FR3051674B1 - Lipoproteines chargees en complexes de platine pour le traitement du cancer - Google Patents

Lipoproteines chargees en complexes de platine pour le traitement du cancer Download PDF

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Abstract

La présente invention a pour objet des lipoprotéines chargées en complexe de platine. L'invention a aussi pour objet un kit comprenant lesdites lipoprotéines. En particulier, la présente invention concerne l'utilisation desdites lipoprotéines chargées en complexe de platine pour cibler spécifiquement les macrophages et les cellules tumorales dans le traitement du cancer.

Description

LIPOPROTEINES CHARGEES EN COMPLEXES DE PLATINE POUR LE
TRAITEMENT DU CANCER
DOMAINE DE L’INVENTION
La présente invention concerne Γutilisation d’anti-tumoraux pour le traitement du cancer. INTRODUCTION
Les complexes de platine sont couramment utilisés dans le traitement des cancers. Parmi ces derniers, on peut citer le cisplatine, le carboplatine, l’oxaliplatine, le tétraplatine, l’iproplatine, le satraplatine, le nédaplatine, le lobaplatine, le picoplatine (Pt-based drugs: The spotlight will be on proteins, O. Pinato, C. Musetti and C.Sissi, Metallomocis February 2014) ou encore le ProLindac (ProLindac™ (AP5346): A review of the development of an H PM A DACH platinum Polymer Therapeutic, David P Nowotnika, Esteban Cvitkovic, Advanced Drug De livery Review s Volume 61, Issue 13, 12 November 2009, Pages 1214 1219). Cependant, ces complexes de platine tels qu’utilisés actuellement présentent l’inconvénient majeur de former des adduits avec les protéines dont l’albumine (Cisplatin Binding Sites on Human Albumin, Andrei I. Ivanov, John Christodoulou, John A. Parkinson, Kevin J. Barnham, Alan Tucker, John Woodrowi, and Peter J. Sadler, The Journal ofBiological Chemistry, Vol 273, No. 24, Issue ofJune 12, pp. 14721-14730, 1998). Le cisplatine est un des complexes de platine les plus utilisés.
Le complexe cis-diaminedichloroplatine (II) (CDDP), plus connu sous le nom de cisplatine, est un antinéoplasique utilisé dans le traitement des cancers. Toutefois, comme la plupart des antinéoplasiques utilisés en thérapies contre le cancer, le cisplatine ne permet pas de cibler spécifiquement les cellules cancéreuses. D’autre part, son utilisation s’accompagne d’effets secondaires tels que la néphrotoxicité, la neurotoxicité, l’ototoxicité, la toxicité pour la moelle osseuse et autres tissus, l’hémolyse, la neuropathie périphérique et l’irritation gastro-intestinale accompagnée de nausées et de vomissements.
Il est donc nécessaire de trouver des méthodes pour augmenter l’efficacité et la sélectivité des complexes de platine, en particulier du cisplatine, tout en diminuant la toxicité liée à l’utilisation de ces derniers.
RESUME DE l’NVENTION
La présente invention a pour objet une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine. Un autre objet de la présente invention concerne une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine.
En outre, un autre objet de la présente invention concerne un kit comprenant : - une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine ou un mélange de ces dernières, et - une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
La présente invention a également pour objet une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine. De même, la présente invention a pour objet une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
Les inventeurs de la présente invention ont démontré que la vectorisation d’un complexe de platine, en particulier le cisplatine, permettait d’augmenter l’efficacité dudit complexe dans le traitement du cancer, tout en permettant de diminuer la toxicité liée à l’utilisation de ce dernier. Les inventeurs ont aussi démontré que la combinaison de différents types de lipoprotéines chargées en complexe de platine, en particulier le cisplatine, permettait d’obtenir un effet synergique et donc d’améliorer davantage l’efficacité dudit complexe dans le traitement du cancer tout en diminuant sa toxicité pour l’organisme.
DESCRIPTION DETAILLEE
Les lipoprotéines de basse densité (LDL) et lipoprotéines de haute densité (HDL) sont bien connues de l’homme du métier (Introduction to Lipids andLipoproteins, Kenneth R FeingoldMD, Car Grunfeld, PhD, NCBI Bookshelf).
Typiquement, les lipoprotéines de haute densité (HDL) sont des lipoprotéines riches en cholestérol, phospholipides et comprenant les apolipoprotéines A-I, A-II, A-IV, C-I, C-II, C-III, et E, de densité comprise entre 1,063 et 1,210 g/mL et de diamètre variant entre 5 et 12 nm.
Typiquement, les lipoprotéines de basse densité (LDL) natives, de forme non-oxydée et non-acétylée, sont des lipoprotéines riches en cholestérol et comprenant Tapolipoprotéine B-100, de densité comprise entre 1.019 et 1.063 g/mL et de diamètre variant entre 18 et 25 nm.
Au sens de la présente invention, on entend par « lipoprotéine de basse densité modifiée » ou « lipoprotéine LDL modifiée » une lipoprotéine de basse densité (LDL) oxydée ou acétylée.
Typiquement, les lipoprotéines HDL et LDL sont obtenues à partir de plasma de donneurs par une technique de séparation par ultracentrifugation.
Typiquement, pour la fabrication d’une lipoprotéine (LDL, HDL ou LDL modifiée) chargée en complexe de platine, le complexe de platine est ajouté à la lipoprotéine en milieu physiologique. Typiquement, afin de permettre l’association dudit complexe de platine à la lipoprotéine et d’éliminer la fraction non liée dudit complexe de platine, les échantillons sont incubés puis dialysés.
Typiquement, la concentration dudit complexe de platine est déterminée par spectrométrie d’absorption atomique en four graphite.
Typiquement, la concentration en complexe de platine retrouvée dans les lipoprotéines est de 0,1 à 1 mg/mL, préférentiellement de 0,2 à 0,8 mg/mL et encore plus préférentiellement de 0,3 à 0,6 mg/mL de solution finale, i.e. la solution obtenue par addition de lipoprotéines dans une solution de tampon de phosphate salin (PB S) contenant du cis-platine. Cette concentration est mesurée pour une concentration en cholestérol de Immol/mL de ladite solution finale.
Typiquement, la concentration en complexe de platine retrouvée dans les lipoprotéines LDL est de 0,3 mg/mL de ladite solution finale. Cette concentration est mesurée pour une concentration en cholestérol de Immol/mL de ladite solution finale.
Typiquement, la concentration en complexe de platine retrouvée dans les lipoprotéines HDL est de 0,5 mg/ml de ladite solution finale. Cette concentration est mesurée pour une concentration en cholestérol de Immol/mL de ladite solution finale.
La présente invention a pour objet une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
Selon la présente invention, ladite lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée est utilisée en tant que médicament.
Plus particulièrement, ladite lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée est utilisée pour traiter le cancer.
On pourra traiter tout type de cancer, en particulier les cancers pour lesquels les complexes de platine sont déjà utilisés couramment : le cancer colorectal, le cancer du colon, le cancer de l’estomac, les cancers de la sphère oto-rhino-laryngée (ORL), le cancer du sein, le cancer du pancréas, le cancer du foie, le cancer du poumon, le cancer du cerveau, le cancer de la prostate, le cancer de l’ovaire, le cancer du testicule, le cancer de l’œsophage, le cancer de la vessie, les cancers épidermoïdes, le cancer du col de l’utérus, le cancer de l’endomètre, le cancer des os, les lymphomes, les tumeurs du système nerveux central, les sarcomes, les leucémies et les adénomes.
Dans un mode de réalisation particulier, le cancer est le cancer colorectal ou le cancer du sein.
Encore plus particulièrement, ladite lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée est utilisée en thérapie pour induire la mort par apoptose des cellules tumorales.
La présente invention a également pour objet une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine.
Les lipoprotéines de basse densité (LDL) modifiées sont connues par l’homme du métier pour être reconnues par les récepteurs éboueurs (scavenger receptors) des macrophages. Typiquement, elles peuvent être obtenues par incubation en présence de sulfate de cuivre ou d’un générateur de radicaux libres (LDL oxydées) ou par acétylation (LDL acétylées) (cf. A Modification Methodfor Isolation and Acétylation of Low Density Lipoprotein of Human Plasma by Density Discontinuons Gradient Ultracentrifugation, J.Z. Rezaetal., Journal of Biological Sciences 10 (8): 785-789, 2010 ISSN 1727-3048).
Selon la présente invention, ladite lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée ou ladite lipoprotéine de basse densité modifiée chargée est utilisée en tant que médicament.
Plus particulièrement, ladite lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée ou ladite lipoprotéine de basse densité modifiée chargée est utilisée pour traiter le cancer.
On pourra traiter tout type de cancer, en particulier les cancers pour lesquels les complexes de platine sont déjà utilisés couramment : le cancer colorectal, le cancer du colon, le cancer de l’estomac, les cancers de la sphère oto-rhino-laryngée (ORL), le cancer du sein, le cancer du pancréas, le cancer du foie, le cancer du poumon, le cancer du cerveau, le cancer de la prostate, le cancer de l’ovaire, le cancer du testicule, le cancer de l’œsophage, le cancer de la vessie, les cancers épidermoïdes, le cancer du col de l’utérus, le cancer de l’endomètre, le cancer des os, les lymphomes, les tumeurs du système nerveux central, les sarcomes, les leucémies et les adénomes.
Dans un mode de réalisation particulier, le cancer est le cancer colorectal ou le cancer du sein.
Plus particulièrement, ladite lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée ou ladite lipoprotéine de basse densité modifiée chargée est utilisée en thérapie pour activer les macrophages.
Typiquement, l’activation de macrophage entraîne une production de nombreux produits de sécrétion intervenant dans l’inflammation. Des produits de sécrétion intervenant dans l’inflammation sont par exemple des espèces réactives de l’oxygène (ROS - Reactive Oxygen Species), des enzymes (protéases et lipases), des cytokines et des composants de la coagulation.
La présente invention a également pour objet un kit comprenant : - une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine ou un mélange de ces dernières, et - une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
Plus particulièrement, le kit est utilisé pour traiter le cancer.
On pourra traiter tout type de cancer, en particulier les cancers pour lesquels les complexes de platine sont déjà utilisés couramment : le cancer colorectal, le cancer du colon, le cancer de l’estomac, les cancers de la sphère oto-rhino-laryngée (ORL), le cancer du sein, le cancer du pancréas, le cancer du foie, le cancer du poumon, le cancer du cerveau, le cancer de la prostate, le cancer de l’ovaire, le cancer du testicule, le cancer de l’œsophage, le cancer de la vessie, les cancers épidermoïdes, le cancer du col de l’utérus, le cancer de l’endomètre, le cancer des os, les lymphomes, les tumeurs du système nerveux central, les sarcomes, les leucémies et les adénomes.
Dans un mode de réalisation particulier, le cancer est le cancer colorectal ou le cancer du sein.
En outre, la présente invention a pour objet une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine.
De même, la présente invention a pour objet une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
On pourra traiter tout type de cancer, en particulier les cancers pour lesquels les complexes de platine sont déjà utilisés couramment : le cancer colorectal, le cancer du colon, le cancer de l’estomac, les cancers de la sphère oto-rhino-laryngée (ORL), le cancer du sein, le cancer du pancréas, le cancer du foie, le cancer du poumon, le cancer du cerveau, le cancer de la prostate, le cancer de l’ovaire, le cancer du testicule, le cancer de l’œsophage, le cancer de la vessie, les cancers épidermoïdes, le cancer du col de l’utérus, le cancer de l’endomètre, le cancer des os, les lymphomes, les tumeurs du système nerveux central, les sarcomes, les leucémies et les adénomes.
Dans un mode de réalisation particulier, le cancer est le cancer colorectal ou le cancer du sein.
La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine telle que définie précédemment ou une lipoprotéine de basse densité modifiée chargée en complexe de platine telle que définie précédemment.
La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant une lipoprotéine basse densité (LDL) chargée en complexe de platine telle que définie précédemment.
La présente invention concerne également Γutilisation desdites lipoprotéines chargées en complexe de platine telles que définies précédemment ou dudit kit tel que défini précédemment pour la fabrication d’un médicament destiné au traitement du cancer.
La présente invention concerne également une méthode pour le traitement du cancer qui comprend l’administration à un patient d’une quantité thérapeutiquement efficace desdites lipoprotéines chargées en complexe de platine telles que définies précédemment. Par quantité thérapeutiquement efficace, on entend toute quantité de lipoprotéines chargées selon la présente invention qui est suffisante pour induire une réponse antitumorale ou activer les macrophages.
Comme mentionné précédemment, les complexes de platine sont couramment utilisés dans le traitement des cancers. Des exemples de complexe de platine sont le cisplatine, le carboplatine, l’oxaliplatin, le tétraplatine, l’iproplatine, le satraplatine, le nédaplatine, le lobaplatine, le picoplatine ou le ProLindac.
Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, le complexe de platine est choisi parmi le groupe comprenant le cisplatine, le carboplatine, l’oxaliplatin, le tétraplatine, l’iproplatine, le satraplatine, le nédaplatine, le lobaplatine, le picoplatine et le ProLindac.
Dans un mode de réalisation préféré, le complexe de platine est le cisplatine.
RESUME DES EXEMPLES
Les inventeurs ont démontré que la vectorisation de complexes de platine, en particulier le cisplatine, était possible via des lipoprotéines de haute densité (HDL) mais aussi via des lipoprotéines de faible densité (LDL).
En comparaison avec des complexes de platine non vectorisés, la vectorisation des complexes de platine, en particulier le cisplatine, par les lipoprotéines permet d’améliorer refficacité de la réponse anti-tumorale tout en diminuant la toxicité liée à Γutilisation des complexes de platine.
Les lipoprotéines chargées en complexe de platine, en particulier le cisplatine, telles que définies selon la présente invention, permettent de cibler efficacement différents types cellulaires. Typiquement, les lipoprotéines de type HDL et LDL modifiées chargées permettent de cibler les macrophages et les lipoprotéines de type LDL chargées permettent de cibler les cellules tumorales. En outre, la vectorisation des complexes de platine, en particulier le cisplatine, par les lipoprotéines, permet d’activer davantage les macrophages et de cibler d’avantage les cellules tumorales en comparaison avec des complexes de platine non vectorisés.
Plus particulièrement, l’utilisation à la fois de lipoprotéines LDL chargées en complexe de platine et l’utilisation de lipoprotéines HDL chargées en complexe de platine ou de lipoprotéines LDL modifiées chargées en complexe de platine ou leur mélange, permet d’apporter un effet synergique et donc d’améliorer l’efficacité anti-tumorale en ciblant spécifiquement et simultanément deux types cellulaires. En effet, l’utilisation combinée de lipoprotéines LDL chargées en cisplatine et l’utilisation de lipoprotéines HDL chargées en complexe de platine ou de lipoprotéines LDL modifiées chargées en complexe de platine ou leur mélange, permet de cibler spécifiquement à la fois les cellules tumorales et les macrophages. Cette utilisation permet donc d’exercer un effet cytotoxique plus puissant et de renforcer la réponse immunitaire via l’activation des macrophages tout en diminuant la toxicité liée à l’utilisation du complexe de platine seul.
FIGURES
Figure 1 : Etude de la vectorisation du cisplatine dans les LDL et les HDL Figure IA : Vectorisation du cisplatine
Figure IB : Evaluation des échanges du cisplatine entre les LDL/HDL chargées et LDL/HDL natives
Figure 2 : Effet de la vectorisation du cisplatine sur les cellules cancéreuses et sur les macrophages
Figure 2A : Effet de la vectorisation du cisplatine sur les cellules tumorales
Figure 2B : Effet de la vectorisation du cisplatine sur les macrophages
Figure 2C : Effet de la vectorisation du cisplatine sur les macrophages (avec LDL oxydée)
Figure 3 : Etude de l’activité des LDL chargés en cisplatine et des HDL chargés en cisplatine sur les cellules cancéreuses et sur les macrophages dans les extraits tumoraux
Figure 4 : Vectorisation du cisplatine par les LDL - amélioration de l’efficacité tumorale - in vivo
Figure 4A : Evolution de la taille des tumeurs en fonction du temps
Figure 5 : Vectorisation du cisplatine par les LDL - diminution de la toxicité in vivo Figure 5A : Effet de la vectorisation du cisplatine par les LDL - volume de la tumeur Figure 5B : Effet de la vectorisation du cisplatine par les LDL - perte de poids
EXEMPLES
Préparation des lipoprotéines chargées en cisplatine
Les lipoprotéines de basse densité et les lipoprotéines de haute densité ont été isolées à partir de plasma de donneurs sains par une technique de séparation par ultracentrifugation sur gradient de densité différentielle au bromure de potassium (KBr) (Technique de Redgrave, 1975). Après extraction, les lipoprotéines ont été ajustées à une concentration en cholestérol de ImM. ΙΟΟμΙ d’une solution de cisplatine (à lOmg/ml, dans du sérum physiologique) ont ensuite été ajoutés pour une concentration finale attendue de lmg/ml. Afin de permettre l’association du cisplatine avec les lipoprotéines et d’éliminer la fraction non liée de cisplatine, les échantillons ont été incubés 3 heures à 37°C, puis soumis à deux dialyses successives (contre 1000 fois le volume de tampon phosphate salin (PBS), Cutoff 7000Da) de 1 heure et 18 heures respectivement. Après la dialyse, la concentration de cisplatine a été déterminée par spectrométrie d’absorption avec four en graphite (GF-AAS) (Figure IA). Comme le démontre la figure IA, la concentration de cisplatine dans les LDL est de 0,3 mg/mL de solution finale, i.e. la solution obtenue par addition de lipoprotéines dans une solution de tampon de phosphate salin (PBS) contenant du cis-platine. La concentration de cisplatine dans les HDL est de 0,5 mg/mL de ladite solution finale. Ces concentrations sont mesurées pour une concentration en cholestérol de Immol/mL de ladite solution finale.
Ainsi, plus de 30% de la concentration initiale de cisplatine a été vectorisée dans les fractions de HDL et de LDL purifiées.
Etude de la stabilité des lipoprotéines chargées en cisplatine (Figure IB)
Des LDL contenant du cisplatine vectorisé (LDL-Cis) ont été incubées 18 heures à 37°C avec des HDL natives (HDL 0). De même, des HDL contenant du cisplatine vectorisé (HDL-Cis) ont donc été incubées 18 heures à 37°C avec des LDL natives (LDL 0).
Après incubation, ces fractions de lipoprotéines ont été extraites par une technique de séparation par ultracentrifugation sur gradient de densité différentielle au bromure de potassium (KBr). La quantité de cisplatine liée aux différentes fractions a ensuite été déterminée par spectrométrie d’absorption avec four en graphite (GF-AAS).
Comme le démontre la figure IB, après 18 heures d’incubation, 0,13mg et 0,26mg de cisplatine par mL de ladite solution finale étaient toujours présents respectivement dans les fractions LDL-Cis et HDL-Cis. En revanche, aucune trace de cisplatine n’a été détectée dans les fractions LDL et HDL natives (Figure IB).
Ces résultats démontrent donc que l’association du cisplatine avec les lipoprotéines est stable. En effet, après 18 heures d’incubation, environ 50% du cisplatine initialement vectorisé était toujours présent dans les fractions de lipoprotéines, et aucun échange de cisplatine avec d’autres classes de lipoprotéines n’est survenu.
Etude in vitro des effets de la vectorisation du cisplatine par des lipoprotéines HDL et LDL sur des cellules d’adénocarcinome ou de macrophages en culture (Figure 2A1
Les cellules d’adénocarcinome et les macrophages sont majoritairement retrouvés dans les tumeurs du colon.
Pour ce test, des lignées de cancer colorectaux SW480 ont été traitées 48 heures avec des LDL natives (LDL 0), des HDL natives (HDL 0), du cisplatine non vectorisé, des LDL-Cis ou des HDL-Cis (concentration finale de cisplatine : 25μΜ). La viabilité des cellules a ensuite été évaluée par cytométrie de flux. D’après la figure 2A, le cisplatine non vectorisé a induit une mortalité de 41% des cellules cancéreuses. En revanche, les LDL et les HDL natives n’ont induit aucun effet sur les cellules cancéreuses. Par ailleurs, les HDL-Cis ont induit une mortalité de 37% des cellules cancéreuses, ce qui est comparable à l’effet du cisplatine non vectorisé. En revanche, les LDL-Cis ont induit une mortalité de 58% des cellules SW480, soit un effet bien supérieur à celui obtenu pour le cisplatine non vectorisé (Figure 2A).
Etude de l’impact de la vectorisation du cisplatine sur la production de ROS ffigure 2B)
Après 7 jours de culture dans du M-CSF humain de chez Miltenyi, Biotec. (Macrophage Colony-Stimulating Factor) à lOOng/ml, des macrophages humains ont été différentiés, à partir de monocytes, en macrophages de phénotype alternatif M2 (pro-tumoral). Ces macrophages ont ensuite été stimulés 2 heures avec des LDL natives (LDL 0), des HDL natives (HDL 0), du cisplatine non vectorisé, des LDL-Cis ou des HDL-Cis (concentration finale de cisplatine : 25μΜ). La production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS, Reactive Oxygen Species, représentative d’une action anti-tumorale) par les macrophages a ensuite été déterminée par cytométrie de flux après un marquage au Dihydroethidium (DHE). Ce test démontre donc que l’utilisation du cisplatine non vectorisé permet de faire passer la production basale de ROS de 8,2% à 18,2% par les macrophages en comparaison avec l’échantillon témoin (CTL). D’autre part, les HDL natives, les LDL natives et les LDL-Cis n’ont eu aucun effet sur la production de RO S par les macrophages. En revanche, les HDL-Cis induisent une activation des macrophages de 26,8%, soit un effet environ 50% plus efficace que le cisplatine non vectorisé (Figure 2B).
Etude de l’impact de la vectorisation du cisplatine sur la production de ROS pour les LDL oxydées chargées en cisplatine (figure 20
Le même protocole a été répété afin de comparer l’effet entre les HDL-Cis et les lipoprotéines LDL oxydées chargées en cisplatine (LDLox + Cis) (voir Figure 2C). Ainsi, les LDLox + Cis induisent une activation des macrophages supérieure à celle induite par les HDL-Cis. Les LDL oxydées ont été obtenues par incubation de LDL natives (cholestérol, 1 mM) pendant 24 heures à 37°C en présence de sulfate de cuivre (5 μΜ). Après oxydation, les LDL oxydées sont dialysées dans un tampon PBS.
Ciblage spécifique
Les tests précédents permettent donc de démontrer que, in vitro, les LDL chargées semblent avoir un effet uniquement sur les cellules cancéreuses, alors que les HDL chargées ont un effet uniquement sur les macrophages. La vectorisation du cisplatine par les HDL permet d’augmenter près de 50% l’efficacité du traitement par rapport au cisplatine non vectorisé. De même, vectorisation du cisplatine par les LDL permet d’augmenter près de 50% l’efficacité du traitement par rapport au cisplatine non vectorisé.
Dans un autre test, des tumeurs provenant d’un modèle d’allogreffe ectopique (sous cutanée) et des tumeurs coliques CT-26 chez la souris BALB-C ont été isolées et mises en contact avec des lipoprotéines fluorescentes (bodipy) de type LDL ou HDL (Figure 3). Comme le démontre la figure 3, les LDL sont préférentiellement captées par les cellules tumorales alors que HDL sont quant à elles majoritairement captées par les macrophages.
Tests in vivo
Afin de vérifier les résultats in vitro ou ex vivo ci-dessus pour un modèle in vivo, le modèle d’allogreffe ectopique (sous cutanée) de tumeurs coliques CT-26 chez la souris BALB-C a été utilisé. Comme démontré par la figure 4A, après 25 jours de traitement, les souris traitées par le LDL-Cis à 1,5 mg/kg présentent des tumeurs bien moins développées en comparaison avec le groupe témoin (CLT) et avec le groupe cisplatine à 1,5 mg/kg non vectorisé. De plus, comme le prouve l’analyse histologique des tumeurs (non montré), la vectorisation améliore la production d’espèces radicalaires (DHE) et induit plus d’apoptose (clivage de la caspase-3) par rapport au groupe cisplatine non vectorisé. Ces expérimentations ont donc montré que la vectorisation d’un agent cytotoxique améliorait son efficacité anti-tumorale.
Etude de la néphrotoxicité et autres effets secondaires pour le cisplatine vectorisé
Ce test a pour but de vérifier que la vectorisation du cisplastine permet bien de réduire la toxicité générale et rénale en comparaison avec le cisplatine non vectorisé. Pour ce test, du cisplatine a administré à une dose de 20 mg/kg pendant 3 jours à notre modèle murin précédemment décrit, i.e. le modèle d’allogreffe ectopique (sous cutanée) de tumeurs coliques CT-26 chez la souris BALB-C, (protocole validé de néphrotoxicité induite par le cisplatine).
Comme le démontre la figure 5B, le cisplatine non vectorisé induit, d’une part, une perte de poids de près de 15% par rapport à l’échantillon témoin (CTL). D’autre part, comme le prouve les analyses histologiques (non montré), le cisplatine non vectorisé induit une forte néphrotoxicité qui se caractérise par des désépithélialisations, la présence de corps hyalins et des phénomènes de nécrose et d’apoptose. En comparaison, aucune perte de poids ou de signes de néphrotoxicité n’ont été observés pour le groupe cisplatine vectorisé par les LDL (cf. figure 5B). Ainsi, la vectorisation du cisplatine permet de diminuer la toxicité liée à l’utilisation de ce dernier en comparaison avec le cisplatine non vectorisé. D’autre part, le cisplatine vectorisé par les LDL engendre l’apoptose des cellules au sein de la tumeur mais pas celle des cellules rénales (analyse histologique non montrée). L’utilisation du cisplatine vectorisé permet donc de s’affranchir des effets secondaires liés à l’utilisation du cisplatine non vectorisé.

Claims (14)

  1. REVENDICATIONS
    1. Lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
  2. 2. Lipoprotéine selon la revendication 1 utilisée en tant que médicament.
  3. 3. Lipoprotéine selon la revendication 1 utilisée pour traiter le cancer.
  4. 4. Lipoprotéine selon la revendication 1 utilisée en thérapie pour induire la mort par apoptose des cellules tumorales.
  5. 5. Lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou lipoprotéine de basse densité oxydée ou acétylée chargée en complexe de platine.
  6. 6. Lipoprotéine selon la revendication 5 utilisée en tant que médicament.
  7. 7. Lipoprotéine selon la revendication 5 utilisée pour traiter le cancer.
  8. 8. Lipoprotéine selon la revendication 5 utilisée en thérapie pour activer les macrophages.
  9. 9. Kit comprenant : - une lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine ou une lipoprotéine de basse densité oxydée ou acétylée chargée en complexe de platine ou un mélange de ces dernières, et - une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
  10. 10. Kit selon la revendication 9 utilisé pour traiter le cancer.
  11. 11. Lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité oxydée ou acétylée chargée en complexe de platine.
  12. 12. Lipoprotéine de haute densité (HDL) chargée en complexe de platine pour son utilisation contre le cancer, caractérisée en ce qu’elle est utilisée en combinaison avec une lipoprotéine de basse densité (LDL) chargée en complexe de platine.
  13. 13. Lipoprotéine selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 et 11 à 12 ou kit selon la revendication 9 ou 10, caractérisé(e) en ce que le complexe de platine est choisi parmi le groupe comprenant le cisplatine, le carboplatine, Poxaliplatin, le tétraplatine, l’iproplatine, le satraplatine, le nédaplatine, le lobaplatine, le picoplatine et le ProLindac.
  14. 14. Lipoprotéine selon l’une quelconque des revendications 1 à 8 et 11 à 12 ou kit selon la revendication 9 ou 10, caractérisé(e) en ce que le complexe de platine est le cisplatine.
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