FR3000389A1 - Procede cosmetique de stimulation de la synthese d'aquaporine 8 par application cutanee d'une composition cosmetique comprenant un extrait de jania rubens. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un procédé cosmétique de stimulation de la synthèse de fibres de collagène par les cellules du derme, d'inhibition de la différenciation des adipocytes et de stimulation de la lipolyse incluant une étape d'application sur la peau d'une composition cosmétique à visée minceur et/ou fermeté renfermant un principe actif stimulant l'expression de l'aquaporine 8.

Description

Procédé cosmétique de stimulation de la synthèse d'aquaporine 8 par application cutanée d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Jania rubens.

Le domaine de l'invention est celui de la cosmétologie. Plus précisément, l'invention concerne un procédé de stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 dans les cellules du derme humain afin de favoriser une action minceur et fermeté. La peau se divise en trois couches : l'épiderme, le derme et l'hypoderme. C'est au niveau de l'hypoderme que se situent les adipocytes, ou cellules graisseuses.

Les adipocytes sont organisés en lobules graisseux, séparés par des cloisons de tissu conjonctif. Lorsque les adipocytes se gorgent exagérément de graisses, les lobules augmentent de volume et poussent le derme et l'épiderme vers le haut. Cet aspect irrégulier est connu sous le nom de peau d'orange ou encore cellulite. L'épaississement de l'hypoderme va, de plus, comprimer les vaisseaux sanguins. Les toxines sont alors mal éliminées et s'accumulent au niveau du derme, créant une réaction inflammatoire. Plus précisément, la dénomination scientifique de la peau d'orange est panniculopathie oedémato-fibro-sclérotique. Ses causes peuvent être génétiques, hormonales ou encore liées à un déséquilibre entre les apports caloriques et les dépenses énergétiques. On estime que la peau d'orange concerne environ 90% des femmes occidentales âgées de plus de vingt ans. Il existe différents types de cellulite ou peau d'orange parmi lesquels on peut citer la cellulite adipeuse et la cellulite fibreuse. La cellulite adipeuse peut se loger dans les genoux, les cuisses, le ventre, les fesses et les hanches. Elle est souple au toucher et non douloureuse. La cellulite fibreuse est, en revanche, particulièrement dense et douloureuse. Quel que soit le type de cellulite, cela peut être particulièrement disgracieux et être complexant pour les sujets concernés. De nombreuses techniques ont alors été mises au point pour résoudre ce problème. On connaît bien sûr les méthodes mécaniques comme la lipoaspiration ou le palper-rouler. La lipoaspiration consiste à faire passer une sonde sous la peau de la patiente anesthésiée afin de racler pour décoller la graisse et l'aspirer. Cette méthode invasive est particulièrement douloureuse. Elle est de plus onéreuse et nécessite une intervention chirurgicale. Le palper-rouler est une méthode de massage consistant à décoller la graisse sous-cutanée pour faciliter son élimination. Qu'elle soit effectuée de manière manuelle ou mécanique, cette méthode est également douloureuse. Elle présente par ailleurs une efficacité limitée sur la cellulite fibreuse et est déconseillée aux sujets présentant une fragilité vasculaire. D'autres méthodes comme la mésothérapie, la lipolyse par ultrasons, par laser ou par injection de solution hypo-osmolaire ont également été testées. Leur efficacité est à relativiser compte tenu des effets secondaires qu'elles entraînent (douleurs, érythèmes, nécroses cutanées...). On connaît également des compositions pharmaceutiques et cosmétiques sous forme de crème, permettant de déstocker les graisses sous-cutanées. La grande majorité de ces crèmes incorporent de la caféine comme actif lipolytique. La caféine agit sur la cellulite en stimulant la lipase hormono-sensible (HSL), enzyme nécessaire à la lipolyse, et en inhibant la phosphodiestérase, enzyme qui dégrade l'AMP cyclique activant la HSL. La caféine permet donc principalement de bloquer le stockage des lipides. Par ailleurs, la plupart de ces compositions contiennent des agents nacrants permettant de renvoyer la lumière, ce qui donne de manière artificielle un aspect plus lisse et moins bosselé à la peau. Toutefois, aucune de ces compositions ne permet de rendre à la peau sa souplesse, sa fermeté et son élasticité. Il existe donc un besoin de formuler une composition cosmétique ou pharmaceutique permettant de stimuler la lipolyse afin d'éliminer la cellulite. Il est également nécessaire de faire en sorte que cette composition redonne à la peau un aspect ferme, élastique et souple. L'invention a notamment pour objectif de pallier ces inconvénients de l'art antérieur. Plus précisément, un objectif de l'invention est de fournir, dans au moins un mode de réalisation, un procédé permettant de stimuler la lipolyse.

Un autre objectif de l'invention est de mettre en oeuvre, dans au moins un mode de réalisation, un procédé cosmétique permettant d'améliorer la souplesse et la fermeté de la peau. L'invention a encore pour objectif de mettre en oeuvre, dans au moins un mode de réalisation, un procédé cosmétique permettant de diminuer l'aspect peau d'orange de la cellulite. 1. Exposé de l'invention Ces objectifs, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints à l'aide d'un procédé cosmétique de stimulation de la synthèse de fibres de collagène par les cellules du derme, d'inhibition de la différenciation des adipocytes et de la stimulation de la lipolyse. Selon l'invention, un tel procédé inclue une étape d'application sur la peau d'une composition cosmétique à visée minceur et/ou fermeté renfermant un principe actif stimulant l'expression de l'aquaporine 8. En effet, les inventeurs ont découvert de manière surprenante que la stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 (AQP8) permettait d'agir de manière centrale en stimulant l'expression d'un ensemble de gènes, aboutissant à la lipolyse et à la différenciation des adipocytes ainsi qu'à la synthèse de fibres de collagène I par les fibroblastes. De manière générale, les aquaporines sont constituées de 6 domaines transmembranaires délimitant un canal central au sein de la membrane cellulaire. Ces protéines participent à l'homéostasie cellulaire en permettant le passage de l'eau et des petits solutés. Plus spécifiquement, l'aquaporine 8 a été initialement détectée dans les hépatocytes, le pancréas, le colon et les cellules rénales. Elle contribue au maintien du pH et de la pression osmotique cellulaire grâce à sa capacité à transporter l'urée et les ions ammonium. Plus récemment, l'expression de l'aquaporine et son rôle éventuel dans l'hydratation de l'épiderme ont été démontrés dans les kératinocytes humains (P.Y Morvan et R. Vallée, Parfums Cosmétiques Actualités (194), 2007).

Les inventeurs ont constaté que le traitement d'adipocytes humains, prélevés chez un sujet féminin âgé de 58 ans, permettaient d'une part de limiter la maturation des adipocytes en diminuant l'expression des gènes impliqués dans la synthèse d'acide gras ou dans la différenciation des adipocytes et d'autre part, de stimuler la lipolyse aussi efficacement que la caféine. Ainsi, l'application d'une composition cosmétique comprenant un principe actif cosmétique stimulant l'expression de l'AQP8 permet de stimuler la lipolyse et donc de déstocker les graisses contenues dans les adipocytes. Elle permet également de stimuler l'expression des gènes impliqués dans la synthèse des acides gras ou dans la liaison des lipides aux protéines, ce qui a pour effet de limiter la formation de cellulite. Enfin, l'aquaporine 8 permet également de favoriser la production d' adiponectine par les adipocytes. Cette hormone est à la fois impliquée dans la régulation du métabolisme des lipides et du glucose, mais présente également un rôle anti-inflammatoire. Or, la formation de cellulite est généralement accompagnée d'une légère inflammation des tissus. Par conséquent, un procédé comprenant l'application d'une composition cosmétique sur la peau, la composition permettant de stimuler l'expression de l'AQP8, permet de combattre la cellulite en déstockant les adipocytes des graisses qu'ils contiennent tout en limitant sa reformation. Les inventeurs ont également constaté de manière plus étonnante que l'expression de l'aquaporine 8 dans les fibroblastes de la peau permettait également de favoriser la synthèse de fibres de collagènes de type I, IV et VII. Or, ces types de collagène sont impliqués respectivement dans la composition du derme, de la lame basale et les fibres d'ancrage de la jonction dermo-épidermique. Ainsi, un procédé cosmétique comprenant l'application sur la peau d'une composition dont le principe actif favorise l'expression de l'AQP8 permet en outre de redonner souplesse et fermeté à la peau en favorisant la synthèse de collagène par les fibroblastes du derme humain. Par conséquent, le procédé selon l'invention permet non seulement de combattre la cellulite et l'aspect peau d'orange, il permet également de limiter la reformation de tels phénomènes.

De préférence, ledit principe actif est un extrait de Jania Rubens. Jania rubens est une algue rouge (Rhodophycées) appartenant aux Corallinacées. Cette algue est une espèce calcifiée, constituée de touffes dressées sur une croûte basale commune, et peut mesurer environ 2 à 3 cm de haut. Au cours de sa lente croissance, Jania rubens est capable de fixer les minéraux et les oligo-éléments de l'eau de mer mais retient également la microflore et la microfaune marines. Cependant, les inventeurs ont constaté que l'intégration d'un extrait de Jania rubens à une composition cosmétique permettait de stimuler l'expression de l'aquaporine 8. De manière avantageuse, ladite composition comprend entre 0,1% et 10% en poids d'un extrait de Jania rubens par rapport au poids total de la composition. De manière davantage préférée, ladite composition comprend entre 0,5% et 2% en poids d'extrait de Jania rubens par rapport au poids total de la composition. Ces plages de concentrations permettent à la fois de stimuler l'expression de l'aquaporine 8 de manière suffisante pour induire les effets précités sur les adipocytes et les fibroblastes humains, tout en limitant les inconvénients associés à l'utilisation de Jania rubens. En effet, Jania rubens dégage une odeur déplaisante ce qui a, jusqu'à présent, limité son utilisation en cosmétique. Dans un mode de réalisation intéressant, l'extrait de Jania rubens est un extrait aqueux ou hydroglycérique. De préférence, cet extrait est obtenu à partir d'une algue de culture. L'utilisation d'algues de culture permet d'éviter l'odeur déplaisante. Un autre aspect de l'invention concerne une composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, ladite composition présentant une activité minceur et/ou fermeté.

Avantageusement, la composition cosmétique comprend un extrait de Jania rubens. Dans un mode de réalisation préféré, ledit extrait de Jania rubens est présent en quantité comprise entre 0,1% et 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,5% et 2% en poids par rapport au poids total de la composition. Cette plage de concentrations permet notamment la formulation de compositions cosmétiques efficaces et peu coûteuses. Les pourcentages massiques sont calculés de la manière suivante : Pourcentage massique (%) = (masse du composé/masse total de la solution) x 100.

De préférence, laquelle ledit extrait de Jania rubens est un extrait aqueux ou hydroglycérique, ce qui facilite son incorporation dans la formulation d'une composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition selon l'invention se présente sous une forme choisie parmi un gel, une solution, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans huile, une émulsion triple. Ces formulations et textures sont simples à produire, et sont compatibles avec une application topique. Préférentiellement, la composition se présente sous la forme d'un gel. L'application sous forme de gel permet notamment d'administrer la composition sur des surfaces importantes de la peau, comme les jambes et le ventre, tout en apportant une sensation de fraîcheur agréable. Dans un autre mode de réalisation intéressant, la composition peut se présenter sous la forme d'une crème ou d'un lait. La texture fluide et onctueuse de la crème ou du lait permet également l'administration sur une surface importante de la peau, tout en apportant une sensation de douceur à l'utilisateur. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend en outre au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, de fruits ou d'algues. 2. Liste des figures D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un mode de réalisation préférentiel, donné à titre de simple exemple illustratif et non limitatif, et des dessins annexés, parmi lesquels : - la figure 1 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la régulation des gènes adipocytaires ; la figure 2 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la libération d'acide gras non estérifiés (AGNE) par des adipocytes humains ; la figure 3 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la régulation des gènes dans les fibroblastes humains ; la figure 4 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la production de fibres de collagène par des fibroblastes humains. 3. Description d'un mode de réalisation de l'invention Le principe général de l'invention repose sur un procédé cosmétique comprenant l'application cutanée d'une composition minceur et/ou fermeté. Plus précisément, cette composition comprend un principe actif permettant de stimuler l'expression de l'aquaporine 8. En effet, les inventeurs ont découvert que cette protéine impliquée dans l'homéostasie cellulaire et le maintien du pH et de la pression osmotique semble également avoir un rôle d'une part sur les fibroblastes en stimulant la synthèse de fibres de collagène, et d'autres part sur les adipocytes en inhibant leur différenciation et en stimulant la lipolyse. Ainsi, un procédé selon l'invention permet non seulement de favoriser la dégradation de la cellulite, mais il permet également de limiter sa reformation tout en redonnant à la peau souplesse et fermeté. Par conséquent, le procédé selon l'invention permet de combattre tous les signes de la cellulite et de fournir des résultats plus durables que ceux obtenus par l'utilisation de compositions minceur actuelles. 3.1. Stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 par un extrait de Jania Rubens sur des adipocytes et des fibroblastes humains Un extrait de Jania rubens a été préparé selon tout méthode bien connue de l'homme de l'art. Plus précisément, la culture de Jania rubens est réalisée en photobioréacteur clos dans de l'eau de mer enrichie en éléments nutritifs avec apports d'éléments nutritifs asservis à leur consommation. Les photobioréacteurs sont éclairés de manière artificielle. Toutes les cultures sont issues d'une lignée isolée et purifiée à partir d'un fragment d'algue d' lmm. En fin de culture, les algues sont récoltées par filtration et rincées à l'eau déminéralisée. Les algues sont ensuite séchées. Ces algues sèches sont extraites à température ambiante dans de l'eau déminéralisée légèrement acidifié à l'acide sulfurique dilué pour hydrolyser les parois calcifiées de l'algue. Ensuite, l'extrait aqueux obtenu est clarifié sur filtre 5p.m. Un ajout de glycérine (50% en masse) est réalisé. Enfin, l'extrait est stérilisé par filtration 0,2 lm et conditionné en ligne sous hotte à flux laminaire. Des adipocytes humains ont été préparés à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines (Lonza) utilisées au quatrième passage et différenciées pendant 21 jours par l'ajout d'un mélange d'inducteurs connus pour induire la différenciation des cellules souches en adipocytes matures. Les cellules ont d'abord été cultivées pendant 4 jours dans du milieu de différenciation (Lonza) afin de démarrer la différenciation. Ensuite, le milieu de culture a été remplacé soit par du milieu de différenciation normal (lot non traité), soit par du milieu de différenciation normal additionné d'un extrait de Jania rubens (concentration finale à 0.1%). Les fibroblastes de derme humain ont été purifiés à partir d'explants de peau. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture avec un milieu de culture additionné de glutamine et de sérum de veau foetal (SVF) à une densité. Les cultures sont réalisées dans une atmosphère à 37°C, 5% CO2 et saturée en humidité. Les cellules ont d'abord été cultivées pendant 4 jours dans du milieu normal afin de laisser les cellules s'adapter. Ensuite, le milieu de culture a été remplacé soit par du milieu de culture normal (lot non traité), soit par du milieu de culture normal additionné d'un extrait de Jania rubens (concentration finale à 0.1%). Les cellules ont été cultivées pendant 24 heures supplémentaires. Au terme de ce délai, les cellules de chaque lot sont traitées en vue d'un marquage en immunofluorescence avec l'anticorps anti-aquaporine 8. Les différentes étapes du marquage sont les suivantes : rinçage des cellules dans une solution saline phosphatée (PBS), - fixation des cellules au formaldéhyde (1h30 à +4°C), rinçages avec du PBS, perméabilisation des cellules avec du Triton 0,1X (10 minutes à température ambiante), blocage des sites non spécifiques avec une solution de PBS/BSA 1% (v/p), - ajout de la solution d'anticorps primaire anti-aquaporine 8 (0,01% volumique), - incubation pendant une nuit à +4°C, - lavages au PBS, - ajout de la solution d'anticorps secondaire couplé au fluorochrome Alexa 488 (0,01% volumique), et du DAPI (0,01% volumique) pendant une heure à température ambiante, - lavages au PBS pour éliminer la fluorescence non spécifique. Les lames sont montées avec la solution de montage Fluoromont (Sigma) et observées après une nuit à +4°C. Une observation microscopique est réalisée à l'aide d'un microscope (NIKON TE300 Eclipse) équipé d'une caméra (DS CAMERA HEAD DS-2Mv, NIKON). Un cliché par puits a été pris et une évaluation semiquantitative du marquage de chaque condition a été faite grâce au logiciel Nikon-NIS Elements BR 3.00 SP4. Cette évaluation prend en compte l'intensité de la coloration exprimée en pixels, évaluée par le logiciel d'analyse d'images et rapportée à la surface des cellules. Les intensités sont exprimées en valeur absolue et sans valeur spécifique. Les résultats ont démontré que Jania rubens augmente l'expression d'AQP8 de 58% dans les fibroblastes et de 50% dans les adipocytes par rapport aux lots non traités. 3.2. Effets de l'activation de l'aquaporine 8 par Jania rubens sur la différenciation d'adipocytes humains. L'objectif de l'étude est d'évaluer l'effet de l'extrait aqueux de Jania Rubens sur la lipolyse et la différenciation d'adipocytes humains.

Les cellules utilisées sont des adipocytes humains différenciés à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines (Lonza) utilisées au cinquième passage. Les cellules souches mésenchymateuses sont incubées dans du milieu de culture (Lonza) puis stimulées pendant 21 jours par un mélange d'inducteurs pour induire la différenciation des cellules souches en adipocytes matures. Au terme de ces 21 jours, le milieu est remplacé par du milieu de culture pour adipocytes contenant ou non l'extrait de Jania rubens à la concentration finale de 1%. Les adipocytes sont ainsi incubés pendant 24 heures, à 37°C. Les cellules sont ensuite récupérées pour mesurer le niveau d'expression des gènes et évaluer leur régulation sous l'influence de l'extrait aqueux de Jania rubens. L'extraction des ARN messager totaux et leur rétro-transcription en ADN complémentaire a été effectuée selon toute méthode bien connue de l'homme de l'art et notamment en suivant les protocoles fournis par les kits Qiagen. L'analyse de l'expression des gènes a été réalisée en utilisant des puces à ADN standard, dédiées à la recherche et adaptées au screening. Ces puces à ADN ont été réalisées sur support Nylon, et portent des sondes nucléiques spécifiques des marqueurs d'intérêt (Piezorray, PerkinElmer). Les résultats obtenus sont automatiquement corrigés du bruit de fond moyen présent sur chaque puce et des différences d'intensité de marquage des différentes sondes utilisées. Les niveaux d'expression des gènes sont également corrigés par l'expression des gènes ménagers (ARN18S) dont l'expression est stable, quel que soit le traitement subi par la cellule. Cette correction permet d'éliminer le biais lié à la quantité de cellules utilisées ou de matériel génétique déposé sur la puce. Enfin, les niveaux d'expression relatifs de chaque gène testé sont exprimés comme suit : Niveau d'expression d'un gène X (%) = (Expression du gène X dans les cellules traitées/ Expression du gène X dans les cellules non traitées) x 100. Le traitement des adipocytes a stimulé l'expression de nombreux gènes impliqués dans : la synthèse des acides gras : notamment des enzymes comme acetyl-CoA synthétase (ACAS), acetyl-CoA acétyltransférase (ACAT), acyl-CoA déshydrogénase (ACADS), diacylglycerol acyltransferase 2 (DGAT2), Fatty acid synthase (FAS), fatty acid transporter (FAT), la lipoprotéine lipase (LPL), l'adipose triglyceride lipase (ATGL), la long-chain-fatty-acid-CoA ligase 1 (FACL1) ; la synthèse des protéines liant les acides gras comme Acyl-CoA binding protein (DBI), adipocyte fatty acid-binding protein (FABP4) ; et la synthèse des protéines impliquées dans la différenciation des adipocytes comme l'adipophiline (ADFP), l'adiponectine (APN), la protéine adipose specific 2 (APM2) et l'aquaporine 7 (AQP7). Le graphique de la figure 1 démontre que l'extrait aqueux de Jania rubens, stimulant l'expression de l'aquaporine 8, permet notamment de stimuler de 30% par rapport au lot non traité l'expression du gène de l'adiponectine qui contrôle le métabolisme du glucose et des lipides et lutte également contre le stress oxydant. On constate également une surexpression de 39% du gène de l'aquaglycéroporine 7, responsable de la sécrétion et de la prise en charge du glycérol dans les adipocytes, évitant ainsi sa transformation en acides gras. Par ailleurs, le gène de l'adipophiline est sous exprimé dans les adipocytes traités par Jania rubens par rapport aux cellules non traitées. Or, l'adipophiline bloque l'accès des lipases aux gouttelettes lipidiques. Ainsi, la lipolyse est favorisée. De même, un traitement à Jania rubens permet de limiter l'expression de l'enzyme de la synthèse des acides gras (FAS). 3.3. Effets de l'activation de l'aquaporine 8 par Jania rubens sur la lipolyse dans les adipocytes humains. L'impact sur la lipolyse a également été quantifié par dosage des acides gras non estérifiés dans le milieu de culture d'adipocytes humains cultivés ou non en présence d'un extrait de Jania rubens. Les adipocytes humains ont été isolés à partir de tissu adipeux d'un donneur de sexe féminin, âgé de 58 ans. Le traitement a été effectué immédiatement après réception. Les fragments de tissus adipeux sont incubés pendant 30 minutes à 37°C en présence de collagénase (Sigma C6885), les adipocytes isolés sont lavés avec du tampon PB S pour obtenir une suspension d'adipocytes. Différentes conditions ont été testées : un lot non traité comme témoin négatif, un lot traité par la caféine comme témoin positif de la lipolyse à la concentration de 10-3 mol/L (soit 0,2%) ; un lot traité par l'extrait de Jania rubens à 0,5% (v /v) ; et un lot traité par l'extrait de Jania rubens à 1% (v Iv). Un mélange est préparé avec 440 ul de milieu d'essai, 100 ul de suspension d'adipocytes et 60 ul de composition testée (solutions 10x). Les mélanges sont incubés à 37°C, sous agitation, pendant 2 heures. Puis, les milieux de culture sont prélevés et les AGNE sont dosés dans des fractions de 5 ul de milieu sous- adipocytes, après centrifugation. Le dosage a été réalisé à l'aide d'un kit Wako NEFA-HR (2) selon les directives du fournisseur. Dans ces conditions expérimentales, la lipolyse basale était moyenne, soit 196 d'AGNE libérés en 2 heures. Les résultats sont présentés sur le graphique de la figure 2. Comme on peut l'observer, le traitement par la caféine a stimulé la lipolyse de 57% ce qui était attendu et valide l'expérience. Dans ces conditions expérimentales, l'extrait de Jania rubens testé à 0,5% et 1% a significativement stimulé la lipolyse basale de respectivement +63% et +62%. Par conséquent, une composition comprenant un principe actif permettant de stimuler l'expression du gène de l'aquaporine 8 permet non seulement de différencier les adipocytes mais également de stimuler la lipolyse. 3.4. Effets de Jania rubens sur les fibroblastes. Cette expérience a pour objectif d'étudier l'impact que l'extrait de Jania rubens à la concentration finale de 0,1% a sur les fibroblastes.

Les fibroblastes de derme humain ont été purifiés à partir d' explants de peau. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture avec un milieu de culture additionné de glutamine et de sérum de veau foetal (SVF). Les cultures sont réalisées dans une atmosphère à 37°C, 5% CO2 et saturée en humidité. Les fibroblastes sont ainsi incubés pendant 24 heures, à 37°C. Les cellules sont ensuite récupérées pour mesurer le niveau d'expression des gènes et évaluer leur régulation sous l'influence de l'extrait aqueux de Jania rubens. L'extraction des ARN messager totaux et leur rétro-transcription en ADN complémentaire a été effectuée selon toute méthode bien connue de l'homme de l'art et notamment en suivant les protocoles fournis par les kits Qiagen. L'analyse de l'expression des gènes a été réalisée en utilisant des puces à ADN standard, dédiées à la recherche et adaptées au screening. Ces puces à ADN ont été réalisées sur support Nylon, et portent des sondes nucléiques spécifiques des marqueurs d'intérêt (Piezorray, PerkinElmer).

Les résultats obtenus sont automatiquement corrigés du bruit de fond moyen présent sur chaque puce et des différences d'intensité de marquage des différentes sondes utilisées. Les niveaux d'expression des gènes sont également corrigés par l'expression des gènes ménagers (ARN18S) dont l'expression est stable, quel que soit le traitement subi par la cellule. Cette correction permet d'éliminer le biais lié à la quantité de cellules utilisées ou de matériel génétique déposé sur la puce. Enfin, les niveaux d'expression relatifs de chaque gène testé sont exprimés comme suit : Niveau d'expression d'un gène X (%) = (Expression du gène X dans les cellules traitées/ Expression du gène X dans les cellules non traitées) x 100. Les résultats sont présentés à la figure 3. Comme on peut le constater, le traitement des fibroblastes avec l'extrait de Jania rubens à 0,1% a principalement induit une augmentation d'expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire (MEC) tels que les collagènes COL4A1 et COL7A1, des protéines d'adhésion telles que le récepteur à la fibronectine (ITGA5), des gènes impliqués dans la synthèse du collagène tels que la hyaluronan synthase (HAS2), la lysyl hydroxylase (LH1) et la Prolyl hydroxylase (P4HA2) ainsi qu'un gène impliqué dans la croissance des fibroblastes : le FGF2. Le traitement des fibroblastes avec l'extrait de Jania rubens à 0,1% stimule également la synthèse de lamine A, impliquée dans la maintenance de la cellule ainsi que dans sa différenciation. 3.5. Effets de Jania rubens sur la production de fibres de collagènes par les fibroblastes humains. Des fibroblastes de derme humain, tel qu'obtenu ci-dessus, ont été ensemencé à une densité de 180 000 cellules/ puits dans des plaques de culture et cultivés dans du milieu supplémenté en sérum de veau foetal (SVF) à 37°, 5% CO2. Les conditions expérimentales sont les suivantes : le milieu de culture des fibroblastes seul comme témoin négatif de l' expérience, le milieu de culture pour fibroblastes additionné de 20 1.1g/m1 de Vitamine C et 10 ng/ml de TGF -I3-1 comme témoin positif de l'expérience, le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 0,1% volumique), le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 0,5% volumique), - le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 1% volumique). La vitamine C (Sigma) combinée au facteur de croissance fibroblastique TGF-I31 (Sigma) ont un effet positif et prouvé sur la synthèse de fibres de collagène par les fibroblastes. Cette condition sert de témoin positif à l'expérience.

On constate, en référence à la figure 3, que le traitement par la vitamine C combinée au TGF-I31 augmente la synthèse de collagène par des fibroblastes humains par rapport aux fibroblastes en contact avec le milieu seul, comme attendu. L'exposition des fibroblastes au milieu de culture contenant l'extrait de Jania rubens à 0,1%, 0,5% et 1%, permet l'augmentation de la production de fibres de collagène de 24%, 30% et 52% respectivement. Il est donc évident que le traitement des fibroblastes par un extrait aqueux de Jania rubens permet de stimuler la synthèse de fibres de collagène par les fibroblastes de derme humain. 3.6. Exemple de composition cosmétique pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention.

On formule une composition amincissante et raffermissante incorporant de l'extrait aqueux de Jania rubens, selon la formulation indiquée dans le tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1 - Exemple d'une composition à visée minceur et/ou fermeté pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. Ingrédients (Nomenclature INCI) Quantité (% massique) Eau/ Aqua 61,35 Propylène Glycol 5,00 Carbomer 0,30 Acrylates/C10-C30 Alkyl Acrylates crosspolymer 0,10 Ceteraryl Alcohol & Sodium cetearyl sulfate 5,00 Behenyl Alcohol 0,80 Caprylic / capric Triglycerides 10,00 Isohexadecane 14,00 Conservateurs 1,00 Triéthanolamine 0,45 Extrait aqueux de Jania rubens conservé avec 50% 2,00 de glycerine Une vingtaine de sujets féminins ayant de la cellulite sur les hanches et un indice de masse corporelle compris entre 23 et 27 ont chacune reçu deux compositions différentes: - une composition telle qu'indiquée au tableau 1 (groupe traité) ; et - une composition placebo dont la composition est identique à celle indiquée au tableau 1 si ce n'est qu'elle ne contient pas d'extrait de Jania rubens (groupe 15 placebo).

Ces femmes ont appliqué deux fois par jour pendant 56 jours la composition selon l'invention sur une de leurs cuisses et la composition placébo sur l'autre cuisse, ceci afin d'éliminer les biais interindividuels qui auraient pu fausser les observations. Différents paramètres ont été évalués lors de cet essai au jour 0, au 28ème jour et au 56ème jour. Ces paramètres sont notamment la présence visuelle de cellulite, la mesure des jonctions dermo-épidermiques et de la densité dermique par DermascanTM, un questionnaire d'auto-évaluation et la prise de photographies. Le DermaScan C® 2D permet de réaliser des mesures directement in vivo, à l'aide d'un échographe haute fréquence. Le principe de la mesure est celui de l'échographie: un faisceau ultrasonore est émis par une céramique piézo-électrique. Ce faisceau est partiellement réfléchi par les interfaces séparant deux milieux d'impédance ultrasonore différente. L'échographe utilisé est muni d'une sonde de 20 MHz. La sonde est appliquée directement sur la peau. Un gel de contact permet une diffusion homogène du signal. Cette méthode permet une visualisation bidimensionnelle de la peau au niveau de l'épiderme et du derme avec une pénétration de 13 mm. Lors de la prise d'image, le tissu conjonctif, échogène, apparaît en couleur (de jaune à vert) ; les inclusions graisseuses, non-échogènes, apparaissent en noir. Une diminution de la longueur linéaire (en mm) de la jonction dermo-hypodermique traduit l'effet anti-cellulite d'un produit. Le rapport de la surface occupée par les inclusions graisseuses, à la surface totale analysée, définit la proportion de graisse présente (en %). Une diminution de ce rapport traduit une diminution des réserves de graisse sous cutanées, soit un effet désinfiltrant, une augmentation de la densité du derme. 74% des femmes ont noté une diminution de leur cellulite de 25% dès le 28ème jour et encore de 28% au 56ème jour au niveau des zones traitées par la composition selon l'invention par rapport aux zones traitées par le placébo. La mesure de la présence d'inclusions lipidiques par DermascanTM a également permis de révéler une diminution moyenne de 15% après le 56ème jour d'application, et jusqu'à 75% pour certaines femmes, grâce à l'utilisation de la composition comprenant un extrait de Jania rubens.

La mesure de la longueur des jonctions dermo-épidermiques a démontré une diminution moyenne statistiquement significative (p<0,05) de 18% après le 56ème jour d'application pour les zones traitées par la composition comprenant un extrait de Jania rubens, ce qui se traduit par une peau moins relâchée et plus ferme.

Enfin l'évaluation de la densité du derme se traduit par une diminution du nombre de zones ne donnant pas de signal à l'échographie. Ces mesures ont démontré une diminution de 4% en moyenne du nombre de ces zones dès lors qu'elles sont traitées pendant 28 jours par la composition selon l'invention, et de 11% en moyenne à partir du 56ème jour (effet statistiquement significatif ; p<0,05).

Par conséquent, un procédé comprenant une étape d'application d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Jania rubens permet non seulement de diminuer la cellulite et d'en améliorer l'aspect mais également de raffermir les tissus et la peau.

Claims (4)

1. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau permettant la stimulation de la synthèse de fibres de collagène par les cellules du derme, l'inhibition de la différenciation des adipocytes et la stimulation de la lipolyse des adipocytes, ladite composition renfermant un extrait de Jania rubens stimulant l'expression de l'aquaporine 8
2. 2. Composition cosmétique selon la revendication 1 dans laquelle ledit extrait de Jania Rubens est présent en quantité comprise entre 0,1% et 10% en poids par rapport au poids total de la composition,
3. 3. Composition cosmétique selon la revendication 2 dans laquelle ledit extrait de Jania rubens est présent en quantité comprise entre 0,5% et 2% en poids par rapport au poids total de la composition.
4. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3 dans laquelle ledit extrait de Jania rubens est un extrait aqueux ou hydroglycérique.