensis 20 à 0.01%. - la figure 2 représente l'intensité de l'expression de la filaggrine par des kératinocytes humains dans différentes conditions de culture (voir l'exemple I), cette intensité est exprimée en unité de fluorescence. *: 25 p<0.05; **:p<0.01; ***:p<0.001. Significativement différent par rapport au contrôle. Les différences significatives sont montrées en utilisant le test statistique « ANOVA one way » suivie par un test de Tukey-Kramer (jmp analysis). - la figure 3 représente l'expression de la 30 filaggrine par des kératinocytes humains dans différentes conditions de culture (voir l'exemple I), elle est exprimée en pourcentage du contrôle.
I .EVALUATION DE L'ACTIVITE D'UN EXTRAIT D' HARUNGANA MADAGASCARI ENS I S SUR LA DI FFERENC IAT I ON EPIDERMIQUE PAR IMMUNOMARQUAGE DE LA FILAGGRINE le but de l'étude est d'analyser l' effet de l'extrait d' Harungana madagascariensis sur la synthèse de la filaggrine, marqueur de la différenciation épidermique, dans des cultures de kératinocytes humains en monocouche. Après traitement dans un milieu nutritif pendant 8 jours, le marqueur de la différenciation est révélé par immunocytochimie. A.MATERIEL ET METHODE On utilise des kératinocytes humains en culture sur lamelle à 37°C et 5% de CO2, dans un milieu essentiel de Dulbecco modifié (DMEM) avec 10 % de sérum de veau foetal (SVF) . On teste des concentrations d'extraits d' Harungana madagascariensis à 0,001% - 0,005% - 0,01% ; avec comme référence positive du calcium 1,5 mM. Les cellules sont rincées et incubées pendant 24 heures dans un milieu DMEM contenant 2mM de L-glutamine et 10% de SVF, milieu nutritif utilisé pour l'étude. Les cellules sont ensuite rincées et incubées 96 heures avec un extrait de Harungana madagascariensis aux concentrations choisies ou la référence.
Chaque tapis cellulaire est alors rincé, fixé au méthanol (-20°C) avant de procéder à la révélation de la filaggrine par immunofluorescence. B. IMMUNOCYTOCHIMIE Les cellules sont incubées avec le premier anticorps dirigé contre la filaggrine puis avec l'anticorps secondaire dirigé contre le premier anticorps couplé au fluorochrome TRITC (Tetra methyl Rhodamine Iso Thio Cyanate, dérivé de la Rhodamine) . Le temps d'incubation entre chaque anticorps est d'une heure.
Les lamelles sont montées sur lame de verre puis observées au microscope à fluorescence (Nikon Eclipse 50±). Plusieurs champs de la population cellulaire sont pris en photo. La fluorescence au Tetra methyl Rhodamine Iso Thio Cyanate (TRITC) détectée indique la présence de la filaggrine. Les clichés photographiques sont analysés par le logiciel d'analyse d' image NIS Elements (Nikon) . C.RESULTATS Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous et représentent la moyenne de l' expression de la filaggrine en intensité de fluorescence ; n représente le nombre de clichés pris par condition et esm l' écart type standard de la moyenne. moyenne esm expression filaggrine en % du contrôle Contrôle 11906280 1698760,5 100 Calcium 1,5mM 25048956 3042802,1 210 Harungana 0,001% 25056372,5 3141493,9 210 Harungana 0,005% 26691551 3645967,7 224 Harungana 0,01% 29407424,5 3325045,0 247 Dans ces conditions expérimentales, l'extrait d'Harungana madagascariensis stimule l'expression de la filaggrine par les kératinocytes en culture. Donc par son action, l'extrait d' Harungana madagascariensis possède la capacité de renforcer la barrière cutanée ; et ainsi de relancer les mécanismes naturels de l'hydratation. II.EXEMPLES DE FORMULATIONS FLUIDE JOUR HYDRATANT CARBOMER 0,30 TAPIOCA STARCH 1,50 SEPINOV EMT 10 0,80 n=20 n=20 n=19 n=19 n=20 ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 GLYCOLS 4,00 PPG 5 CETETH 20 0,20 ACETATE DE TOCOPHEROL 0,20 CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE.. 4,00 CETEARYL ISONONANOATE 2,00 LUBRAJEL 5,00 HARUNGANA MADAGASCARIENSIS 1,00 TROMETHAMINE Q.S. pH PARFUM Q.S. CONSERVATEURS Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.s.P.100 CRÈME DE NUIT HYDRATANTE CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE 4,30 DIMETHICONE 5,00 HUILE VASELINE FLUIDE 8,00 ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE 12,00 STEARETH 21 0,50 GLYCERYL STEARATE & PEG-100 STEARATE 2,70 PENTAERYTHRITYL DISTEARATE 2,00 BEURRE DE KARITE 2,00 CARBOMER 0,25 GOMME XANTHANE 0,20 GLYCERINE 5,00 EDTA DISODIQUE 0,10 DIMETHICONE & DIMETHICONOL 0,50 HARUNGANA MADAGASCARIENSIS 1,00 SODIUM HYDROXIDE Q.S. pH PARFUM Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.s.p.100 CONSERVATEURS Q.S. SERUM HYDRATANT SODIUM POLYACRYLATE 0,80 BIOSACCHARIDE GUM-1 10,00 HARUNGANA MADAGASCARIENSIS 1,00 METHYL GLUCETH 20 3,00 GLYCOLS 15,00 ACIDE CITRIQUE 0,10 PARFUM Q.S. CONSERVATEURS Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.s.P.100