FR3142885A1 - Emulsion cosmetique/dermatologique - Google Patents

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Gérard Redziniak
Fanny REDZINIAK
Valérie SABATIER
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Benu Blanc
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Benu Blanc
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Abstract

L’invention concerne une émulsion huile dans l’eau comprenant une phase lipophile et une phase hydrophile. L’émulsion est dépourvue d’émulsionnant. La phase hydrophile comprend entre 1 et 10 % massique de particules de protéines insolubles. La phase lipophile représente entre 10 et 50 %, du volume total de l’émulsion. Figure pour l’abrégé : 1B

Description

EMULSION COSMETIQUE/DERMATOLOGIQUE
La présente invention se rapporte au domaine général des produits à usages topiques.
L’invention concerne en particulier une émulsion, une émulsion pour une utilisation comme médicament, une émulsion pour une utilisation dans le traitement ou la prévention de désordres dermatologiques ou encore une utilisation cosmétique d’une telle composition pour l’hydratation de la peau par exemple.
 ÉTAT DE LA TECHNIQUE ANTÉRIEURE
Les émulsions sont des mélanges, macroscopiquement homogènes mais microscopiquement hétérogènes comprenant une phase aqueuse ou hydrophile et une phase huileuse ou lipophile. Les deux liquides étant non miscibles, une dispersion d’un liquide en fines gouttelettes dans l’autre liquide est obtenue. Le liquide sous forme de gouttelettes étant la phase dispersée, aussi nommée phase discontinue ou phase interne, l’autre liquide étant la phase dispersante hydrophile, aussi nommée phase continue ou phase externe.
Des émulsions stables huile dans l’eau sont couramment utilisées dans les compositions à usage topique de produits cosmétiques et/ou pharmaceutiques et/ou dermatologiques.
Ces émulsions sont généralement des émulsions à haut pourcentage en phase continue hydrophile, c'est-à-dire que la phase aqueuse peut représenter plus de 80% en volume total de l’émulsion.
Cependant, pour être stables, ces émulsions nécessitent l’ajout d’émulsifiants de synthèse (aussi appelés émulsionnants de synthèse), comme par exemple le cétyl diméthicone polyol, l’alcool stéarylique ou encore le cétyl glucoside. Or, la présence de produits de synthèse dans des émulsions destinées à une application topique peut provoquer des réactions irritantes voir allergiques lors de leur mise en contact avec la peau en particulier lors de leur mise en contact avec des peaux sensibles.
Un but de la présente invention est de proposer une composition remédiant au moins en partie aux inconvénients de l’art antérieur, et en particulier, une composition stable qui répond aux désirs des utilisateurs en étant dépourvue d’émulsifiant, en particulier d’émulsifiants de synthèses, et pouvant en particulier être utilisée dans le traitement de désordres cutanés ou en tant que produit cosmétique à usage dermatologique.
Pour cela, la présente invention propose une émulsion huile dans l’eau comprenant une phase lipophile et une phase hydrophile. L’émulsion selon l’invention est dépourvue d’émulsionnant (aussi appelé émulsifiant). La phase hydrophile comprend entre 1 et 10 % massique de particules de protéines insolubles, par exemple 10 % massique de particules de protéines insolubles en tant qu’agents actifs essentiels. La phase lipophile représente entre 10 et 50 % du volume total de l’émulsion, par exemple 30% du volume total de l’émulsion.
L’invention se distingue fondamentalement de l’art antérieur par la présence de particules de protéines insolubles (en particulier des particules de protéine de soie). Ainsi, l’émulsion présente un haut pourcentage en phase interne lipophile. L’émulsion est stable même si elle est dépourvue d’émulsionnant.
Avantageusement, les protéines insolubles sont des particules de fibroïne, les particules de fibroïne ayant un diamètre compris entre 0,1 à 10 micromètres, par exemple 5 micromètres.
Avantageusement, la phase hydrophile comprend en outre entre 1 et 5% massique de particules de protéines solubles.
Avantageusement, les protéines solubles sont issues des hydrolysats de protéines végétales (par exemple des hydrolysats de protéines de soja et/ou des hydrolysats de protéines de riz) et/ou les protéines solubles sont issues des hydrolysats de protéines de soie (comme la séricine).
Avantageusement, la phase hydrophile comprend des peptides d’origine biosynthétique ou microbiologique.
Avantageusement, la phase hydrophile comprend, en outre, un ou plusieurs des éléments suivants : de la bétaïne, de la glycine, de la nisine et du NaCl.
L’invention concerne également une émulsion telle que décrite précédemment pour son utilisation comme médicament, de préférence un médicament à usage topique.
L’invention concerne également une émulsion telle que décrite précédemment pour son utilisation dans le traitement ou la prévention de désordres cutanés (inflammation de la peau par exemple).
L’invention concerne également une utilisation non thérapeutique (cosmétique) d’une émulsion telle que décrite précédemment pour l’hydratation de la peau ou réduire/enlever les rides de la peau.
L’invention concerne également une utilisation d’une émulsion telle que décrite précédemment en tant que véhicule pour la libération d’un ou plusieurs principes actifs. En particulier, il s’agit d’une utilisation en tant que véhicules pour la libération percutanée d’un ou plusieurs principes actifs.
D’autres caractéristiques et avantages de l’invention ressortiront du complément de description qui suit.
Il va de soi que ce complément de description n’est donné qu’à titre d’illustration de l’objet de l’invention et ne doit en aucun cas être interprété comme une limitation de cet objet.
La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description d’exemples de réalisation donnés à titre purement indicatif et nullement limitatif en faisant référence aux figures annexées pour lesquelles :
La est un cliché photographique, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique sans application d’une quelconque crème, exemple donné à titre comparatif,
La représente la photographie, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel une émulsion selon un mode de réalisation particulier de l’invention a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de la filaggrine, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel aucune émulsion n’a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de la filaggrine, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel une émulsion selon un mode de réalisation particulier de l’invention a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de la transglutaminase, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel aucune émulsion n’a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de la transglutaminase, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel une émulsion selon un mode de réalisation particulier de l’invention a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de LEKTI, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel aucune émulsion n’a été appliquée,
La représente la photographie d’un immunomarquage de LEKTI, d’un explant de peau 3 heures après l’élimination d’une partie des lipides par un traitement chimique et sur lequel une émulsion selon un mode de réalisation particulier de l’invention a été appliquée.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS
Bien que cela ne soit aucunement limitatif, l’invention trouve particulièrement des applications dans le domaine non thérapeutique (cosmétique) et/ou dans le domaine thérapeutique.
L’émulsion peut, en particulier, être utilisée dans le traitement de désordres cutanés cosmétiques et/ou dermatologiques. Notamment, l’émulsion présente des propriétés hydratantes, cicatrisantes et/ou anti-inflammatoires.
En particulier, cette composition à usage cosmétique peut être utilisée pour prévenir les symptômes du vieillissement cutané et stimuler la cicatrisation cutanée.
En particulier, le traitement cosmétique/thérapeutique peut concerner les cicatrices d’acné, les vergetures.
Nous allons dans un premier temps donner quelques définitions.
On entend par « la phase lipophile représente environ 30% du volume total de l’émulsion » que la phase lipophile représente entre 27 à 33 % du volume total de l’émulsion, de préférence 30%.
On entend par « phase aqueuse isotonique » une phase aqueuse ou hydrophile contenant une quantité de solutés dissous égale à celle du cytoplasme des cellules épithéliales soit 0.15 molaire.
On entend par « protéines insolubles » toutes protéines hydrophobes telles que des particules de fibroïne (par exemple calibrée entre 0,5 et 10μm, et plus particulièrement 5microns), des particules de laine ou des particules de protéines de kératine.
On entend par « protéines solubles » toutes protéines hydrophiles telles que les protéines issues d’hydrolysats enzymatiques ou chimiques de protéines végétales tels que les hydrolysats de protéines végétales de riz ou de soja.
On entend par « peptide d’origine biosynthétique ou microbiologique », tout peptide synthétisé par des microorganismes ayant des propriétés antibactériennes, anti-inflammatoires et/ou cicatrisantes pouvant être notamment de la Nisine ou des bactériocines de Lactobacilles.
On entend par « acide aminés » tous les acides aminés et leurs dérivés ou un mélange de ceux-ci, sous une forme libre, notamment la glycine, la bétaïne issue d’extrait de betteraves.
On entend par « glycérides » tous glycérides tels que les monoglycérides diglycérides ou triglycérides ou un mélange de ceux-ci notamment les huiles végétales, les beurres par exemple l’huile d’amande douce ou le beurre de Karité.
On entend par « squalane », tous squalanes issu de l’hydrogénation du squalène notamment issu du squalène de plantes.
On entend par « ester d’acides gras » tous les esters issus d’huile végétale notamment d’huile de carthame, d’olive, et de tournesol.
On entend par « stérols » tous stérols notamment tous stérols issus des plantes tels que le béta-sitostérol issu d’écorce de pin.
On entend par « lipopeptides » tous lipopeptides tels que les lipomonopeptides, lipo-dipeptides, lipo-tripeptides ou un mélange de ceux-ci notamment.
On entend par « principes actifs » toutes molécules liposolubles ayant des propriétés cosmétiques, curatives ou préventives telles que la caféine, le rétinol (Vitamine A).
On entend par « diamètre », soit le diamètre d’une particule dans le cas d’une particule sphérique soit la plus grande dimension d’une particule, dans le cas d’une particule non sphérique.
De plus par « entre X et Y », on entend que les bornes X et Y sont incluses.
Nous allons maintenant décrire plus en détail l’émulsion selon l’invention.
L’émulsion est une émulsion stable dans le temps et ne comprend pas d’émulsifiant et en particulier elle ne comprend pas d’émulsifiant de synthèse.
L’émulsion est une émulsion du type huile dans l’eau. La phase interne est une phase lipophile et la phase continue est la phase hydrophile (ou phase aqueuse).
La phase lipophile de l’émulsion représente entre 10 et 50 % du volume total de l’émulsion, de préférence entre 20% et 40% du volume total de l’émulsion. Par exemple, la phase lipophile représente environ 30% du volume total de l’émulsion.
La phase hydrophile comprend, au moins entre 1 % et 10 % massique, de préférence entre 5 % et 10 % massique, par exemple 10 grammes d’une poudre de protéine insoluble en tant que principe actif (ou agent actif) pour 100 grammes de produit fini. De particules, la poudre est une poudre de protéine de fibroïne. La fibroïne est une des deux protéines du cocon de soie.
De préférence, les particules de la poudre de fibroïne ont un diamètre compris entre 0,1 et 10µm, de préférence compris entre 3 et 7µm, par exemple 5 micromètres.
Les particules sont de préférence sphériques ou sensiblement sphériques.
De préférence, la phase hydrophile de l’émulsion comprend, en outre, un ou plusieurs des éléments suivants : des protéines solubles, des peptides d’origine biosynthétique ou microbiologiques, des acides aminés, des sels minéraux.
La phase hydrophile comprend, avantageusement, entre 5% et 20% massique, par exemple 15% massique, d’un mélange de protéines de protéines insolubles, de protéines solubles, de peptides et acides aminés.
Les éléments du mélange peuvent être repartis selon les quantités suivantes (en pourcentage massique) :
− Des protéines insolubles de 1 à 10%
− Des protéines solubles de 1 à 5%
− Des peptides d’origine biosynthétique ou microbiologique de 0,001 à 5%
− Des acides aminés de 1 à 5%
− Des sels minéraux de 0,1 à 0,9 %.
De préférence, la phase interne lipophile de l’émulsion comprend un ou plusieurs des éléments suivants : des glycérides, du squalane, de l’octyldodecyl PCA, de l’ester d’aminopropanediol, des esters d’acides gras, des stérols, des lipopeptides.
Par exemple, la phase interne lipophile de l’émulsion comprend (en pourcentage massique) :
− Des glycérides de 0,1 à 5%
− Du squalane de 0,1 à 4%
− D’octyldodécyl PCA de 0,1 à 3%
− De l’ester d’aminopropanediol de 0,01 à 1%
− Des esters d’acides gras de 0,01 à 1%
− Des stérols de 0,01 à 0,1%
− Des Lipopeptides de 0,1 à 1%
Avantageusement, les émulsions sans émulsionnant selon l’invention peuvent être utilisées en tant que véhicules pour la libération percutanée d’un ou plusieurs principes actifs, notamment des principes actifs liposolubles.
Le procédé de fabrication des émulsions huile dans l’eau comprend une étape au cours de laquelle la phase lipophile est mélangée avec la phase hydrophile. De préférence, la phase lipophile est introduite dans la phase hydrophile. Le mélange est avantageusement réalisé sous agitation et à une température comprise entre 25° et 90°, par exemple à une température de 80°C.
Exemples illustratifs et non limitatifs :
L’exemple suivant est un exemple, donné à titre illustratif et non limitatif, d’une émulsion sans émulsionnant huile dans l’eau.
Dans un premier temps, la phase lipophile a été préparée. Afin d’obtenir 300g de phase lipophile, les réactifs suivants ont été mélangés à 80°C (en pourcentage massique) :
- Huile d’amande douce 37 %
- Beurre de Karité 5%
- Phytosqualane 35%
- Octyldodecyl PCA 16,10%
- Ester d’Aminopropanediol et d’acides gras de carthame 3,75%
- Beta-sitostérol 0,15%
- Lipo-tripeptide 3%
Après le mélange des réactifs sous agitation, la phase lipophile homogène a été laissée à 80°C avant l’introduction dans la phase hydrophile.
Dans un second temps, 700g de phase hydrophile isotonique ont été préparés. Dans cette phase la fraction en poids des protéines insolubles, solubles, peptides et acide aminés additionnés représentent 15% massique. Les réactifs suivants ont été mélangés à 80°C (en pourcentage massique) :
- Eau 83,71 %
- NaCl 0,29 %
- Bétaïne 1,17 %
- Glycine 1 %
- Hydrolysat de protéines de riz 3,82 %
- Nisine 0,01 %
- Poudre de fibroïne calibrée 5 microns 10 %
Dans cette phase agitée vigoureusement et, toujours sous agitation, a été versée lentement la phase lipophile, elle-même maintenue sous agitation.
L’émulsion, sans émulsionnant, ainsi formée est utilisée pour la réalisation de tests ex-vivo sur explants de peau humaine maintenue en survie pour mesurer ses propriétés d’hydratation, anti-inflammatoire et cicatrisantes, en vue de son utilisation pour le traitement de désordres cutanés cosmétiques ou dermatologiques.
a. Propriétés d’hydratation :
Les propriétés d’hydratation de crème selon la formulation ci-dessus a été évaluée par :
- une expertise histologique de la morphologie générale de la peau.
- Immunomarquage de la filaggrine
- Immunomarquage de la transglutaminase membranaire (TGM)
- Immunomarquage de LEKTI
Préparation des explants :
27 explants d’un diamètre d’environ 10 mm ont été préparés à partir d’une plastie abdominale d’une femme avec son consentement éclairé (référence P942-AB20. Hôpital de Lonjumeau). Les explants ont été mis en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Explants Medium -Sigma) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2.
Les explants ont été séparés en 3 groupes de 9 explants.
Délipidation :
Une délipidation a été effectuée pour permettre d’altérer la fonction barrière du stratum corneum sur les groupes 2, et 3. La délipidation a été réalisée grâce à un mélange de solvants organiques (éther/acétone 50/50) (1 ml-Fluka) qui a été appliqué sur les explants pendant 2 minutes. Le mélange a été ensuite aspiré et la peau essuyée à l’aide d’un coton.
Application de la crème :
Immédiatement après la délipidation, la crème a été appliquée sur les explants du groupe 3 à raison de 4 mg par explant et étalée à l’aide d’une spatule afin d’obtenir une couche uniforme. Aux jours J1, J2 et J3, la crème a été une nouvelle fois appliquée sur les explants du groupe 3 à raison de 2 mg par explant et étalée uniformément à l’aide d’une spatule. Le tableau suivant représente la répartition des explants et les traitements subis :
Groupe Nombre d’explants Délipidation Application de la crème
1 9
2 9 Oui
3 9 Oui Oui
Prélèvements :
Des prélèvements ont été effectués pour permettre la réalisation d’observations histologiques et d’immunomarquage en vue de déterminer les propriétés d’hydratation de la crème comprenant 90% de l’émulsion.
A J0+3heures, J1 et J4, 3 explants de chaque groupe ont été prélevés et coupés en 2.
Une moitié a été fixée par du formol tamponné et l’autre moitié a été congelée à –80°C.
Traitements histologiques :
Après 24 heures de fixation dans le formol tamponné, les prélèvements ont été déshydratés et imprégnés en paraffine à l’aide d’un automate de déshydratation Leica TP 1020 selon le mode opératoire MO-H-149.
Les prélèvements ont été mis en bloc selon le mode opératoire MO-H-153 à l’aide d’une station d’enrobage Leica EG.
Des coupes de 5 μm ont été réalisées selon le mode opératoire MO-H-173 à l’aide d’un microtome type Minot, Leica RM 2125 et montées sur des lames de verre histologiques Superfrost®.
Les prélèvements congelés ont été coupés à 7 μm dans un cryostat Leica CM 3050.
Les coupes ont été collées sur des lames de verre histologique silanisées Superfrost® Plus, pour réaliser les immunomarquages.
Les observations microscopiques ont été réalisées en microscopie optique, à l’aide d’un microscope Leica type Orthoplan ou DMLB. Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra Olympus DP72 et le logiciel Cell^D.
Examen de la morphologie générale :
La morphologie générale a été examinée sur des coupes en paraffine colorées au trichrome de Masson variante de Goldner, selon le mode opératoire MO-H-157.
La morphologie générale a été évaluée par un examen microscopique, essentiellement sur la structure du stratum corneum.
Immunomarquages :
Tous les immunomarquages ont été réalisés à l’aide d’un automate d’immunomarquages (commercialisé par Dako, AutostainerPlus) en suivant les instructions du fabricant et le marquage a été évalué par un examen microscopique à fluorescence.
Immunomarquage de la filaggrine :
La protéolyse de la filaggrine produit des acides aminés, importants composants du NMF (commercialisé par Natural Moisturizing Factor) formant le cément intercornéocytaire responsable de la fonction barrière du stratum corneum.
La filaggrine a été marquée sur coupes paraffine formolées, avec un anticorps monoclonal anti-filaggrine, clone AKH1, (commercialisé par Santa Cruz sous la référence sc-66192), fait sur souris au 1/3200ème pendant 1h à 20°C avec un système amplificateur biotine/streptavidine (commercialisé par Sigma) et révélée en FITC (commercialisé par Sigma)
Les noyaux ont été contre colorés à l’iodure de propidium (commercialisé par Sigma).
Immunomarquage de la transglutaminase membranaire (TGM) :
La TGM est une enzyme impliquée dans la formation des enveloppes cornées du stratum corneum.
La TGM a été marquée sur coupes congelées à l’aide d’un anti-corps monoclonal anti-TGM, clone B.C1, (commercialisé par Harbor BioProducts, sous la référence 621), fait sur souris, dilué au 1/100ème pendant 1 nuit à 20°C avec un système amplificateur Vectastain RTU Universal VECTOR avidine/biotine (commercialisé par Sigma) et révélée en FITC (sigma). Les noyaux ont été contre colorés à l’iodure de propidium (commercialisé par Sigma).
Immunomarquage de LEKTI :
LEKTI est un inhibiteur de sérines protéases qui régule la desquamation du stratum corneum.
LEKTI a été marqué sur coupes paraffine formol à l’aide d’un anti-corps monoclonal anti-LEKTI, clone 1C11G6, (commercialisé par Santa Cruz, sous la référence 32330), fait sur souris, dilué au 1/100ème pendant 24h à TA avec un système amplificateur Vectastain RTU Universal VECTOR avidine/biotine (commercialisé par Sigma) et révélé en FITC(sigma) Les noyaux ont été contre colorés à l’iodure de propidium (commercialisé par Sigma).
Résultats :
Des comparaisons entre des photographies des groupes témoins (Figures 1A, 2A, 3A et 4A) et du groupe traité (Figures 1B, 2B, 3B et 4B) ont été réalisées.
La comparaison entre les figures 1A et 1B montre notamment un stratum corneum mieux feuilleté pour l’explant de la .
Par ailleurs, il y a une bonne activité de restructuration de la barrière cutanée pour l’explant ayant bénéficié de l’application d’émulsion, sans émulsionnant, caractérisée par :
- Une inhibition totale de la baisse d’expression de filaggrine induite par la délipidation comme le montrent la .
- Une inhibition totale de la baisse d’expression de la TGM induite par la délipidation comme le montrent la .
- Une inhibition partielle de la baisse d’expression de LEKTI induite par la délipidation comme le montrent la .
Les observations des prélèvements à 4 jours confirment les résultats décrits ci-dessus.
Conclusion sur les propriétés d’hydratation :
A la lecture de ces résultats, l’émulsion sans émulsionnant, selon l’invention présente de bonnes propriétés d’hydratation et peut être utilisée pour le traitement de désordres cutanés cosmétiques ou dermatologiques.
b. Propriétés anti-inflammatoires :
Lorsque du LPS (lipopolysaccharide) est appliqué sur de peau humaine une réaction inflammatoire est déclenchée.
Dès lors les cellules secrètent des cytokines notamment des interleukines IL1α et IL8 et le facture de nécrose tumorale TNFα dans le milieu extracellulaire.
Ces cytokines peuvent alors quantifiées afin d’évaluer les propriétés antiinflammatoires de produits.
Préparation des explants :
18 explants d’un diamètre d’environ 10 mm (± 1 mm) ont été préparés à partir d’une plastie abdominale d’une femme (référence P946-AB-Hopital Longjumeau) . Les explants ont été mis en survie en milieu BEM (BIOEC’s Explants Medium- Sigma) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2.
Les explants ont été séparés en 3 groupes de 6 explants.
Application des produits :
Du LPS à raison de 2mg/cm², a été appliqué sur les groupes 2 et 3.
Sur le groupe 3, de l’émulsion a été appliquée et étalée uniformément à l’aide d’une spatule,
Au jour J1, 2 mL du milieu de culture a été renouvelé pour l’ensemble des explants.
Aux jours J1 et J2, un disque de papier filtre imprégné de 30 μL de LPS (à 60 000 U/mg) a été appliqué, pendant 1 heure, à la surface des explants des 2 groupes préalablement traités.
Le tableau suivant représente la répartiton des explants et les traitements subis :
Groupe Nombre d’explants Traitement LPS Application de la crème
1 6
2 6 Oui
3 6 Oui Oui
Au jour J2 soir, 2ml de chacun des milieux de culture ont été prélevés, pour quantifier la concentration d’IL1α, d’IL8 et de TNFα.
Dosages :
Les concentrations d’IL1α, d’IL8 et de TNFα ont été déterminées par un dosage par absorbance selon les méthodes connues de l’homme du métier.
Toutes les absorbances ont été mesurées à l’aide d’un lecteur de microplaque commercialisé sous la référence Tecan Infinite M200 Pro, associé au logiciel Magellan selon les instructions du fabricant
Une moyenne de la concentration d’IL1α, d’IL8 et de TNFα en pg.mL-1a été déterminée pour chaque groupe.
Dosage d’IL1α :
La concentration en IL1α dans les milieux de culture a été déterminée à l’aide d’un kit de dosage EIA kit (commercialisé par Cayman, sous la référence 583301) selon les instructions du fabricant.
Les résultats du dosage d’IL1α en pg.mL-1sont les suivants :
- groupe 1 : Moyenne 14,7
- groupe 2 : moyenne 15,5
- groupe 3 : moyenne 9,8
Dosage d’IL8 :
La concentration en IL-8 dans les milieux de culture a été déterminée à l’aide d’un kit de dosage (RayBiotech, ref ELH-IL8-001) selon les instructions du fabricant.
Les résultats du dosage d’IL8 en pg.mL-1sont les suivants :
- groupe 1 : Moyenne 8,34
- groupe 2 : moyenne 30,20
- groupe 3 : moyenne 14,66
Dosage de TNFα :
La concentration en TNFα dans les milieux de culture a été déterminée à l’aide d’un kit de dosage EIA kit (Cayman, ref. 589201) selon les instructions du fabricant.
Les résultats du dosage de TNFα en pg.mL-1:
- groupe 1 : Moyenne 6,0
- groupe 2 : moyenne 23,1
- groupe 3 : moyenne 11,2
Résultats :
Dans les conditions opératoires décrites ci-dessus, après 2 jours de traitement et en comparant le groupe 2 (LPS uniquement) et le groupe 3 (LPS + Émulsion) il a été montré que l’émulsion selon l’invention a induit :
- une diminution de 37% de d’IL1α
- une diminution de 51% de d’IL8
- une diminution de 51% de TNFα
Conclusion de l’étude sur les propriétés anti-inflammatoires :
A la lecture de ces résultats, l’émulsion, sans émulsionnant, selon l’invention présente de bonnes propriétés anti-inflammatoires et peut donc être utilisée pour le traitement de désordres cutanés cosmétiques ou dermatologiques.
c. Propriétés de cicatrisation :
Les propriétés de cicatrisation sont une des autres propriétés intéressantes des produits cosmétiques et/ou pharmaceutiques et/ou dermatologiques pour leurs utilisations dans le traitement de désordres cutanés cosmétiques ou dermatologiques.
Ces propriétés ont été évaluées à l’aide d’une comparaison entre les effets de l’émulsion, sans émulsionnant, selon l’invention et les effets d’une crème commerciale (commercialisé sous le nom Cicalfate) connue pour ses effets cicatrisants, appliquée sur des explants de peau présentant des lésions dues à une irradiation par des UVB.
Cette comparaison a été effectuée sur les bases :
- une expertise histologique de la morphologie générale de la peau
- Immunomarquage de la fibronectine
- Immunomarquage de l’intégrine β4
Préparation des explants :
27 explants d’environ 12 mm de diamètre ont été préparés à partir d’une plastie abdominale d’une femme au consentement éclairé (référence P943-AB39- Hôpital de Longjumeau).
Les explants ont été mis en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Explants Medium-sigma) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2.
Les explants ont été séparés en 3 groupes de 9 explants.
Réalisation des lésions dues à l’irradiation :
Tous les explants ont été irradiés en leur centre avec une dose d’UVB de 10 J/ cm².
Application des produits :
Aux jours J0, J1, J3, J5, J7 et J8, l l’émulsion selon l’invention et de la crème cicatrisante du commerce ont été appliquées respectivement sur les explants des groupes 2 et 3 par voie topique à raison de 2mg/cm².
Le milieu de culture a été renouvelé pour moitié (1 mL) aux jours et J2, J4, J6 et J8.
Prélèvements :
Aux jours J0, J2, et J9, 3 explants de chaque lot ont été prélevés et coupés en deux.
Une partie a été fixée dans une solution de formol tamponné et la 2èmepartie a été congelée à –80°C.
Traitements histologiques :
Les traitements histologiques ont été identiques aux traitements reçus par les explants lors de l’étude sur les propriétés d’hydratation de l’émulsion selon l’invention (comme décrit précédemment).
Examen de la morphologie générale :
La morphologie générale a été examinée aux jours J0, J2 et J9 sur des coupes en paraffine colorées au trichrome de Masson variante de Goldner, selon le mode opératoire MO-H-157.
La morphologie générale a été évaluée par un examen microscopique.
Immunomarquages :
Tous les immunomarquages ont été réalisés à l’aide d’un automate d’immunomarquages (Dako, AutostainerPlus) en suivant les instructions du fabricant et le marquage a été évalué par un examen microscopique à fluorescence.
Immunomarquage de la fibronectine :
La fibronectine joue un rôle dans la migration cellulaire, et dans l’adhésion des cellules entre elles et la matrice extracellulaire, sa présence est un témoin d’un processus de cicatrisation cellulaire.
La fibronectine a été marquée aux jours J0 et J2 sur coupes congelées, avec un anti-corps monoclonal anti-fibronectine, clone TV-1, fait sur souris de chez Chemicon (commercialisé sous la référence MAB 88904), au 1/50ème pendant 1h à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine (commercialisé par Sigma) révélée en FITC (commercialisé par Sigma).
Les noyaux ont été contre colorés à l’iodure de propidium (commercialisé par Sigma).
Immunomarquage de l’intégrine β4 :
L’intégrine β4 est une protéine transmembranaire qui permet aux cellules d’adhérées entre elles, sa présence est un autre témoin d’un processus de cicatrisation.
L’intégrine β4 a été marquée aux jours J0 et J9 sur coupes congelées, avec un anti-corps monoclonal antiintégrine β4 clone 3 E1 (CD104), fait sur souris de chez Chemicon (commercialisé sous la référence MAB 1964), au 1/600ème pendant 1h à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine (commercialisé par Sigma) révélée en FITC (commercialisé par Sigma).
Les noyaux ont été contre colorés à l’iodure de propidium (commercialisé par Sigma).
Résultats :
Des comparaisons ont été réalisées entre des photographies du groupe d’explants irradiés ayant reçu l’émulsion selon l’invention et du groupe d’explants irradiés ayant reçu la crème commerciale Cicalfate.
Ces comparaisons montrent une présence similaire de fibronectine et d’intégrine β4 quelque soit le traitement reçu.
Conclusion sur les propriétés de cicatrisation :
A la lecture de ces résultats, l’émulsion selon l’invention présente une activité cicatrisante et peut être utilisée pour le traitement de désordres cutanés cosmétiques ou dermatologiques.

Claims (8)

  1. Emulsion huile dans l’eau comprenant une phase lipophile et une phase hydrophile, caractérisée en ce que :
    - l’émulsion est dépourvue d’émulsionnant,
    - la phase hydrophile comprend entre 1 et 10 % massique de particules de protéines insolubles,
    - la phase lipophile représente entre 10 % et 50 % du volume total de l’émulsion.
  2. Emulsion selon la revendication 1, caractérisée en ce que les protéines insolubles sont des particules de fibroïne, les particules de fibroïne ayant un diamètre entre 0,1 à 10 micromètres.
  3. Emulsion selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la phase hydrophile comprend entre 1 et 5% massique de particules de protéines solubles.
  4. Emulsion selon la revendication précédente, caractérisée en ce que les protéines solubles sont issues des hydrolysats de protéines végétales, par exemple des hydrolysats de protéines de soja ou de riz, ou en ce que les protéines solubles sont issues des hydrolysats de protéines de soie comme la séricine.
  5. Emulsion selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la phase hydrophile comprend des peptides d’origine biosynthétique ou microbiologique.
  6. Emulsion selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la phase hydrophile comprend, en outre, un ou plusieurs des éléments suivants : de la bétaïne, de la glycine, de la nisine et du NaCl.
  7. Emulsion selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 pour sonutilisation comme médicament, de préférence un médicament à usage topique.
  8. Emulsion selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 pour son utilisation dans le traitement ou la prévention de désordres cutanés, par exemple une inflammation de la peau.
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6106855A (en) * 1992-03-25 2000-08-22 Johnson & Johnson Medical, Inc. Protein stabilized oil-in-water emulsions
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WO2022069844A1 (fr) * 2020-10-02 2022-04-07 Basf Beauty Care Solutions France Sas Nouvelle utilisation d'un peptide pour améliorer le confort de la peau et/ou des muqueuses et/ou l'apparence des phanères

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