FR3000390A1 - Composition cosmetique comprenant un extrait de kalanchoe pinnata - Google Patents

Abstract

La présente invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant un extrait de Kalanchoe pinnata, et à son utilisation pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement de la peau.

Description

Composition cosmétique comprenant un extrait de Kalanchoe pinnata La présente invention se rapporte au domaine du traitement cosmétique de la peau. La peau est un organe particulier du corps humain. De fine épaisseur, elle est très étendue puisqu'elle recouvre toute la surface du corps et totalise chez l'adulte une surface d'environ 1,6 m2. Elle a pour fonction de protéger les tissus profonds du milieu extérieur, tant au niveau de la pénétration physique de corps étrangers, que de l'immunité, de la régulation de la température, de la déperdition de fluides, etc... Enfin, les contraintes mécaniques auxquelles elle est soumise en permanence lui imposent une structure solide et 10 cohérente associée à une grande souplesse. Elle est constituée à sa surface de l'épiderme, en profondeur du derme, et, à leur interface, de la jonction dermo-épidermique (JDE). Comme tous les autres organes du corps, la peau est soumise au vieillissement ; le vieillissement lui donne un aspect visuel et tactile qu'on cherche le plus souvent à prévenir et à réparer. 15 Les causes du vieillissement de la peau sont multiples ; on peut toutefois distinguer : - le vieillissement intrinsèque résultant d'un déséquilibre entre les phénomènes de dégradation cellulaire et systèmes de réparation survenant dans la peau. Le vieillissement intrinsèque résulte notamment du processus de 20 glycation ; il s'agit d'une réaction non enzymatique faisant intervenir un ose (glucose ou ribose) qui réagit selon la réaction de Maillard avec un groupement aminé d'un résidu d'acide aminé, particulièrement un résidu d'acide aminé d'une protéine, pour former une base de Schiff. Celle-ci, après un réarrangement moléculaire dit d'Amadori, peut conduire, par une succession de réactions, à un pontage intramoléculaire irréversible qui rigidifie les 25 protéines et les empêche d'exercer leur fonction ; l'accumulation excessive de protéines glyquées nuit également au fonctionnement des tissus qui se rigidifient et se sclérosent. La réaction de glycation protéique constitue un des processus majeur de vieillissement cutané induit. Dans la peau, la glycation vise notamment le collagène. - et le vieillissement extrinsèque provoqué par des facteurs 30 environnementaux ; le principal étant le rayonnement UV. Les radiations UV augmentent notamment l'expression de métalloprotéinases (MMP) dans l'épiderme et le derme, enzymes responsables de la dégradation du collagène et d'autres macromolécules de la matrice extracellulaire dermique.

Les MMP représentent une famille d'endopeptides ou protéinases. Elles sont impliquées dans plusieurs phénomènes physiologiques (adhésion, migration, différenciation cellulaire, cicatrisation) ou pathologiques (tumeur, photo-vieillissement) ; il en existe 3 classes : * Les gélatinases : composées de la gélatinase A (MMP-2) et de la gélatinase B (MMP-9); elles ont pour substrat les collagènes dégradés, les collagènes natifs de type IV, V, VII et X, l'élastine et la fibronectine. * Les collagènases : elles comprennent la collagénase interstitielle (MMP-1) qui dégrade les collagènes de type I, III, VII, VIII et la gélatine. La collagènase neutrophile (MMP-13) qui a pour substrat les collagènes de type I et III et la collagénase-3 (MMP-8) qui agit sur le collagène II. * Les stromélysines : elles existent sous 2 formes, la stromélysine 1 (MMP-3) et la stromélysine 2 (MMP-10) qui dégradent les protéoglycannes, la fibronectine, la laminine, l'élastine, certaines Pro-MMP et les collagènes IV, V, VII et X.

Le vieillissement et les agressions environnementales brisent, en faveur des métalloprotéinases matricielles (MMP), l'équilibre enzymatique normalement contrôlé par la présence d'inhibiteurs tissulaires appelés TIMP. Ainsi, de l'action excessive des MMP résulte un affaissement de la structure tridimensionnelle de la matrice extracellulaire (MEC) qui contribue à l'apparition des rides, l'affaissement de la peau et la dilatation passive de micro-capillaires sanguins de surface. Le vieillissement de la peau se traduit ainsi par des modifications histologiques et fonctionnelles ; au niveau du derme, les fibres de collagène se brisent, leur renouvellement naturel devient plus difficile, l'élastine perd de son élasticité ; le derme perd peu à peu de sa densité, il s'amincie. La MEC se détériore, les rides et ridules apparaissent ; des fibres élastiques de mauvaise qualité s'accumulent réduisant ainsi l'élasticité de la peau. Au niveau de l'épiderme, les kératinocytes voient leur taille diminuer et leur nombre se réduire. Le renouvellement cellulaire se ralentit et la cohésion entre le derme et l'épiderme s'atténue. Enfin, la pigmentation est moins uniforme ce qui donne à la peau un aspect plus terne.

La Demanderesse a maintenant découvert de manière surprenante et inattendue que des extraits végétaux de Kalanchoe pinnata présentent les propriétés : - de stimuler la synthèse d'acide hyaluronique par les fibroblastes dermiques ; L'acide hyaluronique, ou hyaluronnane, est un polysaccharide de haut poids moléculaire, constituant essentiel de la MEC de la peau. Il est synthétisé principalement par les fibroblastes. Au cours du vieillissement cutanée, la synthèse et la concentration en acide hyaluronique diminue, sa qualité se dégrade ; en conséquence, la peau perd sa turgescence. - de stimuler la synthèse de collagène de type I par les fibroblastes dermiques ; cette propriété permet de limiter la diminution marquée du collagène de type I qui survient au cours du vieillissement de la peau. - d'inhiber le phénomène de glycation des protéines ; - inhibition de l'expression des métalloprotéinases MMP-1 dont l'action excessive altère la peau comme expliqué plus tôt. De par ses propriétés, l'extrait de Kalanchoe pinnata apparait donc être un actif utile pour prévenir et/ou traiter les manifestations cutanées accompagnant le vieillissement de la peau.

Kalanchoe pinnata est une plante succulente tropicale à fleurs de la famille des Crassulaveae endémique de Madagascar. On lui connait plusieurs propriétés médicinales, que ce soit en usage interne ou externe. La plus connue, en usage externe, est le traitement des migraines (application directe de feuilles fraîches sur le front ou la tête pendant plusieurs minutes).

Toujours en usage externe, son action antibactérienne et anti-ulcéreuse est utilisée pour soigner furoncles, panaris, abcès et ulcères. Ses propriétés anti-inflammatoires et antibiotiques sont également efficaces dans les cas de sinusites, de rhinites, d'otites et de conjonctivites purulentes. En usage interne, de nombreux essais cliniques utilisant des extraits de feuilles ou du sirop de Kalanchoe pinnata ont démontré un rôle hépatoprotecteur et cholérétique. Toutefois, à la connaissance de la Demanderesse, il n'a encore jamais été suggéré qu'un extrait de Kalanchoe pinnata pouvait avoir les propriétés précitées et s'avérer utile comme agent anti-age, en particulier, pour la prévention et le traitement des manifestations cutanées du vieillissement de la peau.

Ainsi, selon un premier de ses objets, la présente invention se rapporte à une composition cosmétique comprenant un extrait de Kalanchoe pinnata. L'extrait de Kalanchoe pinnata selon l'invention est réalisé à partir de la plante « fraiche », c'est-à-dire que la plante ne subi aucun traitement entre sa récolte et l'extraction, en particulier, pas de séchage ou de fermentation ; de préférence, l'extraction est réalisée à partir de feuilles fraîches, ; plus particulièrement, l'extraction est conduite en agitant les feuilles de Kalanchoe pinnata dans un solvant, préférentiellement un mélange d'eau et d'éthanol, à des températures allant par exemple de la température ambiante à 70°C pendant une durée de 1 à 10 heures. La solution est ensuite filtrée pour éliminer les parties insolubles de la plante. Après filtration, on élimine le solvant par distillation sous vide. Pour faciliter son usage ultérieur, l'extrait peut ensuite être solubilisé sur un support acceptable en cosmétique, tel que la glycérine. On obtient ainsi un extrait liquide visqueux de couleur marron présentant les caractéristiques analytiques suivantes : couleur CIE (1% w/w dans l'eau, cuve 1 cm, calib/H20: L*=80/100, a*= -15/15, b*- +51+30) ; - teneur en polyphénols (méthode Folin-Ciocalteu) : 0,1 - 10 % équivalent acide gallique ; - indice de réfraction (ND20) : 1,3 - 1,7 ; - densité (D20/20) : 1,100 - 1,500 ; - pH (à 1% w/w dans l'eau, à 20°C) : 4,0 - 6,0. L'extrait de Kalanchoe pinnata formulé dans les compostions selon l'invention est préférentiellement un extrait de feuilles de Kalanchoe pinnata. De façon avantageuse, cet extrait est un extrait aqueux et/ou alcoolique et/ou est stabilisé par de la glycérine. La composition cosmétique selon l'invention comprend entre 0,01 et 10 %, de préférence entre 0,01 et 5%, d'extrait de Kalanchoe pinnata en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.

Cette composition peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétique et dermatologique, et elle peut être notamment sous forme d'une solution aqueuse éventuellement gélifiée, d'une dispersion du type lotion éventuellement biphasée, d'une émulsion obtenue par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou d'une émulsion triple (E/H/E ou H/E/H) ou d'une dispersion vésiculaire de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, en particulier sous forme de stick. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage pour la peau. De façon connue, la composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20% du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules. En tout état de cause, ces adjuvants, ainsi que leurs proportions, seront choisis de manière à ne pas nuire aux propriétés recherchées de l'extrait de Kalanchoe pinnata selon l'invention. En fonction de la destination de la composition selon l'invention, l'extrait de Kalanchoe pinnata peut être associé à d'autres actifs anti-âge, en particulier des actifs anti-rides, dépigmentants, raffermissants, drainants, tenseurs, anti-radicalaires et/ou immunoprotecteurs et/ou à des agents stimulant le métabolisme cellulaire (notamment la synthèse des protéines) et/ou la prolifération cellulaire. La Demanderesse a démontré que l'extrait de Kalanchoe pinnata, et ainsi la composition cosmétique selon l'invention qui le contient, peuvent être utilisés pour favoriser la synthèse de collagène ; pour protéger les protéines cutanées de la glycation ; pour induire la synthèse d'acide hyaluronique et augmenter sa teneur dans la peau et limiter la production excessive de MMP conduisant à la dégradation de la MEC. En conséquence, l'extrait de Kalanchoe pinnata et/ou la composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée de façon générale pour prévenir, retarder et/ou lutter contre le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau. Plus spécifiquement, l'extrait de Kalanchoe pinnata et/ou la composition selon l'invention est avantageusement utilisée pour améliorer l'aspect de surface de la peau : pour prévenir et/ou réduire l'affaissement de la structure tridimensionnelle de la MEC et/ou la perte d'élasticité des fibres cutanées et/ou favoriser la cohésion entre le derme et l'épiderme et/ou régénérer et restructurer l'épiderme ; et ainsi, prévenir et/ou réduire le relâchement cutané, l'amincissement et le flétrissement de la peau, pour retarder l'apparition des rides et ridules et/ou réduire leur profondeur. La composition selon l'invention peut aussi être utilisée pour prévenir la perte de fermeté et/ou redensifier et/ou raffermir et/ou tonifier la peau et/ou apporter un meilleur lissage en surface de la peau. De par son effet tenseur, l'extrait de Kalanchoe pinnata et/ou la composition selon l'invention permet également de préserver et/ou de restaurer la régularité du contour du visage. L'extrait de Kalanchoe pinnata et/ou la composition selon l'invention est également utile pour améliorer la couleur et/ou l'éclat et/ou l'uniformité du teint de la peau ; elle prévient ainsi l'apparition d'une peau terne et/ou sans éclat et apporte à la peau un teint régulier et éclatant. Les applications qui précèdent visent préférentiellement la peau du visage, c'est-à-dire la peau de la face, du cou, du décolleté et/ou du contour des yeux mais permettent également de traitements cosmétiques spécifiques de la peau du corps. La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique anti-âge comprenant l'application sur la peau d'un extrait de Kalanchoe pinnata ou d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Kalanchoe pinnata tels que décrits plus haut. Ce procédé a plus spécifiquement pour but de traiter les manifestations cutanées du vieillissement de la peau décrit ci-avant.

L'application sur la peau peut donc être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée. Il peut s'agir, par exemple d'une simple application sur la peau ou d'une application accompagnée d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention. L'application est de préférence réalisée avec une quantité suffisante de la composition afin que toute la surface de la peau à traiter soit traitée. Il peut s'agir par exemple d'une application classique, comme une crème sur la peau. Il peut s'agir par exemple aussi d'une application pour former un masque traitant. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation des effets biologique d'un extrait de Kalanchoe pinnata et d'autre part des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : Les Figure 1, 2 et 3 représentent chacune respectivement un cliché d'une culture cellulaire de fibroblastes seule (témoin), en présence d'un extrait de Kalanchoe pinnata à 0,01% et en présence d'un extrait de Kalanchoe pinnata à 0,05%, dans lesquelles le collagène I est marquée par immunofluorescence (TRITC, en rouge) selon le protocole décrit dans l'Exemple 2 ; l'observation est réalisée en microscopie optique fluorescence, grossissement x200.

Les histogrammes des Figures 4 et 5 représentent l'expression en collagène I, respectivement, en unité de fluorescence par noyau et en pourcentage par rapport au contrôle. La Figure 6 est une illustration du schéma réactionnel mis en oeuvre dans l'Exemple 4.

La Figure 7 est un histogramme représentant l'évaluation de l'expression de MMP-1 en fonction de différentes concentrations de l'extrait de Kalanchoe pinnata testées. Dans l'ensemble des exemples qui suivent, le produit testé est un extrait de feuille de Kalanchoe pinnata obtenu par le procédé d'extraction décrit plus tôt puis stabilisé dans de la glycérine (15% d'extrait sec dans 85% de glycérine). EXEMPLE 1 - ETUDE DE L'EFFET DU KALANCHOE SUR LA SYNTHESE D'ACIDE HYALURONIQUE PAR LES FIBROBLASTES DERMIQUES Dans la présente étude, les effets de l'extrait de feuille de Kalanchoe pinnata sur la synthèse de matrice extracellulaire ont été évalués par la synthèse/libération d'acide hyaluronique par un dosage ELISA. 1- MATERIELS ET METHODES 2.1- MODELE BIOLOGIQUE - Type cellulaire : fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF), référence Bioalternatives : PF2, utilisés au el' passage. - Conditions de culture : 37°C, 5% de CO2 - Milieu de culture : DMEM complémenté avec L-glutamine 2 mM, Pénicilline 50 U/ml- streptomycine 50 p.g/ml, sérum de veau foetal (SVF) 10%. 2.2- COMPOSE TESTE : L'extrait de Kalanchoe pinnata a été testé à des concentrations de 0,3%, 1 et 3%. 2.3- CULTURE ET TRAITEMENT Les fibroblastes ont été cultivés en plaques 96 puits en milieu de culture. Après 24 heures d'incubation, le milieu a été retiré et remplacé par du milieu de culture contenant, ou non (témoin), l'extrait à l'essai ou la référence (TGF-(3 à 10 ng/ml). Les cellules ont ensuite été incubées pendant 72 heures. Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en n=3, sauf la condition témoin en n=6. 2.4- DOSAGE DE L'ACIDE HYALURONIQUE LIBERE PAR LES FIBROBLASTES La quantité d'acide hyaluronique présente dans les surnageants de culture a été mesurée à l'aide d'un kit ELISA selon les instructions du fournisseur (Duoset hyaluronan, R&D Systems). 2.5- TRAITEMENT DES DONNEES Les données brutes ont été transférées et traitées sous le logiciel Microsoft Excel®. Les comparaisons intergroupes ont été réalisées à l'aide du test T de Student bilatéral non apparié. Les analyses statistiques peuvent être interprétées si n>5 ; cependant pour n<5, les données calculées ne sont fournies qu'à titre indicatif. Formules utilisées : Pourcentage de stimulation : Stimulation (%) [(valeur/moyenne du témoin) x 100] -100 ; Erreur standard de la moyenne : esm = écart-type (Sd)/'In ;l'erreur standard de la moyenne (esm) représente l'écart de la moyenne de l'échantillon par rapport à la moyenne de la vraie population ; l'esm est calculée en divisant le Sd par la racine carré de la taille de l'échantillon. 2- RESULTATS ET CONCLUSION Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau I ci-dessous : Traitement Données de base Données normalisées composés Concentration Acide hyaluronique moyenne esm % témoin esm pi Stimulation esm ni testés (ng/mI) (ng/m1) (%) a 1%) (%) p 1220 1041 Témoin / 1098 1154 37 100 3 / 0 3 / 1294 1163 1108 2268 TGF 10 ng/ml 2489 2427 80 210 7 *** 110 7 *** 2525 1155 0,30% 1352 1159 110 100 10 ns 0 10 ns 970 1849 Kalanchoe 1% 1544 1502 213 130 18 ns 30 18 ns 1113 1967 3% 1087 1664 289 144 25 44 25 1937 : Seuil de significativité statistique : ns : > 0.05, Non significatif ; * : 0.01 à 0.05, Significatif ; *** : < 0.001, Extrêmement significatif. Tableau I Le traitement par le TGE-f3, testé à 10 ng/ml, a nettement stimulé la synthèse et la libération d'acide hyaluronique par les fibroblastes humains (110% de stimulation). Cet effet était attendu et valide l'essai. Dans ces conditions expérimentales, l'extrait de Kalanchoe pinnata testé à 1% et 3% a stimulé de façon concentration-dépendante la synthèse et/ou la libération d'acide hyaluronique (30 et 44% de stimulation respectivement). EXEMPLE 2 - ETUDE DE L'EFFET ANTI-AGE D'UN EXTRAIT DE KALANCHOE SUR L'EXPRESSION DU COLLAGENE DE TYPE I Cette étude a pour but d'évaluer l'effet de l'extrait de Kalanchoe pinnata 10 à 0,01% et 0,05% sur la synthèse de collagène de type I par les fibroblastes du derme. Les fibroblastes sont ensemencés dans des plaques 6 puits avec lamelle de verre à raison de 70.000 cellules par boîte dans du milieu MEM (minimum Essential Medium). 48h après, les cellules sont traitées ou non (témoin) par l'extrait de 15 Kalanchoe pinnata à 0,01% et 0,05% et incubées à l'étuve pendant 72 heures à 37°C, 5%CO2. Chaque tapis cellulaire est ensuite rincé, fixé au méthanol (-20°C) avant de procéder à la révélation du collagène de type I. Les cellules sont incubées avec le 1« anticorps dirigé contre la protéine 20 d'intérêt puis avec l'anticorps secondaire dirigé contre le ler anticorps couplé au fluorochrome TRITC (Tetra methyl Rhodamine Iso Thio Cyanate). Le temps d'incubation entre chaque anticorps est d'une heure. Les noyaux cellulaires sont révélés par un marquage au DAPI (Di Aminido Phenyl Indol). Les lamelles sont montées sur lame de verre puis observées au 25 microscope à fluorescence (Nikon Eclipse 50i). Plusieurs champs de la population cellulaire sont pris en photo ; ces clichés sont représentés aux Figures 1 (témoin), 2 (Kalanchoe pinnata à 0,01%) et 3 (Kalanchoe pinnata à 0,05%). Les images de fluorescence TRITC indiquent les régions de localisation de la protéine d'intérêt. Les images de fluorescence DAPI indique les noyaux cellulaires et donc le nombre de cellules 30 par champs. Les clichés photographiques sont analysés par le logiciel d'analyse d'image NIS Elements (Nikon) ; ces résultats sont présentés dans le Tableau II ci-dessous et dans les histogrammes des Figures 4 (où *** signifie : p<0.001. Significativement différent par rapport au témoin non traité (contrôle) ; les différences significatives sont montrées en utilisant le test statistique « ANOVA one way » suivie par un test de Tukey-Kramer amp analysis)) et 5. collagène de type I* esm expression du (un. fluor. / noyau) collagène I en % du contrôle Témoin 1,01E+06 2,26E+05 100 Kalanchoe 0,01% 1,07E+06 2,39E+05 106 Kalanchoe 0,05% 8,35E+06 1,87E+06 827 * n=20 Tableau II Cette étude démontre que l'extrait de Kalanchoe pinnata favorise de manière significative la synthèse du collagène de type I par les fibroblastes. CONCLUSION L'extrait de Kalanchoe pinnata stimule la synthèse du composant majoritaire de la matrice extracellulaire, le collagène de type I. Ces propriétés confèrent à cet extrait un rôle anti-age. EXEMPLE 3 - EVALUATION DE LA PROTECTION D'UN PRODUIT VIS A VIS DE LA REACTION DE LA GLYCATION PROTEIQUE La glycation est la réaction qui aboutit à une liaison covalente entre une protéine cible et un sucre, en particulier le glucose. Dans l'organisme, il s'agit d'une réaction lente, spontanée, c'est à dire non enzymatique, et qui se déroule dans l'environnement extra-cellulaire. Ce phénomène correspond à une altération de la protéine cible. La glycation augmente avec l'âge, elle explique partiellement la réticulation des collagènes. Un modèle in vitro a été retenu pour évaluer les effets des extraits de Kalanchoe pinnata. Il repose sur la mesure de la formation des dérivés de la réaction de glycation entre les groupements aminés libre de l'albumine bovine et le glucose. Certains de ces dérivés (AGE) sont fluorescents. La réaction a été mesurée après 8 jours d'incubation. I. Produits à l'étude : Le produit testé est un extrait de Kalanchoe pinnata ; son effet est comparé à une molécule de référence : l'aminoguanidine. 2. Mode opératoire : 2.1. Système d'essai : Le système d'essai (SE) est le mélange réactionnel contenant l'albumine bovine (0,5 g/ml) et le glucose (500 mM) dans un tampon phosphate (0,2 M, pH = 7,4). 5 2.2. Incubation produits + SE : Les produits sont mélangés au système d'essai dans des tubes stériles ; ces derniers sont recouverts de papier aluminium (la réaction doit se faire à l'abri de la lumière). Pour les conditions expérimentales ou certains réactifs ou produits ne 10 seront pas présents, il faut compléter le volume du tube QSP avec de l'eau MilliQ. Après avoir fermé l'ouverture des tubes avec du parafilm (la réaction doit se dérouler à l'abri de l'oxygène), les différents mélanges réactionnels sont placés dans une étuve sèche à 37°C pendant 8 jours. 3. Evaluation des effets : 15 Après les 8 jours d'incubation, 100 µl de chaque tube est prélevé et transféré dans une plaque noire 96 puits. La fluorescence est alors lue au FLUOstar (BMG) (excitation à 355 mn, émission à 460 mn). Les résultats seront exprimés en unité arbitraire de fluorescence. La fluorescence relative aux échantillons « produit + albumine bovine » (= interférence) sera 20 soustraite des données « produit + albumine bovine + Glucose ». RESULTATS : Après 8 jours d'incubation d'albumine bovine avec une surcharge en glucose, la formation de « cross - linking » de glycation est observée. Elle a été évaluée en tirant parti des propriétés de fluorescence de l'adduit albumine bovine-glucose. 25 L'extrait de Kalanchoe pinnata à 0,05% présent dans le système d'essai empêche la liaison croisée entre l'albumine bovine et le glucose de manière efficace (Tableau III ci-dessous).

Unité arbitraire inhibition de fluorescence (%) S.E. 16004 / S.E. + Ag* 10 mM 0 100 S.E. + EXTRAIT DE KALANCROE 3960 75 0,05% * aminoguanidine (référence) Tableau III EXEMPLE 4 - EVALUATION DE L'EFFET PROTECTEUR DU KALANCHOE VIS A VIS DES METALLOPROTEINASES MMPI Le principe de cette étude est de contrôler l'activité des MMPs en inactivant l'enzyme en présence d'un inhibiteur sélectif ; plusieurs conditions de stress sont reconnues pour stimuler l'expression génétique des MMPs parmi lesquelles l'exposition aux ultraviolets. Il est donc proposé d'évaluer la capacité de l'extrait de Kalanchoe 10 pinnata à inhiber MMP-1 secrétées dans le milieu de culture par les fibroblastes de demie humain soumis ou non aux irradiations UVA. Les fibroblastes sont répartis dans des plaques multipuits (24 puits) à raison de 105 cellules/puits dans 500 jal de milieu de culture MEM supplémenté par Lglutamine. Elles ont été maintenues 24 h en étuve à CO2 à 37°C. 15 Le produit à tester a été réparti en 2 concentrations : 0,01%, 0,05% à raison de 2 puits par dose (ces concentrations se sont révélées non cytotoxiques pour les cellules au test MTT). Le schéma expérimental de ces essais est représenté en Figure 6. CONSTITUTION DES LOTS : 20 Lot 1 : témoin négatif non traité et non irradié. Lot 2 : témoin négatif non traité et irradié UVA 10,I/cm2. Lot 3 à 5 : traités par l'extrait de Kalanchoe pinnata 0,01%, 0,05%. Lot 6 à 8 : traités par l'extrait de Kalanchoe pinnata 0,01%, 0,05% et irradiés UVA 10 J/cm2.

DOSAGES : La quantité des métalloprotéinases MMP-1 exprimées a été déterminée à l'aide d'un test ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Cette méthode permet de détecter certaines molécules (non radioactives) à de très faibles doses. Le dosage des MMP-1 a été réalisé grâce à des anticorps monoclonaux reconnaissant spécifiquement chaque enzyme. La quantité de métalloprotéinases a été déterminée grâce à un anticorps secondaire couplé à la peroxydase (R&D Systems). Les échantillons sont lus au spectrophotomètre (450 nm) et comparés à une gamme standard de MMP. La quantité de protéines totales a été déterminée en associant le contenu 10 tissulaire récupéré à une solution d'acide bicinchoninique (BCA) et une solution de sulfate de cuivre (Interchim) ; les ions Cu++ de ce mélange sont réduits en ions Cu+ en présence des protéines et se chélatent avec 2 molécules de BCA. Les échantillons sont lus au spectrophotomètre (550 nm) et comparés à une gamme standard de sérum albumine bovine (SAB) pour déterminer la concentration de 15 protéines totales dans la solution. CALCUL DE LA CONCENTRATION DE MMP : Les résultats finaux sont exprimés en ng de MMP / mg protéines. RESULTATS : l'évaluation de l'expression de MMP-1 en fonction des différentes concentrations de l'extrait de Kalanchoe pinnata est répertoriée dans les Tableaux IV et V. Sans irradiation UVA MMP-1 % de diminution (ng/mg protéines) Témoin (basale) 10,95 I 0,01% 5,2 52,5 0,05% 2,4 78 20 Tableau IV Sans irradiation : l'extrait de Kalanchoe pinnata à la concentration optimale de 0,05% inhibe près de 80% des MMP-1 dans la culture de fibroblastes ; la capacité de l'extrait à inhiber les MMP1 présente un effet dose (ces résultats sont représentés graphiquement sur l'histogramme de la Figure 7).

UVA 10J/em2 MMP-1 % de diminution (ng/mg protéines) Témoin 51,5 / 0,01% 11,8 77 0,05% 1,7 97 Tableau V Après irradiation : l'extrait de Kalanchoe pinnata à la concentration optimale de 0,05% inhibe totalement les MMP-1 générés par les UVA dans la culture de fibroblastes ; la capacité de l'extrait à inhiber les MMP1 présente un effet dose.

CONCLUSION : Dans les conditions expérimentales retenues, l'extrait de Kalanchoe pinnata testé aux différentes concentrations choisies présente une activité inhibitrice efficace des métalloprotéinases MMP-1. EXEMPLE 5 - COMPOSITIONS CREME DE JOUR ANTI-ÂGE % SODIUM POLYACRYLATE 0,40 HYDROXYETHYL ACRYLATE/SODIUM ACRYLOYLDIMETHYL TAURATE COPOLYMER 1,20 GLYCOLS 4,00 ISOHEXADECANE 5,00 DICAPRYLYL CARBONATE 5,00 PENTAERYTHRITYL TETRAETHYLHEXANOATE 4,00 BEURRE DE KARITE 2,00 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE 1,00 CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE 4,00 GLYCERYL STEARATE & PEG-100 STEARATE 2,50 SILICA 2,00 EXTRAIT DE KALANCHOE PINNATA 1,00 DISODIUM EDTA 0,10 CONSERVATEURS Q.S. PARFUM Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.S.P. 100 CREME DE NUIT ANTI-ÂGE 0/0 ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0,20 GLYCOLS 7,00 HYDROGENATED PEANUT OIL 4,00 GLYCERYL STEARATE & PEG-100 STEARATE 2,50 CETEARYL ISONONANOATE 6,00 HYDROGENATED COCO-GLYCERIDES 3,00 CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE 6,50 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE 4,50 DIMETHICONE & DIMETHICONOL 0,50 EXTRAIT DE KALANCHOE PINNATA 2,00 DISODIUM EDTA Q.S. CONSERVATEURS Q.S.

SODIUM HYDROXIDE Q.S. PH PARFUM Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.S.P.

100 LOTION ANTI-ÂGE XANTHAN GUM 0,15 CARBOMER 0,20 TAPIOCA STARCH 1,50 DISODIUM EDTA 0,10 GLYCOLS 4,00 BIOSACCHARIDE GUM-1 10,00 GLYCERYL ACRYLATE/ACRYLIC ACID COPOLYMER 10,00 EXTRAIT KALANCHOE PINNATA 1,00 TROMETHAMINE 0,20 CONSERVATEURS Q.S. PARFUM Q.S. EAU DEMINERALISEE Q.S.P. 100

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique comprenant un extrait aqueux et/ou alcoolique de Kalanchoe pinnata.
2. 2. Composition cosmétique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de Kalanchoe pinnata est un extrait de feuilles fraiches.
3. 3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait de Kalanchoe pinnata est stabilisé par de la glycérine.
4. 4. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend entre 0,01 et 10 %, de préférence entre 0,01 et 5%, d'extrait de Kalanchoe pinnata en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
5. 5. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend en outre au moins un adjuvant cosmétique et/ou au moins un actif anti-âge.
6. 6. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes pour utilisation pour favoriser la synthèse de collagène et/ou pour protéger les protéines cutanées de la glycation et/ou pour induire la synthèse d'acide hyaluronique et augmenter sa teneur dans la peau et/ou limiter la production excessive de MMP conduisant à la dégradation de la MEC.
7. 7. Utilisation de la composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou d'un extrait de Kalanchoe pinnata pour prévenir, retarder et/ou lutter contre le vieillissement de la peau et/ou l'apparition des signes de vieillissement de la peau.
8. 8. Utilisation de la composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou d'un extrait de Kalanchoe pinnata pour améliorer l'aspect de surface de la peau ; pour prévenir et/ou réduire l'affaissement de la structure tridimensionnelle de la matrice extracellulaire et/ou la perte d'élasticité des fibres cutanées et/ou favoriser la cohésion entre le derme et l'épiderme et/ou régénérer et restructurer l'épiderme ; pour prévenir et/ou réduire le relâchement cutané, l'amincissement et le flétrissement de la peau ; pour retarder l'apparition des rides et ridules et/ou réduire leur profondeur ; pour prévenir la perte de fermeté et/ou redensifier et/ou raffermir et/ou tonifier la peau et/ou apporter un meilleur lissage en surface de la peau ; pour préserver et/ou de restaurer la régularité du contour du visage.
9. 9. Utilisation de la composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications I à 5 ou d'un extrait de Kalanchoe pinnata pour améliorer la couleur et/ou l'éclat et/ou l'uniformité du teint de la peau ; pour prévenir l'apparition d'une peau terne et/ou sans éclat et apporter à la peau un teint régulier et éclatant.
10. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisée en ce que l'extrait de Kalanchoe pinnata est un extrait aqueux et/ou alcoolique de feuilles fi-aiches.