FR3145865A1

FR3145865A1 - Concentrat d’huile de thé Camellia oleifera et ses utilisations

Info

Publication number: FR3145865A1
Application number: FR2301466A
Authority: FR
Inventors: Sophie LECLERE- BIENFAIT; Gaëtan BOYER; Gaëlle BELLEMERE; Stéphanie Bredif
Original assignee: Laboratoires Expanscience SA
Current assignee: Laboratoires Expanscience SA
Priority date: 2023-02-16
Filing date: 2023-02-16
Publication date: 2024-08-23
Also published as: WO2024170760A1; KR20250145033A; CN120712098A; EP4665370A1; JP2026505499A

Abstract

L’invention se rapporte à un extrait lipidique d’huile de thé Camellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable, ainsi qu’une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique comprenant un excipient approprié et ledit extrait lipidique, ainsi que leurs utilisations.

Description

Concentrat d’huile de théCamellia oleiferaet ses utilisations

DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION

L’invention se rapporte à un extrait lipidique d’huile de théCamellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable, ainsi qu’une composition cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou dermatologique comprenant un excipient approprié et ledit extrait lipidique.

L’invention a également pour objet un procédé de préparation d’un extrait lipidique d’huile de théCamellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable. L’invention concerne également une telle composition ou un tel extrait pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères. L’invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d’améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait, en particulier afin d’améliorer le bien-être physique / physiologique et psychologique de l’utilisateur.

ETAT DE LA TECHNIQUE

Le genreCamelliaest natif de l’Est de l’Asie et comprend plus de 200 espèces ligneuses à feuilles persistantes. Certaines espèces ont une valeur économique importante, telles queC. sinensis,C. japonicaetC. oleifera.C. sinensisest cultivée principalement dans les régions tropicales et subtropicales pour le thé,C. japonicaest cultivée dans les régions tempérées comme plante ornementale et son huile est utilisée traditionnellement comme produit cosmétique au Japon.C. oleifera, également connu sous le nom de « camélia à l'huile de thé » (oil-tea camelia), peut pousser sur des terres stériles sans engrais, commencer à produire des fruits six ans après la plantation initiale et rester très productif pendant 80 ans. Cette espèce est principalement cultivée en Chine pour la production d’huiles alimentaires (« huile de camélia », « huile de graine de thé ») (Yanget al., 2016).

La quantité d’huile contenue dans les graines et la composition en acides gras peuvent varier selon la variété, le sol et le climat (Hu & Yang, 2018). Wen et al. (2018) estiment que l’intensité de la lumière pendant le développement du fruit et de leur maturation (Juillet-Octobre) influence le rendement et la qualité des fruits.

En ce qui concerne la diversité variétale, Yang et al. (2016) ont comparé 10 cultivars différents et des graines de plusieurs individus sauvages et ont conclu que le contenu en huile et les profils en acides gras de leurs extraits n’étaient pas influencés par la culture artificielle et la sélection des cultivars.

Dans de nombreux pays asiatiques (Chine, Taïwan, Japon, Inde, Indonésie), l’huile deCamellia oleiferaest utilisée en cuisine. Elle est aussi traditionnellement utilisée pour soigner les maux d’estomac et les brûlures. À cause de sa teneur en acides gras monoinsaturés (C18:1 majoritaire) proche de l’huile d’olive, plusieurs études ont été menées pour déterminer si l’on pouvait lui attribuer les mêmes bénéfices pour la santé et notamment sur la diminution des risques cardiovasculaires. Des études ont permis de mettre en évidence la capacité de l’huile de thé à diminuer la teneur en cholestérols, triglycérides et lipoprotéines de basse densité mais aussi de la thromboxane B2 et des produits dus à la peroxydation des lipides. Elle permet aussi d’augmenter l’activité des superoxydes dismutases (SOD) et glutathion peroxydase (GSH-Px). Une partie de ces activités pourrait être due à la présence de saponines.

La Demanderesse a découvert que l’extrait lipidique d’huile de théCamellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable, présente des propriétés cosmétiques et dermatologiques jamais décrites jusqu’à présent.

En particulier, c’est la première fois que de tels extraits lipidiques sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques. La Demanderesse a ainsi découvert de manière surprenante que l’extrait lipidique d’huile de théCamellia oleifera,concentrée en sa fraction insaponifiable, peut être utilisé pour stimuler, restaurer ou réguler le métabolisme des cellules de la peau et des muqueuses et/ou pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles liés au tissu cutané.

Selon un premier aspect, l’invention concerne un extrait lipidique d’huile de thé, ledit extrait lipidique étant une huile de théCamellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable, contenant de 1,5 % à 100 % en poids d’insaponifiables, de préférence 1,8 % à 80 %, préférentiellement 2 % à 60 %, par rapport au poids total de l’extrait.

Selon un second aspect, l’invention concerne un procédé de préparation dudit extrait comprenant les étapes successives suivantes :

distillation moléculaire d’une huile brute ou raffinée de théCamellia oleifera;
le cas échéant, extraction de l’insaponifiable ;
récupération de l’huile concentrée en insaponifiable obtenue suite à l’étape a) ou de l’insaponifiable obtenu suite à l’étape b) ;
optionnellement une étape de désodorisation et/ou de décoloration de l’huile concentrée en insaponifiable ou de l’insaponifiable.

Avantageusement, l’étape b) comprend les étapes successives suivantes :

saponification de l’huile de thé concentrée en sa fraction insaponifiable obtenue suite à l’étape a),
puis extraction de l’insaponifiable à l’aide d’un solvant approprié, tel que l’acétate d’éthyle et l’hexane.

Selon un troisième aspect, l’invention concerne une composition comprenant, en tant qu’actif, ledit extrait lipidique d’huile de thé et un excipient approprié. La composition peut être cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou dermatologique.

Selon un quatrième aspect, l’invention concerne l’extrait selon l’invention ou une composition comprenant l’extrait selon l’invention ou l’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention, pour son utilisation dans une composition dermatologique ou pharmaceutique.

Selon un cinquième aspect, l’invention concerne l’utilisation de l’extrait selon l’invention ou d’une composition comprenant l’extrait selon l’invention ou l’extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention, dans une composition nutraceutique ou en tant que complément alimentaire.

Selon un sixième aspect, l’invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses en vue d’améliorer leur état et/ou leur aspect comprenant l’administration topique ou orale, d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention.

Selon un septième aspect, l’invention concerne une méthode de traitement cosmétique des peaux sèches, de la xérose, des peaux sensibles, des peaux irritées, comprenant l’administration, par voie topique ou orale, d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION

L’invention a pour objet un extrait lipidique d’huile de thé, ledit extrait lipidique étant une huile de théCamellia oleiferaconcentrée en sa fraction insaponifiable, contenant de 1,5 % à 100 % en poids d’insaponifiables, de préférence 1,8 % à 80 %, préférentiellement 2 % à 60 %, par rapport au poids total de l’extrait.

L'insaponifiable est la fraction d'un corps gras qui, après action prolongée d'une base alcaline, reste insoluble dans l'eau et peut être extraite par un solvant organique. Cinq grands groupes de substances sont présents dans la plupart des insaponifiables d'huiles végétales : hydrocarbures saturés ou insaturés, alcools aliphatiques ou terpéniques, stérols, tocophérols, tocotriénols, les pigments caroténoïdes et xanthophylles.

L’huile est concentrée en sa fraction insaponifiable, en particulier elle comprend plus de 1,5 % en poids d’insaponifiables, par rapport au poids total de l’extrait, avantageusement plus de 2 %, préférentiellement plus de 2,5 % en poids d’insaponifiables.

L’extrait lipidique d’huile de théCamellia oleifera,concentrée en sa fraction insaponifiable, comprend avantageusement des acides gras ayant de 12 à 22, plus avantageusement de 16 à 20, atomes de carbones. Ces acides gras peuvent être saturés, mono-insaturés ou polyinsaturés. Ce concentrat est avantageusement obtenu à partir d’une huile de thé raffinée. L'huile peut être raffinée selon des procédés connus de l'homme de métier tels que le raffinage physique (dégommage à l'eau, désacidification par désodorisation par stripping vapeur) et le raffinage chimique (démucilagination à l'eau ou traitement acide afin d'éliminer les phospholipides, neutralisation des acides gras libres à l'aide d'une solution basique, décoloration, frigélisation et désodorisation), en particulier par désodorisation par stripping vapeur. Un exemple de caractéristiques de l’huile raffinée de théCamellia oleiferaest donné dans le tableau suivant.

Coupe grasse (% en poids par rapport au poids total de l’extrait lipidique)
C16 (acide palmitique)	5,0-10,0
C16' (acide 5-hexadécénoïque)	≤ 1,0
C18 (acide stéarique)	≤ 5,0
C18' (acide oléique)	65-85
C18'' (acide linoléique)	6-12
C18"' (acide α-linolénique)	< 1,0
C20 (acide arachidique)	≤ 1,0
C20' (acide eicasénoïque)	≤ 1,0
C22 (acide béhénique)	≤ 1,0
Teneur en Tocophérols (g/100g)	0,001 – 0,015
Teneur en Stérols (g/100g)	0,1 – 0,6
Teneur en Squalène (g/100 g)	0,01 – 0,02
Teneur totale en Insaponifiables (g/100 g)	0,4 – 0,8

À partir de cette huile, l’huile de théCamellia oleiferaest avantageusement concentrée en sa fraction insaponifiable – le « concentrat », typiquement par distillation moléculaire. L’huile concentrée en sa fraction insaponifiable présente avantageusement les spécifications suivantes.

Coupe grasse (% en poids par rapport au poids total de l’extrait lipidique)
C16 (acide palmitique)	5,0 - 10,0
C16' (acide 5-hexadécénoïque)	≤ 1,0
C18 (acide stéarique)	≤ 5,0
C18' (acide oléique)	65-85
C18'' (acide linoléique)	6-12
C18"' (acide α-linolénique)	< 1,0
C20 (acide arachidique)	≤ 1,0
C20' (acide eicasénoïque)	≤ 1,0
C22 (acide béhénique)	≤ 1,0
Teneur totale en Insaponifiables (g/100 g)	1,5 – 5

Avantageusement, la fraction insaponifiable est telle que décrite ci-dessous.

Fraction insaponifiable (% en poids par rapport au poids total de l’extrait lipidique)
Teneur en α-tocophérol g/100g	0,01 - 0,150
Teneur en stérols g/100g	1,0 – 4,5
% relatif campesterol	1 - 3,5 %
% relatif stigmasterol	1 - 3,0 %
% relatif beta-sitostérol	1 – 20 %
% relatif famille ergosterol	1 - 2,5 %
% relatif lanosterol	2 - 10 %
% relatif (beta-amyrine + delta5-avenasterol)	20 - 35 %
% relatif (lupeol + delta7-stigmasterol)	20 - 35 %
Squalène	0,05 - 0,2
Total en insaponifiable g/100g	1,5 - 5

% relatif : par rapport au poids total de stérols

Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, la teneur en α-tocophérol est supérieure à 60 % en poids, par rapport au poids total de tocophérols, de préférence 80 % en poids, préférentiellement 95 % en poids.

Selon un autre mode de réalisation préféré, la teneur en stérols de l’extrait selon l’invention est supérieure à 1,5 % en poids, de préférence 2 %, par rapport au poids total de l’extrait.

L’extrait lipidique selon l’invention contient avantageusement de la β-amyrine et du Δ5-avenasterol, de préférence de 10 à 50 % en poids, préférentiellement de 15 à 40 %, plus préférentiellement de 15 à 35 % en poids, typiquement de 20 à 35% en poids, par rapport au poids total de stérols et/ou du lupeol et du Δ7-stigmasterol, de préférence de 10 à 50 % en poids, préférentiellement de 15 à 40 %, plus préférentiellement de 15 à 35 % en poids, typiquement de 20 à 35% en poids, par rapport au poids total de stérols.

Avantageusement, l’extrait lipidique selon l’invention comprend :

% en poids par rapport au poids total de stérols
beta-amyrine + delta5-avenasterol	10 - 50 % de préférence 15-40 %, préférentiellement 15 - 35 %
lupeol + delta7-stigmasterol	10 - 50 % de préférence 15-40 %, préférentiellement 15 - 35 %
lanosterol	2 - 20 % de préférence 3-15 %, préférentiellement 4 - 10 %
beta-sitostérol	5 – 30 % de préférence 10-25 %, préférentiellement 12 - 20 %

L’extrait selon l’invention est avantageusement obtenu par un procédé comprenant les étapes successives suivantes :

distillation moléculaire d’une huile brute ou raffinée de théCamellia oleifera;
le cas échéant, extraction de l’insaponifiable ;
récupération de l’huile concentrée en insaponifiable obtenue suite à l’étape a) ou de l’insaponifiable obtenu suite à l’étape b) ; et
optionnellement une étape de désodorisation et/ou de décoloration de l’huile concentrée en insaponifiable ou de l’insaponifiable.

Lorsque l’on désire récupérer l’huile enrichie (concentrée) en insaponifiable, l’étape b) n’est pas mise en œuvre. Lorsque l’on désire récupérer la fraction insaponifiable, l’étape b) est mise en œuvre.

Cette étape b) comprend avantageusement les étapes successives suivantes :

L’invention a également pour objet un procédé de préparation d’un extrait selon l’invention comprenant les étapes successives suivantes :

L’étape de distillation moléculaire a) est de préférence réalisée en utilisant un dispositif choisi parmi les distillateurs moléculaires de type centrifuge et les dispositifs moléculaires de type à film raclé.

Les distillateurs moléculaires de type centrifuge sont connus de l'homme de métier. Par exemple, la demande EP 493 144 décrit un distillateur moléculaire de ce type. D'une manière générale, le produit à distiller est étalé en couche mince sur la surface chauffée (surface chaude) d'un rotor conique tournant à grande vitesse. L'enceinte de distillation est placée sous vide. Dans ces conditions, il y a évaporation et non pas ébullition, depuis la surface chaude, des constituants de l’huile tels que les insaponifiables, l'avantage étant que l'huile et ses constituants, notamment les insaponifiables (ces produits étant réputés fragiles), ne sont pas dégradés au cours de l'évaporation.

Les distillateurs moléculaires de type à film raclé sont également connus de l'homme du métier. D’une manière générale, ils comprennent une chambre de distillation dotée d'un racleur tournant, permettant l'étalement en continu sur la surface d'évaporation (surface chaude) des produits à distiller. Les vapeurs de produit sont condensées par le biais d'un doigt réfrigéré, placé au centre de la chambre de distillation. Les systèmes périphériques d'alimentation et de vide sont très proches de ceux d'un distillateur centrifuge (pompes d'alimentation, pompes à vide à palette et à diffusion d’huile, etc.). La récupération des résidus et des distillats se fait par écoulement gravitationnel dans les récipients adaptés.

À l’issue de l’étape de fractionnement, la fraction distillée riche en insaponifiables représente avantageusement 3 à 15 % en poids de l’huile de départ, et la fraction distillée riche en triglycérides représente avantageusement 85 à 97 % en poids de l’huile de départ.

Il a en outre été vérifié que ce procédé n’entraînait aucune modification chimique ou altération des composés de l’insaponifiable, et que les fractions fortement insaturées étaient préservées. Par conséquent, la répartition en acides gras de l’huile de thé concentrée est identique à celle de l’huile de thé avant concentration.

Suite à cette étape de distillation moléculaire, le produit obtenu peut-être éventuellement désodorisé et/ou décoloré par des procédés connus de l’Homme de l’art, par exemple désodorisé par stripping vapeur ou distillation moléculaire, ou décoloré par traitement sur charbon actif.

L’huile de thé concentrée en sa fraction insaponifiable ainsi obtenue présente les caractéristiques décrites précédemment.

Lorsque l’on désire récupérer l’huile enrichie en insaponifiable, l’étape b) n’est pas mise en œuvre.

Lorsque l’on désire récupérer la fraction insaponifiable, l’étape b) est mise en œuvre. Cette étape comprend avantageusement les étapes successives suivantes :

L’insaponifiable d’huile de thé peut être obtenu par des procédés connus de l’homme de métier. Typiquement, l’insaponifiable est ensuite lavé jusqu’à élimination complète des savons puis le solvant est évaporé. Enfin l’insaponifiable subit avantageusement une désodorisation à la vapeur d’eau puis stripping à l’azote afin d’éliminer les traces de solvant.

L’insaponifiable d’huile de thé ainsi obtenu présente avantageusement les caractéristiques décrites précédemment.

Un autre objet de l’invention concerne une composition comprenant, en tant qu’actif, un extrait lipidique d’huile de théCamellia oleiferaselon l’invention.

La composition selon l’invention comprend avantageusement de 0,01 % à 20 %, avantageusement de 0,05 à 15 %, plus avantageusement 0,1 à 10 %, en poids dudit extrait lipidique, par rapport au poids total de la composition.

L’extrait lipidique selon l’invention est avantageusement utilisé en tant qu’agent actif dans une composition telle qu’une composition cosmétique, nutraceutique, dermatologique ou pharmaceutique, qui peut comprendre un ou plusieurs excipients appropriés.

La composition selon l’invention peut être formulée sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique ou orale.

Selon une variante, les différentes préparations sont adaptées à l’administration topique et incluent notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.

Dans le cadre d’une utilisation cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique, la composition est avantageusement formulée sous la forme d’une préparation adaptée à une administration topique.

Dans le cadre d’une utilisation nutraceutique, la composition est avantageusement formulée sous la forme d’une préparation adaptée à une administration orale. L’extrait selon l’invention peut entrer soit dans un complément alimentaire soit dans une composition nutraceutique. Le complément alimentaire peut se présenter sous forme de l’extrait selon l’invention en tant que tel ou bien sous forme de gélules ou de capsules molles de gélatine ou végétales. Ledit complément alimentaire peut alors contenir de 10 à 100 % en poids de l’extrait selon l’invention.

La composition de la présente invention peut être incorporée directement et sans autre modification dans les nutraceutiques, les produits diététiques notamment hyperprotéinés ou les breuvages et ce grâce à des techniques comme le mixage, l’infusion, l’injection, le mélange, l’absorption, le pétrissage et la pulvérisation.

La composition selon l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans les domaines pharmaceutique, dermatologique, cosmétique ou nutraceutique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les épaississants, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les agents chélateurs, les absorbeurs d'odeurs, les filtres chimiques ou minéraux, les pigments minéraux, les tensioactifs, les polymères, les huiles de silicone et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, par exemple de 0,01 % à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules. L’homme du métier est en mesure de choisir les adjuvants idoines en fonction de l’application visée.

Comme huiles utilisables dans les compositions permettant de mettre en œuvre l'invention, on peut citer les huiles minérales, les huiles d'origine végétale (huile d'abricot, huile de tournesol, huile de prune), les huiles d'origine animale, les huiles de synthèse, les huiles siliconées et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers). On peut aussi utiliser comme matières grasses des alcools gras (alcool cétylique), des acides gras, des cires (cire d'abeilles).

Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple les esters d'acide gras et de polyéthylène glycol tels que le stéarate de PEG-40, le stéarate de PEG-100, les esters d'acide gras et de polyol tels que le stéarate de glycéryle et le tristéarate de sorbitane.

Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes.

Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique, dermatologique ou cosmétique adapté à un patient comme par exemple l’étendue de la zone de peau à traiter, la tolérance au traitement, le type de peau.

L’invention a également pour objet l’utilisation d’un extrait selon l’invention ou d’une composition selon l’invention en tant que complément alimentaire ou dans une composition nutraceutique.

L’invention a également pour objet un extrait selon l’invention ou une composition selon l’invention pour son utilisation en tant que, ou dans une, composition dermatologique ou pharmaceutique.

La composition ou l’extrait selon l’invention peut être utilisée pour stimuler, restaurer ou réguler le métabolisme des cellules de la peau et des muqueuses et/ou dans la prévention et/ou le traitement des troubles liés au tissu cutané. Avantageusement, la composition ou l’extrait selon la présente invention est utilisée dans la prévention et/ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères.

De préférence, les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères sont choisis parmi les réactions inflammatoires, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution chimique ou atmosphérique, et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR, les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, la peau photosensibilisée, les agressions mécaniques et/ou thermiques, ou en tant qu’agent cicatrisant.

De manière particulièrement avantageuse, les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères sont choisis parmi la peau sèche, la xérose, la peau sensible et les irritations.

La composition ou l’extrait selon l’invention permettent avantageusement d’améliorer le confort cutané.

Selon un mode de réalisation particulier, l’extrait ou la composition selon l’invention peut être utilisé en tant qu’agent anti-âge et/ou agent cicatrisant ; pour prévenir une altération de la peau, et/ou maintenir l'homéostasie de la peau ou des muqueuses ou en tant qu’agent antioxydant et/ou anti-inflammatoire. Avantageusement, la composition ou l’extrait selon l’invention peuvent être utilisés pour prévenir ou retarder le vieillissement cutané prématuré, en particulier photo-induit, avantageusement pour prévenir, réduire et/ou traiter les rides, les ridules ou une altération du microrelief.

La composition ou l’extrait selon l’invention peuvent être également être utilisés pour favoriser la cicatrisation.

Selon une caractéristique technique particulière, la composition ou l’extrait selon l’invention peuvent être également utilisés dans la prévention et/ou le traitement des pathologies ou conditions choisies dans le groupe constitué par les cicatrices superficielles, les lèvres fragiles et les cheilites, les vergetures, la peau après piqûres, les abrasions de la peau, les boutons et/ou les croûtes cutanés, et les peaux fragiles et sensibles, avantageusement les peaux fragiles et sensibles.

Un autre objet de l’invention concerne un procédé de soin cosmétique non thérapeutique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses en vue d’améliorer leur état et/ou leur aspect, avantageusement en vue d'améliorer la fermeté, l'élasticité ou la tonicité de la peau, comprenant l’administration topique ou orale, d’un extrait ou d’une composition selon l’invention

Ledit procédé de soin cosmétique est préférentiellement réalisé en vue d’améliorer le confort cutané, typiquement sur des peaux saines, des phanères sains ou des muqueuses saines, particulièrement avantageusement pour traiter et/ou prévenir les peaux sèches, la xérose, les peaux sensibles et les peaux irritées.

Un autre objet de l’invention concerne une méthode de traitement cosmétique des peaux sèches, de la xérose, des peaux sensibles, des peaux irritées, comprenant l’administration, par voie topique ou orale, d’un extrait ou d’une composition selon l’invention.

Les peaux sèches, la xérose, les peaux sensibles et irritées entraînent des sensations de tiraillement, de manque de confort et de souplesse de la peau.

FIGURES

: Résultats actif vs placebo pour chacun des dix paramètres de la « sensitive scale » (à gauche : actif, à droite : placebo).

: Score global actif vs placebo de la « sensitive scale » (à gauche : actif, à droite : placebo).

: Évolution du stress vocal (à gauche : actif, à droite : placebo).

: Évolution de la cohérence cardiaque (à gauche : actif, à droite : placebo).

: Évolution de la réponse électrodermique (à gauche : actif, à droite : placebo).

: Évaluation de la cornéométrie (à gauche : actif, à droite : placebo) et de l’hydratation (à gauche : actif, à droite : placebo).

EXEMPLES Exemple 1 : Concentrat selon l’invention

Un exemple de concentrat selon l’invention est une huile raffinée deCamellia oleiferaconcentrée en sa fraction insaponifiable. L’extrait est préparé par distillation moléculaire.

Condition de vide : 10^-2à 10^-3mbar

Température du corps de distillation entre 250 et 280 °C

La répartition massique est représentée dans le tableau ci-dessous.

Coupe grasse(% en poids par rapport au poids total de l’extrait lipidique)
C16 (acide palmitique)	11
C16’ (acide 5-hexadécénoïque)	0,1
C18 (acide stéarique)	2,0
C18’ (acide oléique)	77
C18’’ (acide linoléique)	9
C18’’’ (acide α-linolénique)	0,2
C20 (acide eicasénoïque)	0,1
C20’ (acide eicasénoïque)	0,3
C22 (acide béhénique)	0
C22’	0
Teneur en Tocophérols (g/100g)	0,07
Teneur en Stérols (g/100g)	2,21
Teneur en Squalène (g/100 g)	0,07
Teneur totale en Insaponifiables (g/100 g)	2,8

La répartition massique des tocophérols est représentée dans le tableau ci-dessous.

% α-tocophérol	100
% β-tocophérol	0
% δ-tocophérol	0
% γ-tocophérol	0

La répartition massique des stérols est représentée dans le tableau ci-dessous.

% campesterol	2,9
% stigmasterol	2,0
% β-sitostérol	14,0
% ergosterol et dérivés	2,0
% lanosterol	7,0
% relatif (β-amyrine + Δ5-avenasterol)	31,0
% relatif (lupeol + Δ7-stigmasterol)	29,5

Exemple 2 : Tests d’activités biologiques in vitro de l’extrait selon l’invention

L’extrait testé est le concentrat de l’exemple 1. Il sera nommé dans les études « concentrat d’huile de thé ». Sauf indications contraires, les pourcentages sont exprimés en poids de concentrat par rapport au poids total de la composition testée.

Activité anti-inflammatoire

L’activité anti-inflammatoire du concentrat d’huile de thé (THE) a été recherchée par dosage de l’interleukine-1 alpha (IL-1 alpha) produite par des kératinocytes en réponse à un stress pro-inflammatoire induit par le PMA (Phorbol-Myristate-Acetate) dans un modèle de kératinocytes humains normaux, dans un modèle d’épiderme reconstruit soumis à un stress PMA, ainsi que dans un modèle d’épiderme reconstruit soumis à un stress SDS (Sodium Dodecyl Sulfate).

Effet dans un modèle de kératinocytes humains normaux

Matériel et méthode

Des kératinocytes humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence du concentrat d’huile de thé à 0,001 %, 0,005 % ou 0,01 % ou de dexaméthasone à 0,1 µM, référence anti-inflammatoire. Les cellules ont ensuite été stimulées par traitement pendant la nuit en présence de 10 µg/mL de PMA (Phorbol-Myristate-Acetate).

À l’issue du traitement, l’IL-1 alpha produite a été quantifiée par dosage ELISA dans les surnageants de culture.

Les résultats ont été analysés statistiquement par une analyse de variance à un facteur (ANOVA), suivie d’un post-test de Tukey.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé a significativement inhibé la production d’IL-1 alpha induite par le PMA dans les kératinocytes ; il présente donc un potentiel anti-inflammatoire.

[Tableau 8] : Dosage de l’interleukine-1 alpha produite par des kératinocytes soumis à un stress inflammatoire induit par le PMA

	IL-1 alpha (pg/mL)	Protection (%)
Cellules contrôles	57.8 ± 9.8
Cellules stimulées (PMA 10µg/ml)	92.1 ± 4.7
Référence (Dexaméthasone 0,1µM)	66.6 ± 0.5	74%	p<0.001
THE 0,001%	69.4 ± 4.4	66%	p<0.01
THE 0,005%	45.3 ± 7.4	136%	p<0.001

Effet dans un modèle d’épiderme reconstruit soumis à un stress PMA

Matériel et méthode

Des épidermes reconstruits ont été traités en topique par une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé ou son placébo, ou en systémique par la dexaméthasone à 1 µM, référence anti-inflammatoire. Après 24 heures de pré-incubation, les épidermes ont été stimulés par 0,5 µg/mL de PMA et incubés de nouveau pour 24 heures.

Les sousnageants de culture ont été collectés puis un dosage d’IL-1 alpha a été réalisé.

Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide d’une ANOVA suivie d’un test de Tukey.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 %, a significativement inhibé le relargage d’IL-1 alpha induit par le PMA sur des épidermes reconstruits. Cet effet était significativement différent du placébo.

[Tableau 9] : Dosage de l’IL-1 alpha produit par des épidermes reconstruits stimulés par le PMA

	Interleukine-1 alpha (pg/mL)	% Protection
Cellules contrôles	122 ± 4
Cellules stimulées (PMA 0,5 µg/mL)	533 ± 35
Référence (Dexaméthasone 1 µM)	334 ± 41	48 %	p<0.001
Placébo	246 ± 15	70 %	p<0.001	p<0.05
THE 1 %	105 ± 11	104 %	p<0.001	p<0.05

Effet dans un modèle d’épiderme reconstruit soumis à un stress SDS

Matériel et méthode

Des épidermes reconstruits ont été traités en topique par une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé ou son placébo. Après 24 heures de pré-incubation, les épidermes ont été stimulés par du SDS à 0,1 % pendant 30 minutes puis de nouveau traités par les produits pendant 24 heures et incubés de nouveau pour 24 heures.

Les sousnageants de culture ont été collectés puis l’IL-1 alpha et l’IL8 ont été dosées par dosage ELISA.

Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide d’une ANOVA suivie d’un test de Dunnett.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 %, inhibe le relargage d’IL-1 alpha et d’IL8 induit par le SDS.

[Tableau 10] : Dosage de l’IL-1 alpha produit par des épidermes reconstruits stimulés par le PMA

	IL-1 alpha (pg/ml)	% Evolution	IL8 (pg/ml)	% Evolution
Contrôle placebo	9.6 ± 0.6		42.5 ± 13,7
SDS 0,1 %	84 ± 19	+778 %	696,2 ± 241,7	+1536 %
THE 1 %	55.2 ± 12,2	-34 %	478.3 ± 61,7	-31 %

Ces différents résultats démontrent le potentiel anti-inflammatoire du concentrat d’huile de thé.

Activité anti-âge

Le vieillissement cutané se caractérise par une altération de la matrice dermique avec, notamment, une diminution de la qualité et de la quantité des fibres matricielles.

L’activité anti-âge du concentrat d’huile de thé a été évaluée par sa capacité à stimuler l’expression et la production de marqueurs de la matrice dermique en conditions standards et dans des conditions de stress inflammatoire modélisant l’« inflamm’aging ».

Stimulation de l’expression génique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes humains normaux

L’effet du concentrat d’huile de thé sur l’expression de marqueurs de la matrice dermique a été évalué sur des fibroblastes dermiques humains normaux en culture.

Matériel et méthode

Des fibroblastes dermiques humains normaux ont été incubés pendant 48 heures en présence du concentrat d’huile de thé à 0,001 % et 0,005 % ou de TGFβ1 à 5 ng/mL, référence positive du test.

L’expression génique du Collagène III et de la Fibrilline 1 a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.

Les résultats ont été analysés statistiquement par une analyse de variance à un facteur (ANOVA), suivie d’un post-test de Dunnett.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé a significativement stimulé l’expression génique du collagène III et de la Fibrilline 1.

Ces résultats montrent une densification de la matrice dermique pour une action d’antivieillissement cutané.

[Tableau 11] : Expression génique de marqueurs de la matrice dermique dans des fibroblastes

	Cellules contrôles	Référence (TGFb1 5ng/ml)	THE 0,005 %
Collagène III (Quantité Relative et% d’induction)	0.87 ± 0.12	1.55 ± 0.25 +78% p<0.05	1.47 ± 0.37 +69% p<0.05
Fibrilline 1 (Quantité Relative et% d’induction)	0.88 ± 0.23	1.53 ± 0.18 +74% p<0.05	1.94 ± 0.71 +121% p<0.01

Effet dans un modèle d’ « Inflamm’aging »

Avec l’âge, une inflammation bas grade, silencieuse mais chronique peut s’installer au sein des tissus cutanés. Celle-ci est la conséquence des expositions à des stress externes cumulées au cours de la vie. Cette inflammation se traduit par le relargage de cytokines inflammatoires (IL1, IL6, TNF, CRP…), capables de générer des dommages tissulaires et la production d’espèces réactives de l’oxygène, favorisant ainsi l’accélération du processus de vieillissement cutané. Ce phénomène de vieillissement cutané lié à un processus inflammatoire est nommé « Inflamm’aging » en anglais.

Le concentrat d’huile de thé a été évalué dans un modèlein vitroreproduisant le processus d’ « inflammaging » : une inflammation, représentée par la stimulation de la production d’IL-1 alpha, est induite sur des épidermes reconstruits. Les milieux conditionnés de ces épidermes reconstruits sont ensuite appliqués sur des fibroblastes et l’expression de marqueurs dermiques, altérés par l’IL1α produit par les épidermes, est évaluée.

Matériel et méthode

Les sousnageants de culture ont été collectés, un dosage d’IL-1 alpha a été réalisé d’une part et, d’autre part, ces sousnageants (milieux conditionnés) ont été déposés sur des cultures de fibroblastes dermiques humains normaux.

Après 24 heures d’incubation des fibroblastes en présence des milieux conditionnés, l’expression de marqueurs d’intérêt a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 %, a significativement inhibé le relargage d’IL-1 alpha induit par le PMA sur des épidermes reconstruits. Cet effet est significativement différent du placébo.

L’application sur les cultures de fibroblastes des milieux conditionnés, des épidermes reconstruits stimulés par le PMA, a induit des variations d’expression génique de marqueurs inflammatoires, du stress oxydant, de synthèse et de dégradation de la matrice dermique. Ces résultats valident le modèle d’ « Inflamm’aging ».

Dans ces conditions, le concentrat d’huile de thé a modulé la surexpression des cytokines et chimiokines (CXCL1, IL8, IL6, CCL2), des enzymes de dégradation de la matrice (MMP1, MMP3) et a augmenté le niveau d’expression génique de l’HAS2.

Ces résultats montrent que le concentrat d’huile de thé permet de moduler le processus d’ « inflamm’aging ».

[Tableau 12] : Dosage de l’IL-1 alpha produit par des épidermes reconstruits stimulés par le PMA

[Tableau 13] : Gènes modulés par la formule à 1 % de Concentrat d’huile de thé dans le modèle d’ « Inflamm’aging » : expression génique dans les fibroblastes incubés en présence des milieux conditionnés

(Niveau d’expression en quantité relative ; % de protection par rapport au PMA)

		Contrôle	PMA	Dexa. 1µ M	Placebo	THE 1 %
Cytokines/ Chimiokines	CXCL1	100	1116	1503	381(72 %)	96(100 %)
	IL8	100	1645	1350	325(85 %)	58(103 %)
	IL6	100	1817	305	509(76 %)	179(95 %)
	CCL2	100	307	193	198(53 %)	81(109 %)
Réponse au stress oxydatif et cellulaire	SOD2	100	333	354	241(39 %)	102(99 %)
Assemblage / synthèse de la matrice extracellulaire	HAS2	100	78	104	100(100 %)	150(327 %)
Dégradation de la matrice extracellulaire	MMP1	100	1060	52	306(79 %)	155(94 %)
Dégradation de la matrice extracellulaire	MMP3	100	300	74	138(81 %)	105(98 %)

Screening d’activité sur peau reconstruite Matériel et méthode

Une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé, ou son placébo, ont été appliqués en surface de peaux humaines reconstruites. Après 24 heures d’incubation, l’expression génique de marqueurs d’intérêt pour leurs bénéfices dermiques a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.

Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 %, a significativement augmenté le niveau d’expression génique des marqueurs MKI67 et PSMD1. Ces effets sont significativement différents du placébo.

Ces deux gènes sont impliqués dans deux fonctions cellulaires distinctes : la prolifération pour le marqueur MKI67 et le protéasome pour le marqueur PSMD1.

Le vieillissement est associé à une diminution de la capacité proliférative des cellules. Une diminution d’expression du marqueur MKI67 a été observée dans des cellules âgées. En augmentant le niveau d’expression génique de MKI67, le concentrat d’huile de thé peut ainsi favoriser la prolifération cellulaire démontrant ainsi un potentiel anti-âge.

PSMD1 est une sous-unité du protéasome qui joue un rôle structurel clé en agissant comme un site d’amarrage pour les substrats ubiquitinés prêts à être éliminés. Il a été observé une diminution de ce marqueur dans des fibroblastes âgés. La diminution de la capacité des cellules à éliminer les protéines endommagées est un marqueur de vieillissement. En augmentant le niveau d’expression génique de PSMD1, le concentrat d’huile de thé pourrait favoriser l’élimination des protéines endommagées et ainsi démontrer un potentiel anti-âge.

[Tableau 14] : Gènes modulés significativement par la formulation à 1 % de concentrat d’huile de thé comparativement au placébo (fixé à 1.00)

Gènes	Noms	Quantité Relative	P value
MKI67	Antigen Ki-67	1.57 (+57%)	0.0308
PSMD1	26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 1	1.83 (+83%)	0.0465

Potentiel pro-barrière Matériel et méthode

Une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé, ou son placébo, ont été appliqués en surface d’épidermes reconstruits. Après 24 heures d’incubation, l’expression génique de marqueurs d’intérêt pour leurs bénéfices épidermiques a été évaluée par PCR quantitative en temps réel.

Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 %, a significativement augmenté le niveau d’expression génique de marqueurs de la barrière (TJP1, DSC1, LOR, ZNF750, CERS3). Ces effets sont significativement différents du placébo démontrant un potentiel pro-barrière du concentrat d’huile de thé.

[Tableau 15] : Gènes modulés significativement par la formulation à 1 % de concentrat d’huile de thé comparativement au placébo (fixé à 1.00)

Gènes	Noms	Quantité Relative	P value
TJP1	Tight junction protein ZO-1	1.70 (+70%)	0.027
DSC1	Desmocollin-1	1.43 (+43%)	0.001
LOR	Loricrin	1.47 (+47%)	0.026
ZNF750	Zinc finger protein 750	1.60 (+60%)	0.039
CERS3	Ceramide synthase 3	1.33 (+33%)	0.048

Il existe différents types de jonctions cellulaires au sein de l’épiderme assurant la cohésion entre les kératinocytes : les jonctions serrées, les desmosomes et les jonctions« gap ». Ces différentes jonctions participent à la fonction de barrière cutanée.

Les jonctions serrées sont des jonctions intercellulaires qui scellent les kératinocytes entre eux. La protéine TJP1 est un marqueur des jonctions serrées. Elle participe au contrôle de la diffusion paracellulaire des ions et des solutés.

Les desmosomes sont des jonctions localisées entre les kératinocytes des couches basale, spineuse et granuleuse. Les desmosomes sont constitués de 3 parties : une partie intracellulaire, une partie transmembranaire et une partie extracellulaire. La desmocolline-1 est un composant des desmosomes. C’est une glycoprotéine transmembranaire appartenant à la famille des cadhérines.

Les marqueurs Loricrine, ZNF50 et CERS3 sont impliqués, quant à eux, dans la formation de l’enveloppe cornée. Lors de la cornification, la membrane plasmique des kératinocytes en différenciation est remplacée par l'enveloppe cornée constituée de protéines extracellulaires structurelles insolubles liées de manière covalente entre elles et au remodelage des lipides. Ceci empêche la perte excessive de fluides corporels, mais fournit également une barrière efficace contre les agents pathogènes.

Environ 80 % de l’enveloppe cornée est constituée de loricrine.

La différenciation des kératinocytes est stimulée par de nombreux facteurs de transcription comme le ZNF50, un facteur de transcription connu pour réguler plusieurs gènes codant pour des composants de l’enveloppe cornée et la différenciation terminale des kératinocytes.

Les céramides sont les lipides prédominants de la peau et constituent approximativement 50 % en masse des lipides intercellulaires. Ils participent à la fonction barrière de la peau et au maintien de l’hydratation. Les céramides synthases (CERS) 3 et 4 sont majoritaires dans la peau.

Le concentrat d’huile de thé, en augmentant significativement le niveau d’expression génique de ces différents marqueurs, contribue ainsi à un effet pro-barrière.

Activité dans des modèles in vitro en lien avec le confort et bien-être cutané

Le stress psychologique a de multiples impacts physiologiques et cliniques sur la peau. Les impacts physiologiques sont variés (inflammation, altération de la fonction barrière, altération de la cicatrisation, suppression de l’immunité) et vont conduire à des impacts cliniques (phénotype de peau sèche/sensible, rougeurs, irritations, démangeaisons, imperfections, acné, eczéma …).

Il existe deux principaux axes de réponse au stress : le système nerveux sympathique qui va induire le relargage de neuropeptides (substance P par exemple) et catécholamines et l’axe Hypothalamo-hypophyso-surrénalien (HPA axis) qui va induire le relargage du cortisol.

Le stress psychologique aigu peut altérer la perméabilité de la barrière cutanée ainsi que l’intégrité du stratum corneum.

Pour évaluer l’effet du concentrat d’huile de thé sur un axe confort biologique et bien-être, différents modèlesin vitrode stress en lien avec le cortisol et la substance P ont été réalisés.

Effet du concentrat d’huile de thé sur le relargage de cortisol dans un modèle d’explant cutané

Matériel et méthode

Des explants cutanés ont été traités en topique par une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé, ou son placébo, ou traités en systémique (dans le milieu de culture) par le concentrat d’huile de thé à 0.001 % et la référence positive métyrapone à 1 mM. Les explants ont été incubés 24 heures puis stressés par l’ACTH 0.6 µM (Adreno CorticoTropic Hormone), hormone qui induit la production de cortisol. Ce stress a été couplé à une culture des explants dans un incubateur à 42 °C afin de potentialiser l’augmentation de la production de cortisol. Les explants ont été de nouveau traités par les produits en topique ou l’actif et la référence positive en systémique. Après 24 heures d’incubation, les milieux de culture ont été récupérés et un dosage ELISA du cortisol a été effectué.

Les résultats ont été analysés statistiquement par un test t de Student.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé testé en systémique dans le milieu de culture diminue le cortisol dans les sousnageants de culture d’explants, cortisol induit par un traitement à l’ACTH couplé à une culture des explants dans un incubateur à 42 °C.

Le concentrat d’huile de thé, formulé à 1 % versus placebo, inhibe le cortisol, le placebo ayant augmenté le relargage du cortisol.

[Tableau 16] : Dosage du cortisol produit par explants cutanés stimulés par de l’ACTH + T°C 42°C (Concentrat d’huile de thé testé en systémique dans le milieu de culture)

	Quantification relative	% Protection	P value
Cellules contrôles	1 ± 0.17
Cellules stimulées (ACTH 0,6 µM + 42 °C)	1.29 ± 0.05
Référence (Metyrapone 1 mM)	1.08 ± 0.12	70 %	p<0.1
THE 0.001 %	1.02 ± 0.04	93 %	p<0.01

[Tableau 17] : Dosage du cortisol produit par explants cutanés stimulés par de l’ACTH + T°C 42°C (Concentrat d’huile de thé testé en topique en formulationversusplacebo)

	Quantification relative	% Protection (vs ACTH/42 °C)	P value
Cellules contrôles	1 ± 0.17
Cellules stimulées (ACTH 0,6 µM + 42 °C)	1.32 ± 0.12
Référence (Metyrapone 1 mM)	1.08 ± 0.12	73 %
Placebo	1.47 ± 0.27	-50 %	p<0.1
THE 1%	1.16 ± 0.05	49%	p<0.1

Effet du concentrat d’huile de thé dans un modèle de stress exogène/endogène en lien avec la protection de la barrière cutanée

Le concentrat d’huile de thé a été évalué dans un modèle de kératinocytes (HaCaT) stressés à la cortisone puis aux UVA. Le stress UVA potentialise la transformation de la cortisone (molécule inactive) en cortisol (molécule active). Le cortisol est décrit pour altérer la barrière cutanée.

Matériel et méthode

Des kératinocytes HaCaT ont été traités par le concentrat d’huile de thé à 0.0005 % et 0.001 % en parallèle d’un traitement par la cortisone à 100 nM. Après 24 heures d’incubation, les cellules ont été stressées par les UVA à 3 J/cm². Les lysats cellulaires ont été récupérés, soit immédiatement après irradiation pour l’analyse des protéines carbonylées par immunomarquage, soit 6 heures après irradiation pour l’analyse des marqueurs de la barrière et de l’inflammation par RT-qPCR.

Résultats

Le stress cortisone combiné aux UVA a augmenté le niveau d’expression génique de l’IL-1 alpha, traduisant une activation de l’inflammation. Il a également augmenté la quantité de protéines carbonylées. Il a inhibé le niveau d’expression génique de marqueurs de la barrière (loricrine, filaggrine et kératine 10) démontrant l’impact négatif du cortisol sur la barrière cutanée.

Le concentrat d’huile de thé a montré un effet protecteur pro-barrière augmentant les marqueurs filaggrine, loricrine et kératine 10 inhibés par le stress cortione/UVA. Le concentrat d’huile de thé a également présenté un effet anti-inflammatoire vis-à-vis de l’IL1a (expression génique) et a diminué la quantité de protéines carbonylées (protéines endommagées) induites par le stress.

Ce dernier résultat peut être corrélé à un résultat observé lors du screening d’activité sur peau reconstruite où le concentrat d’huile de thé a augmenté significativement le niveau d’expression génique du marqueur PSMD1 (26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 1), marqueur du protéasome impliqué dans la dégradation des protéines endommagées.

[Tableau 18] : Gènes modulés significativement par le concentrat d’huile de thé (QR = Quantification Relative - Contrôle non traité fixé à 100)

	IL-1 alpha QR (% protection)	Loricrine QR (% protection)	Filaggrine QR (% protection)	Kératine 10 QR (% protection)
Cellules contrôles	100 ± 4	100 ± 10	100 ± 14	100 ± 9
Cellules stimulées (Cortisone 100nM + UVA 3J/cm²)	377 ± 16	68 ± 23	63 ± 1	28 ± 9
THE 0.0005%	275 ± 9 37 % p<0.0001	124 ± 32 174 % p<0.1	90 ± 7 72 % p<0.05	44 ± 3 23 % p<0.05

[Tableau 19] : Quantification des protéines carbonylées (QR = Quantification Relative)

	Protéines carbonylées QR	% Protection	P value
Cellules contrôles	100 ± 4
Cellules stimulées (Cortisone 100 nM + UVA 3J/cm²)	128 ± 10
THE 0.0005 %	111 ± 7	65 %	p<0.01
THE 0.001 %	100 ± 9	100 %	P<0.01

Effet du concentrat d’huile de thé sur un modèle de stress cortisol impactant la barrière cutanée

Une étude a été réalisée sur un modèle d’explant cutané dont la barrière a été fragilisée par « tape stripping » puis stressée par du cortisol. Le cortisol altère la barrière cutanée et retarde sa réparation.

Matériel et méthode

Lestratum corneumd’explant cutané a été altéré par « tape stripping » suivi d’un stress au cortisol 0.001 %. Après 6 heures d’incubation, les explants ont été traités à leur surface par une formulation (crème) contenant 1 % de concentrat d’huile de thé, ou son placebo. 24 heures après la première application (J1), les explants ont été de nouveau traités par le cortisol puis les produits 6 heures après. Ces traitements (cortisol + produit 6h après) ont été répétés pour un total de 5 traitements (J0 à J4). 24 heures après le dernier traitement (J5), les explants ont été récupérés afin de réaliser différents marquages :

Un marquage hématoxyline/éosine pour l’analyse de l’épaisseur dustratum corneum,
Un marquage safranin-O-red pour l’analyse du nombre de couchesdu stratum corneum,
Un marquage Lucifer Yellow pour l’analyse de l’intégrité de la barrière cutanée.

Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide d’une ANOVA suivie d’un test de Tukey ou Dunnett.

Résultats

L’altération dustratum corneumpar « tape stripping » suivi d’un traitement répété par le cortisol pendant plusieurs jours a fortement diminué l’épaisseur dustratum corneumet l’intégrité de la barrière cutanée.

Le concentrat d’huile de thé, testé à 1 % versus placebo, montre une efficacité significative sur l’épaisseur dustratum corneumet le nombre de couches dustratum corneum(marquage histologique) qui sont plus importants dans la condition traitée avec l’actif. Il montre également une efficacité significative sur l’intégrité de la barrière cutanée (pénétration du marqueur lucifer yellow).

Le concentrat d’huile de thé favorise ainsi la réparation de la barrière cutanée et protège face à un stress psychologique altérant la réparation de la barrière cutanée.

[Tableau 20] : Quantification de l’épaisseur dustratum corneum

	Épaisseur (µm)	% Efficacité	P value
Explants contrôles	13.4 ± 1.0
Explants stressés (Tape stripping + Cortisol 0.001 %)	8.3 ± 0.4
Placebo	10.1 ± 1.0	35 %	p<0.001	p<0.001
THE 1 %	12.8 ± 1.0	88 %	p<0.001	p<0.001

[Tableau 21] : Quantification du nombre de couches dustratum corneum

	Nombre de couches	% Efficacité	P value
Explants contrôles	9.6 ± 0.5
Explants stressés (Tape stripping + Cortisol 0.001%)	4.4 ± 0.5
Placebo	6.8 ± 0.4	46%	p<0.001	p<0.001
THE 1%	9.1 ± 0.9	91%	p<0.001	p<0.001

[Tableau 22] : Analyse de l’intégrité de la barrière cutanée via la perméabilité du marqueur fluorescent Lucifer Yellow

	Intensité de fluorescence (RFU)	% Efficacité	P value
Explants contrôles	211 ± 31
Explants stressés (Tape stripping + Cortisol 0.001 %)	509 ± 85
Placebo	401 ± 62	36%	p<0.01	p<0.001
THE 1 %	262 ± 62	83%	p<0.001	p<0.001

Ces différents résultats indiquent que le concentrat d’huile de thé présente un fort intérêt dans le confort des peaux sèches et sensibles pouvant être provoquées et amplifiées par le stress psychologique.

Effet du concentrat d’huile de thé dans un modèle d’épiderme réinnervé

Matériel et méthode

Des cellules iPS (induced pluripotent stem cells) d’origine humaine ont été différenciées en neurones sensoriels dans des inserts de culture. Un gel de collagène a ensuite été appliqué sur les neurones sensoriels. Après 3 semaines de culture, un épiderme explanté, dissocié du derme par un traitement à la dispase, a été déposé sur le gel de collagène. Le modèle a été incubé 5 jours, le temps de la réinnervation de l’épiderme par les neurones sensoriels. Puis les épidermes ont été traités en topique par le concentrat d’huile de thé formulé à 0.5 % et 1 % dans la paraffine. Après 24 heures d’incubation, les épidermes ont été traités en topique par l’acide lactique à 10 % pendant 15 minutes. Les milieux de culture ont ensuite été récupérés et un dosage ELISA de la substance P a été effectué.

Les résultats ont été analysés statistiquement à l’aide du test U de Mann-Whitney.

Résultats

Le concentrat d’huile de thé, testé à 0.5 % et 1 %, inhibe significativement le relargage de la substance P, neuropeptide impliqué dans la perception de la douleur, induit par l’acide lactique dans un modèle d’épiderme réinnervé.

Le concentrat d’huile de thé présente donc un intérêt dans le confort des peaux sensibles.

[Tableau 23] : Dosage de la substance P relarguée par des épidermes réinnervés stressés à l’acide lactique

	Substance P (pg/mL)	% Evolution	P value
Épidermes contrôles	629 ± 228
Épidermes stressés à l’acide lactique 10 %	934 ± 198	+ 48 %
THE 0.5 %	488 ± 170	- 48 %	p<0.05
THE 1 %	407 ± 178	- 56 %	p<0.05

En diminuant le relargage de cortisol et de substance P, et en protégeant la peau des effets néfastes du cortisol, le concentrat d’huile de thé apporte ainsi confort et bien-être aux peaux sèches et sensibles.

Exemple 3 : Tests d’activité biologique in vivo de l’extrait selon l’invention

Concept et protocole Concept

Les personnes avec une condition de peau sèche et/ou sensible ressentent des symptômes au niveau cutané (picotement, tiraillements,…) qui impactent négativement leur confort cutané et leur bien-être, pouvant conduire à un état psychologique de stress ou un état émotionnel dégradé et engendrer également une diminution de leur qualité de vie. Un cercle vicieux peut alors s’installer, le stress psychologique pouvant lui-même être source de problèmes cutanés (Farage, 2022).

L’intérêt d’un actif cosmétique ou dermatologique dans le cadre de cette problématique est d’agir sur les symptômes liés à la peau sèche et/ou sensible afin de limiter l’impact négatif sur l’inconfort cutané et leur qualité de vie sur l’état psychologique des personnes et améliorer leur état émotionnel et leur bien-être.

Protocole Objectif

L’objectif de cette étude est d’évaluer l’efficacité et le bénéfice émotionnel de l’extrait selon l’invention en comparaison à un placebo chez des personnes exprimant un inconfort psychologique/stress/mauvaise humeur en raison de leur peau sèche et/ou de leur peau sensible.

Produits

L’extrait testé est le concentrat de l’exemple 1. L’actif est formulé à 1 % de concentrat d’huile de thé. Le détail des compositions est présenté dans le tableau ci-dessous.

[Tableau 24] :

Nom INCI	Actif % Matière	Placebo % Matière
Aqua (Eau)	qsp 100 %	qsp 100 %
Dicaprylyl carbonate & Tocopherol	3.000	3.000
Triisostearin	3.000	3.000
Sodium acrylates copolymer & Lecithin	2.000	2.000
Lauryl glucoside & Polyglyceryl-2 dipolyhydroxystearate & Glycerin & Aqua (eau)	1.000	1.000
1,2-hexanediol	1.000	1.000
Concentrat d’huile de thé	1.000	-
Glyceryl caprylate	0.430	0.430
Citric acid	0.080	0.080

Paramètres

Application pendant 28 jours, 2 fois par jour (matin et soir), visage et corps (évaluations sur le visage).
Étude comparative actif (n=22, 18 peau sèche/19 peau sensible, 51.3±14.7 ans [19-70]) vs Placebo (n=22, 19 peau sèche/20 peau sensible, 45.3±13.8 ans [23-68] ) en double aveugle, randomisée.
Sujet féminin, sain (pas de pathologie cutanée ou autre non stabilisée susceptible d'interférer avec l'étude, pas de symptômes en cours de bilan exploratoire), âgé de plus de 18 ans - Phototype de I à IV (caucasien).
Sujet présentant un type de peau sèche et/ou sensible sur le visage (associé à des signes fonctionnels et/ou cliniques) (répartition homogène entre peau sèche et peau sensible).
Sujet exprimant un inconfort psychologique/ un stress/ une mauvaise humeur en raison de sa peau sèche et/ou de sa peau sensible.
Évaluation à l’aide d’une combinaison d’évaluations cliniques, d’évaluations subjectives par questionnaires et de mesures objectives physiologiques.

Résultats Sensibilité de la peau (« Sensitive Scale »)

L'échelle « Sensitive Scale » décrite dans la littérature permet d'évaluer le degré d'irritation cutanée globale et la sévérité de l'état de la peau (Miseryet al., 2014). Cette échelle est réalisée à partir de 10 items correspondant à des signes ressentis (8 items) ou apparents (2 items) en lien avec l’inconfort cutanée : picotements, sensations de brûlure, sensations de chaleur, tiraillements, démangeaisons, douleurs, inconfort général, bouffées de chaleur, rougeurs et desquamation.

Le sujet peut graduer de 0 à 10 l'intensité de chaque paramètre.

Pour chacun des 10 paramètres, l’amélioration est significative entre T0 et T28 avec l’actif alors qu’elle l’est uniquement pour 6 paramètres pour le placebo (cf. ).

L’actif présente des résultats significativement améliorés par rapport au placebo. En effet, les trois paramètres suivants sont au seuil de p<0,05 : picotements, sensation de brûlure et démangeaisons. De plus, les trois paramètres suivants ainsi que le score global sont au seuil de p<0,1 (cf. ) : sensations de chaleur, tiraillements et l’inconfort général.

Prosodie et cohérence cardiaque

La prosodie correspond au contenu émotionnel de la voix et peut être appréciée par l'étude du spectre vocal révélant les variations en plusieurs paramètres. La charge de stress vocal a été quantifiée à l’aide d’un traitement algorithmique.

L’actif diminue significativement le stress vocal au bout de 28 jours et l’évolution comparée au placebo est significativement meilleure (cf. ).

La variabilité de la fréquence cardiaque (HRV) est la mesure cardiaque de l'interaction entre les branches sympathique et parasympathique du système nerveux autonome (SNA). Les légères variations de la HRV sont couramment utilisées dans les études psychosociologiques du stress car elles offrent un des paramètres les plus stables de la tension émotionnelle d'un sujet. Le stress et les émotions négatives sont bien connus pour perturber la cohérence cardiaque et induire des irrégularités dans le signal HRV. Un état d'esprit plus positif devrait donc augmenter les valeurs de l'indice HRV.

L’actif augmente la cohérence cardiaque HRV au bout de 28 jours de manière significative et la différence avec le placebo est significativement meilleure (cf. ).

Réponse électrodermique

La réponse électrodermique (EDR) correspond à la variation de la résistance de la peau lorsque le courant électrique la traverse. C'est une réponse qui survient suite à des éveils sensoriels ou émotionnels. Cette variation de la résistance électrique cutanée est le résultat de modifications physiologiques qui peuvent être inconscientes ou imperceptibles à l'œil nu. Ces modifications neuro-végétatives sont les conséquences de l'activation du système nerveux sympathique. En effet, suite à une excitation psychologique (c'est-à-dire émotionnelle), l'activité des glandes sudoripares augmente ce qui à son tour augmente la conductance cutanée entraînant une EDR très rapide. Cette réaction se produit surtout sur les zones plantaires et palmaires. Les glandes sudoripares sont contrôlées par le système nerveux sympathique à travers les fibres des ganglions cholinergiques. De cette manière, la réponse électrodermique peut être utilisée comme un signe physiologique d'éveil émotionnel.

Dans le cadre de cette étude, après avoir réalisé la connexion des électrodes pour la réponse électrodermique (EDR) sur le doigt, un technicien demande au sujet de se cacher les yeux avec un bandeau. Un patch induisant un stimulus de température est placé avant le chauffage sur la joue du sujet. Après une période de repos de 2 minutes pour stabiliser les paramètres, le technicien déclenche le chauffage du patch pendant 30 secondes pour réaliser le stimulus de température et enregistrer la réponse électrodermique (EDR). Le patch de la joue est enfin enlevé (le sujet ne voit à aucun moment le patch).

L’actif et le placebo diminuent significativement la réponse électrodermique suite à un stimulus thermique bout de 28 jours et l’évolution avec l’actif est significativement meilleure comparée à celle du placebo (cf. ).

Exemple 4 : Tests d’activité biologique in vivo de l’extrait selon l’invention

Concept et protocole Concept

Le but de cette étude est d’évaluer l’efficacité et le bénéfice d’un actif sur l’état cutané en comparaison à un placebo chez des personnes ayant une condition de peau sèche et/ou sensible.

La barrière cutanée joue un rôle régulateur dans l’équilibre en eau de la peau. Lorsque celle-ci est lésée, il apparaît des dérèglements dans la régulation des échanges d’eau. L’eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur ce qui augmente la Perte Insensible en Eau (PIE ou TEWL de l’anglais «Transepidermal water loss»). Par contre, si l’état de la barrière cutanée s’améliore, les valeurs de la perte en eau vont diminuer car la régulation des échanges d’eau sera assurée de façon correcte.

Protocole Objectif

Produits

[Tableau 25] :

Nom INCI	Actif % Matière	Placebo % Matière
Aqua (Eau)	qsp 100 %	qsp 100 %
Caprylic/capric triglyceride	5.000	5.000
Sclerotium gum	1.000	1.000
1,2-Hexanediol	1.000	1.000
Concentrat d’huile de thé	1.000	-
Caprylyl glycol	0.300	0.300
Citric acid	0.004	0.004

Paramètres

Application pendant 28 jours, 2 fois par jour (matin et soir), visage et corps (évaluations sur le visage).
Étude comparative actif (n=24, 19 peau sèche visible/23 peau sensible, 50,0±16.7 ans [24-71]) vs placebo (n=24, 22 peau sèche visible/22 peau sensible, 54,2±16.8 ans [24-74]) en double aveugle, randomisée.
Sujet féminin, sain (pas de pathologie cutanée ou autre non stabilisée susceptible d'interférer avec l'étude, pas de symptômes en cours de bilan exploratoire), âgé de plus de 18 ans - Phototype de I à IV (caucasien).
Au moins 50 % de sujets avec une peau visiblement sèche au niveau du visage, au moins 50 % de sujets avec une peau sensible (évalué d’après un questionnaire de la littérature : Boyeret al., 2021) avec 1 signe clinique et 1 signe subjectif sur au moins 2 stress.
Sujets présentant des picotements et/ou des sensations de chaleur, de brûlure et/ou des démangeaisons.
Sujets exprimant un inconfort cutané ≥4 sur 10.
Évaluation : Les mesures de perte d'eau transépidermique ont été effectuées avec un Tewameter TM 300®. Une sonde composée de deux capteurs est traversée par un flux de vapeur d'eau. La différence de pression partielle est mesurée entre les deux capteurs. Cette valeur correspond à la vitesse d'évaporation d'une substance volatile (ici l'eau).

Résultats hydratation et fonction barrière

L’hydratation s’améliore avec l’actif et le placebo de manière significative.

La barrière cutanée évaluée à travers la TEWL s’améliore avec l’actif et le placebo de manière significative (cf. ). La différence actif vs placebo est significative en faveur de l’actif (Δ%(ΔActif/ Δplacebo) = - 34,8 %, p < 0,05 (Test Mann-Whitney)).

Références bibliographiques :

Yang C., Liu X., Chen Z., Lin Y., Wang S. Comparison of Oil Content and Fatty Acid Profile of Ten New Camellia oleifera Cultivars,Journal of Lipids,2016, 216. https://doi.org/10.1155/2016/3982486

Hu J.B., Yang G.L. Physiochemical characteristics, fatty acid profile and tocopherol composition of the oil from Camellia oleifera Abel cultivated in Henan, China,Grasas y aceites 2018, 69(2)

Wen Y., Su S.-C., Lv-yi M., Yang S.-Y., Wang Y.-W., Wang X.-N., Effects of canopy microclimate on fruit yield and quality of Camellia oleifera.Scientia Horticulturae,2018, 235. https://doi.org/10.1016/j.scienta.2017.12.042.

Farage M.A. Psychological Aspects of Sensitive Skin: A Vicious Cycle.Cosmetics 2022,9, 78. https://doi.org/10.3390/cosmetics9040078

Misery L., Jean-Decoster C., Mery S., Georgescu V., Sibaud V. A new ten-item questionnaire for assessing sensitive skin: the Sensitive Scale-10.Acta Derm Venereol.2014, 94(6):635-9. doi: 10.2340/00015555-1870.

Boyer G., Belilovsky C.D., Brédif S., Baudouin C., Misery L., Bellemère G. Clinical and Instrumental Exploration of Sensitive Skin in a Pediatric Population.Cosmetics 2021,8, 43. https://doi.org/10.3390/cosmetics8020043.

Claims

Extrait lipidique d’huile de thé,caractérisé en ce que ledit extrait lipidique est une huile de théCamellia oleifera, concentrée en sa fraction insaponifiable, contenant de 1,5 % à 100 % en poids d’insaponifiables, de préférence 1,8 % à 80 %, préférentiellement 2 % à 60 %, par rapport au poids total de l’extrait.
Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que l’extrait lipidique a une teneur en stérols supérieure à 1,5 % en poids, de préférence 2 %, par rapport au poids total de l’extrait.
Extrait selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l’extrait lipidique comprend de la β-amyrine et du Δ5-avenasterol, de préférence de 10 à 50 % en poids, préférentiellement de 15 à 40 %, plus préférentiellement de 15 à 35 % en poids par rapport au poids total de stérols et/ou du lupeol et du Δ7-stigmasterol, de préférence de 10 à 50 % en poids, préférentiellement de 15 à 40 %, plus préférentiellement de 15 à 35 % en poids, par rapport au poids total de stérols.
Procédé de préparation d’un extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, comprenant les étapes successives suivantes :
distillation moléculaire d’une huile brute ou raffinée de théCamellia oleifera;

le cas échéant, extraction de l’insaponifiable ;

récupération de l’huile concentrée en insaponifiable obtenue suite à l’étape a) ou de l’insaponifiable obtenu suite à l’étape b) et

optionnellement une étape de désodorisation et/ou de décoloration de l’huile concentrée en insaponifiable ou de l’insaponifiable.
Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l’étape b) comprend les étapes successives suivantes :
saponification de l’huile de thé concentrée en sa fraction insaponifiable obtenue suite à l’étape a),

puis extraction de l’insaponifiable à l’aide d’un solvant approprié, tel que l’acétate d’éthyle et l’hexane.
Composition comprenant, en tant qu’actif, un extrait lipidique d’huile de théCamellia oleiferaselon l’une quelconque des revendications 1 à 3 et un excipient approprié.
Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu’elle comprend de 0,01 % à 20 % en poids, avantageusement de 0,05 à 15 %, plus avantageusement 0,1 à 10 %, en poids dudit extrait lipidique, par rapport au poids total de la composition.
Composition selon la revendication 6 ou 7 ou extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon la revendication 4 ou 5 ou extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour son utilisation dans une composition dermatologique, pharmaceutique, nutraceutique ou en tant que complément alimentaire.
Composition ou extrait selon la revendication 8, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter les troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, avantageusement les réactions inflammatoires, les désordres liés à des stress intrinsèques ou extrinsèques tels que le stress psychologique, le stress lié à un état d’anxiété, le stress liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution chimique ou atmosphérique, et/ou liées à l’exposition aux UV ou aux IR, les troubles de la barrière ou de l’homéostasie, la peau photosensibilisée, les agressions mécaniques et/ou thermiques, ou en tant qu’agent cicatrisant.
Composition ou extrait selon la revendication 9, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter la peau sèche, la xérose, la peau sensible et les irritations.
Composition ou extrait selon la revendication 9, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des pathologies ou conditions choisies dans le groupe constitué par les cicatrices superficielles, les lèvres fragiles et les cheilites, les vergetures, la peau après piqûres, les abrasions de la peau, les boutons et/ou les croûtes cutanés, et les peaux fragiles et sensibles, avantageusement les peaux fragiles et sensibles.
Utilisation cosmétique d’un extrait selon l’une quelconque des revendications 1 à 3 ou d’un extrait susceptible d’être obtenu par le procédé selon la revendication 4 ou 5 ou d’une composition selon l’une quelconque des revendications 6 ou 7 sous une forme adaptée pour une administration topique ou orale, en vue d’améliorer l’état et/ou l’aspect de la peau saine et/ou des phanères sains et/ou des muqueuses saines, avantageusement en vue d'améliorer la fermeté, l'élasticité ou la tonicité de la peau saine et/ou en vue d'améliorer le confort cutané.