FR3138304A3 - UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE - Google Patents

UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE Download PDF

Info

Publication number
FR3138304A3
FR3138304A3 FR2210602A FR2210602A FR3138304A3 FR 3138304 A3 FR3138304 A3 FR 3138304A3 FR 2210602 A FR2210602 A FR 2210602A FR 2210602 A FR2210602 A FR 2210602A FR 3138304 A3 FR3138304 A3 FR 3138304A3
Authority
FR
France
Prior art keywords
fermentation product
thermophilus
group
streptococcus
sarcopenia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR2210602A
Other languages
English (en)
Other versions
FR3138304B3 (fr
Inventor
Wei-Jen Chen
Tsung-Yin Tang
Ming-Chung TSENG
Yu-Shan WEI
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Syngen Biotech Co Ltd
Original Assignee
Syngen Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Syngen Biotech Co Ltd filed Critical Syngen Biotech Co Ltd
Publication of FR3138304A3 publication Critical patent/FR3138304A3/fr
Application granted granted Critical
Publication of FR3138304B3 publication Critical patent/FR3138304B3/fr
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/06—Anabolic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)

Abstract

UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE Des utilisations d'une composition de produit de fermentation de Streptococcus thermophiles ST7 pour améliorer les performances sportives et soulager la sarcopénie sont divulguées. La composition de produit de fermentation de Streptococcus thermophiles ST7 comprend Streptococcus salivarius subsp. thermophilus ST7 et/ou son produit de fermentation. L'administration d'une quantité efficace de la composition de produit de fermentation de Streptococcus thermophiles ST7 à un individu à l’avance peut augmenter la teneur en ATP des cellules musculaires de l'individu et abaisser les indices liés à la fatigue et aux dommages musculaires, améliorant ainsi les performances sportives de l'individu et améliorant ou prévenant la sarcopénie et ses symptômes.

Description

UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DEStreptococcus thermophilesST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE
ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION
1. Domaine technique
La présente invention concerne les utilisations de probiotiques. Plus particulièrement, l'invention concerne des utilisations d'une composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 pour améliorer les performances sportives et soulager la sarcopénie.
2. Description de l'état antérieur de la technique
Les progrès rapides des soins médicaux et de la technologie ont augmenté, et continuent d'augmenter, la durée de vie humaine. De nombreux pays sont donc confrontés aux problèmes de santé d'une société vieillissante ou âgée. L'un de ces problèmes est la sarcopénie, qui est considérée comme un facteur majeur de détérioration de la santé des personnes âgées. La sarcopénie désigne un groupe de symptômes identifiables par une combinaison d'indices de mesure tels que la masse musculaire, la force musculaire et la fonction musculaire. On pense qu'elle est associée aux handicaps, aux chutes et à une augmentation du taux de mortalité.
Actuellement, il n'existe aucun médicament pour traiter cliniquement la sarcopénie. Les symptômes de la sarcopénie ne peuvent être diminués qu'en ajustant les habitudes alimentaires et les habitudes d'exercice du patient afin de réduire une nouvelle détérioration. Cependant, comme la plupart des patients atteints de sarcopénie présentent déjà des symptômes tels que la lenteur des mouvements, une faible force de préhension et une faiblesse musculaire, il n'est pas rare qu'un patient atteint de sarcopénie abandonne une thérapie par l’exercice en cours en raison de la fatigue ou des douleurs musculaires, ce qui ajoute à la difficulté de réduire la sarcopénie.
BREF RÉSUMÉ DE L'INVENTION
L'objectif principal de la présente invention est de proposer des utilisations d'une composition de produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 pour améliorer les performances sportives et soulager la sarcopénie, c'est-à-dire de proposer l'administration d'une quantité efficace de la composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 à un individu pour augmenter la teneur en adénosine triphosphate (ATP) et la teneur en glycogène des cellules musculaires de l'individu et abaisser les indices biochimiques liés à la fatigue et aux dommages aux tissus musculaires, le but étant d'améliorer efficacement les performances sportives de l'individu (par exemple, en réduisant la fatigue musculaire, en accélérant l'élimination de l'acide lactique des muscles après l'exercice et en améliorant la capacité motrice) et de réduire ou soulager la sarcopénie et ses symptômes.
Pour atteindre l'objectif précédent, la présente invention propose des utilisations deStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 (ouStreptococcus thermophilesST7 en abrégé) et d'un produit de fermentation de celui-ci. Le produit de fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 (ou le produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 en abrégé) est obtenu par fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et comprend des bactéries viables duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des bactéries inactivées duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des métabolites duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, ou du NADH (nicotinamide adénine dinucléotide sous forme réduite). LeStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 est déposé à l'Institut de recherche et de développement de l'industrie alimentaire, Hsinchu, Taiwan (la date de dépôt étant le 25 avril 2022, et le numéro de dépôt étant BCRC 911126) et dans la Collection allemande de cultures cellulaires de micro-organismes (DSMZ) (la date de dépôt étant le 28 avril 2022, et le numéro de dépôt étant DSM 34255).
Les modes de réalisation fournis ici de la présente invention divulguent l'utilisation deStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou de son produit de fermentation pour préparer une composition destinée à soulager la fatigue musculaire, à améliorer les performances sportives d'un individu ou à traiter la sarcopénie. Une quantité efficace duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou de son produit de fermentation peut être administrée à un individu pour augmenter la teneur en ATP des cellules musculaires de l'individu, pour augmenter la teneur en glycogène des cellules musculaires et des cellules hépatiques, pour diminuer la teneur en acide lactique du sang et la concentration d'azote uréique sanguin (BUN), et pour augmenter la capacité de réparation des cellules musculaires, améliorant ainsi de manière significative les performances sportives de l'individu en termes d'endurance, de force de préhension et d'effort physique soutenu, et soulageant ou réduisant la sarcopénie et ses symptômes.
L'individu peut appartenir à une population à haut risque de sarcopénie.
BRÈVE DESCRIPTION DES DIFFERENTES VUES DES DESSINS
montre les résultats d'analyse d'un NADH standard transformé en dérivé par l'acétophénone, le graphique de gauche étant un chromatogramme de chromatographie liquide à haute performance (HPLC) (382 nm), et le graphique de droite étant un spectre de l'absorbance mesurée avec un réseau de photodiodes (PDA – « photodiode-array »).
montre les résultats d'analyse de la composition du produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici, transformée en dérivé par l'acétophénone, le graphique de gauche étant un chromatogramme HPLC (382 nm), et le graphique de droite étant un spectre de l'absorbance mesurée avec un PDA.
est un spectre montrant le résultat de l'analyse par ionisation par électronébuliseur – spectrométrie de masse (ESI-MS) de la composition du produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici.
montre le contenu en ATP de myoblastes C2C12 traités différemment, telle que quantifiée à l'aide d'un kit de dosage colorimétrique de l'ATP.
montre les résultats de l'observation au sujet de la mort des myoblastes C2C12 traités différemment, "+" indiquant la coloration au cristal violet, et "-" indiquant l'absence de coloration au cristal violet.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION
La présente invention divulgue les utilisations d'une composition de produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 pour améliorer les performances sportives et soulager la sarcopénie. La composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophiles ST7divulguée ici comprendStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou un produit de fermentation obtenu par fermentation deStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7. L'administration continue d'une quantité efficace de la composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 à un individu à l'avance peut augmenter la teneur en ATP des cellules musculaires de l'individu, améliorer les capacités musculaires de l'individu, diminuer le degré de fatigue musculaire, et favoriser le métabolisme de l'acide lactique et la réparation des muscles endommagés, améliorant ainsi les performances sportives de l'individu et réduisant ou prévenant la sarcopénie et ses symptômes.
La "composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7" divulguée ici comprend une quantité efficace deStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou d'un produit de fermentation de celui-ci. L’expression "quantité efficace" fait référence à une dose qui permet auStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou à son produit de fermentation d'être actif dans un organisme comme on peut l'entendre dans le domaine auquel la présente invention appartient, tel qu’à 1%-100%. LeStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 peut consister en bactéries viables ou en bactéries inactivées. La composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 peut être préparée selon les besoins en tant qu'aliment, supplément nutritionnel, produit pharmaceutique ou adjuvant ; elle peut être ajoutée à un support de médicament, un excipient, un agent aromatisant, etc. qui sont sans danger pour le corps humain ; et elle peut être préparée sous la forme posologique de comprimés, de poudre, de solution, de suspension ou autres formes posologiques appropriées.
Le "produit de fermentation" divulgué ici fait référence à un produit obtenu par fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et par culture ultérieure. L'étape de collecte du produit de fermentation peut être effectuée par centrifugation, filtration, condensation directe, séchage ou autres méthodes, et la constitution du produit de fermentation peut varier avec la méthode de l'étape de collecte. Plus spécifiquement, le produit de fermentation comprend au moins des bactéries viables duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des bactéries inactivées duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des métabolites duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, ou du NADH. Par exemple, si le procédé de collecte est réalisé de telle sorte que le produit de fermentation est directement séché par chauffage, sans être filtré à l’avance, le produit de fermentation comprendra au moins des bactéries inactivées duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des métabolites duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, et du NADH.
Le "Streptococcus salivariussubsp.thermophilusST7" divulgué ici est déposé à l'Institut de recherche et de développement de l'industrie alimentaire, Hsinchu, Taiwan (la date de dépôt étant le 25 avril 2022, et le numéro de dépôt étant BCRC 911126) et dans la Collection allemande de cultures de cellules de micro-organismes (DSMZ) (la date de dépôt étant le 28 avril 2022, et le numéro de dépôt étant DSM 34255). LeStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 peut être cultivé dans un milieu de culture de croissance courant, tel qu'un milieu de culture contenant 1 % à 2 % de glucose, 1 % à 2 % de peptone, et 0,01 % à 0,08 % de sulfate de magnésium, entre autres ingrédients. En outre, leStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 divulgué ici peut produire du NADH, de sorte que le produit obtenu par fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 en tant que starter et par culture ultérieure comprend du NADH.
L’expression "force de préhension" est utilisée ici en relation avec un test sur les animaux et, lorsqu'elle est appliquée au corps humain, elle désigne la force de serrage. La force de préhension est un indice majeur pour le diagnostic de la sarcopénie. Si une substance peut augmenter la force de préhension ou force de serrage d'un individu, alors la substance est utile pour réduire la sarcopénie.
Pour mettre en lumière les caractéristiques techniques et les effets de la présente invention, plusieurs expériences sont détaillées ci-après avec référence aux dessins annexés.
Toutes les cellules (lignées cellulaires) utilisées dans les expériences sont facilement disponibles pour une personne du métier et il n'est donc pas nécessaire de les déposer.
Les données numériques des expériences sont exprimées en tant que Moyenne±écart-type. Des analyses de variance à une voie (ANOVA à une voie) ont été effectuées avec un progiciel SAS pour l'analyse statistique assistée par ordinateur, et le test de Duncan a été utilisé pour déterminer s'il y avait une quelconque différence entre les différents traitements.
Expérience 1 : Préparation d'une composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7
LeStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 divulgué ici a été cultivé dans un milieu de culture contenant 1 % à 2 % de glucose, 1 % à 2 % de peptone et 0,01 % à 0,08 % de sulfate de magnésium, entre autres ingrédients. Une fois qu'il a atteint le stade de croissance logarithmique, leStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 a été inoculé dans un milieu de culture de fermentation principale, puis on l'a laissé croître et fermenter dans des conditions de fermentation prédéterminées afin de produire un produit de fermentation. Le milieu de culture de fermentation principale contenait 5 % à 15 % de glucose, 2 % à 6 % de peptone et 0,01 % à 0,08 % de sulfate de magnésium, entre autres ingrédients. Les conditions de fermentation prédéterminées comprenaient une valeur de pH de fermentation de 4,0-6,0, une température de fermentation de 35-40°C, et une durée de fermentation de 10-24 heures.
Le produit de fermentation est passé par des procédés tels que la condensation et le séchage, et une composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 a été obtenue comme résultat (le nombre de bactéries étant de 4x 1010cellules/g). Le processus de séchage peut impliquer un séchage par pulvérisation, un séchage à basse température, une lyophilisation ou autres techniques de séchage bien connues de la personne du métier.
La composition du produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 (1g) et un NADH standard (5 mg) ont chacun été mélangés avec de l'eau pour obtenir une solution aqueuse de 10 mL. Chaque solution aqueuse (250 μL) a été additionnée d’eau désionisée (100 μL), d'hydroxyde de potassium (150 μL, 1,3 M), et d'acétophénone (100 μL, 20%), bien mélangée, puis mise dans un bain d'eau glacée, additionnée d’acide méthanoïque (400 μL), puis laissée au repos à température ambiante afin que les réactions aient lieu. Après cela, les solutions aqueuses ont été filtrées et soumises à une analyse par HPLC. Les conditions d'analyse étaient les suivantes : l'éluant était l'acétonitrile, la solution tamponnée phosphate (0,1 M, pH 6,5) était une solution mixte 10:90, la colonne était Supelco C18 (250×4,6, 5 μm), et la longueur d'onde utilisée dans l'analyse était de 382 nm. Les résultats de l'analyse HPLC sont présentés dans la et la . En outre, la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 a été soumise à une analyse par ESI-MS, dont le résultat est présenté dans la .
On peut savoir, d'après les résultats de la et de la , que la composition de produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici contenait le produit de fermentation, et que le produit de fermentation contenait du NADH. On sait également, d'après le résultat de la , que la formule moléculaire de cet NADH était C21 H29 N7 O14 P2- , le rapport masse-à-charge de [M]- étant de 665,2.
Expérience 2 : culture cellulaire
Des myoblastes C2C12 (numéro de dépôt : BCRC NO.60083) ont été inoculés à une densité de 3x 105cellules/puits dans le milieu d'Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) dans une boîte de Petri de 60 mm, où le DMEM contenait une solution de pénicilline-streptomycine à 10%. Les myoblastes C2C12 ont été cultivés à 37°C pendant 1 jour pour la différenciation cellulaire. Après cela, le milieu de culture cellulaire a été remplacé par un DMEM additionné de 2 % de sérum de cheval et a été renouvelé tous les jours. Après 5 jours de différenciation, les myoblastes C2C12 étaient prêts à être utilisés dans les expériences cellulaires suivantes.
Expérience 3 : expérience sur les cellules (1)
Une partie des myoblastes C2C12 cultivés dans l'expérience 2 a été prélevée et additionnée de différentes substances séparément. Les substances comprenaient le médicament Metformine (2.5 mM) ; une gélose de Man, Rogosa et Sharpe (MRS) ; un surnageant du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulgué ici ; un surnageant d'un produit de fermentation deLactobacillus paracaseiMC1-40 (numéro de dépôt : BCRC 911125 ou DSM 34254) ; et un surnageant d'un produit de fermentation deLactobacillus paracaseiLCW23 (numéro de dépôt : CGMCC 3247). La concentration finale de chaque groupe de cellules était de 1 %. Les cellules ont ensuite été cultivées pendant 24 heures supplémentaires. Le surnageant du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 était le filtrat obtenu par filtration d’une solution préparée par redissolution de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 dans l'expérience 1. Le surnageant du produit de fermentation deLactobacillus paracaseiMC1-40 et le surnageant du produit de fermentation deLactobacillus paracaseiLCW23 ont été préparés de la même manière que le surnageant du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7.
LeLactobacillus paracaseiMC1-40 est déposé dans la Collection allemande de micro-organismes et de cultures cellulaires (DSMZ) (la date de dépôt étant le 28 avril 2022 et le numéro de dépôt étant DSM 34254) et à l’Institut de recherche et de développement de l’industrie alimentaire de Taiwan (la date de dépôt étant le 25 avril 2022 et le numéro de dépôt étant BCRC 911125).
LeLactobacillus paracaseiLCW23 (nom complet : Lactobacillus West 2FBGS 3588) est déposé au Centre général chinois de collecte de cultures microbiologiques (CGMCC), la date de dépôt étant le 21 août 2009, et le numéro de dépôt étant CGMCC 3247.
Une fois la culture terminée, les myoblastes C2C12 de chaque groupe ont été collectés, lavés avec une solution tamponnée au phosphate, puis collectés avec de la trypsine-EDTA, et centrifugés. Les culots cellulaires obtenus pour chaque groupe ont été redissous dans un tampon tris(hydroxyméthyl)aminométhane (tampon tris) pour briser les culots, avant que le surnageant ne soit collecté et analysé avec un kit de dosage colorimétrique de l'ATP (Elabscience, n° de catalogue E-BC-K157-S) afin de quantifier la teneur en ATP des cellules à une longueur d'onde d'absorption de 636 nm. Les résultats de l'analyse sont présentés dans la , dans laquelle ST7, MC1-40 et LCW23 désignent les surnageants collectés à partir des produits de fermentation de leurs souches respectives.
D'après les résultats de la , la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici était effectivement capable d'augmenter la teneur en ATP des myoblastes C2C12. Il est donc raisonnable de déduire que les myoblastes C2C12 divulgués ici peuvent augmenter la force musculaire et ainsi soulage ou réduire la sarcopénie et ses symptômes.
Expérience 4 : expérience sur les cellules (2)
Une partie des myoblastes C2C12 cultivés dans l'expérience 2 a été prélevée et additionnée séparément d’un DMEM (groupe témoin), de dexaméthasone 100 μM, et de dexaméthasone 100 μM et d’un surnageant du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulgué ici. La concentration finale de chaque groupe de cellules était de 1 %. Les cellules ont ensuite été cultivées pendant 48 heures supplémentaires. Après cela, les cellules ont été colorées par cristal violet pour faciliter l'observation de la mort des cellules dans chaque groupe cellulaire. Les résultats de l'observation sont présentés sur la .
La dexaméthasone est un réactif qui peut induire une atrophie des myotubes. Par conséquent, comme le montre la , les myoblastes C2C12 cultivés dans le milieu additionné uniquement de dexaméthasone ont montré une atrophie et une mort plus notables que ceux du groupe témoin. En revanche, les myoblastes C2C12 cultivés dans le milieu additionné de dexaméthasone et du surnageant du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulgué ici ont montré une amélioration significative de la mort cellulaire.
Les résultats de la montrent que la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici était efficace pour améliorer l'atrophie des myotubes et la mort des myoblastes C2C12. On peut en déduire que la composition du produit de fermentation de Streptococcus thermophiles ST7 divulguée ici peut retarder la perte musculaire ou l'incapacité musculaire et est donc efficace pour traiter ou prévenir la sarcopénie et améliorer les performances sportives d'un individu.
Expérience 5 : test sur les animaux
Vingt-quatre souris mâles âgées de six semaines de l'Institut de recherche sur le cancer (ICR) ont été nourries pendant deux semaines, puis divisées au hasard en trois groupes, chacun comprenant huit souris. Pendant les quatre semaines suivantes, la composition de produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici a été administrée (ou non administrée) aux souris de chaque groupe comme suit, les souris étant autorisées à manger de la nourriture (Chow 5001) et à boire de l'eau librement, élevées à une température de 24±2°C et à une humidité de 65±5%, et maintenues sous un cycle de 12 heures de lumière et 12 heures d'obscurité :
Groupe 1 : Ce groupe de souris n'a pas reçu la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici.
Groupe 2 : Ce groupe de souris a reçu la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici à une faible dose de 21 mg/kg/jour.
Groupe 3 : Ce groupe de souris a reçu la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici à une dose élevée de 205 mg/kg/jour.
Le poids corporel des souris de chaque groupe a été mesuré pendant le test, et les résultats des mesures sont présentés dans le tableau 1.
Tableau 1 : Poids corporels des souris de chaque groupe pendant l'essai
Poids corporel initial (g) Semaine 1 (g) Semaine 2 (g) Semaine 3 (g) Semaine 4 (g) Semaine 5 (g) Semaine 6 (g)
Groupe 1 29,78±0,35 31,48±0,41 32,99±0,49 34,54±0,49 35,99±0,51 37,14±0,59 38,48±0,37
Groupe 2 29,74±0,71 31,64±0,88 33,11±1,10 34,37±1,14 35,59±1,04 36,92±1,09 38,05±1,10
Groupe 3 29,78±0,77 31,08±0,87 32,28±0,77 33,79±0,50 35,06±0,57 36,45±0,58 37,75±0,58
Les résultats du tableau 1 montrent qu'il n'y avait pas de différence de poids corporel entre les groupes avant le test, et que les poids corporels des animaux de chaque groupe ont augmenté régulièrement après le début du test, ce qui indique que la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici n'avait pas d'effet secondaire sur les animaux ni d'effet négatif sur leur croissance.
Expérience 6 : test biochimique du sang
Une fois le test de l'expérience 5 terminé, les souris ont été sacrifiées, et leur sang a été collecté à partir des cœurs et centrifugé à 4°C et 15000x g pendant 15 minutes. Après cela, le sérum a été collecté pour une analyse des indices de dommages au foie AST (aspartate aminotransférase) et ALT (alanine aminotransférase) par un analyseur automatique de sang (Hitachi 7060, Hitachi, Tokyo, Japon). Les résultats de l'analyse sont présentés dans le tableau 2.
Tableau 2 : Résultats des analyses biochimiques du sang des souris de chaque groupe
Index AST (U/L) ALT (U/L)
Groupe 1 74,75±3,01 41,75±3,20
Groupe 2 75,00±5,71 41,13±5,82
Groupe 3 74,88±23,85 41,25±4,59
Les résultats du tableau 2 montrent qu'il n'y avait pas de différence significative dans les valeurs des indices de lésions hépatiques entre les groupes de souris, ce qui indique que la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici n'avait pas affecté les fonctions hépatiques des animaux.
Expérience 7 : test de force de préhension des membres antérieurs
Le 29e jour de l'essai de l'expérience 5 (th) (c'est-à-dire après que la composition du produit de fermentationStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici ait été administrée pendant quatre semaines), un test de force de préhension des membres antérieurs a été effectué sur les souris de chaque groupe, et la force de préhension relative a été calculée. Les résultats du test sont présentés dans le tableau 3.
Tableau 3 : Résultats des tests de force de préhension des membres antérieurs des souris de chaque groupe.
Force de préhension (g) Force de préhension relative (%)
Groupe 1 112,00±4,84 305,20±18,63
Groupe 2 126,00±7,54 339,77±25,54
Groupe 3 131,38±11,93 356,88±39,23
Il ressort des résultats du tableau 3 que la force absolue de préhension des membres antérieurs des souris des groupes 2 et 3 était respectivement 1,13 fois et 1,17 fois aussi grande que celle des souris du groupe 1, et que la force relative de préhension des membres antérieurs des souris des groupes 2 et 3 était respectivement 1,13 fois et 1,17 fois aussi grande que celle des souris du groupe 1.
Selon les résultats du tableau 3, l'administration à un individu d'une quantité efficace de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici a effectivement permis d'augmenter la force de préhension de l'individu, et l'augmentation de la force de préhension n'a pas été affectée par le poids corporel de l'individu. On peut donc en déduire que la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici est efficace pour réduire ou soulager la sarcopénie et les symptômes associés et pour améliorer les performances sportives d'un individu.
Expérience 8 : test d'endurance
Une semaine avant le test de natation, chaque groupe de souris a subi un processus d'adaptation à la natation (la température de l'eau étant de 27±1°C). Le 31èmejour du test, les souris de chaque groupe ont été amenées à nager sous une charge (5 % de leurs poids corporels respectifs) jusqu'à épuisement. Plus spécifiquement, les souris ont été forcées à nager en étant placées dans une cuve à eau transparente remplie d'eau (le diamètre de la cuve étant de 15 cm, la profondeur de l'eau, de 20 cm, et la température de l'eau, de 27±1°C). Le temps de nage jusqu'à épuisement des souris de chaque groupe a été mesuré et est présenté dans le tableau 4. Les souris avaient jeûné pendant 12 heures avant de nager, et la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 administrée le jour de la natation a été administrée 30 minutes avant le test de natation.
Tableau 4 : Temps de nage jusqu'à épuisement des souris de chaque groupe
Temps de natation jusqu'à épuisement (minute)
Groupe 1 3,50±0,25
Groupe 2 8,92±0,53
Groupe 3 9,43±0,32
Il ressort des résultats du tableau 4 que le temps de nage jusqu'à épuisement des souris des groupes 2 et 3 était respectivement 2,55 fois et 2,69 fois aussi long que celui des souris du groupe 1. Les résultats montrent que l'administration de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici a été capable d'augmenter la teneur en ATP des cellules musculaires et ainsi d'améliorer les capacités musculaires et par conséquent les performances sportives des animaux.
Expérience 9 : analyse de la concentration d'acide lactique dans le sang
Au cours de l'expérience 8, les concentrations d'acide lactique dans le sang des souris de chaque groupe ont été mesurées à trois moments : avant la natation, après un repos de 10 minutes après la natation, et après un repos de 20 minutes après la natation. Les ratios de concentration d'acide lactique dans le sang après l'exercice et avant l'exercice ont également été calculés. Les mesures et les résultats des calculs sont présentés dans le tableau 5.
Tableau 5 : Concentrations d'acide lactique dans le sang des souris de chaque groupe avant et après l'exercice.
Moment Avant la baignade (A) Après 10 minutes de repos après la natation (B) Après 20 minutes de repos après la natation (C) Rendement = B/A Taux d'enlèvement = (B-C)/B
Groupe 1 3,53±0,34 8,41±0,39 7,75±0,29 2,40 ±0,26 0,08±0,06
Groupe 2 3,59±0,26 6,31±0,42 5,45±0,42 1,76 ± 0,17 0,13±0,05
Groupe 3 3,62±0,41 5,70±0,59 4,85±0,32 1,60 ± 0,31 0,14±0,13
Les résultats du tableau 5 montrent qu'avant la baignade, il n'y avait pas de différence significative dans la concentration d'acide lactique dans le sang entre les groupes de souris ; que 10 minutes après la baignade, les concentrations d'acide lactique dans le sang des souris des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 8,41±0,39, 6,31±0,42, et 5,70±0,59 mmol/L ; et que 20 minutes après la baignade, les concentrations d'acide lactique dans le sang des souris des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 7,75±0,29, 5,45±0,42, et 4,85±0,32 mmol/L. En outre, le taux d'élimination de l'acide lactique dans le sang de chaque groupe a été calculé par division de la différence entre la concentration d'acide lactique dans le sang correspondante au moment 10 minutes après la natation et la concentration d'acide lactique dans le sang correspondante 20 minutes après la natation par la concentration d'acide lactique dans le sang correspondante au moment 10 minutes après la natation. Les taux d'élimination de l'acide lactique des souris des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 0,08±0,06, 0,13±0,05 et 0,14±0,13.
On peut déduire des résultats du tableau 5 que l'administration d'une quantité efficace de la composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici à un individu avant l'exercice peut réduire efficacement l'acide lactique produit après l'exercice et améliorer la capacité de l'individu à éliminer ou à métaboliser l'acide lactique dans le corps, réduisant ainsi la sensation de fatigue, favorisant la restauration musculaire, améliorant les performances sportives de l'individu et aidant à prévenir ou à réduire la sarcopénie.
Expérience 10 : Analyse du taux d'azote uréique sanguin (BUN) et de la teneur en créatine kinase
Le 35e jourthdu test de l'expérience 5, et 30 minutes après l'administration de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici, les souris de chaque groupe ont été amenées à nager sans charge pendant 90 minutes (la température de l'eau étant de 30°C), et le sang a été collecté sur les souris après un repos de 60 minutes et soumis à une analyse de la teneur en BUN et de la teneur en créatine kinase (CK). Les résultats des analyses sont présentés dans le tableau 6.
Tableau 6 : Analyse de la teneur en BUN et de l'activité CK de chaque groupe de souris.
Indice BUN avant la natation (mg/dL) BUN après un repos de 60 minutes après la natation (mg/dL) CK après 60 minutes de repos après la natation
(mg/dL)
Groupe 1 22,15±0,59 42,59±1,89 1934,88±105,06
Groupe 2 22,76±0,72 36,33±4,25 1632,00±285,39
Groupe 3 22,35±2,27 35,74±3,16 1664,50±163,47
Les résultats du tableau 6 montrent que les concentrations de BUN après la natation des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 42,59±1,89, 36,33±4,25 et 35,74±3,16 mg/dL. Une analyse plus approfondie révèle que les concentrations de BUN des souris des groupes 2 et 3 étaient significativement inférieures à celles des souris du groupe 1 de respectivement 14,7 % et 16,1 %.
Quant à la modification de l'activité de la CK sanguine, les teneurs en CK des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 1934,88±105,06, 1632,00±285,39 et 1664,50±163,47 U/L, et une analyse plus approfondie révèle que l'activité CK sanguine des souris des groupes 2 et 3 était significativement inférieure à celle des souris du groupe 1 de respectivement 15,7 % et 14,0 %.
Les résultats précédents prouvent que l'administration d'une quantité efficace de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici à un individu est utile pour réduire la concentration de BUN et l'activité CK après un exercice. En d'autres termes, la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici peut aider à réparer les dommages musculaires causés par l'exercice ou le travail physique et est donc efficace pour améliorer les performances sportives d'un individu et sa volonté de faire de l'exercice et donc pour prévenir ou soulager la sarcopénie.
Expérience 11 : Analyse du contenu en glycogène du foie et des muscles
Après un test de natation sans charge de 90 minutes (tel que décrit ci-dessus en relation avec l'expérience 10), les souris de chaque groupe ont été laissées au repos pendant deux jours (c'est-à-dire jusqu'au 37thjour du test de l'expérience 5) et ont ensuite été nourries avec la composition de produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici. Les souris ont été sacrifiées 30 minutes après avoir été nourries, et les foies et les muscles des pattes des souris ont été prélevés et soumis à une analyse du contenu en glycogène. Un glycogène standard disponible dans le commerce (Glycogen Sigma) a été utilisé pour tracer la courbe d'étalonnage, et les changements dans les quantités de glycogène stockées dans le foie et les tissus musculaires des animaux de chaque groupe ont été calculés. Les résultats de l'analyse sont présentés dans le TABLEAU 7.
Tableau 7 : Teneur en glycogène du foie et des muscles des souris de chaque groupe.
Index Teneur en glycogène du foie (mg/g) Teneur en glycogène des muscles (mg/g)
Groupe 1 12,21±0,96 0,97±0,24
Groupe 2 16,88±2,21 1,07±0,37
Groupe 3 20,64±2,29 1,36±0,53
D'après les résultats du tableau 7, la teneur en glycogène des foies des souris des groupes 1, 2 et 3 était de respectivement 12,21±0,96, 16,88±2,21 et 20,64±2,29 mg/g de foie. Une analyse plus approfondie des données révèle que le contenu en glycogène des foies des souris des groupes 2 et 3 était significativement plus élevé que celui des souris du groupe 1, ou respectivement 1,38 fois et 1,69 fois plus élevé que celui des souris du groupe 1, pour être exact. En outre, les teneurs en glycogène des muscles des souris des groupes 1, 2 et 3 étaient de respectivement 0,97±0,24, 1,07±0,37 et 1,36±0,53 mg/g de muscle, et une analyse plus approfondie des données révèle que la teneur en glycogène des muscles des souris du groupe 3 était significativement plus élevée, ou 1,40 fois aussi élevée, que celle des souris du groupe 1.
Les résultats du tableau 7 prouvent que l'administration à un individu d'une quantité efficace de la composition du produit de fermentation deStreptococcus thermophilesST7 divulguée ici peut contribuer à augmenter la teneur en glycogène du foie et des muscles de l'individu et ainsi augmenter ou améliorer les capacités musculaires et la masse musculaire, ce qui à son tour contribue à améliorer les performances sportives de l'individu et à soulager la sarcopénie et ses symptômes.

Claims (3)

1. Utilisation deStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 et/ou d'un produit de fermentation de celui-ci dans la préparation d'une composition pour traiter la sarcopénie, dans laquelle le produit de fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 est obtenu par fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, et leStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 est déposé dans la Collection allemande de micro-organismes et de cultures de cellules (DSMZ), la date de dépôt étant le 28 avril 2022, et le numéro de dépôt étant DSM 34255.
2. Utilisation de la revendication 1, dans laquelle le produit de fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 comprend des bactéries viables duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des bactéries inactivées duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, des métabolites duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7, ou du NADH (nicotinamide adénine dinucléotide sous forme réduite).
3. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle le produit de fermentation duStreptococcus salivariussubsp.thermophilusST7 est utilisé pour améliorer la force de préhension d'un individu.
FR2210602A 2022-07-29 2022-10-14 UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE Active FR3138304B3 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TW111128691 2022-07-29
TW111128691A TWI838803B (zh) 2022-07-29 2022-07-29 嗜熱鏈球菌st7發酵物組合物用於提升運動表現及減緩肌少症之用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR3138304A3 true FR3138304A3 (fr) 2024-02-02
FR3138304B3 FR3138304B3 (fr) 2024-08-09

Family

ID=88510036

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR2210602A Active FR3138304B3 (fr) 2022-07-29 2022-10-14 UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20240033307A1 (fr)
JP (1) JP7371191B1 (fr)
CN (1) CN117503804A (fr)
FR (1) FR3138304B3 (fr)
TW (1) TWI838803B (fr)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110027348A1 (en) * 2007-08-27 2011-02-03 Janos Feher Composition and method inhibiting inflammation
US20150335688A1 (en) * 2014-05-21 2015-11-26 Medlab Ip Pty Ltd Probiotic combinations and uses thereof
ITUB20155752A1 (it) * 2015-11-19 2017-05-19 Probiotical Spa Composizione di batteri per uso per attenuare le diminuzioni di prestazione dopo un esercizio fisico che danneggia i muscoli.
WO2020008250A1 (fr) 2018-07-05 2020-01-09 Synbio Tech Inc. Culture de yaourt contenant un mélange de souches de bactéries d'acide lactique, et produit fermenté préparé à l'aide d'une telle culture de yaourt et utilisation de ce produit fermenté
FR3084255B1 (fr) * 2018-07-26 2020-07-03 Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) Souche de streptococcus thermophilus cnrz160 pour le traitement et la prevention de l'inflammation intestinale et des desordres associes, chez un individu

Also Published As

Publication number Publication date
US20240033307A1 (en) 2024-02-01
JP2024018827A (ja) 2024-02-08
FR3138304B3 (fr) 2024-08-09
TWI838803B (zh) 2024-04-11
JP7371191B1 (ja) 2023-10-30
TW202404619A (zh) 2024-02-01
CN117503804A (zh) 2024-02-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0838217B1 (fr) Composition cosmétique contenant un antagoniste des récepteurs du neuropeptide Y
KR20180106987A (ko) 락토바실러스 플란타룸 tci378 및 지방 감소 및 위장 기능 향상에 있어서 그의 용도
TWI757586B (zh) 植物發酵物及其製備方法與用於肝臟保健的用途
CN119157259A (zh) 发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001在制备改善由高脂高糖饮食引起的代谢综合征制品中的应用
FR3138304A3 (fr) UTILISATIONS DE LA COMPOSITION DU PRODUIT DE FERMENTATION DE Streptococcus thermophiles ST7 POUR AMÉLIORER LES PERFORMANCES SPORTIVES ET SOULAGER LA SARCOPÉNIE
TWI904719B (zh) 一種冬蟲夏草發酵組合物
CN115192620A (zh) 麒麟果发酵物用于制备改善新陈代谢状态组合物的用途
JP2012017337A (ja) アルコール代謝促進剤組成物
AU2021201581B2 (en) Use of antrodia cinnamomea for increasing alcohol metabolism or/and hangover
WO2023156745A1 (fr) Composition comprenant un extrait de myrte et un extrait de tripterygium wilfordii pour lutter contre l'acné des zones non lésionnelles de la peau acnéique
CN119020170B (zh) 一种紫色红曲菌及其制备的富硒红曲菌的应用
EP3979834B1 (fr) Composition comprenant une levure pour la prevention de la cystite simple et/ou recidivante
EP3065749B1 (fr) Composition pharmaceutique comprenant saccharomyces boulardii pour la reduction de la masse adipeuse
Pavcek et al. Factors affecting the vitamin B1 content of yeast
TW202108766A (zh) 具有抑制體脂肪形成之組合物
JPWO2002000238A1 (ja) アルコール代謝促進剤組成物
KR20050079790A (ko) 노루궁뎅이 버섯의 추출물을 포함하는 알코올 분해 촉진용조성물
KR20200016610A (ko) 지방간 개선제 조성물
CN118530882A (zh) 一株转化茶多酚提升抗疲劳功效的格氏乳杆菌及应用
KR20240145856A (ko) 상황버섯 GKPl 추출물을 포함하는 운동능력 향상 및 운동피로 감소용 조성물
TW202606745A (zh) 一種冬蟲夏草發酵組合物
FR3135394A3 (fr) Curcuma fermenté avec lacticaseibacillus paracasei pour la régulation des maladies métaboliques
CN118516258A (zh) 一株能转化花青素且提升缓解疲劳功效的德氏乳杆菌保加利亚亚种及应用
CN119700624A (zh) 具有调节细胞节律的三刺果发酵液制备方法及应用
CN119607027A (zh) 后生元组合物、后生元组合物微囊及制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 2

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 3

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 4